CN1726956A - 葛根总黄酮提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种葛根总黄酮提取物及其制备方法,该提取物总黄酮含量高,所述方法能够提高活性成分的含量,去除大量杂质,同时重复性、稳定性好,并且原料的得率高,成本低,适合工业化生产。本发明还提供葛根总黄酮提取物在制备治疗心脑血管药物中的应用。本发明葛根总黄酮提取物的制备方法,其制备过程如下:取葛根药材,加4~8倍体积30~90%的乙醇溶液提取2-5次,每次0.5-1.5小时,将提取液浓缩上大孔吸附树脂柱,先用水洗脱杂质,再用10~70%的乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,浓缩后,加乙醇使醇浓度达70-80%,滤去沉淀物,滤液浓缩,加正丁醇萃取,回收正丁醇,浓缩、干燥。
Description
技术领域
本发明涉及一种葛根总黄酮提取物,以及从中药葛根中提取该葛根总黄酮的方法,和该提取物的片剂、胶囊或注射剂等剂型以及在制备治疗心脑血管药物上的应用,属医药领域。
背景技术
心血管病作为危害人类健康的“第一杀手”,已波及全球,是许多富裕国家的主要灾难。尽管在第一次世界大战时,心肌梗塞作为冠心病的主要临床类型还很少见,但到1940年,冠心病已成为美国和某些工业化国家的主要死因。由于冠心病的某些类型的诊断尚有一定困难,故通常以急性心肌梗塞的发病率和死亡率来代表冠心病的发病和死亡,其中以死亡率更为常用。据世界卫生组织1990年公布的11个国家资料来看,30~69岁冠心病死亡率以北爱尔兰最高,芬兰次之,日本最低。在美国尽管冠心病的死亡率较30年前下降了40%,但仍居美国死因之首。1988年美国国家健康统计中心公布的美国1987年死亡人数及死因顺位的资料表明,心脏病占总死因的35%,其中冠心病死亡占24.1%,居前10位死因之首。与发达国家相比,我国仍属冠心病低发国家,但八十年代以来,我国心血管病发病率和死亡率呈逐年上升趋势。据1984年报告,冠心病死亡粗率:城市为36.9/10万,农村为15.6/10万。北京市心肺血管中心1985~1989年Monica方案监测结果表明,在由WHO组织的48个监测中心中,中国35~64岁的冠心病标化死亡率仅高于日本,排列倒数第二。男性冠心病死亡率为49/10万,女性为27/10万,与死亡率较高的芬兰(男性493/10万,女性63/10万),相差甚远。1986~1990年我国对10组人群高血压、冠心病、脑卒中发病及其危险因素的前瞻性研究结果表明,在监测38 19659人年内,急性心肌梗塞男性共发生409例,女性为200例,年发病率分别为10~26/10万,8~13/10万;死亡率分别为4~11/10万和2~5/10万。冠心病死亡人数占总死因的4.47%(男)和372(女)。96年有资料表明,心脑血管病死亡人数已占总死亡人数约1/3,其中脑血管病占45%,冠心病占15%。与西方国家相比,我国的特点是脑卒中高发,冠心病较低发。目前,世界上治疗心脑血管疾病的药物虽然很多,但由于西药的毒副作用和传统中药药效有限等原因,仍然需要不断开发新的高效低毒的治疗药物来满足广大人民群众的健康需要。
葛根始载于《本经》,为豆科植物野葛(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi[P.thunbergiana(Sieb.et Zucc.)Benth.;P.hirsute(Thunb.)Schneid.;P.pseudo-hirsuta Tang er Wang])或甘葛藤(Pueraria thomsonii Benth.)的块根。栽培或野生于山野灌丛和疏林中。分布于广东、广西、四川、云南等地。性平,味甘、辛。归脾、胃经。主要功效为解肌退热,发表透疹,生津止渴,升阳止泻。主治外感发热,头项强痛,麻疹初起、疹出不畅,温病口渴,消渴病,泄泻,痢疾,高血压,冠心病。葛根及其制剂的药理作用比较广泛,可单用,也可配伍成复方用于脑血管病治疗。目前含葛根的产品大多为传统中药产品,组方复杂,虽具一定的疗效,但也存在着服用量大、起效慢、使用不方便、药效有限及质量控制难等缺点。
葛根总黄酮包括葛根素(puerarin),大豆甙元(daidzein),大豆甙(daidzin)等,以葛根素为主。文献报道的传统的葛根总黄酮的制备方法有水提法、醇提法、水提醇沉法、醇提水沉法,由于葛根药材的成分复杂,含有很多非甙类的成分,所以传统的制法得到的葛根总黄酮的含量一般较低。
发明内容
本发明针对目前的技术状况,提供一种葛根总黄酮提取物,该提取物中有效成分含量高。
本发明的另一目的是提供葛根总黄酮的制备方法,该方法能够提高活性成分的含量,去除大量杂质,同时重复性、稳定性好,并且原料的得率高,成本低,适合工业化生产。
本发明还提供该葛根总黄酮提取物的应用。
为解决上述技术问题,本发明研究制订了如下技术方案。
一种葛根总黄酮提取物,其特征在于葛根总黄酮提取物中总黄酮的重量百分含量至少为50%。
上述葛根总黄酮提取物中总黄酮的重量百分含量为50~95%。
总黄酮主要活性成分为葛根素和大豆甙元,所述葛根总黄酮提取物中葛根素和大豆甙元组合物的重量百分含量为40~85%。
上述葛根总黄酮提取物与药学上可接受的载体和/或赋形剂制成的任何一种制剂。所述制剂可以为片剂、胶囊或注射剂。
上述葛根总黄酮提取物的制备方法,其制备过程如下:
取葛根药材,加4~8倍体积30~90%的乙醇溶液提取2-5次,每次0.5-1.5小时,将提取液浓缩上大孔吸附树脂柱,先用水洗脱杂质,再用10~70%的乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,浓缩后,加乙醇使醇浓度达70-80%,滤去沉淀物,滤液浓缩,加正丁醇萃取,回收正丁醇,浓缩、干燥。
上述制备方法中大孔树脂型号为D-101、DS-401或AB-8型;药材粉碎后,加50%乙醇热提两次,每次1h。
上述葛根总黄酮提取物在制备治疗心脑血管药物中的应用。
本发明相比现有技术具有如下优点:
本发明运用大孔树脂分离技术,采用醇提液浓缩后上柱、水洗脱后再用10~50%的乙醇充分洗脱,最后再用95%乙醇、正丁醇精制的方法,取得良好的效果,此方法不但操作简便,降低了成本,而且非常适合工业化生产。大量研究表明,D-101、DS-401或AB-8型大孔树脂对葛根总黄酮的吸附分离效果最好。
上述葛根总黄酮提取物,其制成的制剂符合《药品注册管理办法》中药、天然药物注册分类5的要求,即未在国内上市的中药、天然药物提取的有效部位制成的制剂。
上述方法制得的葛根总黄酮提取物,与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合,按常规方法制成含有上述葛根总黄酮提取物为主要活性成分的口服制剂,如片剂、胶囊、滴丸、软胶囊等,以及胃肠道外途径给药的制剂,如粉针、注射液等。
采用本发明制得的葛根总黄酮提取物中,总黄酮的含量至少为50%,甚至可达到50~95%,其主要活性成分为葛根素和大豆甙元,通过高效液相法测定,葛根素和大豆甙元组合物的含量可占葛根总黄酮提取物的40~85%。虽然本发明提取的葛根总黄酮中除主要含葛根素和大豆甙元以外,还含有大豆甙等成分,但该葛根总黄酮以及含该葛根总黄酮的药物组合物总体上疗效优良。药效学试验证明本发明的葛根总黄酮以及含该葛根总黄酮的药物组合物总体上有很好的治疗心脑血管疾病的功效,与传统的制剂相比,本发明治疗心脑血管疾病的有效剂量小,毒副作用小。
本发明由于采用了中药现代化技术中的大孔吸附树脂技术,不但使葛根总黄酮提取物中的活性成分的含量提高,提高了疗效,而且去除了大量杂质,既解决了中成药常有的吸潮性大的问题,又减少了副作用。
本发明的葛根总黄酮的制备方法在现技术的基础上作了改进,针对现有的水提法、醇提法、水提醇沉及大孔树脂吸附分离方法的不足,而运用大孔吸附树脂分离技术,采用醇提浓缩后上柱、水洗脱后再用10~50%乙醇充分洗脱,最后再用95%乙醇、正丁醇精制的方法,取得了良好的效果,此方法不但操作简便,降低了成本,而且非常适合工业化生产。大量研究表明,D-101、DS-401或AB-8型大孔树脂对葛根总黄酮的吸附分离效果最好。
药效试验:
采用多种动物模型研究本发明的葛根总黄酮提取物制成的注射液的药效,并和目前市场上主要的治疗心肌缺血药丹参注射液对照,其试验方法和结果如下:
1.垂体后叶素致大鼠心肌缺血
筛选心电图正常的SD大鼠40只,体重180-220g,♀♂各半,随机均分为5组。模型组、受试药3个剂量组及阳性组。连续给药十天。末次给药30min后先记录心电图(II导联),然后由大鼠舌下静脉注射垂体后叶素0.7u/kg,观察、记录给垂体后叶素后15、30、60、90s时大鼠的心电图,见图1、2、3。测量T波峰值,结果见表1。
表1葛根总黄酮提取物对垂体后叶素所致大鼠心电图T波峰值的影响(攽X敀±SD)
组别 动物数 给药(只) 途径 | 剂量(g/kg) | T波峰值(mv) | |||
给Pit.前 | 给Pit.后的增值(绝对值) | ||||
30s | 60s | 90s | |||
模型组 8 ip丹参注射液组 8 ip葛根总黄酮提取物小剂量组葛根总黄酮提取物中剂量组葛根总黄酮提取物大剂量组 | -888 | ipipip |
*P<0.05 **P<0.01与模型组比较
实验结果表明:本发明的葛根总黄酮提取物三个剂量组在给垂体后叶素30s后开始降低T波峰值,与模型组比较差异显著(P<0.01)。提示葛根总黄酮提取物对垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血有明显的保护作用。
2.异丙肾上腺素致大鼠心肌缺血
筛选心电图正常的SD大鼠48只,体重180~220g,♀♂各半,随机均分为六组:空白对照组、模型组、受试药3个剂量组及阳性药组。各组每天给药一次,连续十天。在给异丙肾上腺素前先记录各组大鼠心电图(II导联)。除空白对照组外,其余各组于第9和第10天的给药30min后,皮下注射8mg/kg异丙肾上腺素,30min后描记心电图,测量ST段偏移的程度,以每组ST段偏移程度的总和(∑ST)的mv数ST均值作为心肌缺血损伤程度的指标,结果见表8。在末次给异丙肾上腺素2h后,处死大鼠,迅速取出心脏,用生理盐水冲冼称重,置0~4℃条件下,用内切式组织匀浆器将心脏组织制成10%心肌匀浆,3500rpm离心15min,取上清液,测定心肌CPK、LDH值,结果见表2、3。
表2 葛根总黄酮提取物对异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺血心电图ST段偏移的影响(X±SD)
组别 动物数(只) | 给药途径 | 剂量(g/kg) | ST段偏移(mv) |
模型组 8丹参注射组 8葛根总黄酮提取物小剂量组葛根总黄酮提取物中剂量组葛根总黄酮提取物大剂量组 | ipip888 | -0.5ipipip | 0.250.75 |
与模型组比较*P<0.05 **P<0.01
表3葛根总黄酮提取物对异丙肾上腺素所致大鼠缺血心肌CPK、LDH的影响(X±SD)
组别 动物数 剂量(只) (g/kg) | CPK(u/l) | LDH(u/l) |
空白对照组 8 -模型组 8 -地奥心血康组 8 0.5葛根总黄酮提取物小剂量组 8葛根总黄酮提取物中剂量组 8葛根总黄酮提取物大剂量组 8 | 0.250.750.25 |
与模型组比较*P<0.05 **P<0.01
与空白对照比较^^P<0.01
实验结果表明:葛根总黄酮提取物三剂量组的ST段偏移明显小于模型组(P<0.05、0.01);且能使心肌组织中CPK、LDH增高,与模型组比较差异显著(P<0.05、0.01=。提示葛根总黄酮提取物对异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺血损伤有明显的保护作用。
3.本申请人其他研究结果表明:在麻醉犬冠脉结扎所致心肌缺血实验中,葛根总黄酮提取物高剂量组可降低麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞的DAP;减慢心率;葛根总黄酮提取物高、中剂量组可降低麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞∑-ST、N-ST,减少麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞后血清中CK、LDH的释放及麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞的梗塞范围,并具有降低心肌耗氧量趋势,提示葛根总黄酮提取物能明显减轻心肌缺血程度,缓解缺血症状。在麻醉犬血流动力学实验中,葛根总黄酮提取物高、中剂量组对麻醉犬动脉的DAP、MAP有降压作用,对HR有减慢作用;葛根总黄酮提取物高剂量组能增加麻醉犬心输出量(CO);中、高两个剂量组能增加麻醉犬、麻醉犬冠脉流量(CBF);高剂量组能明显增加麻醉犬麻醉犬心脏指数(CI)、每搏输出量(SV)和犬心搏指数(SI);葛根总黄酮提取物中、高剂量组减少射血时间、总耗氧量(TTI)和血管总外周阻力(TPVR)。提示葛根总黄酮提取物在不减少心脏供血功能的基础上,能降低后负荷、减少心脏作功、增强心脏功能,对心肌缺血具有保护作用。对犬血压、心电图和心率均无明显影响,提示本品在发挥抗心肌缺血作用的同时对心血管系统无明显的不利影响。
综上所述,葛根总黄酮提取物对急性心肌缺血、心肌缺血损伤具有保护作用。
此外,本发明克服了中药传统工艺的缺陷,运用中药现代化技术中的大孔树脂吸附技术,提供了了一种含量高、成分明确、质量可控、疗效确却、副作用小的葛根总黄酮提取物的制备方法,该方法制备的葛根总黄酮提取物杂质的减少不但可以改善中成药常有的吸潮性,而且使药效显著,减少有些杂质所导致的副作用,增加患者服药的依从性,成为一种高效、低毒的现代化中药。本发明的制备工艺重现性、稳定性都好,原料的得率高,适合工业化生产。
附图说明
图1为葛根总黄酮测定中对照品液相色谱图。
图2为本发明葛根总黄酮测定中供试品液相色谱图。
具体实施方法
实施例中,葛根药材分别购自安徽霍山县、岳西县,均符合《中国药典》2005版一部中“葛根”项下的规定。
葛根总黄酮测定方法:照紫外分光光度法(《中国药典》2005版一部附录VA)在250nm波长处测定。
原料中葛根素测定方法:照高效液相色谱法HPLC(《中国药典》2005版一部附录VID)测定。
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(25∶75)为流动相;检测波长为250nm。理论板数按葛根素峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备:精密称取葛根素对照品10mg,置25ml量瓶中,加30%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取2ml,置10ml量瓶中,加30%乙醇至刻度,摇匀,即得。
药材供试品溶液的制备:取葛根药材粉末(过3号筛)约0.1g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入30%乙醇50ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用30%乙醇不足减失的重量,摇匀滤过,取续滤液,即得。
提取物供试品溶液的制备:精密称取提取物0.1g,置100ml量瓶中,加30%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取2ml,置25ml量瓶中,加30%乙醇至刻度,摇匀,即得。
测定方法:分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得图1、图2。
下列实施例旨在进一步描述本发明,而不是以任何方式限制本发明。
实施例1:
取葛根药材(产地:霍山县)100kg,粉碎成粗粉,放入提取罐中;分别加800L、800L浓度为50%乙醇热提2次,每次1.5h,合并提取液滤过,放冷,上D101大孔吸附树脂柱,用水充分洗脱至流出液为澄清且无还原糖反应后,再用30%的乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至稠膏,加乙醇使醇浓度达80%,静置过夜,滤过,滤液浓缩,加正丁醇萃取,回收正丁醇,浓缩、干燥,得葛根提取物4.6kg
经HPLC法测定:上述实验所得葛根提取物中葛根总黄酮含量为65%,提取物中主要成分葛根素含量为57%。
实施例2:
取葛根药材(产地:岳西县)100kg,粉碎成粗粉,放入提取罐中;分别加400L、400L、400L、400L、400L浓度为30%乙醇热提5次,每次0.5h,合并提取液滤过,放冷,上DS-401大孔吸附树脂柱,用水充分洗脱至流出液为澄清且无还原糖反应后,再用30%的乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至稠膏,加乙醇使醇浓度达70%,静置过夜,滤过,滤液浓缩,加正丁醇萃取,回收正丁醇,浓缩、干燥,得葛根提取物4.6kg。
经HPLC法测定:上述实验所得葛根提取物中葛根总黄酮含量为77%,提取物中主要成分葛根素含量为66%。
实施例3:
取葛根药材(产地:岳西县)100kg,粉碎成粗粉,放入提取罐中;分别加500L、500L、500L浓度为90%乙醇热提3次,每次1h,合并提取液滤过,放冷,上AB-8大孔吸附树脂柱,用水充分洗脱至流出液为澄清且无还原糖反应后,再用30%的乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至稠膏,加乙醇使醇浓度达75%,静置过夜,滤过,滤液浓缩,加正丁醇萃取,回收正丁醇,浓缩、干燥,得葛根提取物4.3kg。
经HPLC法测定:上述实验所得葛根提取物中葛根总黄酮含量为65%,提取物中主要成分葛根素含量为57%。
实施例4
取葛根药材(产地:霍山县)100kg,粉碎成粗粉,放入提取罐中;分别加800L、600L、600L、600L浓度为350%乙醇热提4次,每次45min,合并提取液滤过,放冷,上D101大孔吸附树脂柱,用水充分洗脱至流出液为澄清且无还原糖反应后,再用15%的乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至稠膏,加乙醇使醇浓度达75%,静置过夜,滤过,滤液浓缩,加正丁醇萃取,回收正丁醇,浓缩、干燥,得葛根提取物4.7kg。
经HPLC法测定:上述实验所得葛根提取物中葛根总黄酮含量为66%,提取物中主要成分葛根素含量为57%。
实施例5
取葛根药材(产地:霍山县)100kg,粉碎成粗粉,放入提取罐中;分别加600L、600L、400L、400L浓度为80%乙醇热提4次,每次50min,合并提取液滤过,放冷,上D101大孔吸附树脂柱,用水充分洗脱至流出液为澄清且无还原糖反应后,再用60%的乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至稠膏,加乙醇使醇浓度达75%,静置过夜,滤过,滤液浓缩,加正丁醇萃取,回收正丁醇,浓缩、干燥,得葛根提取物4.8kg。
经HPLC法测定:上述实验所得葛根提取物中葛根总黄酮含量为67%,提取物中主要成分葛根素含量为58%。
实施例6:
葛根总黄酮注射液的制备
取实施例1所得葛根总黄酮提取物200g,加适量注射用水溶解后,再加入活性炭0.02g,加热煮沸20分钟,滤过,加水至9L,用1%的NaOH调PH至7~8,静置,冷藏,过夜,滤过,滤液加注射用水至10L,灌封(10ml/支,20mg/ml),灭菌,即得。用法用量为每日1次,每次200~400mg静脉注射或加入生理盐水或5%~10%的葡萄糖溶液中静脉滴注。
实施例7:
葛根总黄酮胶囊的制备方法:
取实施例1所得葛根提取物500g,淀粉250g,β-环糊精250g混匀,制粒,过筛,干燥后装成3000粒胶囊(0.33g/粒),即得。用法用量:口服,每次3粒,每日2次。
实施例8:
葛根总黄酮片的制备方法:
取实施例2所得葛根提取物500g,淀粉250g,β-环糊精250g混匀,制粒,过筛,干燥后压成3000片(0.33g/片),即得。用法用量:口服,每次3片,每日2次。
Claims (9)
1、一种葛根总黄酮提取物,其特征在于葛根总黄酮提取物中总黄酮的重量百分含量至少为50%。
2、根据权利要求1所述的葛根总黄酮提取物,其特征在于该葛根总黄酮提取物中总黄酮的重量百分含量为50~95%。
3、根据权利要求1所述的葛根总黄酮提取物,其特征在于总黄酮主要活性成分为葛根素和大豆甙元,所述葛根总黄酮提取物中葛根素和大豆甙元组合物的重量百分含量为40~85%。
4、根据权利要求1所述的葛根总黄酮提取物,其特征在于该葛根总黄酮提取物与药学上可接受的载体和/或赋形剂制成的任何一种制剂。
5、根据权利要求4所述的葛根总黄酮提取物的制剂为片剂、胶囊或注射剂。
6、权利要求1所述葛根总黄酮提取物的制备方法,其制备过程如下:
取葛根药材,加4~8倍体积30~90%的乙醇溶液提取2-5次,每次0.5-1.5小时,将提取液浓缩上大孔吸附树脂柱,先用水洗脱杂质,再用10~70%的乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,浓缩后,加乙醇使醇浓度达70-80%,滤去沉淀物,滤液浓缩,加正丁醇萃取,回收正丁醇,浓缩、干燥。
7、根据权利要求6所述的葛根总黄酮提取物的制备方法,其特征在于:大孔树脂型号为D-101、DS-401或AB-8型。
8、根据权利要求6所述的葛根总黄酮提取物的制备方法,其特征在于:药材粉碎后,加50%乙醇热提两次,每次1h。
9、权利要求1所述的葛根总黄酮提取物在制备治疗心脑血管药物中的应用。
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