KR20050071641A - 리포솜 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 혈중 체류성이 보다 향상된, 폴리알킬렌글리콜류와 알부민이 결합되어 있는 리포솜을 제공한다.

Description

리포솜 {LIPOSOME}
본 발명은 우수한 혈중 체류성을 갖는 리포솜에 관한 것이다.
리포솜은 지질 2중막으로 이루어지는 지질 캡슐이며, 여러 가지 약물의 캐리어로서, 주로 주사제를 중심으로 연구되고 있다. 그리고 최근에는 유전자 치료시의 유전자 운반체로서의 응용도 활발히 연구되고 있다. 이미 항진균약 암포테리신 B, 항암제 독소루비신, 다우노루비신, 조영제 인듐 등이 리포솜 제제로서 시판되고 있다 (비특허문헌 1).
리포솜은 생체 적합성의 지질로 구성되어 있기는 하지만, 정맥내 투여 후에는 면역계에 의한 이물인식을 받기 때문에 빠르게 혈중에서 소실된다고 알려져 있다. 따라서, 투여 후 약물의 작용이 오래 지속되지 않는 것이 최대의 결점이다. 이러한 결점을 해결하기 위해, 당단백이나 당지질을 리포솜 표면에 화학수식하는 방법, 글루크론산 유도체를 결합시키는 방법 등이 보고되어 있지만, 제제화에 이른 것은 없다.
이에 반하여, 1990년대에 들어와 리포솜 표면을 친수성의 폴리에틸렌글리콜로 화학 수식하여 면역계에 의한 인식을 회피하고 리포솜의 혈중 체류성을 향상시킴으로써 약물의 작용을 지속시키는 기술이 널리 알려져 있으며, 앞에 서술한 시판 리포솜 제제도 이 기술을 응용한 것이다. 또한 시스플라틴, 빈크리스틴, 캄프토테신 등의 항암제에도 널리 응용검토되고 있다 (비특허문헌 2).
또한 리포솜의 표면 수식은 암세포나 간장실질세포에 대한 약물의 타게팅을 목적으로 한 연구에서도 활발히 이루어지고 있으며, 항체 (비특허문헌 1) 나 트랜스페린을 결합시켜 암세포를 인식시키는 방법, 여러 가지 당쇄를 결합시켜 간장실질세포로 도입하는 방법 등이 보고되어 있다. 이들 화학수식에 있어서, 알부민을 스페이서로서 이용하는 것이 보고되어 있다 (비특허문헌 3).
[비특허문헌 1]
Troy O. Harasym, Marcel B. Bally, Paul Tardi, "Clearance properties of liposomes involving conjugated proteins for targeting", Advanced Drug Delivery Reviews, 1998, vol.32, p.99-118.
[비특허문헌 2]
Naoto Oku, Yoshihiro Tokudome, Tomohiro Asai and Hideo Tsukada, "Evaluation of Drug Targeting Strategies and Liposomal Trafficking", Current Pharmaceutical Design, 2000, vol.6, p.1669-1691.
[비특허문헌 3]
고지마 슈지, 소가와 유스케, 다지리 요시카, 야마자키 노보루, 「시알산 수식에 의한 당단백질 결합 리포솜의 세망 내피계에 대한 도입 억제와 촉진에 관한 검토」, Drug Delivery System, 2002, vol.17-1, p.63-68
도 1 은 시험예에서 측정한 리포솜의 혈중 농도의 경시 변화를 나타내는 도면이다.
도 2 는 실시예 1 방법 1 의 리포솜 제조공정을 나타내는 모식도이다. (a) 는 NGPE 를 함유하고 있는 PEG 수식 리포솜의 모식도이다. 도면 중 R' 는 올레오일기를 나타낸다. 이러한 리포솜 중 1 의 NGPE 만 화학식을 나타내고 있다. 실시예 1 방법 1 (2) 의 공정에서 NGPE 의 화살표로 나타낸 카르복실기에 WSC 가 결합되어, (b) 의 모식도로 나타낸 리포솜이 얻어진다. (b) 에서는, NGPE 와 WSC 의 결합 중 1 의 결합만 화학식을 사용하여 자세하게 나타내고 있지만, 다른 결합도 동일하다. 이어서, 화살표로 나타낸 카르보닐옥시기에 인간혈청 알부민 (rHSA) 의 아미노기가 결합되어, (c) 의 모식도로 나타낸 원하는 리포솜이 얻어진다. (c) 에서는, NGPE 와 rHSA 의 결합 중 1 의 결합만 화학식을 사용하여 자세하게 나타내었지만, 다른 결합도 동일하다. 또한 DSPE 와 PEG 의 결합에 대해서도 1 의 결합만 화학식을 사용하여 자세하게 나타내고 있지만, 다른 결합도 동일하다. 또, R 은 스테아로일기를 나타낸다.
도 3 은 실시예 1 방법 2 의 리포솜 제조공정을 나타내는 모식도이다. 실시예 1 방법 2 (1) 의 공정에서 DOPE 와 SPDP 를 결합시켜 DTP-DOPE 를 제조하고, (2) 의 공정에서 이러한 DTP-DOPE 와 PEG 결합 DSPE 를 구성 지질로서 사용하여 (a) 의 모식도로 나타낸 리포솜을 제조한다. 도면 중 R' 는 올레오일기를 나타낸다. 이러한 리포솜 중 1 의 DTP-DOPE 만 화학식을 나타내고 있다. 이러한 리포솜에 있어서, DTP-DOPE 의 디티오기에 대하여, (3) 의 공정에서 제조된 SH 화 인간 혈청 알부민 (rHSA ; 도면 중 (b)) 의 메르캅토기를 반응시키면, (c) 의 모식도로 나타낸 원하는 리포솜이 얻어진다. (c) 에서는, DTP-DOPE 와 rHSA 의 결합 중 1 의 결합만 화학식을 사용하여 자세하게 나타내었지만, 다른 결합도 동일하다. 또한 DSPE 와 PEG 의 결합에 대해서도 1 의 결합만 화학식을 사용하여 자세하게 나타내고 있지만, 다른 결합도 동일하다. 또, 도면 중 R 은 스테아로일기를 나타낸다.
도 4 는 실시예 2 방법 1 의 리포솜 제조공정을 나타내는 모식도이다. (a) 는 실시예 2 방법 1 (2) 의 공정에서 제조되는 SH 화 rHSA 의 모식도이다. (b) 는 실시예 2 방법 1 (1) 의 공정에서 제조되는 말레이미드-PEG 수식 리포솜의 모식도이다. (b) 에서는, 리포솜 중 1 의 말레이미드-PEG-DSPE 만 화학식을 나타내고 있다. (a) 의 모식도로 나타내는 SH 화 rHSA 와, (b) 의 모식도로 나타내는 리포솜을 반응시킴으로써, (c) 의 모식도로 나타낸 원하는 리포솜이 얻어진다. 여기서, 말레이미드기를 개재한 PEG 와 rHSA 의 결합 중 1 의 결합만 화학식을 사용하여 자세하게 나타내고 있지만, 다른 결합도 동일하다. 또, 도면 중 R 은 스테아로일기를 나타낸다.
도 5 는 실시예 2 방법 2 의 리포솜 제조공정을 나타내는 모식도이다. (a) 는 말레이미드-PEG 수식 DSPE 의 화학식을 나타낸다. (b) 는 실시예 2 방법 2 (2) 의 공정에서 제조되는 SH 화 rHSA 의 모식도이다. (b) 의 모식도로 나타내는 SH 화 rHSA 와 (a) 의 모식도로 나타내는 지질을 반응시킴으로써 (c) 의 모식도로 나타내는 rHSA-PEG-DSPE 복합체를 얻을 수 있다. 이것을 미리 제조한 리포솜에 삽입함으로써 (d) 의 모식도로 나타내는 원하는 리포솜이 얻어진다. 여기서, 말레이미드기를 개재한 PEG 와 rHSA 의 결합 및 상기 PEG 와 리포솜의 결합 중 1 의 결합만 화학식을 사용하여 자세하게 나타내고 있지만, 다른 결합도 동일하다. 또, 도면 중 R 은 스테아로일기를 나타낸다.
도 6 은 실시예 3 방법 1 의 리포솜 제조공정을 나타내는 모식도이다. (a) 는 NGPE 를 함유하고 있는 PEG 수식 리포솜의 모식도이다. 도면 중 R' 은 올레오일기를 나타낸다. 이러한 리포솜 중 1 의 NGPE 만 화학식을 나타내고 있다. 실시예 3 방법 1 (4) 의 공정에서, NGPE 의 화살표로 나타낸 카르복실기에 WSC 가 결합되어, (b) 의 모식도로 나타낸 리포솜이 얻어진다. (b) 에서는, NGPE 와 WSC 의 결합 중 1 의 결합만 화학식을 사용하여 자세하게 나타내고 있지만, 다른 결합도 동일하다. (c) 는 실시예 3 방법 1 (2) 의 공정에서 제조되는 SH 화 rHSA 의 모식도이다. (c) 의 모식도로 나타내는 SH 화 rHSA 와, (d) 의 모식도로 나타내는 말레이미드-PEG 수식 DSPE 를 반응시킴으로써 (e) 의 모식도로 나타내는 말레이미드기를 개재하여 폴리에틸렌글리콜이 결합되어 있는 알부민을 얻을 수 있다. (b) 의 모식도로 나타낸 리포솜과 (e) 의 모식도로 나타내는 알부민을 반응시킴으로써, 화살표로 나타낸 카르보닐옥시기에 rHSA 의 아미노기가 결합되어, (f) 의 모식도로 나타낸 원하는 리포솜이 얻어진다. 여기서, 말레이미드기를 개재한 PEG 와 rHSA 의 결합 및 상기 rHSA 와 리포솜의 결합 중 1 의 결합만 화학식을 사용하여 자세하게 나타내고 있지만, 다른 결합도 동일하다.
도 7 은 실시예 3 방법 2 의 리포솜 제조공정을 나타내는 모식도이다. 실시예 3 방법 2 (1) 의 공정에서 DOPE 와 SPDP 를 결합시켜 DTP-DOPE 를 제조하고, (2) 의 공정에서 이러한 DTP-DOPE 를 구성 지질로서 사용하여 (a) 의 모식도로 나타낸 리포솜을 제조한다. 도면 중 R' 는 올레오일기를 나타낸다. (b) 는 실시예 3 방법 1 (3) 의 공정에서 제조되는 SH 화 rHSA 의 모식도이다. (b) 의 모식도로 나타내는 SH 화 rHSA 와, (c) 의 모식도로 나타내는 말레이미드-PEG 수식 DSPE 를 반응시킴으로써, (d) 의 모식도로 나타내는 말레이미드기를 개재하여 폴리에틸렌글리콜이 결합되어 있는 알부민을 얻을 수 있다. (5) 의 공정에서, 상기 알부민의 아미노기를 메르캅토기로 변환함으로써, (e) 의 모식도로 나타내는 알부민을 얻을 수 있다. (a) 의 모식도로 나타낸 리포솜과 (e) 의 모식도로 나타내는 알부민을 반응시킴으로써, 화살표로 나타낸 디티오기에 알부민의 메르캅토기가 결합되어 (f) 의 모식도로 나타낸 원하는 리포솜이 얻어진다.
(발명을 실시하기 위한 최선의 형태)
통상 「리포솜」이란, 막 형상으로 집합된 지질 및 내부의 수상으로 구성되는 폐쇄소포를 의미하지만 (D. D. Lasic, 「liposomes: from basic to applications」, Elsevier Science Publishers, pp.1-171 (1993) 참조.), 본 발명에서는 특히 내수상을 갖는지의 여부에 관계없이 지질이 집합화한 미립자 전체를 의미한다. 또한 본 발명의 리포솜의 구조도 특별히 한정되지 않고, 다중층 리포솜일 수도 있고, 단층막 리포솜일 수도 있다.
본 발명의 리포솜의 크기는 특별히 한정되지 않지만, 체적 평균 입자직경이 약 10∼5000㎚ 정도, 바람직하게는 약 50∼500㎚ 정도이다. 리포솜의 체적 평균 입자직경은 동적 광산란법 등의 원리에 근거하여 구할 수 있다 (D. D. Lasic, 「Liposomes: from basic to applications」, Elsevier Science Publishers, pp.1-171 (1993) 참조).
본 발명의 리포솜을 구성하는 지질도 특별히 한정되지 않고, 공지된 지질일 수 있다. 상기 지질로는, 예를 들어 인지질, 당지질, 지방산, 양친매성 디알킬디메틸암모늄 (dialkyl dimethylammnonium amphiphiles), 폴리글리세롤알킬에테르, 폴리옥시에틸렌알킬에테르 등 (Liposome Technology, 2nd edition, vol.1, 141, 1993), 알킬글리코시드, 알킬메틸글루카미드, 알킬수크로스에스테르, 디알킬폴리옥시에틸렌에테르, 디알킬폴리글리세롤에테르 등 (Liposome Technology, 2nd edition, vol.1, 141, 1993), 폴리옥시에틸렌-폴리락트산 등의 양친매성 블록공중합체 등 (일본 특허공표공보 평6-508831호), 장쇄 알킬아민류 (테트라데실아민, 헥사데실아민, 스테아릴아민 등) 또는 장쇄 지방산히드라지드류 (미리스틴산히드라지드, 팔미틴산히드라지드 또는 스테아르산히드라지드 등) 등을 들 수 있다.
상기 인지질로는, 예를 들어 포스파티딜콜린 (대두 포스파티딜콜린, 난황 포스파티딜콜린, 디라우로일포스파티딜콜린, 디미리스토일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린 또는 디스테아로일포스파티딜콜린 등), 포스파티딜에탄올아민 (디라우로일포스파티딜에탄올아민, 디미리스토일포스파티딜에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜에탄올아민 또는 디스테아로일포스파티딜에탄올아민 등), 포스파티딜세린 (디라우로일포스파티딜세린, 디미리스토일포스파티딜세린, 디팔미토일포스파티딜세린 또는 디스테아로일포스파티딜세린 등), 포스파티딘산, 포스파티딜글리세롤 (디라우로일포스파티딜글리세롤, 디미리스토일포스파티딜글리세롤, 디팔미토일포스파티딜글리세롤 또는 디스테아로일포스파티딜글리세롤 등), 포스파티딜이노시톨 (디라우로일포스파티딜이노시톨, 디미리스토일포스파티딜이노시톨, 디팔미토일포스파티딜이노시톨 또는 디스테아로일포스파티딜이노시톨 등), 리조포스파티딜콜린, 스핑고미엘린, 난황 레시틴, 대두 레시틴 또는 수소첨가 인지질 등의 천연 또는 합성 인지질 등을 들 수 있다.
상기 당지질로는, 예를 들어 글리세로 당지질, 스핑고 당지질, 스테롤류 등을 들 수 있다. 상기 글리세로 당지질로는, 디갈락토실디글리세리드류 (디갈락토실디라우로일글리세리드, 디갈락토실디미리스토일글리세리드, 디갈락토실디팔미토일글리세리드 또는 디갈락토실디스테아로일글리세리드 등) 또는 갈락토실디글리세리드류(갈락토실디라우로일글리세리드, 갈락토실디미리스토일글리세리드, 갈락토실디팔미토일글리세리드 또는 갈락토실디스테아로일글리세리드 등) 등을 들 수 있다. 상기 스핑고 당지질로는, 예를 들어 갈락토실셀레브로시드, 락토실셀레브로시드 또는 간글로시드 등을 들 수 있다. 상기 스테롤류로는, 예를 들어 콜레스테롤, 콜레스테롤헥사숙시네이트, 3β-[N-(N',N'-디메틸아미노에탄)카르바모일]콜레스테롤, 에르고스테롤 또는 라노스테롤 등을 들 수 있다.
본 발명에 있어서는, 이들 지질은 단독으로, 또는 2종 이상을 조합하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 사용하는 폴리알킬렌글리콜류로는 특별히 한정되지 않지만, 알킬렌쇄가 탄소수 1∼6 정도인 것이 바람직하다. 또한 알킬렌쇄는, 본 발명에 지장이 없는 치환기, 예를 들어 수산기, 카르복실기, 아미노기, 알콕시기 등으로 치환되어 있어도 된다. 구체적으로는, 예를 들어 폴리에틸렌글리콜(PEG), 폴리프로필렌글리콜 등을 사용할 수 있지만, 폴리에틸렌글리콜을 사용하는 것이 특히 바람직하다. 폴리알킬렌글리콜류의 분자량은 특별히 한정되지 않지만, 분자량이 약 200∼400만 정도인 것, 바람직하게는 약 1,000∼50,000 정도인 것을 사용할 수 있다. 폴리에틸렌글리콜을 사용하는 경우에는 특히 상기 분자량인 것이 바람직하다.
본 발명에서 폴리알킬렌글리콜류의 함유량은 특별히 한정되지 않지만, 리포솜을 구성하는 총지질량에 대하여 약 0.5∼30몰% 정도가 바람직하다.
본 발명에서 사용하는 알부민은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 난(卵) 알부민, 혈청 알부민, 젖 알부민 또는 근육 알부민(미오겐) 등의 동물성 알부민, 또는 예를 들어 류코신, 레구멜린 또는 리신 등의 식물성 알부민 등을 들 수 있다. 그 중에서도, 본 발명에서는 투여대상과 동일한 동물의 혈청 알부민을 사용하는 것이 바람직하다. 또한 본 발명에서 사용하는 알부민은, 유전자 재조합 기술에 의해 얻어지는 알부민일 수도 있다. 상기 알부민은, 야생형 알부민과 동일한 아미노산 서열을 갖고 있을 수도 있고, 본 발명의 목적에 반하지 않는 한 1 내지 복수 개, 바람직하게는 1∼몇 개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가되어 있는 변이형 알부민일 수도 있다. 이러한 알부민은 공지된 기술에 따라 용이하게 제작할 수 있다. 본 발명에서는, 감염 위험성이 없다는 점에서 유전자 재조합 알부민을 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명에서 알부민의 함유량은 특별히 한정되지 않지만, 리포솜을 구성하는 총지질량에 대하여 약 0.0001∼10몰% 정도가 바람직하다.
본 발명의 리포솜은, 상기 서술한 폴리알킬렌글리콜류와 알부민을 함유하고 있다면 어떠한 구조든 취할 수 있다. 폴리알킬렌글리콜류와 알부민의 결합의 위치결합 양식은 어떠한 것이든 좋다. 그러나, 본 발명의 리포솜은 폴리알킬렌글리콜류와 알부민을 표면에 갖고 있는 것이 바람직하다. 또한 폴리알킬렌글리콜류 및 알부민은 리포솜에 대하여, 예를 들어 흡착, 전기적 결합, 물리적 결합 (반 데르 발스의 힘 등), 화학 결합 등, 어떠한 형식으로 결합되어 있어도 되지만, 화학 결합에 의해 결합되어 있는 것이 바람직하다.
본 발명의 리포솜의 바람직한 양태로는, (a) 폴리알킬렌글리콜류와 알부민이 각각 리포솜에 결합되어 있는 경우를 들 수 있다. 또한 (b) 폴리알킬렌글리콜류를 개재하여 리포솜과 알부민이 결합되어 있는 경우를 들 수 있다. 즉, 폴리알킬렌글리콜류에 리포솜이 결합되어 그 결합부위와는 다른 부위에서 알부민이 폴리알킬렌글리콜류에 결합되어 있는 경우이다. 그리고, (c) 알부민을 개재하여 리포솜과 폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 경우를 들 수 있다. 즉, 알부민에 리포솜이 결합되어 그 결합부위와는 다른 부위에서 폴리알킬렌글리콜류가 알부민에 결합되어 있는 경우이다. 본 발명에서는 상기 (a)∼(c) 양태의 리포솜이 혼재하고 있어도 된다.
본 발명에 관한 리포솜은 공지 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 본 발명에 관한 리포솜의 바람직한 제조방법을 상기 3개의 실시양태로 나누어 하기에 설명한다.
(a) 폴리알킬렌글리콜류와 알부민이 각각 리포솜에 결합되어 있는 경우, 본 발명에 관한 리포솜의 제조방법으로는, (ⅰ) 폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 리포솜에 알부민을 결합시키는 방법, (ⅱ) 알부민이 결합되어 있는 리포솜에 폴리알킬렌글리콜류를 결합시키는 방법, (ⅲ) 폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 지질과 알부민이 결합되어 있는 지질을 사용하여 리포솜을 제조하는 방법 등을 들 수 있다.
상기 (ⅰ) 의 방법에 있어서, 폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 리포솜은 공지된 방법을 사용하여 용이하게 제조할 수 있다. 예를 들어, 폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 지질을 사용하여 리포솜을 제조한다고 하는 방법을 들 수 있다. 상기 「폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 지질」로는, 폴리알킬렌글리콜류 수식 인지질, 폴리알킬렌글리콜알킬에테르, 폴리알킬렌글리콜 피마자유 유도체 또는 폴리알킬렌글리콜 소르비탄 지방산에스테르류 등을 들 수 있다. 이들 지질의 「폴리알킬렌글리콜」부분은 폴리에틸렌글리콜이 바람직하다. 「폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 지질」로는, 폴리에틸렌글리콜 수식 인지질이 바람직하고, 인지질이 포스파티딜에탄올아민류인 것이 보다 바람직하다.
보다 구체적으로는, 예를 들어 PEG-DSPE[1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스파티딜에탄올아민-N-(폴리에틸렌글리콜)],
다음 식 (11):
CH3O-(CH2CH2O)n-CO-CH2CH2-CO-NH-PE (11)
(식 중 n 은 5∼100,000 의 정수, 바람직하게는 10∼1,200 의 정수를 나타내고, -NH-PE 는 호스파티딜아미노기를 나타낸다.):
로 나타내는 N-모노메톡시폴리에틸렌글리콜숙시닐포스파티딜에탄올아민류,
다음 식 (12):
(식 중 n 및 -NH-PE 는 상기와 동일한 의미이다):
로 나타내는 N-모노메톡시폴리에틸렌글리콜(2-클로로-1,3,5-트리아진-4,6-디일)숙시닐포스파티딜에탄올아민류,
다음 식 (13):
CH3O-(CH2CH2O)n-1-CO-NH-PE (13)
(식 중 n 및 -NH-PE 는 상기와 동일한 의미이다):
로 나타내는 N-모노메톡시폴리에틸렌글리콜카르보닐포스파티딜에탄올아민류,
또는 다음 식 (14):
CH3O-(CH2CH2O)n-CH2CH2-NH-PE (14)
(식 중 n 및 -NH-PE 는 상기와 동일한 의미이다):
로 나타내는 N-모노메톡시폴리에틸렌글리콜에틸렌포스파티딜에탄올아민류를 들 수 있다.
이상과 같은 「폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 지질」은 공지된 기술을 사용하여 용이하게 제조할 수 있고, 또한 시판품을 사용해도 된다. 이러한 지질을 구성 지질로 사용하여 리포솜을 제조하는 방법으로는 특별히 한정되지 않고, 공지된 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 상기 지질 및 수상을 사용하여 박막법, 역상 증발법, 에탄올 주입법, 에테르 주입법, 탈수-재수화법 등에 의해 리포솜을 제조할 수 있고, 초음파 조사법, 동결 융해 후 초음파 조사법, 익스트루전법, 프렌치프레스법, 호모디나이제이션법 등의 방법에 의해 체적 평균 입자직경을 조절할 수 있다 (D. D. Lasic, 「Liposomes: from basic to applications」, Elsevier Science Publishers, pp.1-171 (1993)참조.). 여기서 「수상」이란 리포솜 내부를 구성하는 수용액을 의미하며, 본 기술분야에서 통상 사용되는 것이면 특별히 제한은 없지만, 염화나트륨 수용액, 인산 완충액 또는 아세트산 완충액 등의 완충액, 글루코스 수용액, 트레할로스 등의 당 수용액 또는 이들의 혼합 수용액이 적합하다. 일반적으로 생체 내에 투여된 리포솜의 구조를 안정적으로 유지하기 위해, 리포솜의 제조에 사용되는 수상은 리포솜 외, 즉 체액에 대하여 등장에 가깝고, 리포솜 내외에 가해지는 침투압이 작은 것이 바람직하다.
얻어진 폴리알킬렌글리콜류 결합 리포솜에 알부민을 결합하기 위해서는, 예를 들어 메르캅토기-말레이미드기 커플링 수법 (sulfhydryl-maleimide coupling technique) (Derksen, J.T.P. and Scherphof, G.L. (1985) Biochem. Biophys. Acta 814, p.151-155) 등의 공지 수법을 사용하여 용이하게 실시할 수 있다. 그 중에서도 반응성 개재기를 개재하여 상기 리포솜과 알부민을 결합시키는 방법이 바람직하게 채용될 수 있다. 반응성 개재기로는 특별히 한정되지 않고, 당기술분야에서 공지된 기일 수 있다.
바람직한 양태로는 하기의 방법을 들 수 있다. 상기한 바와 같이 폴리알킬렌글리콜류 결합 리포솜을 제작할 때 구성 지질로서 폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 지질에 더하여 반응성 개재기를 갖는 지질을 사용한다. 반응성 개재기를 갖는 지질로는, 1,2-디올레일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-(글루타릴)(1,2-Dioleoyl- sn -Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-(Glutaryl), 이하 「NGPE」라 약칭함) 이 바람직하다. 이러한 구성 지질을 사용하여 상기 서술한 바와 같이 폴리알킬렌글리콜류 결합 리포솜을 제작한 후, 상기 리포솜이 갖는 반응성 개재기를 개재하여 알부민을 결합시킨다. NGPE 를 사용한 경우는, NGPE 의 말단카르복실기에 알부민의 아미노기를 결합시키는 것이 바람직하다. 이 때, 상기 리포솜이 갖는 반응성 개재기의 반응성을 높이기 위한 관능기를 미리 결합시켜, 이러한 관능기와 치환시키는 형태로 알부민을 결합해도 된다. 예를 들어, NGPE 를 사용한 경우는 수용성 카르보디이미드를 사용해서 NGPE 에 미리 카르보디이미드기를 결합시켜 상기 카르보디이미드기와 치환시키는 형태로 NGPE 에 알부민을 결합시킨다.
다른 바람직한 양태로는, 반응성 개재기를 갖는 지질로서 1,2-디올레일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(1,2-Dioleoyl- sn -Glycero-3-Phosphoethanolamine, 이하 「DOPE」라 약칭함) 의 아미노기에 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(3-(2-pyridyldithio)propionate, 이하 「DTP」라 약칭함) 가 결합되어 있는 지질 (이하 「DTP-DOPE」라 약칭함) 을 사용하는 방법을 들 수 있다. 구체적으로는, 폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 지질에 더하여 DTP-DOPE 를 구성 지질로서 사용하고, 상기 서술한 바와 같이 폴리알킬렌글리콜류 결합 리포솜을 제작한다. 한편, 알부민에 메르캅토기를 도입한다. 메르캅토기의 도입방법은 특별히 한정되지 않고, 공지된 방법을 사용할 수 있다. 바람직하게는, 알부민에 DTP 를 도입하고, 이어서 디티오트레이톨(dithiothreitol)과 반응시킴으로써 메르캅토기가 도입된 알부민을 얻을 수 있다. 상기 리포솜과 알부민을 반응시킴으로써 폴리알킬렌글리콜류 결합 리포솜에 알부민을 결합시킬 수 있다.
상기 (ⅱ) 및 (ⅲ) 에 기재된 방법은 이상 서술해 온 기재에 따라 용이하게 실시할 수 있다.
(b) 폴리알킬렌글리콜류를 개재하여 리포솜과 알부민이 결합되어 있는 경우, 본 발명에 관한 리포솜의 제조방법으로는, (ⅰ) 폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 리포솜을 제조하여 상기 리포솜의 폴리알킬렌글리콜류에 알부민을 결합시키는 방법, (ⅱ) 알부민이 결합되어 있는 폴리알킬렌글리콜류에 알부민과의 결합부위와는 다른 부위에서 리포솜과 결합시키는 방법 등을 들 수 있다.
상기 (ⅰ) 의 방법에 있어서, 폴리알킬렌글리콜류 결합 리포솜의 제조방법은 상기 서술한 것과 동일하다. 상기 리포솜의 폴리알킬렌글리콜류에 알부민을 결합시키기 위해서는 공지된 수법을 사용할 수도 있다. 그 중에서도 반응성 개재기를 개재하여 폴리알킬렌글리콜류와 알부민을 결합시키는 수법이 채용될 수 있다. 반응성 개재기로는 특별히 한정되지 않고, 당기술분야에서 공지된 기일 수도 있으나, 말레이미드기를 바람직한 예로 들 수 있다.
보다 구체적으로는 하기 방법을 들 수 있다. 폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 지질에 있어서, 폴리알킬렌글리콜류에 반응성 관능기를 결합시켜 둔다. 예를 들어, 폴리알킬렌글리콜류의 수산기에 말레이미드기가 결합되어 있는 것이 바람직하다. 얻어진 지질을 사용하여 상기와 동일하게 하여 리포솜을 제조한다. 얻어진 리포솜과 알부민을 반응시킴으로써 리포솜에 결합되어 있는 폴리알킬렌글리콜류의 반응성 관능기를 개재하여 알부민이 결합되어, 원하는 리포솜이 얻어진다. 이 때 상기 반응성 관능기와 알부민이 결합되기 쉽게 알부민에 상기 반응성 관능기에 따른 치환기를 도입하는 등 공지된 처리를 실시할 수도 있다. 상기 반응성 관능기가 말레이미드기인 경우는, 알부민에 미리 메르캅토기를 도입해 두는 것이 바람직하다. 메르캅토기의 도입방법은 특별히 한정되지 않고, 공지된 방법을 사용해도 된다. 보다 구체적으로는, 알부민과 아세틸티오아세테이트를 반응시켜 알부민의 아미노기에 아세틸티오아세테이트를 결합시키고, 이어서 아세틸기를 탈리함으로써 메르캅토기가 도입된 알부민이 얻어진다.
상기 (ⅱ) 의 방법에 있어서, 폴리알킬렌글리콜류와 알부민을 결합시키는 방법은 특별히 한정되지 않고 공지된 수법을 사용할 수 있지만, 반응성 개재기를 개재하여 결합시키는 것이 바람직하다. 반응성 개재기로는 특별히 한정되지 않고, 당기술분야에서 공지된 기일 수 있지만, 말레이미드기를 바람직한 예로 들 수 있다. 이어서, 얻어진 알부민 결합 폴리알킬렌글리콜류에 알부민과의 결합부위와는 다른 부위에서 리포솜과 결합시킨다. 그 방법도 특별히 한정되지 않고 공지된 수법을 사용할 수 있다. 바람직하게는, 폴리알킬렌글리콜류로서 미리 지질이 결합되어 있는 폴리알킬렌글리콜류를 사용하여, 전공정에서 얻어진 알부민-폴리알킬렌글리콜류-지질 복합체를 리포솜에 삽입하는 방법을 들 수 있다.
보다 구체적으로는, 앞서 서술한 것과 같이 하여 폴리알킬렌글리콜류를 지질에 결합시킨다. 이어서, 얻어진 지질의 폴리알킬렌글리콜류에 반응성 관능기를 결합시킨다. 예를 들어 폴리알킬렌글리콜류의 수산기에 말레이미드기를 결합시키는 것이 바람직하다. 이어서, 얻어진 지질의 폴리알킬렌글리콜류에 반응성 관능기를 개재하여 알부민을 반응시킨다. 이 때, 상기 반응성 관능기와 알부민이 결합되기 쉽도록 알부민에 상기 반응성 관능기에 따른 치환기를 도입하는 등 공지된 처리를 실시해 둘 수도 있다. 상기 반응성 관능기가 말레이미드기인 경우는, 알부민에 미리 메르캅토기를 도입해 두는 것이 바람직하다. 메르캅토기의 도입방법은 특별히 한정되지 않고, 공지된 방법을 사용할 수 있다. 보다 구체적으로는, 알부민과 아세틸티오아세테이트를 반응시켜 알부민의 아미노기에 아세틸티오아세테이트를 결합시키고, 이어서 아세틸기를 탈리함으로써 메르캅토기가 도입된 알부민이 얻어진다. 한편, 리포솜을 공지된 방법에 의해 제작해 두고, 얻어진 알부민-폴리알킬렌글리콜류-지질 복합체를 리포솜에 삽입함으로써 원하는 리포솜을 얻을 수 있다.
(c) 알부민을 개재하여 리포솜과 폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 경우, 본 발명에 관한 리포솜의 제조방법으로는 (ⅰ) 폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 알부민에 폴리알킬렌글리콜류와의 결합부위와는 다른 부위에서 리포솜과 결합시키는 방법, (ⅱ) 알부민이 결합되어 있는 리포솜을 제조하여 상기 리포솜의 알부민에 폴리알킬렌글리콜류를 결합시키는 방법 등을 들 수 있다.
상기 (ⅰ) 의 방법에 있어서, 폴리알킬렌글리콜류와 알부민을 결합시키는 방법은 특별히 한정되지 않고 공지된 수법을 사용할 수 있지만, 반응성 개재기를 개재하여 결합시키는 것이 바람직하다. 반응성 개재기로는 특별히 한정되지 않고, 당기술분야에서 공지된 기일 수 있지만, 말레이미드기를 바람직한 예로 들 수 있다. 보다 구체적으로는 폴리알킬렌글리콜류에 반응성 관능기를 결합시킨다. 예를 들어, 폴리알킬렌글리콜류의 수산기에 말레이미드기를 결합시키는 것이 바람직하다. 이어서, 폴리알킬렌글리콜류에 반응성 관능기를 개재하여 알부민을 반응시킨다. 이 때, 상기 반응성 관능기와 알부민이 결합되기 쉽도록 알부민에 상기 반응성 관능기에 따른 치환기를 도입하는 등 공지된 처리를 실시해 두어도 된다. 상기 반응성 관능기가 말레이미드기인 경우는, 알부민에 미리 메르캅토기를 도입해 두는 것이 바람직하다. 메르캅토기의 도입방법은 특별히 한정되지 않고, 공지된 방법을 사용할 수 있다. 보다 구체적으로는, 알부민과 아세틸티오아세테이트를 반응시켜 알부민의 아미노기에 아세틸티오아세테이트를 결합시키고, 이어서 아세틸기를 탈리함으로써 메르캅토기가 도입된 알부민이 얻어진다.
이어서, 얻어진 폴리알킬렌글리콜류가 결합되어 있는 알부민과 리포솜을 결합시킨다. 그 방법은 상기 서술한 바와 같다.
상기 (ⅱ) 의 방법에 있어서, 알부민을 리포솜에 결합시키는 방법은 상기한 바와 같다. 이어서, 상기 알부민에 폴리알킬렌글리콜류를 결합시킨다. 그 방법도 상기한 것과 동일할 수 있다.
상기 제조방법에서 얻어지는 하기 중간체,
식 (3):
(Alb-NH)-CO-CH2-CH2-SH (3)
(식 중 Alb-NH 는 Alb-NH2 로 나타내는 알부민 분자로부터 그 아미노기의 1개의 수소원자를 제거하여 형성되는 기를 나타낸다.):
로 나타내는 화합물,
식 (5):
(Alb-NH)-CO-CH2-SH (5)
(식 중 Alb-NH 는 상기한 정의와 동일하다):
로 나타내는 화합물,
식 (6):
[식 중 Alb-NH 는 상기한 정의와 동일하다. n 은 5∼100,000 의 정수, 바람직하게는 10∼1,200 의 정수를 나타낸다. R 은 탄소수 2∼35 의 포화 또는 불포화 지방산 유래 아실기를 나타낸다. 상기 지방산은, 보다 바람직하게는 탄소수 6∼18, 가장 바람직하게는 탄소수 8∼16 이다. 그러한 지방산으로는, 구체적으로는 옥탄산 (바람직하게는 카프릴산), 데칸산 (바람직하게는 카프르산), 도데칸산 (바람직하게는 라우르산), 헥사데칸산 (바람직하게는 팔미트산), 옥타데칸산 (바람직하게는 스테아르산), 그들의 모노엔 또는 폴리엔 지방산 (바람직하게는 올레산) 등을 들 수 있다. 또한 그러한 지방산 유래 아실기의 구체예로는, 옥타노일기 (바람직하게는 카프릴로일기), 데카노일기 (바람직하게는 카프리노일기), 도데카노일기 (바람직하게는 라우로일기), 헥사데카노일기 (바람직하게는 팔미토일기), 옥타데카노일기 (바람직하게는 스테아로일기) 등을 들 수 있고, 1개 또는 그 이상의 2중 결합을 갖고 있어도 된다 (예를 들어 올레오일기)]:
로 나타내는 화합물,
식 (7):
(식 중 -NH-Alb-NH2 는 H2N-Alb-NH2 로 나타내는 알부민 분자의 1개의 아미노기에서 수소원자 1개를 제거하여 형성되는 기를 나타낸다. n 은 상기 정의와 동일하다):
로 나타내는 화합물,
식 (8):
(식 중 -NH-Alb-NH- 는 H2N-Alb-NH2 로 나타내는 알부민 분자로부터 그 2개의 아미노기의 각각 1개씩의 수소원자를 제거하여 형성되는 기를 나타낸다. n 은 상기 정의와 동일하다):
로 나타내는 화합물은 신규물질이다.
본 발명의 리포솜은, 바람직하게는 생리활성 성분을 담지시켜 사용한다. 생리활성 성분의 담지 형태는 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 생리활성 성분은 리포솜 안에 봉입되어 있어도 되고, 리포솜의 표면에 흡착 또는 결합되어 있어도 된다. 또 생리활성 성분은 알부민이나 폴리알킬렌글리콜류에 흡착 또는 결합되어 있어도 된다.
상기 생리활성 성분으로는, 동물, 바람직하게는 인간에게 투여할 수 있는 임의의 화합물 또는 물질조성물이라면 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어 상기 생리활성 성분으로는, 체내에서 생리활성을 발휘하여 질환의 예방 또는 치료에 효과적인 화합물 또는 조성물, 예를 들어 조영제 등의 진단에 사용하는 화합물 또는 조성물, 그리고 유전자 치료에 유용한 유전자 등도 포함된다. 상기 생리활성 성분으로는, 구체적으로 아시클로버, 지도부딘(zidovudin), 인터페론류 등의 항바이러스제; 아미노글리코시드, 세파로스폴린, 테트라사이클린 등의 항균제; 폴리엔계 항생 물질, 이미다졸, 트리아졸 등의 항진균제; 엽산, 류린 및 피리미딘 유사체 등의 항대사제; 안트라사이클린 항생 물질, 식물알칼로이드 등의 항종양제 ; 콜레스테롤 등의 스테롤; 예를 들어 당이나 전분 등의 탄수화물; 세포수용체 단백질, 면역글로불린, 효소, 호르몬, 신경전달물질, 당단백질 등의 아미노산, 펩티드, 단백질; 색소; 방사성 동위체, 방사성 동위체 표지 화합물 등의 방사선 표지; 방사선 불투과성 화합물; 형광성 화합물; 산동성 화합물; 기관지 확장제; 국소마취약 등을 들 수 있다.
본 발명에서는, 그 중에서도 생리활성 성분으로서 항종양제를 사용하는 것이 바람직하다. 상기 항종양제로는 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 알킬화제, 각종 대사길항제, 항종양성 항생물질, 그 밖에 항종양제, 항종양성 식물성분, BRM (생물학적 응답성 제어물질), 혈관신생 저해제, 세포접착 저해제, 매트릭스·메탈로프로테아제 저해제 또는 호르몬 등을 들 수 있다.
보다 구체적으로는, 알킬화제로서 예를 들어 나이트로젠 머스타드, 나이트로젠 머스타드 N-옥시드, 클로람부실 등의 알킬화제; 예를 들어, 카르보콘, 티오테파 등 아지리딘계 알킬화제; 예를 들어 디브로모만니톨, 디브로모글루시톨 등의 에폭시드계 알킬화제; 예를 들어, 카르무스틴, 로무스틴, 세무스틴, 니무스틴하이드로클로라이드, 스트렙토조신, 클로로조토신, 라니무스틴 등 니트로소우레아계 알킬화제; 부술판; 토실산임프로술판; 다카르바진 등을 들 수 있다. 각종 대사길항제로는, 예를 들어 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 티오이노신 등의 퓨린 대사길항제, 플루오로우라실, 테가푸르, 테가푸르·우라실, 칼모푸르, 독시플루리딘, 브록스우리딘, 시타라빈, 에노시타빈 등의 피리미딘 대사길항제, 메토트렉세이트, 트리메트렉세이트 등의 엽산 대사길항제 등 및 그 염 또는 복합체를 들 수 있다.
항종양성 항생물질로는, 예를 들어 마이토마이신 C, 블레오마이신, 페플로마이신, 다우노루비신, 아클라루비신, 독소루비신, 피라루비신, THP-아드리아마이신, 4'-에피독소루비신, 에피루비신 등의 안트라사이클린계 항생물질 항종양제, 크로모마이신 A3, 악티노마이신 D 등, 및 그 염 또는 복합체를 들 수 있다. 그 밖의 항종양제로는, 예를 들어 시스플라틴, 카르보플라틴, 타목시펜, 캄프토테신, 이포스파미드, 시클로포스파미드, 멜파란, L-아스파라기나제, 아세크라톤, 시조피란, 피시바닐, 우베니멕스, 크레스틴 등, 및 그 염 또는 복합체를 들 수 있다. 또한 프로카르바진, 피포브로만, 네오카르지노스타틴, 히드록시우레아 등도 들 수 있다.
항종양성 식물 성분으로는, 예를 들어 빈데신, 빈크리스틴, 빈브라스틴 등의 빈카알칼로이드류, 에토포시드, 테니포시드 등의 에피포도필로톡신류 및 그 염 또는 복합체를 들 수 있다. BRM 으로는, 예를 들어 종양괴사 인자, 인도메타신 등 및 그 염 또는 복합체를 들 수 있다. 혈관신생 저해제로는, 예를 들어 푸마디롤 유도체 및 그 염 또는 복합체를 들 수 있다. 세포접착 저해제로는, 예를 들어 RGD 배열을 갖는 물질 및 그 염 또는 복합체를 들 수 있다. 매트릭스·메탈로프로테아제 저해제로는, 예를 들어 마리마스타트, 바치마스타트 등 및 그 염 또는 복합체를 들 수 있다. 호르몬으로는, 예를 들어 히드로콜티존, 덱사메타존, 메틸프레드니졸론, 프레드니졸론, 프라스테론, 베타메타존, 트리암시놀론, 옥시메톨론, 난드롤론, 메테놀론, 포스페스트롤, 에티닐에스트라디올, 클로르마디논, 메드록시프로게스테론 등 및 그 염 또는 복합체를 들 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은, 상기 생리활성 성분을 담지하고 있는 본 발명의 리포솜만으로 이루어지는 것일 수도 있지만, 통상 그 리포솜과 약리학적으로 허용되는 담체를 자체 공지된 방법 [제제 기술분야에서 관용인 방법, 예를 들어 일본약전 (예를 들어 제13개정) 에 기재된 방법 등] 에 따라 혼합함으로써 제조된다. 약학적으로 허용되는 담체로는, 제제 소재로서 관용의 각종 유기 또는 무기 담체 물질이 사용되고, 고형 제제에서의 부형제, 활택제, 결합제, 붕괴제; 액상제제에서의 용제, 용해보조제, 현탁화제, 등장화제, 완충제, 무통화제 등을 들 수 있다. 또한 필요에 따라 계면활성제, 발포제, 색소, 산미제, 방부제, 항산화제, 착색제, 감미제, 교미제 등의 제제 첨가물을 사용할 수도 있다.
약학적으로 허용되는 담체로서, 보다 구체적으로는 시트르산칼슘, 인산칼슘 등의 무기염의 부형제; 예를 들어 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘, 경질무수규산, 함수이산화규소 등의 활택제; 히드록시프로필셀룰로오스, 히들록시프로필메틸셀룰로오스, α화 전분, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈, 아라비아고무 분말, 젤라틴 또는 풀루란 등의 결합제; 저치환도 히드록시프로필셀룰로오스나 결정 셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 옥수수전분, 부분알파화 전분이나 히드록시프로필스타치 등의 각종 전분 또는 전분 유도체, 크로스포비돈 또는 벤토나이트 등의 붕괴제 등을 들 수 있다.
또한 염 용액, 포도당 용액 또는 염 용액과 포도당 용액의 혼합물 등의 용제; 예를 들어 덱스트란, 폴리비닐피롤리돈, 벤조산나트륨, 에틸렌디아민, 살리실산아미드, 니코틴산아미드, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 유도체 등 용해보조제; 예를 들어 붕산완충제, 인산완충제, 시트르산완충제, 타르타르산완충제, 아세트산완충제 등의 완충제; 예를 들어 알부민, 글리세린, 프로필렌글리콜 등의 다가알코올, 리도카인 염산염, 벤질알코올 등의 무통화제 등을 들 수 있다.
또한 예를 들어 소르비탄지방산에스테르, 폴리옥시에틸렌지방산에스테르, 인지질, 글리세린지방산에스테르, 폴리에틸렌글리콜지방산에스테르, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 자당지방산에스테르 등의 계면활성제; 예를 들어 탄산수소나트륨, 탄산나트륨, 탄산칼슘 등의 발포제; 예를 들어 시트르산, 타르타르산, 말산 등의 산미제; 예를 들어 삼이산화철, 황색 삼이산화철, 타르계 색소 등의 색소; 예를 들어 레몬, 레몬라임, 오렌지, 파인, 민트, 멘톨 등의 향료; 예를 들어 사카린나트륨, 글리틸리틴 이칼륨, 아스파르템, 스테비아, 소마틴 등의 감미제; 예를 들어 시트르산, 시트르산나트륨, 숙신산, 타르타르산, 푸마르산, 글루타민산 등의 교미제 등을 들 수 있다.
그리고, 안정화제로는 예를 들어 당류나 아황산나트륨 등을 들 수 있다. 당류로는, 글루코오스, 프룩토오스, 자일리톨, 푸코오스, 갈락토오스 등의 단당류; 말토오스, 수크로오스, 락토오스, 락트토오스, 메리비오스 등의 이당류; 프룩토올리고당, 갈락토올리고당, 락토올리고당 등의 올리고당류; 덱스트란 등의 다당류 등을 들 수 있다. 보존제로는, 예를 들어 파라옥시벤조산에스테르, 벤질알코올, 클로로크레졸, 페네틸알콜, 염화벤제토늄 등을 들 수 있다. 킬레이트제로는, 예를 들어 에데트산나트륨, 시트르산나트륨 등을 들 수 있다. 항산화제로는, 예를 들어 아황산나트륨, 아황산수소나트륨, 아스코르브산나트륨, 티오황산나트륨 등을 들 수 있다.
본 발명에 관한 의약의 제형으로는, 예를 들어 정제, 캡슐제 (소프트캡슐, 마이크로캡슐, 장용성 캡슐 포함), 산제, 과립제, 시럽제 등의 경구제; 및 주사제 (예, 피하 주사제, 정맥내 주사제, 근육내 주사제, 복강내 주사제 등), 외용제 (예, 경비 투여제제, 경피 제제, 연고제 등), 좌제 (예, 직장좌제, 질좌제 등), 펠릿, 점적제, 서방성 제제 (예, 서방성 마이크로캡슐 등) 등의 비경구제를 들 수 있다. 본 발명에 관한 의약은 주사제의 제형을 갖고 있는 것이 특히 바람직하다.
본 발명에 관한 의약의 투여량은 리포솜이 갖는 생리활성물질의 종류, 의약의 제형, 치료해야 할 병태의 종류, 증상 및 질환의 중독도, 환자의 연령, 성별 또는 체중, 투여방법 등에 따라 다르기 때문에 일률적으로는 말할 수 없지만, 의사가 상기 상황을 종합적으로 판단하여 결정할 수 있다.
본 발명에 관한 의약의 투여경로는 특별히 한정되지 않고, 상기 서술한 바와 같은 본 발명에 관한 의약의 형태에 의해 경구투여해도 되고, 비경구 투여해도 된다. 예를 들어, 본 발명에 관한 의약이 주사제인 경우, 예를 들어 정맥내 주사, 피하 주사, 피내 주사, 근육내 주사 또는 복강내 주사와 같은 의료상 적당한 투여형태를 예시할 수 있다.
본 발명에 관한 의약은, 본 발명의 리포솜에 담지되어 있는 생리활성물질의 종류에 따라 여러 가지 질환의 예방 및 치료를 할 수 있다. 예를 들어 생리활성물질이 항종양제인 경우, 본 발명에 관한 의약은, 예를 들어 대장암, 뇌종양, 두경부암, 유방암, 폐암, 식도암, 위암, 간암, 담낭암, 담관암, 췌장암, 췌도세포암, 융모암, 결장암, 신세포암, 부신피질암, 방광암, 정소암, 전립선암, 고환종양, 난소암, 자궁암, 융모암, 갑상선암, 악성 카르시노이드 종양, 피부암, 악성 흑색종, 골육종, 연부조직육종, 신경아세포종, 윌름 종양, 망막아세포종, 멜라노마, 편평상피암 등 종양의 예방 또는 치료에 유용하다.
(발명의 개시)
본 발명은 혈중 체류성이 보다 향상된 리포솜을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자들은 상기 목적을 달성하기 위해 예의 검토한 결과, 리포솜에 폴리에틸렌글리콜 (이하 PEG 와 약칭하기도 함) 과 알부민을 동시에 결합함으로써, 상승효과적으로 리포솜의 혈중 체류성이 향상되는 것을 발견하였다. 또한 PEG 단독 수식에서는 혈중 체류성에서 효과가 거의 인정되지 않을 정도의 PEG 수식량에서도, 알부민을 병용 수식함으로써 분명한 효과가 인정되는 것을 발견하였다. 또 PEG 와 알부민을 리포솜 표면에 결합시키는 보고는 아직 없다.
즉, 본 발명은,
(1) 폴리알킬렌글리콜류와 알부민이 결합되어 있는 리포솜,
(2) 추가로 생리활성 성분을 함유하고 있는 상기 (1) 에 기재된 리포솜,
(3) 생리활성 성분이 의약활성물질인 상기 (2) 에 기재된 리포솜,
(4) 의약활성물질이 항종양제인 상기 (3) 에 기재된 리포솜,
(5) 상기 (2)∼(4) 에 기재된 리포솜을 함유하고 있는 의약 조성물,
(6) 주사제인 상기 (5) 에 기재된 의약 조성물,
(7) 폴리알킬렌글리콜류와 알부민이 결합되어 있고, 또한 항종양제를 함유하고 있는 리포솜을 포함하는 의약 조성물을 투여하는 것을 특징으로 하는 암의 치료방법,
(8) 폴리알킬렌글리콜류와 알부민이 결합되어 있고, 또한 생리활성 성분을 함유하고 있는 리포솜의, 생리활성 성분의 체내 체류시간의 연장을 위한 용도,
(9) 하기 식 (1):
(식 중 R 은 탄소수 2∼35 의 지방산 유래 아실기를 나타낸다):
로 나타내는 화합물을 구성 지질로서 갖는 리포솜과 알부민을 결합시키거나,
하기 식 (2):
(식 중 R 은 상기 정의와 동일하다):
로 나타내는 화합물을 구성 지질로서 갖는 리포솜과,
식 (3):
(Alb-NH)-CO-CH2-CH2-SH (3)
(식 중 Alb-NH 는 Alb-NH2 로 나타내는 알부민 분자에서 그 아미노기의 1개 수소원자를 제거하여 형성된 기를 나타낸다):
으로 나타내는 화합물을 결합시키거나,
하기 식 (4):
(식 중 n 은 5∼100,000 의 정수, 바람직하게는 10∼1,200 의 정수를 나타낸다. R 은 상기 정의와 동일하다):
로 나타내는 화합물을 구성 지질로서 갖는 리포솜과,
식 (5):
(Alb-NH)-CO-CH2-SH (5)
(식 중 Alb-NH 는 상기 정의와 동일하다):
로 나타내는 화합물을 결합시키거나,
하기 식 (6):
(식 중 n, R 및 Alb-NH 는 상기 정의와 동일하다):
으로 나타내는 화합물을 리포솜에 삽입하거나,
상기 식 (1) 로 나타내는 화합물을 구성 지질로서 갖는 리포솜과, 하기 식 (7):
(식 중 -NH-Alb-NH2 는 H2N-Alb-NH2 로 나타내는 알부민 분자의 1개의 아미노기에서 수소원자 1개를 제거하여 형성되는 기를 나타낸다. n 은 상기 정의와 동일하다):
로 나타내는 화합물을 결합시키거나,
상기 식 (2) 로 나타내는 화합물을 구성 지질로서 갖는 리포솜과, 하기 식 (8):
(식 중 -NH-Alb-NH- 는 H2N-Alb-NH2 로 나타내는 알부민 분자에서 그 2개의 아미노기 각각 1개씩의 수소원자를 제거하여 형성되는 기를 나타낸다. n 은 상기 정의와 동일하다):
로 나타내는 화합물을 결합시키는 것을 특징으로 하는 상기 (1) 에 기재된 리포솜의 제조방법에 관한 것이다.
상기 화합물 (1), (2), (4) 및 (6) 에서의 R 은, 탄소수 2∼35 의 포화 또는 불포화 지방산 유래 아실기를 나타낸다. 상기 지방산은, 보다 바람직하게는 탄소수 6∼18, 가장 바람직하게는 탄소수 8∼16 이다. 그러한 지방산으로는, 구체적으로는 옥탄산 (바람직하게는 카프릴산), 데칸산 (바람직하게는 카프르산), 도데칸산 (바람직하게는 라우르산), 헥사데칸산 (바람직하게는 팔미틴산), 옥타데칸산 (바람직하게는 스테아르산), 그들 모노엔 또는 폴리엔 지방산 (바람직하게는 올레산) 등을 들 수 있다. 또한 그러한 지방산 유래 아실기의 구체예로는, 옥타노일기 (바람직하게는 카프릴로일기), 데카노일기 (바람직하게는 카프리노일기), 도데카노일기 (바람직하게는 라우로일기), 헥사데카노일기 (바람직하게는 팔미토일기), 옥타데카노일기 (바람직하게는 스테아로일기) 등을 들 수 있고, 1개 또는 그 이상의 2중 결합을 갖고 있어도 된다 (예를 들어 올레오일기).
이하, 실시예를 들어 본 발명을 상세하게 설명하는데, 본 발명은 하기 실시예에 한정되지 않는 것은 말할 필요도 없다. 하기 실시예에서 사용하는 rHSA 는 주식회사 바이파에서 입수하였다. 그리고 본 실시예에 기재된 약어를 하기와 같이 정의한다.
rHSA: 재조합 인간 혈청 알부민
PEG: 폴리에틸렌 글리콜
DSPE: 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민
NGPE: 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-(글루타릴)
NHS: N-히드록시숙시미드
WSC: 수용성 카르보디이미드
SPDP: N-숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트
DTP: 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트
DOPE: 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민
DTT: 디티오트레이톨
SATA: N-숙신이미딜-S-아세틸티오아세테이트
HEPES: N-2-히드록시에틸피페라진-N'-2-에탄술폰산
EDTA: 에틸렌디아민 테트라아세트산 나트륨 염
PBS: pH 7.4 의 인산 완충 용액 (염화나트륨, 염화칼륨, 인산 이수소칼륨, 인산수소 이나트륨으로 이루어진다.)
실시예 1
표면에 PEG 및 rHSA 가 결합되어 있는 리포솜의 제조
방법 1 WSC 를 사용한 제조
(1) NGPE 를 함유하고 있는 PEG 수식 리포솜의 제조
지질을 용해한 클로로포름 용액 (전지질: 100μmol, 난황 레시틴：콜레스테롤：GPE：PEG 결합 DSPE (Shearwater Co. 제조)＝59：30：10：1 의 몰 비율로 용해) 약 8mL 을 켈달 플라스크에 첨가하였다. 이어서, [3H(트리튬)]콜레스테릴 헥사데실 에테르 (사단법인 일본아이소토프협회 제조) 200만dpm 을 첨가하였다. 전량을 10mL 이 되도록 클로로포름을 넣은 후, 로터리 증발기로 질소분위기 하 용매를 감압 증류 제거하여 밤새 건조시켰다. 만들어진 지질박막에 PBS 약 2mL 을 첨가하여 55℃ 로 가온하면서 15분간 이상 교반 혼합하여 지질박막을 현탁시켰다. 이 현탁액을 200㎚ 의 폴리카보네이트멤브레인을 장착한 익스트루더를 사용하여 입경을 균일하게 하였다.
(2) rHSA·PEG 수식 리포솜의 제조
상기 PEG 수식 리포솜에 NHS 100μmol 과 WSC 10μmol 을 첨가하고 15분간 진탕하여 NGPE 와 WSC 를 결합시켰다. 이 액에 2-메르캅토에탄올 500μmol 을 첨가하였다. 리포솜에 결합되지 않은 NHS 및 WSC 를 제거하기 위해 겔 여과로 리포솜 분획과 소분자물질을 분리하여 리포솜 분획을 회수하였다. 바로 rHSA 1μmol 을 첨가하고 밤새 진탕하여 rHSA 를 리포솜에 결합시켰다. 미반응 rHSA 를 제거하기 위해 겔 여과하여 rHSA 결합 리포솜 분획과 rHSA 단체의 분획으로 분리하여 rHSA 결합 리포솜 분획을 회수하였다 (20mL).
방법 2 SPDP 를 사용한 제조
(1) DTP-DOPE 의 제조
DOPE 클로로포름 용액 10μmol 에 SPDP 12μmol 을 더하여 교반하였다. 반응액에 PBS 약 2mL 를 첨가하고 5분간 강하게 진탕한 후, 3000rpm 으로 10분간 원심분리하였다. PBS 층을 제거하고 정제수를 첨가하여 3분간 강하게 진탕한 후, 원심분리하여 다시 물층을 제거하였다. 이 정제수 세정을 다시 한번 하였다. 하층에 남은 흰 반고형물을 증발기로 용매 증류 제거·건조시켰다. 잔류물에 클로로포름 1.0mL 을 첨가, 재용해하여 DTP-DOPE 를 제조하였다.
(2) DTP-DOPE 함유 PEG 수식 리포솜의 제조
지질을 용해한 클로로포름액 (전지질: 90μmol, 난황 레시틴：콜레스테롤：PEG 결합 DSPE (Shearwater Co. 제조)＝59：30：1 의 몰 비율로 용해) 약 8mL 을 켈달 플라스크에 첨가하였다. 다시 DTP-DOPE 를 10μmol 첨가하여 [3H(티리튬)]콜레스테릴 헥사데실 에테르 (사단법인 일본아이소토프협회 제조) 200만dpm 을 첨가하였다. 전량을 10mL 이 되도록 클로로포름을 넣은 후, 로터리 증발기로 질소분위기 하 용매를 감압 증류 제거하여 밤새 건조시켰다. 만들어진 지질박막에 PBS 약 2mL 을 첨가하여 55℃ 로 가온하면서 15분간 이상 교반 혼합하여 지질박막을 현탁시켰다. 이 현탁액을 200㎚ 의 폴리카보네이트멤브레인을 장착한 익스트루더를 사용하여 입경을 균일하게 하였다.
(3) SH 화 rHSA 의 제조
rHSA 수용액 1μmol 에 SPDP 20μmol 을 첨가한 후, 교반하여 DTP-rHSA 를 제조하였다. 미반응 SPDP 을 제거하기 위해 겔 여과하여 PD-rHSA 분획을 분취하였다. DTP-rHSA 에 최종농도 50mM 이 되도록 DTT 를 첨가하고 20분간 교반하여 rHSA 를 SH 화시켰다. 미반응 DTT 를 제거하기 위해 겔 여과하여 SH 화 rHSA 분획을 분취하였다.
(4) DTP-DOPE 함유 리포솜과 SH 화 rHSA 의 반응
DTP-DOPE 함유 PEG 수식 리포솜에 SH 화 rHSA 용액을 첨가하고 실온에서 24시간 이상 교반하였다. 그 후, 반응액을 겔 여과하고 리포솜과 미반응 rHSA 를 분리시키고 리포솜 분획을 회수하여 rHSA·PEG 수식 리포솜을 얻었다.
실시예 2
표면에 PEG 가 결합되고, 다시 PEG 말단에 rHSA 가 결합되어 있는 리포솜의 제조방법
방법 1 PEG 수식 리포솜 제조후, rHSA 를 PEG 와 결합시키는 것에 의한 제조
(1) 말레이미드-PEG 수식 리포솜의 제조
지질을 용해한 클로로포름 용액 (전지질: 100μmol, 난황 레시틴：콜레스테롤：말레이미드-PEG 결합 DSPE (Shearwater Co. 제조)＝63：32：5 의 몰 비율로 용해) 약 8mL 을 켈달 플라스크에 첨가하였다. [3H(트리튬)]콜레스테릴 헥사데실 에테르 (사단법인 일본아이소토프협회 제조) 200만dpm 을 첨가하였다. 전량을 10mL 이 되도록 클로로포름을 넣은 후, 로터리 증발기로 질소분위기 하 용매를 감압 증류 제거하여 밤새 건조시켰다. 만들어진 지질박막에 PBS 약 2mL 을 첨가하여 55℃ 로 가온하면서 15분간 이상 교반 혼합하여 지질박막을 현탁시켰다. 이 현탁액을 200㎚ 의 폴리카보네이트멤브레인을 장착한 익스트루더를 사용하여 입경을 균일하게 하였다.
(2) SATA 에 의한 SH 화 rHSA 의 제조
rHSA 수용액 1μmol 에 디메틸포름아미드로 용해한 SATA 8μmol 을 디메틸포름아미드의 농도가 1% 이상이 되지 않게 첨가하고 30분간 실온에서 진탕하여 아세틸티오아세테이트를 rHSA 의 아미노기와 결합시켰다. 미반응 SATA 를 제거하기 위해 겔 여과하여 아세틸티오아세테이트 결합 rHSA 분획을 분취하였다. 0.5M HEPES 와 25mM EDTA 에 용해한 히드록실아민을 50μmol 첨가하고 아세틸기를 탈리시켜 SH 화 rHSA 를 제조하였다.
(3) 리포솜에 수식한 PEG 에 대한 rHSA 의 결합
말레이미드-PEG 수식 리포솜액과 SH 화 rHSA 액을 4℃ 하에서 혼합하여 18시간 동안 반응시켰다. 마지막에 겔 여과하고 미반응 SH 화 rHSA 분획을 제거하여 rHSA 결합 PEG 수식 리포솜 분획을 분취하였다.
방법 2 rHSA 를 PEG-DSPE 에 결합후, 리포솜에 삽입하는 것에 의한 제조방법
(1) 리포솜의 제조
지질을 용해한 클로로포름 용액 (전지질: 95μmol, 난황 레시틴：콜레스테롤＝63：32 의 몰 비율로 용해) 약 8mL 을 켈달 플라스크에 첨가한다. [3H(트리튬)]콜레스테릴 헥사데실 에테르 (사단법인 일본아이소토프협회 제조) 200만dpm 을 첨가하였다. 전량을 10mL 이 되도록 클로로포름을 넣은 후, 로터리 증발기로 질소분위기 하 용매를 감압 증류 제거하여 밤새 건조시켰다. 만들어진 지질박막에 PBS 약 2mL 을 첨가하여 55℃ 로 가온하면서 15분간 이상 교반 혼합하여 지질박막을 현탁시켰다. 이 현탁액을 200㎚ 의 폴리카보네이트멤브레인을 장착한 익스트루더를 사용하여 입경을 균일하게 하였다.
(2) SATA 에 의한 SH 화 rHSA 의 제조
rHSA 수용액 1μmol 에 디메틸포름아미드로 용해한 SATA 8μmol 을 디메틸포름아미드의 농도가 1% 이상 되지 않게 첨가하고 30분간 실온에서 진탕하여 아세틸티오아세테이트를 rHSA 의 아미노기와 결합시켰다. 미반응 SATA 를 제거하기 위해 겔 여과하여 아세틸티오아세테이트 결합 rHSA 분획을 분취하였다. 0.5M HEPES 와 25mM EDTA 에 용해한 히드록실아민을 50μmol 첨가하고 acetyl기를 탈리시켜 SH 화 rHSA 를 제조하였다.
(3) 말레이미드-PEG 에 대한 rHSA 의 결합
말레이미드-PEG 결합 DSPE (Shearwater Co. 제조) 5μmol 과 SH 화 rHSA 액을 4℃ 하에서 혼합하여 18시간 동안 반응시켰다. 겔 여과하여 rHSA-PEG 결합 DSPE 분획을 분취하였다.
(4) rHSA-PEG 결합 DSPE 의 리포솜에 대한 삽입
rHSA-PEG 결합 DSPE 액을 상기 (1) 에서 제조한 리포솜에 첨가하고 진탕하고 리포솜에 삽입시켜 rHSA-PEG 를 리포솜 표면에 수식시켰다.
실시예 3
표면에 rHSA 가 결합되고, 다시 rHSA 에 PEG 가 결합되어 있는 리포솜의 제조방법
방법 1 SATA 및 WSC 를 사용한 제조
(1) NGPE 함유 리포솜의 제조
지질을 용해한 클로로포름 용액 (전지질: 100μmol, 난황 레시틴：콜레스테롤：NGPE＝60：30：10 의 몰 비율로 용해) 약 8mL 을 켈달 플라스크에 첨가하였다. [3H(트리튬)]콜레스테릴 헥사데실 에테르 (사단법인 일본아이소토프협회 제조) 200만dpm 을 첨가하였다. 전량을 10mL 이 되도록 클로로포름을 넣은 후, 로터리 증발기로 질소분위기 하 용매를 감압 증류 제거하여 밤새 건조시켰다. 만들어진 지질박막에 PBS 약 2mL 을 첨가하여 55℃ 로 가온하면서 15분간 이상 교반 혼합하여 지질박막을 현탁시켰다. 이 현탁액을 200㎚ 의 폴리카보네이트멤브레인을 장착한 익스트루더를 사용하여 입경을 균일하게 하였다.
(2) SATA 에 의한 SH 화 rHSA 의 제조
rHSA 수용액 1μmol 에 디메틸포름아미드로 용해한 SATA 8μmol 을 디메틸포름아미드의 농도가 1% 이상이 되지 않게 첨가하고 30분간 실온에서 진탕하여 아세틸티오아세테이트를 rHSA 의 아미노기에 결합시켰다. 미반응 SATA 를 제거하기 위해 겔 여과하여 아세틸티오아세테이트 결합 rHSA 분획을 분취하였다. 0.5M HEPES 와 25mM EDTA 에 용해한 히드록실아민을 50μmol 첨가하고 acetyl기를 탈리시켜 SH 화 rHSA 를 제조하였다.
(3) 말레이미드-PEG 에 대한 rHSA 의 수식
말레이미드-PEG (Shearwater Co. 제조) 5μmol 과 SH 화 rHSA 액을 4℃ 하에서 혼합하여 18시간 동안 반응시켰다. 겔 여과하여 rHSA-PEG 분획을 분취하였다.
(4) rHSA-PEG 의 NGPE 함유 리포솜과의 결합
상기 NGPE 함유 리포솜에 NHS 100μmol 과 WSC 10μmol 을 첨가하고 15분간 진탕하여 NGPE 와 WSC 를 결합시켰다. 이 액에 2-메르캅토에탄올 500μmol 을 첨가하였다. 리포솜에 결합되지 않은 NHS 및 WSC 를 제거하기 위해 겔 여과로 분리하여 리포솜 분획을 회수하였다. 바로 rHSA-PEG (rHSA 1μmol분에 상당) 을 첨가하고 밤새 진탕하여 rHSA-PEG 를 리포솜에 결합시켰다. 미반응 rHSA-PEG 를 제거하기 위해 겔 여과하여 rHSA-PEG 결합 리포솜 분획을 회수하였다.
방법 2 SATA 및 SPDP 를 사용한 제조
(1) DTP-DOPE 의 제조
DOPE 클로로포름 용액 10μmol 에 SPDP 12μmol 을 더하여 교반하였다. 반응액에 PBS 2mL 을 첨가하고 5분간 강하게 진탕한 후, 3000rpm 으로 10분간 원심분리하였다. PBS 층을 제거하고 정제수를 첨가하여 3분간 강하게 진탕한 후, 원심분리하여 다시 물층을 제거하였다. 이 정제수 세정을 다시 한번 하였다. 하층에 남은 흰 반고형물을 증발기로 용매 증류 제거·건조하였다. 잔류물에 클로로포름 1.0mL 을 첨가, 재용해하여 DTP-DOPE 를 제조하였다.
(2) DTP-DOPE 함유 리포솜의 제조
지질을 용해한 클로로포름액 (전지질: 90μmol, 난황 레시틴：콜레스테롤＝60：30 의 몰 비율로 용해) 약 8mL 을 켈달 플라스크에 첨가하였다. 다시 DTP-DOPE 를 10μmol 첨가하여 [3H(트리튬)]콜레스테릴 헥사데실 에테르 (사단법인 일본아이소토프협회 제조) 200만dpm 을 첨가하였다. 전량을 10mL 이 되도록 클로로포름을 넣은 후, 로터리 증발기로 질소분위기 하 용매를 감압 증류 제거하여 밤새 건조시켰다. 만들어진 지질박막에 PBS 약 2mL 을 첨가하여 55℃ 로 가온하면서 15분간 이상 교반 혼합하여 지질박막을 현탁시켰다. 이 현탁액을 200㎚ 의 폴리카보네이트멤브레인을 장착한 익스트루더를 사용하여 입경을 균일하게 하였다.
(3) SATA 에 의한 SH 화 rHSA 의 제조
rHSA 수용액 1μmol 에 디메틸포름아미드로 용해한 SATA 8μmol 을 디메틸포름아미드의 농도가 1% 이상이 되지 않게 첨가하고 30분간 실온에서 진탕하여 아세틸티오아세테이트를 rHSA 의 아미노기와 결합시켰다. 미반응 SATA 를 제거하기 위해 겔 여과하여 아세틸티오아세테이트 결합 rHSA 분획을 분취하였다. 0.5M HEPES 와 25mM EDTA 에 용해한 히드록실아민을 50μmol 첨가하고 acetyl기를 탈리시켜 SH 화 rHSA 를 제조하였다.
(4) rHSA 의 말레이미드-PEG 에 대한 수식
말레이미드-PEG 5μmol 과 SH 화 rHSA 액을 4℃ 하에서 혼합하여 18시간 동안 반응시켰다. 겔 여과하여 rHSA-PEG 분획을 분취하였다.
(5) SH 화 rHSA-PEG의 제조
rHSA-PEG 수용액 (rHSA 1μmol분에 상당) 에 SPDP 20μmol 을 첨가한 후, 교반하여 DTP-rHSA-PEG 를 제조하였다. 미반응 SPDP 를 제거하기 위해 겔 여과하여 DTP-rHSA-PEG 분획을 분취하였다. DTP-rHSA-PEG 에 최종농도 50mM 이 되도록 DTT 를 첨가하고 20분간 교반하여 rHSA 를 SH 화시켰다. 미반응 DTT 를 제거하기 위해 겔 여과하여 SH 화 rHSA-PEG 분획을 분취하였다.
(6) DTP-DOPE 함유 리포솜과 SH 화 rHSA 의 반응
DTP-DOPE 함유 리포솜에 SH 화 rHSA-PEG 용액을 첨가하고 실온에서 24시간 이상 교반하여 rHSA-PEG 를 리포솜에 수식시켰다. 그 후, 반응액을 겔 여과하고, 리포솜과 미반응 rHSA-PEG 을 분리시키고, 리포솜 분획을 회수하여 rHSA-PEG 수식 리포솜을 얻었다.
시험예 리포솜 샘플을 래트에 투여하는 실험
(1) 혈중농도의 검토
래트 3마리에 각각 실시예 1 에서 제작한 리포솜 샘플 20μmol/㎏ 을 투여하였다. 투여 직후부터 4시간마다 24시간 경과할 때까지 경동맥에서 약 300μL 를 채혈하여 바로 원심분리 (4℃ 하 1500×g, 3분) 하였다. 상청 100μL 을 회수하여 클리어졸 (액체 신틸레이션 칵테일) 을 10mL 넣어 잘 혼화하였다. 이 액을 액체 신틸레이션 카운터로 정량하였다. 샘플 하나당 5분간 측정하였다.
비교로서, 표면에 아무런 수식이 없는 리포솜 및 표면에 PEG 가 수식된 리포솜을 사용하여 동일하게 시험하였다.
그 결과를 도 1 에 나타낸다. 도 1 에 나타낸 수치는 래트 3마리에서 혈중농도의 평균치를 나타낸다.
리포솜 표면에 폴리에틸렌글리콜쇄와 알부민 분자를 결합시킴으로써, 사람이나 동물에 투여하였을 때의 리포솜의 혈중 체류성을 향상시킬 수 있고, 리포솜에 봉입 또는 결합시킨 약물의 치료효과나 진단효과를 높일 수 있다. 알부민으로서 유전자 재조합 인간 혈청 알부민을 사용함으로써, 감염의 위험성이 없고 PEG 단독에 비교하여 대사면에서도 생체 적합성이 더욱 향상된 리포솜을 제작하는 것이 가능하다.

Claims (9)

  1. 폴리알킬렌글리콜류와 알부민이 결합되어 있는 리포솜.
  2. 제 1 항에 있어서, 추가로 생리활성 성분을 함유하고 있는 리포솜.
  3. 제 2 항에 있어서, 생리활성 성분이 의약활성물질인 리포솜.
  4. 제 3 항에 있어서, 의약활성물질이 항종양제인 리포솜.
  5. 제 2 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 기재된 리포솜을 함유하고 있는 의약 조성물.
  6. 제 5 항에 있어서, 주사제인 의약 조성물.
  7. 폴리알킬렌글리콜류와 알부민이 결합되어 있고, 또한 항종양제를 함유하고 있는 리포솜을 포함하는 의약 조성물을 투여하는 것을 특징으로 하는 암의 치료방법.
  8. 폴리알킬렌글리콜류와 알부민이 결합되어 있고, 또한 생리활성 성분을 함유하고 있는 리포솜의, 생리활성 성분의 체내 체류시간 연장을 위한 용도.
  9. 하기 식 (1):
    (식 중, R 은 탄소수 2∼35 의 지방산 유래 아실기를 나타낸다):
    로 나타내는 화합물을 구성 지질로서 갖는 리포솜과 알부민을 결합시키거나,
    하기 식 (2):
    (식 중, R 은 상기 정의와 동일하다):
    로 나타내는 화합물을 구성 지질로서 갖는 리포솜과,
    식 (3):
    (Alb-NH)-CO-CH2-CH2-SH (3)
    (식 중, Alb-NH 는 Alb-NH2 로 나타내는 알부민 분자에서 그 아미노기의 1개의 수소원자를 제거하여 형성된 기를 나타낸다):
    으로 나타내는 화합물을 결합시키거나,
    하기 식 (4):
    (식 중, n 은 5∼100,000 의 정수를 나타내고, R 은 상기 정의와 동일하다):
    로 나타내는 화합물을 구성 지질로서 갖는 리포솜과,
    식 (5):
    (Alb-NH)-CO-CH2-SH (5)
    (식 중, Alb-NH 는 상기 정의와 동일하다):
    로 나타내는 화합물을 결합시키거나,
    하기 식 (6):
    (식 중, n, R 및 Alb-NH 는 상기 정의와 동일하다):
    으로 나타내는 화합물을 리포솜에 삽입하거나,
    상기 식 (1) 로 나타내는 화합물을 구성 지질로서 갖는 리포솜과, 하기 식 (7):
    (식 중, -NH-Alb-NH2 는 H2N-Alb-NH2 로 나타내는 알부민 분자의 1개의 아미노기에서 수소원자 1개를 제거하여 형성되는 기를 나타내고, n 은 상기 정의와 동일하다):
    로 나타내는 화합물을 결합시키거나,
    상기 식 (2) 로 나타내는 화합물을 구성 지질로서 갖는 리포솜과, 하기 식 (8):
    (식 중, -NH-Alb-NH- 는 H2N-Alb-NH2 로 나타내는 알부민 분자에서 그 2개의 아미노기 각각 1개씩의 수소원자를 제거하여 형성되는 기를 나타내고, n 은 상기 정의와 동일하다):
    로 나타내는 화합물을 결합시키는 것을 특징으로 하는 제 1 항에 기재된 리포솜의 제조방법.
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