CN1711074B - 脂质体 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了与聚亚烷基二醇和白蛋白结合的在血液中具有良好滞留性的脂质体。
Description
技术领域
本发明涉及在血液中具有优良滞留性的脂质体。
背景技术
脂质体是一种包含脂质双层膜的脂质囊泡并且主要作为各种注射药物的载体进行了研究。近来,也积极研究了其在基因治疗中作为基因载体的应用。作为抗真菌药物的两性霉素B、作为抗癌剂的阿霉素和道诺红菌素以及作为造影剂的铟已经作为脂质体制剂投放市场(TroyO.Harasym,Marcel B.Bally,Paul Tardi,″参与结合蛋白靶向的脂质体的清除性能″,Advanced Drug Delivery Reviews,1998,vol.32,p.99-118)。
尽管脂质体由生物相容性脂质组成,但是已知它从血液中迅速消失,因为在它静脉内给药后被免疫系统识别为异物。因此,给药后该药物不能长效作用是它的最大缺点。为了解决这种缺点,已经报道了在脂质体的表面化学修饰糖蛋白或糖脂的方法,将葡萄糖醛酸衍生物与其结合的方法等,但是其中均未实际用于药物制剂。
同时,自从1990年,已经普遍公知的技术方法是通过用亲水聚乙二醇化学修饰脂质体表面来避免免疫系统的识别并且通过提高脂质体在血液中的滞留性维持药物的作用。这种技术方法也应用于上述市售的脂质体制剂中。此外,也广泛研究了这种方法应用于抗癌药物,诸如顺氯氨铂、长春花新碱和喜树碱(Naoto Oku,Yoshihiro Tokudome,Tomohiro Asai and Hideo Tsukada,“参与结合蛋白靶向的脂质体的清除性能”,Current Pharmaceutical Design,2000,vol.6,p.1669-1691)。
此外,脂质体表面修饰已经被积极用于癌细胞或肝细胞的药物靶向研究中,并且已经报道了通过结合抗体(Troy O.Harasym,MarcelB.Bally,Paul Tardi,“参与结合蛋白靶向的脂质体的清除性能”,Advanced Drug Delivery Reviews,1998,vol.32,p.99-118)或转铁蛋白而识别癌细胞的方法,通过结合各种糖链而掺入肝细胞的方法,等。在这样的化学修饰中,已经报道了利用白蛋白作为间隔物(Shuji Kojima,Yusuke Sogawa,Yoshika Tajiri和Noboru Yamaki,“用唾液酸修饰的结合糖蛋白的脂质体掺入网状内皮系统的抑制和促进研究”,DrugDelivery System,2002,vol.17-1,p.63-68)。
发明内容
本发明的目的是提供在血液中滞留性显著提高的脂质体。
为了达到上述目的,本发明人进行了深入研究并发现,当聚乙二醇(以下可以缩写为PEG)和白蛋白同时与脂质体结合时,脂质体在血液中的滞留性协同提高。还发现,甚至PEG以修饰量与白蛋白一起进行修饰时观察到明显的效果,只以所述修饰量的PEG进行修饰时对于在血液中的滞留性几乎没有影响。顺便提及,尚未有PEG和白蛋白与脂质体表面结合的报道。
因此,本发明涉及以下条款。
(1)结合聚亚烷基二醇和白蛋白的脂质体。
(2)根据上述(1)的脂质体,其中进一步含有生理活性成分。
(3)根据上述(2)的脂质体,其中生理活性成分是药物活性成分。
(4)根据上述(3)的脂质体,其中药物活性成分是抗肿瘤剂。
(5)含有上述(2)至(4)任一项提及的脂质体的药物组合物。
(6)根据上述(5)的药物组合物,其是注射剂。
(7)治疗癌症的方法,包括施用包含结合了聚亚烷基二醇和白蛋白并且其中含有抗肿瘤剂的脂质体的药物组合物。
(8)结合了聚亚烷基二醇和白蛋白并且其中含有生理活性成分的脂质体在延长该生理活性成分体内滞留时间中的应用。
(9)上述(1)中所述的脂质体的制备方法,其特征在于,具有下式(1)代表的化合物作为脂质成分的脂质体与白蛋白结合
(其中R是来自具有2至35个碳原子的脂肪酸的酰基);
具有下式(2)代表的化合物作为脂质成分的脂质体与下式(3)代表的化合物结合
(其中R与上面定义的相同)
(Alb-NH)-CO-CH2-CH2-SH (3)
(其中Alb-NH是从Alb-NH2代表的白蛋白分子除去氨基的一个氢原子形成的基团);
具有下式(4)代表的化合物作为脂质成分的脂质体与下式(5)代表的化合物结合
(其中n是5至100,000的整数,R与上面定义的相同)(Alb-NH)-CO-CH2-SH (5)
(其中Alb-NH与上面定义的意思相同);
由下式(6)代表的化合物插入脂质体
(其中n、R和Alb-NH每个与上面定义的相同);
具有上式(1)代表的化合物作为脂质成分的脂质体与下式(7)代表的化合物结合
(其中-NH-Alb-NH2是从H2N-Alb-NH2代表的白蛋白分子的一个氨基除去一个氢原子形成的基团,并且n与上面定义的相同);或
具有上式(2)代表的化合物作为脂质成分的脂质体与下式(8)代表的化合物结合
(其中-NH-Alb-NH是从式H2N-Alb-NH2代表的白蛋白分子的两个氨基各除去一个氢原子形成的基团,并且n与上面定义的相同)。
上述化合物(1)、(2)、(4)和(6)中的R是来自具有2至35个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸的酰基。上述脂肪酸更优选具有6至18个碳原子,并且最优选具有8至16个碳原子。这种脂肪酸的具体实例是八烷酸(优选辛酸)、十烷酸(优选癸酸)、十二烷酸(优选月桂酸)、十六烷酸(优选棕榈酸)、十八烷酸(优选硬脂酸)和单烯酸或其多烯脂肪酸(优选油酸)。这种来自脂肪酸的酰基的具体实例是八烷酰基(优选辛酰基)、十烷酰基(优选癸酰基)、十二烷酰基(优选月桂酰基)、十六烷酰基(优选棕榈酰基)和十八烷酰基(优选硬脂酰基)并且其中可能有一个或多个双键(诸如油酰基)。
附图说明
图1是显示测试实施例中测定的随时间推移脂质体在血液中浓度改变的图。
图2是显示了根据实施例1的方法1制备脂质体的方法的示意图。(a)是PEG修饰的含有NGPE的脂质体的示意图。图中的R′代表油酰基。脂质体中仅一个这样的NGPE用化学式显示。在实施例1的方法1的步骤(2)中,WSC与NGPE的箭头所示羧基结合,由此获得示意图(b)所示的脂质体。在(b)中,尽管NGPE与WSC结合的键中仅一个键用化学式详细显示,但是其它键也是一样。在那之后,人血清白蛋白(rHSA)的氨基与箭头所示的羰氧(cabonyloxy)基结合,由此制备了示意图(c)所示的脂质体。在(c)中,尽管NGPE与rHSA结合的键中仅一个键用化学式详细显示,但是其它键也是一样。此外,尽管DSPE与PEG结合的键中仅一个键用化学式详细显示,但是其它键也是一样。顺便提及,R代表硬脂酰基。
图3是显示根据实施例1的方法2制备脂质体的方法示意图。在实施例1的方法2的步骤(1)中,DOPE和SPDP结合制备DTP-DOPE,并且在步骤(2)中,用这种DTP-DOPE和结合PEG的DSPE作为脂质成分制备示意图(a)所示的脂质体。图中的R′代表油酰基。脂质体中仅一个这样的DTP-DOPE用化学式显示。当步骤(3)制备的硫醇化人血清白蛋白(rHSA)(图中的(b))的巯基与所述脂质体中DTP-DOPE的二硫基反应时,制备了示意图(c)所示的目标脂质体。在(c)中,尽管DTP-DOPE与rHSA结合的键中仅一个键用化学式详细显示,但是其它键也是一样。此外,尽管DSPE与PEG结合的键中仅一个键用化学式详细显示,但是其它键也是一样。顺便提及,图中的R代表硬脂酰基。
图4是显示根据实施例2的方法1制备脂质体的方法示意图。(a)是根据实施例2的方法1(2)制备的硫醇化rHSA的示意图。(b)是根据实施例2的方法1(1)制备的马来酰亚胺-PEG-修饰的脂质体的示意图。在(b)中,脂质体中仅一个马来酰亚胺-PEG-DSPE用化学式显示。当示意图(a)所示的硫醇化rHSA与示意图(b)所示的脂质体反应时,获得示意图(c)所示的目标脂质体。这里,尽管通过马来酰亚胺基将PEG与rHSA结合的键中仅一个键用化学式详细显示,但是其它键也是一样。顺便提及,图中的R代表硬脂酰基。
图5是显示了根据实施例2的方法2制备脂质体的方法示意图。(a)显示了马来酰亚胺-PEG-修饰的DSPE的化学式。(b)是根据实施例2的方法2(2)的步骤制备的硫醇化rHSA的示意图。当示意图(b)所示的硫醇化rHSA与示意图(a)所示的脂质反应时,可以制备示意图(c)所示的rHSA-PEG-DSPE复合体。当这种rHSA-PEG-DSPE复合体插入前面制备的脂质体时,可以获得示意图(d)所示的目标脂质体。这里,尽管通过马来酰亚胺基将PEG与rHSA结合的键和上述PEG与脂质体结合的键中仅一个键用化学式详细显示,但是其它键也是一样。顺便提及,图中的R代表硬脂酰基。
图6是显示根据实施例3的方法1制备脂质体的方法示意图。(a)是PEG修饰的含有NGPE的脂质体的示意图。图中的R′显示油酰基。这种脂质体中仅一个NGPEs用化学式显示。在实施例3方法1的步骤(4)中,WSC与NGPE的箭头所示羧基结合,由此可以制备示意图(b)所示的脂质体。在(b)中,尽管NGPE与WSC结合的键中仅一个键用化学式详细显示,但是其它键也是一样。(c)是根据实施例3的方法1(2)制备的硫醇化rHSA的示意图。当示意图(c)所示硫醇化rHSA与示意图(d)所示的马来酰亚胺-PEG-修饰的DSPE反应时,可以制备示意图(c)所示的通过马来酰亚胺基结合聚乙二醇的白蛋白。当示意图(b)所示的脂质体与示意图(e)所示的白蛋白反应时,可以获得示意图(f)所示的目标脂质体,其中rHSA中的氨基与箭头所示的羰氧(cabonyloxy)基结合。这里,尽管通过马来酰亚胺基与PEGrHSA结合的键和上述rHSA与脂质体结合的键中仅一个键用化学式详细显示,但是其它键也是一样。
图7是显示根据实施例3的方法2制备脂质体的方法。在实施例3的方法2的步骤(1)中,DOPE和SPDP结合制备DTP-DOPE,并且在步骤(2)中,用这种DTP-DOPE作为脂质成分制备示意图(a)所示的脂质体。图中的R′显示油酰基。(b)是根据实施例3的方法1,步骤(3)中制备的硫醇化rHSA的示意图。当示意图(b)所示硫醇化rHSA与示意图(c)所示的马来酰亚胺-PEG-修饰的DSPE反应时,可以制备示意图(d)所示的通过马来酰亚胺基结合聚乙二醇的白蛋白。在步骤(5)中,当上述白蛋白的氨基转变为巯基时,可以制备示意图(e)所示的白蛋白。当示意图(a)所示的脂质体与示意图(e)所示的白蛋白反应时,可以获得示意图(f)所示的目标脂质体,其中巯基与箭头表示的二硫基结合。
本发明的最佳实施方式
“脂质体”通常是指由以膜形式装配的脂质和内部水相组成的脂质体,并且内部水相(参照D.D.Lasic“脂质体:从基础到应用”,ElsevierScience Publishers,pp.1-171(1933))和在本发明中指整个微泡,其中脂质的聚集无论是否含有内部水相。对本发明脂质体的结构也没有特殊的限制,它可以是多层脂质体或单层脂质体。
尽管对本发明脂质体的尺寸没有特殊限制,但是它的囊泡平均体积是大约10至5,000nm或,优选大约50至500nm。脂质体的囊泡平均体积可以根据动力学光散射法的原理进行确定。(参照D.D.Lasic的“脂质体:从基础到应用”,Elsevier Science Publishers,pp.1-171(1933))。
对于构成本发明脂质体的脂质也没有特殊限制,它可以是任一种已知脂质。这样的脂质实例是磷脂、糖脂、脂肪酸、二烷基二甲基铵两性分子、聚甘油烷基醚、聚氧乙烯烷基醚等。(Liposome Technology,第2版,vol.1,141,1993)、烷基糖苷、烷基甲基葡萄糖胺(alkylmethylglucamides)、烷基蔗糖酯、二烷基聚氧乙烯醚、二烷基聚甘油醚等(Liposome Technology,第2版,vol.1,141,1993)、两性分子嵌段共聚物等,诸如聚氧化乙烯-聚乳酸(日本专利公开号06/508,831)、长链烷基胺(十四烷胺、十六烷胺、十八烷胺等)或长链脂肪酸酰肼(肉豆蔻酸酰肼、棕榈酸酰肼或硬脂酸酰肼等)等。
上述磷脂的实例是天然或合成的磷脂,诸如卵磷脂(大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二月桂酰卵磷脂、二肉豆蔻酰卵磷脂、二棕榈酰卵磷脂或二硬脂酰卵磷脂等等)、磷脂酰乙醇胺(二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺等)、磷脂酰丝氨酸(二月桂酰磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸或二硬脂酰磷脂酰丝氨酸等等)、磷脂酸、磷脂酰甘油(二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油或二硬脂酰磷脂酰甘油等)、磷脂酰肌醇(二月桂酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇或二硬脂酰磷脂酰肌醇等)、溶血卵磷脂、鞘磷脂、蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂或氢化磷脂等。
上述糖脂的实例是甘油糖脂、鞘糖脂和甾醇等。上述甘油糖脂的实例是双半乳糖甘油二酯(双半乳糖二月桂酰甘油二酯、双半乳糖二肉豆蔻酰甘油酯、双半乳糖二棕榈酰甘油酯或双半乳糖二硬脂酰甘油酯等)或半乳糖甘油二酯(半乳糖二月桂酰甘油酯、半乳糖二肉豆蔻酰甘油酯、半乳糖二棕榈酰甘油酯或半乳糖二硬脂酰甘油酯等)等等。上述鞘糖脂的实例是半乳糖苷脑苷脂、乳糖脑苷脂或神经节苷脂等。上述甾醇的实例是胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯、3β-[N-(N′,N′-二甲基氨基乙烷)甲氨酰]胆固醇、麦角固醇或羊毛甾醇等。
在本发明中,这样的脂质可以单独或通过组合其中两种或更多种联合使用。
尽管对本发明中使用的聚亚烷基二醇没有特殊限制,但是优选具有1至6个碳原子的亚烷基链。亚烷基链可以用不影响本发明的取代基取代,诸如羟基、羧基、氨基和烷氧基等。更具体地,可以使用聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇等,,并且尤其优选使用聚乙二醇。尽管对聚亚烷基二醇的分子量没有特殊限制,但是可以采用具有大约200至4,000,000分子量的聚亚烷基二醇,优选大约1,000至50,000。当使用聚乙二醇时,尤其优选具有上述分子量的分子。
尽管对聚亚烷基二醇的量没有特殊限制,但是优选占构成脂质体的脂质总量的大约0.5至30摩尔%。
对本发明中使用的白蛋白没有特殊限制,并且其实例是动物白蛋白,诸如卵白蛋白、血清白蛋白、乳白蛋白或肌肉白蛋白(肌浆蛋白)和植物白蛋白,如谷白蛋白、豆白蛋白或蓖麻子白蛋白。其中,本发明优选使用作为给药对象的同一动物的血清白蛋白。本发明中使用的白蛋白也可以是重组基因技术制备的白蛋白。上述白蛋白可以与野生型白蛋白具有相同的氨基酸序列或可以是突变型白蛋白,其中一个或多个,优选一个到几个氨基酸缺失、取代或插入,只要不违背本发明的目的。用已知技术可以容易地制备这样的白蛋白。在本发明中,优选使用基因重组白蛋白,因为没有感染的风险。
在本发明中,尽管对白蛋白的量没有特殊限制,但是优选占构成脂质体的脂质总量的大约0.0001至10摩尔%。
本发明的脂质体可以是任何结构,只要它含有上述聚亚烷基二醇和白蛋白。聚亚烷基二醇与白蛋白结合的方式和位置可以是这种键形成的任何方式和任何位置。然而优选本发明的脂质体在其表面具有聚亚烷基二醇和白蛋白。此外,尽管聚亚烷基二醇和白蛋白可以任何形式与脂质体结合,诸如吸附、电结合、物理键(例如,范德华力)和化学键,但是优选通过化学键结合。
关于本发明脂质体的优选实施方案,可以列举每一个聚亚烷基二醇和白蛋白与脂质体结合的例子(a)。以及,也可以列举脂质体和白蛋白通过聚亚烷基二醇结合的例子(b)例证。因此,其是脂质体与聚亚烷基二醇结合,并且在与上述结合位点不同的位点,白蛋白与聚亚烷基二醇结合的情况。仍有另一种脂质体和聚亚烷基二醇通过白蛋白结合的情况(c)。因此,其是脂质体与白蛋白结合,并且在与上述结合位点不同的位点,聚亚烷基二醇与白蛋白结合的情况。在本发明中,上述实施方案(a)至(c)提及的脂质体可以混合状态存在。
本发明的脂质体可以使用已知技术制备。下面将阐述以上面提及的三个实施方案中每个制备本发明脂质体的优选方法。
(a)聚亚烷基二醇和白蛋白与脂质体结合的情况中,制备本发明的脂质体的方法实例包括(i)将白蛋白与结合了聚亚烷基二醇的脂质体结合的方法,(ii)将聚亚烷基二醇与结合了白蛋白的脂质体结合的方法,以及(iii)使用结合了聚亚烷基二醇的脂质和结合了白蛋白的脂质制备脂质体的方法。
在上述方法(i)中,结合聚亚烷基二醇的脂质体可以使用已知方法容易地制备。一个实例是使用结合了聚亚烷基二醇的脂质制备脂质体的方法。上述“结合聚亚烷基二醇的脂质”的实例是聚亚烷基二醇修饰的磷脂、聚亚烷基二醇烷基醚、聚亚烷基二醇蓖麻油衍生物和聚亚烷基二醇山梨糖醇脂肪酸酯。对于这种脂质的“聚亚烷基二醇”部分,优选聚乙二醇。对于“结合聚亚烷基二醇的脂质”,优选聚乙二醇修饰的磷脂,并且更优选其中的磷脂是磷脂酰乙醇胺。
更具体地,例如为PEG-DSPE[1,2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺-N-(聚乙二醇)],
下列公式(11)代表的N-单甲氧基聚乙二醇琥珀酰基磷脂酰乙醇胺:
CH30-(CH2CH2O)n-CO-CH2CH2-CO-NH-PE (11)
(其中n是5至100,000的整数,优选10至1,200的整数,并且-NH-PE是磷脂酰氨基),
下式(12)表示的N-单甲氧聚乙二醇(2-氯-1,3,5-三嗪-4,6-二基)琥珀酰基磷脂酰乙醇胺:
(其中n和-NH-PE与上面定义的意思相同),
下式(13)代表的N-单甲氧聚乙二醇羰基磷脂酰乙醇胺:
CH3O-(CH2CH2O)n-1-CO-NH-PE (13)
(在该式中,n和-NH-PE与上面定义的相同)以及下式(14)代表的N-单甲氧聚乙二醇乙烯磷脂酰乙醇胺:
CH3O-(CH2CH2O)n-CH2CH2-NH-PE (14)
(其中n和-NH-PE与上面定义的相同)。
上述“结合聚亚烷基二醇的脂质”可以使用已知方法容易地制备或可以使用可以市售获得的产品。对于使用这种脂质作为构成脂质制备脂质体的方法没有特殊限制,但是可以使用已知方法。例如,使用上述脂质和水相通过薄膜法、反相蒸发法、乙醇注射法、醚注射法、脱水-再水化方法等等可以制备脂质体,并且可以通过超声波照射方法、冻/融后超声波照射、挤压法、弗氏冲压法、匀化法等来调节囊泡平均体积。(参照D.D.Lasic,″Liposomes:From Basic to Applications″,Elsevier Science Publishers,pp.1-171(1933))。这里,“水相”是指构成脂质体内部面积的水溶液,并且,尽管对其没有特殊限制,只要其普遍应用于相关技术领域,优选氯化钠水溶液、缓冲液诸如磷酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液、糖水溶液诸如葡萄糖水溶液或海藻糖水溶液或其混合物。为了保持脂质体结构的稳定,当施用于活体时,通常优选用于制备脂质体的水相几乎与脂质体的外部等渗,换言之,与体液等渗并且施加到脂质体内部与外部的渗透压很小。
为了将白蛋白与结合了聚亚烷基二醇而产生的脂质体结合,可以使用已知方法容易地实施这种结合,诸如巯基-马来酰亚胺结合技术(Derksen,J.T.P.和Scherphof,G.L.(1985),Biochem.Biophys.Acta,814,p.151-155)。尤其是,可以有利地采用上述脂质体和白蛋白通过活性掺入基团结合的方法。对于活性掺入基团没有特殊限制,它可以是相关技术领域中已知的基团。
对于优选实施方案,可以列举下列方法。因此,在结合聚亚烷基二醇的脂质体的制备中,除了结合聚亚烷基二醇的脂质外,具有活性掺入基团的脂质用作脂质成分。对于具有活性掺入基团的脂质,优选1,2-二油基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-(戊二酰)(以下它将缩写为“NGPE”)。使用这种脂质成分如上所述制备结合聚亚烷基二醇的脂质体,然后将白蛋白通过上述脂质体中的活性掺入基团与其结合。当使用NGPE时,优选白蛋白的氨基与NGPE的末端羧基结合。在那时,也可以预先结合提高上述脂质体活性掺入基团的反应性的功能基团,然后白蛋白可以与这样结合取代功能基团。例如,当使用NGPE时,使用水溶性碳二亚胺,使碳二亚胺基与NGPE预先结合,然后白蛋白与这样的NGPE结合取代碳二亚胺基。
另一个优选实施方案是3-(2-吡啶硫代)丙酸酯(以下它将缩写为“DTP”)与1,2-二油基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(以下它将缩写为“DOPE”)的氨基结合的脂质(以下它将缩写为“DTP-DOPE”)用作具有活性掺入基团的脂质的方法。更具体地,使用DTP-DOPE作为除了结合聚亚烷基二醇的脂质之外的脂质成分如上所述制备结合聚亚烷基二醇的脂质体。同时,巯基被引入白蛋白中。对于引入巯基的方法没有特别限制,而是可以使用已知方法。优选地,将DTP引入白蛋白,接着进行与二硫苏糖醇的反应以获得引入巯基的白蛋白。当上述脂质体与白蛋白反应时,白蛋白可以与结合聚亚烷基二醇的脂质体结合。
上述(ii)和(iii)中提及的方法可以容易地根据上面提及的描述实施。
(b)在脂质体和白蛋白通过聚亚烷基二醇结合的情况中,制备本发明脂质体的方法实例为(i)制备结合了聚亚烷基二醇的脂质体,以及白蛋白与上述脂质体的聚亚烷基二醇结合的方法以及(ii)结合了白蛋白的聚亚烷基二醇在不同于白蛋白与其结合的位点与脂质体结合的方法。
在上面提及的方法(i)中,制备结合聚亚烷基二醇的脂质体的方法与上面提及的相同。对于白蛋白与脂质体的聚亚烷基二醇结合,可以使用已知方法。尤其可以采用聚亚烷基二醇通过活性掺入基团与白蛋白结合的方法。对于活性掺入基团没有特殊限制,而是可以使用相关领域已知的任何基团,并且马来酰亚胺基可以作为合适的实例示例。
更具体地,可以采用下列方法。因此,在结合了聚亚烷基二醇的脂质中,反应性功能基团与聚亚烷基二醇结合。例如,优选马来酰亚胺基与聚亚烷基二醇的羟基结合。所产生的脂质以与上面提及相同的方法用于制备脂质体。当所产生的脂质体与白蛋白反应时,白蛋白通过聚亚烷基二醇结合的反应性功能基团与脂质体结合,因此获得目标脂质体。在那时,可以实施已知的处理,诸如将对应于反应性功能基团的取代基引入白蛋白,使得反应性功能基团易于与白蛋白结合。当反应性的功能基团是马来酰亚胺基时,优选巯基预先引入白蛋白。对于引入巯基的方法没有特殊限制,而是可以使用已知方法。更具体地,将白蛋白与乙酰基硫代醋酸酯酯反应,使得乙酰基硫代醋酸酯酯与白蛋白的氨基结合,然后除去乙酰基,由此将巯基引入白蛋白。
在上面提及的方法(ii)中,对于其中聚亚烷基二醇和白蛋白结合的方法没有特殊限制,而是可以使用已知方法,并且优选通过活性掺入基团进行结合。对于活性掺入基团没有特殊限制,而是可以使用相关技术领域已知的基团,并且马来酰亚胺基可以作为合适的实例示例。然后,在不同于白蛋白结合的位点,脂质体与所产生的结合白蛋白的聚亚烷基二醇结合。而且,对于其方法没有特殊限制,而是可以使用已知方法。优选实例是预先结合脂质的聚亚烷基二醇用作聚亚烷基二醇并且上述步骤中制备的白蛋白-聚亚烷基二醇脂质复合体被插入脂质体中。
更具体地,如上所述将聚亚烷基二醇与脂质结合。然后,将反应性的功能基团与所产生脂质的聚亚烷基二醇结合。例如,优选马来酰亚胺基与聚亚烷基二醇的羟基结合。然后,白蛋白通过反应性的功能基团与所产生脂质的聚亚烷基二醇结合。在那时,白蛋白可以接受已知处理,诸如将对应于上述反应性的功能基团的取代基引入白蛋白,使得上述反应性的功能基团易于与白蛋白结合。当上述反应性的功能基团是马来酰亚胺基时,优选将巯基预先引入白蛋白。对于引入巯基的方法没有特殊限制,而是可以使用已知方法。更具体地,白蛋白与乙酰基硫代醋酸酯酯反应,使得乙酰基硫代醋酸酯酯与白蛋白的氨基结合,然后除去乙酰基,由此产生引入巯基的白蛋白。另一方面,用已知方法制备脂质体并且将所产生的白蛋白-聚亚烷基二醇-脂质复合体插入脂质体而制备目标脂质体。
(c)在脂质体和聚亚烷基二醇通过白蛋白结合的情况中,制备本发明脂质体的方法实例为(i)在不同于聚亚烷基二醇结合的位点,将脂质体与结合聚亚烷基二醇的白蛋白结合的方法以及(ii)制备结合白蛋白的脂质体,然后将聚亚烷基二醇与上述脂质体的白蛋白结合的方法。
在上面提及的方法(i)中,对于聚亚烷基二醇和白蛋白结合的方法没有特殊限制,而是可以使用已知方法,并且优选通过活性掺入基团进行这种结合。对于活性掺入基团没有特殊限制,而是可以使用相关领域已知的基团,并且马来酰亚胺基是合适的实例。更具体地,将反应性的功能基团与聚亚烷基二醇结合。例如,优选马来酰亚胺基与聚亚烷基二醇的羟基结合。然后,白蛋白通过反应性的功能基团与所聚亚烷基二醇结合。在那时,白蛋白可以接受已知处理,诸如将对应于上述反应性的功能基团的取代基引入白蛋白,使得上述反应性的功能基团易于与白蛋白结合。当上述反应性的功能基团是马来酰亚胺基时,优选将巯基预先引入白蛋白。对于引入巯基的方法没有特殊限制,而是可以使用已知方法。更具体地,将白蛋白与乙酰基硫代醋酸酯反应,使得乙酰基硫代醋酸酯与白蛋白的氨基结合,然后除去乙酰基而产生引入巯基的白蛋白。
然后,脂质体与所产生的结合聚亚烷基二醇的白蛋白结合。其方法如上所述。
在上面提及的方法(ii)中,白蛋白与脂质体结合的这种方法如上所述。然后,聚亚烷基二醇与上述白蛋白结合。其方法也可以与上述相同。
上面提及的制备方法中产生的下列中间体是新的物质。
下式(3)代表的化合物:
(Alb-NH)-CO-CH2-CH2-SH (3)
(其中Alb-NH是由从Alb-NH2代表的白蛋白分子的氨基除去一个氢原子形成的基团),
下式(5)代表的化合物
(Alb-NH)-CO-CH2-SH (5)
(其中Alb-NH与上面定义的意思相同),
下式(6)代表的化合物
(其中Alb-NH与上面定义的相同;n是5至100,000的整数,优选10至1,200的整数;R是来自具有2至35个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸的酰基。更优选地,上述脂肪酸具有6至18个碳原子,并且最优选8至16个碳原子。这种脂肪酸的具体实例是八烷酸(优选辛酸)、十烷酸(优选癸酸)、十二烷酸(优选月桂酸)、十六烷酸(优选棕榈酸)、十八烷酸(优选硬脂酸)和单烯酸或其多烯脂肪酸(优选油酸)。来自这种脂肪酸的酰基的具体实例是八烷酰基(优选辛酰基)、十烷酰基(优选癸酰基)、十二烷酰基(优选月桂酰基)、十六烷酰基(优选棕榈酰基)和十八烷酰基(优选硬脂酰基)并且其中可能有一个或多个双键(诸如油酰基),
下式(7)代表的化合物:
(其中-NH-Alb-NH2是由从H2N-Alb-NH2代表的白蛋白分子的一个氨基除去一个氢原子形成的基团,并且n与上面定义的相同),以及
下式(8)代表的化合物:
(其中-NH-Alb-NH是从式H2N-Alb-NH2代表的白蛋白分子的两个氨基各除去一个氢原子形成的基团,并且n与上面定义的相同)。
优选地,本发明的脂质体以携带生理活性成分的形式使用。对于携带生理活性成分的方式没有特殊限制。例如,生理活性成分可以包含入脂质体或可以吸附在脂质体上面或与其表面结合。此外,生理活性成分可以吸附在白蛋白或聚亚烷基二醇上面或与其结合。
对于生理活性成分没有特殊限制,只要它是能够施用于动物或优选人的化合物或物质组合物。例如,该生理活性成分包括发挥生理活性和有效预防或治疗疾病的化合物或组合物,用于诊断的化合物或组合物(例如,造影剂),和用于基因治疗的基因。生理活性成分的具体实例是抗病毒剂如无环鸟苷、叠氮胸苷和干扰素;抗菌剂如氨基糖苷、头孢菌素和四环素;抗真菌剂如多烯抗生素、咪唑和三唑;抗代谢剂如叶酸、嘌呤和嘧啶类似物;抗肿瘤剂如蒽环霉素抗生素和植物碱;甾醇如胆固醇;碳水化合物糖和淀粉;氨基酸,肽和蛋白诸如细胞受体蛋白、免疫球蛋白、酶、激素、神经递质和糖蛋白;染料;放射性标记试剂诸如放射性同位素和放射性同位素标记的化合物;辐射不能透过的试剂;荧光化合物;散瞳化合物;支气管扩张剂和局部麻醉剂。
在本发明中,尤其优选使用抗肿瘤剂作为生理活性成分。尽管对于抗肿瘤剂没有特殊限制,但是其实例是烷化剂、各种代谢拮抗剂、抗肿瘤抗生素、其它抗肿瘤剂、抗癌植物成分、BRM (生物反应调节物)、血管生成抑制剂、细胞粘附抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂和激素。
更具体地,烷化剂的实例是如氮芥、氮芥N-氧化物和苯丁酸氮芥;氮丙啶型烷化剂如卡波醌(carboquone)和硫替派(thiotepa);环氧化物型烷化剂如二溴甘露醇和二溴卫矛醇;亚硝基脲型烷化剂如亚硝脲氮芥、环己亚硝脲(lomustine)、甲基环己亚硝脲(semustine)、盐酸尼莫司汀(nimustine hydrochloride)、链脲霉素、吡葡亚硝脲(chlorozotocin)和雷诺氮芥(ranimustine);白消安;improsulfantosylate;和氮烯唑胺(dacarbazine)。各种代谢拮抗剂的实例是嘌呤代谢拮抗剂如6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤和硫代肌苷;嘧啶代谢拮抗剂如氟尿嘧啶、喃氟啶(tegafur)、喃氟啶尿嘧啶、氟基嘧啶(carmofur)、去氧氟尿苷、broxiuridine、阿糖胞苷(cytarabine)和依诺他宾;叶酸代谢拮抗剂如氨甲喋呤和三甲曲沙;及其盐和复合物。
抗肿瘤抗生素的实例是蒽环霉素型抗生素抗肿瘤剂如丝裂霉素A、博莱霉素、培洛霉素、道诺红菌素、阿克拉霉素A(aclarubicin)、阿霉素、吡柔比星(Pirarubicin)、THP-阿霉素、4′-表阿霉素(4’-epidoxorubicin)和表柔比星(epirubicin);色霉素A3;放线菌素D;及其盐或复合物。其它抗肿瘤剂的实例是顺氯氨铂、卡波铂(carboplatin)、三苯氧胺、喜树碱、异环磷酰胺(ifosfamide)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、苯丙氨酸氮芥(melfalan)、L-天冬酰胺酶、乙酰葡醛酯(aceglatone)、西索菲兰(sizofiran)、picibanil、乌苯美司(ubenimex)、云芝多糖(Krestin)及其盐或复合物。其它实例是甲基苄肼(Procarbazine)、双溴丙基哌嗪(pipobroman)、新制癌菌素(neocarzinostatin)和羟基脲。
抗癌植物成分的实例是长春花生物碱诸如去乙酰长春酰胺(vindesine)、长春新碱和长春花碱;表鬼臼脂素(epipodophyllotoxin)诸如足叶乙甙(etoposide)和替尼泊甙(teniposide);及其盐或复合物。BRM的实例是肿瘤坏死因子、消炎痛(indomethacin)及其盐或复合物。血管生成抑制剂的实例是烟曲霉素(fumagillol)衍生物及其盐或复合物。细胞粘附抑制剂的实例是具有RGD序列(Arg-Gly-Asp)的物质及其盐或复合物。基质金属蛋白酶抑制剂的实例是马马司他(marimastat)、巴马司他(batimastat)及其盐或复合物。激素的实例是氢化可的松、地塞米松、甲基脱氢皮质甾醇、脱氢皮质甾醇、普拉雄酮(prasterone)、倍他米松(betamethasone)、氟羟脱氢皮质甾醇(triamcinolone)、康复龙(oxymetholone)、诺龙(nandrolone)、美替诺龙(metenolone)、磷雌酚(fosfestrol)、乙炔基雌二醇(Ethynylestradiol)、氯地孕酮(chlormadinone)、甲羟孕酮(medroxyprogesterone)及其盐或复合物。
尽管本发明的药物组合物可以仅包含携带上述生理活性成分的本发明的脂质体,但是它通常是用前述已知方法[在药物制剂领域普遍使用的方法,如日本药典(如第13版)中提及的方法]将脂质体与药用载体混合制备的。对于药用载体而言,可以使用已经普遍作为药物制剂原料的各种类型有机或无机载体。这种载体的实例是固体制剂中的赋形剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂;以及溶剂、增溶剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲液和光滑剂(soothing agents)。如果必要,也可以使用药物制剂的添加剂,诸如表面活性剂、起泡剂、染料、酸化剂、防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂和矫正剂。
对于药用载体而言,更具体的实例是无机盐的赋形剂诸如柠檬酸钾和磷酸钙;润滑剂诸如硬脂酸镁、硬脂酸钙、轻硅酸酐和含水二氧化硅;粘合剂诸如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、α-淀粉、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、阿拉伯胶、明胶和支链淀粉;以及崩解剂诸如纤维素(例如取代度低的羟丙基纤维素和结晶纤维素)、各种淀粉或淀粉衍生物(例如,玉米淀粉、部分α-淀粉和羟丙基淀粉)、聚乙烯聚吡咯烷酮和膨润土。
其它实例是溶剂诸如盐溶液、葡萄糖溶液以及盐溶液和葡萄糖溶液的混合物;增溶剂诸如葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、苯甲酸钠、乙二胺、水杨酰胺、尼克酰胺和聚氧化乙烯氢化蓖麻油;缓冲液诸如硼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液;白蛋白;多元醇诸如甘油和丙二醇;以及光滑剂(soothing agents)诸如盐酸利多卡因(lidocaine hydrochloride)和苯甲醇。
更多实例是表面活性剂,诸如失水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、磷脂、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯、聚氧化乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯烷基醚和蔗糖脂肪酸酯;起泡剂诸如碳酸氢钠、碳酸钠和碳酸钙;酸化剂诸如柠檬酸、酒石酸和苹果酸;染料诸如三氧化二铁、黄色三氧化二铁和焦油染料;香料如柠檬、柠檬酸橙、桔子、菠萝、薄荷和薄荷醇;甜味剂如糖精钠、甘草甜素二钾、阿斯巴甜(aspartame)、甜菊糖甙(stevia)和索马甜(thaumatin);和矫正剂如柠檬酸、柠檬酸钠、琥珀酸、酒石酸、延胡索酸和谷氨酸。
此外,对于稳定剂而言,例如为糖和亚硫酸钠。糖的实例是单糖诸如葡萄糖、果糖、木糖醇、岩藻糖和半乳糖;二糖诸如麦芽糖、蔗糖、乳糖、乳果糖和蜜二糖;寡糖诸如果糖寡糖、半乳糖寡糖和乳寡糖;以及多糖诸如葡聚糖。防腐剂的实例是p-苯甲酸酯、苯甲醇、氯甲酚、苯乙醇和苯索氯铵。螯合剂的实例是乙二胺四乙酸钠和柠檬酸钠。抗氧化剂的实例是亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、抗坏血酸钠和硫代硫酸钠。
本发明的药物剂型是口服制剂如片剂、胶囊(包括软胶囊、微胶囊和肠溶胶囊)、稀释粉剂、粒剂和糖浆;以及肠胃外制剂诸如注射制剂(例如,皮下注射制剂、静脉注射制剂、肌肉注射制剂和腹膜内注射液)、外用剂(例如,鼻制剂、经皮制剂和油膏)、栓剂(例如直肠栓剂和阴道栓剂)、丸剂、输注制剂和缓释制剂(例如,缓释微胶囊)。尤其优选的本发明的药物为注射制剂的剂型。
尽管本发明药物的剂量不能明确确定,因为它依赖于脂质体中生理活性成分的种类、药物剂型、待治疗的疾病种类、待治疗的症状和疾病的严重性、患者的年龄、性别或体重、给药途径等等而变化,但是通过医生对上面提及因素的总体判断可以确定。
对于本发明药物的给药途径没有特殊限制,根据上面提及的本发明的剂型,它可以口服或肠胃外施用。例如,当本发明的药物是注射制剂时,例如可以采用医学上合适的给药形式如静脉注射、皮下注射、皮内注射、肌肉注射或腹膜内注射。
本发明的药物可以预防或治疗各种疾病,依赖于本发明脂质体携带的生理活性物质的种类。例如,当生理活性物质是抗肿瘤剂时,本发明的药物可用于预防或治疗肿瘤,诸如结肠直肠癌、脑肿瘤、头部和颈部癌症、乳腺癌、肺癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、胰腺癌、胰岛细胞癌、绒毛膜癌、结肠癌、肾细胞癌、肾上腺皮质癌、膀胱癌、睾丸癌、前列腺癌、睾丸肿瘤、卵巢癌、子宫癌、绒毛膜癌、甲状腺癌、恶性类癌、皮肤癌、恶性黑色素瘤、骨肉瘤、软组织肉瘤、成神经细胞瘤、维尔姆斯氏瘤、成视网膜细胞瘤、黑素瘤和鳞状细胞癌。
实施例
如下所示,将通过实施例的方式详细阐明本发明,尽管不言而喻本发明不限于下列实施例。下列实施例中使用的rHSA购自Bifa Co。实施例中提及的缩写的定义如下:
rHSA:重组人血清白蛋白
PEG;聚乙二醇
DSPE:1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺
NGPE:1,2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-(戊二酰)
NHS:N-羟基琥珀酰亚胺
WSC:水溶性碳二亚胺
SPDP:N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫)丙酸酯
DTP:3-(2-吡啶二硫)丙酸酯
DOPE;1,2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺
DTT:二硫苏糖醇
SATA:N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫代醋酸酯
HEPES:N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙烷磺酸
EDTA:乙二胺四乙酸钠盐
PBS:pH 7.4的磷酸盐缓冲液(包含氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠)
实施例1
脂质体的制备,其中PEG和rHSA与其表面结合
方法1:使用WSC进行制备
(1)PEG修饰的含有NGPE的脂质体的制备
溶解了脂质(总脂质:100μmol;以蛋黄卵磷脂∶胆固醇∶NGPE∶结合PEG的DSPE(Shearwater Co制造)的摩尔比=59∶20∶10∶1溶解)的大约8mL的氯仿溶液添加到茄型烧瓶酯。然后,添加2,000,000dpm的[3H(氚)]胆固醇基十六烷基醚(由日本放射性同位素协会制造)。添加氯仿制成总体积10mL,使用旋转蒸发器在氮气下真空蒸发溶剂,随后干燥一夜。向所产生的脂质薄膜中添加约2mL的PBS,混合物在55℃加热搅拌混合15分钟或更长时间,使得脂质薄膜悬浮。用装有200nm聚碳酸酯膜的挤压机使悬浮液的颗粒大小统一。
(2)rHSA-PEG修饰的脂质体的制备
向上述PEG修饰的脂质体中添加100μmol的NHS和10μmol的WSC,并且搅拌混合物15分钟使得NGPE和WSC与其结合,在此时间后添加500μmol的2-巯基乙醇。为了除去没有与脂质体结合的NHS和WSC,通过凝胶过滤从脂质体馏分分离低分子量物质而回收脂质体馏分。向该脂质体馏分中立即添加1μmol的rHSA,混合物振荡过夜使得rHSA与脂质体结合。为了除去未反应的rHSA,进行凝胶过滤以分离结合rHSA的脂质体馏分和单独的rHSA馏分,结果回收结合rHSA的脂质体馏分(10mL)。
方法2:使用SPDP进行制备
(1)DTP-DOPE的制备
向DOPE的氯仿溶液(10μmol)中添加SPDP(12μmol),并搅拌该溶液。向反应溶液中添加大约2mL的PBS,并用力搅拌混合物5分钟,然后在3,000rpm离心10分钟。除去PBS层后,添加纯水并用力振荡混合物3分钟,再次离心除去水层。再次实施照这样的纯水洗涤。用蒸发器对留在下层的白色半固体进行溶剂蒸发并干燥。残余物中添加1.0mL的氯仿并再次溶解制备DTP-DOPE。
(2)PEG修饰的含有DTP-DOPE的脂质体的制备
溶解了脂质(总脂质:100μmol;以蛋黄卵磷脂∶胆固醇∶结合PEG的DSPE(Shearwater Co制造)的摩尔比率=59∶30∶1溶解)的大约8mL氯仿溶液添加到茄型烧瓶。然后,添加10μmol的DTP-DOPE和2,000,000dpm的[3H(氚)]胆固醇基十六烷基醚(由日本放射性同位素协会制造)。添加氯仿制成10mL总体积,并使用旋转蒸发器在氮气下真空蒸发溶剂,并干燥过夜。向所产生的脂质薄膜中添加大约2mL的PBS,将混合物在55℃加热搅拌混合15分钟或更长时间,使得脂质薄膜悬浮。用装有200nm聚碳酸酯膜的挤压机使悬浮液的颗粒大小统一。
(3)硫醇化rHSA的制备
将SPDP(20μmol)添加到1μmol的rHSA水溶液中,随后搅拌制备DTP-rHSA。为了除去未反应的SPDP,进行凝胶过滤收集PD-rHSA馏分。将DTT添加到DTP-rHSA中以形成50mM的终浓度,混合物搅拌20分钟使rHSA被硫醇化。为了除去未反应的DTT,进行凝胶过滤收集硫醇化rHSA馏分。
(4)含有DTP-DOPE的脂质体与硫醇化rHSA的反应
向PEG修饰的含有DTP-DOPE的脂质体中添加硫醇化rHSA溶液,在室温下搅拌混合物24小时或更长时间。然后,反应溶液接受凝胶过滤使脂质体和未反应的rHSA分离,回收脂质体馏分得到rHSA-PEG修饰的脂质体。
实施例2
制备脂质体的方法,其中将PEG与其表面结合并且将rHSA与PEG末端结合
方法1:制备PEG修饰的脂质体,然后rHSA与PEG结合的制备方法
(1)马来酰亚胺-PEG-修饰的脂质体的制备
将溶解了脂质(总脂质:100μmol;以蛋黄卵磷脂∶胆固醇∶结合马来酰亚胺-PEG的DSPE(Shearwater Co制造)的摩尔比率=63∶32∶5溶解)的大约8mL氯仿溶液添加到茄型烧瓶。向其中添加[3H(氚)]胆固醇基十六烷基醚(由日本放射性同位素协会制造)(2,000,000dpm)。添加氯仿使制成10mL总体积,然后使用旋转蒸发器在氮气下真空蒸发该溶剂,随后干燥过夜。向所产生的脂质薄膜中添加大约2mL的PBS,混合物在55℃加热搅拌混合15分钟或更长时间,使得脂质薄膜悬浮。用装有200nm聚碳酸酯膜的挤压机使悬浮液的颗粒大小统一。
(2)使用SATA制备硫醇化rHSA
将溶于二甲基甲酰胺的8μmol SATA以使二甲基甲酰胺浓度不达到1%或更高的方式添加到rHSA水溶液(1μmol)中,混合物在室温下振荡30分钟使乙酰基硫代醋酸酯与rHSA的氨基结合。为了除去未反应的SATA,进行凝胶过滤收集结合乙酰基硫代醋酸酯的rHSA馏分。添加溶于0.5M HEPES和25mM EDTA的羟胺(50μmol)以除去乙酰基,由此制备硫醇化rHSA。
(3)修饰的PEG和rHSA与脂质体的结合
马来酰亚胺-PEG修饰的脂质体溶液和硫醇化rHSA溶液混合并在4℃或更低温度下反应18小时。最后,进行凝胶过滤除去未反应的硫醇化rHSA馏分,由此回收PEG修饰的结合rHSA的脂质体。
方法2:rHSA与PEG-DSPE结合,随后插入脂质体的制备方法
(1)脂质体的制备
将溶解了脂质(总脂质:95μmol;以蛋黄卵磷脂∶胆固醇的摩尔比率=63∶32溶解)的大约8mL氯仿溶液添加到茄型烧瓶中。[添加[3H(氚)]胆固醇基十六烷基醚(由日本放射性同位素协会制造)(2,000,000dpm)。向其中添加氯仿制成10mL总体积,然后使用旋转蒸发器在氮气下真空蒸发该溶剂,并干燥过夜。向所产生的脂质薄膜中添加大约2mL的PBS,混合物在55℃加热搅拌混合15分钟或更长时间,使得脂质薄膜悬浮。用装有200nm聚碳酸酯膜的挤压机使悬浮液的颗粒大小统一。
(2)使用SATA制备硫醇化rHSA
将溶于二甲基甲酰胺的8μmol SATA以使二甲基甲酰胺浓度不达到1%或更高的方式添加到rHSA水溶液(1μmol)中,并且混合物在室温下振荡30分钟使得乙酰基硫代醋酸酯与rHSA的氨基结合。为了除去未反应的SATA,进行凝胶过滤收集结合乙酰基硫代醋酸酯的rHSA馏分。添加溶于0.5M HEPES和25mM EDTA的羟胺(50μmol)以除去乙酰基,由此制备硫醇化rHSA。
(3)rHSA与马来酰亚胺-PEG的结合
将结合马来酰亚胺-PEG的DSPE(由Shearwater Co制造)(5μmol)和硫醇化rHSA溶液在4℃或更低温度混合并允许反应18小时。进行凝胶过滤收集结合rHSA-PEG的DSPE馏分。
(4)将结合rHSA-PEG的DSPE插入脂质体中
将结合了r-HAS-PEG的DSPE溶液添加到上述(1)制备的脂质体中,并且振荡混合物以插入脂质体,由此用rHSA-PEG修饰脂质体表面。
实施例3
脂质体的制备方法,其中rHSA结合在其表面,并且此外,PEG与rHSA结合
方法1:使用SATA和WSC的制备
(1)含有NGPE的脂质体的制备
溶解了脂质的大约8mL氯仿溶液(总脂质:100umol;以蛋黄卵磷脂∶胆固醇∶NGPE的摩尔比率=60∶30∶10溶解)添加到茄型烧瓶中。[添加[3H(氚)]胆固醇基十六烷基醚(由日本同位素协会制造)(2,000,000dpm)。向其中添加氯仿使制成10mL总体积,然后使用旋转蒸发器在氮气下真空蒸发该溶剂,并干燥过夜。向所产生的脂质薄膜中添加大约2mL的PBS,并且混合物在55℃加热搅拌混合15分钟或更长时间,使得脂质薄膜悬浮。用装有200nm聚碳酸酯膜的挤压机使悬浮液的颗粒大小统一。
(2)使用SATA制备硫醇化rHSA
将溶于二甲基甲酰胺的8μmol SATA以使二甲基甲酰胺浓度不达到1%或更高的方式添加到rHSA水溶液(1μmol)中,并在室温下振荡混合物30分钟使乙酰基硫代乙酸酯与rHSA的氨基结合。为了除去未反应的SATA,进行凝胶过滤收集结合乙酰基硫代醋酸酯的rHSA馏分。添加溶于0.5M HEPES和25mM EDTA的羟胺(50μmol)以除去乙酰基,由此制备硫醇化HSA。
(3)rHSA对马来酰亚胺-PEG的修饰
马来酰亚胺-PEG(Shearwater Co制造)(5μmol)和硫醇化rHSA溶液在4℃或更低温度混合并反应18小时。进行凝胶过滤收集rHSA-PEG馏分。
(4)rHSA-PEG与含有NGPE的脂质体的结合
将100μmol的NHS和10μmol的WSC添加到上述含有NGPE的脂质体中,混合物振荡15分钟使NGPE和WSC与其结合。向溶液中添加500μmol的2-巯基乙醇。为了除去没有与脂质体结合的NHS和WSC,凝胶过滤进行分离并回收脂质体馏分。立即添加rHSA-PEG(相当于1μmolrHSA),随后振荡过夜使rHSA PEG与脂质体结合。进行凝胶过滤除去未反应的rHSA-PEG以回收结合rHSA-PEG的脂质体馏分。
方法2:使用SATA和SPDP的制备
(1)DTP-DOPE的制备
向DOPE的10μmol氯仿溶液中添加SPDP(12μmol),并搅拌该混合物。向反应中添加大约2mL的PBS,并用力搅拌混合物5分钟,并以3,000rpm离心10分钟。除去PBS层后,添加纯水并用力振荡混合物3分钟,并离心除去水层。再次实施这样的纯水洗涤。用蒸发器将留在下层的白色半固体进行溶剂蒸发,然后干燥。将1.0mL的氯仿添加到残余物中再次溶解,产生DTP-DOPE。
(2)含有DTP-DOPE的脂质体的制备
溶解了脂质(总脂质:90μmol;以蛋黄卵磷脂∶胆固醇的摩尔比率=60∶30溶解)的大约8mL氯仿溶液添加到茄型烧瓶中。然后,向其中添加10μmol的DTP-DOPE,和2,000,000dpm的[3H(氚)]胆固醇基十六烷基醚(由日本放射性同位素协会制造)添加到混合物中。添加氯仿制成10mL总体积,然后使用旋转蒸发器在氮气下真空蒸发溶剂并干燥过夜。向所产生的脂质薄膜中添加大约2mL PBS,混合物在55℃加热搅拌混合15分钟或更长时间,使脂质薄膜悬浮。用装有200nm聚碳酸酯膜的挤压机使悬浮液的颗粒大小统一。
(3)使用SATA制备硫醇化rHSA
向rHSA水溶液(1μmol)中以使二甲基甲酰胺浓度不达到1%或更高的程度添加溶于二甲基甲酰胺的8μmol SATA,并在室温下振荡混合物30分钟使乙酰基硫代乙酸酯与rHSA的氨基结合。为了除去未反应的SATA,进行凝胶过滤收集结合乙酰基硫代醋酸酯的rHSA馏分。添加溶于0.5M HEPES和25mM EDTA的羟胺(50umhepesol)以除去乙酰基,由此制备硫醇化rHSA。
(4)rHSA对马来酰亚胺-PEG的修饰
马来酰亚胺-PEG(5μmol)和硫醇化rHSA溶液在4℃或更低温度下混合并反应18小时。进行凝胶过滤收集rHSA-PEG馏分。
(5)硫醇化rHSA-PEG的制备
将SPDP(200μmol)添加到rHSA-PEG水溶液(相当于1μmol的rHSA)中,并搅拌混合物以制备DTP-rHSA-PEG。进行凝胶过滤除去未反应的SPDP,收集DTP-rHSA-PEG馏分。将DTT添加到DTP-rHSA-PEG馏分酯以形成50mM的终浓度,并混合物搅拌20分钟使得一部分rHSA被硫醇化。为了除去未反应的DTT,进行凝胶过滤收集硫醇化rHSA-PEG的馏分。
(6)含有DTP-DOPE的脂质体与硫醇化rHSA-PEG的反应
向含有DTP-DOPE的脂质体中添加硫醇化rHSA-PEG溶液,并在室温下搅拌混合物24小时或更长时间,因此脂质体被rHSA-PEG修饰。然后,将反应溶液进行凝胶过滤使脂质体和未反应的rHSA-PEG分离,由此回收脂质体馏分并制备rHSA-PEG-修饰的脂质体。
试验实施例.脂质体样品对大鼠的给药实验
(1)血液水平的研究
将实施例1制备的脂质体样品(20μmol/kg)施用于三只大鼠中的每一只。从施用后立即到其后24小时,每隔4小时从颈动脉收集约300μl的血液并立即进行离心分离(以1500×g,4℃,3分钟)。回收上清液(100μl),向其中添加10mL的Clearsol(液体闪烁混合物),并充分混合该混合物。使用液体闪烁计数器对液体定量测定。每个样品测定5分钟。
作为比较,用在其表面没有进行修饰的脂质体和表面用PEG修饰的脂质体进行相同测试。
结果显示在图1中。图1中显示的数据是三只大鼠血液水平的平均值。
工业实用性
当聚乙二醇链和白蛋白分子与脂质体表面结合时,脂质体施用于人和动物后提高了其在血液中的滞留性,并提高了包含入脂质体或与之结合的药物的疗效和诊断效果。通过使用基因重组人血清白蛋白作为白蛋白,可以制备没有感染风险,并且与单独PEG的情况相比,在代谢方面生物适合性提高的脂质体。
Claims (9)
1.结合聚乙二醇和重组人血清白蛋白的脂质体。
2.根据权利要求1的脂质体,其中进一步含有生理活性成分。
3.根据权利要求2的脂质体,其中的生理活性成分是药物活性成分。
4.根据权利要求3的脂质体,其中的药物活性成分是抗肿瘤剂。
5.含有权利要求2至4任一项所述的脂质体的药物组合物。
6.根据权利要求5的药物组合物,其是注射剂。
7.结合聚乙二醇和重组人血清白蛋白并且其中含有抗肿瘤剂的脂质体在制备用于治疗癌症的药物组合物中的应用。
8.结合聚乙二醇和重组人血清白蛋白并且其中含有生理活性成分的脂质体在制备用于延长生理活性成分在体内滞留时间的药物组合物中的应用。
9.权利要求1中所述脂质体的制备方法,其特征在于,
具有下式(1)代表的化合物作为脂质成分的脂质体与重组人血清白蛋白结合:
(其中R是来自具有2至35个碳原子的脂肪酸的酰基);
具有下式(2)代表的化合物作为脂质成分的脂质体与下式(3)代表的化合物结合:
(其中R与上面定义的相同)
(Alb-NH)-CO-CH2-CH2-SH (3)
(其中Alb-NH是从Alb-NH2代表的重组人血清白蛋白分子除去氨基的一个氢原子形成的基团);
具有下式(4)代表的化合物作为脂质成分的脂质体与下式(5)代表的化合物结合:
(其中n是5至100,000的整数,并且R与上面定义的相同)
(Alb-NH)-CO-CH2-SH (5)
(其中Alb-NH与上面定义的意思相同);
由下式(6)代表的化合物插入脂质体:
(其中n、R和Alb-NH每个与上面定义的相同);
具有上式(1)代表的化合物作为脂质成分的脂质体与下式(7)代表的化合物结合:
(其中-NH-Alb-NH2是从H2N-Alb-NH2代表的重组人血清白蛋白分子的一个氨基除去一个氢原子形成的基团,并且n与上面定义的相同);或
具有上式(2)代表的化合物作为脂质成分的脂质体与下式(8)代表的化合物结合:
(其中-NH-Alb-NH是从式H2N-Alb-NH2代表的重组人血清白蛋白分子的两个氨基各除去一个氢原子形成的基团,并且n与上面定义的相同)。
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Citations (1)
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US5585466A (en) * | 1994-12-06 | 1996-12-17 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Crystals of serum albumin for use in genetic engineering and rational drug design |
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