CN1781516A - 制备大叶蒟提取物的方法、提取物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了从一种药用植物大叶蒟Piperlaetispicum C.DC.中提取、精制提取物的方法，利用该方法得到的提取物，以及该提取物在治疗、预防抑郁症、焦虑症等精神疾病方面的医疗、保健及食品添加剂等领域的应用。

Description

制备大叶蒟提取物的方法、提取物及其应用
技术领域
本发明涉及药用植物大叶蒟Piper laetispicum C.DC.，具体地说，是关于制备大叶蒟Piper laetispicum C.DC.提取物的方法、利用该方法制备得到的提取物，以及该提取物的应用。
背景技术
抑郁症和(或)焦虑症目前已经成为妨碍人类健康的最主要疾病之一，根据WHO资料显示，抑郁症和(或)焦虑症所造成的疾病总负担在发达国家已经仅次于冠心病，在我国也是仅位于慢性阻塞性肺病之后而居第二位。神经精神疾病在我国疾病总负担中排名首位，约占疾病总负担的1/5。同时，已有众多的社区和医疗研究揭示抑郁和焦虑障碍都有比较高的发病率，如全美合病调查发现有17.3％的普通人群遭遇抑郁发作和24.5％的人在终生的某个时段经历过焦虑障碍，这些研究几乎都一致表明，未来还有大量人群将面临抑郁症或焦虑症的困扰。抑郁症和(或)焦虑症是精神疾病中最主要的问题，普通人群年发病率高于2％，时点患病率高于3％，终生患病率约10％-17％。某些特殊群体，例如身体残障人士、慢性躯体疾病患者、药物滥用者、酒精依赖者及独身主义者等，其抑郁症和(或)焦虑症的患病率、发病率就更高了，所以抑郁症和(或)也有“精神感冒”之称。随着人口日益老龄化，老年人的精神疾病发病率越来越高，其中以老年性痴呆、抑郁症和(或)焦虑症最为突出。
高发且难以根治的抑郁症和(或)焦虑症已经形成了巨大的抗抑郁药及抗焦虑药市场。合成抗抑郁药及抗焦虑药一般存在抗病谱窄、副作用大、药价高和停药易复发存在“停药综合症”等缺陷，因而国内外在抗抑郁药及抗焦虑药的研究开发方面越来越注意天然药物的应用，特别是有2000多年历史的中草药及天然植物提取物。
有关大叶蒟的应用鲜有记载，仅《中国植物志》、《中华本草》(2000版)等有少量植物学专业方面的描述。《中华本草》有关记载为：“该药材性温、味辛，用于活血消肿止痛，主治跌打损伤，淤血肿痛，煎汤内服或泡酒……”。
发明人经过多年的系统研究，动物实验发现其有关提取物具有显著的抗抑郁活性，以及一定的抗焦虑、镇痛及镇静等生物活性。
此前发明人已经申请了两项与大叶蒟相关的中国发明专利，其中第一项(申请号：00119452.6)公开了大叶蒟及其提取物在制备药物组合物中的应用；第二项(申请号：03115911.7)公开了一种大叶蒟有效部位提取物的制备方法，利用该方法制备得到的提取物可以用于抑郁症或其它情感障碍性疾病的治疗和预防等，但是其提取过程中采用回流法，由于回流法的温度相对较高，对有效成分的破坏比较大，因此提取物的药理活性不佳。另外实验操作难度较高。
发明内容
本发明的首要目的即在于克服此前制备大叶蒟提取物的方法的所存在的缺点，从而提供一种改进的高效制备大叶蒟提取物的方法。
本发明的另一个目的在于提供利用所述方法制备得到的大叶蒟提取物。
本发明的又一个目的在于提供所述大叶蒟提取物的应用。
本发明的大叶蒟提取物的制备方法包括以大叶蒟药材，包括根、根茎、藤茎、叶及果实或全草，进行前处理，然后以有机溶剂浸渍或渗漉直接获得提取物；或者经浸渍或渗漉得到的粗提物再进行精制后得到提取物，精制的方法包括但不限于：大孔吸附树脂、聚酰胺柱、离子交换法、醇提水沉法以及酸提碱沉法等；或者也可以将进行前处理的药材以超临界流体萃取法制备得到提取物。
经动物实验证明，本发明的方法制备得到的大叶蒟提取物具有明显的抗抑郁活性及一定的抗焦虑、镇静和镇痛作用，且与采用回流法制备的提取物相比，具有提高了酰胺类生物碱含量及提取物生物活性等优势，有可能开发成为抗抑郁药、抗焦虑药、镇静催眠药、解热镇痛抗炎药以及抗老年性痴呆药等。因此可以作为药品、保健品或食品添加剂的组份或部分组份，用于治疗、预防、诊断抑郁症、焦虑症、神经衰弱、癔症性神经症、精神分裂症、躁狂症、心境障碍、失眠症、老年性痴呆等精神疾病。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而不用于限定本发明的范围。
实施例1、大叶蒟提取物的制备
按表1所示，分别取大叶蒟根、根茎、藤茎、叶及果实或全草，制备大叶蒟提取物，具体如下：
样品1：取大叶蒟的根和根茎切成段状，加入约80％乙醇常温下浸渍约24小时，然后加入同浓度乙醇至药材量的15倍，进行渗漉得粗提物，渗漉液缓慢加入约等量的60℃温水搅拌混匀，然后将稀释后的渗漉液上D101大孔吸附树脂柱，流穿后分别以50％、85％乙醇洗脱，收集85％乙醇洗脱的液体，经≤70℃浓缩干燥得到精制的提取物。
样品2：取大叶蒟的根和根茎切成段状，加入约45％乙醇常温下浸渍约48小时，然后加入同浓度乙醇至药材量的20倍，微加热至50-60℃进行热渗漉得粗提物，然后将粗提物溶液上D101大孔吸附树脂柱，流穿后分别以50％、85％乙醇洗脱，收集80-85％乙醇洗脱的液体，经≤70℃浓缩干燥得到精制的提取物。
样品3：取大叶蒟的藤茎和叶打粉，加入约80％乙醇常温下浸渍约24小时，然后加入同浓度乙醇至药材量的20倍，进行渗漉得粗提物溶液，然后将粗提物≤70℃减压适度浓缩，加凉水搅拌，冷藏3天后滤去沉淀，最后经≤70℃浓缩干燥得到精制的提取物。
样品4：取大叶蒟的全草切成段状，加入0.5％醋酸溶液，渗漉得粗提物，然后加入2％的氨水以酸提碱沉法处理精制，≤70℃浓缩干燥得到精制的提取物。
样品5：取大叶蒟的根及根茎切成段状，加入55％甲醇常温下浸渍约24小时，然后加入同浓度甲醇至药材量的20倍，微加热至50-60℃进行热渗漉得粗提取物，然后直接浓缩干燥即得提取物。
样品6：取大叶蒟的根及藤茎打粉，加入乙醚于常温下密封浸渍约24小时，然后收集提取液，并重复3次。合并提取液回收乙醚，然后以丙酮溶解，以聚酰胺柱处理，最后于≤70℃浓缩干燥得到精制的提取物。
样品7：取大叶蒟的根及根茎切成段状，加入氯仿常温下密封浸渍约24小时，然后加入氯仿至药材量的10倍进行渗漉得到粗提物，回收氯仿后上离子交换柱处理，最后于≤70℃浓缩干燥得到精制的提取物。
样品8：取大叶蒟的根及藤茎打粉，加入氯仿常温下密封浸渍约24小时，然后加氯仿至药材量的10倍进行渗漉得粗提取物，回收氯仿后直接经≤70℃浓缩干燥即得。
样品9：取大叶蒟的全草打粉，加适量乙酸乙酯常温浸渍约24小时，然后加乙酸乙酯至药材量的10倍进行渗漉得粗提取物，回收乙酸乙酯后，加乙醇溶解，之后将乙醇溶液上大孔吸附树脂柱精制，分别以40％、80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱的洗脱液，最后经≤70℃浓缩干燥得到精制的提取物。
样品10：取大叶蒟的根切成段状，加入适量0.5％的氨水浸润24小时，然后加入乙醚提取3次，合并提取液回收乙醚后于≤70℃浓缩干燥得到精制的提取物。
样品11：取大叶蒟的根及根茎打粉，加85％乙醇常温浸渍，后水浴回流2次，过滤合并滤液，浓缩并加稀乙醇得约30％乙醇溶液，然后将之上大孔吸附树脂柱精制，分别以50％、95％乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液，经浓缩干燥后得到精制的提取物。
样品12：取大叶蒟的全草切成段状，在所确定的压力、温度、静态萃取时间、动态萃取量及改性剂加入量等各因素最佳条件下(本实施例中，压力为27.6Mpa、温度为40℃、静态萃取时间为5min、动态萃取量为9ml、改性剂为氯仿)，放入超临界CO2萃取的萃取装置连续萃取(《现代实用中药新剂型新技术》P379-401，董方言，人民卫生出版社，2001)，得到提取物。
                                     表1
  样品号   药材   前处理方式   有机溶剂   提取方式   精制方式
  1   根、根茎   切制   乙醇   渗漉   大孔树脂
  2   根、根茎   切制   乙醇   渗漉   大孔树脂
  3   藤茎、叶   打粉   乙醇   渗漉   醇提水沉法
  4   全草   切制   酸水   浸渍   酸提碱沉法
  5   根、根茎   切制   甲醇   渗漉   -
  6   根、藤茎   打粉   乙醚   浸渍   聚酰胺柱
  7   根、根茎   切制   氯仿   渗漉   离子交换
  8   根、藤茎   打粉   氯仿   渗漉   -
  9   全草   打粉   乙酸乙酯   渗漉   大孔树脂
  10   根   切制   碱水   浸渍   有机溶剂提取
  11   根、根茎   打粉   乙醇   回流   大孔树脂
  12   全草   切制   超临界流体萃取
实施例2、大叶蒟提取物用于制备药物
以实施例1得到的1-12号提取物作为药物原料，按照药学领域的常规生产方法制备成胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、滴丸、微丸、注射剂、粉针剂、口服液体制剂、缓释控释制剂、靶向制剂等各种剂型。鉴于这些方法皆属于现有技术中的常规操作，此处仅以实施例1得到的1号样品为例制备胶囊剂、颗粒剂及片剂。
2-1、胶囊剂
处方：
提取物20g；
玉米淀粉170g；
硬脂酸镁10g
制法：
将提取物与淀粉、硬脂酸镁混匀、过筛，均匀填充入预制的1000粒空胶囊中并封口即得，每粒填料重200mg，其中精制提取物的量20mg。
2-2、颗粒剂
处方：
提取物20g；
可溶性淀粉380g；
糊精200g
制法：
将提取物与可溶性淀粉及糊精混匀后压大片，后再整粒过筛，干燥，分装成1000袋即得。
2-3、片剂
处方：
提取物30g；
淀粉50g；
糊精30g；
蔗糖20g；
滑石粉15g；
硬脂酸镁5g。
制法：
提取物干燥前加淀粉、糊精、蔗糖，制成颗粒，干燥后加滑石粉、硬脂酸镁混匀压片1000粒，包衣即得。
实施例3、抗抑郁作用-强迫游泳试验
取小鼠随机分组，分别按表2所示给受试药物，其中药物的编号对应于实施例1的样品号(下同)，并以生理盐水对照，阳性对照组为文拉法辛。分别连续14天给受试药物，每天一次，第14天给药后60分钟，将动物置于直径约10厘米、高约20厘米、水深8-10厘米玻璃圆筒内，水温22-24℃。自第2分钟开始，纪录4分钟内不动累计时间。结果如表2所示。
                              表2
  药物*   剂量(mg/kg/d)   n   累计不动时间(s)X±SE
  CK-   -   10   83.94±6.89
  CK+   20   10   21.87±4.56**
  1   10   10   18.76±2.41**
  1   20   10   28.45±4.43**
  1   40   10   11.98±3.12**
  5   40   10   36.32±6.54**
  11   10   10   92.73±3.07
  11   20   10   37.07±12.53*
  11   40   10   51.66±6.74*
  4   40   10   33.52±3.63**
*.CK-：生理盐水溶液；
CK+：文拉法辛；
由表2的结果可见，文拉法辛和本发明的大叶蒟提取物均能缩短小鼠的累计不动时间，说明本发明的大叶蒟提取物具有显著的抗抑郁作用，且经过渗漉精制后的提取物的活性最高，明显高于回流所得提取物(样品号11)。
实施例4、抗焦虑作用-小鼠四板实验
取小鼠随机分组，分别按表3所示给受试药物，并以生理盐水对照，阳性对照组为安定。给药30分钟后将小鼠置于板上，使其探究15s。此后，小鼠每当从一块板横跨到另一块板时就给予一次电击，电流强度0.35mA，持续0.5s。小鼠每当因此产生明显的逃避反应，通常穿过2块板或3块板。如小鼠继续跑，在此后的3分钟不给电击。记录10分钟内的电击数。结果如表3所示。
由表3的结果可见，电击可使小鼠运动活性显著减少，而安定和本发明制备的大叶蒟提取物均可以增高电击数，说明本发明的大叶蒟提取物具有一定的抗焦虑作用，并且活性强于回流所得提取物(样品号11)。
                        表3
  药物*   剂量(mg/kg)   n   累计电击数X±SE
  CK-   -   8   4.80±1.63
  CK+   1   8   12.78±2.05**
  2   100   8   8.64±2.14*
  2   50   8   7.43±1.32*
  3   100   8   7.56±2.12
  8   100   8   6.87±1.69
  11   100   8   5.98±1.05
  6   100   8   8.05±2.11*
*.CK-生理盐水溶液
CK+安定
实施例5、镇静作用-开阔法试验
小鼠随机分组，分别给受试药物，并生理盐水对照，阳性对照组为卡瓦内酯提取物。30分钟后将小鼠放入高35cm的圆柱形盒子内，盒底均匀划分为边长为5cm的正方形格子。小鼠适应环境3min后，自第4min起记录此后5min内小鼠爬过的格子数。结果如表4所示。
                        表4
  药物*   剂量(mg/kg)   n   累计爬格子数X±SE
  CK-   -   8   167.38±8.70
  CK+   100   8   136.43±6.86*
  1   100   8   133.87±9.41*
  1   50   8   154.74±10.23
  7   100   8   149.78±9.61
  11   100   8   151.33±5.72
  9   100   8   157.31±9.22
*.CK-生理盐水溶液
CK+卡瓦内酯提取物
由表4的结果可见，卡瓦内酯提取物和本发明的大叶蒟提取物均可以减少小鼠的爬格子次数，说明本发明所得的大叶蒟提取物具有一定的镇静作用，并且活性强于回流所得提取物。
实施例6、镇痛作用-扭体试验
小鼠随机分组，分别给受试药物，并生理盐水对照，阳性对照组为乙酰水杨酸。30min后，分别腹腔注射0.02％苯醌水溶液0.20ml，后立即将小鼠放入四周封闭的盒子内，自小鼠出现第一次扭体反应开始，计时10min，记录此后10min内小鼠扭体次数，结果如表5所示。
                         表5
  药物*   剂量(mg/kg)   n   累计扭体次数X±SE
  CK-   -   8   29.25±2.62
  CK+   50   8   9.89±1.09**
  2   100   8   10.34±1.44**
  2   50   8   14.25±2.47*
  10   100   8   16.25±0.90*
  11   100   8   20.97±1.23
  12   100   8   19.13±2.82*
*.CK-生理盐水溶液
CK+乙酰水杨酸
由表5的结果可见，乙酰水杨酸和本发明的大叶蒟提取物均可以减少小鼠的扭体次数，说明本发明所得的大叶蒟提取物具有一定的镇痛作用，并且活性明显强于回流所得提取物(样品号11)。
综上所述，利用本发明的大叶蒟提取物的制备方法得到的提取物具有明显的抗抑郁活性及一定的抗焦虑、镇静和镇痛作用，因此可以作为药品、保健品或食品添加剂的组份或部分组份，用于治疗、预防抑郁症、焦虑症、神经衰弱、癔症性神经症、精神分裂症、躁狂症、心境障碍、失眠症、老年性痴呆等精神性疾病。且由于本发明的方法采用浸渍、渗漉以及低温浓缩干燥等的方式，因此对提取物中活性成分的破坏较小，很大程度上保存了酰胺类生物碱及木脂素等成分，相对于现有的采用回流方法制备得到的提取物，本发明的大叶蒟提取物在生理活性上具有明显的提高。

Claims (10)

1、一种大叶蒟提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：取大叶蒟的药材，进行前处理后加入有机溶剂浸渍或渗漉获得提取物。
2、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大叶蒟的药材包括大叶蒟的根、根茎、藤茎、叶、果实或全草。
3、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述用于浸渍或渗漉的有机溶剂包括但不限于：乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯和乙醚。
4、如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，还包括将浸渍或渗漉得到的粗提物进行精制的步骤。
5、如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述精制的方法包括但不限于：大孔吸附树脂处理、聚酰胺处理、离子交换法、醇提水沉法、碱润有机溶剂提取法以及酸提碱沉法。
6、一种大叶蒟提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：取大叶蒟的药材，进行前处理后以超临界流体萃取法制备得到提取物。
7、权利要求1-6中任一项所述的方法制备得到的大叶蒟提取物。
8、权利要求7的大叶蒟提取物用于制备治疗、预防和诊断精神疾病的药物、保健品或食品添加剂的用途。
9、如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述精神疾病包括但不限于：抑郁症、焦虑症、神经衰弱、癔症性神经症、精神分裂症、躁狂症、心境障碍、失眠症、老年性痴呆。
10、如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述药物的形式包括但不限于：胶囊、片剂、颗粒、散剂、滴丸、微丸、注射剂、粉针剂、口服液、缓释控释制剂、靶向制剂。
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