CN1931228A - 金钱草总黄酮提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药技术领域,公开了一种金钱草总黄酮提取物及其制备方法,发明中金钱草按照乙醇回流提取,离心,上大孔树脂,洗脱等步骤操作,所得金钱草有效部位提取物总黄酮含量达30-80%,并对提取物中黄酮类化合物进行了指纹图谱分析,确立了32个共有峰。药理学实验表明,本发明的金钱草有效部位提取物可以用于利胆、排石、利尿、抗炎、镇痛等作用,可作为治疗结石药物的活性成分,制成各种医学上可接受的药物制剂。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术领域。涉及金钱草的有效部位提取物-金钱草总黄酮提取物及其制备方法。
背景技术
近年来胆结石和泌尿系结石的发病率有所上升高达10%,严重影响着人类的健康。目前国际上治疗该病的药物有混合胆汁酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、薄荷醇、薄荷酮等环状单萜合剂等,研究表明,胆酸在肠道细菌作用下造成的肝胆酸有肝毒性,长期服用有潜在形成动脉粥样硬化的脂质代谢变化。目前溶石药物治疗尚不理想,原因有:口服溶石疗程长,费用高,疗效不佳,患者在治疗过程中出现各种中毒反应,且复发率较高。随着中药现代化的快速发展,尤其在进入WTO后,中药有效成分的研究发展得到了国内外的高度重视,对于有效成分明确、质量可控及安全高效的中药有效部位或单体在研制胆结石和泌尿结石的治疗药物方面,具有诱人的市场前景和开发价值。
金钱草为我国药典收载品种,其药材来源为报春花科植物过路黄(Lysimachia christinae Hance)的干燥全草。夏秋两季采收,除去杂质,晒干。具有清热退黄、利胆排石、利尿解毒等功效,主治湿热黄疸、胆道及尿道结石以及跌打损伤、疗疮肿毒等症。尤其是对胆道结石疗效颇著,被誉为治结石之要药。近年来对川金钱草进行了研究,尤其是对其药效成分黄酮类物质进行研究,现已从其中分离鉴定了十余种黄酮类成分,其苷元主要为山柰素和槲皮素。由于中药的传统用药习惯,一般金钱草作为药物使用时都采用水煎,其缺点是有效部位含量低,疗效差,又由于受到制备技术的限制,目前还没有提取自金钱草的总黄酮含量较高的产品问世,也未见其报道。
发明内容
本发明公开了一种利用现代分离技术得到的新的金钱草有效部位提取物—金钱草总黄酮提取物,并提供了其制备方法。其总黄酮含量高达30-80%,药理活性好。药理实验证明,其安全性好,可以有效地用于利胆、利尿、抗炎、镇痛等用途。
本发明的具体技术方案如下:
本发明的金钱草总黄酮提取物,由以下方法制备得到:取金钱草药材,用20-70%浓度的乙醇液回流提取,提取液浓缩,过滤或离心,滤液或上清液上大孔树脂,依次用水、10%乙醇、70%乙醇洗脱至流出液无色,收集10-70%乙醇洗脱液,减压蒸干,即得金钱草总黄酮。
上述的金钱草总黄酮提取物制备方法中,其中大孔树脂为101型、HPD100型、HPD200型或AB-8型大孔树脂。更优选的大孔树脂为101型或AB-8型大孔树脂。
上述的金钱草总黄酮提取物,其中用于洗脱大孔树脂的洗脱液依次为水、10%乙醇、70%乙醇,收集70%乙醇洗脱液。
按如上方法制备的金钱草总黄酮提取物,其总黄酮的含量高达30-80%。
本发明金钱草总黄酮中含有的黄酮类化合物主要有槲皮素,槲皮素3-O-葡萄糖苷,山柰素,山柰素3-O-半乳糖苷,山柰素3-O-三糖苷,山柰素3-葡萄糖苷,山柰素3-芸香糖苷,山柰素3-O-鼠李糖基(1→6)葡萄糖苷,山柰素3-鼠李糖苷-7-鼠李糖基(1→3)鼠李糖苷,山柰素3-O-α-L-鼠李糖(1→2)-β-D-木糖苷,山柰素3-O-(2,6-二鼠李糖吡喃葡萄糖苷),3,2′,4′,6′-四羟基-4,3′-二甲氧基查耳酮,杨梅苷,黄芪苷,新西兰牡荆苷,鼠李柠檬素3′,4-二葡萄糖苷等。
本发明对金钱草总黄酮中含有的黄酮类化合物的指纹图谱进行研究。流动相:乙腈(A)、0.2%磷酸水溶液(B),二元梯度分离;流速:0.8mL·min-1;检测波长:330nm;柱温:20℃;进样量:20μL。记录135min色谱图,比较10批药材色谱图,确立32个共有峰。用相对保留时间标定了HPLC指纹图谱中的共有峰。12号峰为芦丁,13号峰为山柰素3-O-α-L-鼠李糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷,18号峰山柰素3-O-α-L-鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷,25号峰为槲皮素,29号峰为山柰素(见附图1)。
本发明的金钱草总黄酮提取物可以作为药物活性成分制备成各种临床用药物制剂,其中含有治疗有效量的金钱草总黄酮提取物及药学上可接受的载体。还可以作为活性部位与其它中药提取物/有效部位或相关化学合成药物与药学上可以接受的赋型剂或辅料一起用于制备药物组合物。
建议临床患者使用金钱草总黄酮的剂量为0.8-3g/天,具体可遵医嘱。
上述两种药物组合物均可采用制剂学的常规方法制备成各种剂型,如胶囊、片剂、丸剂、口服液、颗粒剂、酊剂、缓释剂等胃肠道给药剂型及注射剂、外用制剂等胃肠外给药剂型。
药理学实验表明,本发明金钱草总黄酮提取物具有利胆、利尿、抗炎、镇痛等作用。本发明金钱草总黄酮经口服给药,能增加正常大鼠的胆汁流量,能增加正常大鼠的尿量,对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有抑制作用,对醋酸所致小鼠扭体反应有显著的抑制作用。因此,可以用金钱草总黄酮提取物作为活性部位和成分制备各种医学上可接受的剂型,用于治疗胆结石和泌尿系结石。
附图说明:
图1为金钱草黄酮类化合物的指纹图谱。
具体实施方式
实施例1
金钱草总黄酮的制备
取金钱草药材10公斤,用10倍量50%浓度的乙醇液回流提取3次,提取液合并,减压浓缩至无醇味,离心,上清液上D101大孔树脂柱吸附后,依次用80L水、60L 10%乙醇、80L 70%乙醇洗脱至流出液无色,收集70%乙醇洗脱液,减压蒸干,即得金钱草总黄酮提取物230克,含量65%。
实施例2
金钱草总黄酮的利胆、利尿、抗炎、镇痛作用
一.试验材料
1.1药物与试剂
药物为用实施例1方法制备的金钱草总黄酮。
剂量折算:
金钱草药材人用量:15~60g生药/日/人,0.25~1.0g生药/kg。
大鼠剂量:1g/kg(人)×6倍=1.5g生药/kg。故受试药相当于6g生药/kg的浸膏粉138mg浸膏粉/kg作为低剂量;相当于12g生药/kg的浸膏粉276mg浸膏粉/kg作为高剂量。
小鼠剂量:0.5g/kg(人)×9倍=4.5g生药/kg。故受试药相当于2.0g生药/kg的浸膏粉46mg浸膏粉/kg作为低剂量;相当于4.0g生药/kg的
浸膏粉92mg浸膏粉/kg作为高剂量。
利胆排石胶囊(LP,西安兆兴制药有限公司,批号:041109)。人用量7g/日/人,0.1g/kg;大鼠剂量:0.1g/kg×6倍=0.6g/kg,小鼠剂量:0.1g/kg×9倍=0.9g/kg
1.2受试动物
Wistar大白鼠,体质量(220±20)g,雄性;昆明种小白鼠,体质量(20±2)g,由沈阳药科大学实验动物室提供,合格证号:SCXK(辽)2003-008。
二.试验方法与结果
2.1利胆试验:
取雄性大鼠40只,随机分为4组,实验前动物禁食不禁水12h,实验时各鼠以20%乌拉坦1g/kg ip.麻醉,背部固定于固定板上,沿腹正中线切开约2cm,打开腹腔,找到胃幽门部,翻转十二指肠,在十二指肠降部肠系膜中找到白色有韧性的胆管,分离后在其下穿线,结扎乳头部,做一小切口,插入塑料管,开始收集胆汁。待稳定15min后,先收集30min胆汁,然后各组分别由十二指肠给予利胆排石胶囊1g/kg、低剂量组3g/kg、高剂量组6g/kg及等容积的0.5%CMC-Na溶液。给药后以30min为一时限纪录胆汁流量,观察120min(见表1),计算胆汁流量增加率(给药后每30min胆汁分泌量/给药前30min胆汁分泌量×100%)。
表1金钱草总黄酮提取物对大鼠胆汁分泌量的影响(
x±s)
组别 | 剂量(mg浸膏粉/kg) | n | 胆汁流量增加率(%) | |||
30min | 60min | 90min | 120min | |||
空白对照利胆排石胶囊高剂量组低剂量组 | -600276138 | 10101010 | 99.6±12.1103.2±6.0114.6±14.6*103.3±11.7 | 93.4±4.95102.0±9.23*101.5±10.4*105.6±14.6* | 94.1±9.44104.9±13.399.6±13.1100.3±12.7 | 88.5±15.4103.1±15.9101.2±16.2102.8±19.2 |
*P<0.05与空白对照组比较
可见受试药物高、低剂量及利胆排石胶囊组可使胆汁的分泌量增加,高剂量组在给药60min内均有促进胆汁分泌的作用(P<0.05)。低剂量组在给药60min时促进胆汁分泌效果较好(P<0.05)。
2.2利尿试验
选择2h内收集的尿量达灌入水量的40%以上的雄性大鼠。将大鼠40只随机分为4组,动物禁食不禁水18h后,各组动物水负荷0.9%生理盐水0.025mL/g,然后各组分别给予利胆排石胶囊1g/kg、低剂量组3g/kg、高剂量组6g/kg及等容积的0.5%CMC-Na溶液。给药后压迫大鼠下腹部使其排尽余尿,置代谢笼内收集给药后不同时间的尿液(见表2)。
表2金钱草总黄酮提取物对大鼠尿量的影响(
x±s)
组别 | 剂量(mg浸膏粉/kg) | n | 尿液量(mL) | ||||||
0-1h | 1-2h | 2-3h | 3-4h | 4-5h | 5-6h | 1-6h | |||
空白对照利胆排石胶囊高剂量组低剂量组 | -600276138 | 10999 | 1.03±0.791.94±0.71*2.02±0.50**1.41±1.02 | 1.87±0.711.97±0.612.55±0.82*1.98±0.98 | 0.95±0.650.67±0.540.51±0.570.79±0.96 | 0.80±0.600.49±0.560.60±0.900.32±0.41 | 0.40±0.450.19±0.390.24±0.280.22±0.28 | 0.50±0.450.96±0.850.19±0.290.42±1.06 | 5.55±1.346.22±2.106.32±0.965.09±0.92 |
*P<0.05,**P<0.01与空白对照组比较
可见受试药物高剂量组在给药后2h内均能增加尿量(P<0.05),其中前1h能明显增加尿量(P<0.01)。利胆排石胶囊组在给药后1h内能增加尿量(P<0.05)。
2.3抗炎试验
取雄性小鼠40只,随机分为4组,分别给予利胆排石胶囊1.5g/kg、低剂量组1g/kg、高剂量组2g/kg及等容积的0.5%CMC-Na溶液,给药体积为0.2mL/10g。每日上午10时给药,1日1次,连续4d。在末次给药1h后,于小鼠左耳耳廓涂二甲苯30μL致炎,1h后拉颈椎处死,剪下双耳,用直径为7mm的不锈钢打孔器冲下左右耳同一部位的圆片称重,以两耳片重量之差作为衡量肿胀程度的指标,并计算各组肿胀抑制率[(对照组平均肿胀值-用药组平均肿胀值)/对照组平均肿胀值×100%](见表3)。
表3金钱草总黄酮提取物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响(
x±s)
组别 | 剂量(mg浸膏粉/kg) | n | 耳片重量差(mg) | 肿胀抑制率(%) |
空白对照利胆排石胶囊高剂量组低剂量组 | -9009246 | 10889 | 13.66±3.478.71±2.49**10.12±0.83*8.30±2.36** | -36.2339.2325.91 |
*P<0.05,**P<0.01与空白对照组比较
可见受试药物低剂量及利胆排石胶囊组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀均有显著抑制作用(P<0.01),而受试药物高剂量组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有抑制作用(P<0.05)。
2.4镇痛作用
取雄性小鼠40只,随机分为4组,分别给予利胆排石胶囊1.5g/kg、低剂量组1g/kg、高剂量组2g/kg及等容积的0.5%CMC-Na溶液,给药体积为0.2mL/10g。每日上午10时给药,1日1次,连续4d。在末次给药1h后,ip.0.6%HAC 0.2mL/只,观察并记录15min内小鼠的扭体次数,并计算各组镇痛率[(对照组平均扭体次数-给药组平均扭体次数)/对照组平均扭体次数×100%](见表4)。
表4金钱草总黄酮提取物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(
x±s)
组别 | 剂量(mg浸膏粉/kg) | n | 扭体次数 | 镇痛率(%) |
空白对照利胆排石胶囊高剂量组低剂量组 | -9009246 | 10889 | 43.4±5.532.0±6.4***36.2±4.3**32.7±5.8*** | -26.316.624.6 |
**P<0.01,***P<0.001与空白对照组比较
可见受试药物低剂量组和利胆排石胶囊组对醋酸所致小鼠扭体反应有非常显著抑制作用(P<0.001),受试药物高剂量组对醋酸所致小鼠扭体反应有显著抑制作用(P<0.01)。
三.试验结论
受试药物高、低剂量及利胆排石胶囊组可使胆汁的分泌量增加,高剂量组在给药60min内均有促进胆汁分泌的作用(P<0.05)。低剂量组在给药60min时促进胆汁分泌效果较好(P<0.05);受试药物高剂量组在给药后2h内均能增加尿量(P<0.05),其中前1h能明显增加尿量(P<0.01)。利胆排石胶囊组在给药后1h内能增加尿量(P<0.05);受试药物低剂量及利胆排石胶囊组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀均有显著抑制作用(P<0.01),而受试药物高剂量组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有抑制作用(P<0.05);受试药物低剂量组和利胆排石胶囊组对醋酸所致小鼠扭体反应有非常显著抑制作用(P<0.001),受试药物高剂量组对醋酸所致小鼠扭体反应有显著抑制作用(P<0.01)。
结果表明金钱草总黄酮提取物具利胆、利尿、抗炎、镇痛等作用,可用于治疗胆结石和泌尿系结石。
实施例3
金钱草总黄酮片剂
取实施例1方法制备的金钱草总黄酮100mg与淀粉100mg,糊精100mg混合,用适量30%乙醇作湿润剂,制成软材,常规方法制粒,加入适量硬脂酸镁混合,制成片剂。
实施例4
金钱草总黄酮缓释胶囊
取实施例1方法制备的金钱草总黄酮100mg与卡波姆934p30mg,羟丙基甲基纤维素K15M90mg微晶纤维素100mg,磷酸钙70mg混合,用10%聚乙烯吡咯烷酮k30乙醇溶液适量,制成软材,常规方法制粒,装入硬胶囊中,制成缓释胶囊。
Claims (6)
1.一种金钱草总黄酮提取物,其特征在于由以下方法制备得到:取金钱草药材,用20-70%浓度的乙醇液回流提取,提取液浓缩,过滤或离心,滤液或上清液上大孔树脂,依次依次用水、10%乙醇、70%乙醇洗脱,收集10-70%乙醇洗脱液,减压蒸干,即得总黄酮含量为30-80%的金钱草总黄酮提取物。
2.根据权利要求1所述的金钱草总黄酮提取物的制备方法,其特征在于:大孔树脂选自101型、HPD100型、HPD200型或AB-8型大孔树脂。
3.根据权利要求1所述的金钱草总黄酮提取物的制备方法,其特征在于:用于洗脱大孔树脂的洗脱液依次为水、10%乙醇、70%乙醇,收集70%乙醇洗脱液。
4.一种药物组合物,其特征在于:含有治疗有效量的权利要求1所述的金钱草总黄酮提取物与药学上可接受的载体。
5.根据权利要求4所述的药物组合物,其特征在于:所述的金钱草总黄酮还可以作为活性部位与其它中药提取物/有效部位或相关化学合成药物与药学上可以接受的赋型剂或辅料混合。
6.金钱草总黄酮提取物的用途,其特征在于:金钱草总黄酮提取物用于制备利胆、利尿、抗炎、镇痛药物。
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