CN1872101A - 具抗病毒作用的小紫金牛提取物及其提取方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有抗病毒作用的含有小紫金牛多糖的小紫金牛提取物；并公开了其提取方法是采用生长在粤北瑶族的紫金牛科(Myrsinaceae)紫金牛属(Ardisia SW)的小紫金牛(Ardisia chinensis Benth)植物的干燥全株，用水提取得到，也可进一步提纯精制。同时，还公开了该提取物可用于制备治疗和预防乙肝病毒(HBV)和柯萨奇B3型病毒(CoxB3)引起的临床症状的药物、保健品或食品。

Description

具抗病毒作用的小紫金牛提取物及其提取方法和应用

 技术领域

本发明涉及来源于植物材料的药用提取物及其提取方法和用途，具体地说，是小紫金牛植物的提取物及其提取方法和用途。

背景技术

人体由于病毒感染引起的疾病很多，危害性也很大，如由乙型肝炎病毒(HBV)引起的慢性肝炎可导致慢性病毒感染症，淋巴肿疾患及慢性肾脏障碍。目前，世界上有约2亿人口是HBV病毒携带者，其中80％集中在亚太地区，大部分血液中出现乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性。现虽已开发了一些治疗乙型肝炎病毒的药物，但都没有满意的药物，合成药如乙膦甲酸盐、苏拉明、2-脱氧鸟苷等，副作用大，且易出现耐药性。寻找新的、安全有效的抗乙肝病毒药物很有必要。另外，柯萨奇B3型病毒(CoxB3)是病毒性心肌炎的主要致病因素，病毒可在体内持续存在，导致扩张性心肌病，引起患者急性瘁死，另有报道指出CoxB3会引起呼吸道感染和肠炎。但目前临床上对柯萨奇病毒感染尚缺乏有效的治疗方法和药物。从植物中寻找有效的抗病毒药物是目前的研究热点。

紫金牛科(Myrsinaceae)紫金牛属(Ardisia)植物全世界约有300种，分布于热带美洲、太平洋诸岛、印度洋半岛东部及南部，少数分布于太平洋；在中国的紫金牛属植物资源丰富，约有68种，在不同地区产的不同种的紫金牛植物含有的成分不尽相同，生理活性也可有异，据报道紫金牛属植物主要含有香豆素类、酚类、黄酮类及三萜皂苷类成分。我们在中国粤北瑶乡发现一种生长在深山溪边的当地人把之称为“黄胆草”的植物，后经专家鉴定，“黄胆草”为紫金牛科紫金牛属的小紫金牛(Ardisia chinensis Benth)异名有；小狮子、黑果凉伞、小凉伞。据文献报道，该植物的性状苦、平。功效是止血，止痛。主治肺结核、咯血，吐血，跌打、痛经等。据当地是瑶胞介绍，该草药是用来医治当地的常见病黄疸型肝炎的祖传秘方，疗效好，副作用小。但经检索，未见小紫金牛的化学成分及其生物活性的方面的系统研究，因而导致该草药开发利用滞后。

发明内容

本发明的目的是从植物药小紫金牛提取物中寻找具抗病毒作用的成分及提供其提取方法，并进一步提供其在制备抗病毒药物、保健品及食品上的用途。

为达到上述目的，本发明具抗病毒作用的小紫金牛提取物，含有小紫金牛多糖。

所述小紫金牛多糖的含量不少于20％，总多酚的含量为不大于30％。

所述小紫金牛多糖为中性多糖，分子量为100～10KDa，该多糖中D-葡萄糖含量不少于50％；所述多酚为末食子酸及多羟基苯甲酸衍生物。

本发明的提取方法是：采用生长在粤北瑶族的紫金牛科(Myrsinaceae)紫金牛属(Ardisia SW)的小紫金牛(Ardisia chinensis Benth)植物的干燥全株，用水提取得到。提取时，可将阴干、切碎的小紫金牛用水煎煮二次，每次1-2个小时，过滤提取液，浓缩成浸膏，再在真空烘箱中干燥或喷雾干燥成褐色粉末，为小紫金牛水提物。药理实验表明，小紫金牛水提物有抗病毒作用。

为了从小紫金牛植物的水提物中进一步获取纯度较高，疗效更好的产品，将所得的小紫金牛提取液，减压浓缩，离心分离得上清液，上清液用95％乙醇调至乙醇浓度为60～80％，搅拌均匀，静置沉淀，离心分离沉淀物，干燥得小紫金牛粗多糖干品；以提取物干品重量计算，小紫金牛多糖含量为60～80％、总多酚含量为5-10％。药理实验表明，小紫金牛粗多糖富集了具有抗病毒作用的成分。

取所得小紫金牛粗多糖干品溶于蒸馏水中，超声波脱气后，过离子交换柱或大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱至洗脱液用苯酚-硫酸试剂不显色，洗脱液浓缩、干燥得小紫金牛多糖干品；以提取物干品重量计算含有小紫金牛多糖85～95％、总多酚1～3％。药理实验表明，小紫金牛多糖为小紫金牛植物抗病毒的主要活性成分。

小紫金牛各提取物的总糖含量测定方法：

总糖含量用蒽酮-硫酸比色法测定，用半乳糖做标准。D-半乳糖标准曲线的制备：准确称取一定量的D-半乳糖，用蒸馏水配成100mL储备液，分别取1，2，3，4，5mL储备液再配成100mL溶液，即得到不同浓度的标准半乳糖溶液。分别吸取1mL不同浓度标准糖溶液移入具塞试管中，同时以1mL蒸馏水作空白对照，先在冰水浴中冷却数分钟，沿试管壁徐徐加入5mL蒽酮试剂(0.2g蒽酮溶于100mL80％硫酸)，震摇后于80℃水浴中反应20min，取出冷却至室温，在波长为640nm下测定吸光度，得出不同浓度标准半乳糖的吸光度值，作标准曲线，求出标准曲线方程。测定法：准确称取一定量的各小紫金牛提取物，用蒸馏水加热溶解，配成100mL溶液。分别取1mL此溶液按上述标准糖的操作，测得各样品的吸光度值，从标准曲线查得(或标准曲线方程算得)样品中总糖含量。

小紫金牛各提取物的多酚含量测定方法

总多酚含量用Folin-Ciocalteu’s试剂比色法测定，用末食子酸做标准。末食子酸标准曲线的制备：准确称取一定量的末食子酸，用蒸馏水配成100mL储备液，分别取1，2，3，4，5mL储备液再配成100mL溶液，即得到不同浓度的标准末食子酸溶液。分别吸取8ml不同浓度的标准末食子酸溶液移入具塞试管中，同时以8ml蒸馏水作空白对照。在各试管中加入0.5ml的Folin-Ciocalteu’s试剂(购自 Sigma公司)，混合均匀后，再加入1.5ml的20％的碳酸钠溶液，再混合均匀，放置1小时后，用紫外分光光度计在750nm测定不同浓度的标准末食子酸吸光度值，作标准曲线，求出标准曲线方程。测定法：准确称取一定量的各小紫金牛提取物，溶于8ml的蒸馏水中，加入0.5ml的Folin-Ciocalteu’s试剂(购自Sigma公司)，混合均匀后，再加入1.5ml的20％的碳酸钠溶液，再混合均匀，放置1小时后，用紫外分光光度计在750nm测定吸收值。从标准曲线查得(或标准曲线方程算得)样品中总多酚含量。

小紫金牛各提取物中的末食子酸定性分析

用薄层色谱(TLC)分析的方法定性检测各提取物中的末食子酸，将小紫金牛各提取物(包括水提物、粗多糖和多糖)和末食子酸标样(购自中国药品和生物制品检定所)分别溶于一定量的甲醇中，点于硅胶薄层GF₂₅₄板(青岛海洋化工厂)中，用氯仿∶甲醇＝9∶1(或8∶2，或7∶3)展开，用FeCl₃/EtOH试剂显色，根据Rf值的大小做定性分析。另外，我们通过硅胶柱层析分离，从小紫金牛水提物中分离出末食子酸及多羟基苯甲酸衍生物，分离所得的化合物的结构鉴定采用核磁共振H谱、C谱和质谱分析的方法。

小紫金牛水提物、粗多糖、多糖含量测定结果：

(1)小紫金牛水提物干品中，以D-半乳糖计，多糖含量应为30～20％；以末食子酸计，多酚含量应为20～30％。

(2)小紫金牛粗多糖干品中，以D-半乳糖计，多糖含量应为80～60％，以末食子酸计，多酚含量应为5～10％。

(3)小紫金牛多糖干品中，以D-半乳糖计，多糖含量应为85～95％，以末食子酸计，多酚含量应为1～3％。

(4)小紫金牛提取物中的多酚为末食子酸及多羟基苯甲酸衍生物。

小紫金牛多糖的单糖组成及含量：

先用2mol/L的三氟乙酸，于110℃下水解样品1.5h，然后减压蒸干。在水解后的样品中加入10mg盐酸羟胺、0.5ml吡啶，于90℃水浴中振荡反应30min，取出后冷却至室温，加入0.5ml醋酸酐，在90℃水浴中继续反应30min，使之转变成糖腈乙酸酯衍生物，反应产物直接取样，进行气相色谱分析。本实验采用气相色谱柱为DB-5柱(0.2mm×35m)，液膜厚0.25μm，载气为高纯氦气。色谱条件：采用程序升温，初始温度为60℃，保持2min后以30℃/min的速率升至120℃，保持1min，再以2.5℃/min的速率升至250℃并保持10min。进样口温度280℃，采用不分流模式进样，柱流量为2ml/min。质谱条件：采用电子轰击(EI)离子源，离子能量70eV。

结果：从图1可见，小紫金牛多糖中D-葡萄糖含量超过50％。

小紫金牛多糖分子量测定

采用葡聚糖凝胶柱测定小紫金牛多糖分子量。葡聚糖(Dextran 500、400、76.9、42、10KDa)标准曲线的制备：先按产品说明书的方法处理葡聚糖凝胶，然后装柱、平衡。将适量不同分子量(Mr)的标准葡聚糖分别溶于蒸馏水中，加入柱子中，用0.05mol/ml的NaCl洗脱柱子，苯酚-硫酸试剂监测多糖的洗出终点，记录洗脱体积(Ve)，以Ve为纵坐标，1gMr为横坐标，作标准曲线，求出标准曲线方程。测定法：同上取适量小紫金牛多糖样品溶于蒸馏水中，上柱，洗脱，测其从柱子中流出时的Ve，从标准曲线查得(或标准曲线方程算得)小紫金牛多糖分子量。

结果：小紫金牛多糖分子量为100～10KDa。

以本发明的各提取物为活性成分加药学所允许的辅料，按常规的制剂工艺可组成各种口服制剂。

将上述不同部位的提取物进行抗病毒体外试验以证实其用途。

一、各提取物的柯萨奇B3型病毒(CoxB3)活性测定方法：

1、样品体外细胞毒性实验：采用四唑盐比色法(MTT colorimetric method)测定样品的细胞毒性，本实验所用的细胞为Hella细胞。实验过程简述如下：将Hella细胞接种在96孔细胞培养板上，置37℃、CO₂(5％)培养箱中培养2天，待细胞长成单层后，弃去培养液。将对倍稀释后的供试液加入到96孔板培养的单层细胞中，同时设正常细胞对照组(只加维持液)。加样后的96孔板置于37℃，5％CO₂培养箱中培养72h，用光学显微镜每天观察样品引起的细胞毒性，记录各浓度孔细胞毒性情况。72h后弃去孔中培养液，加入10μL 5mg/ml的MTT溶液，置于培养箱中培养5h，再加入DMSO溶解，用酶标仪测定各孔的OD值，测量波长为570nm，参比波长为630nm，计算多糖样品对细胞的半数致死毒性浓度(CC50)。

2、样品体外抗CoxB3活性实验：采用细胞病变抑制法(CPE reduction assay)测定样品的体外抗病毒活性。本实验中，Hela细胞为CoxB3的宿主细胞，抗CoxB3的阳性对照药为利巴韦林。实验过程简述如下：将Hela细胞接种在96孔细胞培养板上，置37℃、CO2(5％)培养箱中培养2天，待细胞长成单层后，弃去培养液。将对倍稀释后的供试液加入到96孔板培养的单层细胞中。同时设置不加药的细胞对照和利巴韦林作阳性对照药。再将等体积的病毒混悬液(100TCID50/ml)加入单层细胞中。将细胞置于37℃、CO2(5％)培养箱中培养2～5天，用光学显微镜每天观察病毒引起的细胞病变(CPE)情况。对CPE进行记分(令0＝0％CPE，1＝0～25％CPE，2＝25～50％CPE，3＝50～75％CPE，4＝75～100％CPE)。半数抑制浓度(IC50)是指加入供试液和病毒后，在光镜下观察到细胞病变为50％时供试液的浓度。选择性指数SI＝CC₅₀/IC₅₀，SI值越高，表示样品的活性高、毒性小。

实验结果见表1：

                  表1小紫金牛提取物体外抗CoxB3活性

样品	多糖含量	CC50(μg/ml)	IC50(μg/ml)	SI
					水提物	30～20％	＞1000	31.25	＞32
粗多糖	80～60％	＞1000	10	＞100
					小紫金牛多糖	85～98％	＞1000	3.9	＞265
病毒唑	-	62.5	12.5	5

表中数据表明，小紫金牛水提物、粗多糖和多糖都具有很好的体外抗肠病毒活性，他们的IC₅₀分别为31.25μg/ml、10μg/ml和3.9μg/ml，它们的SI值分别大于32、100和大于265，它们的体外抗肠病毒活性比病毒唑(IC₅₀为12.5μg/ml，SI值为5)好得多。随着提取物中多糖含量的增加，它们的体外抗肠病毒活性增加，尤其是小紫金牛多糖具有优异的抗肠病毒活性。

二、样品体外抗乙型肝炎病毒(HBV)活性实验方法

采用鸭乙肝病毒(DHBV)模型：

1、原代鸭肝细胞(PDH)的培养

1日龄广州麻鸭静脉注射0.2ml鸭乙肝病毒(DHBV)阳性血清。取7日龄DHBV阳性鸭，注射5％戊巴比妥钠0.4ml麻醉后剖腹，静脉灌注灌流缓冲液200ml后，灌注消化缓冲液50ml。为保证灌注在37℃下进行，所有缓冲液先预热至37℃，肝脏用纱布覆盖。灌注完毕后，取下肝脏，将肝脏置于小瓶中，剪碎，加L-15生长液，吹打分散细胞。取细胞悬液，经细胞离解筛过滤后离心(50×g，4min)，沉淀细胞用L-15生长液洗3次。细胞经血球计计数后，用L-15生长液稀释后接种于24孔板(1×10⁶细胞/ml/孔)，置于37℃下培养24h。用L-15生长液稀释小紫金牛各提取物，加入24孔板中，每个浓度做3个平行，另设病毒对照组，以L-15生长液代替药物，每个浓度也做3个平行。48h后取上清液离心(6000×g，10min)，-70℃下冻存，供斑点杂交检测用。

2、斑点杂交检测

取750μl上述上清液点在硝化纤维素膜上，室温晾干后在0.5M NaOH作用下变性10min，再用1M tris-HCl-0.6M NaCl(pH7.5)溶液中和15min，60℃烘烤4h固定DNA。³²P-DHBV-DNA探针标记按缺口翻译试剂盒说明书方法进行。将上述中制备的硝化纤维素膜依次在60℃，1％十二烷基硫酸钠(SDS)和3×SSC(pH7.0)溶液中预杂交20min和60℃，1％十二烷基硫酸钠(SDS)、100μg/ml变性鲑鱼精DNA、10×Denhardt’s溶液中预杂交4h后，再将膜置于50％甲酰胺，5×SSC、3×Denhardt’s溶液和100μg/ml变性鲑油精DNA溶液中，42℃杂交箱中杂交8h，倾去杂交液，用1％十二烷基硫酸钠(SDS)和3×SSC溶液分别于室温、42℃、60℃各漂洗10min。膜干用X-ray胶片，置于-70℃放射自显影。用酶标仪测所形成的斑点的OD值。用已知含量的HBV-DNA按上述方法处理，测定各斑点的OD值，作标准曲线。通过标准曲线求出各待测样品的DHBV-DNA含量。标准实验数据以平均值±标准偏差( x±s)表示，采用Student’s T-test进行非配对统计学分析，在P＜0.05水平，判断差异是否有统计学意义。并按下式计算药物对细胞内DHBV DNA的抑制率：抑制率％＝[病毒对照的DHBV DNA含量-样品的DHBV-DNA含量]/病毒对照的DHBV DNA含量×100％。以药物浓度为横坐标，抑制率为纵坐标绘制曲线，求出DHBV抑制率为50％时的药物浓度，即IC₅₀。

不同浓度小紫金牛提取物对DHBV DNA抑制情况见表2：

     表2小紫金牛各提取物对DHBV DNA的抑制率(％)

样品浓度(μg/ml)	抑制率(％)
				水提物	粗多糖	小紫金牛多糖
	25	-6	-2.4				-0.79
50				23.62*	13.01	16.83*
	100	18.01	20.86*				20.37*
200				35.76*	50.57*	52.74*
	400	72.41*	80.92*				81.50**
1000				90.49*	93.60*	95.32**
	病毒对照	-	-				-

*各组与病毒对照组比较P＜O.05，**P＜0.01。

从表2数据可见：实验较高浓度组(≥200μg/ml)与病毒对照组比较有显著性差异，说明小紫金牛各提取物均能抑制DHBV DNA的复制，且各提取物在实验最高浓度1000μg/ml时，对DHBV DNA的抑制率均达到90％以上。

小紫金牛水提物对DHBV DNA抑制的IC₅₀为273μg/ml、粗多糖对DHBV DNA抑制的IC₅₀为200μg/ml、小紫金牛多糖对DHBV DNA抑制的IC₅₀小于200μg/ml。

三、样品体内抗乙型肝炎病毒(HBV)活性实验方法

采用鸭乙肝病毒(DHBV)模型，具体方法如下：1日龄广州麻鸭静脉注射0.2ml鸭乙肝病毒(DHBV)阳性血清。取13日龄DHBV阳性鸭，取血，离心分离血清，-70℃下冻存。另外，将13日龄DHBV阳性鸭随机分组进行药物治疗实验，每组10～7只不等。给药组分小紫金牛水提物大剂量组10g·kg^-1·d^-1、中剂量组(5g·kg^-1·d^-1)和小剂量组(1g·kg^-1·d^-1)，均口服，2次/d，10天为一疗程。另设病毒对照组，以生理盐水代替药物，阳性对照用无环鸟苷口服，给药10mg·kg^-1·d^-1，2次/d，10天为一疗程。在感染后第13天(给药前)、给药5天、给药10天和停药3天，自鸭腿静脉取血，分离血清，-70℃下冻存。

取上述鸭血清，每批同时点在硝化纤维素膜上，按照前述的斑点杂交方法，做鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑点，在酶标仪上测定OD值，计算血清DHBV-DNA含量，实验数据以平均值±标准偏差( x±s)表示，采用Student’sT-test进行非配对统计学分析，在P＜0.05水平，判断差异是否有统计学意义。并按下式计算药物对细胞内DHBV-DNA的抑制率：

抑制率％＝(OD_给药前-OD_给药后/OD_给药后)×100％

动物实验结果见表3：

                  表3、小紫金牛水提物在鸭体内对DHBV-DNA的抑制率

组别	动物数(只)	平均抑制率(％)
						用药前	用药5天	用药10天	停药3天
		病毒对照组	8	0	25.83					7.55	1.52
阿昔洛韦	8					0	87.46**	90.21**	-20.74
		大剂量组	8	0	56.67*					57.32**	39.30
中剂量组	7					0	50.40	52.62**	40.07
		小剂量组	7	0	29.22					30.01	22.44

^*各组与病毒对照组比较P＜0.05，^**P＜0.01。

可见：用药10天后，小紫金牛水提物各剂量组对血清中DHBV-DNA含量均有一定抑制，大剂量和中剂量组对HBV-DNA体内抑制达50％，且有显著性差异。另外，停药后小紫金牛水提物对DHBV-DNA仍然保持较好的抑制，DHBV-DNA的回升没有阳性对照药明显。即小紫金牛水提物在5g·kg^-1·d^-1和10g·kg^-1·d^-1的剂量时，在体内对乙肝病毒有较好的抑制。

小紫金牛虽然在瑶族地区作为祖传秘方用来医治病黄疸型肝炎，在长期实践中证明疗效好，副作用小。但从未有现代科学研究证实其疗效，更未有研究报道其有效部位和成分，从而导致了该民间草药的开发利用滞后。本发明首次证实小紫金牛的水提物具有抗乙型肝炎和抗柯萨奇病毒的活性，活性追踪分离显示其抗病毒活性成分为小紫金牛多糖。在本发明的基础上，可制备治疗和预防乙肝病毒(HBV)和柯萨奇B3型病毒(CoxB3)引起的临床症状的药物、保健品和食品。

附图说明

图1是本发明小紫金牛多糖中单糖组成的分析(GC-MS分析)结果图。

具体实施方式

本发明可以通过以下实施例进行详细说明，但并不仅仅局限于以下实施例。

实施例一：小紫金牛水提物的制备

取阴干、切碎后的小紫金牛全株，用10倍量水，于100℃回流提取二次，每次1～2个小时，过滤提取液，滤液用旋转蒸发仪浓缩成浸膏，在真空干燥箱中干燥或喷雾干燥成褐色粉末，为小紫金牛水提物。以提取物干品重量计算含有小紫金牛多糖30～20％、总多酚20～30％。

实施例二：小紫金牛粗多糖的制备

取阴干、切碎后的小紫金牛全株，用10倍量水，于100℃回流提取二次，每次1～2个小时，过滤提取液，滤液用旋转蒸发仪浓缩至相对密度为1.05-1.15(60℃)，离心分离得上清液，加入95％乙醇溶液至体系中乙醇浓度为60～80％，搅拌过夜使沉淀完全析出，离心分离沉淀物，干燥得干品，为小紫金牛粗多糖。以提取物干品重量计算，小紫金牛多糖含量为60～80％、总多酚含量为5-10％。

实施例三：小紫金牛多糖的制备方法1

称取DEAE Cellulose-52离子交换树脂100g，加蒸馏水500mL，搅拌均匀，用水浮选法除去少量的纤维素单体或碎片，然后在室温下放置24h，待树脂充分溶胀后，将树脂抽干，按说明书的要求活化树脂。将已活化的树脂，加蒸馏水300mL，用超声波脱气，搅拌均匀后，沿玻棒小心缓慢地灌到柱中，同时轻轻敲击柱壁，使树脂沉降均匀、紧密，然后用蒸馏水充分淋洗48h，放置过夜平衡柱子。

称取小紫金牛粗多糖干品200mg，加热溶于1mL蒸馏水中，超声波脱气后，将样品加入上述活化和平衡过的离子交换柱中，用蒸馏水洗脱柱子，使用HL-2恒流泵，控制流速为1mL/min，自动收集仪收集洗脱液，每管收集10mL，收集液用苯酚-硫酸法显色，在波长为490nm下测定吸光度，绘制洗脱曲线，合并吸收峰的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得到小紫金牛多糖。以提取物干品重量计算含有小紫金牛多糖90～95％、总多酚1-3％。

实施例四：小紫金牛多糖的制备方法2

称取大孔吸附树脂(AB-8或D101)500g，加蒸馏水800mL，搅拌均匀，用水浮选法除去少量的树脂单体或碎片，然后在室温下放置24h，待树脂充分溶胀后，将树脂抽干，按说明书的要求处理树脂。将已处理的树脂，加蒸馏水800mL，搅拌均匀后，加到柱中，同时轻轻敲击柱壁，使树脂沉降均匀、紧密，然后用蒸馏水充分淋洗48h，放置过夜平衡柱子。

称取小紫金牛粗多糖干品30g，溶于70mL蒸馏水中，超声波脱气后，将样品加入上述处理和平衡过的大孔树脂柱中，同“实施例三”方法，用蒸馏水洗脱柱子，收集液用苯酚-硫酸法显色检测，合并显色的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得到小紫金牛多糖。以提取物干品重量计算含有小紫金牛多糖85～95％、总多酚1-3％。

实施例五：小紫金牛胶囊制备

称取85-90g实施例二所得的小紫金牛提取物，加药用淀粉15-10g，混合均匀，用适量水或95％乙醇制粒，过12目筛挤压制湿颗粒，在60℃下真空干燥，用20目筛整粒，同时加入1-5g微粉硅胶，混合均匀，颗粒填装入胶囊即可。口服胶囊，可预防及治疗乙肝病毒(HBV)和柯萨奇B3型病毒(CoxB3)引起的临床症状。

当然，也可按常规的制剂工艺制成如片剂、口服液等的其它口服剂型。

Claims (10)

1、一种具抗病毒作用的小紫金牛提取物，其特征在于：含有小紫金牛多糖。

2、根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：小紫金牛多糖的含量不少于20％，总多酚的含量为不大于30％。

3、根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：所述小紫金牛多糖为中性多糖，分子量为100～10KDa，该多糖中D-葡萄糖含量不少于50％；所述多酚为末食子酸及多羟基苯甲酸衍生物。

4、权利要求1、2或3所述小紫金牛提取物的提取方法，其特征在于：用紫金牛科紫金牛属的小紫金牛植物的干燥全株用水提取得到。

5、根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于：将阴干、切碎的小紫金牛用水煎煮二次，每次1～2个小时，过滤提取液，浓缩成浸膏，再干燥成褐色粉末，为小紫金牛水提物。

6、根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于：所述过滤后得到的提取液，减压浓缩，离心分离得上清液，用乙醇调至上清液乙醇浓度为60～80％，静置沉淀，干燥得粗多糖干品；以提取物干品重量计算，小紫金牛多糖含量为60～80％、总多酚含量为5～10％。

7、根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于：所得粗多糖干品溶于蒸馏水中，超声波脱气后，过离子交换柱或大孔树脂柱，用蒸馏水洗脱至洗脱液用苯酚-硫酸试剂不显色，洗脱液浓缩、干燥得小紫金牛多糖干品；以提取物干品重量计算含有小紫金牛多糖85～95％、总多酚1～3％。

8、权利要求1至3中任一项所述小紫金牛提取物用于制备治疗和预防乙肝病毒(HBV)和柯萨奇B3型病毒(CoxB3)引起的临床症状的药物、保健品或食品。

9、由权利要求6所述的提取方法制得的小紫金牛提取物用于制备治疗和预防乙肝病毒(HBV)和柯萨奇B3型病毒(CoxB3)引起的临床症状的药物、保健品或食品。

10、根据权利要求9所述的用途，其特征在于：以权利要求6所制得的小紫金牛提取物为活性成分加药学所允许的辅料，按常规的制剂工艺制成各种口服制剂。

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