CN100343266C - 一种胡黄连总苷提取物及其在制备肝病药物中的应用和制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胡黄连总苷提取物的制备及其肝病治疗用途，该提取物可由下述方法制得：1)提取：以胡黄连为原料，用水、低级醇或含水低级醇提取；2)过滤：提取后蒸去低级醇，过滤；3)除杂：滤液经树脂吸附并用水或含水低级醇淋洗除去杂质；4)洗脱：用含水低级醇洗脱吸附于树脂上的胡黄连总苷；5)干燥：洗脱液减压浓缩至干，经干燥粉碎得胡黄连总苷。所得到的胡黄连总苷提取物可在治疗和预防肝病中应用，可制成口服剂和注射剂等。本发明所提供的胡黄连总苷提取物，其制备工艺简单、含量高(总苷含量可达90%)、安全、易于操作、不需高温高压和特殊设备、成本低廉。
Description
技术领域
本发明涉及一种胡黄连总苷提取物及其在制备肝病药物中的应用和制备方法，属于中药现代化领域。
背景技术
仅在中国，因病原体、化学药物或过量饮酒等因素导致的肝病患者已逾千万，尤其是肝炎为严重威胁人类身体健康的主要疾患之一。肝炎是肝脏发生炎性病变的总称，在肝炎的临床治疗中，一般采用综合治疗法，即抗病毒药、免疫增强剂及保肝药物通常配合治疗，抗病毒药、免疫增强剂着重于清除体内的病毒，保肝药物着重于肝脏的恢复，在肝炎的治疗中，抗病毒药、免疫增强剂及保肝药都十分重要，在甲肝或毒物损伤性肝炎的治疗中尤其需要保肝药物，水飞蓟素(益肝宁)及其有效成分水飞蓟宾、女贞子及其有效成分齐墩果酸、垂盆草苷、山豆根及其肝炎灵注射液、葫芦素片、茵栀黄注射液、复方益肝宁等为常用保肝退黄中药。保肝药虽然品种繁多，但历经临床考验、作用确切的较少。临床治疗还没有特效药，患者仍然迫切需要疗效确切、安全经济的保肝药新药品种。从中草药中寻找新的肝保护药物仍是全世界科学工作者研究的热点之一。
胡黄连(Picrorhiza scrophulariiflora Pennell.)是一味常用中药，主产于我国西藏、云南等省(区)。而胡黄连的同属植物印度胡黄连(Picrorhiza kurrooa Royleex Benth.)在印度民间主要用于治疗肝炎和尿路感染，文献(Gupta，P.P..Picroliv.Drugs of the Future，200l，26(1)：25-31.)表明印度产胡黄连标准提取物“Picroliv”毒性低，无致突变性，对各种实验性肝损伤均有较理想的保护作用，美国专利US5145955公开其组成为含胡黄连苦苷I和kutcoside(环烯醚萜苷类)50-70％，胡黄连苦苷I与kutcoside间的比例为1∶1.5，另含有4-5％的葫芦素苷类(三萜皂苷类)的提取物，其制备工艺主要为混合溶剂萃取法及活性炭或硅胶脱色纯化等。
我国从二十世纪六十年代开始对胡黄连(Picrorhiza scrophulariifloraPennell.)开展药学和化学研究，发现胡黄连主要含有环烯醚萜苷类、酚苷类，有机芳香酸类等成分(吉文亮，张朝晖。中草药，1998，29(1)：54-56)。一些文献(吉文亮，张朝晖。中草药，1998，29(1)：54-56；Stupper，H.，Wagner，H..Planta Medica，1989，55：467-469)显示胡黄连苦苷II有相当强的保肝利胆活性，胡黄连苦苷I、6-异阿魏酰梓醇和6-阿魏酰梓醇等为代表的其它胡黄连环烯醚萜苷类化合物和草夹竹桃苷有中等或较弱的保肝活性。公开号为CN 1298705的中国专利公开了含中药胡黄连的环烯醚萜苷类化合物的药物制备方法及乙肝治疗用途，但该专利涉及的主要制备方法为氧化铝柱层析法和聚酰胺柱层析法。由于氧化铝具有一定的酸碱性和催化氧化作用，易引起化学性质非常活泼的环烯醚萜苷类有效成分的分解等结构变化，而且回收氧化铝较烦琐，使生产成本过高。而采用聚酰胺柱层析法，由于聚酰胺为己内酰胺的聚合物，对其使用还没有安全性的评价指标，其药用使用尚存疑问。公开号为CN 1380297的中国专利涉及胡黄连中环烯醚萜苷类化合物的富集方法，但该专利涉及的富集方法，胡黄连提取液上样后，未经洗脱除杂，这使得所得目标物中杂质含量较高。
发明内容
本发明目的在于提供一种胡黄连总苷提取物及其制备方法。
本发明的另一个目的在于提供这种胡黄连总苷提取物在制备肝病药物中的应用。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种胡黄连总苷提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)提取：以胡黄连为原料，用水、低级醇或含水低级醇提取；
2)过滤：用水提取后过滤或者提取后蒸去低级醇，过滤；
3)除杂：滤液经树脂吸附并用水或含水低级醇淋洗除去杂质；
4)洗脱：用含水低级醇洗脱吸附于树脂上的胡黄连总苷；
5)干燥：洗脱液减压浓缩至干，经干燥粉碎得胡黄连总苷。
所述提取用含水低级醇的碳数为C1-C5，例如：甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、异丁醇等；浓度为X，0＜X≤95％，优选0＜X≤30％。
所述树脂可为以苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯中任意一种或几种为骨架材料的极性或非极性树脂。例如D101、D201、AB-8、HP-20、XAD-4和XAD-16等。优选为苯乙烯型大孔吸附树脂。
所述除杂用的含水低级醇的碳数为C1-C5，例如：甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、异丁醇等；浓度为X，0＜X≤40％，优选0＜X≤20％。实验表明，在该洗脱浓度下，杂质能够得到去除而使胡黄连总苷得到富集。
所述洗脱用含水低级醇的碳数为C1-C5，例如：甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、异丁醇等；浓度为X，50≤X≤100％，优选50≤X≤80％。实验表明，在该洗脱浓度下，得到产品中的胡黄连总苷含量较高。
提取方法包括煎煮、回流、浸渍、渗漉等，最好为浸渍、渗漉。提取液蒸去低级醇后或直接吸附到树脂柱，为了保护树脂柱，最好过滤。
胡黄连总苷提取物的干燥方法为真空干燥、冷冻干燥、喷雾干燥等，最好为真空干燥或冷冻干燥。
一种胡黄连总苷提取物，该胡黄连提取物采用上述方法制备得到。
一种胡黄连总苷提取物的应用，将所述的胡黄连总苷提取物用于制备预防和治疗肝病的药剂。
一种胡黄连总苷提取物制剂，该制剂所述的胡黄连总苷提取物为主要活性成分，加入药剂学可接受的辅料，制成药剂学可接受的剂型。所述辅料选自淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠中的任意一种或几种。所述的药剂学可接受的剂型为口服剂或注射剂，为片剂、丸剂、胶囊、滴丸、水针、粉针或输液。
利用本发明得到的胡黄连总苷提取物制备所需药物的各种剂型时，可以按照药剂学领域的常规生产方法制备。如将该提取物与一种或多种载体混合，然后制成相应的剂型。
本发明所得到的胡黄连总苷提取物有良好的肝保护作用，可用于各种肝病(如肝炎，酒精性肝损伤等)的肝保护治疗。
本发明的优点是：本发明所提供的胡黄连总苷提取物，其制备工艺简单、含量高(总苷含量可达90％以上)、安全、易于操作、不需高温高压和特殊设备、成本低廉。
以下通过实施例详细说明本发明技术方案，并不以此限定本发明的实施范围。
具体实施方式
实施例1
5公斤粉碎的胡黄连药材，以15L水浸泡2小时，装入渗漉筒，以水渗漉，收集60L渗漉液，直接吸附于AB-8树脂，以水洗去杂质，再以50％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，喷雾干燥，得胡黄连总苷712g，总苷含量可达90％。
取胡黄连总苷300g，加淀粉400g，微晶纤维素100g，以50％乙醇制粒，压片，得片剂，每片为80mg。
实施例2
5公斤粉碎的胡黄连药材，装入回流提取罐，以50L30％乙醇回流提取2小时，过滤，残渣再以40L 30％乙醇回流提取2小时，过滤，合并两次提取液，浓缩蒸去乙醇，过滤，水残液吸附于HP-20树脂，以水洗去杂质，再以80％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，减压干燥，得胡黄连总苷785g，总苷含量可达90％。
实施例3
5公斤粉碎的胡黄连药材，以50L 20％乙醇浸渍12小时，过滤，残渣再以40L30％乙醇浸泡12小时，合并两次浸泡液，直接吸附于D101树脂，以30％乙醇洗去杂质，再以60％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，冷冻干燥，得胡黄连总苷613g，总苷含量可达90％。
实施例4
5公斤粉碎的胡黄连药材，装入回流提取罐，以40L60％乙醇回流提取2小时，过滤，残渣再以40L 70％乙醇回流提取2小时，过滤，合并两次提取液，浓缩蒸去乙醇，过滤，水残液吸附于XAD-4树脂，以40％乙醇洗去杂质，再以80％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，减压干燥，得胡黄连总苷675g，总苷含量可达90％。
实施例5
5公斤粉碎的胡黄连药材，以20L90％浸泡2小时，装入渗漉筒，以水渗漉，收集60L渗漉液，浓缩蒸去乙醇，过滤，水液吸附于D201树脂，以40％水洗去杂质，再以100％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，喷雾干燥，得胡黄连总苷312g，总苷含量可达90％。
实施例6
取实施例1下胡黄连总苷300g，加淀粉400g，微晶纤维素100g，以50％乙醇制粒，压片，供制成10000片。
实施例7
取实施例1下胡黄连总苷3g，以注射用水溶解，加1％活性炭去热原，过0.22μm微孔滤膜，分装于300支10ml西林瓶中，冷冻干燥，得注射用粉针剂。
规格：10mg/支
用量：1-2支/次，供静脉或肌注使用。
本发明质量稳定、剂量可控，无污染，便于操作、运输、储藏，适于大规模生产。
实施例8
1.昆明种小鼠150只，雌雄各半，体重20-25g，按体重随机分为15组：空白对照组，模型对照组，西利宾胺(相当于水飞蓟宾200.0mg/kg)，胡黄连总苷提取物0.125、0.375和1.250g原生药/kg三个剂量组。灌胃给药，容量为0.2ml/10g，空白组和模型组给予同等容量的0.5％的CMC，连续三天，每天两次，于第三天给药后1小时，除空白组外，各鼠均腹腔注射0.1％CCl4油溶液(0.1ml/10g体重)，空白组给予同等容量的注射用油，24小时后眼眶取血，取血前16小时禁食，3,000g×10min离心取血清，用临床诊断试剂盒测定SGOT和SGPT，结果用t检验进行统计学处理，见表1。
表1 胡黄连总苷提取物对CCl4所致小鼠急性肝损伤的影响
| 组别 | 剂量(g原生药/kg) | 动物数(只) | SGPT(u/L) | SGOT(u/L) |
| 空白 | - | 10 | 43.5±6.1** | 34.3±11.3** |
| 模型 | - | 10 | 306.3±14.8 | 152.5±30.9 |
| 西利宾胺 | 200mg水飞蓟宾/kg | 10 | 170.1±128.7** | 90.3±71.2** |
| 总苷 | 0.1250.3751.250 | 101010 | 79.1±29.3**54.9±7.5**53.3±6.8** | 48.1±16.7**47.8±14.6**43.6±10.0** |
注：(1)表中数据为X±S.D.。(2)与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。
结果表明，胡黄连总苷提取物0.125、0.375和1.250原生药g/kg能明显抑制小鼠腹腔注射CCl4引起的血清SGPT和SGOT的升高，且呈剂量依赖关系，表明胡黄连总苷对CCl4所致小鼠急性肝损伤有防治作用，其作用强度均大于阳性对照药西利宾胺。
2.昆明种小鼠20只，体重18-22g，雌雄各半，禁食16小时后一次灌胃给药最大体积(0.8ml/20g体重)最大浓度(0.25g/ml)胡黄连总苷提取物的溶液，剂量为10.0g/kg，观察给药后小鼠行为活动，中毒症状的情况，记录小鼠7日内体重增长情况(表2)。
表2 小鼠灌胃最大耐受量胡黄连总苷提取物后体重增长情况
| 性别 | 给药前体重(g) | 给药后体重(g)(X±SD) | ||||||
| 1天 | 2天 | 3天 | 4天 | 5天 | 6天 | 7天 | ||
| 雌雄 | 19.4±1.319.7±1.4 | 21.7±1.722.0±1.6 | 22.0±1.622.5±1.7 | 22.4±1.822.9±1.9 | 23.2±1.923.7±1.9 | 24.2±2.024.5±2.0 | 24.9±2.425.5±1.9 | 25.8±2.326.5±1.9 |
注：1.雌雄两组动物数均为10只
结果表明一次灌胃最大体积最大浓度胡黄连总苷溶液，剂量为10.0g/kg，给药后小鼠未见异常，7日内进食、饮水、体重增长速度均正常，最大耐受量为10.0g/kg，口服安全。
3.昆明种小鼠50只，体重18-22g，雌雄各半，静脉注射胡黄连总苷提取物生理盐水溶液，剂量为885.8、984.2、1093.5、1215.0和1350.0mg/kg，剂距为1∶0.9，给药体积0.2ml/20g体重，观察给药后小鼠中毒症状和死亡情况，对死亡小鼠进行肉眼尸检，对存活小鼠连续观察7天内进食、饮水、行为活动、体重增长情况。按Bliss法计算腹腔注射胡黄连总苷提取物的LD50值和95％可信限(表3)。
表3 小鼠静脉注射胡黄连总苷提取物的LD50
| 剂量(mg/kg) | 对数剂量(x) | 动物数(只) | 死亡数(只) | 死亡率％ | 机率单位(Y) | LD50(mg/kg) | 95％可信限(mg/kg) |
| 885.8984.21093.51215.01350.0 | 2.9472.9933.0393.0853.130 | 1010101010 | 12589 | 1020508090 | 3.7184.1585.0005.8426.282 | 1093.5 | 1028.1-1163.1 |
结果表明，一次静脉注射胡黄连总苷提取物，小鼠LD50值为1093.5mg/kg(95％可信限为1028.1-1163.1mg/kg)。
4.雄性wistar大鼠50只，体重200-250g，按给药前1小时胆汁分泌量区组随机分为五组：空白组、西利宾胺(相当于西利宾胺200mg/kg)、实施例胡黄连总苷提取物三个剂量组(10、30和100mg/kg)。大鼠禁食14小时，腹腔注射20％乌拉坦(1.2g/kg)麻醉，沿腹中线上剖开，暴露胃幽门部，追踪胆总管，在其近十二指肠端结扎，沿肝脏方向插管作胆汁引流。稳定30分钟后，接取1小时胆汁。然后十二指肠给药，容量为0.5ml/100g体重，空白组给予同等容量的生理盐水。继续接取给药后第1，2，3，4小时的胆汁，累计给药后各小时的胆汁总量，结果用t检验进行统计学处理。
结果表明，胡黄连总苷提取物30和100mg/kg能明显增加大鼠的胆汁分泌量，在给药1小时后即显效，30和100mg/kg剂量作用可维持4小时。胡黄连总苷提取物促进大鼠胆汁分泌作用强于西利宾胺(表4)
表4 胡黄连总苷提取物对大鼠胆汁分泌的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 给药前 | 给药后胆汁总量(ml) | |||
| 1h | 1h | 2h | 3h | 4h | ||
| 空白西利宾胺胡黄连总苷 | ---2001030100 | 0.51±0.150.51±0.150.52±0.180.57±0.190.52±0.11 | 0.42±0.120.51±0.120.50±0.120.60±0.19*0.58±0.13* | 0.81±0.260.99±0.221.00±0.221.16±0.36*1.15±0.24** | 1.17±0.391.47±0.351.47±0.331.65±0.52*1.69±0.31** | 1.49±0.531.91±0.461.92±0.432.09±0.64*2.16±0.39** |
注：(1)表中数据为X±SD(n＝10)。
(2)与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
5.按照0.1ml/100g给药体积，大鼠皮下注射50％四氯化碳油溶液，每周2次，连续8周，造成四氯化碳慢性肝损伤动物模型后，按体重随机分成6组，分别为空白对照组，模型组，水飞蓟宾阳性对照组(200mg/kg)及胡黄连总苷提取物三个剂量组(15、30、60mg/kg)，除空白对照组10只外，其他各组15只，每日口服灌胃一次，空白及模型组给予同等容量的蒸馏水，连续给药一个月后，以失血法处死动物，取血，分离血清，测定胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、SGPT和SGOT。另取大鼠肝右叶一块，10％福尔马林溶液固定，进行病理组织学检查。结果中计量资料以t检验进行统计学处理，计数资料以非参数方法进行统计学处理，见表5。
表5胡黄连总苷提取物对四氯化碳所致大鼠慢性肝损伤的作用
| 组别 | 剂量mg/kg | 动物数(只) | 胆固醇mmol/L | 甘油三酯mmol/L | 低密度脂蛋白mmol/L |
| 空白模型水飞蓟宾胡黄连总苷 | -200153060 | 101010101010 | 1.47±0.26**0.91±0.331.32±0.15**1.49±0.23**1.38±0.23**1.48±.22** | 0.61±0.13**0.39±0.100.59±0.11**0.54±0.12**0.47±0.06*0.55±0.09** | 1.59±0.26**0.77±0.261.58±0.19**1.65±0.28**1.68±0.27**1.82±0.31** |
(续表)
| 组别 | 剂量mg/kg | 动物数(只) | 高密度脂蛋白mmol/L | SGPT(U/L) | SGOT(U/L) |
| 空白模型水飞蓟宾胡黄连总苷 | -200153060 | 101010101010 | 1.40±0.230.29±0.101.16±0.13**1.37±0.27**1.29±0.35**1.33±0.19** | 9.42±3.19**118.88±31.021.26±4.06**23.11±7.17**22.41±4.75**21.35±6.25** | 67.15±9.18**193.23±25.5667.51±3.95**79.54±13.53**69.66±6.35**68.81±5.43** |
注1.表中数据为X±SD(n＝10)。
2.与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。
表6 胡黄连总苷提取物对四氯化碳所致大鼠慢性肝损伤的病理结果(计数资料)
| 组别 | 剂量mg/kg | 动物数(只) | 点状坏死(个/每肝切片) | 灶状坏死(个/每肝切片) | 肝细胞脂肪变性(级别) | 肝汇管区纤维化(级别) |
| 空白模型水飞蓟宾胡黄连总苷 | -200153060 | 101010101010 | 0.0±0.0**193.8±10.710.0±1.9**59.6±2.2**39.1±3.0**8.5±1.4** | 0.0±0.0**39.6±2.05.0±0.7**10.1±1.7**7.9±1.3**4.2±0.4** | 0.0±0.0**2.8±0.40.8±0.4*1.0±0.5*1.3±0.5*0.5±0.5** | 0.0±0.0**2.8±0.41.7±0.5*2.7±0.52.5±0.51.7±0.5* |
注1.表中数据为X±SD(n＝10)。
2.与模型组相比，*P＜0.05；**P＜0.01。
结果表明，本发明提供的胡黄连总苷提取物具有良好保肝、利胆和退黄的作用，安全有效，作用剂量小。
Claims (14)
1、一种胡黄连总苷提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)提取：以胡黄连为原料，用水、C1-C5低级醇或含水C1-C5低级醇提取；
2)过滤：用水提取后过滤；或者用C1-C5低级醇或含水C1-C5低级醇提取后蒸去C1-C5低级醇，过滤；
3)除杂：滤液经树脂吸附并用水或含水C1-C5低级醇淋洗除去杂质；
4)洗脱：用含水C1-C5低级醇洗脱吸附于树脂上的胡黄连总苷；
5)干燥：洗脱液减压浓缩至干，经干燥粉碎得胡黄连总苷。
2、根据权利要求1所述的胡黄连总苷提取物的制备方法，其特征在于：所述提取用含水C1-C5低级醇的浓度为X，0＜X≤95％。
3、根据权利要求2所述的胡黄连总苷提取物的制备方法，其特征在于：所述提取用含水C1-C5低级醇的浓度为X，0＜X≤30％。
4、根据权利要求1所述的胡黄连总苷提取物的制备方法，其特征在于：所述树脂可为以苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯中任意一种或几种为骨架材料的极性或非极性树脂。
5、根据权利要求1所述的胡黄连总苷提取物的制备方法，其特征在于：所述除杂用的含水C1-C5低级醇的浓度为X，0＜X≤40％。
6、根据权利要求5所述的胡黄连总苷提取物的制备方法，其特征在于：所述含水C1-C5低级醇浓度为X，0＜X≤20％。
7、根据权利要求1所述的胡黄连总苷提取物的制备方法，其特征在于：所述洗脱用含水C1-C5低级醇的浓度为X，50≤X≤100％。
8、根据权利要求7所述的胡黄连总苷提取物的制备方法，其特征在于：所述洗脱用含水C1-C5低级醇浓度为X，50≤X≤80％。
9、一种胡黄连总苷提取物，其特征在于：该胡黄连提取物采用权利要求1至8中任何一项所述的方法制备得到。
10、一种胡黄连总苷提取物制剂，其特征在于该制剂以权利要求9所述的胡黄连总苷提取物为主要活性成分，加入药剂学可接受的辅料，制成药剂学可接受的剂型。
11、根据权利要求10所述的胡黄连总苷提取物制剂，其特征在于：所述辅料选自淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠中的任意一种或几种。
12、根据权利要求10所述的胡黄连总苷提取物制剂，其特征在于：所述的药剂学可接受的剂型为口服剂或注射剂。
13、根据权利要求12所述的胡黄连总苷提取物制剂，其特征在于：所述口服剂或注射剂，为片剂、丸剂、胶囊、滴丸、水针、粉针或输液。
14、一种胡黄连总苷提取物的应用，其特征在于：将权利要求9所述的胡黄连总苷提取物用于制备预防和治疗肝病的药剂。
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|---|---|---|---|
| CNB031563899A CN100343266C (zh) | 2003-09-05 | 2003-09-05 | 一种胡黄连总苷提取物及其在制备肝病药物中的应用和制备方法 |
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