CN102475746B - 大叶蒟有效组分的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药的提取技术，特别涉及一种大叶蒟有效组分的制备方法，该有效组分用以下方法制备：步骤1，大叶蒟用乙醇提取，得到醇提物；步骤2，醇提物过大孔树脂柱，乙醇为冲洗液；弃掉前两次冲洗液，步骤3，收集第三批洗脱液，浓缩得到本发明有效组分提取物，本发明大叶蒟提取物在制备治疗抑郁症和焦虑症等精神疾病的药物中有很好的应用前景。

Description

大叶蒟有效组分的制备方法

技术领域

本发明涉及中药的提取技术，特别涉及一种从大叶蒟中提取分离活性物质的方法及其用途，属于中药领域。

背景技术

大叶蒟为活血消肿止痛药，别名小肠风、野胡椒、山胡椒。性味辛；温。功效为活血消肿止痛。主治跌打损伤；瘀血肿痛。用法用量为，内服：煎汤，3-10g；或泡酒。

大叶蒟为为胡椒科胡椒属植物，是中国特有的物种，分布于广西、广东、海南及沿海诸岛，民间主要用于治疗跌打损伤，淤血肿痛。

大叶蒟木质攀援藤本植物，长达10m。枝无毛，干时变淡褐色。叶革质，有透明腺点，长圆形或卵状长圆形，稀椭圆形，长12-17cm，宽4-9cm，先端短渐尖，基部斜心形，两耳圆且常重叠，上面无毛，下面疏被长柔毛，叶脉羽状，但基部常有5条比较明显的掌状脉，最上1对离基5-8cm从中脉发出；叶柄短，一侧长2-5mm，另一侧长6-10mm，被短柔毛；叶鞘长2-3mm。花单性，雌雄异株，聚集成与叶对生的穗状花序，雄花序长约10cm；总花梗长1-1.5cm，无毛；花序轴被毛；苞片阔倒卵形，盾状，有缘毛；雄蕊2枚，花药2室，花丝肥厚，长约1.2mm；雌花序与雄花序近等长，在果期延长并增粗；花序轴密被粗毛；苞片倒卵状长圆形，上面贴生于花序轴上，仅边缘分离，盾状，有缘毛；子房卵形，柱头4，先端短尖。浆果近球形，直径约5mm，果柄与果近等长。花期8-12月。

目前对大叶蒟的研究主要有如下专利：

03115911，大叶蒟有效部位的制备及其在医疗、保健领域的应用

200410084791 制备大叶蒟提取物的方法、提取物及其应用

200910046084 大叶蒟素的化学合成方法

200410025493 化合物大叶蒟素在制备药物组合物中的应用。

但这些研究主要针对的是粗提物，本发明经过研究开发出一种精提物，具有良好的治疗效果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种大叶蒟提取物及其在制备治疗精神领域疾病的药物中的用途。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种大叶蒟提取物，该提取物用以下方法制备：

步骤1，大叶蒟用乙醇提取，得到醇提物；

步骤2，醇提物过大孔树脂柱，乙醇为冲洗液；弃掉前两次冲洗液，

步骤3，收集第三批洗脱液，浓缩得到本发明提取物。

优选的本发明的的提取方法，经过以下步骤：

步骤1，大叶蒟用5-10倍量70-95％乙醇提取1-3次，每次1-3小时，合并浓缩得到的醇提物；

步骤2，醇提物用40-60％乙醇溶解，过大孔树脂柱，乙醇为洗脱液，用60-80％乙醇洗脱，洗脱液弃去；

步骤3，再用80-95％乙醇洗脱，收集该洗脱液，浓缩得到本发明提取物。

特别优选的本发明的的提取方法，经过以下步骤：

步骤1，提取：取大叶蒟地上部分，粗粉粹，加6倍量95％乙醇溶液，回流提取2h，滤过，药渣用5倍量95％乙醇回流提取2h，滤过，合并提取液，60℃减压浓缩至浓浸膏，即得大叶蒟总提物；

步骤2，过柱：取大叶蒟总提物用50％乙醇溶解至1倍生药量体积(先用1/2 95％溶解，不溶物再用1/2热水溶解，合并溶液即得)，上D101大孔树脂柱(树脂-生药比1∶3)，用70％乙醇溶液洗脱，流速1BV/h，收集洗脱液4BV，弃去；

步骤3，收集：继续用95％乙醇洗脱，流速1BV/h，收集洗脱液4BV，浓缩至浓浸膏。即得大叶蒟有效组分。

经HPLC检测，用本发明实施例1的方法得到的有效部位主要成分为：

(1)N-isobutyl-7(3，4-methylenedioxy-phenyl)-2E-4E-heptadienamide((2E，4E)-N-异丁基-9-(3，4-次甲二氧基苯)七碳二烯酰胺)；(为图1中G9)

(2)laetispiamide A((2E，4E，7E)-N-异丁基-9-(3，4-次甲二氧基苯)九碳二烯酰胺)；(为图1中G8-1)

(3)N-isobutyl-9-phenyl-2E，4E-nonadienamide((2E，4E)-N-异丁基-9-苯基九碳二烯酰胺)；(为图1中G5)

(4)laetispieine(大叶蒟素)；(为图1中G6)

经HPLC测定，四种酰胺类生物碱总含量为60~80％。

色谱条件：

色谱柱：C18(5μm，250mm×4.60mm)

流速：1.0ml/min

柱温：30℃

吸收波长：240nm

流动相：

表1：本发明的实施例1方法得到大叶蒟有效组分HPLC色谱条件

本发明还提供以本发明方法制备的大叶蒟有效组分为药物活性成分制备的药物组合物。

本发明的药物组合物，其中药物活性成分，其在组合物中所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余为药物可接受的载体。本发明的药物组合物，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋等。

本发明的药物组合物可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是口服剂型，如：胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。

本发明的药物组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。

适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。

可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。

口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。

对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。

本发明的药物组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

本发明的药物组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每次1-20剂，如：1-20袋或粒或片。

大叶蒟提取物在制备治疗抑郁症和焦虑症等精神疾病的药物中的应用。

以下通过实验数据说明本发明的有益效果。

实验一、多次给药对小鼠悬尾不动时间的影响

1.实验材料

①药品

大叶蒟提取物加入2％ Tween 80水溶液，配制成含药品16mg/ml的溶液。盐酸氟西汀，生产厂家：Patheon France(法国)；分包装厂：礼来苏州制药有限公司；规格：20mg/粒；批号：81958，临时用2％ Tween 80水溶液配制成含药品1mg/ml的溶液。

②动物

60只6~8周雄性C57BL/6小鼠，质量180～220g，都购于北京维通利华实动物技术有限公司，实验动物生产许可证：SCXK(京)2006-0009。

③实验仪器

YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪，山东省医学科学院设备站

2.方法与结果

C57BL/6小鼠，雄性，鼠龄6-8周，体重18-22g，适应性喂养1~2天后，将小鼠放入YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪中，适应1min后记录第1min末至第4min内小鼠活动次数。筛选出自主活动在70-150次的30只小鼠随机分为3组，按表1所列示药物和剂量每日灌胃给药1次，连续给药7天。各组动物于末次给药60min后，将小鼠尾端1cm处用胶布固定于支撑物上，使其呈倒挂状态，其头部离台面约10cm，用板隔开相邻动物的视线。小鼠为了克服不正常体位而挣扎活动，但活动一段时间后出现间断性不动，显示失望状态。每只动物观察6min内累计不动的时间，为失望时间。不动时间是指小鼠除呼吸外所有肢体均不动。结果见表1。

表2显示，大叶蒟提取物高、低剂量给药7天均能明显缩短小鼠尾悬吊不动时间，与溶媒对照组相比具有统计学意义(P＜0.01)。

表2 化合物多次给药对小鼠悬尾实验不动时间的影响

注：与溶媒组比较*P＜0.05，**P＜0.01

实验二、对利血平致眼睑下垂和运动不能的影响

1.试验材料

①药品

大叶蒟提取物、氟西汀溶液配制参见实施例1.(1)①项。

利血平注射液，上海复旦复华药业有限公司生产，规格1mg/ml，批号x070302。

②动物

60只雄性SPF级6~8周C57BL/6小鼠，实验动物生产许可证：SCXK(京)2006-0009。

2.方法与结果

50只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组，按表3所列示药物和剂量每日灌胃给药一次，连续7天。各组动物于末次给药1h后，按4mg/kg腹腔注射利血平，将小鼠放于直径为7.5cm的圆形滤纸中央，观察30s内各族动物中仍在滤纸中的个数，计算出圈率。同时观察各组小鼠在2min内不能睁眼情况，根据表2计算闭眼程度评分。结果见表4。

表3 利血平致眼睑下垂评分标准

观察的闭眼程度	评分标准
		双眼全闭	4分
双眼闭3/4	3分
		双眼闭2/4	2分
双眼闭1/4	1分
		双眼不闭	0分

表4 多次给药对利血平致眼睑下垂的影响

*：P＜0.05；**：P＜0.01

利血平拮抗(reserpine reversal)是一种囊泡再摄取抑制剂。小鼠腹腔注射利血平，可使脑中生物胺(去甲肾上腺素、5-HT、多巴胺)耗竭可诱导小鼠眼睑下垂、动作不能和体温下降等现象，并可被抗抑郁药、单胺氧化酶抑制剂和中枢兴奋剂所对抗。表4显示，大叶蒟提取物高、低剂量连续给药7天后具有显著拮抗利血平所致小鼠眼睑下垂和运动不能的作用。

附图说明

图1为本发明的实施例1方法得到大叶蒟有效组分HPLC色谱图。

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1

步骤1，提取：取大叶蒟地上部分，粗粉粹，加6倍量95％乙醇溶液，回流提取2h，滤过，药渣用5倍量95％乙醇回流提取2h，滤过，合并提取液，60℃减压浓缩至浓浸膏，即得大叶蒟总提物。

步骤2，过柱：取大叶蒟总提物用50％乙醇溶解至1倍生药量体积(先用1/2 95％溶解，不溶物再用1/2热水溶解，合并溶液即得)，上D101大孔树脂柱(树脂-生药比1∶3)，用70％乙醇溶液洗脱，流速1BV/h，收集洗脱液4BV，弃去。

步骤3，收集：继续用95％乙醇洗脱，流速1BV/h，收集洗脱液4BV，浓缩至浓浸膏。即得大叶蒟有效组分。

实施例2

步骤1，大叶蒟用5倍量70％乙醇提取1次，每次1小时，得到的醇提物合并；

步骤2，醇提物用40％乙醇溶解，过大孔树脂柱，乙醇为洗脱液，用60％乙醇洗脱，洗脱液弃去；

步骤3，再用80％乙醇洗脱，收集该洗脱液，浓缩得到本发明提取物。

实施例3

步骤1，大叶蒟用10倍量95％乙醇提取3次，每次3小时，得到的醇提物合并；

步骤2，醇提物用60％乙醇溶解，过大孔树脂柱，用80％乙醇洗脱，洗脱液弃去；

步骤3，再用95％乙醇洗脱，收集该洗脱液，浓缩得到本发明提取物。

实施例4

步骤1，大叶蒟用5-10倍量70-95％乙醇提取1-3次，每次1-3小时，得到的醇提物合并；

步骤2，醇提物用60-80％乙醇洗脱，洗脱液弃去；

步骤3，再用80-95％乙醇洗脱，收集该洗脱液，浓缩得到本发明提取物。

实施例5、颗粒剂

取实施例1-4任意一个药物活性物质100份，加入1.5倍量的糊精，0.5％蔗糖，1.5％微晶纤维素，用适量乙醇溶解制成软材，制粒，60℃鼓风干燥，制粒，整粒，即得颗粒剂。

实施例6、滴丸

取实施例1-4任意一个药物活性物质100份，加入1000份的聚乙二醇，混合均匀，熔融，上滴丸机，制成滴丸。

实施例7、口腔崩解片

取实施例1-4任意一个药物活性物质100份，加入5％交联聚维酮，0.1％的硬脂酸镁，50％的微晶纤维素，用适量乙醇溶液制成软材，制粒，60℃鼓风干燥，制粒，整粒，压制成片，即得口腔崩解片。

实施例8、粉针剂

取实施例1-4任意一项药物活性物质0.5份，葡萄糖4.5份、硫代硫酸钠0.9份和蒸馏水1ml，上述组分混合均匀后，冷冻干燥，分装500支，即得粉针剂。

实施例9、胶囊剂

取实施例1-4任意一项药物活性物质100份，加入等量淀粉，蔗糖和硬脂酸镁，制粒，装入胶囊，即得胶囊剂。

实施例10、片剂

取实施例1-4任意一项药物活性物质100份，与淀粉，羧甲基纤维素钠、滑石粉混合均匀，制粒，压片即得片剂。

实施例11、口服液

取实施例1-4任意一项药物活性物质2份，与糖浆4份、溶于100ml的纯净水中，均质，过滤，经过高温瞬时灭菌(135℃，4s)。无菌灌装、分装，制得口服液。

Claims (6)

1.一种大叶蒟提取物，该提取物用以下方法制备：

步骤1，提取：取大叶蒟地上部分，粗粉粹，加6倍量95％乙醇溶液，回流提取2h，滤过，药渣用5倍量95％乙醇回流提取2h，滤过，合并提取液，60℃减压浓缩至浓浸膏，即得大叶蒟总提物；

步骤2，过柱：取大叶蒟总提物用50％乙醇溶解至1倍生药量体积，上D101大孔树脂柱，用70％乙醇溶液洗脱，流速1BV/h，收集洗脱液4BV，弃去；

步骤3，收集：继续用95％乙醇洗脱，流速1BV/h，收集洗脱液4BV，浓缩至浓浸膏，即得；

其主要成分为：

(2E,4E)-N-异丁基-9-(3,4-次甲二氧基苯)七碳二烯酰胺；

(2E,4E，7E)-N-异丁基-9-(3,4-次甲二氧基苯)九碳二烯酰胺；

(2E,4E)-N-异丁基-9-苯基九碳二烯酰胺；

大叶蒟素；

经HPLC测定，四种酰胺类生物碱总含量为60-80％。

2.以权利要求1所述的大叶蒟提取物为药物活性成分的药物组合物，其特征在于，其中药物活性成分，在组合物中所占重量百分比是0.1-99.9％，其余为药物可接受的载体。

3.根据权利要求2的组合物，其特征在于，药物组合物是任何可药用的剂型。

4.根据权利要求2的组合物，其特征在于，剂型包括：糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、混悬剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、滴丸剂或贴剂。

5.权利要求1所述的大叶蒟提取物在制备治疗抑郁症和焦虑症的药物中的应用。

6.权利要求1所述的大叶蒟提取物的制备方法，其特征在于，经过以下步骤：

步骤1，提取：取大叶蒟地上部分，粗粉粹，加6倍量95％乙醇溶液，回流提取2h，滤过，药渣用5倍量95％乙醇回流提取2h，滤过，合并提取液，60℃减压浓缩至浓浸膏，即得大叶蒟总提物；

步骤2，过柱：取大叶蒟总提物用50％乙醇溶解至1倍生药量体积，上D101大孔树脂柱，用70％乙醇溶液洗脱，流速1BV/h，收集洗脱液4BV，弃去；

步骤3，收集：继续用95％乙醇洗脱，流速1BV/h，收集洗脱液4BV，浓缩至浓浸膏，即得大叶蒟提取物。