CN107375409B - 龙须藤多甲氧基总黄酮治疗和预防胃溃疡的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药领域,具体涉及一种龙须藤多甲氧基总黄酮在制备治疗和预防胃溃疡药物中的应用。本发明提供了一种龙须藤多甲氧基总黄酮在制备治疗和预防胃溃疡药物中的应用,所述龙须藤多甲氧基总黄酮由5,6,7,5’‑四甲氧基‑3’,4’‑亚甲二氧基黄酮,5,6,7,3’,4’,5’‑六甲氧基黄酮,5,6,7,3’,4’‑五甲氧基黄酮,5,7,3’‑三甲氧基‑4’,5’‑亚甲二氧基黄酮和5,7,3’,4’,5’‑五甲氧基黄酮中的一种或两种以上组成,可单独或与药学上可接受的载体混合,用于治疗和预防胃溃疡。本发明龙须藤多甲氧基总黄酮对大鼠、小鼠胃溃疡均具有较好的抑制作用,为临床治疗和预防胃溃疡提供了新选择。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,具体涉及一种龙须藤多甲氧基总黄酮在制备治疗和预防胃溃疡药物中的应用。
背景技术
胃溃疡是一种世界性范围的胃肠道疾病,全球人口中约有10%的人曾患过此病;该病并发症多、病程长、易反复,临床表现为长期、有节律性,且呈现一定周期性的腹部疼痛而且容易引起胃部出血,严重影响患者的生活质量,另外,其转化为胃癌的概率高达1%,对人类健康危害极大,被世界卫生组织列为癌前状态疾病。目前临床上常用的药物有抗酸药、组胺H2受体阻断药、质子泵抑制剂、胃肠粘膜保护剂、抗氧化剂等,以上药物对不同病因的胃溃疡虽有一定的疗效,但是也存在着不良反应明显和复发率高等不足,因此发掘一类疗效好、不良反应小的抗溃疡药物对于治疗和预防胃溃疡疾病具有重要意义;中医学把胃溃疡归属“胃脘病”范畴,在中医理论指导下,治疗“胃脘病”中药及中药制剂在治疗消化性胃溃疡上体现出独特的优势且疗效显著。
龙须藤为豆科苏木亚科羊蹄甲属植物龙须藤(Bauhinia championii(Benth.)Benth)的干燥藤茎,是一种广泛分布于越南、斯里兰卡、印度尼西亚等东南亚国家及中国的广东、广西、福建、台湾、贵州、湖南等地的特色中药。其性平、味甘微苦、归肝、大肠经,以祛风除湿、行气活血见长,临床多用于风湿痹痛、胃脘胀痛、跌打损伤、小儿疳积等症。
龙须藤多甲氧基总黄酮作为龙须藤主要活性成分,关于其治疗和预防胃溃疡的研究与应用未见报道。
发明内容
本发明提供了一种龙须藤多甲氧基总黄酮在制备治疗和预防胃溃疡药物中的应用。本发明龙须藤多甲氧基总黄酮对大鼠、小鼠胃溃疡均具有较好的抑制作用,为临床治疗和预防胃溃疡提供了新选择。
本发明提供了一种龙须藤多甲氧基总黄酮在制备治疗和预防胃溃疡药物中的应用;所述龙须藤多甲氧基总黄酮由5,6,7,5’-四甲氧基-3’,4’-亚甲二氧基黄酮,5,6,7,3’,4’,5’-六甲氧基黄酮,5,6,7,3’,4’-五甲氧基黄酮,5,7,3’-三甲氧基-4’,5’亚甲二氧基黄酮和5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黄酮中的一种或两种以上组成。
所述龙须藤多甲氧基总黄酮的制备方法为:
S1.取干燥的龙须藤药材,粉碎,加入其10倍重量的体积浓度为70%的乙醇,回流提取3次,每次2h,过滤,减压回收乙醇至无醇味,得浸膏;
S2.向步骤S1所得浸膏中加入其相同体积的乙酸乙酯溶剂进行萃取,萃取4次,回收溶剂,得乙酸乙酯部位浸膏;
S3.取步骤S2所得龙须藤乙酸乙酯部位浸膏150g,加入体积浓度为15%的乙醇溶解,稀释至3000mL,得上样溶液;将上样溶液以一定流速通过装有大孔树脂600g的树脂柱,树脂柱的径高比为1:9,先用水和35%乙醇洗脱杂质,再用75%乙醇洗脱,收集75%乙醇洗脱液,浓缩,干燥,得纯化物;
S4.将步骤S3所得纯化物过硅胶柱色谱,其中纯化物与硅胶的质量比为1:10,以二氯甲烷与乙酸乙酯按体积比8:1组成的溶液作为洗脱剂,TLC跟踪分析合并相同部位,即得。
为从龙须藤中寻找治疗和预防胃溃疡的活性成分,发明人对龙须藤进行了大量的研究,通过提取纯化,对总黄酮中的主要成分进行了结构鉴定,发现其主要成分为5,6,7,5’-四甲氧基-3’,4’-亚甲二氧基黄酮,5,6,7,3’,4’,5’-六甲氧基黄酮,5,6,7,3’,4’-五甲氧基黄酮,5,7,3’-三甲氧基-4’,5’-亚甲二氧基黄酮和5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黄酮。发明人对多甲氧基总黄酮的活性进行了体内外研究并经过反复推敲,对其抗胃溃疡药理药效进行了大量试验研究,结果表明,龙须藤多甲氧基总黄酮具有明显的抗胃溃疡作用。
本发明的龙须藤多甲氧基总黄酮作为药物活性成分可与药学上可接受的载体制备成各种剂型,用于制备治疗和预防和预防胃溃疡的药物。同时,本发明龙须藤多甲氧基总黄酮可单独或与其他中药或中药提取物或中药有效部位或化学成分或辅料共同制备的药物组合物,用于制备治疗和预防胃溃疡的药物。
本发明龙须藤多甲氧基总黄酮对大鼠、小鼠胃溃疡均具有较好的抑制作用,为临床治疗和预防胃溃疡提供了新选择。
具体实施方式
下面将结合实施例进一步的详细说明本发明。需要指出的是,以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明,并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。
实施例1龙须藤多甲氧基总黄酮制备方法
S1.取干燥的龙须藤饮片,适当碎断,加入其10倍重量的体积浓度为70%的乙醇,回流提取3次,每次2h,过滤,减压回收乙醇至无醇味,得浸膏;
S2.向步骤S1所得浸膏中加入其相同体积的乙酸乙酯溶剂进行萃取,萃取4次,回收溶剂,得乙酸乙酯部位浸膏;
S3.取步骤S2所得龙须藤乙酸乙酯部位浸膏150g,加入体积浓度为15%的乙醇溶解,稀释至3000mL,得上样溶液;将上样溶液以一定流速通过装有大孔树脂600g的树脂柱,树脂柱的径高比为1:9,先用水和35%乙醇洗脱杂质,再用75%乙醇洗脱,收集75%乙醇洗脱液,浓缩,干燥,得纯化物;
S4.将步骤S3所得纯化物过硅胶柱色谱,其中纯化物与硅胶的质量比为1:10,以二氯甲烷与乙酸乙酯按体积比8:1组成的溶液作为洗脱剂,TLC跟踪分析合并相同部位,即得。
对上述提取得到的龙须藤总黄酮经反复硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、半制备液相色谱及重结晶等分离纯化方式分离纯化,得到5个单体化合物,后结构鉴定,其分别为:5,6,7,5’-四甲氧基-3’,4’-亚甲二氧基黄酮,5,6,7,3’,4’,5’-六甲氧基黄酮,5,6,7,3’,4’-五甲氧基黄酮,5,7,3’-三甲氧基-4’,5’-亚甲二氧基黄酮和5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黄酮,化学结构式依次如下所示:
实施例2龙须藤多甲氧基总黄酮对无水乙醇致大鼠胃溃疡模型药效学试验
1.给药剂量
低剂量:剂量为2.1mg/kg,给药体积为5mL/kg,药物浓度为0.42mg/mL;
中剂量:剂量为4.2mg/kg,给药体积为5mL/kg,药物浓度为0.84mg/mL;
高剂量:剂量为8.4mg/kg,给药体积为5mL/kg,药物浓度为1.68mg/mL。
盐酸雷尼替丁胶囊:剂量为50mg/kg,给药体积为5mL/kg,药物浓度为10mg/mL;
奥美拉唑胶囊:剂量为5mg/kg,给药体积为5mL/kg,药物浓度为1mg/mL。2.造模与给药
将昆明大鼠分成空白组、模型组、奥美拉唑组、盐酸雷尼替丁组、高剂量组、中剂量组和低剂量组,正常组、模型组给予0.5%CMC-Na溶液,给药体积为5mL/kg,每天给药1次,连续7天,最后一次给药1小时后用无水乙醇(0.5mL/100g)造模,诱导一个小时后脱颈椎处死大鼠,用手术剪打开大鼠腹腔找到胃,分别结扎贲门、幽门端后取出胃,向胃内注入1%甲醛溶液1mL,将全胃置于装有1%甲醛溶液的烧杯中固定20min,沿胃大弯剪开后,以生理盐水冲洗3次,用滤纸吸干水分,展平,测定溃疡面积。
3.溃疡抑制率的计算
溃疡抑制率(%)=(模型组溃疡面积–给药组溃疡面积)/模型组溃疡面积×100%,结果见表1所示。
表1龙须藤多甲氧基总黄酮对无水乙醇致大鼠胃溃疡模型的影响
**与模型组比较,P<0.01。
由表1可知,与模型组比较,奥美拉唑组、盐酸雷尼替丁组、高剂量组、中剂量组和低剂量组对大鼠胃溃疡均具有较好的抑制作用,且胃溃疡面积有极显著性差异(P<0.01)。与奥美拉唑组、盐酸雷尼替丁组比较,龙须藤多甲氧基总黄酮高、中、低剂量给药后的大鼠胃溃疡抑制率相当甚至更高,说明其具有明显的抗胃溃疡作用。
实施例3龙须藤多甲氧基总黄酮对无水乙醇致小鼠胃溃疡模型药效学试验
1.给药剂量
低剂量:剂量为3.9mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为0.39mg/mL;
中剂量:剂量为7.8mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为0.78mg/mL;
高剂量:剂量为15.6mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为1.56mg/mL;
盐酸雷尼替丁胶囊:剂量为50mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为5mg/mL;
奥美拉唑胶囊:剂量为5mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为0.5mg/mL。2.造模与给药
将昆明小鼠分成空白组、模型组、盐酸雷尼替丁组、奥美拉唑组、高剂量组、中剂量组和低剂量组,模型组给予0.5%CMC-Na溶液,给药体积为10mL/kg,每天给药1次,连续7天,最后一次给药1小时后用无水乙醇(0.1mL/10g)造模,诱导一个小时后脱颈椎处死小鼠,用手术剪打开小鼠腹腔找到胃,分别结扎贲门、幽门端后取出胃,向胃内注入1%甲醛溶液1mL,将全胃置于装有1%甲醛溶液的烧杯中固定20min,沿胃大弯剪开后,以生理盐水冲洗3次,用滤纸吸干水分,展平,测定溃疡面积。
3.溃疡抑制率的计算
溃疡抑制率(%)=(模型组溃疡面积–给药组溃疡面积)/模型组溃疡面积×100%,结果见表2所示。
表2龙须藤多甲氧基总黄酮对无水乙醇致小鼠胃溃疡模型的影响
**与模型组比较,P<0.01。
由表2可知,与模型组比较,奥美拉唑组、盐酸雷尼替丁组、高剂量组、中剂量组和低剂量组对小鼠胃溃疡均具有较好的抑制作用,且胃溃疡面积有极显著性差异(P<0.01)。与奥美拉唑组、盐酸雷尼替丁组比较,龙须藤多甲氧基总黄酮高、中、低剂量给药后的小鼠胃溃疡抑制率相当甚至更高,说明其具有明显的抗胃溃疡作用。
实施例4龙须藤多甲氧基总黄酮对吲哚美辛致小鼠胃溃疡模型药效学试验
1.给药剂量
低剂量:剂量为3.9mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为0.39mg/mL;
中剂量:剂量为7.8mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为0.78mg/mL;
高剂量:剂量为15.6mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为1.56mg/mL;
盐酸雷尼替丁胶囊:剂量为50mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为5mg/mL;
奥美拉唑胶囊:剂量为5mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为0.5mg/mL。
2.造模与给药
将昆明小鼠分成空白组、模型组、盐酸雷尼替丁组、奥美拉唑组、高剂量组、中剂量组和低剂量组,模型组给予0.5%CMC-Na溶液,给药体积为10mL/kg,每天给药1次,连续7天,最后一次给药1小时后用吲哚美辛(50mg/kg,10mL/kg)造模,诱导一个小时后脱颈椎处死小鼠,用手术剪打开小鼠腹腔找到胃,分别结扎贲门、幽门端后取出胃,向胃内注入1%甲醛溶液1mL,将全胃置于装有1%甲醛溶液的烧杯中固定20min,沿胃大弯剪开后,以生理盐水冲洗3次,用滤纸吸干水分,展平,测定溃疡面积。
3.溃疡抑制率的计算
溃疡抑制率(%)=(模型组溃疡面积–给药组溃疡面积)/模型组溃疡面积×100%,结果见表3所示。
表3龙须藤多甲氧基总黄酮对吲哚美辛致小鼠胃溃疡模型的影响
**与模型组比较,P<0.01。
由表3可知,与模型组比较,奥美拉唑组、盐酸雷尼替丁组、高剂量组、中剂量组和低剂量组对小鼠胃溃疡均具有较好的抑制作用,且胃溃疡面积有极显著性差异(P<0.01)。与奥美拉唑组、盐酸雷尼替丁组比较,龙须藤多甲氧基总黄酮高、中、低剂量给药后的小鼠胃溃疡抑制率相当甚至更高,说明其具有明显的抗胃溃疡作用。
实施例5龙须藤多甲氧基总黄酮对水浸应激致小鼠胃溃疡模型药效学试验
1.给药剂量
低剂量:剂量为3.9mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为0.39mg/mL;
中剂量:剂量为7.8mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为0.78mg/mL;
高剂量:剂量为15.6mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为1.56mg/mL;
盐酸雷尼替丁胶囊:剂量为50mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为5mg/mL;
奥美拉唑胶囊:剂量为5mg/kg,给药体积为10mL/kg,药物浓度为0.5mg/mL。2.造模与给药
48只小鼠随机分为6组,每组8只,分别为模型组、龙须藤多甲氧基总黄酮(3.9mg/kg、7.8mg/kg和15.6mg/kg)组、奥美拉唑(5mg/kg)组和盐酸雷尼替丁组(50mg/kg),模型组给予0.5%CMC-Na溶液(10mL/kg),每天给药1次,连续7天,最后一次给药1小时后,放入特制的应激盒内,浸在(21±1)℃的水中,使水面达其胸骨剑突水平,20小时即成。取出小鼠,麻醉处死,用手术剪打开小鼠腹腔找到胃,分别结扎贲门、幽门端后取出胃,向胃内注入1%甲醛溶液1mL,将全胃置于装有1%甲醛溶液的烧杯中固定20min,取出沿胃大弯剪开,以生理盐水冲洗内容物,用滤纸吸干水分,展平,测定溃疡面积。
3.溃疡抑制率的计算
溃疡抑制率(%)=(模型组溃疡面积–给药组溃疡面积)/模型组溃疡面积×100%,结果见表4所示。
表4龙须藤多甲氧基总黄酮对水浸应激致小鼠胃溃疡模型的影响
**与模型组比较,P<0.01。
由表4可知,与模型组比较,奥美拉唑组、盐酸雷尼替丁组、高剂量组、中剂量组和低剂量组对小鼠胃溃疡均具有较好的抑制作用,且胃溃疡面积有极显著性差异(P<0.01)。与奥美拉唑组、盐酸雷尼替丁组比较,龙须藤多甲氧基总黄酮高、中、低剂量给药后的小鼠胃溃疡抑制率相当甚至更高,说明其具有明显的抗胃溃疡作用。
以上试验结果均表明,龙须藤多甲氧基总黄酮对胃溃疡具有更好的抑制作用,可作为有效部位用于胃溃疡的治疗与预防。与现有常用的胃溃疡治疗和预防药物相比,其只需要较低的剂量,就能达到同样的效果甚至更优。因此将其应用到制备抗胃溃疡药物时,能够显著降低药物的摄入量,减轻病人对药物的依赖性或其他副作用。
Claims (2)
1.一种龙须藤多甲氧基总黄酮在制备治疗和预防胃溃疡药物中的应用;
所述龙须藤多甲氧基总黄酮由5,6,7,5’-四甲氧基-3’,4’-亚甲二氧基黄酮,5,6,7,3’,4’,5’-六甲氧基黄酮,5,6,7,3’,4’-五甲氧基黄酮,5,7,3’-三甲氧基-4’,5’-亚甲二氧基黄酮和5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黄酮中一种或两种以上组成;
所述龙须藤多甲氧基总黄酮制备方法为:
S1.取干燥的龙须藤饮片,适当碎断,加入其10倍重量的体积浓度为70%的乙醇,回流提取3次,每次2h,过滤,减压回收乙醇至无醇味,得浸膏;
S2.向步骤S1所得浸膏中加入其相同体积的乙酸乙酯溶剂进行萃取,萃取4次,回收溶剂,得乙酸乙酯部位浸膏;
S3.取步骤S2所得龙须藤乙酸乙酯部位浸膏150g,加入体积浓度为15%的乙醇溶解,稀释至3000mL,得上样溶液;将上样溶液以一定流速通过装有大孔树脂600g的树脂柱,树脂柱的径高比为1:9,先用水和35%乙醇洗脱杂质,再用75%乙醇洗脱,收集75%乙醇洗脱液,浓缩,干燥,得纯化物;
S4.将步骤S3所得纯化物过硅胶柱色谱,其中纯化物与硅胶的质量比为1:10,以二氯甲烷与乙酸乙酯按体积比8:1组成的溶液作为洗脱剂,TLC跟踪分析合并相同部位,即得。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述龙须藤多甲氧基总黄酮与药学载体混合,用于制备治疗和预防胃溃疡的药物。
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PB01 | Publication | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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