CN1768770A - 虎尾草提取物药物制剂的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及到一种由天然植物药材中提取的有效药用部位制成的药物的质量控制方法。本质量控制方法,由以下步骤组成:(一)用虎尾草对照药材作为对照药材、金丝桃苷、芦丁作为对照品来鉴别虎尾草提取物;(二)检测虎尾草提取物中大孔吸附树脂中有机溶剂残留物;(三)用芦丁作为对照品来测定虎尾草提取物药物制剂中总黄酮的含量;(四)用虎尾草提取物药物制剂中金丝桃苷的含量控制其质量。本方法控制虎尾草提取物药物制剂质量具有专属性强,重现性好,操作方便,可较好地用于控制虎尾草提取物药物制剂的质量,从而保证了每批药品疗效的一致性。
Description
技术领域
本发明涉及到一种由天然植物药材中提取的有效药用部位制成的药物的质量控制方法。
背景技术
虎尾草提取物药物制剂为报春花科虎尾草Lysimachia barystachys Bung.或矮桃Lysimachia clethroides Duby.In D.C.的总黄酮提取物。它对治疗中风及中风引起的偏瘫、四肢麻木、口眼歪斜、言语不利等症有较好的疗效,虎尾草经植化分析,主要含有黄酮类化合物,药效学研究表明,该总黄酮提取物对离体的牛脑动脉条具有显著的舒张作用,显著增加家兔颈动脉及脑血流量,对花生四烯酸抗血栓所致急性肺栓塞、呼吸窘迫和死亡有明显保护作用。
发明内容
本发明的目的旨在提供一种以虎尾草提取物为有效药用成分制备的治疗脑中风疾病的虎尾草提取物药物制剂的质量控制方法。
本发明所述的治疗脑中风疾病的药物制剂由以下重量百分比的成分组成:虎尾草提取物20-60%和余量的药用辅料。
本发明所用的原料药材为报春花科虎尾草Lysimachia barystachys Bung.或矮桃Lysimachia clethroides Duby.In D.C.的带根全草,所述的虎尾草提取物为总黄酮百分含量为10%-80%的虎尾草醇提取物或水提取物。所述的药用辅料是指药学领域常规的药用辅料。该药物为口服制剂,其使用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化,其日服剂量可以是20~120mg/人·天。
本发明所述药物制剂的制备方法由以下步骤组成:
一、取虎尾草药材清洁后进行粗粉碎;
二、加入4-12倍量的溶剂热回流提取或煮提,所述溶剂为10-95%的乙醇或水,回流1-3小时,合并提取液回收溶剂;
三、回收溶剂后的浸膏加入药材量的1-4倍量的水,煮沸后冷至室温,用膜过滤,滤液按药材量的1-4倍上大孔吸附树脂柱,依次用1-20%乙醇溶液、30-100%乙醇溶液洗脱;
四、洗脱液回收乙醇后浓缩至比重为60℃时1.30以上后,40℃-90℃真空干燥,粉碎,过筛,即得浸膏粉;
五、将浸膏粉与辅料混匀后,制成药物制剂。
本发明所述的虎尾草提取物药物制剂的质量控制方法,其特征在于:
(一)、用虎尾草对照药材作为对照药材、金丝桃苷、芦丁作为对照品来鉴别虎尾草提取物;
(二)、检测虎尾草提取物中大孔吸附树脂中有机溶剂残留物;
(三)、用芦丁作为对照品来测定虎尾草提取物药物制剂中总黄酮的含量;
(四)、用虎尾草提取物药物制剂中金丝桃苷的含量控制其质量。
本发明所述的更为具体的质量控制方法由以下步骤组成:
(一)、虎尾草鉴别
称取虎尾草对照药材粗粉0.2-1.0g,加甲醇10-20ml,超声处理10-20分钟,滤过,滤液水浴挥去甲醇,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;称取金丝桃苷、芦丁对照品各1mg,分别溶于甲醇2ml中,作为对照品溶液;另称取胶囊内容物6mg,加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;照薄层色谱法,分别取供试品溶液、对照品和对照药材溶液各0.5-1.0ul,点于同一聚酰胺薄膜上,以乙醇-丙酮-水1∶1∶2为展开剂,展开,取出,凉干,喷以1%AlCl3乙醇溶液,热风吹至斑点清晰,置紫外灯下检视,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的黄绿色荧光斑点;
(二)、大孔吸附树脂有机溶剂残留物检测
气相色谱,DB-624石英毛细管柱,N2为载气,流速为2.5ml/分钟;
进样口温度220℃,不分流;
检测器为氢火焰离子检测器,检测温度为250℃,
程序升温:柱温40℃,以14℃/分钟升温至200℃保持1分钟;
(三)、总黄酮含量测定
对照品溶液的制备:精密称取120℃干燥至恒重的芦丁标准品50mg,置于50ml容量瓶中,加甲醇适量,微热使其溶解,放冷后用甲醇稀释至刻度,摇匀,精密量取20ml,置100ml容量瓶中,用水稀释到刻度,摇匀,即得;
标准曲线的制备:精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml置于25ml容量瓶中,各加5%亚硝酸钠溶液1ml,摇匀后放置6分钟,加10%硝酸铝溶液1ml,摇匀,再放6分钟,加4%氢氧化钠10ml,分别加水稀释至刻度,摇匀,放置15-20分钟,照分光光度法,用对照品溶液0.0ml样品作空白,在500nm处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;
供试品溶液的制备:取装量差异项下的内容物40-150mg,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇15ml,称定重量,充分振摇后,超声处理15分钟,冷至室温后,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;
含量测定:精密吸取供试品溶液0.5-2ml于25ml容量瓶中,按标准曲线法,自“加5%亚硝酸钠溶液1ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线读出供试品溶液中芦丁含量,计算,即得总黄酮含量;
(四)、金丝桃苷的含量测定
高效液相色谱,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂流动相为:
乙腈 14体积
四氢呋喃 2体积
0.1%磷酸水溶液 84体积
检测波长为350nm
理论塔板数按金丝桃苷吸收峰计算应不低于3000。
本发明所述药物制剂的毒理学研究:
毒理学研究表明,经口给予虎尾草提取物的最大耐受剂量分别为:大鼠>7.5g/kg、小鼠>12.5g/kg.Beale狗按105、210、420mg/kg剂量口服,大鼠按0.35、0.70、1.40g/kg灌胃,连续6个月,血液学及生化指标未见异常,病理学检验也未见异常,经统计学检验,与空白组比较无显著性差异。
本发明所述药物制剂的药效学研究:
1.虎尾草提取物对大鼠局灶性脑缺血的影响
用电凝法阻断大鼠脑中动脉,造成局灶性脑缺血模型,观察虎尾草提取物对局灶性脑缺血的治疗作用。结果表明,与模型组比较,虎尾草提取物组大鼠十二指肠给药后梗塞灶明显缩小,脑梗塞后动物的神经行为障碍明显减轻,血浆ET含量明显降低。表明虎尾草提取物对大鼠局灶性脑缺血有明显的治疗作用。
2.虎尾草提取物对麻醉犬脑血流量的影响
以颈内动脉血流量为主要观测指标,观察虎尾草提取物对动物脑血流量的影响。实验结果表明,虎尾草提取物可明显增加麻醉犬脑血流量(CBF),降低脑血管阻力(CVR);对动脉血压(SP、DP、MAP)、心率(HR)、心电图(ECG-II)无明显影响。
3.虎尾草提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响
用大鼠脑缺血再灌注损伤模型,观察虎尾草提取物对大鼠脑含水量及脑组织SOD活力、MDA含量的影响。结果表明,缺血再灌注后脑含水量明显升高,脑组织SOD活力明显降低、MDA含量升高,造成脑组织损伤,通透性增强。十二指肠给予虎尾草提取物后,脑含水量明显降低,组织SOD活力明显增强、MDA含量明显降低,与模型组比较差异显著(P<0.05)。表明虎尾草提取物对脑缺血再灌注损伤有保护作用。
4.虎尾草提取物对家兔血小板聚集的影响
采用Born氏比浊法,观察虎尾草提取物对家兔血小板聚集的影响。试验结果显示,家兔连续7天灌胃给药,虎尾草提取物明显降低二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)及血小板活化因子(PAF)诱导的家兔血小板聚集率(P<0.05-0.001)。表明虎尾草提取物具有明显抑制血小板聚集的作用。
5.虎尾草提取物对大鼠体外血栓形成及血液粘度的影响
试验观察虎尾草提取物对大鼠体外血栓形成及血液粘度的影响。结果表明:大鼠连续7天灌胃给药,虎尾草提取物显著缩短血栓长度((P<0.01∽0.001)、减轻血栓湿重和干重(P<0.01∽0.001);降低切变率100S-1、30S-1、5S-1下的全血粘度(P<0.05∽0.001)。表明虎尾草提取物具有抑制血栓形成、降低血液粘度的作用。
6.虎尾草提取物对大鼠软脑膜微循环的影响
通过注射15%高分子右旋糖酐造成大鼠软脑膜微循环障碍,观察虎尾草提取物十二指肠给药对大鼠微循环障碍的影响。结果表明,虎尾草提取物在所观察10、20、30min的时段内均可明显增加血液流速,改善血液流态,与模型组比较均有显著性差异。表明虎尾草提取物具有改善大鼠软脑膜微循环障碍的作用。
本发明所述药物制剂的一般药理学研究:
1、小鼠经口分别给予虎尾草提取物960、480、240mg/kg剂量,对小鼠的精神神经系统无明显影响,与蒸馏水对照组相似(P>0.05),其一般行为,瞳孔、姿势、步态、流诞、肌颤、自主活动数及各项观察指标均无任何明显影响;与阈下催眠剂量戊巴比妥钠也无协同作用,其平均入睡时间和睡眠时间与蒸馏水对照组相同(P>0.05)。
2、猫分别经口给予虎尾草提取物288、144、72mg/kg剂量,对猫的心血管及呼吸系统无明显影响,其平均动脉压、呼吸频率、呼吸幅度及心电图的心率、P波、R波、T波、QRS波群、S-T位移、P-R间期、Q-T间期等各项指标均与蒸馏水对照组相似(P>0.05)。
本发明所述的虎尾草提取物药物制剂可以是由虎尾草提取物制成的口服制剂如片剂、口服液、颗粒剂以及胶囊剂等,本方法控制虎尾草提取物药物制剂质量具有专属性强,重现性好,操作方便,可较好地用于控制虎尾草提取物药物制剂的质量,从而保证了每批药品疗效的一致性。
具体实施方式
实施例:虎尾草黄酮胶囊的质量控制方法
(一)、虎尾草鉴别
称取虎尾草对照药材粗粉0.5g,加甲醇20ml,超声处理10分钟,滤过,滤液水浴挥去甲醇,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;称取金丝桃苷、芦丁对照品各1mg,分别溶于甲醇2ml中,作为对照品溶液;另称取胶囊内容物6mg,加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VIB),分别取供试品溶液、对照品和对照药材溶液各0.5ul,点于同一聚酰胺薄膜上,以乙醇-丙酮-水(1∶1∶2)为展开剂,展开,取出,凉干,喷以1%AlCl3乙醇溶液,热风吹至斑点清晰,置紫外灯(365nm)下检视,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的黄绿色荧光斑点。
(二)、大孔吸附树脂有机溶剂残留物苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙苯、二乙烯苯、萘、癸烷、十一烷、十二烷检测。
按气相色谱法《中国药典》二部附录VE测定。
色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:DB-624石英毛细管柱30m×0.32mm×1.8μm,载气为N2,流速为2.5ml/分钟;进样口温度220℃,不分流;检测器为FID(氢火焰离子检测器),检测温度为250℃,氢气30ml/分钟,空气300ml/分钟,尾吹30ml/分钟;程序升温:柱温40℃,以14℃/分钟升温至200℃保持1分钟。
对照品溶液的制备:精密称取苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙苯、二乙烯苯、萘、癸烷、十一烷、十二烷对照品适量,加色谱纯二氯甲烷制成苯2ppm、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙苯、二乙烯苯、萘、癸烷、十一烷、十二烷10ppm的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备:精密称取1.0g样品,加入5ml色谱纯二氯甲烷,称重,超声提取10分钟,再称重,补足重量减失部分,滤过,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl,注入气相色谱仪,测定,即得。
本品每克胶囊内容物中含苯不得大于2ppm,甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙苯、二乙烯苯、萘、癸烷、十一烷、十二烷不得大于20ppm。
(三)、总黄酮含量测定
对照品溶液的制备:精密称取120℃干燥至恒重的芦丁标准品50mg,置于50ml容量瓶中,加甲醇适量,微热使其溶解,放冷后用甲醇稀释至刻度,摇匀,精密量取20ml,置100ml容量瓶中,用水稀释到刻度,摇匀,即得(每1ml含芦丁0.2mg)。
标准曲线的制备:精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml置于25ml容量瓶中,各加5%亚硝酸钠溶液1ml,摇匀后放置6分钟,加10%硝酸铝溶液1ml,摇匀,再放6分钟,加4%氢氧化钠10ml,分别加水稀释至刻度,摇匀,放置15-20分钟,照分光光度法(中国药典2000版一部附录V),用对照品溶液0.0ml样品作空白,在500nm处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。
供试品溶液的制备:取装量差异项下的内容物60mg,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇15ml,称定重量,充分振摇后,超声处理15分钟,冷至室温后,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。
含量测定:精密吸取供试品溶液2ml于25ml容量瓶中,按标准曲线法,自“加5%亚硝酸钠溶液1ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线读出供试品溶液中芦丁含量,计算,即得总黄酮含量。
本品每克胶囊内容物中含总黄酮以芦丁(C27H30O16)计每粒不得少于160.0mg。
(四)、金丝桃苷的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》一部附录VID)测定。
色谱条件与系统性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈-四氢呋喃-0.1%磷酸溶液(14∶2∶84),检测波长为350nm,理论塔板数按金丝桃苷吸收峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备:精密称取金丝桃苷10mg,置于50ml容量瓶中,加甲醇适量,微热使其溶解,放冷后用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1ml含金丝桃苷0.2mg)。
供试品溶液的制备:取本品70mg,精密称定,用少量甲醇溶解后移至25ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,作为供试品溶液。
测定法:精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每克胶囊内容物中含金丝桃苷(C21H21O12)不得少于9.0mg。
Claims (2)
1、一种虎尾草提取物药物制剂的质量控制方法,其特征在于由以下步骤组成:
(一)、用虎尾草对照药材作为对照药材、金丝桃苷、芦丁作为对照品来鉴别虎尾草提取物;
(二)、检测虎尾草提取物中大孔吸附树脂中有机溶剂残留物;
(三)、用芦丁作为对照品来测定虎尾草提取物药物制剂中总黄酮的含量;
(四)、用虎尾草提取物药物制剂中金丝桃苷的含量控制其质量。
2、如权利要求1所述的虎尾草提取物药物制剂的质量控制方法,其特征在于由以下步骤组成:
(一)、虎尾草鉴别
称取虎尾草对照药材粗粉0.2-1.0g,加甲醇10-20ml,超声处理10-20分钟,滤过,滤液水浴挥去甲醇,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;称取金丝桃苷、芦丁对照品各1mg,分别溶于甲醇2ml中,作为对照品溶液;另称取胶囊内容物6mg,加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;照薄层色谱法,分别取供试品溶液、对照品和对照药材溶液各0.5-1.0ul,点于同一聚酰胺薄膜上,以乙醇-丙酮-水1∶1∶2为展开剂,展开,取出,凉干,喷以1%AlCl3乙醇溶液,热风吹至斑点清晰,置紫外灯下检视,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的黄绿色荧光斑点;
(二)、大孔吸附树脂有机溶剂残留物检测
气相色谱,DB-624石英毛细管柱,N2为载气,流速为2.5ml/分钟;
进样口温度220℃,不分流;
检测器为氢火焰离子检测器,检测温度为250℃,
程序升温:柱温40℃,以14℃/分钟升温至200℃保持1分钟;
(三)、总黄酮含量测定
对照品溶液的制备:精密称取120℃干燥至恒重的芦丁标准品50mg,置于50ml容量瓶中,加甲醇适量,微热使其溶解,放冷后用甲醇稀释至刻度,摇匀,精密量取20ml,置100ml容量瓶中,用水稀释到刻度,摇匀,即得;
标准曲线的制备:精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml置于25ml容量瓶中,各加5%亚硝酸钠溶液1ml,摇匀后放置6分钟,加10%硝酸铝溶液1ml,摇匀,再放6分钟,加4%氢氧化钠10ml,分别加水稀释至刻度,摇匀,放置15-20分钟,照分光光度法,用对照品溶液0.0ml样品作空白,在500nm处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;
供试品溶液的制备:取装量差异项下的内容物40-150mg,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇15ml,称定重量,充分振摇后,超声处理15分钟,冷至室温后,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;
含量测定:精密吸取供试品溶液0.5-2ml于25ml容量瓶中,按标准曲线法,自“加5%亚硝酸钠溶液1ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线读出供试品溶液中芦丁含量,计算,即得总黄酮含量;
(四)、金丝桃苷的含量测定
高效液相色谱,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
流动相为:
乙腈 14体积
四氢呋喃 2体积
0.1%磷酸水溶液 84体积
检测波长为350nm
理论塔板数按金丝桃苷吸收峰计算应不低于3000。
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