CN104857043A - 一种柴胡提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种柴胡提取物及其制备方法，所述制备方法包括以下步骤：(1)取柴胡饮片，粗碎，用含水醇提取，得提取液；(2)提取液浓缩成浸膏，必要时包括以下步骤：步骤(2)中所述提取液或浸膏用水溶解，加入碱液，调节pH值6-9，过大孔树脂纯化，最后洗脱液浓缩即得柴胡提取物。

Description

一种柴胡提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药提取物，特别涉及一种柴胡提取物及其提取方法。

背景技术

柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurumchinense DC.或狭叶柴胡BupleurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根。具有和解少阳，舒肝解郁，升举阳气等功效，用于治疗外感发热，肝郁气滞，胸肋疼痛，气虚下陷等病症，在我国中医药史上已有上千年的临床应用，疗效显著。

现代药理研究证明，柴胡总皂苷、柴胡挥发油、柴胡总黄酮和柴胡多糖为其主要活性成分。柴胡总皂苷包括柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡苷元E、柴胡苷元F、柴胡苷元G、龙吉苷元等，柴胡皂苷具有抗炎、解热、抗过敏、抗溃疡、抗病毒等作用，其中以柴胡皂苷a、d的生物活性最为显著。同时柴胡挥发油具有解热、镇痛、抗炎、保肝等作用。

目前对柴胡总皂苷提取工艺研究较多，多以水提醇沉制备柴胡总皂苷，其中迟雪洁等人以柴胡皂苷a含量为指标优选醇提工艺提取柴胡提取物，得到柴胡精制提取物中柴胡皂苷a含量为3%，含量较低。

发明内容

柴胡皂苷可溶于水，易溶于热水、含水稀醇和热乙醇中，且与热水提取相比，柴胡皂苷更易溶于热乙醇溶液中，柴胡传统提取工艺为水提醇沉。将柴胡进行乙醇溶液提取后，利用大孔吸附树脂其本身多孔性结构，使柴胡有效成分被吸附树脂吸附后再经一定溶剂洗脱而被分离，而达到精制效果。

本发明的目的是提供一种具有退热抗炎作用的药物及其制备方法，该方法采用醇提及大孔吸附树脂精制制备柴胡提取物。

为此，本发明提供一种柴胡提取物，其制备方法包括以下步骤：

（1）取柴胡饮片，粗碎，用含水醇提取，得醇提液；

（2）醇提取回收乙醇至无醇味得提取液，并进一步浓缩成浸膏。

必要时，还包括以下步骤：

（3）步骤（2）中所述的提取液或浸膏用水溶解，加入碱液，调节pH值6-9，过大孔树脂，用溶剂洗脱，洗脱液浓缩即得柴胡提取物。

其中，步骤（1）所述的含水醇为：50‐90%（v/v）的甲醇或乙醇，所述提取选自回流，浸泡，渗漉，优选回流提取；提取次数为1‐3次，每次0.5‐5小时，提取液合并即可进行下一步浓缩步骤；其中优选的提取2次；第一次提取加入柴胡量5‐12倍（优选7‐9倍，最佳为8倍量）的50‐90%（v/v）的甲醇或乙醇，提取1‐5小时，（优选2小时）；第二次提取加入柴胡量3‐10倍（优选5‐7倍，最佳为6倍量）的50‐90%（v/v）的甲醇或乙醇，提取0.5‐3小时，（优选1小时），合并两次提取液。最佳为70%乙醇。

其中，步骤（2）所述的浓缩为加热浓缩。

本发明进一步的提供一种柴胡提取物，是对步骤（2）所得提取物的进一步纯化，即经过了步骤（3）的制备过程。

其中，步骤（3）所述提取液或浸膏用水溶解，是用水将浸膏稀释至浓度为0.1‐1g药材/ml，优选0.1‐0.2g药材/mL。

所述加入碱液选自：碳酸氢钠、磷酸氢钠、羧酸钠、碳酸钠，氢氧化钠，氢氧化钾、氨水中一种或几种的碱性溶液，优选碳酸氢钠，碳酸钠。调节pH值优选为：6‐7。

所述过大孔树脂是将前述的碱性提取稀释液加入到大孔树脂柱中，随后用溶剂进行洗脱，所述溶剂选自0‐95%（v/v）的醇，流速为1‐4VB/h。

优选的，大孔吸附树脂用量为对应药材量的2倍及2倍以上。最佳为大孔吸附树脂用量为对应药材量的2‐4倍。本发明所述大孔树脂型号选自为所述的树脂柱型号包括但不限于AB－8柱、D101柱、D201柱、D301柱、HPD100柱、HPD300柱、HPD600柱、NKA-9柱、DA201型、D—型、SIP系列、X—5型、GDX104型、LD605型、LD601型、CAD—40型、DM—130型、R—A型、CHA—111型、WLD型（混合型）、H107型等。优选AB－8柱、D101柱。

本发明的大孔树脂柱还可以用聚酰胺柱、硅胶柱、氧化铝等代替。

本发明所述的洗脱步骤为：先用5‐9BV纯化水洗脱，流速为1‐2VB/h，再用5‐9BV10‐40%（v/v）醇溶液洗脱，流速为2‐4VB/h，纯化水及10‐40%（v/v）醇洗脱液弃去，最后用5‐9BV50‐95%醇溶液洗脱，流速为2‐4VB/h，洗脱液回收醇至干即得提取物。

优选的洗脱步骤为：先用6‐7BV纯化水洗脱，流速为1‐2VB/h，再用6‐7BV30%（v/v）醇溶液洗脱，流速为2‐4VB/h，纯化水及30%（v/v）醇洗脱液弃去，最后用6‐7BV70%（v/v）醇溶液洗脱，流速为2‐4VB/h，洗脱液回收醇至干即的提取物。

其中所述醇为甲醇或乙醇，优选乙醇。

经本发明步骤步骤（2）和步骤（3）得到的柴胡提取物，其理化性质如下：

步骤（2）所得浸膏：外观性状：深棕色不均匀浸膏

水分：16.2%

柴胡皂苷a含量：18.42mg/g

吸收度：0.938

步骤（3）所得提取物：外观性状：黄色粉末

柴胡皂苷a含量：143.96mg/g

吸收度：0.182

本发明还提供用本发明的柴胡提取物作为药物活性成分制备成的药物组合物，本发明的药物组合物，包括有效组分，根据需要该组合物还可以加入药物可接受的载体。

本发明的组合物，是单位剂量的药物制剂形式，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋等。

本发明的组合物其中的有效组分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.1-99.9%，其余为药物可接受的载体。

本发明的组合物，通过将上述有效组分和药物可接受的载体混合制备得到。

本发明的组合物，其药物制剂形式可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是口服剂型，如：胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。

本发明的组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。

适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。

可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。

口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体（它们可以包括食用油），例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。

对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。

本发明的组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β－环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

本发明的组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每次1-20剂，如：1-20袋或粒或片。

本发明的有益效果

一、本发明提取工艺收率高

与水提醇沉工艺相比，柴胡经本发明步骤（1）和步骤（2）得到的提取物，提取物出膏率由9.3%提高至19.10%。柴胡皂苷a含量由7.52mg/mL提高至18.42mg/mL。柴胡皂苷a转移率由16.25%提高至82.98%。柴胡醇提提取物的吸收度由0.140提高至0.938。

水提醇沉工艺：按照CN101015575A实施例一制备

醇提工艺：按照实施例1制备

精制工艺：按照实施例2制备

柴胡经本发明步骤（1），步骤（2）和步骤（3）得到的提取物与传统水提醇沉工艺相比：柴胡皂苷a含量由7.52mg/mL提高至143.96mg/mL。柴胡皂苷a转移率由16.25%提高至65.95%。精制柴胡提取物制成滴丸剂后，与水提工艺相比日服用量由45粒/日降低至13粒/日。

试验例二、本发明的提取物具有抗炎解热的作用

药效学试验结果表明，与水提醇沉工艺相比，本发明柴胡醇提提取物具有较高的解热作用

有关实验如下：

1.材料

1.1受试药物

柴胡样品3种，均由天士力集团提供，工艺信息如下表所示：

样品1：水提醇沉工艺：按照CN101015575A实施例一制备

样品2，醇提工艺，按照实施例1制备

样品3，按照实施例2制备

样品编号	样品名称	生药量（g）	提取物量（g）	批号
					1	水提醇沉	152*2=304	304*9.3%=28.3	20130801
2	醇提	152*2=304	304*19.4%=59.0	20130802
					3	精制	152*2=304	304*1.97%=6.0	20130803

药物配制：临用前采用无菌蒸馏水溶解，配制成所需浓度药液，供灌胃。

1.2对照药物

柴胡口服液，10ml/支（相当于原药材10g），河南省百泉制药有限公司，批号：121206。

1.3动物

1.3.1种属、来源

健康白兔，雄性，体重1.5～2.5kg，南京市江宁青龙山动物养殖场，生产许可证号：SCXK（苏）2007-0001。

SD大鼠，SPF级，雄性，体重180-220g，上海西普尔-必凯实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK（沪）：2008-0016。

1.3.2饲养

（1）大鼠

大鼠均饲养于独立送风笼具（IVC）中，空气洁净度10000级，实验室温度24±2℃；相对湿度60%～80%；每小时空气交换次数：10-15次/小时；光照周期：12（日）/12（夜）小时。雌雄分开饲养，每笼不超过5只。

饲料：鼠全价颗粒饲料，购自江苏省协同医药生物工程有限责任公司，其质量符合GB14924.1-2001《实验动物配合饲料通用质量标准》。

垫料：灭菌颗粒垫料，购自江苏省协同医药生物工程有限责任公司。

饮水：饮用纯化水，经酸化后自由饮用。

（2）兔

兔购入后置于室温20～25℃，相对湿度为40%～60%的饲育室内。

饲料：兔颗粒饲料，购自南京市江宁青龙山动物养殖场，其质量符合GB14924.1-2001《实验动物配合饲料通用质量标准》。

1.4主要试剂

细菌内毒素工作标准品（冻干），10000EU/支，购自中国药品生物制品检定所，用前无菌超纯水配至100EU/ml备用；

λ-角叉菜胶（C3889，Lot122k1444）购自Sigma公司。

1.5主要仪器

CR.W11体温计，上海华辰医用仪表有限公司；

FEJ-200电子天平（0.1～200g），福州富日衡之宝电子有限公司；

RTZ-10A-RT型体重称，无锡市衡器厂；

BS210S精密电子天平（0.1mg～10g），德国赛多利斯（sartorius）；

MILI-Q超纯水系统，美国Millipore公司。

2.研究内容

2.1剂量设置依据

剂量参考柴胡滴丸的临床给药量。柴胡滴丸临床给药量：(3571g生药/1000g)*0.525g/袋*（3袋/天）=5.6g生药/人/天。按照成人体重60kg折算，即0.094g生药/kg体重。临床等效剂量折算到家兔的剂量为：0.094*3.1=0.291g生药/kg体重.，折算到大鼠的剂量为：0.094*6.2=0.583g生药/kg体重。本研究中各样品均设高、低剂量组，大鼠分别为1.8g生药/kg和0.6g生药/kg，兔分别为0.9g生药/kg和0.3g生药/kg。本研究中低剂量约为临床等效剂量，高剂量约为临床等效剂量的3倍。

柴胡口服液均设1个剂量组，大鼠为1.8g生药/kg（1.8ml/kg），兔为0.9g生药/kg（0.9ml/kg），分别于受试样品高剂量的生药量相当。

2.2解热作用—内毒素致家兔发热模型

2.2.1剂量与分组

72只雄性家兔，试验共设9组，分别为对照组（蒸馏水），模型组（蒸馏水），柴胡口服液组（0.9g生药/kg），柴胡样品1）高、低剂量组（0.9、0.3g生药/kg），柴胡样品2高、低剂量组（0.9、0.3g生药/kg），每组8只动物,各组均为灌胃给药。

给药体积均为1ml/kg。

2.2.2兔体温测定方法

兔购入后置于室温20～25℃,相对湿度为40%～60%的饲育室内饲养3d后用于实验。实验室的温度控制在(25±1)℃,相对湿度为40%～60%。全部实验用兔固定于专用固定器内，将体温表插入无麻醉清醒兔直肠内5cm,并固定于尾部。插入5min后取出体温表读数，记录直肠温。

2.2.3致热及给药方法

各组动物预防给药5天，试验前禁食过夜，试验当天各组灌胃给药后，取兔分别测肛温2次，把2次所测温度作为体温基础值。每兔均从耳缘静脉注射内毒素100EU/kg造模，造模后0.5、1、1.5、2h各测定肛温1次。

2.2.4数据处理及统计方法

各组数据均以表示，组间比较采用t检验考察显著性，以P<0.05作为显著性指标。

2.2.5结果

试验期间正常动物体温维持在稳定水平，均值为39.3～39.5℃。与正常动物相比，内毒素注射后2h内家兔体温呈现持续升高。与模型动物相比，3个柴胡受试样品各治疗组致热1h内对家兔体温升高未见明显改善作用，也呈现持续升高。致热1.5h后，各治疗组体温均出现不同程度的下降或持平趋势，均低于同时间点的模型组体温，其中样品2高、低剂量组致热1.5～2h体温显著低于模型组（P<0.05，P<0.01）（表.1）。

表.1柴胡样品对内毒素致家兔发热模型体温的影响（N=8，）

**P<0.01，与正常组比较；#P<0.05，与模型组比较。

2.3抗炎作用—角叉菜胶致大鼠足跖肿胀模型

2.3.1剂量与分组

试验共设8组，分别为对照组（蒸馏水），模型组（蒸馏水），柴胡口服液组（1.8g生药/kg），柴胡样品1高、低剂量组（1.8、0.6g生药/kg），柴胡样品3高、低剂量组（1.8、0.6g生药/kg），每组10只动物，各组均为灌胃给药。

2.3.2大鼠足跖肿胀诱发

1%角叉菜胶于试验前1天配制，按比例称取后置于0.9%氯化钠注射液中溶胀过夜备用。致炎前将动物灌胃给予0.9%氯化钠注射液1ml/100g，然后将动物后肢拉直，于右足跖中部皮下注入1%角叉菜胶0.1ml致炎。

2.3.3检测指标

各组动物预防给药5天，试验前禁食过夜。

参考有关文献方法自制装置，采用排水法测定大鼠后足体积。角叉菜胶注入后即测定1次，作为基础体积，随后测定致炎1、2、4和6h大鼠后足体积，观察肿胀达峰时间和消退时间，求算出各时间点肿胀度及肿胀率，比较给药组和对照组的差异情况，算出药物的肿胀抑制率，进行抗炎作用评价。计算公式如下：

肿胀度（ml）=（测定体积-基础体积）

肿胀率（%）=[(测定体积-基础体积)/基础体积]×100%

2.3.4数据处理及统计方法

各组数据均以表示，组间比较采用t检验考察显著性，以P<0.05作为显著性指标。

2.3.5结果

模型动物造模6h内出现明显的足肿胀，柴胡3个受试样品对造模后各时间点足肿胀均有不同程度的抑制作用，部分样品2-6h时间点具有统计学显著差异，（P<0.05，P<0.01）（表.2，表.3，）。

表.2柴胡样品对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀模型肿胀度（ml）的影响（N=10，）

#P<0.05，##P<0.01，与模型组比较。

表.3柴胡样品对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀模型肿胀率（%）的影响（N=10，）

#P<0.05，##P<0.01，与模型组比较。

解热试验结果是显示，2个柴胡受试样品各治疗组致热1h内对家兔体温升高未见明显改善作用，也呈现持续升高。致热1.5h后，各治疗组体温均出现不同程度的下降或持平趋势，均低于同时间点的模型组体温，其中样品2高、低剂量组致热1.5～2h体温显著低于模型组。

抗炎试验结果是显示，柴胡2个受试样品对造模后各时间点足肿胀均有不同程度的抑制作用，样品3高低剂量组2-6h时间点具有统计学显著差异。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1柴胡样品2制备

取柴胡饮片，粗碎，一煎提取加入柴胡量8倍的70%乙醇溶液，提取2小时；二煎提取加入柴胡量6倍的70%乙醇溶液，提取1小时，合并醇提取液；上述醇提取液减压回收乙醇至稠膏，稠膏干燥即得柴胡提取物。

实施例2柴胡样品3制备

取柴胡饮片，粗碎，一煎提取加入柴胡量8倍的70%乙醇溶液，提取2小时；二煎提取加入柴胡量6倍的70%乙醇溶液，提取1小时，合并提取液；上述提取液减压回收乙醇至无醇味加水使药液稀释至浓度为0.1‐0.2g药材/ml，加入碳酸氢钠，调整药液pH值6-7，超声溶解后，分离清液，过大孔吸附树脂，树脂用量为对应药材量的2‐4倍，上样速度为1‐2BV/h，先用6‐7BV纯化水洗脱，流速为1‐2VB/h，再用6‐7BV30%乙醇溶液洗脱，流速为2‐4VB/h，纯化水及30%乙醇洗脱液弃去，最后用6‐7BV70%乙醇溶液洗脱，流速为2‐4VB/h，洗脱液回收醇至干即提取物。

实施例3

柴胡提取物的制备，

步骤（1）柴胡用5倍50%甲醇或乙醇，提取1次，0.5小时，提取液备用；步骤（2），提取液减压回收甲醇或乙醇得浸膏，干燥即可。

实施例4

柴胡提取物的制备，

步骤（1）柴胡用12倍90%甲醇或乙醇，提取3次，每次5小时，合并提取液备用；

步骤（2），提取液减压回收甲醇或乙醇得浸膏，干燥即可。

实施例5

柴胡提取物的制备，

步骤（1）取柴胡饮片，粗碎，一煎提取加入柴胡量7倍的50%乙醇溶液，提取2小时；二煎提取加入柴胡量5倍的50%乙醇溶液，提取1小时，合并提取液。

步骤（2），提取液减压回收甲醇或乙醇得浸膏，干燥即可。

实施例6

柴胡提取物的制备，

步骤（1）取柴胡饮片，粗碎，一煎提取加入柴胡量9倍的90%乙醇溶液，提取2小时；二煎提取加入柴胡量7倍的90%乙醇溶液，提取1小时，合并提取液。

步骤（2），提取液减压回收甲醇或乙醇得浸膏，干燥即可。

实施例7

柴胡提取物的制备，

实施例1得到的浸膏用水溶解，加入碱液，调节pH值6，过大孔树脂纯化，最后洗脱液浓缩即得柴胡提取物，其中浸膏用水溶解稀释至浓度为0.1g药材/ml，所述的碱液为碳酸氢钠；其中，大孔树脂纯化步骤为：用5BV的水洗脱，流速为1VB/h，收集洗脱液，浓缩干燥即得。

实施例8

实施例1得到的浸膏用水溶解，加入碱液，调节pH值9，过大孔树脂纯化，最后洗脱液浓缩即得柴胡提取物。其中浸膏用水溶解稀释至浓度为1g药材/ml，所述的碱液为氢氧化钠或氢氧化钾,其中大孔树脂纯化步骤为：用9BV的95%乙醇梯度洗脱，流速为4VB/h。收集洗脱液，浓缩干燥即得。

实施例9

实施例1得到的浸膏用水溶解，加入碱液，调节pH值8，过大孔树脂纯化，最后洗脱液浓缩即得柴胡提取物。其中浸膏用水溶解稀释至浓度为0.5g药材/ml，所述的碱液为碳酸钠。其中大孔树脂纯化步骤为：树脂用量为对应药材量的2倍，先用5BV纯化水洗脱，流速为1VB/h，再用5BV10%乙醇溶液洗脱，流速为2VB/h，纯化水及10%乙醇洗脱液弃去，最后用5BV50%乙醇溶液洗脱，流速为2VB/h，洗脱液回收醇至干即提取物。

实施例10

实施例1得到的浸膏用水溶解，加入碱液，调节pH值7，过大孔树脂纯化，最后洗脱液浓缩即得柴胡提取物。其中浸膏用水溶解稀释至浓度为0.8g药材/ml，所述的碱液为氨水。其中所述的大孔树脂纯化步骤为：树脂用量为对应药材量的4倍，先用9BV纯化水洗脱，流速为2VB/h，再用9BV40%乙醇溶液洗脱，流速为4VB/h，纯化水及40%乙醇洗脱液弃去，最后用9BV95%乙醇溶液洗脱，流速为4VB/h，洗脱液回收醇至干即提取物。

实施例11

实施例1得到的浸膏用水溶解，加入碱液，调节pH值7，过大孔树脂纯化，最后洗脱液浓缩即得柴胡提取物。其中浸膏用水溶解稀释至浓度为0.8g药材/ml，所述的碱液为氨水。其中所述的大孔树脂纯化步骤为：树脂用量为对应药材量的4倍，上样速度为2BV/h，先用7BV纯化水洗脱，流速为2VB/h，再用7BV30%乙醇溶液洗脱，流速为4VB/h，纯化水及30%乙醇洗脱液弃去，最后用7BV70%乙醇溶液洗脱，流速为4VB/h，洗脱液回收醇至干即提取物。

实施例12

实施例1得到的提取液回收乙醇至无醇味用水溶解，加入碱液，调节pH值7，过大孔树脂纯化，最后洗脱液浓缩即得柴胡提取物。其中浸膏用水溶解稀释至浓度为0.8g药材/ml，所述的碱液为氨水。其中所述的大孔树脂纯化步骤为：树脂用量为对应药材量的3倍，上样速度为1BV/h，先用6BV纯化水洗脱，流速为1VB/h，再用6BV30%乙醇溶液洗脱，流速为2VB/h，纯化水及30%乙醇洗脱液弃去，最后用6BV70%乙醇溶液洗脱，流速为2VB/h，洗脱液回收醇至干即提取物。

实施例13

柴胡提取物的制备方法，如下步骤：

（1）取柴胡饮片，粗碎，用3倍量的50%甲醇或乙醇，提取物1次，每次0.5小时，合并醇提取液备用；

（2）合并醇提取液减压回收乙醇至至无醇味用得提取液备用；

（3）提取液加水使药液稀释至浓度为0.1g药材/mL，加入碱液，调整药液pH值6，超声溶解后，分离清液，过大孔吸附树脂，树脂用量为对应药材量的2倍，上样速度为1BV/h，用5BV纯化水洗脱，流速为1VB/h，再用5BV10%醇溶液洗脱，流速为2VB/h，纯化水及10%醇洗脱液弃去，最后用5BV50%醇溶液洗脱，流速为2VB/h，洗脱液回收醇至干，即得。

实施例14

柴胡提取物的制备方法，如下步骤：

（1）取柴胡饮片，粗碎，用12倍量的90%甲醇或乙醇，提取物3次，每次5小时，合并提取液备用；

（2）合并醇提取液减压回收乙醇至至无醇味用得提取液备用；

（3）提取液用加水使药液稀释至浓度为1g药材/mL，加入碱液，调整药液pH值8，超声溶解后，分离清液，过大孔吸附树脂，树脂用量为对应药材量的3倍，上样速度为2BV/h，用9BV纯化水洗脱，流速为2VB/h，再用9BV40%醇溶液洗脱，流速为4VB/h，纯化水及40%醇洗脱液弃去，最后用9BV95%醇溶液洗脱，流速为4VB/h，洗脱液回收醇至干，即得。

实施例15

柴胡提取物的制备方法，如下步骤：

（3）取柴胡饮片，粗碎，一煎提取加入柴胡量9倍的70%乙醇溶液，提取2小时；二煎提取加入柴胡量7倍的90%乙醇溶液，提取1小时，合并提取液；

（4）上述提取液减压回收乙醇至稠膏备注；

（3）上述稠膏加水使药液稀释至浓度为0.2g药材/ml，加入碱液，调整药液pH值7，超声溶解后，分离清液，过大孔吸附树脂，树脂用量为对应药材量的4倍，上样速度为2BV/h，先用7BV纯化水洗脱，流速为2VB/h，再用7BV30%乙醇溶液洗脱，流速为4VB/h，纯化水及30%乙醇洗脱液弃去，最后用7BV70%乙醇溶液洗脱，流速为4VB/h，洗脱液回收醇至干即提取物。

实施例16

柴胡提取物的制备方法，如下步骤：

（5）取柴胡饮片，粗碎，一煎提取加入柴胡量7倍的70%乙醇溶液，提取2小时；二煎提取加入柴胡量5倍的50%乙醇溶液，提取1小时，合并提取液；

（6）上述提取液减压回收乙醇至稠膏备注；

（3）上述稠膏加水使药液稀释至浓度为0.1g药材/ml，加入碱液，调整药液pH值6.5，超声溶解后，分离清液，过大孔吸附树脂，树脂用量为对应药材量的2倍，上样速度为1BV/h，先用6BV纯化水洗脱，流速为1VB/h，再用6BV30%乙醇溶液洗脱，流速为2VB/h，纯化水及30%乙醇洗脱液弃去，最后用6BV70%乙醇溶液洗脱，流速为2VB/h，洗脱液回收醇至干即提取物。

实施例17

制剂的制备

取实施例2的柴胡提取物0.5g与10.5g聚乙二醇-6000混合均匀，加热熔融，化料后移至滴丸滴灌中，药液滴至6-8℃液体石蜡中，除油，制得滴丸400粒。

实施例18

取实施例1的柴胡提取物0.5g、葡萄糖4.5g、硫代硫酸钠0.9g和蒸馏水1ml，上述组分混合均匀后，冷冻干燥，分装500支，即得。

实施例19

取实施例2的柴胡提取物0.5g、甘露醇5.5g、依地酸钙钠0.9g和蒸馏水2ml，上述组分混匀后，冷冻干燥，分装300支，即得。

实施例20

取实施例2的柴胡提取物0.5g、淀粉50g、蔗糖50g，上述组分混匀后，制粒，压片即得片剂。

实施例21

取实施例2的柴胡提取物0.5g、淀粉50g、蔗糖50g，上述组分混匀后，制粒，装胶囊即得胶囊剂。

Claims (10)

1.一种柴胡提取物，其特征在于，是由下述制备方法获得的

（1）取柴胡饮片，粗碎，用含水醇提取，得醇提液；

（2）醇提液回收乙醇至无醇味得提取液，提取液进一步浓缩成浸膏，干燥即得提取物。

2.如权利要求1所述的柴胡提取物，其特征在于，还包括步骤（3）：步骤（2）中所述提取液或浸膏用水溶解，加入碱液，调节pH值6-9，过大孔树脂纯化，最后洗脱液浓缩即得柴胡提取物。

3.如权利要求1所述的柴胡提取物，其特征在于：所述的步骤（1）步骤如下：用5-12倍50‐90%甲醇或乙醇，提取1‐3次，每次0.5‐5小时，合并醇提液。

4.如权利要求1所述的柴胡提取物，其特征在于：所述步骤（1）步骤如下：取柴胡饮片，粗碎，一煎提取加入柴胡量7‐9倍的50%‐90%乙醇溶液，提取2小时；二煎提取加入柴胡量5-7倍的50%‐90%乙醇溶液，提取1小时，合并醇提液。

5.如权利要求2所述的柴胡提取物，其特征在于：所述的步骤（3）用水溶解稀释至浓度为0.1‐1g药材/ml，所述的碱液包括碳酸氢钠、磷酸氢钠、羧酸钠、碳酸钠，氢氧化钠，氢氧化钾、氨水中一种或几种。

6.如权利要求2所述的柴胡提取物，其特征在于：所述步骤（3）中大孔树脂纯化步骤为：用5‐9BV的0‐95%乙醇梯度洗脱，流速为1‐4VB/h。

7.如权利要求6所述的柴胡提取物，其特征在于：所述的大孔树脂纯化步骤为：树脂用量为对应药材量的2倍及2倍以上，先用5‐9BV纯化水洗脱，流速为1‐2VB/h，再用5‐9BV10‐40%乙醇溶液洗脱，流速为2‐4VB/h，纯化水及10‐40%乙醇洗脱液弃去，最后用5‐9BV50‐95%乙醇溶液洗脱，流速为2‐4VB/h，洗脱液回收醇至干即提取物。

8.如权利要求6所述的柴胡提取物，其特征在于：所述的大孔树脂纯化步骤为：树脂用量为对应药材量的2‐4倍，上样速度为1‐2BV/h，先用6‐7BV纯化水洗脱，流速为1‐2VB/h，再用6‐7BV30%乙醇溶液洗脱，流速为2‐4VB/h，纯化水及30%乙醇洗脱液弃去，最后用6‐7BV70%乙醇溶液洗脱，流速为2‐4VB/h，洗脱液回收醇至干即提取物。

9.权利要求2所述的柴胡提取物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）取柴胡饮片，粗碎，用3-12倍量的50‐90%甲醇或乙醇，提取物1‐3次，每次0.5‐5小时，合并醇提液备用；

（2）醇提液减压回收乙醇至无醇味得提取液，提取液进一步浓缩得浸膏备用；

（3）步骤（2）所述的提取液或浸膏用加水使药液稀释至浓度为0.1-1g药材/mL，加入碱液，调整药液pH值6-8，超声溶解后，分离清液，过大孔吸附树脂，树脂用量为对应药材量的2倍及2倍以上，上样速度为1-2BV/h，用5-9BV纯化水洗脱，流速为1-2VB/h，再用5-9BV10-40%醇溶液洗脱，流速为2-4VB/h，纯化水及10-40%醇洗脱液弃去，最后用5-9BV50-95%醇溶液洗脱，流速为2-4VB/h，洗脱液回收醇至干，即得。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于：步骤方法如下：

（1）取柴胡饮片，粗碎，一煎提取加入柴胡量7‐9倍的70%乙醇溶液，提取2小时；二煎提取加入柴胡量5-7倍的50%‐90%乙醇溶液，提取1小时，合并醇提液；

（2）上述醇提液减压回收乙醇至无醇味得提取液，提取液进一步浓缩得浸膏；

（3）提取液或浸膏加水使药液稀释至浓度为0.1‐0.2g药材/ml，加入碱液，调整药液pH值6-7，超声溶解后，分离清液，过大孔吸附树脂，树脂用量为对应药材量的2‐4倍，上样速度为1‐2BV/h，先用6‐7BV纯化水洗脱，流速为1‐2VB/h，再用6‐7BV30%乙醇溶液洗脱，流速为2‐4VB/h，纯化水及30%乙醇洗脱液弃去，最后用6‐7BV70%乙醇溶液洗脱，流速为2‐4VB/h，洗脱液回收醇至干即提取物。