CN1930277A - 在转基因植物中产生多不饱和脂肪酸的方法 - Google Patents

在转基因植物中产生多不饱和脂肪酸的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及在转基因植物的种子中产生多不饱和脂肪酸的方法，通过向生物导入编码具有ω3去饱和酶、Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ6延伸酶(elongase)、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶活性的多肽，优选具有Δ6去饱和酶、Δ6延伸酶和Δ5去饱和酶活性的多肽的核酸实现所述方法。所述核酸序列为SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199和SEQ ID NO：201中所示序列。这些核酸序列可以有利地在生物中表达，如果合适，与编码脂肪酸或者脂类代谢的生物合成的多肽的其他核酸序列一起表达。特别有利的是编码Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ12去饱和酶和/或Δ6延伸酶活性的核酸序列。这些去饱和酶和延伸酶有利地来自海链藻属(Thalassiosira)、裸藻属(Euglena)或Ostreococcus。此外，本发明涉及具有升高含量的长链多不饱和脂肪酸的油和/或三酰甘油酯的生产方法。在优选实施方案中，本发明还涉及产生花生四烯酸、二十碳五烯酸或者二十二碳六烯酸的方法，还涉及在转基因植物，有利地在转基因植物的种子中产生具有升高含量的不饱和脂肪酸，尤其花生四烯酸、二十碳五烯酸或者二十二碳六烯酸的甘油三酯的方法。本发明涉及转基因植物的产生，由于用于根据本发明的方法中延伸酶和去饱和酶的表达，所述转基因植物具有升高含量的多不饱和脂肪酸，尤其花生四烯酸、二十碳五烯酸和/或者二十二碳六烯酸。本发明还涉及重组核酸分子，其包含在一起或者单独地编码具有Δ6去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶和Δ5延伸酶活性的多肽的核酸序列，还涉及包含上述重组核酸分子的转基因植物。本发明的另一部分涉及通过根据本发明的方法产生的油、脂类和/或脂肪酸，还涉及它们的用途。此外，本发明涉及不饱和脂肪酸和具有升高含量的不饱和脂肪酸的甘油三酯，还涉及它们的用途。

Description

在转基因植物中产生多不饱和脂肪酸的方法
本发明涉及在转基因植物的种子中产生多不饱和脂肪酸的方法，通过向生物导入编码具有ω3去饱和酶、Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ6延伸酶(elongase)、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶活性的多肽，优选具有Δ6去饱和酶、Δ6延伸酶和Δ5去饱和酶活性的多肽的核酸实现所述方法。
所述核酸序列为SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199和SEQ ID NO：201中所示序列。除了这些核酸序列，优选还向植物中导入编码具有Δ12去饱和酶活性的多肽的另一核酸序列，其也同时表达。特别优选地，该核酸序列为SEQ ID NO：195中所示核酸序列。
这些核酸序列可以有利地在生物中表达，如果合适，与编码脂肪酸或者脂类代谢的生物合成的多肽的其他核酸序列一起表达。特别有利的是编码Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ12去饱和酶和/或Δ6延伸酶活性的核酸序列。这些去饱和酶和延伸酶有利地来自海链藻属(Thalassiosira)、裸藻属(Euglena)或Ostreococcus。此外，本发明涉及具有升高含量的长链多不饱和脂肪酸的油和/或三酰甘油酯的生产方法。
在优选实施方案中，本发明还涉及产生花生四烯酸、二十碳五烯酸或者二十二碳六烯酸的方法，还涉及在转基因植物，有利地在转基因植物的种子中产生具有升高含量的不饱和脂肪酸，尤其花生四烯酸、二十碳五烯酸或者二十二碳六烯酸的甘油三酯的方法。本发明涉及转基因植物的产生，由于用于根据本发明的方法中延伸酶和去饱和酶的表达，所述转基因植物具有升高含量的多不饱和脂肪酸，尤其花生四烯酸、二十碳五烯酸和/或者二十二碳六烯酸。
本发明还涉及重组核酸分子，其包含在一起或者单独地编码具有Δ6去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶和Δ5延伸酶活性的多肽的核酸序列，还涉及包含上述重组核酸分子的转基因植物。
本发明的另一部分涉及通过根据本发明的方法产生的油、脂类和/或脂肪酸，还涉及它们的用途。此外，本发明涉及不饱和脂肪酸和具有升高含量的不饱和脂肪酸的甘油三酯，还涉及它们的用途。
脂类合成可以分成两部分：脂肪酸的合成和它们与sn-甘油-3-磷酸的结合，和极性首基的加入或者修饰。用于膜的有用的脂类包括磷脂、糖脂、鞘脂和磷酸甘油酯。脂肪酸合成以乙酰辅酶羧化酶A催化的乙酰辅酶A向丙二酸单酰辅酶A的转化或者乙酰转酰基酶催化的乙酰辅酶A向乙酰基-ACP的转化开始。缩合反应后，这两种产物分子一起形成乙酰乙酰基-ACP，其通过一系列缩合、还原和脱水反应转化，从而得到具有所需要的链长的饱和的脂肪酸分子。特定去饱和酶通过分子氧有氧或者无氧地催化从这些分子产生不饱和脂肪酸(关于微生物中脂肪酸合成，见F.C.Neidhardt等人(1996)E.coli and Salmonella.ASM Press：Washington，D.C.，p.612-636和其中引用的参考文献；Lengeler等人(Ed.)(1999)Biologyof Procaryotes.Thieme：Stuttgart，New York，和其中引用的参考文献，和Magnuson，K.，等人(1993)Microbiological Reviews 57：522-542和其中引用的参考文献)。为了经历进一步延长步骤，所得磷脂结合的脂肪酸必须返回到脂肪酸CoA酯库。这通过酰基辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶变成可能。而且，这些酶能够将延长的脂肪酸从辅酶A酯转移回到磷脂。如果合适，该反应顺序可以重复进行。
此外，脂肪酸必须随后转运到多种修饰位点并掺入三酰甘油贮藏脂类。脂类合成中另一重要的步骤是例如，通过甘油脂肪酸酰基转移酶将脂肪酸转移到极性首基(见Frentzen，1998，Lipid，100(4-5)：161-166)。
关于植物中脂肪酸的生物合成、去饱和、脂类代谢和脂类化合物的膜转运、β氧化、脂肪酸和辅因子的修饰和三酰甘油的贮藏和装配的出版物，包括其中引用的参考文献，见下面的文章：Kinney，1997，GeneticEngineering，Ed.：JK Setlow，19：149-166；Ohlrogge和Browse，1995，PlantCell 7：957-970；Shanklin和Cahoon，1998，Annu.Rev.Plant Physiol.PlantMol.Biol.49：611-641；Voelker，1996，Genetic Engineering，Ed.：JK Setlow，18：111-13；Gerhardt，1992，Prog.Lipid R.31：397-417；Gühnemann-Sch_fer & Kindl，1995，Biochim.Biophys Acta 1256：181-186；Kunau等人，1995，Prog.Lipid Res.34：267-342；Stymne等人，1993，in：Biochemistry and Molecular Biology of Membrane and Storage Lipidsof Plants，Eds.：Murata and Somerville，Rockville，American Society ofPlant Physiologists，150-158，Murphy & Ross 1998，Plant Journal.13(1)：1-16。
在下面的文本中，将多不饱和脂肪酸称作PUFA、PUFAs、LCPUFA或者LCPUFAs(多不饱和脂肪酸( poly  unsaturated  fatty  acids)， PUFA，长链多不饱和脂肪酸( long  chain  poly  unsaturated  fatty  acids)， LCPUFA)。
脂肪酸和三酰甘油酯在食品工业、动物营养、化妆品和制药领域有许多应用。取决于它们是否是游离的饱和或者不饱和的脂肪酸还是具有升高含量的饱和的或者不饱和脂肪酸的三酰甘油酯，它们适于非常不同的应用。多不饱和脂肪酸，如亚油酸和亚麻酸是哺乳动物必需的，因为它们不能由哺乳动物产生。这是为什么多不饱和的ω3-脂肪酸和ω6-脂肪酸是人和动物食物的重要成分的原因。从而，例如，具有不饱和脂肪酸，特别具有多不饱和脂肪酸的脂类优选用于人类营养。推测多不饱和的ω3-脂肪酸对血液中胆固醇水平具有积极作用从而对心脏病的预防具有积极作用。通过向食物中加入这些ω3-脂肪酸可以显著降低心脏病、中风或者高血压的风险(Shimikawa 2001，World Rev.Nutr.Diet.88，100-108)。
ω3-脂肪酸对与免疫学疾病有关的炎症过程，特别对慢性炎症过程，如对类风湿性关节炎具有积极作用(Calder 2002，Proc.Nutr.Soc.61，345-358；Cleland and James 2000，J.Rheumatol.27，2305-2307)。因此将它们加入食品，特别加入饮食食品，或者用于药物中。ω6-脂肪酸，如花生四烯酸倾向于对这些风湿性疾病有消极作用。
ω3-和ω6-脂肪酸是称作类二十烷酸的组织激素(如前列腺素)的前体，所述组织激素衍生自二高-γ-亚麻酸、花生四烯酸和二十碳五烯酸，ω3-和ω6-脂肪酸也是血栓烷和白三烯的前体，血栓烷和白三烯衍生自花生四烯酸和二十碳五烯酸。从ω6-脂肪酸形成的类二十烷酸(称作PG2系列)通常促进炎症反应，而来自ω3-脂肪酸的类二十烷酸(称作PG3系列)有很小或者没有促炎效果。
多不饱和的长链ω3-脂肪酸如二十碳五烯酸(＝EPA，C20:5Δ5，8，11，14，17)或者二十二碳六烯酸(＝DHA，C22:6Δ4，7，10，13，16，19)由于它们在健康方面的多种作用而是人类营养的重要组分，所述作用包括儿童脑的发育、眼的功能性、激素和其他信号物质的合成，和心血管疾病、癌症和糖尿病的预防(Poulos，A Lipids 30：1-14，1995；Horrocks，LA and Yeo YK Pharmacol Res40：211-225，1999)。因此需要生产多不饱和的长链脂肪酸。
由于当前人类食物的组成，向食物中加入多不饱和ω3脂肪酸是尤其重要的，所述多不饱和ω3脂肪酸优先在鱼油中发现。从而，例如，将多不饱和脂肪酸，如二十二碳六烯酸(＝DHA，C22:6Δ4，7，10，13，16，19)或者二十碳五烯酸(＝EPA，C20:5Δ5，8，11，14，17)加入婴儿配方中以提高营养价值。推测不饱和脂肪酸DHA对脑功能的发育和维持具有积极作用。因此，需要生产多不饱和的长链脂肪酸。
多种脂肪酸和甘油三酯主要从微生物如被孢霉属(Mortierella)或者Schizochytrium或者从产油植物，如大豆、油菜(oilseed rape)、藻类，如隐甲藻属(Crypthecodinium)或褐指藻属(Phaeodactylum)和其它生物中获得，通常以它们的三酰甘油酯(＝甘油三酯＝三甘油)的形式得到。然而，它们还可以从动物，例如从鱼得到。有利地通过水解制备游离脂肪酸。然而，极长链多不饱和脂肪酸如DHA、EPA、花生四烯酸(ARA，C20:4Δ5，8，11，14)、二高-γ-亚麻酸(C20:3Δ8，11，14)或者二十二碳五烯酸(DPA，C22:5Δ7，10，13，16，19)不在油料作物如油菜、大豆、向日葵和红花中合成。这些脂肪酸的常规天然来源为鱼，如鲱鱼、鲑鱼、沙丁鱼、雄鲑、鳗鲡、鲤鱼、鳟鱼、大比目鱼、鲭鱼、梭鲈或金枪鱼或藻类。
取决于预期的用途，优选含有饱和或者不饱和脂肪酸的油。在人类营养中，例如，优选含有不饱和脂肪酸，特别是多不饱和脂肪酸的脂类。据称多不饱和ω3脂肪酸对血液中的胆固醇水平有积极作用并且从而可能预防心脏病。通过向食物中加入这些ω3脂肪酸可以显著减小心脏病、中风或者高血压的风险。而且，ω3脂肪酸对与免疫学疾病如类风湿性关节炎有关的炎性、特别是慢性炎性过程有积极作用。因此将它们加入食品中，特别是加入饮食食品中，或者用于药物。ω3脂肪酸如花生四烯酸由于我们通常的饮食摄入通常对与这些风湿病有关的这些病症倾向于有不利影响。
由于它们的积极特征，过去已经尝试利用涉及这些脂肪酸或者甘油三酯的合成的基因在多种生物中产生改变含量的不饱和脂肪酸。从而，WO 91/13972和其美国同族专利描述了Δ9-去饱和酶。WO 93/11245要求保护Δ15去饱和酶，WO 94/11516要求保护Δ12去饱和酶。其他去饱和酶在例如EP-A-0 550 162、WO 94/18337、WO 97/30582、WO 97/21340、WO 95/18222、EP-A-0 794 250、Stukey等人，J.Biol.Chem.，265，1990：20144-20149、Wada等人，Nature 347，1990：200-203或者Huang等人，Lipids 34，1999：649-659中描述。然而，多种去饱和酶的生物化学表征迄今还不充分，因为这些酶是膜结合的蛋白质，对它们的分离和表征造成了巨大困难(McKeon等人，Methods in Enzymol.71，1981：12141-12147，Wang等人，Plant Physiol.Biochem.，26，1988：777-792)。通常，通过导入合适的生物并随后通过分析起始材料和产物而分析酶活性来表征膜结合的去饱和酶。Δ6-去饱和酶在WO 93/06712、US 5,614,393、US5614393、WO 96/21022、WO 00/21557和WO 99/27111中描述。该酶在转基因生物中生产脂肪酸的应用描述于WO 98/46763、WO 98/46764和WO 98/46765。多种去饱和酶的表达在WO 99/64616或者WO 98/46776中描述和要求保护。关于去饱和酶的表达效力和它对多不饱和脂肪酸形成的影响，必须注意到迄今描述的一种去饱和酶的表达仅仅导致低含量的不饱和脂肪酸/脂类，如γ-亚麻酸和十八碳四烯酸。
在过去已经进行了许多尝试以期得到延伸酶基因。Millar和Kunst，1997(Plant Journal 12：121-131)和Millar等人，1999(Plant Cell11：825-838)描述了植物延伸酶的表征，所述延伸酶用于在植物中合成单不饱和的长链脂肪酸(C22:1)和合成极长链脂肪酸以形成蜡(C28-C32)。花生四烯酸和EPA的合成描述于例如WO 01/59128、WO 00/12720、WO 02/077213和WO 02/08401中。多不饱和C24-脂肪酸的合成描述于例如Tvrdik等人2000，J.Cell Biol.149：707-718或WO 02/44320中。
用于产生PUFA的特别适宜的微生物是诸如微藻，如三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)、Porphiridium某些种、破囊壶菌属(Thraustochytrium)某些种、Schizochytrium种或隐甲藻属某些种、纤毛虫例如棘尾虫属(Stylonychia)或豆形虫属(Colpidium)、真菌如被孢霉、虫霉菌属(Entomophthora)或毛霉属(Mucor)和/或藓类如剑叶藓属(Physcomitrella)、角齿藓属(Ceratodon)和地钱属(Marchantia)(R.Vazhappilly和F.Chen(1998)Botanica Marina 41：553-558；K.Totani和K.Oba(1987)Lipids 22：1060-1062；M.Akimoto等，(1998)Appl.Biochemistry and Biotechnology 73：269-278)。菌株选择已经导致开发了所述微生物的许多突变株，它们产生一系列所希望的化合物，包括PUFA。然而，改良产生特定分子如多不饱和脂肪酸的株系的突变和选择是费时且困难的方法，这是为什么优选上述重组方法的原因。然而，借助上述微生物，仅可以产生有限量的所希望的多不饱和脂肪酸，如DPA、EPA或者ARA；其中通常，取决于所用的微生物，它们通常作为脂肪酸混合物得到。
高等植物包含多不饱和脂肪酸如亚油酸(C18:2)和亚麻酸(C18:3)。ARA、EPA和DHA在高等植物的种子油中根本没有发现或者以仅仅以极小量存在(E.Ucciani：Nouveau Dictionnaire des Huiles Végétales[NewDictionary of the Vegetable Oils]。然而，在高等植物，优选在油料种子作物如油菜(oilseed rape)、亚麻子、向日葵和大豆中产生LCPUFA将是有利的，因为食品工业、动物营养和制药目的所需的较大量的高质量LCPUFA可以经济地得到。为此，有利地是通过重组方法向油料种子作物中导入编码LCPUFA生物合成的酶的基因并在其中表达它们。这些基因编码例如，Δ6去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶。这些基因可以有利地从产生LCPUFA并将它们掺入膜或者三酰甘油酯的微生物和低等植物分离。从而，因此已有可能从藓类植物展叶剑叶藓(Physcomitrella patens)中分离Δ6去饱和酶基因并且从展叶剑叶藓和秀丽线虫(C.elegans)中分离Δ6延伸酶基因。。
已经讨论了多种合成途径，它们合成花生四烯酸、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)(图1)。从而，在海洋细菌如弧菌(Vibrio sp.)或希瓦菌(Shewanella sp.)中通过聚酮化合物途径产生了EPA或者DHA(Yu，R.等人Lipids 35：1061-1064，2000；Takeyama，H.等人Micro-biology 143：2725-2731，1997)。
备选策略是改变去饱和酶和延伸酶的活性(zank，T.K.等人PlantJournal 31：255-268，2002；Sakuradani，E.等人Gene 238：445-453，1999)。Δ6去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和Δ4去饱和酶对上述途径的修饰是哺乳动物中的Sprecher途径(Sprecher 2000，Biochim.Biophys.Acta 1486：219-231)。实施进一步的延伸步骤而非Δ4去饱和过程以产生C24，随后通过进一步Δ6-去饱和作用和最终的β-氧化作用产生了C22的链长度。由于调节机制未知，故称作Sprecher的途径(见图1)并不适于植物和微生物中的生产。
取决于它们的去饱和模式，可以将多不饱和脂肪酸分成两大类，即，ω6-或者ω3-脂肪酸，它们的代谢和功能活性不同(图1)。
ω6-代谢途径的起始物质是脂肪酸亚油酸(18:2Δ9，12)，而ω3-途径通过亚麻酸(18:3Δ9，12，15)进行。通过ω3去饱和酶的活性形成亚麻酸(Tocher等人1998，Prog.Lipid Res.37，73-117；Domergue等人2002，Eur.J.Biochem.269，4105-4113)。
哺乳动物，从而人，没有对应的去饱和酶活性(Δ12-和ω3-去饱和酶)并且必须通过食物摄入这些脂肪酸(必需脂肪酸)。以这些前体开始，生理上重要的多不饱和的脂肪酸花生四烯酸(＝ARA，20:4Δ5，8，11，14)、一种ω6-脂肪酸和两种ω3-脂肪酸二十碳五烯酸(＝EPA，20:5Δ5，8，11，14，17)和二十二碳六烯酸(DHA，22:6Δ4，7，10，13，17，19)通过去饱和酶和延伸酶反应顺序合成。ω3-脂肪酸的应用在心血管疾病(Shimikawa 2001，World Rev.Nutr.Diet.88，100-108)、炎症(Calder 2002，Proc.Nutr.Soc.61，345-358)和关节炎(Cleland和James 2000，J.Rheumatol.27，2305-2307)的治疗中显示出上述治疗活性。
因此从营养生理学角度，有利的是实现ω6-合成途径和ω3-合成途径之间的转变(见图1)从而产生更多的ω3-脂肪酸。在文献中已经描述了去饱和C18:2-、C22:4-或者C22:5脂肪酸的多种ω3去饱和酶的酶促活性(见图1)。然而，已经描述了其生物化学性质的去饱和酶没有一种将ω6-合成途径的宽范围底物转化成ω3-合成途径的对应的脂肪酸。
延伸酶将脂肪酸延长2或4个C原子对于分别产生C20-和C22-PUFA是至关重要的。该过程通过4步进行。第一步是通过酮脂酰辅酶A合酶(KCS，以下称作延伸酶)将丙二酸单酰辅酶A缩合到脂肪酸酰基辅酶A上。接着是还原步骤(酮脂酰辅酶A还原酶，KCR)、脱水步骤(脱水酶)和最终的还原步骤(烯酰辅酶A还原酶)。已经推测延伸酶活性影响整个过程的特异性和速率(Millar和Kunst，1997 Plant Journal 12：121-131)。
迄今还没有描述特异的延伸酶在不天然产生DHA脂肪酸的生物中产生DHA(C22:6 n-3)。迄今仅描述了提供C20-或者C24-脂肪酸的延伸酶。迄今还没有描述Δ5延伸酶活性。
包含并且表达编码LCPUFA生物合成酶并且因此产生LCPUFA的第一种转基因植物首次描述于例如DE-A-102 19 203(在植物中产生多不饱和脂肪酸的方法)或WO 2004/071467。然而，这些植物产生的LCPUFA的量需要进一步优化以加工植物中存在的油。从而，DE-A-102 19 203中描述的植物中ARA含量仅为0.4到2％，EPA含量仅为0.5到1％(在每种情况中都基于植物的总脂类含量)。WO 2004/071467公开了更高含量的多不饱和C20-和C22-脂肪酸，如ARA、EPA或DHA。然而，所公开的方法有一系列严重缺点。似乎在所公开的方法中，在种子中根本不能检测到DHA。对于产生PUFA，大豆由于它仅仅按重量计约20％的低油含量而较不适宜。大豆是有利的蛋白质来源并且因此大规模生长。然而，大豆的油含量相当低。此外，在生产过程中得到的二高-γ-亚麻酸(＝DGHL或者HGLA)含量太高。在鱼油或者藻类油或者微生物油中几乎不能检测到HGLA。另一个缺点是WO 2004/071467中公开的植物通过共转化产生，这导致随后的世代中特征分离，从而加重了选择工作。
因此，为了用这些多不饱和脂肪酸强化食品和/或饲料，非常需要在植物系统，特别是在转基因植物的种子中产生这些多不饱和脂肪酸的简单、廉价的方法。
因此，本发明的目的是开发在转基因植物的种子中大量产生多不饱和脂肪酸，特别是ARA、EPA和DHA的方法。通过根据本发明方法在转基因植物的种子中产生基于总脂类内含物按重量计至少20％含量的通式I化合物实现了该目的，
Figure A20058000742800221
所述方法包括下面的步骤：
a)向生物中导入至少一种编码Δ9延伸酶和Δ6去饱和酶活性的核酸序列，和
b)向生物中导入至少一种编码Δ8去饱和酶和Δ6延伸酶活性的核酸序列，和
c)向生物中导入至少一种编码Δ5去饱和酶活性的核酸序列，和
d)向生物中导入至少一种编码Δ5延伸酶活性的核酸序列，和
e)向生物中导入至少一种编码Δ4去饱和酶活性的核酸序列，和
其中式I中的变量和取代基具有下面的含义：
R1＝羟基、辅酶A(硫酯)、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血二磷脂酰甘油、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰肌醇、鞘碱(sphingo base)或者通式II的原子团
Figure A20058000742800231
R2＝氢、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血二磷脂酰甘油、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰肌醇，或者饱和或不饱和的C2-C24-烷基羰基，
R3＝氢、饱和或不饱和的C2-C24-烷基羰基，或者R2和R3相互独立地为式Ia的原子团：
Figure A20058000742800232
n＝2、3、4、5、6、7或9，m＝2、3、4、5或6并且p＝0或3。有利地，上述式I和Ia中变量n、m和p表示下面的含义：n＝2，3或5，m＝4，5或6和p＝0或3。在该方法的特别有利的实施方案中，式I和Ia中变量n、m和p表示下面的含义：m＝4，n＝3，p＝3并且通式I和Ia的化合物从而表示花生四烯酸，和/或m＝5，n＝3，p＝0并且通式I和Ia的化合物从而表示二十碳五烯酸，和/或m＝5，n＝5，p＝0并且通式I和Ia的化合物从而表示二十二碳五烯酸，和/或m＝6，n＝3，p＝0并且通式I和Ia的化合物从而表示二十二碳六烯酸。
通式I中R1为羟基、辅酶A(硫酯)、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血二磷脂酰甘油、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰肌醇、鞘碱或式II的原子团
Figure A20058000742800233
上述R1原子团总是以它们的硫酯形式结合到通式I的化合物。
通式II中的R2为氢、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血二磷脂酰甘油、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰肌醇，或者饱和或不饱和的C2-C24-烷基羰基。
可以提及的烷基原子团是取代或者未取代的、饱和或不饱和的C2-C24-烷基羰基链，如乙基羰基、正丙基羰基、正丁基羰基、正戊基羰基、正己基羰基、正庚基羰基、正辛基羰基、正壬基羰基、正癸基羰基、正十一烷基羰基、正十二烷基羰基、正十三烷基羰基、正十四烷基羰基、正十五烷基羰基、正十六烷基羰基、正十七烷基羰基、正十八烷基羰基、正十九烷基羰基、正二十烷基羰基、正二十二烷基羰基或者正二十四烷基羰基，它们包含一个或多个双键。优选包含一个或多个双键的饱和或不饱和C10-C22-烷基羰基原子团，如正癸基羰基、正十一烷基羰基、正十二烷基羰基、正十三烷基羰基、正十四烷基羰基、正十五烷基羰基、正十六烷基羰基、正十七烷基羰基、正十八烷基羰基、正十九烷基羰基、正二十烷基羰基、正二十二烷基羰基或者正二十四烷基羰基。特别优选包含一个或多个双键的饱和和/或不饱和的C10-C22-烷基羰基原子团，如C10-烷基羰基、C11-烷基羰基、C12-烷基羰基、C13-烷基羰基、C14-烷基羰基、C16-烷基羰基、C18-烷基羰基、C20-烷基羰基或C22-烷基羰基原子团。非常特别优选包含一个或多个双键的饱和或不饱和的C16-C22-烷基羰基原子团，如C16-烷基羰基、C18-烷基羰基、C20-烷基羰基或C22-烷基羰基。这些有利的原子团可以包含2、3、4、5或6个双键。在脂肪酸链中有20或22个碳原子的特别优选的原子团包含高达6个双键，有利地3、4、5或6个双键，特别优选4、5或6个双键，非常特别优选5或6个双键。所有上述原子团都来自对应的脂肪酸。
式II中的R3是氢、饱和的或不饱和的C2-C24-烷基羰基。
可以提及的烷基原子团是包含一个或多个双键的取代或者未取代的、饱和或不饱和的C2-C24-烷基羰基链，如乙基羰基、正丙基羰基、正丁基羰基、正戊基羰基、正己基羰基、正庚基羰基、正辛基羰基、正壬基羰基、正癸基羰基、正十一烷基羰基、正十二烷基羰基、正十三烷基羰基、正十四烷基羰基、正十五烷基羰基、正十六烷基羰基、正十七烷基羰基、正十八烷基羰基、正十九烷基羰基、正二十烷基羰基、正二十二烷基羰基或者正二十四烷基羰基。优选包含一个或多个双键的饱和或不饱和C10-C22-烷基羰基原子团，如正癸基羰基、正十一烷基羰基、正十二烷基羰基、正十三烷基羰基、正十四烷基羰基、正十五烷基羰基、正十六烷基羰基、正十七烷基羰基、正十八烷基羰基、正十九烷基羰基、正二十烷基羰基、正二十二烷基羰基或者正二十四烷基羰基。特别优选包含一个或多个双键的饱和和/或不饱和的C10-C22-烷基羰基原子团，如C10-烷基羰基、C11-烷基羰基、C12-烷基羰基、C13-烷基羰基、C14-烷基羰基、C16-烷基羰基、C18-烷基羰基、C20-烷基羰基或C22-烷基羰基原子团。非常特别优选包含一个或多个双键的饱和或不饱和的C16-C22-烷基羰基原子团，如C16-烷基羰基、C18-烷基羰基、C20-烷基羰基或C22-烷基羰基原子团。这些有利的原子团可以包含2、3、4、5或6个双键。在脂肪酸链中有20或22个碳原子的特别优选的原子团包含高达6个双键，有利地3、4、5或6个双键，特别优选4、5或6个双键，非常特别优选5或6个双键。所有上述原子团都来自对应的脂肪酸。
上述R1、R2和R3原子团可以被羟基和/或环氧基取代和/或可以包含三键。
在根据本发明的方法中产生的多不饱和脂肪酸有利地包含至少2个，有利地3、4、5或6个双键。脂肪酸特别有利地包含4、5或6个双键。该方法中产生的脂肪酸有利地在脂肪酸链中有18、20或22个C原子；脂肪酸在该脂肪酸链中优选包含20或22个碳原子。通过该方法中使用的核酸，饱和脂肪酸有利地最小程度地反应，或者根本不反应。最小程度将理解为表示饱和脂肪酸与多不饱和脂肪酸相比以小于5％的活性，有利地小于3％，特别有利地小于2％，非常特别优选小于1、0.5、0.25或0.125％的活性反应。已经产生的这些脂肪酸可以在该方法中作为单一产物或者以脂肪酸混合物存在。
根据本发明的方法中使用的核酸序列以分离的核酸序列的形式存在，这些核酸序列编码具有Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶活性的多肽。
根据本发明的方法中有利地使用的核酸序列是编码具有Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶活性的多肽的核酸序列，它们选自：
a)具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199或SEQ ID NO：201中所示序列的核酸序列，或
b)核酸序列，其由于遗传密码简并性可以从SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76、SEQID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：194、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：200或者SEQ ID NO：202中所示的氨基酸序列衍生得到，或者
c)SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：193、SEQID NO：197、SEQ ID NO：199或SEQ ID NO：201中所示核酸序列的衍生物，其编码的多肽在氨基酸水平上与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：60、SEQID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQID NO：88、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：194、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：200或SEQ ID NO：202有至少40％同一性并且具有Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶活性。
有利地，通式I和II中的取代基R2或R3相互独立地为饱和或不饱和的C18-C22-烷基羰基；特别有利地相互独立的为C18-、C20-或C22-烷基羰基，其具有至少2个双键，有利地具有至少3、4、5或6个双键，特别有利地具有至少4、5或6个双键。
在该方法的优选实施方案中，还向转基因植物中导入编码具有ω3去饱和酶活性的核酸序列，其选自：
a)具有SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：105中所示序列的核酸序列，或者
b)由于遗传密码简并性，可以从SEQ ID NO：88或者SEQ ID NO：106中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或者
c)SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：105中所示核酸序列的衍生物，其编码的多肽在氨基酸水平上与SEQ ID NO：88或SEQ ID NO：106有至少60％同一性并且具有ω3去饱和酶活性。
在该方法的另一优选实施方案中，还向转基因植物中导入编码具有Δ12去饱和酶活性的多肽的核酸序列，其选自：
a)具有SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：195中所示序列的核酸序列，或者
b)由于遗传密码简并性，可以从SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110或者SEQ ID NO：196中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或者
c)SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：195中所示核酸序列的衍生物，其编码的多肽在氨基酸水平上与SEQ ID NO：108、SEQID NO：110或者SEQ ID NO：196有至少60％同一性并且具有Δ12去饱和酶活性。
这些上述Δ12去饱和酶序列可以单独或者与ω3去饱和酶序列组合与用于该方法中的编码Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或者Δ4去饱和酶的核酸序列一起使用。
表1显示了所述核酸序列、来源生物和序列ID号。
  No.   生物  活性  序列号
  1.   细小裸藻(Euglena gracilis)  Δ8去饱和酶  SEQ ID NO：1
  2.   绿光等鞭金藻(Isochrysis galbana)  Δ9延伸酶  SEQ ID NO：3
  3.   三角褐指藻(Phaedodactylum tricornutum)  Δ5去饱和酶  SEQ ID NO：5
  4.   角齿藓(Ceratodon pupureus)  Δ5去饱和酶  SEQ ID NO：7
  5.   展叶剑叶藓(Physcomitrella patens)  Δ5去饱和酶  SEQ ID NO：9
  6.   破囊壶菌属中的种(Thraustrochytrium sp.)  Δ5去饱和酶  SEQ ID NO：11
  7.   高山被孢霉(Mortierella alpina)  Δ5去饱和酶  SEQ ID NO：13
  8.   秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)  Δ5去饱和酶  SEQ ID NO：15
  9.   琉璃苣(Borago officinalis)  Δ6去饱和酶  SEQ ID NO：17
  10.   角齿藓  Δ6去饱和酶  SEQ ID NO：19
  11.   三角褐指藻  Δ6去饱和酶  SEQ ID NO：21
  12.   展叶剑叶藓  Δ6去饱和酶  SEQ ID NO：23
  No.  生物  活性   序列号
  13.  秀丽隐杆线虫  Δ6去饱和酶   SEQ ID NO：25
  14.  展叶剑叶藓  Δ6延伸酶   SEQ ID NO：27
  15.  破囊壶菌属中的种  Δ6延伸酶   SEQ ID NO：29
  16.  致病疫霉(Phytopthera infestans)  Δ6延伸酶   SEQ ID NO：31
  17.  高山被孢霉  Δ6延伸酶   SEQ ID NO：33
  18.  高山被孢霉  Δ6延伸酶   SEQ ID NO：35
  19.  秀丽隐杆线虫  Δ6延伸酶   SEQ ID NO：37
  20.  细小裸藻  Δ4去饱和酶   SEQ ID NO：39
  21.  破囊壶菌属中的种  Δ4去饱和酶   SEQ ID NO：41
  22.  假矮海链藻(Thalassiosira pseudonana)  Δ5延伸酶   SEQ ID NO：43
  23.  假矮海链藻  Δ6延伸酶   SEQ ID NO：45
  24.  寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)  Δ5延伸酶   SEQ ID NO：47
  25.  寇氏隐甲藻  Δ5延伸酶   SEQ ID NO：49
  26.  虹鳟(Oncorhynchus mykiss)  Δ5延伸酶   SEQ ID NO：51
  27.  虹鳟  Δ5延伸酶   SEQ ID NO：53
  28.  假矮海链藻  Δ5延伸酶   SEQ ID NO：59
  29.  假矮海链藻  Δ5延伸酶   SEQ ID NO：61
  30.  假矮海链藻  Δ5延伸酶   SEQ ID NO：63
  31.  鲜黄破囊壶菌(Thraustrochytrium aureum)  Δ5延伸酶   SEQ ID NO：65
  32.  Ostreococcus tauri  Δ5延伸酶   SEQ ID NO：67
  33.  Ostreococcus tauri  Δ6延伸酶   SEQ ID NO：69
  34.  有粉报春(Primula farinosa)  Δ6去饱和酶   SEQ ID NO：71
  35.  高穗花报春(Primula vialii)  Δ6去饱和酶   SEQ ID NO：73
  36.  Ostreococcus tauri  Δ5延伸酶   SEQ ID NO：75
  No.   生物   活性   序列号
  37.   Ostreococcus tauri   Δ5延伸酶   SEQ ID NO：77
  38.   Ostreococcus tauri   Δ5延伸酶   SEQ ID NO：79
  39.   Ostreococcus tauri   Δ6延伸酶   SEQ ID NO：81
  40.   破囊壶菌属中的种   Δ5延伸酶   SEQ ID NO：83
  41.   假矮海链藻   Δ5延伸酶   SEQ ID NO：85
  42.   致病疫霉   ω3去饱和酶   SEQ ID NO：87
  43.   Ostreococcus tauri   Δ6去饱和酶   SEQ ID NO：89
  44.   Ostreococcus tauri   Δ5去饱和酶   SEQ ID NO：91
  45.   Ostreococcus tauri   Δ5去饱和酶   SEQ ID NO：93
  46.   Ostreococcus tauri   Δ4去饱和酶   SEQ ID NO：95
  47.   假矮海链藻   Δ6去饱和酶   SEQ ID NO：97
  48.   假矮海链藻   Δ5去饱和酶   SEQ ID NO：99
  49.   假矮海链藻   Δ5去饱和酶   SEQ ID NO：101
  50.   假矮海链藻   Δ4去饱和酶   SEQ ID NO：103
  51.   假矮海链藻   ω3去饱和酶   SEQ ID NO：105
  52.   Ostreococcus tauri   Δ12去饱和酶   SEQ ID NO：107
  53.   假矮海链藻   Δ12去饱和酶   SEQ ID NO：109
  54.   Ostreococcus tauri   Δ6延伸酶   SEQ ID NO：111
  55.   Ostreococcus tauri   Δ5延伸酶   SEQ ID NO：113
  56.   非洲爪蟾(Xenopus laevis)(BC044967)   Δ5延伸酶   SEQ ID NO：117
  57.   玻璃海鞘(Ciona intestinalis)(AK112719)   Δ5延伸酶   SEQ ID NO：119
  58.   细小裸藻   Δ5延伸酶   SEQ ID NO：131
  59.   细小裸藻   Δ5延伸酶   SEQ ID NO：133
  60.   拟南芥(Arabidopsis thaliana)   Δ5延伸酶   SEQ ID NO：135
  No.  生物 活性   序列号
  61.  拟南芥 Δ5延伸酶   SEQ ID NO：137
  62.  三角褐指藻 Δ6延伸酶   SEQ ID NO：183
  63.  Phytium irregulare Δ6去饱和酶   SEQ ID NO：193
  64.  金盏花(Calendula officinalis) Δ12去饱和酶   SEQ ID NO：195
  65.  Ostreococcus tauri Δ5延伸酶   SEQ ID NO：197
  66.  Ostreococcus tauri Δ6延伸酶   SEQ ID NO：199
  67.  Ostreococcus tauri Δ6去饱和酶   SEQ ID NO：201
在本发明的另一实施方案中，将开发用于在转基因植物中产生大量多不饱和脂肪酸，特别是ARA和EPA的方法。该方法也适于产生DHA。从而，可以用该方法产生ARA、EPA、DHA或者它们的混合物。本发明的另一实施方案是在转基因植物中产生通式I的化合物的方法，
Figure A20058000742800321
该方法包括：
a)向植物中导入至少一种核酸序列，其编码具有Δ6去饱和酶活性的多肽并且选自：
i)具有SEQ ID NO：193或者SEQ ID NO：201中所示序列的核酸，
ii)编码SEQ ID NO：194或者SEQ ID NO：202中所示氨基酸序列的核酸序列，
iii)在严格条件下与SEQ ID NO：193或者SEQ ID NO：201中所示核酸序列的互补链杂交的核酸序列，和
iv)与SEQ ID NO：193或者SEQ ID NO：201中所示序列有至少60％同一性的核酸序列，
b)向植物中导入至少一种核酸序列，其编码具有Δ6延伸酶活性的多肽并且选自：
i)具有SEQ ID NO：27或者SEQ ID NO：199中所示序列的核酸，
ii)编码SEQ ID NO：28或者SEQ ID NO：200中所示氨基酸序列的核酸序列，
iii)在严格条件下与SEQ ID NO：27或者SEQ ID NO：199中所示核酸序列的互补链杂交的核酸序列，和
iv)与SEQ ID NO：27或者SEQ ID NO：199中所示序列有至少60％同一性的核酸序列，
c)向植物中导入至少一种核酸序列，其编码具有Δ5去饱和酶活性的多肽并且选自：
i)具有SEQ ID NO：11中所示序列的核酸，
ii)编码SEQ ID NO：12中所示氨基酸序列的核酸序列，
iii)在严格条件下与SEQ ID NO：11中所示核酸序列的互补链杂交的核酸序列，和
iv)与SEQ ID NO：11中所示序列有至少60％同一性的核酸序列，
其中式I中的变量和取代基具有上面给出的含义。
可以用于本发明方法的核酸序列在WO 02/26946(Δ5去饱和酶，来自破囊壶菌属(Thraustochytrium ssp.)，SEQ ID NO：11，Δ6去饱和酶，来自Phytium irregulare，SEQ ID NO：193)和WO 01/59128(Δ6延伸酶，来自SEQ ID NO：27)中描述，将它们在此特别引用。然而，在这些情况中，ARA和EPA的形成没有在转基因植物中研究，而仅仅在微生物中研究，或者在转基因植物中没有检测到ARA和EPA合成增加。此外，在这些申请中，根据本发明的核酸没有与编码脂肪酸生物合成途径的其他酶的核酸组合。
令人惊奇地，现在已经发现转基因植物中具有SEQ ID NO：11、27、193、199和201中所示序列的核酸的共表达导致ARA含量基于植物中总的脂类含量极大地增加到高达8％，有利地高达超过10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％，特别有利地超过21％、22％、23％、24％或25％(参见表2、表3、表4和图31)。上述百分数为重量百分数。
为了进一步增加对产生含有多不饱和脂肪酸，特别是ARA、EPA或者DHA或者它们的混合物的油和/或甘油三酯所述方法中的产率(所述多不饱和脂肪酸的含量与来自野生型植物的油和/或甘油三酯相比有利地增加)，有利地是增加脂肪酸生物合成的起始材料的量。这可以例如通过导入编码具有Δ12去饱和酶活性的多肽的核酸，并在生物中共表达该核酸来实现。
这在具有高油酸含量但是仅仅低的亚油酸含量的产油生物中是特别有利地，所述生物为例如十字花科(Brassicaceae)，如芸苔(Brassica)属，例如，油菜、芜菁油菜(turnip rape)或者印度芥菜(Indian mustard)；胡颓子科(Elaeagnaceae)，如胡颓子属(Elaeagnus)，例如油橄榄(Oleaeuropaea)的属和种，或者豆科(Fabaceae)，如大豆属(Glycine)，例如，大豆(Glycine max)的属和种(Mikoklajczak等人，Journal of theAmerican Oil Chemical Society，38，1961，678-681)。
这是为什么在本发明的优选实施方案中，还向转基因植物额外导入编码具有Δ12去饱和酶活性的多肽的核酸序列的原因。
特别优选地，该核酸序列选自：
a)具有SEQ ID NO：195中所示序列的核酸序列，
b)编码SEQ ID NO：196中所示氨基酸序列的核酸序列，
c)在严格条件下与SEQ ID NO：195中所示核酸序列的互补链杂交的核酸序列，和
d)与SEQ ID NO：195中所示序列有至少60％同一性的核酸序列。
SEQ ID NO：195所示的核酸序列来自金盏花并且描述于WO01/85968，将其公开同样引入本申请作为参考。
用于根据本发明方法的Δ12去饱和酶有利地将油酸(C18:1Δ9)转化成亚油酸(C18:2Δ9，12)或者将C18:2Δ6，9转化成C18:3Δ6，9，12(γ-亚麻酸＝GLA)，其是ARA、EPA和DHA合成的原料。Δ12去饱和酶有利地转化结合到磷脂或者辅酶A脂肪酸酯，有利地结合到辅酶A脂肪酸酯的脂肪酸。如果预先发生了延伸步骤，那么这有利地导致更高产率的合成产物，因为通常延伸在辅酶A脂肪酸酯发生，而去饱和主要发生在磷脂或者甘油三酯。从而不需要辅酶A脂肪酸酯和磷脂或者甘油三酯之间的交换，这将需要进一步的可能限制性的酶反应。
Δ12去饱和酶在转基因植物中的额外表达导致ARA含量基于植物的总脂类含量进一步增加到高达超过10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％和20％，特别有利地超过21％、22％、23％、24％或25％(参见表3和4和图32)。上面的百分数为重量百分数。
在根据本发明的方法中，编码具有Δ5延伸酶活性的多肽的其他核酸序列可以有利地导入植物中。
优选编码Δ5延伸酶活性的那些核酸序列，其选自：
a)SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQID NO：79、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：113、SEQ IDNO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ IDNO：135、SEQ ID NO：137或者SEQ ID NO：197中所示核酸序列，
b)编码SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ IDNO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：114、SEQID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQID NO：136、SEQ ID NO：138或者SEQ ID NO：198中所示氨基酸序列的核酸序列，
c)核酸序列，其在严格条件下与SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137或者SEQ ID NO：197中所示核酸序列的互补链杂交，和
d)核酸序列，其与SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137或者SEQ ID NO：197中所示序列有至少60％同一性。
在该方法的优选实施方案中，Δ5延伸酶在种子特异的启动子控制下表达。
在该方法的另一有利的实施方案中，所有核酸序列都导入植物中共用的重组核酸分子上，每种核酸序列都可以处于其自身启动子控制下并且该自身启动子可以为种子特异启动子的形式。
然而，不仅序列表中详述的核酸可以成功地用于本发明中进行所述转化；而且，甚至在一定程度上偏离这些序列并且编码具有基本上相同酶促活性的蛋白质的序列也可以使用。这些序列与序列表中给出的序列有一定程度的同一性或同源性。基本相同的酶促活性表示具有野生型酶的至少20％、30％、40％、50％或者60％，有利地至少70％、80％、90％或者95％，特别有利地至少96％、97％、98％或99％的酶促活性的蛋白质。
为了确定两种氨基酸序列或者两种核酸的同源性(＝同一性)百分数。将一条序列写在另一条的下面(例如，可以在蛋白质或者核酸的序列中引入缺口以便与另一蛋白质或者另一核酸产生最佳比对)。然后，比较对应氨基酸位置或者核苷酸位置处的氨基酸原子团或者核苷酸。如果序列中的位置被与另一序列中对应位置相同的氨基酸原子团或者相同核苷酸占据，那么这两个分子在该位置是同源的(即，本上下文中所用的氨基酸或者核酸“同源性”对应于氨基酸或核酸“同一性”)。两种序列之间同源性百分数是这两种序列共有位置数的函数(即，％同源性＝相同位置数/位置总数×100)。因此认为术语同源性和同一性是同义的。
在整个氨基酸或者核酸序列区上计算同源性。为了比较多种序列，技术人员可以利用基于多种算法的一系列程序。Needleman和Wunsch或者Smith和Waterman的算法给出尤其可靠的结果。程序PileUp(J.Mol.Evolution.，25，351-360，1987，Higgins等人，CABIOS，51989：151-153)或者程序Gap和BestFit[Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48；443-453(1970)和Smith和Waterman(Adv.Appl.Math.2；482-489(1981)]是GCG软件包[Genetics Computer Group，575 Science Drive，Madison，Wisconsin，USA 53711(1991)]的部分，用于进行序列比较。使用程序GAP使用下面的设置在整个序列区上确定上面给出的序列同源性数据(以％表示)：缺口权重：50，长度权重：3，平均匹配：10.000和平均错配：0.000。除非另外指出，这些设置总是用作序列比较的标准设置。
技术人员将认识到在群体中可以发生DNA序列多态性，其导致SEQID NO：12、28、194、196、198、200和/或202的氨基酸序列的修饰。这些天然变体通常导致Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ6延伸酶基因的核苷酸序列中1到5％的变异。本发明的范围将包含每种和所有这些核苷酸变异和Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ6延伸酶中所得氨基酸多态性，它们是天然变异的结果并且基本上不改变酶活性。
用于根据本发明的方法中的Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5延伸酶或Δ5去饱和酶的基本酶活性理解为表示它们与该序列和它的衍生物编码的蛋白质/酶相比保留至少10％，优选至少20％，特别优选至少30％、40％、50％或者至少60％，最优选至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或者99％的酶活性并且它们从而能够参与植物或者植物细胞中脂肪酸、脂肪酸酯，如二酰基甘油酯和/或三酰甘油酯的合成所需的化合物的代谢或者参与分子跨膜运输，所述分子指脂肪酸分子中C18-、C20-或者C22-碳链，其在至少2个位置，有利地3、4或者5个位置有双键。
同样地，本发明的范围包括在严格条件下与所用的Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ6延伸酶核酸的互补链杂交的核酸分子。本发明上下文中所用的术语“在严格条件下杂交”将描述杂交和洗涤条件，在所述条件下相互具有至少60％同源性的核苷酸序列通常保持相互杂交。优选使得具有至少约65％、70％、80％或90％同源性，优选至少约91％、92％、93％、94％或95％同源性，特别优选至少约96％、97％、98％、99％或者以上同源性的序列通常保持相互杂交的条件。这些严格条件是技术人员已知的并且例如在Current Protocols in MolecularBiology，John Wiley & Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6中描述。
严格杂交条件的优选的非限制性实例是在6x氯化钠/柠檬酸钠(＝SSC)中约45℃下杂交，然后在0.2×SSC，0.1％ SDS中50到65℃下洗涤一次或多次。技术人员已知这些杂交条件取决于核酸的类型而不同，例如，当存在有机溶剂时，温度和缓冲液浓度不同。在“标准杂交条件”下，例如，取决于核酸类型，在浓度为0.1到5×SSC的水性缓冲液中(pH7.2)，杂交温度为42℃到58℃。如果在上述缓冲液中存在有机溶剂，例如，50％甲酰胺，那么在标准条件下的温度为约42℃。DNA:DNA杂合分子的优选的杂交条件为例如，0.1×SSC和20℃到45℃，优选30℃到45℃。优选地，DNA:RNA杂合分子的杂交条件为例如，0.1×SSC和30℃到55℃，优选45℃到55℃。对长度为约100bp(＝碱基对)并且G+C含量为50％的核酸，在不存在甲酰胺的条件下，确定上述杂交温度。技术人员已知怎样根据教科书如Sambrook等人，“Molecular Cloning”，Cold Spring Harbor Laboratory，1989；Hames and Higgins(Eds.)1985，“Nucleic Acids Hybridization：APractical Approach”，IRL Press at Oxford University Press，Oxford；Brown(Ed.)1991，“Essential Molecular Biology：A Practical Approach”，IRL Press at Oxford University Press，Oxford确定所需的杂交条件。
通过向核苷酸序列导入一个或多个核苷酸替代、添加或者缺失，可能产生分离的编码Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ6延伸酶的核酸分子，它们具有一个或多个氨基酸替代、添加或者缺失。可以通过标准技术，如定点诱变和PCR介导的诱变向序列之一导入突变。优选在一个或多个上面的非必需氨基酸原子团中产生保守氨基酸替代。在“保守氨基酸替代”中，氨基酸原子团用具有相似侧链的氨基酸原子团替代。在本领域中已经定义了具有相似侧链的氨基酸原子团家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β分枝侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。从而，Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或者Δ6延伸酶中预测的非必需氨基酸原子团优选被来自侧链的同一家族的另一氨基酸原子团替换。在另一实施方案中，突变可以备选地例如通过饱和诱变在编码Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或者Δ6延伸酶的序列的全长或者部分序列上随机导入，并且所得突变体可以通过重组表达本文所述的Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或者Δ6延伸酶活性来筛选以便鉴定保留了Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或者Δ6延伸酶活性的突变体。
根据本发明的方法中产生的多不饱和脂肪酸有利地包含至少2个，优选3、4、5或6个双键。脂肪酸特别优选包含4、5或6个双键。该方法中产生的脂肪酸优选具有20或者22个碳原子长度。
饱和脂肪酸优选地在很小程度上与该方法中所用的核酸反应或者根本不反应。“很小程度”理解为指与多不饱和脂肪酸相比，饱和的脂肪酸以小于5％，优选以小于3％，特别优选以小于2％，最优选小于1、0.5、0.25或0.125％的活性反应。所产生的脂肪酸可以组成本方法的唯一产物或者可以以脂肪酸混合物存在。
本发明中产生的多不饱和脂肪酸有利地结合在膜脂类和/或三酰甘油酯中，但是也在生物中作为游离脂肪酸发生或者以其他形式的脂肪酸酯的形式结合。在该上下文中，它们可以作为“纯的产物”存在或者有利地以多种脂肪酸的混合物或者不同甘油酯的混合物的形式存在。结合在三酰甘油酯中的多种脂肪酸可以来自具有4到6个C原子的短链脂肪酸，具有8到12个C原子的中等链脂肪酸，或者具有14到24个C原子的长链脂肪酸，优选长链脂肪酸，特别优选C18-，C20-和/或C22-脂肪酸的长链脂肪酸LCPUFA，非常特别优选C20-和/或C22-脂肪酸的长链脂肪酸LCPUFA，如ARA、EPA、DHA或者它们的组合。
根据本发明的方法有利地产生脂肪酸酯，其中该脂肪酸酯中多不饱和的C18-，C20-和/或C22-脂肪酸分子有至少2个双键，有利地在脂肪酸酯中有至少3、4、5或6个双键，特别有利地脂肪酸酯中有4、5或6个双键，非常特别有利地在脂肪酸酯中有至少5或6个双键。这有利地导致合成亚油酸(＝LA，C18:2Δ9，12)、γ-亚麻酸(＝GLA，C18:3Δ6，9，12)、十八碳四烯酸(＝SDA，C18:4Δ6，9，12，15)、二高-γ-亚麻酸(＝DGLA，20:3Δ8，11，14)、ω3-二十碳四烯酸(＝ETA，C20:4Δ5，8，11，14)、花生四烯酸(ARA，C20:4Δ5，8，11，14)、二十碳五烯酸(EPA，C20:4Δ5，8，11，14)或者它们的混合物，优选产生ω3-二十碳四烯酸(＝ETA，C20:4Δ5，8，11，14)、花生四烯酸(ARA，C20:4Δ5，8，11，14)、二十碳五烯酸(EPA，C20:5Δ5，8，11，14，17)、ω6-二十二碳五烯酸(C22:5Δ4，7，10，13，16)、ω6-二十二碳四烯酸(C22:4Δ7，10，13，16)、ω3-二十二碳五烯酸(＝DPA，C22:5Δ7，10，13，16，19)、二十二碳六烯酸(＝DHA，C22:6Δ4，7，10，13，16，19)或者它们的混合物，非常特别产生ARA、EPA和/或DHA。有利地产生ω3-脂肪酸，如EPA和/或DHA，优选DHA。
具有多不饱和的C18-、C20-和/或C22-脂肪酸分子，有利地具有多不饱和的C20-和/或C22-脂肪酸分子的脂肪酸酯可以以油或者脂类的形式，例如，以诸如鞘脂类、磷酸甘油酯、脂类、糖脂例如糖鞘脂类、磷脂，如磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇或者双磷脂酰甘油、单酰基甘油酯、二酰基甘油酯、三酰甘油酯，或者其他脂肪酸酯，如乙酰辅酶A酯的化合物形式从用于制备脂肪酸酯的植物分离，所述化合物包含具有至少2、3、4、5或6个双键，优选具有4、5或者6个双键，特别优选具有5或者6个双键的多不饱和脂肪酸。优选地，它们以它们的二酰基甘油酯、三酰甘油酯和/或以磷脂酰胆碱，特别优选以三酰甘油酯的形式分离。除了这些酯，多不饱和脂肪酸还在植物中以游离脂肪酸存在或者结合在其他化合物中。通常，多种上述化合物(脂肪酸酯和游离脂肪酸)存在于生物中，大概分布为按重量计80到90％甘油三酯，按重量计2到5％甘油二酯，按重量计5到10％甘油一酯，按重量计1到5％游离脂肪酸，按重量计2到8％磷脂，多种化合物的总量为按重量计100％。
在根据本发明的方法中(对于本发明和其中所示的公开，单数形式包含复数形式并且反之亦然)，基于转基因生物中，有利地在转基因植物的种子中的总脂肪酸，所产生的LCPUFA的含量按重量计为至少3、5、6、7或8％，有利地按重量计至少9、10、11、12、13、14或15％，优选按重量计至少16、17、18、19或20％，特别优选按重量计至少21、22、23、24或25％，非常特别优选按重量计至少26、27、28、29或30％。这里，宿主生物中存在的C18-和/或C20-脂肪酸有利地转化成对应的产物，如ARA、EPA、DPA或者DHA(仅提及少数作为实例)，转化率为至少10％，有利地至少20％，特别有利地至少30％，非常特别有利地至少40％。脂肪酸有利地以结合的形式产生。
在分子中有4或5个双键的多不饱和C20-脂肪酸有利地在本发明方法中产生，所有此类脂肪酸一起的含量基于转基因植物的种子中总脂肪酸按重量计为至少15、16、17、18、19、或20％，有利地按重量计至少21、22、23、24或25％，特别有利地按重量计至少26、27、28、29或30％。
在分子中有4、5或6个双键的多不饱和C20-和/或C22-脂肪酸有利地在本发明方法中产生，所有此类脂肪酸一起的含量基于转基因植物的种子中总脂肪酸按重量计为至少15、16、17、18、19、或20％，有利地按重量计至少21、22、23、24或25％，特别有利地按重量计至少26、27、28、29或30％，非常特别有利地按重量计至少31、32、33、34或35％。
在根据本发明的方法中产生ARA，其含量基于转基因植物的种子中总脂类含量为按重量计至少3、5、6、7、8、9或10％，有利地按重量计至少11、12、13、14或15％，优选地按重量计至少16、17、18、19或20％，特别优选地按重量计至少21、22、23、24或25％，最优选地按重量计至少26％。
在根据本发明的方法中产生EPA，其含量基于转基因植物的种子中总脂类含量为按重量计至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1％，有利地按重量计至少2、3、4或5％，优选地按重量计至少6、7、8、9或10％，特别优选地按重量计至少11、12、13、14或15％，最优选地按重量计至少16％。
在根据本发明的方法中产生DHA，其含量基于转基因植物的种子中总脂类含量为按重量计至少0.01或0.02％，有利地按重量计至少0.03或0.05％，有利地按重量计至少0.09或0.1％，特别优选地按重量计至少0.2或0.3％，最优选地按重量计至少0.35％。
借助于根据本发明的方法中使用的核酸，这些不饱和脂肪酸可能位于有利地产生的甘油三酯的sn1、sn2和/或sn3位。因为在根据本发明的方法中，起始化合物亚油酸(C18:2)和亚麻酸(C18:3)经过许多反应步骤，该方法的终产物，如花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)、ω6-二十二碳五烯酸或者DHA不作为绝对纯的产物得到，所以在终产物中也总是存在痕量的前体。例如，如果在起始生物，或者起始植物中存在亚油酸和亚麻酸，那么终产物如ARA、EPA或者DHA作为混合物存在。有利地是在终产物ARA或者DHA中，在每种情况下应该存在仅很小量的其他终产物。这是为什么在含有DHA的脂类和/或油中，应该存在按重量计小于15、14、13、12或11％，有利地按重量计小于10、9、8、7、6或5％，特别有利地按重量计小于4、3、2或1％EPA和/或ARA的原因。这是为什么在含有EPA的脂类和/或油中，应该存在按重量计小于15、14、13、12或11％，有利地按重量计小于10、9、8、7、6或5％，特别有利地按重量计小于4、3、2或1％ARA的原因。这是为什么在含有ARA的脂类和/或油中，应该存在按重量计小于15、14、13、12或11％，有利地按重量计小于10、9、8、7、6或5％，特别有利地按重量计小于4、3、2或1％EPA和/或DHA的原因。
然而，一种产物中不同多不饱和C20-和/或C22-脂肪酸的混合物也可以是所希望的。在这些情况中，含有DHA的脂类和/或油可以基于转基因植物的种子中总脂类含量，包含按重量计至少1、2、3、4或5％ARA和/或EPA，有利地按重量计至少6、7或8％，特别有利地按重量计至少9、10、11、12、13、14、或15％，非常特别有利地按重量计至少16、17、18、19、20、21、22、23、24或25％。
基于所述终产物的量，前体应该有利地按重量计不超过20％，优选按重量计不超过15％，特别优选地按重量计不超过10％，非常特别优选地按重量计不超过5％。有利地，在本发明的方法中，转基因植物中仅ARA、EPA或者仅DHA以结合形式或者游离酸形式作为终产物产生。如果化合物ARA、EPA和DHA同时产生，它们有利地以至少1∶1∶2(EPA∶ARA∶DHA)，有利地至少1∶1∶3，优选1∶1∶4，特别优选1∶1∶5的比例产生。如果化合物ARA和EPA同时产生，它们有利地在植物中以至少1∶6(EPA∶ARA)，有利地至少1∶8，优选至少1∶10，特别优选至少1∶12的比例产生。
根据本发明的方法产生的脂肪酸酯或者脂肪酸混合物有利地包含6到15％棕榈酸，1到6％硬脂酸，7-85％油酸，0.5到8％11-十八碳烯酸，0.1到1％花生酸，7到25％饱和脂肪酸，8到85％单不饱和脂肪酸和60到85％多不饱和脂肪酸，每种情况下都是基于100％和基于生物的总脂肪酸含量。
此外，通过本发明的方法产生的脂肪酸酯或者脂肪酸混合物有利地包含多种脂肪酸，其选自芥酸(13-二十二碳烯酸)、苹婆酸(9，10-亚甲基十八碳-9-烯酸)、锦葵酸(8，9-亚甲基十七碳-8-烯酸)、大风子油酸(环戊烯十二烷酸)、呋喃脂肪酸(9，12-环氧十八碳-9，11-二烯酸)、斑鸠菊酸(9，10-环氧十八碳-12-烯酸)、果脂酸(6-十八碳炔酸)、6-十九碳炔酸、santalbicacid(反11-十八碳烯-9-炔酸)、6，9-十八碳烯炔酸、pyrulic acid(反10-十七烯-8-炔酸)、crepenyninic acid(9-十八烯-12-炔酸)、13，14-二氢oropheic acid、十八碳-13-烯-9，11-二炔酸、伞形花子油酸(顺-6-十八烯酸)、9顺，12反-十八碳二烯酸、金盏花素酸(calendulic acid)(8反10反12顺-十八碳三烯酸)、梓甙酸(catalpic acid)(9反11反13顺-十八碳三烯酸)、桐酸(9顺11反13反-十八碳三烯酸)、jacaric acid(8顺10反12顺-十八碳三烯酸)、石榴酸(9顺11反13顺-十八碳三烯酸)、麦饼树酸(9顺11反13反15顺-十八碳四烯酸)、皮诺敛酸(pinolenic acid)(全-顺-5，9，12-十八碳三烯酸)、laballenic acid(5，6-十八碳二烯丙二烯酸)、蓖麻油酸(12-羟油酸)和/或革盖菌素酸(coriolic acid)(13-羟-9顺，11反-十八碳二烯酸)的脂肪酸。上面提到的脂肪酸通常有利地在根据本发明的方法产生的脂肪酸酯或者脂肪酸混合物中以痕量发现，也就是说，基于总脂肪酸，它们的存在小于30％，优选小于25％、24％、23％、22％或21％、特别优选小于20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％或5％、非常特别优选小于4％、3％、2％或1％。在本发明的另一优选形式中，这些上面提到的脂肪酸基于总脂肪酸小于0.9％、0.8％、0.7％、0.6％或0.5％，特别优选小于0.4％、0.3％、0.2％、0.1％。根据本发明的方法产生的脂肪酸酯或者脂肪酸混合物有利地基于总脂肪酸占小于0.1％，或者没有丁酸，没有胆固醇，没有鰶鱼酸(＝二十二碳五烯酸，C22:5Δ4，8，12，15，21)并且没有尼生酸(二十四碳六烯酸，C23:6Δ3，8，12，15，18，21)。
由于根据本发明的核酸序列或者用于根据本发明方法的核酸序列，与非转基因起始植物，例如，芥菜(Brassica juncea)、欧洲油菜(Brassicanapus)、亚麻荠(Camelina sativa)、拟南芥(Arabidopsis thanliana)或亚麻(Linum usitatissimum)的植物相比，当通过GC分析比较时，多不饱和脂肪酸，主要是ARA和EPA，以及DHA的产率增加至少50、80或者100％，有利地至少150、200或者250％，特别有利地至少300、400、500、600、700、800或者900％，非常特别有利地至少1000、1100、1200、1300、1400或者1500％；见实施例。
有利地，如上述，在该方法中产生的在分子中具有4、5或6个双键的多不饱和C20-和/或C22-脂肪酸将包含在植物的种子中，该种子包含仅非常小量的C12:0-或者C14:0-脂肪酸，或者根本不包含。甚至更短的饱和脂肪酸，如脂肪酸C4:0、C6:0、C8:0或C10:0将不存在于脂类和/或油中，或者仅以非常小量存在。仅非常小量有利地理解为在GC分析中，在GC中有利地低于5、4、3、2或者1％，有利地低于0.9、0.8、0.7、0.6或者0.5％，特别有利地低于0.4、0.3、0.2或者0.1％，非常特别优选地低于0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02或者0.01单位面积的量。脂肪酸C16:0应该有利地为1到28％GC单位面积的范围内。脂肪酸C16:0应该有利地以GC单位面积小于25％、20％、15％或者10％、有利地小于9％、8％、7％、6％或者5％、特别有利地小于4％、3％、2％或者1％的量存在于脂类、油和/或脂肪酸中，或者根本不存在。脂肪酸C16:1应该有利地为小于1、0.5、0.4、0.3、0.2或者0.1％、特别有利地0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02或者0.01GC中单位面积。非常特别优选地，脂肪酸C16:1应该不存在于该方法产生的油和/或脂类中。这同样应用于脂肪酸C15:0、C17:0、C16:1Δ3反式、C16:4Δ4，7，10，13和C18:5Δ3，6，9，12，15。除了油酸(C18:1Δ9)，在脂类、油和/或游离脂肪酸中也可以存在异构体(C18:1Δ7、18:1Δ11)。有利地，异构体的量小于5％、4％、3％、2％或者1％(以单位GC面积测量)。脂肪酸C20:0、C20:1、C24:0和C24:1应该在每种情况中分别为0到1％，0到3％和0到5％的单位GC面积。此外，在种子油和/或种子脂类CG分析应该检测到很少的二高-γ-亚麻酸(＝DGLA)(以单位GC面积表示)。很少将理解为小于2、1.9、1.8、1.7、1.6或者1.5％，有利地小于1.4、1.3、1.2、1.1或者1％，特别有利地小于0.9、0.8、0.7、0.6、0.5或者0.4％(单位GC面积)。
在该方法的优选实施方案中，DGLA和ARA应该以1∶1到高达1∶100，有利地1∶2到高达1∶80，特别有利地1∶3到高达1∶70，非常特别地1∶5到高达1∶60的比例产生。
在另一优选实施方案中，DGLA和EPA应该以1∶1到高达1∶100，有利地1∶2到高达1∶80，特别有利地1∶3到高达1∶70，非常特别地1∶5到高达1∶60的比例产生。
基于转基因植物的种子中总脂肪酸含量，根据本发明的方法中产生的脂类和/或油应该有利地含有按重量计至少30、40或50％，有利地按重量计至少60、70或者80％的高不饱和的、有利地多不饱和的脂肪酸含量。
在优选用于根据本发明的方法的植物中所有不饱和脂肪酸一起应该有利地仅为少量。在该上下文中，少量理解为指以单位GC面积小于15％、14％、13％、12％、11％或者10％，优选小于9％、8％、7％或者6％。
此外，多不饱和脂肪酸的合成基因用于该方法中并且已经在该方法中通过不同方法导入，有利地作为宿主植物，应该有利地比种子中的蛋白质含量有更高的油含量，有利地植物具有5∶1、4∶1、3∶1、2∶1或者1∶1的油/蛋白质含量比。在该上下文中，基于种子总重量的油含量将为15-55％，有利地25-50％，特别有利地25-50％。有利地，用于该方法中的宿主植物将分布不饱和脂肪酸如油酸、亚油酸和亚麻酸，这些不饱和脂肪酸是根据本发明的方法中的起始化合物，用于合成甘油三酯中的sn1、sn2和sn3位的多不饱和脂肪酸，如下面的表5所示，其中1-7行代表此类分布的不同的有利的备选方案。n.p.指不存在。
表5：在甘油三酯上sn1、sn2和sn3位具有有利的脂肪酸分布的植物
  No.   油酸   亚油酸   α-亚麻酸
  sn1   sn2   sn3   sn1   sn2   sn3   sn1   sn2   sn3
  1.   1   1   1   2   4   1   n.p.   n.p.   n.p.
  2.   1.4   2.2   1   2.8   9   1   2   6.7   1
  3.   0.8   0.8   1   1.1   1.6   1   1   0.8   1
  4.   0.9   0.9   1   1.2   1.6   1   0.9   1   1
  5.   0.9   0.9   1   1   1.3   1   1   1   1
  6.   1   1.1   1   2   2.8   1   1   1   n.p.
  7.   1.3   9.7   1   1   9   痕量   1   n.p.   n.p.
行显示了下面植物的比例：行1＝落花生(Arachis hypogaea)，行2＝欧洲油菜(Brassica napus)，行3＝大豆，行4＝亚麻(Linumusitatissimum)，行5＝玉蜀黍(Zea mays)，行6＝油橄榄和行7＝可可树(Theobroma cacao)。
有利地用于该方法的宿主植物为与脂类和/或油中，特别甘油三酯中亚油酸和/或亚麻酸比较具有高油酸含量，即基于植物的总脂肪酸含量按重量计至少40、50、60或者70％的宿主植物，例如，Anarcardium occidentale、Argania spinosa、木棉(Bombax malabaricum)、欧洲油菜、牛油果(Butyrospermum parkii)、高油酸红花(Carthamus tinctorius)、Citrulluscolocythis、欧洲榛(Corylus avellana)、Curcurbita foetidissima、Curcurbitapepo、Guizotia abyssinica、高油酸向日葵(Helianthus annus)、全缘叶澳洲坚果(Macadamia intergrifolia)、栽培黑种草(Nigella sativa)、油橄榄、罂粟(Papaver somniferium)、鸡蛋果(Passiflora edulis)、鳄梨(Perseaamericana)、Prunus amygdalis、藏杏(Prunus armeniaca)、Prunus dulcis、Prunus communis、胡麻(Sesamum indicum)、Simarouba glauca、Theasasumgua或者可可树。其他有利的植物在sn2位与其他位置sn1和sn3相比有更高含量的不饱和脂肪酸油酸、亚油酸和α-亚麻酸。更高含量理解为指(sn1∶sn2∶sn3)1∶1.1∶1、1∶1.5∶1到1∶3∶1的比率。有利地，植物如中华猕猴桃(Actinidia chinensis)、Aleurites moluccana、Arnebia griffithii、白芥(Brassica alba)、白芥(Brassica hirta)、黑芥(Brassica nigra)、芥菜、Brassica carinata、亚麻荠、大麻(Cannabis sativa)、Echium rubrum、蓝蓟(Echium vulgare)、啤酒花(Humulus lupulus)、核桃(Juglans regia)、亚麻、罗勒属的某些种(Ocimum spp.)、紫苏(Perilla frutescens)、马齿苋(Portulaca oleracea)、欧洲酸樱桃(Prunus cerasus)、Salicorniabigelovii、Salvia hispanica也是在植物的脂类和/或油中有高α-亚麻酸含量的植物，所述高α-亚麻酸含量也就是说α-亚麻酸含量基于植物的总脂肪酸含量为按重量计至少10、15或者20％，有利地按重量计至少25、30、35、40、45或者50％。非常特别有利的植物同样显示出甘油三酯中sn2位比sn1和sn3位有利地偏爱，对于该方法中产生的花生四烯酸、二十碳五烯酸或者二十二碳六烯酸，为1∶1.1∶1、1∶1.5∶1到1∶3∶1。
用于该方法的植物的芥酸含量基于植物的总脂肪酸含量为按重量计小于2％。而且，饱和脂肪酸C16:0和/或C18:0的含量基于植物的总脂肪酸含量应该有利地按重量计小于19、18、17、16、15、14、13、12、11或者10％，有利地按重量计小于9、8、7、6或者5％。而且，较长的脂肪酸如C20:0或者C22:1应该不存在，或者仅以少量存在，有利地基于植物的总脂肪酸含量按重量计小于4、3、2或者1％，有利地按重量计小于0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或者0.1％的量存在于本方法中使用的植物中。通常，C16:1不作为脂肪酸存在，或者仅以少量存在于用于本发明方法的植物中。少量也有利地理解为指脂肪酸含量，其基于植物的总脂肪酸含量按重量计小于4、3、2或者1％，有利地按重量计小于0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或者0.1％。
由于经济原因，也就是说由于栽培面积和大规模生长的植物的油产量，如大豆、油菜、芥菜、亚麻荠属(Camelina)、亚麻子、向日葵、油棕榈树、棉花、芝麻、玉米、橄榄是优选的，油菜、亚麻荠属、亚麻子、向日葵优选经常用作方法中的宿主植物。
化学上纯的多不饱和脂肪酸或者脂肪酸组合物也可以通过上述方法合成。为此，以已知方式从植物，有利地从植物的种子分离脂肪酸或者脂肪酸组合物，所述方式为例如通过压碎种子，如碾磨，然后提取、蒸馏、结晶、层析或者这些方法的组合。这些化学纯的脂肪酸或者脂肪酸组合物有利地用于食品工业领域、化妆品领域和特别是制药工业领域。
适于根据本发明方法的植物原则上是能够合成脂肪酸的所有那些植物，如所有双子叶或者单子叶植物、藻类或者藓类。有利的植物选自植物科Adelotheciaceae、漆树科(Anacardiaceae)、菊科(Asteraceae)、伞形科(Apiaceae)、桦木科(Betulaceae)、紫草科(Boraginaceae)、十字花科(Brassicaceae)、凤梨科(Bromeliaceae)、番木瓜科(Caricaceae)、大麻科(Cannabaceae)、菊科(Compositae)、旋花科(Convolvulaceae)、十字花科(Cruciferae)、葫芦科(Cucurbitaceae)、胡颓子科(Elaeagnaceae)、杜鹃花科(Ericaceae)、大戟科(Euphorbiaceae)、豆科(Fabaceae)、牻牛儿苗科(Geraniaceae)、禾本科(Gramineae)、核桃科(Juglandaceae)、樟科(Lauraceae)、豆科(Leguminosae)、亚麻科(Linaceae)、锦葵科(Malvaceae)、辣木科(Moringaceae)、地钱科(Marchantiaceae)、柳叶菜科(Onagraceae)、铁青树科(Olacaceae)、木犀科(Oleaceae)、罂粟科(Papaveraceae)、胡椒科(Piperaceae)、胡麻科(Pedaliaceae)、禾本科(Poaceae)、Rosaceae或者茄科(Solanaceae)，有利地，漆树科、菊科、紫草科、十字花科、大麻科、菊科、十字花科(Cruciferae)、葫芦科、胡颓子科、大戟科、豆科、牻牛儿苗科、禾本科、豆科、亚麻科、锦葵科、辣木科、地钱科、柳叶菜科、铁青树科、木犀科、罂粟科、胡椒科、胡麻科、禾本科或者茄科，但是适于该方法的其他植物是蔬菜植物或者观赏植物，如万寿菊属(Tagetes)。
可以提及的实例为选自下列的植物：漆树科如黄连木属(Pistacia)、芒果属(Mangifera)、腰果属(Anacardium)例如阿月混子(Pistacia vera[阿月混子实])、芒果(Mangifer indica[芒果])或腰果(Anacardiumoccidentale[腰果])的属和种、菊科如金盏花属(Calendula)、红蓝花属(Carthamus)、矢车菊属(Centaurea)、菊苣属(Cichorium)、菜蓟属(Cynara)、向日葵属(Helianthus)、莴苣属(Lactuca)、Locusta、万寿菊属、缬草属(Valeriana)例如圆头沙蒿(Artemisia sphaerocephala)、金盏花(Calendula officinalis [普通金盏花])、红花(Carthamus tinctorius[红花])、矢车菊(Centaurea cyanus[矢车菊])、菊苣(Cichorium intybus[菊苣])、洋蓟(Cynara scolymus[朝鲜蓟])、向日葵(Helianthus annus[向日葵])、莴苣(Lactuca sativa)、皱叶莴苣(Lactuca crispa)、芋(Lactucaesculenta)、毒莴苣的某些种(Lactuca scariola L.ssp.Sativa)、Lactucascariola L.var.integrata、Lactuca scariola L.var.integrifolia、莴苣romana亚种(Lactuca sativa subsp.Romana)、Locusta communis、莴苣缬草(Valeriana locusta[沙拉蔬菜])、香叶万寿菊(Tagetes lucida)、万寿菊(Tagetes erecta)或细叶万寿菊(Tagetes tenuifolia)[非洲或法国金盏花]的属和种、伞形科如胡萝卜属(Daucus)例如胡萝卜(Daucus carota[胡萝卜])的属和种、桦木科如榛属(Corylus)例如欧洲榛(Corylusavellana)或榛子(Corylus colurna[榛子])的属和种、紫草科如Adelocaryum、Alkanna、Anchusa、Borago、Brunnera、Cerinthe、琉璃草属(Cynoglossum)、蓝蓟属(Echium)、Gastrocatyle、紫草属(Lithospermum)、Moltkia、假紫狼草属(Nonea)、滇紫草属(Onosma)、Onosmodium、Paracaryum、Pectocarya、Symphytum例如，如下的属和种：Adelocarym coelestinum、Alkanna orientalis、Anchusa anzurea、Anchusa capensis、Anchusa hybrida、Borago officinalis[琉璃苣]、Brunneraorientalis、Cerinthe minor、倒提壶(Cynoglossum amabile)、小花琉璃草(Cynoglossum lanceolatum)、Echium rubrum、蓝蓟(Echium vulgare)、Gastrocatyle hispida、麦家公(Lithospermum arvense)、Lithosperumumpurpureocaeruleum、Moltkia aurea、Moltkia coerules、Noneamacrosperma、Onosma sericeum、Onosmodium molle、Onosmodiumoccidentale、Paracaryum caelestinum、Pectocarya platycarpa、Symphytumofficinale、十字花科如芸苔属(Brassica)、亚麻荠属(Camelina)、Melanosinapis、白芥属(Sinapis)、拟南芥属(Arabadopsis)例如白芥、Brassica carinata、白芥、欧洲油菜(Brassica napus)、芜青属某些种(Brassica rapa ssp.[油菜])、野生欧白芥(Sinapis arvensis)、芥菜(Brassicajuncea)、Brassica juncea var.juncea、皱叶芥菜(Brassica juncea var.crispifolia)、大叶芥菜(Brassica juncea var.foliosa)、黑芥(Brassica nigra)、Brassica sinapioides、亚麻荠(Camelina sativa)、芥菜(Melanosinapiscommunis[芥菜])、甘蓝(Brassica oleracea[饲用甜菜])或拟南芥(Arabidopsis thaliana)的属和种、凤梨科如凤梨属(Anana)、Bromelia(菠萝)例如菠萝(Anana comosus)、Ananas ananas或Bromelia comosa[菠萝]的属和种、番木瓜科如番木瓜属(Carica)例如番木瓜(Caricapapaya[番木瓜])的属和种、大麻科如大麻属(Cannabis)例如大麻(Cannabis sativa[大麻])的属和种、旋花科如番薯属(Ipomea)、旋花属(Convolvulus)例如甘薯(Ipomoea batatus)、提琴叶牵牛花(Ipomoeapandurata)、Convolvulus batatas、Convolvulus tiliaceus、Ipomoeafastigiata、Ipomoea tiliacea、三裂叶薯(Ipomoea triloba)或Convolvuluspanduratus[甜薯、番薯]的属和种、藜科如甜菜属(Beta vulgaris)例如甜菜(Beta vulgaris)、Beta vulgaris var.altissima、甜菜普通变种(Betavulgaris var.vulgaris)、Beta maritima、甜菜宿根变种Beta vulgaris var.perennis、Beta vulgaris var.Conditiva或Beta vulgaris var.esculenta[甜菜]的属和种、隐甲藻科如隐甲藻属例如寇氏隐甲藻(Cryptecodiniumcohnii)的属和种、葫芦科如南瓜属(Cucurbita)例如笋瓜(Cucurbitamaxima)、灰子南瓜(Cucurbita mixta)、西葫芦(Cucurbita pepo)或南瓜(Cucurbita moschata[西葫芦/南瓜])的属和种、胡颓子科如胡颓子属(Elaeagnus)例如油橄榄(Olea europaea[橄榄])的属和种、杜鹃花科如山月桂属(Kalmia)例如阔叶山月桂(Kalmia latifolia)、狭叶山月桂(Kalmia angustifolia)、小叶山月桂(Kalmia microphylla)、沼泽山月桂(Kalmia polifolia)、西洋山月桂(Kalmia occidentalis)、Cistuschamaerhodendros或山月桂(Kalmia lucida [山月桂])的属和种、大戟科如木薯属(Manihot)、Janipha、麻风树属(Jatropha)、蓖麻属(Ricinus)例如木薯(Manihot utilissima)、Janipha manihot、Jatropha manihot、Manihot aipil、甜木薯(Manihot dulcis)、Manihot manihot、Manihotmelanobasis、木薯(Manihot esculenta[木薯])或蓖麻(Ricinus communis[蓖麻])的属和种、豆科如豌豆属(Pisum)、合欢属(Albizia)、Cathormion、Feuillea、Inga、Pithecolobium、金合欢属(Acacia)、含羞草属(Mimosa)、Medicajo、大豆属(Glycine)、扁豆属(Dolichos)、菜豆属Phaseolus、大豆属(Soybean)例如豌豆(Pisum sativum)、饲料豌豆(Pisum arvense)、Pisum humile[豌豆]、Albizia berteriana、合欢(Albizia julibrissin)、阔荚合欢(Albizia lebbeck)、Acacia berteriana、Acacia littoralis、Albiziaberteriana、Albizzia berteriana、Cathormion berteriana、Feuilleaberteriana、Inga fragrans、Pithecellobium berterianum、Pithecellobiumfragrans、Pithecolobium berterianum、Pseudalbizzia berteriana、Acaciajulibrissin、Acacia nemu、Albizia nemu、Feuilleea julibrissin、Mimosajulibrissin、Mimosa speciosa、Sericanrda julibrissin、阔荚金合欢(Acacialebbeck)、Acacia macrophylla、大叶合欢(Albizia lebbeck)、Feuilleealebbeck、大叶含羞草(Mimosa lebbeck)、Mimosa speciosa、紫苜蓿(Medicago sativa)、野苜蓿(Medicago falcata)、杂交苜蓿(Medicagovaria)[紫花苜蓿]、大豆(Glycine max)、镰扁豆(Dolichos soja)、宽叶蔓豆(Glycine gracilis)、大豆(Glycine hispida)、大菜豆(Phaseolusmax)、Soja hispida或Soja max[大豆]的属和种、牻牛儿苗科(Geraniaceae)如天竺葵属(Pelargonium)、椰子属(Cocos)、Oleum例如椰子(Cocos nucifera)、茶麋子天竺葵(Pelargonium grossularioides)或椰子油(Oleum cocois[椰子])的属和种、禾本科如甘蔗属(Saccharum)例如甘蔗(Saccharum officinarum)的属和种、胡桃科如胡桃属(Juglans)、Wallia例如胡桃(Juglans regia)、Juglans ailanthifolia、山核桃(Juglanssieboldiana)、灰核桃(Juglans cinerea)、Wallia cinerea、Juglans bixbyi、加州黑核桃(Juglans californica)、印度黑核桃(Juglans hindsii)、Juglansintermedia、Juglans jamaicensis、大核桃(Juglans major)、Juglansmicrocarpa、黑核桃(Juglans nigra)或胡桃(Wallia nigra)[胡桃]的属和种、樟科如鳄梨属(Persea)、月桂属(Laurus)例如月桂(Laurus nobilis[bay])、鳄梨(Persea americana)、鳄梨油(Persea gratissima)或Perseapersea[avocado]的属和种、豆科如落花生属(Arachis)例如落花生(Arachishypogaea[花生])的属和种、亚麻科如Adenolinum属例如亚麻(Linumusitatissimum)、Linum humile、奥地利亚麻(Linum austriacum)、Linumbienne、窄叶亚麻(Linum angustifolium)、泻亚麻(Linum catharticum)、金黄亚麻(Linum flavum)、大花亚麻(Linum grandiflorum)、Adenolinumgrandiflorum、刘易斯亚麻(Linum lewisii)、那旁亚麻(Linumnarbonense)、宿根亚麻(Linum perenne)、宿根亚麻刘易斯变种(Linumperenne var.lewisii)、Linum pratense或亚麻子(Linum trigynum[亚麻子])的属和种、Lythrarieae如石榴属(Punica)例如石榴(Punica granatum[pomegranate])的属和种、锦葵科(Malvaceae)如棉属(Gossypium)例如陆地棉(Gossypium hirsutum)、树棉(Gossypium arboreum)、海岛棉(Gossypium barbadense)、草棉(Gossypium herbaceum)或瑟伯棉(Gossypium thurberi[棉])的属和种、地钱科(Marchantiaceae)如地钱属(Marchantia)例如Marchantia berteroana、Marchantia foliacea、大孢地钱(Marchantia macropora)的属和种、芭蕉科(Musaceae)如芭蕉属(Musa)例如香蕉(Musa nana)、小果野蕉(Musa acuminata)、大蕉(Musa paradisiaca)、芭蕉属的某些种(Musa spp.[banana])的属和种、柳叶菜科(Onagraceae)如Camissonia属、月见草属(Oenothera)例如月见草(Oenothera biennis)或夜来香(Camissonia brevipes[月见草])的属和种、棕榈科(Palmae)如油棕属(Elaeis)，例如以下的属和种：油棕(Elaeis guineensis[油棕榈])、罂粟科(Papaveraceae)如罂粟属(Papaver)，例如以下的属和种：东方罂粟(Papaver orientale)、虞美人(Papaver rhoeas)、长荚罂粟(Papaver dubium[罂粟])、胡麻科(Pedaliaceae)如胡麻属(Sesamum)例如胡麻(Sesamum indicum[sesame])的属和种、胡椒科(Piperaceae)如胡椒属(Piper)、Artanthe、草胡椒属(Peperomia)、Steffensia例如树胡椒(Piper aduncum)、Piperamalago、狭叶胡椒(Piper angustifolium)、大胡椒(Piper auritum)、萎叶(Piper betel)、荜澄茄(Piper cubeba)、荜菝(Piper longum)、胡椒(Piper nigrum)、假荜拔(Piper retrofractum)、Artanthe adunca、Artanthe elongata、长胡椒(Peperomia elongata)、Piper elongatum、Steffensia elongata[cayenne pepper]的属和种、禾本科(Poaceae)如大麦属(Hordeum)、黑麦属(Secale)、燕麦属(Avena)、高梁属(Sorghum)、须芒草属(Andropogon)、绒毛草属(Holcus)、黍属(Panicum)、稻属(Oryza)、玉蜀黍属(Zea(maize))、小麦属(Triticum)例如大麦(Hordeum vulgare)、芒颖大麦草(Hordeum jubatum)、鼠大麦草(Hordeum murinum)、短芒大麦草(Hordeum secalinum)、栽培二棱大麦(Hordeum distichon)、Hordeum aegiceras、六列大麦(Hordeumhexastichon)、六棱大麦(Hordeum hexastichum)、不规则大麦(Hordeumirregulare)、大麦(Hordeum sativum)、短芒大麦草(Hordeum secalinum)[大麦]、黑麦(Secale cereale [黑麦])、燕麦(Avena sativa)、野燕麦(Avenafatua)、地中海红燕麦(Avena byzantina)、Avena fatua var.sativa、杂种燕麦(Avena hybrida[燕麦])、二色高梁(Sorghum bicolor)、石茅高梁(Sorghum halepense)、甜高梁(Sorghum saccharatum)、高梁(Sorghumvulgare)、Andropogon drummondii、二色绒毛草(Holcus bicolor)、Holcus sorghum、Sorghum aethiopicum、Sorghum arundinaceum、Sorghum caffrorum、垂穗高梁草(Sorghum cernuum)、工艺高梁(Sorghumdochna)、Sorghum drummondii、硬高粱草(Sorghum durra)、Sorghumguineense、Sorghum lanceolatum、多脉高粱草(Sorghum nervosum)、甜高梁(Sorghum saccharatum)、Sorghum subglabrescens、垂叶高梁草(Sorghum verticilliflorum)、高梁(Sorghum vulgare)、石茅高梁(Holcushalepensis)、Sorghum miliaceum、黍粟(Panicum militaceum[millet])、稻(Oryza sativa)、Oryza latifolia[稻]、玉米(Zea mays[maize])、小麦(Triticum aestivum)、硬粒小麦(Triticum durum)、圆柱小麦(Triticumturgidum)、Triticum hybernum、马卡小麦(Triticum macha)、普通小麦(Triticum sativum或Triticum vulgare)[小麦]、紫球藻科(Porphyridiaceae)如Chroothece属、Flintiella属、Petrovanella属、紫球藻属(Porphyridium)、Rhodella、Rhodosorus、Vanhoeffenia例如紫球藻(Porphyridium cruentum)的属和种、山龙眼科(Proteaeeae)如澳洲坚果属(Macadamia)例如全缘叶澳洲坚果(Macadamia intergrifolia[macadamia])的属和种、Rosaceae，如李属，例如，下面的属和种：Prunusarmeniaca、扁桃(Prunus amygdalus)、Prunus avilum，茜草科(Rubiaceae)如咖啡属(Coffea)例如咖啡属(Coffea)某些种、小果咖啡(Coffea arabica)、中果咖啡(Coffea canephora)或大果咖啡(Coffea liberica[coffee])、玄参科(Scrophulariaceae)如玄参属(Scrophularia)、毛蕊花属(Verbascum)例如以下的属和种：Scrophularia marilandica、毛瓣毛蕊花(Verbascumblattaria)、东方毛蕊花(Verbascum chaixii)、密叶毛蕊花(Verbascumdensiflorum)、Verbascum lagurus、长叶毛蕊花(Verbascum longifolium)、Verbascum lychnitis、Verbascum nigrum、奥林匹克毛蕊花(Verbascumolympicum)、Verbascum phlomoides、紫毛蕊花(Verbascum phoenicum)、Verbascum pulverulentum或毛蕊花(Verbascum thapsus[mullein])、茄科(Solanaceae)如辣椒属(Capsicum)、烟草属(Nicotiana)、茄属(Solanum)、番茄属(Lycopersicon)例如以下的属和种：辣椒(Capsicumannuum)、Capsicum annuum var.glabriusculum、五色椒(Capsicumfrutescens[pepper])、红椒(Capsicum annuum[paprika])、烟草(Nicotianatabacum)、花烟草(Nicotiana alata)、长头烟草(Nicotiana attenuata)、光烟草(Nicotiana glauca)、Nicotiana langsdorffii、Nicotiana obtusifolia、Nicotiana quadrivalvis、Nicotiana repanda、黄花烟草(Nicotiana rustica)、Nicotiana sylvestris[烟草]、马铃薯(Solanum tuberosum[番茄])、茄(Solanum melongena[eggplant])、番茄(Lycopersicon esculentum)、Lycopersicon lycopersicum、梨形番茄(Lycopersicon pyriforme)、红茄(Solanum integrifolium)或番茄(Solanum lycopersicum)[番茄]、梧桐科(Sterculiaceae)如可可树属(Theobroma)例如可可树(Theobroma cacao[可可])的属和种或山茶科(Theaceae)如山茶属(Camellia)例如大叶茶(Camellia sinensis[茶])的属和种。
可以提及的其他植物是Argania spinosa、Arnebia griffithii、猴面包树(Adansonia digitata)、Orbignya martiana、Carum carvi、Bertholletiaexcelsa、Aleurites moluceana、Hydnoearpus kursii、Salvia hispanica、葡萄(Vitis vinifera)、Corvlus avellana、啤酒花(Humulus lupus)、穗序山香(Hyptis spicigera)和Shorea stenoptera的属和种的植物。
有利地用于根据本发明方法的植物是转基因植物，如双子叶植物或者单子叶植物。特别有利地用于根据本发明方法的植物是属于产油植物的转基因植物，也就是用于生产油的植物，例如，优选地，包含大量脂类化合物的油料果实作物(oil fruit crop)，如花生、油菜、卡诺拉油菜、向日葵、红花(Carthamus tinctoria)、罂粟、芥菜、大麻、蓖麻、橄榄、芝麻、金盏花、石榴、月见草、毛蕊花、大蓟、野玫瑰、榛子、杏仁、澳洲坚果、鳄梨、月桂、西葫芦/南瓜、亚麻子、大豆、阿月混子、琉璃苣、树(油棕榈树、椰子树或胡桃树)或作物例如玉米、小麦、黑麦、燕麦、小黑麦、稻、大麦、棉、木薯、胡椒、万寿菊、茄科植物例如马铃薯、烟草、茄子和番茄、蚕豆属的种、豌豆、紫花苜蓿或灌木(咖啡、可可、茶)、柳属的种和多年生牧草及饲料作物。
优选的植物根据本发明是油料种子和油料作物植物如花生、油菜、芸苔、向日葵、红花、罂粟、印度芥菜、芥菜、大麻、蓖麻、橄榄、金盏花、石榴、月见草、西葫芦/南瓜、亚麻子、大豆、琉璃苣、树(油棕榈树、可可树)。尤其优选的植物是含有高C18:2和/或C18:3脂肪酸的植物，如向日葵、红花、烟草、毛蕊花、芝麻、棉、西葫芦/南瓜、罂粟、月见草、胡桃、亚麻子、大麻、大蓟或者红花。非常尤其优选的植物是例如红花、向日葵、罂粟、月见草、胡桃、亚麻子、印度芥菜、亚麻荠或大麻。
对上述根据本发明的方法有利的是除了该方法中步骤(a)到(e)或者(a)到(c)中导入的核酸，还向植物中导入编码脂肪酸或者脂类代谢的酶的核酸，和任选导入编码ω3去饱和酶和/或Δ12去饱和酶的核酸序列。
脂肪酸或脂类代谢中的所有基因原则上均可在产生多不饱和脂肪酸的方法中使用，有利地与Δ5延伸酶，Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶组合使用[为了本发明目的，将复数形式理解为包含单数，并且反之亦然]。选自酰基辅酶A脱氢酶、酰基ACP[＝酰基载体蛋白]去饱和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基转移酶、酰基-辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、脂肪酸合成酶、脂肪酸羟化酶、乙酰基-辅酶A羧化酶、酰基辅酶A氧化酶、脂肪酸去饱和酶、脂肪酸炔属酶(acetylenase)、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氢过氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶的脂肪酸和脂类代谢中的基因有利地与Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶组合使用。选自Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶、Δ12去饱和酶、Δ6延伸酶或Δ9延伸酶的基因尤其优选地与上述Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶的基因组合使用，可与单种基因或多种基因组合使用。上述基因有利地与根据本发明使用的Δ6延伸酶、Δ5延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶和/或Δ12去饱和酶组合使用。
选自Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶、Δ5延伸酶或者Δ9延伸酶的基因还优选与上述基因组合使用。
由于用于根据本发明的方法中的编码具有Δ6延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶和/或Δ12去饱和酶活性的核酸的酶促活性，有利地组合编码脂肪酸或者脂类代谢的多肽，如具有Δ8去饱和酶，或者Δ5-或者Δ9延伸酶活性的多肽的核酸序列组合，所以可以在根据本发明的方法中产生多种多不饱和脂肪酸。取决于用于根据本发明方法的植物的选择，多种多不饱和脂肪酸的混合物或者单独的多不饱和脂肪酸，如EPA或者ARA可以以游离或者结合的形式产生。取决于起始植物中占优势的脂肪酸组成(C18:2-或者C18:3-脂肪酸)，从而得到来自C18:2-脂肪酸的脂肪酸，如GLA、DGLA或者ARA，或者来自C18:3-脂肪酸的脂肪酸，如SDA、ETA或者EPA。如果在用于该方法的植物中仅亚油酸(＝LA，C18:2Δ9，12)作为不饱和脂肪酸存在，那么该方法可以仅提供GLA、DGLA和ARA作为产物，它们都作为游离脂肪酸或者以结合形式存在。如果仅α-亚麻酸(＝ALA，C18:3Δ9，12，15)作为不饱和脂肪酸存在于用于该方法的植物中，如亚麻子中的情况，那么该方法可以提供SDA、ETA或者EPA作为产物，它们都可以作为游离脂肪酸或者以结合形式存在，如上述。
由于Δ6去饱和酶和Δ6延伸酶的活性，依赖于起始植物和其中存在的不饱和脂肪酸，所形成的产物，例如，分别为GLA和DGLA，或者SDA和ETA。优先形成DGLA或者ETA或者或者它们的混合物。如果还向植物中导入Δ5去饱和酶，那么还形成ARA和/或EPA。此外，如果还导入编码Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶活性的基因，那么可以在根据本发明的方法中产生脂肪酸DPA和/或DHA。有利地，取决于植物中存在的脂肪酸，仅合成ARA、EPA和/或DHA或者这些的混合物，所述脂肪酸作为合成的起始物质。因为涉及生物合成级联，所以所述终产物不以纯的形式存在于生物中。在终产物中总是存在少量前体化合物。基于终产物DGLA、ETA或者它们的混合物，或者ARA、EPA或者它们的混合物，或者ARA、EPA、DHA或者它们的混合物，这些少量为按重量计小于20％，有利地按重量计小于15％，特别有利地按重量计小于10％，最有利地按重量计小于5、4、3、2或者1％。
除了在植物中直接产生用于本发明方法中所用酶的起始脂肪酸，还可以外源地喂饲脂肪酸。因为经济原因在植物中产生为优选。优选用于产生ARA的底物是亚油酸(C18:2Δ9，12)、γ-亚麻酸(C18:3Δ6，9，12)和二高-γ-亚麻酸(20:3Δ8，11，14)。优选用于产生EPA的底物是亚麻酸(C18:3Δ9，12，15)、十八碳四烯酸(C18:4Δ6，9，12，15)和二十碳四烯酸(C20:4Δ8，11，14，17)。优选用于产生DHA的底物是亚麻酸(C18:3Δ9，12，15)、十八碳四烯酸(C18:4Δ6，9，12，15)、二十碳四烯酸(C20:4Δ8，11，14，17)、EPA和DPA。
与人类延伸酶或来自非人类动物的延伸酶如那些来自大马哈鱼属(Oncorhynchus)、爪蟾(Xenopus)或海鞘(Ciona)的延伸酶比较，本发明的Δ5延伸酶具备有利特性，即它们不使C22脂肪酸延伸为相应的C24脂肪酸。而且它们有利地不转化具有Δ6位置双键的脂肪酸，而上述脂肪酸则由人类延伸酶或来自非人类动物的延伸酶所转化。尤其有利的Δ5延伸酶优选地只转化不饱和C20脂肪酸。这些有利的Δ5延伸酶含有数个推定的跨膜螺旋(5-7个)。有利地，所述Δ5延伸酶仅转化在Δ5位置上具有一个双键的C20脂肪酸，其中优选转化ω3-C20脂肪酸(EPA)。此外，在本发明的一个优选实施方案中，上述Δ5延伸酶具有如此特性即除了Δ5延伸酶活性外，这类酶还有利地没有或仅有较小的Δ6延伸酶活性。相反，人类的延伸酶或来自非人类动物的延伸酶对具有Δ6或Δ5双键的脂肪酸表现了大致相同的活性。将这类有利的延伸酶称作公知的单功能延伸酶。相反，将人类的延伸酶或来自非人类动物的延伸酶称作多功能延伸酶，所述多功能延伸酶除了以上提到的底物之外，还可使例如具有Δ9或Δ11双键的单不饱和C16和C18脂肪酸转化。在酵母喂饲实验中，其中已向酵母中喂饲EPA作为底物，单功能延伸酶有利地使所喂饲的EPA至少15％重量，有利地至少20％重量，尤其有利地至少25％重量转化为二十二碳五烯酸(DPA，C22:5Δ7，10，13，16，19)。若喂饲作为底物的γ-亚麻酸(GLA，C18:3Δ6，9，12)，γ-亚麻酸有利地根本未得到延伸。同样C18:3Δ5，9，12也未得到延伸。在另一个有利的实施方案中，单功能延伸酶将所喂饲GLA以小于60％重量、有利地小于55％重量、尤其优选地小于50％重量，尤其有利地小于45％重量、非常尤其有利地小于40％重量转化为二高γ亚麻酸(＝C20:3Δ8，11，14)。根据本发明在Δ5延伸酶活性的又一个非常尤其优选的实施方案中，GLA未得到转化。
图27和28显示了不同延伸酶经测定的底物特异性。图27显示了非洲爪蛙(Xenopus laevis)(图27A)、玻璃海鞘(Ciona intestinalis)(图27B)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)(图27C)的多功能延伸酶的特异性。所有这些延伸酶均转化了广泛类型的底物。在本发明的方法中，这可以导致必须由其它酶活性来转化的副产物。这就是为什么这些酶在本发明的方法中较次优选的原因。优选的单功能延伸酶和它们的底物特异性在图28中显示。图28A显示了Ostreococcus tauriΔ5延伸酶特异性。这种酶仅转化在Δ5位置上具有双键的脂肪酸。有利地仅使C20-脂肪酸转化。假矮海链藻Δ5延伸酶显示了相似的高底物特异性(图28C)。Ostreococcustauri Δ6延伸酶(图28B)和假矮海链藻Δ6延伸酶(图28D)均有利地仅转化在Δ6位置上具有双键的脂肪酸。有利地仅使C18脂肪酸转化。来自拟南芥和细小裸藻的Δ5延伸酶也根据它们的特异性进行了区分。
本发明有利的Δ6延伸酶，也即优选地延伸C18脂肪酸的延伸酶同样根据高特异性进行区分。这类Δ6延伸酶有利地转化在Δ6-位置上具有双键的脂肪酸。尤其有利的Δ6延伸酶有利地转化在分子中具有三个或四个双键的C18脂肪酸，其中所述的脂肪酸必须在Δ6位置上包含一个双键。在本发明的优选实施方案中，这些Δ6延伸酶还具有如下特征：即除了Δ6延伸酶活性外，这些Δ6延伸酶还有利地没有或仅有相对较小的Δ5延伸酶活性。相反，人类的延伸酶或来自非人类动物的延伸酶对具有Δ6或Δ5双键的脂肪酸表现了大致相同的活性。将这些有利的延伸酶称作公知的单功能延伸酶。相反，如以上描述，将人类延伸酶或来自非人类动物的延伸酶称作多功能延伸酶，其中这类酶除了以上提到的底物以外，还可使具有例如Δ9或Δ11双键的单不饱和的C16和C18脂肪酸转化。在酵母喂饲实验中，其中已经向酵母中喂饲EPA作为底物，所述单功能延伸酶有利地转化了所喂饲的α-亚麻酸(＝ALA，C18:3Δ9，12，15)至少10％重量或转化了所喂饲的γ-亚麻酸(＝GLA，C18:3Δ6，9，12)至少40％重量，有利地至少20％重量和50％重量，尤其有利地至少25％重量和60％重量。C18:4Δ6，9，12，15(十八碳四烯酸)也尤其有利地得到延伸。在本文中，SDA至少40％重量，有利地至少50％重量，尤其有利地至少60％重量、非常尤其有利地至少70％重量得到转化。尤其有利的Δ6延伸酶对如下底物：C18:1Δ6、C18:1Δ9、C18:1Δ11、C20:2Δ11，14、C20:3Δ11，14，17、C20:3Δ8，11，14、C20:4Δ5，8，11，14、C20:5Δ5，8，11，14，17或C22:4Δ7，10，13，16表现出没有活性或仅表现出极小的活性(转化率小于0.1％重量)。
图29和30及表21列出了多种延伸酶经测量的底物特异性。
与已知的ω3去饱和酶相比，本发明的方法中使用的ω3去饱和酶具有有利的特征，即它能够使广泛类型的ω6脂肪酸去饱和；可优选地使C20和C22脂肪酸如C20:2、C20:3、C20:4、C22:4或C22:5脂肪酸去饱和。然而也能有利地使更短的C18脂肪酸如C18:2或C18:3脂肪酸去饱和。由于ω3去饱和酶的这些特点，将在生物中，有利地将在植物或真菌中的脂肪酸谱由ω6脂肪酸转变至ω3脂肪酸有利地成为可能。本发明的ω3去饱和酶优选地使C20脂肪酸去饱和。这些来自当前脂肪酸库中的脂肪酸至少10％、15％、20％、25％或30％于生物内转化为对应的ω3脂肪酸。ω3去饱和酶对C18-脂肪酸的活性小10倍，即仅仅约1.5至3％的存在于脂肪酸库中的C18-脂肪酸转化为相应的ω3脂肪酸。本发明ω3去饱和酶的优选底物是结合于磷脂中的ω6脂肪酸。以去饱和二高γ-亚麻酸[C20:4 Δ8，11，14]为参考，图19清晰显示在去饱和期间，ω3去饱和酶有利地不区别在sn1位置结合或在sn2位置结合的脂肪酸。在磷脂sn1位置结合的脂肪酸和sn2位置结合的脂肪酸均得以去饱和。而且ω3去饱和酶对广泛类型的磷脂如磷脂酰胆碱(＝PC)、磷脂酰肌醇(＝PIS)或磷脂酰乙醇胺(＝PE)的转化是有利的。最后，去饱和产物也可在中性脂类(＝NL)中，也即在甘油三酯中找到。
与已知的Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶和Δ6去饱和酶比较，本发明的Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶和Δ6去饱和酶的优点是它们能够转化结合至磷脂或辅酶A脂肪酸酯的脂肪酸，有利地转化结合至辅酶A脂肪酸酯的脂肪酸。
本发明方法中所用的Δ12去饱和酶有利地将油酸(C18:1Δ9)转化为亚油酸(C18:2Δ9，12)或有利地将C18:2Δ6，9转化为C18:3Δ6，9，12(＝GLA)。所用Δ12去饱和酶有利地转化结合至磷脂或辅酶A脂肪酸酯的脂肪酸，有利地转化结合至辅酶A脂肪酸酯的那些脂肪酸。
由于本发明方法中所用的核酸的酶活性，其中所述核酸编码具有Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶活性的多肽，有利地与编码脂肪酸或脂类代谢的多肽如具有Δ4、Δ5、Δ6、Δ8、Δ12去饱和酶或者Δ5、Δ6或Δ9延伸酶活性的其它多肽的核酸序列联合使用，种类广泛的多不饱和脂肪酸可在本发明的方法中产生。根据本发明方法中所用的有利的植物的选择，多种的多不饱和脂肪酸混合物或单种的多不饱和脂肪酸如EPA、ARA或者DHA可以以游离或结合形式产生。根据起始植物中优势的脂肪酸组成(C18:2或C18:3脂肪酸)，由C18:2脂肪酸衍生的脂肪酸如GLA、DGLA或ARA；或由C18:3脂肪酸衍生的脂肪酸如SDA、ETA、EPA或者DHA因此获得。若仅仅亚油酸(＝LA，C18:2Δ9，12)作为不饱和脂肪酸在方法所用的植物中出现，该方法仅能提供作为产物的GLA、DGLA和ARA，所有产物均能以游离的脂肪酸或以结合的形式出现。通过在植物中表达额外的ω3去饱和酶，脂肪酸谱可以偏向α-亚麻酸、DPA和DHA。然而，脂肪酸谱中的该偏移仅仅是相对有限的。更有利的是如下文中描述的植物中的这种偏移已经具有高α-亚麻酸含量。若仅仅α-亚麻酸(ALA，C18:3Δ9，12，15)作为不饱和脂肪酸在方法所用的植物中如在亚麻子中存在，方法仅能提供SDA、ETA或EPA和/或DHA，如上所述的所有产物均可以以游离脂肪酸或以结合形式存在。由于对Δ5延伸酶酶活性的修饰，其有利地与在合成中起作用的Δ4、Δ5、Δ6、Δ12去饱和酶和/或Δ6延伸酶、或Δ4、Δ5、Δ8、Δ12去饱和酶和/或Δ9延伸酶联合使用，可以在以上提及植物中以定向的方式只产生单个的产物。由于Δ6去饱和酶和Δ6延伸酶的活性，依据起始的植物和不饱和脂肪酸，形成了例如GLA和DGLA或SDA和ETA。DGLA或ETA或这些脂肪酸的混合物优选地形成。若向生物，有利地向植物中额外地导入Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和Δ4去饱和酶，ARA、EPA和/或DHA额外地形成。这也适用于事先已导入Δ8去饱和酶和Δ9延伸酶的生物。根据在植物中作为合成起始物质而存在的脂肪酸，仅ARA、EPA或DHA或这些脂肪酸的混合物有利地得到合成。因为涉及生物合成的级联，所讨论的终产物未能在生物中以纯的形式出现。小量的前体化合物总是额外地在终产物中存在。基于终产物DGLA、ETA或其混合物，或者ARA、EPA、DHA或其混合物，有利地EPA或DHA或其混合物，这些小量为小于20％重量、有利地占小于15％重量、尤其有利地占小于10％重量、最有利地占小于5、4、3、2或1％重量。
来自鳟鱼并且可以用于根据本发明方法的具有SEQ ID NO：53的核酸编码对两种C18:4Δ6，9，12，15和C20:5Δ5，8，11，14，17脂肪酸有高特异性的蛋白质，这两种脂肪酸是DHA合成的前体(DHA的前体和合成，见图1)。然而，其他脂肪酸也可以通过该酶延伸。从而SEQ ID NO：53编码的蛋白质对具有一个额外ω3-双键的Δ6-和Δ5-脂肪酸有特异性(图2)。Δ5延伸酶具有酮-酰基辅酶A合酶活性，其有利地将酰基辅酶A酯的脂肪酸残基延伸两个碳原子。
酵母(酿酒酵母，Saccharomyces cerevisiae)中DHA的合成通过上述鱼Δ5延伸酶基因产物和来自Phaeodactylum的其他Δ5延伸酶、Δ5去饱和酶和来自裸藻属(Euglena)的Δ4去饱和酶的基因产物检测(图3)。
除了在转基因生物，有利地在转基因植物中直接产生用于有利地用于根据本发明方法的Δ5延伸酶、Δ6延伸酶、Δ9延伸酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ12去饱和酶和/或ω3去饱和酶的起始脂肪酸，还可以外源地加入脂肪酸。由于经济原因，优选在生物中产生。ω3去饱和酶的优选底物是亚油酸(C18:2Δ9，12)、γ-亚麻酸(C18:3Δ6，9，12)、二十碳二烯酸(C20:2Δ11，14)、二高-γ-亚麻酸(C20:3Δ8，11，14)、花生四烯酸(C20:4Δ5，8，11，14)、二十二碳四烯酸(C22:4Δ7，10，13，16)和二十二碳五烯酸(C22:5Δ4，7，10，13，15)。
为了在上述用于产生多不饱和脂肪酸含量有利地得到升高的油和/或甘油三酯的方法中提高产量，增加合成脂肪酸的起始产物的量是有利的；这可以例如通过向生物中导入编码Δ12去饱和酶活性多肽的核酸实现。在产油生物如那些来自十字花科如芸苔属，例如油菜；胡颓子科如胡颓子属，例如油橄榄的属和种或豆科如大豆属，例如具有高的油酸的大豆的属和种中这种方法尤其有利。因为这些生物仅有较低的亚油酸(Mikoklajczak等，Journal of the American oils Chemical Society，38，1961，678-681)，以上提到的Δ12去饱和酶用于产生起始物质亚油酸是有利的。
本发明方法中所用的核酸有利地来自植物如藻类，例如草绿藻科的藻类如异毛藻属(Heteromastix)、Mammella、Mantoniella、微单藻属(Micromonas)、肾藻属、Ostreococcus、绿枝藻属(Prasinocladus)、Prasinococcus、Pseudoscourfielda、Pycnococcus、塔胞藻属(Pyramimonas)、Scherffelia、扁藻属例如Heteromastix longifillis、Mamiella gilva、Mantoniella squamata、Micromonas pusilla、绿肾藻(Nephroselmis olivacea)、Nephroselmis pyriformis、圆形肾藻(Nephroselmis rotunda)、Ostreococcus tauri、Ostreococcus sp.、Prasinocladus ascus、Prasinocladus lubricus、Pycnococcus provasolii、Pyramimonas amylifera、Pyramimonas disomata、Pyramimonas obovata、Pyramimonas orientalis、Pyramimonas parkeae、Pyramimonas spinifera、Pyramimonas sp.、Tetraselmis apiculata、Tetraselmis carteriaformis、周氏扁藻(Tetraselmis chui)、皱叶扁藻(Tetraselmis convolutae)、Tetraselmisdesikacharyi、纤细扁藻(Tetraselmis gracilis)、Tetraselmis hazeni、Tetraselmis impellucida、Tetraselmis inconspicua、Tetraselmis levis、有斑扁藻(Tetraselmis maculata)、Tetraselmis marina、Tetraselmis striata、Tetraselmis subcordiformis、Tetraselmis suecica、Tetraselmistetrabrachia、Tetraselmis tetrathele、Tetraselmis verrucosa、Tetraselmisverrucosa fo.Rubens或Tetraselmis sp.的属和种或选自裸藻科的藻类如囊胞藻属(Ascoglena)、变胞藻属(Astasia)、胶柄藻属、Cyclidiopsis、裸藻属、拟裸藻属(Euglenopsis)、Hyalophacus、克氏藻属(Khawkinea)、鳞孔藻属、扁裸藻属、陀螺藻属(Strombomonas)或囊裸藻属例如梭形裸藻(Euglena acus)、膝曲裸藻(Euglena geniculata)、细小裸藻、Euglenamixocylindracea、喙状裸藻(Euglena rostrifera)、绿色裸藻(Euglenaviridis)、Colacium stentorium、圆柱囊裸藻(Trachelomonas cylindrica)或旋转囊裸藻(Trachelomonas volvocina)的属和种。用于该方法的核酸序列有利地来自藻类，如紫球藻(Porphyridium cruentum)、绿光等鞭金藻(Isochrysis galbana)或者Chlorella minutissima、普通小球藻(Chlorellavulgaris)、Thraustochytrium aureum或者Nannochloropsis oculata。所用核酸有利地来自裸藻属、Mantoniella或Ostreococcus属的藻类。
作为根据本发明的方法中使用的核酸序列来源的更有利的植物是藻类如等鞭金藻属(Isochrysis)或隐甲藻属、藻类/硅藻如海链藻属或褐指藻属、藓类如剑叶藓属或角齿藓属、或者高等植物如报春花科(Primulaceae)例如Aleuritia、Calendula stellata、刺状骨籽菊(Osteospermum spinescens)或Osteospermum hyoseroides、微生物如真菌例如曲霉属(Aspergillus)、破囊壶菌属、疫霉属、虫霉属、毛霉属或被孢霉属，细菌如希瓦氏菌，酵母或动物如线虫例如隐杆线虫、昆虫、蛙、海参或鱼。本发明经分离的核酸序列有利地源自脊椎动物目的动物。所述核酸序列优选地源自脊椎动物纲；Euteleostomi，辐鳍鱼纲(Actinopterygii)；新鳍鱼亚纲(Neopterygii)；硬骨鱼类(Teleostei)；Euteleostei、原鳍鱼总目(Protacanthopterygii)、鲑形目(Salmoniformes)；鲑科(Salmonidae)或大马哈鱼属(Oncorhynchus)或脊椎动物(Vertebrata)、两栖纲(Amphibia)、无尾两栖目(Anura)、负子蟾科(Pipidae)、非洲爪蟾属或无脊椎动物(Evertebrata)例如原索动物门(Protochordata)、被囊亚门(Tunicata)、海参纲(Holothuroidea)、海鞘科(Cionidae)例如Amarouciumconstellatum、Botryllus schlosseri、玻璃海鞘、Molgula citrina、Molgulamanhattensis、Perophora viridis或Styela partita。所述核酸尤其有利地源自真菌、动物、或源自植物如藻类或藓类，优选地源自鲑形目如鲑科，如鲑属，例如来自虹鳟、Trutta trutta或亚东鲑(Salmo trutta fario)的属和种，源自藻类如Mantoniella或Ostreococcus，或源自硅藻如海链藻属或褐指藻属或者源自藻类如隐甲藻属。
用于根据本发明方法的有利的核酸可以来自微生物，如真菌，如被孢霉属、腐霉属(Phytium)，例如，高山被孢霉(Mortierella alpiina)、长孢被孢霉(Mortierella elongata)、畸雌腐霉(Phytium irregulare)、终极腐霉(Phytium ultimum)或者细菌，如希瓦菌属，例如，Shewanellahanedai的属和种。
本发明的方法有利地使用以上提及的核酸序列或它们的衍生物或同源物，其编码这样的多肽，所述多肽保留了由以上提及的核酸序列所编码的蛋白质的酶活性。这些序列单独地或与编码Δ12去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶的核酸序列组合而克隆于表达构建体内并用于向生物中导入和在生物中表达。由于它们的构建，这些表达构建体使得可有利地优化合成本发明方法中所产生的多不饱和脂肪酸。
在一个优选的实施方案中，所述方法进一步包括获得转基因植物的步骤，其中所述植物包含方法中所用的核酸序列，该植物在所述的方法中由本发明编码Δ12去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶的核酸序列、如下所述的基因构建体或载体，单独地或与编码脂肪酸或脂类代谢的蛋白质的核酸序列组合而转化。在一个更优选的实施方案中，所述方法进一步包括从植物的种子，例如油料作物的种子中获得油、脂类或游离脂肪酸的步骤，所述油料作物为例如，花生、油菜、卡诺拉油菜(Canola)、亚麻子、大麻、花生、大豆、红花、大麻、向日葵或琉璃苣。
在植物细胞、植物组织或植物器官的情况下，“生长”理解为意指例如在营养培养基内或培养基上培养、或完整植物在基底物上或基底物内的培养例如在水培、盆载培养料内或在可耕地上的培养。
本发明还涉及基因构建体，其包含根据本发明的核酸序列，这些核酸序列编码Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶或者Δ6延伸酶，所述核酸与一种或多种调节信号功能地连接。此外，基因构建体可以包含脂肪酸或者脂类代谢的其他生物合成基因，其选自：酰基辅酶A脱氢酶、酰基ACP[＝酰基载体蛋白]去饱和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基转移酶、酰基-辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、脂肪酸合成酶、脂肪酸羟化酶、乙酰基-辅酶A羧化酶、酰基辅酶A氧化酶、脂肪酸去饱和酶、脂肪酸炔属酶(acetylenase)、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氢过氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶。有利地额外存在选自Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶、Δ9延伸酶或者ω3去饱和酶的脂肪酸或者脂类代谢的生物合成基因。
用于该方法中的编码具有Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ12去饱和酶、Δ5延伸酶或者Δ6延伸酶活性的核酸序列有利地单独地，或者优选地与表达盒(＝核酸构建体)组合导入植物中，所述表达盒使得该核酸可以在植物中表达。核酸构建体可以包含具有例如，Δ12去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ6延伸酶的酶促活性的一种以上的核酸序列。
为了将核酸导入基因构建体，用于该方法中的核酸有利地以已知方式扩增和连接。优选地，按照Pfu DNA聚合物或者Pfu/Taq DNA聚合酶混合物方案的步骤。考虑待扩增的序列选择引物。应该以这种方式便利地选择引物使得扩增产物包含从起始密码子到终止密码子的完整编码序列。扩增后，便利地分析扩增产物。例如，可以进行凝胶电泳分离，然后进行定量和定性分析。之后，可以按照标准方案(例如，Qiagen)纯化扩增产物。然后纯化的扩增产物的等分试样可用于随后的克隆步骤。
适宜的克隆载体通常是技术人员已知的。这些具体包括能够在微生物系统中复制的载体，也就是说主要是确保在酵母或者真菌中有效克隆并且使得可能稳定转化植物的载体。必须提及的载体是适于T-DNA-介导的转化的多种双元的和共整合的载体系统。此类载体系统通常的特征在于它们至少包含农杆菌介导的转化所需的vir基因和T-DNA-定界序列(T-DNA边界)。这类载体系统还有利地包含其它顺式调节区域，如启动子和终止子序列和/或选择标记，通过这些顺式调节区域，已合适转化的生物通过选择标记可以鉴定。在共整合载体系统的情况下，vir基因和T-DNA序列在相同载体中排列，而双元系统至少以两种载体为基础，其中一种载体携带了vir基因但没有T-DNA，同时第二种载体携带了T-DNA而无vir基因。因此所提及的后一种载体相对较小，容易操作和在大肠杆菌(E.coli)中和农杆菌中复制。这类双元载体包括来自pBIB-HYG、pPZP、pBecks、pGreen系列的载体。根据本发明，Bin19、pBI101、pBinAR、pGPTV和pCAMBIA优选使用。双元载体和它们的用途的综述可在Hellens等，Trends in Plant Science(2000)5，446-451中找到。
为了制备载体，载体首先以限制性核酸内切酶线性化并且然后按照合适的方式进行酶修饰。此后纯化载体并且将一份纯化的载体用于克隆步骤。在克隆步骤中，使用连接酶将已经酶切割并且根据需要已纯化的扩增物与已按类似方式制备的载体片段连接。在本上下文中，具体的核酸构建体、或载体或质粒构建体可具有一个或超过一个的编码性基因片段。将编码性基因片段在这些构建体中优选地与调节性序列功能地连接。调节性序列尤其包括植物序列，如启动子和终止子序列。这类构建体可在微生物，特别在大肠杆菌和根癌农杆菌中于选择性条件下稳定增殖并且有可能向植物或微生物中转移异源DNA。
方法中所用的核酸可有利地使用克隆载体向植物中导入，并且因此用于转化植物，如那些在Plant Molecular Biology and Biotechnology(CRCPress，Boca Raton，Florida)，Chapter 6/7，p.71-119(1993)；F.F.White，Vectors for Gene Transfer in Higher Plants；in：Transgenic Plants，Vol.1，Engineering and Utilization，Eds.：Kung and R.Wu，Academic Press，1993，15-38；B.Jenes等人，Techniques for Gene Transfer，in：Transgenic Plants，Vol.1，Engineering and Utilization，Eds.：Kung and R.Wu，AcademicPress(1993)，128-143；Potrykus，Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Molec.Biol.42(1991)，205-225中发表和引用的植物。因此方法中所用的核酸和/或载体可用于重组性修饰广泛类型的植物，因此经重组性修饰的植物成为更好和/或更高效的PUFA生产者。
存在一系列可修饰Δ12去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶和/或Δ6去饱和酶蛋白质的机制，因此多不饱和脂肪酸在植物、优选在油料种子植物或者油料作物中的产量、产生和/或产生效率由于该经修饰的蛋白质可直接受到影响。Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶或者Δ5去饱和酶蛋白质或基因的数目或活性可以得到增加，因此产生了更大量的基因产物并且最终产生了更大量的通式I化合物。在向缺乏该化合物生物合成活性和能力的植物中导入相应基因之前，从头(denovo)合成也为可能。这类似地适用于脂肪酸和脂类代谢中的其它去饱和酶或延伸酶或其它酶的组合。利用多种趋异的序列，即在DNA序列水平不同的序列，在本上下文中也是有利的，或者利用启动子也是有利的，其中所述的启动子可使不同基因的表达随时间过程不同，例如与种子或贮油组织成熟程度相关。
由于将Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或Δ5去饱和酶基因的组合单独或者与其他基因组合导入植物，不仅可以增加向终产物的生物合成流量，而且可以增加或者从头产生对应的三酰甘油组合物。同样地，与一种或多种脂肪酸、油、极性和/或中性脂类的生物合成所需的营养物的输出有关的其他基因的数目或者活性可以增加，从而细胞或者储存隔室内这些前体、辅因子或者中间物的浓度增加，从而细胞产生PUFA的能力进一步增强。通过优化与这些化合物的生物合成有关的一种或多种Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶或者Δ5去饱和酶基因的活性或者增加所述基因的数目，或者通过破坏与这些化合物的降解有关的一种或多种基因的活性，可以增加植物中脂肪酸和脂类分子的产率、产量和/或生产效率。
用于该方法中的核酸序列有利地导入表达盒中，该表达盒使得可以在植物中表达所述核酸。
在这种情况下，编码Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶或者Δ5去饱和酶的核酸序列功能地连接一种或多种调节信号，所述信号有利地用于增强基因表达。这些调节序列意在使得可能特异表达所述基因和蛋白质。取决于宿主生物，这表示例如，该基因仅在发生诱导后表达和/或过表达，或者该基因立即表达和/或过表达。例如，这些调节序列表现为诱导物或者抑制物结合的序列形式，从而控制核酸的表达。除了这些新的调节序列，或者代替这些序列，这些序列的天然调节元件仍然可以存在于实际的结构基因之前，如果合适，可以已经以如此方式进行基因修饰使得它们的天然调节被消除并且基因的表达得到增强。这些修饰的启动子还可以自身以部分序列(＝具有用于根据本发明的核酸序列的部分的启动子)的形式位于天然基因之前，以便增强活性。而且，基因构建体还可以有利地包含一种或多种所称作的增强子序列，它们与启动子有效连接，使得增强表达核酸序列。额外有利的序列，如其他调节元件或者终止子序列，也可以插入DNA序列的3’末端。
Δ12去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ6延伸酶基因可以存在于一个或多个拷贝的表达盒(＝基因构建体)中。优选地，仅一个拷贝的基因存在于每个表达盒中。该一个或多个基因构建体可以在宿主植物中一起表达。在该上下文中，一个或多个基因构建体可以插入一个或多个载体并且以游离形式存在于细胞中，或者插入基因组中。当待表达的基因一起存在于一个基因构建体中时，有利的是在宿主基因组中插入其他基因。
在该上下文中，如上述，调节序列或者因子可以优选对导入的基因的基因表达有积极作用，从而增强基因表达。从而，有利地在转录水平上调节元件的增强可以通过使用强转录信号，如启动子和/或增强子来发生。然而，此外，增强的翻译也是可能的，例如，通过提高mRNA的稳定性。
在本发明的另一实施方案中，存在一种或多种基因构建体，其包含SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：201或者它们的衍生物定义的一种或多种序列并且编码如SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：194、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：202中所示的多肽。上述Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶或者Δ5去饱和酶蛋白质有利地导致脂肪酸的去饱和或者延伸，底物有利地有1、2、3或者4个双键并且有利地在脂肪酸分子中有18、20或者22个碳原子。这同样适用于它们的同源物、衍生物或者类似物，其功能地连接一种或多种调节信号，优选用于增强基因表达的调节信号。
原则上，对于所述新的方法，可能使用所有天然的启动子以及它们的调节序列，如上面提到的那些。还可能并且有利地一起或者单独使用合成的启动子，尤其当它们介导种子特异的表达时，如WO 99/16890中所述的那些启动子。
为了取得特别高的PUFA含量，尤其在转基因植物中，PUFA生物合成基因应当有利地在油种子中以种子特异性的方式表达。为实现此目的，可使用种子特异性启动子或在胚和/或在胚乳中活跃的那些启动子。原则上，种子特异性启动子既可从双子叶植物也可从单子叶植物中分离。如下列出了优选的启动子：USP(未知种子蛋白质)和豌豆球蛋白(豌豆((Viciafaba))[B_umlein等，Mol.Gen Genet.，1991，225(3)]、油菜籽蛋白(油菜)[US 5,608,152]、conlinin(亚麻子)[WO 02/102970]、酰基载体蛋白(油菜)[US 5,315,001和WO 92/18634]、油质蛋白(拟南芥)[WO 98/45461和WO 93/20216]、菜豆蛋白(菜豆)[US 5,504,200]、Bce4[WO 91/13980]、豆球蛋白B4(LegB4启动子)[B_umlein等，Plant J.，2，2，1992]，Lpt2和lpt1(大麦)[WO 95/15389和WO95/23230]、来自稻、玉米和小麦的种子特异性启动子[WO 99/16890]、Amy32b、Amy 6-6和aleurain[US5,677,474]、Bce4(油菜)[US 5,530,149]、大豆球蛋白(大豆)[EP 571 741]、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(大豆)[JP 06/62870]、ADR12-2(大豆)[WO 98/08962]、异柠檬酸裂合酶(油菜)[US 5,689,040]或α淀粉酶(大麦)[EP 781 849]。
植物基因表达也可通过化学可诱导启动子促进(见于综述Gatz 1997，Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.，48：89-108)。在需要以时间特异性方式进行基因表达时，这种化学可诱导启动子尤其合适。此类启动子的例子是水杨酸可诱导启动子(WO 95/19443)、四环素可诱导启动子(Gatz等(1992)Plant J.2，397-404)和乙醇可诱导启动子。
为确保这类生物合成基因经多个世代后仍然稳定地在转基因植物中整合，编码Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或Δ5去饱和酶并且用于方法中的每种核酸应当在一个独立的启动子，优选地在不同于其它启动子的启动子控制下表达，因为重复序列基序可导致T-DNA不稳定或导致重组事件。在本上下文中，表达盒有利地按如此方式构建从而启动子后是适宜的切割位点，这个切割位点有利地位于多位点接头中以便插入将要表达的核酸，并且根据需要使终止子序列位于这个多位点接头的后面。上述的这种序列重复多次，优选地重复三、四、五、六或七次，由此多达七个基因可在一个构建体中组合并导入转基因植物中以便表达。这种序列有利地重复了多达四次。为了表达核酸序列，核酸序列通过例如多位点接头中的合适切割位点在启动子后面插入。每种核酸序列有利地具有自身的启动子并且根据需要具有自身的终止子序列。这类有利的构建体在例如DE 101 02 337或DE 101 02 338中公开。然而仍然可在共享的启动子后面并且根据需要在共享的终止子序列前插入多个核酸序列。这里表达盒中所插入核酸的插入位点或其序列并不特别重要，也就是说核酸序列可在表达盒中最先的位置或最末的位置插入而不显著地影响这种核酸序列的表达。不同的启动子例如USP、LegB4或DC3启动子和不同的终止子序列可有利地在表达盒中使用。然而也可在表达盒中只使用一种类型的启动子，但是这可能导致不为所需的重组事件。
如以上所述，已导入基因的转录应当通过位于已导入的生物合成基因3’端的合适终止子序列有利地终止(在终止密码子之后)。在本上下文中，可使用序列的例子是OCS 1终止子序列。如同启动子的情况，对每种基因应该使用不同的终止子序列。
如以上所述，基因构建体还可包含欲导入植物的其它基因。向宿主植物中导入并且因此表达调节基因如诱导物、阻抑物或酶基因是可能并且有利的，其中这些诱导物、阻抑物或酶因其活性参与了生物合成途径中一种或多种基因的调节。这类调节基因可为异源或同源。
而且脂肪酸或脂类代谢中的其它生物合成基因可在核酸构建体或基因构建体中有利地存在；然而这些基因还可以存在于一种或多种其它核酸构建体中。优选选择的脂肪酸或脂类代谢中的生物合成基因是选自酰基辅酶A脱氢酶、酰基ACP[＝酰基载体蛋白]去饱和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基转移酶、酰基辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、脂肪酸合成酶、脂肪酸羟化酶、乙酰基辅酶A羧化酶、酰基辅酶A氧化酶、脂肪酸去饱和酶、脂肪酸炔属酶、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氢过氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶或它们组合的基因。
尤其有利的核酸序列是脂肪酸或脂类代谢中的生物合成基因，这些生物合成基因选自酰基辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、ω3去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ9去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ9延伸酶。
在本上下文中，以上提到的核酸或基因可与其它延伸酶和去饱和酶组合在以上提及的表达盒中克隆并在农杆菌属协助下转化植物。
这里调节序列或调节因子可如以上所述优选地积极影响已导入基因的表达，并且因此增强了已导入基因的基因表达。因此，调节元件的增强可通过使用强转录信号例如启动子和/或增强子有利地在转录水平发生。然而例如通过改善mRNA稳定性同样可增强翻译。原则上，这类表达盒可直接用于导入植物或导入载体。
这些有利的载体，优选地表达载体包含编码Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶或者Δ5去饱和酶并且用于方法中的核酸，或包含核酸构建体，其中所述核酸单独使用或者与脂肪酸或脂类代谢中的其它生物合成基因如酰基辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、ω3去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ9延伸酶组合使用。
如在本上下文中所用，术语“载体”指这样的核酸分子，其能够运输与这种核酸分子所结合的其它核酸。载体的一个类型是“质粒”，即可连接额外的DNA片段的环状双链DNA环。载体的另一个类型是病毒载体，对额外的DNA片段而言有可能向这种病毒的基因组内连接。某些载体能够在已导入这些载体的宿主细胞中自主复制(例如具有细菌复制原点的细菌载体)。其它载体当向宿主细胞导入时有利地在宿主细胞的基因组内整合并且因此随宿主基因组一起复制。而且某些载体能够控制与这些载体有效连接的基因的表达。这些载体在本上下文中称为“表达载体”。通常适用于DNA重组技术的表达载体采用了质粒的形式。在本说明书中由于质粒是最常用的载体形式，故“质粒”和“载体”可交换使用。然而本发明还将覆盖具有类似功能的其它形式的表达载体如病毒载体。而且术语“载体”还将包含技术人员熟知的其它载体如噬菌体、病毒如SV40、CMV、TMV、转座子、IS元件、噬粒、噬菌粒、粘粒、线形或环形DNA。
有利地在方法中使用的重组表达载体包含具有宿主细胞中适于所用核酸表达的形式的根据本发明使用的核酸或者所述基因构建体，即所述重组表达载体包含基于用于表达的宿主细胞所选择的一种或多种调节序列，其中这种(类)调节序列功能地与将要表达的核酸序列连接。在重组表达载体中，“功能连接”或者“有效连接”意指将目的核苷酸序列与调节序列以如此方式连接，即有可能使这种核苷酸序列表达并且它们彼此连接而使这两类序列(例如在体外转录/翻译系统中，或如果载体导入了宿主细胞，在宿主细胞中)都执行了属于该序列的预期功能。
术语“调节序列”旨在包含启动子、增强子和其它表达控制元件(例如多聚腺苷酸化信号)。这些调节序列描述于例如Goeddel：Gene ExpressionTechnology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，CA(1990)一书中或参见：Gruber和Crosby，Methods in Plant MolecularBiology and Biotechnolgy，CRC Press，Boca Raton，Florida，Glick和Thompson编著，Chapter 7，89-108，包括其中引用的参考文献。调节序列包含那些在多种类型的宿主细胞中控制核苷酸序列组成型表达的调节序列和那些控制核苷酸序列仅仅在特定的宿主细胞中于特定条件下直接表达的调节序列。技术人员知道表达载体的设计可依赖多种因素，如待转化的宿主细胞的选择、蛋白质的目的表达水平及其它因素。
在该方法的另一实施方案中，Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或Δ5去饱和酶可以在单细胞植物细胞(如藻类)中表达，见Falciatore等人，1999，Marine Biotechnology 1(3)：239-251和其中引用的参考文献，也可以在高等植物(例如，种子植物，如可耕种的作物)的植物细胞中表达。植物表达载体的实例包含在Becker，D.，Kemper，E.，Schell，J.，and Masterson，R.(1992)“New plant binary vectors with selectablemarkers located proximal to the left border”，Plant Mol.Biol.20：1195-1197；and Bevan，M.W.(1984)“Binary Agrobacterium vectors forplant transformation”，Nucl.Acids Res.12：8711-8721；Vectors for GeneTransfer in Higher Plants；in：Transgenic Plants，Vol.1，Engineering andUtilization，Eds.：Kung and R.Wu，Academic Press，1993，p.15-38中详述的那些表达载体。
植物表达盒优选地包含能够在植物细胞中控制基因表达并且功能连接的调节序列，如此使每一种序列能够实现它的功能，例如多聚腺苷酸化信号的转录终止功能。优选的多聚腺苷酸化信号是来自根癌农杆菌T-DNA如Ti质粒pTiACH5(1984年Gielen等，EMBO J.3期，835等)的基因3的那些多聚腺苷酸化信号，其中已知基因3是章鱼碱合酶，或者是那些多聚腺苷酸化信号的功能等同物，但是所有其它在植物中具有功能活性的终止子序列同样合适。
由于植物基因表达通常不限于在转录水平，植物表达盒优选地包含其它功能连接的序列，如翻译增强子例如超驱动序列，所述的超驱动序列增强烟草花叶病毒5’-非翻译前导序列，这种前导序列提高了蛋白质/RNA比(Gallie等，1987，Nucl.Acids Research 15：8693-8711)。
如以上所述，待表达的基因必须与合适启动子功能地连接，其中这种启动子以正确的时间过程或以细胞或组织特异性方式引发基因表达。可使用的启动子是组成型启动子(Benfey等，EMBO J.8(1989)2195-2202)，例如那些来自植物病毒如35S CaMV(Franck等，Cell 21(1980)285-294)、19S CaMV(也见US 5352605和WO 84/02913)的启动子或组成型植物启动子，如在US 4,962,028中所描述Rubisco小亚单位的启动子。
如以上所述，植物基因表达还可以通过化学可诱导启动子(见Gatz1997，Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.，48：89-108的综述)实现。当希望基因表达需以时间特异性方式发生时，化学可诱导启动子尤其适合。这类启动子的例子是水杨酸可诱导启动子(WO 95/19443)、四环素可诱导启动子(Gatz等(1992)Plant J.2，397-404)和乙醇可诱导启动子。
对生物性或非生物应激条件反应的启动子如病原诱导的PRP1基因启动子(Ward等，Plant.Mol.Biol.22(1993)361-366)、热诱导的番茄hsp80启动子(US 5,187,267)、冷冻诱导的马铃薯α淀粉酶启动子(WO96/12814)或外伤诱导的pinII启动子(EP-A-0 375 091)同样适合。
那些在进行脂肪酸、脂类和油生物合成的组织和器官中，在种子细胞如胚乳细胞和发育胚的细胞中引起基因表达的启动子尤其有利。这类合适的启动子是油菜的油菜籽蛋白启动子(US 5,608,152)、亚麻子Conlinin启动子(WO 02/102970)、蚕豆的USP启动子(Baeumlein等，MolGengenet，1991，225(3)：459-67)、拟南芥的油质蛋白启动子(WO98/45461)、菜豆的菜豆蛋白启动子(US 5,504,200)、芸苔属的Bce4启动子(WO 91/13980)或豆球蛋白B4启动子(LeB4；Baeumlein等，1992，Plant Journal，2(2)：233-9)及在单子叶植物如玉米、大麦、小麦、黑麦、稻等中引起种子特异性表达的启动子。适宜的值得注意的启动子是大麦的lpt2或lpt1基因启动子(WO 95/15389和WO 95/23230)或WO99/16890中所描述来自大麦的大麦醇溶蛋白基因、稻的谷蛋白基因、稻的水稻素基因、稻的谷醇溶蛋白基因、小麦的麦醇溶蛋白基因、小麦的谷蛋白基因、玉米的玉米醇溶蛋白基因、燕麦的谷蛋白基因、高梁的kasirin基因或黑麦的裸麦醇溶蛋白基因的启动子。
因为质体是合成脂类生物合成的前体和某些终产物的区室，同样尤其适合的其它启动子是那些引起质体特异性表达的启动子。这类合适的启动子如在WO 95/16783和WO 97/06250中描述的病毒RNA聚合酶启动子以及在WO 99/46394中描述的来自拟南芥的clpP启动子。
引起方法中所用的Δ12去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或Δ5去饱和酶的多平行表达可能尤为所需。这类表达盒可通过同时转化多种单独的表达构建体，或优选地通过在一个构建体上组合多个表达盒而产生。同样在每一情况下多种载体可以用多种表达盒转化然后向宿主细胞转移。
与植物基因表达盒有效连接使用的其他优选的序列是靶向序列，需要靶向序列来将基因产物靶向到它的对应的细胞区域，例如，靶向液泡、细胞核、所有类型的质体，如造粉体、叶绿体、色质体、胞外空间、线粒体、内质网、油质体、过氧化物酶体和植物细胞的其它区室(综述见Kermode，Crit.Rev.Plant Sci.15，4(1996)285-423和其中引用的参考文献)。
根据本发明的方法使用具有SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：27、SEQID NO：193、SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：201的核酸序列或者它们的衍生物或者同源物，所述衍生物或同源物编码的多肽保留所述核酸序列编码的蛋白质的酶促活性。这些序列单独或者与编码所用的其他酶的核酸序列组合克隆到表达构建体中并用于转化到植物并在植物中表达。由于它们的构建，这些表达构建体使得可能有利地最佳合成根据本发明的方法中产生的多不饱和脂肪酸。
在优选实施方案中，该方法还包括得到包含方法中所用的核酸序列的细胞或者完整植物，其中所述细胞或者完整植物用编码具有Δ12去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ6延伸酶活性的多肽的核酸序列、如上述的基因构建体或者载体，单独或者与编码脂肪酸或者脂类代谢的蛋白质的其他核酸序列组合转化。所得细胞有利地是产油生物，如油料作物的细胞，所述油料作物为例如，花生、油菜、芸苔、亚麻子、大麻、花生、大豆、红花、大麻、芥菜、向日葵或者琉璃苣。
对于本发明，“转基因的”或“重组的”意指例如核酸序列、表达盒(＝基因构建体)或包含根据本发明的核酸序列的载体或用本发明的核酸序列、表达盒或载体所转化的生物，所有那些构建都通过重组方法进行，其中
a)本发明的核酸序列，或
b)有效地连接于本发明核酸序列的遗传控制序列，例如启动子，或
c)a)和b)均不处于它们天然的遗传环境中或均已经通过重组方法修饰，对这种修饰而言可采取例如一个或多个核苷酸残基的替代、添加、缺失、倒位或插入的形式。将天然遗传环境理解为意指最初生物中的天然基因组位点或染色体位点或在基因组文库中的存在。在为基因组文库的情况下，优选地保留，至少部分保留所述核酸序列的天然遗传环境。所述环境位于所述核酸序列的至少一侧并且具有至少50bp、优选地至少500bp、尤其优选地至少1000bp、最为优选地至少5000bp的序列长度。天然存在的表达盒—例如用于本发明方法的所述核酸序列的天然启动子与相应的Δ12去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6延伸酶和/或Δ5延伸酶基因的天然存在的组合-当经过非天然、合成的(“人工的”)方法例如通过诱变处理修饰后变成了转基因的表达盒。合适的方法在美国5,565,350或WO001/15815中描述。
用于本发明目的的转基因植物因此理解为意指上述方法中所用的核酸不处于它们在植物的基因组中的天然基因座处，对这类核酸而言可同源或异源性地表达。然而转基因也意指即便本发明的核酸处于植物基因组中它们的天然位置上，这种序列相对于天然序列已经过了修饰，和/或天然序列的调节序列已经过了修饰。转基因优选地理解为意指本发明的核酸或者用于本发明的核酸序列在基因组内非天然基因座处的表达，即发生了这种核酸的同源表达，或优选地异源表达。优选的转基因植物是油料种子或者油料果实(oil fruit)植物。
适用于本发明方法的植物原则上为有利地合成脂肪酸，尤其不饱和脂肪酸如ARA、EPA和/或DHA，并且适用于表达重组基因的所有植物。实例是植物如拟南芥、菊科植物例如金盏花或作物植物如大豆、花生、蓖麻油植物、向日葵、玉米、棉、亚麻、油菜、椰子、油棕榈、红花(Carthamustinctorius)或可可豆；能够天然合成大量油的植物是优选的，如大豆、油菜、亚麻荠、芥菜、印度椰子、油棕榈、红花、亚麻、大麻、蓖麻油植物、金盏花、花生、可可豆或向日葵，或者酵母如酿酒酵母，并且尤其优选大豆、亚麻、油菜、红花、向日葵、亚麻荠、印度芥菜或者金盏花。
可以用于克隆本发明方法中所用核酸序列的其他宿主细胞在Goeddel，Gene Expression Technology：Methods in Enzymology 185，AcademicPress，San Diego，CA(1990)中详述。
可使用的表达株系，例如具有较低蛋白酶活性的那些株系在Gottesman，S.，Gene Expression Technology：Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，California(1990)119-128中描述。
这些株系包括植物细胞和某些组织、器官和植物的所有表型形式中的部分如花药、纤维、根毛、茎、胚、愈伤组织、cotelydon、叶柄、所收获的材料、植物组织、可繁殖的组织和来自实际的转基因植物的和/或可用于产生转基因植物的细胞培养物。
包含本发明方法中所合成的多不饱和脂肪酸，尤其ARA、EPA和/或DHA的转基因植物或者有利地其种子能够有利地直接销售而无需分离所合成的油、脂类或脂肪酸。本发明方法的植物指：完整植物和植物的所有部分、植物器官或植物部分如叶、茎、种子、根、块茎、花药、纤维、根毛、茎、胚、愈伤组织、cotelydons、叶柄、所收获的材料、植物组织、可繁殖的组织和来自实际转基因植物的细胞培养物和/或可用于产生转基因植物的细胞培养物。在本上下文中，种子包含种子的所有部分如种皮、表皮细胞、种子细胞、胚乳或胚组织。
原则上，根据本发明的方法也适于在植物细胞培养物中产生多不饱和脂肪酸，尤其ARA、EPA和/或DHA，然后从培养物得到脂肪酸。具体地，它们可以表现为悬浮液或者愈伤组织培养物的形式。
然而，本发明方法中产生的化合物可以从植物，有利地从植物种子中，以它们的油、脂肪、脂类和/或游离脂肪酸的形式分离。该方法中产生的多不饱和脂肪酸，尤其ARA、EPA和/或DHA，可以通过从它们生长的培养物或者从田间收获植物或者植物种子来获得。
在另一优选实施方案中，该方法还包括从植物或者作物得到油、脂类或者游离脂肪酸的步骤。该作物可以例如，采取温室或者田间生长的植物作物的形式。
油、脂类或者游离脂肪酸可以通过压榨或者提取植物部分，优选地植物种子来分离。在本上下文中，油、脂类或者游离脂肪酸通过公知的冷敲打(cold-beating)或冷榨可获得而无需加热。为了更容易地破裂植物部分尤其种子，它们事先经过粉碎、蒸热或烘烤。随后经如此方式预处理的种子可用溶剂如温己烷压榨或提取。然后去除溶剂。
此后所得到包含多不饱和脂肪酸的产物经过进一步加工即精制。在该方法中，例如植物黏液和悬浮物的物质首先去除。众知的所谓除去矿泥可通过酶或例如通过加入酸如磷酸而化学-物理地完成。此后游离脂肪酸用碱例如氢氧化钠溶液处理去除。得到的产物用水彻底洗涤以去除产物中残留的碱，然后干燥。为了除去产物中残留的色素，利用滤土或活性碳漂白产物。最后例如利用蒸汽使产物脱臭。
通过该方法所产生的PUFA或LCPUFA优选是C18、C20或C22脂肪酸分子，有利地是C20或C22脂肪酸分子，这些脂肪酸分子具有至少两个双键，优选地具有三、四、五或六个双键，特别优选具有四、五或六个双键。这些C18、C20或C22脂肪酸分子可以以油、脂类或游离脂肪酸的形式从植物中分离。合适的植物是例如以上提到的那些植物。优选的生物是转基因植物。
因此本发明的一个实施方案是通过以上描述的方法制备的油、脂类或脂肪酸或它们的级分，尤其优选含有PUFA并且来自转基因植物的油、脂类或脂肪酸组合物。
该方法中所得脂肪酸适宜作为有价值产品的化学合成的原料。例如，它们可以一起或者单独用于生产药物、食品、饲料或者化妆品。
如以上所描述，在每一情况下，以100％为基础并且以生物的总脂肪酸含量为基础，这些油、脂类或脂肪酸有利地包含6至15％的棕榈酸、1至6％的硬脂酸、7-85％的油酸、0.5至8％的11-十八碳烯酸、0.1至1％的花生酸、7至25％的饱和脂肪酸、8至85％的单不饱和脂肪酸和60至85％的多不饱和脂肪酸。以总脂肪酸含量为基础，这些脂肪酸酯或脂肪酸混合物中存在的有利的多不饱和脂肪酸优选地为至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1％的花生四烯酸。而且通过本发明方法产生的脂肪酸酯或脂肪酸混合物有利地包含选自如下的脂肪酸：芥酸(二十二碳烯-13酸)、苹婆酸(9，10-亚甲基十八碳-9-烯酸)、锦葵酸(8，9-亚甲基十七碳-8-烯酸)、大风子油酸(环戊烯十二烷酸)、呋喃脂肪酸(9，12-环氧十八碳-9，11-二烯酸)、斑鸠菊酸(9，10-环氧十八碳-12-烯酸)、果脂酸(6-十八碳炔酸)、6-十九碳炔酸、santalbic acid(反11-十八碳烯-9-炔酸)、6，9-十八碳烯炔酸、pyrulic acid(反10-十七烯-8-炔酸)、crepenyninic acid(9-十八烯-12-炔酸)、13，14-二氢oropheicacid、十八碳-13-烯-9，11-二炔酸、伞形花子油酸(顺-6-十八烯酸)、9顺，12反-十八碳二烯酸、金盏花素酸(8反10反12顺-十八碳三烯酸)、梓甙酸(9反11反13顺-十八碳三烯酸)、石榴酸(9顺11反13顺-十八碳三烯酸)、jacaric acid(8顺10反12顺-十八碳三烯酸)、石榴酸(9顺11反13顺-十八碳三烯酸)、麦饼树酸(9顺11反13反15顺-十八碳四烯酸)、皮诺敛酸(全-顺-5，9，12-十八碳三烯酸)、laballenic acid(5，6-十八碳二烯丙二烯酸)、蓖麻油酸(12-羟油酸)和/或革盖菌素酸(13-羟-9顺，11反-十八碳二烯酸)。通常上面提到的脂肪酸有利地仅在本发明方法产生的脂肪酸酯或脂肪酸的混合物中痕量地存在，也就是说以总脂肪酸为基础，它们的含量小于30％，优选地小于25％、24％、23％、22％或21％，尤其优选地小于20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％或5％、非常尤其优选地小于4％、3％、2％或1％。在本发明更优选的形式中，以总脂肪酸为基础，以上这些提到的脂肪酸的含量小于0.9％、0.8％、0.7％、0.6％或0.5％，尤其优选地小于0.4％、0.3％、0.2％、0.1％。以总脂肪酸为基础，由本发明方法所产生的脂肪酸酯或脂肪酸混合物有利地包含小于0.1％和/或无丁酸、无胆固醇、无鰶鱼酸(＝二十二碳五烯酸，C22:5Δ4，8，12，15，21)以及无尼生酸(二十四碳六烯酸，C23:6Δ3，8，12，15，18，21)。
以生产生物，有利地是植物，尤其优选地是油料作物植物如大豆、油菜、椰子、油棕榈、红花、亚麻、大麻、蓖麻油植物、金盏花、花生、可可豆、向日葵或以上提到的其它单子叶或双子叶油料作物植物的总脂肪酸含量为基础，本发明的油、脂类或脂肪酸有利地包含至少0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％，有利地至少11％、12％、13％、14％、15％、16％或者17％，特别有利地至少18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％或者25％的ARA或至少0.5％、1％、2％、3％、4％、5％或6％，有利地至少7％、8％、9％、10％或11％，特别有利地至少12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或者20％EPA或者至少0.01％、0.02％、0.03％、0.04％或者0.05％或者0.06％，有利地至少0.07％、0.08％、0.09％或者0.1％，特别有利地至少0.2％、0.3％或者0.4％的DHA。所有百分数都是按重量计。
由于本发明的核酸序列，或者本发明方法中使用的核酸序列，与非转基因起始植物，例如，芥菜、欧洲油菜、亚麻荠、拟南芥或亚麻的植物相比，当通过GC分析比较时，多不饱和脂肪酸，主要是ARA和EPA，以及DHA的产率增加至少50、80或者100％，有利地至少150、200或者250％，特别有利地至少300、400、500、600、700、800或者900％，非常特别有利地至少1000、1100、1200、1300、1400或者1500％；见实施例。
本发明方法中产生的脂类和/或油在sn-2位与其他位sn1和sn3相比有较高含量的不饱和脂肪酸油酸、亚油酸和α-亚麻酸。较高含量理解为指(sn1∶sn2∶sn3)1∶1.1∶1、1∶1.5∶1到1∶3∶1的比率。而且，在脂类和/或油中，方法中产生的花生四烯酸、二十碳五烯酸或者二十二碳六烯酸同样显示出对甘油三酯的sn-2位与sn1和sn3相比的偏爱，有利地为1∶1.1∶1、1∶1.5∶1到1∶3∶1。
如上述，在本方法中产生的在分子中有4、5或者6个双键的多不饱和C20-和/或C22脂肪酸将在植物的种子中，该种子不包含或者仅包含非常少量的C12:0-或者C14:0脂肪酸。甚至更短的饱和脂肪酸，如脂肪酸C4:0、C6:0、C8:0或者C10:0也不应该存在于脂类和/或油中，或者仅以少量存在。仅少量理解为表示当通过GC分析时，有利地，为小于5、4、3、2或者1％、有利地小于0.9、0.8、0.7、0.6或者0.5％、特别有利地小于0.4、0.3、0.2或者0.1％、特别优选地小于0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02或者0.01单位GC峰面积。脂肪酸C16:0应该有利地为1到28％单位GC峰面积的范围内。脂肪酸C16:0应该有利地以小于25％、20％、15％或者10％、有利地小于9％、8％、7％、6％或者5％、特别有利地小于4％、3％、2％或者1％的单位GC峰面积的量存在于脂类、油和/或脂肪酸中，或者根本不存在。脂肪酸C16:1应该有利地小于1、0.5、0.4、0.3、0.2或者0.1％、特别有利地0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02或者0.01单位GC峰面积。非常特别优选地，脂肪酸C16:1应该不存在于该方法产生的油和/或脂类中。这同样应用于脂肪酸C15:0、C17:0、C16:1Δ3反式、C16:4Δ4，7，10，13和C18:5Δ3，6，9，12，15。除了油酸(C18:1Δ9)，在脂类、油和/或游离脂肪酸中也可以存在异构体(C18:1Δ7、18:1Δ11)。有利地，异构体的量小于5％、4％、3％、2％或者1％(以单位GC峰面积测量)。脂肪酸C20:0、C20:1、C24:0和C24:1应该在每种情况中分别以0到1％，0到3％和0到5％的单位GC峰面积的范围存在。此外，在种子油和/或种子脂类CG分析应该检测到很少的二高-γ-亚麻酸(＝DGLA)(以单位GC峰面积表示)。很少将理解为小于2、1.9、1.8、1.7、1.6或者1.5％，有利地小于1.4、1.3、1.2、1.1或者1％，特别有利地小于0.9、0.8、0.7、0.6、0.5或者0.4％(单位GC峰面积)。
在该方法的优选实施方案中，DGLA和ARA应该以1∶1到高达1∶100，有利地1∶2到高达1∶80，特别有利地1∶3到高达1∶70，非常特别地1∶5到高达1∶60的比例产生。
在另一优选实施方案中，DGLA和EPA应该以1∶1到高达1∶100，有利地1∶2到高达1∶80，特别有利地1∶3到高达1∶70，非常特别优选地1∶5到高达1∶60的比例产生。
基于转基因植物的种子中总脂肪酸含量，根据本发明的方法中产生的脂类、油和/或脂肪酸应该有利地含有按重量计至少30、40或50％，有利地按重量计至少60、70或者80％的高含量不饱和的、有利地多不饱和的脂肪酸。
所有饱和脂肪酸一起应该优选在所用的植物中的脂类、油和/或脂肪酸中占少量。在该上下文中，少量理解为指以单位GC峰面积表示小于15％、14％、13％、12％、11％或者10％、优选小于9％、8％、7％或者6％的量。
本方法中产生的脂类、油和/或脂肪酸的芥酸含量基于植物的总脂肪酸含量计按重量计小于2％。有利地，在脂类和/或油中应该不存在芥酸。而且，饱和脂肪酸C16:0和/或C18:0的含量应该基于脂类和/或油的总脂肪酸含量，按重量计小于19、18、17、16、15、14、13、12、11或者10％，有利地按重量计小于9、8、7、6或者5％。而且，较长的脂肪酸如C20:0或者C22:1应该不存在，或者仅以少量存在，有利地基于脂类和/或油的总脂肪酸含量按重量计小于4、3、2或者1％，有利地按重量计小于0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或者0.1％的量存在。通常，C16:1不作为脂肪酸存在，或者仅以少量存在于根据本发明产生的脂类和/或油中。少量也有利地理解为指脂肪酸含量，其基于脂类和/或油的总脂肪酸含量按重量计小于4、3、2或者1％，有利地按重量计小于0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或者0.1％。
压榨后得到的本发明的油、脂类、氨基酸或者脂肪酸混合物为所称作的“粗品油”。它们仍然包含所有油和/或脂类内含物和其中溶解的化合物。此类化合物为多种生育酚，如α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚和/或δ-生育酚或者植物固醇，如菜子固醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇、二氢谷甾醇、Δ5-燕麦甾醇、Δ5，24-豆甾二烯醇、Δ7-stigmasternol或者Δ7-燕麦甾醇。这些化合物以1到1000mg/100g，有利地10到800mg/100g脂类或者油的范围存在。三萜类如germaniol、香树素、环阿乔醇和其他三萜也可以存在于这些脂类和油中。这些脂类和/或油包含该方法中产生的多不饱和脂肪酸，如ARA、EPA和/或DHA，它们结合在极性和非极性脂类，如磷脂，例如，磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、半乳糖脂、甘油一酯、甘油二酯或者甘油三酯等中。溶血磷脂也可以存在于脂类和/或油中。脂类和/或油的这些组分可以通过合适的方法相互分离。胆固醇不存在于这些粗品油中。
本发明的另一实施方案是油、脂类、脂肪酸和/或脂肪酸组合物在饲料、食品、化妆品或者药物中的应用。本发明的油、脂类、脂肪酸和/或脂肪酸混合物可以技术人员熟悉的方式使用用于与动物来源的其他油、脂类、脂肪酸和/或脂肪酸混合物(如鱼油)混合。典型的此类鱼油短链脂肪酸为，诸如C12:0、C14:0、C14:1、支链C15:0、C15:0、C16:0或者C16:1。在鱼油中也发现多不饱和的C16脂肪酸，如C16:2、C16:3或者C16:4、支链C17:0、C17:1、支链C18:0和C19:0和C19:0和C19:1。此类脂肪酸是鱼油典型的并且在植物油中很少发现或者根本没有发现。经济上相关的鱼油为例如，凤尾鱼油、油鲱鱼油、鲔鱼油、沙丁鱼油、鲱鱼油、鲭鱼油、鲸油和鲑鱼油。动物来源的这些脂类和/或油可以与粗品油形式，即还没有纯化的脂类和/或油形式的本发明的油混合物，或者多种纯化的级分可以用于混合。
本发明的另一实施方案是油、脂类、脂肪酸和/或脂肪酸组合物在饲料、食品、化妆品或者药物中的应用。
本发明的油、脂类、脂肪酸和/或脂肪酸混合物可以技术人员熟悉的方式使用用于与动物来源的油、脂类、脂肪酸和/或脂肪酸混合物(如鱼油)混合。再次，这些由植物和动物成分组成的油、脂类、脂肪酸或脂肪酸混合物可以用于制备食品、饲料、化妆品或者药物。
术语“油”、“脂类”或“脂肪”理解为意指包含不饱和的、饱和的，优选地已酯化的脂肪酸的脂肪酸混合物。油、脂类或脂肪优选地具有高的多不饱和的游离脂肪酸或有利地具有高的酯化的脂肪酸，特别是亚油酸、γ-亚麻酸、二高γ-亚麻酸、花生四烯酸、α-亚麻酸、十八碳四烯酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸或二十二碳六烯酸。不饱和酯化的脂肪酸的量优选地占约30％含量，50％的含量更为优选，60％、70％、80％、85％或更高的含量尤其优选。为了分析，脂肪酸的含量例如可在脂肪酸经酯转换转化为甲酯后通过气相色谱测定。油、脂类或脂肪可包含多种其它饱和或不饱和的脂肪酸，例如金盏花素酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸等。在油或脂肪中的多种脂肪酸含量可变化，这尤其取决于起始生物。
在方法中所产生的有利地具有至少两个双键的多不饱和脂肪酸如上所述是例如鞘脂类、磷酸甘油酯、脂类、糖脂、磷脂、单酰甘油、二酰甘油、三酰甘油或其它脂肪酸酯。
从通过本发明方法制备的有利地具有至少五个或六个双键的多不饱和脂肪酸开始，所存在的多不饱和脂肪酸经碱例如KOH或NaOH水溶液处理，或者有利地于存在醇例如甲醇或乙醇时经酸水解，或者经酶切割释放并且通过例如相分离及随后例如H2SO4的酸化作用而分离。这类脂肪酸也可无需以上描述的处理步骤直接释放。
藓类和藻类是唯一已知的产生大量多不饱和脂肪酸如花生四烯酸(ARA)和/或二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)的植物系统。藓类在膜脂中包含PUFA；而藻类、与藻类有关的生物及少数真菌也在三酰甘油级分中积累大量的PUFA。这是为什么从三酰甘油级分中积累PUFA的株系所分离的核酸分子尤其有利地用于本发明方法并且因此用于修饰宿主中脂类和PUFA产生系统的原因，特别是修饰植物中如油料作物例如油菜、卡诺拉油菜、亚麻子、大麻、大豆、向日葵和琉璃苣中的脂类和PUFA产生系统。因此这类核酸分子可有利地用于本发明的方法。
方法中所用的核酸在导入植物细胞或植物后，可以在单独的质粒中存在或者有利地可以整合入宿主细胞的基因组内。在整合入基因组内的情况下，整合可以是随机的或可通过重组实现，从而所导入的拷贝替代了天然基因，由此细胞产生的目的化合物是被调节的，或可通过运用基因反式而实现，从而这种基因与功能性表达单元功能地连接，其中这个表达单元包含至少一段确保基因表达的序列和至少一段确保功能性转录的基因多聚腺苷酸化的序列。这类核酸通过多重表达盒或构建体有利地向生物中导入以便多重平行表达，有利地向植物中导入以便基因的多重平行种子特异性的表达。
天然地，多种基因的共表达不仅可以通过将多种基因导入共用的重组核酸构建体上来实现。而且，各基因还可以分开-同时或者接连导入多个构建体上。在该情况中，通过使用不同的选择标记确保植物中同时存在所有这些基因的共表达。该植物可以是一次或多次转化步骤的产物或者可以是包含一种或多种基因的植物的杂交产物。
有利地适于本发明方法中所用的核酸的底物，其中所述核酸编码具有ω3去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ12去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或Δ9延伸酶活性和/或适于所用的其它核酸的底物有利地是C16、C18、C20或C22脂肪酸，其中所述其它的核酸是编码脂肪酸或者脂类代谢的多肽的核酸，所述多肽选自酰基-辅酶A脱氢酶、酰基ACP[＝酰基载体蛋白]去饱和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基转移酶、酰基-辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、脂肪酸合酶、脂肪酸羟化酶、乙酰基辅酶A羧化酶、酰基辅酶A氧化酶、脂肪酸去饱和酶、脂肪酸炔属酶、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氢过氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶。方法中作为底物转化的脂肪酸优选地以它们酰基辅酶A酯形式和/或它们的磷脂形式转化。在方法中有利地使用对酰基辅酶A酯有特异性的去饱和酶。这里的优点是可以省却磷脂酯(其通常是去饱和的底物)和酰基辅酶A酯之间的取代。从而，可以省却另一个酶步骤，其如所示在某些情况中是限速步骤。
为产生本发明的长链PUFA，多不饱和C16-或者C18脂肪酸首先必须通过去饱和酶的酶活性去饱和并且接下来通过延伸酶延伸至少两个碳原子。在一次延伸循环后，延伸酶的酶活性产生了C18-或C20脂肪酸并且经过两轮延伸循环后，产生了C20-或者C22脂肪酸。本发明方法中所用的去饱和酶和延伸酶的活性优选地产生C18、C20和/或C22脂肪酸，在脂肪酸分子中有利地具有至少两个双键，优选地具有三、四、五或六个双键，尤其优选地产生C20和/或C22脂肪酸，在脂肪酸分子中具有至少两个双键，优选地具有三、四、五或六个双键，非常尤其优选地在分子中具有四、五或六个双键。根据本发明方法的特别优选的产物是花生四烯酸、二十碳五烯酸和/或二十二碳六烯酸。在脂肪酸中有至少两个双键的C18脂肪酸可以以游离脂肪酸或者酯，如磷脂、糖脂、鞘脂、磷酸甘油酯、单酰基甘油、二酰基甘油或者三酰甘油的形式通过本发明的酶促活性延长。
脂肪酸、油、脂类或脂肪在有利使用的植物中优选的生物合成部位例如通常是种子或种子的细胞层，因此对方法中所用的核酸进行种子特异性表达是有意义的。然而，显然脂肪酸、油或脂类的生物合成不必限定于种子组织，而是也可在植物的所有其它部分例如在表皮细胞或在块茎中以组织特异性方式进行。
由于本发明编码Δ5延伸酶的核酸的利用，与不含有这种重组核酸的野生型生物比较，方法中产生的多不饱和脂肪酸可增加至少5％，优选地至少10％，尤其优选地至少20％，非常尤其优选地至少50％。
原则上，可以两种不同方式增加在方法所用的植物中由本发明方法产生的多不饱和脂肪酸。游离的多不饱和脂肪酸库和/或由方法产生的酯化多不饱和脂肪酸含量可以扩大。转基因生物中酯化的多不饱和脂肪酸库通过本发明方法有利地扩大。
本发明的另一主题是经分离的编码具有Δ5延伸酶活性多肽的核酸序列，其中由所述核酸序列编码的Δ5延伸酶转化在脂肪酸分子中具有至少四个双键的C20脂肪酸，这种C20脂肪酸有利地最终掺入二酰甘油酯和/或三酰甘油酯内。
本发明的另一个主题从而是分离的核酸序列，其编码具有Δ5延伸酶活性的多肽并且具有SEQ ID NO：197中所示序列。
本发明的另一个主题是分离的核酸序列，其编码具有Δ6延伸酶活性的多肽并且具有SEQ ID NO：199中所示序列。
本发明的再一个主题是分离的核酸序列，其编码具有Δ6去饱和酶活性的多肽并且具有SEQ ID NO：201中所示序列。
本发明的主题同样延伸到重组核酸分子，其包含：
a)在植物细胞，优选在种子细胞中有活性的启动子的一个或多个拷贝，
b)至少一种核酸序列，其具有SEQ ID NO：193或者SEQ ID NO：201中所示序列并且编码Δ6去饱和酶活性，
c)至少一种核酸序列，其具有SEQ ID NO：11中所示序列并且编码Δ5去饱和酶活性，
d)至少一种核酸序列，其具有SEQ ID NO：27或者SEQ ID NO：199中所示序列并且编码Δ6延伸酶活性，和
e)一个或多个拷贝的终止子序列。
有利地，具有SEQ ID NO：195中所示序列并且编码Δ12去饱和酶的额外核酸序列也可以有利地存在于上述重组核酸分子中。
在另一有利的实施方案中，具有SEQ ID NO：197中所示序列并且编码Δ5延伸酶的额外核酸序列也可以存在于该重组核酸分子中。
除了这些上述序列，脂肪酸或者脂类代谢的其他生物合成基因也可以导入所述重组核酸分子中，所述生物合成基因选自：酰基-辅酶A脱氢酶、酰基ACP[＝酰基载体蛋白]去饱和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基转移酶、酰基-辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、脂肪酸合酶、脂肪酸羟化酶、乙酰基辅酶A羧化酶、酰基辅酶A氧化酶、脂肪酸去饱和酶、脂肪酸炔属酶、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氢过氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶。
这些基因优选为选自Δ4去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶或者Δ9延伸酶的脂肪酸或者脂类代谢的基因。
本发明的再一个主题是基因构建体，其包含本发明的核酸序列SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：195、SEQ IDNO：197、SEQ ID NO：199或者SEQ ID NO：201，该核酸功能地连接一个或多个调节信号。
本发明方法中使用的所有核酸序列有利地来自真核生物，如植物、微生物，如藻类或者动物。优选地，核酸序列来自鳟形目、爪蟾或者海鞘、藻类如Mantoniella，隐甲藻属，裸藻属或Ostreococcus、真菌如疫霉属或者硅藻如海链藻属或褐指藻属。
方法中所用的编码具有ω3去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶、Δ12去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶或Δ9延伸酶活性的蛋白质的核酸序列有利地单独导入，或优选地与有可能使所述核酸在植物中表达的表达盒(＝核酸构建体)组合导入。所述核酸构建体可以存在具有酶活性如Δ12去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或ω3去饱和酶活性的一种以上的核酸序列。
为导入植物，方法中所用的核酸有利地以上述的已知方式扩增和连接。
存在可修饰Δ12去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ6去饱和酶和/或ω3去饱和酶蛋白质和方法中所用的其它蛋白质如Δ12去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶或Δ4去饱和酶蛋白质的一系列机制，因此有利的多不饱和脂肪酸在植物、优选在油料作物植物的产量、产生和/或产生效率由于经修饰的蛋白质可直接受到影响。Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶蛋白质或基因的数目或活性可以得到增加，因此产生了更大量的基因产物并且最终产生了更大量的通式I化合物。在向缺乏该化合物生物合成活性和能力的植物中导入相应基因之前，从头(de novo)合成也为可能。这类似地适用于脂肪酸和脂类代谢中的其它去饱和酶或延伸酶或其它酶的组合。利用不同趋异的序列，即在DNA序列水平不同的序列也是有利的，或者利用基因表达的启动子也是有利的，其中所述的启动子可使不同基因的表达随时间过程不同，例如与种子或贮油组织成熟程度相关。
由于向植物中单独导入Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶基因或与其它基因组合导入细胞中，不但有可能增加指向终产物的生物合成流，而且还有可能增加或全新产生相应三酰甘油组合物。同样，可增加其它基因的数目或活性，其中所述的其它基因参与为一种或多种脂肪酸、油、极性和/或中性脂类的生物合成所需的营养物的输入，由此增加这些前体、辅因子或中间体在细胞中或贮存区室中的浓度，从而如以下描述可进一步增强细胞产生PUFA的能力。通过优化参与这类化合物生物合成的一种或多种Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶基因的活性或增加其量，或通过破坏参与这些化合物降解的一种或多种基因的活性，有可能在生物中，有利地在植物中增加脂肪酸和脂类分子的产量、生产和/或生产效率。
本发明方法中所用的经分离的核酸分子编码这样的蛋白质或其部分，其中所述蛋白质或单个蛋白质或其部分包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与序列SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ IDNO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ IDNO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：194、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：200或者SEQ ID NO：202中所示的氨基酸序列具有足够的同源性，因此所述蛋白质或其部分保留了Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶的活性。所述核酸分子编码的蛋白质或其部分在生物中，有利地在植物中仍然保留了它/它们的基本酶活性以及参与细胞膜或脂肪体合成所需的化合物代谢的能力，或参与跨越这类膜运输的能力。所述核酸分子编码的蛋白质有利地具有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ IDNO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ IDNO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ IDNO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ IDNO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ IDNO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ IDNO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ IDNO：72、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ IDNO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ IDNO：88、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ IDNO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ IDNO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：194、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：200或者SEQ ID NO：202中所示氨基酸序列至少约50％、优选地至少约60％并且更优选地至少约70％、80％和90％并且最为优选地至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性。为了本发明目的，将同源性或同源的理解为意指同一性或同一的。
在整个氨基酸或者核酸序列区上计算同源性。为了比较不同序列，利用基于多种算法的一系列程序。在该上下文中，Needleman和Wunsch或者Smith和Waterman的算法给出尤其可靠的结果。为了进行序列比对，使用程序PileUp(J.Mol.Evolution.，25，351-360，1987，Higgins等人，CABIOS，51989：151-153)或者程序Gap和BestFit[Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48；443-453(1970)和Smith和Waterman(Adv.Appl.Math.2；482-489(1981)]，其是GCG软件包[Genetics ComputerGroup，575 Science Drive，Madison，Wisconsin，USA 53711(1991)]的部分。使用程序GAP使用下面的设置在整个序列区上确定上面给出的序列同源性数据(以％表示)：缺口权重：50，长度权重：3，平均匹配：10.000和平均错配：0.000。除非另外指出，这些设置总是还用作序列比对的标准设置。
本发明方法中所用的Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶的基本酶活性理解为意指与序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ IDNO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199或者SEQ ID NO：201和它们的衍生物所编码的蛋白质/酶比较，保留了至少10％，优选地为20％，尤其优选地为30％和非常尤其地为40％的酶活性并且因此可参与在生物中，有利地为在植物或在植物细胞中，或在分子跨膜运输中合成脂肪酸、脂肪酸酯如二酰甘油酯和/或三酰甘油所需的化合物的代谢，这意味着脂肪酸分子中C18、C20或C22碳链在至少两处，有利地在三、四、五或六处位置具有双键。
有利地用于方法的核酸可源自细菌、真菌、硅藻、动物如隐杆线虫或大马哈鱼属或者植物，如藻类或者藓类，如希瓦氏菌属、剑叶藓属、破囊壶菌属、镰孢属(Fusarium)、疫霉属、角齿藓属、Mantoniella、Ostreococcus、等鞭金藻属、Aleurita、Muscarioides、被孢霉属、琉璃苣属、褐指藻属、隐甲藻属，尤其来自虹鳟、非洲爪蟾、玻璃海鞘、假矮海链藻、Mantoniella sq uamata、Ostreococcus sp.、Ostreococcus tauri、细小裸藻、展叶剑叶藓、致病疫霉、Fusarium graminaeum、寇氏隐甲藻、角齿藓(Ceratodon purpureus)、球等鞭金藻(Isocrydid galbana)、Aleurita farinosa、破囊壶菌属的种、Muscarioides viallii、高山被孢霉、玻璃莴苣、三角褐指藻、秀丽线虫的属和种或尤其有利地来自虹鳟、细小裸藻、假矮海链藻或寇氏隐甲藻。
可在本发明方法中备选地使用编码Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶并且与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ IDNO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ IDNO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ IDNO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ IDNO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ IDNO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ IDNO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ IDNO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ IDNO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ IDNO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ IDNO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199或者SEQ ID NO：201中所示核酸序列在严格条件下有利杂交的核酸序列。
方法中所用的核酸序列有利地向表达盒导入，其中所述的表达盒使得可能在生物如微生物或植物中表达所述核酸。
在该上下文中，将编码Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶的核酸序列与有利地用于增强基因表达的一个或多个调节信号功能地连接。这类调节序列用于使基因和蛋白质靶向表达。根据宿主植物，这可以意味例如仅在诱导已经发生后才表达和/或过表达这种基因，或立即表达和/或过表达这种基因。例如这些调节序列采取了诱导物和阻抑物结合的序列形式，因此调节这种核酸的表达。除了这些新的调节序列以外或作为这些序列的替代，这些序列的天然调节仍可在实际的结构基因之前存在并且根据需要可以如此方式加以基因修饰从而关闭它们的天然调节而且增强这些基因的表达。然而这种表达盒(＝表达构建体＝基因构建体)也可以更为简单地构建，也就是说在核酸序列或其衍生物的前面未插入额外的调节信号而且并不除去天然启动子和其调节功能。作为替代，天然调节序列已经以如此方式突变从而调节不再发生和/或增强了基因的表达。这些经修饰的启动子也可以部分序列(＝用于本发明核酸序列的一部分的启动子)的形式或者单独位于天然基因前以增强活性。而且这种基因构建体也可包含与启动子功能连接的一个或多个称作的“增强子序列”，而这有可能增强核酸序列的表达。额外有利的序列如其它调节元件或终止子序列也可在DNA序列的3′端插入。Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或Δ9延伸酶基因可在表达盒(＝基因构建体)中存在单个或多个拷贝。有利地，仅仅这些基因的单个拷贝存在于表达盒中。这种基因构建体或这类基因构建体可在宿主生物中共同表达。在本上下文中，基因构建体可插入在一种或多种载体中并且在细胞中以游离的形式存在，或插入基因组中。当待表达的基因共同存在于一个基因构建体中时，其他基因在宿主基因组中的插入有利的。
在本上下文中，调节序列或调节因子如上所述可优选地积极影响所导入基因的基因表达，从而增强基因表达。因此调节元件的增强过程可通过使用强转录信号如启动子和/或增强子有利地在转录水平上发生。然而，此外例如通过提高mRNA的稳定性，增强翻译同样是可能的。
该新方法的有利的调节序列存在于例如启动子中，如植物启动子CaMV/35S[Franck等人，Cell 21(1980)285-294]，PRP1[Ward等人，PlantMol.Biol.22(1993)]、SSU、OCS、lib4、usp、STLS1、B33、nos或者存在于泛蛋白或菜豆蛋白启动子中。可诱导启动子在本上下文中同样是有利的，如在EP-A-0 388 186(苄磺酰胺可诱导)、Plant J.2，1992：397-404(Gatz等，四环素可诱导)、EP-A-0 335 528(脱落酸可诱导)或WO 93/21334(乙醇或环己醇可诱导)中的启动子。其它合适的植物启动子是马铃薯胞质FBP酶启动子或ST-LSI启动子(Stockhaus等，EMBO J.8，1989，2445)、大豆磷酸核糖焦磷酸酰氨基转移酶启动子(GenbankAccession No.U87999)或在EP-A-0 249 676中所描述的结节特异性启动子。尤其有利的启动子是有可能使得在参与脂肪酸生物合成的组织中表达的启动子。种子特异性的启动子如所描述的USP启动子非常尤其有利，并且其它启动子如LeB4、DC3、菜豆蛋白或油菜籽蛋白启动子同样如此。进一步更有利的启动子是种子特异性启动子，这种启动子能用于单子叶或双子叶植物并且在US 5,608,152(油菜的油菜籽蛋白启动子)、WO 98/45461(拟南芥的油质蛋白启动子)、US 5,504,200(菜豆的菜豆蛋白启动子)、WO 91/13980(芸苔的Bce4启动子)、Baeumlein等，Plant J.，2，2，1992：233-239(来自豆科植物的LeB4启动子)中描述，这些启动子适于双子叶植物。下面的启动子适于单子叶植物：大麦lpt-2或lpt-1启动子(WO95/15389和WO 95/23230)、大麦醇溶蛋白启动子和WO 99/16890中所描述的其它合适启动子。
原则上，对于新方法可使用所有天然启动子及其调节序列，如那些如上提及的天然启动子及其调节序列。也可有利地使用合成启动子，可组合或者单独地使用，尤其当这类合成启动子介导了种子特异性表达时，如那些WO 99/16890中所描述的启动子。
为了取得特别高的PUFA含量，尤其在转基因植物中，PUFA生物合成基因应当有利地在油料作物中以种子特异性的方式表达。为实现此目的，可使用种子特异性启动子或在胚和/或在胚乳中活跃的那些启动子。原则上，种子特异性启动子既可从双子叶植物也可从单子叶植物中分离。此类有利的启动子在上文进一步详述，例如，USP、豌豆球蛋白、油菜籽蛋白、油质蛋白、菜豆蛋白、Bce4、LegB4、Lpt2、lpt1、Amy32b、Amy 6-6、Aleurain或者Bce4启动子。
此外，化学可诱导的启动子也可以有利地用于本发明的方法。
有利地适于在大豆中表达的其他有利的启动子是β-conglycininα亚基、β-conglycinin β亚基、Kunitz胰蛋白酶抑制剂、膜联蛋白、glysinin、白蛋白2S、豆球蛋白A1、豆球蛋白A2和BD30的启动子。
特别有利的启动子是USP、LegB4、Fad3、SBP、DC-3或者cruciferin820启动子。
用于表达本发明方法中所用核酸序列的有利的调节序列是有利地在大豆中表达的终止子Leg2A3’、Kti3’、Phas3’、BD303’或者AIS3’。
特别有利的终止子是A7T、OCS、LeB3T或者cat终止子。
如上述，为确保这类生物合成基因经多个世代后仍然稳定地在转基因植物中整合，编码Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶并且用于方法中的每种核酸应当在它自身的启动子，优选地在不同启动子控制下，因为重复序列基序可导致T-DNA不稳定或导致重组事件。如上述，基因构建体还可以包含将导入植物中的其他基因。
在该上下文中，有利地用于本发明方法中核酸表达的调节序列或者因子可以如上述优选对导入的基因的基因表达有积极作用。
这些有利的载体，优选表达载体包含方法中所用的核酸，所述核酸编码Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或者Δ4去饱和酶，或者包含核酸构建体，其中所用的核酸单独或者与脂肪酸或者脂类代谢的其他生物合成基因组合使用，所述基因为例如酰基辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、ω3去饱和酶、Δ4去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶、Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ5延伸酶、Δ6延伸酶和/或Δ9延伸酶的基因。
本上下文中描述和使用的术语“载体”指这样的核酸分子，其能够运输与这种核酸分子所结合的其它核酸。
所用的重组表达载体可以设计用于在原核或者真核细胞中表达Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶。为方便起见，载体构建的中间步骤常在微生物中进行，因此这样设计是有利的。例如Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶基因可使用载体按照如WO98/01572中所描述的转化方法在细菌细胞、昆虫细胞(使用杆状病毒表达载体)、酵母和其它真菌细胞(见Romanos，M.A.等(1992)“Foreign geneexpression in yeast：a review”，Yeast 8：423-488：van den Hondel、C.A.M.J.J.等.(1991)“Heterologous gene expression in filamentous fungi”，in：More Gene Manipulations in Fungi，J.W.Bennet和L.L.Lasure编辑，第396-428页：Academic Press：San Diego：和van den Hondel、C.A.M.J.J.& Punt，P.J.(1991)”Gene transfer systems and vectordevelopment for filamentous fungi，in：Applied Molecular Genetics ofFungi，Peberdy，J.F.等编辑，第1-28页Cambridge University Press：Cambridge)、藻类(Falciatore等，1999，Marine Biotechnology.1，3：239-251)、多种类型的纤毛虫：Holotrichia，缘毛亚纲(Peritrichia)，旋毛亚纲(Spirotrichia)，吸管亚纲(Suctoria)，四膜虫(Tetrahymena)，草履虫(Paramecium)，豆形虫(colpidium)，瞬目虫(Glaucoma)，匙口虫(Platyophrya)，Potomacus，Desaturaseudocohnilembus，游仆虫(Euplotes)，Engelmaniella和stylonychia(Stylonychia)，尤其是Stylonychia lemnae并且优选地在多细胞植物的细胞中(见Schmidt，R.和Willmitzer，L.(1988)“High efficiency Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of Arabidopsis thaliana leaf and cotyledonexplants”Plant Cell Rep.：583-586；Plant Molecular Biology andBiotechnology，C Press，Boca Raton，Florida，Chapter 6/7，pp.71-119(1993)；F.F.White，B.Jenes等，Techniques for Gene Transfer，in：Transgenic Plants，第一卷，Engineering and Utilization，Ed.：Kung和R.Wu，Academic Press(1993)，128-43；Potrykus，Annu.Rev.PlantPhysiol.Plant Molec.Biol.42(1991)，205-225(和其中所引用的参考文献))表达。合适的宿主细胞在Goeddel，Gene Expression Technology：Methodsin Enzymology 185，Academic Press，San Diego，CA(1990)中详细讨论。作为备选，重组表达载体可例如使用T7-启动子调节序列和T7-聚合酶体外转录和翻译。
在大多数情况下，有利地为了简化酶活性的检测，例如，去饱和酶或者延伸酶活性的检测，原核生物中蛋白质的表达可以使用包含控制融合或非融合蛋白质表达的组成型或可诱导启动子的载体进行。典型的融合表达载体的实例为pGEX(Pharmacia Biotech Inc；Smith，D.B.和Johnson，K.S.(1988)Gene 67：31-40)、pMAL(New England Biolabs，Beverly，MA)和pRIT5(Pharmacia，Piscataway，NJ)，其中谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖E结合蛋白和蛋白A分别与重组靶蛋白融合。
合适的可诱导的非融合大肠杆菌表达载体的例子尤其为pTrc(Amann等(1988)Gene 69：301-315)和pET 11d(1990年加利福尼亚圣迭哥Academic Press出版社《Methods in Enzymology》185的Studier等《GeneExpression Technology》第60-89页)。靶基因自pTrc载体的表达是基于宿主RNA聚合酶自杂合trp-lac融合启动子的转录。靶基因自pET 11d载体的表达是基于经共表达的病毒RNA聚合酶(T7-gn1)所介导的T7-gn10-lac融合启动子的转录。这种病毒RNA聚合酶由宿主菌株BL21(DE3)或HMS174(DE3)的定居λ-原噬菌体提供，其中所述定居λ-原噬菌体携带了受lacUV 5启动子转录控制的T7gn1基因。
其它适用于原核生物的载体为技术人员所知，这类载体是例如大肠杆菌的pLG338、pACYC184、pBR系列如pBR322、pUC系列如pUC18或pUC19、M113mp系列、pKC30、pRep4、pHS1、pHS2、pPLc236、pMBL24、pLG200、pUR290、pIN-III113-B1、λgt11或pBdCI，链霉菌中的pIJ101、pIJ364、pIJ702或pIJ361，芽孢杆菌属中的pUB110、pC194或pBD214，棒杆菌属中的pSA77或pAJ667。
在另一个实施方案中，表达载体是酵母表达载体。用于酿酒酵母中表达的载体的例子包含pYeDesaturasec1(Baldari等.(1987)Embo J.6：229-234)、pMFa(Kurjan和Herskowitz(1982)Cell 30：933-943)、pJRY88(Schultz等(1987)Gene 54：113-123)和pYES2(InvitrogenCorporation，San Diego，CA)。用于构建适用于其它真菌如丝状真菌的载体和构建方法包含在1991年剑桥大学的剑桥大学出版社J.F.Peberdy等编辑的《Applied Molecular Genetics of fungi》第1-28页，van den Hondel、C.A.M.J.J；和Pun，P.J.的“Gene transfer systems and vector developmentfor filamentous fungi”中或在《More Gene Manipulations in Fungi》[圣迭哥Academic Press出版社J.W.Bennet和L.L.Lasure编辑，第396-428页]中所详细描述的那些载体和方法。其它合适的酵母载体为例如pAG-1、YEp6、YEp13和pEMBLYe23。
作为备选，Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶可用杆状病毒载体在昆虫细胞中表达。可用于在培养的昆虫细胞(例如Sf9细胞)中表达蛋白质的杆状病毒载体包含pAc系列(Smith等(1983)Mol.CellBiol.3：2156-2165)和pVL系列(Lucklow和Summers(1989)Virology170：31-39)。
以上提到的载体仅概略回顾了可能适合的载体。其它的质粒为技术人员所知并且在例如《Cloning vector》(1985年阿姆斯特旦-纽约-牛津Elsevier出版社，Pouwels，P.H.等编辑，ISBN 0 444 904018)中描述。对于其它合适用于原核及真核细胞的表达系统，见1989年纽约冷泉港ColdSpring Harbor Laboratory出版社，Sambrook，J.、Fritsch，E.F.和Maniatis，T.的《Molecular Cloning：A Laboratory Manual》第二版第16和第17章中的描述。
为了检测酶活性，Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶可在单细胞植物细胞(如藻类)中表达，参见Falciatore等，1999，MarineBiotechnology 1(3)：239-251及其中引用的参考文献，并且可在高等植物的植物细胞中表达(如种子植物，例如耕作作物)。植物表达载体的例子包括在1992年Becker，D.、Kemper，E.、Schell，J.和Masterson，R.“New plant binary vectors with selectable markers located proximal to theleft border”，Plant Mol.Biol.20：1195-1197；和1984年Bevan，M.W.“Binary Agrobacterium vectors for plant transformation”，Nucl.AcidsRes.12：8711-8721；在1993年Academic Press出版社Kung和R.Wu编辑的《Transgenic Plants：第1卷Engineering and Utilization》第15-38页的Vectors for Gene Transfer in Higher Plants中所详细描述的那些植物表达载体。
植物表达盒优选地包含能够在植物细胞中控制基因表达并且功能地连接从而使每一种序列能够实现它的功能的调节序列，例如转录终止信号，如多聚腺苷酸化信号。优选的多聚腺苷酸化信号是来自根癌农杆菌T-DNA如Ti质粒pTiACH5(1984年Gielen等，EMBO J.3期，835等)的基因3的那些多聚腺苷酸化信号，其中已知基因3是章鱼碱合酶，或者是那些多聚腺苷酸化信号的功能等同物，但是所有其它在植物中具有功能性活性的终止子同样合适。
由于植物基因表达通常不限于在转录水平，植物表达盒优选地包含其它功能地连接的序列如翻译增强子，例如超驱动序列，所述的超驱动序列包含烟草花叶病毒5’-非翻译前导序列，这种前导序列提高了蛋白质/RNA比(Gallie等，1987，Nucl.Acids Research 15：8693-8711)。
如以上所述，植物基因表达必须功能地与合适启动子连接，其中这种启动子引发基因以正确的时间过程或以细胞或组织特异性方式表达。可使用的启动子是组成型启动子(Benfey等，EMBO J.8(1989)2195-2202)，例如那些衍生自植物病毒如35S CaMV(Franck等，Cell 21(1980)285-294)、19S CaMV(也见US 5352605和WO 84/02913)的启动子或植物启动子如在US 4,962,028中所描述Rubisco小亚基的启动子。
用于在植物基因表达盒中功能连接的其它优选的序列是靶向序列，其中这种靶向序列为基因产物向该基因产物相关的细胞区室中(见Kermode，Crit.Rev.Plant Sci.15，4(1996)285-423的综述及其引用的参考文献)例如向液泡、细胞核、所有类型质体如造粉体、叶绿体、色质体、胞外空间、线粒体、内质网、油质体、过氧化物酶体和植物细胞的其它区室中导入所需。
如以上所述，植物基因表达还可以通过化学可诱导启动子(见Gatz1997，Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.，48：89-108的综述)来促进。当希望基因表达需以时间特异性发生时，化学可诱导启动子尤其适合。这类启动子的例子是水杨酸可诱导启动子(WO 95/19443)、四环素可诱导启动子(Gatz等(1992)Plant J.2，397-404)和乙醇可诱导启动子。
对生物性或非生物应激条件反应的启动子如病原诱导的PRP1基因启动子(Ward等，Plant.Mol.Biol.22(1993)361-366)、热诱导的番茄hsp80启动子(US 5,187,267)、冷冻诱导的马铃薯α淀粉酶启动子(WO96/12814)或外伤诱导的pinII启动子(EP-A-0 375 091)同样适合。
那些在进行脂肪酸、脂类和油生物合成的组织和器官中，在种子细胞如胚乳细胞和发育胚的细胞中引起基因表达的启动子尤其有利。这类合适的启动子是油菜的油菜籽蛋白启动子(US 5,608,152)、蚕豆的USP启动子(Baeumlein等，Mol Gengenet，1991，225(3)：459-67)、拟南芥的油质蛋白启动子(WO 98/45461)、菜豆的菜豆蛋白启动子(US 5,504,200)、芸苔属的Bce4启动子(WO 91/13980)或豆球蛋白B4启动子(LeB4；Baeumlein等，1992，Plant Journal，2(2)：233-9)及在单子叶植物如玉米、大麦、小麦、黑麦、稻等中引起种子特异性表达的启动子。重要的合适启动子是大麦的lpt2或lpt1基因启动子(WO 95/15389和WO 95/23230)或WO 99/16890中所描述来自大麦的大麦醇溶蛋白基因、稻的谷蛋白基因、稻的水稻素基因、稻的谷醇溶蛋白基因、小麦的麦醇溶蛋白基因、小麦的谷蛋白基因、玉米的玉米醇溶蛋白基因、燕麦的谷蛋白基因、高梁的kasirin基因或黑麦的裸麦醇溶蛋白基因的启动子。
Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶的多重平行表达可能尤为所需。这类表达盒可通过同时转化多种单独的表达构建体，或优选地通过在一个构建体上组合多种表达盒而产生。同样在每一情况下多种载体可以用多种表达盒转化然后向宿主细胞转移。
因为质体是合成脂类生物合成的前体和某些终产物的区室，同样尤其适合的是那些引起质体特异性表达的启动子。这类合适的启动子如病毒RNA聚合酶启动子在WO 95/16783和WO 97/06250中描述以及来自拟南芥的clpP启动子在WO 99/46394中描述。
载体DNA可通过常规的转化或转染技术向原核和真核细胞内导入。术语“转化”和“转染”、接合和转导如在本上下文中所用，旨在包含本领域众知的用于向宿主细胞内导入外源核酸(如DNA)的多种方法，包括磷酸钙或氯化钙共沉淀、DEAE葡聚糖介导的转染、脂质转染、天然感受态、化学介导的转移、电穿孔或粒子轰击。适用于转化或转染包括植物细胞在内的宿主细胞的方法可在Sambrook等(1989年纽约冷泉港Cold SpringHarbor Laboratory出版社《Molecular Cloning：A Laboratory Manual》第二版)和其它的实验室手册如1995年新泽西Totowa的Humana Press出版社《Methods in Molecular Biology》第44卷Gartland和Davey编辑的《Agrobacterium protocols》中找到。
有利使用的宿主生物是植物细胞，优选植物或其部分。非常优选使用包含大量脂类化合物的植物如油料种子植物或者油料作物，例如油菜、月见草、大麻、大蓟、花生、卡诺拉油菜、亚麻子、大豆、红花、印度芥菜、向日葵、琉璃苣，或植物如玉米、小麦、黑麦、燕麦、小黑麦、稻、大麦、棉、木薯、胡椒、万寿菊，茄科植物如马铃薯、烟草、茄和番茄、豌豆属的种、豌豆、紫花苜蓿，灌木植物(咖啡、可可、茶)，柳属的种、树(油棕榈、椰子)和多年生牧草及饲料作物。本发明尤其优选的植物是油料作物如大豆、花生、油菜、卡诺拉油菜、亚麻子、大麻、月见草、向日葵、红花、树(油棕榈、椰子)。
如上述，本发明的另一目的是编码具有Δ5延伸酶活性的多肽的经分离的核酸序列，其具有SEQ ID NO：197中所示序列，其中由这种核酸序列所编码的延伸酶不延伸具有一个双键的C16和C18脂肪酸。具有一个Δ6双键的多不饱和C18脂肪酸或者C22脂肪酸也不被转化。有利地，仅具有一个Δ5双键的多不饱和C20脂肪酸被该酶活性延伸。本发明的其他主题是如上述的Δ6延伸酶、Δ6去饱和酶和Δ12去饱和酶。
在一个有利的实施方案中，术语“核酸(分子)”如在本上下文中所用还包含位于编码基因区的3’端和5’端的非翻译序列：位于编码区5’端上游序列的至少500个，优选200个，尤其优选100个核苷酸的序列和位于编码基因区的3’端下游序列的至少100个，优选50个，特别优选20个核苷酸的序列。“经分离的”核酸分子与在这种核酸的天然来源中存在的其它核酸分子分离。“经分离的”核酸优选地不具备这种核酸所来源的生物的基因组DNA中天然分布于这种核酸两侧的序列(例如位于这种核酸序列的5’端和3’端的序列)。在多种实施方案中，经分离的Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶的核酸分子可包含例如小于约5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb或0.1kb的核苷酸序列，而这些核苷酸序列在来源于所述核酸分子所来源的细胞的基因组DNA中天然地分布在所述核酸分子的两侧。
该方法中所用的核酸分子，例如，具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ IDNO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ IDNO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ IDNO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ IDNO：183、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199或者SEQID NO：201的核苷酸序列或者其部分的核酸分子可以使用分子生物学标准技术和这里提供的序列信息分离。DNA或氨基酸水平的同源序列或同源的保守序列区域例如还可在比较性算法的协助下鉴定。这些序列区可用作杂交探针和用于标准杂交技术(例如在1989年纽约冷泉港Cold SpringHarbor Laboratory出版社《Molecular Cloning：A Laboratory Manual》第二版所描述的那些探针和标准杂交技术)以分离可用于方法的其它核酸序列。此外，包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ IDNO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199或者SEQ ID NO：201的完整序列或者其部分的核酸分子可通过聚合酶链反应分离，其中使用基于这种序列或其部分的寡核苷酸引物(例如包含完整序列或其部分的核酸分子通过以相同的序列为基础所产生的寡核苷酸引物进行的聚合酶链反应分离)。例如mRNA可从细胞中分离(如通过Chirgwin等(1979)Biochemistry18：5294-5299的硫氰酸胍提取方法)和通过逆转录酶获得cDNA(例如可以用从Gibco/BRL，Bethesda，MD获得的莫洛尼MLV逆转录酶或可以用从Seikagaku America，Inc.，St.Petersburg，FL获得的AMV逆转录酶)。用于聚合酶链反应扩增的合成寡核苷酸引物可基于SEQ ID NO：1、SEQID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199或者SEQ ID NO：201中所示的一种序列产生或在SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76、SEQID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：194、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：200或者SEQ ID NO：202中详述的氨基酸序列协助下产生。上述核酸之一可使用cDNA或备选地使用基因组DNA作为模板并且使用合适的寡核苷酸引物通过标准PCR扩增技术扩增。所扩增的核酸因此可向合适的载体克隆并且通过DNA序列分析表征。与去饱和酶核苷酸序列对应的寡核苷酸可通过标准合成方法如使用自动DNA合成仪产生。
具有序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199或者SEQ ID NO：201的Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶的核酸序列的同源物意指例如与SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQID NO：137、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQID NO：199或者SEQ ID NO：201中所示核苷酸序列之一或其同源物、衍生物或类似物或者部分具有至少约50或60％，优选地具有至少约60或70％，更为优选地具有至少约70或80％、90％或95％并且甚至更为优选地具有至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性或同源性的等位基因变体。此外，分离的核酸分子的核苷酸序列例如在严格条件下与SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQID NO：137、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQID NO：199或者SEQ ID NO：201中所示核苷酸序列之一或者其部分杂交。根据本发明，在上下文中，将部分理解为意指至少25个碱基对(＝bp)、50bp、75bp、100bp、125bp或150bp，优选至少175bp、200bp、225bp、250bp、275bp或300bp，尤其优选350bp、400bp、450bp、500bp或更多的碱基对为杂交所用。有利地，可以使用全长序列。等位基因变体尤其包含功能性变体，这种功能性变体可自/向SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ IDNO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ IDNO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ IDNO：183、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199或者SEQID NO：201中所示序列通过核苷酸的缺失、插入或替代而获得，然而即便由于插入了一个或多个核苷酸，预计所合成的最终蛋白质的酶活性仍然有利地得以保留。保留了Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶的酶活性的蛋白质，即酶活性基本上未减少的蛋白质意指与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ IDNO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ IDNO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ IDNO：137、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQ IDNO：199或者SEQ ID NO：201所编码的蛋白质比较，具有至少10％，优选地具有20％，尤其优选地具有30％，非常尤其优选地具有40％的原初酶活性。计算了涵盖整个氨基酸或核酸序列区域的同源性。技术人员可获得用于不同序列比较的多种算法的一系列程序。这里Needleman和Wunsch或Smith和Waterman的算法给出了尤其可靠的结果。这里PileUp程序(J.Mol.Evolution.，25，351-360，1987，Higgins等，CABIOS，5 1989：151-153)或作为GCG软件包[Genetics Computer Group，575 ScienceDrive，Madison，Wisconsin，USA 53711(1991)]的部分的Gap和BestFit程序[Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48；443-453(1970)和Smith及Waterman(Adv.Appl.Math.2；482-489(1981))用于序列比对。使用GAP程序并如下设置：缺口权重：50，长度权重：3，平均匹配：10.000和平均错配：0.000确定如以上以百分率所示的涵盖全长序列的序列同源性值。除非另有说明，这些设置总是作为标准设置用于序列比对。
上述核苷酸序列的同源物同样意指例如细菌、真菌和植物的同源物、经截短的序列、编码和非编码的DNA序列的单链DNA或单链RNA或者衍生物例如启动子变体。通过替换一个或多个核苷酸、通过(多次)插入和/或(多次)缺失可修饰位于所述的核苷酸序列上游的启动子同时并未不利地影响这种启动子的功能或活性。进一步有可能通过修饰启动子序列增强启动子的活性或者有可能以包括来自异源生物的启动子在内的更高活性的启动子完全取代这类启动子。
将具有Δ12去饱和酶、ω3去饱和酶、Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶和/或Δ4去饱和酶活性并且参与脂类和脂肪酸、PUFA辅因子和酶的代谢或参与亲脂化合物跨膜运输的以上提及的核酸和蛋白质分子在本发明的方法中使用，以便在转基因植物如玉米、小麦、黑麦、燕麦、小黑麦、稻、大麦、大豆、花生、棉花、亚麻属的种例如亚麻子或亚麻，芸苔属的种例如油菜、卡诺拉油菜、印度芥菜和芜箐、胡椒、向日葵、琉璃苣、月见草和万寿菊，茄科的植物例如马铃薯、烟草、茄和番茄，豌豆属的种，豌豆，木薯，紫花苜蓿，灌木植物(咖啡、可可、茶)，柳属的种，树(油棕榈、椰子)和宿生牧草和饲料作物中调节PUFA的产生，所述的调节为直接调节(例如当脂肪酸生物合成中的蛋白质过表达或优化表达对经修饰的生物中脂肪酸的产量、生产和/或生产效率有直接影响时)和/或具有间接影响，然而这种间接影响仍然引起了PUFA产量、生产和/或生产效率的增强或所不需的化合物的减少(例如当调节细胞中脂类和脂肪酸、辅因子和酶的代谢引起了所需化合物的产量、生产和/或生产效率或组成，而这又可影响一种或多种脂肪酸的产生时)。
芸苔科、紫草科、报春花科或亚麻科特别适于产生PUFA，优选花生四烯酸、二十碳五烯酸或二十二碳六烯酸。印度芥菜(Brassica juncea)、油菜和亚麻荠尤其适合以本发明所述的核酸序列组合其它去饱和酶和延伸酶用于产生PUFA。
多种前体分子和生物合成酶的组合导致产生不同的脂肪酸分子，其对脂类的组成有主要影响，因为多不饱和脂肪酸(＝PUFA)不仅掺入三酰甘油而且掺入膜脂中。
芸苔科、紫草科、报春花科或亚麻科特别适于产生PUFA，优选十八碳四烯酸、二十碳五烯酸或二十二碳六烯酸。亚麻子(Linumusitatissumum)、芥菜(Brassica juncea)、和亚麻荠尤其适合以本发明所述的核酸序列组合其它去饱和酶和延伸酶用于产生PUFA。
脂类合成可划分为两个阶段：脂肪酸的合成和它们与sn-甘油-3-磷酸的结合及极性首基的添加或修饰。通常用于膜中的脂类包含磷脂类、糖脂类、鞘脂类和磷酸甘油酯。脂肪酸的合成始于通过乙酰基辅酶A羧化酶将乙酰基辅酶A转化为丙二酸单酰辅酶A或通过乙酰基转酰基酶将乙酰基辅酶A转化为乙酰基ACP。这两种产物分子在缩合反应后共同形成了乙酰乙酰基ACP，这种分子经一系列缩合、还原和脱水反应转化，因而获得了具有所需链长度的饱和脂肪酸分子。从这些分子产生不饱和脂肪酸的过程由特异性去饱和酶通过分子氧有氧性地催化，或者无氧性地催化(关于在微生物中脂肪酸合成，见F.C.Neidhardt等(1996)E.coli and Salmonella.ASM Press：Washington，D.C.第612-636页和其中所引用的参考文献；Lengeler等(Ed.)(1999)Biology of Procaryotes.Thieme：Stuttgart，New York和其中的参考文献及Magnuson，K.，等(1993)MicrobiologicalReviews 57：522-542和其中的参考文献)。为经历进一步的延伸步骤，所得的与磷脂结合的脂肪酸必须从磷脂返回至脂肪酸辅酶A酯库。通过酰基辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶实施此步骤。而且这些酶能够将已延伸的脂肪酸从辅酶A酯再次转移至磷脂。根据需要可以重复这种反应顺序。
用于生物合成PUFA的前体的例子是油酸、亚油酸和亚麻酸。必须将C18碳的脂肪酸延伸至C20和C22以获得二十和二十二链型的脂肪酸。在方法中所用的去饱和酶如Δ12、ω3、Δ4、Δ5、Δ6和Δ8去饱和酶和/或Δ5、Δ6、Δ9延伸酶的协助下，可以产生花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸或二十二碳六烯酸，有利地产生二十碳五烯酸和/或二十二碳六烯酸并且可在涉及食品、饲料、化妆品或药品方面的多种领域中应用。以上提到的酶可用于产生脂肪酸分子中具有至少两个双键，有利地具有至少三、四、五或六个双键的C20和/或C22脂肪酸，优选地产生在脂肪酸分子中有利地具有四个、五个或六个双键的C20或C22脂肪酸。去饱和可在延伸所讨论的脂肪酸之前或之后发生。这是为什么去饱和酶活性的产物和其它可能的去饱和和延伸步骤的产物产生了具有更高去饱和程度的优选PUFA的原因，包括将C20至C22脂肪酸进一步延伸为如γ-亚麻酸、二高γ-亚麻酸、花生四烯酸、十八碳四烯酸、二十碳四烯酸或二十碳五烯酸的脂肪酸。本发明方法中所用的去饱和酶和延伸酶的底物是C16、C18或C20脂肪酸例如亚油酸、γ-亚麻酸、α-亚麻酸、二高γ-亚麻酸、二十碳四烯酸或十八碳四烯酸。优选的底物是亚油酸、γ-亚麻酸和/或α-亚麻酸、二高γ-亚麻酸或花生四烯酸、二十碳四烯酸或二十碳五烯酸。脂肪酸中具有至少二、三、四、五或六个双键，有利地至少四、五或六个双键的所合成的C20或C22脂肪酸在本发明的方法中以游离脂肪酸形式或以其酯形式，如以其甘油酯形式获得。
将术语“甘油酯”理解为意指用一、二或三个羧基所酯化的甘油(单酰甘油、二酰甘油或三酰甘油)。将“甘油酯”理解为意指多种甘油酯的混合物。甘油酯或甘油酯的混合物可以包含其它添加物，例如游离脂肪酸、抗氧化剂、蛋白质、糖类、维生素和/或其它物质。
为了本发明的目的，也将“甘油酯”理解为意指甘油衍生物。除以上所描述的脂肪酸甘油酯以外，这些甘油衍生物还包括甘油磷脂和甘油糖脂。可提到的优选的例子为甘油磷脂如卵磷脂(磷脂酰胆碱)、心磷脂、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸和烷基酰基甘油磷脂。
而且随后脂肪酸必须转运至不同的修饰位点并且掺入三酰甘油贮藏脂。脂类合成的又一个重要步骤是例如通过甘油脂肪酸酰基转移酶将脂肪酸转移至极性首基(见Frentzen，1998，Lipid，100(4-5)：161-166)。
关于植物脂肪酸生物合成、去饱和、脂类新陈代谢和脂类化合物的跨膜运输、β氧化、脂肪酸修饰和辅因子、三酰甘油贮藏和三酰甘油组装的出版物，包括其中的参考文献参见如下文章：1997年JK Setlow编辑的《Genetic Engeneering》19第149-166页Kinney；Ohlrogge和Browse，1995，Plant Cell 7：957-970；Shanklin和Cahoon，1998，Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.49：611-641；1996年JK Setlow编辑的《Genetic Engeneering》18第111-13页Voelker；Gerhardt，1992，Prog.Lipid R.31：397-417；Gühnemann-Sch_fer和Kindl，1995，Biochim.Biophys Acta 1256：181-186；Kunau等，1995，Prog.Lipid Res.34：267-342；Rockville美国植物生理学学会1993年Murata和Somerville编辑的《Biochemistry and Molecular Biology of Membrane and StorageLipids of Plants》第150-158页Stymne等；Murphy和Ross 1998，PlantJournal.13(1)：1-16。
方法中所产生的PUFA包含高等动物不再能合成并且因此必须摄入的一组分子或者高等动物不再能自行足量地合成并且因此必须摄入额外量的一组分子，虽然这类PUFA易于由其它生物例如细菌合成，但是猫不再能合成花生四烯酸。
对于本发明，磷脂将理解为指磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油和/或磷脂酰肌醇，有利地，磷脂酰胆碱。
术语“产生”或“生产量(productivity)”在本领域内为公知并且指在特定时间段内和在特定发酵体积内形成的发酵产物(式I化合物)的浓度(例如kg产物每小时每升)。这个术语还包含在植物细胞或植物中的生产量，也即基于该细胞或植物中所有脂肪酸含量，方法中所产生的目的脂肪酸的含量。术语“产生效率”包含为获得特定产量所需的时间(如细胞建立精细化学品的某种通量速率需要的时间)。术语“产量”或“产物/碳产量”为本领域公知并且包含将碳源转化为产物(例如，精细化学品)的效率。例如通常将产量表述为每kg碳源kg产物。通过增加化合物的产量或产生，增加了在某一量的培养基中经特定时间段所获得这种化合物的分子的量或所获得的该化合物的合适分子的量。
术语“生物合成”或“生物合成途径”为本领域所知并且包含例如在多步骤且受强烈调控的过程中通过细胞从中间体开始合成化合物，优选地合成有机化合物。术语“分解代谢”或“分解代谢途径”为本领域所知并且包含例如在多步骤且受强烈调控的过程中由细胞切割化合物，优选地切割有机化合物以产生分解代谢产物(以更为通俗的术语描述，较小的或复杂度较低的分子)。
术语“代谢”为本领域所知并且包含生物中发生的全部生物化学反应。某种化合物的代谢(例如脂肪酸的代谢)因此包含细胞中该化合物全部的生物合成途径、修饰途径和分解代谢途径。
本发明通过以下实施例更详细地说明，这不得解释为作为限制性的说明。本专利申请中所引用的参考文献、专利申请、专利和已公布的专利申请的全部内容此处引用作为参考。
实施例
实施例1：通用的克隆方法
克隆方法例如限制性切割、琼脂糖凝胶电泳、纯化DNA片段、核酸转移至硝酸纤维素膜和尼龙膜、连接DNA片段、转化大肠杆菌细胞、细菌培养和重组DNA的序列分析按照Sambrook等(1989)(Cold SpringHarbor Laboratory Press：ISBN 0-87969-309-6)所描述实施。
实施例2：重组DNA的序列分析
重组DNA分子以ABI激光荧光DNA测序仪按照Sanger(Sanger等(1977)Proc.Natl.Acad.Sci.USA74，5463-5467)的方法测序。通过聚合酶链反应获得的片段经过测序和验证以避免待表达的构建体中的聚合酶偏差。
实施例3：从虹鳟克隆基因
在对应于本申请所详述的延伸酶基因的蛋白质序列中对保守区域的搜索鉴定了在Genebank序列数据库中具有适宜基序的两个序列。
  基因名称   Genbank No.   氨基酸
  OmELO2   CA385234，CA364848，CA366480   264
  OmELO3   CA360014，CA350786   295
虹鳟的总RNA用来自Qiagen的RNAeasy试剂盒(Valencia，CA，美国)分离。聚腺苷酸化RNA(mRNA)以寡聚-dT-纤维素从总RNA中分离(Sambrook等，1989)。这种RNA使用来自Promega的逆转录系统试剂盒进行逆转录并且将所合成的cDNA克隆至载体λZAP(lambdaZAP Gold，Stratagene)。然后根据制造商的说明将所述cDNA去包装以产生质粒DNA。然后将这种cDNA质粒文库用于克隆表达质粒的PCR。
实施例4：用于酵母中异源表达的表达质粒的克隆
为了克隆在酵母中异源表达的两种序列，以下寡核苷酸用于PCR反应：
  引物   核苷酸序列
  5’f* OmELO23’r* OmELO25’f OmELO33’r OmELO3   5’aagcttacataatggcttcaacatggcaa(SEQ ID NO：179)5’ggatccttatgtcttcttgctcttcctgtt(SEQ ID NO：180)5’aagcttacataatggagacttttaat(SEQ ID NO：181)5’ggatccttcagtcccccctcactttcc(SEQ ID NO：182)
*f：正向引物，r：反向引物
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10×缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物与限制性酶HindIII和BamHI 37℃温育2小时。酵母表达载体pYES3(Invitrogen)以同样方式温育。此后经琼脂糖凝胶电泳分离812bp的PCR产物、905bp的PCR产物和载体并且切下相应的DNA片段。然后该DNA以Qiagen凝胶纯化试剂盒(Gel Purification Kit)按照制造商的说明纯化。此后连接载体和延伸酶的cDNA。为此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒(Rapid Ligation Kit)。得到的质粒pYES3-OmELO2和pYES3-OmELO3经测序证实并且通过电穿孔(1500V)转化入酵母株INVSc1(Invitrogen)。pYES3作为对照进行平行转化。此后将酵母在补加了2％葡萄糖的撤除色氨酸的完全基本培养基上铺板。能在无色氨酸的培养基内生长的细胞包含相应的质粒pYES3、pYES3-OmELO2(SEQ ID NO：51)和pYES3-OmELO3(SEQ ID NO：53)。在选择后，对每种情况挑选了两个转化体用于进一步的功能性表达。
实施例5：植物中种子特异性表达的表达载体的克隆
生成基于pSUN-USP的另一个转化载体以转化植物。使用以下引物对将NotI切割位点导入编码序列的5′和3′端以实现此目的：
PSUN-OmELO2
正向引物：5’-GCGGCCGCATAATGGCTTCAACATGGCAA(SEQID NO：175)
反向引物：3’-GCGGCCGCTTATGTCTTCTTGCTCTTCCTGTT(SEQ ID NO：176)
PSUN-OmELO3
正向引物：5’-GCGGCCGCataatggagacttttaat(SEQ ID NO：177)
反向引物：3’-GCGGCCGCtcagtcccccctcactttcc(SEQ ID NO：178)
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM的dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产物和7624bp的载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。为此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒pSUN-OmELO2和pSUN-OmELO3经测序证实。
pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P，Svab，Z，Maliga，P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binaryvectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼碱合酶基因的加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H，Dhaese，P.，Seurinck，J.，Lemmers，M，Van Montagu，M.和Schell，J.Nucleotidesequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Tiplasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684位的核苷酸(Genbank AccessionX56240)，其中USP基因非编码区的一部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列：5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATCCGGATCTGCTTGGCTATGAA-3’，SEQ ID NO：174)通过遵循标准方法的PCR反应扩增。将PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且插入带OCS终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建体用于转化拟南芥、油菜、烟草和亚麻子。
实施例6：从酵母和种子中提取脂类
遗传性修饰对植物、真菌、藻类、纤毛虫的影响或对产生目的产物(例如脂肪酸)的影响可通过将经修饰的微生物或经修饰的植物在合适条件下(例如那些以上所描述的条件下)生长并且分析用于产生升高的目的产物(即脂类或脂肪酸)的培养基和/或细胞成分而测定。这些分析的技术为技术人员所知并包含光谱学、薄层层析、多种染色方法、酶和微生物学方法以及分析性层析如高效液相层析(例如参见：Ullman，Encyclopedia ofIndustrial Chemistry，Vol.A2，p.89-90和p.443-613，VCH：Weinheim(1985)；Fallon，A.等人，(1987)“Applications of HPLC in Biochemistry“，在：Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology，Vol.17一书中；Rehm等人(1993)Biotechnology，Vol.3，Chapter III：“Productrecovery and purification“，p.469-714，VCH：Weinheim；Belter，P.A.等人(1988)Bioseparations：downstream processing for Biotechnology，JohnWiley and Sons；Kennedy，J.F.和Cabral，J.M.S.(1992)Recovery processesfor biological Materials，John Wiley and Sons；Shaeiwitz，J.A.和Henry，J.D.(1988)Biochemical Separations，在：Ullmann’s Encyclopedia ofIndustrial Chemistry，Vol.B3；Chapter 11，p.1-27，VCH：Weinheim一书中；以及Dechow，F.J.(1989)Separation and purification techniques inbiotechnology，Noyes Publications)。
除以上提到的方法，植物脂类可如Cahoon等(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96(22)：12935-12940和Browse等(1986)Analytic Biochemistry152：141-145所描述从植物材料中提取。脂类或脂肪酸的定性和定量分析由Christie，William W.，Advances in Lipid Methodology，Ayr/Scotland：Oily Press(Oily Press Lipid Library；2)；Christie，William W.，GasChromatography and Lipids.A Practical Guide-Ayr，Scotland：OilyPress，1989，Repr.1992，IX，307pp.(Oily Press Lipid Library；1)；“Progress in Lipid Research，Oxford：Pergamon Press，1(1952)-16(1977)在题为Progress in the Chemistry of Fats and Other Lipids CODEN的文章中描述。
除了测量发酵的终产物以外，还可分析用于产生目的化合物的代谢途径中的其它成分例如中间体和副产物以测定该化合物的总生产效率。分析方法包括测量培养基中营养物(例如糖、碳水化合物、氮源、磷酸盐和其它离子)的量，测量生物量的组成和生长，分析生物合成途径中的常规代谢物的产生和测量发酵期间所产生的气体。用于这些测量的标准方法在IRL Press出版社P.M.Rhodes和P.F.Stanbury编辑的《Applied MicrobialPhysiology；A Practical Approach》(ISBN：0199635773)的第103-129页、第131-163页和第165-192页以及其中所引用的参考文献中描述。
一个分析的例子是脂肪酸的分析(缩略语：FAME，脂肪酸甲酯；GC-MS，气液色谱/质谱；TAG，三酰甘油；TLC，薄层层析)。
可如Christie及其中的参考文献(1997年Dundee的Oily Press出版社Christie的《Advances on Lipid Methodology》第四版中第119-169页；1998年Gaschromatographie-Massenspektrometrie-Verfahren[GasChromatography/mass spectrometric methods]，Lipide 33：343-353)数次描述的那样使用分析性标准方法：GC、GC-MS或TLC通过分析重组生物清楚无误地检测脂肪酸产物的存在。
欲分析的材料可通过超声处理、玻璃磨中研磨、液氮和研磨或者通过其它可利用的方法加以破碎。这种材料在破碎后必须离心。在蒸馏水中重悬沉淀，100℃加热10分钟，冰上冷却并且再次离心，然后在含0.5M硫酸和2％二甲氧基丙烷的甲醇溶液中90℃提取1小时，由此产生了已水解的油和脂类化合物，产生了已转甲基化的脂类。这些脂肪酸甲酯在石油醚中提取并且最后通过使用毛细管柱(Chrompack，WCOT Fused Silica，CP-Wax-52 CB，25μm，0.32mm)经20分钟的170℃至240℃之间的温度梯度并且在240℃维持5分钟进行GC分析。得到的脂肪酸甲酯的身份必须使用可从商业来源获得的标准品(即Sigma)确定。
首先通过往返于研杵和研钵之间机械地匀浆植物材料以使其更便于提取。
随后100℃加热10分钟并且在冰上冷却后再次离心。细胞沉淀以1M硫酸的甲醇溶液(methanolic sulfuric acid)和2％二甲氧基丙烷90℃水解一小时并且将脂类转甲基化。得到的脂肪酸甲酯(FAME)在石油醚中抽提。所提取的FAME通过使用毛细管柱(Chrompack，WCOT FusedSilica，CP-Wax-52 CB，25μm，0.32mm)的气液色谱经20分钟的170℃至240℃之间的温度梯度并且在240℃维持5分钟进行分析。脂肪酸甲酯的身份通过与相应FAME标准品(Sigma)的比较确认。双键的身份和位置通过使FAME混合物适当地化学衍生以产生例如4，4-二甲氧_唑啉衍生物(Christie，1998)经GC-MS进一步分析。
对如实施例4中所描述的质粒pYES3、pYES3-OmELO2和pYES3-OmELO3转化了的酵母进行如下分析：
来自主培养物的酵母细胞经离心(100×g、10分钟、20℃)收获并用pH8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯(FAME)由酵母细胞沉淀经酸甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉淀与2ml的1N硫酸的甲醇溶液(methanolic sulfuric acid)和2％(v/v)二甲氧基丙烷80℃温育1小时。FAME通过石油醚(PE)提取两次。为了除去未衍生的脂肪酸，在每种情况下，有机相以2ml pH8.0的100mMNaHCO3和2ml蒸馏水洗涤一次。此后PE相用Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并用100μl PE吸收。样品在带有火焰电离化检测器的Hewlett-Packard6850气相色谱内的DB-23毛细管柱(30m，0.25mm，0.25μm，Agilent)内分离。GLC分析的条件如下：将炉腔温度设置为以每分钟5℃的增量从50℃升至250℃并且最后250℃维持10分钟(保持)。
通过与相应脂肪酸标准品(Sigma)的保留时间比较鉴定信号。
例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585；Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方法。
实施例7：OmELO2和OmELO3的功能表征
OmELO2未表现延伸酶活性，而OmELO3表现了对不同底物的明显活性。OmElo3的底物特异性在表达后并且喂饲了多种脂肪酸(图2)后加以测定。所喂饲的底物可大量在所有转基因酵母中检测到。所有转基因酵母均显示合成了作为OmElo3反应产物的新脂肪酸。这意味基因OmElo3功能性表达。
图2显示OmElo3具有高度特异地导致带有一个ω双键的Δ5和Δ6脂肪酸延伸的底物特异性。而且ω6脂肪酸(C18和C20)也可以较低的特异性延伸。OmElo3的最佳底物是十八碳四烯酸(C18:4ω3)和二十碳五烯酸(C20:5ω3)(高达66％的延伸)。
实施例8：酵母中DHA合成的重建
通过共表达OmElo3与细小裸藻Δ4去饱和酶或通过共表达OmElo3与三角褐指藻Δ5去饱和酶和细小裸藻Δ4去饱和酶由EPA(20:5ω3)或十八碳四烯酸(18:4ω3)开始进行DHA(22:6ω3)生物合成的重建。为达此目的，还构建了表达载体pYes2-EgD4和pESCLeu-PtD5。上述已由pYes3-OtElo3(SEQ ID NO：55)转化的酵母株以pYes2-EgD4或同时以pYes2-EgD4和pESCLeu-PtD5进一步转化。在pYes3-pYes3-OmEIO/pYes2-EgD4株的情况下，经转化的酵母以补加了2％葡萄糖的无色氨酸和尿嘧啶的完全基本培养基琼脂平板选择；在pYes3-OmELO/pYes2-EgD4+pESCLeu-PtD5株的情况下，经转化的酵母以无色氨酸、尿嘧啶和亮氨酸的完全基本培养基琼脂平板选择。酶的表达通过加入2％(w/v)半乳糖诱导。培养物随后进一步15℃温育120小时。
图3显示了已经喂饲了20:5ω3的转基因酵母中的脂肪酸谱。在已由pYes3-OmElo3载体和空白载体pYes2转化的对照酵母(A)中，20:5ω3经过极高效地延伸以产生22:5ω3(65％延伸)。额外导入的EEgΔ4去饱和酶导致22:5ω3转化为22:6ω3DHA。转基因酵母中的脂肪酸组成在图5中显示。在共表达OmElo3和EgD4后，酵母中检测到了高达3％的DHA。
在又一个共表达实验中，将OmElo3、EgD4和三角褐指藻Δ5去饱和酶(PtD5)共表达。所述转基因酵母喂饲了十八碳四烯酸(18:4ω3)并且进行了分析(图4)。这些酵母的脂肪酸组成在图5中显示。所喂饲的脂肪酸18:4ω3通过OmElo3延伸以产生20:4ω3(60％延伸)。20:4ω3经过PtD5去饱和产生20:5ω3。PtD5的活性是15％。而且通过OmElo3将20:5ω3延伸以产生22:5ω3。此后新近合成的22:5ω3经去饱和得到22:6ω3(DHA)。高达0.7％的DHA在这些实验中获得。
这些实验表明本发明中所用的序列OmElo3、EgD4和PtD5适于真核细胞中DHA的产生。
实施例9：转基因植物的产生
a)转基因油菜植物的产生(Moloney等，1992，Plant Cell Reports，8：238-242的改良方法)
根癌农杆菌C58C1：pGV2260或大肠杆菌中的双元载体(Deblaere等，1984，Nucl.Acids.Res.13，4777-4788)可用于产生转基因油菜植物。为了转化油菜植物(Var.Drakkar，NPZ Nordeutsche Pflanzenzucht，Hohenlieth，Germany)，将阳性转化的农杆菌菌落在补加3％蔗糖(3MS培养基)的Murashige-Skoog培养基(Murashige和Skoog 1962 Physiol.Plant.15，473)中的过夜培养物1∶50稀释后使用。将新近发芽的无菌油菜植物的叶柄或下胚轴(在每一情况下约1cm2)与1∶50的农杆菌稀释物在培养皿中共同温育5-10分钟。然后这些叶柄或下胚轴在补加了0.8％ Bacto琼脂的3MS培养基上黑暗中25℃共温育3天。然后将这些培养物在16小时光照/8小时黑暗中生长3天。这种培养按照每周节律继续在补加了500mg/L Claforan(头孢噻肟钠)、50mg/L卡那霉素、20μM苄氨基嘌呤(BAP)、1.6g/L葡萄糖的MS培养基上生长。生长的芽转移至补加了2％蔗糖、250mg/L Claforan和0.8％ Bacto琼脂的MS培养基中。若三周后根未发育，向培养基中加入作为生长激素用于生根的2-吲哚丁酸。
已再生的苗在补加了卡那霉素和Claforan的2MS培养基上获得；生根之后，将这些苗转移至培养料并且在受控的环境箱或温室中生长两周后，允许开花，并且收获成熟的种子及通过脂类分析法分析延伸酶的表达如Δ5延伸酶或Δ6延伸酶活性。具有含量已升高的多不饱和C20和C22脂肪酸的株系可经如此方式鉴定。
b)转基因亚麻子植物的产生
转基因亚麻子植物可通过例如Bell等，1999，In Vitro Cell.Dev.Biol.Plant.35(6)：456-465的方法经粒子轰击产生。通常以例如Mlynarova等(1994)，Plant Cell Report 13：282-285的方法经农杆菌介导的转化作用转化亚麻子。
实施例10：从鲜黄破囊壶菌ATCC34304和破囊壶菌属某些种中克隆Δ5延伸酶基因
通过比较本发明中所发现的多种延伸酶的蛋白质序列，使得可以确定保守的核酸区域(组氨酸盒：His-Val-X-His-His、酪氨酸盒：Met-Tyr-X-Tyr-Tyr)。在这些序列的辅助下筛选了鲜黄破囊壶菌ATCC34304和破囊壶菌属某些种的EST数据库以发现其它的Δ5延伸酶。发现了如下所列的新序列：
  基因名称   核苷酸   氨基酸
  BioTaurELO1   828bp   275
  TL16y2   831   276
用来自Qiagen的RNAeasy试剂盒(Valencia，CA，美国)分离了鲜黄破囊壶菌ATCC34304和破囊壶菌属某些种的总RNA。以PolyATract分离系统(Promega)从总RNA中分离mRNA。这些RNA使用MarathoncDNA扩增试剂盒(Marathon cDNA Amplification Kit)(BD Biosciences)按照制造商的说明逆转录并且连接了人工接头。然后将这种cDNA文库用于PCR以通过5’和3’RACE(cDNA末端快速扩增)克隆表达质粒。
实施例11：用于酵母中异源表达的表达质粒的克隆
以下的寡核苷酸用于PCR反应以克隆酵母中异源表达的序列：
 引物  核苷酸序列
 5’f* BioTaurELO13’r* BioTaurELO15’f*TL16y23’r*TL16y2  5’gacataatgacgagcaacatgag(SEQ ID NO：170)5’cggcttaggccgacttggccttggg(SEQ ID NO：171)5’agacataatggacgtcgtcgagcagcaatg(SEQ ID NO：172)5’ttagatggtcttctgcttcttgggcgcc(SEQ ID NO：173)
*f：正向引物，r：反向引物
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10×缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物BioTaurELO1(见SEQ ID NO：65)和TL16y2(见SEQ IDNO：83)与酵母表达载体pYES2.1-TOPO(Invitrogen)根据制造商说明21℃温育30分钟。这里通过T突出端和拓扑异构酶(Invitrogen)的活性向载体中连接PCR产物。在温育后转化大肠杆菌DH5α细胞。合适的克隆通过PCR鉴定，质粒DNA通过Qiagen DN Aeasy试剂盒分离并且经测序证实。正确的序列随后经电穿孔(1500V)转化入酵母株INVSc1(Invitrogen)。以空白载体pYES2.1平行转化作为对照。此后将酵母在补加了2％葡萄糖的完全无尿嘧啶基本培养基上铺板。能在无尿嘧啶的培养基内生长的细胞包含相应的质粒pYES2.1、pYES2.1-BioTaurELO1和pYES2.1-TL16y2。在选择后，对每种情况挑选两个转化体用于进一步的功能性表达。
实施例12：植物中种子特异性表达的表达载体的克隆
产生了另一个基于pSUN-USP的转化载体以转化植物。为达此目的，利用以下引物对将NotI切割位点导入编码序列的5′和3′端：
PSUN-BioTaurELO1
正向引物：5’-GCGGCCGCATAATGACGAGCAACATGAGC(SEQID NO：166)
反向引物：3’-GCGGCCGCTTAGGCCGACTTGGCCTTGGG(SEQID NO：167)
PSUN-TL16y2
正向引物：
5’-GCGGCCGCACCATGGACGTCGTCGAGCAGCAATG(SEQ IDNO：168)
反向引物：
5’-GCGGCCGCTTAGATGGTCTTCTGCTTCTTGGGCGCC(SEQ IDNO：169)
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM的dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶
使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产物和7624bp的载体并且切下相应的DNA片段。此后通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照制造商说明将DNA纯化。此后将载体和PCR产物连接。为此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒pSUN-BioTaurELO1和pSUN-TL16y2经测序证实。
pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P，Svab，Z，Maliga，P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binaryvectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼碱合酶基因的加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H，Dhaese，P.，Seurinck，J.，Lemmers，M，Van Montagu，M.和Schell，J.Nucleotidesequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Tiplasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。DerUSP启动子对应于第1-684位的核苷酸(Genbank AccessionX56240)，其中USP基因非编码区的一部分存在于USP启动子中。以商业上可获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列：5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATCC GGATCTGCTGGCTATGAA-3’，SEQ ID NO：165)通过遵循标准方法的PCR反应扩增684个碱基对大小的启动子片段。这个PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且插入带OCS终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建体用于转化拟南芥、油菜、烟草和亚麻子。
如实施例6中所描述从酵母和种子中提取脂类。
实施例13：BioTaurELO1和TL16y2的功能表征
BioTaurELO1的底物特异性在表达和喂饲多种脂肪酸后加以测定(图6)。图6显示了以包含pYes2.1载体(对照)或包含具有Δ5延伸酶的载体pYes2.1-BioTaurELO1(BioTaur)的酵母株测定功能性和底物特异性的喂饲实验。在两个方法中，将200μM的γ-亚麻酸和二十碳五烯酸喂饲酵母温育培养基并且温育24小时。脂肪酸从酵母中提取之后经转甲基化并且以气相色谱分离。从所喂饲的两种脂肪酸获得的延伸产物如箭头所示。
所喂饲的底物可大量地在所有转基因酵母中检测到。全部转基因酵母均显示合成了作为BioTaurELO1反应产物的新脂肪酸。这意味基因BioTaurELO1已经功能性表达。
图6表明BioTaurELO1具有高度特异性地引起带有一个ω3双键的Δ5和Δ6脂肪酸延伸的底物特异性。而且ω6脂肪酸(C18和C20)也进一步地加以延伸。γ-亚麻酸(C18:3ω6)以65.28％的转化率转化，十八碳四烯酸(C18:4ω3)以65.66％的转化率转化并且二十碳五烯酸(C20:5ω3)以22.01％的转化率转化。多个饲喂实验的底物特异性在表6中显示(见本描述的末尾)。
当喂饲GLA和EPA时，GLA的转化率为65.28％。当喂饲GLA和EPA时，EPA的转化率为9.99％。如果仅喂饲EPA，EPA的转化率为22.01％。当喂饲花生四烯酸(＝ARA)时，花生四烯酸也被转化。花生四烯酸的转化率为14.47％。十八碳四烯酸(＝SDA)也被转化。在此情况下，十八碳四烯酸转化率为65.66％。
TL16y2的功能性和底物特异性在表达后和喂饲多种脂肪酸后进行测定。表7显示了喂饲实验。这个喂饲实验按照对BioTaurELO1描述的同样方式进行。喂饲的底物可在所有转基因酵母大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为TL16y2反应产物的新脂肪酸(图11)。这意味基因TL16y2已经功能性表达。
表7：TL16y2在酵母中的表达
  气相色谱分析的面积(以％表示)
  质粒   脂肪酸   C18:3(n-6)   C18:4(n-3)   C20:3(n-6)   C20:4(n-6)  C20:4(n-3)   C20:5(n-3)   C22:4(n-6)   C22:5(n-3)
  pYES   250uMEPA   13.79
  TL16y2   250uMEPA   25.81   2.25
  pYES   50uMEPA   5.07
  TL16y2   50uMEPA   2.48   1.73
  pYES   250uMGLA   8.31
  TL16y2   250uMGLA   3.59   10.71
  pYES   250uMARA   16.03
  TL16y2   250uMARA   15.2   3.87
  pYES   250uMSDA   26.79   0.35
  TL16y2   250uMSDA   7.74   29.17
TL16y2的结果如表7所示，显示出以对照的百分率表示的以下转化率：a)EPA的％转化率(250μM)：8％，b)EPA的％转化率(50μM)：41％，c)ARA的％转化率：20.3％，d)SDA的％转化率：79.4％，以及e)GLA的％转化率：74.9％。
因此，TL16y2显示Δ5-、Δ6-和Δ8延伸酶活性。其中对具有Δ6-双键的C18-脂肪酸具有最高活性。根据所喂饲的脂肪酸浓度，延伸具有一个Δ5-或Δ8-双键的C20-脂肪酸。
实施例14：从Ostreococcus tauri中克隆基因
在本申请中所列具有Δ5延伸酶活性或Δ6延伸酶活性的延伸酶基因的辅助下通过搜索蛋白质序列中的保守序列，在Ostreococcus tauri序列数据库(基因组序列)中鉴定了具有合适基序的序列。如下是这些序列：
  基因名称  SEQ ID   氨基酸
  OtELO1，(Δ5延伸酶)  SEQ ID NO：67   300
  OtELO2，(Δ6延伸酶)  SEQ ID NO：69   292
OtElo1与斑马鱼(Danio rerio)延伸酶(GenBank AAN77156；约26％同一性)有最高的相似性，同时OtElo与剑叶藓Elo(PSE)[约36％同一性]有最大的相似性(用tBLASTn算法进行比对(Altschul等，J.Mol.Biol.1990，215：403-410)。
克隆步骤如下：
将稳定期的40ml Ostreococcus tauri培养物离心并且在100μl双蒸水中重悬并且-20℃保存。基于PCR法扩增了各自的基因组DNA。相关引物对以这样的方式选择，即引物包含紧接起始密码子的用于高效翻译的酵母共有序列(Kozak，Cell 1986，44：283-292)。在每种情况下，使用1μl解冻的细胞、200μM dNTP、2.5U Taq聚合酶和每种引物100pmol于总计50μl体积中进行OtElo-DNA的扩增。PCR的条件如下：首先95℃变性5分钟，其后为94℃30秒、55℃1分钟和72℃2分钟的30个循环，并且终末延伸步骤为72℃10分钟。
实施例15：用于酵母中异源表达的表达质粒的克隆
为表征Ostreococcus tauri延伸酶的功能，将所讨论的DNA的可读框克隆至pYE2.1/V5-His-TOPO(Invitrogen)的半乳糖可诱导GAL1启动子的下游，产生了pOTE1和pOTE2。
酿酒酵母334株以载体pOTE1或pOTE2经电穿孔(1500V)转化。空白载体pYES2转化的酵母用作对照。在补加了2％葡萄糖的无尿嘧啶完全基本培养基(CMdum)琼脂平板上选择已转化的酵母。选择后，在每种情况下挑选三个转化体用于进一步的功能性表达。
在每种情况下，为表达Ot延伸酶，以所选择的转化体首先接种由补加了2％(w/v)棉子糖但缺乏尿嘧啶的CMdum培养基组成的5ml预培养基并且以每分钟200转30℃温育2天。
然后用预培养物接种补加了2％棉子糖和300μM多种脂肪酸的5mlCMdum(无尿嘧啶)液体培养基至OD6000.05。酶的表达通过加入2％(w/v)的半乳糖诱导。培养物进一步20℃温育96小时。
实施例16：用于植物中种子特异性表达的表达质粒的克隆
产生了基于pSUN-USP的另一个转化载体用于转化植物。为达此目的，使用PCR向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点。对应的引物序列从OtElo1和OtElo2的5′和3′区域衍生。
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM的dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶
使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产物和载体并且切下相应的DNA片段。此后该DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。为此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒pSUN-OtELO1和pSUN-OtELO2经测序证实。
pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P，Svab，Z，Maliga，P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binaryvectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼碱合酶基因的加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H，Dhaese，P.，Seurinck，J.，Lemmers，M，Van Montagu，M.和Schell，J.Nucleotidesequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Tiplasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684位的核苷酸(Genbank AccessionX56240)，其中USP基因非编码区的一部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列：5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATCC GGATCTGCTGGCTATGAA-3’，SEQ ID NO：164)通过遵循标准方法的PCR反应扩增。这个PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且插入带OCS终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建体用于转化拟南芥、油菜、烟草和亚麻子。
实施例17：OtELO1和OtELO2在酵母中的表达
用如实施例15中所述质粒pYES3、pYES3-OtELO1和pYES3-OtELO2转化的酵母按如下方式分析：
来自主培养物的酵母细胞经离心(100×g，5分钟，20℃)收获并以pH8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯(FAME)从酵母细胞沉淀经酸性甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉淀与2ml的1N硫酸的甲醇溶液和2％(v/v)二甲氧基丙烷80℃温育1小时。FAME以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下，为除去未衍生的脂肪酸，有机相以2ml的pH8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤一次。随后PE相以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并用100μl PE吸收。样品在装备有火焰电离化检测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m，0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设置为以每分钟5℃的增量从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟(保持)。
通过比较保留时间与相应的脂肪酸标准品(Sigma)而鉴定信号。例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585，Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方法。
实施例18：OtELO1和OtELO2的功能表征
OtElo1底物特异性在表达后和在喂饲不同脂肪酸后测定(表8)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为OtElo1反应产物的新脂肪酸。这意味基因OtElo1已经功能性表达。
表7表明OtElo1具有窄的底物特异性。OtElo1只能延伸C20脂肪酸二十碳五烯酸(图7)和花生四烯酸(图8)，但优选地延伸ω3去饱和的二十碳五烯酸。
表8：
脂肪酸底物   转化率(％)
16:0   -
16:1Δ9   -
18:0   -
18:1Δ9   -
18:1Δ11   -
18:2Δ9，12   -
18:3Δ6，9，12   -
18:3Δ5，9，12   -
20:3Δ8，11，14   -
20:4Δ5，8，11，14   10.8±0.6
20:5Δ5，8，11，14，17   46.8±3.6
22:4Δ7，10，13，16   -
22:6Δ4，7，10，13，16，19 -
表8显示了与多种脂肪酸比较，延伸酶OtElo1对于在Δ5位具有一个双键的C20-多不饱和脂肪酸的底物特异性。
经载体pOTE1转化的酵母在所述脂肪酸存在下在基本培养基中生长。通过对完整细胞的酸性甲醇分解作用合成脂肪酸甲酯。随后这些FAME通过GLC分析。每个值显示为平均值(n＝3)±标准差。
OtElo2(SEQ IN NO：81)的底物特异性在表达后和喂饲不同脂肪酸后测定(表9)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为OtElo2反应产物的新脂肪酸。这意味基因OtElo2已经功能性表达。
表9：
脂肪酸底物   转化率(％)
16:0   -
16:1Δ9   -
16:3Δ7，10，13   -
18:0   -
18:1Δ0   -
18:1Δ9   -
18:1Δ11   -
18:2Δ9，12   -
18:3Δ6，9，12   15.3+
18:3Δ5，9，12   -
18:4Δ6，9，12，15   21.1±
20:2Δ11，14   -
20:3Δ8，11，14   -
20:4Δ5，8，11，14   -
20:5Δ5，8，11，14，17   -
22:4Δ7，10，13，16   -
22:5Δ7，10，13，16，19   -
22:6Δ4，7，10，13，16，19 -
表9显示了延伸酶OtElo2对于多种脂肪酸的底物特异性。经载体pOTE2转化的酵母在所述脂肪酸存在下在基本培养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过GLC分析。每个值显示为平均值(n＝3)±标准差。
表9中所示的酶活性清楚表明OtElo2为Δ6延伸酶。
实施例19：从假矮海链藻中克隆基因
在如本申请中所详述的具有Δ5延伸酶活性或Δ6延伸酶活性的延伸酶基因的辅助下通过搜索蛋白质序列中的保守区域，可在假矮海链藻序列数据库(基因组序列)中鉴定到两个具有适宜基序的序列。这两个序列如下：
  基因名称   SEQ ID   氨基酸
  TpELO1(Δ5延伸酶)   43   358
  TpELO2(Δ5延伸酶)   59   358
  TpELO3(Δ6延伸酶)   45   272
2L假矮海链藻培养物在f/2培养基中(《Culture of MarineInvertebrate Animals》中(纽约Plenum Press出版Smith，W.L.和ChanleyM.H编辑)中第29-60页Guillard，R.R.L.1975.Culture of phytoplanktonfor feeding marine invertebrates)于80E/cm2光强度下生长14天。在细胞离心后，RNA用来自Qiagen的RNAeasy试剂盒(Valencia，CA，美国)按照制造商说明分离。mRNA遵循制造商的说明使用Marathon cDNA扩增试剂盒(BD Biosciences)逆转录并且连接了人工接头。然后此cDNA文库用于PCR以通过5’和3’RACE(cDNA末端快速扩增)方法克隆表达质粒。
实施例20：用于酵母中异源表达的表达质粒的克隆
有关引物对以这样方式选择即所述引物具有毗邻起始密码子的用于高效翻译的酵母共有序列(Kozak，Cell 1986，44：283-292)。在每种情况下使用1μl cDNA、200μM dNTP、2.5U Advantage聚合酶和每种引物100pmol于总计50μl体积中实施TpElo DNA的扩增。PCR的条件如下：首先95℃变性5分钟，其后为94℃30秒、55℃1分钟和72℃2分钟的30个循环，和72℃10分钟的终末延伸步骤。
用于PCR反应的以下寡核苷酸用于克隆在酵母中异源表达的序列：
 基因名称和SEQ ID NO：   引物序列
 TpELO1(Δ5延伸酶)，SEQ ID NO：59   F：5’-accatgtgctcaccaccgccgtc(SEQ ID NO：158)R：5’-ctacatggcaccagtaac(SEQ ID NO：159)
 TpELO2(Δ5延伸酶)，SEQ ID NO：85   F：5’-accatgtgctcatcaccgccgtc(SEQ ID NO：160)R：5’-ctacatggcaccagtaac(SEQ ID NO：161)
 TpELO3(Δ6延伸酶)，SEQ ID NO：45   F：5’-accatggacgcctacaacgctgc(SEQ ID NO：162)R：5’-ctaagcactcttcttcttt(SEQ ID NO：163)
*F＝正向引物，R＝反向引物
PCR产物与酵母表达载体pYES2.1-TOPO(Invitrogen)根据制造商说明21℃温育30分钟。这里通过T突出端和拓扑异构酶(Invitrogen)活性向载体连接PCR产物。温育后转化大肠杆菌DH5α细胞。合适的克隆通过PCR鉴定，质粒DNA通过Qiagen DNAeasy试剂盒分离并且经测序证实。然后将正确的序列经电穿孔(1500V)转化入酵母株INVSc1(Invitrogen)。平行转化空白载体pYES2.1作为对照。此后酵母在补加了2％葡萄糖的完全尿嘧啶撤出基本培养基上铺板。因此能够在无尿嘧啶的培养基中生长的细胞包含相应的质粒pYES2.1、pYES2.1-TpELO1、pYES2.1-TpELO2和pYES2.1-TpELO3。选择后，在每种情况下挑选了两个转化体用于进一步的功能性表达。
实施例21：克隆用于植物中种子特异性表达的表达质粒
产生了基于pSUN-USP的另一种转化载体用于转化植物。为达此目的，使用以下引物对向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点：
PSUN-TPELO1
正向引物：5’-GCGGCCGCACCATGTGCTCACCACCGCCGTC(SEQID NO：152)
反向引物：3’-GCGGCCGCCTACATGGCACCAGTAAC(SEQ ID NO：153)
PSUN-TPELO2
正向引物：5’-GCGGCCGCACCATGTGCTCATCACCGCCGTC(SEQID NO：154)
反向引物：3’-GCGGCCGCCTACATGGCACCAGTAAC(SEQ ID NO：155)
PSUN-TPELO3
正向引物：5’-GCGGCCGCaccatggacgcctacaacgctgc(SEQ ID NO：156)
反向引物：3’-GCGGCCGCCTAAGCACTCTTCTTCTTT(SEQ ID NO：157)
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM的dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶
使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产物和7624bp的载体并且切下相应的DNA片段。此后该DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。为此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒pSUN-TPELO1、pSUN-TPELO2和pSUN-TPELO3经测序证实。
pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P，Svab，Z，Maliga，P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binaryvectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼碱合酶基因的加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H，Dhaese，P.，Seurinck，J.，Lemmers，M，Van Montagu，M.和Schell，J.Nucleotidesequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Tiplasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684位的核苷酸(Genbank AccessionX56240)，其中USP基因非编码区的一部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列：5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATCC GGATCTGCTGGCTATGAA-3’)；SEQ ID NO：151)通过遵循标准方法的PCR反应扩增。这个PCR片段再用EcoRI/SaII切割并且插入带OCS终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建体用于转化拟南芥、油菜、烟草和亚麻子。
如实施例6中所描述从酵母和种子中提取脂类。
实施例22：TpELO1、TpELO2和TpELO3在酵母中的表达
用如实施例4中所描述的质粒pYES2、pYES2-TpELO1、pYES2-TpELO2和pYES2-TpELO3转化的酵母按如下方式分析：
来自主培养物的酵母细胞经离心(100×g、5分钟、20℃)收获并以pH8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯(FAME)从酵母细胞沉淀经酸性甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉淀与2ml的1N硫酸的甲醇溶液和2％(v/v)二甲氧基丙烷80℃温育1小时。FAME以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下，为除去未衍生的脂肪酸，有机相以2ml的pH8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤一次。随后PE相以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并用100μl PE吸收。样品在装备有火焰电离化检测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m，0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设置为以每分钟5℃的增量从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟(保持)。
信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)与保留时间加以鉴定。例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585，Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方法。
实施例23：TpELO1和TpELO3的功能表征
TpElo1的底物特异性在表达后和喂饲不同脂肪酸之后测定(图9)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为TpElo1反应产物的新脂肪酸。这意味基因TpElo1已经功能性表达。
从表10可以看出TpElo1具有窄的底物特异性。TpElo1只能延伸C20脂肪酸二十碳五烯酸和花生四烯酸，但优选地延伸ω3去饱和的二十碳五烯酸。
已由载体pYES2-TpElo1转化的酵母于所述脂肪酸存在下在基本培养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸性甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过GLC分析。
表10：TpElo1在酵母中的表达。列1和列3显示了列2(喂饲250μM20:4Δ5，8，11，14)和列4(喂饲250μM 20:5Δ5，8，11，14，17)的对照反应。
  表达   表达   表达   表达
脂肪酸   1   2   3   4
16:0   18.8   17.8   25.4   25.2
16:1Δ9   28.0   29.8   36.6   36.6
18:0   5.2   5.0   6.8   6.9
18:1Δ9   25.5   23.6   24.6   23.9
20:4Δ5，8，11，14   22.5   23.4   -   -
22:4Δ7，10，13，16   -   0.4   -   -
20:5Δ5，8，11，14，17   -   -   6.6   6.5
22:5Δ7，10，13，16，19  -   -   -   0.9
％转化   0   1.7   0   12.2
TpElo3的底物特异性在表达后和在喂饲不同脂肪酸之后测定(图10)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为TpElo3反应产物的新脂肪酸。这意味基因TpElo3已经功能性表达。
从表11可以看出TpElo3具有窄范围的底物特异性。TpElo3只能延伸C18脂肪酸γ-亚麻酸和十八碳四烯酸，但优选地延伸ω3去饱和的十八碳四烯酸。
已由载体pYES2-TpElo3转化的酵母于所述脂肪酸存在的基本培养基中生长。然后，脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸性甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过GLC分析。
表11：TpElo3在酵母中的表达。列1显示了未喂饲的酵母的脂肪酸谱。列2显示了对照反应。在列3至列6喂饲了γ-亚麻酸、十八碳四烯酸、花生四烯酸和二十碳五烯酸(每种脂肪酸各250μM)。
脂肪酸   1   2   3   4   5   6
16:0   17.9   20.6   17.8   16.7   18.8   18.8
16:1Δ9   41.7   18.7   27.0   33.2   24.0   31.3
18:0   7.0   7.7   6.4   6.6   5.2   6,0
18:1Δ9   33.3   16.8   24.2   31.8   25.5   26.4
18:2Δ9，12   -   36.1   -   -   -   -
18:3Δ6，9，12   -   -   6.1   -   -   -
18:4Δ6，9，12，15  -   -   -   1.7   -   -
20:2Δ11，14  -   0   -   -   -   -
20:3Δ8，11，14  -   -   18.5   -   -   -
20:4Δ8，11，14，17  -   -   -   10.0   -   -
20:4Δ5，8，11，14  -   -   -   -   22.5   -
22:4Δ7，10，13，16  -   -   -   -   0   -
20:5Δ5，8，11，14，17  -   -   -   -   -   17.4
22:5Δ7，10，13，16，19 -   -   -   -   -   0
％转化  0   0   75   85   0   0
实施例24：用于酵母中Pi-ω3Des异源表达的表达质粒的克隆
为了在酵母中异源表达，将Pi-ω3Des的克隆以合适的特异性Pi-ω3Des引物通过PCR克隆至酵母表达载体pYES3。仅仅扩增了这个编码Pi-ω3Des蛋白质的基因的可读框；为该可读框两个切割位点以克隆到pYES3表达载体中：
正向引物：5’-TAAGCTTACATGGCGACGAAGGAGG(SEQ  IDNO：149)
反向引物：5’-TGGATCCACTTACGTGGACTTGGT(SEQ ID NO：150)
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10×缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl 5’ATG引物和3’Stopp引物)
0.50μl Advantage聚合酶
使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物与限制性酶HindIII和BamHI 37℃温育2小时。酵母表达载体pYES3(Invitrogen)以同样方式温育。此后经琼脂糖凝胶电泳分离了1104bp的PCR产物和载体并且切下了相应的DNA片段。然后DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照制造商说明纯化。此后连接载体和去饱和酶的cDNA。为此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒pYES3-Pi-ω3Des经测序证实并且通过电穿孔(1500V)转化入酵母株INVSc1(Invitrogen)。平行转化pYES3作为对照。此后酵母在补加了2％葡萄糖的色氨酸撤除的完全基本培养基上铺板。能够在无色氨酸的培养基内生长的细胞包含相应的质粒pYES3、pYES3-Pi-ω3Des。选择后，在每种情况下挑选了两个转化体用于进一步的功能表达。
实施例25：用于植物中种子特异性表达的表达质粒的克隆
产生了基于pSUN-USP的另一种转化载体用于转化植物。为达此目的，使用以下引物对向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点：
PSUN-Pi-ω3Des
反向引物：3’-GCGGCCGCTTACGTGGACTTGGTC(SEQ ID NO：147)
正向引物：5’-GCGGCCGCatGGCGACGAAGGAGG(SEQ ID NO：148)
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM的dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶
使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育4小时。植物表达载体pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产物和7624bp的载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。为此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒pSUN-Piω3Des经测序证实。
实施例26：Pi-ω3Des在酵母中表达
将如实施例24中所描述的质粒pYES3或pYES3-Pi-ω3Des转化的酵母按如下方式分析：
来自主培养物的酵母细胞经离心(100×g，5分钟，20℃)收获并以pH8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯(FAME)从酵母细胞沉淀经酸性甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉淀与2ml的1N硫酸的甲醇溶液和2％(v/v)二甲氧基丙烷80℃温育1小时。FAME以石油醚(PE)提取两次。在每种情况下为除去未衍生的脂肪酸，有机相以2ml的pH8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤一次。随后PE相以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并用100μl PE吸收。样品在装备有火焰电离化检测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m，0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设置为以每分钟5℃的增量从50℃升至250℃并且最后在250℃维持10分钟(保持)。
信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)与保留时间加以鉴定。例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585，Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方法。
实施例27：Pi-ω3Des的功能表征
在表达和喂饲不同脂肪酸后测定Pi-ω3Des的底物特异性(图12至18)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中大量地存在，证明酵母摄取了这些脂肪酸。转基因酵母显示合成了作为Pi-ω3Des反应产物的新脂肪酸。这意味基因Pi-ω3Des已经功能性表达。
图12表示Pi-ω3Des将亚油酸(18:2ωω-6脂肪酸)去饱和为α亚麻酸(18:3ωω-3脂肪酸)。脂肪酸甲酯通过对已由空白载体pYES2(图12A)或载体pYES3-Pi-ω3Des(图12B)转化的完整细胞经酸性甲醇分解作用合成。酵母于存在C18:2Δ9，12脂肪酸(300μM)的基本培养基中生长。随后这些FAME通过GLC分析。
图13表明Pi-ωω3Des使γ-亚麻酸(18:3ω-6脂肪酸)去饱和为十八碳四烯酸(18:4ω-3脂肪酸)。脂肪酸甲酯通过对已由空白载体pYES2(图13A)或载体pYes3-Pi-ω3De(图13B)转化的完整细胞经酸性甲醇分解作用合成。酵母于存在γ-C18:3Δ6，9，12-脂肪酸(300μM)的基本培养基中生长。随后这些FAME通过GLC分析。
图14表明Pi-ωω3Des使C20:2-ω-6脂肪酸去饱和为C20:3-ω-3脂肪酸。脂肪酸甲酯通过对已由空白载体pYES2(图14A)或载体pYes3-Pi-ω3Des(图14B)转化的完整细胞经酸性甲醇分解作用合成。酵母于存在C20:2Δ11，14-脂肪酸(300μM)的基本培养基中生长。随后这些FAME通过GLC分析。
图15表明Pi-ω3Des使C20:3-ω-6脂肪酸去饱和为C20:4-ω-3脂肪酸。脂肪酸甲酯通过对已由空白载体pYES2(图15A)或载体pYes3-Pi-ω3Des(图15B)转化的完整细胞经酸性甲醇分解作用合成。酵母于存在C20:3Δ8，11，14-脂肪酸(300μM)的基本培养基中生长。随后这些FAME通过GLC分析。
图16表明Pi-ω3Des将花生四烯酸(C20:4-ω-6脂肪酸)去饱和为二十碳五烯酸(C20:5-ω-3脂肪酸)。
脂肪酸甲酯通过对已由空白载体pYES2(图16A)或载体pYes3-Pi-ω3Des(图16B)转化的完整细胞经酸性甲醇分解作用合成。这些酵母于存在C20:4Δ5，8，11，14脂肪酸(300μM)的基本培养基中生长。随后这些FAME通过GLC分析。
图17表明Pi-ω3Des使二十二碳四烯酸(C22:4-ω-6脂肪酸)去饱和为二十二碳五烯酸(C22:5-ω-3脂肪酸)。脂肪酸甲酯通过对已由空白载体pYES2(图17A)或载体pYes3-Pi-ω3Des(图17B)转化的完整细胞经酸性甲醇分解作用合成。将酵母在C22:4Δ7，10，13，16脂肪酸(300μM)存在时于基本培养基中生长。随后这些FAME通过GLC分析。
Pi-ω3Des对不同脂肪酸的底物特异性可从图18中看出。已由载体pYes3-Pi-ω3Des转化的酵母于存在所述脂肪酸的基本培养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸性甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过GLC分析。每个值代表为三次测量的平均值。使用下式：[产物]/([产物]+[底物])×100计算转化率(％去饱和)。
如实施例9中所描述，Pi-ω3Des还可用于产生转基因植物。然后可从这些植物的种子中如实施例6中所描述提取脂类。
实施例28：从Ostreococcus tauri克隆去饱和酶基因
在保守基序(His盒，Domergue等人，2002，Eur.J.Biochem.269，4105-4113)的辅助下搜索蛋白质序列中的保守区域可在Ostreococcus tauri序列数据库(基因组序列)中鉴定五个具有相应基序的序列。这些序列如下显示：
  基因名称   SEQ ID   氨基酸   同源性
  OtD4   SEQ ID NO：95   536   Δ4去饱和酶
  OtD5.1   SEQ ID NO：91   201   Δ5去饱和酶
  OtD5.2   SEQ ID NO：93   237   Δ5去饱和酶
  OtD6.1   SEQ ID NO：89   456   Δ6去饱和酶
  OtFad2   SEQ ID NO：107   361   Δ12去饱和酶
使用tBLASTn算法(Altschul等，J.Mol.Biol.1990，215：403-410)实施了发现单个基因间同源性的比对。
如下进行克隆步骤：
将稳定期的40ml Ostreococcus tauri培养物经离心并且在100μl双蒸水中重悬并-20℃保存。各自的基因组DNA基于PCR法扩增。相应的引物对以如此方式选择，即引物包含紧接起始密码子的用于高效翻译的酵母共有序列(Kozak，Cell 1986，44：283-292)。在每一情况下使用1μl解冻的细胞、200μM dNTP、2.5U Taq聚合酶和每种引物100pmol于总计50μl体积中实施了OtDes-DNA的扩增。PCR的条件如下：首先95℃变性5分钟，其后为94℃30秒、55℃1分钟和72℃2分钟的30个循环，和72℃10分钟的终末延伸步骤。
以下的引物用于PCR：
OtDes6.1正向引物：
5’ggtaccacataatgtgcgtggagacggaaaataacg3’(SEQ ID NO：145)
OtDes6.1反向引物：
5’ctcgagttacgccgtctttccggagtgttggcc3’(SEQ ID NO：146)
实施例29：酵母中异源表达的表达质粒的克隆
为表征来自Ostreococcus tauri的去饱和酶OtDes6.1(＝Δ6去饱和酶)的功能，将位于pYES2.1/V5-His-TOPO(Invitrogen)的半乳糖可诱导的GAL1启动子下游的DNA可读框克隆，产生了相应的pYES2.1-OtDes6.1克隆，以类似方式可克隆Ostreococcus的其它去饱和酶基因。
酿酒酵母334株以载体pYES2.1-OtDes6.1经电穿孔(1500V)转化。由空白载体pYES2转化的酵母用作对照。已转化的酵母在补加了2％葡萄糖的无尿嘧啶的完全基本培养基(CMdum)琼脂平板上选择。选择后，在每一情况下挑选三个转化体用于进一步的功能性表达。
在每一情况下，为表达OtDes6.1去饱和酶，由5ml补加了2％(w/v)棉子糖的尿嘧啶撤除的CMdum培养基组成的预培养基首先以所选择的转化体接种并且以200转/分钟在30℃温育2天。然后对5ml补加了2％棉子糖和300μM多种脂肪酸的CMdum(无尿嘧啶)液体培养基接种预培养物至OD600 0.05。酶的表达通过加入2％(w/v)半乳糖诱导。培养物进一步20℃温育96小时。
实施例30：克隆用于植物中种子特异性表达的表达质粒
产生了基于pSUN-USP的另一个转化载体用于转化植物。为达此目的，使用PCR向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点。对应的引物序列从去饱和酶的5′和3′区域衍生。
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM的dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶
使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物和载体并且切下相应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。为此目的，使用了来自Roche的快速连接试剂盒。得到的质粒经测序证实。
pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P，Svab，Z，Maliga，P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binaryvectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼碱合酶基因的加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H，Dhaese，P.，Seurinck，J.，Lemmers，M，Van Montagu，M.和Schell，J.Nucleotidesequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Tiplasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684位的核苷酸(Genbank AccessionX56240)，其中USP基因非编码区的一部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列：5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATCC GGATCTGCTGGCTATGAA-3’，SEQ ID NO：144)通过遵循标准方法的PCR反应扩增。这个PCR片段再用EcoRI/SaII切割并且插入带OCS终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建体用于转化拟南芥、油菜、烟草和亚麻子。
实施例31：OtDes6.1在酵母中的表达
经质粒pYES2和pYES2-OtDes6.2如实施例4中所描述转化的酵母按如下方式分析：
来自主培养物的酵母细胞经离心(100×g，5分钟，20℃)收获并以pH8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯(FAME)从酵母细胞沉淀经酸性甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉淀与2ml的1N硫酸的甲醇溶液和2％(v/v)二甲氧基丙烷80℃温育1小时。FAME以石油醚(PE)提取两次。在每种情况下，为除去未衍生的脂肪酸，有机相以2ml的pH8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤一次。随后PE相以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并用100μl PE吸收。样品在装备有火焰电离化检测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m，0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设置为以每分钟5℃的增量从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟(保持)。
信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)与保留时间加以鉴定。例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585，Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方法。
实施例32：Ostreococcus去饱和酶的功能表征
去饱和酶的底物特异性可在酵母中表达酶后通过喂饲不同酵母(见克隆去饱和酶基因、酵母表达的实施例)测定。对单种活性测定的描述可在WO 93/11245中对Δ15去饱和酶的描述；WO 94/11516中对Δ12去饱和酶的描述；WO 93/06712、US 5,614,393、US 5,614,393、WO 96/21022、WO 0021557和WO 99/27111中对Δ6去饱和酶的描述；Qiu等，2001，J.Biol.Chem.276，31561-31566对Δ4去饱和酶的描述；Hong等，2002，Lipids37，863-868对Δ5去饱和酶的描述中找到。
表12显示了OtDes6.1去饱和酶对不同脂肪酸的底物特异性。OtDes6.1的底物特异性在表达后和喂饲多种脂肪酸后测定。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为OtDes6.1反应产物的新脂肪酸(图20)。这意味着功能性表达了基因OtDes6.1。
用载体pYes2-OtDes6.1转化的酵母于所述脂肪酸存在的基本培养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸性甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过GLC分析。每个值表示为平均值(n＝3)±标准差。活性是使用公式底物/(底物+产物)*100]计算的转化率。
从表12可以看出OtDes6.1去饱和酶对油酸和亚油酸(18:2和18:3)具有底物特异性，原因在于这些脂肪酸引起了最高的活性。相反，对油酸(18:1)和棕榈油酸(16:1)的活性明显较低。优选转化亚油酸和亚麻酸表明这种去饱和酶适合于产生多不饱和脂肪酸。
表12
 底物   活性(％)
 16:1Δ9   5.6
 18:1Δ9   13.1
 18:2Δ9，12   68.7
 18:3Δ9，12，15   64.6
图20表明OtDes6.1转化了亚油酸。FAME通过气相色谱分析。所喂饲的底物(C18:2)转化为γ-C18:3。箭头指示起始材料和形成的产物。
图21表明当存在OtDes6.1时分别使亚油酸(＝LA)和α-亚麻酸(＝ALA)转化以产生γ-亚麻酸(＝GLA)和十八碳四烯酸(＝STA)(图21A和C)。图21还显示当Δ6去饱和酶OtDes6.1与来自展叶剑叶藓的Δ6延伸酶PSE1(Zank等2002，Plant J.31：255-268)和来自三角褐指藻的Δ5去饱和酶PtD5(Domergue等2002，Eur.J.Biochem.269，4105-4113)共同存在时分别使亚油酸(＝LA)和α-亚麻酸(＝ALA)转化以产生二高γ-亚麻酸(＝DHGLA)和花生四烯酸(＝ARA，图21B)以及产生二高十八碳四烯酸(＝DHSTA)和二十碳五烯酸(＝EPA，图21D)。图21清晰地表明当存在Δ6延伸酶PSE1时几乎定量地使Δ6去饱和酶OtDes6.1的反应产物GLA和STA分别延伸以产生DHGLA和DHSTA。接下来由Δ5去饱和酶PtD5进行去饱和以分别产生ARA和EPA同样是顺利的。大约25％-30％的延伸酶产物被去饱和(图21B和D)。
表13为已克隆的Ostreococcus去饱和酶的概览。
                       Ostreococcus tauri去饱和酶
名称 bp aa  同源性 Cyt.B5 His盒1 His盒2 His盒3
OtD4 1611 536  Δ4去饱和酶 HPGG HCANH WRYHHQVSHH QVEHHLFP
 Δ5
  OtD5.1   606   201   去饱和酶 - -  -   QVVHHLFP
OtD5.2 714 237   Δ5去饱和酶 - - WRYHHMVSHH QIEHHLPF
OtD6.1 1443 480   Δ6去饱和酶 HPGG HEGGH WNSMHNKHH QVIHHLFP
  OtFAD2   1086   361   Δ12去饱和酶 - HECGH WQRSHAVHH HVAHH
实施例33：从假矮海链藻中克隆去饱和酶基因
在保守基序(His盒，参见基序)的辅助下搜索蛋白质序列中的保守区域可在假矮海链藻序列数据库(基因组序列)中鉴定六个具有相应基序的序列。序列如下：
  基因名称   SEQ ID   氨基酸   同源性
  TpD4   SEQ ID NO：103   503   Δ-4去饱和酶
  TpD5-1   SEQ ID NO：99   476   Δ-5去饱和酶
  TpD5-2   SEQ ID NO：101   482   Δ-5去饱和酶
  TpD6   SEQ ID NO：97   484   Δ-6去饱和酶
  TpFAD2   SEQ ID NO：109   434  Δ-12去饱和酶
  TpO3   SEQ ID NO：105   418  ω-3去饱和酶
克隆步骤如下：
稳定期的40ml假矮海链藻培养物经过离心并且在100μl双蒸水中重悬并且-20℃保存。各自基因组DNA基于PCR法扩增。以如此方式选择相关的引物对使得引物包含紧接起始密码子的用于高效翻译的酵母共有序列(Kozak，Cell 1986，44：283-292)。在每一情况下使用1μl解冻的细胞、200μM dNTP、2.5U Taq聚合酶和每种引物100pmol于总计50μl体积中实施了TpDes DNA的扩增。PCR的条件如下：首先95℃变性5分钟，其后为94℃30秒、55℃1分钟和在72℃2分钟的30个循环，和72℃10分钟的终末延伸步骤。
实施例34：用于酵母中异源表达的表达质粒的克隆
为表征假矮海链藻去饱和酶的功能，将各自DNA的可读框克隆于pYES2.1/V5-His-TOPO(Invitrogen)的半乳糖可诱导的GAL1启动子的下游，产生了相应的pYES2.1克隆。
酿酒酵母334株以载体pYES2.1-TpDesatauresen经电穿孔(1500V)转化。经空白载体pYES2转化的酵母作为对照使用。已转化的酵母在补加了2％葡萄糖的缺乏尿嘧啶的完全基本培养基(CMdum)琼脂平板上选择。选择后，每种情况挑选三个转化体用于进一步的功能性表达。
在每一情况下，为了表达Tp去饱和酶，5ml由补加了2％(w/v)棉子糖但缺乏尿嘧啶的CMdum培养基组成的预培养基首先以所选择的转化体接种并且以每分钟200转在30℃温育2天。然后将5ml补加了2％棉子糖和300μM多种脂肪酸的CMdum(无尿嘧啶)液体培养基接种预培养物至OD6000.05。酶的表达通过加入2％(w/v)半乳糖诱导。培养物在20℃下进一步温育96小时。
实施例35：植物中种子特异性表达的表达质粒的克隆
产生了基于pSUN-USP的另一种转化载体用于转化植物。为达此目的，使用PCR向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点。对应的引物序列从去饱和酶的5′和3′区域衍生。
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM的dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶
使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物和载体并且切下相应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。使用了来自Roche的快速连接试剂盒以便连接。得到的质粒经测序证实。
pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P，Svab，Z，Maliga，P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binaryvectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼碱合酶基因的加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H，Dhaese，P.，Seurinck，J.，Lemmers，M，Van Montagu，M.和Schell，J.Nucleotidesequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Tiplasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684位的核苷酸(Genbank AccessionX56240)，其中USP基因非编码区的一部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的启动子片段以商业上可获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物(引物序列：5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATCC GGATCTGCTGGCTATGAA-3’；SEQ ID NO：143)通过遵循标准方法的PCR反应扩增。这个PCR片段再用EcoRI/SaII切割并且插入带OCS终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建体用于转化拟南芥、油菜、烟草和亚麻子。
实施例36：Tp去饱和酶在酵母中的表达
如实施例4中所描述由质粒pYES2和pYES2-TpDesaturasen转化的酵母以如下方式分析：
来自主培养物的酵母细胞经离心(100×g，5分钟，20℃)收获并以pH8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯(FAME)从酵母细胞沉淀经酸性甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉淀与2ml的1N硫酸的甲醇溶液和2％(v/v)二甲氧基丙烷80℃温育1小时。FAME以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下为除去未衍生的脂肪酸，有机相以2ml的pH8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤一次。随后PE相以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并用100μl PE吸收。样品在装备有火焰电离化检测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m，0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设置为以每分钟5℃的增量从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟(保持)。
信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)与保留时间加以鉴定。例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585，Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方法。
实施例37：假矮海链藻去饱和酶的功能表征
去饱和酶的底物特异性可在酵母中表达后通过使用不同酵母的喂饲(见克隆去饱和酶基因、酵母表达的实施例)测定。对单种活性测定的描述可在WO 93/11245中对Δ15去饱和酶的描述；WO 94/11516中对Δ12去饱和酶的描述；WO 93/06712、US 5,614,393、US 5,614,393、WO 96/21022、WO 0021557和WO 99/27111中对Δ6去饱和酶的描述；Qiu等，2001，J.Biol.Chem.276，31561-31566对Δ4去饱和酶的描述；Hong等，2002，Lipids 37，863-868对Δ5去饱和酶的描述中找到。
单种去饱和酶的活性使用公式：[底物/(底物+产物)*100]从转化率计算。
以下表14和15为经克隆的假矮海链藻去饱和酶的概览。
表14：经克隆的假矮海链藻去饱和酶的长度和特征
去饱和酶   cDNA(bp) 蛋白质(aa) Cyt.B5 His盒1 His盒2 His盒3
  TpD4   1512   503   HPGG   HDGNH   WELQHMLGHH   QIEHHLFP
  TpD5-1   1431   476   HPGG   HDANH   WMAQHWTHH   QVEHHLFP
  TpD5-2   1443   482   HPGG   HDANH   WLAQHWTHH   QVEHHLFP
  TpD6   1449   484   HPGG   HDFLH   WKNKHNGHH   QVDHHLFP
  TpFAD2(d12)   1305   434   -   HECGH   HAKHH   HVAHHLFH
  TpO3   1257   419   -   HDAGH   WLFMVTYLQHH   HVVHHLF
表15：经克隆的去饱和酶的长度、外显子、同源性和同一性
Des. GDNA(bp) 外显子1 外显子2   第一Blast Hit   Hom./Iden.
  TpD4   2633   496-1314   1571-2260   破囊壶菌D4-des   56％/43％
  TpD5-1   2630   490-800   900-2019   褐指藻D5-des   74％/62％
  TpD5-2   2643   532-765   854-2068   褐指藻D5-des   72％/61％
  TpD6   2371   379-480   630-1982   褐指藻D6-des   83％/69％
  TpFAD2   2667   728-2032 -   褐指藻FAD2   76％/61％
  TpO3   2402   403-988   1073-1743   隐杆线虫Fad2   49％/28％
来自Ostreococcus和海链藻的Δ12去饱和酶基因也可按以上提及的实施例类似地克隆。
实施例38：从非洲爪蟾和玻璃海鞘中克隆延伸酶基因
在本申请中所详述的具有Δ5延伸酶活性或Δ6延伸酶活性的延伸酶基因的辅助下，通过在基因数据库(Genebank)中搜索蛋白质序列内的保守区域(见共有序列SEQ ID NO：115和SEQ ID NO：116)，可鉴定和分离其它生物来源的其它延伸酶。可使用合适的基序分别鉴定非洲爪蟾和玻璃海鞘来源的其它序列。这些序列如下显示：
  基因名称   生物   Genbank No.   SEQ IDNO：   氨基酸
  ELO(Xl)   非洲爪蟾   BC044967   117   303
  ELO(Ci)   玻璃海鞘   AK112719   119   290
非洲爪蟾cDNA克隆从NIH(国立健康研究所)[genetic and genomictools for Xenopus research：The NIH Xenopus initiative，Dev.Dyn.225(4)，384-391(2002)]获得。
玻璃海鞘cDNA克隆从Kyoto大学[Satou，Y.，Yamada，L.，Mochizuki，Y.，Takatori，N.，Kawashima，T.，Sasaki，A.，Hamaguchi，M.，Awazu，S.，Yagi，K.，Sasakura，Y.，Nakayama，A.，Ishikawa，H.，Inaba，K.and Satoh，N.“A cDNA resource fromthe basal chordate Ciona intestinalis”JOURNAL  Genesis 33(4)，153-154(2002)]获得。
实施例39：用于酵母中异源表达的表达质粒的克隆
延伸酶DNA在每一情况下以1μl cDNA、200μM dNTP、2.5UAdvantage聚合酶和每种引物100pmol于总计50μl体积中扩增。PCR的条件如下：首先95℃变性5分钟，其后为94℃30秒、55℃1分钟和72℃2分钟的30个循环，和72℃10分钟的终末延伸步骤。
以下寡核苷酸用于克隆酵母中异源表达的序列的PCR反应：
  基因名称和SEQ IDNO：   引物序列
  ELO(Xl)SEQ IDNO：121SEQ ID NO：122   F：5’-AGGATCC ATGGCCTTCAAGGAGCTCACATCR：5’-CCTCGAG TCAATGGTTTTTGCTTTTCAATGCACCG
  ELO(Ci)，SEQ IDNO：123SEQ ID NO：124   F：5’-TAAGCTT ATGGACGTACTTCATCGTR：5’-TCAGATCT TTAATCGGTTTTACCATT
*F＝正向引物，R＝反向引物
PCR产物与酵母表达载体pYES2.1-TOPO(Invitrogen)根据制造商说明21℃温育30分钟。这里通过T突出端和拓扑异构酶(Invitrogen)活性向载体连入PCR产物。在温育后转化大肠杆菌DH5α细胞。合适的克隆通过PCR鉴定，质粒DNA通过Qiagen DNAeasy试剂盒分离并且经测序证实。然后将正确的序列经电穿孔(1500V)转化入酵母株INVSc1(Invitrogen)。平行转化空白载体pYES2.1作为对照。此后将酵母在补加了2％葡萄糖的尿嘧啶撤除的完全基本培养基上铺板。能够在无尿嘧啶的培养基中生长的细胞包含相应的质粒pYES2.1、pYES2.1-ELO(Xl)和pYES2.1-ELO(Ci)。选择后，在每种情况下挑选了两个转化体用于进一步的功能性表达。
实施例40：植物中种子特异性表达的表达质粒的克隆
产生了基于pSUN-USP的另一种转化载体用于转化植物。为达此目的，使用以下引物对向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点：
pSUN-ELO(XI)
正向引物：5’-GCGGCCGCACC ATGGCCTTCAAGGAGCTCACATC
                                    (SEQ ID NO：125)
反向引物：
3’-GCGGCCGCCT TCAATGGTTTTTGCTTTTCAATGCACCG
                                    (SEQ ID NO：126)
pSUN-ELO(Ci)
正向引物：5’-GCGGCCGCACC ATGGACGTACTTCATCGT
                                    (SEQ ID NO：127)
反向引物：3’-GCGGCCGCT TTAATCGGTTTTACCATT
                                    (SEQ ID NO：128)
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM的dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶
使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产物和7624bp的载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。使用了来自Roche的快速连接试剂盒以便连接。得到的质粒pSUN-ELO(Xl)和pSUN-ELO(Ci)经测序证实。
pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P，Svab，Z，Maliga，P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacterium binaryvectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼碱合酶基因的加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H，Dhaese，P.，Seurinck，J.，Lemmers，M，Van Montagu，M.和Schell，J.Nucleotidesequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Tiplasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684位的核苷酸(Genbank AccessionX56240)，其中USP基因非编码区的一部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的启动子片段以商业上可获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物通过遵循标准方法的PCR反应扩增。
引物序列：
5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATCC GGATCTGCTGGCTATGAA-3’(SEQ ID NO：129)。
这个PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且插入带OCS终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建体用于转化拟南芥、油菜、烟草和亚麻子。
如实施例6所述自酵母和种子提取脂类。
实施例41：ELO(XI)和ELO(Ci)在酵母中的表达
如实施例4中所描述的由质粒pYES2，pYES2-ELO(Xl)和pYES2-ELO(Ci)转化的酵母如下进行分析：
来自主培养物的酵母细胞经离心(100×g，5分钟，20℃)收获并以pH8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯(FAME)从酵母细胞沉淀经酸性甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉淀与2ml的1N硫酸的甲醇溶液和2％(v/v)二甲氧基丙烷80℃温育1小时。FAME以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下，为除去未衍生的脂肪酸，有机相以2ml的pH8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤一次。随后PE相以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并用100μl PE吸收。样品在装备有火焰电离化检测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m，0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设置为以每分钟5℃的增量从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟(保持)。
信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)与保留时间加以鉴定。例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585，Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方法。
实施例42：ELO(XI)和ELO(Ci)的功能表征
ELO(XI)的底物特异性在表达和在喂饲不同脂肪酸后测定(图22)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为ELO(XI)反应产物的新脂肪酸。这意味基因ELO(XI)已经功能性表达。
从表16可以看出ELO(XI)具有宽泛的底物特异性。C18脂肪酸和C20脂肪酸均得到延伸，优选地观察到了Δ5和Δ6去饱和的脂肪酸。
经载体pYES2-ELO(Xl)所转化的酵母于存在所述脂肪酸的基本培养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸性甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过GLC分析。
表16：ELO(Xl)在酵母中的表达。描述了不同起始物质(在每一情况下以250μM喂饲)的转化率。
起始物质  ELO(Xl)对起始物质的转化(％)
16:0  3
16:1Δ9  0
18:0  2
18:1Δ9  0
18:2Δ9，12  3
18:3Δ6，9，12  12
18:3Δ5，9，12  13
18:3Δ9，12，15  3
18:4Δ6，9，12，15 20
20:3Δ8，11，14  5
20:3Δ11，14，17  13
起始物质  ELO(Xl)对起始物质的转化(％)
20:4Δ5，8，11，14  15
20.5Δ5，8，11，14，17  10
22:4Δ7，10，13，16  0
22:6Δ4，7，10，13，16，19 0
ELO(Ci)的底物特异性在表达和在喂饲不同脂肪酸后测定(图23)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为ELO(Ci)反应产物的新脂肪酸。这意味基因ELO(Ci)得到功能性表达。
表17：ELO(Ci)在酵母中的表达。描述了不同起始物质(在每一情况下以250μM喂饲)的转化率。
起始物质  ELO(Ci)对起始物质的转化(％)
16:0  0
16:1Δ9  0
18:0  0
18:1Δ9  0
18:2Δ9，12  23
18:3Δ6，9，12  10
18:3Δ5，9，12  38
18:3Δ9，12，15  25
18:4Δ6，9，12，15  3
起始物质  ELO(Ci)对起始物质的转化(％)
20:3Δ8，11，14  10
20:3Δ11，14，17  8
20:4Δ5，8，11，14  10
20:5Δ5，8，11，14，17  15
22:4Δ7，10，13，16  0
22:6Δ4，7，10，13，16，19 0
表17表明ELO(Ci)具有宽泛的底物特异性。C18脂肪酸和C20脂肪酸均得到了延伸，优选地观察到了经Δ5和Δ6去饱和的脂肪酸。
经载体pYES2-ELO(Ci)所转化的酵母于存在所述脂肪酸的基本培养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸性甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过GLC分析。
实施例43：从Ostreococcus tauri克隆基因
在此处所描述的具有Δ5延伸酶活性或Δ6延伸酶活性的延伸酶基因的辅助下，通过搜索蛋白质序列中的保守区域，在每种情况下可在Ostreococcus tauri序列数据库(基因组序列)中鉴定具有相应基序的序列。序列如下：
  基因名称   SEQ ID   氨基酸
  OtELO1，(Δ5延伸酶)   SEQ ID NO：67   300
  OtELO1.2，(Δ5延伸酶)   SEQ ID NO：113   300
  OtELO2，(Δ6延伸酶)   SEQ ID NO：69   292
  OtELO2.1，(Δ6延伸酶)   SEQ ID NO：111   292
OtElo1和OtElo1.2表现了与斑马鱼来源的延伸酶(GenBankAAN77156；约26％同一性)最高程度的相似性，而OtElo2和OtElo2.1表现了与剑叶藓Elo(PSE)最高程度的相似性[约36％同一性](用tBLASTn算法进行比对(Altschul等，J.Mol.Biol.1990，215：403-410))。
延伸酶按如下方式克隆：
稳定期的40ml Ostreococcus tauri培养物经过离心并且沉淀物在100μl双蒸水中重悬并-20℃保存。各自基因组DNA基于PCR法扩增。以如此方式选择了相应的引物对使得引物携有紧邻起始密码子的用于高效翻译的酵母共有序列(Kozak，Cell 1986，44：283-292)。在每一情况下使用1μl解冻的细胞、200μM dNTP、2.5U Taq聚合酶和100pmol每种引物于总计50μl体积中实施了OtElo-DNA的扩增。PCR的条件如下：首先95℃变性5分钟，其后为94℃30秒、55℃1分钟和72℃2分钟的30个循环，和72℃10分钟的终末延伸步骤。
实施例44：酵母中异源表达的表达质粒的克隆
为表征Ostreococcus tauri延伸酶的功能，将各DNA的可读框克隆于pYES2.1/V5-His-TOPO(Invitrogen)的半乳糖可诱导的GAL1启动子下游，产生了pOTE1、pOTE1.2、pOTE2和pOTE2.1克隆。
酿酒酵母334株分别以载体pOTE1、pOTE1.2、pOTE2和pOTE2.1经电穿孔(1500V)转化。经空白载体pYES2转化的酵母用作对照。已转化的酵母在补加了2％葡萄糖但缺乏尿嘧啶的完全基本培养基(CMdum)琼脂平板上选择。选择后，在每种情况下挑选三个转化体用于进一步的功能性表达。
为表达Ot延伸酶，在每种情况下对5ml由补加了2％(w/v)棉子糖但缺乏尿嘧啶的CMdum培养基组成的预培养基首先以经选择的转化体接种并且以每分钟200转在30℃温育2天。然后将5ml补加了2％棉子糖和300μM多种脂肪酸的CMdum(无尿嘧啶)液体培养基以预培养物接种至OD6000.05。酶的表达通过加入2％(w/v)半乳糖诱导。培养物进一步20℃温育96小时。
实施例45：植物中种子特异性表达的表达质粒的克隆
产生了基于pSUN-USP的另一种转化载体用于转化植物。为达此目的，使用PCR向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点。对应的引物序列从OtElo1、OtElo1.2、OtElo2和OtElo2.1的5′和3′区域衍生。
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM的dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶
使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物和载体并且切下相应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。使用了来自Roche的快速连接试剂盒以便连接。得到的质粒pSUN-OtELO1、pSUN-OtELO1.2、pSUN-OtELO2和pSUN-OtELO2.2经测序证实。
pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P，Svab，Z，Maliga，P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacteriumbinary vectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼碱合酶基因的加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H，Dhaese，P.，Seurinck，J.，Lemmers，M，Van Montagu，M.和Schell，J.Nucleotidesequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Tiplasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684位的核苷酸(Genbank AccessionX56240)，其中USP基因非编码区的一部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的USP启动子片段以商业上可获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物通过遵循标准方法的PCR反应扩增。
引物序列：
5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATCC GGATCTGCTGGCTATGAA-3’，SEQ ID NO：130
这个PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且插入带OCS终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建体用于转化拟南芥、油菜、烟草和亚麻子。
实施例46：OtElo1、OtElo1.2、OtElo2和OtELO2.2在酵母中的表达
如实施例15中所描述的由质粒pYES3，pYES3-OtELO1，pYES3-OtELO1.2，pYES3-OtELO2和pYES3-OtELO2.2转化的酵母按如下方式分析：
来自主培养物的酵母细胞经离心(100×g，5分钟，20℃)收获并以pH8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯(FAME)从酵母细胞沉淀经酸性甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉淀与2ml的1N硫酸的甲醇溶液和2％(v/v)二甲氧基丙烷80℃温育1小时。FAME以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下，为除去未衍生的脂肪酸，有机相以2ml的pH8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤一次。随后PE相以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并用100μl PE吸收。样品在装备有火焰电离化检测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m，0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设置为以每分钟5℃的增量从50℃升至250并且最后在250℃维持10分钟(保持)。
信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)与保留时间加以鉴定。例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585，Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方法。
实施例47：OtElo1、OtElo1.2、OtElo2和OtELO2.1的功能表征
OtElo1的底物特异性在表达和在喂饲不同脂肪酸后测定(表18)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为OtElo1反应产物的新脂肪酸。这意味基因OtElo1得到功能性地表达。
表18表明OtElo1和OtElo1.2具有窄的底物特异性。OtElo1和OtElo1.2只能延伸C20脂肪酸二十碳五烯酸(图24A、24B)和花生四烯酸(图25A、25B)，但是优选延伸ω-3去饱和的二十碳五烯酸。
表18表明同不同脂肪酸比较，延伸酶OtElo1和OtElo1.2对Δ5位置具备双键的C20多不饱和脂肪酸具有底物特异性。
分别由载体pOTE1或pOTE1.2转化的酵母在存在所述脂肪酸的基本培养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸性甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过GLC分析。
OtElo2(SEQ ID NO：81)和OtElo2.1(SEQ ID NO：111)的底物特异性在表达和在喂饲不同脂肪酸后测定(表19)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为OtElo2反应产物的新脂肪酸。这意味着功能性表达了基因OtElo2和OtElo2.1。
表18
  脂肪酸底物   OtElo1转化率(％)   OtElo1.2转化率(％)
  16:0   -   -
  16:1Δ9   -   -
  18:0   -   -
  18:1Δ9   -   -
脂肪酸底物   OtElo1转化率(％)   OtElo1.2转化率(％)
18:1Δ11   -   -
18:2Δ9，12   -   -
18:3Δ6，9，12   -   -
18:3Δ5，9，12   -   -
20:3Δ8，11，14   -   -
20:4Δ5，8，11，14   10.8±0.6   38.0
20:5Δ5，8，11，14，17   46.8±3.6   68.6
22:4Δ7，10，13，16   -   -
22:6Δ4，7，10，13，16，19 -   -
表19显示了延伸酶OtElo2和OtElo2.1对多种脂肪酸的底物特异性。OtElo2.1的活性明显较高。
已由载体pOTE2或pOTE2.1分别转化的酵母在存在所述脂肪酸的基本培养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸性甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过GLC分析。
在表19中显示的酶活性清楚地表明OtElo2和OtElo2.1分别是Δ6延伸酶。
表19：
脂肪酸底物   OtEIo2转化率(％)   OtEIO2.2转化率(％)
16:0   -   -
16:1Δ9   -   -
16:3Δ7，10，13   -   -
18:0   -   -
18:1Δ6   -   -
18:1Δ9   -   -
18:1Δ11   -   -
18:2Δ9，12   -   -
18:3Δ6，9，12   15.3   55.7
18:3Δ5，9，12   -   -
18:4Δ6，9，12，15   21.1   70.4
20:2Δ11，14   -   -
20:3Δ8，11，14   -   -
20:4Δ5，8，11，14   -   -
20:5Δ5，8，11，14，17   -   -
22:4Δ7，10，13，16   -   -
22:5Δ7，10，13，16，19   -   -
22:6Δ4，7，10，13，16，19 -   -
图24A-D分别显示了OtElo1(B)和OtElo1.2(D)对二十碳五烯酸的延伸。对照(A、C)未显示延伸产物(22:5ω3)。
图25A-D分别显示了OtElo1(B)和OtElo1.2(D)对花生四烯酸的延伸。对照(A、C)未显示延伸产物(22:4ω6)。
实施例48：从细小裸藻和拟南芥中克隆延伸酶基因
在本申请中所详述的具有Δ5延伸酶活性或Δ6延伸酶活性的延伸酶基因的辅助下，通过搜索蛋白质序列中的保守区域，可在序列数据库(Genbank，裸藻EST文库)中鉴定分别来自拟南芥和细小裸藻的具有相应基序的序列。序列如下：
  基因名称   SEQ ID   氨基酸
  EGY1019(细小裸藻)   SEQ ID NO：131   262
  EGY2019(细小裸藻)   SEQ ID NO：133   262
  At3g06460(拟南芥)   SEQ ID NO：135   298
  At3g06470(拟南芥)   SEQ ID NO：137   278
将细小裸藻延伸酶按如下方式克隆：
细小裸藻1224-5/25株从Sammlung für Algenkulturen G_ttingen[G_ttingen collection of algal cultures](SAG)获得。该株在培养基II(Calvayrac R和Douce R，FEBS Letters 7：259-262，1970)中于23℃以8小时/16小时光周期(光照密度35mol s-1m-2)周期生长4天。
用来自Qiagen的RNAeasy试剂盒(Valencia，CA，美国)分离了四日龄的裸藻培养物的总RNA。聚腺苷酸化RNA(mRNA)以寡聚-dT-纤维素从这种总RNA中分离(Sambrook等，1989)。这种RNA使用来自Promega的逆转录系统试剂盒进行逆转录并且将已合成的cDNA克隆入载体λZAP(lambda ZAP Gold，Stratagene)。然后这种cDNA根据制造商的说明去包装以产生质粒DNA，并且对克隆以随机测序方式进行部分测序。mRNA以PolyATract分离系统(Promega)从总RNA中分离。这种mRNA使用Marathon cDNA扩增试剂盒(BD Biosciences)遵循制造商的说明进行逆转录并且连接了人工接头。然后这种cDNA文库用于通过5’和3’RACE(cDNA末端快速扩增)方法的PCR克隆表达质粒。
将拟南芥延伸酶按如下方式克隆：
从基因组DNA开始，用于这两种基因的引物衍生自可读框5’和3’端。
将Chrigwin等(1979)的方法用于从拟南芥中分离总RNA。21日龄的植物的叶片于液氮中捣碎、以破碎缓冲液处理并于37℃温育15分钟。离心后(10分钟，4℃，12000×g)将上清中的RNA以0.02体积3M pH5.0的乙酸钠和0.75体积乙醇在-20℃沉淀5小时。然后经再次离心后，将RNA置于每克起始材料1ml的TES中，并且以1倍体积的酚/氯仿提取一次并且以1倍体积的氯仿再提取一次，RNA以2.5M LiCl沉淀。RNA经再次离心并且经80％乙醇洗涤后重悬于水中。cDNA如Sambrook等所描述合成，并且以衍生的引物进行RT-PCR。将PCR产物按照制造商说明克隆入载体pYES2.1-TOPO(Invitrogen)。
实施例49：酵母中异源表达的表达质粒的克隆
为表征来自拟南芥延伸酶的功能，将所讨论的DNA的可读框克隆至pYES2.1/V5-His-TOPO(Invitrogen)的半乳糖可诱导的GAL1启动子下游，产生了pAt60和pAt70。
酿酒酵母334株分别以载体pAt60和pAt70经电穿孔(1500V)转化。经空白载体pYES2.1转化的酵母用作对照。已转化的酵母在补加了2％葡萄糖但缺乏尿嘧啶的完全基本培养基(CMdum)琼脂平板上选择。选择后，在每种情况下挑选三个转化体用于进一步的功能性表达。
为表达At延伸酶，在每种情况下对5ml由补加了2％(w/v)棉子糖但缺乏尿嘧啶的CMdum液体培养基组成的预培养基首先以经选择的转化体接种并且以每分钟200转在30℃温育2天。
然后5ml补加了2％棉子糖和300μM多种脂肪酸的CMdum(无尿嘧啶)液体培养基以预培养物接种至OD6000.05。酶的表达通过加入2％(w/v)半乳糖诱导。培养物进一步20℃温育96小时。
实施例50：pAt60和pAt70在酵母中的表达
如实施例5中所描述的由质粒pYES2.1、pAt60和pAt70转化的酵母按如下方式分析：
来自主培养物的酵母细胞经离心(100×g，5分钟，20℃)收获并以pH8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯(FAME)从酵母细胞沉淀经酸性甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉淀与2ml的1N硫酸的甲醇溶液和2％(v/v)二甲氧基丙烷80℃温育1小时。FAME以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下，为除去未衍生的脂肪酸，有机相以2ml的pH8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤一次。随后PE相以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并用100μl PE吸收。样品在装备有火焰电离化检测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m，0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设置为以每分钟5℃的增量从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟(保持)。
信号通过比较相应的脂肪酸标准品(Sigma)与保留时间加以鉴定。例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585，Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方法。
实施例51：pAt60和pAt70的功能表征
延伸酶At3g06460和At3g06470的底物特异性在表达和在喂饲多种脂肪酸后测定(表20、图26)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可检测到，转基因酵母显示分别合成了作为At3g06460和At3g06470基因产物的新脂肪酸。这意味这些基因得到了功能性表达。
表20：EPA分别经延伸酶At3g06460和At3g06470延伸。在喂饲250μMEPA之后，测量酵母提取物
  基因   喂饲的脂肪酸   C20:5n-3含量   C22:5n-3含量
  At3g06460   EPA(C20:5n-3)   20.8   0.6
  At3g06460   EPA(C20:5n-3)   25.4   1.1
  EPA的转化率   At3g06460：3.0％   At3g06470：4.1％
图26显示20:5n-3经延伸酶At3g06470得到了延伸。
实施例52：从三角褐指藻中克隆延伸酶
在本申请中所详述的具有Δ6延伸酶活性的延伸酶基因的辅助下从蛋白质序列中的保守区域开始，构建了简并引物并且这些引物通过PCR方法用于筛选褐指藻属的cDNA文库：
  引物名   序列5’-3’方向   相应的氨基酸
  Phaelo正向引物1   AA(C/T)CTUCTUTGGCTUTT(C/T)TA(SEQ ID NO：185)   NLLWLFY
  Phaelo反向引物1   GA(C/T)TGUAC(A/G)AA(A/G)AA(C/T)TGUGC(A/G)AA(SEQ ID NO：186)   FAQFFVQS
括号中的核苷酸碱基意指在每种情况下存在的一种或另一种核苷酸碱基的寡核苷酸混合物。
褐指藻属cDNA文库的构建：
2L三角褐指藻UTEX 646培养物在f/2培养基中(1975年纽约PlenumPress出版社(Smith，W.L.和Chanley，M.H.编辑)《Culture of MarineInvertebrate Animals》中第29-60页的Guillard，R.R.L.Culture ofphytoplankton for feeding marine invertebrates)经14天长成35E/cm2光强度。离心后，冷冻的细胞在液氮存在时研成细粉并且在2ml匀浆缓冲液(在0.2M Tris-Cl pH8.5中的0.33M山梨糖醇、0.3M NaCl、10mM EDTA、10mM EGTA、2％SDS、2％巯基乙醇)中重悬。在加入4ml酚和2ml氯仿后，将混合物40-50℃剧烈振摇15分钟。随后离心该混合物(10分钟×10000g)，并且使用氯仿逐步萃取水相。然后通过加入1/20体积的4M碳酸氢钠溶液沉淀核酸并且加以离心。将沉淀吸收于80mM Tris-硼酸pH7.0和1mM EDTA中，以8M氯化锂沉淀RNA。RNA沉淀经离心和用70％浓度的乙醇洗涤后吸收于无RNA酶的水中。Poly(A)-RNA以Dynabeads(Dynal，Oslo，Norway)遵循制造商的说明分离，并且第一链cDNA的合成使用来自Roche(Mannheim)的MLV逆转录酶实施。第二链的合成随后以DNA聚合酶℃和Klenow片段实施，然后以RNA酶H消化。所述cDNA经过T4DNA聚合酶处理并且随后通过T4连接酶附加EcoRI/XhoI接头(Pharmacia，Freiburg)。在经过XhoI消化、磷酸化作用和凝胶分离之后，大于300bp的片段按照制造商说明连接进入噬菌体λZAP Express(荷兰阿姆斯特丹Stratagene)内。在cDNA文库的大量切割和质粒回收后，将质粒文库转化入大肠杆菌DH10B细胞并且用于PCR筛选。
可使用以上提到的简并引物产生具有序列编号SEQ ID NO：187的PCR片段。
所述片段以洋地黄毒苷(Roche，Mannheim)标记并且用作筛选噬菌体文库的探针。
使用序列SEQ ID NO：187可获得基因序列SEQ ID NO：183，其构成褐指藻属Δ6延伸酶的全长RNA分子。
实施例53：酵母中异源表达的表达质粒的克隆
有关引物对以如此方式选择使得它们具有紧邻起始密码子的用于高效翻译的酵母共有序列(Kozak，Cell 1986，44：283-292)。PtELO6DNA的扩增在每一情况下使用1μl cDNA、200μM dNTP、2.5U Advantage聚合酶和每种引物100pmol于总计50μl体积中实施。PCR的条件如下：首先95℃变性5分钟，其后为94℃30秒、55℃1分钟和72℃2分钟的30个循环，和72℃10分钟的终末延伸步骤。
以下寡核苷酸用于克隆在酵母中异源表达的序列的PCR反应：
 基因名称和SEQ ID NO：   引物序列
 PtELO6(SEQ ID NO：183)   F：5’-GCGGCCGCACATAATGATGGTACCTTCAAG(SEQ ID NO：188)R：3’-GAAGACAGCTTAATAGACTAGT(SEQ ID NO：189)
*F＝正向引物，R＝反向引物
PCR产物与酵母表达载体pYES2.1-TOPO(Invitrogen)根据制造商说明21℃温育30分钟。通过T突出端和拓扑异构酶(Invitrogen)活性向载体连入PCR产物(见SEQ ID NO：192)。在温育后转化大肠杆菌DH5α细胞。合适的克隆通过PCR鉴定，质粒DNA通过Qiagen DNAeasy试剂盒分离并且经测序证实。然后正确的序列经电穿孔(1500V)转化入酵母株INVSc1(Invitrogen)。平行转化空白载体pYES2.1作为对照。此后酵母在补加了2％葡萄糖的无尿嘧啶完全基本培养基上铺板。能够在无尿嘧啶的培养基中生长的细胞包含相应的质粒pYES2.1和pYES2.1-PtELO6。选择后，在每种情况下挑选了两个转化体用于进一步的功能表达。
实施例54：植物中种子特异性表达的表达质粒的克隆
产生了基于pSUN-USP的另一种转化载体用于转化植物。为达此目的，使用以下引物对向编码序列的5′和3′端导入NotI切割位点：
PSUN-PtELO6
正向引物：5’-GCGGCCGCACCATGATGGTACCTTCAAGTTA(SEQ ID NO：190)
反向引物：3’-GAAGACAGCTTAATAGGCGGCCGC(SEQ ID NO：191)
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM的dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶
使用了来自Clontech的Advantage聚合酶。
PCR反应条件：
退火温度：55℃1分钟
变性温度：94℃1分钟
延伸温度：72℃2分钟
循环次数：35
PCR产物与限制性酶NotI 37℃温育16小时。植物表达载体pSUN300-USP以同样方式温育。此后通过琼脂糖凝胶电泳分离了PCR产物和7624bp的载体并且切下相应的DNA片段。此后这些DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照制造商说明纯化。此后连接载体和PCR产物。使用了来自Roche的快速连接试剂盒以便连接。得到的质粒pSUN-PtELO经测序证实。
pSUN300是质粒pPZP的衍生物(Hajdukiewicz，P，Svab，Z，Maliga，P.，(1994)The small versatile pPZP family of Agrobacteriumbinary vectors for plant transformation.Plant Mol Biol 25：989-994)。通过向pSUN300中插入作为EcoRI片段的USP启动子从pSUN300衍生了pSUN-USP。加A信号是来自根癌农杆菌Ti质粒的章鱼碱合酶基因的加A信号(ocs终止子，Genbank Accession V00088)(De Greve，H，Dhaese，P.，Seurinck，J.，Lemmers，M，Van Montagu，M.和Schell，J.Nucleotidesequence and transcript map of the Agrobacterium tumefaciens Tiplasmid-encoded octopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982)。USP启动子对应于第1-684位的核苷酸(Genbank AccessionX56240)，其中USP基因非编码区的一部分存在于USP启动子中。684碱基对大小的启动子片段以商业上可获得的T7标准引物(Stratagene)和经合成的引物通过遵循标准方法的PCR反应扩增。
引物序列：
5’-GTCGACCCGCGGACTAGTGGGCCCTCTAGACCCGGGGGATCC GGATCTGCTGGCTATGAA-3’；SEQ ID NO：151)。
所述PCR片段再用EcoRI/SalI切割并且插入带OCS终止子的pSUN300载体。由此产生了名为pSUN-USP的质粒。这种构建体用于转化拟南芥、油菜、烟草和亚麻子。
如实施例6描述的从酵母和种子提取脂类。
实施例55：PtElo在酵母中的表达
如实施例4中所描述的由质粒pYES2和pYES2-PtELO6转化的酵母按如下方式分析：
来自主培养物的酵母细胞经离心(100×g，5分钟，20℃)收获并以pH8.0的100mM NaHCO3洗涤以除去残留的培养基和脂肪酸。脂肪酸甲酯(FAME)从酵母细胞沉淀经酸性甲醇分解作用制备。为达此目的，细胞沉淀与2ml的1N硫酸的甲醇溶液和2％(v/v)二甲氧基丙烷80℃温育1小时。FAME以石油醚(PE)提取两次。在每一情况下为除去未衍生的脂肪酸，有机相以2ml的pH8.0的100mM NaHCO3和2ml蒸馏水洗涤一次。随后PE相以Na2SO4干燥，在氩气下蒸发并用100μl PE吸收。样品在装备有火焰电离化检测器的Hewlett-Packard 6850气相色谱仪的DB-23毛细管柱(30m，0.25mm，0.25μm，Agilent)中分离。GLC分析条件如下：将炉腔温度设置为以每分钟5℃的增量从50℃升至250°并且最后在250℃维持10分钟(保持)。
信号通过比较保留时间与相应的脂肪酸标准品(Sigma)加以鉴定。例如在Napier和Michaelson，2001，Lipids.36(8)：761-766；Sayanova等，2001，Journal of Experimental Botany.52(360)：1581-1585，Sperling等，2001，Arch.Biochem.Biophys.388(2)：293-298和Michaelson等，1998，FEBS Letters.439(3)：215-218中描述了这种方法。
实施例56：PtELO6的功能表征
图29显示了C18:3Δ6，9，12和C18:4Δ6，9，12，15的转化。在每一情况下底物延伸了两个碳原子，分别形成了脂肪酸C20:3Δ8，11，14和C20:4Δ8，11，14，17。PtELO6的底物特异性在表达和在喂饲不同脂肪酸后测定(图30)。所喂饲的底物在全部转基因酵母中可大量地检测到。转基因酵母显示合成了作为PtELO6反应产物的新脂肪酸。这意味PtELO6基因得到功能性的表达。
从表21可以看出PtElo6具有窄的底物特异性。PtELO6只能延伸C18脂肪酸亚油酸、亚麻酸、γ-亚麻酸和十八碳四烯酸，但是优选地延伸ω3去饱和的十八碳四烯酸(见图30)。
喂饲实验：每一情况下喂饲250μM的脂肪酸(粗体)。下划线的脂肪酸为从头形成的。
表21：PtElo6的底物特异性
  喂饲的脂肪酸：   +18:2   +18:3   +18:3   +18:4
  16:0   16.2   18.2   15.2   20   04:48
  16:1   50.6   20.5   22.8   33.5   34.2
  18:0   5.4   6.3   6.2   5.2   12.4
  18:1   27.7   14.6   19.6   19.3   16.7
  18:2   40
  18:3   32.9
  18:3   12.3
  18:4   4.5
  20:2   0.4
  20:3   3.4
  20:3   9.7
  20:4   14.5
  ％延伸   0.0   0.99   9.37   44.09   76.32
喂饲了以下脂肪酸，但是未得到转化。
●18:1Δ6，18:1Δ9，18:1Δ11
●20:2Δ11，14，20:3Δ11，14，17，20:3Δ8，11，14，20:4Δ5，8，11，14，20:5Δ5，8，11，14，17
●22:4Δ7，10，13，16
经载体pYES2-PtELO6转化的酵母在存在所述脂肪酸的基本培养基中生长。脂肪酸甲酯通过对完整细胞的酸性甲醇分解作用合成。随后这些FAME通过GLC分析。确定了在图29和30及表19中所示的结果。
实施例57：克隆植物中种子特异表达的表达质粒
除非另外指出，下文描述的一般条件应用于所有随后实验。
根据本发明，下面的优选用于后面的实施例：Bin19、pBI101、pBinAR、pGPTV和pCAMBIA。双元载体和它们的应用的综述见Hellens等人，Trends in Plant Science(2000)5，446-451。使用如在DE10205607中描述的pGPTV衍生物。该载体与pGPTV的不同之处在于还插入了AscI限制性切割位点。
克隆步骤的起点是克隆载体pUC19(Maniatis等人)。在第一个步骤中，用下面的引物扩增Conlinin启动子片段：
CnI1C 5’：
gaattcggcgcgccgagctcctcgagcaacggttccggcggtatagagttgggtaattcga
CnI1C 3’：cccgggatcgatgccggcagatctccaccattttttggtggtgat
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：1min 55℃
变性温度：1min 94℃
延伸温度：2min 72℃
循环数：35
PCR产物首先与限制酶EcoRI在37℃温育2小时然后与限制酶SmaI在25℃温育12小时。克隆载体pUC19以相同的方式温育。之后，将PCR产物和切割的2668bp载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除对应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-CnI1-C通过测序验证。
在下一步，来自载体pGPVT-USP/OCS(DE 10205607)的OCS终止子(Genbank Accession V00088；De Greve，H.，Dhaese，P.，Seurinck，J.，Lemmers，M.，Van Montagu，M.和Schell，J.Nucleotide sequence andtranscript map of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid-encodedoctopine synthase gene J.Mol.Appl.Genet.1(6)，499-511(1982))用下面的引物扩增：
OCS_C 5’：aggcctccatggcctgctttaatgagatatgcgagacgcc
OCS_C 3’：cccgggccggacaatcagtaaattgaacggag
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：1min 55℃
变性温度：1min 94℃
延伸温度：2min 72℃
循环数：35
PCR产物首先与限制酶StuI在37℃温育2小时然后与限制酶SmaI在25℃温育12小时。载体pUC19-Cnl1-C用限制酶SmaI在25℃温育12小时。之后，将PCR产物和切割的载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除对应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-CnI1-C OCS通过测序验证。
在下一步中，通过PCR使用下面的引物扩增Cnl1-B启动子：
Cnl1-B 5’：aggcctcaacggttccggcggtatag
Cnl1-B 3’：
cccggggttaacgctagcgggcccgatatcggatcccattttttggtggtgattggttct
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：1min 55℃
变性温度：1min 94℃
延伸温度：2min 72℃
循环数：35
PCR产物首先与限制酶StuI在37℃温育2小时然后与限制酶SmaI在25℃温育12小时。载体pUC19-Cnl1-C用限制酶SmaI在25℃温育12小时。之后，将PCR产物和切割的载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除对应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-CnI1C_CnI1B_OCS通过测序验证。
在另一步中，插入Cnl1B的OCS终止子。为此，用下面的引物进行PCR：
OCS25’：aggcctcctgctttaatgagatatgcgagac
OCS23’：cccgggcggacaatcagtaaattgaacggag
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：1min 55℃
变性温度：1min 94℃
延伸温度：2min 72℃
循环数：35
PCR产物首先与限制酶StuI在37C温育2小时然后与限制酶SmaI在25C温育12小时。载体pUC19-CnI1C_CnI1B_OCS用限制酶SmaI在25C温育12小时。之后，将PCR产物和切割的载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除对应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-CnI1C_CnI1B_OCS2通过测序验证。
在下一步中，通过PCR使用下面的引物扩增Cnl1-A启动子：
Cnl1-B 5’：aggcctcaacggttccggcggtatagag
Cnl1-B 3’：aggccttctagactgcaggcggccgcccgcattttttggtggtgattggt
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：1min 55℃
变性温度：1min 94℃
延伸温度：2min 72℃
循环数：35
PCR产物与限制酶StuI在37℃温育2小时。载体pUC19-Cnl1-C用限制酶SmaI在25℃温育12小时。之后，将PCR产物和切割的载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除对应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-CnI1C_Cnl1B_Cnl1A_OCS2通过测序验证。
在另一步中，插入Cnl1A的OCS终止子。为此，用下面的引物进行PCR：
OCS25’：ggcctcctgctttaatgagatatgcga
OCS23’：aagcttggcgcgccgagctcgtcgacggacaatcagtaaattgaacggaga
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：1min 55℃
变性温度：1min 94℃
延伸温度：2min 72℃
循环数：35
PCR产物首先与限制酶StuI在37℃温育2小时然后与限制酶HindIII在37℃温育2小时。载体pUC19-CnI1C_CnI1B_CnI1A_OCS2与限制酶StuI在37℃温育2小时并与限制酶HindIII在37℃温育2小时。之后，将PCR产物和切割的载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除对应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-CnI1C_CnI1B_CnI1A_OCS3通过测序验证。
在下一步中，质粒pUC19-CnI1C_CnI1B_CnI1A_OCS3用于克隆Δ6-，Δ5去饱和酶和Δ6延伸酶。为此，用下面的PCR引物从Phytium irregulare(WO02/26946)扩增Δ6去饱和酶：
D6Des(Pir)5’：agatctatggtggacctcaagcctggagtg
D6Des(Pir)3’：ccatggcccgggttacatcgctgggaactcggtgat
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCI2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：1min 55℃
变性温度：1min 94℃
延伸温度：2min 72℃
循环数：35
PCR产物首先与限制酶BglII在37℃温育2小时然后与限制酶NcoI在37℃温育2小时。载体pUC19-CnI1C_CnI1B_CnI1A_OCS3与限制酶BglII在37℃温育2小时并与限制酶NcoI在37℃温育2小时。之后，将PCR产物和切割的载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除对应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-CnI1_d6Des(Pir)通过测序验证。
在下一步中，质粒pUC19-CnI1_d6Des(Pir)用于克隆破囊壶菌(Thraustochytrium ssp.)的Δ5去饱和酶(WO02/26946)。为此，用下面的PCR引物从Thraustochytrium ssp.扩增Δ5去饱和酶：
D5Des(Tc)5’：gggatccatgggcaagggcagcgagggccg
D5Des(Tc)3’：ggcgccgacaccaagaagcaggactgagatatc
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：1min 55℃
变性温度：1min 94℃
延伸温度：2min 72℃
循环数：35
PCR产物首先与限制酶BamHI在37℃温育2小时然后与限制酶EcoRV在37℃温育2小时。载体pUC19-Cnl1_d6Des(Pir)与限制酶BamHI在37℃温育2小时并与限制酶EcoRV在37℃温育2小时。之后，将PCR产物和切割的载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除对应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)通过测序验证。
在下一步中，质粒pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)用于克隆展叶剑叶藓的Δ6延伸酶(WO01/59128)。为此，用下面的PCR引物扩增：
D6Elo(Pp)5’：gcggccgcatggaggtcgtggagagattctacggtg
D6Elo(Pp)3’：gcaaaagggagctaaaactgagtgatctaga
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：1min 55℃
变性温度：1min 94℃
延伸温度：2min 72℃
循环数：35
PCR产物首先与限制酶NotI在37℃温育2小时然后与限制酶XbaI在37℃温育2小时。载体pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)与限制酶NotI在37℃温育2小时并与限制酶XbaI在37℃温育2小时。之后，将PCR产物和切割的载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除对应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)通过测序验证。
从pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)开始产生用于植物转化的双元载体。为此，将pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)与限制酶AscI在37℃温育2小时。载体pGPTV以相同方式处理。之后，来自pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)的片段和切割的pGPTV载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除相关的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pGPTV-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)通过测序验证。
使用另一构建体pGPTV-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)_D12Des(Co)。为此，从pUC19-Cnl1C_OCS开始使用下面的引物进行扩增：
Cnl1_OCS 5’：gtcgatcaacggttccggcggtatagagttg
Cnl1_OCS 3’：gtcgatcggacaatcagtaaattgaacggaga
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：1min 55℃
变性温度：1min 94℃
延伸温度：2min 72℃
循环数：35
PCR产物与限制酶SalI在37℃温育2小时。载体pUC19与限制酶SalI在37℃温育2小时。之后，将PCR产物和切割的载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除对应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-CnI1_OCS通过测序验证。
在另一步骤中，将来自金盏花(WO01/85968)的Δ12去饱和酶基因克隆到pUC19-Cnl1_OCS中。为此，使用下面的引物扩增d12Des(Co)：
D12Des(Co)5’：agatctatgggtgcaggcggtcgaatgc
D12Des(Co)3’：ccatggttaaatcttattacgatacc
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：1min 55℃
变性温度：1min 94℃
延伸温度：2min 72℃
循环数：35
PCR产物首先与限制酶BglII在37℃温育2小时随后与限制酶NcoI在相同温度下温育2小时。载体pUC19-Cnl1_OCS以相同方式温育。之后，将PCR产物和切割的载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除对应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-CnI1_D12Des(Co)通过测序验证。
质粒pUC19-CnI1_D12Des(Co)和质粒pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)与限制酶SalI在37℃下温育2小时。之后载体片段和载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除对应的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和载体片段。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)_D12Des(Co)通过测序验证。
从pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)_D12Des(Co)开始产生用于植物转化的双元载体。为此，将pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)_D12Des(Co)与限制酶AscI在37℃温育2小时。载体pGPTV以相同方式处理。之后，来自pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)_D12Des(Co)的片段和切割的pGPTV载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除相关的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pGPTV-CnI1d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)_D12Des(Co)通过测序验证。
适于植物转化的另一种载体是pSUN2。为了将载体中存在的表达盒的数目增加到4个以上，将该载体与Gateway System(Invitrogen，Karlsruhe)组合使用。为此，根据生产商的说明书如下述将Gateway盒A插入载体pSUN2中。
pSUN2载体(1μg)与限制酶EcoRV在37℃温育1小时。之后，通过Roche，Mannheim的快速连接试剂盒将Gateway盒A(Invitrogen，Karlsruhe)连接到切割的载体中。所得质粒转化到大肠杆菌DB3.1细胞(Invitrogen)。通过测序随后验证分离的质粒pSUN-GW。
在第二步，通过AscI从pUC19-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)_D12Des(Co)切除表达盒并将其连接到已经以相同方式处理的载体pSUN-GW中。所得质粒pSUN-4G用于其他基因构建体。
为此，首先按照生产商的说明书(Invitrogen)修饰pENTR克隆。质粒pENTR1A(Invitrogen)用限制酶EcorI在37℃温育1小时，随后用Klenow酶并用一种1μM dNTP混合物处理30分钟，然后将AscI接头(5’-ggcgcgcc；在5’末端磷酸化，双键)连接到载体pENTR1A中。将该修饰的基因逐步插入上述Cnl盒并通过AscI转移到pENTR载体。
以上述方式将来自破囊壶菌(SEQ ID NO：83)的基因TL16y2转移到pSUN-4G载体中：
在下一步，质粒pUC19-CnI1C_CnI1B_CnI1A_OCS3用于克隆Δ5延伸酶TL16y2。为此，用下面的PCR引物扩增破囊壶菌的Δ5延伸酶。
TL16y25’：agatct atggacgtcgtcgagcagca
TL16y23’：ccatggcccggg agaagcagaagaccatctaa
PCR混合物(50μl)的组成：
5.00μl模板cDNA
5.00μl 10x缓冲液(Advantage聚合酶)+25mM MgCl2
5.00μl 2mM dNTP
1.25μl每种引物(10pmol/μl)
0.50μl Advantage聚合酶(Clontech)
PCR反应条件：
退火温度：1min 55℃
变性温度：1min 94℃
延伸温度：2min 72℃
循环数：35
PCR产物首先与限制酶BglII在37℃温育2小时随后与限制酶NcoI在37℃温育2小时。载体pUC19-CnI1C_CnI1B_CnI1A_OCS3与限制酶BglII在37℃温育2小时随后与限制酶NcoI在37℃温育2小时。之后，将PCR产物和切割的载体通过琼脂糖凝胶电泳分离并切除相关的DNA片段。DNA通过Qiagen凝胶纯化试剂盒按照生产商的说明书纯化。之后，连接载体和PCR产物。Roche的快速连接试剂盒用于该目的。所得质粒pUC19-Cnl1_TL16y2通过测序验证。之后，将表达盒用AscI切割并连接到AscI-预处理的pENTR载体中。然后将所得质粒pENTR-Cnl1_TL16y2与载体pSUN-4G在重组反应中根据生产商的说明书(Invitrogen)温育。产物得到载体pSUN-5G，其用于植物的转化。
在另一步中，用上述方法产生构建体pSUN-8G。为此，产生基因SEQID 41、53、87和113的5’和3’引物，其具有上述限制性切割位点和每种情况下可读框的前和后20个核苷酸，将所述引物在标准条件(见上文)下扩增并连接到载体pENTR-CnI中。
用载体pSUN-4G进行重组反应得到构建体pSUN-8G。该载体也用于植物的转化。
实施例58：转基因植物的产生
a)转基因印度芥菜植物的产生。使用转化油菜植物的方案(Moloney等人，1992，Plant Cell Reports，8：238-242方法的改进方法)。
为了产生转基因植物，将已经产生的双元载体pGPTV-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)_D12Des(Co)、pSUN-5G和pSUN-8G转化到根癌农杆菌C58C1：pGV2260(Deblaere等人，1984，Nucl.Acids Res.13，4777-4788)。为了转化印度芥菜植物，使用在补加3％蔗糖的Murashige-Skoog培养基(Murashige和Skoog 1962 Physiol.Plant.15，473)(3MS培养基)中阳性转化的农杆菌菌落的过夜培养物的1∶50稀释液。新发芽的无菌植物的叶柄或者下胚轴(每种情况下约1cm2)与1∶50农杆菌稀释液在培养皿中温育5-10分钟。然后在黑暗中25℃下在补加0.8％Bacto琼脂的3MS培养基上共同培养3天。随后在16小时光/8小时黑暗和以每周的节律在补加500mg/l of Claforan(头孢噻肟)、50mg/l卡那霉素、20μM苄基氨基嘌呤(BAP)和1.6g/l葡萄糖的MS培养基上继续培养16小时。将生长的枝条转移补加2％蔗糖、250mg/l头孢噻肟和0.8％Bacto琼脂的MS培养基。如果3周后没有形成根，向培养基加入2-吲哚基丁酸作为生长激素促进生根。
再生的枝条保持在补加卡那霉素和头孢噻肟的2MS培养基中，生根后，转移到土壤，栽培后，在控制环境的室内或者在温室内生长2周，允许开花，收获成熟种子并通过脂类分析研究延伸酶表达，如Δ6延伸酶或者或者Δ5-或者Δ6去饱和酶活性。以这种方式，鉴定了C20-和C22多不饱和脂肪酸含量升高的品系。
使用该方案还成功地产生的转基因油菜植物。
b)转基因亚麻子植物的产生
通过例如Bell等人，1999，In Vitro Cell.Dev.Biol.-Plant.35(6)：456-465的方法用微粒轰击可以产生转基因亚麻子植物。例如，通过Mlynarova等人(1994)，Plant Cell Report 13：282-285的方法可以进行农杆菌介导的转化。
实施例59：从种子提取脂类
植物中基因修饰对所希望的化合物(如脂肪酸)的生产的影响可以如下确定：将修饰的植物在适宜条件(如上述条件)下生长，并分析培养基和/或细胞组分来研究目标产物(即，脂类或者脂肪酸)的升高的生产。这些分析技术是技术人员已知的并且包括光谱法、薄层层析、多种类型的染色方法、酶和微生物学方法和分析层析，如高效液相层析(见，例如，Ullman，Encyclopedia of Industrial Chemistry，Vol.A2，pp 89-90和pp 443-613，VCH：Weinheim(1985)；Fallon，A.，等人，(1987)“Applications of HPLC inBiochemistry”in：Laboratory Techniques in Biochemistry and MolecularBiology，Vol.17；Rehm等人(1993)Biotechnology，Vol.3，Chapter III：“Product recovery and purification”，pp 469-714，VCH：Weinheim；Belter，P.A.，等人(1988)Bioseparations：downstream processing for Biotechnology，John Wiley and Sons；Kennedy，J.F.，and Cabral，J.M.S.(1992)Recoveryprocesses for biological Materials，John Wiley and Sons；Shaeiwitz，J.A.，and Henry，J.D.(1988)Biochemical Separations，in：Ullmann’sEncyclopedia of Industrial Chemistry，Vol.B3；Chapter 11，pp 1-27，VCH：Weinheim；and Dechow，F.J.(1989)Separation and purificationtechniques in biotechnology，Noyes Publications)。
除了上述方法，按照Cahoon等人(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96(22)：12935-12940 and Browse等人(1986)Analytic Biochemistry152：141-145描述的从植物材料提取植物脂类。脂类或者脂肪酸的定性和定量分析由Christie，William W.，Advances in Lipid Methodology，Ayr/Scotland：Oily Press(Oily Press Lipid Library；2)；Christie，WilliamW.，Gas Chromatography and Lipids.A Practical Guide-Ayr，Scotland：Oily Press，1989，Repr.1992，IX，307pp(Oily Press Lipid Library；1)；“Progress in Lipid Research，Oxford：Pergamon Press，1(1952)-16(1977)标题：Progress in the Chemistry of Fats and Other Lipids CODEN描述。
除了测量发酵终产物，还可以分析代谢途径中用于产生目标化合物的其他组分，如中间物和副产物，以确定化合物的总的生产效率。分析方法包括测量培养基中营养物的量(例如，糖、烃、氮源、磷酸盐和其他离子)，测量生物量组成和生长，分析生物合成途径的常规代谢物的产生，和测量发酵中产生的气体。这些测量的标准方法描述于Applied MicrobialPhysiology；A Practical Approach，P.M.Rhodes and P.F.Stanbury，Ed.，IRL Press，pp 103-129；131-163和165-192(ISBN：0199635773)和其中引用的参考文献。
一个实例是分析脂肪酸(简写：FAME，脂肪酸甲酯；GC-MS，气液色谱/质谱；TAG：三酰甘油；TLC，薄层层析)。
用标准分析方法：GC、GC-MS或者TLC，如Christie和其中的参考文献(1997，in：Advances on Lipid Methodology，Fourth Edition：Christie，Oily Press，Dundee，119-169；1998，Gaschromatographie-Massenspektrometrie-Verfahren[Gaschromatography/mass spectrometry methods]，Lipide 33：343-353)描述的，通过分析重组生物可以得到脂肪酸产物存在的明确证据。
可以将待分析的材料通过超声处理破裂，在玻璃粉碎机和液氮中碾磨，和通过其他适用的方法碾磨。破裂后，必须将材料离心。将沉淀物重悬浮在蒸馏水中，100℃下加热10分钟，冰上冷却并再次离心，然后在90℃下在甲醇中的0.5M硫酸中加入二甲氧基丙烷萃取，得到水解的油和脂类化合物，其得到甲基转移的脂类。这些脂肪酸甲酯在石油醚中提取，并最后进行GC分析，使用毛细管柱(Chrompack，WCOT Fused Silica，CP-Wax-52CB，25μm，0.32mm)，在170℃到240℃的温度梯度下进行20分钟，在240℃下进行5分钟。所得脂肪酸甲酯的身份必须用从商业来源(例如，Sigma)可得到的标准品定义。
首先通过用研杵和研钵机械匀浆植物材料以使其更便于提取。
随后100℃加热10分钟并且在冰上冷却后再次离心。细胞沉淀以1M硫酸的甲醇溶液和2％二甲氧基丙烷90℃水解一小时并且将脂类转甲基化。得到的脂肪酸甲酯(FAME)在石油醚中抽提。所提取的FAME通过使用毛细管柱(Chrompack，WCOT Fused Silica，CP-Wax-52 CB，25μm，0.32mm)的气液色谱经20分钟的170℃至240℃之间的温度梯度并且在240℃维持5分钟进行分析。脂肪酸甲酯的身份通过与相应FAME标准品(Sigma)的比较确认。双键的身份和位置通过使FAME混合物适当地化学衍生以产生例如4，4-二甲氧基_唑啉衍生物(Christie，1998)经GC-MS进一步分析。
实施例60：来自产生的转基因植物的种子的分析
类似于实施例59，分析用构建体pGPTV-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)_D12Des(Co)、pSUN-5G和pSUN-8G转化的植物的种子。图XX显示了使用构建体pGPTV-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc))_D6Elo(Pp)_D12Des(Co)所得种子的脂肪酸谱。与没有转化的的对照植物(野生型对照，WT)比较，观察到脂肪酸谱的显著改变。从而可以证明转化的基因是有功能的。表22编辑了图32的结果。
表22：
  品系   脂肪酸
  16:0   18:0   18:1   18:2   GLA   18:3   SDA   ARA   EPA
  WT对照   5.6   6.5   31.7   41.7   nd   12.1   nd   nd   nd
  1424_Ko82_4   6.6   1.5   8.9   10.5   42.2   3.1   2.8   17.2   0.2
  1424_Ko82_5   6.1   1.5   11.0   9.0   40.6   2.9   4.0   15.0   1.5
  1424_Ko82_6   5.7   1.6   15.5   10.6   37.1   3.0   3.2   14.6   0.2
  1424_Ko82_7   5.4   2.0   20.4   10.7   32.6   3.5   3.2   12.1   1.0
  1424_Ko82_8   5.4   1.4   15.1   12.5   39.9   2.6   2.4   12.2   0.7
  1424_Ko82_9   6.0   1.8   25.0   9.9   29.7   2.2   2.5   10.2   0.8
  1424_Ko82_10   5.7   1.3   10.1   10.3   42.5   2.6   3.5   13.9   1.1
  1424_Ko82_11   5.4   1.4   15.7   11.3   38.2   2.6   2.8   14.1   1.0
这里，具有构建体pSUN-5G的种子的分析揭示了与构建体pGPTV-CnI1_d6Des(Pir)_d5Des(Tc)_D6Elo(Pp)_D12Des(Co)相比花生四烯酸含量显著增加的品系。在该上下文中，得到了含有高达25％ARA的品系。额外的延伸酶(TL16y2)肯定造成了该效应(图31，pSUN-5G)。来自该品系的结果在图23中汇编。
表23：用构建体pSUN-5G转化的转基因种子的脂肪酸分析
品系   脂肪酸
16:0 18:0 18:1   18:2LA   18:3GLA   18:3ALA   18:4SDA   20:3HGLA ARA EPA
  WT   5.2   2.3   34.2   37.9   0.0   11.6   0.0   0.0   0.0   0.0
  16-1-2   4.2   1.6   20.1   21.5   25.9   4.1   1.8   1.7   8.9   0.8
  16-1-3   5.8   2.3   9.9   14.6   33.6   3.1   2.2   2.2   16.0   1.4
  16-1-8   5.0   2.8   11.1   12.6   34.9   2.2   1.8   2.6   16.3   1.2
  16-2-1   4.9   1.6   14.5   17.4   32.9   3.5   2.0   1.6   12.3   1.0
  16-2-5   5.5   3.3   12.9   13.8   32.9   2.9   2.2   1.4   15.4   1.4
  16-4-2   5.8   2.5   18.8   14.7   32.0   3.5   2.3   1.2   12.0   1.2
  16-4-3   5.9   2.0   19.7   15.0   32.0   3.8   2.4   1.1   11.4   1.2
  16-7-2   6.2   4.4   14.3   10.2   30.7   2.0   2.1   1.7   19.4   1.9
  16-7-3   5.0   2.5   21.6   13.6   30.7   2.1   1.8   1.5   12.6   1.1
  16-7-4   5.3   4.1   18.8   19.5   23.1   4.2   2.2   2.9   11.3   1.4
  16-7-5   7.4   1.8   4.2   6.8   33.7   1.8   2.7   2.6   25.8   2.6
实施例61：转基因印度芥菜植物的种子中DHA的检测
对用如实施例58描述的构建体pSUN-8G产生的植物的种子如实施例59描述的分析。除了LCPUFA花生四烯酸和二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸外，在这些种子中也检测到通过破囊壶菌的Δ4去饱和酶和虹鳟(Onchorynchis mykiss)和Ostreococcus tauri的Δ5延伸酶转化后的产物。图32显示了与未转化的对照植物相比，具有修饰的脂肪酸谱的层析图。一些测量结果在表24中汇编。
表24显示了用构建体pSUN-8G转化的转基因种子的脂肪酸分析。
在该实验中，首次阐明了种子中二十二碳六烯酸的合成。而高等植物中DHA的分析已经在例如WO 2004/071467中描述，还没有对种子，仅仅对胚发生细胞培养物阐明了该合成。
等同方案：
根据本文描述的本发明的特定实施方案的许多等同方案可以由技术人员通过简单的常规实验看到或者发现。这些等同方案意在包括在专利权利要求中。
表2：三种不同转基因芥菜品系的种子中脂肪酸分布
  芥菜品系   No.   18:1   18:2(LA)  γ18:3(GLA)   α18:3(ALA)   18:4(SDA)   20:3(HGLA)   20:4(ARA)
  WT   1   33.2   38.2  0   12.2   0   0   0
  2   31.3   41.2  0   11.7   0   0   0
  8-1424-5   1   25.1   12.8  26.4   3.5   2.4   0.6   8.3
  2   26   12.7  26.3   3.8   2.6   0.6   8.2
  3   25   12.5  25.9   3.4   2.4   0.8   8.5
  8-1424-8   1   28.1   13.1  25   5.8   3.7   0.2   6.2
  2   24.7   14.8  26.4   5.2   3   0.3   6.8
  8-1424-10   1   25.2   14.2  29.8   5.2   3.4   0.5   5
  2   27.2   12.7  27.9   4.2   2.9   0.3   6.3
脂肪酸的量以重量百分数表示。
LA＝亚油酸，GLA＝γ-亚麻酸，ALA＝α-亚麻酸，SDA＝十八碳四烯酸，HGLA＝二高-γ-亚麻酸，ARA＝花生四烯酸，ETA＝二十碳四烯酸，EPA＝二十碳五烯酸
表3：三种不同转基因芥菜品系的种子中脂肪酸分布
样品 号 18:1Δ9 18:2Δ6，9 18:2Δ9，12(LA) 18:3Δ6，9，12(GLA) 18:3Δ9，12，15(ALA) 18:4Δ6，9，12，15(SDA)   20:3Δ8，11，14(HGLA) 20:4Δ5，8，11，14(ARA) 20:4Δ8，11，14，17(ETA) 20:5Δ5，8，11，14，17(EPA)
  WT   1   35.10   0.00   35.71  0.00   10.80   0.00   0.00   0.00  0.00   0.00
  2   27.79   0.00   32.83  0.00   8.94   0.71   0.00   0.00  0.00   0.00
  9-1424   1   17.62   1.07   12.32  29.92   2.84   2.17   0.97   13.05  ＜0.01   1.21
  2   23.68   2.17   10.57  23.70   2.39   1.80   0.98   11.60  ＜0.01   1.16
  3   17.15   0.94   12.86  31.16   3.19   2.40   1.01   12.09  ＜0.01   1.16
  9-1424   1   16.48   1.47   11.09  30.49   3.06   2.56   0.75   11.84  ＜0.01   1.24
  2   17.70   1.23   11.42  27.94   2.35   1.88   0.64   12.30  0.03   1.12
  3   19.29   1.05   10.95  26.11   2.85   2.11   1.07   12.09  ＜0.01   1.21
  9-1424   1   24.71   0.00   41.87  0.00   12.32   0.00   0.00   0.00  0.00   0.00
  2   28.84   0.00   40.65  0.00   10.94   0.00   0.00   0.00  0.00   0.00
  3   29.28   0.00   41.34  0.00   10.76   0.00   0.00   0.00  0.00   0.00
  9-1424   1   32.41   0.00   37.26  0.00   10.05   0.00   0.00   0.00  0.00   0.00
样品 号 18:1Δ9 18:2Δ6，9 18:2Δ9，12(LA) 18:3Δ6，9，12(GLA) 18:3Δ9，12，15(ALA) 18:4Δ6，9，12，15(SDA)   20:3Δ8，11，14(HGLA) 20:4Δ5，8，11，14(ARA) 20:4Δ8，11，14，17(ETA) 20:5Δ5，8，11，14，17(EPA)
  2   27.76   0.00   36.66   0.00   11.43   0.00   0.00   0.00   0.00   0.00
  3   32.03   0.00   36.27   0.00   9.27   0.00   0.00   0.00   0.00   0.00
  9-1424   1   19.08   0.61   11.26   23.31   3.73   2.14   1.11   10.93   0.08   1.11
  2   20.34   3.78   10.07   19.59   2.36   1.72   0.68   8.21   ＜0.01   1.00
  3   28.27   0.00   37.19   0.00   9.32   0.00   0.00   0.00   0.00   0.00
  9-1424   1   25.95   0.00   37.87   0.00   9.15   0.00   0.00   0.00   0.00   0.00
  2   22.94   0.00   42.69   0.00   9.14   0.00   0.00   0.00   0.00   0.00
  3   18.96   0.61   14.09   23.76   3.17   1.86   0.97   10.46   ＜0.01   0.94
脂肪酸的量以重量百分数表示。
LA＝亚油酸，GLA＝γ-亚麻酸，ALA＝α-亚麻酸，SDA＝十八碳四烯酸，HGLA＝二高-γ-亚麻酸，ARA＝花生四烯酸，ETA＝二十碳四烯酸，EPA＝二十碳五烯酸
表4：芥菜的种子中脂肪酸分析
Figure A20058000742801991
脂肪酸的量以重量百分数表示。
LA＝亚油酸，GLA＝γ-亚麻酸，ALA＝α-亚麻酸，SDA＝十八碳四烯酸，HGLA＝二高-γ-亚麻酸，ARA＝花生四烯酸，ETA＝二十碳四烯酸，EPA＝二十碳五烯酸
表6：喂饲的脂肪酸的转化率。转化率用下式计算：[转化率]＝[产物]/[[底物]+[产物]]*100
  GC分析的BioTaur克隆面积(％)
克隆 脂肪酸 C16:0   C16:1(n-7) C18:0   C18:1(n-9)   C18:3(n-6)   C18:4(n-3)   C20:3(n-6)   C20:4(n-6)   C20:4(n-3)   C20:5(n-3)   C22:4(n-6)   C22:4(n-3)   C22:5(n-3)
  载体   无   21.261   41.576   4.670   25.330
  BioTaur   无   20.831   37.374   4.215   26.475
  载体   GLA+EPA   22.053   23.632   5.487   17.289   11.574   13.792
  BioTaur   GLA+EPA   20.439   25.554   6.129   19.587   3.521   6.620   10.149   1.127
  载体   EPA   20.669   28.985   6.292   21.712   16.225
  BioTaur   EPA   20.472   26.913   6.570   23.131   11.519   3.251
  载体   ARA   23.169   23.332   6.587   12.735   27.069
  BioTaur   ARA   20.969   31.281   5.367   21.351   9.648   1.632
  载体   SDA   18.519   12.626   6.642   6.344   47.911
  BioTaur   SDA   19.683   15.878   7.246   8.403   13.569   25.946   0.876
表24：用构建体pSUN-8G转化的转基因种子的脂肪酸分析
I 16:0 18:0 18:1Δ9  LA18:2Δ9，12 GLA18:3Δ6，9，12 ALA18:3Δ9，12，15 SDA18:4Δ6，9，12，15 HGLA20:3Δ8，11，14 ARA20:4Δ5，8，11，14 EPA20:5Δ5，8，11，14，17 22:5Δ7，10，13，16，19  DHA22:6Δ4，7，10，13，16，19
  WT   5.26   1.80   30.78  43.93 nd 12.47 nd nd nd nd  nd  nd
  Bj-17-1-3 4.73 2.28 19.30 14.04 31.48 3.09 2.40 1.70 3.37 8.65  0.19 0.25
  Bj-17-2-1 4.34 2.17 17.60 15.56 29.97 3.37 2.44 2.14 4.05 9.14  0.23 0.40
  Bj-17-4-3 4.31 1.70 14.45 16.94 35.54 3.43 2.39 0.10 5.09 9.43  0.24 0.23
  II   ％饱和脂肪酸   ％单不饱和脂肪酸   ％多不饱和脂肪酸  ％LCFΔ   ％VLCFA
  WT   7.96   35.43   56.62  97.71   2.29
  Bj-17-1-3   9.18   24.95   65.87  79.64   20.36
  Bj-17-2-1   9.83   25.44   64.73  80.44   19.56
  Bj-17-4-3   14.05   20.36   65.60  75.27   24.73
LCFA＝脂肪酸链中长达18个碳原子的所有脂肪酸
VLCFA＝脂肪酸链中长达20或更多碳原子的脂肪酸
                           序列表
<110>巴斯福植物科学有限公司
<120>在转基因植物中产生多不饱和脂肪酸的方法
<130>PF56186
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<160>202
<170>PatentIn版本3.1
<210>1
<211>1266
<212>DNA
<213>细小裸藻(Euglena gracilis)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1266)
<223>Δ8去饱和酶
<400>1
atg aag tca aag cgc caa gcg ctt ccc ctt aca att gat gga aca aca     48
Met Lys Ser Lys Arg Gln Ala Leu Pro Leu Thr Ile Asp Gly Thr Thr
1               5                   10                  15
tat gat gtg tct gcc tgg gtc aat ttc cac cct ggt ggt gcg gaa att     96
Tyr Asp Val Ser Ala Trp Val Asn Phe His Pro Gly Gly Ala Glu Ile
            20                  25                  30
ata gag aat tac caa gga agg gat gcc act gat gcc ttc atg gtt atg    144
Ile Glu Asn Tyr Gln Gly Arg Asp Ala Thr Asp Ala Phe Met Val Met
        35                  40                  45
cac tct caa gaa gcc ttc gac aag ctc aag cgc atg ccc aaa atc aat    192
His Ser Gln Glu Ala Phe Asp Lys Leu Lys Arg Met Pro Lys Ile Asn
    50                  55                  60
ccc agt tct gag ttg cca ccc cag gct gca gtg aat gaa gct caa gag    240
Pro Ser Ser Glu Leu Pro Pro Gln Ala Ala Val Asn Glu Ala Gln Glu
65                  70                  75                  80
gat ttc cgg aag ctc cga gaa gag ttg atc gca act ggc atg ttt gat    288
Asp Phe Arg Lys Leu Arg Glu Glu Leu Ile Ala Thr Gly Met Phe Asp
                85                  90                  95
gcc tcc ccc ctc tgg tac tca tac aaa atc agc acc aca ctg ggc ctt    336
Ala Ser Pro Leu Trp Tyr Ser Tyr Lys Ile Ser Thr Thr Leu Gly Leu
            100                 105                 110
gga gtg ctg ggt tat ttc ctg atg gtt cag tat cag atg tat ttc att    384
Gly Val Leu Gly Tyr Phe Leu Met Val Gln Tyr Gln Met Tyr Phe Ile
        115                 120                 125
ggg gca gtg ttg ctt ggg atg cac tat caa cag atg ggc tgg ctt tct    432
Gly Ala Val Leu Leu Gly Met His Tyr Gln Gln Met Gly Trp Leu Ser
    130                 135                 140
cat gac att tgc cac cac cag act ttc aag aac cgg aac tgg aac aac    480
His Asp Ile Cys His His Gln Thr Phe Lys Asn Arg Asn Trp Asn Asn
145                 150                 155                 160
ctc gtg gga ctg gta ttt ggc aat ggt ctg caa ggt ttt tcc gtg aca    528
Leu Val Gly Leu Val Phe Gly Asn Gly Leu Gln Gly Phe Ser Val Thr
                165                 170                 175
tgc tgg aag gac aga cac aat gca cat cat tcg gca acc aat gtt caa    576
Cys Trp Lys Asp Arg His Asn Ala His His Ser Ala Thr Asn Val Gln
            180                 185                 190
ggg cac gac cct gat att gac aac ctc ccc ctc tta gcc tgg tct gag    624
Gly His Asp Pro Asp Ile Asp Asn Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ser Glu
        195                 200                 205
gat gac gtc aca cgg gcg tca ccg att tcc cgc aag ctc att cag ttc    672
Asp Asp Val Thr Arg Ala Ser Pro Ile Ser Arg Lys Leu Ile Gln Phe
    210                 215                 220
cag cag tat tat ttc ttg gtc atc tgt atc ttg ttg cgg ttc att tgg    720
Gln Gln Tyr Tyr Phe Leu Val Ile Cys Ile Leu Leu Arg Phe Ile Trp
225                 230                 235                 240
tgt ttc cag agc gtg ttg acc gtg cgc agt ctg aag gac aga gat aac     768
Cys Phe Gln Ser Val Leu Thr Val Arg Ser Leu Lys Asp Arg Asp Asn
                245                 250                 255
caa ttc tat cgc tct cag tat aag aag gag gcc att ggc ctc gcc ctg     816
Gln Phe Tyr Arg Ser Gln Tyr Lys Lys Glu Ala Ile Gly Leu Ala Leu
            260                 265                 270
cat tgg aca ttg aag gcc ctg ttc cac tta ttc ttt atg ccc agc atc     864
His Trp Thr Leu Lys Ala Leu Phe His Leu Phe Phe Met Pro Ser Ile
        275                 280                 285
ctc aca tcg ctg ttg gta ttt ttc gtt tcg gag ctg gtt ggc ggc ttc     912
Leu Thr Ser Leu Leu Val Phe Phe Val Ser Glu Leu Val Gly Gly Phe
    290                 295                 300
ggc att gcg atc gtg gtg ttc atg aac cac tac cca ctg gag aag atc     960
Gly Ile Ala Ile Val Val Phe Met Asn His Tyr Pro Leu Glu Lys Ile
305                 310                 315                 320
ggg gac tcg gtc tgg gat ggc cat gga ttc tcg gtt ggc cag atc cat    1008
Gly Asp Ser Val Trp Asp Gly His Gly Phe Ser Val Gly Gln Ile His
                325                 330                 335
gag acc atg aac att cgg cga ggg att atc aca gat tgg ttt ttc gga    1056
Glu Thr Met Asn Ile Arg Arg Gly Ile Ile Thr Asp Trp Phe Phe Gly
            340                 345                 350
ggc ttg aac tac cag atc gag cac cat ttg tgg ccg acc ctc cct cgc    1104
Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu Trp Pro Thr Leu Pro Arg
        355                 360                 365
cac aac ctg aca gcg gtt agc tac cag gtg gaa cag ctg tgc cag aag    1152
His Asn Leu Thr Ala Val Ser Tyr Gln Val Glu Gln Leu Cys Gln Lys
    370                 375                 380
cac aac ctg ccg tat cgg aac ccg ctg ccc cat gaa ggg ttg gtc atc    1200
His Asn Leu Pro Tyr Arg Asn Pro Leu Pro His Glu Gly Leu Val Ile
385                 390                 395                 400
ctg ctg cgc tat ctg gcg gtg ttc gcc cgg atg gcg gag aag caa ccc    1248
Leu Leu Arg Tyr Leu Ala Val Phe Ala Arg Met Ala Glu Lys Gln Pro
                405                 410                 415
gcg ggg aag gct cta taa                                            1266
Ala Gly Lys Ala Leu
            420
<210>2
<211>421
<212>PRT
<213>细小裸藻
<400>2
Met Lys Ser Lys Arg Gln Ala Leu Pro Leu Thr Ile Asp Gly Thr Thr
1               5                   10                  15
Tyr Asp Val Ser Ala Trp Val Asn Phe His Pro Gly Gly Ala Glu Ile
            20                  25                  30
Ile Glu Asn Tyr Gln Gly Arg Asp Ala Thr Asp Ala Phe Met Val Met
        35                  40                  45
His Ser Gln Glu Ala Phe Asp Lys Leu Lys Arg Met Pro Lys Ile Asn
    50                  55                  60
Pro Ser Ser Glu Leu Pro Pro Gln Ala Ala Val Asn Glu Ala Gln Glu
65                  70                  75                  80
Asp Phe Arg Lys Leu Arg Glu Glu Leu Ile Ala Thr Gly Met Phe Asp
                85                  90                  95
Ala Ser Pro Leu Trp Tyr Ser Tyr Lys Ile Ser Thr Thr Leu Gly Leu
            100                 105                 110
Gly Val Leu Gly Tyr Phe Leu Met Val Gln Tyr Gln Met Tyr Phe Ile
        115                 120                 125
Gly Ala Val Leu Leu Gly Met His Tyr Gln Gln Met Gly Trp Leu Ser
    130                 135                 140
His Asp Ile Cys His His Gln Thr Phe Lys Asn Arg Asn Trp Asn Asn
145                 150                 155                 160
Leu Val Gly Leu Val Phe Gly Asn Gly Leu Gln Gly Phe Ser Val Thr
                165                 170                 175
Cys Trp Lys Asp Arg His Asn Ala His His Ser Ala Thr Asn Val Gln
            180                 185                 190
Gly His Asp Pro Asp Ile Asp Asn Leu Pro Leu Leu Ala Trp Ser Glu
        195                 200                 205
Asp Asp Val Thr Arg Ala Ser Pro Ile Ser Arg Lys Leu Ile Gln Phe
    210                 215                 220
Gln Gln Tyr Tyr Phe Leu Val Ile Cys Ile Leu Leu Arg Phe Ile Trp
225                 230                 235                 240
Cys Phe Gln Ser Val Leu Thr Val Arg Ser Leu Lys Asp Arg Asp Asn
                245                 250                 255
Gln Phe Tyr Arg Ser Gln Tyr Lys Lys Glu Ala Ile Gly Leu Ala Leu
            260                 265                 270
His Trp Thr Leu Lys Ala Leu Phe His Leu Phe Phe Met Pro Ser Ile
        275                 280                 285
Leu Thr Ser Leu Leu Val Phe Phe Val Ser Glu Leu Val Gly Gly Phe
    290                 295                 300
Gly Ile Ala Ile Val Val Phe Met Asn His Tyr Pro Leu Glu Lys Ile
305                 310                 315                 320
Gly Asp Ser Val Trp Asp Gly His Gly Phe Ser Val Gly Gln Ile His
                325                 330                 335
Glu Thr Met Asn Ile Arg Arg Gly Ile Ile Thr Asp Trp Phe Phe Gly
            340                 345                 350
Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu Trp Pro Thr Leu Pro Arg
        355                 360                 365
His Asn Leu Thr Ala Val Ser Tyr Gln Val Glu Gln Leu Cys Gln Lys
    370                 375                 380
His Asn Leu Pro Tyr Arg Asn Pro Leu Pro His Glu Gly Leu Val Ile
385                 390                 395                 400
Leu Leu Arg Tyr Leu Ala Val Phe Ala Arg Met Ala Glu Lys Gln Pro
                405                 410                 415
Ala Gly Lys Ala Leu
            420
<210>3
<211>777
<212>DNA
<213>绿光等鞭金藻(Isochrysis galbana)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(777)
<223>Δ9延伸酶
<400>3
atg gcc ctc gca aac gac gcg gga gag cgc atc tgg gcg gct gtg acc     48
Met Ala Leu Ala Asn Asp Ala Gly Glu Arg Ile Trp Ala Ala Val Thr
1               5                   10                  15
gac ccg gaa atc ctc att ggc acc ttc tcg tac ttg cta ctc aaa ccg     96
Asp Pro Glu Ile Leu Ile Gly Thr Phe Ser Tyr Leu Leu Leu Lys Pro
            20                  25                  30
ctg ctc cgc aat tcc ggg ctg gtg gat gag aag aag ggc gca tac agg    144
Leu Leu Arg Asn Ser Gly Leu Val Asp Glu Lys Lys Gly Ala Tyr Arg
        35                  40                  45
acg tcc atg atc tgg tac aac gtt ctg ctg gcg ctc ttc tct gcg ctg    192
Thr Ser Met Ile Trp Tyr Asn Val Leu Leu Ala Leu Phe Ser Ala Leu
    50                  55                  60
agc ttc tac gtg acg gcg acc gcc ctc ggc tgg gac tat ggt acg ggc    240
Ser Phe Tyr Val Thr Ala Thr Ala Leu Gly Trp Asp Tyr Gly Thr Gly
65                  70                  75                  80
gcg tgg ctg cgc agg caa acc ggc gac aca ccg cag ccg ctc ttc cag    288
Ala Trp Leu Arg Arg Gln Thr Gly Asp Thr Pro Gln Pro Leu Phe Gln
                85                  90                  95
tgc ccg tcc ccg gtt tgg gac tcg aag ctc ttc aca tgg acc gcc aag    336
Cys Pro Ser Pro Val Trp Asp Ser Lys Leu Phe Thr Trp Thr Ala Lys
            100                 105                 110
gca ttc tat tac tcc aag tac gtg gag tac ctc gac acg gcc tgg ctg    384
Ala Phe Tyr Tyr Ser Lys Tyr Val Glu Tyr Leu Asp Thr Ala Trp Leu
        115                 120                 125
agg gtc tcc ttt ctc cag gcc ttc cac cac ttt ggc gcg ccg tgg gat    432
Arg Val Ser Phe Leu Gln Ala Phe His His Phe Gly Ala Pro Trp Asp
    130                 135                 140
gtg tac ctc ggc att cgg ctg cac aac gag ggc gta tgg atc ttc atg    480
Val Tyr Leu Gly Ile Arg Leu His Asn Glu Gly Val Trp Ile Phe Met
145                 150                 155                 160
ttt ttc aac tcg ttc att cac acc atc atg tac acc tac tac ggc ctc    528
Phe Phe Asn Ser Phe Ile His Thr Ile Met Tyr Thr Tyr Tyr Gly Leu
                165                 170                 175
acc gcc gcc ggg tat aag ttc aag gcc aag ccg ctc atc acc gcg atg    576
Thr Ala Ala Gly Tyr Lys Phe Lys Ala Lys Pro Leu Ile Thr Ala Met
            180                 185                 190
cag atc tgc cag ttc gtg ggc ggc ttc ctg ttg gtc tgg gac tac atc    624
Gln Ile Cys Gln Phe Val Gly Gly Phe Leu Leu Val Trp Asp Tyr Ile
        195                 200                 205
aac gtc ccc tgc ttc aac tcg gac aaa ggg aag ttg ttc agc tgg gct    672
Asn Val Pro Cys Phe Asn Ser Asp Lys Gly Lys Leu Phe Ser Trp Ala
    210                 215                 220
ttc aac tat gca tac gtc ggc tcg gtc ttc ttg ctc ttc tgc cac ttt    720
Phe Asn Tyr Ala Tyr Val Gly Ser Val Phe Leu Leu Phe Cys His Phe
225                 230                 235                 240
ttc tac cag gac aac ttg gca acg aag aaa tcg gcc aag gcg ggc aag    768
Phe Tyr Gln Asp Asn Leu Ala Thr Lys Lys Ser Ala Lys Ala Gly Lys
               245                 250                 255
cag ctc tag                                                       777
Gln Leu
<210>4
<211>258
<212>PRT
<213>绿光等鞭金藻
<400>4
Met Ala Leu Ala Asn Asp Ala Gly Glu Arg Ile Trp Ala Ala Val Thr
1               5                   10                  15
Asp Pro Glu Ile Leu Ile Gly Thr Phe Ser Tyr Leu Leu Leu Lys Pro
            20                  25                  30
Leu Leu Arg Asn Ser Gly Leu Val Asp Glu Lys Lys Gly Ala Tyr Arg
        35                  40                  45
Thr Ser Met Ile Trp Tyr Asn Val Leu Leu Ala Leu Phe Ser Ala Leu
    50                  55                  60
Ser Phe Tyr Val Thr Ala Thr Ala Leu Gly Trp Asp Tyr Gly Thr Gly
65                  70                  75                  80
Ala Trp Leu Arg Arg Gln Thr Gly Asp Thr Pro Gln Pro Leu Phe Gln
                85                  90                  95
Cys Pro Ser Pro Val Trp Asp Ser Lys Leu Phe Thr Trp Thr Ala Lys
            100                 105                 110
Ala Phe Tyr Tyr Ser Lys Tyr Val Glu Tyr Leu Asp Thr Ala Trp Leu
        115                 120                 125
Arg Val Ser Phe Leu Gln Ala Phe His His Phe Gly Ala Pro Trp Asp
    130                 135                 140
Val Tyr Leu Gly Ile Arg Leu His Asn Glu Gly Val Trp Ile Phe Met
145                 150                 155                 160
Phe Phe Asn Ser Phe Ile His Thr Ile Met Tyr Thr Tyr Tyr Gly Leu
                165                 170                 175
Thr Ala Ala Gly Tyr Lys Phe Lys Ala Lys Pro Leu Ile Thr Ala Met
            180                 185                 190
Gln Ile Cys Gln Phe Val Gly Gly Phe Leu Leu Val Trp Asp Tyr Ile
        195                 200                 205
Asn Val Pro Cys Phe Asn Ser Asp Lys Gly Lys Leu Phe Ser Trp Ala
    210                 215                 220
Phe Asn Tyr Ala Tyr Val Gly Ser Val Phe Leu Leu Phe Cys His Phe
225                 230                 235                 240
Phe Tyr Gln Asp Asn Leu Ala Thr Lys Lys Ser Ala Lys Ala Gly Lys
                 245                 250                 255
Gln Leu
<210>5
<211>1410
<212>DNA
<213>三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1410)
<223>Δ5去饱和酶
<400>5
atg gct ccg gat gcg gat aag ctt cga caa cgc cag acg act gcg gta    48
Met Ala Pro Asp Ala Asp Lys Leu Arg Gln Arg Gln Thr Thr Ala Val
1               5                   10                  15
gcg aag cac aat gct gct acc ata tcg acg cag gaa cgc ctt tgc agt     96
Ala Lys His Asn Ala Ala Thr Ile Ser Thr Gln Glu Arg Leu Cys Ser
            20                  25                  30
ctg tct tcg ctc aaa ggc gaa gaa gtc tgc atc gac gga atc atc tat    144
Leu Ser Ser Leu Lys Gly Glu Glu Val Cys Ile Asp Gly Ile Ile Tyr
        35                  40                  45
gac ctc caa tca ttc gat cat ccc ggg ggt gaa acg atc aaa atg ttt    192
Asp Leu Gln Ser Phe Asp His Pro Gly Gly Glu Thr Ile Lys Met Phe
    50                  55                  60
ggt ggc aac gat gtc act gta cag tac aag atg att cac ccg tac cat    240
Gly Gly Asn Asp Val Thr Val Gln Tyr Lys Met Ile His Pro Tyr His
65                  70                  75                  80
acc gag aag cat ttg gaa aag atg aag cgt gtc ggc aag gtg acg gat    288
Thr Glu Lys His Leu Glu Lys Met Lys Arg Val Gly Lys Val Thr Asp
                85                  90                  95
ttc gtc tgc gag tac aag ttc gat acc gaa ttt gaa cgc gaa atc aaa    336
Phe Val Cys Glu Tyr Lys Phe Asp Thr Glu Phe Glu Arg Glu Ile Lys
            100                 105                 110
cga gaa gtc ttc aag att gtg cga cga ggc aag gat ttc ggt act ttg    384
Arg Glu Val Phe Lys Ile Val Arg Arg Gly Lys Asp Phe Gly Thr Leu
        115                 120                 125
gga tgg ttc ttc cgt gcg ttt tgc tac att gcc att ttc ttc tac ctg    432
Gly Trp Phe Phe Arg Ala Phe Cys Tyr Ile Ala Ile Phe Phe Tyr Leu
    130                 135                 140
cag tac cat tgg gtc acc acg gga acc tct tgg ctg ctg gcc gtg gcc    480
Gln Tyr His Trp Val Thr Thr Gly Thr Ser Trp Leu Leu Ala Val Ala
145                 150                 155                 160
tac gga atc tcc caa gcg atg att ggc atg aat gtc cag cac gat gcc    528
Tyr Gly Ile Ser Gln Ala Met Ile Gly Met Asn Val Gln His Asp Ala
                165                 170                 175
aac cac ggg gcc acc tcc aag cgt ccc tgg gtc aac gac atg cta ggc    576
Asn His Gly Ala Thr Ser Lys Arg Pro Trp Val Asn Asp Met Leu Gly
            180                 185                 190
ctc ggt gcg gat ttt att ggt ggt tcc aag tgg ctc tgg cag gaa caa     624
Leu Gly Ala Asp Phe Ile Gly Gly Ser Lys Trp Leu Trp Gln Glu Gln
        195                 200                 205
cac tgg acc cac cac gct tac acc aat cac gcc gag atg gat ccc gat     672
His Trp Thr His His Ala Tyr Thr Asn His Ala Glu Met Asp Pro Asp
    210                 215                 220
agc ttt ggt gcc gaa cca atg ctc cta ttc aac gac tat ccc ttg gat     720
Ser Phe Gly Ala Glu Pro Met Leu Leu Phe Asn Asp Tyr Pro Leu Asp
225                 230                 235                 240
cat ccc gct cgt acc tgg cta cat cgc ttt caa gca ttc ttt tac atg     768
His Pro Ala Arg Thr Trp Leu His Arg Phe Gln Ala Phe Phe Tyr Met
                245                 250                 255
ccc gtc ttg gct gga tac tgg ttg tcc gct gtc ttc aat cca caa att     816
Pro Val Leu Ala Gly Tyr Trp Leu Ser Ala Val Phe Asn Pro Gln Ile
            260                 265                 270
ctt gac ctc cag caa cgc ggc gca ctt tcc gtc ggt atc cgt ctc gac     864
Leu Asp Leu Gln Gln Arg Gly Ala Leu Ser Val Gly Ile Arg Leu Asp
        275                 280                 285
aac gct ttc att cac tcg cga cgc aag tat gcg gtt ttc tgg cgg gct     912
Asn Ala Phe Ile His Ser Arg Arg Lys Tyr Ala Val Phe Trp Arg Ala
    290                 295                 300
gtg tac att gcg gtg aac gtg att gct ccg ttt tac aca aac tcc ggc     960
Val Tyr Ile Ala Val Asn Val Ile Ala Pro Phe Tyr Thr Asn Ser Gly
305                 310                 315                 320
ctc gaa tgg tcc tgg cgt gtc ttt gga aac atc atg ctc atg ggt gtg    1008
Leu Glu Trp Ser Trp Arg Val Phe Gly Asn Ile Met Leu Met Gly Val
                325                 330                 335
gcg gaa tcg ctc gcg ctg gcg gtc ctg ttt tcg ttg tcg cac aat ttc    1056
Ala Glu Ser Leu Ala Leu Ala Val Leu Phe Ser Leu Ser His Asn Phe
            340                 345                 350
gaa tcc gcg gat cgc gat ccg acc gcc cca ctg aaa aag acg gga gaa    1104
Glu Ser Ala Asp Arg Asp Pro Thr Ala Pro Leu Lys Lys Thr Gly Glu
        355                 360                 365
cca gtc gac tgg ttc aag aca cag gtc gaa act tcc tgc act tac ggt    1152
Pro Val Asp Trp Phe Lys Thr Gln Val Glu Thr Ser Cys Thr Tyr Gly
    370                 375                 380
gga ttc ctt tcc ggt tgc ttc acg gga ggt ctc aac ttt cag gtt gaa    1200
Gly Phe Leu Ser Gly Cys Phe Thr Gly Gly Leu Asn Phe Gln Val Glu
385                 390                 395                 400
cac cac ttg ttc cca cgc atg agc agc gct tgg tat ccc tac att gcc    1248
His His Leu Phe Pro Arg Met Ser Ser Ala Trp Tyr Pro Tyr Ile Ala
                405                 410                 415
ccc aag gtc cgc gaa att tgc gcc aaa cac ggc gtc cac tac gcc tac    1296
Pro Lys Val Arg Glu Ile Cys Ala Lys His Gly Val His Tyr Ala Tyr
            420                 425                 430
tac ccg tgg atc cac caa aac ttt ctc tcc acc gtc cgc tac atg cac    1344
Tyr Pro Trp Ile His Gln Asn Phe Leu Ser Thr Val Arg Tyr Met His
        435                 440                 445
gcg gcc ggg acc ggt gcc aac tgg cgc cag atg gcc aga gaa aat ccc    1392
Ala Ala Gly Thr Gly Ala Asn Trp Arg Gln Met Ala Arg Glu Asn Pro
    450                 455                 460
ttg acc gga cgg gcg taa                                            1410
Leu Thr Gly Arg Ala
465
<210>6
<211>469
<212>PRT
<213>三角褐指藻
<400>6
Met Ala Pro Asp Ala Asp Lys Leu Arg Gln Arg Gln Thr Thr Ala Val
1               5                   10                  15
Ala Lys His Asn Ala Ala Thr Ile Ser Thr Gln Glu Arg Leu Cys Ser
            20                  25                  30
Leu Ser Ser Leu Lys Gly Glu Glu Val Cys Ile Asp Gly Ile Ile Tyr
        35                  40                  45
Asp Leu Gln Ser Phe Asp His Pro Gly Gly Glu Thr Ile Lys Met Phe
    50                  55                  60
Gly Gly Asn Asp Val Thr Val Gln Tyr Lys Met Ile His Pro Tyr His
65                  70                  75                  80
Thr Glu Lys His Leu Glu Lys Met Lys Arg Val Gly Lys Val Thr Asp
                85                  90                  95
Phe Val Cys Glu Tyr Lys Phe Asp Thr Glu Phe Glu Arg Glu Ile Lys
            100                 105                 110
Arg Glu Val Phe Lys Ile Val Arg Arg Gly Lys Asp Phe Gly Thr Leu
        115                 120                 125
Gly Trp Phe Phe Arg Ala Phe Cys Tyr Ile Ala Ile Phe Phe Tyr Leu
    130                 135                 140
Gln Tyr His Trp Val Thr Thr Gly Thr Ser Trp Leu Leu Ala Val Ala
145                 150                 155                 160
Tyr Gly Ile Ser Gln Ala Met Ile Gly Met Asn Val Gln His Asp Ala
                165                 170                 175
Asn His Gly Ala Thr Ser Lys Arg Pro Trp Val Asn Asp Met Leu Gly
            180                 185                 190
Leu Gly Ala Asp Phe Ile Gly Gly Ser Lys Trp Leu Trp Gln Glu Gln
        195                 200                 205
His Trp Thr His His Ala Tyr Thr Asn His Ala Glu Met Asp Pro Asp
    210                 215                 220
Ser Phe Gly Ala Glu Pro Met Leu Leu Phe Asn Asp Tyr Pro Leu Asp
225                 230                 235                 240
His Pro Ala Arg Thr Trp Leu His Arg Phe Gln Ala Phe Phe Tyr Met
                245                 250                 255
Pro Val Leu Ala Gly Tyr Trp Leu Ser Ala Val Phe Asn Pro Gln Ile
            260                 265                 270
Leu Asp Leu Gln Gln Arg Gly Ala Leu Ser Val Gly Ile Arg Leu Asp
        275                 280                 285
Asn Ala Phe Ile His Ser Arg Arg Lys Tyr Ala Val Phe Trp Arg Ala
    290                 295                 300
Val Tyr Ile Ala Val Asn Val Ile Ala Pro Phe Tyr Thr Asn Ser Gly
305                 310                 315                 320
Leu Glu Trp Ser Trp Arg Val Phe Gly Asn Ile Met Leu Met Gly Val
                325                 330                 335
Ala Glu Ser Leu Ala Leu Ala Val Leu Phe Ser Leu Ser His Asn Phe
            340                 345                 350
Glu Ser Ala Asp Arg Asp Pro Thr Ala Pro Leu Lys Lys Thr Gly Glu
        355                 360                 365
Pro Val Asp Trp Phe Lys Thr Gln Val Glu Thr Ser Cys Thr Tyr Gly
    370                 375                 380
Gly Phe Leu Ser Gly Cys Phe Thr Gly Gly Leu Asn Phe Gln Val Glu
385                 390                 395                 400
His His Leu Phe Pro Arg Met Ser Ser Ala Trp Tyr Pro Tyr Ile Ala
                405                 410                 415
Pro Lys Val Arg Glu Ile Cys Ala Lys His Gly Val His Tyr Ala Tyr
            420                 425                 430
Tyr Pro Trp Ile His Gln Asn Phe Leu Ser Thr Val Arg Tyr Met His
        435                 440                 445
Ala Ala Gly Thr Gly Ala Asn Trp Arg Gln Met Ala Arg Glu Asn Pro
    450                 455                 460
Leu Thr Gly Arg Ala
465
<210>7
<211>1344
<212>DNA
<213>角齿藓(Ceratodon purpureus)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1344)
<223>Δ5去饱和酶
<400>7
atg gta tta cga gag caa gag cat gag cca ttc ttc att aaa att gat     48
Met Val Leu Arg Glu Gln Glu His Glu Pro Phe Phe Ile Lys Ile Asp
1               5                   10                  15
gga aaa tgg tgt caa att gac gat gct gtc ctg aga tca cat cca ggt     96
Gly Lys Trp Cys Gln Ile Asp Asp Ala Val Leu Arg Ser His Pro Gly
            20                  25                  30
ggt agt gca att act acc tat aaa aat atg gat gcc act acc gta ttc    144
Gly Ser Ala Ile Thr Thr Tyr Lys Asn Met Asp Ala Thr Thr Val Phe
        35                  40                  45
cac aca ttc cat act ggt tct aaa gaa gcg tat caa tgg ctg aca gaa    192
His Thr Phe His Thr Gly Ser Lys Glu Ala Tyr Gln Trp Leu Thr Glu
    50                  55                  60
ttg aaa aaa gag tgc cct aca caa gaa cca gag atc cca gat att aag    240
Leu Lys Lys Glu Cys Pro Thr Gln Glu Pro Glu Ile Pro Asp Ile Lys
65                  70                  75                  80
gat gac cca atc aaa gga att gat gat gtg aac atg gga act ttc aat    288
Asp Asp Pro Ile Lys Gly Ile Asp Asp Val Asn Met Gly Thr Phe Asn
                85                  90                  95
att tct gag aaa cga tct gcc caa ata aat aaa agt ttc act gat cta    336
Ile Ser Glu Lys Arg Ser Ala Gln Ile Asn Lys Ser Phe Thr Asp Leu
            100                 105                 110
cgt atg cga gtt cgt gca gaa gga ctt atg gat gga tct cct ttg ttc    384
Arg Met Arg Val Arg Ala Glu Gly Leu Met Asp Gly Ser Pro Leu Phe
        115                 120                 125
tac att aga aaa att ctt gaa aca atc ttc aca att ctt ttt gca ttc    432
Tyr Ile Arg Lys Ile Leu Glu Thr Ile Phe Thr Ile Leu Phe Ala Phe
    130                 135                 140
tac ctt caa tac cac aca tat tat ctt cca tca gct att cta atg gga    480
Tyr Leu Gln Tyr His Thr Tyr Tyr Leu Pro Ser Ala Ile Leu Met Gly
145                 150                 155                 160
gtt gcg tgg caa caa ttg gga tgg tta atc cat gaa ttc gca cat cat    528
Val Ala Trp Gln Gln Leu Gly Trp Leu Ile His Glu Phe Ala His His
                165                 170                 175
cag ttg ttc aaa aac aga tac tac aat gat ttg gcc agc tat ttc gtt    576
Gln Leu Phe Lys Asn Arg Tyr Tyr Asn Asp Leu Ala Ser Tyr Phe Val
            180                 185                 190
gga aac ttt tta caa gga ttc tca tct ggt ggt tgg aaa gag cag cac    624
Gly Asn Phe Leu Gln Gly Phe Ser Ser Gly Gly Trp Lys Glu Gln His
        195                 200                 205
aat gtg cat cac gca gcc aca aat gtt gtt gga cga gac gga gat ctt    672
Asn Val His His Ala Ala Thr Asn Val Val Gly Arg Asp Gly Asp Leu
    210                 215                 220
gat tta gtc cca ttc tat gct aca gtg gca gaa cat ctc aac aat tat    720
Asp Leu Val Pro Phe Tyr Ala Thr Val Ala Glu His Leu Asn Asn Tyr
225                 230                 235                 240
tct cag gat tca tgg gtt atg act cta ttc aga tgg caa cat gtt cat    768
Ser Gln Asp Ser Trp Val Met Thr Leu Phe Arg Trp Gln His Val His
                245                 250                 255
tgg aca ttc atg tta cca ttc ctc cgt ctc tcg tgg ctt ctt cag tca    816
Trp Thr Phe Met Leu Pro Phe Leu Arg Leu Ser Trp Leu Leu Gln Ser
            260                 265                 270
atc att ttt gtt agt cag atg cca act cat tat tat gac tat tac aga    864
Ile Ile Phe Val Ser Gln Met Pro Thr His Tyr Tyr Asp Tyr Tyr Arg
        275                 280                 285
aat act gcg att tat gaa cag gtt ggt ctc tct ttg cac tgg gct tgg     912
Asn Thr Ala Ile Tyr Glu Gln Val Gly Leu Ser Leu His Trp Ala Trp
    290                 295                 300
tca ttg ggt caa ttg tat ttc cta ccc gat tgg tca act aga ata atg     960
Ser Leu Gly Gln Leu Tyr Phe Leu Pro Asp Trp Ser Thr Arg Ile Met
305                 310                 315                 320
ttc ttc ctt gtt tct cat ctt gtt gga ggt ttc ctg ctc tct cat gta    1008
Phe Phe Leu Val Ser His Leu Val Gly Gly Phe Leu Leu Ser His Val
                325                 330                 335
gtt act ttc aat cat tat tca gtg gag aag ttt gca ttg agc tcg aac    1056
Val Thr Phe Asn His Tyr Ser Val Glu Lys Phe Ala Leu Ser Ser Asn
            340                 345                 350
atc atg tca aat tac gct tgt ctt caa atc atg acc aca aga aat atg    1104
Ile Met Ser Asn Tyr Ala Cys Leu Gln Ile Met Thr Thr Arg Asn Met
        355                 360                 365
aga cct gga aga ttc att gac tgg ctt tgg gga ggt ctt aac tat cag    1152
Arg Pro Gly Arg Phe Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln
    370                 375                 380
att gag cac cat ctt ttc cca acg atg cca cga cac aac ttg aac act    1200
Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Thr
385                 390                 395                 400
gtt atg cca ctt gtt aag gag ttt gca gca gca aat ggt tta cca tac    1248
Val Met Pro Leu Val Lys Glu Phe Ala Ala Ala Asn Gly Leu Pro Tyr
                405                 410                 415
atg gtc gac gat tat ttc aca gga ttc tgg ctt gaa att gag caa ttc    1296
Met Val Asp Asp Tyr Phe Thr Gly Phe Trp Leu Glu Ile Glu Gln Phe
            420                 425                 430
cga aat att gca aat gtt gct gct aaa ttg act aaa aag att gcc tag    1344
Arg Asn Ile Ala Asn Val Ala Ala Lys Leu Thr Lys Lys Ile Ala
        435                 440                 445
<210>8
<211>447
<212>PRT
<213>角齿藓
<400>8
Met Val Leu Arg Glu Gln Glu His Glu Pro Phe Phe Ile Lys Ile Asp
1               5                   10                  15
Gly Lys Trp Cys Gln Ile Asp Asp Ala Val Leu Arg Ser His Pro Gly
            20                  25                  30
Gly Ser Ala Ile Thr Thr Tyr Lys Asn Met Asp Ala Thr Thr Val Phe
        35                  40                  45
His Thr Phe His Thr Gly Ser Lys Glu Ala Tyr Gln Trp Leu Thr Glu
    50                  55                  60
Leu Lys Lys Glu Cys Pro Thr Gln Glu Pro Glu Ile Pro Asp Ile Lys
65                  70                  75                  80
Asp Asp Pro Ile Lys Gly Ile Asp Asp Val Asn Met Gly Thr Phe Asn
                85                  90                  95
Ile Ser Glu Lys Arg Ser Ala Gln Ile Asn Lys Ser Phe Thr Asp Leu
            100                 105                 110
Arg Met Arg Val Arg Ala Glu Gly Leu Met Asp Gly Ser Pro Leu Phe
        115                 120                 125
Tyr Ile Arg Lys Ile Leu Glu Thr Ile Phe Thr Ile Leu Phe Ala Phe
    130                 135                 140
Tyr Leu Gln Tyr His Thr Tyr Tyr Leu Pro Ser Ala Ile Leu Met Gly
145                 150                 155                 160
Val Ala Trp Gln Gln Leu Gly Trp Leu Ile His Glu Phe Ala His His
                165                 170                 175
Gln Leu Phe Lys Asn Arg Tyr Tyr Asn Asp Leu Ala Ser Tyr Phe Val
            180                 185                 190
Gly Asn Phe Leu Gln Gly Phe Ser Ser Gly Gly Trp Lys Glu Gln His
        195                 200                 205
Asn Val His His Ala Ala Thr Asn Val Val Gly Arg Asp Gly Asp Leu
    210                 215                 220
Asp Leu Val Pro Phe Tyr Ala Thr Val Ala Glu His Leu Asn Asn Tyr
225                 230                 235                 240
Ser Gln Asp Ser Trp Val Met Thr Leu Phe Arg Trp Gln His Val His
                245                 250                 255
Trp Thr Phe Met Leu Pro Phe Leu Arg Leu Ser Trp Leu Leu Gln Ser
            260                 265                 270
Ile Ile Phe Val Ser Gln Met Pro Thr His Tyr Tyr Asp Tyr Tyr Arg
        275                 280                 285
Asn Thr Ala Ile Tyr Glu Gln Val Gly Leu Ser Leu His Trp Ala Trp
    290                 295                 300
Ser Leu Gly Gln Leu Tyr Phe Leu Pro Asp Trp Ser Thr Arg Ile Met
305                 310                 315                 320
Phe Phe Leu Val Ser His Leu Val Gly Gly Phe Leu Leu Ser His Val
                325                 330                 335
Val Thr Phe Asn His Tyr Ser Val Glu Lys Phe Ala Leu Ser Ser Asn
            340                 345                 350
Ile Met Ser Asn Tyr Ala Cys Leu Gln Ile Met Thr Thr Arg Asn Met
        355                 360                 365
Arg Pro Gly Arg Phe Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln
    370                 375                 380
Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Thr
385                 390                 395                 400
Val Met Pro Leu Val Lys Glu Phe Ala Ala Ala Asn Gly Leu Pro Tyr
                405                 410                 415
Met Val Asp Asp Tyr Phe Thr Gly Phe Trp Leu Glu Ile Glu Gln Phe
            420                 425                 430
Arg Asn Ile Ala Asn Val Ala Ala Lys Leu Thr Lys Lys Ile Ala
        435                 440                 445
<210>9
<211>1443
<212>DNA
<213>展叶剑叶藓(Physcomitrella patens)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1443)
<223>Δ5去饱和酶
<400>9
atg gcg ccc cac tct gcg gat act gct ggg ctc gtg cct tct gac gaa     48
Met Ala Pro His Ser Ala Asp Thr Ala Gly Leu Val Pro Ser Asp Glu
1               5                   10                  15
ttg agg cta cga acg tcg aat tca aag ggt ccc gaa caa gag caa act     96
Leu Arg Leu Arg Thr Ser Asn Ser Lys Gly Pro Glu Gln Glu Gln Thr
            20                  25                  30
ttg aag aag tac acc ctt gaa gat gtc agc cgc cac aac acc cca gca    144
Leu Lys Lys Tyr Thr Leu Glu Asp Val Ser Arg His Asn Thr Pro Ala
        35                  40                  45
gat tgt tgg ttg gtg ata tgg ggc aaa gtc tac gat gtc aca agc tgg    192
Asp Cys Trp Leu Val Ile Trp Gly Lys Val Tyr Asp Val Thr Ser Trp
    50                  55                  60
att ccc aat cat ccg ggg ggc agt ctc atc cac gta aaa gca ggg cag    240
Ile Pro Asn His Pro Gly Gly Ser Leu Ile His Val Lys Ala Gly Gln
65                  70                  75                  80
gat tcc act cag ctt ttc gat tcc tat cac ccc ctt tat gtc agg aaa    288
Asp Ser Thr Gln Leu Phe Asp Ser Tyr His Pro Leu Tyr Val Arg Lys
                85                  90                  95
atg ctc gcg aag tac tgt att ggg gaa tta gta ccg tct gct ggt gat    336
Met Leu Ala Lys Tyr Cys Ile Gly Glu Leu Val Pro Ser Ala Gly Asp
            100                 105                 110
gac aag ttt aag aaa gca act ctg gag tat gca gat gcc gaa aat gaa    384
Asp Lys Phe Lys Lys Ala Thr Leu Glu Tyr Ala Asp Ala Glu Asn Glu
        115                 120                 125
gat ttc tat ttg gtt gtg aag caa cga gtt gaa tct tat ttc aag agt    432
Asp Phe Tyr Leu Val Val Lys Gln Arg Val Glu Ser Tyr Phe Lys Ser
    130                 135                 140
aac aag ata aac ccc caa att cat cca cat atg atc ctg aag tca ttg    480
Asn Lys Ile Asn Pro Gln Ile His Pro His Met Ile Leu Lys Ser Leu
145                 150                 155                 160
ttc att ctt ggg gga tat ttc gcc agt tac tat tta gcg ttc ttc tgg    528
Phe Ile Leu Gly Gly Tyr Phe Ala Ser Tyr Tyr Leu Ala Phe Phe Trp
                165                 170                 175
tct tca agt gtc ctt gtt tct ttg ttt ttc gca ttg tgg atg ggg ttc    576
Ser Ser Ser Val Leu Val Ser Leu Phe Phe Ala Leu Trp Met Gly Phe
            180                 185                 190
ttc gca gcg gaa gtc ggc gtg tcg att caa cat gat gga aat cat ggt    624
Phe Ala Ala Glu Val Gly Val Ser Ile Gln His Asp Gly Asn His Gly
        195                 200                 205
tca tac act aaa tgg cgt ggc ttt gga tat atc atg gga gcc tcc cta    672
Ser Tyr Thr Lys Trp Arg Gly Phe Gly Tyr Ile Met Gly Ala Ser Leu
    210                 215                 220
gat cta gtc gga gcc agt agc ttc atg tgg aga cag caa cac gtt gtg    720
Asp Leu Val Gly Ala Ser Ser Phe Met Trp Arg Gln Gln His Val Val
225                 230                 235                 240
gga cat cac tcg ttt aca aat gtg gac aac tac gat cct gat att cgt    768
Gly His His Ser Phe Thr Asn Val Asp Asn Tyr Asp Pro Asp Ile Arg
                245                 250                 255
gtg aaa gat cca gat gtc agg agg gtt gcg acc aca caa cca aga caa    816
Val Lys Asp Pro Asp Val Arg Arg Val Ala Thr Thr Gln Pro Arg Gln
            260                 265                 270
tgg tat cat gcg tat cag cat atc tac ctg gca gta tta tat gga act     864
Trp Tyr His Ala Tyr Gln His Ile Tyr Leu Ala Val Leu Tyr Gly Thr
        275                 280                 285
cta gct ctt aag agt att ttt cta gat gat ttc ctt gcg tac ttc aca     912
Leu Ala Leu Lys Ser Ile Phe Leu Asp Asp Phe Leu Ala Tyr Phe Thr
    290                 295                 300
gga tca att ggc cct gtc aag gtg gcg aaa atg acc ccc ctg gag ttc     960
Gly Ser Ile Gly Pro Val Lys Val Ala Lys Met Thr Pro Leu Glu Phe
305                 310                 315                 320
aac atc ttc ttt cag gga aag ctg cta tat gcg ttc tac atg ttc gtg    1008
Asn Ile Phe Phe Gln Gly Lys Leu Leu Tyr Ala Phe Tyr Met Phe Val
                325                 330                 335
ttg cca tct gtg tac ggt gtt cac tcc gga gga act ttc ttg gca cta    1056
Leu Pro Ser Val Tyr Gly Val His Ser Gly Gly Thr Phe Leu Ala Leu
            340                 345                 350
tat gtg gct tct cag ctc att aca ggt tgg atg tta gct ttt ctt ttt    1104
Tyr Val Ala Ser Gln Leu Ile Thr Gly Trp Met Leu Ala Phe Leu Phe
        355                 360                 365
caa gta gca cat gtc gtg gat gat gtt gca ttt cct aca cca gaa ggt    1152
Gln Val Ala His Val Val Asp Asp Val Ala Phe Pro Thr Pro Glu Gly
    370                 375                 380
ggg aag gtg aag gga gga tgg gct gca atg cag gtt gca aca act acg    1200
Gly Lys Val Lys Gly Gly Trp Ala Ala Met Gln Val Ala Thr Thr Thr
385                 390                 395                 400
gat ttc agt cca cgc tca tgg ttc tgg ggt cat gtc tct gga gga tta    1248
Asp Phe Ser Pro Arg Ser Trp Phe Trp Gly His Val Ser Gly Gly Leu
                405                 410                 415
aac aac caa att gag cat cat ctg ttt cca gga gtg tgc cat gtt cat    1296
Asn Asn Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Gly Val Cys His Val His
            420                 425                 430
tat cca gcc att cag cct att gtc gag aag acg tgc aag gaa ttc gat    1344
Tyr Pro Ala Ile Gln Pro Ile Val Glu Lys Thr Cys Lys Glu Phe Asp
        435                 440                 445
gtg cct tat gta gcc tac cca act ttt tgg act gcg ttg aga gcc cac    1392
Val Pro Tyr Val Ala Tyr Pro Thr Phe Trp Thr Ala Leu Arg Ala His
    450                 455                 460
ttt gcg cat ttg aaa aag gtt gga ttg aca gag ttt cgg ctc gat ggc    1440
Phe Ala His Leu Lys Lys Val Gly Leu Thr Glu Phe Arg Leu Asp Gly
465                 470                 475                 480
tga                                                                1443
<210>10
<211>480
<212>PRT
<213>展叶剑叶藓
<400>10
Met Ala Pro His Ser Ala Asp Thr Ala Gly Leu Val Pro Ser Asp Glu
1               5                   10                  15
Leu Arg Leu Arg Thr Ser Asn Ser Lys Gly Pro Glu Gln Glu Gln Thr
            20                  25                  30
Leu Lys Lys Tyr Thr Leu Glu Asp Val Ser Arg His Asn Thr Pro Ala
        35                  40                  45
Asp Cys Trp Leu Val Ile Trp Gly Lys Val Tyr Asp Val Thr Ser Trp
    50                  55                  60
Ile Pro Asn His Pro Gly Gly Ser Leu Ile His Val Lys Ala Gly Gln
65                  70                  75                  80
Asp Ser Thr Gln Leu Phe Asp Ser Tyr His Pro Leu Tyr Val Arg Lys
                85                  90                  95
Met Leu Ala Lys Tyr Cys Ile Gly Glu Leu Val Pro Ser Ala Gly Asp
            100                 105                 110
Asp Lys Phe Lys Lys Ala Thr Leu Glu Tyr Ala Asp Ala Glu Asn Glu
        115                 120                 125
Asp Phe Tyr Leu Val Val Lys Gln Arg Val Glu Ser Tyr Phe Lys Ser
    130                 135                 140
Asn Lys Ile Asn Pro Gln Ile His Pro His Met Ile Leu Lys Ser Leu
145                 150                 155                 160
Phe Ile Leu Gly Gly Tyr Phe Ala Ser Tyr Tyr Leu Ala Phe Phe Trp
                165                 170                 175
Ser Ser Ser Val Leu Val Ser Leu Phe Phe Ala Leu Trp Met Gly Phe
            180                 185                 190
Phe Ala Ala Glu Val Gly Val Ser Ile Gln His Asp Gly Asn His Gly
        195                 200                 205
Ser Tyr Thr Lys Trp Arg Gly Phe Gly Tyr Ile Met Gly Ala Ser Leu
    210                 215                 220
Asp Leu Val Gly Ala Ser Ser Phe Met Trp Arg Gln Gln His Val Val
225                 230                 235                 240
Gly His His Ser Phe Thr Asn Val Asp Asn Tyr Asp Pro AspIle Arg
                245                 250                 255
Val Lys Asp Pro Asp Val Arg Arg Val Ala Thr Thr Gln Pro Arg Gln
            260                 265                 270
Trp Tyr His Ala Tyr Gln His Ile Tyr Leu Ala Val Leu Tyr Gly Thr
        275                 280                 285
Leu Ala Leu Lys Ser Ile Phe Leu Asp Asp Phe Leu Ala Tyr Phe Thr
    290                 295                 300
Gly Ser Ile Gly Pro Val Lys Val Ala Lys Met Thr Pro Leu Glu Phe
305                 310                 315                 320
Asn Ile Phe Phe Gln Gly Lys Leu Leu Tyr Ala Phe Tyr Met Phe Val
                325                 330                 335
Leu Pro Ser Val Tyr Gly Val His Ser Gly Gly Thr Phe Leu Ala Leu
            340                 345                 350
Tyr Val Ala Ser Gln Leu Ile Thr Gly Trp Met Leu Ala Phe Leu Phe
        355                 360                 365
Gln Val Ala His Val Val Asp Asp Val Ala Phe Pro Thr Pro Glu Gly
    370                 375                 380
Gly Lys Val Lys Gly Gly Trp Ala Ala Met Gln Val Ala Thr Thr Thr
385                 390                 395                 400
Asp Phe Ser Pro Arg Ser Trp Phe Trp Gly His Val Ser Gly Gly Leu
                405                 410                 415
Asn Asn Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Gly Val Cys His Val His
            420                 425                 430
Tyr Pro Ala Ile Gln Pro Ile Val Glu Lys Thr Cys Lys Glu Phe Asp
        435                 440                 445
Val Pro Tyr Val Ala Tyr Pro Thr Phe Trp Thr Ala Leu Arg Ala His
    450                 455                 460
Phe Ala His Leu Lys Lys Val Gly Leu Thr Glu Phe Arg Leu Asp Gly
465                 470                 475                 480
<210>11
<211>1320
<212>DNA
<213>破囊壶菌(Thraustrochytrium)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1320)
<223>
<400>11
atg ggc aag ggc agc gag ggc cgc agc gcg gcg cgc gag atg acg gcc    48
Met Gly Lys Gly Ser Glu Gly Arg Ser Ala Ala Arg Glu Met Thr Ala
1               5                   10                  15
gag gcg aac ggc gac aag cgg aaa acg att ctg atc gag ggc gtc ctg    96
Glu Ala Asn Gly Asp Lys Arg Lys Thr Ile Leu Ile Glu Gly Val Leu
            20                  25                  30
tac gac gcg acg aac ttt aag cac ccg ggc ggt tcg atc atc aac ttc    144
Tyr Asp Ala Thr Asn Phe Lys His Pro Gly Gly Ser Ile Ile Asn Phe
        35                  40                  45
ttg acc gag ggc gag gcc ggc gtg gac gcg acg cag gcg tac cgc gag    192
Leu Thr Glu Gly Glu Ala Gly Val Asp Ala Thr Gln Ala Tyr Arg Glu
    50                  55                  60
ttt cat cag cgg tcc ggc aag gcc gac aag tac ctc aag tcg ctg ccg    240
Phe His Gln Arg Ser Gly Lys Ala Asp Lys Tyr Leu Lys Ser Leu Pro
65                  70                  75                  80
aag ctg gat gcg tcc aag gtg gag tcg cgg ttc tcg gcc aaa gag cag    288
Lys Leu Asp Ala Ser Lys Val Glu Ser Arg Phe Ser Ala Lys Glu Gln
                85                  90                  95
gcg cgg cgc gac gcc atg acg cgc gac tac gcg gcc ttt cgc gag gag    336
Ala Arg Arg Asp Ala Met Thr Arg Asp Tyr Ala Ala Phe Arg Glu Glu
            100                 105                 110
ctc gtc gcc gag ggg tac ttt gac ccg tcg atc ccg cac atg att tac    384
Leu Val Ala Glu Gly Tyr Phe Asp Pro Ser Ile Pro His Met Ile Tyr
        115                 120                 125
cgc gtc gtg gag atc gtg gcg ctc ttc gcg ctc tcg ttc tgg ctc atg    432
Arg Val Val Glu Ile Val Ala Leu Phe Ala Leu Ser Phe Trp Leu Met
    130                 135                 140
tcc aag gcc tcg ccc acc tcg ctc gtg ctg ggc gtg gtg atg aac ggc    480
Ser Lys Ala Ser Pro Thr Ser Leu Val Leu Gly Val Val Met Asn Gly
145                 150                 155                 160
att gcg cag ggc cgc tgc ggc tgg gtc atg cac gag atg ggc cac ggg    528
Ile Ala Gln Gly Arg Cys Gly Trp Val Met His Glu Met Gly His Gly
                165                 170                 175
tcg ttc acg ggc gtc atc tgg ctc gac gac cgg atg tgc gag ttc ttc    576
Ser Phe Thr Gly Val Ile Trp Leu Asp Asp Arg Met Cys Glu Phe Phe
            180                 185                 190
tac ggc gtc ggc tgc ggc atg agc ggg cac tac tgg aag aac cag cac    624
Tyr Gly Val Gly Cys Gly Met Ser Gly His Tyr Trp Lys Asn Gln His
        195                 200                 205
agc aag cac cac gcc gcg ccc aac cgc ctc gag cac gat gtc gat ctc     672
Ser Lys His His Ala Ala Pro Asn Arg Leu Glu His Asp Val Asp Leu
    210                 215                 220
aac acg ctg ccc ctg gtc gcc ttt aac gag cgc gtc gtg cgc aag gtc     720
Asn Thr Leu Pro Leu Val Ala Phe Asn Glu Arg Val Val Arg Lys Val
225                 230                 235                 240
aag ccg gga tcg ctg ctg gcg ctc tgg ctg cgc gtg cag gcg tac ctc     768
Lys Pro Gly Ser Leu Leu Ala Leu Trp Leu Arg Val Gln Ala Tyr Leu
                245                 250                 255
ttt gcg ccc gtc tcg tgc ctg ctc atc ggc ctt ggc tgg acg ctc tac     816
Phe Ala Pro Val Ser Cys Leu Leu Ile Gly Leu Gly Trp Thr Leu Tyr
            260                 265                 270
ctg cac ccg cgc tac atg ctg cgc acc aag cgg cac atg gag ttc gtc     864
Leu His Pro Arg Tyr Met Leu Arg Thr Lys Arg His Met Glu Phe Val
        275                 280                 285
tgg atc ttc gcg cgc tac att ggc tgg ttc tcg ctc atg ggc gct ctc     912
Trp Ile Phe Ala Arg Tyr Ile Gly Trp Phe Ser Leu Met Gly Ala Leu
    290                 295                 300
ggc tac tcg ccg ggc acc tcg gtc ggg atg tac ctg tgc tcg ttc ggc     960
Gly Tyr Ser Pro Gly Thr Ser Val Gly Met Tyr Leu Cys Ser Phe Gly
305                 310                 315                 320
ctc ggc tgc att tac att ttc ctg cag ttc gcc gtc agc cac acg cac    1008
Leu Gly Cys Ile Tyr Ile Phe Leu Gln Phe Ala Val Ser His Thr His
                325                 330                 335
ctg ccg gtg acc aac ccg gag gac cag ctg cac tgg ctc gag tac gcg    1056
Leu Pro Val Thr Asn Pro Glu Asp Gln Leu His Trp Leu Glu Tyr Ala
            340                 345                 350
gcc gac cac acg gtg aac att agc acc aag tcc tgg ctc gtc acg tgg    1104
Ala Asp His Thr Val Asn Ile Ser Thr Lys Ser Trp Leu Val Thr Trp
        355                 360                 365
tgg atg tcg aac ctg aac ttt cag atc gag cac cac ctc ttc ccc acg    1152
Trp Met Ser Asn Leu Asn Phe Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr
    370                 375                 380
gcg ccg cag ttc cgc ttc aag gaa atc agt cct cgc gtc gag gcc ctc    1200
Ala Pro Gln Phe Arg Phe Lys Glu Ile Ser Pro Arg Val Glu Ala Leu
385                 390                 395                 400
ttc aag cgc cac aac ctc ccg tac tac gac ctg ccc tac acg agc gcg    1248
Phe Lys Arg His Asn Leu Pro Tyr Tyr Asp Leu Pro Tyr Thr Ser Ala
                405                 410                 415
gtc tcg acc acc ttt gcc aat ctt tat tcc gtc ggc cac tcg gtc ggc    1296
Val Ser Thr Thr Phe Ala Asn Leu Tyr Ser Val Gly His Ser Val Gly
            420                 425                 430
gcc gac acc aag aag cag gac tga                                    1320
Ala Asp Thr Lys Lys Gln Asp
        435
<210>12
<211>439
<212>PRT
<213>破囊壶菌
<400>12
Met Gly Lys Gly Ser Glu Gly Arg Ser Ala Ala Arg Glu Met Thr Ala
1               5                   10                  15
Glu Ala Asn Gly Asp Lys Arg Lys Thr Ile Leu Ile Glu Gly Val Leu
            20                  25                  30
Tyr Asp Ala Thr Asn Phe Lys His Pro Gly Gly Ser Ile Ile Asn Phe
        35                  40                  45
Leu Thr Glu Gly Glu Ala Gly Val Asp Ala Thr Gln Ala Tyr Arg Glu
    50                  55                  60
Phe His Gln Arg Ser Gly Lys Ala Asp Lys Tyr Leu Lys Ser Leu Pro
65                  70                  75                  80
Lys Leu Asp Ala Ser Lys Val Glu Ser Arg Phe Ser Ala Lys Glu Gln
                85                  90                  95
Ala Arg Arg Asp Ala Met Thr Arg Asp Tyr Ala Ala Phe Arg Glu Glu
            100                 105                 110
Leu Val Ala Glu Gly Tyr Phe Asp Pro Ser Ile Pro His Met Ile Tyr
        115                 120                 125
Arg Val Val Glu Ile Val Ala Leu Phe Ala Leu Ser Phe Trp Leu Met
    130                 135                 140
Ser Lys Ala Ser Pro Thr Ser Leu Val Leu Gly Val Val Met Asn Gly
145                 150                 155                 160
Ile Ala Gln Gly Arg Cys Gly Trp Val Met His Glu Met Gly His Gly
                165                 170                 175
Ser Phe Thr Gly Val Ile Trp Leu Asp Asp Arg Met Cys Glu Phe Phe
            180                 185                 190
Tyr Gly Val Gly Cys Gly Met Ser Gly His Tyr Trp Lys Asn Gln His
        195                 200                 205
Ser Lys His His Ala Ala Pro Asn Arg Leu Glu His Asp Val Asp Leu
    210                 215                 220
Asn Thr Leu Pro Leu Val Ala Phe Asn Glu Arg Val Val Arg Lys Val
225                 230                 235                 240
Lys Pro Gly Ser Leu Leu Ala Leu Trp Leu Arg Val Gln Ala Tyr Leu
                245                 250                 255
Phe Ala Pro Val Ser Cys Leu Leu Ile Gly Leu Gly Trp Thr Leu Tyr
            260                 265                 270
Leu His Pro Arg Tyr Met Leu Arg Thr Lys Arg His Met Glu Phe Val
        275                 280                 285
Trp Ile Phe Ala Arg Tyr Ile Gly Trp Phe Ser Leu Met Gly Ala Leu
    290                 295                 300
Gly Tyr Ser Pro Gly Thr Ser Val Gly Met Tyr Leu Cys Ser Phe Gly
305                 310                 315                 320
Leu Gly Cys Ile Tyr Ile Phe Leu Gln Phe Ala Val Ser His Thr His
                325                 330                 335
Leu Pro Val Thr Asn Pro Glu Asp Gln Leu His Trp Leu Glu Tyr Ala
            340                 345                 350
Ala Asp His Thr Val Asn Ile Ser Thr Lys Ser Trp Leu Val Thr Trp
        355                 360                 365
Trp Met Ser Asn Leu Asn Phe Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr
    370                 375                 380
Ala Pro Gln Phe Arg Phe Lys Glu Ile Ser Pro Arg Val Glu Ala Leu
385                 390                 395                 400
Phe Lys Arg His Asn Leu Pro Tyr Tyr Asp Leu Pro Tyr Thr Ser Ala
                405                 410                 415
Val Ser Thr Thr Phe Ala Asn Leu Tyr Ser Val Gly His Ser Val Gly
            420                 425                 430
Ala Asp Thr Lys Lys Gln Asp
        435
<210>13
<211>1341
<212>DNA
<213>高山被孢霉(Mortierella alpina)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1341)
<223>Δ5去饱和酶
<400>13
atg gga acg gac caa gga aaa acc ttc acc tgg gaa gag ctg gcg gcc    48
Met Gly Thr Asp Gln Gly Lys Thr Phe Thr Trp Glu Glu Leu Ala Ala
1               5                   10                  15
cat aac acc aag gac gac cta ctc ttg gcc atc cgc ggc agg gtg tac     96
His Asn Thr Lys Asp Asp Leu Leu Leu Ala Ile Arg Gly Arg Val Tyr
            20                  25                  30
gat gtc aca aag ttc ttg agc cgc cat cct ggt gga gtg gac act ctc    144
Asp Val Thr Lys Phe Leu Ser Arg His Pro Gly Gly Val Asp Thr Leu
        35                  40                  45
ctg ctc gga gct ggc cga gat gtt act ccg gtc ttt gag atg tat cac    192
Leu Leu Gly Ala Gly Arg Asp Val Thr Pro Val Phe Glu Met Tyr His
    50                  55                  60
gcg ttt ggg gct gca gat gcc att atg aag aag tac tat gtc ggt aca    240
Ala Phe Gly Ala Ala Asp Ala Ile Met Lys Lys Tyr Tyr Val Gly Thr
65                  70                  75                  80
ctg gtc tcg aat gag ctg ccc atc ttc ccg gag cca acg gtg ttc cac    288
Leu Val Ser Asn Glu Leu Pro Ile Phe Pro Glu Pro Thr Val Phe His
                85                  90                  95
aaa acc atc aag acg aga gtc gag ggc tac ttt acg gat cgg aac att    336
Lys Thr Ile Lys Thr Arg Val Glu Gly Tyr Phe Thr Asp Arg Asn Ile
            100                 105                 110
gat ccc aag aat aga cca gag atc tgg gga cga tac gct ctt atc ttt    384
Asp Pro Lys Asn Arg Pro Glu Ile Trp Gly Arg Tyr Ala Leu Ile Phe
        115                 120                 125
gga tcc ttg atc gct tcc tac tac gcg cag ctc ttt gtg cct ttc gtt    432
Gly Ser Leu Ile Ala Ser Tyr Tyr Ala Gln Leu Phe Val Pro Phe Val
    130                 135                 140
gtc gaa cgc aca tgg ctt cag gtg gtg ttt gca atc atc atg gga ttt    480
Val Glu Arg Thr Trp Leu Gln Val Val Phe Ala Ile Ile Met Gly Phe
145                 150                 155                 160
gcg tgc gca caa gtc gga ctc aac cct ctt cat gat gcg tct cac ttt    528
Ala Cys Ala Gln Val Gly Leu Asn Pro Leu His Asp Ala Ser His Phe
                165                 170                 175
tca gtg acc cac aac ccc act gtc tgg aag att ctg gga gcc acg cac    576
Ser Val Thr His Asn Pro Thr Val Trp Lys Ile Leu Gly Ala Thr His
            180                 185                 190
gac ttt ttc aac gga gca tcg tac ctg gtg tgg atg tac caa cat atg     624
Asp Phe Phe Asn Gly Ala Ser Tyr Leu Val Trp Met Tyr Gln His Met
        195                 200                 205
ctc ggc cat cac ccc tac acc aac att gct gga gca gat ccc gac gtg     672
Leu Gly His His Pro Tyr Thr Asn Ile Ala Gly Ala Asp Pro Asp Val
    210                 215                 220
tcg acg tct gag ccc gat gtt cgt cgt atc aag ccc aac caa aag tgg     720
Ser Thr Ser Glu Pro Asp Val Arg Arg Ile Lys Pro Asn Gln Lys Trp
225                 230                 235                 240
ttt gtc aac cac atc aac cag cac atg ttt gtt cct ttc ctg tac gga     768
Phe Val Asn His Ile Asn Gln His Met Phe Val Pro Phe Leu Tyr Gly
                245                 250                 255
ctg ctg gcg ttc aag gtg cgc att cag gac atc aac att ttg tac ttt     816
Leu Leu Ala Phe Lys Val Arg Ile Gln Asp Ile Asn Ile Leu Tyr Phe
            260                 265                 270
gtc aag acc aat gac gct att cgt gtc aat ccc atc tcg aca tgg cac     864
Val Lys Thr Asn Asp Ala Ile Arg Val Asn Pro Ile Ser Thr Trp His
        275                 280                 285
act gtg atg ttc tgg ggc ggc aag gct ttc ttt gtc tgg tat cgc ctg     912
Thr Val Met Phe Trp Gly Gly Lys Ala Phe Phe Val Trp Tyr Arg Leu
    290                 295                 300
att gtt ccc ctg cag tat ctg ccc ctg ggc aag gtg ctg ctc ttg ttc     960
Ile Val Pro Leu Gln Tyr Leu Pro Leu Gly Lys Val Leu Leu Leu Phe
305                 310                 315                 320
acg gtc gcg gac atg gtg tcg tct tac tgg ctg gcg ctg acc ttc cag    1008
Thr Val Ala Asp Met Val Ser Ser Tyr Trp Leu Ala Leu Thr Phe Gln
                325                 330                 335
gcg aac cac gtt gtt gag gaa gtt cag tgg ccg ttg cct gac gag aac    1056
Ala Asn His Val Val Glu Glu Val Gln Trp Pro Leu Pro Asp Glu Asn
            340                 345                 350
ggg atc atc caa aag gac tgg gca gct atg cag gtc gag act acg cag    1104
Gly Ile Ile Gln Lys Asp Trp Ala Ala Met Gln Val Glu Thr Thr Gln
        355                 360                 365
gat tac gca cac gat tcg cac ctc tgg acc agc atc act ggc agc ttg    1152
Asp Tyr Ala His Asp Ser His Leu Trp Thr Ser Ile Thr Gly Ser Leu
    370                 375                 380
aac tac cag gct gtg cac cat ctg ttc ccc aac gtg tcg cag cac cat    1200
Asn Tyr Gln Ala Val His His Leu Phe Pro Asn Val Ser Gln His His
385                 390                 395                 400
tat ccc gat att ctg gcc atc atc aag aac acc tgc agc gag tac aag    1248
Tyr Pro Asp Ile Leu Ala Ile Ile Lys Asn Thr Cys Ser Glu Tyr Lys
                405                 410                 415
gtt cca tac ctt gtc aag gat acg ttt tgg caa gca ttt gct tca cat    1296
Val Pro Tyr Leu Val Lys Asp Thr Phe Trp Gln Ala Phe Ala Ser His
            420                 425                 430
ttg gag cac ttg cgt gtt ctt gga ctc cgt ccc aag gaa gag tag        1341
Leu Glu His Leu Arg Val Leu Gly Leu Arg Pro Lys Glu Glu
        435                 440                 445
<210>14
<211>446
<212>PRT
<213>高山被孢霉
<400>14
Met Gly Thr Asp Gln Gly Lys Thr Phe Thr Trp Glu Glu Leu Ala Ala
1               5                   10                  15
His Asn Thr Lys Asp Asp Leu Leu Leu Ala Ile Arg Gly Arg Val Tyr
            20                  25                  30
Asp Val Thr Lys Phe Leu Ser Arg His Pro Gly Gly Val Asp Thr Leu
        35                  40                  45
Leu Leu Gly Ala Gly Arg Asp Val Thr Pro Val Phe Glu Met Tyr His
    50                  55                  60
Ala Phe Gly Ala Ala Asp Ala Ile Met Lys Lys Tyr Tyr Val Gly Thr
65                  70                  75                  80
Leu Val Ser Asn Glu Leu Pro Ile Phe Pro Glu Pro Thr Val Phe His
                85                  90                  95
Lys Thr Ile Lys Thr Arg Val Glu Gly Tyr Phe Thr Asp Arg Asn Ile
            100                 105                 110
Asp Pro Lys Asn Arg Pro Glu Ile Trp Gly Arg Tyr Ala Leu Ile Phe
        115                 120                 125
Gly Ser Leu Ile Ala Ser Tyr Tyr Ala Gln Leu Phe Val Pro Phe Val
    130                 135                 140
Val Glu Arg Thr Trp Leu Gln Val Val Phe Ala Ile Ile Met Gly Phe
145                 150                 155                 160
Ala Cys Ala Gln Val Gly Leu Asn Pro Leu His Asp Ala Ser His Phe
                165                 170                 175
Ser Val Thr His Asn Pro Thr Val Trp Lys Ile Leu Gly Ala Thr His
            180                 185                 190
Asp Phe Phe Asn Gly Ala Ser Tyr Leu Val Trp Met Tyr Gln His Met
        195                 200                 205
Leu Gly His His Pro Tyr Thr Asn Ile Ala Gly Ala Asp Pro Asp Val
    210                 215                 220
Ser Thr Ser Glu Pro Asp Val Arg Arg Ile Lys Pro Asn Gln Lys Trp
225                 230                 235                 240
Phe Val Asn His Ile Asn Gln His Met Phe Val Pro Phe Leu Tyr Gly
                245                 250                 255
Leu Leu Ala Phe Lys Val Arg Ile Gln Asp Ile Asn Ile Leu Tyr Phe
            260                 265                 270
Val Lys Thr Asn Asp Ala Ile Arg Val Asn Pro Ile Ser Thr Trp His
        275                 280                 285
Thr Val Met Phe Trp Gly Gly Lys Ala Phe Phe Val Trp Tyr Arg Leu
    290                 295                 300
Ile Val Pro Leu Gln Tyr Leu Pro Leu Gly Lys Val Leu Leu Leu Phe
305                 310                 315                 320
Thr Val Ala Asp Met Val Ser Ser Tyr Trp Leu Ala Leu Thr Phe Gln
                325                 330                 335
Ala Asn His Val Val Glu Glu Val Gln Trp Pro Leu Pro Asp Glu Asn
            340                 345                 350
Gly Ile Ile Gln Lys Asp Trp Ala Ala Met Gln Val Glu Thr Thr Gln
        355                 360                 365
Asp Tyr Ala His Asp Ser His Leu Trp Thr Ser Ile Thr Gly Ser Leu
    370                 375                 380
Asn Tyr Gln Ala Val His His Leu Phe Pro Asn Val Ser Gln His His
385                 390                 395                 400
Tyr Pro Asp Ile Leu Ala Ile Ile Lys Asn Thr Cys Ser Glu Tyr Lys
                405                 410                 415
Val Pro Tyr Leu Val Lys Asp Thr Phe Trp Gln Ala Phe Ala Ser His
            420                 425                 430
Leu Glu His Leu Arg Val Leu Gly Leu Arg Pro Lys Glu Glu
        435                 440                 445
<210>15
<211>1344
<212>DNA
<213>秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1344)
<223>Δ5去饱和酶
<400>15
atg gta tta cga gag caa gag cat gag cca ttc ttc att aaa att gat     48
Met Val Leu Arg Glu Gln Glu His Glu Pro Phe Phe Ile Lys Ile Asp
1               5                   10                  15
gga aaa tgg tgt caa att gac gat gct gtc ctg aga tca cat cca ggt     96
Gly Lys Trp Cys Gln Ile Asp Asp Ala Val Leu Arg Ser His Pro Gly
            20                  25                  30
ggt agt gca att act acc tat aaa aat atg gat gcc act acc gta ttc    144
Gly Ser Ala Ile Thr Thr Tyr Lys Asn Met Asp Ala Thr Thr Val Phe
        35                  40                  45
cac aca ttc cat act ggt tct aaa gaa gcg tat caa tgg ctg aca gaa    192
His Thr Phe His Thr Gly Ser Lys Glu Ala Tyr Gln Trp Leu Thr Glu
    50                  55                  60
ttg aaa aaa gag tgc cct aca caa gaa cca gag atc cca gat att aag    240
Leu Lys Lys Glu Cys Pro Thr Gln Glu Pro Glu Ile Pro Asp Ile Lys
65                  70                  75                  80
gat gac cca atc aaa gga att gat gat gtg aac atg gga act ttc aat    288
Asp Asp Pro Ile Lys Gly Ile Asp Asp Val Asn Met Gly Thr Phe Asn
                85                  90                  95
att tct gag aaa cga tct gcc caa ata aat aaa agt ttc act gat cta    336
Ile Ser Glu Lys Arg Ser Ala Gln Ile Asn Lys Ser Phe Thr Asp Leu
            100                 105                 110
cgt atg cga gtt cgt gca gaa gga ctt atg gat gga tct cct ttg ttc    384
Arg Met Arg Val Arg Ala Glu Gly Leu Met Asp Gly Ser Pro Leu Phe
        115                 120                 125
tac att aga aaa att ctt gaa aca atc ttc aca att ctt ttt gca ttc    432
Tyr Ile Arg Lys Ile Leu Glu Thr Ile Phe Thr Ile Leu Phe Ala Phe
    130                 135                 140
tac ctt caa tac cac aca tat tat ctt cca tca gct att cta atg gga    480
Tyr Leu Gln Tyr His Thr Tyr Tyr Leu Pro Ser Ala Ile Leu Met Gly
 145                150                 155                 160
gtt gcg tgg caa caa ttg gga tgg tta atc cat gaa ttc gca cat cat    528
Val Ala Trp Gln Gln Leu Gly Trp Leu Ile His Glu Phe Ala His His
                165                 170                 175
cag ttg ttc aaa aac aga tac tac aat gat ttg gcc agc tat ttc gtt    576
Gln Leu Phe Lys Asn Arg Tyr Tyr Asn Asp Leu Ala Ser Tyr Phe Val
            180                 185                 190
gga aac ttt tta caa gga ttc tca tct ggt ggt tgg aaa gag cag cac    624
Gly Asn Phe Leu Gln Gly Phe Ser Ser Gly Gly Trp Lys Glu Gln His
        195                 200                 205
aat gtg cat cac gca gcc aca aat gtt gtt gga cga gac gga gat ctt    672
Asn Val His His Ala Ala Thr Asn Val Val Gly Arg Asp Gly Asp Leu
    210                 215                 220
gat tta gtc cca ttc tat gct aca gtg gca gaa cat ctc aac aat tat    720
Asp Leu Val Pro Phe Tyr Ala Thr Val Ala Glu His Leu Asn Asn Tyr
225                 230                 235                 240
tct cag gat tca tgg gtt atg act cta ttc aga tgg caa cat gtt cat    768
Ser Gln Asp Ser Trp Val Met Thr Leu Phe Arg Trp Gln His Val His
                245                 250                 255
tgg aca ttc atg tta cca ttc ctc cgt ctc tcg tgg ctt ctt cag tca    816
Trp Thr Phe Met Leu Pro Phe Leu Arg Leu Ser Trp Leu Leu Gln Ser
            260                 265                 270
atc att ttt gtt agt cag atg cca act cat tat tat gac tat tac aga    864
Ile Ile Phe Val Ser Gln Met Pro Thr His Tyr Tyr Asp Tyr Tyr Arg
        275                 280                 285
aat act gcg att tat gaa cag gtt ggt ctc tct ttg cac tgg gct tgg    912
Asn Thr Ala Ile Tyr Glu Gln Val Gly Leu Ser Leu His Trp Ala Trp
    290                 295                 300
tca ttg ggt caa ttg tat ttc cta ccc gat tgg tca act aga ata atg    960
Ser Leu Gly Gln Leu Tyr Phe Leu Pro Asp Trp Ser Thr Arg Ile Met
305                 310                 315                 320
ttc ttc ctt gtt tct cat ctt gtt gga ggt ttc ctg ctc tct cat gta   1008
Phe Phe Leu Val Ser His Leu Val Gly Gly Phe Leu Leu Ser His Val
                325                 330                 335
gtt act ttc aat cat tat tca gtg gag aag ttt gca ttg agc tcg aac   1056
Val Thr Phe Asn His Tyr Ser Val Glu Lys Phe Ala Leu Ser Ser Asn
            340                 345                 350
atc atg tca aat tac gct tgt ctt caa atc atg acc aca aga aat atg    1104
Ile Met Ser Asn Tyr Ala Cys Leu Gln Ile Met Thr Thr Arg Asn Met
        355                 360                 365
aga cct gga aga ttc att gac tgg ctt tgg gga ggt ctt aac tat cag    1152
Arg Pro Gly Arg Phe Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln
    370                 375                 380
att gag cac cat ctt ttc cca acg atg cca cga cac aac ttg aac act    1200
Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Thr
385                 390                 395                 400
gtt atg cca ctt gtt aag gag ttt gca gca gca aat ggt tta cca tac    1248
Val Met Pro Leu Val Lys Glu Phe Ala Ala Ala Asn Gly Leu Pro Tyr
                405                 410                 415
atg gtc gac gat tat ttc aca gga ttc tgg ctt gaa att gag caa ttc    1296
Met Val Asp Asp Tyr Phe Thr Gly Phe Trp Leu Glu Ile Glu Gln Phe
            420                 425                 430
cga aat att gca aat gtt gct gct aaa ttg act aaa aag att gcc tag    1344
Arg Asn Ile Ala Asn Val Ala Ala Lys Leu Thr Lys Lys Ile Ala
        435                 440                 445
<210>16
<211>447
<212>PRT
<213>秀丽隐杆线虫
<400>16
Met Val Leu Arg Glu Gln Glu His Glu Pro Phe Phe Ile Lys Ile Asp
1               5                   10                  15
Gly Lys Trp Cys Gln Ile Asp Asp Ala Val Leu Arg Ser His Pro Gly
            20                  25                  30
Gly Ser Ala lie Thr Thr Tyr Lys Asn Met Asp Ala Thr Thr Val Phe
        35                  40                  45
His Thr Phe His Thr Gly Ser Lys Glu Ala Tyr Gln Trp Leu Thr Glu
    50                  55                  60
Leu Lys Lys Glu Cys Pro Thr Gln Glu Pro Glu Ile Pro Asp Ile Lys
65                  70                  75                  80
Asp Asp Pro Ile Lys Gly Ile Asp Asp Val Asn Met Gly Thr Phe Asn
                85                  90                  95
Ile Ser Glu Lys Arg Ser Ala Gln Ile Asn Lys Ser Phe Thr Asp Leu
            100                 105                 110
Arg Met Arg Val Arg Ala Glu Gly Leu Met Asp Gly Ser Pro Leu Phe
        115                 120                 125
Tyr Ile Arg Lys Ile Leu Glu Thr Ile Phe Thr Ile Leu Phe Ala Phe
    130                 135                 140
Tyr Leu Gln Tyr His Thr Tyr Tyr Leu Pro Ser Ala Ile Leu Met Gly
145                 150                 155                 160
Val Ala Trp Gln Gln Leu Gly Trp Leu Ile His Glu Phe Ala His His
                165                 170                 175
Gln Leu Phe Lys Asn Arg Tyr Tyr Asn Asp Leu Ala Ser Tyr Phe Val
            180                 185                 190
Gly Asn Phe Leu Gln Gly Phe Ser Ser Gly Gly Trp Lys Glu Gln His
        195                 200                 205
Asn Val His His Ala Ala Thr Asn Val Val Gly Arg Asp Gly Asp Leu
    210                 215                 220
Asp Leu Val Pro Phe Tyr Ala Thr Val Ala Glu His Leu Asn Asn Tyr
225                 230                 235                 240
Ser Gln Asp Ser Trp Val Met Thr Leu Phe Arg Trp Gln His Val His
                245                 250                 255
Trp Thr Phe Met Leu Pro Phe Leu Arg Leu Ser Trp Leu Leu Gln Ser
            260                 265                 270
Ile Ile Phe Val Ser Gln Met Pro Thr His Tyr Tyr Asp Tyr Tyr Arg
        275                 280                 285
Asn Thr Ala Ile Tyr Glu Cln Val Gly Leu Ser Leu His Trp Ala Trp
    290                 295                 300
Ser Leu Gly Gln Leu Tyr Phe Leu Pro Asp Trp Ser Thr Arg Ile Met
305                 310                 315                 320
Phe Phe Leu Val Ser His Leu Val Gly Gly Phe Leu Leu Ser His Val
                325                 330                 335
Val Thr Phe Asn His Tyr Ser Val 6lu Lys Phe Ala Leu Ser Ser Asn
            340                 345                 350
Ile Met Ser Asn Tyr Ala Cys Leu Gln Ile Met Thr Thr Arg Asn Met
        355                 360                 365
Arg Pro Gly Arg Phe Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln
    370                 375                 380
Ile Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Thr
385                 390                 395                 400
Val Met Pro Leu Val Lys Glu Phe Ala Ala Ala Asn Gly Leu Pro Tyr
                405                 410                 415
Met Val Asp Asp Tyr Phe Thr Gly Phe Trp Leu Glu Ile Glu 6ln Phe
            420                 425                 430
Arg Asn Ile Ala Asn Val Ala Ala Lys Leu Thr Lys Lys Ile Ala
        435                 440                 445
<210>17
<211>1683
<212>DNA
<213>琉璃苣(Borago officinalis)
<220>
<221>CDS
<222>(42)..(1388)
<223>Δ6去饱和酶
<400>17
tatctgccta ccctcccaaa gagagtagtc atttttcatc a atg gct gct caa atc   56
                                              Met Ala Ala Gln Ile
                                              1               5
aag aaa tac att acc tca gat gaa ctc aag aac cac gat aaa ccc gga    104
Lys Lys Tyr Ile Thr Ser Asp Glu Leu Lys Asn His Asp Lys Pro Gly
                10                  15                  20
gat cta tgg atc tcg att caa ggg aaa gcc tat gat gtt tcg gat tgg    152
Asp Leu Trp Ile Ser Ile Gln Gly Lys Ala Tyr Asp Val Ser Asp Trp
            25                  30                  35
gtg aaa gac cat cca ggt ggc agc ttt ccc ttg aag agt ctt gct ggt    200
Val Lys Asp His Pro Gly Gly Ser Phe Pro Leu Lys Ser Leu Ala Gly
        40                  45                  50
caa gag gta act gat gca ttt gtt gca ttc cat cct gcc tct aca tgg    248
Gln Glu Val Thr Asp Ala Phe Val Ala Phe His Pro Ala Ser Thr Trp
    55                  60                  65
aag aat ctt gat aag ttt ttc act ggg tat tat ctt aaa gat tac tct    296
Lys Asn Leu Asp Lys Phe Phe Thr Gly Tyr Tyr Leu Lys Asp Tyr Ser
70                  75                  80                  85
gtt tct gag gtt tct aaa gat tat agg aag ctt gtg ttt gag ttt tct    344
Val Ser Glu Val Ser Lys Asp Tyr Arg Lys Leu Val Phe Glu Phe Ser
                90                  95                  100
aaa atg ggt ttg tat gac aaa aaa ggt cat att atg ttt gca act ttg    392
Lys Met Gly Leu Tyr Asp Lys Lys Gly His Ile Met Phe Ala Thr Leu
            105                 110                 115
tgc ttt ata gca atg ctg ttt gct atg agt gtt tat ggg gtt ttg ttt    440
Cys Phe Ile Ala Met Leu Phe Ala Met Ser Val Tyr Gly Val Leu Phe
        120                 125                 130
tgt gag ggt gtt ttg gta cat ttg ttt tct ggg tgt ttg atg ggg ttt    488
Cys Glu Gly Val Leu Val His Leu Phe Ser Gly Cys Leu Met Gly Phe
    135                 140                 145
ctt tgg att cag agt ggt tgg att gga cat gat gct ggg cat tat atg    536
Leu Trp Ile Gln Ser Gly Trp Ile Gly His Asp Ala Gly His Tyr Met
150                 155                 160                 165
gta gtg tct gat tca agg ctt aat aag ttt atg ggt att ttt gct gca    584
Val Val Ser Asp Ser Arg Leu Asn Lys Phe Met Gly Ile Phe Ala Ala
                170                 175                 180
aat tgt ctt tca gga ata agt att ggt tgg tgg aaa tgg aac cat aat    632
Asn Cys Leu Ser Gly Ile Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn
            185                 190                 195
gca cat cac att gcc tgt aat agc ctt gaa tat gac cct gat tta caa    680
Ala His His Ile Ala Cys Asn Ser Leu Glu Tyr Asp Pro Asp Leu Gln
        200                 205                 210
tat ata cca ttc ctt gtt gtg tct tcc aag ttt ttt ggt tca ctc acc    728
Tyr Ile Pro Phe Leu Val Val Ser Ser Lys Phe Phe Gly Ser Leu Thr
    215                 220                 225
tct cat ttc tat gag aaa agg ttg act ttt gac tct tta tca aga ttc    776
Ser His Phe Tyr Glu Lys Arg Leu Thr Phe Asp Ser Leu Ser Arg Phe
230                 235                 240                 245
ttt gta agt tat caa cat tgg aca ttt tac cct att atg tgt gct gct    824
Phe Val Ser Tyr Gln His Trp Thr Phe Tyr Pro Ile Met Cys Ala Ala
                250                 255                 260
agg ctc aat atg tat gta caa tct ctc ata atg ttg ttg acc aag aga    872
Arg Leu Asn Met Tyr Val Gln Ser Leu Ile Met Leu Leu Thr Lys Arg
            265                 270                 275
aat gtg tcc tat cga gct cag gaa ctc ttg gga tgc cta gtg ttc tcg    920
Asn Val Ser Tyr Arg Ala Gln Glu Leu Leu Gly Cys Leu Val Phe Ser
        280                 285                 290
att tgg tac ccg ttg ctt gtt tct tgt ttg cct aat tgg ggt gaa aga    968
Ile Trp Tyr Pro Leu Leu Val Ser Cys Leu Pro Asn Trp Gly Glu Arg
    295                 300                 305
att atg ttt gtt att gca agt tta tca gtg act gga atg caa caa gtt   1016
Ile Met Phe Val Ile Ala Ser Leu Ser Val Thr Gly Met Gln Gln Val
310                 315                 320                 325
cag ttc tcc ttg aac cac ttc tct tca agt gtt tat gtt gga aag cct    1064
Gln Phe Ser Leu Asn His Phe Ser Ser Ser Val Tyr Val Gly Lys Pro
                330                 335                 340
aaa ggg aat aat tgg ttt gag aaa caa acg gat ggg aca ctt gac att    1112
Lys Gly Asn Asn Trp Phe Glu Lys Gln Thr Asp Gly Thr Leu Asp Ile
            345                 350                 355
tct tgt cct cct tgg atg gat tgg ttt cat ggt gga ttg caa ttc caa    1160
Ser Cys Pro Pro Trp Met Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln
        360                 365                 370
att gag cat cat ttg ttt ccc aag atg cct aga tgc aac ctt agg aaa    1208
Ile Glu His His Leu Phe Pro Lys Met Pro Arg Cys Asn Leu Arg Lys
    375                 380                 385
atc tcg ccc tac gtg atc gag tta tgc aag aaa cat aat ttg cct tac    1256
Ile Ser Pro Tyr Val Ile Glu Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr
390                 395                 400                 405
aat tat gca tct ttc tcc aag gcc aat gaa atg aca ctc aga aca ttg    1304
Asn Tyr Ala Ser Phe Ser Lys Ala Asn Glu Met Thr Leu Arg Thr Leu
                410                 415                 420
agg aac aca gca ttg cag gct agg gat ata acc aag ccg ctc ccg aag    1352
Arg Asn Thr Ala Leu Gln Ala Arg Asp Ile Thr Lys Pro Leu Pro Lys
            425                 430                 435
aat ttg gta tgg gaa gct ctt cac act cat ggt taa aattaccctt         1398
Asn Leu Val Trp Glu Ala Leu His Thr His Gly
        440                 445
agttcatgta ataatttgag attatgtatc tcctatgttt gtgtcttgtc ttggttctac  1458
ttgttggagt cattgcaact tgtcttttat ggtttattag atgtttttta atatatttta  1518
gaggttttgc tttcatctcc attattgatg aataaggagt tgcatattgt caattgttgt  1578
gctcaatatc tgatattttg gaatgtactt tgtaccactg tgttttcagt tgaagctcat  1638
gtgtacttct atagactttg tttaaatggt tatgtcatgt tattt                  1683
<210>18
<211>448
<212>PRT
<213>琉璃苣
<400>18
Met Ala Ala Gln Ile Lys Lys Tyr Ile Thr Ser Asp Glu Leu Lys Asn
1               5                   10                  15
His Asp Lys Pro Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile Gln Gly Lys Ala Tyr
            20                  25                  30
Asp Val Ser Asp Trp Val Lys Asp His Pro Gly Gly Ser Phe Pro Leu
        35                  40                  45
Lys Ser Leu Ala Gly Gln Glu Val Thr Asp Ala Phe Val Ala Phe His
    50                  55                  60
Pro Ala Ser Thr Trp Lys Asn Leu Asp Lys Phe Phe Thr Gly Tyr Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Asp Tyr Ser Val Ser Glu Val Ser Lys Asp Tyr Arg Lys Leu
                85                  90                  95
Val Phe Glu Phe Ser Lys Met Gly Leu Tyr Asp Lys Lys Gly His Ile
            100                 105                 110
Met Phe Ala Thr Leu Cys Phe Ile Ala Met Leu Phe Ala Met Ser Val
        115                 120                 125
Tyr Gly Val Leu Phe Cys Glu Gly Val Leu Val His Leu Phe Ser Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Met Gly Phe Leu Trp Ile Gln Ser Gly Trp Ile Gly His Asp
145                 150                 155                 160
Ala Gly His Tyr Met Val Val Ser Asp Ser Arg Leu Asn Lys Phe Met
                165                 170                 175
Gly Ile Phe Ala Ala Asn Cys Leu Ser Gly IIe Ser Ile Gly Trp Trp
            180                 185                 190
Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys Asn Ser Leu Glu Tyr
        195                 200                 205
Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Phe Leu Val Val Ser Ser Lys Phe
    210                 215                 220
Phe Gly Ser Leu Thr Ser His Phe Tyr Glu Lys Arg Leu Thr Phe Asp
225                 230                 235                 240
Ser Leu Ser Arg Phe Phe Val Ser Tyr Gln His Trp Thr Phe Tyr Pro
                245                 250                 255
Ile Met Cys Ala Ala Arg Leu Asn Met Tyr Val Gln Ser Leu Ile Met
            260                 265                 270
Leu Leu Thr Lys Arg Asn Val Ser Tyr Arg Ala Gln Glu Leu Leu Gly
        275                 280                 285
Cys Leu Val Phe Ser Ile Trp Tyr Pro Leu Leu Val Ser Cys Leu Pro
    290                 295                 300
Asn Trp Gly Glu Arg Ile Met Phe Val Ile Ala Ser Leu Ser Val Thr
305                 310                 315                 320
Gly Met Gln Gln Val Gln Phe Ser Leu Asn His Phe Ser Ser Ser Val
                325                 330                 335
Tyr Val Gly Lys Pro Lys Gly Asn Asn Trp Phe Glu Lys Gln Thr Asp
            340                 345                 350
Gly Thr Leu Asp Ile Ser Cys Pro Pro Trp Met Asp Trp Phe His Gly
        355                 360                 365
Gly Leu Gln Phe Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Lys Met Pro Arg
    370                 375                 380
Cys Asn Leu Arg Lys Ile Ser Pro Tyr Val Ile Glu Leu Cys Lys Lys
385                 390                 395                 400
His Asn Leu Pro Tyr Asn Tyr Ala Ser Phe Ser Lys Ala Asn Glu Met
                405                 410                 415
Thr Leu Arg Thr Leu Arg Asn Thr Ala Leu Gln Ala Arg Asp Ile Thr
            420                 425                 430
Lys Pro Leu Pro Lys Asn Leu Val Trp Glu Ala Leu His Thr His Gly
        435                 440                 445
<210>19
<211>1563
<212>DNA
<213>角齿藓
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1563)
<223>Δ6去饱和酶
<400>19
atg gtg tcc cag ggc ggc ggt ctc tcg cag ggt tcc att gaa gaa aac     48
Met Val Ser Gln Gly Gly Gly Leu Ser Gln Gly Ser Ile Glu Glu Asn
1               5                   10                  15
att gac gtt gag cac ttg gca acg atg ccc ctc gtc agt gac ttc cta     96
Ile Asp Val Glu His Leu Ala Thr Met Pro Leu Val Ser Asp Phe Leu
            20                  25                  30
aat gtc ctg gga acg act ttg ggc cag tgg agt ctt tcc act aca ttc    144
Asn Val Leu Gly Thr Thr Leu Gly Gln Trp Ser Leu Ser Thr Thr Phe
        35                  40                  45
gct ttc aag agg ctc acg act aag aaa cac agt tcg gac atc tcg gtg    192
Ala Phe Lys Arg Leu Thr Thr Lys Lys His Ser Ser Asp Ile Ser Val
    50                  55                  60
gag gca caa aaa gaa tcg gtt gcg cgg ggg cca gtt gag aat att tct    240
Glu Ala Gln Lys Glu Ser Val Ala Arg Gly Pro Val Glu Asn Ile Ser
65                  70                  75                  80
caa tcg gtt gcg cag ccc atc agg cgg agg tgg gtg cag gat aaa aag    288
Gln Ser Val Ala Gln Pro Ile Arg Arg Arg Trp Val Gln Asp Lys Lys
                85                  90                  95
ccg gtt act tac agc ctg aag gat gta gct tcg cac gat atg ccc cag    336
Pro Val Thr Tyr Ser Leu Lys Asp Val Ala Ser His Asp Met Pro Gln
            100                 105                 110
gac tgc tgg att ata atc aaa gag aag gtg tat gat gtg agc acc ttc    384
Asp Cys Trp Ile Ile Ile Lys Glu Lys Val Tyr Asp Val Ser Thr Phe
        115                 120                 125
gct gag cag cac cct gga ggc acg gtt atc aac acc tac ttc gga cga    432
Ala Glu Gln His Pro Gly Gly Thr Val Ile Asn Thr Tyr Phe Gly Arg
    130                 135                 140
gac gcc aca gat gtt ttc tct act ttc cac gca tcc acc tca tgg aag    480
Asp Ala Thr Asp Val Phe Ser Thr Phe His Ala Ser Thr Ser Trp Lys
145                 150                 155                 160
att ctt cag aat ttc tac atc ggg aac ctt gtt agg gag gag ccg act    528
Ile Leu Gln Asn Phe Tyr Ile Gly Asn Leu Val Arg Glu Glu Pro Thr
                165                 170                 175
ttg gag ctg ctg aag gag tac aga gag ttg aga gcc ctt ttc ttg aga    576
Leu Glu Leu Leu Lys Glu Tyr Arg Glu Leu Arg Ala Leu Phe Leu Arg
            180                 185                 190
gaa cag ctt ttc aag agt tcc aaa tcc tac tac ctt ttc aag act ctc    624
Glu Gln Leu Phe Lys Ser Ser Lys Ser Tyr Tyr Leu Phe Lys Thr Leu
        195                 200                 205
ata aat gtt tcc att gtt gcc aca agc att gcg ata atc agt ctg tac    672
Ile Asn Val Ser Ile Val Ala Thr Ser Ile Ala Ile Ile Ser Leu Tyr
    210                 215                 220
aag tct tac cgg gcg gtt ctg tta tca gcc agt ttg atg ggc ttg ttt    720
Lys Ser Tyr Arg Ala Val Leu Leu Ser Ala Ser Leu Met Gly Leu Phe
225                 230                 235                 240
att caa cag tgc gga tgg ttg tct cac gat ttt cta cac cat cag gta    768
Ile Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ser His Asp Phe Leu His His Gln Val
                245                 250                 255
ttt gag aca cgc tgg ctc aat gac gtt gtt ggc tat gtg gtc ggc aac    816
Phe Glu Thr Arg Trp Leu Asn Asp Val Val Gly Tyr Val Val Gly Asn
            260                 265                 270
gtt gtt ctg gga ttc agt gtc tcg tgg tgg aag acc aag cac aac ctg     864
Val Val Leu Gly Phe Ser Val Ser Trp Trp Lys Thr Lys His Asn Leu
        275                 280                 285
cat cat gct gct ccg aat gaa tgc gac caa aag tac aca ccg att gat     912
His His Ala Ala Pro Asn Glu Cys Asp Gln Lys Tyr Thr Pro Ile Asp
    290                 295                 300
gag gat att gat act ctc ccc atc att gct tgg agt aaa gat ctc ttg     960
Glu Asp Ile Asp Thr Leu Pro Ile Ile Ala Trp Ser Lys Asp Leu Leu
305                 310                 315                 320
gcc act gtt gag agc aag acc atg ttg cga gtt ctt cag tac cag cac    1008
Ala Thr Val Glu Ser Lys Thr Met Leu Arg Val Leu Gln Tyr Gln His
                325                 330                 335
cta ttc ttt ttg gtt ctt ttg acg ttt gcc cgg gcg agt tgg cta ttt    1056
Leu Phe Phe Leu Val Leu Leu Thr Phe Ala Arg Ala Ser Trp Leu Phe
            340                 345                 350
tgg agc gcg gcc ttc act ctc agg ccc gag ttg acc ctt ggc gag aag    1104
Trp Ser Ala Ala Phe Thr Leu Arg Pro Glu Leu Thr Leu Gly Glu Lys
        355                 360                 365
ctt ttg gag agg gga acg atg gct ttg cac tac att tgg ttt aat agt    1152
Leu Leu Glu Arg Gly Thr Met Ala Leu His Tyr Ile Trp Phe Asn Ser
    370                 375                 380
gtt gcg ttt tat ctg ctc ccc gga tgg aaa cca gtt gta tgg atg gtg    1200
Val Ala Phe Tyr Leu Leu Pro Gly Trp Lys Pro Val Val Trp Met Val
385                 390                 395                 400
gtc agc gag ctc atg tct ggt ttc ctg ctg gga tac gta ttt gta ctc    1248
Val Ser Glu Leu Met Ser Gly Phe Leu Leu Gly Tyr Val Phe Val Leu
                405                 410                 415
agt cac aat gga atg gag gtg tac aat acg tca aag gac ttc gtg aat    1296
Ser His Asn Gly Met Glu Val Tyr Asn Thr Ser Lys Asp Phe Val Asn
            420                 425                 430
gcc cag att gca tcg act cgc gac atc aaa gca ggg gtg ttt aat gat    1344
Ala Gln Ile Ala Ser Thr Arg Asp Ile Lys Ala Gly Val Phe Asn Asp
        435                 440                 445
tgg ttc acc gga ggt ctc aac aga cag att gag cat cat cta ttt cca    1392
Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Arg Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro
    450                 455                 460
acg atg ccc agg cac aac ctt aat aaa att tct cct cac gtg gag act    1440
Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Lys Ile Ser Pro His Val Glu Thr
465                 470                 475                 480
ttg tgc aag aag cat gga ctg gtc tac gaa gac gtg agc atg gct tcg    1488
Leu Cys Lys Lys His Gly Leu Val Tyr Glu Asp Val Ser Met Ala Ser
                485                 490                 495
ggc act tac cgg gtt ttg aaa aca ctt aag gac gtt gcc gat gct gct    1536
Gly Thr Tyr Arg Val Leu Lys Thr Leu Lys Asp Val Ala Asp Ala Ala
            500                 505                 510
tca cac cag cag ctt gct gcg agt tga                                1563
Ser His Gln Gln Leu Ala Ala Ser
        515                 520
<210>20
<211>520
<212>PRT
<213>角齿藓
<400>20
Met Val Ser Gln Gly Gly Gly Leu Ser Gln Gly Ser Ile Glu Glu Asn
1               5                   10                  15
Ile Asp Val Glu His Leu Ala Thr Met Pro Leu Val Ser Asp Phe Leu
            20                  25                  30
Asn Val Leu Gly Thr Thr Leu Gly Gln Trp Ser Leu Ser Thr Thr Phe
        35                  40                  45
Ala Phe Lys Arg Leu Thr Thr Lys Lys His Ser Ser Asp Ile Ser Val
    50                  55                  60
Glu Ala Gln Lys Glu Ser Val Ala Arg Gly Pro Val Glu Asn Ile Ser
65                  70                  75                  80
Gln Ser Val Ala Gln Pro Ile Arg Arg Arg Trp Val Gln Asp Lys Lys
                85                  90                  95
Pro Val Thr Tyr Ser Leu Lys Asp Val Ala Ser His Asp Met Pro Gln
            100                 105                 110
Asp Cys Trp Ile Ile Ile Lys Glu Lys Val Tyr Asp Val Ser Thr Phe
        115                 120                 125
Ala Glu Gln His Pro Gly Gly Thr Val Ile Asn Thr Tyr Phe Gly Arg
    130                 135                 140
Asp Ala Thr Asp Val Phe Ser Thr Phe His Ala Ser Thr Ser Trp Lys
145                 150                 155                 160
Ile Leu Gln Asn Phe Tyr Ile Gly Asn Leu Val Arg Glu Glu Pro Thr
                165                 170                 175
Leu Glu Leu Leu Lys Glu Tyr Arg Glu Leu Arg Ala Leu Phe Leu Arg
            180                 185                 190
Glu Gln Leu Phe Lys Ser Ser Lys Ser Tyr Tyr Leu Phe Lys Thr Leu
        195                 200                 205
Ile Asn Val Ser Ile Val Ala Thr Ser Ile Ala Ile Ile Ser Leu Tyr
    210                 215                 220
Lys Ser Tyr Arg Ala Val Leu Leu Ser Ala Ser Leu Met Gly Leu Phe
225                 230                 235                 240
Ile Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ser His Asp Phe Leu His His Gln Val
                245                 250                 255
Phe Glu Thr Arg Trp Leu Asn Asp Val Val Gly Tyr Val Val Gly Asn
            260                 265                 270
Val Val Leu Gly Phe Ser Val Ser Trp Trp Lys Thr Lys His Asn Leu
        275                 280                 285
His His Ala Ala Pro Asn Glu Cys Asp Gln Lys Tyr Thr Pro Ile Asp
    290                 295                 300
Glu Asp Ile Asp Thr Leu Pro Ile Ile Ala Trp Ser Lys Asp Leu Leu
305                 310                 315                 320
Ala Thr Val Glu Ser Lys Thr Met Leu Arg Val Leu Gln Tyr Gln His
                325                 330                 335
Leu Phe Phe Leu Val Leu Leu Thr Phe Ala Arg Ala Ser Trp Leu Phe
            340                 345                 350
Trp Ser Ala Ala Phe Thr Leu Arg Pro Glu Leu Thr Leu Gly Glu Lys
        355                 360                 365
Leu Leu Glu Arg Gly Thr Met Ala Leu His Tyr Ile Trp Phe Asn Ser
    370                 375                 380
Val Ala Phe Tyr Leu Leu Pro Gly Trp Lys Pro Val Val Trp Met Val
385                 390                 395                 400
Val Ser Glu Leu Met Ser Gly Phe Leu Leu Gly Tyr Val Phe Val Leu
                405                 410                 415
Ser His Asn Gly Met Glu Val Tyr Asn Thr Ser Lys Asp Phe Val Asn
            420                 425                 430
Ala Gln Ile Ala Ser Thr Arg Asp Ile Lys Ala Gly Val Phe Asn Asp
        435                 440                 445
Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Arg Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro
    450                 455                 460
Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Lys Ile Ser Pro His Val Glu Thr
465                 470                 475                 480
Leu Cys Lys Lys His Gly Leu Val Tyr Glu Asp Val Ser Met Ala Ser
                485                 490                 495
Gly Thr Tyr Arg Val Leu Lys Thr Leu Lys Asp Val Ala Asp Ala Ala
            500                 505                 510
Ser His Gln Gln Leu Ala Ala Ser
        515                 520
<210>21
<211>1434
<212>DNA
<213>三角褐指藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1434)
<223>Δ6去饱和酶
<400>21
atg ggc aaa gga ggg gac gct cgg gcc tcg aag ggc tca acg gcg gct     48
Met Gly Lys Gly Gly Asp Ala Arg Ala Ser Lys Gly Ser Thr Ala Ala
1               5                   10                  15
cgc aag atc agt tgg cag gaa gtc aag acc cac gcg tct ecg gag gac     96
Arg Lys Ile Ser Trp Gln Glu Val Lys Thr His Ala Ser Pro Glu Asp
            20                  25                  30
gcc tgg atc att cac tee aat aag gtc tac gac gtg tcc aac tgg cac    144
Ala Trp Ile Ile His Ser Asn Lys Val Tyr Asp Val Ser Asn Trp His
        35                  40                  45
gaa cat ccc gga ggc gcc gtc att ttc acg cac gcc ggt gac gac atg    192
Glu His Pro Gly Gly Ala Val Ile Phe Thr His Ala Gly Asp Asp Met
    50                  55                  60
acg gac att ttc gct gcc ttt cac gca ccc gga tcg cag tcg ctc atg    240
Thr Asp Ile Phe Ala Ala Phe His Ala Pro Gly Ser Gln Ser Leu Met
65                  70                  75                  80
aag aag ttc tac att ggc gaa ttg ctc ccg gaa acc acc ggc aag gag    288
Lys Lys Phe Tyr Ile Gly Glu Leu Leu Pro Glu Thr Thr Gly Lys Glu
                85                  90                  95
ccg cag caa atc gcc ttt gaa aag ggc tac cgc gat ctg cgc tcc aaa    336
Pro Gln Gln Ile Ala Phe Glu Lys Gly Tyr Arg Asp Leu Arg Ser Lys
            100                 105                 110
ctc atc atg atg ggc atg ttc aag tcc aac aag tgg ttc tac gtc tac    384
Leu Ile Met Met Gly Met Phe Lys Ser Asn Lys Trp Phe Tyr Val Tyr
        115                 120                 125
aag tgc ctc agc aac atg gcc att tgg gcc gcc gcc tgt gct ctc gtc    432
Lys Cys Leu Ser Asn Met Ala Ile Trp Ala Ala Ala Cys Ala Leu Val
    130                 135                 140
ttt tac tcg gac cgc ttc tgg gta cac ctg gcc agc gcc gtc atg ctg    480
Phe Tyr Ser Asp Arg Phe Trp Val His Leu Ala Ser Ala Val Met Leu
145                 150                 155                 160
gga aca ttc ttt cag cag tcg gga tgg ttg gca cac gac ttt ctg cac    528
Gly Thr Phe Phe Gln Gln Ser Gly Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His
                165                 170                 175
cac cag gtc ttc acc aag cgc aag cac ggg gat ctc gga gga ctc ttt    576
His Gln Val Phe Thr Lys Arg Lys His Gly Asp Leu Gly Gly Leu Phe
            180                 185                 190
tgg ggg aac ctc atg cag ggt tac tcc gta cag tgg tgg aaa aac aag    624
Trp Gly Asn Leu Met Gln Gly Tyr Ser Val Gln Trp Trp Lys Asn Lys
        195                 200                 205
cac aac gga cac cac gcc gtc ccc aac ctc cac tgc tcc tcc gca gtc    672
His Asn Gly His His Ala Val Pro Asn Leu His Cys Ser Ser Ala Val
    210                 215                 220
gcg caa gat ggg gac ccg gac atc gat acc atg ccc ctt ctc gcc tgg    720
Ala Gln Asp Gly Asp Pro Asp Ile Asp Thr Met Pro Leu Leu Ala Trp
225                 230                 235                 240
tcc gtc cag caa gcc cag tct tac cgg gaa ctc caa gcc gac gga aag    768
Ser Val Gln Gln Ala Gln Ser Tyr Arg Glu Leu Gln Ala Asp Gly Lys
                245                 250                 255
gat tcg ggt ttg gtc aag ttc atg atc cgt aac caa tcc tac ttt tac    816
Asp Ser Gly Leu Val Lys Phe Met Ile Arg Asn Gln Ser Tyr Phe Tyr
            260                 265                 270
ttt ccc atc ttg ttg ctc gcc cgc ctg tcg tgg ttg aac gag tcc ttc    864
Phe Pro Ile Leu Leu Leu Ala Arg Leu Ser Trp Leu Asn Glu Ser Phe
        275                 280                 285
aag tgc gcc ttt ggg ctt gga gct gcg tcg gag aac gct gct ctc gaa    912
Lys Cys Ala Phe Gly Leu Gly Ala Ala Ser Glu Asn Ala Ala Leu Glu
    290                 295                 300
ctc aag gcc aag ggt ctt cag tac ccc ctt ttg gaa aag gct ggc atc     960
Leu Lys Ala Lys Gly Leu Gln Tyr Pro Leu Leu Glu Lys Ala Gly Ile
305                 310                 315                 320
ctg ctg cac tac gct tgg atg ctt aca gtt tcg tcc ggc ttt gga cgc    1008
Leu Leu His Tyr Ala Trp Met Leu Thr Val Ser Ser Gly Phe Gly Arg
                325                 330                 335
ttc tcg ttc gcg tac acc gca ttt tac ttt cta acc gcg acc gcg tcc    1056
Phe Ser Phe Ala Tyr Thr Ala Phe Tyr Phe Leu Thr Ala Thr Ala Ser
            340                 345                 350
tgt gga ttc ttg ctc gcc att gtc ttt ggc ctc ggc cac aac ggc atg    1104
Cys Gly Phe Leu Leu Ala Ile Val Phe Gly Leu Gly His Asn Gly Met
        355                 360                 365
gcc acc tac aat gcc gac gcc cgt ccg gac ttc tgg aag ctc caa gtc    1152
Ala Thr Tyr Asn Ala Asp Ala Arg Pro Asp Phe Trp Lys Leu Gln Val
    370                 375                 380
acc acg act cgc aac gtc acg ggc gga cac ggt ttc ccc caa gcc ttt    1200
Thr Thr Thr Arg Asn Val Thr Gly Gly His Gly Phe Pro Gln Ala Phe
385                 390                 395                 400
gtc gac tgg ttc tgt ggt ggc ctc cag tac caa gtc gac cac cac tta    1248
Val Asp Trp Phe Cys Gly Gly Leu Gln Tyr Gln Val Asp His His Leu
                405                 410                 415
ttc ccc agc ctg ccc cga cac aat ctg gcc aag aca cac gca ctg gtc    1296
Phe Pro Ser Leu Pro Arg His Asn Leu Ala Lys Thr His Ala Leu Val
            420                 425                 430
gaa tcg ttc tgc aag gag tgg ggt gtc cag tac cac gaa gcc gac ctt    1344
Glu Ser Phe Cys Lys Glu Trp Gly Val Gln Tyr His Glu Ala Asp Leu
        435                 440                 445
gtg gac ggg acc atg gaa gtc ttg cac cat ttg ggc agc gtg gcc ggc    1392
Val Asp Gly Thr Met Glu Val Leu His His Leu Gly Ser Val Ala Gly
    450                 455                 460
gaa ttc gtc gtg gat ttt gta cgc gat gga ccc gcc atg taa            1434
Glu Phe Val Val Asp Phe Val Arg Asp Gly Pro Ala Met
465                 470                 475
<210>22
<211>477
<212>PRT
<213>三角褐指藻
<400>22
Met Gly Lys Gly Gly Asp Ala Arg Ala Ser Lys Gly Ser Thr Ala Ala
1               5                   10                  15
Arg Lys Ile Ser Trp Gln Glu Val Lys Thr His Ala Ser Pro Glu Asp
            20                  25                  30
Ala Trp Ile Ile His Ser Asn Lys Val Tyr Asp Val Ser Asn Trp His
        35                  40                  45
Glu His Pro Gly Gly Ala Val Ile Phe Thr His Ala Gly Asp Asp Met
    50                  55                  60
Thr Asp Ile Phe Ala Ala Phe His Ala Pro Gly Ser Gln Ser Leu Met
65                  70                  75                  80
Lys Lys Phe Tyr Ile Gly Glu Leu Leu Pro Glu Thr Thr Gly Lys Glu
                85                  90                  95
Pro Gln Gln Ile Ala Phe Glu Lys Gly Tyr Arg Asp Leu Arg Ser Lys
            100                 105                 110
Leu Ile Met Met Gly Met Phe Lys Ser Asn Lys Trp Phe Tyr Val Tyr
        115                 120                 125
Lys Cys Leu Ser Asn Met Ala Ile Trp Ala Ala Ala Cys Ala Leu Val
    130                 135                 140
Phe Tyr Ser Asp Arg Phe Trp Val His Leu Ala Ser Ala Val Met Leu
145                 150                 155                 160
Gly Thr Phe Phe Gln Gln Ser Gly Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His
                165                 170                 175
His Gln Val Phe Thr Lys Arg Lys His Gly Asp Leu Gly Gly Leu Phe
            180                 185                 190
Trp Gly Asn Leu Met Gln Gly Tyr Ser Val Gln Trp Trp Lys Asn Lys
        195                 200                 205
His Asn Gly His His Ala Val Pro Asn Leu His Cys Ser Ser Ala Val
    210                 215                 220
Ala Gln Asp Gly Asp Pro Asp Ile Asp Thr Met Pro Leu Leu Ala Trp
225                 230                 235                 240
Ser Val Gln Gln Ala Gln Ser Tyr Arg Glu Leu Gln Ala Asp Gly Lys
                245                 250                 255
Asp Ser Gly Leu Val Lys Phe Met Ile Arg Asn Gln Ser Tyr Phe Tyr
            260                 265                 270
Phe Pro Ile Leu Leu Leu Ala Arg Leu Ser Trp Leu Asn Glu Ser Phe
        275                 280                 285
Lys Cys Ala Phe Gly Leu Gly Ala Ala Ser Glu Asn Ala Ala Leu Glu
    290                 295                 300
Leu Lys Ala Lys Gly Leu Gln Tyr Pro Leu Leu Glu Lys Ala Gly Ile
305                 310                 315                 320
Leu Leu His Tyr Ala Trp Met Leu Thr Val Ser Ser Gly Phe Gly Arg
                325                 330                 335
Phe Ser Phe Ala Tyr Thr Ala Phe Tyr Phe Leu Thr Ala Thr Ala Ser
            340                 345                 350
Cys Gly Phe Leu Leu Ala Ile Val Phe Gly Leu Gly His Asn Gly Met
        355                 360                 365
Ala Thr Tyr Asn Ala Asp Ala Arg Pro Asp Phe Trp Lys Leu Gln Val
    370                 375                 380
Thr Thr Thr Arg Asn Val Thr Gly Gly His Gly Phe Pro Gln Ala Phe
385                 390                 395                 400
Val Asp Trp Phe Cys Gly Gly Leu Gln Tyr Gln Val Asp His His Leu
                405                 410                 415
Phe Pro Ser Leu Pro Arg His Asn Leu Ala Lys Thr His Ala Leu Val
            420                 425                 430
Glu Ser Phe Cys Lys Glu Trp Gly Val Gln Tyr His Glu Ala Asp Leu
        435                 440                 445
Val Asp Gly Thr Met Glu Val Leu His His Leu Gly Ser Val Ala Gly
    450                 455                 460
Glu Phe Val Val Asp Phe Val Arg Asp Gly Pro Ala Met
465                 470                 475
<210>23
<211>1578
<212>DNA
<213>展叶剑叶藓
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1578)
<223>Δ6去饱和酶
<400>23
atg gta ttc gcg ggc ggt gga ctt cag cag ggc tct ctc gaa gaa age     48
Met Val Phe Ala Gly Gly Gly Leu Gln Gln Gly Ser Leu Glu Glu Asn
1               5                   10                  15
atc gac gtc gag cac att gcc agt atg tct ctc ttc agc gac ttc ttc     96
Ile Asp Val Glu His Ile Ala Ser Met Ser Leu Phe Ser Asp Phe Phe
            20                  25                  30
agt tat gtg tct tca act gtt ggt tcg tgg agc gta cac agt ata caa    144
Ser Tyr Val Ser Ser Thr Val Gly Ser Trp Ser Val His Ser Ile Gln
        35                  40                  45
cct ttg aag cgc ctg acg agt aag aag cgt gtt tcg gaa agc gct gcc    192
Pro Leu Lys Arg Leu Thr Ser Lys Lys Arg Val Ser Glu Ser Ala Ala
    50                  55                  60
gtg caa tgt ata tca gct gaa gtt cag aga aat tcg agt acc cag gga    240
Val Gln Cys Ile Ser Ala Glu Val Gln Arg Asn Ser Ser Thr Gln Gly
65                  70                  75                  80
act gcg gag gca ctc gca gaa tca gtc gtg aag ccc acg aga cga agg    288
Thr Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ser Val Val Lys Pro Thr Arg Arg Arg
                85                  90                  95
tca tct cag tgg aag aag tcg aca cac ccc cta tca gaa gta gca gta    336
Ser Ser Gln Trp Lys Lys Ser Thr His Pro Leu Ser Glu Val Ala Val
            100                 105                 110
cac aac aag cca agc gat tgc tgg att gtt gta aaa aac aag gtg tat    384
His Asn Lys Pro Ser Asp Cys Trp Ile Val Val Lys Asn Lys Val Tyr
        115                 120                 125
gat gtt tcc aat ttt gcg gac gag cat ccc gga gga tca gtt att agt    432
Asp Val Ser Asn Phe Ala Asp Glu His Pro Gly Gly Ser Val Ile Ser
    130                 135                 140
act tat ttt gga cga gac ggc aca gat gtt ttc tct agt ttt cat gca    480
Thr Tyr Phe Gly Arg Asp Gly Thr Asp Val Phe Ser Ser Phe His Ala
145                 150                 155                 160
gct tct aca tgg aaa att ctt caa gac ttt tac att ggt gac gtg gag    528
Ala Ser Thr Trp Lys Ile Leu Gln Asp Phe Tyr Ile Gly Asp Val Glu
                165                 170                 175
agg gtg gag ccg act cca gag ctg ctg aaa gat ttc cga gaa atg aga    576
Arg Val Glu Pro Thr Pro Glu Leu Leu Lys Asp Phe Arg Glu Met Arg
            180                 185                 190
gct ctt ttc ctg agg gag caa ctt ttc aaa agt tcg aaa ttg tac tat    624
Ala Leu Phe Leu Arg Glu Gln Leu Phe Lys Ser Ser Lys Leu Tyr Tyr
        195                 200                 205
gtt atg aag ctg ctc acg aat gtt gct att ttt gct gcg agc att gca    672
Val Met Lys Leu Leu Thr Asn Val Ala Ile Phe Ala Ala Ser Ile Ala
    210                 215                 220
ata ata tgt tgg agc aag act att tca gcg gtt ttg gct tca gct tgt     720
Ile Ile Cys Trp Ser Lys Thr Ile Ser Ala Val Leu Ala Ser Ala Cys
225                 230                 235                 240
atg atg gct ctg tgt ttc caa cag tgc gga tgg cta tcc cat gat ttt     768
Met Met Ala Leu Cys Phe Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ser His Asp Phe
                245                 250                 255
ctc cac aat cag gtg ttt gag aca cgc tgg ctt aat gaa gtt gtc ggg     816
Leu His Asn Gln Val Phe Glu Thr Arg Trp Leu Asn Glu Val Val Gly
            260                 265                 270
tat gtg atc ggc aac gcc gtt ctg ggg ttt agt aca ggg tgg tgg aag     864
Tyr Val Ile Gly Asn Ala Val Leu Gly Phe Ser Thr Gly Trp Trp Lys
        275                 280                 285
gag aag cat aac ctt cat cat gct gct cca aat gaa tgc gat cag act     912
Glu Lys His Asn Leu His His Ala Ala Pro Asn Glu Cys Asp Gln Thr
    290                 295                 300
tac caa cca att gat gaa gat att gat act ctc ccc ctc att gcc tgg     960
Tyr Gln Pro Ile Asp Glu Asp Ile Asp Thr Leu Pro Leu Ile Ala Trp
305                 310                 315                 320
agc aag gac ata ctg gcc aca gtt gag aat aag aca ttc ttg cga atc    1008
Ser Lys Asp Ile Leu Ala Thr Val Glu Asn Lys Thr Phe Leu Arg Ile
                325                 330                 335
ctc caa tac cag cat ctg ttc ttc atg ggt ctg tta ttt ttc gcc cgt    1056
Leu Gln Tyr Gln His Leu Phe Phe Met Gly Leu Leu Phe Phe Ala Arg
            340                 345                 350
ggt agt tgg ctc ttt tgg agc tgg aga tat acc tct aca gca gtg ctc    1104
Gly Ser Trp Leu Phe Trp Ser Trp Arg Tyr Thr Ser Thr Ala Val Leu
        355                 360                 365
tca cct gtc gac agg ttg ttg gag aag gga act gtt ctg ttt cac tac    1152
Ser Pro Val Asp Arg Leu Leu Glu Lys Gly Thr Val Leu Phe His Tyr
    370                 375                 380
ttt tgg ttc gtc ggg aca gcg tgc tat ctt ctc cct ggt tgg aag cca    1200
Phe Trp Phe Val Gly Thr Ala Cys Tyr Leu Leu Pro Gly Trp Lys Pro
385                 390                 395                 400
tta gta tgg atg gcg gtg act gag ctc atg tcc ggc atg ctg ctg ggc    1248
Leu Val Trp Met Ala Val Thr Glu Leu Met Ser Gly Met Leu Leu Gly
                405                 410                 415
ttt gta ttt gta ctt agc cac aat ggg atg gag gtt tat aat tcg tct    1296
Phe Val Phe Val Leu Ser His Asn Gly Met Glu Val Tyr Asn Ser Ser
            420                 425                 430
aaa gaa ttc gtg agt gca cag atc gta tcc aca cgg gat atc aaa gga    1344
Lys Glu Phe Val Ser Ala Gln Ile Val Ser Thr Arg Asp Ile Lys Gly
        435                 440                 445
aac ata ttc aac gac tgg ttc act ggt ggc ctt aac agg caa ata gag    1392
Asn Ile Phe Asn Asp Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Arg Gln Ile Glu
    450                 455                 460
cat cat ctt ttc cca aca atg ccc agg cat aat tta aac aaa ata gca    1440
His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Lys Ile Ala
465                 470                 475                 480
cct aga gtg gag gtg ttc tgt aag aaa cac ggt ctg gtg tac gaa gac    1488
Pro Arg Val Glu Val Phe Cys Lys Lys His Gly Leu Val Tyr Glu Asp
                485                 490                 495
gta tct att gct acc ggc act tgc aag gtt ttg aaa gca ttg aag gaa    1536
Val Ser Ile Ala Thr Gly Thr Cys Lys Val Leu Lys Ala Leu Lys Glu
            500                 505                 510
gtc gcg gag gct gcg gca gag cag cat gct acc acc agt taa            1578
Val Ala Glu Ala Ala Ala Glu Gln His Ala Thr Thr Ser
        515                 520                 525
<210>24
<211>525
<212>PRT
<213>展叶剑叶藓
<400>24
Met Val Phe Ala Gly Gly Gly Leu Gln Gln Gly Ser Leu Glu Glu Asn
1               5                   10                  15
Ile Asp Val Glu His Ile Ala Ser Met Ser Leu Phe Ser Asp Phe Phe
            20                  25                  30
Ser Tyr Val Ser Ser Thr Val Gly Ser Trp Ser Val His Ser Ile Gln
        35                  40                  45
Pro Leu Lys Arg Leu Thr Ser Lys Lys Arg Val Ser Glu Ser Ala Ala
    50                  55                  60
Val Gln Cys Ile Ser Ala Glu Val Gln Arg Asn Ser Ser Thr Gln Gly
65                  70                  75                  80
Thr Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ser Val Val Lys Pro Thr Arg Arg Arg
                85                  90                  95
Ser Ser Gln Trp Lys Lys Ser Thr His Pro Leu Ser Glu Val Ala Val
            100                 105                 110
His Asn Lys Pro Ser Asp Cys Trp Ile Val Val Lys Asn Lys Val Tyr
        115                 120                 125
Asp Val Ser Asn Phe Ala Asp Glu His Pro Gly Gly Ser Val Ile Ser
    130                 135                 140
Thr Tyr Phe Gly Arg Asp Gly Thr Asp Val Phe Ser Ser Phe His Ala
145                 150                 155                 160
Ala Ser Thr Trp Lys Ile Leu Gln Asp Phe Tyr Ile Gly Asp Val Glu
                165                 170                 175
Arg Val Glu Pro Thr Pro Glu Leu Leu Lys Asp Phe Arg Glu Met Arg
            180                 185                 190
Ala Leu Phe Leu Arg Glu Gln Leu Phe Lys Ser Ser Lys Leu Tyr Tyr
        195                 200                 205
Val Met Lys Leu Leu Thr Asn Val Ala Ile Phe Ala Ala Ser Ile Ala
    210                 215                 220
Ile Ile Cys Trp Ser Lys Thr Ile Ser Ala Val Leu Ala Ser Ala Cys
225                 230                 235                 240
Met Met Ala Leu Cys Phe Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ser His Asp Phe
                245                 250                 255
Leu His Asn Gln Val Phe Glu Thr Arg Trp Leu Asn Glu Val Val Gly
            260                 265                 270
Tyr Val Ile Gly Asn Ala Val Leu Gly Phe Ser Thr Gly Trp Trp Lys
        275                 280                 285
Glu Lys His Asn Leu His His Ala Ala Pro Asn Glu Cys Asp Gln Thr
    290                 295                 300
Tyr Gln Pro Ile Asp Glu Asp Ile Asp Thr Leu Pro Leu Ile Ala Trp
305                 310                 315                 320
Ser Lys Asp Ile Leu Ala Thr Val Glu Asn Lys Thr Phe Leu Arg Ile
                325                 330                 335
Leu Gln Tyr Gln His Leu Phe Phe Met Gly Leu Leu Phe Phe Ala Arg
            340                 345                 350
Gly Ser Trp Leu Phe Trp Ser Trp Arg Tyr Thr Ser Thr Ala Val Leu
        355                 360                 365
Ser Pro Val Asp Arg Leu Leu Glu Lys Gly Thr Val Leu Phe His Tyr
    370                 375                 380
Phe Trp Phe Val Gly Thr Ala Cys Tyr Leu Leu Pro Gly Trp Lys Pro
385                 390                 395                 400
Leu Val Trp Met Ala Val Thr Glu Leu Met Ser Gly Met Leu Leu Gly
                405                 410                 415
Phe Val Phe Val Leu Ser His Asn Gly Met Glu Val Tyr Asn Ser Ser
            420                 425                 430
Lys Glu Phe Val Ser Ala Gln Ile Val Ser Thr Arg Asp Ile Lys Gly
        435                 440                 445
Asn Ile Phe Asn Asp Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Arg Gln Ile Glu
    450                 455                 460
His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg His Asn Leu Asn Lys Ile Ala
465                 470                 475                 480
Pro Arg Val Glu Val Phe Cys Lys Lys His Gly Leu Val Tyr Glu Asp
                485                 490                 495
Val Ser Ile Ala Thr Gly Thr Cys Lys Val Leu Lys Ala Leu Lys Glu
            500                 505                 510
Val Ala Glu Ala Ala Ala Glu Gln His Ala Thr Thr Ser
        515                 520                 525
<210>25
<211>1332
<212>DNA
<213>秀丽隐杆线虫
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1332)
<223>Δ6去饱和酶
<400>25
atg gtc gtc gac aag aat gcc tcc ggg ctt cga atg aag gtc gat ggc     48
Met Val Val Asp Lys Asn Ala Ser Gly Leu Arg Met Lys Val Asp Gly
1               5                   10                  15
aaa tgg ctc tac ctt agc gag gaa ttg gtg aag aaa cat cca gga gga     96
Lys Trp Leu Tyr Leu Ser Glu Glu Leu Val Lys Lys His Pro Gly Gly
            20                  25                  30
gct gtt att gaa caa tat aga aat tcg gat gct act cat att ttc cac    144
Ala Val Ile Glu Gln Tyr Arg Asn Ser Asp Ala Thr His Ile Phe His
        35                  40                  45
gct ttc cac gaa gga tct tct cag gct tat aag caa crt gac ctt ctg    192
Ala Phe His Glu Gly Ser Ser Gln Ala Tyr Lys Gln Leu Asp Leu Leu
    50                  55                  60
aaa aag cac gga gag cac gat gaa ttc ctt gag aaa caa ttg gaa aag    240
Lys Lys His Gly Glu His Asp Glu Phe Leu Glu Lys Gln Leu Glu Lys
65                  70                  75                  80
aga ctt gac aaa gtt gat atc aat gta tca gca tat gat gtc agt gtt    288
Arg Leu Asp Lys Val Asp Ile Asn Val Ser Ala Tyr Asp Val Ser Val
                85                  90                  95
gca caa gaa aag aaa atg gtt gaa tca ttc gaa aaa cta cga cag aag    336
Ala Gln Glu Lys Lys Met Val Glu Ser Phe Glu Lys Leu Arg Gln Lys
            100                 105                 110
ctt cat gat gat gga tta atg aaa gca aat gaa aca tat ttc ctg ttt    384
Leu His Asp Asp Gly Leu Met Lys Ala Asn Glu Thr Tyr Phe Leu Phe
        115                 120                 125
aaa gcg att tca aca ctt tca att atg gca ttt gca ttt tat ctt cag    432
Lys Ala Ile Ser Thr Leu Ser Ile Met Ala Phe Ala Phe Tyr Leu Gln
    130                 135                 140
tat ctt gga tgg tat att act tct gca tgt tta tta gca ctt gca tgg    480
Tyr Leu Gly Trp Tyr Ile Thr Ser Ala Cys Leu Leu Ala Leu Ala Trp
145                 150                 155                 160
caa caa ttc gga tgg tta aca cat gag ttc tgc cat caa cag cca aca    528
Gln Gln Phe Gly Trp Leu Thr His Glu Phe Cys His Gln Gln Pro Thr
                165                 170                 175
aag aac aga cct ttg aat gat act att tct ttg ttc ttt ggt aat ttc    576
Lys Asn Arg Pro Leu Asn Asp Thr Ile Ser Leu Phe Phe Gly Asn Phe
            180                 185                 190
tta caa gga ttt tca aga gat tgg tgg aag gac aag cat aac act cat    624
Leu Gln Gly Phe Ser Arg Asp Trp Trp Lys Asp Lys His Asn Thr His
        l95                 200                 205
cac gct gcc aca aat gta att gat cat gac ggt gat atc gac ttg gca    672
His Ala Ala Thr Asn Val Ile Asp His Asp Gly Asp Ile Asp Leu Ala
    210                 215                 220
cca ctt ttc gca ttt att cca gga gat ttg tgc aag tat aag gcc agc    720
Pro Leu Phe Ala Phe Ile Pro Gly Asp Leu Cys Lys Tyr Lys Ala Ser
225                 230                 235                 240
ttt gaa aaa gca att ctc aag att gta cca tat caa cat ctc tat ttc    768
Phe Glu Lys Ala Ile Leu Lys Ile Val Pro Tyr Gln His Leu Tyr Phe
                245                 250                 255
acc gca atg ctt cca atg ctc cgt ttc tca tgg act ggt cag tca gtt     816
Thr Ala Met Leu Pro Met Leu Arg Phe Ser Trp Thr Gly Gln Ser Val
            260                 265                 270
caa tgg gta ttc aaa gag aat caa atg gag tac aag gtc tat caa aga     864
Gln Trp Val Phe Lys Glu Asn Gln Met Glu Tyr Lys Val Tyr Gln Arg
        275                 280                 285
aat gca ttc tgg gag caa gca aca att gtt gga cat tgg gct tgg gta     912
Asn Ala Phe Trp Glu Gln Ala Thr Ile Val Gly His Trp Ala Trp Val
    290                 295                 300
ttc tat caa ttg ttc tta tta cca aca tgg cca ctt cgg gtt gct tat     960
Phe Tyr Gln Leu Phe Leu Leu Pro Thr Trp Pro Leu Arg Val Ala Tyr
305                 310                 315                 320
ttc att att tca caa atg gga gga ggc ctt ttg att gct cac gta gtc    1008
Phe Ile Ile Ser Gln Met Gly Gly Gly Leu Leu Ile Ala His Val Val
                325                 330                 335
act ttc aac cat aac tct gtt gat aag tat cca gcc aat tct cga att    1056
Thr Phe Asn His Asn Ser Val Asp Lys Tyr Pro Ala Asn Ser Arg Ile
            340                 345                 350
tta aac aac ttc gcc gct ctt caa att ttg acc aca cgc aac atg act    1104
Leu Asn Asn Phe Ala Ala Leu Gln Ile Leu Thr Thr Arg Asn Met Thr
        355                 360                 365
cca tct cca ttc att gat tgg ctt tgg ggt gga ctc aat tat cag atc    1152
Pro Ser Pro Phe Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Ile
    370                 375                 380
gag cac cac ttg ttc cca aca atg cca cgt tgc aat ctg aat gct tgc    1200
Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg Cys Asn Leu Asn Ala Cys
385                 390                 395                 400
gtg aaa tat gtg aaa gaa tgg tgc aaa gag aat aat ctt cct tac ctc    1248
Val Lys Tyr Val Lys Glu Trp Cys Lys Glu Asn Asn Leu Pro Tyr Leu
                 405                 410                 415
gtc gat gac tac ttt gac gga tat gca atg aat ttg caa caa ttg aaa    1296
Val Asp Asp Tyr Phe Asp Gly Tyr Ala Met Asn Leu Gln Gln Leu Lys
            420                 425                 430
aat atg gct gag cac att caa gct aaa gct gcc taa                    1332
Asn Met Ala Glu His Ile Gln Ala Lys Ala Ala
        435                 440
<210>26
<211>443
<212>PRT
<213>秀丽隐杆线虫
<400>26
Met Val Val Asp Lys Asn Ala Ser Gly Leu Arg Met Lys Val Asp Gly
1               5                   10                  15
Lys Trp Leu Tyr Leu Ser Glu Glu Leu Val Lys Lys His Pro Gly Gly
            20                  25                  30
Ala Val Ile Glu Gln Tyr Arg Asn Ser Asp Ala Thr His Ile Phe His
        35                  40                  45
Ala Phe His Glu Gly Ser Ser Gln Ala Tyr Lys Gln Leu Asp Leu Leu
    50                  55                  60
Lys Lys His Gly Glu His Asp Glu Phe Leu Glu Lys Gln Leu Glu Lys
65                  70                  75                  80
Arg Leu Asp Lys Val Asp Ile Asn Val Ser Ala Tyr Asp Val Ser Val
                85                  90                  95
Ala Gln Glu Lys Lys Met Val Glu Ser Phe Glu Lys Leu Arg Gln Lys
            100                 105                 110
Leu His Asp Asp Gly Leu Met Lys Ala Asn Glu Thr Tyr Phe Leu Phe
        115                 120                 125
Lys Ala Ile Ser Thr Leu Ser Ile Met Ala Phe Ala Phe Tyr Leu Gln
    130                 135                 140
Tyr Leu Gly Trp Tyr Ile Thr Ser Ala Cys Leu Leu Ala Leu Ala Trp
145                 150                 155                 160
Gln Gln Phe Gly Trp Leu Thr His Glu Phe Cys His Gln Gln Pro Thr
                165                 170                 175
Lys Asn Arg Pro Leu Asn Asp Thr Ile Ser Leu Phe Phe Gly Asn Phe
            180                 185                 190
Leu Gln Gly Phe Ser Arg Asp Trp Trp Lys Asp Lys His Asn Thr His
        195                 200                 205
His Ala Ala Thr Asn Val Ile Asp His Asp Gly Asp Ile Asp Leu Ala
    210                 215                 220
Pro Leu Phe Ala Phe Ile Pro Gly Asp Leu Cys Lys Tyr Lys Ala Ser
225                 230                 235                 240
Phe Glu Lys Ala Ile Leu Lys Ile Val Pro Tyr Gln His Leu Tyr Phe
                245                 250                 255
Thr Ala Met Leu Pro Met Leu Arg Phe Ser Trp Thr Gly Gln Ser Val
            260                 265                 270
Gln Trp Val Phe Lys Glu Asn Gln Met Glu Tyr Lys Val Tyr Gln Arg
        275                 280                 285
Asn Ala Phe Trp Glu Gln Ala Thr Ile Val Gly His Trp Ala Trp Val
    290                 295                 300
Phe Tyr Gln Leu Phe Leu Leu Pro Thr Trp Pro Leu Arg Val Ala Tyr
305                 310                 315                 320
Phe Ile Ile Ser Gln Met Gly Gly Gly Leu Leu Ile Ala His Val Val
                325                 330                 335
Thr Phe Asn His Asn Ser Val Asp Lys Tyr Pro Ala Asn Ser Arg Ile
            340                 345                 350
Leu Asn Asn Phe Ala Ala Leu Gln Ile Leu Thr Thr Arg Asn Met Thr
        355                 360                 365
Pro Ser Pro Phe Ile Asp Trp Leu Trp Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Ile
    370                 375                 380
Glu His His Leu Phe Pro Thr Met Pro Arg Cys Asn Leu Asn Ala Cys
385                 390                 395                 400
Val Lys Tyr Val Lys Glu Trp Cys Lys Glu Asn Asn Leu Pro Tyr Leu
                405                 410                 415
Val Asp Asp Tyr Phe Asp Gly Tyr Ala Met Asn Leu Gln Gln Leu Lys
            420                 425                 430
Asn Met Ala Glu His Ile Gln Ala Lys Ala Ala
        435                 440
<210>27
<211>873
<212>DNA
<213>展叶剑叶藓
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(873)
<223>Δ6延伸酶
<400>27
atg gag gtc gtg gag aga ttc tac ggt gag ttg gat ggg aag gtc tcg     48
Met Glu Val Val Glu Arg Phe Tyr Gly Glu Leu Asp Gly Lys Val Ser
1               5                   10                  15
cag ggc gtg aat gca ttg ctg ggt agt ttt ggg gtg gag ttg acg gat     96
Gln Gly Val Asn Ala Leu Leu 6ly Ser Phe Gly Val Glu Leu Thr Asp
            20                  25                  30
acg ccc act acc aaa ggc ttg ccc ctc gtt gac agt ccc aca ccc atc    144
Thr Pro Thr Thr Lys Gly Leu Pro Leu Val Asp Ser Pro Thr Pro Ile
        35                  40                  45
gtc ctc ggt gtt tct gta tac ttg act att gtc att gga ggg ctt ttg    192
Val Leu Gly Val Set Val Tyr Leu Thr Ile Val Ile Gly Gly Leu Leu
    50                  55                  60
tgg ata aag gcc agg gat ctg aaa ccg cgc gcc tcg gag cca ttt ttg    240
Trp Ile Lys Ala Arg Asp Leu Lys Pro Arg Ala Ser Glu Pro Phe Leu
65                  70                  75                  80
ctc caa gct ttg gtg ctt gtg cac aac ctg ttc tgt ttt gcg ctc agt    288
Leu Gln Ala Leu Val Leu Val His Asn Leu Phe Cys Phe Ala Leu Ser
                85                  90                  95
ctg tat atg tgc gtg ggc atc gct tat cag gct att acc tgg cgg tac    336
Leu Tyr Met Cys Val Gly Ile Ala Tyr Gln Ala Ile Thr Trp Arg Tyr
            100                 105                 110
tct ctc tgg ggc aat gca tac aat cct aaa cat aaa gag atg gcg att    384
Ser Leu Trp Gly Asn Ala Tyr Asn Pro Lys His Lys Glu Met Ala Ile
        115                 120                 125
ctg gta tac ttg ttc tac atg tct aag tac gtg gaa ttc atg gat acc    432
Leu Val Tyr Leu Phe Tyr Met Ser Lys Tyr Val Glu Phe Met Asp Thr
    130                 135                 140
gtt atc atg ata ctg aag cgc agc acc agg caa ata agc ttc ctc cac    480
Val Ile Met Ile Leu Lys Arg Ser Thr Arg Gln Ile Ser Phe Leu His
145                 150                 155                 160
gtt tat cat cat tct tca att tcc ctc att tgg tgg gct att gct cat    528
Val Tyr His His Ser Ser Ile Ser Leu Ile Trp Trp Ala Ile Ala His
                165                 170                 175
cac gct cct ggc ggt gaa gca tat tgg tct gcg gct ctg aac tca gga    576
His Ala Pro Gly Gly Glu Ala Tyr Trp Ser Ala Ala Leu Asn Ser Gly
            180                 185                 190
gtg cat gtt ctc atg tat gcg tat tac ttc ttg gct gcc tgc ctt cga    624
Val His Val Leu Met Tyr Ala Tyr Tyr Phe Leu Ala Ala Cys Leu Arg
        195                 200                 205
agt agc cca aag tta aaa aat aag tac ctt ttt tgg ggc agg tac ttg    672
Ser Ser Pro Lys Leu Lys Asn Lys Tyr Leu Phe Trp Gly Arg Tyr Leu
    210                 215                 220
aca caa ttc caa atg ttc cag ttt atg ctg aac tta gtg cag gct tac    720
Thr Gln Phe Gln Met Phe Gln Phe Met Leu Asn Leu Val Gln Ala Tyr
225                 230                 235                 240
tac gac atg aaa acg aat gcg cca tat cca caa tgg ctg atc aag att    768
Tyr Asp Met Lys Thr Asn Ala Pro Tyr Pro Gln Trp Leu Ile Lys Ile
                245                 250                 255
ttg ttc tac tac atg atc tcg ttg ctg ttt ctt ttc ggc aat ttt tac    816
Leu Phe Tyr Tyr Met Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Gly Asn Phe Tyr
            260                 265                 270
gta caa aaa tac atc aaa ccc tct gac gga aag caa aag gga gct aaa    864
Val Gln Lys Tyr Ile Lys Pro Ser Asp Gly Lys Gln Lys Gly Ala Lys
        275                 280                 285
act gag tga                                                        873
Thr Glu
    290
<210>28
<211>290
<212>PRT
<213>展叶剑叶藓
<400>28
Met Glu Val Val Glu Arg Phe Tyr Gly Glu Leu Asp Gly Lys Val Ser
1               5                   10                  15
Gln Gly Val Asn Ala Leu Leu Gly Ser Phe Gly Val Glu Leu Thr Asp
            20                  25                  30
Thr Pro Thr Thr Lys Gly Leu Pro Leu Val Asp Ser Pro Thr Pro Ile
        35                  40                  45
Val Leu Gly Val Ser Val Tyr Leu Thr Ile Val Ile Gly Gly Leu Leu
    50                  55                  60
Trp Ile Lys Ala Arg Asp Leu Lys Pro Arg Ala Ser Glu Pro Phe Leu
65                  70                  75                  80
Leu Gln Ala Leu Val Leu Val His Asn Leu Phe Cys Phe Ala Leu Ser
                85                  90                  95
Leu Tyr Met Cys Val Gly Ile Ala Tyr Gln Ala Ile Thr Trp Arg Tyr
            100                 105                 110
Ser Leu Trp Gly Asn Ala Tyr Asn Pro Lys His Lys Glu Met Ala Ile
        115                 120                 125
Leu Val Tyr Leu Phe Tyr Met Ser Lys Tyr Val Glu Phe Met Asp Thr
    130                 135                 140
Val Ile Met Ile Leu Lys Arg Ser Thr Arg Gln Ile Ser Phe Leu His
145                 150                 155                 160
Val Tyr His His Ser Ser Ile Ser Leu Ile Trp Trp Ala Ile Ala His
                165                 170                 175
His Ala Pro Gly Gly Glu Ala Tyr Trp Ser Ala Ala Leu Asn Ser Gly
            180                 185                 190
Val His Val Leu Met Tyr Ala Tyr Tyr Phe Leu Ala Ala Cys Leu Arg
        195                 200                 205
Ser Ser Pro Lys Leu Lys Asn Lys Tyr Leu Phe Trp Gly Arg Tyr Leu
    210                 215                 220
Thr Gln Phe Gln Met Phe Gln Phe Met Leu Asn Leu Val Gln Ala Tyr
225                 230                 235                 240
Tyr Asp Met Lys Thr Asn Ala Pro Tyr Pro Gln Trp Leu Ile Lys Ile
                245                 250                 255
Leu Phe Tyr Tyr Met Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Gly Asn Phe Tyr
            260                 265                 270
Val Gln Lys Tyr Ile Lys Pro Ser Asp Gly Lys Gln Lys Gly Ala Lys
        275                 280                 285
Thr Glu
    290
<210>29
<211>1049
<212>DNA
<213>破囊壶菌
<220>
<221>CDS
<222>(43)..(858)
<223>Δ6延伸酶
<400>29
gaattcggca cgagagcgcg cggagcggag acctcggccg cg atg atg gag ccg      54
                                               Met Met Glu Pro
                                               1
ctc gac agg tac agg gcg ctg gcg gag ctc gcc gcg agg tac gcc agc    102
Leu Asp Arg Tyr Arg Ala Leu Ala Glu Leu Ala Ala Arg Tyr Ala Ser
5                   10                  15                  20
tcg gcg gcc ttc aag tgg caa gtc acg tac gac gcc aag gac agc ttc    150
Ser Ala Ala Phe Lys Trp Gln Val Thr Tyr Asp Ala Lys Asp Ser Phe
                25                  30                  35
gtc ggg ccc ctg gga arc cgg gag ccg ctc ggg crc ctg gtg ggc tcc    198
Val Gly Pro Leu Gly Ile Arg Glu Pro Leu Gly Leu Leu Val Gly Ser
            40                  45                  50
gtg gtc ctc tac ctg agc ctg ctg gcc gtg gtc tac gcg ctg cgg aac    246
Val Val Leu Tyr Leu Ser Leu Leu Ala Val Val Tyr Ala Leu Arg Asn
        55                  60                  65
tac ctt ggc ggc ctc atg gcg ctc cgc agc gtg cat aac ctc ggg ctc    294
Tyr Leu Gly Gly Leu Met Ala Leu Arg Ser Val His Asn Leu Gly Leu
    70                  75                  80
tgc ctc ttc tcg ggc gcc gtg tgg atc tac acg agc tac ctc atg atc    342
Cys Leu Phe Ser Gly Ala Val Trp Ile Tyr Thr Ser Tyr Leu Met Ile
85                  90                  95                  100
cag gat ggg cac ttt cgc agc ctc gag gcg gca acg tgc gag ccg ctc    390
Gln Asp Gly His Phe Arg Ser Leu Glu Ala Ala Thr Cys Glu Pro Leu
                105                 110                 115
aag cat ccg cac ttc cag ctc atc agc ttg ctc ttt gcg ctg tcc aag    438
Lys His Pro His Phe Gln Leu Ile Ser Leu Leu Phe Ala Leu Ser Lys
            120                 125                 130
atc tgg gag tgg ttc gac acg gtg ctc ctc atc gtc aag ggc aac aag    486
Ile Trp Glu Trp Phe Asp Thr Val Leu Leu Ile Val Lys Gly Asn Lys
        135                 140                 145
ctc cgc ttc ctg cac gtc ttg cac cac gcc acg acc ttt tgg ctc tac    534
Leu Arg Phe Leu His Val Leu His His Ala Thr Thr Phe Trp Leu Tyr
    150                 155                 160
gcc atc gac cac atc ttt ctc tcg tcc atc aag tac ggc gtc gcg gtc    582
Ala Ile Asp His Ile Phe Leu Ser Ser Ile Lys Tyr Gly Val Ala Val
165                 170                 175                 180
aat gct ttc atc cac acc gtc atg tac gcg cac tac ttc cgc cca ttc    630
Asn Ala Phe Ile His Thr Val Met Tyr Ala His Tyr Phe Arg Pro Phe
                185                 190                 195
ccg aag ggc ttg cgc ccg ctt att acg cag ttg cag atc gtc cag ttc    678
Pro Lys Gly Leu Arg Pro Leu Ile Thr Gln Leu Gln Ile Val Gln Phe
            200                 205                 210
att ttc agc atc ggc atc cat acc gcc att tac tgg cac tac gac tgc    726
Ile Phe Ser Ile Gly Ile His Thr Ala Ile Tyr Trp His Tyr Asp Cys
        215                 220                 225
gag ccg ctc gtg cat acc cac ttt tgg gaa tac gtc acg ccc tac ctt    774
Glu Pro Leu Val His Thr His Phe Trp Glu Tyr Val Thr Pro Tyr Leu
    230                 235                 240
ttc gtc gtg ccc ttc ctc atc ctc ttt ttc aat ttt tac ctg cag cag    822
Phe Val Val Pro Phe Leu Ile Leu Phe Phe Asn Phe Tyr Leu Gln Gln
245                 250                 255                 260
tac gtc ctc gcg ccc gca aaa acc aag aag gca tag ccacgtaaca         868
Tyr Val Leu Ala Pro Ala Lys Thr Lys Lys Ala
                265                 270
gtagaccagc agcgccgagg acgcgtgccg cgttatcgcg aagcacgaaa taaagaagat  928
catttgattc aacgaggcta cttgcggcca cgagaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa  988
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa  1048
c                                                                  1049
<210>30
<211>271
<212>PRT
<213>破囊壶菌
<400>30
Met Met Glu Pro Leu Asp Arg Tyr Arg Ala Leu Ala Glu Leu Ala Ala
1               5                   10                  15
Arg Tyr Ala Ser Ser Ala Ala Phe Lys Trp Gln Val Thr Tyr Asp Ala
            20                  25                  30
Lys Asp Ser Phe Val Gly Pro Leu Gly Ile Arg Glu Pro Leu Gly Leu
        35                  40                  45
Leu Val Gly Ser Val Val Leu Tyr Leu Ser Leu Leu Ala Val Val Tyr
    50                  55                  60
Ala Leu Arg Asn Tyr Leu Gly Gly Leu Met Ala Leu Arg Ser Val His
65                  70                  75                  80
Asn Leu Gly Leu Cys Leu Phe Ser Gly Ala Val Trp Ile Tyr Thr Ser
                85                  90                  95
Tyr Leu Met Ile Gln Asp Gly His Phe Arg Ser Leu Glu Ala Ala Thr
            100                 105                 110
Cys Glu Pro Leu Lys His Pro His Phe Gln Leu Ile Ser Leu Leu Phe
        115                 120                 125
Ala Leu Ser Lys Ile Trp Glu Trp Phe Asp Thr Val Leu Leu Ile Val
    130                 135                 140
Lys Gly Asn Lys Leu Arg Phe Leu His Val Leu His His Ala Thr Thr
145                 150                 155                 160
Phe Trp Leu Tyr Ala Ile Asp His Ile Phe Leu Ser Ser Ile Lys Tyr
                165                 170                 175
Gly Val Ala Val Asn Ala Phe Ile His Thr Val Met Tyr Ala His Tyr
            180                 185                 190
Phe Arg Pro Phe Pro Lys Gly Leu Arg Pro Leu Ile Thr Gln Leu Gln
        195                 200                 205
Ile Val Gln Phe Ile Phe Ser Ile Gly Ile His Thr Ala Ile Tyr Trp
    210                 215                 220
His Tyr Asp Cys Glu Pro Leu Val His Thr His Phe Trp Glu Tyr Val
225                 230                 235                 240
Thr Pro Tyr Leu Phe Val Val Pro Phe Leu Ile Leu Phe Phe Asn Phe
                245                 250                 255
Tyr Leu Gln Gln Tyr Val Leu Ala Pro Ala Lys Thr Lys Lys Ala
            260                 265                 270
<210>31
<211>837
<212>DNA
<213>致病疫霉(Phytophthora infestans)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(837)
<223>Δ6延伸酶
<400>31
atg tcg act gag cta ctg cag agc tac tac gcg tgg gcc aac gcc acg     48
Met Ser Thr Glu Leu Leu Gln Ser Tyr Tyr Ala Trp Ala Asn Ala Thr
1               5                   10                  15
gag gcc aag ctg ctg gac tgg gtc gac cct gag ggc ggc tgg aag gtg     96
Glu Ala Lys Leu Leu Asp Trp Val Asp Pro Glu Gly Gly Trp Lys Val
            20                  25                  30
cat cct atg gca gac tac ccc cta gcc aac ttc tcc agc gtc tac gcc    144
His Pro Met Ala Asp Tyr Pro Leu Ala Asn Phe Ser Ser Val Tyr Ala
        35                  40                  45
atc tgc gtc gga tac ttg ctc ttc gta atc ttc ggc acg gcc ctg atg    192
Ile Cys Val Gly Tyr Leu Leu Phe Val Ile Phe Gly Thr Ala Leu Met
    50                  55                  60
aaa atg gga gtc ccc gcc atc aag acc agt cca tta cag ttt gtg tac    240
Lys Met Gly Val Pro Ala Ile Lys Thr Ser Pro Leu Gln Phe Val Tyr
65                  70                  75                  80
aac ccc atc caa gtc att gcc tgc tct tat atg tgc gtg gag gcc gcc    288
Asn Pro Ile Gln Val Ile Ala Cys Ser Tyr Met Cys Val Glu Ala Ala
                85                  90                  95
atc cag gcc tac cgc aac ggc tac acc gcc gcc ccg tgc aac gcc ttt    336
Ile Gln Ala Tyr Arg Asn Gly Tyr Thr Ala Ala Pro Cys Asn Ala Phe
            100                 105                 110
aag tcc gac gac ccc gtc atg ggc aac gtt ctg tac ctc ttc tat ctc    384
Lys Ser Asp Asp Pro Val Met Gly Asn Val Leu Tyr Leu Phe Tyr Leu
        115                 120                 125
tcc aag atg ctc gac ctg tgc gac aca gtc ttc att atc cta gga aag    432
Ser Lys Met Leu Asp Leu Cys Asp Thr Val Phe Ile Ile Leu Gly Lys
    130                 135                 140
aag tgg aaa cag ctt tcc atc ttg cac gtg tac cac cac ctt acc gtg    480
Lys Trp Lys Gln Leu Ser Ile Leu His Val Tyr His His Leu Thr Val
145                 150                 155                 160
ctt ttc gtc tac tat gtg acg ttc cgc gcc gct cag gac ggg gac tca    528
Leu Phe Val Tyr Tyr Val Thr Phe Arg Ala Ala Gln Asp Gly Asp Ser
                165                 170                 175
tat gct acc atc gtg ctc aac ggc ttc gtg cac acc atc atg tac act    576
Tyr Ala Thr Ile Val Leu Asn Gly Phe Val His Thr Ile Met Tyr Thr
            180                 185                 190
tac tac ttc gtc agc gcc cac acg cgc aac att tgg tgg aag aag tac    624
Tyr Tyr Phe Val Ser Ala His Thr Arg Asn Ile Trp Trp Lys Lys Tyr
        195                 200                 205
ctc acg cgc att cag ctt atc cag ttc gtg acc atg aac gtg cag ggc    672
Leu Thr Arg Ile Gln Leu Ile Gln Phe Val Thr Met Asn Val Gln Gly
    210                 215                 220
tac ctg acc tac tct cga cag tgc cca ggc atg cct cct aag gtg ccg    720
Tyr Leu Thr Tyr Ser Arg Gln Cys Pro Gly Met Pro Pro Lys Val Pro
225                 230                 235                 240
ctc atg tac crt gtg tac gtg cag tca ctc ttc tgg ctc ttc atg aat    768
Leu Met Tyr Leu Val Tyr Val Gln Ser Leu Phe Trp Leu Phe Met Asn
                245                 250                 255
ttc tac att cgc gcg tac gtg ttc ggc ccc aag aaa ccg gcc gtg gag    816
Phe Tyr Ile Arg Ala Tyr Val Phe Gly Pro Lys Lys Pro Ala Val Glu
            260                 265                 270
gaa tcg aag aag aag ttg taa                                        837
Glu Ser Lys Lys Lys Leu
        275
<210>32
<211>278
<212>PRT
<213>致病疫霉
<400>32
Met Ser Thr Glu Leu Leu Gln Ser Tyr Tyr Ala Trp Ala Asn Ala Thr
1               5                   10                  15
Glu Ala Lys Leu Leu Asp Trp Val Asp Pro Glu Gly Gly Trp Lys Val
            20                  25                  30
His Pro Met Ala Asp Tyr Pro Leu Ala Asn Phe Ser Ser Val Tyr Ala
        35                  40                  45
Ile Cys Val Gly Tyr Leu Leu Phe Val Ile Phe Gly Thr Ala Leu Met
    50                  55                  60
Lys Met Gly Val Pro Ala Ile Lys Thr Ser Pro Leu Gln Phe Val Tyr
65                  70                  75                  80
Asn Pro Ile Gln Val Ile Ala Cys Ser Tyr Met Cys Val Glu Ala Ala
                85                  90                  95
Ile Gln Ala Tyr Arg Asn Gly Tyr Thr Ala Ala Pro Cys Asn Ala Phe
            l00                 105                 110
Lys Ser Asp Asp Pro Val Met Gly Asn Val Leu Tyr Leu Phe Tyr Leu
        115                 120                 125
Ser Lys Met Leu Asp Leu Cys Asp Thr Val Phe Ile Ile Leu Gly Lys
    130                 135                 140
Lys Trp Lys Gln Leu Ser Ile Leu His Val Tyr His His Leu Thr Val
145                 150                 155                 160
Leu Phe Val Tyr Tyr Val Thr Phe Arg Ala Ala Gln Asp Gly Asp Ser
                165                 170                 175
Tyr Ala Thr Ile Val Leu Asn Gly Phe Val His Thr Ile Met Tyr Thr
            180                 185                 190
Tyr Tyr Phe Val Ser Ala His Thr Arg Asn Ile Trp Trp Lys Lys Tyr
        195                 200                 205
Leu Thr Arg Ile Gln Leu Ile Gln Phe Val Thr Met Asn Val Gln Gly
    210                 215                 220
Tyr Leu Thr Tyr Ser Arg Gln Cys Pro Gly Met Pro Pro Lys Val Pro
225                 230                 235                 240
Leu Met Tyr Leu Val Tyr Val Gln Ser Leu Phe Trp Leu Phe Met Asn
                245                 250                 255
Phe Tyr Ile Arg Ala Tyr Val Phe Gly Pro Lys Lys Pro Ala Val Glu
            260                 265                 270
Glu Ser Lys Lys Lys Leu
        275
<210>33
<211>954
<212>DNA
<213>高山被孢霉
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(954)
<223>Δ6延伸酶
<400>33
atg gcc gcc gca atc ttg gac aag gtc aac ttc ggc att gat cag ccc     48
Met Ala Ala Ala Ile Leu Asp Lys Val Asn Phe Gly Ile Asp Gln Pro
1               5                   10                  15
ttc gga atc aag ctc gac acc tac ttt gct cag gcc tat gaa ctc gtc     96
Phe Gly Ile Lys Leu Asp Thr Tyr Phe Ala Gln Ala Tyr Glu Leu Val
            20                  25                  30
acc gga aag tcc atc gac tcc ttc gtc ttc cag gag ggc gtc acg cct    144
Thr Gly Lys Ser Ile Asp Ser Phe Val Phe Gln Glu Gly Val Thr Pro
        35                  40                  45
ctc tcg acc cag aga gag gtc gcc atg tgg act atc act tac ttc gtc    192
Leu Ser Thr Gln Arg Glu Val Ala Met Trp Thr Ile Thr Tyr Phe Val
    50                  55                  60
gtc atc ttt ggt ggt cgc cag atc atg aag agc cag gac gcc ttc aag    240
Val Ile Phe Gly Gly Arg Gln Ile Met Lys Ser Gln Asp Ala Phe Lys
65                  70                  75                  80
ctc aag ccc ctc ttc atc ctc cac aac ttc ctc ctg acg atc gcg tcc    288
Leu Lys Pro Leu Phe Ile Leu His Asn Phe Leu Leu Thr Ile Ala Ser
                85                  90                  95
gga tcg ctg ttg ctc ctg ttc atc gag aac ctg gtc ccc atc ctc gcc    336
Gly Ser Leu Leu Leu Leu Phe Ile Glu Asn Leu Val Pro Ile Leu Ala
            100                 105                 110
aga aac gga ctt ttc tac gcc atc tgc gac gac ggt gcc tgg acc cag    384
Arg Asn Gly Leu Phe Tyr Ala Ile Cys Asp Asp Gly Ala Trp Thr Gln
        115                 120                 125
cgc ctc gag ctc ctc tac tac ctc aac tac ctg gtc aag tac tgg gag    432
Arg Leu Glu Leu Leu Tyr Tyr Leu Asn Tyr Leu Val Lys Tyr Trp Glu
    130                 135                 140
ttg gcc gac acc gtc ttt ttg gtc ctc aag aag aag cct ctt gag ttc    480
Leu Ala Asp Thr Val Phe Leu Val Leu Lys Lys Lys Pro Leu Glu Phe
145                 150                 155                 160
ctg cac tac ttc cac cac tcg atg acc atg gtt ctc tgc ttt gtc cag    528
Leu His Tyr Phe His His Ser Met Thr Met Val Leu Cys Phe Val Gln
                165                 170                 175
ctt gga gga tac act tca gtg tcc tgg gtc cct att acc ctc aac ttg    576
Leu Gly Gly Tyr Thr Ser Val Ser Trp Val Pro Ile Thr Leu Asn Leu
            180                 185                 190
act gtc cac gtc ttc atg tac tac tac tac atg cgc tcc gct gcc ggt    624
Thr Val His Val Phe Met Tyr Tyr Tyr Tyr Met Arg Ser Ala Ala Gly
        195                 200                 205
gtt cgc atc tgg tgg aag cag tac ttg acc act ctc cag atc gtc cag    672
Val Arg Ile Trp Trp Lys Gln Tyr Leu Thr Thr Leu Gln Ile Val Gln
    210                 215                 220
ttc gtt ctt gac ctc gga ttc atc tac ttc tgc gcc tac acc tac ttc    720
Phe Val Leu Asp Leu Gly Phe Ile Tyr Phe Cys Ala Tyr Thr Tyr Phe
225                 230                 235                 240
gcc ttc acc tac ttc ccc tgg gct ccc aac gtc ggc aag tgc gcc ggt    768
Ala Phe Thr Tyr Phe Pro Trp Ala Pro Asn Val Gly Lys Cys Ala Gly
                245                 250                 255
acc gag ggt gct gct ctc ttt ggc tgc gga ctc ctc tcc agc tat ctc    816
Thr Glu Gly Ala Ala Leu Phe Gly Cys Gly Leu Leu Ser Ser Tyr Leu
            260                 265                 270
ttg ctc ttt atc aac ttc tac cgc att acc tac aat gcc aag gcc aag    864
Leu Leu Phe Ile Asn Phe Tyr Arg Ile Thr Tyr Asn Ala Lys Ala Lys
        275                 280                 285
gca gcc aag gag cgt gga agc aac ttt acc ccc aag act gtc aag tcc    912
Ala Ala Lys Glu Arg Gly Ser Asn Phe Thr Pro Lys Thr Val Lys Ser
    290                 295                 300
ggc gga tcg ccc aag aag ccc tcc aag agc aag cac atc taa            954
Gly Gly Ser Pro Lys Lys Pro Set Lys Ser Lys His Ile
305                 310                 315
<210>34
<211>317
<212>PRT
<213>高山被孢霉
<400>34
Met Ala Ala Ala Ile Leu Asp Lys Val Asn Phe Gly Ile Asp Gln Pro
1               5                   10                  15
Phe Gly Ile Lys Leu Asp Thr Tyr Phe Ala Gln Ala Tyr Glu Leu Val
            20                  25                  30
Thr Gly Lys Ser Ile Asp Ser Phe Val Phe Gln Glu Gly Val Thr Pro
        35                  40                  45
Leu Ser Thr Gln Arg Glu Val Ala Met Trp Thr Ile Thr Tyr Phe Val
    50                  55                  60
Val Ile Phe Gly Gly Arg Gln Ile Met Lys Ser Gln Asp Ala Phe Lys
65                  70                  75                  80
Leu Lys Pro Leu Phe Ile Leu His Asn Phe Leu Leu Thr Ile Ala Ser
                85                  90                  95
Gly Ser Leu Leu Leu Leu Phe Ile Glu Asn Leu Val Pro Ile Leu Ala
            100                 105                 110
Arg Asn Gly Leu Phe Tyr Ala Ile Cys Asp Asp Gly Ala Trp Thr Gln
        115                 120                 125
Arg Leu Glu Leu Leu Tyr Tyr Leu Asn Tyr Leu Val Lys Tyr Trp Glu
    130                 135                 140
Leu Ala Asp Thr Val Phe Leu Val Leu Lys Lys Lys Pro Leu Glu Phe
145                 150                 155                 160
Leu His Tyr Phe His His Ser Met Thr Met Val Leu Cys Phe Val Gln
                165                 170                 175
Leu Gly GIy Tyr Thr Ser Val Ser Trp Val Pro Ile Thr Leu Asn Leu
            180                 185                 190
Thr Val His Val Phe Met Tyr Tyr Tyr Tyr Met Arg Ser Ala Ala Gly
        195                 200                 205
Val Arg Ile Trp Trp Lys Gln Tyr Leu Thr Thr Leu Gln Ile Val Gln
    210                 215                 220
Phe Val Leu Asp Leu Gly Phe Ile Tyr Phe Cys Ala Tyr Thr Tyr Phe
225                 230                 235                 240
Ala Phe Thr Tyr Phe Pro Trp Ala Pro Asn Val Gly Lys Cys Ala Gly
                245                 250                 255
Thr Glu Gly Ala Ala Leu Phe Gly Cys Gly Leu Leu Ser Ser Tyr Leu
            260                 265                 270
Leu Leu Phe Ile Asn Phe Tyr Arg Ile Thr Tyr Asn Ala Lys Ala Lys
        275                 280                 285
Ala Ala Lys Glu Arg Gly Ser Asn Phe Thr Pro Lys Thr Val Lys Ser
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Gly Gly Ser Pro Lys Lys Pro Ser Lys Ser Lys His Ile
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<210>35
<211>957
<212>DNA
<213>高山被孢霉
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(957)
<223>Δ6延伸酶
<400>35
atg gag tcg att gcg cca ttc ctc cca tca aag atg ccg caa gat ctg     48
Met Glu Ser Ile Ala Pro Phe Leu Pro Ser Lys Met Pro Gln Asp Leu
1               5                   10                  15
ttt atg gac ctt gcc acc gct atc ggt gtc cgg gcc gcg ccc tat gtc     96
Phe Met Asp Leu Ala Thr Ala Ile Gly Val Arg Ala Ala Pro Tyr Val
            20                  25                  30
gat cct ctc gag gcc gcg ctg gtg gcc cag gcc gag aag tac atc ccc    144
Asp Pro Leu Glu Ala Ala Leu Val Ala Gln Ala Glu Lys Tyr Ile Pro
        35                  40                  45
acg att gtc cat cac acg cgt ggg ttc ctg gte gcg gtg gag tcg cct    192
Thr Ile Val His His Thr Arg Gly Phe Leu Val Ala Val Glu Ser Pro
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ttg gcc cgt gag ctg ccg ttg atg aac ccg ttc cac gtg ctg ttg atc    240
Leu Ala Arg Glu Leu Pro Leu MetAsn Pro Phe His Val Leu Leu Ile
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gtg ctc gct tat ttg gtc acg gtc ttt gtg ggc atg cag atc atg aag    288
Val Leu Ala Tyr Leu Val Thr Val Phe Val Gly Met Gln Ile Met Lys
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aac ttt gag cgg ttc gag gtc aag acg ttt tcg ctc ctg cac aac ttt    336
Asn Phe Glu Arg Phe Glu Val Lys Thr Phe Ser Leu Leu His Asn Phe
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tgt ctg gtc tcg atc agc gcc tac atg tgc ggt ggg atc ctg tac gag    384
Cys Leu Val Ser Ile Ser Ala Tyr Met Cys Gly Gly Ile Leu Tyr Glu
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gct tat cag gcc aac tat gga ctg ttt gag aac gct gct gat cat acc    432
Ala Tyr Gln Ala Asn Tyr Gly Leu Phe Glu Asn Ala Ala Asp His Thr
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ttc aag ggt ctt cct atg gcc aag atg atc tgg ctc ttc tac ttc tcc    480
Phe Lys Gly Leu Pro Met Ala Lys Met Ile Trp Leu Phe Tyr Phe Ser
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aag atc atg gag ttt gtc gac acc atg atc atg gtc ctc aag aag aac    528
Lys Ile Met Glu Phe Val Asp Thr Met Ile Met Val Leu Lys Lys Asn
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aac cgc cag atc tcc ttc ttg cac gtt tac cac cac agc tcc atc ttc    576
Asn Arg Gln Ile Ser Phe Leu His Val Tyr His His Ser Ser Ile Phe
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acc atc tgg tgg ttg gtc acc ttt gtt gca ccc aac ggt gaa gcc tac    624
Thr Ile Trp Trp Leu Val Thr Phe Val Ala Pro Asn Gly Glu Ala Tyr
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ttc tct gct gcg ttg aac tcg ttc atc cat gtg atc atg tac ggc tac    672
Phe Ser Ala Ala Leu Asn Ser Phe Ile His Val Ile Met Tyr Gly Tyr
    210                 215                 220
tac ttc ttg tcg gcc ttg ggc ttc aag cag gtg tcg ttc atc aag ttc    720
Tyr Phe Leu Ser Ala Leu Gly Phe Lys Gln Val Ser Phe Ile Lys Phe
225                 230                 235                 240
tac atc acg cgc tcg cag atg aca cag ttc tgc atg atg tcg gtc cag    768
Tyr Ile Thr Arg Ser Gln Met Thr Gln Phe Cys Met Met Ser Val Gln
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tct tcc tgg gac atg tac gcc atg aag gtc ctt ggc cgc ccc gga tac    816
Ser Ser Trp Asp Met Tyr Ala Met Lys Val Leu Gly Arg Pro Gly Tyr
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ccc ttc ttc atc acg gct ctg ctt tgg ttc tac atg tgg acc atg ctc    864
Pro Phe Phe Ile Thr Ala Leu Leu Trp Phe Tyr Met Trp Thr Met Leu
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Gly Leu Phe Tyr Asn Phe Tyr Arg Lys Asn Ala Lys Leu Ala Lys Gln
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gcc aag gcc gac gct gcc aag gag aag gca agg aag ttg cag taa        957
Ala Lys Ala Asp Ala Ala Lys Glu Lys Ala Arg Lys Leu Gln
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<210>36
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<212>PRT
<213>高山被孢霉
<400>36
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1               5                   10                  15
Phe Met Asp Leu Ala Thr Ala Ile Gly Val Arg Ala Ala Pro Tyr Val
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Asp Pro Leu Glu Ala Ala Leu Val Ala Gln Ala Glu Lys Tyr Ile Pro
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Thr Ile Val His His Thr Arg Gly Phe Leu Val Ala Val Glu Ser Pro
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Leu Ala Arg Glu Leu Pro Leu Met Asn Pro Phe His Val Leu Leu Ile
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Val Leu Ala Tyr Leu Val Thr Val Phe Val Gly Met Gln Ile Met Lys
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Asn Phe Glu Arg Phe Glu Val Lys Thr Phe Ser Leu Leu His Asn Phe
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Lys Ile Met Glu Phe Val Asp Thr Met Ile Met Val Leu Lys Lys Asn
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Asn Arg Gln Ile Ser Phe Leu His Val Tyr His His Ser Set Ile Phe
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Tyr Ile Thr Arg Ser Gln Met Thr Gln Phe Cys Met Met Ser Val Gln
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Ser Ser Trp Asp Met Tyr Ala Met Lys Val Leu Gly Arg Pro Gly Tyr
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Gly Leu Phe Tyr Asn Phe Tyr Arg Lys Asn Ala Lys Leu Ala Lys Gln
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Ala Lys Ala Asp Ala Ala Lys Glu Lys Ala Arg Lys Leu Gln
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<210>37
<211>867
<212>DNA
<213>秀丽隐杆线虫
<220>
<22l>CDS
<222>(1)..(867)
<223>Δ6延伸酶
<400>37
atg gct cag cat ccg ctc gtt caa cgg ctt ctc gat gtc aaa ttc gac    48
Met Ala Gln His Pro Leu Val Gln Arg Leu Leu Asp Val Lys Phe Asp
1               5                   10                  15
acg aaa cga ttt gtg gct att gct act cat ggg cca aag aat ttc cct     96
Thr Lys Arg Phe Val Ala Ile Ala Thr His Gly Pro Lys Asn Phe Pro
            20                  25                  30
gac gca gaa ggt cgc aag ttc ttt gct gat cac ttt gat gtt act att    144
Asp Ala Glu Gly Arg Lys Phe Phe Ala Asp His Phe Asp Val Thr Ile
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cag gct tca atc ctg tac atg gtc gtt gtg ttc gga aca aaa tgg ttc    192
Gln Ala Ser Ile Leu Tyr Met Val Val Val Phe Gly Thr Lys Trp Phe
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Met Arg Asn Arg Gln Pro Phe Gln Leu Thr Ile Pro Leu Asn Ile Trp
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aat ttc atc ctc gcc gca ttt tcc atc gca gga gct gtc aaa atg acc    288
Asn Phe Ile Leu Ala Ala Phe Ser Ile Ala Gly Ala Val Lys Met Thr
                85                  90                  95
cca gag ttc ttt gga acc att gcc aac aaa gga att gtc gca tcc tac    336
Pro Glu Phe Phe Gly Thr Ile Ala Asn Lys Gly Ile Val Ala Ser Tyr
            100                 105                 110
tgc aaa gtg ttt gat ttc acg aaa gga gag aat gga tac tgg gtg tgg    384
Cys Lys Val Phe Asp Phe Thr Lys Gly Glu Asn Gly Tyr Trp Val Trp
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ctc ttc atg gct tcc aaa ctt ttc gaa ctt gtt gac acc atc ttc ttg    432
Leu Phe Met Ala Ser Lys Leu Phe Glu Leu Val Asp Thr Ile Phe Leu
    130                 135                 140
gtt ctc cgt aaa cgt cca ctc atg ttc ctt cac tgg tat cac cat att    480
Val Leu Arg Lys Arg Pro Leu Met Phe Leu His Trp Tyr His His Ile
145                 150                 155                 160
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Leu Thr Met Ile Tyr Ala Trp Tyr Ser His Pro Leu Thr Pro Gly Phe
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aac aga tac gga att tat ctt aac ttt gtc gtc cac gcc ttc atg tac    576
Asn Arg Tyr Gly Ile Tyr Leu Asn Phe Val Val His Ala Phe Met Tyr
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tct tac tac ttc ctt cgc tcg atg aag att cgc gtg cca gga ttc atc    624
Ser Tyr Tyr Phe Leu Arg Ser Met Lys Ile Arg Val Pro Gly Phe Ile
        195                 200                 205
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Ala Gln Ala Ile Thr Ser Leu Gln Ile Val Gln Phe Ile Ile Ser Cys
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Ala Val Leu Ala His Leu Gly Tyr Leu Met His Phe Thr Asn Ala Asn
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Thr Tyr Leu Ala Leu Phe Val Asn Phe Phe Leu Gln Ser Tyr Val Leu
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cgc gga gga aaa gac aag tac aag gca gtg cca aag aag aag aac aac    864
Arg Gly Gly Lys Asp Lys Tyr Lys Ala Val Pro Lys Lys Lys Asn Asn
        275                 280                 285
taa                                                                867
<210>38
<21l>288
<212>PRT
<213>秀丽隐杆线虫
<400>38
Met Ala Gln His Pro Leu Val Gln Arg Leu Leu Asp Val Lys Phe Asp
1               5                   10                  15
Thr Lys Arg Phe Val Ala Ile Ala Thr His Gly Pro Lys Asn Phe Pro
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Pro Glu Phe Phe Gly Thr Ile Ala Asn Lys Gly Ile Val Ala Ser Tyr
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<210>39
<21l>1626
<212>DNA
<213>细小裸藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1626)
<223>Δ4去饱和酶
<400>39
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Met Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Val Lys Gln Tyr Ser Gln Lys
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        35                  40                  45
aac gtt cgg ccc acc cgt cca gct gga ccc ccg ccg gcc acg tac tac    192
Asn Val Arg Pro Thr Arg Pro Ala Gly Pro Pro Pro Ala Thr Tyr Tyr
    50                  55                  60
gac tcc ctg gca gtg tcg ggg cag ggc aag gag cgg ctg ttc acc acc    240
Asp Ser Leu Ala Val Ser Gly Gln Gly Lys Glu Arg Leu Phe Thr Thr
65                  70                  75                  80
gat gag gtg agg cgg cac atc ctc ccc acc gat ggc tgg ctg acg tgc    288
Asp Glu Val Arg Arg His Ile Leu Pro Thr Asp Gly Trp Leu Thr Cys
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cac gaa gga gtc tac gat gtc act gat ttc ctt gcc aag cac cct ggt    336
His Glu Gly Val Tyr Asp Val Thr Asp Phe Leu Ala Lys His Pro Gly
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gag tca tac cac cct gct ggg cgc ccg gac aag gtg atg gag aag tac    432
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Val Leu Thr Leu Phe Phe Val Ser Trp Tyr Met Trp Val Ala His Lys
        195                 200                 205
tcc ttc ctc tgg gcc gcc gtc tgg ggc ttc gcc ggc tcc cac gtc ggg    672
Ser Phe Leu Trp Ala Ala Val Trp Gly Phe Ala Gly Ser His Val Gly
    210                 215                 220
ctg agc atc cag cac gat ggc aac cac ggc gcg ttc agc cgc aac aca    720
Leu Ser Ile Gln His Asp Gly Asn His Gly Ala Phe Ser Arg Asn Thr
225                 230                 235                 240
ctg gtg aac cgc ctg gcg ggg tgg ggc atg gac ttg atc ggc gcg tcg    768
Leu Val Asn Arg Leu Ala Gly Trp Gly Met Asp Leu Ile Gly Ala Ser
                245                 250                 255
tcc acg gtg tgg gag tac cag cac gtc atc ggc cac cac cag tac acc    816
Ser Thr Val Trp Glu Tyr Gln His Val Ile Gly His His Gln Tyr Thr
            260                 265                 270
aac ctc gtg tcg gac acg cta ttc agt ctg cct gag aac gat ccg gac     864
Asn Leu Val Ser Asp Thr Leu Phe Ser Leu Pro Glu Asn Asp Pro Asp
        275                 280                 285
gtc ttc tcc agc tac ccg ctg atg cgc atg cac ccg gat acg gcg tgg     912
Val Phe Ser Ser Tyr Pro Leu Met Arg Met His Pro Asp Thr Ala Trp
    290                 295                 300
cag ccg cac cac cgc ttc cag cac ctg ttc gcg ttc cca ctg ttc gcc     960
Gln Pro His His Arg Phe Gln His Leu Phe Ala Phe Pro Leu Phe Ala
305                 310                 315                 320
ctg atg aca atc agc aag gtg ctg acc agc gat ttc gct gtc tgc ctc    1008
Leu Met Thr Ile Ser Lys Val Leu Thr Ser Asp Phe Ala Val Cys Leu
                325                 330                 335
agc atg aag aag ggg tcc atc gac tgc tcc tcc agg ctc gtc cca ctg    1056
Ser Met Lys Lys Gly Ser Ile Asp Cys Ser Ser Arg Leu Val Pro Leu
            340                 345                 350
gag ggg cag ctg ctg ttc tgg ggg gcc aag ctg gcg aac ttc ctg ttg    1104
Glu Gly Gln Leu Leu Phe Trp Gly Ala Lys Leu Ala Asn Phe Leu Leu
        355                 360                 365
cag att gtg ttg cca tgc tac ctc cac ggg aca gct atg ggc ctg gcc    1152
Gln Ile Val Leu Pro Cys Tyr Leu His Gly Thr Ala Met Gly Leu Ala
    370                 375                 380
ctc ttc tct gtt gct cac ctt gtg tcg ggg gag tac ctc gcg atc tgc    1200
Leu Phe Ser Val Ala His Leu Val Ser Gly Glu Tyr Leu Ala Ile Cys
385                 390                 395                 400
ttc atc atc aac cac atc agc gag tct tgt gag ttt atg aat aca agc    1248
Phe Ile Ile Asn His Ile Ser Glu Ser Cys Glu Phe Met Asn Thr Ser
                405                 410                 415
ttt caa acc gcc gcc cgg agg aca gag atg ctt cag gca gca cat cag    1296
Phe Gln Thr Ala Ala Arg Arg Thr Glu Met Leu Gln Ala Ala His Gln
            420                 425                 430
gca gcg gag gcc aag aag gtg aag ccc acc cct cca ccg aac gat tgg    1344
Ala Ala Glu Ala Lys Lys Val Lys Pro Thr Pro Pro Pro Asn Asp Trp
        435                 440                 445
gct gtg aca cag gtc caa tgc tgc gtg aat tgg aga tca ggt ggc gtg    1392
Ala Val Thr Gln Val Gln Cys Cys Val Asn Trp Arg Ser Gly Gly Val
    450                 455                 460
ttg gcc aat cac ctc tct gga ggc ttg aac cac cag atc gag cat cat    1440
Leu Ala Asn His Leu Ser Gly Gly Leu Asn His Gln Ile Glu His His
465                 470                 475                 480
ctg ttc ccc agc atc tcg cat gcc aac tac ccc acc atc gcc cct gtt    1488
Leu Phe Pro Ser Ile Ser His Ala Asn Tyr Pro Thr Ile Ala Pro Val
                485                 490                 495
gtg aag gag gtg tgc gag gag tac ggg ttg ccg tac aag aat tac gtc    1536
Val Lys Glu Val Cys Glu Glu Tyr Gly Leu Pro Tyr Lys Asn Tyr Val
            500                 505                 510
acg ttc tgg gat gca gtc tgt ggc atg gtt cag cac ctc cgg ttg atg    1584
Thr Phe Trp Asp Ala Val Cys Gly Met Val Gln His Leu Arg Leu Met
        515                 520                 525
ggt gct cca ccg gtg cca acg aac ggg gac aaa aag tca taa            1626
Gly Ala Pro Pro Val Pro Thr Asn Gly Asp Lys Lys Ser
    530                 535                 540
<210>40
<211>541
<212>PRT
<213>细小裸藻
<400>40
Met Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Val Lys Gln Tyr Ser Gln Lys
1               5                   10                  15
Asn Gly Lys Pro Glu Asn Gly Ala Thr Pro Glu Asn Gly ala Lys Pro
            20                  25                  30
Gln Pro Cys Glu Asn Gly Thr Val Glu Lys Arg Glu Asn Asp Thr Ala
        35                  40                  45
Asn Val Arg Pro Thr Arg Pro Ala Gly Pro Pro Pro Ala Thr Tyr Tyr
    50                  55                  60
Asp Ser Leu Ala Val Ser Gly Gln Gly Lys Glu Arg Leu Phe Thr Thr
65                  70                  75                  80
Asp Glu Val Arg Arg His Ile Leu Pro Thr Asp Gly Trp Leu Thr Cys
                85                  90                  95
His Glu Gly Val Tyr Asp Val Thr Asp Phe Leu Ala Lys His Pro Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Val Ile Thr Leu Gly Leu Gly Arg Asp Cys Thr Ile Leu Ile
        115                 120                 125
Glu Ser Tyr His Pro Ala Gly Arg Pro Asp Lys Val Met Glu Lys Tyr
    130                 135                 140
Arg Ile Gly Thr Leu Gln Asp Pro Lys Thr Phe Tyr Ala Trp Gly Glu
145                 150                 155                 160
Ser Asp Phe Tyr Pro Glu Leu Lys Arg Arg Ala Leu Ala Arg Leu Lys
                165                 170                 175
Glu Ala Gly Gln Ala Arg Arg Gly Gly Leu Gly Val Lys Ala Leu Leu
            180                 185                 190
Val Leu Thr Leu Phe Phe Val Ser Trp Tyr Met Trp Val Ala His Lys
        195                 200                 205
Ser Phe Leu Trp Ala Ala Val Trp Gly Phe Ala Gly Ser His Val Gly
    210                 215                 220
Leu Ser Ile Gln His Asp Gly Asn His Gly Ala Phe Ser Arg Asn Thr
225                 230                 235                 240
Leu Val Asn Arg Leu Ala Gly Trp Gly Met Asp Leu Ile Gly Ala Ser
                245                 250                 255
Ser Thr Val Trp Glu Tyr Gln His Val Ile Gly His His Gln Tyr Thr
            260                 265                 270
Asn Leu Val Ser Asp Thr Leu Phe Ser Leu Pro Glu Asn Asp Pro Asp
        275                 280                 285
Val Phe Ser Ser Tyr Pro Leu Met Arg Met His Pro Asp Thr Ala Trp
    290                 295                 300
Gln Pro His His Arg Phe Gln His Leu Phe Ala Phe Pro Leu Phe Ala
305                 310                 315                 320
Leu Met Thr Ile Ser Lys Val Leu Thr Ser Asp Phe Ala Val Cys Leu
                325                 330                 335
Ser Met Lys Lys Gly Ser Ile Asp Cys Ser Ser Arg Leu Val Pro Leu
            340                 345                 350
Glu Gly Gln Leu Leu Phe Trp Gly Ala Lys Leu Ala Asn Phe Leu Leu
        355                 360                 365
Gln Ile Val Leu Pro Cys Tyr Leu His Gly Thr Ala Met Gly Leu Ala
    370                 375                 380
Leu Phe Ser Val Ala His Leu Val Ser Gly Glu Tyr Leu Ala Ile Cys
385                 390                 395                 400
Phe Ile Ile Asn His Ile Ser Glu Ser Cys Glu Phe Met Asn Thr Ser
                405                 410                 415
Phe Gln Thr Ala Ala Arg Arg Thr Glu Met Leu Gln Ala Ala His Gln
            420                 425                 430
Ala Ala Glu Ala Lys Lys Val Lys Pro Thr Pro Pro Pro Asn Asp Trp
        435                 440                 445
Ala Val Thr Gln Val Gln Cys Cys Val Asn Trp Arg Ser Gly Gly Val
    450                 455                 460
Leu Ala Asn His Leu Ser Gly Gly Leu Asn His Gln Ile Glu His His
465                 470                 475                 480
Leu Phe Pro Ser Ile Ser His Ala Asn Tyr Pro Thr Ile Ala Pro Val
                485                 490                 495
Val Lys Glu Val Cys Glu Glu Tyr Gly Leu Pro Tyr Lys Asn Tyr Val
            500                 505                 510
Thr Phe Trp Asp Ala Val Cys Gly Met Val Gln His Leu Arg Leu Met
        515                 520                 525
Gly Ala Pro Pro Val Pro Thr Asn Gly Asp Lys Lys Ser
    530                 535                 540
<210>41
<211>1548
<212>DNA
<213>破囊壶菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1548)
<223>Δ4去饱和酶
<400>41
atg acg gtc ggg ttt gac gaa acg gtg act atg gac acg gtc cgc aac     48
Met Thr Val Gly Phe Asp Glu Thr Val Thr Met Asp Thr Val Arg Asn
1               5                   10                  15
cac aac atg ccg gac gac gcc tgg tgc gcg atc cac ggc acc gtg tac     96
His Asn Met Pro Asp Asp Ala Trp Cys Ala Ile His Gly Thr Val Tyr
            20                  25                  30
gac atc acc aag ttc agc aag gtg cac ccc ggc ggg gac atc atc atg    144
Asp Ile Thr Lys Phe Ser Lys Val His Pro Gly Gly Asp Ile Ile Met
        35                  40                  45
ctg gcc gct ggc aag gag gcc acc atc ctg ttc gag acc tac cac atc    192
Leu Ala Ala Gly Lys Glu Ala Thr Ile Leu Phe Glu Thr Tyr His Ile
    50                  55                  60
aag ggc gtc ccg gac gcg gtg ctg cgc aag tac aag gtc ggc aag ctc    240
Lys Gly Val Pro Asp Ala Val Leu Arg Lys Tyr Lys Val Gly Lys Leu
65                  70                  75                  80
ccc cag ggc aag aag ggc gaa acg agc cac atg ccc acc ggg ctc gac    288
Pro Gln Gly Lys Lys Gly Glu Thr Ser His Met Pro Thr Gly Leu Asp
                85                  90                  95
tcg gcc tcc tac tac tcg tgg gac agc gag ttt tac agg gtg ctc cgc    336
Ser Ala Ser Tyr Tyr Ser Trp Asp Ser Glu Phe Tyr Arg Val Leu Arg
            100                 105                 110
gag cgc gtc gcc aag aag ctg gcc gag ccc ggc ctc atg cag cgc gcg    384
Glu Arg Val Ala Lys Lys Leu Ala Glu Pro Gly Leu Met Gln Arg Ala
        115                 120                 125
cgc atg gag ctc tgg gcc aag gcg atc ttc ctc ctg gca ggt ttc tgg    432
Arg Met Glu Leu Trp Ala Lys Ala Ile Phe Leu Leu Ala Gly Phe Trp
    130                 135                 140
ggc tcc ctt tac gcc atg tgc gtg cta gac ccg cac ggc ggt gcc atg    480
Gly Ser Leu Tyr Ala Met Cys Val Leu Asp Pro His Gly Gly Ala Met
145                 150                 155                 160
gta gcc gcc gtt acg ctc ggc gtg ttc gct gcc ttt gtc gga act tgc    528
Val Ala Ala Val Thr Leu Gly Val Phe Ala Ala Phe Val Gly Thr Cys
                165                 170                 175
atc cag cac gac ggc agc cac ggc gcc ttc tcc aag tcg cga ttc atg    576
Ile Gln His Asp Gly Ser His Gly Ala Phe Ser Lys Ser Arg Phe Met
            180                 185                 190
aac aag gcg gcg ggc tgg acc ctc gac atg atc ggc gcg agt gcg atg    624
Asn Lys Ala Ala Gly Trp Thr Leu Asp Met Ile Gly Ala Ser Ala Met
        195                 200                 205
acc tgg gag atg cag cac gtt ctt ggc cac cac ccg tac acc aac ctc    672
Thr Trp Glu Met Gln His Val Leu Gly His His Pro Tyr Thr Asn Leu
    210                 215                 220
atc gag atg gag aac ggt ttg gcc aag gtc aag ggc gcc gac gtc gac    720
Ile Glu Met Glu Asn Gly Leu Ala Lys Val Lys Gly Ala Asp Val Asp
225                 230                 235                 240
ccg aag aag gtc gac cag gag agc gac ccg gac gtc ttc agt acg tac    768
Pro Lys Lys Val Asp Gln Glu Ser Asp Pro Asp Val Phe Ser Thr Tyr
                245                 250                 255
ccg atg ctt cgc ctg cac ccg tgg cac cgc cag cgg ttt tac cac aag    816
Pro Met Leu Arg Leu His Pro Trp His Arg Gln Arg Phe Tyr His Lys
            260                 265                 270
ttc cag cac ctg tac gcc ccg ttt atc ttt ggg tct atg acg att aac     864
Phe Gln His Leu Tyr Ala Pro Phe Ile Phe Gly Ser Met Thr Ile Asn
        275                 280                 285
aag gtg att tcc cag gat gtc ggg gtt gtg ctg cgc aag cgc ctg ttc     912
Lys Val Ile Ser Gln Asp Val Gly Val Val Leu Arg Lys Arg Leu Phe
    290                 295                 300
cag atc gac gcc aac tgc cgg tat ggc agc ccc tgg tac gtg gcc cgc     960
Gln Ile Asp Ala Asn Cys Arg Tyr Gly Ser Pro Trp Tyr Val Ala Arg
305                 310                 315                 320
ttc tgg atc atg aag ctc ctc acc acg ctc tac atg gtg gcg ctt ccc    1008
Phe Trp Ile Met Lys Leu Leu Thr Thr Leu Tyr Met Val Ala Leu Pro
                325                 330                 335
atg tac atg cag ggg cct gct cag ggc ttg aag ctt ttc ttc atg gcc    1056
Met Tyr Met Gln Gly Pro Ala Gln Gly Leu Lys Leu Phe Phe Met Ala
            340                 345                 350
cac ttc acc tgc gga gag gtc ctc gcc acc atg ttt att gtc aac cac    1104
His Phe Thr Cys Gly Glu Val Leu Ala Thr Met Phe Ile Val Asn His
        355                 360                 365
atc atc gag ggc gtc agc tac gct tcc aag gac gcg gtc aag ggc gtc    1152
Ile Ile Glu Gly Val Ser Tyr Ala Ser Lys Asp Ala Val Lys Gly Val
    370                 375                 380
atg gct ccg ccg cgc act gtg cac ggt gtc acc ccg atg cag gtg acg    1200
Met Ala Pro Pro Arg Thr Val His Gly Val Thr Pro Met Gln Val Thr
385                 390                 395                 400
caa aag gcg ctc agt gcg gcc gag tcg gcc aag tcg gac gcc gac aag    1248
Gln Lys Ala Leu Ser Ala Ala Glu Ser Ala Lys Ser Asp Ala Asp Lys
                405                 410                 415
acg acc atg atc ccc ctc aac gac tgg gcc gct gtg cag tgc cag acc    1296
Thr Thr Met Ile Pro Leu Asn Asp Trp Ala Ala Val Gln Cys Gln Thr
            420                 425                 430
tct gtg aac tgg gct gtc ggg tcg tgg ttt tgg aac cac ttt tcg ggc    1344
Ser Val Asn Trp Ala Val Gly Ser Trp Phe Trp Asn His Phe Ser Gly
        435                 440                 445
ggc ctc aac cac cag att gag cac cac tgc ttc ccc caa aac ccc cac    1392
Gly Leu Asn His Gln Ile Glu His His Cys Phe Pro Gln Asn Pro His
    450                 455                 460
acg gtc aac gtc tac atc tcg ggc atc gtc aag gag acc tgc gaa gaa    1440
Thr Val Asn Val Tyr Ile Ser Gly Ile Val Lys Glu Thr Cys Glu Glu
465                 470                 475                 480
tac ggc gtg ccg tac cag gct gag atc agc ctc ttc tct gcc tat ttc    1488
Tyr Gly Val Pro Tyr Gln Ala Glu Ile Ser Leu Phe Ser Ala Tyr Phe
                485                 490                 495
aag atg ctg tcg cac ctc cgc acg ctc ggc aac gag gac ctc acg gcc    1536
Lys Met Leu Ser His Leu Arg Thr Leu Gly Asn Glu Asp Leu Thr Ala
            500                 505                 510
tgg tcc acg tga                                                    1548
Trp Ser Thr
        515
<210>42
<211>515
<212>PRT
<213>破囊壶菌
<400>42
Met Thr Val Gly Phe Asp Glu Thr Val Thr Met Asp Thr Val Arg Asn
1                5                  10                  15
His Asn Met Pro Asp Asp Ala Trp Cys Ala Ile His Gly Thr Val Tyr
            20                  25                  30
Asp Ile Thr Lys Phe Ser Lys Val His Pro Gly Gly Asp Ile Ile Met
        35                  40                  45
Leu Ala Ala Gly Lys Glu Ala Thr Ile Leu Phe Glu Thr Tyr His Ile
    50                  55                  60
Lys Gly Val Pro Asp Ala Val Leu Arg Lys Tyr Lys Val Gly Lys Leu
65                  70                  75                  80
Pro Gln Gly Lys Lys Gly Glu Thr Ser His Met Pro Thr Gly Leu Asp
                85                  90                  95
Ser Ala Ser Tyr Tyr Ser Trp Asp Ser Glu Phe Tyr Arg Val Leu Arg
            100                 105                 110
Glu Arg Val Ala Lys Lys Leu Ala Glu Pro Gly Leu Met Gln Arg Ala
        115                 120                 125
Arg Met Glu Leu Trp Ala Lys Ala Ile Phe Leu Leu Ala Gly Phe Trp
    130                 135                 140
Gly Ser Leu Tyr Ala Met Cys Val Leu Asp Pro His Gly Gly Ala Met
145                 150                 155                 160
Val Ala Ala Val Thr Leu Gly Val Phe Ala Ala Phe Val Gly Thr Cys
                165                 170                 175
Ile Gln His Asp Gly Ser His Gly Ala Phe Ser Lys Ser Arg Phe Met
            180                 185                 190
Asn Lys Ala Ala Gly Trp Thr Leu Asp Met Ile Gly Ala Ser Ala Met
        195                 200                 205
Thr Trp Glu Met Gln His Val Leu Gly His His Pro Tyr Thr Asn Leu
    210                 215                 220
Ile Glu Met Glu Asn Gly Leu Ala Lys Val Lys Gly Ala Asp Val Asp
225                 230                 235                 240
Pro Lys Lys Val Asp Gln Glu Ser Asp Pro Asp Val Phe Ser Thr Tyr
                245                 250                 255
Pro Met Leu Arg Leu His Pro Trp His Arg Gln Arg Phe Tyr His Lys
            260                 265                 270
Phe Gln His Leu Tyr Ala Pro Phe Ile Phe Gly Ser Met Thr Ile Asn
        275                 280                 285
Lys Val Ile Ser Gln Asp Val Gly Val Val Leu Arg Lys Arg Leu Phe
    290                 295                 300
Gln Ile Asp Ala Asn Cys Arg Tyr Gly Ser Pro Trp Tyr Val Ala Arg
305                 310                 315                 320
Phe Trp Ile Met Lys Leu Leu Thr Thr Leu Tyr Met Val Ala Leu Pro
                325                 330                 335
Met Tyr Met Gln Gly Pro Ala Gln Gly Leu Lys Leu Phe Phe Met Ala
            340                 345                 350
His Phe Thr Cys Gly Glu Val Leu Ala Thr Met PheIle Val Asn His
        355                 360                 365
Ile Ile Glu Gly Val Ser Tyr Ala Ser Lys Asp Ala Val Lys Gly Val
    370                 375                 380
Met Ala Pro Pro Arg Thr Val His Gly Val Thr Pro Met Gln Val Thr
385                 390                 395                 400
Gln Lys Ala Leu Ser Ala Ala Glu Ser Ala Lys Ser Asp Ala Asp Lys
                405                 410                 415
Thr Thr Met Ile Pro Leu Asn Asp Trp Ala Ala Val Gln Cys Gln Thr
            420                 425                 430
Ser Val Asn Trp Ala Val Gly Ser Trp Phe Trp Asn His Phe Ser Gly
        435                 440                 445
Gly Leu Asn His Gln Ile Glu His His Cys Phe Pro Gln Asn Pro His
    450                 455                 460
Thr Val Asn Val Tyr Ile Ser Gly Ile Val Lys Glu Thr Cys Glu Glu
465                 470                 475                 480
Tyr Gly Val Pro Tyr Gln Ala Glu Ile Ser Leu Phe Ser Ala Tyr Phe
                485                 490                 495
Lys Met Leu Ser His Leu Arg Thr Leu Gly Asn Glu Asp Leu Thr Ala
            500                 505                 510
Trp Ser Thr
        515
<210>43
<21l>960
<212>DNA
<213>假矮海链藻(Thalassiosira pseudonana)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(960)
<223>Δ5延伸酶
<400>43
atg gtg ttg tac aat gtg gcg caa gtg ctg ctc aat ggg tgg acg gtg     48
Met Val Leu Tyr Asn Val Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val
1               5                   10                  15
tat gcg att gtg gat gcg gtg atg aat aga gac cat ccg ttt att gga     96
Tyr Ala Ile Val Asp Ala Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly
            20                  25                  30
agt aga agt ttg gtt ggg gcg gcg ttg cat agt ggg agc tcg tat gcg    144
Ser Arg Ser Leu Val Gly Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala
        35                  40                  45
gtg tgg gtt cat tat tgt gat aag tat ttg gag ttc ttt gat acg tat    192
Val Trp Val His Tyr Cys Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr
    50                  55                  60
ttt atg gtg ttg agg ggg aaa atg gac cag atg gta ctt ggt gaa gtt    240
Phe Met Val Leu Arg Gly Lys Met Asp Gln Met Val Leu Gly Glu Val
65                  70                  75                  80
ggt ggc agt gtg tgg tgt ggc gtt gga tat atg gat atg gag aag atg    288
Gly Gly Ser Val Trp Cys Gly Val Gly Tyr Met Asp Met Glu Lys Met
                85                  90                  95
ata cta ctc agc ttt gga gtg cat cgg tct gct cag gga acg ggg aag    336
Ile Leu Leu Ser Phe Gly Val His Arg Ser Ala Gln Gly Thr Gly Lys
            100                 105                 110
gct ttc acc aac aac gtt acc aat cca cat ctc acg ctt cca cct cat    384
Ala Phe Thr Asn Asn Val Thr Asn Pro His Leu Thr Leu Pr0 Pro His
        115                 120                 125
tct aca aaa aca aaa aaa cag gtc tcc ttc ctc cac atc tac cac cac    432
Ser Thr Lys Thr Lys Lys Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His
    130                 135                 140
acg acc ata gcg tgg gca tgg tgg atc gcc ctc cgc ttc tcc ccc ggt    480
Thr Thr Ile Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly
145                 150                 155                 160
gga gac att tac ttc ggg gca ctc ctc aac tcc atc atc cac gtc ctc    528
Gly Asp Ile Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu
                165                 170                 175
atg tat tcc tac tac gcc ctt gcc cta ctc aag gtc agt tgt cca tgg    576
Met Tyr Ser Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp
            180                 185                 190
aaa cga tac ctg act caa gct caa tta ttg caa ttc aca agt gtg gtg    624
Lys Arg Tyr Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val
        195                 200                 205
gtt tat acg ggg tgt acg ggt tat act cat tac tat cat acg aag cat    672
Val Tyr Thr Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His
    210                 215                 220
gga gcg gat gag aca cag cct agt tta gga acg tat tat ttc tgt tgt    720
Gly Ala Asp Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys
225                 230                 235                 240
gga gtg cag gtg ttt gag atg gtt agt ttg ttt gta ctc ttt tcc atc    768
Gly Val Gln Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile
                245                 250                 255
ttt tat aaa cga tcc tat tcg aag aag aac aag tca gga gga aag gat    816
Phe Tyr Lys Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp
            260                 265                 270
agc aag aag aat gat gat ggg aat aat gag gat caa tgt cac aag gct    864
Ser Lys Lys Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala
        275                 280                 285
atg aag gat ata tcg gag ggt gcg aag gag gtt gtg ggg cat gca gcg    912
Met Lys Asp Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala
    290                 295                 300
aag gat get gga aag ttg gtg gct acg aga gta agg tgt aag gtg taa    960
Lys Asp Ala Gly Lys Leu Val Ala Thr Arg Val Arg Cys Lys Val
305                 310                 315
<210>44
<211>319
<212>PRT
<213>假矮海链藻
<400>44
Met Val Leu Tyr Asn Val Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val
1               5                   10                  15
Tyr Ala Ile Val Asp Ala Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly
            20                  25                  30
Ser Arg Ser Leu Val Gly Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala
        35                  40                  45
Val Trp Val His Tyr Cys Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr
    50                  55                  60
Phe Met Val Leu Arg Gly Lys Met Asp Gln Met Val Leu Gly Glu Val
65                  70                  75                  80
Gly Gly Ser Val Trp Cys Gly Val Gly Tyr Met Asp Met Glu Lys Met
                85                  90                  95
Ile Leu Leu Ser Phe Gly Val His Arg Ser Ala Gln Gly Thr Gly Lys
            100                 105                 110
Ala Phe Thr Asn Asn Val Thr Asn Pro His Leu Thr Leu Pro Pro His
        115                 120                 125
Ser Thr Lys Thr Lys Lys Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His
    130                 135                 140
Thr Thr Ile Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly
145                 150                 155                 160
Gly Asp Ile Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu
                165                 170                 175
Met Tyr Ser Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp
            180                 185                 190
Lys Arg Tyr Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val
        195                 200                 205
Val Tyr Thr Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His
    210                 215                 220
Gly Ala Asp Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys
225                 230                 235                 240
Gly Val Gln Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile
                245                 250                 255
Phe Tyr Lys Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp
            260                 265                 270
Ser Lys Lys Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala
        275                 280                 285
Met Lys Asp Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala
    290                 295                 300
Lys Asp Ala Gly Lys Leu Val Ala Thr Arg Val Arg Cys Lys Val
305                 310                 315
<210>45
<211>819
<212>DNA
<213>假矮海链藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(819)
<223>Δ5延伸酶
<400>45
atg gac gcc tac aac gct gca atg gat aag atc ggt gcc gcc atc atc     48
Met Asp Ala Tyr Asn Ala Ala Met Asp Lys Ile Gly Ala Ala Ile Ile
1               5                   10                  15
gat tgg tct gat ccc gat gga aag ttc cgt gcc gat aga gag gac tgg     96
Asp Trp Ser Asp Pro Asp Gly Lys Phe Arg Ala Asp Arg Glu Asp Trp
            20                  25                  30
tgg ctc tgc gac ttc cgt agc gcc atc acc atc gcc ctc atc tac atc    144
Trp Leu Cys Asp Phe Arg Ser Ala Ile Thr Ile Ala Leu Ile Tyr Ile
        35                  40                  45
gcc ttc gtc atc ctc ggt tcc gcc gtc atg caa tcc ctc ccc gca atg    192
Ala Phe Val Ile Leu Gly Ser Ala Val Met Gln Ser Leu Pr0Ala Met
    50                  55                  60
gat ccc  tac ccc atc aaa ttc ctc tac aac gtc tcc caa atc ttc ctt    240
Asp Pro Tyr Pro Ile Lys Phe Leu Tyr Asn Val Ser Gln Ile Phe Leu
65                  70                  75                  80
tgt gcc tac atg act gtc gag gcg gga ttt ttg gcc tac cgc aat gga    288
Cys Ala Tyr Met Thr Val Glu Ala Gly Phe Leu Ala Tyr Arg Asn Gly
                85                  90                  95
tat acc gtc atg cct tgc aat cat ttc aat gtg aat gat cct ccc gtg    336
Tyr Thr Val Met Pro Cys Asn His Phe Asn Val Asn Asp Pro Pro Val
            100                 105                 110
gcg aat ctt ctt tgg ttg ttt tat att tcc aag gtg tgg gac ttt tgg    384
Ala Asn Leu Leu Trp Leu Phe Tyr Ile Ser Lys Val Trp Asp Phe Trp
        115                 120                 125
gat acc att ttc att gtg ttg ggg aag aag tgg cgt caa tta tct ttc    432
Asp Thr Ile Phe Ile Val Leu Gly Lys Lys Trp Arg Gln Leu Ser Phe
    130                 135                 140
ttg cat gta tac cat cac acc acc atc ttt cta ttc tat tgg ctg aat    480
Leu His Val Tyr His His Thr Thr Ile Phe Leu Phe Tyr Trp Leu Asn
145                 150                 155                 160
gcc aat gtc ttg tac gat ggt gac atc ttc ctt acc atc ttg ctc aat    528
Ala Asn Val Leu Tyr Asp Gly Asp Ile Phe Leu Thr Ile Leu Leu Asn
                165                 170                 175
gga ttc atc cac acg gtg atg tac acg tat tac ttc atc tgt atg cat    576
Gly Phe Ile His Thr Val Met Tyr Thr Tyr Tyr Phe Ile Cys Met His
            180                 185                 190
acc aaa gat tcc aag acg ggc aag agt ctt cct ata tgg tgg aag tcg    624
Thr Lys Asp Ser Lys Thr Gly Lys Ser Leu Pro Ile Trp Trp Lys Ser
        195                 200                 205
agt ttg acg gcg ttt cag ttg ttg caa ttc act atc atg atg agt cag    672
Ser Leu Thr Ala Phe Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ile Met Met Ser Gln
    210                 215                 220
gct acc tac ctt gtc ttc cac ggg tgt gat aag gtg tcg ctt cgt atc    720
Ala Thr Tyr Leu Val Phe His Gly Cys Asp Lys Val Ser Leu Arg Ile
225                 230                 235                 240
acg att gtg tac ttt gtg tcc ctt ttg agt ttg ttc ttc crt ttt gct    768
Thr Ile Val Tyr Phe Val Ser Leu Leu Ser Leu Phe Phe Leu Phe Ala
                245                 250                 255
cag ttc ttt gtg caa tca tac atg gca ccc aaa aag aag aag agt gct    816
Gln Phe Phe Val Gln Ser Tyr Met Ala Pro Lys Lys Lys Lys Ser Ala
            260                 265                 270
tag                                                                819
<210>46
<211>272
<212>PRT
<213>假矮海链藻
<400>46
Met Asp Ala Tyr Asn Ala Ala Met Asp Lys Ile Gly Ala Ala Ile Ile
1               5                   10                  15
Asp Trp Ser Asp Pro Asp Gly Lys Phe Arg Ala Asp Arg Glu Asp Trp
            20                  25                  30
Trp Leu Cys Asp Phe Arg Ser Ala Ile Thr Ile Ala Leu Ile Tyr Ile
        35                  40                  45
Ala Phe Val Ile Leu Gly Ser Ala Val Met Gln Ser Leu Pro Ala Met
    50                  55                  60
Asp Pro Tyr Pro Ile Lys Phe Leu Tyr Asn Val Ser Gln Ile Phe Leu
65                  70                  75                  80
Cys Ala Tyr Met Thr Val Glu Ala Gly Phe Leu Ala Tyr Arg Asn Gly
                85                  90                  95
Tyr Thr Val Met Pro Cys Asn His Phe Asn Val Asn Asp Pro Pro Val
            100                 105                 110
Ala Asn Leu Leu Trp Leu Phe Tyr Ile Ser Lys Val Trp Asp Phe Trp
        115                 120                 125
Asp Thr Ile Phe Ile Val Leu Gly Lys Lys Trp Arg Gln Leu Ser Phe
    130                 135                 140
Leu His Val Tyr His His Thr Thr Ile Phe Leu Phe Tyr Trp Leu Asn
145                 150                 155                 160
Ala Asn Val Leu Tyr Asp Gly Asp Ile Phe Leu Thr Ile Leu Leu Asn
                165                 170                 175
Gly Phe Ile His Thr Val Met Tyr Thr Tyr Tyr Phe Ile Cys Met His
            180                 185                 190
Thr Lys Asp Ser Lys Thr Gly Lys Ser Leu Pro Ile Trp Trp Lys Ser
        195                 200                 205
Ser Leu Thr Ala Phe Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ile Met Met Ser Gln
    210                 215                 220
Ala Thr Tyr Leu Val Phe His Gly Cys Asp Lys Val Ser Leu Arg Ile
225                 230                 235                 240
Thr Ile Val Tyr Phe Val Ser Leu Leu Ser Leu Phe Phe Leu Phe Ala
                245                 250                 255
Gln Phe Phe Val Gln Ser Tyr Met Ala Pro Lys Lys Lys Lys Ser Ala
            260                 265                 270
<210>47
<21l>936
<212>DNA
<213>寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(936)
<223>Δ5延伸酶
<400>47
atg tct gcc ttc atg act ctc cca cag gct ctc tcc gat gtg acc tcg     48
Met Set Ala Phe Met Thr Leu Pro Gln Ala Leu Ser Asp Val Thr Ser
1               5                   10                  15
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Ala Leu Val Thr Leu Gly Lys Asp Val Ser Ser Pro Ser Ala Phe Gln
            20                  25                  30
gct gtc act ggc ttc tgc agg gag cag tgg ggg att ccg aca gta ttc    144
Ala Val Thr Gly Phe Cys Arg Glu Gln Trp Gly Ile Pro Thr Val Phe
        35                  40                  45
tgc ctg ggc tac ttg gcc atg gtc tac gcg gcc aga aga ccc ctc ccg    192
Cys Leu Gly Tyr Leu Ala Met Val Tyr Ala Ala Arg Arg Pro Leu Pro
    50                  55                  60
cag cac ggc tac atg gtt gcg gtg gac cgt tgc ttc gct gct tgg aac    240
Gln His Gly Tyr Met Val Ala Val Asp Arg Cys Phe Ala Ala Trp Asn
65                  70                  75                  80
ttg gct ctc tct gtc ttc agc act tgg ggc ttc tac cac atg gct gtc    288
Leu Ala Leu Ser Val Phe Ser Thr Trp Gly Phe Tyr His Met Ala Val
                85                  90                  95
ggg ctc tac aac atg aca gag acg agg ggc ttg caa ttc acc atc tgc    336
Gly Leu Tyr Asn Met Thr Glu Thr Arg Gly Leu Gln Phe Thr Ile Cys
            100                 105                 110
ggt tcg act ggg gag ctc gtg cag aac ctt cag act ggc cca acc gct    384
Gly Ser Thr Gly Glu Leu Val Gln Asn Leu Gln Thr Gly Pro Thr Ala
        115                 120                 125
ctg gcg ctc tgc ctc ttc tgc ttc agc aag atc ccc gag ttg atg gac    432
Leu Ala Leu Cys Leu Phe Cys Phe Ser Lys Ile Pro Glu Leu Met Asp
    130                 135                 140
acg gtg ttt ctc atc ctg aag gcc aag aag gtc cgc ttc ttg cag tgg    480
Thr Val Phe Leu Ile Leu Lys Ala Lys Lys Val Arg Phe Leu Gln Trp
145                 150                 155                 160
tac cac cat gcc aca gtc atg ctc ttc tgt tgg ctc gcc ctc gcg acg    528
Tyr His His Ala Thr Val Met Leu Phe Cys Trp Leu Ala Leu Ala Thr
                165                 170                 175
gag tac act cct ggc ttg tgg ttt gcg gcg acg aac tac ttc gtg cac    576
Glu Tyr Thr Pro Gly Leu Trp Phe Ala Ala Thr Asn Tyr Phe Val His
            180                 185                 190
tcc atc atg tac atg tac ttc ttc ctc atg acc ttc aag tcg gcc gcg    624
Ser Ile Met Tyr Met Tyr Phe Phe Leu Met Thr Phe Lys Ser Ala Ala
        195                 200                 205
aag gtg gtg aag ccc atc gcc cct ctc atc aca gtt atc cag att gct    672
Lys Val Val Lys Pro Ile Ala Pro Leu Ile Thr Val Ile Gln Ile Ala
    210                 215                 220
cag atg gtc tgg ggc ctc atc gtc aac ggc atc gcc atc acc acc ttc    720
Gln Met Val Trp Gly Leu Ile Val Asn Gly Ile Ala Ile Thr Thr Phe
225                 230                 235                 240
ttc acg act ggt gcc tgc cag atc cag tct gtg act gtg tat tcg gcc    768
Phe Thr Thr Gly Ala Cys Gln Ile Gln Ser Val Thr Val Tyr Ser Ala
                245                 250                 255
atc atc atg tac gct tcg tac ttc tac ctg ttc tcc cag ctc ttc ttc    816
Ile Ile Met Tyr Ala Ser Tyr Phe Tyr Leu Phe Ser Gln Leu Phe Phe
            260                 265                 270
gag gcc cat ggt gcc gct ggc aag aac aag aag aag ttg acc cgc gag    864
Glu Ala His Gly Ala Ala Gly Lys Asn Lys Lys Lys Leu Thr Arg Glu
        275                 280                 285
ctc tct cga aaa atc tcg gag gct ctc ctg aac acc ggt gac gag gtt    912
Leu Ser Arg Lys Ile Ser Glu Ala Leu Leu Asn Thr Gly Asp Glu Val
    290                 295                 300
tcc aag cac ctg aag gtg aat tga                                    936
Ser Lys His Leu Lys Val Asn
305                 310
<210>48
<211>311
<212>PRT
<213>寇氏隐甲藻
<400>48
Met Ser Ala Phe Met Thr Leu Pro Gln Ala Leu Ser Asp Val Thr Ser
1               5                   10                  15
Ala Leu Val Thr Leu Gly Lys Asp Val Ser Ser Pro Ser Ala Phe Gln
            20                  25                  30
Ala Val Thr Gly Phe Cys Arg Glu Gln Trp Gly Ile Pro Thr Val Phe
        35                  40                  45
Cys Leu Gly Tyr Leu Ala Met Val Tyr Ala Ala Arg Arg Pro Leu Pro
    50                  55                  60
Gln His Gly Tyr Met Val Ala Val Asp Arg Cys Phe Ala Ala Trp Asn
65                  70                  75                  80
Leu Ala Leu Ser Val Phe Ser Thr Trp Gly Phe Tyr His Met Ala Val
                85                  90                  95
Gly Leu Tyr Asn Met Thr Glu Thr Arg Gly Leu Gln Phe Thr Ile Cys
            100                 105                 110
Gly Ser Thr Gly Glu Leu Val Gln Asn Leu Gln Thr Gly Pro Thr Ala
        115                 120                 125
Leu Ala Leu Cys Leu Phe Cys Phe Ser Lys Ile Pro Glu Leu Met Asp
    130                 135                 140
Thr Val Phe Leu Ile Leu Lys Ala Lys Lys Val Arg Phe Leu Gln Trp
145                 150                 155                 160
Tyr His His Ala Thr Val Met Leu Phe Cys Trp Leu Ala Leu Ala Thr
                165                 170                 175
Glu Tyr Thr Pro Gly Leu Trp Phe Ala Ala Thr Asn Tyr Phe Val His
            180                 185                 190
Ser Ile Met Tyr Met Tyr Phe Phe Leu Met Thr Phe Lys Ser Ala Ala
        195                 200                 205
Lys Val Val Lys Pro Ile Ala Pro Leu Ile Thr Val Ile Gln Ile Ala
    210                 215                 220
Gln Met Val Trp Gly Leu Ile Val Asn Gly Ile Ala Ile Thr Thr Phe
225                 230                 235                 240
Phe Thr Thr Gly Ala Cys Gln Ile Gln Ser Val Thr Val Tyr Ser Ala
                245                 250                 255
Ile Ile Met Tyr Ala Ser Tyr Phe Tyr Leu Phe Ser Gln Leu Phe Phe
            260                 265                 270
Glu Ala His Gly Ala Ala Gly Lys Asn Lys Lys Lys Leu Thr Arg Glu
        275                 280                 285
Leu Ser Arg Lys Ile Ser Glu Ala Leu Leu Asn Thr Gly Asp Glu Val
    290                 295                 300
Ser Lys His Leu Lys Val Asn
305                 310
<210>49
<211>927
<212>DNA
<213>寇氏隐甲藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(927)
<223>Δ5延伸酶
<400>49
atg gct tcc tac caa caa gca ttc tcc gaa ttg gct aga gct ttg tcc     48
Met Ala Ser Tyr Gln Gln Ala Phe Ser Glu Leu Ala Arg Ala Leu Ser
1               5                   10                  15
act ttg aac cac gac ttc tcc agc gtc gag cca ttc aaa gtc gtg acg     96
Thr Leu Asn His Asp Phe Ser Ser Val Glu Pro Phe Lys Val Val Thr
            20                  25                  30
cag ttc tgc agg gac cag tgg gcg atc ccg aca gtc ttt tgc atc ggt    144
Gln Phe Cys Arg Asp Gln Trp Ala Ile Pro Thr Val Phe Cys Ile Gly
        35                  40                  45
tac ttg gca atg gtc tac gcc acg cga aga cct atc gcg aag cac ccc    192
Tyr Leu Ala Met Val Tyr Ala Thr ArgArg Pro Ile Ala Lys His Pro
    50                  55                  60
tac atg tct ctc gtg gat cgc tgc ttt gcg gcc tgg aac ttg ggc ctc    240
Tyr Met Set Leu Val Asp Arg Cys Phe Ala Ala Trp Asn Leu Gly Leu
65                  70                  75                  80
tcg ctc ttc agt tgc tgg ggc ttc tac cac atg gca gtg gga ctc tcc    288
Set Leu Phe Set Cys Trp Gly Phe Tyr His MetAla Val Gly Leu Ser
                85                  90                  95
cac acc act tgg aat ttc ggg ctc cag ttc acc atc tgc ggc agc acc    336
His Thr Thr Trp Asn Phe Gly Leu Gln Phe Thr Ile Cys Gly Ser Thr
            100                 105                 110
acg gag ctt gtg aat ggc ttc cag aag ggc ccg gcg gcc ctc gcc ctc    384
Thr Glu Leu Val Asn Gly Phe Gln Lys Gly Pro Ala Ala Leu Ala Leu
        115                 120                 125
atc ctg ttc tgc ttc tcc aag atc ccg gag ttg ggc gac acc gtc ttc    432
Ile Leu Phe Cys Phe Ser Lys Ile Pro Glu Leu Gly Asp Thr Val Phe
    130                 135                 140
ttg atc ttg aag gga aag aag gtc cgc ttc ttg cag tgg tac cac cac    480
Leu Ile Leu Lys Gly Lys Lys Val Arg Phe Leu Gln Trp Tyr His His
145                 150                 155                 160
acg acc gtg atg ctc ttc tgt tgg atg gcc ttg gcg act gag tac act    528
Thr Thr Val Met Leu Phe Cys Trp Met Ala Leu Ala Thr Glu Tyr Thr
                165                 170                 175
cct gga ttg tgg ttc gcg gcc acg aac tac ttc gtg cac tcc atc atg    576
Pro Gly Leu Trp Phe Ala Ala Thr Asn Tyr Phe Val His Ser Ile Met
            180                 185                 190
tac atg tac ttc ttc ctc atg acc ttc aag acg gcc gcc ggc atc atc    624
Tyr Met Tyr Phe Phe Leu Met Thr Phe Lys Thr Ala Ala Gly Ile Ile
        195                 200                 205
aag ccc atc gcg cct ctc atc acc atc atc cag atc tcc cag atg gtc    672
Lys Pro Ile Ala Pro Leu Ile Thr Ile Ile Gln Ile Ser Gln Met Val
    210                 215                 220
tgg ggc ttg gtc gtg aac gcc atc gcc gtc ggc acc ttc ttc acc aca    720
Trp Gly Leu Val Val Asn Ala Ile Ala Val Gly Thr Phe Phe Thr Thr
225                 230                 235                 240
ggc aac tgc cag atc cag gca gtg aca gtc tac tcc gcc atc gtg atg    768
Gly Asn Cys Gln Ile Gln Ala Val Thr Val Tyr Ser Ala Ile Val Met
                245                 250                 255
tac gcc tcc tac ttc tac ctc ttc ggc cag ctc ttc ttc gag gcc cag    816
Tyr Ala Ser Tyr Phe Tyr Leu Phe Gly Gln Leu Phe Phe Glu Ala Gln
            260                 265                 270
ggt tcg gct gga aag gac aag aag aag ttg gcc cga gag ctg agc cga    864
Gly Ser Ala Gly Lys Asp Lys Lys Lys Leu Ala Arg Glu Leu Ser Arg
        275                 280                 285
aag gtc tcg cgg gct ctc aca gca acg ggc gaa gag gtg tcg aag cac    912
Lys Val Ser Arg Ala Leu Thr Ala Thr Gly Glu Glu Val Ser Lys His
    290                 295                 300
atg aag gtg aat tga                                                927
Met Lys Val Asn
305
<210>50
<211>308
<212>PRT
<213>寇氏隐甲藻
<400>50
Met Ala Ser Tyr Gln Gln Ala Phe Ser Glu Leu Ala Arg Ala Leu Ser
1               5                   10                  15
Thr Leu Asn His Asp Phe Ser Ser Val Glu Pro Phe Lys Val Val Thr
            20                  25                  30
Gln Phe Cys Arg Asp Gln Trp Ala Ile Pro Thr Val Phe Cys Ile Gly
        35                  40                  45
Tyr Leu Ala Met Val Tyr Ala Thr Arg Arg Pro Ile Ala Lys His Pro
    50                  55                  60
Tyr Met Ser Leu Val Asp Arg Cys Phe Ala Ala Trp Asn Leu Gly Leu
65                  70                  75                  80
Ser Leu Phe Ser Cys Trp Gly Phe Tyr His Met Ala Val Gly Leu Ser
                85                  90                  95
His Thr Thr Trp Asn Phe Gly Leu Gln Phe Thr Ile Cys Gly Ser Thr
            100                 105                 110
Thr Glu Leu Val Asn Gly Phe Gln Lys Gly Pro Ala Ala Leu Ala Leu
        115                 120                 125
Ile Leu Phe Cys Phe Ser Lys Ile Pro Glu Leu Gly Asp Thr Val Phe
    130                 135                 140
Leu Ile Leu Lys Gly Lys Lys Val Arg Phe Leu Gln Trp Tyr His His
145                 150                 155                 160
Thr Thr Val Met Leu Phe Cys Trp Met Ala Leu Ala Thr Glu Tyr Thr
                165                 170                 175
Pro Gly Leu Trp Phe Ala Ala Thr Asn Tyr Phe Val His Ser Ile Met
            180                 185                 190
Tyr Met Tyr Phe Phe Leu Met Thr Phe Lys Thr Ala Ala Gly Ile Ile
        195                 200                 205
Lys Pro Ile Ala Pro Leu Ile Thr Ile Ile Gln Ile Ser Gln Met Val
    210                 215                 220
Trp Gly Leu Val Val Asn Ala Ile Ala Val Gly Thr Phe Phe Thr Thr
225                 230                 235                 240
Gly Asn Cys Gln Ile Gln Ala Val Thr Val Tyr Ser Ala Ile Val Met
                245                 250                 255
Tyr Ala Ser Tyr Phe Tyr Leu Phe Gly Gln Leu Phe Phe Glu Ala Gln
            260                 265                 270
Gly Ser Ala Gly Lys Asp Lys Lys Lys Leu Ala Arg Glu Leu Set Arg
        275                 280                 285
Lys Val Ser Arg Ala Leu Thr Ala Thr Gly Glu Glu Val Ser Lys His
    290                 295                 300
Met Lys Val Asn
305
<210>51
<211>795
<212>DNA
<213>虹鳟(0ncorhynchus mykiss)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(795)
<223>Δ5延伸酶
<400>51
atg gct rca aca tgg caa agc gtt cag tcc atg cgc cag tgg att tta     48
Met Ala Ser Thr Trp Gln Ser Val Gln Ser Met Arg Gln Trp Ile Leu
1               5                   10                  15
gag aat gga gat aaa agg aca gac cca tgg cta ctg gtc tac tcc cct     96
Glu Asn Gly Asp Lys Arg Thr Asp Pro Trp Leu Leu Val Tyr Ser Pro
            20                  25                  30
atg cca gtg gcc att ata ttc ctc ctc tat ctt ggt gtg gtc tgg gct    144
Met Pro Val Ala Ile Ile Phe Leu Leu Tyr Leu Gly Val Val Trp Ala
        35                  40                  45
ggg ccc aag ctg atg aaa cgc agg gaa cca gtt gat ctc aag gct gta    192
Gly Pro Lys Leu Met Lys Arg Arg Glu Pro Val Asp Leu Lys Ala Val
    50                  55                  60
ctc att gtc tac aac ttc gcc atg gtc tgc ctg tct gtc tac atg ttc    240
Leu Ile Val Tyr Asn Phe Ala Met Val Cys Leu Ser Val Tyr Met Phe
65                  70                  75                  80
cat gag ttc ttg gtc acg tcc ttg ctg tct aac tac agt tac ctg tgt    288
His Glu Phe Leu Val Thr Ser Leu Leu Ser Asn Tyr Ser Tyr Leu Cys
                85                  90                  95
caa cct gtg gat tac agc act agt cca ctg gcg atg agg atg gcc aaa    336
Gln Pro Val Asp Tyr Ser Thr Ser Pro Leu Ala Met Arg Met Ala Lys
            100                 105                 110
gta tgc tgg tgg ttt ttc ttc tcc aag gtc ata gaa ttg gct gac acg    384
Val Cys Trp Trp Phe Phe Phe Ser Lys Val Ile Glu Leu Ala Asp Thr
        115                 120                 125
gtg ttc ttc atc ctg agg aag aag aac agt cag ctg act ttc ctg cat    432
Val Phe Phe Ile Leu Arg Lys Lys Asn Ser Gln Leu Thr Phe Leu His
    130                 135                 140
gtc tat cac cat ggc acc atg atc ttc aac tgg tgg gca ggg gtc aag    480
Val Tyr His His Gly Thr Met Ile Phe Asn Trp Trp Ala Gly Val Lys
145                 150                 155                 160
tat ctg gct gga ggc caa tcg ttc ttc atc ggc ctg ctc aat acc ttt    528
Tyr Leu Ala Gly Gly Gln Ser Phe Phe Ile Gly Leu Leu Asn Thr Phe
                165                 170                 175
gtg cac atc gtg atg tac tct tac tac gga ctg gct gcc ctg ggg cct    576
Val His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ala Ala Leu Gly Pro
            180                 185                 190
cac acg cag aag tac tta tgg tgg aag cgc tat ctg acc tca ctg cag    624
His Thr Gln Lys Tyr Leu Trp Trp Lys Arg Tyr Leu Thr Ser Leu Gln
        195                 200                 205
ctg ctc cag ttt gtc ctg ttg acc act cac act ggc tac aac ctc ttc    672
Leu Leu Gln Phe Val Leu Leu Thr Thr His Thr Gly Tyr Asn Leu Phe
    210                 215                 220
act gag tgt gac ttc ccg gac tcc atg aac gct gtg gtg ttt gcc tac    720
Thr Glu Cys Asp Phe Pro Asp Ser Met Asn Ala Val Val Phe Ala Tyr
225                 230                 235                 240
tgt gtc agt ctc att gct ctc ttc agc aac ttc tac tat cag agc tac    768
Cys Val Ser Leu Ile Ala Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Tyr Gln Ser Tyr
                245                 250                 255
ctc aac agg aag agc aag aag aca taa                                795
Leu Asn Arg Lys Ser Lys Lys Thr
            260
<210>52
<211>264
<212>PRT
<213>虹鳟
<400>52
Met Ala Ser Thr Trp Gln Ser Val Gln Ser Met Arg Gln Trp Ile Leu
1               5                   10                  15
Glu Asn Gly Asp Lys Arg Thr Asp Pro Trp Leu Leu Val Tyr Ser Pro
            20                  25                  30
Met Pro Val Ala Ile Ile Phe Leu Leu Tyr Leu Gly Val Val Trp Ala
        35                  40                  45
Gly Pro Lys Leu Met Lys Arg Arg Glu Pro Val Asp Leu Lys Ala Val
    50                  55                  60
Leu Ile Val Tyr Asn Phe Ala Met Val Cys Leu Ser Val Tyr Met Phe
65                  70                  75                  80
His Glu Phe Leu Val Thr Ser Leu Leu Ser Asn Tyr Ser Tyr Leu Cys
                85                  90                  95
Gln Pro Val Asp Tyr Ser Thr Ser Pro Leu Ala Met Arg Met Ala Lys
            100                 105                 110
Val Cys Trp Trp Phe Phe Phe Ser Lys Val Ile Glu Leu Ala Asp Thr
        115                 120                 125
Val Phe Phe Ile Leu Arg Lys Lys Asn Ser Gln Leu Thr Phe Leu His
    130                 135                 140
Val Tyr His His Gly Thr Met Ile Phe Asn Trp Trp Ala Gly Val Lys
145                 150                 155                 160
Tyr Leu Ala Gly Gly Gln Ser Phe Phe Ile Gly Leu Leu Asn Thr Phe
                165                 170                 175
Val His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ala Ala Leu Gly Pro
            180                 185                 190
His Thr Gln Lys Tyr Leu Trp Trp Lys Arg Tyr Leu Thr Ser Leu Gln
        195                 200                 205
Leu Leu Gln Phe Val Leu Leu Thr Thr His Thr Gly Tyr Asn Leu Phe
    210                 215                 220
Thr Glu Cys Asp Phe Pro Asp Ser Met Asn Ala Val Val Phe Ala Tyr
225                 230                 235                 240
Cys Val Ser Leu Ile Ala Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Tyr Gln Ser Tyr
                245                 250                 255
Leu Asn Arg Lys Ser Lys Lys Thr
            260
<210>53
<211>885
<212>DNA
<213>虹鳟
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(885)
<223>Δ5延伸酶
<400>53
atg gag act ttt aat tat aaa cta aac atg tac ata gac tca tgg atg     48
Met Glu Thr Phe Asn Tyr Lys Leu Asn Met Tyr Ile Asp Ser Trp Met
1               5                   10                  15
ggt ccc aga gat gag cgg gta cag gga tgg ctg ctt ctg gac aac tac     96
Gly Pro Arg Asp Glu Arg Val Gln Gly Trp Leu Leu Leu Asp Asn Tyr
            20                  25                  30
cct cca acc ttt gca cta aca gtc atg tac ctg ctg atc gta tgg atg    144
Pro Pro Thr Phe Ala Leu Thr Val Met Tyr Leu Leu Ile Val Trp Met
        35                  40                  45
ggg ccc aag tac atg aga cac aga cag ccg gtg tct tgc cgg ggt ctc    192
Gly Pro Lys Tyr Met Arg His Arg Gln Pro Val Ser Cys Arg Gly Leu
    50                  55                  60
ctc ttg gtc tac aat ctg ggc ctc acg atc ttg tcc ttc tat atg ttc    240
Leu Leu Val Tyr Asn Leu Gly Leu Thr Ile Leu Ser Phe Tyr Met Phe
65                  70                  75                  80
tat gag atg gtg tct gct gtg tgg cac ggg gat tat aac ttc ttt tgc    288
Tyr Glu Met Val Ser Ala Val Trp His Gly Asp Tyr Asn Phe Phe Cys
                85                  90                  95
caa gac aca cac agt gca gga gaa acc gat acc aag atc ata aat gtg    336
Gln Asp Thr His Ser Ala Gly Glu Thr Asp Thr Lys Ile Ile Asn Val
            100                 105                 110
ctg tgg tgg tac tac ttc tcc aag ctc ata gag ttt atg gat acc ttc    384
Leu Trp Trp Tyr Tyr Phe Ser Lys Leu Ile Glu Phe Met Asp Thr Phe
        115                 120                 125
ttc ttc atc ctg cgg aag aac aac cat caa atc acg ttt ctg cac atc    432
Phe Phe Ile Leu Arg Lys Asn Asn His Gln Ile Thr Phe Leu His Ile
    130                 135                 140
tac cac cat gct agc atg ctc aac atc tgg tgg ttc gtc atg aac tgg    480
Tyr His His Ala Ser Met Leu Asn Ile Trp Trp Phe Val Met Asn Trp
145                 150                 155                 160
gtg ccc tgt ggt cac tcc tac ttt ggt gcc tcc ctg aac agc ttc atc    528
Val Pro Cys Gly His Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Asn Ser Phe Ile
                165                 170                 175
cat gtc ctg atg tac tct tac tat ggg ctc tct gct gtc ccg gcc ttg    576
His Val Leu Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ser Ala Val Pro Ala Leu
             180                 185                 190
cgg ccc tat cta tgg tgg aag aaa tac atc aca caa gta cag ctg att    624
Arg Pro Tyr Leu Trp Trp Lys Lys Tyr Ile Thr Gln Val Gln Leu Ile
        195                 200                 205
cag ttc ttt ttg acc atg tcc cag acg ata tgt gca gtc att tgg cca    672
Gln Phe Phe Leu Thr Met Ser Gln Thr Ile Cys Ala Val Ile Trp Pro
    210                 215                 220
tgt gat ttc ccc aga ggg tgg ctg tat ttc cag ata ttc tat gtc atc    720
Cys Asp Phe Pro Arg Gly Trp Leu Tyr Phe Gln Ile Phe Tyr Val Ile
225                 230                 235                 240
aca ctt att gcc ctt ttc tca aac ttc tac att cag act tac aag aaa    768
Thr Leu Ile Ala Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Ile Gln Thr Tyr Lys Lys
                245                 250                 255
cac ctt gtt tca caa aag aag gag tat cat cag aat ggc tct gtt gct    816
His Leu Val Ser Gln Lys Lys Glu Tyr His Gln Asn Gly Ser Val Ala
            260                 265                 270
tca ttg aat ggc cat gtg aat ggg gtg aca ccc acg gaa acc att aca    864
Ser Leu Asn Gly His Val Asn Gly Val Thr Pro Thr Glu Thr Ile Thr
        275                 280                 285
cac agg aaa gtg agg ggg gac                                        885
His Arg Lys Val Arg Gly Asp
    290                 295
<210>54
<211>295
<212>PRT
<213>虹鳟
<400>54
Met Glu Thr Phe Asn Tyr Lys Leu Asn Met Tyr Ile Asp Ser Trp Met
1               5                   10                  15
Gly Pro Arg Asp Glu Arg Val Gln Gly Trp Leu Leu Leu Asp Asn Tyr
            20                  25                  30
Pro Pro Thr Phe Ala Leu Thr Val Met Tyr Leu Leu Ile Val Trp Met
        35                  40                  45
Gly Pro Lys Tyr Met Arg His Arg Gln Pro Val Ser Cys Arg Gly Leu
    50                  55                  60
Leu Leu Val Tyr Asn Leu Gly Leu Thr Ile Leu Ser Phe Tyr Met Phe
65                  70                  75                  80
Tyr Glu Met Val Ser Ala Val Trp His Gly Asp Tyr Asn Phe Phe Cys
                85                  90                  95
Gln Asp Thr His Ser Ala Gly Glu Thr Asp Thr Lys Ile Ile Asn Val
            100                 105                 110
Leu Trp Trp Tyr Tyr Phe Ser Lys Leu Ile Glu Phe Met Asp Thr Phe
        115                 120                 125
Phe Phe Ile Leu Arg Lys Asn Asn His Gln Ile Thr Phe Leu His Ile
    130                 135                 140
Tyr His His Ala Ser Met Leu Asn Ile Trp Trp Phe Val Met Asn Trp
145                 150                 155                 160
Val Pro Cys Gly His Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Asn Ser Phe Ile
                165                 170                 175
His Val Leu Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ser Ala Val Pro Ala Leu
            180                 185                 190
Arg Pro Tyr Leu Trp Trp Lys Lys Tyr Ile Thr Gln Val Gln Leu Ile
        195                 200                 205
Gln Phe Phe Leu Thr Met Ser Gln Thr Ile Cys Ala Val Ile Trp Pro
    210                 215                 220
Cys Asp Phe Pro Arg Gly Trp Leu Tyr Phe Gln Ile Phe Tyr Val Ile
225                 230                 235                 240
Thr Leu Ile Ala Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Ile Gln Thr Tyr Lys Lys
                245                 250                 255
His Leu Val Ser Gln Lys Lys Glu Tyr His Gln Asn Gly Ser Val Ala
            260                 265                 270
Ser Leu Asn Gly His Val Asn Gly Val Thr Pro Thr Glu Thr Ile Thr
        275                 280                 285
His Arg Lys Val Arg Gly Asp
    290                 295
<210>55
<211>6753
<212>DNA
<213>虹鳟
<220>
<221>CDS
<222>(513)..(1397)
<223>Δ5延伸酶
<400>55
acggattaga agccgccgag cgggtgacag ccctccgaag gaagactctc ctccgtgcgt   60
cctcgtcctc accggtcgcg ttcctgaaac gcagatgtgc ctcgcgccgc actgctccga  120
acaataaaga ttctacaata ctagctttta tggttatgaa gaggaaaaat tggcagtaac  180
ctggccccac aaaccttcaa atgaacgaat caaattaaca accataggat gataatgcga  240
ttagtttttt agccttattt ctggggtaat taatcagcga agcgatgatt tttgatctat  300
taacagatat ataaatgcaa aaactgcatt aaccacttta actaatactt tcaacatttt  360
cggtttgtat tacttcttat tcaaatgtaa taaaagtatc aacaaaaaat tgttaatata  420
cctctatact ttaacgtcaa ggagaaaaaa ccccggatcg gactactagc agctgtaata  480
cgactcacta tagggaatat taagcttaca ta atg gag act ttt aat tat aaa    533
                                    Met Glu Thr Phe Asn Tyr Lys
                                    1               5
cta aac atg tac ata gac tca tgg atg ggt ccc aga gat gag cgg gta    581
Leu Asn Met Tyr Ile Asp Ser Trp Met Gly Pro Arg Asp Glu Arg Val
        10                  15                  20
cag gga tgg ctg ctt ctg gac aac tac cct cca acc ttt gca cta aca    629
Gln Gly Trp Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Pro Pro Thr Phe Ala Leu Thr
    25                  30                  35
gtc atg tac ctg ctg atc gta tgg atg ggg ccc aag tac atg aga cac    677
Val Met Tyr Leu Leu Ile Val Trp Met Gly Pro Lys Tyr Met Arg His
40                  45                  50                  55
aga cag ccg gtg tct tgc cgg ggt ctc ctc ttg gtc tac aat ctg ggc    725
Arg Gln Pro Val Ser Cys Arg Gly Leu Leu Leu Val Tyr Asn Leu Gly
                60                  65                  70
ctc acg atc ttg tcc ttc tat atg ttc tat gag atg gtg tct gct gtg    773
Leu Thr Ile Leu Ser Phe Tyr Met Phe Tyr Glu Met Val Ser Ala Val
            75                  80                  85
tgg cac ggg gat tat aac ttc ttt tgc caa gac aca cac agt gca gga    821
Trp His Gly Asp Tyr Asn Phe Phe Cys Gln Asp Thr His Ser Ala Gly
        90                  95                  100
gaa acc gat acc aag atc ata aat gtg ctg tgg tgg tac tac ttc tcc     869
Glu Thr Asp Thr Lys Ile Ile Asn Val Leu Trp Trp Tyr Tyr Phe Ser
    105                 110                 115
aag ctc ata gag ttt atg gat acc ttc ttc ttc atc ctg cgg aag aac     917
Lys Leu Ile Glu Phe Met Asp Thr Phe Phe Phe Ile Leu Arg Lys Asn
120                 125                 130                 135
aac cat caa atc acg ttt ctg cac atc tac cac cat gct agc atg ctc     965
Asn His Gln Ile Thr Phe Leu His Ile Tyr His His Ala Ser Met Leu
                140                 145                 150
aac atc tgg tgg ttc gtc atg aac tgg gtg ccc tgt ggt cac tcc tac    1013
Asn Ile Trp Trp Phe Val Met Asn Trp Val Pro Cys Gly His Ser Tyr
            155                 160                 165
ttt ggt gcc tcc ctg aac agc ttc atc cat gtc ctg atg tac tct tac    1061
Phe Gly Ala Ser Leu Asn Ser Phe Ile His Val Leu Met Tyr Ser Tyr
        170                 175                 180
tat ggg ctc tct gct gtc ccg gcc ttg cgg ccc tat cta tgg tgg aag    1109
Tyr Gly Leu Ser Ala Val Pro Ala Leu Arg Pro Tyr Leu Trp Trp Lys
    185                 190                 195
aaa tac atc aca caa gta cag ctg att cag ttc ttt ttg acc atg tcc    1157
Lys Tyr Ile Thr Gln Val Gln Leu Ile Gln Phe Phe Leu Thr Met Ser
200                 205                 210                 215
cag acg ata tgt gca gtc att tgg cca tgt gat ttc ccc aga ggg tgg    1205
Gln Thr Ile Cys Ala Val Ile Trp Pro Cys Asp Phe Pro Arg Gly Trp
                220                 225                 230
ctg tat ttc cag ata ttc tat gtc atc aca ctt att gcc ctt ttc tca    1253
Leu Tyr Phe Gln Ile Phe Tyr Val Ile Thr Leu Ile Ala Leu Phe Ser
            235                 240                 245
aac ttc tac att cag act tac aag aaa cac ctt gtt tca caa aag aag    130l
Asn Phe Tyr Ile Gln Thr Tyr Lys Lys His Leu Val Ser Gln Lys Lys
        250                 255                 260
gag tat cat cag aat ggc tct gtt gct tca ttg aat ggc cat gtg aat    1349
Glu Tyr His Gln Asn Gly Ser Val Ala Ser Leu Asn Gly His Val Asn
    265                 270                 275
ggg gtg aca ccc acg gaa acc att aca cac agg aaa gtg agg ggg gac      1397
Gly Val Thr Pro Thr Glu Thr Ile Thr His Arg Lys Val Arg Gly Asp
280                 285                 290                 295
tgaaggatcc actagtaacg gccgccagtg tgctggaatt ctgcagatat ccagcacagt    1457
ggcggccgct cgagtctaga gggcccttcg aaggtaagcc tatccctaac cctctcctcg    1517
gtctcgattc tacgcgtacc ggtcatcatc accatcacca ttgagtttaa acccgctgat    1577
cctagagggc cgcatcatgt aattagttat gtcacgctta cattcacgcc ctccccccac    1637
atccgctcta accgaaaagg aaggagttag acaacctgaa gtctaggtcc ctatttattt    1697
ttttatagtt atgttagtat taagaacgtt atttatattt caaatttttc ttttttttct    1757
gtacagacgc gtgtacgcat gtaacattat actgaaaacc ttgcttgaga aggttttggg    1817
acgctcgaag gctttaattt gcaagctgcg gccctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg    1877
gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc    1937
tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc    19g7
acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaagcccagg    2057
aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat    2117
cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag    2177
gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga    2237
tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg    2297
tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt    2357
cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac    2417
gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc    2477
ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt    2537
ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc    2597
ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc    2657
agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg    2717
aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag    2777
atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg    2837
tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt    2897
tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gcgcttacca    2957
tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca    3017
gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc    3077
tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt    3137
ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg    3197
gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc    3257
aaaaaagcgg ttagetcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg    3317
ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga    3377
tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga    3437
ccgagttgct cttgcccggc gtcaacacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta    3497
aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg    3557
ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact    3617
ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata    3677
agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt    3737
tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa    3797
ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt    3857
atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct tcaagaaatt    3917
cggtcgaaaa aagaaaagga gagggccaag agggagggca ttggtgacta ttgagcacgt    3977
gagtatacgt gattaagcac acaaaggcag cttggagtat gtctgttatt aatttcacag    4037
gtagttctgg tccattggtg aaagtttgcg gcttgcagag cacagaggcc gcagaatgtg    4097
ctctagattc cgatgctgac ttgctgggta ttatatgtgt gcccaataga aagagaacaa    4157
ttgacccggt tattgcaagg aaaatttcaa gtcttgtaaa agcatataaa aatagttcag    4217
gcactccgaa atacttggtt ggcgtgtttc gtaatcaacc taaggaggat gttttggctc    4277
tggtcaatga ttacggcatt gatatcgtcc aactgcacgg agatgagtcg tggcaagaat    4337
accaagagtt cctcggtttg ccagttatta aaagactcgt atttccaaaa gactgcaaca    4397
tactactcag tgcagcttca cagaaacctc attcgtttat tcccttgttt gattcagaag    4457
caggtgggac aggtgaactt ttggattgga actcgatttc tgactgggtt ggaaggcaag    4517
agagccccga gagcttacat tttatgttag ctggtggact gacgccagaa aatgttggtg    4577
atgcgcttag attaaatggc gttattggtg ttgatgtaag cggaggtgtg gagacaaatg    4637
gtgtaaaaga ctctaacaaa atagcaaatt tcgtcaaaaa tgctaagaaa taggttatta    4697
ctgagtagta tttatttaag tattgtttgt gcacttgccc tagcttatcg atgataagct    4757
gtcaaagatg agaattaatt ccacggacta tagactatac tagatactcc gtctactgta    4817
cgatacactt ccgctcaggt ccttgtcctt taacgaggcc ttaccactct tttgttactc    4877
tattgatcca gctcagcaaa ggcagtgtga tctaagattc tatcttcgcg atgtagtaaa    4937
actagctaga ccgagaaaga gactagaaat gcaaaaggca cttctacaat ggctgccatc    4997
attattatcc gatgtgacgc tgcagcttct caatgatatt cgaatacgct ttgaggagat    5057
acagcctaat atccgacaaa ctgttttaca gatttacgat cgtacttgtt acccatcatt    5117
gaattttgaa catccgaacc tgggagtttt ccctgaaaca gatagtatat ttgaacctgt    5177
ataataatat atagtctagc gctttacgga agacaatgta tgtatttcgg ttcctggaga    5237
aactattgca tctattgcat aggtaatctt gcacgtcgca tccccggttc attttctgcg    5297
tttccatctt gcacttcaat agcatatctt tgttaacgaa gcatctgtgc ttcattttgt    5357
agaacaaaaa tgcaacgcga gagcgctaat ttttcaaaca aagaatctga gctgcatttt    5417
tacagaacag aaatgcaacg cgaaagcgct attttaccaa cgaagaatct gtgcttcatt    5477
tttgtaaaac aaaaatgcaa cgcgacgaga gcgctaattt ttcaaacaaa gaatctgagc    5537
tgcattttta cagaacagaa atgcaacgcg agagcgctat tttaccaaca aagaatctat    5597
acttcttttt tgttctacaa aaatgcatcc cgagagcgct atttttctaa caaagcatct    5657
tagattactt tttttctcct ttgtgcgctc tataatgcag tctcttgata actttttgca    5717
ctgtaggtcc gttaaggtta gaagaaggct actttggtgt ctattttctc ttccataaaa    5777
aaagcctgac tccacttccc gcgtttactg attactagcg aagctgcggg tgcatttttt    5837
caagataaag gcatccccga ttatattcta taccgatgtg gattgcgcat actttgtgaa    5897
cagaaagtga tagcgttgat gattcttcat tggtcagaaa attatgaacg gtttcttcta    5957
ttttgtctct atatactacg tataggaaat gtttacattt tcgtattgtt ttcgattcac    6017
tctatgaata gttcttacta caattttttt gtctaaagag taatactaga gataaacata    6077
aaaaatgtag aggtcgagtt tagatgcaag ttcaaggagc gaaaggtgga tgggtaggtt    6137
atatagggat atagcacaga gatatatagc aaagagatac ttttgagcaa tgtttgtgga    6197
agcggtattc gcaatgggaa gctccacccc ggttgataat cagaaaagcc ccaaaaacag    6257
gaagattgta taagcaaata tttaaattgt aaacgttaat attttgttaa aattcgcgtt    6317
aaatttttgt taaatcagct cattttttaa cgaatagccc gaaatcggca aaatccctta    6377
taaatcaaaa gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttcca acaagagtcc    6437
actattaaag aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa agggtctatc agggcgatgg    6497
cccactacgt gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcagt    6557
aaatcggaag ggtaaacgga tgcccccatt tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt    6617
ggcgagaaag gaagggaaga aagcgaaagg agcgggggct agggcggtgg gaagtgtagg    6677
ggtcacgctg ggcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat ggggcgctac agggcgcgtg    6737
gggatgatcc actagt                                                    6753
<210>56
<211>295
<212>PRT
<213>虹鳟
<400>56
Met Glu Thr Phe Asn Tyr Lys Leu Asn Met Tyr Ile Asp Ser Trp Met
1               5                   10                  15
Gly Pro Arg Asp Glu Arg Val Gln Gly Trp Leu Leu Leu Asp Asn Tyr
            20                  25                  30
Pro Pro Thr Phe Ala Leu Thr Val Met Tyr Leu Leu Ile Val Trp Met
        35                  40                  45
Gly Pro Lys Tyr Met Arg His Arg Gln Pro Val Ser Cys Arg Gly Leu
    50                  55                  60
Leu Leu Val Tyr Asn Leu Gly Leu Thr Ile Leu Ser Phe Tyr Met Phe
65                  70                  75                  80
Tyr Glu Met Val Ser Ala Val Trp His Gly Asp Tyr Asn Phe Phe Cys
                85                  90                  95
Gln Asp Thr His Ser Ala Gly Glu Thr Asp Thr Lys Ile Ile Asn Val
            100                 105                 110
Leu Trp Trp Tyr Tyr Phe Ser Lys Leu Ile Glu Phe Met Asp Thr Phe
        115                 120                 125
Phe Phe Ile Leu Arg Lys Asn Asn His Gln Ile Thr Phe Leu His Ile
    130                 135                 140
Tyr His His Ala Ser Met Leu Asn Ile Trp Trp Phe Val Met Asn Trp
145                 150                 155                 160
Val Pro Cys Gly His Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Asn Ser Phe Ile
                165                 170                 175
His Val Leu Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ser Ala Val Pro Ala Leu
            180                 185                 190
Arg Pro Tyr Leu Trp Trp Lys Lys Tyr Ile Thr Gln Val Gln Leu Ile
        195                 200                 205
Gln Phe Phe Leu Thr Met Ser Gln Thr Ile Cys Ala Val Ile Trp Pro
    210                 215                 220
Cys Asp Phe Pro Arg Gly Trp Leu Tyr Phe Gln Ile Phe Tyr Val Ile
225                 230                 235                 240
Thr Leu Ile Ala Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Ile Gln Thr Tyr Lys Lys
                245                 250                 255
His Leu Val Ser Gln Lys Lys Glu Tyr His Gln Asn Gly Ser Val Ala
            260                 265                 270
Ser Leu Asn Gly His Val Asn Gly Val Thr Pro Thr Glu Thr Ile Thr
        275                 280                 285
His Arg Lys Val Arg Gly Asp
    290                 295
<210>57
<211>6645
<212>DNA
<213>虹鳟
<220>
<221>CDS
<222>(513)..(1304)
<223>Δ5延伸酶
<400>57
acggattaga agccgccgag cgggtgacag ccctccgaag gaagactctc ctccgtgcgt   60
cctcgtcctc accggtcgcg ttcctgaaac gcagatgtgc ctcgcgccgc actgctccga  120
acaataaaga ttctacaata ctagctttta tggttatgaa gaggaaaaat tggcagtaac  180
ctggccccac aaaccttcaa atgaacgaat caaattaaca accataggat gataatgcga  240
ttagtttttt agccttattt ctggggtaat taatcagcga agcgatgatt tttgatctat  300
taacagatat ataaatgcaa aaactgcatt aaccacttta actaatactt tcaacatttt  360
cggtttgtat tacttcttat tcaaatgtaa taaaagtatc aacaaaaaat tgttaatata  420
cctctatact ttaacgtcaa ggagaaaaaa ccccggatcg gactactagc agctgtaata  480
cgactcacta tagggaatat taagcttaca ta atg gct tca aca tgg caa agc    533
                                    Met Ala Ser Thr Trp Gln Ser
                                    1               5
gtt cag tcc atg cgc cag tgg att tta gag aat gga gat aaa agg aca    581
Val Gln Ser Met Arg Gln Trp Ile Leu Glu Asn Gly Asp Lys Arg Thr
        10                  15                  20
gac cca tgg cta ctg gtc tac tcc cct atg cca gtg gcc att ata ttc    629
Asp Pro Trp Leu Leu Val Tyr Ser Pro Met Pro Val Ala Ile Ile Phe
    25                  30                  35
ctc ctc tat ctt ggt gtg gtc tgg gct ggg ccc aag ctg atg aaa cgc    677
Leu Leu Tyr Leu Gly Val Val Trp Ala Gly Pro Lys Leu Met Lys Arg
40                  45                  50                  55
agg gaa cca gtt gat ctc aag gct gta ctc att gtc tac aac ttc gcc    725
Arg Glu Pro Val Asp Leu Lys Ala Val Leu Ile Val Tyr Asn Phe Ala
                60                  65                  70
atg gtc tgc ctg tct gtc tac atg ttc cat gag ttc ttg gtc acg tcc    773
Met Val Cys Leu Ser Val Tyr Met Phe His Glu Phe Leu Val Thr Ser
            75                  80                  85
ttg ctg tct aac tac agt tac ctg tgt caa cct gtg gat tac agc act     821
Leu Leu Ser Asn Tyr Ser Tyr Leu Cys Gln Pro Val Asp Tyr Ser Thr
        90                  95                  100
agt cca ctg gcg atg agg atg gcc aaa gta tgc tgg tgg ttt ttc ttc     869
Ser Pro Leu Ala Met Arg Met Ala Lys Val Cys Trp Trp Phe Phe Phe
    105                 110                 115
tcc aag gtc ata gaa ttg gct gac acg gtg ttc ttc atc ctg agg aag     917
Ser Lys Val Ile Glu Leu Ala Asp Thr Val Phe Phe Ile Leu Arg Lys
120                 125                 130                 135
aag aac agt cag ctg act ttc ctg cat gtc tat cac cat ggc acc atg     965
Lys Asn Ser Gln Leu Thr Phe Leu His Val Tyr His His Gly Thr Met
                140                 145                 150
atc ttc aac tgg tgg gca ggg gtc aag tat ctg gct gga ggc caa tcg    1013
Ile Phe Asn Trp Trp Ala Gly Val Lys Tyr Leu Ala Gly Gly Gln Ser
            155                 160                 165
ttc ttc atc ggc ctg ctc aat acc ttt gtg cac atc gtg atg tac tct    1061
Phe Phe Ile Gly Leu Leu Asn Thr Phe Val His Ile Val Met Tyr Ser
        170                 175                 180
tac tac gga ctg gct gcc ctg ggg cct cac acg cag aag tac tta tgg    1109
Tyr Tyr Gly Leu Ala Ala Leu Gly Pro His Thr Gln Lys Tyr Leu Trp
    185                 190                 195
tgg aag cgc tat ctg acc tca ctg cag ctg ctc cag ttt gtc ctg ttg    1157
Trp Lys Arg Tyr Leu Thr Ser Leu Gln Leu Leu Gln Phe Val Leu Leu
200                 205                 210                 215
acc act cac act ggc tac aac ctc ttc act gag tgt gac ttc ccg gac    1205
Thr Thr His Thr Gly Tyr Asn Leu Phe Thr Glu Cys Asp Phe Pro Asp
                220                 225                 230
tcc atg aac gct gtg gtg ttt gcc tac tgt gtc agt ctc att gct ctc    1253
Ser Met Asn Ala Val Val Phe Ala Tyr Cys Val Ser Leu Ile Ala Leu
            235                 240                 245
ttc agc aac ttc tac tat cag agc tac ctc aac agg aag agc aag aag    1301
Phe Ser Asn Phe Tyr Tyr Gln Ser Tyr Leu Asn Arg Lys Ser Lys Lys
        250                 255                 260
aca taaggatcca ctagtaacgg ccgccagtgt gctggaattc tgcagatatc           1354
Thr
catcacactg gcggccgctc gagcatgcat ctagagggcc gcatcatgta attagttatg    1414
tcacgcttac attcacgccc tccccccaca tccgctctaa ccgaaaagga aggagttaga    1474
caacctgaag tctaggtccc tatttatttt tttatagtta tgttagtatt aagaacgtta    1534
tttatatttc aaatttttct tttttttctg tacagacgcg tgtacgcatg taacattata    1594
ctgaaaacct tgcttgagaa ggttttggga cgctcgaagg ctttaatttg cggccctgca    1654
ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc    1714
ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc    1774
aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc    1834
aaaaggccag caaaagccca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag    1894
gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc    1954
gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt    2014
tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct    2074
ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg    2134
ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct    2194
tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat    2254
tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg    2314
ctacactaga aggacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa    2374
aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt    2434
ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc    2494
tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt    2554
atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta    2614
aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat    2674
ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac    2734
tacgatacgg gagcgcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg    2794
ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag    2854
tggtcctgca actttatccg cctccattca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt    2914
aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttggc attgctacag gcatcgtggt    2974
gtcactctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt    3034
tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt    3094
cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct    3154
tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt    3214
ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatag    3274
tgtatcacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa    3334
actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa    3394
ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca    3454
aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct    3514
ttttcaatgg gtaataactg atataattaa attgaagctc taatttgtga gtttagtata    3574
catgcattta cttataatac agttttttag ttttgctggc cgcatcttct caaatatgct    3634
tcccagcctg cttttctgta acgttcaccc tctaccttag catcccttcc ctttgcaaat    3694
agtcctcttc caacaataat aatgtcagat cctgtagaga ccacatcatc cacggttcta    3754
tactgttgac ccaatgcgtc tcccttgtca tctaaaccca caccgggtgt cataatcaac    3814
caatcgtaac cttcatctct tccacccatg tctctttgag caataaagcc gataacaaaa    3874
tctttgtcgc tcttcgcaat gtcaacagta cccttagtat attctccagt agatagggag    3934
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gccgcctgct tcaaaccgct aacaatacct gggcccacca caccgtgtgc attcgtaatg    4054
tctgcccatt ctgctattct gtatacaccc gcagagtact gcaatttgac tgtattacca    4114
atgtcagcaa attttctgtc ttcgaagagt aaaaaattgt acttggcgga taatgccttt    4174
agcggcttaa ctgtgccctc catggaaaaa tcagtcaaga tatccacatg tgtttttagt    4234
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cacttccgct caggtccttg tcctttaacg aggccttacc actcttttgt tactctattg    4774
atccagctca gcaaaggcag tgtgatctaa gattctatct tcgcgatgta gtaaaactag    4834
ctagaccgag aaagagacta gaaatgcaaa aggcacttct acaatggctg ccatcattat    4894
tatccgatgt gacgctgcag cttctcaatg atattcgaat acgctttgag gagatacagc    4954
ctaatatccg acaaactgtt ttacagattt acgatcgtac ttgttaccca tcattgaatt    5014
ttgaacatcc gaacctggga gttttccctg aaacagatag tatatttgaa cctgtataat    5074
aatatatagt ctagcgcttt acggaagaca atgtatgtat ttcggttcct ggagaaacta    5134
ttgcatctat tgcataggta atcttgcacg tcgcatcccc ggttcatttt ctgcgtttcc    5194
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tacttttttt ctcctttgtg cgctctataa tgcagtctct tgataacttt ttgcactgta    5614
ggtccgttaa ggttagaaga aggctacttt ggtgtctatt ttctcttcca taaaaaaagc    5674
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tattcgcaat gggaagctcc accccggttg ataatcagaa aagccccaaa aacaggaaga    6154
ttgtataagc aaatatttaa attgtaaacg ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt    6214
tttgttaaat cagctcattt tttaacgaat agcccgaaat cggcaaaatc ccttataaat    6274
caaaagaata gaccgagata gggttgagtg ttgttccagt ttccaacaag agtccactat    6334
taaagaacgt ggactccaac gtcaaagggc gaaaaagggt ctatcagggc gatggcccac    6394
tacgtgaacc atcaccctaa tcaagttttt tggggtcgag gtgccgtaaa gcagtaaatc    6454
ggaagggtaa acggatgccc ccatttagag cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga    6514
gaaaggaagg gaagaaagcg aaaggagcgg gggctagggc ggtgggaagt gtaggggtca    6574
cgctgggcgt aaccaccaca cccgccgcgc ttaatggggc gctacagggc gcgtggggat    6634
gatccactag t                                                         6645
<210>58
<211>264
<212>PRT
<213>虹鳟
<400>58
Met Ala Ser Thr Trp Gln Ser Val Gln Ser Met Arg Gln Trp Ile Leu
1               5                   10                  15
Glu Asn Gly Asp Lys Arg Thr Asp Pro Trp Leu Leu Val Tyr Ser Pro
            20                  25                  30
Met Pro Val Ala Ile Ile Phe Leu Leu Tyr Leu Gly Val Val Trp Ala
        35                  40                  45
Gly Pro Lys Leu Met Lys Arg Arg Glu Pro Val Asp Leu Lys Ala Val
    50                  55                  60
Leu Ile Val Tyr Asn Phe Ala Met Val Cys Leu Ser Val Tyr Met Phe
65                  70                  75                  80
His Glu Phe Leu Val Thr Ser Leu Leu Ser Asn Tyr Ser Tyr Leu Cys
                85                  90                  95
Gln Pro Val Asp Tyr Ser Thr Ser Pro Leu Ala Met Arg Met Ala Lys
            100                 105                 110
Val Cys Trp Trp Phe Phe Phe Ser Lys Val Ile Glu Leu Ala Asp Thr
        115                 120                 125
Val Phe Phe Ile Leu Arg Lys Lys Asn Ser Gln Leu Thr Phe Leu His
    130                 135                 140
Val Tyr His His Gly Thr Met Ile Phe Asn Trp Trp Ala Gly Val Lys
145                 150                 155                 160
Tyr Leu Ala Gly Gly Gln Ser Phe Phe Ile Gly Leu Leu Asn Thr Phe
                165                 170                 175
Val His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ala Ala Leu Gly Pro
            180                 185                 190
His Thr Gln Lys Tyr Leu Trp Trp Lys Arg Tyr Leu Thr Ser Leu Gln
        195                 200                 205
Leu Leu Gln Phe Val Leu Leu Thr Thr His Thr Gly Tyr Asn Leu Phe
    210                 215                 220
Thr Glu Cys Asp Phe Pro Asp Ser Met Asn Ala Val Val Phe Ala Tyr
225                 230                 235                 240
Cys Val Ser Leu Ile Ala Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Tyr Gln Ser Tyr
                245                 250                 255
Leu Asn Arg Lys Ser Lys Lys Thr
            260
<210>59
<211>1077
<212>DNA
<213>假矮海链藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1077)
<223>Δ5延伸酶
<400>59
atg tgc tca tca ccg ccg tca caa tcc aaa aca aca tcc ctc cta gca     48
Met Cys Ser Ser Pro Pro Ser Gln Ser Lys Thr Thr Ser Leu Leu Ala
1               5                   10                  15
cgg tac acc acc gcc gcc ctc ctc ctc ctc acc ctc aca aca tgg tgc     96
Arg Tyr Thr Thr Ala Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Thr Thr Trp Cys
            20                  25                  30
cac ttc gcc ttc cca gcc gcc acc gcc aca ccc ggc ctc acc gcc gaa    144
His Phe Ala Phe Pro Ala Ala Thr Ala Thr Pro Gly Leu Thr Ala Glu
        35                  40                  45
atg cac tcc tac aaa gtc cca ctc ggt ctc acc gta ttc tac ctg ctg    192
Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu
    50                  55                  60
agt cta ccg tca cta aag tac gtt acg gac aac tac ctt gcc aaa aag    240
Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys
65                  70                  75                  80
tat gat atg aag tca ctc cta acg gaa tca atg gtg ttg tac aat gtg    288
Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val
                85                  90                  95
gcg caa gtg ctg ctc aat ggg tgg acg gtg tat gcg att gtg gat gcg    336
Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala
            100                 105                 110
gtg atg aat aga gac cat ccg ttt att gga agt aga agt ttg gtt ggg    384
Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly
        115                 120                 125
gcg gcg ttg cat agt ggg agc tcg tat gcg gtg tgg gtt cat tat tgt    432
Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys
    130                 135                 140
gat aag tat ttg gag ttc ttt gat acg tat ttt atg gtg ttg agg ggg    480
Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly
145                 150                 155                 160
aaa atg gac cag gtc tcc ttc ctc cac atc tac cac cac acg acc ata    528
Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile
                165                 170                 175
gcg tgg gca tgg tgg atc gcc ctc cgc  ttc tcc ccc ggt gga gac att    576
Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile
                180                 185                 190
tac ttc ggg gca ctc ctc aac tcc atc atc cac gtc ctc atg tat tcc    624
Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser
        195                 200                 205
tac tac gcc ctt gcc cta ctc aag gtc agt tgt cca tgg aaa cga tac    672
Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr
    210                 215                 220
ctg act caa gct caa tta ttg caa ttc aca agt gtg gtg gtt tat acg    720
Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr
225                 230                 235                 240
ggg tgt acg ggt tat act cat tac tat cat acg aag cat gga gcg gat    768
Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp
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gag aca cag cct agt tta gga acg tat tat ttc tgt tgt gga gtg cag    816
Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln
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gtg ttt gag atg gtt agt ttg ttt gta ctc ttt tcc atc ttt tat aaa    864
Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys
        275                 280                 285
cga tcc tat tcg aag aag aac aag tca gga gga aag gat agc aag aag    912
Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys
    290                 295                 300
aat gat gat ggg aat aat gag gat caa tgt cac aag gct atg aag gat    960
Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp
305                 310                 315                 320
ata tcg gag ggt gcg aag gag gtt gtg ggg cat gca gcg aag gat gct   1008
Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala
                325                 330                 335
gga aag ttg gtg gct acg gcg agt aag gct gta aag agg aag gga act   1056
Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr
            340                 345                 350
cgt gtt act ggt gcc atg tag                                       1077
Arg Val Thr Gly Ala Met
        355
<210>60
<211>358
<212>PRT
<213>假矮海链藻
<400>60
Met Cys Ser Ser Pro Pro Ser Gln Ser Lys Thr Thr Ser Leu Leu Ala
1               5                   10                  15
Arg Tyr Thr Thr Ala Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Thr Thr Trp Cys
            20                  25                  30
His Phe Ala Phe Pro Ala Ala Thr Ala Thr Pro Gly Leu Thr Ala Glu
        35                  40                  45
Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu
    50                  55                  60
Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys
65                  70                  75                  80
Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val
                85                  90                  95
Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala
            100                 105                 110
Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly
        115                 120                 125
Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys
    130                 135                 140
Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly
145                 150                 155                 160
Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile
                165                 170                 175
Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile
            180                 185                 190
Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser
        195                 200                 205
Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr
    210                 215                 220
Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr
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Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp
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Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln
            260                 265                 270
Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys
        275                 280                 285
Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys
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Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp
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Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala
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Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr
            340                 345                 350
Arg Val Thr Gly Ala Met
        355
<210>61
<211>933
<212>DNA
<213>假矮海链藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(933)
<223>Δ5延伸酶
<400>61
atg cac tcc tac aaa gtc cca ctc ggt ctc acc gta ttc tac ctg ctg     48
Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu
1               5                   10                  15
agt cta ccg tca cta aag tac gtt acg gac aac tac ctt gcc aaa aag     96
Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys
            20                  25                  30
tat gat atg aag tca ctc cta acg gaa tca atg gtg ttg tac aat gtg    144
Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val
        35                  40                  45
gcg caa gtg ctg ctc aat ggg tgg acg gtg tat gcg att gtg gat gcg    192
Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala
    50                  55                  60
gtg atg aat aga gac cat ccg ttt att gga agt aga agt ttg gtt ggg    240
Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly
65                  70                  75                  80
gcg gcg ttg cat agt ggg agc tcg tat gcg gtg tgg gtt cat tat tgt    288
Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Set Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys
                85                  90                  95
gat aag tat ttg gag ttc ttt gat acg tat ttt atg gtg ttg agg ggg    336
Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly
            100                 105                 110
aaa atg gac cag gtc tcc ttc ctc cac atc tac cac cac acg acc ata    384
Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile
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gcg tgg gca tgg tgg atc gcc ctc cgc ttc tcc ccc ggt gga gac att    432
Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile
    130                 135                 140
tac ttc ggg gca ctc ctc aac tcc atc atc cac gtc ctc atg tat tcc    480
Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser
145                 150                 155                 160
tac tac gcc ctt gcc cta ctc aag gtc agt tgt cca tgg aaa cga tac    528
Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr
                165                 170                 175
ctg act caa gct caa tta ttg caa ttc aca agt gtg gtg gtt tat acg    576
Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr
            180                 185                 190
ggg tgt acg ggt tat act cat tac tat cat acg aag cat gga gcg gat    624
Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp
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Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys
225                 230                 235                 240
cga tcc tat tcg aag aag aac aag tca gga gga aag gat agc aag aag    768
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aat gat gat ggg aat aat gag gat caa tgt cac aag gct atg aag gat    816
Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp
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Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala
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gga aag ttg gtg gct acg gcg agt aag gct gta aag agg aag gga act    912
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cgt gtt act ggt gcc atg tag                                        933
Arg Val Thr Gly Ala Met
305                 310
<210>62
<211>310
<212>PRT
<213>假矮海链藻
<400>62
Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu
1               5                   10                  15
Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Vat Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys
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        35                  40                  45
Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala
    50                  55                  60
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Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys
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Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly
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Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr
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225                 230                 235                 240
Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys
                245                 250                 255
Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp
            260                 265                 270
Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala
        275                 280                 285
Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr
    290                 295                 300
Arg Val Thr Gly Ala Met
305                 310
<210>63
<211>933
<212>DNA
<213>假矮海链藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(933)
<223>Δ5延伸酶
<400>63
atg cac tcc tac aaa gtc cca ctc ggt ctc acc gta ttc tac ctg ctg     48
Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu
1               5                   10                  15
agt cta ccg tca cta aag tac gtt acg gac aac tac ctt gcc aaa aag     96
Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys
            20                  25                  30
tat gat atg aag tca ctc cta acg gaa tca atg gtg ttg tac aat gtg    144
Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val
        35                  40                  45
gcg caa gtg ctg ctc aat ggg tgg acg gtg tat gcg att gtg gat gcg    192
Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala
    50                  55                  60
gtg atg aat aga gac cat ccg ttt att gga agt aga agt ttg gtt ggg    240
Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly
65                  70                  75                  80
gcg gcg ttg cat agt ggg agc tcg tat gcg gtg tgg gtt cat tat tgt    288
Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys
                85                  90                  95
gat aag tat ttg gag ttc ttt gat acg tat ttt atg gtg ttg agg ggg    336
Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly
            100                 105                 110
aaa atg gac cag gtc tcc ttc ctc cac atc tac cac cac acg acc ata    384
Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile
        115                 120                 125
gcg tgg gca tgg tgg atc gcc ctc cgc ttc tcc ccc ggt gga gac att    432
Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile
    130                 135                 140
tac ttc ggg gca ctc ctc aac tcc atc atc cac gtc ctc atg tat tcc    480
Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser
145                 150                 155                 160
tac tac gcc ctt gcc cta ctc aag gtc agt tgt cca tgg aaa cga tac    528
Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr
                165                 170                 175
ctg act caa gct caa tta ttg caa ttc aca agt gtg gtg gtt tat acg    576
Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr
            180                 185                 190
ggg tgt acg ggt tat act cat tac tat cat acg aag cat gga gcg gat    624
Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp
        195                 200                 205
gag aca cag cct agt tta gga acg tat tat ttc tgt tgt gga gtg cag    672
Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln
    210                 215                 220
gtg ttt gag atg gtt agt ttg ttt gta ctc ttt tcc atc ttt tat aaa    720
Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys
225                 230                 235                 240
cga tcc tat tcg aag aag aac aag tca gga gga aag gat agc aag aag    768
Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys
                245                 250                 255
aat gat gat ggg aat aat gag gat caa tgt cac aag gct atg aag gat    816
Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp
            260                 265                 270
ata tcg gag ggt gcg aag gag gtt gtg ggg cat gca gcg aag gat gct    864
Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala
        275                 280                 285
gga aag ttg gtg gct acg gcg agt aag gct gta aag agg aag gga act    912
Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr
    290                 295                 300
cgt gtt act ggt gcc atg tag                                        933
Arg Val Thr Gly Ala Met
305                 310
<210>64
<211>310
<212>PRT
<213>假矮海链藻
<400>64
Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu
1               5                   10                  15
Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys
            20                  25                  30
Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val
        35                  40                  45
Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala
    50                  55                  60
Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly
65                  70                  75                  80
Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys
                85                  90                  95
Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly
            100                 105                 110
Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile
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Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile
    130                 135                 140
Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser
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Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr
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Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr
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Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp
        195                 200                 205
Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln
    210                 215                 220
Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys
225                 230                 235                 240
Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys
                245                 250                 255
Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp
            260                 265                 270
Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala
        275                 280                 285
Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr
    290                 295                 300
Arg Val Thr Gly Ala Met
305                 310
<210>65
<211>825
<212>DNA
<213>鲜黄破囊壶菌(Thraustrochytrium aureum)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(825)
<223>Δ5延伸酶
<400>65
atg acg agc aac atg agc gcg tgg ggc gtc gcc gtc gac cag acg cag     48
Met Thr Ser Asn Met Ser Ala Trp Gly Val Ala Val Asp Gln Thr Gln
1               5                   10                  15
cag gtc gtc gac cag atc atg ggc ggc gcc gag ccg tac aag ctg aca     96
Gln Val Val Asp Gln Ile Met Gly Gly Ala Glu Pro Tyr Lys Leu Thr
            20                  25                  30
gaa ggg cgc atg acg aac gtc gag acg atg ctg gcg atc gag tgc ggc    144
Glu Gly Arg Met Thr Asn Val Glu Thr Met Leu Ala Ile Glu Cys Gly
        35                  40                  45
tac gcc gcc atg ctg ctg ttc ctg acc ccg atc atg aag cag gcc gag    192
Tyr Ala Ala Met Leu Leu Phe Leu Thr Pro Ile Met Lys Gln Ala Glu
    50                  55                  60
aag ccc ttc gag ctc aag tcc ttc aag ctc gcc cac aac ctg ttc ctg    240
Lys Pro Phe Glu Leu Lys Ser Phe Lys Leu Ala His Asn Leu Phe Leu
65                  70                  75                  80
ttc gtc ctg tcc gcc tac atg tgc ctc gag acc gtc cgc cag gcc tac    288
Phe Val Leu Ser Ala Tyr Met Cys Leu Glu Thr Val Arg Gln Ala Tyr
                85                  90                  95
ctt gcg ggc tac tcg gtg ttc ggc aac gac atg gag aag ggc agc gag    336
Leu Ala Gly Tyr Ser Val Phe Gly Asn Asp Met Glu Lys Gly Ser Glu
            100                 105                 110
ccg cac gcg cac ggc atg gcc caa atc gtg tgg atc ttt tac gtg tcc    384
Pro His Ala His Gly Met Ala Gln Ile Val Trp Ile Phe Tyr Val Ser
        115                 120                 125
aag gcg tac gag ttc gtg gac acg ctg atc atg atc ctg tgc aaa aag    432
Lys Ala Tyr Glu Phe Val Asp Thr Leu Ile Met Ile Leu Cys Lys Lys
    130                 135                 140
ttc aac cag gtc tcc gtc ctg cac gtg tac cac cac gcc acc atc ttt    480
Phe Asn Gln Val Ser Val Leu His Val Tyr His His Ala Thr Ile Phe
145                 150                 155                 160
gct atc tgg ttt atg atc gcc aag tac gcc ccg ggc ggc gac gca tac    528
Ala Ile Trp Phe Met Ile Ala Lys Tyr Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr
                165                 170                 175
ttt agc gtc atc ctg aac tcg ttc gtg cac acc gtc atg tac gcg tac    576
Phe Ser Val Ile Leu Asn Ser Phe Val His Thr Val Met Tyr Ala Tyr
            180                 185                 190
tac ttc ttc tcg tcg cag ggc ttc ggg ttc gtc aag ccg atc aag ccg    624
Tyr Phe Phe Ser Ser Gln Gly Phe Gly Phe Val Lys Pro Ile Lys Pro
        195                 200                 205
tac atc acc tcg ctg cag atg acg cag ttc atg gcg atg ctc gtg cag    672
Tyr Ile Thr Ser Leu Gln Met Thr Gln Phe Met Ala Met Leu Val Gln
    210                 215                 220
tcg ctg tac gac tac ctt tac ccg tgc gac tac ccg cag ggg ctc gtc    720
Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Tyr Pro Cys Asp Tyr Pro Gln Gly Leu Val
225                 230                 235                 240
aag ctc ctc ggc gtg tac atg ctc acc ctg ctt gcg ctc ttc ggc aac    768
Lys Leu Leu Gly Val Tyr Met Leu Thr Leu Leu Ala Leu Phe Gly Asn
                245                 250                 255
ttt ttc gtg cag agc tac ctc aag aag tcg aac aag ccc aag gcc aag    816
Phe Phe Val Gln Ser Tyr Leu Lys Lys Ser Asn Lys Pro Lys Ala Lys
            260                 265                 270
tcg gcc taa                                                        825
Ser Ala
<210>66
<211>274
<212>PRT
<213>鲜黄破囊壶菌
<400>66
Met Thr Ser Asn Met Ser Ala Trp Gly Val Ala Val Asp Gln Thr Gln
1               5                   10                  15
Gln Val Val Asp Gln Ile Met Gly Gly Ala Glu Pro Tyr Lys Leu Thr
            20                  25                  30
Glu Gly Arg Met Thr Asn Val Glu Thr Met Leu Ala Ile Glu Cys Gly
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Met Leu Leu Phe Leu Thr Pro Ile Met Lys Gln Ala Glu
    50                  55                  60
Lys Pro Phe Glu Leu Lys Ser Phe Lys Leu Ala His Asn Leu Phe Leu
65                  70                  75                  80
Phe Val Leu Ser Ala Tyr Met Cys Leu Glu Thr Val Arg Gln Ala Tyr
                85                  90                  95
Leu Ala Gly Tyr Ser Val Phe Gly Asn Asp Met Glu Lys Gly Ser Glu
            100                 105                 110
Pro His Ala His Gly Met Ala Gln Ile Val Trp Ile Phe Tyr Val Ser
        115                 120                 125
Lys Ala Tyr Glu Phe Val Asp Thr Leu Ile Met Ile Leu Cys Lys Lys
    130                 135                 140
Phe Asn Gln Val Ser Val Leu His Val Tyr His His Ala Thr Ile Phe
145                 150                 155                 160
Ala Ile Trp Phe Met Ile Ala Lys Tyr Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr
                165                 170                 175
Phe Ser Val Ile Leu Asn Ser Phe Val His Thr Val Met Tyr Ala Tyr
            180                 185                 190
Tyr Phe Phe Ser Ser Gln Gly Phe Gly Phe Val Lys Pro Ile Lys Pro
        195                 200                 205
Tyr Ile Thr Ser Leu Gln Met Thr Gln Phe Met Ala Met Leu Val Gln
    210                 215                 220
Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Tyr Pro Cys Asp Tyr Pro Gln Gly Leu Val
225                 230                 235                 240
Lys Leu Leu Gly Val Tyr Met Leu Thr Leu Leu Ala Leu Phe Gly Asn
                245                 250                 255
Phe Phe Val Gln Ser Tyr Leu Lys Lys Ser Asn Lys Pro Lys Ala Lys
            260                 265                 270
Ser Ala
<210>67
<211>903
<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<22l>CDS
<222>(1)..(903)
<223>Δ5延伸酶
<400>67
atg agc gcc tcc ggt gcg ctg ctg ccc gcg atc gcg ttc gcc gcg tac     48
Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Phe Ala Ala Tyr
1               5                   10                  15
gcg tac gcg acg tac gcc tac gcc ttt gag tgg tcg cac gcg aat ggc     96
Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly
            20                  25                  30
atc gac aac gtc gac gcg cgc gag tgg atc ggt gcg ctg tcg ttg agg    144
Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg
        35                  40                  45
ctc ccg gcg atc gcg acg acg atg tac ctg ttg ttc tgc ctg gtc gga    192
Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly
    50                  55                  60
ccg agg ttg atg gcg aag cgc gag gcg ttc gac ccg aag ggg ttc atg    240
Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met
65                  70                  75                  80
ctg gcg tac aat gcg tat cag acg gcg ttc aac gtc gtc gtg ctc ggg    288
Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly
                85                  90                  95
atg ttc gcg cga gag atc tcg ggg ctg ggg cag ccc gtg tgg ggg tca    336
Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser
            100                 105                 110
acc atg ccg tgg agc gat aga aaa tcg ttt aag atc ctc ctc ggg gtg    384
Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val
        115                 120                 125
tgg ttg cac tac aac aac caa tat ttg gag cta ttg gac act gtg ttc    432
Trp Leu His Tyr Asn Asn Gln Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe
    130                 135                 140
atg gtt gcg cgc aag aag acg aag cag ttg agc ttc ttg cac gtt tat    480
Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr
145                 150                 155                 160
cat cac gcc ctg ttg atc tgg gcg tgg tgg ttg gtg tgt cac ttg atg    528
His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met
                165                 170                 175
gcc acg aac gat tgt atc gat gcc tac ttc ggc gcg gcg tgc aac tcg    576
Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser
            180                 185                 190
ttc att cac atc gtg atg tac tcg tat tat ctc atg tcg gcg ctc ggc    624
Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly
        195                 200                 205
att cga tgc ccg tgg aag cga tac atc acc cag gct caa atg ctc caa    672
Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln
    210                 215                 220
ttc gtc att gtc ttc gcg cac gcc gtg ttc gtg ctg cgt cag aag cac    720
Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His
225                 230                 235                 240
tgc ccg gtc acc ctt cct tgg gcg caa atg ttc gtc atg acg aac atg    768
Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met
                245                 250                 255
ctc gtg ctc ttc ggg aac ttc tac ctc aag gcg tac tcg aac aag tcg    816
Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser
            260                 265                 270
cgc ggc gac ggc gcg agt tcc gtg aaa cca gcc gag acc acg cgc gcg    864
Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala
        275                 280                 285
ccc agc gtg cga cgc acg cga tct cga aaa att gac taa                903
Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp
    290                 295                 300
<210>68
<211>300
<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>68
Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Phe Ala Ala Tyr
1               5                   10                  15
Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly
            20                  25                  30
Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg
        35                  40                  45
Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly
    50                  55                  60
Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met
65                  70                  75                  80
Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly
                85                  90                  95
Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser
            100                 105                 110
Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val
        115                 120                 125
Trp Leu His Tyr Asn Asn Gln Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe
    130                 135                 140
Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr
145                 150                 155                 160
His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met
                165                 170                 175
Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser
            180                 185                 190
Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly
        195                 200                 205
Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln
    210                 215                 220
Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His
225                 230                 235                 240
Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met
                245                 250                 255
Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser
            260                 265                 270
Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala
        275                 280                 285
Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp
    290                 295                 300
<210>69
<211>879
<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(879)
<223>Δ6延伸酶
<400>69
atg agt ggc tta cgt gca ccc agc ttt tta cac aga ttc tgg aca aag     48
Met Ser Gly Leu Arg Ala Pro Asn Phe Leu His Arg Phe Trp Thr Lys
1               5                   10                  15
tgg gac tac gcg att tcc aaa gtc gtc ttc acg tgt gcc gac agt ttt     96
Trp Asp Tyr Ala Ile Ser Lys Val Val Phe Thr Cys Ala Asp Ser Phe
            20                  25                  30
cag tgg gac atc ggg cca gtg agt tcg agt acg gcg cat tta ccc gcc    144
Gln Trp Asp Ile Gly Pro Val Ser Ser Ser Thr Ala His Leu Pro Ala
        35                  40                  45
att gaa tcc cct acc cca ctg gtg act agc ctc ttg ttc tac tta gtc    192
Ile Glu Ser Pro Thr Pro Leu Val Thr Ser Leu Leu Phe Tyr Leu Val
    50                  55                  60
aca gtt ttc ttg tgg tat ggt cgt tta acc agg agt tca gac aag aaa    240
Thr Val Phe Leu Trp Tyr Gly Arg Leu Thr Arg Ser Ser Asp Lys Lys
65                  70                  75                  80
att aga gag cct acg tgg tta aga aga ttc ata ata tgt cat aat gcg    288
Ile Arg Glu Pro Thr Trp Leu Arg Arg Phe Ile Ile Cys His Asn Ala
                85                  90                  95
ttc ttg ata gtc ctc agt ctt tac atg tgc ctt ggt tgt gtg gcc caa    336
Phe Leu Ile Val Leu Ser Leu Tyr Met Cys Leu Gly Cys Val Ala Gln
            100                 105                 110
gcg tat cag aat gga tat act tta tgg ggt aat gaa ttc aag gcc acg    384
Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Trp Gly Asn Glu Phe Lys Ala Thr
        115                 120                 125
gaa act cag ctt gct ctc tac att tac att ttt tac gta agt aaa ata    432
Glu Thr Gln Leu Ala Leu Tyr Ile Tyr Ile Phe Tyr Val Ser Lys Ile
    130                 135                 140
tac gag ttt gta gat act tac att atg ctt ctc aag aat aac ttg cgg    480
Tyr Glu Phe Val Asp Thr Tyr Ile Met Leu Leu Lys Asn Asn Leu Arg
145                 150                 155                 160
caa gta agt ttc cta cac att tat cac cac agc acg att tcc ttt att    528
Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Ser Thr Ile Ser Phe Ile
                165                 170                 175
tgg tgg atc att gct cgg agg gct ccg ggt ggt gat gct tac ttc agc    576
Trp Trp Ile Ile Ala Arg Arg Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr Phe Ser
            180                 185                 190
gcg gcc ttg aac tca tgg gta cac gtg tgc atg tac acc tat tat cta    624
Ala Ala Leu Asn Ser Trp Val His Val Cys Met Tyr Thr Tyr Tyr Leu
        195                 200                 205
tta tca acc ctt att gga aaa gaa gat cct aag cgt tcc aac tac ctt    672
Leu Ser Thr Leu Ile Gly Lys Glu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Tyr Leu
    210                 215                 220
tgg tgg ggt cgc cac cta acg caa atg cag atg ctt cag ttt ttc ttc    720
Trp Trp Gly Arg His Leu Thr Gln Met Gln Met Leu Gln Phe Phe Phe
225                 230                 235                 240
aac gta ctt caa gcg ttg tac tgc gct tcg ttc tct acg tat ccc aag    768
Asn Val Leu Gln Ala Leu Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Pro Lys
                245                 250                 255
ttt ttg tcc aaa att ctg ctc gtc tat atg atg agc ctt ctc ggc ttg    816
Phe Leu Ser Lys Ile Leu Leu Val Tyr Met Met Ser Leu Leu Gly Leu
            260                 265                 270
ttt ggg cat ttc tac tat tcc aag cac ata gca gca gct aag ctc cag    864
Phe Gly His Phe Tyr Tyr Ser Lys His Ile Ala Ala Ala Lys Leu Gln
        275                 280                 285
aaa aaa cag cag tga                                                879
Lys Lys Gln Gln
    290
<210>70
<211>292
<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>70
Met Ser Gly Leu Arg Ala Pro Asn Phe Leu His Arg Phe Trp Thr Lys
1               5                   10                  15
Trp Asp Tyr Ala Ile Ser Lys Val Val Phe Thr Cys Ala Asp Ser Phe
            20                  25                  30
Gln Trp Asp Ile Gly Pro Val Ser Ser Ser Thr Ala His Leu Pro Ala
        35                  40                  45
Ile Glu Ser Pro Thr Pro Leu Val Thr Ser Leu Leu Phe Tyr Leu Val
    50                  55                  60
Thr Val Phe Leu Trp Tyr Gly Arg Leu Thr Arg Ser Ser Asp Lys Lys
65                  70                  75                  80
Ile Arg Glu Pro Thr Trp Leu Arg Arg Phe Ile Ile Cys His Asn Ala
                85                  90                  95
Phe Leu Ile Val Leu Ser Leu Tyr Met Cys Leu Gly Cys Val Ala Gln
            100                 105                 110
Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Trp Gly Asn Glu Phe Lys Ala Thr
        115                 120                 125
Glu Thr Gln Leu Ala Leu Tyr Ile Tyr Ile Phe Tyr Val Ser Lys Ile
    130                 135                 140
Tyr Glu Phe Val Asp Thr Tyr Ile Met Leu Leu Lys Asn Asn Leu Arg
145                 150                 155                 160
Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Ser Thr Ile Ser Phe Ile
                165                 170                 175
Trp Trp Ile Ile Ala Arg Arg Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr Phe Ser
            180                 185                 190
Ala Ala Leu Asn Ser Trp Val His Val Cys Met Tyr Thr Tyr Tyr Leu
        195                 200                 205
Leu Ser Thr Leu Ile Gly Lys Glu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Tyr Leu
    210                 215                 220
Trp Trp Gly Arg His Leu Thr Gln Met Gln Met Leu Gln Phe Phe Phe
225                 230                 235                 240
Asn Val Leu Gln Ala Leu Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Pro Lys
                245                 250                 255
Phe Leu Ser Lys Ile Leu Leu Val Tyr Met Met Ser Leu Leu Gly Leu
            260                 265                 270
Phe Gly His Phe Tyr Tyr Ser Lys His Ile Ala Ala Ala Lys Leu Gln
        275                 280                 285
Lys Lys Gln Gln
    290
<210>71
<211>1362
<212>DNA
<213>有粉报春(有粉报春)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1362)
<223>Δ6去饱和酶
<400>71
atg gct aac aaa tct cca cca aac ccc aaa aca ggt tac ata acc agc     48
Met Ala Asn Lys Ser Pro Pro Asn Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Thr Ser
1               5                   10                  15
tca gac ctg aaa tcc cac aac aag gca ggt gac cta tgg ata tca atc     96
Ser Asp Leu Lys Ser His Asn Lys Ala Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile
            20                  25                  30
cac ggc caa gtc tac gac gtg tcc tct tgg gcc gcc ctt cat ccg ggg    144
His Gly Gln Val Tyr Asp Val Ser Ser Trp Ala Ala Leu His Pro Gly
        35                  40                  45
ggc act gcc cct ctc atg gcc ctt gca gga cac gac gtg acc gat gct    192
Gly Thr Ala Pro Leu Met Ala Leu Ala Gly His Asp Val Thr Asp Ala
    50                  55                  60
ttc ctc gcg tac cat ccc cct tcc act gcc cgt ctc ctc cct cct ctc    240
Phe Leu Ala Tyr His Pro Pro Ser Thr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Leu
65                  70                  75                  80
tct acc aac ctc ctt ctt caa aac cac tcc gtc tcc ccc acc tcc tca    288
Ser Thr Asn Leu Leu Leu Gln Asn His Ser Val Ser Pro Thr Ser Ser
                85                  90                  95
gac tac cgc aaa ctc ctc gac aac ttc cat aaa cat ggc ctt ttc cgc    336
Asp Tyr Arg Lys Leu Leu Asp Asn Phe His Lys His Gly Leu Phe Arg
            100                 105                 110
gcc agg ggc cac act gct tac gcc acc ttc gtc ttc atg ata gcg atg    384
Ala Arg Gly His Thr Ala Tyr Ala Thr Phe Val Phe Met Ile Ala Met
        115                 120                 125
ttt cta atg agc gtg act gga gtc ctt tgc agc gac agt gcg tgg gtc    432
Phe Leu Met Ser Val Thr Gly Val Leu Cys Ser Asp Ser Ala Trp Val
    130                 135                 140
cat ttg gct agc ggc gga gca atg ggg ttc gcc tgg atc caa tgc gga    480
His Leu Ala Ser Gly Gly Ala Met Gly Phe Ala Trp Ile Gln Cys Gly
145                 150                 155                 160
tgg ata ggt cac gac tct ggg cat tac cgg att atg tct gac agg aaa    528
Trp Ile Gly His Asp Ser Gly His Tyr Arg Ile Met Ser Asp Arg Lys
                165                 170                 175
tgg aac tgg ttc gcg caa atc cta agc aca aac tgc ctc cag ggg att    576
Trp Asn Trp Phe Ala Gln Ile Leu Ser Thr Asn Cys Leu Gln Gly Ile
            180                 185                 190
agt atc ggg tgg tgg aag tgg aac cat aat gcg cac cac atc gct tgc    624
Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys
        195                 200                 205
aat agc ctg gat tac gac ccc gac ctc cag tat atc cct ttg ctc gtc    672
Asn Ser Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Leu Leu Val
    210                 215                 220
gtc tcc ccc aag ttc ttc aac tcc ctt act tct cgt ttc tac gac aag    720
Val Ser Pro Lys Phe Phe Asn Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Lys
225                 230                 235                 240
aag ctg aac ttc gac ggc gtg tcg agg ttt ctg gtt tgc tac cag cac    768
Lys Leu Asn Phe Asp Gly Val Ser Arg Phe Leu Val Cys Tyr Gln His
                245                 250                 255
tgg acg ttt tat ccg gtc atg tgt gtc gct agg ctg aac atg ctc gcg     816
Trp Thr Phe Tyr Pro Val Met Cys Val Ala Arg Leu Asn Met Leu Ala
            260                 265                 270
cag tca ttt ata acg ctt ttc tcg agt agg gag gtg tgc cat agg gcg     864
Gln Ser Phe Ile Thr Leu Phe Ser Ser Arg Glu Val Cys His Arg Ala
        275                 280                 285
caa gag gtt ttc gga ctt gcc gtg ttt tgg gtt tgg ttt ccg ctt tta     912
Gln Glu Val Phe Gly Leu Ala Val Phe Trp Val Trp Phe Pro Leu Leu
    290                 295                 300
ctt tct tgt tta cct aat tgg ggc gag agg att atg ttt ttg ctt gcg     960
Leu Ser Cys Leu Pro Asn Trp Gly Glu Arg Ile Met Phe Leu Leu Ala
305                 310                 315                 320
agc tat tcc gtt acg ggg ata caa cac gtg cag ttc agc ttg aac cat    1008
Ser Tyr Ser Val Thr Gly Ile Gln His Val Gln Phe Ser Leu Asn His
                325                 330                 335
ttt tct tcg gac gtc tat gtg ggc ccg cca gta ggt aat gac tgg ttc    1056
Phe Ser Ser Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Val Gly Asn Asp Trp Phe
            340                 345                 350
aag aaa cag act gcc ggg aca ctt aac ata tcg tgc ccg gcg tgg atg    1104
Lys Lys Gln Thr Ala Gly Thr Leu Asn Ile Ser Cys Pro Ala Trp Met
        355                 360                 365
gat tgg ttc cat ggc ggg tta cag ttt cag gtc gag cac cac ttg ttt    1152
Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln Val Glu His His Leu Phe
    370                 375                 380
ccg cgg atg cct agg ggt cag ttt agg aag att tct cct ttt gtg agg    1200
Pro Arg Met Pro Arg Gly Gln Phe Arg Lys Ile Ser Pro Phe Val Arg
385                 390                 395                 400
gat ttg tgt aag aaa cac aac ttg cct tac aat atc gcg tct ttt act    1248
Asp Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr Asn Ile Ala Ser Phe Thr
                405                 410                 415
aaa gcg aat gtg ttt acg ctt aag acg ctg aga aat acg gcc att gag    1296
Lys Ala Asn Val Phe Thr Leu Lys Thr Leu Arg Asn Thr Ala Ile Glu
            420                 425                 430
gct cgg gac ctc tct aat ccg ctc cca aag aat atg gtg tgg gaa gct    1344
Ala Arg Asp Leu Ser Asn Pro Leu Pro Lys Asn Met Val Trp Glu Ala
        435                 440                 445
ctt aaa act ctc ggg tga                                            1362
Leu Lys Thr Leu Gly
    450
<210>72
<211>453
<212>PRT
<213>有粉报春
<400>72
Met Ala Asn Lys Ser Pro Pro Asn Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Thr Ser
1               5                   10                  15
Ser Asp Leu Lys Ser His Asn Lys Ala Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile
            20                  25                  30
His Gly Gln Val Tyr Asp Val Ser Ser Trp Ala Ala Leu His Pro Gly
        35                  40                  45
Gly Thr Ala Pro Leu Met Ala Leu Ala Gly His Asp Val Thr Asp Ala
    50                  55                  60
Phe Leu Ala Tyr His Pro Pro Ser Thr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Leu
65                  70                  75                  80
Ser Thr Asn Leu Leu Leu Gln Asn His Ser Val Ser Pro Thr Ser Ser
                85                  90                  95
Asp Tyr Arg Lys Leu Leu Asp Asn Phe His Lys His Gly Leu Phe Arg
            100                 105                 110
Ala Arg Gly His Thr Ala Tyr Ala Thr Phe Val Phe Met Ile Ala Met
        115                 120                 125
Phe Leu Met Ser Val Thr Gly Val Leu Cys Ser Asp Ser Ala Trp Val
    130                 135                 140
His Leu Ala Ser Gly Gly Ala Met Gly Phe Ala Trp Ile Gln Cys Gly
145                 150                 155                 160
Trp Ile Gly His Asp Ser Gly His Tyr Arg Ile Met Ser Asp Arg Lys
                165                 170                 175
Trp Asn Trp Phe Ala Gln Ile Leu Ser Thr Asn Cys Leu Gln Gly Ile
            180                 185                 190
Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys
        195                 200                 205
Asn Ser Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Leu Leu Val
    210                 215                 220
Val Ser Pro Lys Phe Phe Asn Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Lys
225                 230                 235                 240
Lys Leu Asn Phe Asp Gly Val Ser Arg Phe Leu Val Cys Tyr Gln His
                245                 250                 255
Trp Thr Phe Tyr Pro Val Met Cys Val Ala Arg Leu Asn Met Leu Ala
            260                 265                 270
Gln Ser Phe Ile Thr Leu Phe Ser Ser Arg Glu Val Cys His Arg Ala
        275                 280                 285
Gln Glu Val Phe Gly Leu Ala Val Phe Trp Val Trp Phe Pro Leu Leu
    290                 295                 300
Leu Ser Cys Leu Pro Asn Trp Gly Glu Arg Ile Met Phe Leu Leu Ala
305                 310                 315                 320
Ser Tyr Ser Val Thr Gly Ile Gln His Val Gln Phe Ser Leu Asn His
                325                 330                 335
Phe Ser Ser Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Val Gly Asn Asp Trp Phe
            340                 345                 350
Lys Lys Gln Thr Ala Gly Thr Leu Asn Ile Ser Cys Pro Ala Trp Met
        355                 360                 365
Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln Val Glu His His Leu Phe
    370                 375                 380
Pro Arg Met Pro Arg Gly Gln Phe Arg Lys Ile Ser Pro Phe Val Arg
385                 390                 395                 400
Asp Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr Asn Ile Ala Ser Phe Thr
                405                 410                 415
Lys Ala Asn Val Phe Thr Leu Lys Thr Leu Arg Asn Thr Ala Ile Glu
            420                 425                 430
Ala Arg Asp Leu Ser Asn Pro Leu Pro Lys Asn Met Val Trp Glu Ala
        435                 440                 445
Leu Lys Thr Leu Gly
    450
<210>73
<21l>1362
<212>DNA
<213>高穗花报春(Primula vialii)
<220>
<22l>CDS
<222>(1)..(1362)
<223>Δ6去饱和酶
<400>73
atg gct aac aaa tct cca cca aac ccc aaa aca ggt tac att acc agc     48
Met Ala Asn Lys Ser Pro Pro Asn Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Thr Ser
1               5                   10                  15
tca gac ctg aaa ggg cac aac aaa gca gga gac cta tgg ata tca atc     96
Ser Asp Leu Lys Gly His Asn Lys Ala Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile
            20                  25                  30
cac ggg gag gta tac gac gtg tcc tcg tgg gcc ggc ctt cac ccg ggg    144
His Gly Glu Val Tyr Asp Val Ser Ser Trp Ala Gly Leu His Pro Gly
        35                  40                  45
ggc agt gcc ccc ctc atg gcc ctc gca gga cac gac gta acc gac gct    192
Gly Ser Ala Pro Leu Met Ala Leu Ala Gly His Asp Val Thr Asp Ala
    50                  55                  60
ttt cta gcg tat cat cct cct tct acc gcc cgc ctc ctc cct ccc ctc    240
Phe Leu Ala Tyr His Pro Pro Ser Thr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Leu
65                  70                  75                  80
tcc acc aac ctc ctc ctt caa aac cac tcc gtc tcc ccc acc tcc tct    288
Ser Thr Asn Leu Leu Leu Gln Asn His Ser Val Ser Pro Thr Ser Ser
                85                  90                  95
gac tac cgc aaa ctc ctc cac aac ttc cat aaa att ggt atg ttc cgc    336
Asp Tyr Arg Lys Leu Leu His Asn Phe His Lys Ile Gly Met Phe Arg
            100                 105                 110
gcc agg ggc cac act gct tac gcc acc ttc gtc atc atg ata gtg atg    384
Ala Arg Gly His Thr Ala Tyr Ala Thr Phe Val Ile Met Ile Val Met
        115                 120                 125
ttt cta acg agc gtg acc gga gtc ctt tgc agc gac agt gcg tgg gtc    432
Phe Leu Thr Ser Val Thr Gly Val Leu Cys Ser Asp Ser Ala Trp Val
    130                 135                 140
cat ctg gct agc ggc gca gca atg ggg ttc gcc tgg atc cag tgc gga    480
His Leu Ala Ser Gly Ala Ala Met Gly Phe Ala Trp Ile Gln Cys Gly
145                 150                 155                 160
tgg ata ggt cac gac tct ggg cat tac cgg att atg tct gac agg aaa    528
Trp Ile Gly His Asp Ser Gly His Tyr Arg Ile Met Ser Asp Arg Lys
                165                 170                 175
tgg aac tgg ttc gcg cag gtc ctg agc aca aac tgc ctc cag ggg atc    576
Trp Asn Trp Phe Ala Gln Val Leu Ser Thr Asn Cys Leu Gln Gly Ile
            180                 185                 190
agt atc ggg tgg tgg aag tgg aac cat aac gcc cac cac att gct tgc    624
Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys
        195                 200                 205
aat agc ctg gac tac gac ccc gac ctc cag tat atc cct ttg ctc gtg    672
Asn Ser Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Leu Leu Val
    210                 215                 220
gtc tcc ccc aag ttc ttc aac tcc ctt act tct cgt ttc tac gac aag    720
Val Ser Pro Lys Phe Phe Asn Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Lys
225                 230                 235                 240
aag ctg aat ttc gac ggc gtg tca agg ttt ctg gtt tgc tac cag cac    768
Lys Leu Asn Phe Asp Gly Val Ser Arg Phe Leu Val Cys Tyr Gln His
                245                 250                 255
tgg acg ttt tat cca gtc atg tgt gtc gct agg cta aac atg atc gca    816
Trp Thr Phe Tyr Pro Val Met Cys Val Ala Arg Leu Asn Met Ile Ala
            260                 265                 270
cag tcg ttt ata acg ctt ttc tcg agc agg gag gtg ggt cat agg gcg    864
Gln Ser Phe Ile Thr Leu Phe Ser Ser Arg Glu Val Gly His Arg Ala
        275                 280                 285
caa gag att ttc gga ctt gct gtg ttt tgg gtt tgg ttt ccg ctc ctg    912
Gln Glu Ile Phe Gly Leu Ala Val Phe Trp Val Trp Phe Pro Leu Leu
    290                 295                 300
ctc tct tgc tta cct aat tgg agc gag agg att atg ttt ctg cta gcg    960
Leu Ser Cys Leu Pro Asn Trp Ser Glu Arg Ile Met Phe Leu Leu Ala
305                 310                 315                 320
agc tat tcc gtt acg ggg ata cag cac gtg cag ttc agc ttg aac cat   1008
Ser Tyr Ser Val Thr Gly Ile Gln His Val Gln Phe Ser Leu Asn His
                325                 330                 335
ttt tct tcg gac gtc tac gtg ggc ccg cca gta gct aac gac tgg ttc   1056
Phe Ser Ser Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Val Ala Asn Asp Trp Phe
            340                 345                 350
aag aaa cag act gct ggg aca ctt aac ata tcg tgc ccg gcg tgg atg   1104
Lys Lys Gln Thr Ala Gly Thr Leu Asn Ile Ser Cys Pro Ala Trp Met
        355                 360                 365
gac tgg ttc cat ggc ggg ttg cag ttt cag gtc gag cac cac ttg ttt   1152
Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln Val Glu His His Leu Phe
    370                 375                 380
ccg cgg atg cct agg ggt cag ttt agg aag att tct cct ttt gtg agg    1200
Pro Arg Met Pro Arg Gly Gln Phe Arg Lys Ile Ser Pro Phe Val Arg
385                 390                 395                 400
gat ttg tgt aag aaa cac aac ttg cct tac aat atc gcg tct ttt act    1248
Asp Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr Asn Ile Ala Ser Phe Thr
                405                 410                 415
aaa gca aac gtg ttg acg ctt aag acg ctg aga aat acg gcc att gag    1296
Lys Ala Asn Val Leu Thr Leu Lys Thr Leu Arg Asn Thr Ala Ile Glu
            420                 425                 430
gct cgg gac ctc tct aat ccg acc cca aag aat atg gtg tgg gaa gcc    1344
Ala Arg Asp Leu Ser Asn Pro Thr Pro Lys Asn Met Val Trp Glu Ala
        435                 440                 445
gtc cac aca cac ggc tag                                            1362
Val His Thr His Gly
    450
<210>74
<211>453
<212>PRT
<213>高穗花报春
<400>74
Met Ala Asn Lys Ser Pro Pro Asn Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Thr Ser
1               5                   10                  15
Ser Asp Leu Lys Gly His Asn Lys Ala Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile
            20                  25                  30
His Gly Glu Val Tyr Asp Val Ser Ser Trp Ala Gly Leu His Pro Gly
        35                  40                  45
Gly Ser Ala Pro Leu Met Ala Leu Ala Gly His Asp Val Thr Asp Ala
    50                  55                  60
Phe Leu Ala Tyr His Pro Pro Ser Thr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Leu
65                  70                  75                  80
Ser Thr Asn Leu Leu Leu Gln Asn His Ser Val Ser Pro Thr Ser Ser
                85                  90                  95
Asp Tyr Arg Lys Leu Leu His Asn Phe His Lys Ile Gly Met Phe Arg
            100                 105                 110
Ala Arg Gly His Thr Ala Tyr Ala Thr Phe Val Ile Met Ile Val Met
        115                 120                 125
Phe Leu Thr Ser Val Thr Gly Val Leu Cys Ser Asp Ser Ala Trp Val
    130                 135                 140
His Leu Ala Ser Gly Ala Ala Met Gly Phe Ala Trp Ile Gln Cys Gly
145                 150                 155                 160
Trp Ile Gly His Asp Ser Gly His Tyr Arg Ile Met Ser Asp Arg Lys
                165                 170                 175
Trp Asn Trp Phe Ala Gln Val Leu Ser Thr Asn Cys Leu Gln Gly Ile
            180                 185                 190
Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys
        195                 200                 205
Asn Ser Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Leu Leu Val
    210                 215                 220
Val Ser Pro Lys Phe Phe Asn Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Lys
225                 230                 235                 240
Lys Leu Asn Phe Asp Gly Val Ser Arg Phe Leu Val Cys Tyr Gln His
                245                 250                 255
Trp Thr Phe Tyr Pro Val Met Cys Val Ala Arg Leu Asn Met Ile Ala
            260                 265                 270
Gln Ser Phe Ile Thr Leu Phe Ser Ser Arg Glu Val Gly His Arg Ala
        275                 280                 285
Gln Glu Ile Phe Gly Leu Ala Val Phe Trp Val Trp Phe Pro Leu Leu
    290                 295                 300
Leu Ser Cys Leu Pro Asn Trp Ser Glu Arg Ile Met Phe Leu Leu Ala
305                 310                 315                 320
Ser Tyr Ser Val Thr Gly Ile Gln His Val Gln Phe Ser Leu Asn His
                325                 330                 335
Phe Ser Ser Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Val Ala Asn Asp Trp Phe
            340                 345                 350
Lys Lys Gln Thr Ala Gly Thr Leu Asn Ile Ser Cys Pro Ala Trp Met
        355                 360                 365
Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln Val Glu His His Leu Phe
    370                 375                 380
Pro Arg Met Pro Arg Gly Gln Phe Arg Lys Ile Ser Pro Phe Val Arg
385                 390                 395                 400
Asp Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr Asn Ile Ala Ser Phe Thr
                405                 410                 415
Lys Ala Asn Val Leu Thr Leu Lys Thr Leu Arg Asn Thr Ala Ile Glu
            420                 425                 430
Ala Arg Asp Leu Ser Asn Pro Thr Pro Lys Asn Met Val Trp Glu Ala
        435                 440                 445
Val His Thr His Gly
    450
<210>75
<211>903
<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(903)
<223>Δ5延伸酶
<400>75
atg agc gcc tcc ggt gcg ctg ctg ccc gcg atc gcg tcc gcc gcg tac     48
Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Ser Ala Ala Tyr
1               5                   10                  15
gcg tac gcg acg tac gcc tac gcc ttt gag tgg tcg cac gcg aat ggc     96
Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly
            20                  25                  30
atc gac aac gtc gac gcg cgc gag tgg atc ggt gcg ctg tcg ttg agg    144
Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg
        35                  40                  45
ctc ccg gcg atc gcg acg acg atg tac ctg ttg ttc tgc ctg gtc gga    192
Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly
    50                  55                  60
ccg agg ttg atg gcg aag cgc gag gcg ttc gac ccg aag ggg ttc atg    240
Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met
65                  70                  75                  80
ctg gcg tac aat gcg tat cag acg gcg ttc aac gtc gtc gtg ctc ggg    288
Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly
                85                  90                  95
atg ttc gcg cga gag atc tcg ggg ctg ggg cag ccc gtg tgg ggg tca    336
Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser
            100                 105                 110
acc atg ccg tgg agc gat aga aaa tcg ttt aag atc ctc ctc ggg gtg    384
Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val
        115                 120                 125
tgg ttg cac tac aac aac aaa tat ttg gag cta ttg gac act gtg ttc    432
Trp Leu His Tyr Asn Asn Lys Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe
    130                 135                 140
atg gtt gcg cgc aag aag acg aag cag ttg agc ttc ttg cac gtt tat    480
Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr
145                 150                 155                 160
cat cac gcc ctg ttg atc tgg gcg tgg tgg ttg gtg tgt cac ttg atg    528
His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met
                165                 170                 175
gcc acg aac gat tgt atc gat gcc tac ttc ggc gcg gcg tgc aac tcg    576
Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser
            180                 185                 190
ttc att cac atc gtg atg tac tcg tat tat ctc atg tcg gcg ctc ggc    624
Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly
       195                 200                 205
att cga tgc ccg tgg aag cga tac atc acc cag gct caa atg ctc caa    672
Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln
    210                 215                 220
ttc gtc att gtc ttc gcg cac gcc gtg ttc gtg ctg cgt cag aag cac    720
Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His
225                 230                 235                 240
tgc ccg gtc acc ctt cct tgg gcg caa atg ttc gtc atg acg aac atg    768
Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met
                245                 250                 255
ctc gtg ctc ttc ggg aac ttc tac ctc aag gcg tac tcg aac aag tcg    816
Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser
            260                 265                 270
cgc ggc gac ggc gcg agt tcc gtg aaa cca gcc gag acc acg cgc gcg    864
Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala
        275                 280                 285
ccc agc gtg cga cgc acg cga tct cga aaa att gac taa                903
Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp
    290                 295                 300
<210>76
<211>300
<212>PRT
<213>0streococcus tauri
<400>76
Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Ser Ala Ala Tyr
1               5                   10                  15
Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly
            20                  25                  30
Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg
        35                  40                  45
Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly
    50                  55                  60
Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met
65                  70                  75                  80
Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly
                85                  90                  95
Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser
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Trp Leu His Tyr Asn Asn Lys Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe
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Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr
145                 150                 155                 160
His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met
                165                 170                 175
Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser
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Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly
        195                 200                 205
Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln
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Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His
225                 230                 235                 240
Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met
                245                 250                 255
Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser
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Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala
        275                 280                 285
Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp
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<220>
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<222>(1)..(903)
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<400>77
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gcg tac gcg acg tac gcc tac gcc ttt gag tgg tcg cac gcg aat ggc     96
Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly
            20                  25                  30
atc gac aac gtc gac gcg cgc gag tgg atc ggt gcg ctg tcg ttg agg    144
Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg
        35                  40                  45
ctc ccg gcg atc gcg acg acg atg tac ctg ttg ttc tgc ctg gtc gga    192
Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly
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ccg agg ttg atg gcg aag cgc gag gcg ttc gac ccg aag ggg ttc atg    240
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ctg gcg tac aat gcg tat cag acg gcg ttc aac gtc gtc gtg ctc ggg    288
Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly
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atg ttc gcg cga gag atc tcg ggg ctg ggg cag ccc gtg tgg ggg tca    336
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acc atg ccg tgg agc gat aga aaa tcg ttt aag atc ctc ctc ggg gtg    384
Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val
        115                 120                 125
tgg ttg cac tac aac aac aaa tat ttg gag cta ttg gac act gtg ttc    432
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atg gtt gcg cgc aag aag acg aag cag ttg agc ttc ttg cac gtt tat    480
Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr
145                 150                 155                 160
cat cac gcc ctg ttg atc tgg gcg tgg tgg ttg gtg tgt cac ttg atg    528
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Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly
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Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln
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Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His
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<212>PRT
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<210>79
<211>903
<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(903)
<223>Δ5延伸酶
<400>79
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Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Ser Ala Ala Tyr
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ctc ccg gcg atc gcg acg acg atg tac ctg ttg ttc tgc ctg gtc gga    192
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<213>Ostreococcus tauri
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<213>Ostreococcus tauri
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att aga gag cct acg tgg tta aga aga ttc ata ata tgt cat aat gcg    288
Ile Arg Glu Pro Thr Trp Leu Arg Arg Phe Ile Ile Cys His Asn Ala
                85                  90                  95
ttc ttg ata gtc ctc agt ctt tac atg tgc ctt ggt tgt gtg gcc caa    336
Phe Leu Ile Val Leu Ser Leu Tyr Met Cys Leu Gly Cys Val Ala Gln
            100                 105                 110
gcg tat cag aat gga tat act tta tgg ggt aat gaa ttc aag gcc acg    384
Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Trp Gly Asn Glu Phe Lys Ala Thr
        115                 120                 125
gaa act cag ctt gct ctc tac att tac att ttt tac gta agt aaa ata    432
Glu Thr Gln Leu Ala Leu Tyr Ile Tyr Ile Phe Tyr Val Ser Lys Ile
    130                 135                 140
tac gag ttt gta gat act tac att atg ctt ctc aag aat aac ttg cgg    480
Tyr Glu Phe Val Asp Thr Tyr Ile Met Leu Leu Lys Asn Asn Leu Arg
145                 150                 155                 160
caa gta aga ttc cta cac act tat cac cac agc acg att tcc ttt att    528
Gln Val Arg Phe Leu His Thr Tyr His His Ser Thr Ile Ser Phe Ile
                165                 170                 175
tgg tgg atc att gct cgg agg gct ccg ggt ggt gat gct tac ttc agc    576
Trp Trp Ile Ile Ala Arg Arg Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr Phe Ser
            180                 185                 190
gcg gcc ttg aac tca tgg gta cac gtg tgc atg tac acc tat tat cta    624
Ala Ala Leu Asn Ser Trp Val His Val Cys Met Tyr Thr Tyr Tyr Leu
        195                 200                 205
tta tca acc ctt att gga aaa gaa gat cct aag cgt tcc aac tac ctt    672
Leu Ser Thr Leu Ile Gly Lys Glu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Tyr Leu
    210                 215                 220
tgg tgg ggt cgc cac cta acg caa atg cag atg ctt cag ttt ttc ttc    720
Trp Trp Gly Arg His Leu Thr Gln Met Gln Met Leu Gln Phe Phe Phe
225                 230                 235                 240
aac gta ctt caa gcg ttg tac tgc gct tcg ttc tct acg tat ccc aag    768
Asn Val Leu Gln Ala Leu Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Pro Lys
                245                 250                 255
ttt ttg tcc aaa att ctg ctc gtc tat atg atg agc ctt ctc ggc ttg    816
Phe Leu Ser Lys Ile Leu Leu Val Tyr Met Met Ser Leu Leu Gly Leu
            260                 265                 270
ttt ggg cat ttc tac tat tcc aag cac ata gca gca gct aag ctc cag    864
Phe Gly His Phe Tyr Tyr Ser Lys His Ile Ala Ala Ala Lys Leu Gln
        275                 280                 285
aaa aaa cag cag tga                                                879
Lys Lys Gln Gln
    290
<210>82
<211>292
<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>82
Met Ser Gly Leu Arg Ala Pro Asn Phe Leu His Arg Phe Trp Thr Lys
1               5                   10                  15
Trp Asp Tyr Ala Ile Ser Lys Val Val Phe Thr Cys Ala Asp Ser Phe
            20                  25                  30
Gln Trp Asp Ile Gly Pro Val Ser Ser Ser Thr Ala His Leu Pro Ala
        35                  40                  45
Ile Glu Ser Pro Thr Pro Leu Val Thr Ser Leu Leu Phe Tyr Leu Val
    50                  55                  60
Thr Val Phe Leu Trp Tyr Gly Arg Leu Thr Arg Ser Ser Asp Lys Lys
65                  70                  75                  80
Ile Arg Glu Pro Thr Trp Leu Arg Arg Phe Ile Ile Cys His Asn Ala
                85                  90                  95
Phe Leu Ile Val Leu Ser Leu Tyr Met Cys Leu Gly Cys Val Ala Gln
            100                 105                 110
Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Trp Gly Asn Glu Phe Lys Ala Thr
        115                 120                 125
Glu Thr Gln Leu Ala Leu Tyr Ile Tyr Ile Phe Tyr Val Ser Lys Ile
    130                 135                 140
Tyr Glu Phe Val Asp Thr Tyr Ile Met Leu Leu Lys Asn Asn Leu Arg
145                 150                 155                 160
Gln Val Arg Phe Leu His Thr Tyr His His Ser Thr Ile Ser Phe Ile
                165                 170                 175
Trp Trp Ile Ile Ala Arg Arg Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr Phe Ser
            180                 185                 190
Ala Ala Leu Asn Ser Trp Val His Val Cys Met Tyr Thr Tyr Tyr Leu
        195                 200                 205
Leu Ser Thr Leu Ile Gly Lys Glu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Tyr Leu
    210                 215                 220
Trp Trp Gly Arg His Leu Thr Gln Met Gln Met Leu Gln Phe Phe Phe
225                 230                 235                 240
Asn Val Leu Gln Ala Leu Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Pro Lys
                245                 250                 255
Phe Leu Ser Lys Ile Leu Leu Val Tyr Met Met Ser Leu Leu Gly Leu
            260                 265                 270
Phe Gly His Phe Tyr Tyr Ser Lys His Ile Ala Ala Ala Lys Leu Gln
        275                 280                 285
Lys Lys Gln Gln
    290
<210>83
<211>831
<212>DNA
<213>破囊壶菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(831)
<223>Δ5延伸酶
<400>83
atg gac gtc gtc gag cag caa tgg cgc cgc ttc gtg gac gcc gtg gac     48
Met Asp Val Val Glu Gln Gln Trp Arg Arg Phe Val Asp Ala Val Asp
1               5                   10                  15
aac gga atc gtg gag ttc atg gag cat gag aag ccc aac aag ctg aac     96
Asn Gly Ile Val Glu Phe Met Glu His Glu Lys Pro Asn Lys Leu Asn
            20                  25                  30
gag ggc aag ctc ttc acc tcg acc gag gag atg atg gcg ctt atc gtc    144
Glu Gly Lys Leu Phe Thr Ser Thr Glu Glu Met Met Ala Leu Ile Val
        35                  40                  45
ggc tac ctg gcg ttc gtg gtc crc ggg tcc gcc ttc atg aag gcc ttt    192
Gly Tyr Leu Ala Phe Val Val Leu Gly Ser Ala Phe Met Lys Ala Phe
    50                  55                  60
gtc gat aag cct ttc gag ctc aag ttc ctc aag ctc gtg cac aac atc    240
Val Asp Lys Pro Phe Glu Leu Lys Phe Leu Lys Leu Val His Ash Ile
65                  70                  75                  80
ttc ctc acc ggt ctg tcc atg tac atg gcc acc gag tgc gcg cgc cag    288
Phe Leu Thr Gly Leu Ser Met Tyr Met Ala Thr Glu Cys Ala Arg Gln
                85                  90                  95
gca tac ctc ggc ggc tac aag ctc ttt ggc aac ccg atg gag aag ggc    336
Ala Tyr Leu Gly Gly Tyr Lys Leu Phe Gly Asn Pro Met Glu Lys Gly
            100                 105                 110
acc gag tcg cac gcc ccg ggc atg gcc aac atc atc tac atc ttc tac    384
Thr Glu Ser His Ala Pro Gly Met Ala Asn Ile Ile Tyr Ile Phe Tyr
        115                 120                 125
gtg agc aag ttc ctc gaa ttc ctc gac acc gtc ttc atg atc ctc ggc    432
Val Ser Lys Phe Leu Glu Phe Leu Asp Thr Val Phe Met Ile Leu Gly
    130                 135                 140
aag aag tgg aag cag ctc agc ttt ctc cac gtc tac cac cac gcg agc    480
Lys Lys Trp Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr His His Ala Ser
145                 150                 155                 160
atc agc ttc atc tgg ggc atc atc gcc cgc ttc gcg ccc ggt ggc gac    528
Ile Ser Phe Ile Trp Gly Ile Ile Ala Arg Phe Ala Pro Gly Gly Asp
                165                 170                 175
gcc tac ttc tct acc atc ctc aac agc agc gtg cat gtc gtg ctc tac    576
Ala Tyr Phe Ser Thr Ile Leu Asn Ser Ser Val His Val Val Leu Tyr
            180                 185                 190
ggc tac tac gcc tcg acc acc ctc ggc tac acc ttc atg cgc ccg ctg    624
Gly Tyr Tyr Ala Ser Thr Thr Leu Gly Tyr Thr Phe Met Arg Pro Leu
        195                 200                 205
cgc ccg tac att acc acc att cag ctc acg cag ttc atg gcc atg gtc    672
Arg Pro Tyr Ile Thr Thr Ile Gln Leu Thr Gln Phe Met Ala Met Val
    210                 215                 220
gtc cag tcc gtc tat gac tac tac aac ccc tgc gac tac ccg cag ccc    720
Val Gln Ser Val Tyr Asp Tyr Tyr Asn Pro Cys Asp Tyr Pro Gln Pro
225                 230                 235                 240
ctc gtc aag ctg ctc ttc tgg tac atg ctc acc atg ctc ggc ctc ttc    768
Leu Val Lys Leu Leu Phe Trp Tyr Met Leu Thr Met Leu Gly Leu Phe
                245                 250                 255
ggc aac ttc ttc gtg cag cag tac crc aag ccc aag gcg ccc aag aag    816
Gly Asn Phe Phe Val Gln Gln Tyr Leu Lys Pro Lys Ala Pro Lys Lys
            260                 265                 270
cag aag acc atc taa                                                831
Gln Lys Thr Ile
        275
<210>84
<211>276
<212>PRT
<213>破囊壶菌
<400>84
Met Asp Val Val Glu Gln Gln Trp Arg Arg Phe Val Asp Ala Val Asp
1               5                   10                  15
Asn Gly Ile Val Glu Phe Met Glu His Glu Lys Pro Asn Lys Leu Asn
            20                  25                  30
Glu Gly Lys Leu Phe Thr Ser Thr Glu Glu Met Met Ala Leu Ile Val
        35                  40                  45
Gly Tyr Leu Ala Phe Val Val Leu Gly Ser Ala Phe Met Lys Ala Phe
    50                  55                  60
Val Asp Lys Pro Phe Glu Leu Lys Phe Leu Lys Leu Val His Asn Ile
65                  70                  75                  80
Phe Leu Thr Gly Leu Ser Met Tyr Met Ala Thr Glu Cys Ala Arg Gln
                85                  90                  95
Ala Tyr Leu Gly Gly Tyr Lys Leu Phe Gly Asn Pro Met Glu Lys Gly
            100                 105                 110
Thr Glu Ser His Ala Pro Gly Met Ala Asn Ile Ile Tyr Ile Phe Tyr
        115                 120                 125
Val Ser Lys Phe Leu Glu Phe Leu Asp Thr Val Phe Met Ile Leu Gly
    130                 135                 140
Lys Lys Trp Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr His His Ala Ser
145                 150                 155                 160
Ile Ser Phe Ile Trp Gly Ile Ile Ala Arg Phe Ala Pro Gly Gly Asp
                165                 170                 175
Ala Tyr Phe Ser Thr Ile Leu Asn Ser Ser Val His Val Val Leu Tyr
            180                 185                 190
Gly Tyr Tyr Ala Ser Thr Thr Leu Gly Tyr Thr Phe Met Arg Pro Leu
        195                 200                 205
Arg Pro Tyr Ile Thr Thr Ile Gln Leu Thr Gln Phe Met Ala Met Val
    210                 215                 220
Val Gln Ser Val Tyr Asp Tyr Tyr Asn Pro Cys Asp Tyr Pro Gln Pro
225                 230                 235                 240
Leu Val Lys Leu Leu Phe Trp Tyr Met Leu Thr Met Leu Gly Leu Phe
                245                 250                 255
Gly Asn Phe Phe Val Gln Gln Tyr Leu Lys Pro Lys Ala Pro Lys Lys
            260                 265                 270
Gln Lys Thr Ile
        275
<210>85
<211>1077
<212>DNA
<213>假矮海链藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1077)
<223>Δ5延伸酶
<400>85
atg tgc tca cca ccg ccg tca caa tcc aaa aca aca tcc ctc cta gca     48
Met Cys Ser Pro Pro Pro Ser Gln Ser Lys Thr Thr Ser Leu Leu Ala
1               5                   10                  15
cgg tac acc acc gcc gcc ctc ctc ctc ctc acc ctc aca acg tgg tgc     96
Arg Tyr Thr Thr Ala Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Thr Thr Trp Cys
            20                  25                  30
cac ttc gcc ttc cca gcc gcc acc gcc aca ccc ggc ctc acc gcc gaa    144
His Phe Ala Phe Pro Ala Ala Thr Ala Thr Pro Gly Leu Thr Ala Glu
        35                  40                  45
atg cac tcc tac aaa gtc cca ctc ggt ctc acc gta ttc tac ctg ctg    192
Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu
    50                  55                  60
agt cta ccg tca cta aag tac gtt acg gac aac tac ctt gcc aaa aag    240
Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys
65                  70                  75                  80
tat gat atg aag tca ctc ctg acg gaa tca atg gtg ttg tac aat gtg    288
Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val
                85                  90                  95
gcg caa gtg ctg ctc aat ggg tgg acg gtg tat gcg att gtg gat gcg    336
Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala
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gtg atg aat aga gac cat cct ttt att gga agt aga agt ttg gtt ggg    384
Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly
        115                 120                 125
gcg gcg ttg cat agt ggg agc tcg tat gcg gtg tgg gtt cat tat tgt    432
Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys
    130                 135                 140
gat aag tat ttg gag ttc ttt gat acg tat ttt atg gtg ttg agg ggg    480
Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly
145                 150                 155                 160
aaa atg gac cag gtc tcc ttc ctc cac atc tac cac cac acg acc ata    528
Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile
                165                 170                 175
gcg tgg gca tgg tgg atc gcc ctc cgc ttc tcc ccc ggc gga gac att     576
Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile
            180                 185                 190
tac ttc ggg gca ctc ctc aac tcc atc atc cac gtc ctc atg tat tcc     624
Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser
        195                 200                 205
tac tac gcc ctt gcc cta ctc aag gtc agt tgt cca tgg aaa cga tac     672
Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr
    210                 215                 220
ttg act caa gct caa tta ttg caa ttc aca agt gtg gtg gtt tat acg     720
Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr
225                 230                 235                 240
ggg tgt acg ggt tat act cat tac tat cat acg aag cat gga gcg gat     768
Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp
                245                 250                 255
gag aca cag cct agt tta gga acg tat tat ttc tgt tgt gga gtg cag     816
Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln
            260                 265                 270
gtg ttt gag atg gtt agt ttg ttt gta ctc ttt tcc atc ttt tat aaa     864
Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys
        275                 280                 285
cga tcc tat tcg aag aag aac aag tca gga gga aag gat agc aag aag     912
Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys
    290                 295                 300
aat gat gat ggg aat aat gag gat caa tgt cac aag gct atg aag gat     960
Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp
305                 310                 315                 320
ata tcg gag ggt gcg aag gag gtt gtg ggg cat gca gcg aag gat gct    1008
Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala
                325                 330                 335
gga aag ttg gtg gct acg gcg agt aag gct gta aag agg aag gga act    1056
Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr
            340                 345                 350
cgt gtt act ggt gcc atg tag                                        1077
Arg Val Thr Gly Ala Met
        355
<210>86
<211>358
<212>PRT
<213>假矮海链藻
<400>86
Met Cys Ser Pro Pro Pro Ser Gln Ser Lys Thr Thr Ser Leu Leu Ala
1               5                   10                  15
Arg Tyr Thr Thr Ala Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Thr Thr Trp Cys
            20                  25                  30
His Phe Ala Phe Pro Ala Ala Thr Ala Thr Pro Gly Leu Thr Ala Glu
        35                  40                  45
Met His Ser Tyr Lys Val Pro Leu Gly Leu Thr Val Phe Tyr Leu Leu
    50                  55                  60
Ser Leu Pro Ser Leu Lys Tyr Val Thr Asp Asn Tyr Leu Ala Lys Lys
65                  70                  75                  80
Tyr Asp Met Lys Ser Leu Leu Thr Glu Ser Met Val Leu Tyr Asn Val
                85                  90                  95
Ala Gln Val Leu Leu Asn Gly Trp Thr Val Tyr Ala Ile Val Asp Ala
            100                 105                 110
Val Met Asn Arg Asp His Pro Phe Ile Gly Ser Arg Ser Leu Val Gly
        115                 120                 125
Ala Ala Leu His Ser Gly Ser Ser Tyr Ala Val Trp Val His Tyr Cys
    130                 135                 140
Asp Lys Tyr Leu Glu Phe Phe Asp Thr Tyr Phe Met Val Leu Arg Gly
145                 150                 155                 160
Lys Met Asp Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Thr Thr Ile
                165                 170                 175
Ala Trp Ala Trp Trp Ile Ala Leu Arg Phe Ser Pro Gly Gly Asp Ile
            180                 185                 190
Tyr Phe Gly Ala Leu Leu Asn Ser Ile Ile His Val Leu Met Tyr Ser
        195                 200                 205
Tyr Tyr Ala Leu Ala Leu Leu Lys Val Ser Cys Pro Trp Lys Arg Tyr
    210                 215                 220
Leu Thr Gln Ala Gln Leu Leu Gln Phe Thr Ser Val Val Val Tyr Thr
225                 230                 235                 240
Gly Cys Thr Gly Tyr Thr His Tyr Tyr His Thr Lys His Gly Ala Asp
                245                 250                 255
Glu Thr Gln Pro Ser Leu Gly Thr Tyr Tyr Phe Cys Cys Gly Val Gln
            260                 265                 270
Val Phe Glu Met Val Ser Leu Phe Val Leu Phe Ser Ile Phe Tyr Lys
        275                 280                 285
Arg Ser Tyr Ser Lys Lys Asn Lys Ser Gly Gly Lys Asp Ser Lys Lys
    290                 295                 300
Asn Asp Asp Gly Asn Asn Glu Asp Gln Cys His Lys Ala Met Lys Asp
305                 3l0                 315                 320
Ile Ser Glu Gly Ala Lys Glu Val Val Gly His Ala Ala Lys Asp Ala
                325                 330                 335
Gly Lys Leu Val Ala Thr Ala Ser Lys Ala Val Lys Arg Lys Gly Thr
            340                 345                 350
Arg Val Thr Gly Ala Met
        355
<210>87
<211>1086
<212>DNA
<213>致病疫霉
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1086)
<223>ω3去饱和酶
<400>87
atg gcg acg aag gag gcg tat gtg ttc ccc act ctg acg gag atc aag     48
Met Ala Thr Lys Glu Ala Tyr Val Phe Pro Thr Leu Thr Glu Ile Lys
1               5                   10                  15
cgg tcg cta cct aaa gac tgt ttc gag gct tcg gtg cct ctg tcg ctc     96
Arg Ser Leu Pro Lys Asp Cys Phe Glu Ala Ser Val Pro Leu Ser Leu
            20                  25                  30
tac tac acc gtg cgt tgt ctg gtg atc gcg gtg gct cta acc ttc ggt    144
Tyr Tyr Thr Val Arg Cys Leu Val Ile Ala Val Ala Leu Thr Phe Gly
        35                  40                  45
ctc aac tac gct cgc gct ctg ccc gag gtc gag agc ttc tgg gct ctg    192
Leu Asn Tyr Ala Arg Ala Leu Pro Glu Val Glu Ser Phe Trp Ala Leu
    50                  55                  60
gac gcc gca ctc tgc acg ggc tac atc ttg ctg cag ggc atc gtg ttc    240
Asp Ala Ala Leu Cys Thr Gly Tyr Ile Leu Leu Gln Gly Ile Val Phe
65                  70                  75                  80
tgg ggc ttc ttc acg gtg ggc cac gat gcc ggc cac ggc gcc ttc tcg    288
Trp Gly Phe Phe Thr Val Gly His Asp Ala Gly His Gly Ala Phe Ser
                85                  90                  95
cgc tac cac ctg ctt aac ttc gtg gtg ggc act ttc atg cac tcg ctc    336
Arg Tyr His Leu Leu Asn Phe Val Val Gly Thr Phe Met His Ser Leu
            100                 105                 110
atc ctc acg ccc ttc gag tcg tgg aag ctc acg cac cgt cac cac cac    384
Ile Leu Thr Pro Phe Glu Ser Trp Lys Leu Thr His Arg His His His
        115                 120                 125
aag aac acg ggc aac att gac cgt gac gag gtc ttc tac ccg caa cgc    432
Lys Asn Thr Gly Asn Ile Asp Arg Asp Glu Val Phe Tyr Pro Gln Arg
    130                 135                 140
aag gcc gac gac cac ccg ctg tct cgc aac ctg att ctg gcg ctc ggg    480
Lys Ala Asp Asp His Pro Leu Ser Arg Asn Leu Ile Leu Ala Leu Gly
145                 150                 155                 160
gca gcg tgg ctc gcc tat ttg gtc gag ggc ttc cct cct cgt aag gtc    528
Ala Ala Trp Leu Ala Tyr Leu Val Glu Gly Phe Pro Pro Arg Lys Val
                165                 170                 175
aac cac ttc aac ccg ttc gag cct ctg ttc gtg cgt cag gtg tca gct    576
Asn His Phe Asn Pro Phe Glu Pro Leu Phe Val Arg Gln Val Ser Ala
            180                 185                 190
gtg gta atc tct ctt ctc gcc cac ttc ttc gtg gcc gga ctc tcc atc    624
Val Val Ile Ser Leu Leu Ala His Phe Phe Val Ala Gly Leu Ser Ile
        195                 200                 205
tat ctg agc ctc cag ctg ggc ctt aag acg atg gca atc tac tac tat    672
Tyr Leu Ser Leu Gln Leu Gly Leu Lys Thr Met Ala Ile Tyr Tyr Tyr
    210                 215                 220
gga cct gtt ttt gtg ttc ggc agc atg ctg gtc att acc acc ttc cta    720
Gly Pro Val Phe Val Phe Gly Ser Met Leu Val Ile Thr Thr Phe Leu
225                 230                 235                 240
cac cac aat gat gag gag acc cca tgg tac gcc gac tcg gag tgg acg    768
His His Asn Asp Glu Glu Thr Pro Trp Tyr Ala Asp Ser Glu Trp Thr
                245                 250                 255
tac gtc aag ggc aac ctc tcg tcc gtg gac cga tcg tac ggc gcg ctc    816
Tyr Val Lys Gly Asn Leu Ser Ser Val Asp Arg Ser Tyr Gly Ala Leu
            260                 265                 270
att gac aac ctg agc cac aac atc ggc acg cac cag atc cac cac ctt    864
Ile Asp Asn Leu Ser His Asn Ile Gly Thr His Gln Ile His His Leu
        275                 280                 285
ttc cct atc att ccg cac tac aaa ctc aag aaa gcc act gcg gcc ttc    912
Phe Pro Ile Ile Pro His Tyr Lys Leu Lys Lys Ala Thr Ala Ala Phe
    290                 295                 300
cac cag gct ttc cct gag ctc gtg cgc aag agc gac gag cca att atc     960
His Gln Ala Phe Pro Glu Leu Val Arg Lys Ser Asp Glu Pro Ile Ile
305                 310                 315                 320
aag gct ttc ttc cgg gtt gga cgt ctc tac gca aac tac ggc gtt gtg    1008
Lys Ala Phe Phe Arg Val Gly Arg Leu Tyr Ala Asn Tyr Gly Val Val
                325                 330                 335
gac cag gag gcg aag ctc ttc acg cta aag gaa gcc aag gcg gcg acc    1056
Asp Gln Glu Ala Lys Leu Phe Thr Leu Lys Glu Ala Lys Ala Ala Thr
            340                 345                 350
gag gcg gcg gcc aag acc aag tcc acg taa                            1086
Glu Ala Ala Ala Lys Thr Lys Ser Thr
        355                 360
<210>88
<211>361
<212>PRT
<213>致病疫霉
<400>88
Met Ala Thr Lys Glu Ala Tyr Val Phe Pro Thr Leu Thr Glu Ile Lys
1               5                   10                  15
Arg Ser Leu Pro Lys Asp Cys Phe Glu Ala Ser Val Pro Leu Ser Leu
            20                  25                  30
Tyr Tyr Thr Val Arg Cys Leu Val Ile Ala Val Ala Leu Thr Phe Gly
        35                  40                  45
Leu Asn Tyr Ala Arg Ala Leu Pro Glu Val Glu Ser Phe Trp Ala Leu
    50                  55                  60
Asp Ala Ala Leu Cys Thr Gly Tyr Ile Leu Leu Gln Gly Ile Val Phe
65                  70                  75                  80
Trp Gly Phe Phe Thr Val Gly His Asp Ala Gly His Gly Ala Phe Ser
                85                  90                  95
Arg Tyr His Leu Leu Asn Phe Val Val Gly Thr Phe Met His Ser Leu
            100                 105                 110
Ile Leu Thr Pro Phe Glu Ser Trp Lys Leu Thr His Arg His His His
        115                 120                 125
Lys Asn Thr Gly Asn Ile Asp Arg Asp Glu Val Phe Tyr Pro Gln Arg
    130                 135                 140
Lys Ala Asp Asp His Pro Leu Ser Arg Asn Leu Ile Leu Ala Leu Gly
145                 150                 155                 160
Ala Ala Trp Leu Ala Tyr Leu Val Glu Gly Phe Pro Pro Arg Lys Val
                165                 170                 175
Asn His Phe Asn Pro Phe Glu Pro Leu Phe Val Arg Gln Val Ser Ala
            180                 185                 190
Val Val Ile Ser Leu Leu Ala His Phe Phe Val Ala Gly Leu Ser Ile
        195                 200                 205
Tyr Leu Ser Leu Gln Leu Gly Leu Lys Thr Met Ala Ile Tyr Tyr Tyr
    210                 215                 220
Gly Pro Val Phe Val Phe Gly Ser Met Leu Val Ile Thr Thr Phe Leu
225                 230                 235                 240
His His Asn Asp Glu Glu Thr Pro Trp Tyr Ala Asp Ser Glu Trp Thr
                245                 250                 255
Tyr Val Lys Gly Asn Leu Ser Ser Val Asp Arg Ser Tyr Gly Ala Leu
            260                 265                 270
Ile Asp Asn Leu Ser His Asn Ile Gly Thr His Gln Ile His His Leu
        275                 280                 285
Phe Pro Ile Ile Pro His Tyr Lys Leu Lys Lys Ala Thr Ala Ala Phe
    290                 295                 300
His Gln Ala Phe Pro Glu Leu Val Arg Lys Ser Asp Glu Pro Ile Ile
305                 310                 315                 320
Lys Ala Phe Phe Arg Val Gly Arg Leu Tyr Ala Asn Tyr Gly Val Val
                325                 330                 335
Asp Gln Glu Ala Lys Leu Phe Thr Leu Lys Glu Ala Lys Ala Ala Thr
            340                 345                 350
Glu Ala Ala Ala Lys Thr Lys Ser Thr
        355                 360
<210>89
<211>1371
<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1371)
<223>Δ6去饱和酶
<400>89
atg tgc gtg gag acg gaa aat aac gat ggg ate ccc acg gtg gag atc     48
Met Cys Val Glu Thr Glu Asn Asn Asp Gly Ile Pro Thr Val Glu Ile
1               5                   10                  15
gcg ttc gac ggt gag cgc gag cgg gcg gag gca gac gtg aag ctg tcc     96
Ala Phe Asp Gly Glu Arg Glu Arg Ala Glu Ala Asn Val Lys Leu Ser
            20                  25                  30
gcg gag aag atg gag ccg gcg gcg ctg gcg aag acg ttc gcg agg cgg    144
Ala Glu Lys Met Glu Pro Ala Ala Leu Ala Lys Thr Phe Ala Arg Arg
        35                  40                  45
tac gtc gtg atc gag ggg gtg gag tac gat gtg acg gat ttt aag cac    192
Tyr Val Val Ile Glu Gly Val Glu Tyr Asp Val Thr Asp Phe Lys His
    50                  55                  60
ccg gga gga acg gtt att ttc tat gcg ttg tca aac gcc ggg gcg gac    240
Pro Gly Gly Thr Val Ile Phe Tyr Ala Leu Ser Asn Thr Gly Ala Asp
65                  70                  75                  80
gcg acg gaa gcg ttc aag gag ttt cat cat cgg tcg aga aag gcg agg    288
Ala Thr Glu Ala Phe Lys Glu Phe His His Arg Ser Arg Lys Ala Arg
                85                  90                  95
aaa gcc ttg gcg gcg ctc ccg tct cga ccg gcc aag acg gcc aag gtg    336
Lys Ala Leu Ala Ala Leu Pro Ser Arg Pro Ala Lys Thr Ala Lys Val
            100                 105                 110
gac gac gcg gag atg ctc caa gat ttc gcc aag tgg cgg aaa gaa ttg    384
Asp Asp Ala Glu Met Leu Gln Asp Phe Ala Lys Trp Arg Lys Glu Leu
        115                 120                 125
gag aga gat gga ttc ttc aag ccc tct ccg gcg cac gtg gcg tat cgc    432
Glu Arg Asp Gly Phe Phe Lys Pro Ser Pro Ala His Val Ala Tyr Arg
    130                 135                 140
ttc gcc gag ctc gcg gcg atg tac gct ctc ggg acg tac ctg atg tac    480
Phe Ala Glu Leu Ala Ala Met Tyr Ala Leu Gly Thr Tyr Leu Met Tyr
145                 150                 155                 160
gct cga tac gtc gtc tcc tcg gtg ctc gtg tac gct tgc ttt ttc ggc    528
Ala Arg Tyr Val Val Ser Ser Val Leu Val Tyr Ala Cys Phe Phe Gly
                165                 170                 175
gcc cga tgc ggt tgg gtg cag cac gag ggc gga cac agc tcg ctg acg    576
Ala Arg Cys Gly Trp Val Gln His Glu Gly Gly His Ser Ser Leu Thr
            180                 185                 190
ggc aac att tgg tgg gac aag cgc atc cag gcc ttc aca gcc ggg ttc    624
Gly Asn Ile Trp Trp Asp Lys Arg Ile Gln Ala Phe Thr Ala Gly Phe
        195                 200                 205
ggt ctc gcc ggt agc ggc gac atg tgg aac tcg atg cac aac aag cat    672
Gly Leu Ala Gly Ser Gly Asp Met Trp Asn Ser Met His Asn Lys His
    210                 215                 220
cac gcg acg cct caa aag gtt cgt cac gac atg gat ctg gac acc acc    720
His Ala Thr Pro Gln Lys Val Arg His Asp Met Asp Leu Asp Thr Thr
225                 230                 235                 240
ccc gcg gtg gcg ttc ttc aac acc gcg gtg gaa gac aat cgt ccc cgt    768
Pro Ala Val Ala Phe Phe Asn Thr Ala Val Glu Asp Asn Arg Pro Arg
                245                 250                 255
ggc ttt agc aag tac tgg ttg cgc ctt cag gcg tgg acc ttc atc ccc     816
Gly Phe Ser Lys Tyr Trp Leu Arg Leu Gln Ala Trp Thr Phe Ile Pro
            260                 265                 270
gtg acg tcc ggc ttg gtg ctc ctt ttc tgg atg ttt ttc ctc cac ccc     864
Val Thr Ser Gly Leu Val Leu Leu Phe Trp Met Phe Phe Leu His Pro
        275                 280                 285
tcc aag gct ttg aag ggt ggc aag tac gaa gag ttg gtg tgg atg ctc     912
Ser Lys Ala Leu Lys Gly Gly Lys Tyr Glu Glu Leu Val Trp Met Leu
    290                 295                 300
gcc gcg cac gtc atc cgc acg tgg acg atc aag gcg gtg acc gga ttc     960
Ala Ala His Val Ile Arg Thr Trp Thr Ile Lys Ala Val Thr Gly Phe
305                 310                 315                 320
acc gcg atg cag tcc tac ggc tta ttt ttg gcg acg agc tgg gtg agc    1008
Thr Ala Met Gln Ser Tyr Gly Leu Phe Leu Ala Thr Ser Trp Val Ser
                325                 330                 335
ggc tgc tat ctg ttt gca cac ttc tcc acg tcg cac acg cac ctg gat    1056
Gly Cys Tyr Leu Phe Ala His Phe Ser Thr Ser His Thr His Leu Asp
            340                 345                 350
gtg gtg ccc gcg gac gag cat ctc tcc tgg gtt cga tac gcc gtc gat    1104
Val Val Pro Ala Asp Glu His Leu Ser Trp Val Arg Tyr Ala Val Asp
        355                 360                 365
cac acg atc gac atc gat ccg agt caa ggt tgg gtg aac tgg ttg atg    1152
His Thr Ile Asp Ile Asp Pro Ser Gln Gly Trp Val Asn Trp Leu Met
    370                 375                 380
ggc tac ctc aac tgc caa gtc atc cac cac ctc ttt ccg agc atg ccg    1200
Gly Tyr Leu Asn Cys Gln Val Ile His His Leu Phe Pro Ser Met Pro
385                 390                 395                 400
cag ttc cgc cag ccc gag gta tct cgc cgc ttc gtc gcc ttt gcg aaa    1248
Gln Phe Arg Gln Pro Glu Val Ser Arg Arg Phe Val Ala Phe Ala Lys
                405                 410                 415
aag tgg aac ctc aac tac aag gtc atg acc tac gcc ggt gcg tgg aag    1296
Lys Trp Asn Leu Asn Tyr Lys Val Met Thr Tyr Ala Gly Ala Trp Lys
            420                 425                 430
gca acg ctc gga aac ctc gac aac gtg ggt aag cac tac tac gtg cac    1344
Ala Thr Leu Gly Asn Leu Asp Asn Val Gly Lys His Tyr Tyr Val His
        435                 440                 445
ggc caa cac tcc gga aag acg gcg taa                                1371
Gly Gln His Ser Gly Lys Thr Ala
    450                 455
<210>90
<211>456
<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>90
Met Cys Val Glu Thr Glu Asn Asn Asp Gly Ile Pro Thr Val Glu Ile
1               5                   10                  15
Ala Phe Asp Gly Glu Arg Glu Arg Ala Glu Ala Asn Val Lys Leu Ser
            20                  25                  30
Ala Glu Lys Met Glu Pro Ala Ala Leu Ala Lys Thr Phe Ala Arg Arg
        35                  40                  45
Tyr Val Val Ile Glu Gly Val Glu Tyr Asp Val Thr Asp Phe Lys His
    50                  55                  60
Pro Gly Gly Thr Val Ile Phe Tyr Ala Leu Ser Asn Thr Gly Ala Asp
65                  70                  75                  80
Ala Thr Glu Ala Phe Lys Glu Phe His His Arg Ser Arg Lys Ala Arg
                85                  90                  95
Lys Ala Leu Ala Ala Leu Pro Ser Arg Pro Ala Lys Thr Ala Lys Val
            100                 105                 110
Asp Asp Ala Glu Met Leu Gln Asp Phe Ala Lys Trp Arg Lys Glu Leu
        115                 120                 125
Glu Arg Asp Gly Phe Phe Lys Pro Ser Pro Ala His Val Ala Tyr Arg
    130                 135                 140
Phe Ala Glu Leu Ala Ala Met Tyr Ala Leu Gly Thr Tyr Leu Met Tyr
145                 150                 155                 160
Ala Arg Tyr Val Val Ser Ser Val Leu Val Tyr Ala Cys Phe Phe Gly
                165                 170                 175
Ala Arg Cys Gly Trp Val Gln His Glu Gly Gly His Ser Ser Leu Thr
            180                 185                 190
Gly Asn Ile Trp Trp Asp Lys Arg Ile Gln Ala Phe Thr Ala Gly Phe
        195                 200                 205
Gly Leu Ala Gly Ser Gly Asp Met Trp Asn Ser Met His Asn Lys His
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His Ala Thr Pro Gln Lys Val Arg His Asp Met Asp Leu Asp Thr Thr
225                 230                 235                 240
Pro Ala Val Ala Phe Phe Asn Thr Ala Val Glu Asp Asn Arg Pro Arg
                245                 250                 255
Gly Phe Ser Lys Tyr Trp Leu Arg Leu Gln Ala Trp Thr Phe Ile Pro
            260                 265                 270
Val Thr Ser Gly Leu Val Leu Leu Phe Trp Met Phe Phe Leu His Pro
        275                 280                 285
Ser Lys Ala Leu Lys Gly Gly Lys Tyr Glu Glu Leu Val Trp Met Leu
    290                 295                 300
Ala Ala His Val Ile Arg Thr Trp Thr Ile Lys Ala Val Thr Gly Phe
305                 310                 315                 320
Thr Ala Met Gln Ser Tyr Gly Leu Phe Leu Ala Thr Ser Trp Val Ser
                325                 330                 335
Gly Cys Tyr Leu Phe Ala His Phe Ser Thr Ser His Thr His Leu Asp
            340                 345                 350
Val Val Pro Ala Asp Glu His Leu Ser Trp Val Arg Tyr Ala Val Asp
        355                 360                 365
His Thr Ile Asp Ile Asp Pro Ser Gln Gly Trp Val Asn Trp Leu Met
    370                 375                 380
Gly Tyr Leu Asn Cys Gln Val Ile His His Leu Phe Pro Ser Met Pro
385                 390                 395                 400
Gln Phe Arg Gln Pro Glu Val Ser Arg Arg Phe Val Ala Phe Ala Lys
                405                 410                 415
Lys Trp Asn Leu Asn Tyr Lys Val Met Thr Tyr Ala Gly Ala Trp Lys
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Ala Thr Leu Gly Asn Leu Asp Asn Val Gly Lys His Tyr Tyr Val His
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Gly Gln His Ser Gly Lys Thr Ala
    450                 455
<210>91
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<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(606)
<223>Δ5去饱和酶
<400>91
atg tac ggt ttg cta tcg ctc aag tcg tgc ttc gtc gac gat ttc aac     48
Met Tyr Gly Leu Leu Ser Leu Lys Ser Cys Phe Val Asp Asp Phe Asn
1               5                   10                  15
gcc tac ttc tcc gga cgc atc ggc tgg gtc aag gtg atg aag ttc acc     96
Ala Tyr Phe Ser Gly Arg Ile Gly Trp Val Lys Val Met Lys Phe Thr
            20                  25                  30
cgc ggc gag gcg atc gca ttt tgg ggc acc aag ctc ttg tgg gcc gcg    144
Arg GIy Glu Ala Ile Ala Phe Trp Gly Thr Lys Leu Leu Trp Ala Ala
        35                  40                  45
tat tac ctc gcg ttg ccg cta aag atg tcg cat cgg ccg ctc gga gaa    192
Tyr Tyr Leu Ala Leu Pro Leu Lys Met Ser His Arg Pro Leu Gly Glu
    50                  55                  60
ctc ctc gca ctc tgg gcc gtc acc gag ttc gtc acc gga tgg ctg ttg    240
Leu Leu Ala Leu Trp Ala Val Thr Glu Phe Val Thr Gly Trp Leu Leu
65                  70                  75                  80
gcg ttc atg ttc caa gtc gcc cac gtc gtc ggc gag gtt cac ttc ttc    288
Ala Phe Met Phe Gln Val Ala His Val Val Gly Glu Val His Phe Phe
                85                  90                  95
acc ctc gac gcg aag aac cgc gtg aac ttg gga tgg gga gag gca cag    336
Thr Leu Asp Ala Lys Asn Arg Val Asn Leu Gly Trp Gly Glu Ala Gln
            100                 105                 110
ctc atg tcg agc gcg gat ttc gcc cac gga tcc aag ttt tgg acg cac    384
Leu Met Ser Ser Ala Asp Phe Ala His Gly Ser Lys Phe Trp Thr His
        115                 120                 125
ttc tcc gga ggc tta aac tac caa gtc gtc cac cat ctc ttc ccg ggc    432
Phe Ser Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Val Val His His Leu Phe Pro Gly
    130                 135                 140
gtc tgc cac gtg cac tat ccc gcg ctc gcg cca att att aag gcg gca    480
Val Cys His Val His Tyr Pro Ala Leu Ala Pro Ile Ile Lys Ala Ala
145                 150                 155                 160
gct gag aag cac ggc ctc cac tac cag att tac ccc acg ttt tgg tcc    528
Ala Glu Lys His Gly Leu His Tyr Gln Ile Tyr Pro Thr Phe Trp Ser
                165                 170                 175
gcc ctg cgc gcg cac ttc cgg cac ctc gcc aac gtc ggc cgc gcc gcg    576
Ala Leu Arg Ala His Phe Arg His Leu Ala Asn Val Gly Arg Ala Ala
            180                 185                 190
tac gta ccg tcc ctc caa acc gtc gga tga                            606
Tyr Val Pro Ser Leu Gln Thr Val Gly
        195                 200
<210>92
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<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>92
Met Tyr Gly Leu Leu Ser Leu Lys Ser Cys Phe Val Asp Asp Phe Asn
1               5                   10                  15
Ala Tyr Phe Ser Gly Arg Ile Gly Trp Val Lys Val Met Lys Phe Thr
            20                  25                  30
Arg Gly Glu Ala Ile Ala Phe Trp Gly Thr Lys Leu Leu Trp Ala Ala
        35                  40                  45
Tyr Tyr Leu Ala Leu Pro Leu Lys Met Ser His Arg Pro Leu Gly Glu
    50                  55                  60
Leu Leu Ala Leu Trp Ala Val Thr Glu Phe Val Thr Gly Trp Leu Leu
65                  70                  75                  80
Ala Phe Met Phe Gln Val Ala His Val Val Gly Glu Val His Phe Phe
                85                  90                  95
Thr Leu Asp Ala Lys Asn Arg Val Asn Leu Gly Trp Gly Glu Ala Gln
            100                 105                 110
Leu Met Ser Ser Ala Asp Phe Ala His Gly Ser Lys Phe Trp Thr His
        115                 120                 125
Phe Ser Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Val Val His His Leu Phe Pro Gly
    130                 135                 140
Val Cys His Val His Tyr Pro Ala Leu Ala Pro Ile Ile Lys Ala Ala
145                 150                 155                 160
Ala Glu Lys His Gly Leu His Tyr Gln Ile Tyr Pro Thr Phe Trp Ser
                165                 170                 175
Ala Leu Arg Ala His Phe Arg His Leu Ala Asn Val Gly Arg Ala Ala
            180                 185                 190
Tyr Val Pro Ser Leu Gln Thr Val Gly
        195                 200
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<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
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<221>CDS
<222>(1)..(714)
<223>Δ5去饱和酶
<400>93
atg gtg agc cat cac tcg tac tgt aac gac gcg gat ttg gat cag gat     48
Met Val Ser His His Ser Tyr Cys Ash Asp Ala Asp Leu Asp Gln Asp
1               5                   10                  15
gtg tac acc gca ctg ccg ctc ctg cgc ctg gac ccg tct cag gag ttg     96
Val Tyr Thr Ala Leu Pro Leu Leu Arg Leu Asp Pro Ser Gln Glu Leu
            20                  25                  30
aag tgg ttt cat cga tac cag gcg ttt tac gcc ccg ctc atg tgg ccg    144
Lys Trp Phe His Arg Tyr Gln Ala Phe Tyr Ala Pro Leu Met Trp Pro
        35                  40                  45
ttt ttg tgg ctc gcg gcg cag ttt ggc gac gcg cag aac atc ctg atc    192
Phe Leu Trp Leu Ala Ala Gln Phe Gly Asp Ala Gln Asn Ile Leu Ile
    50                  55                  60
gac cga gcg tcg ccg ggc gtc gcg tac aag gga ttg atg gcg aac gag    240
Asp Arg Ala Ser Pro Gly Val Ala Tyr Lys Gly Leu Met Ala Asn Glu
65                  70                  75                  80
gtc gcg ctg tac gtt ctc ggt aag gtt tta cac ttt ggt ctt ctc ctc    288
Val Ala Leu Tyr Val Leu Gly Lys Val Leu His Phe Gly Leu Leu Leu
                85                  90                  95
ggc gtt cct gcg tac ttg cac gga ttg tcc aac gcg atc gtt cca ttc    336
Gly Val Pro Ala Tyr Leu His Gly Leu Ser Asn Ala Ile Val Pro Phe
            100                 105                 110
ttg gcg tac ggc gca ttc ggc tcc ttc gtc ctg tgc tgg ttc ttc atc    384
Leu Ala Tyr Gly Ala Phe Gly Ser Phe Val Leu Cys Trp Phe Phe Ile
        115                 120                 125
gtc agc cat aac ctc gaa gcg ctg aca ccc gtt aac ctt aac aag tcc    432
Val Ser His Asn Leu Glu Ala Leu Thr Pro Val Asn Leu Asn Lys Ser
    130                 135                 140
acg aag aac gac tgg ggg gcg tgg cag atc gag aca tcg gcg tct tgg    480
Thr Lys Asn Asp Trp Gly Ala Trp Gln Ile Glu Thr Ser Ala Ser Trp
145                 150                 155                 160
ggc aac gcg ttc tgg agc ttc ttc tct gga ggt ctg aac ctg caa atc    528
Gly Asn Ala Phe Trp Ser Phe Phe Ser Gly Gly Leu Asn Leu Gln lle
                165                 170                 175
gag cac cac ctc ttc ccg ggc atg gcg cac aac ctg tac ccg aag atg    576
Glu His His Leu Phe Pro Gly Met Ala His Asn Leu Tyr Pro Lys Met
            180                 185                 190
gtg ccg atc atc aag gac gag tgt gcg aaa gcg ggc gtt cgc tac acc    624
Val Pro Ile Ile Lys Asp Glu Cys Ala Lys Ala Gly Val Arg Tyr Thr
        195                 200                 205
ggt tac ggt ggc tac acc ggc ctg ctc ccg atc acc cgc gac atg ttc    672
Gly Tyr Gly Gly Tyr Thr Gly Leu Leu Pro Ile Thr Arg Asp Met Phe
    210                 215                 220
tcc tac ctc cat aag tgt ggc cga acg gcg aaa cta gcc taa            714
Ser Tyr Leu His Lys Cys Gly Arg Thr Ala Lys Leu Ala
225                 230                 235
<210>94
<211>237
<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>94
Met Val Ser His His Ser Tyr Cys Asn Asp Ala Asp Leu Asp Gln Asp
1               5                   10                  15
Val Tyr Thr Ala Leu Pro Leu Leu Arg Leu Asp Pro Ser Gln Glu Leu
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Lys Trp Phe His Arg Tyr Gln Ala Phe Tyr Ala Pro Leu Met Trp Pro
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Phe Leu Trp Leu Ala Ala Gln Phe Gly Asp Ala Gln Asn Ile Leu Ile
    50                  55                  60
Asp Arg Ala Ser Pro Gly Val Ala Tyr Lys Gly Leu Met Ala Asn Glu
65                  70                  75                  80
Val Ala Leu Tyr Val Leu Gly Lys Val Leu His Phe Gly Leu Leu Leu
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Gly Val Pro Ala Tyr Leu His Gly Leu Ser Asn Ala Ile Val Pro Phe
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Leu Ala Tyr Gly Ala Phe Gly Ser Phe Val Leu Cys Trp Phe Phe Ile
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Thr Lys Asn Asp Trp Gly Ala Trp Gln Ile Glu Thr Ser Ala Ser Trp
145                 150                 155                 160
Gly Asn Ala Phe Trp Ser Phe Phe Ser Gly Gly Leu Asn Leu Gln Ile
                165                 170                 175
Glu His His Leu Phe Pro Gly Met Ala His Asn Leu Tyr Pro Lys Met
            180                 185                 190
Val Pro Ile Ile Lys Asp Glu Cys Ala Lys Ala Gly Val Arg Tyr Thr
        195                 200                 205
Gly Tyr Gly Gly Tyr Thr Gly Leu Leu Pro Ile Thr Arg Asp Met Phe
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Ser Tyr Leu His Lys Cys Gly Arg Thr Ala Lys Leu Ala
225                 230                 235
<210>95
<211>1611
<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1611)
<223>Δ4去饱和酶
<400>95
atg tac ctc gga cgc ggc cgt ctc gag agc ggg acg acg cga ggg atg     48
Met Tyr Leu Gly Arg Gly Arg Leu Glu Ser Gly Thr Thr Arg Gly Met
1               5                   10                  15
atg cgg acg cac gcg cgg cga ccg tcg acg acg tcg aat ccg tgc gcg     96
Met Arg Thr His Ala Arg Arg Pro Ser Thr Thr Ser Asn Pro Cys Ala
            20                  25                  30
cgg tca cgc gtg cgt aag acg acg gag cga tcg ctc gcg cga gtg cga    144
Arg Ser Arg Val Arg Lys Thr Thr Glu Arg Ser Leu Ala Arg Val Arg
        35                  40                  45
cga tcg acg agt gag aag gga agc gcg ctc gtg ctc gag cga gag agc    192
Arg Ser Thr Ser Glu Lys Gly Ser Ala Leu Val Leu Glu Arg Glu Ser
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gaa cgg gag aag gag gag gga ggg aaa gcg cga gcg gag gga ttg cga    240
Glu Arg Glu Lys Glu Glu Gly Gly Lys Ala Arg Ala Glu Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
ttc caa cgc ccg gac gtc gcc gcg ccg ggg gga gcg gat cct tgg aac    288
Phe Gln Arg Pro Asp Val Ala Ala Pro Gly Gly Ala Asp Pro Trp Asn
                85                  90                  95
gac gag aag tgg aca aag acc aag tgg acg gta ttc aga gac gtc gcg    336
Asp Glu Lys Trp Thr Lys Thr Lys Trp Thr Val Phe Arg Asp Val Ala
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tac gat ctc gat cct ttc ttc gct cga cac ccc gga gga gac tgg ctc    384
Tyr Asp Leu Asp Pro Phe Phe Ala Arg His Pro Gly Gly Asp Trp Leu
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ctg aac ttg gcc gtg gga cga gac tgc acc gcg ctc atc gaa tcc tat    432
Leu Asn Leu Ala Val Gly Arg Asp Cys Thr Ala Leu Ile Glu Ser Tyr
    130                 135                 140
cac ttg cga cca gag gtg gcg acg gct cgt ttc aga atg ctg ccc aaa    480
His Leu Arg Pro Glu Val Ala Thr Ala Arg Phe Arg Met Leu Pro Lys
145                 150                 155                 160
ctc gag gat ttt ccc gtc gag gcc gtg ccc aag tcc ccg aga ccg aac    528
Leu Glu Asp Phe Pro Val Glu Ala Val Pro Lys Ser Pro Arg Pro Asn
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gat tcg ccg tta tac aac aac att cgc aac cga gtc cgc gaa gag ctc    576
Asp Ser Pro Leu Tyr Asn Asn Ile Arg Asn Arg Val Arg Glu Glu Leu
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Phe Pro Glu Glu Gly Lys Asn Met His Arg Gln Gly Gly Asp His Gly
        195                 200                 205
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Asp Gly Asp Asp Ser Gly Phe Arg Arg Leu Leu Leu Met Pro Cys Thr
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tat tcc ctt ccg ggg gtt cct ttc cgg ctg cct cct cgg gtc tcg cgg    720
Tyr Ser Leu Pro Gly Val Pro Phe Arg Leu Pro Pro Arg Val Ser Arg
225                 230                 235                 240
ggg cgt gga ttg gtc tca cga ttc agg cac tgc gcc aac cac ggc gcg    768
Gly Arg Gly Leu Val Ser Arg Phe Arg His Cys Ala Asn His Gly Ala
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Met Ser Pro Ser Pro Ala Val Asn Gly Val Leu Gly Leu Thr Asn Asp
            260                 265                 270
ctc atc ggc ggc tcg tcc ttg atg tgg aga tat cac cac caa gtc agc     864
Leu Ile Gly Gly Ser Ser Leu Met Trp Arg Tyr His His Gln Val Ser
        275                 280                 285
cac cac att cat tgc aac gac aac gcc atg gat caa gac gtg tac acg     912
His His Ile His Cys Asn Asp Asn Ala Met Asp Gln Asp Val Tyr Thr
    290                 295                 300
gcg atg cca tta ttg cgt ttc gac gct cgc cgg ccc aag tcc tgg tac     960
Ala Met Pro Leu Leu Arg Phe Asp Ala Arg Arg Pro Lys Ser Trp Tyr
305                 310                 315                 320
cat cgc ttc cag cag tgg tac atg ttt tta gcg ttc ccg ttg ttg cag    1008
His Arg Phe Gln Gln Trp Tyr Met Phe Leu Ala Phe Pro Leu Leu Gln
                325                 330                 335
gtt gcc ttc caa gtc gga gac att gcc gca ctg ttc acg cgt gat acc    1056
Val Ala Phe Gln Val Gly Asp Ile Ala Ala Leu Phe Thr Arg Asp Thr
            340                 345                 350
gaa ggc gct aag ctt cac ggg gcg acg acg tgg gag ctt acc acg gtt    1104
Glu Gly Ala Lys Leu His Gly Ala Thr Thr Trp Glu Leu Thr Thr Val
        355                 360                 365
gtc ctc ggt aag att gtg cac ttc ggt ctt ttg ttg ggg ccg ttg atg    1152
Val Leu Gly Lys Ile Val His Phe Gly Leu Leu Leu Gly Pro Leu Met
    370                 375                 380
aac cac gcg gtg agt tct gtt ttg ctg ggg atc gtc ggt ttc atg gcg    1200
Asn His Ala Val Ser Ser Val Leu Leu Gly Ile Val Gly Phe Met Ala
385                 390                 395                 400
tgc caa ggt ata gtt ctg gcg tgc acg ttt gct gtg agt cac aat gtc    1248
Cys Gln Gly Ile Val Leu Ala Cys Thr Phe Ala Val Ser His Asn Val
                405                 410                 415
gcg gag gcg aag ata cct gag gac acc gga gga gaa gcc tgg gag aga    1296
Ala Glu Ala Lys Ile Pro Glu Asp Thr Gly Gly Glu Ala Trp Glu Arg
            420                 425                 430
gat tgg ggt gtc cag cag ttg gtg act agc gcc gac tgg ggt gga aag    1344
Asp Trp Gly Val Gln Gln Leu Val Thr Ser Ala Asp Trp Gly Gly Lys
        435                 440                 445
ata ggt aac ttc ttc acg ggt ggc ctc aac ttg caa gtt gag cac cac    1392
Ile Gly Asn Phe Phe Thr Gly Gly Leu Asn Leu Gln Val Glu His His
    450                 455                 460
ttg ttt ccg gcg att tgc ttc gtc cac tac ccg gac atc gcg aag atc    1440
Leu Phe Pro Ala Ile Cys Phe Val His Tyr Pro Asp Ile Ala Lys Ile
465                 470                 475                 480
gtg aag gaa gaa gcg gcc aag ctc aac atc cct tac gcg tct tac agg    1488
Val Lys Glu Glu Ala Ala Lys Leu Asn Ile Pro Tyr Ala Ser Tyr Arg
                485                 490                 495
act ctt cct ggt att ttc gtc caa ttc tgg aga ttt atg aag gac atg    1536
Thr Leu Pro Gly Ile Phe Val Gln Phe Trp Arg Phe Met Lys Asp Met
            500                 505                 510
ggc acg gct gag caa att ggt gaa gtt cca ttg ccg aag att ccc aac    1584
Gly Thr Ala Glu Gln Ile Gly Glu Val Pro Leu Pro Lys Ile Pro Asn
        515                 520                 525
ccg cag ctc gcg ccg aag ctc gct tag                                1611
Pro Gln Leu Ala Pro Lys Leu Ala
    530                 535
<210>96
<211>536
<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>96
Met Tyr Leu Gly Arg Gly Arg Leu Glu Ser Gly Thr Thr Arg Gly Met
l               5                   10                  15
Met Arg Thr His Ala Arg Arg Pro Ser Thr Thr Ser Asn Pro Cys Ala
            20                  25                  30
Arg Ser Arg Val Arg Lys Thr Thr Glu Arg Ser Leu Ala Arg Val Arg
        35                  40                  45
Arg Ser Thr Ser Glu Lys Gly Ser Ala Leu Val Leu Glu Arg Glu Ser
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Lys Glu Glu Gly Gly Lys Ala Arg Ala Glu Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
Phe Gln Arg Pro Asp Val Ala Ala Pro Gly Gly Ala Asp Pro Trp Asn
                85                  90                  95
Asp Glu Lys Trp Thr Lys Thr Lys Trp Thr Val Phe Arg Asp Val Ala
            100                 105                 110
Tyr Asp Leu Asp Pro Phe Phe Ala Arg His Pro Gly Gly Asp Trp Leu
        115                 120                 125
Leu Asn Leu Ala Val Gly Arg Asp Cys Thr Ala Leu Ile Glu Ser Tyr
    130                 135                 140
His Leu Arg Pro Glu Val Ala Thr Ala Arg Phe Arg Met Leu Pro Lys
145                 150                 155                 160
Leu Glu Asp Phe Pro Val Glu Ala Val Pro Lys Ser Pro Arg Pro Asn
                165                 170                 175
Asp Ser Pro Leu Tyr Asn Asn Ile Arg Asn Arg Val Arg Glu Glu Leu
            180                 185                 190
Phe Pro Glu Glu Gly Lys Asn Met His Arg Gln Gly Gly Asp His Gly
        195                 200                 205
Asp Gly Asp Asp Ser Gly Phe Arg Arg Leu Leu Leu Met Pro Cys Thr
    210                 215                 220
Tyr Ser Leu Pro Gly Val Pro Phe Arg Leu Pro Pro Arg Val Ser Arg
225                 230                 235                 240
Gly Arg Gly Leu Val Ser Arg Phe Arg His Cys Ala Asn His Gly Ala
                245                 250                 255
Met Ser Pro Ser Pro Ala Val Asn Gly Val Leu Gly Leu Thr Asn Asp
            260                 265                 270
Leu Ile Gly Gly Ser Ser Leu Met Trp Arg Tyr His His Gln Val Ser
        275                 280                 285
His His Ile His Cys Asn Asp Asn Ala Met Asp Gln Asp Val Tyr Thr
    290                 295                 300
Ala Met Pro Leu Leu Arg Phe Asp Ala Arg Arg Pro Lys Ser Trp Tyr
305                 310                 315                 320
His Arg Phe Gln Gln Trp Tyr Met Phe Leu Ala Phe Pro Leu Leu Gln
                325                 330                 335
Val Ala Phe Gln Val Gly Asp Ile Ala Ala Leu Phe Thr Arg Asp Thr
            340                 345                 350
Glu Gly Ala Lys Leu His Gly Ala Thr Thr Trp Glu Leu Thr Thr Val
        355                 360                 365
Val Leu Gly Lys Ile Val His Phe Gly Leu Leu Leu Gly Pro Leu Met
    370                 375                 380
Asn His Ala Val Ser Ser Val Leu Leu Gly Ile Val Gly Phe Met Ala
385                 390                 395                 400
Cys Gln Gly Ile Val Leu Ala Cys Thr Phe Ala Val Ser His Asn Val
                405                 410                 415
Ala Glu Ala Lys Ile Pro Glu Asp Thr Gly Gly Glu Ala Trp Glu Arg
            420                 425                 430
Asp Trp Gly Val Gln Gln Leu Val Thr Ser Ala Asp Trp Gly Gly Lys
        435                 440                 445
Ile Gly Asn Phe Phe Thr Gly Gly Leu Asn Leu Gln Val Glu His His
    450                 455                 460
Leu Phe Pro Ala Ile Cys Phe Val His Tyr Pro Asp Ile Ala Lys Ile
465                 470                 475                 480
Val Lys Glu Glu Ala Ala Lys Leu Asn Ile Pro Tyr Ala Ser Tyr Arg
                485                 490                 495
Thr Leu Pro Gly Ile Phe Val Gln Phe Trp Arg Phe Met Lys Asp Met
            500                 505                 510
Gly Thr Ala Glu Gln Ile Gly Glu Val Pro Leu Pro Lys Ile Pro Asn
        515                 520                 525
Pro Gln Leu Ala Pro Lys Leu Ala
    530                 535
<210>97
<211>1455
<212>DNA
<213>假矮海链藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1455)
<223>Δ6去饱和酶
<400>97
atg gga aaa gga gga gac gca gcc gca gct acc aag cgt agt gga gca     48
Met Gly Lys Gly Gly Asp Ala Ala Ala Ala Thr Lys Arg Ser Gly Ala
1               5                   10                  15
ttg aaa ttg gcg gag aag ccg cag aag tac act tgg cag gag gtg aag     96
Leu Lys Leu Ala Glu Lys Pro Gln Lys Tyr Thr Trp Gln Glu Val Lys
            20                  25                  30
aag cac atc acc ccc gac gat gcc tgg gta gtc cac caa aac aaa gtc    144
Lys His Ile Thr Pro Asp Asp Ala Trp Val Val His Gln Asn Lys Val
        35                  40                  45
tac gac gtc tcc aac tgg tac gac cac ccc ggt gga gcc gtg gtg ttc    192
Tyr Asp Val Ser Asn Trp Tyr Asp His Pro Gly Gly Ala Val Val Phe
    50                  55                  60
acc cac gcc gga gac gac atg acg gac atc ttc gcc gcc ttc cac gcc    240
Thr His Ala Gly Asp Asp Met Thr Asp Ile Phe Ala Ala Phe His Ala
65                  70                  75                  80
caa ggc tct cag gcc atg atg aag aag ttt tac att gga gat ttg att    288
Gln Gly Ser Gln Ala Met Met Lys Lys Phe Tyr Ile Gly Asp Leu Ile
                85                  90                  95
ccg gag agt gtg gag cat aag gat caa aga cag ttg gat ttc gag aag    336
Pro Glu Ser Val Glu His Lys Asp Gln Arg Gln Leu Asp Phe Glu Lys
            100                 105                 110
gga tat cgt gat tta cgg gcc aag ctt gtc atg atg ggg atg ttc aag    384
Gly Tyr Arg Asp Leu Arg Ala Lys Leu Val Met Met Gly Met Phe Lys
        115                 120                 125
tcg agt aag atg tat tat gca tac aag tgc tcg ttc aat atg tgc atg    432
Ser Ser Lys Met Tyr Tyr Ala Tyr Lys Cys Ser Phe Asn Met Cys Met
    130                 135                 140
tgg ttg gtg gcg gtg gcc atg gtg tac tac tcg gac agt ttg gca atg    480
Trp Leu Val Ala Val Ala Met Val Tyr Tyr Ser Asp Ser Leu Ala Met
145                 150                 155                 160
cac att gga tcg gct ctc ttg ttg gga ttg ttc tgg cag cag tgt gga    528
His Ile Gly Ser Ala Leu Leu Leu Gly Leu Phe Trp Gln Gln Cys Gly
                165                 170                 175
tgg ctt gcg cac gac ttt ctt cac cac caa gtc ttt aag caa cga aag    576
Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His His Gln Val Phe Lys Gln Arg Lys
            180                 185                 190
tac gga gat ctc gtt ggc atc ttt tgg gga gat ctc atg cag ggg ttc    624
Tyr Gly Asp Leu Val Gly Ile Phe Trp Gly Asp Leu Met Gln Gly Phe
        195                 200                 205
tcg atg cag tgg tgg aag aac aag cac aat ggc cac cat gct gtt ccc    672
Ser Met Gln Trp Trp Lys Asn Lys His Asn Gly His His Ala Val Pro
    210                 215                 220
aac ttg cac aac tct tcc ttg gac agt cag gat ggt gat ccc gat att    720
Asn Leu His Asn Ser Ser Leu Asp Ser Gln Asp Gly Asp Pro Asp Ile
225                 230                 235                 240
gat acc atg cca ctc ctt gct tgg agt ctc aag cag gct cag agt ttc    768
Asp Thr Met Pro Leu Leu Ala Trp Ser Leu Lys Gln Ala Gln Ser Phe
                245                 250                 255
aga gag atc aat aag gga aag gac agt acc ttc gtc aag tac gct atc     816
Arg Glu Ile Asn Lys Gly Lys Asp Ser Thr Phe Val Lys Tyr Ala Ile
            260                 265                 270
aaa ttc cag gca ttc aca tac ttc ccc atc ctc ctc ttg gct cgc atc     864
Lys Phe Gln Ala Phe Thr Tyr Phe Pro Ile Leu Leu Leu Ala Arg Ile
        275                 280                 285
tct tgg ttg aat gaa tcc ttc aaa act gca ttc gga ctc gga gct gcc     912
Ser Trp Leu Asn Glu Ser Phe Lys Thr Ala Phe Gly Leu Gly Ala Ala
    290                 295                 300
tcg gag aat gcc aag ttg gag ttg gag aag cgt gga ctt cag tac cca     960
Ser Glu Asn Ala Lys Leu Glu Leu Glu Lys Arg Gly Leu Gln Tyr Pro
305                 310                 315                 320
ctt ttg gag aag ctt gga atc acc ctt cat tac act tgg atg ttc gtc    1008
Leu Leu Glu Lys Leu Gly Ile Thr Leu His Tyr Thr Trp Met Phe Val
                325                 330                 335
ctc tct tcc gga ttt gga agg tgg tct ctt cca tat tcc atc atg tat    1056
Leu Ser Ser Gly Phe Gly Arg Trp Ser Leu Pro Tyr Ser Ile Met Tyr
            340                 345                 350
ttc ttc act gcc aca tgc tcc tcg gga ctt ttc ctc gca ttg gtc ttt    1104
Phe Phe Thr Ala Thr Cys Ser Ser Gly Leu Phe Leu Ala Leu Val Phe
        355                 360                 365
gga ttg gga cac aac ggt atg tca gtg tac gat gcc acc acc cga cct    1152
Gly Leu Gly His Asn Gly Met Ser Val Tyr Asp Ala Thr Thr Arg Pro
    370                 375                 380
gac ttc tgg caa ctc caa gtc acc act aca cgt aac atc att ggt gga    1200
Asp Phe Trp Gln Leu Gln Val Thr Thr Thr Arg Asn Ile Ile Gly Gly
385                 390                 395                 400
cac ggc att ccc caa ttc ttt gtg gat tgg ttc tgc ggt gga ttg caa    1248
His Gly Ile Pro Gln Phe Phe Val Asp Trp Phe Cys Gly Gly Leu Gln
                405                 410                 415
tac caa gtg gat cac cac ctc ttc ccc atg atg cct aga aac aat atc    1296
Tyr Gln Val Asp His His Leu Phe Pro Met Met Pro Arg Asn Asn Ile
            420                 425                 430
gcg aaa tgc cac aag crt gtg gag tca ttc tgt aag gag tgg ggt gtg    1344
Ala Lys Cys His Lys Leu Val Glu Ser Phe Cys Lys Glu Trp Gly Val
        435                 440                 445
aag tac cat gag gcc gat atg tgg gat ggt acc gtg gaa gtg ttg caa    1392
Lys Tyr His Glu Ala Asp Met Trp Asp Gly Thr Val Glu Val Leu Gln
    450                 455                 460
cat ctc tcc aag gtg tcg gat gat ttc ctt gtg gag atg gtg aag gat    1440
His Leu Ser Lys Val Ser Asp Asp Phe Leu Val Glu Met Val Lys Asp
465                 470                 475                 480
ttc cct gcc atg taa                                                1455
Phe Pro Ala Met
<210>98
<211>484
<212>PRT
<213>假矮海链藻
<400>98
Met Gly Lys Gly Gly Asp Ala Ala Ala Ala Thr Lys Arg Ser Gly Ala
1               5                   10                  15
Leu Lys Leu Ala Glu Lys Pro Gln Lys Tyr Thr Trp Gln Glu Val Lys
            20                  25                  30
Lys His Ile Thr Pro Asp Asp Ala Trp Val Val His Gln Asn Lys Val
        35                  40                  45
Tyr Asp Val Ser Asn Trp Tyr Asp His Pro Gly Gly Ala Val Val Phe
    50                  55                  60
Thr His Ala Gly Asp Asp Met Thr Asp Ile Phe Ala Ala Phe His Ala
65                  70                  75                  80
Gln Gly Ser Gln Ala Met Met Lys Lys Phe Tyr Ile Gly Asp Leu Ile
                85                  90                  95
Pro Glu Ser Val Glu His Lys Asp Gln Arg Gln Leu Asp Phe Glu Lys
            100                 105                 110
Gly Tyr Arg Asp Leu Arg Ala Lys Leu Val Met Met Gly Met Phe Lys
        115                 120                 125
Ser Ser Lys Met Tyr Tyr Ala Tyr Lys Cys Ser Phe Asn Met Cys Met
    130                 135                 140
Trp Leu Val Ala Val Ala Met Val Tyr Tyr Ser Asp Ser Leu Ala Met
145                 150                 155                 160
His Ile Gly Ser Ala Leu Leu Leu Gly Leu Phe Trp Gln Gln Cys Gly
                165                 170                 175
Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His His Gln Val Phe Lys Gln Arg Lys
            180                 185                 190
Tyr Gly Asp Leu Val Gly Ile Phe Trp Gly Asp Leu Met Gln Gly Phe
        195                 200                 205
Ser Met Gln Trp Trp Lys Asn Lys His Asn Gly His His Ala Val Pro
    210                 215                 220
Asn Leu His Asn Ser Ser Leu Asp Ser Gln Asp Gly Asp Pro Asp Ile
225                 230                 235                 240
Asp Thr Met Pro Leu Leu Ala Trp Ser Leu Lys Gln Ala Gln Ser Phe
                245                 250                 255
Arg Glu Ile Asn Lys Gly Lys Asp Ser Thr Phe Val Lys Tyr Ala Ile
            260                 265                 270
Lys Phe Gln Ala Phe Thr Tyr Phe Pro Ile Leu Leu Leu Ala Arg Ile
        275                 280                 285
Ser Trp Leu Asn Glu Ser Phe Lys Thr Ala Phe Gly Leu Gly Ala Ala
    290                 295                 300
Ser Glu Asn Ala Lys Leu Glu Leu Glu Lys Arg Gly Leu Gln Tyr Pro
305                 310                 315                 320
Leu Leu Glu Lys Leu Gly Ile Thr Leu His Tyr Thr Trp Met Phe Val
                325                 330                 335
Leu Ser Ser Gly Phe Gly Arg Trp Ser Leu Pro Tyr Ser Ile Met Tyr
            340                 345                 350
Phe Phe Thr Ala Thr Cys Ser Ser Gly Leu Phe Leu Ala Leu Val Phe
        355                 360                 365
Gly Leu Gly His Asn Gly Met Ser Val Tyr Asp Ala Thr Thr Arg Pro
    370                 375                 380
Asp Phe Trp Gln Leu Gln Val Thr Thr Thr Arg Asn Ile Ile Gly Gly
385                 390                 395                 400
His Gly Ile Pro Gln Phe Phe Val Asp Trp Phe Cys Gly Gly Leu Gln
                405                 410                 415
Tyr Gln Val Asp His His Leu Phe Pro Met Met Pro Arg Asn Asn Ile
            420                 425                 430
Ala Lys Cys His Lys Leu Val Glu Ser Phe Cys Lys Glu Trp Gly Val
        435                 440                 445
Lys Tyr His Glu Ala Asp Met Trp Asp Gly Thr Val Glu Val Leu Gln
    450                 455                 460
His Leu Ser Lys Val Ser Asp Asp Phe Leu Val Glu Met Val Lys Asp
465                 470                 475                 480
Phe Pro Ala Met
<210>99
<211>1431
<212>DNA
<213>假矮海链藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1431)
<223>Δ5去饱和酶
<400>99
atg ccc ccc aac gcc gat atc tcc cgc atc cgc aac cgc atc ccc acc     48
Met Pro Pro Asn Ala Asp Ile Ser Arg Ile Arg Asn Arg Ile Pro Thr
l               5                   10                  15
aaa aca ggt acc gtt gcc tct gcc gac aac aac gac ccc gcc gcc caa     96
Lys Thr Gly Thr Val Ala Ser Ala Asp Ash Asn Asp Pro Ala Thr Gln
            20                  25                  30
tcc gtc cga acc ctc aaa tct ctc aag ggc aac gag gtc gtc atc aac    144
Ser Val Arg Thr Leu Lys Ser Leu Lys Gly Asn Glu Val Val Ile Asn
        35                  40                  45
ggc aca att tat gac att gct gac ttt gtc cat cct gga gga gag gtt    192
Gly Thr Ile Tyr Asp Ile Ala Asp Phe Val His Pro Gly Gly Glu Val
    50                  55                  60
gtc aag ttc ttt ggt ggg aat gat gtt act att cag tat aat atg att    240
Val Lys Phe Phe Gly Gly Ash Asp Val Thr Ile Gln Tyr Asn Met Ile
65                  70                  75                  80
cat ccg tat cat acg ggg aaa cat ctg gag aag atg aag gct gtt gga    288
His Pro Tyr His Thr Gly Lys His Leu Glu Lys Met Lys Ala Val Gly
                85                  90                  95
aag gtt gta gat tgg cag tcg gac tac aag ttc gac acc ccc ttt gaa    336
Lys Val Val Asp Trp Gln Ser Asp Tyr Lys Phe Asp Thr Pro Phe Glu
            100                 105                 110
cga gag atc aaa tca gaa gtg ttc aag atc gta cgt cgc ggg cgt gag    384
Arg Glu Ile Lys Ser Glu Val Phe Lys Ile Val Arg Arg Gly Arg Glu
        115                 120                 125
ttc ggc aca aca ggc tac ttc ctc cgt gcc ttt ttc tac atc gct ctc    432
Phe Gly Thr Thr Gly Tyr Phe Leu Arg Ala Phe Phe Tyr Ile Ala Leu
    130                 135                 140
ttc ttc acc atg cga tac act ttc gcc aca tgc acc acc ttc acc acc    480
Phe Phe Thr Met Gln Tyr Thr Phe Ala Thr Cys Thr Thr Phe Thr Thr
145                 150                 155                 160
tac gat cac tgg tat cag agt ggt gta ttc atc gca att gtg ttt ggt     528
Tyr Asp His Trp Tyr Gln Ser Gly Val Phe Ile Ala Ile Val Phe Gly
                165                 170                 175
att tca cag gca ttc att ggg ttg aat gtc cag cac gat gcc aat cac     576
Ile Ser Gln Ala Phe Ile Gly Leu Asn Val Gln His Asp Ala Asn His
            180                 185                 190
gga gct gcc agt aag cgt ccc tgg gtg aat gac ttg ttg gga ttt gga     624
Gly Ala Ala Ser Lys Arg Pro Trp Val Asn Asp Leu Leu Gly Phe Gly
        195                 200                 205
acg gat ttg att gga tct aac aaa tgg aat tgg atg gca cag cat tgg     672
Thr Asp Leu Ile Gly Ser Asn Lys Trp Asn Trp Met Ala Gln His Trp
    210                 215                 220
act cat cac gct tac act aac cat agt gag aag gat ccc gat agc ttc     720
Thr His His Ala Tyr Thr Asn His Ser Glu Lys Asp Pro Asp Ser Phe
225                 230                 235                 240
agc tcg gaa cct atg ttt gca ttc aat gac tat ccc att gga cac ccg     768
Ser Ser Glu Pro Met Phe Ala Phe Asn Asp Tyr Pro Ile Gly His Pro
                245                 250                 255
aag aga aag tgg tgg cat agg ttc cag gga ggg tac ttc ctc ttc atg     816
Lys Arg Lys Trp Trp His Arg Phe Gln Gly Gly Tyr Phe Leu Phe Met
            260                 265                 270
ctt gga ctt tac tgg ctc tcg act gta ttc aat ccg caa ttc att gat     864
Leu Gly Leu Tyr Trp Leu Ser Thr Val Phe Asn Pro Gln Phe Ile Asp
        275                 280                 285
ctt cgt caa cgt ggg gct cag tac gtc gga att caa atg gag aat gat     912
Leu Arg Gln Arg Gly Ala Gln Tyr Val Gly Ile Gln Met Glu Asn Asp
    290                 295                 300
ttc att gtc aag agg agg aag tac gcc gtt gca ttg agg atg atg tac     960
Phe Ile Val Lys Arg Arg Lys Tyr Ala Val Ala Leu Arg Met Met Tyr
305                 310                 315                 320
att tac ttg aac att gtc agc ccc ttc atg aac aat ggt ttg agc tgg    1008
Ile Tyr Leu Asn Ile Val Ser Pro Phe Met Asn Asn Gly Leu Ser Trp
                325                 330                 335
tct acc ttt gga atc atc atg ttg atg gga atc agc gag agt ctc act    1056
Ser Thr Phe Gly Ile Ile Met Leu Met Gly Ile Ser Glu Ser Leu Thr
            340                 345                 350
ctc agt gtg ctc ttc tcg ttg tct cac aac ttc atc aat tcg gat cgt    1104
Leu Ser Val Leu Phe Ser Leu Ser His Asn Phe Ile Asn Ser Asp Arg
        355                 360                 365
gat cct acg gct gac ttc aaa aag acc gga gaa caa gtg tgc tgg ttc    1152
Asp Pro Thr Ala Asp Phe Lys Lys Thr Gly Glu Gln Val Cys Trp Phe
    370                 375                 380
aag tcg cag gtg gag act tcg tct acc tat ggg ggt ttt att tcc gga    1200
Lys Ser Gln Val Glu Thr Ser Ser Thr Tyr Gly Gly Phe Ile Ser Gly
385                 390                 395                 400
tgt ctt acg gga gga ctc aac ttt cag gtg gaa cat cat ctc ttt ccc    1248
Cys Leu Thr Gly Gly Leu Asn Phe Gln Val Glu His His Leu Phe Pro
                405                 410                 415
cgt atg agc agt gct tgg tat cct tac att gca cct acg gtt cgt gag    1296
Arg Met Ser Ser Ala Trp Tyr Pro Tyr Ile Ala Pro Thr Val Arg Glu
            420                 425                 430
gtt tgc aag aag cac ggg gtg aac tac gct tat tat cct tgg att ggg    1344
Val Cys Lys Lys His Gly Val Asn Tyr Ala Tyr Tyr Pro Trp Ile Gly
        435                 440                 445
cag aat ttg gta tca aca ttc aaa tac atg cat cgc gct ggt agt gga    1392
Gln Asn Leu Val Ser Thr Phe Lys Tyr Met His Arg Ala Gly Ser Gly
    450                 455                 460
gcc aac tgg gag ctc aag ccg ttg tct gga agt gcc taa                1431
Ala Asn Trp Glu Leu Lys Pro Leu Ser Gly Ser Ala
465                 470                 475
<210>100
<211>476
<212>PRT
<213>假矮海链藻
<400>100
Met Pro Pro Asn Ala Asp Ile Ser Arg Ile Arg Asn Arg Ile Pro Thr
1               5                   10                  15
Lys Thr Gly Thr Val Ala Ser Ala Asp Asn Asn Asp Pro Ala Thr Gln
            20                  25                  30
Ser Val Arg Thr Leu Lys Ser Leu Lys Gly Asn Glu Val Val Ile Asn
        35                  40                  45
Gly Thr Ile Tyr Asp Ile Ala Asp Phe Val His Pro Gly Gly Glu Val
    50                  55                  60
Val Lys Phe Phe Gly Gly Asn Asp Val Thr Ile Gln Tyr Asn Met Ile
65                  70                  75                  80
His Pro Tyr His Thr Gly Lys His Leu Glu Lys Met Lys Ala Val Gly
                85                  90                  95
Lys Val Val Asp Trp Gln Ser Asp Tyr Lys Phe Asp Thr Pro Phe Glu
            100                 105                 110
Arg Glu Ile Lys Ser Glu Val Phe Lys Ile Val Arg Arg Gly Arg Glu
        115                 120                 125
Phe Gly Thr Thr Gly Tyr Phe Leu Arg Ala Phe Phe Tyr Ile Ala Leu
    130                 135                 140
Phe Phe Thr Met Gln Tyr Thr Phe Ala Thr Cys Thr Thr Phe Thr Thr
145                 150                 155                 160
Tyr Asp His Trp Tyr Gln Ser Gly Val Phe Ile Ala Ile Val Phe Gly
                165                 170                 175
Ile Ser Gln Ala Phe Ile Gly Leu Asn Val Gln His Asp Ala Asn His
            180                 185                 190
Gly Ala Ala Ser Lys Arg Pro Trp Val Asn Asp Leu Leu Gly Phe Gly
        195                 200                 205
Thr Asp Leu Ile Gly Ser Asn Lys Trp Asn Trp Met Ala Gln His Trp
    210                 215                 220
Thr His His Ala Tyr Thr Asn His Ser Glu Lys Asp Pro Asp Ser Phe
225                 230                 235                 240
Ser Ser Glu Pro Met Phe Ala Phe Asn Asp Tyr Pro Ile Gly His Pro
                245                 250                 255
Lys Arg Lys Trp Trp His Arg Phe Gln Gly Gly Tyr Phe Leu Phe Met
            260                 265                 270
Leu Gly Leu Tyr Trp Leu Ser Thr Val Phe Asn Pro Gln Phe Ile Asp
        275                 280                 285
Leu Arg Gln Arg Gly Ala Gln Tyr Val Gly Ile Gln Met Glu Asn Asp
    290                 295                 300
Phe Ile Val Lys Arg Arg Lys Tyr Ala Val Ala Leu Arg Met Met Tyr
305                 310                 315                 320
Ile Tyr Leu Asn Ile Val Ser Pro Phe Met Asn Asn Gly Leu Ser Trp
                325                 330                 335
Ser Thr Phe Gly Ile Ile Met Leu Met Gly Ile Ser Glu Ser Leu Thr
            340                 345                 350
Leu Ser Val Leu Phe Ser Leu Ser His Asn Phe Ile Asn Ser Asp Arg
        355                 360                 365
Asp Pro Thr Ala Asp Phe Lys Lys Thr Gly Glu Gln Val Cys Trp Phe
    370                 375                 380
Lys Ser Gln Val Glu Thr Ser Ser Thr Tyr Gly Gly Phe Ile Ser Gly
385                 390                 395                 400
Cys Leu Thr Gly Gly Leu Asn Phe Gln Val Glu His His Leu Phe Pro
                405                 410                 415
Arg Met Ser Ser Ala Trp Tyr Pro Tyr Ile Ala Pro Thr Val Arg Glu
            420                 425                 430
Val Cys Lys Lys His Gly Val Asn Tyr Ala Tyr Tyr Pro Trp Ile Gly
        435                 440                 445
Gln Asn Leu Val Ser Thr Phe Lys Tyr Met His Arg Ala Gly Ser Gly
    450                 455                 460
Ala Asn Trp Glu Leu Lys Pro Leu Ser Gly Ser Ala
465                 470                 475
<210>101
<211>1449
<212>DNA
<213>假矮海链藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1449)
<223>Δ5去饱和酶
<400>101
atg cca ccc aac gcc gag gtc aaa aac ctc cgt tca cgt tcc atc cca     48
Met Pro Pro Asn Ala Glu Val Lys Asn Leu Arg Ser Arg Ser Ile Pro
1               5                   10                  15
acg aag aag tcc agt tca tcg tca tcc acc gcg aac gac gat ccg gct     96
Thr Lys Lys Ser Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ala Asn Asp Asp Pro Ala
            20                  25                  30
acc caa tcc acc tca cct gtg aac cga acc ctc aag tct ttg aat gga    144
Thr Gln Ser Thr Ser Pro Val Asn Arg Thr Leu Lys Ser Leu Asn Gly
        35                  40                  45
aac gaa ata gct att gac ggt gtc atc tat gat att gat ggc ttt gtc    192
Asn Glu IIe Ala Ile Asp Gly Val Ile Tyr Asp Ile Asp Gly Phe Val
    50                  55                  60
cat cct gga gga gag gtt att agc ttc ttt gga ggc aac gat gtg act    240
His Pro Gly Gly Glu Val Ile Ser Phe Phe Gly Gly Asn Asp Val Thr
65                  70                  75                  80
gta cag tac aaa atg att cat ccg tat cat aat agt aag cat ctc gag    288
Val Gln Tyr Lys Met Ile His Pro Tyr His Asn Ser Lys His Leu Glu
                85                  90                  95
aag atg aga gcc gtt gga aag att gca gac tac tcc aca gag tac aag    336
Lys Met Arg Ala Val Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Ser Thr Glu Tyr Lys
            100                 105                 110
ttc gac aca ccc ttt gaa cga gag atc aaa tcc gaa gtg ttc aaa atc    384
Phe Asp Thr Pro Phe Glu Arg Glu Ile Lys Ser Glu Val Phe Lys Ile
        115                 120                 125
gtc cgt cga gga cgt gaa ttc ggt aca aca gga tat ttc ctc cgt gcc    432
Val Arg Arg Gly Arg Glu Phe Gly Thr Thr Gly Tyr Phe Leu Arg Ala
    130                 135                 140
ttc ttc tac att gct ctc ttc ttc acc atg caa tac acc ttc gcc aca    480
Phe Phe Tyr Ile Ala Leu Phe Phe Thr Met Gln Tyr Thr Phe Ala Thr
145                 150                 155                 160
tgc act acc ttc acc acc tac gat cat tgg tat caa agt ggt gta ttc    528
Cys Thr Thr Phe Thr Thr Tyr Asp His Trp Tyr Gln Ser Gly Val Phe
                165                 170                 175
atc gcc att gtg ttt ggt atc tca caa gct ttc att ggg ttg aat gta    576
Ile Ala Ile Val Phe Gly Ile Ser Gln Ala Phe Ile Gly Leu Asn Val
            180                 185                 190
caa cat gat gcc aat cac gga gct gct agc aaa cga cct tgg gtg aat    624
Gln His Asp Ala Asn His Gly Ala Ala Ser Lys Arg Pro Trp Val Asn
        195                 200                 205
gat ctc ctt gga tct gga gct gat ctc atc ggt gga tgc aaa tgg aac    672
Asp Leu Leu Gly Ser Gly Ala Asp Leu Ile Gly Gly Cys Lys Trp Asn
    210                 215                 220
tgg ttg gct cag cat tgg act cat cat gcg tat acc aat cac gct gat    720
Trp Leu Ala Gln His Trp Thr His His Ala Tyr Thr Asn His Ala Asp
225                 230                 235                 240
aaa gat cct gat agc ttt agt tcc gag ccg gtc ttc aac ttt aac gat    768
Lys Asp Pro Asp Ser Phe Ser Ser Glu Pro Val Phe Asn Phe Asn Asp
                245                 250                 255
tat ccc att ggt cac ccc aaa aga aag tgg tgg cat agg ttc caa ggg    816
Tyr Pro Ile Gly His Pro Lys Arg Lys Trp Trp His Arg Phe Gln Gly
            260                 265                 270
ctc tac ttc cta atc atg ctg agt ttc tat tgg gta tcg atg gta ttc     864
Leu Tyr Phe Leu Ile Met Leu Ser Phe Tyr Trp Val Ser Met Val Phe
        275                 280                 285
aac cca caa gtt atc gac ctc cgt cat gct gga gct gcc tac gtt gga     912
Asn Pro Gln Val Ile Asp Leu Arg His Ala Gly Ala Ala Tyr Val Gly
    290                 295                 300
ttt cag atg gag aac gac ttt atc gtc aaa cgg aga aag tat gca atg     960
Phe Gln Met Glu Asn Asp Phe Ile Val Lys Arg Arg Lys Tyr Ala Met
305                 310                 315                 320
gca ctt cgt gca atg tac ttc tat ttc aac atc tat tgt ccg att gtc    1008
Ala Leu Arg Ala Met Tyr Phe Tyr Phe Asn Ile Tyr Cys Pro Ile Val
                325                 330                 335
aac aat gga ttg act tgg tcg aca gtt gga atc atc ctc tta atg gga    1056
Asn Asn Gly Leu Thr Trp Ser Thr Val Gly Ile Ile Leu Leu Met Gly
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gtt agc gaa agc ttc atg ctc tcc ggt cta ttc gta ctc tca cac aac    1104
Val Ser Glu Ser Phe Met Leu Ser Gly Leu Phe Val Leu Ser His Asn
        355                 360                 365
ttt gaa aat tcc gaa cgt gat cct acc tct gag tat cgc aag act ggt    1152
Phe Glu Asn Ser Glu Arg Asp Pro Thr Ser Glu Tyr Arg Lys Thr Gly
    370                 375                 380
gag caa gta tgt tgg ttc aag tct caa gtg gag act tct tct acc tac    1200
Glu Gln Val Cys Trp Phe Lys Ser Gln Val Glu Thr Ser Ser Thr Tyr
385                 390                 395                 400
gga ggt atc gtt gct ggg tgt ctc act ggt gga ctc aac ttt caa gtg    1248
Gly Gly Ile Val Ala Gly Cys Leu Thr Gly Gly Leu Asn Phe Gln Val
                405                 410                 415
gag cat cat ttg ttc ccg agg atg agc agt gct tgg tat cct ttc atc    1296
Glu His His Leu Phe Pro Arg Met Ser Ser Ala Trp Tyr Pro Phe Ile
            420                 425                 430
gcg ccg aag gtt aga gag att tgt aag aag cat gga gtt aga tac gct    1344
Ala Pro Lys Val Arg Glu Ile Cys Lys Lys His Gly Val Arg Tyr Ala
        435                 440                 445
tac tat ccg tac atc tgg cag aac ttg cat tct acc gtg agt tac atg    1392
Tyr Tyr Pro Tyr Ile Trp Gln Asn Leu His Ser Thr Val Ser Tyr Met
    450                 455                 460
cat ggg acg gga acg gga gct aga tgg gag ctt cag ccg ttg tct gga    1440
His Gly Thr Gly Thr Gly Ala Arg Trp Glu Leu Gln Pro Leu Ser Gly
465                 470                 475                 480
agg gcg tag                                                        1449
Arg Ala
<210>102
<211>482
<212>PRT
<213>假矮海链藻
<400>102
Met Pro Pro Asn Ala Glu Val Lys Asn Leu Arg Ser Arg Ser Ile Pro
1               5                   10                  15
Thr Lys Lys Ser Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ala Asn Asp Asp Pro Ala
            20                  25                  30
Thr Gln Ser Thr Ser Pro Val Asn Arg Thr Leu Lys Ser Leu Asn Gly
        35                  40                  45
Asn Glu Ile Ala Ile Asp Gly Val Ile Tyr Asp Ile Asp Gly Phe Val
    50                  55                  60
His Pro Gly Gly Glu Val Ile Ser Phe Phe Gly Gly Asn Asp Val Thr
65                  70                  75                  80
Val Gln Tyr Lys Met Ile His Pro Tyr His Asn Ser Lys His Leu Glu
                85                  90                  95
Lys Met Arg Ala Val Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Ser Thr Glu Tyr Lys
            100                 105                 110
Phe Asp Thr Pro Phe Glu Arg Glu Ile Lys Ser Glu Val Phe Lys Ile
        115                 120                 125
Val Arg Arg Gly Arg Glu Phe Gly Thr Thr Gly Tyr Phe Leu Arg Ala
    130                 135                 140
Phe Phe Tyr Ile Ala Leu Phe Phe Thr Met Gln Tyr Thr Phe Ala Thr
145                 150                 155                 160
Cys Thr Thr Phe Thr Thr Tyr Asp His Trp Tyr Gln Ser Gly Val Phe
                165                 170                 175
Ile Ala Ile Val Phe Gly Ile Ser Gln Ala Phe Ile Gly Leu Asn Val
            180                 185                 190
Gln His Asp Ala Asn His Gly Ala Ala Ser Lys Arg Pro Trp Val Asn
        195                 200                 205
Asp Leu Leu Gly Ser Gly Ala Asp Leu Ile Gly Gly Cys Lys Trp Asn
    210                 215                 220
Trp Leu Ala Gln His Trp Thr His His Ala Tyr Thr Asn His Ala Asp
225                 230                 235                 240
Lys Asp Pro Asp Ser Phe Ser Ser Glu Pro Val Phe Asn Phe Asn Asp
                245                 250                 255
Tyr Pro Ile Gly His Pro Lys Arg Lys Trp Trp His Arg Phe Gln Gly
            260                 265                 270
Leu Tyr Phe Leu Ile Met Leu Ser Phe Tyr Trp Val Ser Met Val Phe
        275                 280                 285
Asn Pro Gln Val Ile Asp Leu Arg His Ala Gly Ala Ala Tyr Val Gly
    290                 295                 300
Phe Gln Met Glu Asn Asp Phe Ile Val Lys Arg Arg Lys Tyr Ala Met
305                 310                 315                 320
Ala Leu Arg Ala Met Tyr Phe Tyr Phe Asn Ile Tyr Cys Pro Ile Val
                325                 330                 335
Asn Asn Gly Leu Thr Trp Ser Thr Val Gly Ile Ile Leu Leu Met Gly
            340                 345                 350
Val Ser Glu Ser Phe Met Leu Ser Gly Leu Phe Val Leu Ser His Asn
        355                 360                 365
Phe Glu Asn Ser Glu Arg Asp Pro Thr Ser Glu Tyr Arg Lys Thr Gly
    370                 375                 380
Glu Gln Val Cys Trp Phe Lys Ser Gln Val Glu Thr Ser Ser Thr Tyr
385                 390                 395                 400
Gly Gly Ile Val Ala Gly Cys Leu Thr Gly Gly Leu Asn Phe Gln Val
                405                 410                 415
Glu His His Leu Phe Pro Arg Met Ser Ser Ala Trp Tyr Pro Phe Ile
            420                 425                 430
Ala Pro Lys Val Arg Glu Ile Cys Lys Lys His Gly Val Arg Tyr Ala
        435                 440                 445
Tyr Tyr Pro Tyr Ile Trp Gln Asn Leu His Ser Thr Val Ser Tyr Met
    450                 455                 460
His Gly Thr Gly Thr Gly Ala Arg Trp Glu Leu Gln Pro Leu Ser Gly
465                 470                 475                 480
Arg Ala
<210>103
<211>1512
<212>DNA
<213>假矮海链藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1512)
<223>Δ4去饱和酶
<400>103
atg tgc aac ggc aac ctc cca gca tcc acc gca cag ctc aag tcc acc     48
Met Cys Asn Gly Asn Leu Pro Ala Ser Thr Ala Gln Leu Lys Ser Thr
1               5                   10                  15
tcg aag ccc cag cag caa cat gag cat cgc acc atc tcc aag tcc gag     96
Ser Lys Pro Gln Gln Gln His Glu His Arg Thr Ile Ser Lys Ser Glu
            20                  25                  30
ctc gcc caa cac aac acg ccc aaa tca gca tgg tgt gcc gtc cac tcc    144
Leu Ala Gln His Asn Thr Pro Lys Ser Ala Trp Cys Ala Val His Ser
        35                  40                  45
act ccc gcc acc gac cca tcc cac tcc aac aac aaa caa cac gca cac    192
Thr Pro Ala Thr Asp Pro Ser His Ser Asn Asn Lys Gln His Ala His
    50                  55                  60
cta gtc ctc gac att acc gac ttt gcg tcc cgc cat cca ggg gga gac    240
Leu Val Leu Asp Ile Thr Asp Phe Ala Ser Arg His Pro Gly Gly Asp
65                  70                  75                  80
ctc atc ctc ctc gct tcc ggc aaa gac gcc tcg gtg ctg ttt gaa aca    288
Leu Ile Leu Leu Ala Ser Gly Lys Asp Ala Ser Val Leu Phe Glu Thr
                85                  90                  95
tac cat cca cgt gga gtt ccg acg tct ctc att caa aag ctg cag att    336
Tyr His Pro Arg Gly Val Pro Thr Ser Leu Ile Gln Lys Leu Gln Ile
            100                 105                 110
gga gtg atg gag gag gag gcg ttt cgg gat tcg ttt tac agt tgg act    384
Gly Val Met Glu Glu Glu Ala Phe Arg Asp Ser Phe Tyr Ser Trp Thr
        115                 120                 125
gat tct gac ttt tat act gtg ttg aag agg agg gtt gtg gag cgg ttg    432
Asp Ser Asp Phe Tyr Thr Val Leu Lys Arg Arg Val Val Glu Arg Leu
    130                 135                 140
gag gag agg ggg ttg gac agg agg gga tcg aaa gag att tgg atc aag    480
Glu Glu Arg Gly Leu Asp Arg Arg Gly Ser Lys Glu Ile Trp Ile Lys
145                 150                 155                 160
gct ttg ttc ttg ttg gtt gga ttt tgg tac tgt ttg tac aag atg tat    528
Ala Leu Phe Leu Leu Val Gly Phe Trp Tyr Cys Leu Tyr Lys Met Tyr
                165                 170                 175
act acg tcg gat atc gat cag tac ggt att gcc att gcc tat tct att     576
Thr Thr Ser Asp Ile Asp Gln Tyr Gly Ile Ala Ile Ala Tyr Ser Ile
            180                 185                 190
gga atg gga acc ttt gcg gca ttc atc ggc acg tgt att caa cac gat     624
Gly Met Gly Thr Phe Ala Ala Phe Ile Gly Thr Cys Ile Gln His Asp
        195                 200                 205
gga aat cac ggt gca ttc gct cag aac aag tta ctc aac aag ttg gct     672
Gly Asn His Gly Ala Phe Ala Gln Asn Lys Leu Leu Asn Lys Leu Ala
    210                 215                 220
ggg tgg acg ttg gat atg att ggt gcg agt gcg ttt acg tgg gag ctt     720
Gly Trp Thr Leu Asp Met Ile Gly Ala Ser Ala Phe Thr Trp Glu Leu
225                 230                 235                 240
cag cac atg ctg ggg cat cat cca tat acg aat gtg ttg gat ggg gtg     768
Gln His Met Leu Gly His His Pro Tyr Thr Asn Val Leu Asp Gly Val
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gag gag gag agg aag gag agg ggg gag gat gtt gct ttg gaa gaa aag     816
Glu Glu Glu Arg Lys Glu Arg Gly Glu Asp Val Ala Leu Glu Glu Lys
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gat cag gat ttt gaa gtt gcc aca tcc gga cga tta tat cat att gat     864
Asp Gln Asp Phe Glu Val Ala Thr Ser Gly Arg Leu Tyr His Ile Asp
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gcc aat gta cgt tat ggt tcg gta tgg aat gtc atg agg ttt tgg gct     912
Ala Asn Val Arg Tyr Gly Ser Val Trp Asn Val Met Arg Phe Trp Ala
    290                 295                 300
atg aag gtc att acg atg gga tat atg atg gga tta cca atc tac ttt     960
Met Lys Val Ile Thr Met Gly Tyr Met Met Gly Leu Pro Ile Tyr Phe
305                 310                 315                 320
cat gga gta ctg agg gga gtt gga ttg ttt gtt att ggg cat ttg gcg    1008
His Gly Val Leu Arg Gly Val Gly Leu Phe Val Ile Gly His Leu Ala
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tgt gga gag ttg ttg gcg acg atg ttt att gtg aat cac gtc att gag    1056
Cys Gly Glu Leu Leu Ala Thr Met Phe Ile Val Asn His Val Ile Glu
            340                 345                 350
ggt gtg agt tat gga acg aag gat ttg gtt ggt ggt gcg agt cat gta    1104
Gly Val Ser Tyr Gly Thr Lys Asp Leu Val Gly Gly Ala Ser His Val
        355                 360                 365
gat gag aag aag att gtc aag cca acg act gta ttg gga gat aca cca    1152
Asp Glu Lys Lys Ile Val Lys Pro Thr Thr Val Leu Gly Asp Thr Pro
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atg gta aag act cgc gag gag gca ttg aaa agc aac agc aat aac aac    1200
Met Val Lys Thr Arg Glu Glu Ala Leu Lys Ser Asn Ser Asn Asn Asn
385                 390                 395                 400
aag aag aag gga gag aag aac tcg gta cca tcc gtt cca ttc aac gac    1248
Lys Lys Lys Gly Glu Lys Asn Ser Val Pro Ser Val Pro Phe Asn Asp
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tgg gca gca gtc caa tgc cag acc tcc gtg aat tgg tct cca ggc tca    1296
Trp Ala Ala Val Gln Cys Gln Thr Ser Val Asn Trp Ser Pro Gly Ser
            420                 425                 430
tgg ttc tgg aat cac ttt tct ggg gga ctc tct cat cag att gag cat    1344
Trp Phe Trp Asn His Phe Ser Gly Gly Leu Ser His Gln Ile Glu His
        435                 440                 445
cac ttg ttc ccc agc att tgt cat aca aac tac tgt cat atc cag gat    1392
His Leu Phe Pro Ser Ile Cys His Thr Asn Tyr Cys His Ile Gln Asp
    450                 455                 460
gtt gtg gag agt acg tgt gct gag tac gga gtt ccg tat cag agt gag    1440
Val Val Glu Ser Thr Cys Ala Glu Tyr Gly Val Pro Tyr Gln Ser Glu
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agt aat ttg ttt gtt gct tat gga aag atg att agt cat ttg aag ttt    1488
Ser Asn Leu Phe Val Ala Tyr Gly Lys Met Ile Ser His Leu Lys Phe
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Leu Gly Lys Ala Lys Cys Glu
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<210>104
<211>503
<212>PRT
<213>假矮海链藻
<400>104
Met Cys Asn Gly Asn Leu Pro Ala Ser Thr Ala Gln Leu Lys Ser Thr
1               5                   10                  15
Ser Lys Pro Gln Gln Gln His Glu His Arg Thr Ile Ser Lys Ser Glu
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Thr Pro Ala Thr Asp Pro Ser His Ser Asn Asn Lys Gln His Ala His
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Leu Val Leu Asp Ile Thr Asp Phe Ala Ser Arg His Pro Gly Gly Asp
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Leu Ile Leu Leu Ala Ser Gly Lys Asp Ala Ser Val Leu Phe Glu Thr
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Tyr His Pro Arg Gly Val Pro Thr Ser Leu Ile Gln Lys Leu Gln Ile
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Gly Val Met Glu Glu Glu Ala Phe Arg Asp Ser Phe Tyr Ser Trp Thr
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Asp Ser Asp Phe Tyr Thr Val Leu Lys Arg Arg Val Val Glu Arg Leu
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145                 150                 155                 160
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Thr Thr Ser Asp Ile Asp Gln Tyr Gly Ile Ala Ile Ala Tyr Ser Ile
            180                 185                 190
Gly Met Gly Thr Phe Ala Ala Phe Ile Gly Thr Cys Ile Gln His Asp
        195                 200                 205
Gly Asn His Gly Ala Phe Ala Gln Asn Lys Leu Leu Asn Lys Leu Ala
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        355                 360                 365
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Trp Ala Ala Val Gln Cys Gln Thr Ser Val Asn Trp Ser Pro Gly Ser
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Trp Phe Trp Asn His Phe Ser Gly Gly Leu Ser His Gln Ile Glu His
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Leu Gly Lys Ala Lys Cys Glu
            500
<210>105
<211>1257
<212>DNA
<213>假矮海链藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1257)
<223>ω3去饱和酶
<400>105
atg tac aga tta aca tcc acc ttc ctc atc gca ttg gca ttc tcc tcc     48
Met Tyr Arg Leu Thr Ser Thr Phe Leu Ile Ala Leu Ala Phe Ser Ser
1               5                   10                  15
tcc atc aat gcc ttc tct cca caa cgg cca cca cgt act atc acc aaa     96
Ser Ile Asn Ala Phe Ser Pro Gln Arg Pro Pro Arg Thr Ile Thr Lys
            20                  25                  30
agt aaa gtc caa agc acc gtg cta ccc ata ccg acc aag gat gat ctg    144
Ser Lys Val Gln Ser Thr Val Leu Pro Ile Pro Thr Lys Asp Asp Leu
        35                  40                  45
aac ttt ctc caa cca caa ctc gat gag aat gat ctc tac ctc gac gat    192
Asn Phe Leu Gln Pro Gln Leu Asp Glu Asn Asp Leu Tyr Leu Asp Asp
    50                  55                  60
gtc aac act cca cca aga gca ggt acc atc atg aag atg ttg ccg aag    240
Val Asn Thr Pro Pro Arg Ala Gly Thr Ile Met Lys Met Leu Pro Lys
65                  70                  75                  80
gaa acg ttc aac att gat aca gca act tca ttg ggt tac ttt ggt atg    288
Glu Thr Phe Asn Ile Asp Thr Ala Thr Ser Leu Gly Tyr Phe Gly Met
                85                  90                  95
gat atg gca gcg gtt gta tcg tcc atg acg ttg cta aat gct att gta    336
Asp Met Ala Ala Val Val Ser Ser Met Thr Leu Leu Asn Ala Ile Val
            100                 105                 110
act tcg gat cag tac cat gct ctt cca ctt cct ctc caa gca gca aca    384
Thr Ser Asp Gln Tyr His Ala Leu Pro Leu Pro Leu Gln Ala Ala Thr
        115                 120                 125
gtg att ccc ttt cag cta ttg gct ggg ttc gcc atg tgg tgt atg tgg    432
Val Ile Pro Phe Gln Leu Leu Ala Gly Phe Ala Met Trp Cys Met Trp
    130                 135                 140
tgc att gga cac gat gct gga cat tct act gtt tcg aag aca aag tgg    480
Cys Ile Gly His Asp Ala Gly His Ser Thr Val Ser Lys Thr Lys Trp
145                 150                 155                 160
atc aac cga gtc gtt ggt gaa gtg gct cat tct gtt gtt tgt ctc acg    528
Ile Asn Arg Val Val Gly Glu Val Ala His Ser Val Val Cys Leu Thr
                165                 170                 175
ccg ttc gtg cct tgg cag atg tcg cat agg aaa cac cat ttg aat cac    576
Pro Phe Val Pro Trp Gln Met Ser His Arg Lys His His Leu Asn His
            180                 185                 190
aat cat att gaa aag gac tac tct cat aag tgg tac agt cgc gac gag    624
Asn His Ile Glu Lys Asp Tyr Ser His Lys Trp Tyr Ser Arg Asp Glu
        195                 200                 205
ttt gat gat atc cca caa ctc tat aag aca ttt ggc tac aac cca aga    672
Phe Asp Asp Ile Pro Gln Leu Tyr Lys Thr Phe Gly Tyr Asn Pro Arg
    210                 215                 220
atg atg caa ctt cca ttc ctc tac ttc atg tat ctt gca ttg gga att     720
Met Met Gln Leu Pro Phe Leu Tyr Phe Met Tyr Leu Ala Leu Gly Ile
225                 230                 235                 240
cca gat ggt ggg cat gtt gtg ttc tac gga aga atg tgg gaa gga gtg     768
Pro Asp Gly Gly His Val Val Phe Tyr Gly Arg Met Trp Glu Gly Val
                245                 250                 255
tca ttg cag aag aag ttt gat gct gct att tct gtg gcc gta tca tgt     816
Ser Leu Gln Lys Lys Phe Asp Ala Ala Ile Ser Val Ala Val Ser Cys
            260                 265                 270
gca act gct gga tcg ctt tgg atg aat atg ggt aca gca gac ttc acg     864
Ala Thr Ala Gly Ser Leu Trp Met Asn Met Gly Thr Ala Asp Phe Thr
        275                 280                 285
gtg gta tgc atg gtt cct tgg cta gtt cta tcg tgg tgg ctc ttc atg     912
Val Val Cys Met Val Pro Trp Leu Val Leu Ser Trp Trp Leu Phe Met
    290                 295                 300
gta aca tac ctt cag cat cat tca gaa gac gga aag cta tac act gat     960
Val Thr Tyr Leu Gln His His Ser Glu Asp Gly Lys Leu Tyr Thr Asp
305                 310                 315                 320
gaa acg ttt aca ttt gaa aag gga gcc ttc gag acc gtg gat cgt tcg    1008
Glu Thr Phe Thr Phe Glu Lys Gly Ala Phe Glu Thr Val Asp Arg Ser
                325                 330                 335
tac ggc aag ttg atc aac cga atg tcg cat cac atg atg gac ggt cac    1056
Tyr Gly Lys Leu Ile Asn Arg Met Ser His His Met Met Asp Gly His
            340                 345                 350
gtg gtg cac cac ttg ttc ttt gaa cgt gta cct cac tac aga tta gag    1104
Val Val His His Leu Phe Phe Glu Arg Val Pro His Tyr Arg Leu Glu
        355                 360                 365
gca gct acc gaa gct ctt gtg aaa gga atg gat gaa acg gga cag aaa    1152
Ala Ala Thr Glu Ala Leu Val Lys Gly Met Asp Glu Thr Gly Gln Lys
    370                 375                 380
cat ttg tac aaa tac att gat act cct gat ttc aat gcc gag att gtc    1200
His Leu Tyr Lys Tyr Ile Asp Thr Pro Asp Phe Asn Ala Glu Ile Val
385                 390                 395                 400
aac gga ttt cgc gac aat tgg ttc ctt gtt gaa gag gag aac atc aaa    1248
Asn Gly Phe Arg Asp Asn Trp Phe Leu Val Glu Glu Glu Asn Ile Lys
                405                 410                 415
agg gag tag                                                        1257
Arg Glu
<210>106
<211>418
<212>PRT
<213>假矮海链藻
<400>106
Met Tyr Arg Leu Thr Ser Thr Phe Leu Ile Ala Leu Ala Phe Ser Ser
1               5                   10                  15
Ser Ile Asn Ala Phe Ser Pro Gln Arg Pro Pro Arg Thr Ile Thr Lys
            20                  25                  30
Ser Lys Val Gln Ser Thr Val Leu Pro Ile Pro Thr Lys Asp Asp Leu
        35                  40                  45
Asn Phe Leu Gln Pro Gln Leu Asp Glu Asn Asp Leu Tyr Leu Asp Asp
    50                  55                  60
Val Asn Thr Pro Pro Arg Ala Gly Thr Ile Met Lys Met Leu Pro Lys
65                  70                  75                  80
Glu Thr Phe Asn Ile Asp Thr Ala Thr Ser Leu Gly Tyr Phe Gly Met
                85                  90                  95
Asp Met Ala Ala Val Val Ser Ser Met Thr Leu Leu Asn Ala Ile Val
            100                 105                 110
Thr Ser Asp Gln Tyr His Ala Leu Pro Leu Pro Leu Gln Ala Ala Thr
        115                 120                 125
Val Ile Pro Phe Gln Leu Leu Ala Gly Phe Ala Met Trp Cys Met Trp
    130                 135                 140
Cys Ile Gly His Asp Ala Gly His Ser Thr Val Ser Lys Thr Lys Trp
145                 150                 155                 160
Ile Asn Arg Val Val Gly Glu Val Ala His Ser Val Val Cys Leu Thr
                165                 170                 175
Pro Phe Val Pro Trp Gln Met Ser His Arg Lys His His Leu Asn His
            180                 185                 190
Asn His Ile Glu Lys Asp Tyr Ser His Lys Trp Tyr Ser Arg Asp Glu
        195                 200                 205
Phe Asp Asp Ile Pro Gln Leu Tyr Lys Thr Phe Gly Tyr Asn Pro Arg
    210                 215                 220
Met Met Gln Leu Pro Phe Leu Tyr Phe Met Tyr Leu Ala Leu Gly Ile
225                 230                 235                 240
Pro Asp Gly Gly His Val Val Phe Tyr Gly Arg Met Trp Glu Gly Val
                245                 250                 255
Ser Leu Gln Lys Lys Phe Asp Ala Ala Ile Ser Val Ala Val Ser Cys
            260                 265                 270
Ala Thr Ala Gly Ser Leu Trp Met Asn Met Gly Thr Ala Asp Phe Thr
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Val Val Cys Met Val Pro Trp Leu Val Leu Ser Trp Trp Leu Phe Met
    290                 295                 300
Val Thr Tyr Leu Gln His His Ser Glu Asp Gly Lys Leu Tyr Thr Asp
305                 310                 315                 320
Glu Thr Phe Thr Phe Glu Lys Gly Ala Phe Glu Thr Val Asp Arg Ser
                325                 330                 335
Tyr Gly Lys Leu Ile Asn Arg Met Ser His His Met Met Asp Gly His
            340                 345                 350
Val Val His His Leu Phe Phe Glu Arg Val Pro His Tyr Arg Leu Glu
        355                 360                 365
Ala Ala Thr Glu Ala Leu Val Lys Gly Met Asp Glu Thr Gly Gln Lys
    370                 375                 380
His Leu Tyr Lys Tyr Ile Asp Thr Pro Asp Phe Asn Ala Glu Ile Val
385                 390                 395                 400
Asn Gly Phe Arg Asp Asn Trp Phe Leu Val Glu Glu Glu Asn Ile Lys
                405                 410                 415
Arg Glu
<210>107
<211>1086
<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1086)
<223>Δ12去饱和酶
<400>107
atg cag gag ggg gtg cga aac att ccg aac gag tgc ttt gag acg gga     48
Met Gln Glu Gly Val Arg Asn Ile Pro Asn Glu Cys Phe Glu Thr Gly
1               5                   10                  15
cat ctt gaa aga ccc tgg cgt tcc ggc cgg tgt ggg cgc gat ccc ggt     96
His Leu Glu Arg Pro Trp Arg Ser Gly Arg Cys Gly Arg Asp Pro Gly
            20                  25                  30
tcg aat tgg ggc gct ggc ttc cgc ttt ttt tcg ctc aag ggg ttt tgg    144
Ser Asn Trp Gly Ala Gly Phe Arg Phe Phe Ser Leu Lys Gly Phe Trp
        35                  40                  45
tgg ccg gcg tgg tgg gcg tac gcg ttc gtg acg ggg acg gcg gcc act    192
Trp Pro Ala Trp Trp Ala Tyr Ala Phe Val Thr Gly Thr Ala Ala Thr
    50                  55                  60
ggg tgt tgg gtc gcc gcg cac gag tgc ggg cac ggc gcg ttc agc gat    240
Gly Cys Trp Val Ala Ala His Glu Cys Gly His Gly Ala Phe Ser Asp
65                  70                  75                  80
aac aag acg ttg caa gat gcg gtt gga tac gtg ttg cac tcg ttg ctc    288
Asn Lys Thr Leu Gln Asp Ala Val Gly Tyr Val Leu His Ser Leu Leu
                85                  90                  95
ttg gtg ccg tac ttt tct tgg cag cga tca cac gcg gtg cat cac tcg    336
Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Gln Arg Ser His Ala Val His His Ser
            100                 105                 110
agg acg aat cac gtt ctt gag ggc gag acg cac gtg ccg gcg cgc ttg    384
Arg Thr Asn His Val Leu Glu Gly Glu Thr His Val Pro Ala Arg Leu
        115                 120                 125
ggg acg gaa gac gcc aac gtc gtg ttc aag ctt cgc gaa ttg atc ggt    432
Gly Thr Glu Asp Ala Asn Val Val Phe Lys Leu Arg Glu Leu Ile Gly
    130                 135                 140
gaa ggg ccg ttc acg ttt ttc aac ctc gtc ggc gtc ttc gcg ctc gga    480
Glu Gly Pro Phe Thr Phe Phe Asn Leu Val Gly Val Phe Ala Leu Gly
145                 150                 155                 160
tgg ccg att tac ttg ctc acc ggc gcg agc ggc gga ccg gtg cgc ggt    528
Trp Pro Ile Tyr Leu Leu Thr Gly Ala Ser Gly Gly Pro Val Arg Gly
                165                 170                 175
aac acg aac cac ttc tta ccc ttc atg ggc gag aaa ggt aag cac gcg    576
Asn Thr Asn His Phe Leu Pro Phe Met Gly Glu Lys Gly Lys His Ala
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ctg ttc ccg ggt aag tgg gcg aag aag gtg tgg cag tct gac atc ggc    624
Leu Phe Pro Gly Lys Trp Ala Lys Lys Val Trp Gln Ser Asp Ile Gly
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gtt gtt gcc gtc ctg ggc gcg ctc gcg gct tgg gcg gcg cac agc ggg    672
Val Val Ala Val Leu Gly Ala Leu Ala Ala Trp Ala Ala His Ser Gly
    210                 215                 220
att gcc aca gtg atg gca ctc tac gtc ggc ccg tac atg gtg acc aac    720
Ile Ala Thr Val Met Ala Leu Tyr Val Gly Pro Tyr Met Val Thr Asn
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ttt tgg ctc gtc ttg tac acg tgg tta cag cac acc gac gtt gac gtg     768
Phe Trp Leu Val Leu Tyr Thr Trp Leu Gln His Thr Asp Val Asp Val
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ccg cac ttc gag ggc gac gat tgg aac ttg gtc aag ggg gca ttc atg     816
Pro His Phe Glu Gly Asp Asp Trp Asn Leu Val Lys Gly Ala Phe Met
            260                 265                 270
acg atc gat cgc ccg tac ggc cca gtt ttt gat ttc ttg cac cac cgc     864
Thr Ile Asp Arg Pro Tyr Gly Pro Val Phe Asp Phe Leu His His Arg
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Ile Gly Ser Thr His Val Ala His His Ile Asn Thr Pro Phe Pro His
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Tyr Lys Ala Gln Met Ala Thr Asp Ala Leu Lys Glu Ala Tyr Pro Asp
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ctc tac ctt tac gat cca act ccg atc gcg acc gct acg tgg cgc gtg    1008
Leu Tyr Leu Tyr Asp Pro Thr Pro Ile Ala Thr Ala Thr Trp Arg Val
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Thr Asp Lys Gln Leu Pro Val Ala Ala
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<210>108
<211>361
<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>108
Met Gln Glu Gly Val Arg Asn Ile Pro Asn Glu Cys Phe Glu Thr Gly
1               5                   10                  15
His Leu Glu Arg Pro Trp Arg Ser Gly Arg Cys Gly Arg Asp Pro Gly
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Asn Lys Thr Leu Gln Asp Ala Val Gly Tyr Val Leu His Ser Leu Leu
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Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Gln Arg Ser His Ala Val His His Ser
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Ile Gly Ser Thr His Val Ala His His Ile Asn Thr Pro Phe Pro His
    290                 295                 300
Tyr Lys Ala Gln Met Ala Thr Asp Ala Leu Lys Glu Ala Tyr Pro Asp
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Gly Ser Lys Cys Ile Ala Val Val Lys Lys Gly Asp Glu Trp Val Phe
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Thr Asp Lys Gln Leu Pro Val Ala Ala
        355                 360
<210>109
<211>1305
<212>DNA
<213>假矮海链藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1305)
<223>Δ12去饱和酶
<400>109
atg gga aag gga gga aga tca gta acc cgc gct caa aca gca gaa aag     48
Met Gly Lys Gly Gly Arg Ser Val Thr Arg Ala Gln Thr Ala Glu Lys
1               5                   10                  15
tca gca cac acc atc caa acc ttc acc gac ggc cga tgg gtc tcc ccc     96
Ser Ala His Thr Ile Gln Thr Phe Thr Asp Gly Arg Trp Val Ser Pro
            20                  25                  30
tac aac ccc ctc gca aaa gat gca cct gaa ctc ccc tcc aag ggt gaa    144
Tyr Asn Pro Leu Ala Lys Asp Ala Pro Glu Leu Pro Ser Lys Gly Glu
        35                  40                  45
atc aag gcg gtc atc ccc aaa gag tgc ttc gaa cga agc tac ctc cac    192
Ile Lys Ala Val Ile Pro Lys Glu Cys Phe Glu Arg Ser Tyr Leu His
    50                  55                  60
tcc atg tac ttc gtc ctc cgt gac acc gtc atg gcc gtg gcc tgc gcc    240
Ser Met Tyr Phe Val Leu Arg Asp Thr Val Met Ala Val Ala Cys Ala
65                  70                  75                  80
tac atc gcc cac tca acg ctc tcc acc gat att ccc tcc gag tta ctg    288
Tyr Ile Ala His Ser Thr Leu Ser Thr Asp Ile Pro Ser Glu Leu Leu
                85                  90                  95
agc gtg gac gca ctc aaa tgg ttc ctc gga tgg aac acc tac gcc ttt    336
Ser Val Asp Ala Leu Lys Trp Phe Leu Gly Trp Asn Thr Tyr Ala Phe
            100                 105                 110
tgg atg ggg tgc att ctc acc gga cac tgg gtc cta gcc cat gaa tgt    384
Trp Met Gly Cys Ile Leu Thr Gly His Trp Val Leu Ala His Glu Cys
        115                 120                 125
gga cat ggt gca ttc tct ccc tct cag acg ttt aat gac ttt tgg ggg    432
Gly His Gly Ala Phe Ser Pro Ser Gln Thr Phe Asn Asp Phe Trp Gly
    130                 135                 140
ttc att atg cat cag gcg gtg ttg gtt ccg tat ttc gcc tgg cag tac    480
Phe Ile Met His Gln Ala Val Leu Val Pro Tyr Phe Ala Trp Gln Tyr
145                 150                 155                 160
tct cat gcg aag cat cat cga cgt acc aac aac att atg gat ggg gag    528
Ser His Ala Lys His His Arg Arg Thr Asn Asn Ile Met Asp Gly Glu
                165                 170                 175
agc cat gtg ccc aat atc gcc aag gaa atg gga ttg aac gag aag aat    576
Ser His Val Pro Asn Ile Ala Lys Glu Met Gly Leu Asn Glu Lys Asn
            180                 185                 190
gag cgc agt gga gga tat gcc gcc att cat gag gct att gga gat gga     624
Glu Arg Ser Gly Gly Tyr Ala Ala Ile His Glu Ala Ile Gly Asp Gly
        195                 200                 205
ccc ttt gcg atg ttt caa atc ttt gct cac ttg gtg atc ggg tgg cct     672
Pro Phe Ala Met Phe Gln Ile Phe Ala His Leu Val Ile Gly Trp Pro
    210                 215                 220
att tac ttg atg gga ttt gct tcc act gga cgt ctc ggt cag gat ggg     720
Ile Tyr Leu Met Gly Phe Ala Ser Thr Gly Arg Leu Gly Gln Asp Gly
225                 230                 235                 240
aag gaa ctt cag gct gga gag atc atc gac cat tac cgt cct tgg agt     768
Lys Glu Leu Gln Ala Gly Glu Ile Ile Asp His Tyr Arg Pro Trp Ser
                245                 250                 255
aag atg ttc ccc acc aag ttg cga ttc aaa att gct ctt tcg aca ctt     816
Lys Met Phe Pro Thr Lys Leu Arg Phe Lys Ile Ala Leu Ser Thr Leu
            260                 265                 270
gga gtg att gcc gcc tgg gtt ggg ttg tac ttt gct gca caa gag tat     864
Gly Val Ile Ala Ala Trp Val Gly Leu Tyr Phe Ala Ala Gln Glu Tyr
        275                 280                 285
gga gtc ttg ccc gtg gtt ctt tgg tac att ggc cca ctc atg tgg aat     912
Gly Val Leu Pro Val Val Leu Trp Tyr Ile Gly Pro Leu Met Trp Asn
    290                 295                 300
cag gcg tgg ctt gtg ctc tac act tgg ctt cag cac aat gat ccc tcc     960
Gln Ala Trp Leu Val Leu Tyr Thr Trp Leu Gln His Asn Asp Pro Ser
305                 310                 315                 320
gtg cct caa tat gga agt gac gaa tgg aca tgg gtc aag gga gct ttg    1008
Val Pro Gln Tyr Gly Ser Asp Glu Trp Thr Trp Val Lys Gly Ala Leu
                325                 330                 335
tcg acg att gat cgc ccg tat ggt atc ttt gac ttc ttc cat cac aag    1056
Ser Thr Ile Asp Arg Pro Tyr Gly Ile Phe Asp Phe Phe His His Lys
            340                 345                 350
att gga agc act cac gta gct cat cat ttg ttc cac gag atg cca ttt    1104
Ile Gly Ser Thr His Val Ala His His Leu Phe His Glu Met Pro Phe
        355                 360                 365
tac aag gcg gat gtg gct act gcg tcg atc aag ggt ttc ttg gag ccg    1152
Tyr Lys Ala Asp Val Ala Thr Ala Ser Ile Lys Gly Phe Leu Glu Pro
    370                 375                 380
aag gga ctt tac aac tat gat cca acg cct tgg tat gtg gcc atg tgg    1200
Lys Gly Leu Tyr Asn Tyr Asp Pro Thr Pro Trp Tyr Val Ala Met Trp
385                 390                 395                 400
agg gtg gcc aag act tgt cat tat att gag gat gtg gat gga gtt cag    1248
Arg Val Ala Lys Thr Cys His Tyr Ile Glu Asp Val Asp Gly Val Gln
                405                 410                 415
tat tat aag agt ttg gag gat gtg cct ttg aag aag gat gcc aag aag    1296
Tyr Tyr Lys Ser Leu Glu Asp Val Pro Leu Lys Lys Asp Ala Lys Lys
            420                 425                 430
tct gat tag                                                        1305
Ser Asp
<210>110
<211>434
<212>PRT
<213>假矮海链藻
<400>110
Met Gly Lys Gly Gly Arg Ser Val Thr Arg Ala Gln Thr Ala Glu Lys
1               5                   10                  15
Ser Ala His Thr Ile Gln Thr Phe Thr Asp Gly Arg Trp Val Ser Pro
            20                  25                  30
Tyr Asn Pro Leu Ala Lys Asp Ala Pro Glu Leu Pro Ser Lys Gly Glu
        35                  40                  45
Ile Lys Ala Val Ile Pro Lys Glu Cys Phe Glu Arg Ser Tyr Leu His
    50                  55                  60
Ser Met Tyr Phe Val Leu Arg Asp Thr Val Met Ala Val Ala Cys Ala
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Ala His Ser Thr Leu Ser Thr Asp Ile Pro Ser Glu Leu Leu
                85                  90                  95
Ser Val Asp Ala Leu Lys Trp Phe Leu Gly Trp Asn Thr Tyr Ala Phe
            100                 105                 110
Trp Met Gly Cys Ile Leu Thr Gly His Trp Val Leu Ala His Glu Cys
        115                 120                 125
Gly His Gly Ala Phe Ser Pro Ser Gln Thr Phe Asn Asp Phe Trp Gly
    130                 135                 140
Phe Ile Met His Gln Ala Val Leu Val Pro Tyr Phe Ala Trp Gln Tyr
145                 150                 155                 160
Ser His Ala Lys His His Arg Arg Thr Asn Asn Ile Met Asp Gly Glu
                165                 170                 175
Ser His Val Pro Asn Ile Ala Lys Glu Met Gly Leu Asn Glu Lys Asn
            180                 185                 190
Glu Arg Ser Gly Gly Tyr Ala Ala Ile His Glu Ala Ile Gly Asp Gly
        195                 200                 205
Pro Phe Ala Met Phe Gln Ile Phe Ala His Leu Val Ile Gly Trp Pro
    210                 215                 220
Ile Tyr Leu Met Gly Phe Ala Ser Thr Gly Arg Leu Gly Gln Asp Gly
225                 230                 235                 240
Lys Glu Leu Gln Ala Gly Glu Ile Ile Asp His Tyr Arg Pro Trp Ser
                245                 250                 255
Lys Met Phe Pro Thr Lys Leu Arg Phe Lys Ile Ala Leu Ser Thr Leu
            260                 265                 270
Gly Val Ile Ala Ala Trp Val Gly Leu Tyr Phe Ala Ala Gln Glu Tyr
        275                 280                 285
Gly Val Leu Pro Val Val Leu Trp Tyr Ile Gly Pro Leu Met Trp Asn
    290                 295                 300
Gln Ala Trp Leu Val Leu Tyr Thr Trp Leu Gln His Asn Asp Pro Ser
305                 310                 315                 320
Val Pro Gln Tyr Gly Ser Asp Glu Trp Thr Trp Val Lys Gly Ala Leu
                325                 330                 335
Ser Thr Ile Asp Arg Pro Tyr Gly Ile Phe Asp Phe Phe His His Lys
            340                 345                 350
Ile Gly Ser Thr His Val Ala His His Leu Phe His Glu Met Pro Phe
        355                 360                 365
Tyr Lys Ala Asp Val Ala Thr Ala Ser Ile Lys Gly Phe Leu Glu Pro
    370                 375                 380
Lys Gly Leu Tyr Asn Tyr Asp Pro Thr Pro Trp Tyr Val Ala Met Trp
385                 390                 395                 400
Arg Val Ala Lys Thr Cys His Tyr Ile Glu Asp Val Asp Gly Val Gln
                405                 410                 415
Tyr Tyr Lys Ser Leu Glu Asp Val Pro Leu Lys Lys Asp Ala Lys Lys
            420                 425                 430
Ser Asp
<210>111
<211>879
<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(879)
<223>Δ6延伸酶
<400>111
atg agt ggc tta cgt gca ccc aac ttt tta cac aga ttc tgg aca aag     48
Met Ser Gly Leu Arg Ala Pro Asn Phe Leu His Arg Phe Trp Thr Lys
1               5                   10                  15
tgg gac tac gcg att tcc aaa gtc gtc ttc acg tgt gcc gac agt ttt     96
Trp Asp Tyr Ala Ile Ser Lys Val Val Phe Thr Cys Ala Asp Ser Phe
            20                  25                  30
cag tgg gac atc ggg cca gtg agt tcg agt acg gcg cat tta ccc gcc    144
Gln Trp Asp Ile Gly Pro Val Ser Ser Ser Thr Ala His Leu Pro Ala
        35                  40                  45
att gaa tcc cct acc cca ctg gtg act agc ctc ttg ttc tac tta gtc    192
Ile Glu Ser Pro Thr Pro Leu Val Thr Ser Leu Leu Phe Tyr Leu Val
    50                  55                  60
aca gtt ttc ttg tgg tat ggt cgt tta acc agg agt tca gac aag aaa    240
Thr Val Phe Leu Trp Tyr Gly Arg Leu Thr Arg Ser Ser Asp Lys Lys
65                  70                  75                  80
att aga gag cct acg tgg tta aga aga ttc ata ata tgt cat aat gcg    288
Ile Arg Glu Pro Thr Trp Leu Arg Arg Phe Ile Ile Cys His Asn Ala
                85                  90                  95
ttc ttg ata gtc ctc agt ctt tac atg tgc ctt ggt tgt gtg gcc caa    336
Phe Leu Ile Val Leu Ser Leu Tyr Met Cys Leu Gly Cys Val Ala Gln
            100                 105                 110
gcg tat cag aat gga tat act tta tgg ggt aat gaa ttc aag gcc acg    384
Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Trp Gly Asn Glu Phe Lys Ala Thr
        115                 120                 125
gaa act cag ctt gct ctc tac att tac att ttt tac gta agt aaa ata    432
Glu Thr Gln Leu Ala Leu Tyr Ile Tyr Ile Phe Tyr Val Ser Lys Ile
    130                 135                 140
tac gag ttt gta gat act tac att atg ctt ctc aag aat aac ttg cgg    480
Tyr Glu Phe Val Asp Thr Tyr Ile Met Leu Leu Lys Asn Asn Leu Arg
145                 150                 155                 160
caa gta agt ttc cta cac att tat cac cac agc acg att tcc ttt att    528
Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Ser Thr Ile Ser Phe Ile
                165                 170                 175
tgg tgg atc att gct cgg agg gct ccg ggt ggt gat gct tac ttc agc    576
Trp Trp Ile Ile Ala Arg Arg Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr Phe Ser
            180                 185                 190
gcg gcc ttg aac tca tgg gta cac gtg tgc atg tac acc tat tat cta    624
Ala Ala Leu Asn Ser Trp Val His Val Cys Met Tyr Thr Tyr Tyr Leu
        195                 200                 205
tta tca acc ctt att gga aaa gaa gat cct aag cgt tcc aac tac ctt    672
Leu Ser Thr Leu Ile Gly Lys Glu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Tyr Leu
    210                 215                 220
tgg tgg ggt cgc cac cta acg caa atg cag atg ctt cag ttt ttc ttc    720
Trp Trp Gly Arg His Leu Thr Gln Met Gln Met Leu Gln Phe Phe Phe
225                 230                 235                 240
aac gta ctt caa gcg ttg tac tgc gct tcg ttc tct acg tat ccc aag    768
Asn Val Leu Gln Ala Leu Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Pro Lys
                245                 250                 255
ttt ttg tcc aaa att ctg ctc gtc tat atg atg agc ctt ctc ggc ttg    816
Phe Leu Ser Lys Ile Leu Leu Val Tyr Met Met Ser Leu Leu Gly Leu
            260                 265                 270
ttt ggg cat ttc tac tat tcc aag cac ata gca gca gct aag ctc cag    864
Phe Gly His Phe Tyr Tyr Ser Lys His Ile Ala Ala Ala Lys Leu Gln
        275                 280                 285
aaa aaa cag cag tga                                                879
Lys Lys Gln Gln
    290
<210>112
<211>292
<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>112
Met Ser Gly Leu Arg Ala Pro Asn Phe Leu His Arg Phe Trp Thr Lys
1               5                   10                  15
Trp Asp Tyr Ala Ile Ser Lys Val Val Phe Thr Cys Ala Asp Ser Phe
            20                  25                  30
Gln Trp Asp Ile Gly Pro Val Ser Ser Ser Thr Ala His Leu Pro Ala
        35                  40                  45
Ile Glu Ser Pro Thr Pro Leu Val Thr Ser Leu Leu Phe Tyr Leu Val
    50                  55                  60
Thr Val Phe Leu Trp Tyr Gly Arg Leu Thr Arg Ser Ser Asp Lys Lys
65                  70                  75                  80
Ile Arg Glu Pro Thr Trp Leu Arg Arg Phe Ile Ile Cys His Asn Ala
                85                  90                  95
Phe Leu Ile Val Leu Ser Leu Tyr Met Cys Leu Gly Cys Val Ala Gln
            100                 105                 110
Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Trp Gly Asn Glu Phe Lys Ala Thr
        115                 120                 125
Glu Thr Gln Leu Ala Leu Tyr Ile Tyr Ile Phe Tyr Val Ser Lys Ile
    130                 135                 140
Tyr Glu Phe Val Asp Thr Tyr Ile Met Leu Leu Lys Asn Asn Leu Arg
145                 150                 155                 160
Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Ser Thr Ile Ser Phe Ile
                165                 170                 175
Trp Trp Ile Ile Ala Arg Arg Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr Phe Ser
            180                 185                 190
Ala Ala Leu Asn Ser Trp Val His Val Cys Met Tyr Thr Tyr Tyr Leu
        195                 200                 205
Leu Ser Thr Leu Ile Gly Lys Glu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Tyr Leu
    210                 215                 220
Trp Trp Gly Arg His Leu Thr Gln Met Gln Met Leu Gln Phe Phe Phe
225                 230                 235                 240
Asn Val Leu Gln Ala Leu Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Pro Lys
                245                 250                 255
Phe Leu Ser Lys Ile Leu Leu Val Tyr Met Met Ser Leu Leu Gly Leu
            260                 265                 270
Phe Gly His Phe Tyr Tyr Ser Lys His Ile Ala Ala Ala Lys Leu Gln
        275                 280                 285
Lys Lys Gln Gln
    290
<210>113
<211>903
<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(903)
<223>Δ5延伸酶
<400>113
atg agc gcc tcc ggt gcg ctg ctg ccc gcg atc gcg ttc gcc gcg tac     48
Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Phe Ala Ala Tyr
1               5                   10                  15
gcg tac gcg acg tac gcc tac gcc ttt gag tgg tcg cac gcg aat ggc     96
Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly
            20                  25                  30
atc gac aac gtc gac gcg cgc gag tgg atc ggt gcg ctg tcg ttg agg    144
Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg
        35                  40                  45
ctc ccg gcg atc gcg acg acg atg tac ctg ttg ttc tgc ctg gtc gga    192
Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly
    50                  55                  60
ccg agg ttg atg gcg aag cgc gag gcg ttc gac ccg aag ggg ttc atg    240
Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met
65                  70                  75                  80
ctg gcg tac aat gcg tat cag acg gcg ttc aac gtc gtc gtg ctc ggg    288
Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly
                85                  90                  95
atg ttc gcg cga gag atc tcg ggg ctg ggg cag ccc gtg tgg ggg tca    336
Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser
            100                 105                 110
acc atg ccg tgg agc gat aga aaa tcg ttt aag atc ctc ctc ggg gtg    384
Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val
        115                 120                 125
tgg ttg cac tac aac aac aaa tat ttg gag cta ttg gac act gtg ttc    432
Trp Leu His Tyr Asn Asn Lys Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe
    130                 135                 140
atg gtt gcg cgc aag aag acg aag cag ttg agc ttc ttg cac gtt tat    480
Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr
145                 150                 155                 160
cat cac gcc ctg ttg atc tgg gcg tgg tgg ttg gtg tgt cac ttg atg    528
His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met
                165                 170                 175
gcc acg aac gat tgt atc gat gcc tac ttc ggc gcg gcg tgc aac tcg    576
Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser
            180                 185                 190
ttc att cac atc gtg atg tac tcg tat tat ctc atg tcg gcg ctc ggc    624
Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly
        195                 200                 205
att cga tgc ccg tgg aag cga tac atc acc cag gct caa atg ctc caa    672
Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln
    210                 215                 220
ttc gtc att gtc ttc gcg cac gcc gtg ttc gtg ctg cgt cag aag cac    720
Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His
225                 230                 235                 240
tgc ccg gtc acc ctt cct tgg gcg caa atg ttc gtc atg acg aac atg    768
Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met
                245                 250                 255
ctc gtg ctc ttc ggg aac ttc tac ctc aag gcg tac tcg aac aag tcg     816
Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser
            260                 265                 270
cgc ggc gac ggc gcg agt tcc gtg aaa cca gcc gag acc acg cgc gcg     864
Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala
        275                 280                 285
ccc agc gtg cga cgc acg cga tct cga aaa att gac taa                 903
Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp
    290                 295                 300
<210>114
<211>300
<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>114
Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Phe Ala Ala Tyr
1               5                   10                  15
Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly
            20                  25                  30
Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg
        35                  40                  45
Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly
    50                  55                  60
Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met
65                  70                  75                  80
Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly
                85                  90                  95
Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser
            100                 105                 110
Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val
        115                 120                 125
Trp Leu His Tyr Asn Asn Lys Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe
    130                 135                 140
Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr
145                 150                 155                 160
His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met
                165                 170                 175
Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser
            180                 185                 190
Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly
        195                 200                 205
Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln
    210                 215                 220
Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His
225                 230                 235                 240
Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met
                245                 250                 255
Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser
            260                 265                 270
Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala
        275                 280                 285
Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp
    290                 295                 300
<210>115
<211>13
<212>PRT
<213>共有序列
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(13)
<223>序列中2、3、4、6、7、8和9位的Xaa具有表A中给出的含义
<400>115
Asn Xaa Xaa Xaa His Xaa Xaa Met Tyr Xaa Tyr Tyr Xaa
1               5                   10
<210>116
<211>10
<212>PRT
<213>共有序列
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(10)
<223>序列中3、4、5和69位的Xaa具有表A中给出的含义
<400>116
His His Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Ala Trp Trp
1               5                   10
<210>117
<211>909
<212>DNA
<213>非洲爪蟾(Xenopus laevis)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(909)
<223>Δ5延伸酶
<400>117
atg gcc ttc aag gag ctc aca tca agg gca gtg ctc ctg tat gat gaa     48
Met Ala Phe Lys Glu Leu Thr Ser Arg Ala Val Leu Leu Tyr Asp Glu
1               5                   10                  15
tgg att aaa gat gct gat cct agg gtt gaa gac tgg cca ctc atg tcc     96
Trp Ile Lys Asp Ala Asp Pro Arg Val Glu Asp Trp Pro Leu Met Ser
            20                  25                  30
tct cct atc cta eaa acc ate atc atc ggc gct tac atc tac ttt gtc    144
Ser Pro Ile Leu Gln Thr Ile Ile Ile Gly Ala Tyr Ile Tyr Phe Val
        35                  40                  45
aca tca ttg ggc cca agg atc atg gag aac agg aag ccg ttt gct ctg    192
Thr Ser Leu Gly Pro Arg Ile Met Glu Asn Arg Lys Pro Phe Ala Leu
    50                  55                  60
aag gag atc atg gca tgt tac aac tta ttc atg gtt ctg ttt tct gtg    240
Lys Glu Ile Met Ala Cys Tyr Asn Leu Phe Met Val Leu Phe Ser Val
65                  70                  75                  80
tac atg tgc tat gag ttt ctc atg tcg ggc tgg gct act gga tat tcc    288
Tyr Met Cys Tyr Glu Phe Leu Met Ser Gly Trp Ala Thr Gly Tyr Ser
                85                  90                  95
ttt aga tgt gac att gtt gac tac tct cag tca cct cag gcg tta cgg    336
Phe Arg Cys Asp Ile Val Asp Tyr Ser Gln Ser Pro Gln Ala Leu Arg
            100                 105                 110
atg gcc tgg acc tgc tgg ctc ttc tat ttt tca aag ttc att gaa tta    384
Met Ala Trp Thr Cys Trp Leu Phe Tyr Phe Ser Lys Phe Ile Glu Leu
        115                 120                 125
tta gac act gtt ttc ttt gtg ctg cgt aag aag aac agc cag att aca    432
Leu Asp Thr Val Phe Phe Val Leu Arg Lys Lys Asn Ser Gln Ile Thr
    130                 135                 140
ttc ctg cac gtc tat cac cac tcc att atg cct tgg acg tgg tgg ttt    480
Phe Leu His Val Tyr His His Ser Ile Met Pro Trp Thr Trp Trp Phe
145                 150                 155                 160
gga gtc aaa ttt gct cca ggt ggt ttg ggc aca ttc cat gca ctg gtg    528
Gly Val Lys Phe Ala Pro Gly Gly Leu Gly Thr Phe His Ala Leu Val
                165                 170                 175
aac tgt gtg gtc cat gtt atc atg tac agc tac tac ggc ctg tca gcc    576
Asn Cys Val Val His Val Ile Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ser Ala
            180                 185                 190
ttg ggg cct gcc tac cag aag tac ctg tgg tgg aaa aag tac atg acg    624
Leu Gly Pro Ala Tyr Gln Lys Tyr Leu Trp Trp Lys Lys Tyr Met Thr
        195                 200                 205
tct atc caa ctg acc cag ttc ttg atg gtt act ttt cac atc ggc cag    672
Ser Ile Gln Leu Thr Gln Phe Leu Met Val Thr Phe His Ile Gly Gln
    210                 215                 220
ttc ttc ttc atg gag aat tgc ccg tac cag tat ccc gtc ttc ttg tat    720
Phe Phe Phe Met Glu Asn Cys Pro Tyr Gln Tyr Pro Val Phe Leu Tyr
225                 230                 235                 240
gtc att tgg ctg tac ggg ttc gtt ttc tta atc ttg ttc ctc aac ttc    768
Val Ile Trp Leu Tyr Gly Phe Val Phe Leu Ile Leu Phe Leu Asn Phe
                245                 250                 255
tgg ttc cac gct tac atc aaa gga cag agg ctg ccg aaa gcc gtc caa    816
Trp Phe His Ala Tyr Ile Lys Gly Gln Arg Leu Pro Lys Ala Val Gln
            260                 265                 270
aat ggc cac tgc aag aac aac aac aac caa gaa aac act tgg tgc aag    864
Asn Gly His Cys Lys Asn Asn Asn Asn Gln Glu Asn Thr Trp Cys Lys
        275                 280                 285
aac aaa aac cag aaa aac ggt gca ttg aaa agc aaa aac cat tga        909
Asn Lys Asn Gln Lys Asn Gly Ala Leu Lys Ser Lys Asn His
    290                 295                 300
<210>118
<211>302
<212>PRT
<213>非洲爪蟾
<400>118
Met Ala Phe Lys Glu Leu Thr Ser Arg Ala Val Leu Leu Tyr Asp Glu
1               5                   10                  15
Trp Ile Lys Asp Ala Asp Pro Arg Val Glu Asp Trp Pro Leu Met Ser
            20                  25                  30
Ser Pro Ile Leu Gln Thr Ile Ile Ile Gly Ala Tyr Ile Tyr Phe Val
        35                  40                  45
Thr Ser Leu Gly Pro Arg Ile Met Glu Asn Arg Lys Pro Phe Ala Leu
    50                  55                  60
Lys Glu Ile Met Ala Cys Tyr Asn Leu Phe Met Val Leu Phe Ser Val
65                  70                  75                  80
Tyr Met Cys Tyr Glu Phe Leu Met Ser Gly Trp Ala Thr Gly Tyr Ser
                85                  90                  95
Phe Arg Cys Asp Ile Val Asp Tyr Ser Gln Ser Pro Gln Ala Leu Arg
            100                 105                 110
Met Ala Trp Thr Cys Trp Leu Phe Tyr Phe Ser Lys Phe Ile Glu Leu
        115                 120                 125
Leu Asp Thr Val Phe Phe Val Leu Arg Lys Lys Asn Ser Gln Ile Thr
    130                 135                 140
Phe Leu His Val Tyr His His Ser Ile Met Pro Trp Thr Trp Trp Phe
145                 150                 155                 160
Gly Val Lys Phe Ala Pro Gly Gly Leu Gly Thr Phe His Ala Leu Val
                165                 170                 175
Asn Cys Val Val His Val Ile Met Tyr Ser Tyr Tyr Gly Leu Ser Ala
            180                 185                 190
Leu Gly Pro Ala Tyr Gln Lys Tyr Leu Trp Trp Lys Lys Tyr Met Thr
        195                 200                 205
Ser Ile Gln Leu Thr Gln Phe Leu Met Val Thr Phe His Ile Gly Gln
    210                 215                 220
Phe Phe Phe Met Glu Asn Cys Pro Tyr Gln Tyr Pro Val Phe Leu Tyr
225                 230                 235                 240
Val Ile Trp Leu Tyr Gly Phe Val Phe Leu Ile Leu Phe Leu Asn Phe
                245                 250                 255
Trp Phe His Ala Tyr Ile Lys Gly Gln Arg Leu Pro Lys Ala Val Gln
            260                 265                 270
Asn Gly His Cys Lys Asn Asn Asn Asn Gln Glu Asn Thr Trp Cys Lys
        275                 280                 285
Asn Lys Asn Gln Lys Asn Gly Ala Leu Lys Ser Lys Asn His
    290                 295                 300
<210>119
<211>870
<212>DNA
<213>玻璃海鞘(Ciona intestinalis)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(870)
<223>Δ5延伸酶
<400>119
atg gac gta ctt cat cgt ttc tta gga ttc tac gaa tgg acg ctg act     48
Met Asp Val Leu His Arg Phe Leu Gly Phe Tyr Glu Trp Thr Leu Thr
1               5                   10                  15
ttc gcg gac ccc cga gtg gca aaa tgg cct tta ata gaa aac ccc ctt     96
Phe Ala Asp Pro Arg Val Ala Lys Trp Pro Leu Ile Glu Asn Pro Leu
            20                  25                  30
cct aca att gct att gtg ttg ctg tac ctg gcg ttt gtt ctg tat att    144
Pro Thr Ile Ala Ile Val Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Val Leu Tyr Ile
        35                  40                  45
ggg ccg cgt ttt atg cga aaa aga gca cca gtt gac ttt ggt tta ttc    192
Gly Pro Arg Phe Met Arg Lys Arg Ala Pro Val Asp Phe Gly Leu Phe
    50                  55                  60
ctc cct gga tat aac ttt gct ttg gtt gca tta aat tat tat atc ctg    240
Leu Pro Gly Tyr Asn Phe Ala Leu Val Ala Leu Asn Tyr Tyr Ile Leu
65                  70                  75                  80
caa gaa gtg gtc act ggg agt tat ggg gct ggg tat gat ttg gtt tgc    288
Gln Glu Val Val Thr Gly Ser Tyr Gly Ala Gly Tyr Asp Leu Val Cys
                85                  90                  95
aca cca ctt cga agt gat tcc tac gat ccc aat gaa atg aag gtt gca    336
Thr Pro Leu Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Pro Asn Glu Met Lys Val Ala
            100                 105                 110
aac gct gta tgg tgg tat tat gta tcc aag ata ata gag ttg ttt gat    384
Asn Ala Val Trp Trp Tyr Tyr Val Ser Lys Ile Ile Glu Leu Phe Asp
        115                 120                 125
act gtg ttg ttc act cta cgc aaa cga gac cga caa gta act ttc ctt    432
Thr Val Leu Phe Thr Leu Arg Lys Arg Asp Arg Gln Val Thr Phe Leu
    130                 135                 140
cat gtt tat cac cat tct acc atg ccc ctg ttg tgg tgg att ggg gca    480
His Val Tyr His His Ser Thr Met Pro Leu Leu Trp Trp Ile Gly Ala
145                 150                 155                 160
aag tgg gtg cct ggt ggg caa tca ttt gtt ggc atc ata ctg aac tcc    528
Lys Trp Val Pro Gly Gly Gln Ser Phe Val Gly Ile Ile Leu Asn Ser
                165                 170                 175
agt gtt cat gtt atc atg tat acg tac tat gga ttg tca gcc ttg ggg    576
Ser Val His Val Ile Met Tyr Thr Tyr Tyr Gly Leu Ser Ala Leu Gly
            180                 185                 190
cct cac atg cag aag ttt cta tgg tgg aag aaa tat atc aca atg ttg    624
Pro His Met Gln Lys Phe Leu Trp Trp Lys Lys Tyr Ile Thr Met Leu
        195                 200                 205
caa ctg gtt caa ttt gtt ctt gcc atc tac cat act gct cga tca ttg    672
Gln Leu Val Gln Phe Val Leu Ala Ile Tyr His Thr Ala Arg Ser Leu
    210                 215                 220
tac gtt aaa tgt ccc tcg cct gtt tgg atg cac tgg gca ctt atc ttg    720
Tyr Val Lys Cys Pro Ser Pro Val Trp Met His Trp Ala Leu Ile Leu
225                 230                 235                 240
tac gct ttc tca ttc att ttg ctt ttc tca aac ttc tac atg cat gcc    768
Tyr Ala Phe Ser Phe Ile Leu Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Met His Ala
                245                 250                 255
tat atc aag aaa tca aga aaa ggg aaa gag aat ggc agt cga gga aaa    816
Tyr Ile Lys Lys Ser Arg Lys Gly Lys Glu Asn Gly Ser Arg Gly Lys
            260                 265                 270
ggt ggt gta agt aat gga aag gaa aag ctg cac gct aat ggt aaa acc    864
Gly Gly Val Ser Asn Gly Lys Glu Lys Leu His Ala Asn Gly Lys Thr
        275                 280                 285
gat taa                                                            870
Asp
<210>120
<211>289
<212>PRT
<213>玻璃海鞘
<400>120
Met Asp Val Leu His Arg Phe Leu Gly Phe Tyr Glu Trp Thr Leu Thr
1               5                   10                  15
Phe Ala Asp Pro Arg Val Ala Lys Trp Pro Leu Ile Glu Asn Pro Leu
            20                  25                  30
Pro Thr Ile Ala Ile Val Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Val Leu Tyr Ile
        35                  40                  45
Gly Pro Arg Phe Met Arg Lys Arg Ala Pro Val Asp Phe Gly Leu Phe
    50                  55                  60
Leu Pro Gly Tyr Asn Phe Ala Leu Val Ala Leu Asn Tyr Tyr Ile Leu
65                  70                  75                  80
Gln Glu Val Val Thr Gly Ser Tyr Gly Ala Gly Tyr Asp Leu Val Cys
                85                  90                  95
Thr Pro Leu Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Pro Asn Glu Met Lys Val Ala
            100                 105                 110
Asn Ala Val Trp Trp Tyr Tyr Val Ser Lys Ile Ile Glu Leu Phe Asp
        115                 120                 125
Thr Val Leu Phe Thr Leu Arg Lys Arg Asp Arg Gln Val Thr Phe Leu
    130                 135                 140
His Val Tyr His His Ser Thr Met Pro Leu Leu Trp Trp Ile Gly Ala
145                 150                 155                 160
Lys Trp Val Pro Gly Gly Gln Ser Phe Val Gly Ile Ile Leu Asn Ser
                165                 170                 175
Ser Val His Val Ile Met Tyr Thr Tyr Tyr Gly Leu Ser Ala Leu Gly
            180                 185                 190
Pro His Met Gln Lys Phe Leu Trp Trp Lys Lys Tyr Ile Thr Met Leu
        195                 200                 205
Gln Leu Val Gln Phe Val Leu Ala Ile Tyr His Thr Ala Arg Ser Leu
    210                 215                 220
Tyr Val Lys Cys Pro Ser Pro Val Trp Met His Trp Ala Leu Ile Leu
225                 230                 235                 240
Tyr Ala Phe Ser Phe Ile Leu Leu Phe Ser Asn Phe Tyr Met His Ala
                245                 250                 255
Tyr Ile Lys Lys Ser Arg Lys Gly Lys Glu Asn Gly Ser Arg Gly Lys
            260                 265                 270
Gly Gly Val Ser Asn Gly Lys Glu Lys Leu His Ala Asn Gly Lys Thr
        275                 280                 285
Asp
<210>121
<211>30
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(30)
<223>
<400>121
aggatccatg gccttcaagg agctcacatc                                   30
<210>122
<211>35
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(35)
<223>
<400>122
cctcgagtca atggtttttg cttttcaatg caccg                             35
<210>123
<211>25
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(25)
<223>
<400>123
taagcttatg gacgtacttc atcgt                                        25
<210>124
<211>26
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(26)
<223>
<400>124
tcagatcttt aatcggtttt accatt                                       26
<210>125
<211>34
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(34)
<223>
<400>125
gcggccgcac catggccttc aaggagctca catc                              34
<210>126
<211>38
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(38)
<223>
<400>126
gcggccgcct tcaatggttt ttgcttttca atgcaccg                          38
<210>127
<211>29
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(29)
<223>
<400>127
gcggccgcac catggacgta cttcatcgt                                      29
<210>128
<211>27
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(27)
<223>
<400>128
gcggccgctt taatcggttt taccatt                                        27
<210>129
<211>60
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(60)
<223>
<400>129
gtcgacccgc ggactagtgg gccctctaga cccgggggat ccggatctgc tggctatgaa    60
<210>130
<211>60
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(60)
<223>
<400>130
gtcgacccgc ggactagtgg gccctctaga cccgggggat ccggatctgc tggctatgaa    60
<210>131
<211>789
<212>DNA
<213>细小裸藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(789)
<223>Δ5延伸酶
<400>131
atg ctg ggg gcc atc gcg gac gtc gtg ctc cgg ggg ccc gcc gca ttc      48
Met Leu Gly Ala Ile Ala Asp Val Val Leu Arg Gly Pro Ala Ala Phe
1               5                   10                  15
cac tgg gac cct gcc acc acc ccg ctc gca tcg atc gtc agc ccc tgt      96
His Trp Asp Pro Ala Thr Thr Pro Leu Ala Ser Ile Val Ser Pro Cys
            20                  25                  30
gtg gcc tcc gtg gcg tac ctg ggg gcc atc ggg ctg ctg aag cgc cgc     144
Val Ala Ser Val Ala Tyr Leu Gly Ala Ile Gly Leu Leu Lys Arg Arg
        35                  40                  45
act gga ccg gag gtc cgc tcc aag ccc ttc gag ctg cta cac aac ggg    192
Thr Gly Pro Glu Val Arg Ser Lys Pro Phe Glu Leu Leu His Asn Gly
    50                  55                  60
ctg ctg gtg ggc tgg tcc ctc gtg gtg ctg ctc ggg acg ctg tac ggc    240
Leu Leu Val Gly Trp Ser Leu Val Val Leu Leu Gly Thr Leu Tyr Gly
65                  70                  75                  80
gcg ttc cag cgc gtg cag gag gac ggc cgg ggg gtg cag gcc ctc ctg    288
Ala Phe Gln Arg Val Gln Glu Asp Gly Arg Gly Val Gln Ala Leu Leu
                85                  90                  95
tgc acc cag cgg cca cca tct cag atc tgg gac ggc ccg gtg ggg tac    336
Cys Thr Gln Arg Pro Pro Ser Gln Ile Trp Asp Gly Pro Val Gly Tyr
            100                 105                 110
ttc acg tac ctc ttc tac ctc gcg aag tac tgg gag ctg gcg gac act    384
Phe Thr Tyr Leu Phe Tyr Leu Ala Lys Tyr Trp Glu Leu Ala Asp Thr
        115                 120                 125
gtc atc ctc gcc ctc cgc cag aag ccc acc atc ccc ctc cac gtc tac    432
Val Ile Leu Ala Leu Arg Gln Lys Pro Thr Ile Pro Leu His Val Tyr
    130                 135                 140
cat cac gcc gtc atg ctg ttc atc gtg tgg tcg tgg ttc gcg cac ccc    480
His His Ala Val Met Leu Phe Ile Val Trp Ser Trp Phe Ala His Pro
145                 150                 155                 160
tgg ctc gag ggg agc tgg tgg tgc tcc ctg gtc aac tct ttc atc cac    528
Trp Leu Glu Gly Ser Trp Trp Cys Ser Leu Val Asn Ser Phe Ile His
                165                 170                 175
acg gtg atg tac tcg tac tac acc ctg acg gtg gtt ggc atc aac cct    576
Thr Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Thr Leu Thr Val Val Gly Ile Asn Pro
            180                 185                 190
tgg tgg aag aag tgg atg acc acc atg cag atc atc cag ttc atc acg    624
Trp Trp Lys Lys Trp Met Thr Thr Met Gln Ile Ile Gln Phe Ile Thr
        195                 200                 205
ggc tgc gtg tac gtc atg gcg ttc ttc ggc cta tat tat gcc ggg gcg    672
Gly Cys Val Tyr Val Met Ala Phe Phe Gly Leu Tyr Tyr Ala Gly Ala
    210                 215                 220
ggc tgc acc tcc aac gtg tac act gcc tgg ttc tcg atg ggg gtc aac    720
Gly Cys Thr Ser Asn Val Tyr Thr Ala Trp Phe Ser Met Gly Val Asn
225                 230                 235                 240
ctc agc ttt ctg tgg ctc ttc gct ctt ttc ttc cgc cgg tca tac agc    768
Leu Ser Phe Leu Trp Leu Phe Ala Leu Phe Phe Arg Arg Ser Tyr Ser
                245                 250                 255
aaa cct agc cgg aag gag tag                                        789
Lys Pro Ser Arg Lys Glu
            260
<210>132
<211>262
<212>PRT
<213>细小裸藻
<400>132
Met Leu Gly Ala Ile Ala Asp Val Val Leu Arg Gly Pro Ala Ala Phe
1               5                   10                  15
His Trp Asp Pro Ala Thr Thr Pro Leu Ala Ser Ile Val Ser Pro Cys
            20                  25                  30
Val Ala Ser Val Ala Tyr Leu Gly Ala Ile Gly Leu Leu Lys Arg Arg
        35                  40                  45
Thr Gly Pro Glu Val Arg Ser Lys Pro Phe Glu Leu Leu His Asn Gly
    50                  55                  60
Leu Leu Val Gly Trp Ser Leu Val Val Leu Leu Gly Thr Leu Tyr Gly
65                  70                  75                  80
Ala Phe Gln Arg Val Gln Glu Asp Gly Arg Gly Val Gln Ala Leu Leu
                85                  90                  95
Cys Thr Gln Arg Pro Pro Ser Gln Ile Trp Asp Gly Pro Val Gly Tyr
            100                 105                 110
Phe Thr Tyr Leu Phe Tyr Leu Ala Lys Tyr Trp Glu Leu Ala Asp Thr
        115                 120                 125
Val Ile Leu Ala Leu Arg Gln Lys Pro Thr Ile Pro Leu His Val Tyr
    130                 135                 140
His His Ala Val Met Leu Phe Ile Val Trp Ser Trp Phe Ala His Pro
145                 150                 155                 160
Trp Leu Glu Gly Ser Trp Trp Cys Ser Leu Val Asn Ser Phe Ile His
                165                 170                 175
Thr Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Thr Leu Thr Val Val Gly Ile Ash Pro
            180                 185                 190
Trp Trp Lys Lys Trp Met Thr Thr Met Gln Ile Ile Gln Phe Ile Thr
        195                 200                 205
Gly Cys Val Tyr Val Met Ala Phe Phe Gly Leu Tyr Tyr Ala Gly Ala
    210                 215                 220
Gly Cys Thr Ser Asn Val Tyr Thr Ala Trp Phe Ser Met Gly Val Asn
225                 230                 235                 240
Leu Ser Phe Leu Trp Leu Phe Ala Leu Phe Phe Arg Arg Ser Tyr Ser
                245                 250                 255
Lys Pro Ser Arg Lys Glu
            260
<210>133
<211>789
<212>DNA
<213>细小裸藻
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(789)
<223>Δ5延伸酶
<400>133
atg ctg ggg gcc atc gcg gac gtc gtg ctc cgg ggg ccc gcc gca ttc     48
Met Leu Gly Ala Ile Ala Asp Val Val Leu Arg Gly Pro Ala Ala Phe
1               5                   10                  15
cac tgg gac cct gcc acc acc ccg ctc gca tcg atc gtc agc ccc tgt     96
His Trp Asp Pro Ala Thr Thr Pro Leu Ala Ser Ile Val Ser Pro Cys
            20                  25                  30
gtg gcc tcc gtg gcg tac ctg ggg gcc atc ggg ctg ctg aag cgc cgc    144
Val Ala Ser Val Ala Tyr Leu Gly Ala Ile Gly Leu Leu Lys Arg Arg
        35                  40                  45
act gga ccg gag gtc cgc tcc aag ccc ttc gag ctg cta cac aac ggg    192
Thr Gly Pro Glu Val Arg Ser Lys Pro Phe Glu Leu Leu His Asn Gly
    50                  55                  60
ctg ctg gtg ggc tgg tcc ctc gtg gtg ctg ctc ggg acg ctg tac ggc    240
Leu Leu Val Gly Trp Ser Leu Val Val Leu Leu Gly Thr Leu Tyr Gly
65                  70                  75                  80
gcg tac cag cgc gtg cag gag gac ggc cgg ggg gtg cag gcc ctg ctg    288
Ala Tyr Gln Arg Val Gln Glu Asp Gly Arg Gly Val Gln Ala Leu Leu
                85                  90                  95
tgc acc cag cgg cca cca tct cag atc tgg gac ggc ccg gtg ggg tac    336
Cys Thr Gln Arg Pro Pro Ser Gln Ile Trp Asp Gly Pro Val Gly Tyr
            100                 105                 110
ttc acg tac ctt ttc tac ctc gcg aag tac tgg gag ctg gtg gac act    384
Phe Thr Tyr Leu Phe Tyr Leu Ala Lys Tyr Trp Glu Leu Val Asp Thr
        115                 120                 125
gtc atc ctc gcc ctc cgc cag aag ccc acc atc ccc ctc cac gtc tac    432
Val Ile Leu Ala Leu Arg Gln Lys Pro Thr Ile Pro Leu His Val Tyr
    130                 135                 140
cat cac gcc gtc atg ctg ttc att gtg tgg tcg tgg ttc gcg cac ccc    480
His His Ala Val Met Leu Phe Ile Val Trp Ser Trp Phe Ala His Pro
145                 150                 155                 160
tgg ctc gag ggg agc tgg tgg tgc tcc ctg gtc aac tct ttc atc cac    528
Trp Leu Glu Gly Ser Trp Trp Cys Ser Leu Val Asn Ser Phe Ile His
                165                 170                 175
acg gtg atg tac tcg tat tac acc ctg acg gtg gtt ggc atc aac cct    576
Thr Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Thr Leu Thr Val Val Gly Ile Asn Pro
            180                 185                 190
tgg tgg aag aag tgg atg acc acc atg cag atc atc cag ttc atc acg    624
Trp Trp Lys Lys Trp Met Thr Thr Met Gln Ile Ile Gln Phe Ile Thr
        195                 200                 205
ggc tgc gtg tac gtc acg gcg ttc ttc ggc cta tac tat gcc ggg gcg    672
Gly Cys Val Tyr Val Thr Ala Phe Phe Gly Leu Tyr Tyr Ala Gly Ala
    210                 215                 220
ggc tgc acc tcc aac gtg tac act gcc tgg ttc tcg atg ggg gtc aac    720
Gly Cys Thr Ser Asn Val Tyr Thr Ala Trp Phe Ser Met Gly Val Asn
225                 230                 235                 240
ctc agc ttt ctg tgg ctc ttc gct ctt ttc ttc cgc cgg tcg tac agc    768
Leu Ser Phe Leu Trp Leu Phe Ala Leu Phe Phe Arg Arg Ser Tyr Ser
                245                 250                 255
aaa cct agc cgg aag gag tag                                        789
Lys Pro Ser Arg Lys Glu
            260
<210>134
<211>262
<212>PRT
<213>细小裸藻
<400>134
Met Leu Gly Ala Ile Ala Asp Val Val Leu Arg Gly Pro Ala Ala Phe
1               5                   10                  15
His Trp Asp Pro Ala Thr Thr Pro Leu Ala Ser Ile Val Ser Pro Cys
            20                  25                  30
Val Ala Ser Val Ala Tyr Leu Gly Ala Ile Gly Leu Leu Lys Arg Arg
        35                  40                  45
Thr Gly Pro Glu Val Arg Ser Lys Pro Phe Glu Leu Leu His Asn Gly
    50                  55                  60
Leu Leu Val Gly Trp Ser Leu Val Val Leu Leu Gly Thr Leu Tyr Gly
65                  70                  75                  80
Ala Tyr Gln Arg Val Gln Glu Asp Gly Arg Gly Val Gln Ala Leu Leu
                85                  90                  95
Cys Thr Gln Arg Pro Pro Ser Gln Ile Trp Asp Gly Pro Val Gly Tyr
            100                 105                 110
Phe Thr Tyr Leu Phe Tyr Leu Ala Lys Tyr Trp Glu Leu Val Asp Thr
        115                 120                 125
Val Ile Leu Ala Leu Arg Gln Lys Pro Thr Ile Pro Leu His Val Tyr
    130                 135                 140
His His Ala Val Met Leu Phe Ile Val Trp Ser Trp Phe Ala His Pro
145                 150                 155                 160
Trp Leu Glu Gly Ser Trp Trp Cys Ser Leu Val Asn Ser Phe Ile His
                165                 170                 175
Thr Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Thr Leu Thr Val Val Gly Ile Asn Pro
            180                 185                 190
Trp Trp Lys Lys Trp Met Thr Thr Met Gln Ile Ile Gln Phe Ile Thr
        195                 200                 205
Gly Cys Val Tyr Val Thr Ala Phe Phe Gly Leu Tyr Tyr Ala Gly Ala
    210                 215                 220
Gly Cys Thr Ser Asn Val Tyr Thr Ala Trp Phe Ser Met Gly Val Asn
225                 230                 235                 240
Leu Ser Phe Leu Trp Leu Phe Ala Leu Phe Phe Arg Arg Ser Tyr Ser
                245                 250                 255
Lys Pro Ser Arg Lys Glu
            260
<210>135
<211>897
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(897)
<223>Δ5延伸酶
<400>135
atg gca tct gtt tac tcc acc cta acc tac tgg ctc gtc cac cac ccc     48
Met Ala Ser Val Tyr Ser Thr Leu Thr Tyr Trp Leu Val His His Pro
1               5                   10                  15
tac att gcc aac ttc acg tgg acc gaa ggt gaa aca cta ggc tcc acc     96
Tyr Ile Ala Asn Phe Thr Trp Thr Glu Gly Glu Thr Leu Gly Ser Thr
            20                  25                  30
gtt ttc ttt gtc ttt gtc gtc gtc tcc ctt tac ctc tcc gcc aca ttc    144
Val Phe Phe Val Phe Val Val Val Ser Leu Tyr Leu Ser Ala Thr Phe
        35                  40                  45
ctc ctc cga tac acc gtc gat tca ctc ccc aca ctc ggt ccc cgc att    192
Leu Leu Arg Tyr Thr Val Asp Ser Leu Pro Thr Leu Gly Pro Arg Ile
    50                  55                  60
ctc aaa cca atc aca gcc gtt cac agc ctc att ctc ttc ctc ctc tcc    240
Leu Lys Pro Ile Thr Ala Val His Ser Leu Ile Leu Phe Leu Leu Ser
65                  70                  75                  80
tta acc atg gcc gtt ggt tgc act ctc tcc cta atc tct tcc tcg gac    288
Leu Thr Met Ala Val Gly Cys Thr Leu Ser Leu Ile Ser Ser Ser Asp
                85                  90                  95
ccg aag gcg cgt ctc ttc gac gcc gtt tgt ttc ccc ctc gac gtg aaa    336
Pro Lys Ala Arg Leu Phe Asp Ala Val Cys Phe Pro Leu Asp Val Lys
            100                 105                 110
cct aag gga ccg ctt ttc ttt tgg gct caa gtc ttt tac ctc tcg aag    384
Pro Lys Gly Pro Leu Phe Phe Trp Ala Gln Val Phe Tyr Leu Ser Lys
        115                 120                 125
atc ctt gag ttc gta gac aca ctt ctc atc ata ctc aac aaa tca atc    432
Ile Leu Glu Phe Val Asp Thr Leu Leu Ile Ile Leu Asn Lys Ser Ile
    130                 135                 140
caa cgg ctc tcg ttc ctc cac gtc tac cac cac gca acg gtt gtg att    480
Gln Arg Leu Ser Phe Leu His Val Tyr His His Ala Thr Val Val Ile
145                 150                 155                 160
ttg tgc tac ctc tgg tta cga aca cgt caa tcg atg ttt cct gtt ggg    528
Leu Cys Tyr Leu Trp Leu Arg Thr Arg Gln Ser Met Phe Pro Val Gly
                165                 170                 175
ctc gtg ttg aac tcg acg gtc cat gtg att atg tac ggg tac tat ttc    576
Leu Val Leu Asn Ser Thr Val His Val Ile Met Tyr Gly Tyr Tyr Phe
            180                 185                 190
ctc tgc gct atc gga tcg agg ccc aag tgg aag aag ttg gtg acg aat    624
Leu Cys Ala Ile Gly Ser Arg Pro Lys Trp Lys Lys Leu Val Thr Asn
        195                 200                 205
ttt caa atg gtt cag ttt gct ttc ggc atg ggg tta gga gcc gct tgg    672
Phe Gln Met Val Gln Phe Ala Phe Gly Met Gly Leu Gly Ala Ala Trp
    210                 215                 220
atg ctc cca gag cat tat ttc ggg tcg ggt tgc gcc ggg att tgg aca    720
Met Leu Pro Glu His Tyr Phe Gly Ser Gly Cys Ala Gly Ile Trp Thr
225                 230                 235                 240
gtt tat ttc aat ggt gtg ttt act gct tct cta ttg gct ctc ttc tac    768
Val Tyr Phe Asn Gly Val Phe Thr Ala Ser Leu Leu Ala Leu Phe Tyr
                245                 250                 255
aac ttc cac tcc aag aac tat gag aag act aca acg tcg cct ttg tat    816
Asn Phe His Ser Lys Asn Tyr Glu Lys Thr Thr Thr Ser Pro Leu Tyr
            260                 265                 270
aag atc gaa tcc ttt ata ttt att cac gga gag agg tgg gca aat aaa    864
Lys Ile Glu Ser Phe Ile Phe Ile His Gly Glu Arg Trp Ala Asn Lys
        275                 280                 285
gcg att aca tta ttt tcc aag aaa aac gat taa                        897
Ala Ile Thr Leu Phe Ser Lys Lys Asn Asp
    290                 295
<210>136
<211>298
<212>PRT
<213>拟南芥
<400>136
Met Ala Ser Val Tyr Ser Thr Leu Thr Tyr Trp Leu Val His His Pro
1               5                   10                  15
Tyr Ile Ala Asn Phe Thr Trp Thr Glu Gly Glu Thr Leu Gly Ser Thr
            20                  25                  30
Val Phe Phe Val Phe Val Val Val Ser Leu Tyr Leu Ser Ala Thr Phe
        35                  40                  45
Leu Leu Arg Tyr Thr Val Asp Ser Leu Pro Thr Leu 6ly Pro Arg Ile
    50                  55                  60
Leu Lys Pro Ile Thr Ala Val His Ser Leu Ile Leu Phe Leu Leu Ser
65                  70                  75                  80
Leu Thr Met Ala Val Gly Cys Thr Leu Ser Leu Ile Ser Ser Ser Asp
                85                  90                  95
Pro Lys Ala Arg Leu Phe Asp Ala Val Cys Phe Pro Leu Asp Val Lys
            100                 105                 110
Pro Lys Gly Pro Leu Phe Phe Trp Ala Gln Val Phe Tyr Leu Ser Lys
        115                 120                 125
Ile Leu Glu Phe Val Asp Thr Leu Leu Ile Ile Leu Asn Lys Ser Ile
    130                 135                 140
Gln Arg Leu Ser Phe Leu His Val Tyr His His Ala Thr Val Val Ile
145                 150                 155                 160
Leu Cys Tyr Leu Trp Leu Arg Thr Arg Gln Ser Met Phe Pro Val Gly
                165                 170                 175
Leu Val Leu Asn Ser Thr Val His Val Ile Met Tyr Gly Tyr Tyr Phe
            180                 185                 190
Leu Cys Ala Ile Gly Ser Arg Pro Lys Trp Lys Lys Leu Val Thr Asn
        195                 200                 205
Phe Gln Met Val Gln Phe Ala Phe Gly Met Gly Leu Gly Ala Ala Trp
    210                 215                 220
Met Leu Pro Glu His Tyr Phe Gly Ser Gly Cys Ala Gly Ile Trp Thr
225                 230                 235                 240
Val Tyr Phe Asn Gly Val Phe Thr Ala Ser Leu Leu Ala Leu Phe Tyr
                245                 250                 255
Asn Phe His Ser Lys Asn Tyr Glu Lys Thr Thr Thr Ser Pro Leu Tyr
            260                 265                 270
Lys Ile Glu Ser Phe Ile Phe Ile His Gly Glu Arg Trp Ala Asn Lys
        275                 280                 285
Ala Ile Thr Leu Phe Ser Lys Lys Asn Asp
    290                 295
<210>137
<211>837
<212>DNA
<213>拟南芥
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(837)
<223>Δ5延伸酶
<400>137
atg gca tca att tac tcc tct tta acc tac tgg ctc gtt aac cac ccc     48
Met Ala Ser Ile Tyr Ser Ser Leu Thr Tyr Trp Leu Val Asn His Pro
1               5                   10                  15
tac atc tcc aat ttt act tgg atc gaa ggt gaa acc cta ggc tcc acc     96
Tyr Ile Ser Asn Phe Thr Trp Ile Glu Gly Glu Thr Leu Gly Ser Thr
            20                  25                  30
gtc ttt ttc gta tcc gtc gta gtc tcc gtt tac ctc tcc gcc acg ttc    144
Val Phe Phe Val Ser Val Val Val Ser Val Tyr Leu Ser Ala Thr Phe
        35                  40                  45
ctc ctc cga tcc gcc atc gat tca ctc cca tca ctc agt cca cgt atc    192
Leu Leu Arg Ser Ala Ile Asp Ser Leu Pro Ser Leu Ser Pro Arg Ile
    50                  55                  60
ctc aaa ccg atc aca gcc gtc cac agc cta atc ctc tgt ctc ctc tcc    240
Leu Lys Pro Ile Thr Ala Val His Ser Leu Ile Leu Cys Leu Leu Ser
65                  70                  75                  80
tta gtc atg gcc gtc ggt tgc act ctc tca ata acc tca tct cac gcg    288
Leu Val Met Ala Val Gly Cys Thr Leu Ser Ile Thr Ser Ser His Ala
                85                  90                  95
tct tca gat ccg atg gcg cgt ttc ctt cac gcg att tgc ttt ccc gtc    336
Ser Ser Asp Pro Met Ala Arg Phe Leu His Ala Ile Cys Phe Pro Val
            100                 105                 110
gac gtt aaa cct aac gga ccg ctt ttc ttc tgg gct caa gtc ttc tac    384
Asp Val Lys Pro Asn Gly Pro Leu Phe Phe Trp Ala Gln Val Phe Tyr
        115                 120                 125
ctc tcg aag atc ctc gag ttc gga gac acg atc ctc atc ata ctc ggc    432
Leu Ser Lys Ile Leu Glu Phe Gly Asp Thr Ile Leu Ile Ile Leu Gly
    130                 135                 140
aaa tca atc caa cgg cta tcc ttc ctc cac gtg tac cac cac gcg acg    480
Lys Ser Ile Gln Arg Leu Ser Phe Leu His Val Tyr His His Ala Thr
145                 150                 155                 160
gtt gtg gtc atg tgt tat ctc tgg ctc cga act cgc caa tcg atg ttt    528
Val Val Val Met Cys Tyr Leu Trp Leu Arg Thr Arg Gln Ser Met Phe
                165                 170                 175
ccg att gcg ctc gtg acg aat tcg acg gta cac gtc atc atg tac ggt    576
Pro Ile Ala Leu Val Thr Asn Ser Thr Val His Val Ile Met Tyr Gly
            180                 185                 190
tac tac ttc crc tgc gcc gtt gga tcg agg ccc aag tgg aag aga ttg    624
Tyr Tyr Phe Leu Cys Ala Val Gly Ser Arg Pro Lys Trp Lys Arg Leu
        195                 200                 205
gtg acg gat tgt cag att gtt cag ttt gtt ttc agt ttc ggg tta tcc    672
Val Thr Asp Cys Gln Ile Val Gln Phe Val Phe Ser Phe Gly Leu Ser
    210                 215                 220
ggt tgg atg ctc cga gag cac tta ttc ggg tcg ggt tgc acc ggg att    720
Gly Trp Met Leu Arg Glu His Leu Phe Gly Ser Gly Cys Thr Gly Ile
225                 230                 235                 240
tgg gga tgg tgt ttc aac gct gca ttt aat gct tct ctt ttg gct ctc    768
Trp Gly Trp Cys Phe Asn Ala Ala Phe Asn Ala Ser Leu Leu Ala Leu
                245                 250                 255
ttt tcc aac ttc cat tca aag aat tat gtc aag aag cca acg aga gag    816
Phe Ser Asn Phe His Ser Lys Asn Tyr Val Lys Lys Pro Thr Arg Glu
            260                 265                 270
gat ggc aaa aaa agc gat tag                                        837
Asp Gly Lys Lys Ser Asp
        275
<210>138
<211>278
<212>PRT
<213>拟南芥
<400>138
Met Ala Ser Ile Tyr Ser Ser Leu Thr Tyr Trp Leu Val Asn His Pro
1               5                   10                  15
Tyr Ile Ser Asn Phe Thr Trp Ile Glu Gly Glu Thr Leu Gly Ser Thr
            20                  25                  30
Val Phe Phe Val Ser Val Val Val Ser Val Tyr Leu Ser Ala Thr Phe
        35                  40                  45
Leu Leu Arg Ser Ala Ile Asp Ser Leu Pro Ser Leu Ser Pro Arg Ile
    50                  55                  60
Leu Lys Pro Ile Thr Ala Val His Ser Leu Ile Leu Cys Leu Leu Ser
65                  70                  75                  80
Leu Val Met Ala Val Gly Cys Thr Leu Ser Ile Thr Ser Ser His Ala
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Ser Ser Asp Pro Met Ala Arg Phe Leu His Ala Ile Cys Phe Pro Val
            l00                 105                 110
Asp Val Lys Pro Asn Gly Pro Leu Phe Phe Trp Ala Gln Val Phe Tyr
        115                 120                 125
Leu Ser Lys Ile Leu Glu Phe Gly Asp Thr Ile Leu Ile Ile Leu Gly
    130                 135                 140
Lys Ser Ile Gln Arg Leu Ser Phe Leu His Val Tyr His His Ala Thr
145                 150                 155                 160
Val Val Val Met Cys Tyr Leu Trp Leu Arg Thr Arg Gln Ser Met Phe
                165                 170                 175
Pro Ile Ala Leu Val Thr Asn Ser Thr Val His Val Ile Met Tyr Gly
            180                 185                 190
Tyr Tyr Phe Leu Cys Ala Val Gly Ser Arg Pro Lys Trp Lys Arg Leu
        195                 200                 205
Val Thr Asp Cys Gln Ile Val Gln Phe Val Phe Ser Phe Gly Leu Ser
    210                 215                 220
Gly Trp Met Leu Arg Glu His Leu Phe Gly Ser Gly Cys Thr Gly Ile
225                 230                 235                 240
Trp Gly Trp Cys Phe Asn Ala Ala Phe Asn Ala Ser Leu Leu Ala Leu
                245                 250                 255
Phe Ser Asn Phe His Ser Lys Asn Tyr Val Lys Lys Pro Thr Arg Glu
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Asp Gly Lys Lys Ser Asp
        275
<210>139
<211>6
<212>PRT
<213>共有序列
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(6)
<223>序列中3和4位的Xaa具有表A中给出的含义
<400>139
Leu His Xaa Xaa His His
1               5
<210>140
<211>8
<212>PRT
<213>共有序列
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(8)
<223>序列中2、3、5和6位的Xaa具有表A中给出的含义
<400>140
Thr Xaa Xaa Gln Xaa Xaa Gln Phe
1               5
<210>141
<211>6
<212>PRT
<213>共有序列
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(6)
<223>序列中3位的Xaa具有表A中给出的含义
<400>141
Asp Thr Xaa Phe Met Val
1               5
<210>142
<211>8
<212>PRT
<213>共有序列
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(8)
<223>序列中5和6位的Xaa具有表A中给出的含义
<400>142
Thr Gln Ala Gln Xaa Xaa Gln Phe
1               5
<210>143
<211>60
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(60)
<223>
<400>143
gtcgacccgc ggactagtgg gccctctaga cccgggggat ccggatctgc tggctatgaa    60
<210>144
<211>60
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(60)
<223>
<400>144
gtcgacccgc ggactagtgg gccctctaga cccgggggat ccggatctgc tggctatgaa    60
<210>145
<211>36
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(36)
<223>
<400>145
ggtaccacat aatgtgcgtg gagacggaaa ataacg                            36
<210>146
<211>33
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(33)
<223>
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<210>147
<211>24
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(24)
<223>
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<211>24
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(24)
<223>
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<212>DNA
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<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(25)
<223>
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<211>24
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(24)
<223>
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tggatccact tacgtggact tggt                                           24
<210>151
<211>60
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(60)
<223>
<400>151
gtcgacccgc ggactagtgg gccctctaga cccgggggat ccggatctgc tggctatgaa    60
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<211>31
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(31)
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gcggccgcac catgtgctca ccaccgccgt c                                 31
<210>153
<211>26
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(26)
<223>
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<210>154
<211>31
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(31)
<223>
<400>154
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<210>155
<211>26
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(26)
<223>
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gcggccgcct acatggcacc agtaac                                       26
<210>156
<211>31
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(31)
<223>
<400>156
gcggccgcac catggacgcc tacaacgctg c                                 31
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<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(27)
<223>
<400>157
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<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(23)
<223>
<400>158
accatgtgct caccaccgcc gtc                                          23
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<211>18
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(18)
<223>
<400>159
ctacatggca ccagtaac                                                18
<210>160
<211>23
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(23)
<223>
<400>160
accatgtgct catcaccgcc gtc                                          23
<210>161
<211>18
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(18)
<223>
<400>161
ctacatggca ccagtaac                                                18
<210>162
<211>23
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(23)
<223>
<400>162
accatggacg cctacaacgc tgc                                          23
<210>163
<211>19
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(19)
<223>
<400>163
ctaagcactc ttcttcttt                                                 19
<210>164
<211>60
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(60)
<223>
<400>164
gtcgacccgc ggactagtgg gccctctaga cccgggggat ccggatctgc tggctatgaa    60
<210>165
<211>60
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(60)
<223>
<400>165
gtcgacccgc ggactagtgg gccctctaga cccgggggat ccggatctgc tggctatgaa    60
<210>166
<211>29
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(29)
<223>
<400>166
gcggccgcat aatgacgagc aacatgagc                                    29
<210>167
<211>29
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(29)
<223>
<400>167
gcggccgctt aggccgactt ggccttggg                                    29
<210>168
<211>34
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(34)
<223>
<400>168
gcggccgcac catggacgte gtcgagcagc aatg                              34
<210>169
<211>36
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(36)
<223>
<400>169
gcggccgctt agatggtctt ctgcttcttg ggcgcc                            36
<210>170
<211>23
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(23)
<223>
<400>170
gacataatga cgagcaacat gag                                          23
<210>171
<211>25
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(25)
<223>
<400>171
cggcttaggc cgacttggcc ttggg                                        25
<210>172
<211>30
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(30)
<223>
<400>172
agacataatg gacgtcgtcg agcagcaatg                                   30
<210>173
<211>28
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(28)
<223>
<400>173
ttagatggtc ttctgcttct tgggcgcc                                       28
<210>174
<211>60
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(60)
<223>
<400>174
gtcgacccgc ggactagtgg gccctctaga cccgggggat ccggatctgc tggctatgaa    60
<210>175
<211>29
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(29)
<223>
<400>175
gcggccgcat aatggcttca acatggcaa                                    29
<210>176
<211>32
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(32)
<223>
<400>176
gcggccgctt atgtcttctt gctcttcctg tt                                32
<210>177
<211>26
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(26)
<223>
<400>177
gcggecgcat aatggagact tttaat                                       26
<210>178
<211>28
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(28)
<223>
<400>178
gcggccgctc agtcccccct cactttcc                                     28
<210>179
<211>29
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(29)
<223>
<400>179
aagcttacat aatggcttca acatggcaa                                    29
<210>180
<211>30
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(30)
<223>
<400>180
ggatccttat gtcttcttgc tcttcctgtt                                   30
<210>181
<211>26
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(26)
<223>
<400>181
aagcttacat aatggagact tttaat                                       26
<210>182
<211>27
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(27)
<223>
<400>182
ggatccttca gtcccccctc actttcc                                      27
<210>183
<211>993
<212>DNA
<213>三角褐指藻
<220>
<221>CDS
<222>(103)..(939)
<223>Δ6延伸酶
<400>183
ggtcttttgt ggtagctatc gtcatcacac gcaggtcgtt gctcactatc gtgatccgta    60
tattgaccgt gcacttgtgt aaaacagaga tatttcaaga gt atg atg gta cct      114
                                               Met Met Val Pro
                                               1
tca agt tat gac gag tat atc gtc atg gtc aac gac ctt ggc gac tct     162
Ser Ser Tyr Asp Glu Tyr Ile Val Met Val Asn Asp Leu Gly Asp Ser
5                   10                  15                  20
att ctg agc tgg gcc gac cct gat cac tat cgt gga cat acc gag gga     210
Ile Leu Ser Trp Ala Asp Pro Asp His Tyr Arg Gly His Thr Glu Gly
                25                  30                  35
tgg gag ttc act gac ttt tct gct gct ttt agc att gcc gtc gcg tac    258
Trp Glu Phe Thr Asp Phe Ser Ala Ala Phe Ser Ile Ala Val Ala Tyr
            40                  45                  50
ctc ctg ttt gtc ttt gtt gga tct ctc att atg agt atg gga gtc ccc    306
Leu Leu Phe Val Phe Val Gly Ser Leu Ile Met Ser Met Gly Val Pro
        55                  60                  65
gca att gac cct tat ccg ctc aag ttt gtc tac aat gtt tca cag att    354
Ala Ile Asp Pro Tyr Pro Leu Lys Phe Val Tyr Asn Val Ser Gln Ile
    70                  75                  80
atg ctt tgt gct tac atg acc att gaa gcc agt ctt cta gct tat cgt    402
Met Leu Cys Ala Tyr Met Thr Ile Glu Ala Ser Leu Leu Ala Tyr Arg
85                  90                  95                  100
aac ggc tac aca ttc tgg cct tgc aac gat tgg gac ttt gaa aag ccg    450
Asn Gly Tyr Thr Phe Trp Pro Cys Asn Asp Trp Asp Phe Glu Lys Pro
                105                 110                 115
cct atc gct aag ctc ctc tgg ctc ttt tac gtt tcc aaa att tgg gat    498
Pro Ile Ala Lys Leu Leu Trp Leu Phe Tyr Val Ser Lys Ile Trp Asp
            120                 125                 130
ttt tgg gac acc atc ttt att gtt ctc ggg aag aag tgg cgt caa ctt    546
Phe Trp Asp Thr Ile Phe Ile Val Leu Gly Lys Lys Trp Arg Gln Leu
        135                 140                 145
tcc ttc ctg cac gtc tac cat cac acc acc atc ttt ctc ttc tac tgg    594
Ser Phe Leu His Val Tyr His His Thr Thr Ile Phe Leu Phe Tyr Trp
    150                 155                 160
ttg aat gca cat gta aac ttt gat ggt gat att ttc ctc acc atc gtc    642
Leu Asn Ala His Val Asn Phe Asp Gly Asp Ile Phe Leu Thr Ile Val
165                 170                 175                 180
ttg aac ggt ttc atc cac acc gtc atg tac acg tac tac ttc att tgc    690
Leu Asn Gly Phe Ile His Thr Val Met Tyr Thr Tyr Tyr Phe Ile Cys
                185                 190                 195
atg cac acc aag gtc cca gag acc ggc aaa tcc ttg ccc att tgg tgg    738
Met His Thr Lys Val Pro Glu Thr Gly Lys Ser Leu Pro Ile Trp Trp
            200                 205                 210
aaa tct agt ttg aca agc atg cag ctg gtg cag ttc atc acg atg atg    786
Lys Ser Ser Leu Thr Ser Met Gln Leu Val Gln Phe Ile Thr Met Met
        215                 220                 225
acg cag gct atc atg atc ttg tac aag ggc tgt gct gct ccc cat agc    834
Thr Gln Ala Ile Met Ile Leu Tyr Lys Gly Cys Ala Ala Pro His Ser
    230                 235                 240
cgg gtg gtg aca tcg tac ttg gtt tac att ttg tcg ctc ttt att ttg    882
Arg Val Val Thr Ser Tyr Leu Val Tyr Ile Leu Ser Leu Phe Ile Leu
245                 250                 255                 260
ttc gcc cag ttc ttt gtc agc tca tac ctc aag ccg aag aag aag aag    930
Phe Ala Gln Phe Phe Val Ser Ser Tyr Leu Lys Pro Lys Lys Lys Lys
                265                 270                 275
aca gct taa gcgaaatttg ggtctacgtt aaaacaatta cgttacaaaa            979
Thr Ala
aaaaaaaaaa aaaa                                                    993
<210>184
<211>278
<212>PRT
<213>三角褐指藻
<400>184
Met Met Val Pro Ser Ser Tyr Asp Glu Tyr Ile Val Met Val Asn Asp
1               5                   10                  15
Leu Gly Asp Ser Ile Leu Ser Trp Ala Asp Pro Asp His Tyr Arg Gly
            20                  25                  30
His Thr Glu Gly Trp Glu Phe Thr Asp Phe Ser Ala Ala Phe Ser Ile
        35                  40                  45
Ala Val Ala Tyr Leu Leu Phe Val Phe Val Gly Ser Leu Ile Met Ser
    50                  55                  60
Met Gly Val Pro Ala Ile Asp Pro Tyr Pro Leu Lys Phe Val Tyr Asn
65                  70                  75                  80
Val Ser Gln Ile Met Leu Cys Ala Tyr Met Thr Ile Glu Ala Ser Leu
                85                  90                  95
Leu Ala Tyr Arg Asn Gly Tyr Thr Phe Trp Pro Cys Asn Asp Trp Asp
            100                 105                 110
Phe Glu Lys Pro Pro Ile Ala Lys Leu Leu Trp Leu Phe Tyr Val Ser
        115                 120                 125
Lys Ile Trp Asp Phe Trp Asp Thr Ile Phe Ile Val Leu Gly Lys Lys
    130                 135                 140
Trp Arg Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr His His Thr Thr Ile Phe
145                 150                 155                 160
Leu Phe Tyr Trp Leu Asn Ala His Val Asn Phe Asp Gly Asp Ile Phe
                165                 170                 175
Leu Thr Ile Val Leu Asn Gly Phe Ile His Thr Val Met Tyr Thr Tyr
            180                 185                 190
Tyr Phe Ile Cys Met His Thr Lys Val Pro Glu Thr Gly Lys Ser Leu
        195                 200                 205
Pro Ile Trp Trp Lys Ser Ser Leu Thr Ser Met Gln Leu Val Gln Phe
    210                 215                 220
Ile Thr Met Met Thr Gln Ala Ile Met Ile Leu Tyr Lys Gly Cys Ala
225                 230                 235                 240
Ala Pro His Ser Arg Val Val Thr Ser Tyr Leu Val Tyr Ile Leu Ser
                245                 250                 255
Leu Phe Ile Leu Phe Ala Gln Phe Phe Val Ser Ser Tyr Leu Lys Pro
            260                 265                 270
Lys Lys Lys Lys Thr Ala
        275
<210>185
<211>20
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(20)
<223>3或18位的N是C或者T。
<400>185
aanctuctut ggctuttnta                                              20
<210>186
<211>23
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(23)
<223>3和15位的N是C或者T。9、12、21位的N是A或者G。
<400>186
gantguacna anaantgugc naa                                          23
<210>187
<211>446
<212>DNA
<213>PCR片段
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(446)
<223>PCR片段
<400>187
aagctcctct ggctctttta cgtttccaaa atttgggatt tttgggacac catctttatt   60
gttctcggga agaagtggcg tcaactttcc ttcctgcacg tctaccatca caccaccatc  120
tttctcttct actggttgaa tgcacatgta aactttgatg gtgatatttt cctcaccatc  180
gtcttgaacg gtttcatcca caccgtcatg tacacgtact acttcatttg catgcacacc  240
aaggtcccag agaccggcaa atccttgccc atttggtgga aatctagttt gacaagcatg  300
cagctggtgc agttcatcac gatgatgacg caggctatca tgatcttgta caagggctgt  360
gctgctcccc atagccgggt ggtgacatcg tacttggttt acattttgtc gctctttatt  420
ttgttcgccc agttctttgt cagctc                                       446
<210>188
<211>30
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(30)
<223>
<400>188
gcggccgcac ataatgatgg taccttcaag                                   30
<210>189
<211>22
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(22)
<223>
<400>189
gaagacagct taatagacta gt                                           22
<210>190
<211>31
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(31)
<223>
<400>190
gcggccgcac catgatggta ccttcaagtt a                                 31
<210>191
<211>24
<212>DNA
<213>引物
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(24)
<223>
<400>191
gaagacagct taataggcgg ccgc                                          24
<210>192
<211>859
<212>DNA
<213>PCR产物
<400>192
gcggccgcac ataatgatgg taccttcaag ttatgacgag tatatcgtca tggtcaacga   60
ccttggcgac tctattctga gctgggccga ccctgatcac tatcgtggac ataccgaggg  120
atgggagttc actgactttt ctgctgcttt tagcattgcc gtcgcgtacc tcctgtttgt  180
ctttgttgga tctctcatta tgagtatggg agtccccgca attgaccctt atccgctcaa  240
gtttgtctac aatgtttcac agattatgct ttgtgcttac atgaccattg aagccagtct  300
tctagcttat cgtaacggct acacattctg gccttgcaac gattgggact ttgaaaagcc  360
gcctatcgct aagctcctct ggctctttta cgtttccaaa atttgggatt tttgggacac  420
catctttatt gttctcggga agaagtggcg tcaactttcc ttcctgcacg tctaccatca  480
caccaccatc tttctcttct actggttgaa tgcacatgta aactttgatg gtgatatttt  540
cctcaccatc gtcttgaacg gtttcatcca caccgtcatg tacacgtact acttcatttg  600
catgcacacc aaggtcccag agaccggcaa atccttgccc atttggtgga aatctagttt  660
gacaagcatg cagctggtgc agttcatcac gatgatgacg caggctatca tgatcttgta  720
caagggctgt gctgctcccc atagccgggt ggtgacatcg tacttggttt acattttgtc  780
gctctttatt ttgttcgccc agttctttgt cagctcatac ctcaagccga agaagaagaa  840
gacagcttaa tagactagt                                               859
<210>193
<211>1380
<212>DNA
<213>Phytium irregulare
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1380)
<223>Δ6去饱和酶
<400>193
atg gtg gac ctc aag cct gga gtg aag cgc ctg gtg agc tgg aag gag     48
Met Val Asp Leu Lys Pro Gly Val Lys Arg Leu Val Ser Trp Lys Glu
1               5                   10                  15
atc cgc gag cac gcg acg ccc gcg acc gcg tgg atc gtg att cac cac     96
Ile Arg Glu His Ala Thr Pro Ala Thr Ala Trp Ile Val Ile His His
            20                  25                  30
aag gtc tac gac atc tcc aag tgg gac tcg cac ccg ggt ggc tcc gtg    144
Lys Val Tyr Asp Ile Ser Lys Trp Asp Ser His Pro Gly Gly Ser Val
        35                  40                  45
atg ctc acg cag gcc ggc gag gac gcc acg gac gcc ttc gcg gtc ttc    192
Met Leu Thr Gln Ala Gly Glu Asp Ala Thr Asp Ala Phe Ala Val Phe
    50                  55                  60
cac ccg tcc tcg gcg ctc aag ctg ctc gag cag ttc tac gtc ggc gac    240
His Pro Ser Ser Ala Leu Lys Leu Leu Glu Gln Phe Tyr Val Gly Asp
65                  70                  75                  80
gtg gac gaa acc tcc aag gcc gag atc gag ggg gag ccg gcg agc gac    288
Val Asp Glu Thr Ser Lys Ala Glu Ile Glu Gly Glu Pro Ala Ser Asp
                85                  90                  95
gag gag cgc gcg cgc cgc gag cgc atc aac gag ttc atc gcg tcc tac    336
Glu Glu Arg Ala Arg Arg Glu Arg Ile Asn Glu Phe Ile Ala Ser Tyr
            100                 105                 110
cgc cgt ctg cgc gtc aag gtc aag ggc atg ggg ctc tac gac gcc agc    384
Arg Arg Leu Arg Val Lys Val Lys Gly Met Gly Leu Tyr Asp Ala Ser
        115                 120                 125
gcg ctc tac tac gcg tgg aag ctc gtg agc acg ttc ggc atc gcg gtg    432
Ala Leu Tyr Tyr Ala Trp Lys Leu Val Ser Thr Phe Gly Ile Ala Val
    130                 135                 140
ctc tcg atg gcg atc tgc ttc ttc ttc aac agt ttc gcc atg tac atg    480
Leu Ser Met Ala Ile Cys Phe Phe Phe Asn Ser Phe Ala Met Tyr Met
145                 150                 155                 160
gtc gcc ggc gtg att atg ggg ctc ttc tac cag cag tcc gga tgg ctg    528
Val Ala Gly Val Ile Met Gly Leu Phe Tyr Gln Gln Ser Gly Trp Leu
                165                 170                 175
gcg cac gac ttc ttg cac aac cag gtg tgc gag aac cgc acg ctc ggc    576
Ala His Asp Phe Leu His Asn Gln Val Cys Glu Asn Arg Thr Leu Gly
            180                 185                 190
aac ctt atc ggc tgc ctc gtg ggc aac gcc tgg cag ggc ttc agc atg    624
Asn Leu Ile Gly Cys Leu Val Gly Asn Ala Trp Gln Gly Phe Ser Met
        195                 200                 205
cag tgg tgg aag aac aag cac aac ctg cac cac gcg gtg ccg aac ctg    672
Gln Trp Trp Lys Asn Lys His Asn Leu His His Ala Val Pro Asn Leu
    210                 215                 220
cac agc gcc aag gac gag ggc ttc atc ggc gac ccg gac atc gac acc    720
His Ser Ala Lys Asp Glu Gly Phe Ile Gly Asp Pro Asp Ile Asp Thr
225                 230                 235                 240
atg ccg ctg ctg gcg tgg tct aag gag atg gcg cgc aag gcg ttc gag    768
Met Pro Leu Leu Ala Trp Ser Lys Glu Met Ala Arg Lys Ala Phe Glu
                245                 250                 255
tcg gcg cac ggc ccg ttc ttc atc cgc aac cag gcg ttc cta tac ttc     816
Ser Ala His Gly Pro Phe Phe Ile Arg Asn Gln Ala Phe Leu Tyr Phe
            260                 265                 270
ccg ctg ctg ctg ctc gcg cgc ctg agc tgg ctc gcg cag tcg ttc ttc     864
Pro Leu Leu Leu Leu Ala Arg Leu Ser Trp Leu Ala Gln Ser Phe Phe
        275                 280                 285
tac gtg ttc acc gag ttc tcg ttc ggc atc ttc gac aag gtc gag ttc     912
Tyr Val Phe Thr Glu Phe Ser Phe Gly Ile Phe Asp Lys Val Glu Phe
    290                 295                 300
gac gga ccg gag aag gcg ggt ctg atc gtg cac tac atc tgg cag ctc     960
Asp Gly Pro Glu Lys Ala Gly Leu Ile Val His Tyr Ile Trp Gln Leu
305                 310                 315                 320
gcg atc ccg tac ttc tgc aac atg agc ctg ttt gag ggc gtg gca tac    1008
Ala Ile Pro Tyr Phe Cys Asn Met Ser Leu Phe Glu Gly Val Ala Tyr
                325                 330                 335
ttc ctc atg ggc cag gcg tcc tgc ggc ttg ctc ctg gcg ctg gtg ttc    1056
Phe Leu Met Gly Gln Ala Ser Cys Gly Leu Leu Leu Ala Leu Val Phe
            340                 345                 350
agt att ggc cac aac ggc atg tcg gtg tac gag cgc gaa acc aag ccg    1104
Ser Ile Gly His Asn Gly Met Ser Val Tyr Glu Arg Glu Thr Lys Pro
        355                 360                 365
gac ttc tgg cag ctg cag gtg acc acg acg cgc aac atc cgc gcg tcg    1152
Asp Phe Trp Gln Leu Gln Val Thr Thr Thr Arg Asn Ile Arg Ala Ser
    370                 375                 380
gta ttc atg gac tgg ttc acc ggt ggc ttg aac tac cag atc gac cat    1200
Val Phe Met Asp Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Asp His
385                 390                 395                 400
cac ctg ttc ccg ctc gtg ccg cgc cac aac ttg cca aag gtc aac gtg    1248
His Leu Phe Pro Leu Val Pro Arg His Asn Leu Pro Lys Val Asn Val
                405                 410                 415
ctc atc aag tcg cta tgc aag gag ttc gac atc ccg ttc cac gag acc    1296
Leu Ile Lys Ser Leu Cys Lys Glu Phe Asp Ile Pro Phe His Glu Thr
            420                 425                 430
ggc ttc tgg gag ggc atc tac gag gtc gtg gac cac ctg gcg gac atc    1344
Gly Phe Trp Glu Gly Ile Tyr Glu Val Val Asp His Leu Ala Asp Ile
        435                 440                 445
agc aag gaa ttt atc acc gag ttc cca gcg atg taa                    1380
Ser Lys Glu Phe Ile Thr Glu Phe Pro Ala Met
    450                 455
<210>194
<211>459
<212>PRT
<213>Phytium irregulare
<400>194
Met Val Asp Leu Lys Pro Gly Val Lys Arg Leu Val Ser Trp Lys Glu
1               5                   10                  15
Ile Arg Glu His Ala Thr Pro Ala Thr Ala Trp Ile Val Ile His His
            20                  25                  30
Lys Val Tyr Asp Ile Ser Lys Trp Asp Ser His Pro Gly Gly Ser Val
        35                  40                  45
Met Leu Thr Gln Ala Gly Glu Asp Ala Thr Asp Ala Phe Ala Val Phe
    50                  55                  60
His Pro Ser Ser Ala Leu Lys Leu Leu Glu Gln Phe Tyr Val Gly Asp
65                  70                  75                  80
Val Asp Glu Thr Ser Lys Ala Glu Ile Glu Gly Glu Pro Ala Ser Asp
                85                  90                  95
Glu Glu Arg Ala Arg Arg Glu Arg Ile Asn Glu Phe Ile Ala Ser Tyr
            100                 105                 110
Arg Arg Leu Arg Val Lys Val Lys Gly Met Gly Leu Tyr Asp Ala Ser
        115                 120                 125
Ala Leu Tyr Tyr Ala Trp Lys Leu Val Ser Thr Phe Gly Ile Ala Val
    130                 135                 140
Leu Ser Met Ala Ile Cys Phe Phe Phe Asn Ser Phe Ala Met Tyr Met
145                 150                 155                 160
Val Ala Gly Val Ile Met Gly Leu Phe Tyr Gln Gln Ser Gly Trp Leu
                165                 170                 175
Ala His Asp Phe Leu His Asn Gln Val Cys Glu Asn Arg Thr Leu Gly
            180                 185                 190
Asn Leu Ile Gly Cys Leu Val Gly Asn Ala Trp Gln Gly Phe Ser Met
        195                 200                 205
Gln Trp Trp Lys Asn Lys His Asn Leu His His Ala Val Pro Asn Leu
    210                 215                 220
His Ser Ala Lys Asp Glu Gly Phe Ile Gly Asp Pro Asp Ile Asp Thr
225                 230                 235                 240
Met Pro Leu Leu Ala Trp Ser Lys Glu Met Ala Arg Lys Ala Phe Glu
                245                 250                 255
Ser Ala His Gly Pro Phe Phe Ile Arg Asn Gln Ala Phe Leu Tyr Phe
            260                 265                 270
Pro Leu Leu Leu Leu Ala Arg Leu Ser Trp Leu Ala Gln Ser Phe Phe
        275                 280                 285
Tyr Val Phe Thr Glu Phe Ser Phe Gly Ile Phe Asp Lys Val Glu Phe
    290                 295                 300
Asp Gly Pro Glu Lys Ala Gly Leu Ile Val His Tyr Ile Trp Gln Leu
305                 310                 315                 320
Ala Ile Pro Tyr Phe Cys Asn Met Ser Leu Phe Glu Gly Val Ala Tyr
                325                 330                 335
Phe Leu Met Gly Gln Ala Ser Cys Gly Leu Leu Leu Ala Leu Val Phe
            340                 345                 350
Ser Ile Gly His Asn Gly Met Ser Val Tyr Glu Arg Glu Thr Lys Pro
        355                 360                 365
Asp Phe Trp Gln Leu Gln Val Thr Thr Thr Arg Asn Ile Arg Ala Ser
    370                 375                 380
Val Phe Met Asp Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Asp His
385                 390                 395                 400
His Leu Phe Pro Leu Val Pro Arg His Asn Leu Pro Lys Val Asn Val
                405                 410                 415
Leu Ile Lys Ser Leu Cys Lys Glu Phe Asp Ile Pro Phe His Glu Thr
            420                 425                 430
Gly Phe Trp Glu Gly Ile Tyr Glu Val Val Asp His Leu Ala Asp Ile
        435                 440                 445
Ser Lys Glu Phe Ile Thr Glu Phe Pro Ala Met
    450                 455
<210>195
<211>1152
<212>DNA
<213>金盏花(Calendula officinalis)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1152)
<223>Δ12去饱和酶
<400>195
atg ggt gca ggc ggt cga atg caa gat ccc acc aac ggt ggc aac aaa    48
Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Gln Asp Pro Thr Asn Gly Gly Ash Lys
1               5                   10                  15
acc gag ccc gaa cca atc caa cgg gtc cca cat gaa aaa ccc cca ttc    96
Thr Glu Pro Glu Pro Ile Gln Arg Val Pro His Glu Lys Pro Pro Phe
            20                  25                  30
aca gtt gga gac atc aag aaa gcg atc cca cct cat tgt ttc aac cga    144
Thr Val Gly Asp Ile Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Asn Arg
        35                  40                  45
tcg gta att cgt tca ttt tca tac gtc ttt tac gac ctc aca atc gcg    192
Ser Val Ile Arg Ser Phe Ser Tyr Val Phe Tyr Asp Leu Thr Ile Ala
    50                  55                  60
tca atc ttg tac tac att gcc aac aat tac atc tct acc ctc cct agc    240
Ser Ile Leu Tyr Tyr Ile Ala Asn Asn Tyr Ile Ser Thr Leu Pro Ser
65                  70                  75                  80
ccg ctc gcc tac gtg gca tgg ccc gtt tac tgg gcc gtc caa ggg tgc    288
Pro Leu Ala Tyr Val Ala Trp Pro Val Tyr Trp Ala Val Gln Gly Cys
                85                  90                  95
gtc tta acc ggg gtg tgg gtc ata gcc cac gaa tgt ggc cat cat gct    336
Val Leu Thr Gly Val Trp Val Ile Ala His Glu Cys Gly His His Ala
            100                 105                 110
ttt agc gac cac caa tgg ctc gat gac acc gtg ggt ctc gtc ttg cac    384
Phe Ser Asp His Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Leu Val Leu His
        115                 120                 125
tcg ttc cta ctc gtg ccc tac ttt tcg tgg aaa tat agc cac cgt agg    432
Ser Phe Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg
    130                 135                 140
cac cac tcg aac acg ggc tcg atc gag cac gat gag gtt ttc gtc ccg    480
His His Ser Asn Thr Gly Ser Ile Glu His Asp Glu Val Phe Val Pro
145                 150                 155                 160
aag ttg aaa tcg ggc gtc cgg tca acc gcc cgg tac cta aac aac cca    528
Lys Leu Lys Ser Gly Val Arg Ser Thr Ala Arg Tyr Leu Asn Asn Pro
                165                 170                 175
ccg ggc cga atc ttg acc cta ctc gta acc cta acc ctc ggt tgg cct    576
Pro Gly Arg Ile Leu Thr Leu Leu Val Thr Leu Thr Leu Gly Trp Pro
            180                 185                 190
cta tac ctc acg ttc aac gtt tcg ggc cgt tac tac gac cgg ttc gcg    624
Leu Tyr Leu Thr Phe Asn Val Ser Gly Arg Tyr Tyr Asp Arg Phe Ala
        195                 200                 205
tgc cat ttc gac ccg aat agc ccg atc tac tcg aag cgc gaa cgg gct     672
Cys His Phe Asp Pro Asn Ser Pro Ile Tyr Ser Lys Arg Glu Arg Ala
    210                 215                 220
caa atc ttc ata tcc gac gcc ggg atc tta gcc gta gtc ttc gta ctc     720
Gln Ile Phe Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Val Phe Val Leu
225                 230                 235                 240
ttc cga ctc gca atg acc aaa ggg ctc acg tgg gtc cta acc atg tac     768
Phe Arg Leu Ala Met Thr Lys Gly Leu Thr Trp Val Leu Thr Met Tyr
                245                 250                 255
ggt ggc ccg tta ctc gtg gtc aac ggt ttc cta gtc ttg atc aca ttc     816
Gly Gly Pro Leu Leu Val Val Asn Gly Phe Leu Val Leu Ile Thr Phe
            260                 265                 270
cta caa cac act cac cct tcg ctc ccg cac tat gac tca acc gaa tgg     864
Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp
        275                 280                 285
gat tgg tta cgt ggg gcc ctc acc aca atc gac cgt gat tac ggg atc     912
Asp Trp Leu Arg Gly Ala Leu Thr Thr Ile Asp Arg Asp Tyr Gly Ile
    290                 295                 300
cta aac aaa gtg ttc cat aac ata acc gac act cac gtg gcc cac cat     960
Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His
305                 310                 315                 320
ttg ttc tct aca atg cct cat tac cat gca atg gaa gcc acg aag gtg    1008
Leu Phe Ser Thr Met Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Val
                325                 330                 335
atc aaa ccg att ttg ggc gat tat tat cag ttt gac ggg acc tcg att    1056
Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr Gln Phe Asp Gly Thr Ser Ile
            340                 345                 350
ttt aag gcg atg tat cgg gaa aca aag gag tgc att tat gtt gat aag    1104
Phe Lys Ala Met Tyr Arg Glu Thr Lys Glu Cys Ile Tyr Val Asp Lys
        355                 360                 365
gat gag gag gtg aaa gat ggt gtt tat tgg tat cgt aat aag att taa    1152
Asp Glu Glu Val Lys Asp Gly Val Tyr Trp Tyr Arg Asn Lys Ile
    370                 375                 380
<210>196
<211>383
<212>PRT
<213>金盏花
<400>196
Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Gln Asp Pro Thr Ash Gly Gly Asn Lys
1               5                   10                  15
Thr Glu Pro Glu Pro Ile Gln Arg Val Pro His Glu Lys Pro Pro Phe
            20                  25                  30
Thr Val Gly Asp Ile Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Asn Arg
        35                  40                  45
Ser Val Ile Arg Ser Phe Ser Tyr Val Phe Tyr Asp Leu Thr Ile Ala
    50                  55                  60
Ser Ile Leu Tyr Tyr Ile Ala Asn Asn Tyr Ile Ser Thr Leu Pro Ser
65                  70                  75                  80
Pro Leu Ala Tyr Val Ala Trp Pro Val Tyr Trp Ala Val Gln Gly Cys
                85                  90                  95
Val Leu Thr Gly Val Trp Val Ile Ala His Glu Cys Gly His His Ala
            100                 105                 110
Phe Ser Asp His Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Leu Val Leu His
        115                 120                 125
Ser Phe Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg
    130                 135                 140
His His Ser Asn Thr Gly Ser Ile Glu His Asp Glu Val Phe Val Pro
145                 150                 155                 160
Lys Leu Lys Ser Gly Val Arg Ser Thr Ala Arg Tyr Leu Asn Asn Pro
                165                 170                 175
Pro Gly Arg Ile Leu Thr Leu Leu Val Thr Leu Thr Leu Gly Trp Pro
            180                 185                 190
Leu Tyr Leu Thr Phe Asn Val Ser Gly Arg Tyr Tyr Asp Arg Phe Ala
        195                 200                 205
Cys His Phe Asp Pro Asn Ser Pro Ile Tyr Ser Lys Arg Glu Arg Ala
    210                 215                 220
Gln Ile Phe Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Val Phe Val Leu
225                 230                 235                 240
Phe Arg Leu Ala Met Thr Lys Gly Leu Thr Trp Val Leu Thr Met Tyr
                245                 250                 255
Gly Gly Pro Leu Leu Val Val Asn Gly Phe Leu Val Leu Ile Thr Phe
            260                 265                 270
Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp
        275                 280                 285
Asp Trp Leu Arg Gly Ala Leu Thr Thr Ile Asp Arg Asp Tyr Gly Ile
    290                 295                 300
Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His
305                 310                 315                 320
Leu Phe Ser Thr Met Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Val
                325                 330                 335
Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr Gln Phe Asp Gly Thr Ser Ile
            340                 345                 350
Phe Lys Ala Met Tyr Arg Glu Thr Lys Glu Cys Ile Tyr Val Asp Lys
        355                 360                 365
Asp Glu Glu Val Lys Asp Gly Val Tyr Trp Tyr Arg Asn Lys Ile
    370                 375                 380
<210>197
<211>903
<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(903)
<223>Δ5延伸酶
<400>197
atg tct gct tct gga gct ttg ttg cct gct att gct ttc gct gct tac     48
Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Phe Ala Ala Tyr
1               5                   10                  15
gct tac gct acc tac gct tat gct ttc gag tgg tct cat gct aac gga     96
Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly
            20                  25                  30
atc gat aac gtg gat gct aga gag tgg att gga gct ttg tct ttg aga    144
Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg
        35                  40                  45
ctc cct gca att gct acc acc atg tac ctc ttg ttc tgc ctt gtg gga    192
Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly
    50                  55                  60
cct aga ttg atg gct aag agg gag gct ttt gat cct aag gga ttc atg    240
Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met
65                  70                  75                  80
ctc gct tac aac gct tac caa acc gct ttc aac gtt gtg gtg ctc gga    288
Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly
                85                  90                  95
atg ttc gct aga gag atc tct gga ttg gga caa cct gtt tgg gga tct    336
Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser
            100                 105                 110
act atg cct tgg agc gat agg aag tcc ttc aag att ttg ttg gga gtg    384
Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val
        115                 120                 125
tgg ctc cat tac aac aat aag tac ctc gag ttg ttg gat act gtg ttc    432
Trp Leu His Tyr Asn Asn Lys Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe
    130                 135                 140
atg gtg gct agg aaa aag acc aag cag ctc tct ttc ttg cat gtg tac    480
Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr
145                 150                 155                 160
cat cat gct ttg ttg att tgg gct tgg tgg ctt gtt tgt cat ctc atg    528
His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met
                165                 170                 175
gct acc aac gat tgc atc gat gct tat ttc gga gct gct tgc aac tct    576
Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser
            180                 185                 190
ttc atc cac atc gtg atg tac tcc tac tac ctc atg tct gct ttg gga    624
Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly
        195                 200                 205
att aga tgc cct tgg aag aga tat atc acc cag gct cag atg ttg caa    672
Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln
    2l0                 215                 220
ttc gtg atc gtg ttc gct cat gct gtt ttc gtg ctc aga caa aag cac    720
Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His
225                 230                 235                 240
tgc cct gtt act ttg cct tgg gca caa atg ttc gtg atg aca aat atg    768
Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met
                245                 250                 255
ttg gtg ctc ttc gga aac ttc tac ctc aag gct tac tct aac aag tct    816
Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser
            260                 265                 270
agg gga gat gga gct tct tct gtt aag cct gct gag act act aga gca    864
Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala
        275                 280                 285
cct tct gtg aga aga acc agg tcc agg aag atc gat tga                903
Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp
    290                 295                 300
<210>198
<211>300
<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>198
Met Ser Ala Ser Gly Ala Leu Leu Pro Ala Ile Ala Phe Ala Ala Tyr
1               5                   10                  15
Ala Tyr Ala Thr Tyr Ala Tyr Ala Phe Glu Trp Ser His Ala Asn Gly
            20                  25                  30
Ile Asp Asn Val Asp Ala Arg Glu Trp Ile Gly Ala Leu Ser Leu Arg
        35                  40                  45
Leu Pro Ala Ile Ala Thr Thr Met Tyr Leu Leu Phe Cys Leu Val Gly
    50                  55                  60
Pro Arg Leu Met Ala Lys Arg Glu Ala Phe Asp Pro Lys Gly Phe Met
65                  70                  75                  80
Leu Ala Tyr Asn Ala Tyr Gln Thr Ala Phe Asn Val Val Val Leu Gly
                85                  90                  95
Met Phe Ala Arg Glu Ile Ser Gly Leu Gly Gln Pro Val Trp Gly Ser
            100                 105                 110
Thr Met Pro Trp Ser Asp Arg Lys Ser Phe Lys Ile Leu Leu Gly Val
        115                 120                 125
Trp Leu His Tyr Asn Asn Lys Tyr Leu Glu Leu Leu Asp Thr Val Phe
    130                 135                 140
Met Val Ala Arg Lys Lys Thr Lys Gln Leu Ser Phe Leu His Val Tyr
145                 150                 155                 160
His His Ala Leu Leu Ile Trp Ala Trp Trp Leu Val Cys His Leu Met
                165                 170                 175
Ala Thr Asn Asp Cys Ile Asp Ala Tyr Phe Gly Ala Ala Cys Asn Ser
            180                 185                 190
Phe Ile His Ile Val Met Tyr Ser Tyr Tyr Leu Met Ser Ala Leu Gly
        195                 200                 205
Ile Arg Cys Pro Trp Lys Arg Tyr Ile Thr Gln Ala Gln Met Leu Gln
    210                 215                 220
Phe Val Ile Val Phe Ala His Ala Val Phe Val Leu Arg Gln Lys His
225                 230                 235                 240
Cys Pro Val Thr Leu Pro Trp Ala Gln Met Phe Val Met Thr Asn Met
                245                 250                 255
Leu Val Leu Phe Gly Asn Phe Tyr Leu Lys Ala Tyr Ser Asn Lys Ser
            260                 265                 270
Arg Gly Asp Gly Ala Ser Ser Val Lys Pro Ala Glu Thr Thr Arg Ala
        275                 280                 285
Pro Ser Val Arg Arg Thr Arg Ser Arg Lys Ile Asp
    290                 295                 300
<210>199
<211>879
<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(879)
<223>Δ6延伸酶
<400>199
atg tct gga ttg agg gct cct aac ttc ttg cat agg ttc tgg acc aag     48
Met Ser Gly Leu Arg Ala Pro Asn Phe Leu His Arg Phe Trp Thr Lys
1               5                   10                  15
tgg gat tac gct atc tct aag gtg gtg ttc act tgc gct gat tct ttc     96
Trp Asp Tyr Ala Ile Ser Lys Val Val Phe Thr Cys Ala Asp Ser Phe
            20                  25                  30
cag tgg gat atc gga cct gtt tct tct tct acc gct cat ttg cct gct    144
Gln Trp Asp Ile Gly Pro Val Ser Ser Ser Thr Ala His Leu Pro Ala
        35                  40                  45
att gag tct cct act cct ttg gtg acc tct ttg ctc ttc tac ttg gtg    192
Ile Glu Ser Pro Thr Pro Leu Val Thr Ser Leu Leu Phe Tyr Leu Val
    50                  55                  60
act gtg ttc ttg tgg tac gga aga ttg acc aga tcc tcc gat aag aag    240
Thr Val Phe Leu Trp Tyr Gly Arg Leu Thr Arg Ser Ser Asp Lys Lys
65                  70                  75                  80
atc aga gag cct acc tgg ttg agg aga ttc atc atc tgc cac aac gct    288
Ile Arg Glu Pro Thr Trp Leu Arg Arg Phe Ile Ile Cys His Asn Ala
                85                  90                  95
ttc ttg att gtg ctc tcc ttg tac atg tgt ttg gga tgc gtt gct caa    336
Phe Leu Ile Val Leu Ser Leu Tyr Met Cys Leu Gly Cys Val Ala Gln
            100                 105                 110
gct tac caa aac gga tac acc ttg tgg gga aac gag ttc aag gct act    384
Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Trp Gly Asn Glu Phe Lys Ala Thr
        115                 120                 125
gag acc caa ttg gct ctc tac atc tac atc ttc tac gtg tcc aag atc    432
Glu Thr Gln Leu Ala Leu Tyr Ile Tyr Ile Phe Tyr Val Ser Lys Ile
    130                 135                 140
tac gag ttc gtg gat acc tac atc atg ctc ctc aag aac aac ctc agg    480
Tyr Glu Phe Val Asp Thr Tyr Ile Met Leu Leu Lys Asn Asn Leu Arg
145                 150                 155                 160
caa gtg tct ttc ttg cac atc tac cac cac tct acc atc tct ttc atc    528
Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Ser Thr Ile Ser Phe Ile
                165                 170                 175
tgg tgg atc atc gct aga aga gca cct gga gga gat gct tat ttc tcc    576
Trp Trp Ile Ile Ala Arg Arg Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr Phe Ser
            180                 185                 190
gct gct ctc aac tct tgg gtt cat gtg tgc atg tac act tac tac ctc    624
Ala Ala Leu Asn Ser Trp Val His Val Cys Met Tyr Thr Tyr Tyr Leu
        195                 200                 205
ctc tct acc ttg att gga aag gaa gat cct aag agg tct aac tac ctc    672
Leu Ser Thr Leu Ile Gly Lys Glu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Tyr Leu
    210                 215                 220
tgg tgg gga agg cat ttg acc caa atg caa atg ctc cag ttc ttc ttc    720
Trp Trp Gly Arg His Leu Thr Gln Met Gln Met Leu Gln Phe Phe Phe
225                 230                 235                 240
aac gtg ctc caa gct ctt tat tgc gct tcc ttc tcc act tac cct aag    768
Asn Val Leu Gln Ala Leu Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Pro Lys
                245                 250                 255
ttc ctc tcc aag atc ttg ctc gtg tac atg atg tct ttg ctc gga ctt    816
Phe Leu Ser Lys Ile Leu Leu Val Tyr Met Met Ser Leu Leu Gly Leu
            260                 265                 270
ttc gga cac ttc tac tac tct aag cac atc gct gct gct aag ttg caa    864
Phe Gly His Phe Tyr Tyr Ser Lys His Ile Ala Ala Ala Lys Leu Gln
        275                 280                 285
aag aag cag cag tga                                                879
Lys Lys Gln Gln
    290
<210>200
<211>292
<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>200
Met Ser Gly Leu Arg Ala Pro Asn Phe Leu His Arg Phe Trp Thr Lys
1               5                   10                  15
Trp Asp Tyr Ala Ile Ser Lys Val Val Phe Thr Cys Ala Asp Ser Phe
            20                  25                  30
Gln Trp Asp Ile Gly Pro Val Ser Ser Ser Thr Ala His Leu Pro Ala
        35                  40                  45
Ile Glu Ser Pro Thr Pro Leu Val Thr Ser Leu Leu Phe Tyr Leu Val
    50                  55                  60
Thr Val Phe Leu Trp Tyr Gly Arg Leu Thr Arg Ser Ser Asp Lys Lys
65                  70                  75                  80
Ile Arg Glu Pro Thr Trp Leu Arg Arg Phe Ile Ile Cys His Asn Ala
                85                  90                  95
Phe Leu Ile Val Leu Ser Leu Tyr Met Cys Leu Gly Cys Val Ala Gln
            100                 105                 110
Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Trp Gly Asn Glu Phe Lys Ala Thr
        115                 120                 125
Glu Thr Gln Leu Ala Leu Tyr Ile Tyr Ile Phe Tyr Val Ser Lys Ile
    130                 135                 140
Tyr Glu Phe Val Asp Thr Tyr Ile Met Leu Leu Lys Asn Asn Leu Arg
145                 150                 155                 160
Gln Val Ser Phe Leu His Ile Tyr His His Ser Thr Ile Ser Phe Ile
                165                 170                 175
Trp Trp Ile Ile Ala Arg Arg Ala Pro Gly Gly Asp Ala Tyr Phe Ser
            180                 185                 190
Ala Ala Leu Asn Ser Trp Val His Val Cys Met Tyr Thr Tyr Tyr Leu
        195                 200                 205
Leu Ser Thr Leu Ile Gly Lys Glu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Tyr Leu
    210                 215                 220
Trp Trp Gly Arg His Leu Thr Gln Met Gln Met Leu Gln Phe Phe Phe
225                 230                 235                 240
Asn Val Leu Gln Ala Leu Tyr Cys Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Pro Lys
                245                 250                 255
Phe Leu Ser Lys Ile Leu Leu Val Tyr Met Met Ser Leu Leu Gly Leu
            260                 265                 270
Phe Gly His Phe Tyr Tyr Ser Lys His Ile Ala Ala Ala Lys Leu Gln
        275                 280                 285
Lys Lys Gln Gln
    290
<210>201
<211>1421
<212>DNA
<213>Ostreococcus tauri
<220>
<221>CDS
<222>(26)..(1399)
<223>Δ6去饱和酶
<400>201
ggatccttaa ttaaggcgcg ccaaa atg tgt gtt gag acc gag aac aac gat     52
                            Met Cys Val Glu Thr Glu Asn Asn Asp
                            1               5
gga atc cct act gtg gag atc gct ttc gat gga gag aga gaa aga gct    100
Gly Ile Pro Thr Val Glu Ile Ala Phe Asp Gly Glu Arg Glu Arg Ala
10                  15                  20                  25
gag gct aac gtg aag ttg tct gct gag aag atg gaa cct gct gct ttg    148
Glu Ala Asn Val Lys Leu Ser Ala Glu Lys Met Glu Pro Ala Ala Leu
                30                  35                  40
gct aag acc ttc gct aga aga tac gtg gtt atc gag gga gtt gag tac    196
Ala Lys Thr Phe Ala Arg Arg Tyr Val Val Ile Glu Gly Val Glu Tyr
            45                  50                  55
gat gtg acc gat ttc aaa cat cct gga gga acc gtg att ttc tac gct    244
Asp Val Thr Asp Phe Lys His Pro Gly Gly Thr Val Ile Phe Tyr Ala
        60                  65                  70
ctc tct aac act gga gct gat gct act gag gct ttc aag gag ttc cac    292
Leu Ser Asn Thr Gly Ala Asp Ala Thr Glu Ala Phe Lys Glu Phe His
    75                  80                  85
cac aga tct aga aag gct agg aag gct ttg gct gct ttg cct tct aga    340
His Arg Ser Arg Lys Ala Arg Lys Ala Leu Ala Ala Leu Pro Ser Arg
90                  95                  100                 105
cct gct aag acc gct aaa gtg gat gat gct gag atg ctc cag gat ttc    388
Pro Ala Lys Thr Ala Lys Val Asp Asp Ala Glu Met Leu Gln Asp Phe
                110                 115                 120
gct aag tgg aga aag gag ttg gag agg gac gga ttc ttc aag cct tct    436
Ala Lys Trp Arg Lys Glu Leu Glu Arg Asp Gly Phe Phe Lys Pro Ser
            125                 130                 135
cct gct cat gtt gct tac aga ttc gct gag ttg gct gct atg tac gct    484
Pro Ala His Val Ala Tyr Arg Phe Ala Glu Leu Ala Ala Met Tyr Ala
        140                 145                 150
ttg gga acc tac ttg atg tac gct aga tac gtt gtg tcc tct gtg ttg    532
Leu Gly Thr Tyr Leu Met Tyr Ala Arg Tyr Val Val Ser Ser Val Leu
    155                 160                 165
gtt tac gct tgc ttc ttc gga gct aga tgt gga tgg gtt caa cat gag    580
Val Tyr Ala Cys Phe Phe Gly Ala Arg Cys Gly Trp Val Gln His Glu
170                 175                 180                 185
gga gga cat tct tct ttg acc gga aac atc tgg tgg gat aag aga atc    628
Gly Gly His Ser Ser Leu Thr Gly Asn Ile Trp Trp Asp Lys Arg Ile
                190                 195                 200
caa gct ttc act gct gga ttc gga ttg gct gga tct gga gat atg tgg    676
Gln Ala Phe Thr Ala Gly Phe Gly Leu Ala Gly Ser Gly Asp Met Trp
            205                 210                 215
aac tcc atg cac aac aag cac cat gct act cct caa aaa gtg agg cac    724
Asn Ser Met His Asn Lys His His Ala Thr Pro Gln Lys Val Arg His
        220                 225                 230
gat atg gat ttg gat acc act cct gct gtt gct ttc ttc aac acc gct    772
Asp Met Asp Leu Asp Thr Thr Pro Ala Val Ala Phe Phe Asn Thr Ala
    235                 240                 245
gtg gag gat aat aga cct agg gga ttc tct aag tac tgg ctc aga ttg     820
Val Glu Asp Asn Arg Pro Arg Gly Phe Ser Lys Tyr Trp Leu Arg Leu
250                 255                 260                 265
caa gct tgg acc ttc att cct gtg act tct gga ttg gtg ttg ctc ttc     868
Gln Ala Trp Thr Phe Ile Pro Val Thr Ser Gly Leu Val Leu Leu Phe
                270                 275                 280
tgg atg ttc ttc ctc cat cct tct aag gct ttg aag gga gga aag tac     916
Trp Met Phe Phe Leu His Pro Ser Lys Ala Leu Lys Gly Gly Lys Tyr
            285                 290                 295
gag gag ctt gtg tgg atg ttg gct gct cat gtg att aga acc tgg acc     964
Glu Glu Leu Val Trp Met Leu Ala Ala His Val Ile Arg Thr Trp Thr
        300                 305                 310
att aag gct gtt act gga ttc acc gct atg caa tcc tac gga ctc ttc    1012
Ile Lys Ala Val Thr Gly Phe Thr Ala Met Gln Ser Tyr Gly Leu Phe
    315                 320                 325
ttg gct act tct tgg gtt tcc gga tgc tac ttg ttc gct cac ttc tct    1060
Leu Ala Thr Ser Trp Val Ser Gly Cys Tyr Leu Phe Ala His Phe Ser
330                 335                 340                 345
act tct cac acc cat ttg gat gtt gtt cct gct gat gag cat ttg tct    1108
Thr Ser His Thr His Leu Asp Val Val Pro Ala Asp Glu His Leu Ser
                350                 355                 360
tgg gtt agg tac gct gtg gat cac acc att gat atc gat cct tct cag    1156
Trp Val Arg Tyr Ala Val Asp His Thr Ile Asp Ile Asp Pro Ser Gln
            365                 370                 375
gga tgg gtt aac tgg ttg atg gga tac ttg aac tgc caa gtg att cat    1204
Gly Trp Val Asn Trp Leu Met Gly Tyr Leu Asn Cys Gln Val Ile His
        380                 385                 390
cac ctc ttc cct tct atg cct caa ttc aga caa cct gag gtg tcc aga    1252
His Leu Phe Pro Ser Met Pro Gln Phe Arg Gln Pro Glu Val Ser Arg
    395                 400                 405
aga ttc gtt gct ttc gct aag aag tgg aac ctc aac tac aag gtg atg    1300
Arg Phe Val Ala Phe Ala Lys Lys Trp Asn Leu Asn Tyr Lys Val Met
410                 415                 420                 425
act tat gct gga gct tgg aag gct act ttg gga aac ctc gat aat gtg    1348
Thr Tyr Ala Gly Ala Trp Lys Ala Thr Leu Gly Asn Leu Asp Asn Val
                430                 435                 440
gga aag cac tac tac gtg cac gga caa cat tct gga aag acc gct tga    1396
Gly Lys His Tyr Tyr Val His Gly Gln His Ser Gly Lys Thr Ala
            445                 450                 455
taa ttaattaagg cgcgccgaat tc                                       1421
<210>202
<211>456
<212>PRT
<213>Ostreococcus tauri
<400>202
Met Cys Val Glu Thr Glu Asn Asn Asp Gly Ile Pro Thr Val Glu Ile
1               5                   10                  15
Ala Phe Asp Gly Glu Arg Glu Arg Ala Glu Ala Asn Val Lys Leu Ser
            20                  25                  30
Ala Glu Lys Met Glu Pro Ala Ala Leu Ala Lys Thr Phe Ala Arg Arg
        35                  40                  45
Tyr Val Val Ile Glu Gly Val Glu Tyr Asp Val Thr Asp Phe Lys His
    50                  55                  60
Pro Gly Gly Thr Val Ile Phe Tyr Ala Leu Ser Asn Thr Gly Ala Asp
65                  70                  75                  80
Ala Thr Glu Ala Phe Lys Glu Phe His His Arg Ser Arg Lys Ala Arg
                85                  90                  95
Lys Ala Leu Ala Ala Leu Pro Ser Arg Pro Ala Lys Thr Ala Lys Val
            100                 105                 110
Asp Asp Ala Glu Met Leu Gln Asp Phe Ala Lys Trp Arg Lys Glu Leu
        115                 120                 125
Glu Arg Asp Gly Phe Phe Lys Pro Ser Pro Ala His Val Ala Tyr Arg
    130                 135                 140
Phe Ala Glu Leu Ala Ala Met Tyr Ala Leu Gly Thr Tyr Leu Met Tyr
145                 150                 155                 160
Ala Arg Tyr Val Val Ser Ser Val Leu Val Tyr Ala Cys Phe Phe Gly
                165                 170                 175
Ala Arg Cys Gly Trp Val Gln His G1u Gly Gly His Ser Ser Leu Thr
            180                 185                 190
Gly Asn Ile Trp Trp Asp Lys Arg Ile Gln Ala Phe Thr Ala Gly Phe
        195                 200                 205
Gly Leu Ala Gly Ser Gly Asp Met Trp Asn Ser Met His Asn Lys His
    210                 215                 220
His Ala Thr Pro Gln Lys Val Arg His Asp Met Asp Leu Asp Thr Thr
225                 230                 235                 240
Pro Ala Val Ala Phe Phe Asn Thr Ala Val Glu Asp Asn Arg Pro Arg
                245                 250                 255
Gly Phe Ser Lys Tyr Trp Leu Arg Leu Gln Ala Trp Thr Phe Ile Pro
            260                 265                 270
Val Thr Ser Gly Leu Val Leu Leu Phe Trp Met Phe Phe Leu His Pro
        275                 280                 285
Ser Lys Ala Leu Lys Gly Gly Lys Tyr Glu Glu Leu Val Trp Met Leu
    290                 295                 300
Ala Ala His Val Ile Arg Thr Trp Thr Ile Lys Ala Val Thr Gly Phe
305                 310                 315                 320
Thr Ala Met Gln Ser Tyr Gly Leu Phe Leu Ala Thr Ser Trp Val Ser
                325                 330                 335
Gly Cys Tyr Leu Phe Ala His Phe Ser Thr Ser His Thr His Leu Asp
            340                 345                 350
Val Val Pro Ala Asp Glu His Leu Ser Trp Val Arg Tyr Ala Val Asp
        355                 360                 365
His Thr Ile Asp Ile Asp Pro Ser Gln Gly Trp Val Asn Trp Leu Met
    370                 375                 380
Gly Tyr Leu Asn Cys Gln Val Ile His His Leu Phe Pro Ser Met Pro
385                 390                 395                 400
Gln Phe Arg Gln Pro Glu Val Ser Arg Arg Phe Val Ala Phe Ala Lys
                405                 410                 415
Lys Trp Asn Leu Asn Tyr Lys Val Met Thr Tyr Ala Gly Ala Trp Lys
            420                 425                 430
Ala Thr Leu Gly Asn Leu Asp Asn Val Gly Lys His Tyr Tyr Val His
        435                 440                 445
Gly Gln His Ser Gly Lys Thr Ala
    450                 455

Claims (55)

1.在转基因植物的种子中产生基于总脂类含量按重量计至少20％含量的通式I化合物的方法，
该方法包括下面的步骤：
a)向生物中导入至少一种编码Δ9延伸酶和Δ6去饱和酶活性的核酸序列，和
b)向生物中导入至少一种编码Δ8去饱和酶和Δ6延伸酶活性的核酸序列，和
c)向生物中导入至少一种编码Δ5去饱和酶活性的核酸序列，和
d)向生物中导入至少一种编码Δ5延伸酶活性的核酸序列，和
e)向生物中导入至少一种编码Δ4去饱和酶活性的核酸序列，和
其中式I中的变量和取代基具有下面的含义：
R1＝羟基、辅酶A(硫酯)、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血二磷脂酰甘油、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰肌醇、鞘碱(sphingo base)或者通式II的原子团
R2＝氢、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血二磷脂酰甘油、溶血磷脂酰丝氨酸、溶血磷脂酰肌醇，或者饱和或不饱和的C2-C24-烷基羰基，
R3＝氢、饱和或不饱和的C2-C24-烷基羰基，或者R2和R3相互独立地为通式Ia的原子团：
其中
n＝2、3、4、5、6、7或9，m＝2、3、4、5或6并且p＝0或3。
2.权利要求1的方法，其中变量n、m和p具有下面的含义：
n＝2、3或5，m＝4、5或6和p＝0或3。
3.权利要求1或2的方法，其中在式I中，m＝4，n＝3，p＝3并且所述化合物是花生四烯酸，和/或m＝5，n＝3，p＝0并且所述化合物是二十碳五烯酸，和/或m＝5，n＝5，p＝0并且所述化合物是二十二碳五烯酸，和/或m＝6，n＝3，p＝0并且所述化合物是二十二碳六烯酸。
4.权利要求2或3的方法，其中在转基因植物的种子中，式I的所有化合物的含量一起基于总脂类含量按重量计为至少27％。
5.权利要求2或3的方法，其中在转基因植物的种子中，二十二碳六烯酸的含量基于总脂类含量按重量计为至少1％。
6.权利要求1到5的方法，其中编码具有Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶活性的多肽的核酸序列选自：
a)具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199或SEQ ID NO：201中所示序列的核酸序列，或者
b)核酸序列，其由于遗传密码简并性可以从SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76、SEQID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：194、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：200或SEQ ID NO：202中所示氨基酸序列衍生得到，或者
c)SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：193、SEQID NO：197、SEQ ID NO：199或SEQ ID NO：201中所示核酸序列的衍生物，其编码的多肽在氨基酸水平上与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ IDNO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ IDNO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ IDNO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ IDNO：184、SEQ ID NO：194、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：200或SEQ IDNO：202有至少40％同一性并且具有Δ9延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ6延伸酶、Δ5去饱和酶、Δ5延伸酶或Δ4去饱和酶活性。
7.权利要求1到6的方法，其中向转基因植物中还导入编码具有ω3去饱和酶活性的多肽的核酸序列，该核酸序列选自：
a)具有SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：105中所示序列的核酸序列，或者
b)由于遗传密码简并性，可以从SEQ ID NO：88或者SEQ ID NO：106中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或者
c)SEQ ID NO：87或SEQ ID NO：105中所示核酸序列的衍生物，其编码的多肽在氨基酸水平上与SEQ ID NO：88或SEQ ID NO：106有至少60％同一性并且具有ω3去饱和酶活性。
8.权利要求1到7的方法，其中向转基因植物中还导入编码具有Δ12去饱和酶活性的多肽的核酸序列，该核酸序列选自：
a)具有SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：195中所示序列的核酸序列，或者
b)由于遗传密码简并性，可以从SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110或者SEQ ID NO：196中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或者
c)SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109或SEQ ID NO：195中所示核酸序列的衍生物，其编码的多肽在氨基酸水平上与SEQ ID NO：108、SEQID NO：110或者SEQ ID NO：196有至少60％同一性并且具有Δ12去饱和酶活性。
9.权利要求1到8的方法，其中向转基因植物中还导入编码脂肪酸或者脂类代谢的生物合成途径的蛋白质的核酸序列，所述蛋白质选自酰基辅酶A脱氢酶、酰基ACP[＝酰基载体蛋白]去饱和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基转移酶、酰基-辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、脂肪酸合酶、脂肪酸羟化酶、乙酰基-辅酶A羧化酶、酰基辅酶A氧化酶、脂肪酸去饱和酶、脂肪酸炔属酶(acetylenase)、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氢过氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶。
10.权利要求1到9的方法，其中取代基R2或R3相互独立地为饱和或不饱和的C18-C22-烷基羰基。
11.权利要求1到10的方法，其中取代基R2或R3相互独立地为具有至少两个双键的不饱和的C18-、C20-或C22-烷基羰基。
12.权利要求1到11的方法，其中转基因植物选自产油植物、蔬菜植物或者观赏植物。
13.权利要求1到12的方法，其中转基因生物是选自漆树科(Anacardiaceae)、菊科(Asteraceae)、紫草科(Boraginaceae)、十字花科(Brassicaceae)、大麻科(Cannabaceae)、菊科(Compositae)、十字花科(Cruciferae)、葫芦科(Cucurbitaceae)、胡颓子科(Elaeagnaceae)、大戟科(Euphorbiaceae)、豆科(Fabaceae)、牻牛儿苗科(Geraniaceae)、禾本科(Gramineae)、豆科(Leguminosae)、亚麻科(Linaceae)、锦葵科(Malvaceae)、辣木科(Moringaceae)、地钱科(Marchantiaceae)、柳叶菜科(Onagraceae)、铁青树科(Olacaceae)、木犀科(Oleaceae)、罂粟科(Papaveraceae)、胡椒科(Piperaceae)、胡麻科(Pedaliaceae)、禾本科(Poaceae)或者茄科(Solanaceae)的转基因植物。
14.权利要求1到13的方法，其中通式I的化合物以它们的油、脂类或者游离脂肪酸的形式从生物中分离。
15.在转基因植物中产生权利要求1的通式I的化合物的方法，其包括：
a)向植物中导入至少一种核酸序列，其编码具有Δ6去饱和酶活性的多肽并且选自：
i)具有SEQ ID NO：193或者SEQ ID NO：201中所示序列的核酸序列，
ii)编码SEQ ID NO：194或者SEQ ID NO：202中所示氨基酸序列的核酸序列，
iii)在严格条件下与SEQ ID NO：193或者SEQ ID NO：201中所示核酸序列的互补链杂交的核酸序列，和
iv)与SEQ ID NO：193或者SEQ ID NO：201中所示序列有至少60％同一性的核酸序列，
b)向植物中导入至少一种核酸序列，其编码具有Δ6延伸酶活性的多肽并且选自：
i)具有SEQ ID NO：27或者SEQ ID NO：199中所示序列的核酸序列，
ii)编码SEQ ID NO：28或者SEQ ID NO：200中所示氨基酸序列的核酸序列，
iii)在严格条件下与SEQ ID NO：27或者SEQ ID NO：199中所示核酸序列的互补链杂交的核酸序列，和
iv)与SEQ ID NO：27或者SEQ ID NO：199中所示序列有至少60％同一性的核酸序列，
c)向植物中导入至少一种核酸序列，其编码具有Δ5去饱和酶活性的多肽并且选自：
i)具有SEQ ID NO：11中所示序列的核酸序列，
ii)编码SEQ ID NO：12中所示氨基酸序列的核酸序列，
iii)在严格条件下与SEQ ID NO：11中所示核酸序列的互补链杂交的核酸序列，和
iv)与SEQ ID NO：11中所示序列有至少60％同一性的核酸序列，
其中式I中的变量和取代基具有权利要求1中给出的含义。
16.权利要求15的方法，其中取代基R2或R3相互独立地为饱和或不饱和的C10-C22-烷基羰基。
17.权利要求15或16的方法，其中取代基R2或R3相互独立地为具有至少两个双键的不饱和的C18-、C20-或C22-烷基羰基。
18.权利要求15到17的方法，其中向植物中额外导入编码具有Δ12去饱和酶活性的多肽的核酸序列。
19.权利要求18的方法，其中所述核酸序列选自：
a)具有SEQ ID NO：195中所示序列的核酸序列，
b)编码SEQ ID NO：196中所示氨基酸序列的核酸序列，
c)在严格条件下与SEQ ID NO：195中所示核酸序列的互补链杂交的核酸序列，和
d)与SEQ ID NO：195中所示序列有至少60％同一性的核酸序列。
20.权利要求18的方法，其中Δ12去饱和酶在种子特异的启动子的控制下表达。
21.权利要求15到20的方法，其中向植物中额外导入编码具有Δ5延伸酶活性的多肽的核酸序列。
22.权利要求21的方法，其中所述核酸序列选自：
a)具有SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ IDNO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：113、SEQID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQID NO：135、SEQ ID NO：137或者SEQ ID NO：197中所示序列的核酸序列，
b)编码SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ IDNO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：114、SEQID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQID NO：136、SEQ ID NO：138或者SEQ ID NO：198中所示氨基酸序列的核酸序列，
c)核酸序列，其在严格条件下与SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137或者SEQ ID NO：197中所示核酸序列的互补链杂交，和
d)核酸序列，其与SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137或者SEQ ID NO：197中所示序列有至少60％同一性。
23.权利要求21的方法，其中Δ5延伸酶在种子特异的启动子的控制下表达。
24.权利要求12到24的方法，其中所有核酸序列导入植物中一个共用的重组核酸分子上。
25.权利要求24的方法，其中每个核酸序列处于其自身启动子的控制下。
26.权利要求25的方法，其中所述自身启动子是种子特异的启动子。
27.权利要求15到26的方法，其中在式I中，m＝4，n＝3，p＝3并且所述化合物是花生四烯酸，和/或m＝5，n＝3，p＝0并且所述化合物是二十碳五烯酸，和/或m＝6，n＝3，p＝0并且所述化合物是二十二碳六烯酸。
28.权利要求15到27的方法，其中所述植物是油料种子植物或者油料果实植物。
29.权利要求28的方法，其中所述植物选自大豆、花生、油菜、卡诺拉油菜、亚麻子、月见草、毛蕊花、大蓟、榛子、杏仁、澳洲坚果、鳄梨、月桂、野玫瑰、西葫芦/南瓜、阿月混子、芝麻、向日葵、红花、琉璃苣、玉米、罂粟、芥菜、大麻、蓖麻、橄榄、金盏花、石榴、油棕榈树、胡桃和椰子。
30.权利要求28或29的方法，其中所述植物是芥菜。
31.权利要求15到30的方法，其中式I的化合物以它们的油、脂类和游离脂肪酸的形式从植物得到。
32.权利要求31的方法，其中从式I的化合物释放不饱和或者饱和脂肪酸。
33.权利要求32的方法，其中通过碱水解或者酶切割实现所述释放。
34.权利要求15到33的方法，其中基于转基因植物的总脂类含量，花生四烯酸浓度为至少25％。
35.权利要求15到33的方法，其中基于转基因植物的总脂类含量，二十碳五烯酸浓度为至少15％。
36.油、脂类或者脂肪酸或者其级分，其通过前面权利要求之一的方法得到。
37.如权利要求15、18或者21中定义的Δ12延伸酶、Δ6去饱和酶、Δ5去饱和酶、Δ6延伸酶和Δ5延伸酶的用途，用于产生权利要求1的式I化合物。
38.重组核酸分子，其包含：
a)在植物细胞，优选在种子细胞中有活性的启动子的一个或多个拷贝，
b)如在权利要求15中定义的至少一种核酸序列，其编码Δ6去饱和酶活性，
c)如在权利要求15中定义的至少一种核酸序列，其编码Δ5去饱和酶活性，
d)如在权利要求15中定义的至少一种核酸序列，其编码Δ6延伸酶活性，和
e)终止子序列的一个或多个拷贝。
39.权利要求38的重组核酸分子，其还包含如权利要求18定义的编码Δ12去饱和酶的核酸序列。
40.权利要求38或者39的重组核酸分子，其还包含如权利要求21定义的编码Δ5延伸酶的核酸序列。
41.权利要求38到40的重组核酸分子，其还包含脂肪酸或者脂类代谢中的生物合成基因，所述基因是选自酰基辅酶A脱氢酶、酰基ACP[＝酰基载体蛋白]去饱和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基转移酶、酰基-辅酶A溶血磷脂酰基转移酶、脂肪酸合酶、脂肪酸羟化酶、乙酰基-辅酶A羧化酶、酰基辅酶A氧化酶、脂肪酸去饱和酶、脂肪酸炔属酶(acetylenase)、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氢过氧化物裂合酶和脂肪酸延伸酶的基因。
42.权利要求38到41任一项的重组核酸分子，其还包含脂肪酸或者脂类代谢中的生物合成基因，所述基因是选自Δ4去饱和酶、Δ8去饱和酶、Δ9去饱和酶或Δ9延伸酶的基因。
43.转基因植物，其包含权利要求38到42任一项的重组核酸分子或者包含权利要求15中定义的核酸序列和，如果合适，还包含权利要求18或21中定义的核酸序列。
44.权利要求15到35的方法，其中通式I的化合物以它们的油、脂类或者游离脂肪酸的形式从生物中分离。
45.油、脂类或者脂肪酸或者其级分，其通过权利要求15到35任一项的方法产生。
46.油、脂类或者脂肪酸组合物，其包含通过权利要求1到14任一项的方法产生的PUFA并且来自转基因植物。
47.产生油、脂类或者脂肪酸组合物的方法，其包括将权利要求45的油、脂类或者脂肪酸或者权利要求46的油、脂类或者脂肪酸组合物与动物或者微生物油、脂类或者脂肪酸混合。
48.权利要求45的油、脂类或者脂肪酸、权利要求46的油、脂类或者脂肪酸组合物或者根据权利要求46产生的油、脂类或者脂肪酸组合物在饲料、食品、化妆品或者药物中的应用。
49.分离的核酸序列，其编码具有Δ5延伸酶活性的多肽并且具有SEQ ID NO：197中所示序列。
50.分离的核酸序列，其编码具有Δ6延伸酶活性的多肽并且具有SEQ ID NO：199中所示序列。
51.分离的核酸序列，其编码具有Δ6去饱和酶活性的多肽并且具有SEQ ID NO：201中所示序列。
52.基因构建体，其包含权利要求49到51任一项的分离的核酸，其中该核酸功能地连接一个或多个调节信号。
53.权利要求53的基因构建体，其中该核酸构建体包含脂肪酸或者脂类代谢中的额外的生物合成基因，所述基因是选自酰基辅酶A脱氢酶、酰基ACP[＝酰基载体蛋白]去饱和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基转移酶、酰基-辅酶A：溶血磷脂酰基转移酶、脂肪酸合酶、脂肪酸羟化酶、乙酰基-辅酶A羧化酶、酰基辅酶A氧化酶、脂肪酸去饱和酶、脂肪酸炔属酶(acetylenase)、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氢过氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶的基因。
54.载体，其包含权利要求50或51的核酸或者权利要求52或者53的基因构建体。
55.转基因植物，其包含权利要求50或51的至少一种核酸或者权利要求52或者53的基因构建体或者权利要求54的载体。
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