CN1630532A - 预防和治疗胃肠疾病的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了预防或治疗哺乳动物如人类患者胃肠(GI)疾病的方法。在一个实施方式中，所述方法包括给予哺乳动物治疗有效量的化合物，该化合物调节一氧化氮(NO)信号通路，特别是GI神经元中的NO信号通路。本发明的方法特别可用于治疗(包括预防性治疗)糖尿病性胃病和其他胃肠疾病。

Description

预防和治疗胃肠疾病的方法
有关申请的相互参考
本申请要求于2000年4月19日提交的美国临时申请60/198,545的优先权，并将该申请的内容引入本文作为参考。
有关美国政府资助的声明
本发明由美国政府提供部分资金，依靠DA-00266基金、DA00074研究科学家奖和美国公共卫生局提供的MH-19547号奖金。因此，美国政府拥有本发明的一些权利。
发明背景
1.发明领域
本发明总体涉及预防或治疗胃肠(GI)疾病的方法。一方面，本发明提供了通过调节特别在GI神经元中的一氧化氮(NO)信号通路来治疗所述疾病的方法。本发明的方法一般包括给药至少一种化合物，所述化合物通过增加NO活性或者神经元一氧化氮合成酶(nNOS)水平的一种或多种来调节所述信号通路。本发明具有广泛的用途，包括治疗各种胃病，通过给药治疗量的胰岛素或磷酸二酯酶(PDE)抑制剂如西地那非(ViagraTM)中的至少一种来进行。
2.背景
运动减弱是众多胃肠(GI)疾病的一个特点。例如，已报道了伴随有延迟排空的胃运动减弱。也已知，例如，影响肠道的郁积。一般参见McCallum，R.W.(1989)于胃肠疾病(Gastrointestinal Disease)，第4版(Sleisenger，M.H.和Fordtran，J.S.编辑)W.B.Saunders Co.，Philadelphia；以及其中引用的文献。
大多数胃肠疾病的症状包括恶心、呕吐、胃灼热、餐后不适和消化不良。在某些实例中，胃肠道的酸反流可以引起溃疡，导致内出血和感染。伴随胃肠疾病的疼痛会导致代价高的和潜在威胁生命的哮喘或心肌梗死的误诊。参见Brunton，L.L.，于The Pharmacological Basisof Therapeutics，第8版(Gilman，A.G等编辑)McGraw-Hill，Inc.NewYork。
特殊疾病伴随运动减弱或胃肠道郁积，例如，糖尿病性神经病、神经性食欲减退和胃酸缺乏常伴随胃运动减弱。外科介入后的胃肠道损伤，比如，可导致实质性胃郁积。
现在对胃运动减弱的治疗通常包括使用促动力剂(prokineticagent)，典型的有多潘立酮，西沙比利，或甲氧氯普胺。但有报道说这些药物并不总能治疗胃郁积而且可能产生副作用。参见Brunton，L.L.，同上。
糖尿病是一种全世界范围内常见的疾病，可引起包括胃肠道功能紊乱在内的严重并发症。参见Porse，D.和Halter，J.B.(1999)于DiabeticNeuropathy(Dyck，P.J.和Thomas，P.K编辑)W.B Saunders Co.Philadelphia，PA；以及Poster，D.W.(1998)于Harrison′s Principles ofInternal Medicine(A.S.Fauci等编辑)McGraw-Hill New York。
目前一直试图用动物模型研究人类糖尿病。这些模型包括链脲霉素诱导(STZ诱导)的糖尿病和啮齿动物变异种，如NOD(非肥胖性糖尿病)小鼠。
现已认识到糖尿病性胃病包括幽门括约肌正常驰缓的混乱，幽门是一个帮助调节胃排空组织。
NOS酶得到很多关注。在适当的条件下，这种酶可生产一氧化氮(NO)。例如，参见S.H.Snyder等的美国专利5,439,938；6,103,872；和6,168,926中关于NOS和NO的一般内容。也可参见Zakhary，R.等，(1997)PNAS(USA)94：14848。
NO被普遍认为是一种神经递质。有证据表明NO在胃肠道发挥作用，特别是在肠、胃和幽门。例如，参见Huang，P.L.等，(1993)Cell 75：1273。
幽门nNOS的丧失特别会伴随有胃流出阻塞。NO还参与降低经分离的幽门的压力波，改变在胃里液态葡萄糖的分布，减缓胃排空和降低胃紧张性。
要在NO作用和胃肠功能之间建立牢固的联系还存在一些问题。
例如，NO被认为可能阻止人类胃排空，尽管在一些动物模型中nNOS被认为延迟这一过程。另外，很难确定nNOS表达如何被调节，尤其是在活体内如何被调节。这些和其他缺点防碍了人们开发出增加或减少内源NO水平的疗法。
通常环单磷酸鸟苷(cGMP)被认为是一种重要的细胞信使分子。磷酸二酯酶(PDE)主要负责破坏cGMP，一般通过在cGMP和水之间催化水解反应来进行。有报道10个磷酸二酯酶(PDE)家族具有不同的组织、细胞和亚细胞分布。某些磷酸二酯酶(PDE)家族被认为优先选择环单磷酸腺苷(cAMP)替代cGMP作为酶底物。
已公开了众多的PDE抑制剂。例如，已报道了III和IV型PDE抑制剂。参见，例如美国专利4,753,945；4,837,239；4,971,972；5,091,431；6,054,475；6,127,363；和6,156,753；以及其中所引用的文献。还可参见Komas等，于磷酸二酯酶抑制剂(1996)(Schudt等编辑)AcademicPress，San Diego，CA。
V型PDE抑制剂受到特别关注，它是一种cGMP偏爱酶。例如，已报道了某种抑制剂如西地那非(ViagraTM)用于治疗男性勃起功能障碍。参见，例如美国专利6,100,270；6,207,829，以及其中所引用的文献。
还有许多工作研究胰岛素的生物学作用。一般参见Kahn，C.R.等，于The Pharmacological Basis of Therapeutics，第8版(Gilman，A.G等编辑)McGraw-Hill，Inc.New York。
还可参见美国专利4,916,212；4,701,440；H245，提交日1984年6月27日；4,652,547；和4,652,525(公开了多种胰岛素分子)。
调整一氧化氮(NO)信号对寻找治疗胃肠(GI)疾病的方法很有用。当存在病理水平的神经元一氧化氮合成酶(nNOS)时，提高或优选恢复正常NO信号的胃肠疾病治疗方法将是特别合乎需要的。
发明概述
本发明总体涉及预防或治疗胃肠(GI)疾病的方法。在一方面，本发明提供了特别是在GI神经元中调节一氧化氮(NO)信号通路的治疗所述疾病的方法，优选的发明方法包括给予至少一个通过增加NO活性或神经元一氧化氮合成酶(nNOS)的一个或多个来调节所述通路的化合物。本发明有很广泛的应用，包括治疗多种胃病，通过给予治疗量的至少一种胰岛素或磷酸二酯酶(PDE)抑制剂如西地那非(ViagraTM)进行。
我们发现通过调节胃肠神经元中的NO信号通路，可预防或治疗多种疾病。尤其是，已发现在许多哺乳动物胃肠疾病中特殊的NO信号通路受到破坏。优选的发明方法通过增加所述通路中某种确定分子的活性来一般性地预防或治疗这种疾病，代表性的分子是NO分子或促使产生该分子的酶即nNOS酶。优选的发明方法适当地增加和更优选恢复正常的神经元NO信号，从而帮助预防多种胃肠疾病、减轻其严重程度或消除与之相关的症状。
更具体而言，我们发现许多(如果不是全部)胃肠疾病伴有异常的神经元NO信号。例如，正如下面讨论的，相信许多疾病与关键NO信号分子，特别是nNOS酶和NO分子的丧失相关。下游的信号通路被认为受到这种丧失的影响。不受理论的限制，这种关键信号组分的丧失被认为对于在正常GI功能中发挥重要作用的多种细胞功能具有负面影响。即，从重要和正常的NO调节过程中去除了所述的细胞功能。丧失这种控制因素据信会促进胃肠道疾病发作或加重该疾病。因此，增强或恢复这种控制因素是本发明的一个重要目的。尤为重要的是，本发明首次提供了通过调节NO信号通路来预防或治疗胃肠道疾病的治疗方法。正如所讨论的那样，优选的发明方法提供了众多nNOS酶中的至少一种，或者增加NO分子活性，特别是在GI神经元中。
因此，一方面，本发明提供了在患有或易患有该疾病的哺乳动物中预防或治疗至少一种和优选一种胃肠疾病的方法。在一个实施方式中，所述方法包括向哺乳动物给予治疗有效量的至少一种化合物，该化合物优选具有至少一种如下作用：
a)增加如胃肠神经元或卡雅尔间质细胞中的一氧化氮(NO)活性，其根据标准胃排空实验(如下文定义的实验)测量，或
b)使例如胃肠神经元或间质细胞中的一氧化氮合成酶(nNOS)水平增加，其根据标准nNOS蛋白表达实验(如下文定义的实验)。
前述一般性发明方法适当地调节NO信号通路。更具体而言，所述方法首次提供了一种在异常水平NO或nNOS酶的存在下治疗性地扩增这一重要通路的方式。因此，所述方法有利地向“危险”或患病GI神经元提供NO活性增加或nNOS酶水平增加的至少一种。这一重要的发明特点合乎需要地增加和优选恢复以正常GI神经元为特征的NO信号。此外，本发明的方法可提供超生理(高于正常)水平的NO、nNOS、cGMP等，它们能够具有重要的疗效，例如用于治疗过敏性结肠综合征和其他疾病。由此，不受任何理论束缚，通过这样的作用，实施所述方法可预防或治疗GI疾病。
在一些发明实施方式中，所述化合物适当地增加NO活性和nNOS水平。但是，在大多数实施方式中，优选的化合物最理想情况下只增加这些特征之一。
在其他实施方式中，本发明用于上述化合物中至少两种的给药，其中第一化合物优选增加NO活性，第二化合物优选增加nNOS酶水平。本发明的这一示例十分重要，因为它例举了一种治疗性地增加NO信号的“双分支”方法，即通过第一化合物增强NO活性，和用第二化合物增加nNOS水平。该治疗策略可显示为疾病设置，在该疾病设置中受试者患有或易患有(特别为)难治或慢性GI疾病。第一和第二化合物可按需要给药，例如，在基本上相同时间给药(第一和第二化合物共同给药)或在不同时间给药，以达到预期治疗目的。
优选的本发明方法采用哺乳动物，优选灵长类动物、兔或啮齿类动物，更优选人类受试者，其中已鉴定和选择哺乳动物用于本发明的治疗处理。也就是说，已鉴定和选择哺乳动物受益于上述NO活性或nNOS水平的至少一种的增加。在这种情况下，随后将至少一种所述化合物给予已鉴定和选择的哺乳动物。在意图给予两种或多种化合物的实施方式中，可按需要同时或在一个或多个不同时间给药，以预防或治疗特定的GI疾病。
在本发明方法的其他实施例中，如标准cGMP实验所测，给药化合物的量一般足以适当地增加神经元环3′-单磷酸鸟苷(cGMP)水平。如上所述，cGMP是重要的NO“下游”分子，据信有助于信号传递到细胞。通过提高cGMP水平，本发明促进所述传递，特别是在低于NO分子或nNOS酶最佳水平的条件下。在下文讨论和实施例中描述所述标准cGMP实验。
本发明的疗法对于预防或治疗广谱GI疾病特别有效。优选的GI疾病是那些可根据本发明预防或治疗的疾病，优选通过调节胃肠道相关神经元中NO信号通路进行。额外优选的疾病包括那些特征为小肠、大肠、结肠、食道或胃中至少一个运动减弱或运动过强的疾病。这些优选的GI疾病进一步特征在于如下适应症中的至少一种：恶心、呕吐、胃灼热、餐后不适、腹泻、便秘、消化不良或相关症状。
根据本发明进一步优选的GI疾病与如下疾病中的至少一种有关：糖尿病、神经性食欲缺乏、贪食症、胃酸缺乏、弛缓不能、肛裂、过敏性结肠综合征、肠假性梗阻、硬皮病或相关疾病。一个特殊GI疾病的例子为一般与糖尿病相关的胃病。
额外优选的适于经本发明预防或治疗的GI疾病包括更特别的肠假性梗阻，优选结肠假性梗阻(奥格尔维综合征)、特发性胃轻瘫和特发性便秘(巨结肠)中的至少一种。
进一步优选的适于经本发明预防或治疗的GI疾病是那些来自预期或意外胃肠道损伤，例如源于冲击或外科介入的疾病。其他根据本发明优选的GI疾病包括肥厚性幽门狭窄、功能性肠紊乱和胃食管反流病(GERD)。所述功能性肠紊乱优选是过敏性结肠综合征或功能性消化不良中的至少一种。
本发明还包括治疗或预防(即预防性处理)克隆病和溃疡性结肠炎的方法，其包括向患有或易患有这些病症的患者给予有效量的一种或多种PDE抑制剂和/或胰岛素或其生物学活性变体。
本发明的实施适用于能调节细胞信号通路的多种化合物。这些化合物的例子包括但不限于磷酸二酯酶(PDE)抑制剂。具体的本发明PDE抑制剂先前已在美国专利6,100,270；6,006,735；6,143,757；6,143,746；6,140,329；6,117,881；6,043,252；6,001,847；5,981,527；和6,207,829 B1中报道，这些专利的内容引入本文作为参考。
也可参见PCT/EP95/04065；WO-A-93106104；WO-A-93/07149；WO-A-93/12095；WO-A-94/00453；EP 0 463756 B1；和WO-A-94/05661。
也可参见美国专利4,753,945；5,010,086；6,121,279；6,156,753；6,054,475；5,091,431；6,127,363和6,040,309。
也可参见Komas等，同上(公开了适用于本发明的另外的PDE抑制剂)。
优选用于本发明的PDE抑制剂包括但不限于特别的双环杂环PDE抑制剂，更优选吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮、吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮、喹唑啉-4-酮、嘌呤-6-酮、吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酮；及其可药用的盐。
特别优选的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮是西地那非(ViagraTM)，也即5-[2-乙氧基-5-(4-甲基哌嗪-1-基磺酰基)苯基]-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4,3d]嘧啶-7-酮；及其可药用的盐。
额外优选的本发明化合物包括胰岛素或其生物活性变体，包括等位基因变体。优选的胰岛素灵长类、兔或啮齿类动物胰岛素，更优选以重组形式提供的人胰岛素。已公开了多种可接受的胰岛素分子。额外优选的用于本发明的化合物，特别在与PDE抑制剂共同给药的方案中，其为一种或多种可提高所给药受试者胰岛素效果或水平(例如，通过促进胰岛素释放，或增加细胞对胰岛素的敏感度或增强胰岛素的作用)的化合物。
本发明的其他方面在下文中描述。
附图简述
图1A-D是显示nNOS-/-小鼠具有胃排空延迟和丧失NO依赖性非肾上腺素能、非胆碱能(NANC)弛缓的图。
图2A-C和2E是显示糖尿病小鼠胃排空延迟的图，其中胃排空延迟不归因于高血糖症和扩张的胃。
图2D是显示多个野生型和(非肥胖糖尿病)NOD突变种的胃的照片。
图3A和3B是显示糖尿病小鼠幽门缺乏NO介导的NANC弛缓和胰岛素逆转处理的图。
图4A是代表性的显示糖尿病小鼠幽门肠肌层神经元中nNOS蛋白表达减少的显微照片。
图4B是显示图4A所示数据量化的图。
图5A是代表性的显示糖尿病小鼠幽门肠肌层神经元中nNOSmRNA表达减少的显微照片。
图5B是显示图5A所示数据量化的图。
图6是代表性的蛋白质免疫印迹，显示在整个NOD小鼠的肠和胰岛素逆转中的nNOS蛋白减少。
图7是显示糖尿病小鼠幽门丧失nNOS表达而不丧失神经元的图。
图8是显示5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制使糖尿病小鼠中胃排空延迟逆转的图。
图9A和9B是显示胰岛素处理逆转了胃排空延迟的图。
发明详述
如上所述，本发明的特点在于预防和治疗异常NO信号调节的广谱胃肠(GI)疾病的治疗方法。这些方法一般包括给予需要该治疗的哺乳动物和优选人患者治疗有效量的化合物，该化合物能增加如下情况中的至少一种：根据标准胃排空实验所测，增加胃肠神经元或卡雅尔间质细胞中一氧化氮(NO)活性；或者，根据标准nNOS表达实验所测，增加胃肠神经元或间质细胞中的一氧化氮合成酶(nNOS)水平。
不受理论束缚，本发明的方法可诱导、促进或导致神经元中形成NO，NO随后扩散到邻近肌肉，在那里刺激cGMP的形成，而所给药的PDE抑制剂化合物和/或胰岛素、胰岛素变体或其他胰岛素促进剂化合物能增加该cGMP水平。
优选的本发明化合物包括PDE抑制剂，例如那些影响I-V型磷酸二酯酶的PDE抑制剂。特别优选的用于本发明方法的PDE抑制剂在下文中描述。
其他的优选化合物包括灵长类、啮齿类或兔胰岛素，包括其生物学活性变体，其中包括等位基因变体，更优选可以重组形式得到的人胰岛素。特别优选的人胰岛素源包括可药用的和无菌的制剂，例如那些可得自Eli Lilly(Indianapolis，IN 46285)的制剂，名为HumulinTM(人胰岛素rDNA起源)。参见The Physician′s Desk Reference，第55版.(2001)Medical Economics，Thomson Healthcare(公开了其他合适的人胰岛素)。额外优选的化合物包括能提高给药受试者中胰岛素效果或增加其水平的试剂，例如格列甲嗪和/或rosiglitazone。
正如已讨论的那样，已发现通过调节与GI神经元相关的NO信号通路，有可能预防或治疗多种GI疾病。即，通过用于增强“危险”或患病GI神经元中的NO信号，本发明可改变这些疾病或相关适应症的进展或严重程度。更具体而言，已发现通过提高那些提供神经元NO的酶(nNOS)的水平和/或增强神经元NO功能，特别当有较少NO可用于所述神经元时，有可能增加或恢复有利的NO信号。本发明的这一特点和其他特点提供了非常有用的治疗效果，能预防或治疗一种或多种GI疾病。
本发明的治疗方法一般包括给予需要该治疗的受试者治疗有效量的至少一种本发明化合物，例如磷酸二酯酶(PDE)抑制剂。示例受试者包括哺乳动物，特别是灵长类、啮齿类和兔。优选的灵长类动物是需要本发明所提供的治疗的人类受试者。
根据本发明更典型的受试者包括哺乳动物如人患者，其患有或易患有上述GI疾病，优选通过调节GI神经元中有效的NO信号通路来调整的GI疾病，特别是特征在于小肠、大肠、结肠、食道或胃中至少一个的运动减弱或运动过强的疾病。进一步优选的哺乳动物受试者包括患有或易患有特征在于如下适应症中至少一种的GI疾病：恶心、呕吐、胃灼热、餐后不适、腹泻、便秘、消化不良或相关症状。
其他哺乳动物受试者包括患有或易患有与如下疾病中至少一种相关的GI疾病的人类患者：糖尿病、神经性食欲缺乏、贪食症、胃酸缺乏、弛缓不能、肛裂、过敏性结肠综合征、肠假性梗阻、硬皮病或相关病症。所关心的特别受试者包括患有或易患有与糖尿病相关的GI疾病，特别是糖尿病性胃病的受试者。
额外优选的受试者包括患有或易患有涉及如下疾病的GI疾病的人类患者：肠假性梗阻，优选结肠假性梗阻(奥格尔维综合征)、特发性胃轻瘫和特发性便秘(巨结肠)中的至少一种。如上所述，本发明还包括克隆病和溃疡性结肠炎的预防和治疗。
根据本发明进一步优选的受试者例如是患有或易患有与源于冲击或外科介入的胃肠道损伤有关的GI疾病的人类患者。其他的优选受试者患有或易患有包括肥厚性幽门狭窄、功能性肠紊乱和胃食管反流病(GERD)在内的GI疾病。也可治疗患有或易患有巴雷特化生或巴雷特食管的受试者，其中所述疾病可为GERD的并发症。优选，所述功能性肠紊乱是过敏性结肠综合征或功能性消化不良中的至少一种。
如果受试者具有发展该疾病的易感性，例如遗传易感性或由医疗史或所计划的治疗介入例如但不限于腹部手术所造成的易感性，则受试者“易患有”待根据本发明治疗的GI疾病或其他疾病。
如已经讨论的，本发明完全适合于多种给药化合物的应用，所述化合物包括影响PDE的化合物。简单测试，例如采用本文定义的标准活体内或活体外实验，可易于鉴别合适的化合物。特别是，可通过使用实施例中讨论的活体内胃排空实验鉴别出合适的化合物，所述实验包括如下步骤a)至e)中至少一步，优选全部：a)将一种可测标记的溶液经口服给药至活小鼠的胃中，例如，具有nNOS-/-基因型的小鼠；b)培育已给药溶液的小鼠约0至约4小时；c)从小鼠中切下胃；d)将胃均质化；和e)测量保留在胃匀浆中可测标记的溶液的量。至于本文所述“标准活体内胃排空实验”或“标准胃排空实验”或者其他类似术语指包括所述步骤a)至e)的方案。
优选的用于活体内胃排空实验的溶液是溶解糖如右旋糖和酚红的结合，尽管其他可测标记的溶液也可使用。优选地，候选治疗化合物在所述方法的步骤a)之前或过程中加入，通常在进行步骤a)之前约1分钟至约1小时加入。合适的对照是不含待测化合物的盐水或溶解糖溶液。
前述标准活体内胃排空实验易于被调整用于测试其他化合物，包括增加胃肠神经元或卡雅尔间质细胞中的一氧化氮合成酶(nNOS)水平的化合物。例如，所述方法可用于NOD-糖尿病小鼠，代替具有nNOS-/-基因型的小鼠。如下文所讨论的，NOD小鼠被认为具有发展糖尿病的易感性。此外，所述方法也适用于事先被操作引起糖尿病的小鼠，例如通过给予毒性糖如链脲霉素(STZ)。在这些特别的活体内胃排空实验实施例中，如刚讨论和实施例部分所述，准备小鼠受试者，并量化胃容量。准备使用的具体小鼠类型将根据已知参数进行选择，例如根据需筛选化合物的类型。也参见下面实施例中更具体的涉及前述标准活体内胃排空实验的内容。
优选用于本发明治疗方法的化合物诱使胃排空相对于在标准活体内胃排空实验中不存在所测化合物时达到的胃排空而言增加至少约10％，更优选相对于对照而言胃排空增加至少约15％或20％，和更优选诱使胃排空相对于在标准活体内胃排空实验中不存在所测化合物时达到的胃排空而言增加至少约25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约100％。
在标准活体内胃排空实验中，更特别的抑制剂化合物的半排空期(t1/2，排空约50％可测标记溶液所需的时间)为约1分钟至约1小时，优选为约10分钟至约45分钟，更优选约15至约30分钟。
额外优选的本发明化合物用于增加GI神经元和卡雅尔间质细胞中的nNOS水平，其根据标准活体外nNOS蛋白表达实验进行测量。合适的化合物可经使用下面实施例中所述表达实验来鉴别，该实验包括如下步骤a)至e)：a)取出哺乳动物受试者，例如NOD-糖尿病小鼠的GI组织，b)将该组织均质化，并经SDS-PAGE凝胶电泳分离匀浆，c)将分级分离的匀浆转移到可接受的膜如PVDF上，d)使所述膜与合适的抗nNOS抗体接触，和e)检测抗nNOS抗体和分级分离的匀浆之间形成的复合体，优选通过采用常规蛋白质印迹方法进行检测。所述印迹的信号可使用标准光密度分析技术进行测定和量化。本文使用的术语“标准活体外nNOS蛋白表达实验”或“标准nNOS表达实验”或者类似术语指包括刚刚描述的步骤a)至e)。
在标准活体外nNOS蛋白表达实验中，候选治疗化合物在所述方法的步骤a)之前或过程中加入，通常在进行步骤a)之前约1分钟至约2周之间加入，更优选在进行步骤a)之前约8小时至约1周之间加入。合适的对照是不含所述化合物的盐水或溶解糖溶液。如果需要，可在步骤a)前，通常在进行该步骤前约1分钟至约1-2天之间，用常规NOS抑制剂如7-硝基吲唑处理哺乳动物受试者。
优选用于本发明治疗方法的化合物诱使nNOS蛋白表达相对于在标准活体外nNOS蛋白表达实验中不存在所测化合物时达到的nNOS蛋白表达而言增加至少约10％，更优选相对于对照而言nNOS蛋白表达增加至少约15％或25％，和更优选诱使nNOS蛋白表达相对于在标准活体外nNOS蛋白表达实验中不存在所测化合物时达到的nNOS蛋白表达而言增加至少约25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约100％。
进一步优选的本发明化合物足以增加神经元中的神经元环3′-单磷酸鸟苷(cGMP)，其根据本领域公知的任一标准活体外cGMP实验来测量。这些实验参见The Handb.Exp.Pharmacol.(1983)58：题为″CyclicNucleotides″，Pt.I：Biochemistry，J.A Nathanson，J.W.Kobabian编辑(Springer-Verlag，New York)，其内容引入本文作为参考。
优选的用于本发明的cGMP实验是放射免疫分析，其监测细胞和组织中的cGMP水平。这些放射免疫分析可在商业上由例如AmershamPharmacia Biotech获得。该Amersham实验采用闪烁亲近测定法，在Amersham产品手册中有进一步的描述。本文所使用的“cGMP实验”或其他类似术语指用例如Amersham Pharmacia可商购放射免疫试剂盒进行的实验。
优选用于本发明治疗方法的化合物诱使cGMP相对于在标准活体外cGMP实验中不存在所测化合物时产生的cGMP而言增加至少约5％，更优选相对于对照而言cGMP增加至少约10％或20％，和更优选诱使cGMP相对于在所述实验中不存在所测化合物时产生的cGMP而言增加至少约25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约100％。
在用于测定cGMP PDE或PDE5抑制作用的任一活体外试验方法中，额外优选的本发明化合物的ID50为约0.01至约10mM，优选约0.1至约1mM，更优选约0.5mM或更低，参见美国专利6,100,270；WO-A-93/06104；WO-A-93/07149；WO-A-93/12095；WO-A-94/00453；和WO-A-94/05661。
更具体的发明实施方式包括预防或治疗患有或易患有胃肠疾病的哺乳动物的所述疾病。在一个实施例中，所述方法包括给予哺乳动物治疗有效量的至少一种如下物质：
a)磷酸二酯酶(PDE)抑制剂，根据胃排空实验中所测，其量足以增加胃肠神经元中的一氧化氮(NO)，或
b)胰岛素或其生物学活性变体，和/或能提高被给药受试者的胰岛素效果或水平(例如，通过增加胰岛素释放，或增加细胞对胰岛素的敏感度，或增强胰岛素的作用)的试剂，根据标准nNOS蛋白表达实验所测，其量足以增加胃肠神经元或间质细胞中一氧化氮合成酶(nNOS)水平。
优选地，根据下文所述标准PDE或PDE5实验的至少一种实验所测，所述PDE抑制剂降低环单磷酸鸟苷(cGMP)特异性PDE的活性，在一些实施方式中，特异性地降低5型PDE(PDE5)的活性是有作用的。但在另一些实施方式中，对于预防或治疗特别的GI适应症，在抑制或不抑制PDE5的情况下抑制I-IV型酶是合乎需要的。
还优选在标准PDE或PDE5实验中，PDE抑制剂的IC50为约0.5mM或更低。根据标准cGMP实验测量，这些优选的PDE抑制剂还将合乎需要地增加神经元中的神经元环3′-单磷酸鸟苷(cGMP)。
胰岛素试剂，即，胰岛素、其生物学活性变体或在给药后能提高胰岛素效果或水平的试剂，可能具有多种疗效。优选的胰岛素生物学活性变体在下文中讨论。合适的能提高胰岛素效果或水平的试剂包括例如磺酰脲如格列甲嗪，和噻唑烷二酮如rosiglitazone。除噻唑烷二酮外的PPAR-γ受体激动剂也是合适的。合适的能提高胰岛素效果和胰岛素水平的试剂还公开于例如美国专利5,489,602；5,811,439；5,965,589；和5,72,973。另外的提高胰岛素效果和胰岛素水平的试剂的鉴别方法公开于美国专利5,466,610和6,100.047。
同样特别优选的是能根据本发明对患者给药，特别是用于增加nNOS表达的各种胰岛素生物活性形式，特别是口服形式。
优选的治疗方法特别包括给予至少一种，例如约1至约，优选约2至约5，更优选约1种本文所公开的化合物。
除上述PDE抑制剂化合物之外，适用于本发明方法的PDE抑制剂化合物在下文中公开，包括如下式I-XIII的化合物，它们一般是优选用于本发明。但应理解，本发明不限于任何特定的PDE抑制剂化合物，且本发明可应用于任何已知或随后发现或开发的PDE抑制剂化合物。
更具体而言，在一个发明实施方式中，至少一种给药化合物是如美国专利6,100,270公开的双环杂环PDE抑制剂，优选至少一种如下式I-V所示的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮、吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮、喹唑啉-4-酮、嘌呤-6-酮、或吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酮，包括其可药用的盐。
合适的PDE抑制剂化合物包括下式I化合物：
其中在式I中，R1是甲基或乙基；R2是乙基或正丙基；且R3和R4各自独立地为H，或任选被C5-C7环烷基或吗啉代取代的C1-C6烷基；和其可药用的盐。
合适的PDE抑制剂化合物还包括下式II化合物：
Figure A0181042800291
其中，在式II中，R1是C1-C6烷基；R2是H；甲基或乙基；
R3是C2-C4烷基；
R4是H；任选被NR5R6，CN，CONR5R6或CO2R7取代的C1-C4烷基；任选被CN，CONR5R6或CO2R7取代的C2-C4链烯基；任选被NR5R6取代的C2-C4烷酰基；SO2NR5R6；CONR5R6；CO2R7或卤素；
R5和R6各自独立地为H或C1-C4烷基；或者，与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷子基(pyrrolidino)，哌啶子基，吗啉代，4-(NR8)-1-哌嗪基或1-咪唑基基团，其中所述基团任选被一个或两个C1-C4烷基取代；
R7是H或C1-C4烷基；和
R5是H；C1-C3烷基或(羟基)C2-C3烷基；及其可药用的盐。
其他合适的PDE抑制剂化合物包括如下式(III)化合物：
Figure A0181042800301
其中在式III中，R1是H；C1-C4烷基；C1-C4烷氧基或CONR5R6；
R2是H或C1-C4烷基；
R3是C2-C4烷基；
R4是H；任选被NR7R8取代的C2-C4烷酰基；任选被NR7R8取代的(羟基)C2-C4烷基；CH＝CHCO2R9；CH＝CHCONR7R8；CH2CH2CO2R9；CH2CH2CONR7R8；SO2NR7R8；SO2NH(CH2)nNR7R8或咪唑基；
R5和R6各自独立地为H或C1-C4烷基；
R7和R8各自独立地为H或C1-C4烷基；或者，与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷子基，哌啶子基，吗啉代或4-(NR10)-1-哌嗪基基团，其中所述基团任选被CONR5R6取代；
R9是H或C1-C4烷基；
R10是H；C1-C3烷基或(羟基)C2-C3烷基；
和n是2，3或4；
条件是当R1是H，C1-C4烷基或C1-C4烷氧基时R4不是H；和其可药用的盐。
合适的PDE抑制剂化合物包括下式IV化合物：
其中R1是C1-C4烷基；R2是C2-C4烷基；
R3是H或SO2NR4R5；
R4和R5与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷子基，哌啶子基，吗啉代或4-(NR6)-1-哌嗪基基团；和
R6是H或C1-C3烷基；及其可药用的盐。
另外的合适的PDE抑制剂化合物包括下式(V)化合物：
其中，在式V中，R1是H；C1-C4烷基；CN或CONR4R5；R2是C2-C4烷基；
R3是SO2NR6R7；NO2；NH2；NHCOR8；NHSO2R8或N(SO2R8)2；
R4和R5各自独立地选自H和C1-C4烷基；
R6和R7各自独立地选自H和任选被CO2R9、OH、吡啶基、5-异噁唑啉-3-酮基、吗啉代或1-咪唑烷-2-酮基取代的C1-C4烷基；或者，与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷子基、哌啶子基、吗啉代、1-吡唑基或4-(NR10)-1-哌嗪基基团，其中所述基团可任选被一个或两个选自C1-C4烷基、CO2R9、NH2和OH的取代基取代；
R8是C1-C4烷基或吡啶基；
R9是H或C1-C4烷基；和
R10是H；C1-C4烷基或(羟基)C2-C3烷基；及其可药用的盐。
优选的一组上式I化合物包括如下化合物，其中：
R3是H；甲基或乙基；
R4是任选被环己基或吗啉代取代的C1-C6烷基；和
R1和R2如前式(I)所定义，及其可药用的盐。
优选的上式II化合物包括如下化合物，其中R1是正丙基；R2是H或甲基；R3是乙基或正丙基；R4是H；被CONR5R6或CO2R7取代的乙基；被CONR5R6或CO2R7取代的乙烯基；被NR5R6取代的乙酰基；SO2NR5R6；CONR5R6；CO2R7或溴；R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成吗啉代，4-(NR8)-1-哌嗪基或2，4-二甲基-1-咪唑基；R7是H或叔丁基；和R8是甲基或2-羟乙基；及其可药用的盐。
优选的上式III化合物包括如下化合物，其中R1是H；甲基；甲氧基或CONR5R6；R2是H或甲基；R3是乙基或正丙基；R4是H；任选被NR7R8取代的乙酰基；被NR7R8取代的羟乙基；CH＝CHCO2R9；CH＝CHCONR7R8；CH2CH2CO2R9；SO2NR7R8；SO2NH(CH2)3NR7R8或1-咪唑基；R5和R6各自独立地为H或乙基；R7和R8与它们所连接的氮原子一起形成哌啶子基，4-氨甲酰基哌啶子基，吗啉代或4-(NR10)-1-哌嗪基；R9是H或叔丁基；和R10是H；甲基或2-羟乙基；条件是当R1是H、甲基或甲氧基时R4不是H；及其可药用的盐。
优选的上式IV化合物包括如下化合物，其中R1和R2各自独立地为乙基或正丙基；R4和R5与它们所连接的氮原子一起形成4-(NR6)-1-哌嗪基；且R3和R6如前式IV定义；及其可药用的盐。
优选的上式V化合物包括如下化合物，其中R1是H；正丙基；CN或CONH2；R2是乙基；R3是SO2NR6R7；NO2；NH2；NHCOCH(CH3)2；NHSO2CH(CH3)2；NHSO2(3-吡啶基)或N[SO2(3-吡啶基)]2；R6是H；甲基或2-羟乙基；R7是任选被2-吡啶基或5-异噁唑啉-3-酮基取代的甲基；或2位被OH、CO2CH2CH3、吗啉代或1-咪唑烷-2-酮基取代的乙基；或R6和R7与它们所连接的氮原子一起形成(4-CO2R9)哌啶子基，5-氨基-3-羟基-1-吡唑基或4-(NR10)-1-哌嗪基；R9是H或乙基；和R10是H、甲基或2-羟乙基。
特别优选的一组化合物是：上式III化合物，其中R1是甲基；CONH2或CONHCH2CH3；R2是H；R3是乙基或正丙基；R4是H；乙酰基；1-羟基-2-(NR7R8)乙基；CH＝CHCO2C(CH3)3；CH＝CHCONR7R8；SO2NR7R8或1-咪唑基，R7和R8与它们所连接的氮原子一起形成4-(NR10)-1-哌嗪基；和R10是甲基或2-羟乙基；条件是当R1是甲基时R4不是H；式(IV)化合物，其中R1是正丙基；R2是乙基；和R3是1-哌嗪基磺酰基或4-甲基-1-哌嗪基磺酰基；和式V化合物，其中R1是正丙基或CN；R2是乙基；R3是SO2NR6R7；NHSO2CH(CH3)2；NHSO2(3-吡啶基)或N[SO2(3-吡啶基)]2；R6是H或甲基；R7是甲基；或2位被CO2CH2CH3；吗啉代或1-咪唑烷-2-酮基取代的乙基；或R6和R7与它们所连接的氮原子一起形成(4-CO2R9)哌啶子基或4-(NR10)-1-哌嗪基；R9是H或乙基；和R10是H；甲基或2-羟乙基。
尤其优选的单个本发明化合物包括：
1-乙基-5-[5-(正己基氨磺酰基)-2-正丙氧基-苯基]-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；
1-乙基-5-[5-(二乙基氨磺酰基-2-正丙氧基-苯基)-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]-嘧啶-7-酮；
5-[5-(N-环己基甲基-N-甲基氨磺酰基)-2-正丙氧基苯基]-1-乙基-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮；
6-(5-溴-2-正丙氧基苯基)-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮；
3-甲基-6-(5-吗啉代磺酰基-2-正丙氧基苯基)-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮；
6-[5-(2-羧基乙烯基)-2-正丙氧基苯基]-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮；
6-[5-(2-叔丁氧羰基乙烯基)-2-正丙氧基苯基]-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮；
3-甲基-6-[5-(2-吗啉代羰基乙烯基)-2-正丙氧基苯基]-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮；
3-甲基-6-[5-(2-吗啉代羰乙基)-2-正丙氧基苯基]-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮；
2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基-磺酰基]苯基}-8-甲基喹唑啉-4-(3H)-酮；
2-{5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基磺酰基]-2-正丙氧基苯基}-8-甲基喹唑啉-4(3H)-酮；
8-甲基-2-{5-[2-(4-甲基-1-哌嗪基羰基)-乙烯基(ethenyl)]-2-正丙氧基苯基}喹唑啉-4(3H)-酮；
8-氨甲酰基-2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基磺酰基]苯基}喹唑啉-4(3H)-酮；
8-乙基氨甲酰基-2-(2-正丙氧基苯基)喹唑啉-4(3H)-酮；
2-[2-乙氧基-5-(4-乙氧基羰基哌啶子基-磺酰基)苯基]-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
2-[5-(4-羧基哌啶子基磺酰基)-2-乙氧基苯基]-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基-磺酰基]苯基}-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；和
2-{2-乙氧基-5-[双-3-吡啶基磺酰基)氨基]-苯基}-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮。
在另一发明实施方式中，给药化合物中至少一种是四环cGMP特异性PDE抑制剂，例如美国专利6,143,746所述以及下式VI-IX所示的化合物，包括其可药用的盐。
更具体而言，合适的化合物包括下式VI化合物：
其中，在式VI中，R0代表氢，卤素，或C1-6烷基；
R1代表氢，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，卤代C1-6烷基，C3-8环烷基，C3-8环烷基C1-3烷基，芳基C1-3烷基，或杂芳基C1-3烷基；
R2代表任选取代的选自苯、噻吩、呋喃和吡啶的单环芳环，或任选取代的双环；
其经一个苯环碳原子与分子的其余部分相连，其中稠合环A是5-或6-元环，该环可以饱和或者部分或完全不饱和，并且包括碳原子和任选的一个或两个选自氧、硫和氮的杂原子；和
R3代表氢或C1-3烷基，或R1和R3一起代表3-或4-元烷基或链烯基链；及其可药用的盐和溶剂化物(如水合物)。
合适的化合物还包括下式VII化合物：
其中，在式VII中，R0代表氢，卤素，或C1-6烷基；
R1代表氢，C1-6烷基，卤代C1-6烷基，C3-8环烷基C1-3烷基，芳基C1-3烷基，或杂芳基C1-3烷基；和
R2代表任选取代的选自苯、噻吩、呋喃和吡啶的单环芳环，或任选取代的双环；
其经一个苯环碳原子与分子的其余部分相连，其中稠合环A是5-或6-元环，该环可以饱和或者部分或完全不饱和，并且包括碳原子和任选的一个或两个选自氧、硫和氮的杂原子；及其可药用的盐和溶剂化物(如水合物)。
另一优选用于本发明方法的式VI化合物亚组是如下式VIII化合物：
其中，在式VIII中：
R0代表氢，卤素，或C1-6烷基；
R1代表氢或C1-6烷基；
R2代表双环
或
其可任选被一个或多个选自卤素和C1-3烷基取代；和
R3代表氢或C1-3烷基；及其可药用的盐和溶剂化物(例如水合物)。
在上式VII中，关于R1，作为芳基C1-3烷基一部分的术语“芳基”指苯基或被一个或多个(例如，1，2，或3个)取代基取代的苯基，所述取代基选自卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基和亚甲二氧基。作为杂芳基C1-3烷基一部分的“杂芳基”指噻吩基，呋喃基，或吡啶基，其各自任选被一个或多个(例如，1，2，或3个)选自卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基取代。作为C3-8环烷基C1-3烷基的一个基团或一部分的术语“C3-8环烷基”指包含3-8个碳原子的单环。合适的环烷基环的例子包括C3-6环烷基环，如环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
在上式VII中，关于R2，任选的苯环取代基选自一个或多个(例如，1，2，或3个)原子或基团，该原子或基团包括卤素，羟基，C1-6烷基，C1-6烷氧基，CO2Rb，卤代C1-6烷基，卤代C1-6烷氧基，氰基，硝基，和NRaRb，其中Ra和Rb各为氢或C1-6烷基，或Ra也可代表C2-7烷酰基或C1-6烷基磺酰基。任选的其余环系统的取代基选自一个或多个(例如，1，2，或3个)原子或基团，该原子或基团包括卤素，C1-6烷基，C1-6烷氧基，和上文定义的芳基C1-3烷基。双环
Figure A0181042800371
可，例如，代表萘，杂环如苯并噁唑，苯并噻唑，苯并异噁唑，苯并咪唑，喹啉，吲哚，苯并噻吩，苯并呋喃，或
Figure A0181042800372
其中n是整数1或2，X和Y可各自代表CH2，O，S，或NH。
除非另外指明，在上面的式子以及其他本文描述的式子中，作为基团或基团一部分的术语“烷基”指直链，或者，在有用时，指支链部分，其含指定碳原子数。例如，它可代表C1-4烷基官能团，以甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基为代表。本文所使用的术语“链烯基”包括含指定碳原子数的直链和支链链烯基，例如乙烯基和烯丙基。本文使用的术语“炔基”包括含指定碳原子数的直链和支链炔基，乙炔是合适的。
除非另外指明，在上面的式子以及其他本文描述的式子中，本文中的术语“卤素”指氟，氯，溴，或碘原子。
除非另外指明，在上面的式子以及其他本文描述的式子中，术语“卤代C1-6烷基”指如上定义的烷基，其包含1-6个碳原子，并且在一个或多个碳原子上被一个或多个(例如，1，2，或3个)卤原子取代。类似地，卤代C1-6烷氧基是如上定义的经氧原子与R2苯环连接的卤代C1-6烷基。卤代C1-6烷基的例子包括三氟甲基和2，2，2-三氟乙基。卤代C1-6烷氧基的一个例子是三氟甲氧基。术语“C2-7烷酰基”指其中C1-6烷基部分如上定义的C1-6烷酰基。合适的C2-7烷酰基是C2烷酰基，乙酰基。
除非另外指明，在上面的式子以及其他本文描述的式子中，当R0是卤原子或C1-6烷基时，该取代基可位于四环中苯基部分的任何可用位置上。但是，特别的连接位是环的10-位。
式VI化合物可含两个或多个不对称中心，并因此可存在对映异构体和非对映异构体。具体而言，在上式VII中，用星号表示两个环手性中心。应理解，本发明包括式(VII)化合物的异构体混合物以及分离的单个异构体。
式VI化合物也可以互变异构体的形式存在，本发明包括其混合物和分离的单个互变异构体。
一组特别的用于本发明方法的化合物是式VI化合物，其中R0是氢或卤素(例如，氟)，特别是氢。
另一组特别的用于本发明方法的化合物是式VI化合物，其中R1代表氢，C1-4烷基，卤代C1-4烷基，C3-6环烷基，C3-6环烷基甲基，吡啶基C1-3烷基，呋喃基C1-3烷基，或任选取代的苄基。在该组具体化合物中，C1-4烷基的例子是甲基，乙基，正丙基，异丙基，和正丁基。C3-6环烷基甲基的例子是环丙基甲基和环己基甲基。任选取代的苄基的例子包括苄基和卤代苄基(例如，氟苄基)。
另一组用于本发明方法的化合物是式VI化合物，其中R2代表任选取代的苯，噻吩，呋喃，吡啶，或萘环，或任选取代的双环
其中n是1或2，和X和Y各为CH2或O。在该组具体化合物中，取代苯基团的例子是被如下基团之一取代的苯：卤素(例如，氯)，羟基，C1-3烷基(例如，甲基，乙基，或异丙基)，C1-3烷氧基(例如，甲氧基或乙氧基)，CO2Rb，卤代甲基(例如，三氟甲基)，卤代甲氧基(例如，三氟甲氧基)，氰基，硝基，或NRaRb，其中Ra和Rb各自为氢或甲基，或者，Ra为乙酰基，或二卤代(例如，二氯)或者被C1-3烷氧基(例如，甲氧基)以及卤素(例如，氯)和羟基之一取代的苯。取代噻吩环的一个例子是卤素(例如溴)取代的噻吩环。
更具体的式VI化合物是如下化合物，其中R3代表氢，或R1和R3一起代表3-元烷基链。
优选的一组本发明化合物是式VI的顺式异构体，如式(IX)所示：
Figure A0181042800392
以及与其顺式光学对映体形成的混合物，包括外消旋混合物，和这些化合物的盐和溶剂化物(例如水合物)，其中R0是氢或卤素(例如，氟)，特别是氢，和R1，R2，和R3如前定义。
式IX所示的单一异构体，即，6R，12aR异构体是特别优选的。
在上面对式IX的定义中，R1优选可代表C1-4烷基(例如，甲基，乙基，异丙基，和正丁基)，C3-6环烷基(例如，环戊基)或C3-6环烷基甲基(例如，环丙基甲基)。
R2优选可代表取代的苯环，如被C1-3烷氧基(例如，甲氧基)或被C1-3烷氧基(例如，甲氧基)和卤素(例如，氯)取代的苯，特别是4-甲氧基苯基或3-氯-4-甲氧基苯基，或R2优选可代表3，4-亚甲二氧基苯基。
特别优选的一个上式化合物亚组是如下化合物，其中R0代表氢。
进一步优选的亚组包括如下化合物，其中R1选自氢，甲基，和异丙基。
R2优选代表未取代的双环：
Figure A0181042800401
另一式IX化合物亚组是如下化合物，其中R3代表氢或甲基。
应理解，本发明包括上述具体和优选组别的全部适宜组合。
适用于本发明方法的具体化合物包括：
顺-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-(4-吡啶基-甲基)-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′；6，1]-吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
顺-2，3，6，7，12，12a-六氢-6-(2，3-二氢苯并[b]呋喃-5-基)-2-甲基-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并-[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
顺-2，3，6，7，12，12a-六氢-6-(5-溴-2-噻吩基)-2-甲基吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
顺-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-丁基-6-(4-甲基苯基)-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-异丙基-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并-[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-环戊基-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′；6，1]-吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-环丙基甲基-6-(4-甲氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′；6，1]-吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-6-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-甲基-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-甲基-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(5aR，12R，14aS)-1，2，3，5，6，11，12，14a-八氢-12-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡咯并[1″，2″：4′5′]-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-5-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-6-(5-苯并呋喃基)-2-甲基-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-6-(5-苯并呋喃基)-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(3S，6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-6-(5-苯并呋喃基)-3-甲基-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(3S，6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-6-(5-苯并呋喃基)-2，3-二甲基-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-6-(5-苯并呋喃基)-2-异丙基-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；及其生理可接受的溶剂化物(例如，水合物)。
本发明还可与美国专利6,140,329中公开的特殊cGMP PDE抑制剂的给药相配伍，至少一些所述化合物已在美国专利6,143,746中有所描述。美国专利6,140,329中的优选化合物如下式X所示，并包括其可药用的盐。
其中，在式X中：
R0代表氢，卤素或C1-6烷基；
R1代表氢，C1-6烷基，C2-6链烯基，C2-6炔基，卤代C1-6烷基，C3-8环烷基，C3-8环烷基C1-3烷基，芳基C1-3烷基或杂芳基C1-3烷基；
R2代表任选取代的选自苯，噻吩，呋喃和吡啶的芳族单环，或任选取代的双环
其经一个苯环碳原子与分子的其余部分相连，其中稠合环A是5-或6-元环，该环可以饱和或者部分或完全不饱和，并且包括碳原子和任选的一个或两个选自氧、硫和氮的杂原子；和
R3代表氢或C1-3烷基，或R1和R3一起代表3-或4-元烷基或链烯基链；及其可药用的盐和溶剂化物(如水合物)。
另外适用于所述治疗的的单个本发明化合物包括：
顺-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-(4-吡啶基甲基)-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
顺-2，3，6，7，12，12-六氢-6-(2，3-二氢苯并[b]呋喃-5-基)-2-甲基-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
顺-2，3，6，7，12，12a-六氢-6-(5-溴-2-噻吩基)-2-甲基-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
顺-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-丁基-6-(4-甲基苯基)-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-异丙基-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-环戊基-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-环丙基甲基-6-(4-甲氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-6-(3-氯-4-甲氧基苯基)-2-甲基-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-甲基-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(5aR，12R，14aS)-1，2，3，5，6，11，12，14a-八氢-12-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡咯并[1″，2″：4′，5′]吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-5-1，4-二酮；
顺-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-环丙基-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
(3S，6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-3-甲基-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮；
及其生理可接受的盐和溶剂化物(例如，水合物)。
特别适用于本发明方法的化合物包括：
(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-2-甲基-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4b]吲哚-1，4-二酮(化合物A)；和
(3S，6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氢-2，3-二甲基-6-(3，4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′：6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮(化合物B)；及其生理可接受的盐和溶剂化物(例如，水合物)。
在另一发明实施方式中，至少一种给药化合物是咔啉衍生物或N-肉桂酰基衍生物或(β)咔啉，如美国专利6,043,252和6,117,881所述。这些优选的化合物如下式XI和XIII所示，包括其可药用的盐。
式XI化合物具有如下结构：
Figure A0181042800441
其中，在式XI中：
R0代表氢或卤素；
R1选自：
氢，NO2，三氟甲基，三氟甲氧基，卤素，氰基，含至少一个选自氧、氮和硫的杂原子的5-或6-元杂环基团，和任选被如下基团取代：-C(O)ORa或C1-4烷基，任选被如下基团取代的C1-6烷基：-ORa，C1-3烷氧基，C(＝O)Ra，O-C(＝O)Ra，C(＝O)ORa，C1-4亚烷基C(＝O)ORa，O-C1-4亚烷基-C(＝O)ORa，C1-4亚烷基-O-C1-4亚烷基-C(＝O)ORa，C(＝O)NRaSO2Rc，C(＝O)C1-4亚烷基Het，C1-4亚烷基NRaRb，C2-6亚烷基NRaRb，C(＝O)NRaRb，C(＝O)NRaRc，C(＝O)NRaC1-4亚烷基ORbC(＝O)NRaC1-4亚烷基Het，ORaOC2-4亚烷基NRaRb，OC1-4亚烷基-CH(ORa)CH2NRaRb，O-C1-4亚烷基Het，O-C2-4亚烷基-ORa，O-C2-4亚烷基-NRa- C(＝O)ORb，NRaRb，NRaC1-4亚烷基NRaRb，NRaC(＝O)Rb，NRaC(＝O)NRaRb，N(SO2C1-4烷基)2，NRa(SO2C1-4烷基)，SO2NRaRb，和OSO2三氟甲基；R2选自：氢，卤素，ORa，C1-6烷基，NO2，和NRaRb，或者
R1和R2合在一起形成构成5-或6-元环的3-或4-元亚烷基或亚烯基(alkenylene)链组分，其任选含至少一个杂原子；
R3选自：氢，卤素，NO2，三氟甲氧基，C1-6烷基，和C(＝O)ORa；R4是氢，或者
R3和R4合在一起形成构成5-或6-元环的3-或4-元亚烷基或亚烯基链组分，其任选含至少一个杂原子；
Het代表5-或6-元杂环基团，其含至少一个选自氧、氮和硫的杂原子，和任选被C1-4烷基取代；
Ra和Rb可相同或不同，并独立地选自氢和C1-6烷基；
Rc代表苯基或C4-6环烷基，其中所述苯基或C4-6环烷基可任选被一个或多个卤原子，一个或多个-C(＝O)ORa，或一个或多个-ORa取代；
n是选自1，2和3的整数；
m是选自1和2的整数；
及其可药用的盐或溶剂化物(例如，水合物)。
在上式XI中，此处使用的术语烷基或亚烷基分别含指定的碳原子数，并包括直链和支链烷基或亚烷基，一般为甲基，亚甲基，乙基，和亚乙基，和直链和支链丙基，亚丙基，丁基，和亚丁基。与式XI相关使用的术语亚C2-6链烯基指如下基团，其含2至6个碳原子，并包括直链和支链亚烯基，特别是亚乙烯基等。在式XI中，术语C4-6环烷基指含4-6个碳原子的环状基团，即环丁烷、环戊烷和环己烷。在式XI中，此处使用的术语卤素包括氟，氯，溴，和碘。在式XI中，此处使用的术语5-或6-元杂环基团包括5-或6-元杂环烷基和杂芳基，例如，四氢呋喃基，哌啶基，哌嗪基，吡咯烷基，吗啉基，吡啶基，咪唑基，呋喃基，和四唑基。在式XI中，R0适宜代表氢。此外，R0也可代表卤素，特别是氟。在式XI中，R1可能适宜代表任何-ORa、-O-C2-4亚烷基NRaRb、-O-C1-4亚烷基Het和-O-C2-4亚烷基-ORa。R1特别代表-O-C2-4亚烷基NRaRb，其中C2-4亚烷基可代表亚乙基，和Ra和Rb可独立地代表甲基。R2特别适宜代表氢。此外，当R1和R2一起形成构成5-或6-元环的3-或4-元亚烷基或亚烯基链组分，并任选含至少一个上文所述杂原子时，R1和R2一起形成亚甲二氧基链、乙烯氧基链、亚乙二氧基链、亚乙烯氧基链、亚丙基链、亚丁基链或-NRa亚乙基-O-。R1和R2适宜一起形成亚甲二氧基、亚丙基、或-N(CH3)-(CH2)2-O-。
在上式XI中，R3和R4适宜合在一起形成构成5-或6-元环的3-或4-元亚烷基或亚烯基链组分，并任选含至少一个上文所述杂原子。特别是R3和R4一起形成亚甲二氧基链、乙烯氧基链、亚乙二氧基链、亚乙烯氧基链、亚丙基链、亚丁基链、或-NRa亚乙基-O-。R3和R4适宜一起形成亚甲二氧基链、乙烯氧基链、亚乙二氧基链、亚乙烯氧基链、或亚丙基链。特别是，R3和R4一起形成亚甲二氧基或乙烯氧基，更特别是乙烯氧基。
用于本发明方法的一个具体化合物亚组包括下式(XII)化合物：
其中
R5选自-OH、-OC2-4亚烷基NRaRb、和O-C1-4亚烷基Het，其中Het如上文所述，和
R6代表
其中C代表5-或6-元环，其可以是饱和或者部分或完全不饱和的，并包含碳原子和任选的选自氧、硫和氮的一个或两个杂原子，并任选被C1-4烷基取代；
及其可药用的盐和溶剂化物(例如，其水合物)。
在式XII中，R5一般代表-OC2-4亚烷基NRaRb，特别是-OCH2CH2N(CH3)2。此外，R5也可代表-O-C1-4亚烷基Het，其中Het可以是哌啶基、吡咯烷基(任选被C1-4烷基如甲基取代)或吗啉基。
R6特别代表
Figure A0181042800472
或
Figure A0181042800473
尤其是
Figure A0181042800481
另外的用于本发明方法的具体化合物包括：
(E)-1-(1-苯基-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-1-(1-苯基-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-3-(4-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-(1-苯基-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-3-(4-三氟甲基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-(1-苯基-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-3-(4-甲氧基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(4-甲氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-三氟甲基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-N-[4-[3-氧代-3-(1-苯基-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯基]乙酰胺；
(E)-1-[1-(4-甲氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-1-(1-苯基-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-3-(4-甲酰基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-N-[4-[3-氧代-3-(1-(4-硝基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯基]乙酰胺；
(E)-1-[1-(4-硝基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(4-三氟甲氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(4-甲基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-N-[4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-丙烯基]苯基]乙酰胺；
(E)-4-[3-氧代-3-(1-苯基-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-丙烯基]苯甲酸甲酯；
(E)-1-[1-(2-氯苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-1-(1-苯基-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-3-(3，4-亚甲二氧基苯基)-丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-溴苯基)-丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(4-氯苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-乙氧基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]乙酸苯酯；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-羟基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-甲酰基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-丙烯基]苯基]-3-苯基脲；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-氨基苯基)-丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-硝基苯基)-丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-[(4-双(甲基磺酰基)-氨基苯基]-丙烯-1-酮；
(E)-4-[3-氧代-3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-丙烯基]苯甲酸甲酯；
(E)-N-[4-[3-氧代-3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯基]甲磺酰胺；
(E)-4-[3-氧代-3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯甲酰胺]；
(E)-4-[3-氧代-3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-丙烯基]苯甲酸；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-氰基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-三氟甲基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3，4-亚甲二氧基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-氯苯基)-丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-三氟甲氧基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-甲基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-[4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯基]脲；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-羟基甲基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-N-苄基-4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯甲酰胺；
(E)-1-[1-(3，4-亚乙二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(2，4-二氯苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-甲氧基-4-羟基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-氟苯基)-丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(2，3-二氢化茚)-5-基-1-丙烯-1-酮；
(E)-N-[4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯甲酰基]苯磺酰胺；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3，4-二氯苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3，4-二甲氧基苯酚)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3，4-二羟基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-N-甲基-N-[4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯基]乙酰胺；
(E)-2，2-二甲基-N-[4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯基]丙酰胺；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3，5-二甲氧基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(N)-{4-[3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-6-氟-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-氧代丙烯基]-苯基}-乙酰胺；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3，4，5-三甲氧基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-N-[4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯基]异丁酰胺；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-6-氟-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-N-(2-甲氧基乙基)-4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯甲酰胺；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-羟基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-甲氧基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-[4-(2-二甲基氨基乙氧基)苯基]丙烯-1-酮；
(E)-N-(2-吗啉-4-基乙基)-4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯甲酰胺；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-[4-(1H-四唑-5-基)苯基]丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-氨基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-N-环己基-4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯甲酰胺；
(E)-N-(四氢呋喃-2-基甲基)-4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基)苯甲酰胺；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-氰基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-N-(4-哌啶-4-羧酸乙酯)-4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯甲酰胺；
(E)-N-(4-哌啶-4-羧酸)-4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯甲酰胺；
(E)-3-[3-氧代-3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-丙烯基]苯甲酸；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-苯基)丙烯-1-酮；
(E)-N-(2-哌嗪-1-基乙基)-3-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯甲酰胺；
(E)-4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-丙烯基]乙酸乙酯；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-四唑并苯基)丙烯-1-酮；
(E)-2-[3-氧代-3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-丙烯基]苯甲酸甲酯；
(E)-3-[3-氧代-3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-丙烯基]苯甲酸甲酯；
(E)-1-(4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-丙烯基]苯基)哌啶-4-羧酸乙酯；
(E)-N-(1-乙基吡咯烷-2-基-甲基)-3-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯甲酰胺；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-(2-二甲基氨基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3，5-二叔丁基(diterbutyl)-4-羟基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-3-[3-氧代-3-[1-(4-甲氧基羰基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯甲酸甲酯；
(E)-2-[3-氧代-3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯甲酸；
(E)-(4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯氧基)乙酸乙酯；
(E)-(4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-丙烯基]苯基)乙酸；
(E)-(4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯氧基)乙酸；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-硝基-4-氯苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(5-硝基-2-氯苯基)丙烯-1-酮；
(E)-3-氯代-4-[3-氧代-3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯甲酸甲酯；
(E)-(4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基)苄氧基)乙酸；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(5-氨基-2-氯苯基)丙烯-1-酮；
(E)-3-氯代-4-[3-氧代-3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯甲酸；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3，5-二溴-4-羟基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-(2-二甲基氨基丙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-2-氯-5-[3-氧代-3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯甲酸甲酯；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-(2-二异丙基氨基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-2-氯-5-[3-氧代-3-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯甲酸；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-羟基-4-硝基-苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3，5-二甲基-4-羟基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-(2-二甲基氨基乙氧基)-4-硝基-苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-(2-二甲基氨基乙氧基)-4-氨基-苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-硝基-4-羟基-5-甲氧基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-氯苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(4-甲氧基-苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(2-氯-5-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(2，6-二氯苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-甲基氨基甲基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-甲基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-N-甲基-(4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯磺酰胺；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-羟基-4-乙酰基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(2-氯-5-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(2-羟基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-硝基-2-哌啶-1-基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(4-异丙基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-(S)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(4-甲氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(4-甲基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(2-氯-5-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-N-(四氢呋喃-2-基甲基)-3-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯甲酰胺；
(E)-1-[1-((2，3-二氢化茚)-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-乙酰基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-二甲基氨基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-4-[3-氧代-3-[1-(4-甲氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯甲酸甲酯；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-甲基-3，4-二氢-2H-苯并[1，4]-噁嗪-6-基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(2-羟基-5-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-4-[3-氧代-3-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基)苯甲酸甲酯；
(E)-4-[3-氧代-3-[1-(4-甲氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯甲酸；
(E)-4-[3-氧代-3-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯甲酸；
(E)-1-[1-(苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-3-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-丙烯基]苯基)三氟甲磺酸苯酯；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(苯并呋喃-5-基-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-二甲氨基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(2-二甲氨基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(2-哌啶-1-基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-4-[3-氧代-3-[1-(苯并呋喃-5-基-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基丁)-丙烯基]-苯甲酸甲酯；
(E)-4-[3-(1-苯并呋喃-5-基-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-3-氧代-丙烯基]-苯甲酸；
(E)-4-[3-氧代-3-(1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)丙烯基]苯基)三氟甲磺酸苯酯；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(2-(2-二甲氨基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-二甲氨基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-[1-(2，3-二氢苯并[1，4]二噁英(dioxin)-6-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-吡咯烷-1-基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-[4-吡咯烷-1-基苯基]丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-[4-咪唑-1-基苯基]丙烯-1-酮；
(E)-4-[3-[1-(2，3-二氢苯并[1，4]二噁英-6-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-氧代-丙烯基]苯甲酸甲酯；
(E)-1-[1-(2，3-二氢苯并[1，4]二噁英-6-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(2，3-二氢苯并[1，4]二噁英-6-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-二甲氨基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-二甲氨基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-4-[3-[1-(2，3-二氢苯并[1，4]二噁英-6-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-氧代丙烯基]苯甲酸；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-(S)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-二甲氨基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-氨基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(S)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-苯基丙烯-1-酮；
(E)-(S)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(1-(S)-甲基吡咯烷-2-基-甲氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-羟基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-二甲氨基-1-甲基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-(1-苯基-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(1-(S)-甲基吡咯烷-2-基-甲氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-(2-二甲氨基-1-甲基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-二甲氨基丙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-4-[3-氧代-3-[1-(3，4-氟苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯甲酸甲酯；
(E)-(R)-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-(2-二乙氨基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-二甲氨基丙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-4-[3-氧代-3-[1-(3，4-二氟苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]丙烯基]苯甲酸；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-氨基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-氨基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-吡咯烷-1-基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-二乙氨基乙氧基)苯基丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(3-硝基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-三氟甲基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(3-三氟甲基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-(2-吗啉-4-基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-(2-(乙甲氨基)乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-(3-(二甲氨基)丙烯基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-(3-二甲氨基-2-羟基丙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-(1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-3-(4-甲酰基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-丙基氨基甲基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-[4-(2-二甲氨基乙基氨基)苯基丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-(2-氨基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-羟基苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-甲基氨基甲基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-异丙基氨基甲基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-二甲基氨基甲基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-[4-(3-二甲氨基丙氧基)苯基]丙烯-1-酮；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-(4-(2-哌啶-1-基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮；
(E)-1-[1-(3，4-亚甲二氧基苯基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)-3-(4-(2-哌啶-1-基乙氧基)苯基]丙烯-1-酮；
(E)-(R)-[2-(4-{3-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基]-3-氧代丙烯基}-苯氧基)乙基]甲基氨基甲酸叔丁酯；
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-咔啉-2-基]-3-[4-(2-甲基氨基乙氧基)苯基]丙烯-1-酮；
及其可药用的盐和溶剂化物(例如，水化物)。
一个具体的本发明化合物是：
(E)-(R)-1-[1-(2，3-二氢苯并呋喃-5-基)-1，3，4，9-四氢-β-咔啉-2-基)]-3-(4-(2-二甲氨基乙氧基)苯基)丙烯-1-酮，及其可药用的盐和溶剂化物(例如，水合物)。
在另一发明实施方式中，至少一种给药化合物是如美国专利6,143,757和6,001,847中所述的化学化合物。这些化合物如下式XIII所示，包括其可药用的盐：
Figure A0181042800611
其中在式XIII中：
R0代表氢、卤素或C1-6烷基；
R1选自：
(a)氢，
(b)C1-6烷基，其任选被一个或多个选自苯基、卤素、-CO2Ra和-NRaRb的取代基取代
(c)C3-6环烷基，
(d)苯基，和
(e)5-或6-元杂环，其含至少一个选自氧、氮和硫的杂原子，并任选被一个或多个C1-6烷基取代，并且任选经C1-6烷基与R1所连的氮原子相连；
R2选自：
(f)C3-6环烷基，
(g)苯基，其任选被一个或多个选自-ORa、-NRaRb、卤素、羟基、三氟甲基、氰基和硝基的取代基取代，
(h)5-或6-元杂环，其含至少一个选自氧、氮和硫的杂原子；和
(i)双环
Figure A0181042800621
其经一个苯环碳原子与分子的其余部分相连，其中A是(h)中定义的5-或6-元杂环；和
Ra和Rb独立地代表氢或C1-6烷基。
在上式XIII中，术语“C1-6烷基”指任何含1-6个碳原子的直链或支链烷基链，包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、戊基和己基等。术语“卤素”指氟、氯、溴和碘。
特别的一组式XIII化合物是如下化合物，其中R0代表氢、甲基、溴、和氟中的任一个，但式XIII中给出的R0定义包括在其范围内的其他C1-6烷基和卤素基团。
在上式XIII中，R1优选可代表选自甲基、乙基(任选被一个或多个氯原子取代)、丁基、环己基和苄基的取代基。其他R1取代基包括氢；环烷基，如环丙基；C1-6烷基，一般为乙基或丙基，其被-NRaRb取代基如二甲氨基取代基取代；苯基，其任选经C1-6烷基链如乙基等与R1所连接的氮原子相连；和C1-6烷基，例如甲基，其被-CO2Ra如-CH2CO2Et(Et是CH2CH3)等取代。
合适的式XIII R1定义中的杂环包括吡啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基和哌啶基。通常，该杂环经C1-6烷基链，更优选C1-4烷基链与R1所连接的氮原子相连。
具体的R2取代基是
其他R2取代基包括噻吩基、吡啶基、呋喃基和苯基，其中苯基可被一个或多个取代基取代，所述取代基选自-ORa(例如，甲氧基)、-NRaRb(例如，二甲氨基)、卤素(特别是氯或氟)、羟基、三氟甲基、氰基和硝基。此外，R2也可代表C3-6环烷基，如环己基等。
含碱性中心的式XIII化合物可药用盐是由可药用酸形成的酸加成盐。例子包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、磷酸盐或磷酸氢盐、乙酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、葡糖酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。式XIII化合物也可制成可药用的金属盐，特别是用碱制成的碱金属盐。例子包括钠盐和钾盐。
应理解，本发明包括上述具体和优选组别的全部适宜组合。
适用于本发明方法的其他具体上式化合物包括：
顺-2-苄基-5-(3，4-亚甲二氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-苄基-5-(3，4-亚甲二氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-5-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-乙基-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-乙基-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-乙基-5-(3，4-亚甲二氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-乙基-5-(2-噻吩基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-5-(4-二甲氨基苯基)-2-乙基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-9-甲基-5-苯基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-9-溴-2-丁基-5-苯基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-丁基-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-丁基-9-氟-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-9-氟-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-5-(3，4-亚甲二氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-丁基-5-(3-氯苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-5-(3-氯苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-丁基-5-(4-氯苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-5-(4-氯苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-5-(4-氟苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-5-(4-羟基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-丁基-5-(4-三氟甲基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-丁基-5-(4-氰基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-5-(4-氰基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-丁基-5-(4-硝基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-5-(4-硝基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-丁基-5-(3-吡啶基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-丁基-5-(3-噻吩基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-5-(3-噻吩基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-丁基-5-(3-呋喃基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-5-(3-呋喃基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-环己基-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-环己基-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-环己基-9-氟-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-环己基-9-氟-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-苄基-5-苯基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-苄基-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-苄基-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
(5R，11aR)-2-苄基-5-(3，4-亚甲二氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-苄基-5-(4-羟基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-(2-氯乙基)-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-苄基-5-环己基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-苄基-5-环己基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-5-苯基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-环己基-5-苯基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-环己基-5-苯基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-乙氧基羰基甲基-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-5-(4-甲氧基苯基)-2-[2-(2-吡啶基)-乙基]5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-环丙基-5-苯基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-苯乙基-5-苯基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-5-苯基-2-(2-吡啶基甲基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-5-苯基-2-(4-吡啶基甲基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-5-(4-甲氧基苯基)-2-(3-吡啶基甲基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1’，5’：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-(2-二甲氨基乙基)-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-(3-二甲氨基丙基)-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-(2-吗啉-4-基-乙基)-5-苯基-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-5-(4-甲氧基苯基)-2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-5-(4-甲氧基苯基)-2-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1’，5’：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-5-(4-甲氧基苯基)-2-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙基]-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
及其可药用的盐和溶剂化物。
特别优选的本发明化合物是：
(5R，11aR)-2-苄基-5-(3，4-亚甲二氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-环己基-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
反-2-丁基-5-(4-甲氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b)吲哚-1，3(2H)-二酮；
顺-2-苄基-5-(3，4-亚甲二氧基苯基)-5，6，11，11a-四氢-1H-咪唑并[1′，5′：1，6]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，3(2H)-二酮；
及其可药用的盐和溶剂化物。
如前所述，本发明适合与包括其生物活性变体在内的多种胰岛素分子(例如，猪，兔，小鼠，或人的胰岛素)配伍，所述生物活性变体包括等位基因变体。术语“生物变体”，特别是当该术语涉及人胰岛素时，指与全长和成熟的人胰岛素序列(参见，Kahn，C.R.等，于ThePharmacological Basis of Therapeutics，第8版.(Gilinan，A.G等编辑)第1464页，McGraw-Hill，Inc.New York.)相比具有至少一个氨基酸替换、缺失或添加的分子。
更特别的全长和成熟胰岛素序列的生物活性变体优选具有至少约80或85％，优选90％，更优选至少约95％，和更优选至少约100％的上述全长和成熟胰岛素序列活性。测定胰岛素活性的方法已知包括此处有时称作标准活体外胰岛素实验的方法。该实验涉及向禁食兔给予一定量的胰岛素，并测定该兔的血糖浓度。有关标准活体外胰岛素实验的详细描述参见Kahn，C.R.的文献以及其中引用的文献。在标准活体外胰岛素实验中，一单位胰岛素等于在大约数小时后将血糖浓度降低至约45mg/dl(2.5mM)所需的量。
全长和成熟胰岛素序列的生物活性变体适宜与未修饰胰岛素相比基本上具有序列同一性，例如，与未修饰的灵长类、兔或啮齿类动物胰岛素相比，优选与未修饰的灵长类胰岛素如人胰岛素相比，具有至少约70％，80％或85％，优选90％，更优选至少约95％的序列同一性，其中所述序列同一性根据BLAST程序测定。
特别的本发明胰岛素制剂是每毫克包括约20至约40单位胰岛素的重组人胰岛素。典型制剂包括约1至约5 mg胰岛素/毫升。也可得到更浓的胰岛素溶液，其浓度高达约500U/ml。
制备生物活性胰岛素变体的方法是已知的，一般包括在核酸水平上制造突变，例如(连续或不连续的)替换、添加或缺失，其中所述突变可针对实质上同源的变体编码核酸序列进行。特别是，给定核苷酸序列可在活体外或在活体内突变，以产生核苷酸变化，例如，形成新的或附加的限制性内切酶位点，或者破坏先前存在的位点，并由此促进进一步活体外修饰。可使用任何本领域已知的诱变技术，包括但不限于活体外定点诱变(Hutchinson等，J.Biol.Chem.，253：6551(1978))，使用TAB记录TM接头(Pharmacia)，和PCR-定向诱变等。
除非另外指明，术语“可药用的”或“生理可接受的”盐和/或溶剂化物指含碱性中心的本发明化合物的盐，例如，与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，与有机羧酸，或与有机磺酸形成的非毒性酸加成盐。本发明化合物也可制成可药用的金属盐，特别是用碱制成的碱金属盐。例子包括钠盐和钾盐。有关合适药用盐的综述参见J.Pharm.Sci.，1977，66，1。
本发明化合物可根据如下专利所述的方法适当地制备：美国专利6,100,270；6,006,735；6,143,757；6,143,746；6,140,329；6,117,881；6,043,252；6,001,847；5,981,527；和6,207,829 B1。一些治疗化合物可商购，如西地那非(ViagraTM)。
如前讨论的，优选的人重组胰岛素也可有多种商业来源。参见ThePhysician′s Desk Reference，同上。
本发明进一步提供了更特别的预防或治疗哺乳动物，优选灵长类、啮齿类或兔，更优选人类受试者的糖尿病性胃病的方法。在一个实施方式中，所述方法包括给予哺乳动物治疗有效量的至少一种如下物质：
a)一种或多种上式I-XIII所示的化合物，及其可药用的盐，和
b)胰岛素或其生物学活性变体，包括等位基因变体，优选以可药用的和无菌制剂形式提供的人胰岛素，或者提高受试者的胰岛素效果或水平的化合物。
在上述方法的一个实施方式中，给药化合物是至少一种式I-V所示化合物及其可药用的盐。给药化合物优选是至少一种吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，喹唑啉-4-酮，嘌呤-6-酮，或吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酮，或它们的可药用的盐。
更优选，所述方法中的给药化合物是至少一种如下化合物：
a)5-[2-乙氧基-5-(4-甲基哌嗪-1-基磺酰基)苯基]-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3d]嘧啶-7-酮(西地那非)，
b)1-乙基-5-[5-(正己基氨磺酰基)-2-正丙氧基-苯基]-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，
c)1-乙基-5-(5-二乙基氨磺酰基-2-正丙氧基-苯基)-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]-嘧啶-7-酮，
d)5-f5-(N-环己基甲基-N-甲基氨磺酰基)-2-正丙氧基苯基]-1-乙基-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，
e)6-(5-溴-2-正丙氧基苯基)-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
f)3-甲基-6-(5-吗啉代磺酰基-2-正丙氧基苯基)-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
g)6-[5-(2-羧基乙烯基)-2-正丙氧基苯基]-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
h)6-[5-(2-叔丁氧羰基乙烯基)-2-正丙氧基苯基]-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
i)3-甲基-6-[5-(2-吗啉代羰基乙烯基)-2-正丙氧基苯基]-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
j)3-甲基-6-[5-(2-吗啉代羰基乙基)-2-正丙氧基苯基]-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
k)2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基-磺酰基]苯基}-8-甲基喹唑啉-4-(3H)-酮，
l)2-{5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基磺酰基]-2-正丙氧基苯基}-8-甲基喹唑啉-4(3H)-酮，
m)8-甲基-2-{5-[2-(4-甲基-1-哌嗪基羰基)-乙烯基(ethenyl)]-2-正丙氧基苯基}喹唑啉-4(3H)-酮，
n)8-氨甲酰基-2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基磺酰基]苯基}喹唑啉-4(3H)-酮，
k)8-乙基氨甲酰基-2-(2-正丙氧基苯基)喹唑啉-4(3H)-酮，
l)2-[2-乙氧基-5-(4-乙氧基羰基哌啶子基-磺酰基)苯基]-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，
m)2-[5-(4-羧基哌啶子基磺酰基)-2-乙氧基苯基]-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，
n)2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基-磺酰基]苯基}-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，
o)2-{2-乙氧基-5-[双-3-吡啶基磺酰基)氨基]-苯基}-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
或其可药用的盐。
特别优选的是西地那非(ViagraTM)给药。
如上文讨论的，用于根据本发明给药的典型受试者是哺乳动物，如灵长类，尤其是人类。兽用时，很多受试者都合适，例如家畜，如牛，羊等；和驯养动物，特别是宠物，如狗和猫。
在本发明的治疗方法中，适宜选择需要该治疗的哺乳动物等受试者，例如患有GI疾病的受试者，例如患有上述那些GI疾病，优选糖尿病性胃病，和随后给选定受试者给予本发明的治疗化合物。
本发明化合物适宜以质子化和水溶形式给予受试者，例如，作为有机酸或无机酸的可药用的盐，例如，盐酸盐，硫酸盐，半硫酸盐(hemi-sulfate)，磷酸盐，硝酸盐，乙酸盐，草酸盐，柠檬酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐等。此外，当治疗化合物中存在酸性基团时，也可使用有机或无机碱的可药用的盐，如铵盐，或有机胺盐，或碱金属或碱土金属盐，如钾盐、钙盐或钠盐。特别合适的可药用的盐也已在上文中公开。还可考虑使用前述的适宜的化合物溶剂化物。
在本发明的方法中，治疗化合物如胰岛素或PDE抑制剂化合物可以多种途径给予受试者，包括经非肠道(包括静脉内，皮下，肌内和皮内)，局部(包括颊部，舌下)，口服，经鼻等给药。
用于本发明方法的治疗化合物可单独施用，或与一种或多种其他治疗剂组合施用，所述其他治疗剂包括一种或多种促动力剂，它们与常规赋形剂混合作为药物组合物，所述赋形剂即为可药用的有机或无机载体物质，其适合于所需的给药途径，不会不利地与活性化合物反应，且对接受者无害。合适的可药用的载体包括但不限于水、盐溶液、醇、植物油、聚乙二醇、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、芳香油、甘油一脂肪酸酯和甘油二脂肪酸酯、石油醚脂肪酸酯(petroethral fatty acid esters)、羟甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮等。可对药物制剂灭菌，如果需要，可与助剂混合，所述助剂例如，润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂、调味剂和/或芳香物质等，它们不会不利地与活性化合物反应。
对于非肠道施用，特别合适的是溶液，优选油性或水溶液，以及悬浮液、乳状液或植入物，包括栓剂。安瓿剂是方便的单位剂量方式。
对于肠道给药，特别合适的是片剂、糖锭或胶囊，其含有滑石和/或碳水化合物载体黏合剂等，所述载体优选是乳糖和/或玉米淀粉和/或土豆淀粉。可使用糖浆剂或酏剂等，其中采用甜味介质。可配制持续释放组合物，包括其中活性成分受可差别降解涂层保护的组合物，例如经微囊包封、多重涂层等保护。对于口服给药，片剂、胶囊和糖浆剂或其他流体通常是优选的。
在一特定治疗中，可给药单一治疗化合物或多种不同治疗化合物的组合。在这方面，通过选择最佳治疗化合物，特别是最佳PDE抑制剂化合物，或多种胰岛素变体或PDE抑制剂化合物的最佳混合物，可优化特定的治疗。这些最佳化合物可容易地由本发明技术人员鉴别，例如通过下面实施例中的活体外和活体内实验进行。
如上所述，其他药物的给药可与本发明治疗化合物给药协同进行，特别是与PDE抑制剂化合物协同给药。例如，促动力剂，特别是甲氧氯普胺、多潘立酮、红霉素或西沙比利的至少一种，例如分开或基本上同时给药，如通过将两种试剂配制为一种药物组合物用于给予患者。
应理解，在指定治疗中使用的实际优选的活性化合物量随利用的具体化合物、配制的具体组合物、施用方式、给药的具体位置等变化。指定给药方案的最佳给药速率可由本领域技术人员利用常规剂量确定试验容易地确定，所述试验根据前述指示进行。至少一些治疗化合物如西地那非(ViagraTM)和重组人胰岛素先前已经在临床上应用，因此确定这些化合物的安全性。在先前的临床应用中采用的剂量还将为本发明方法的优选剂量提供进一步的指导。
本发明还提供了预防或治疗哺乳动物的至少一种GI疾病的方法，所述哺乳动物已接受或将要接受治疗量的至少一种促动力剂的处理。合适的促动力剂的例子包括如下文献中所述的那些：Gilman，Ed.，同上，例如，甲氧氯普胺、多潘立酮、红霉素或西沙比利的一种或多种。用于本发明的具体促动力剂的选择和剂量根据已知参数来进行，这些参数包括治疗的GI疾病、个体的高度和重量等。用于促动力剂给药的优选给药方案已报告于Gilman，E.D.，同上。
如已经讨论和将更明显从下文实施例中看出的，通过检测离体器官浴制备物(organ bath preparation)中的胃排空和幽门神经生理，使用带有靶向基因组nNOS缺失的小鼠，我们评价了nNOS在胃幽门功能中的作用。我们发现nNOS-/-小鼠胃排空延迟和幽门中丧失NO介导非肾上腺素能、非胆碱能(NANC)弛缓。使用两个小鼠糖尿病模型，我们发现糖尿病小鼠发展出胃排空延迟和幽门中丧失NO介导非肾上腺素能、非胆碱能(NANC)弛缓，它类似于nNOS-/-小鼠的表型。nNOS蛋白和mRNA在糖尿病小鼠的幽门肠肌层神经元中减少，与缺乏NO介导的幽门弛缓一致。胰岛素处理逆转了糖尿病小鼠的异常生理，并恢复幽门nNOS蛋白和mRNA。西地那非是一种增强NO信号的cGMP磷酸二酯酶抑制剂，用西地那非处理糖尿病动物，逆转了胃排空延迟。相应地，小鼠糖尿病性胃病的关键特点反映出nNOS的可逆负调节。
本文所述的所有文献引入本文作为参考。下面非限制性实施例是本发明的举例说明。
下面实施例1-4在如下文献中有描述：C.C.Watkins等(2000)J ofClin.Invest.106：373；其内容引入本文作为参考。
实施例1：nNOS-/-小鼠胃排空延迟和缺乏幽门NANC弛缓
nNOS-/-小鼠幽门肥大和胃扩张，暗示了NO在幽门功能中的关键作用(15)。nNOS在整个胃、幽门和肠中表达(33-35)，所有这些组织以不同方式协同调节胃排空(10)。因此，我们希望确定nNOS-/-小鼠胃幽门生理学上nNOS基因组缺失的全部功能性效果。为了说明此点，采用分光光度法来测量小鼠流食胃排空(30，36)。在这些实验中，小鼠用小导管经口-胃插管，随后灌输含已知量酚红的液体。在合适的时间之后，用分光光度法测定留在胃中的酚红的量。盐水排空快，t1/2为8分钟，而10％和20％右旋糖排空较慢(分别针对10％和20％右旋糖，t1/2＝24和32分钟)，反映出作为对热量载荷增加的回应，正常的生理性胃排空减缓(图1a)。在nNOS-/-小鼠中，在胃排空盐水(t1/2＝34分钟)、10％右旋糖(t1/2＝50分钟)和20％右旋糖(t1/2＝75分钟，图1b)的情况下，观察到实质的延迟。因此在nNOS-/-小鼠中胃排空延迟，与nNOS在胃排空中的关键作用一致。
由于局部化幽门收缩可阻碍胃流出(9，10)，幽门弛缓的削弱可能是nNOS-/-小鼠中胃排空延迟的原因。为评估这种可能性，我们使用小鼠幽门的离体器官浴制备物。nNOS-/-幽门对乙酰胆碱(Ach)，P物质(SP)，和硝普钠(SNP)具有正常应答，说明平滑肌功能不受nNOS丧失的影响。在NANC条件下，幽门用0.1微摩尔的SP预收缩，通过电场刺激引发NO依赖性弛缓。野生型幽门证明作为EFS回应，有实质的NANC弛缓(图1，c和d)。该弛缓由NO介导，它可被nNOS抑制剂阻断，包括0.1mM L-NNA和0.1mM。在同一条件下，在nNOS-/-幽门中NANC弛缓几乎被消除(图1，c和d)。野生型幽门中EFS-诱发的弛缓完全被0.1微摩尔TTX阻断，与神经元NO源一致。这些结果表明nNOS衍生的NO影响幽门中NANC弛缓，和NO介导NANC弛缓的丧失导致胃排空延迟。
图1的详细解释如下：nNOS-/-小鼠胃排空延迟，并丧失NO依赖性NANC弛缓。(a)野生型(WT)小鼠和(b)nNOS-/-小鼠中的胃排空。如方法部分所述，酚红标记的盐水(圆)，10％右旋糖(三角)，或20％右旋糖(正方形)被灌输到各组小鼠的胃中，对每时间点有5-10只动物。在所示时间处死小鼠，以确定保留在它们胃中的酚红，作为胃排空的量度。单个数据点表示从各组小鼠个体中得到的在各时间点上5-10个测定值的平均(±SEM)。在有些情况下，误差范围小，并处于标记范围内。作为对热量增加响应而观察到的胃排空延迟与已知的胃生理一致，并由nNOS-/-小鼠保有。如所描述的(参见方法)，由野生型和nNOS-/-幽门监测(c)EFS引起的NANC弛缓。在用SP(0.1微摩尔)预收缩后，野生型幽门显示对EFS(40V，10Hz，5ms脉冲，持续5秒)响应的弛缓(＞95％)，而在nNOS-/-幽门中几乎不存在弛缓(＜5％)。所有EFS引起的弛缓被0.1微摩尔TTX和nNOS抑制剂L-NNA(0.1mM)和7-Nt(0.1mM)阻断。所显示的例子是来自代表性的实验。(d)对野生型和nNOS-/-幽门定量NANC诱发的弛缓。使用数个表示野生型和nNOS-/-小鼠的幽门来定量对EFS响应的NANC弛缓度。与野生型样本相比，如果各组小鼠存在数个测定值(对野生型n＝20，对nNOS-/-幽门n＝10)，则显示的数据是平均值(±SEM)。
实施例2：糖尿病小鼠胃排空延迟且NO依赖性NANC弛缓减小，与nNOS-/-小鼠类似
在nNOS-/-小鼠中观察到的胃排空延迟与人糖尿病性胃病类似(4-6，37-39)。此外，先前的报道表明nNOS表达在糖尿病大鼠中可能有所改变(25-27)。为确定nNOS是否在糖尿病性胃病中具有作用，在两个小鼠糖尿病模型中评估了胃幽门功能。NOD小鼠在约14周龄时，经胰腺B细胞的自体免疫破坏，自发地发展出糖尿病(40)。因此，年幼的NOD小鼠(NOD前驱糖尿病)具有正常的胰岛素和葡萄糖水平，而年老的NOD糖尿病小鼠具有胰岛素缺陷性糖尿病。另一个小鼠糖尿病模型使用STZ，STZ是选择性地被胰腺B细胞摄取的毒性葡萄糖衍生物(29)。我们用单一STZ注射(200mg/kg；如方法部分讨论)来诱发糖尿病，并研究8周后STZ糖尿病小鼠的胃幽门功能。NOD前驱糖尿病小鼠具有正常的胃排空速率，与年龄相符的野生型对照类似，而在NOD糖尿病小鼠中胃排空显著延迟(图2a)。如同NOD糖尿病小鼠，STZ-糖尿病小鼠胃排空大大延迟，类似于nNOS-/-小鼠(图2a)。因此，胃排空延迟发生在两个不同的小鼠糖尿病模型中。
高血糖症，包括正常餐后范围内的血糖水平，可在正常和糖尿病人中延迟胃排空(41-47)，尽管幽门收缩增加可能不会在血糖正常过程中帮助胃排空延迟(48)。因此，高血糖症单独可解释糖尿病小鼠中观察到的胃排空延迟。为说明此种可能，我们使用皮下植入物用胰岛素处理了STZ-糖尿病动物(参见方法部分)，并监测血清葡萄糖水平。胰岛素治疗12小时后，葡萄糖水平从近400mg/dL降低至约100mg/dL，而假性操作的动物其血清葡萄糖水平没有显著的改变(图2b)。我们监测了假性操作STZ糖尿病小鼠、胰岛素处理的STZ-糖尿病小鼠和野生型小鼠中的胃排空。与STZ糖尿病动物t1/2为60分钟相比，野生型小鼠的胃排空t1/2为36分钟(图2c)。该胰岛素处理12小时后，我们发现胃排空只有中等程度的增加，t1/2为54分钟(图2c)。因此单独高血糖症并不能用以解释糖尿病小鼠中观察到的胃排空延迟。
假设nNOS-/-小鼠胃排空延迟与胃扩张有关，我们监测了患或不患糖尿病的小鼠的胃的尺寸和重量(图2，d和e)。到30-32周龄(糖尿病发病后16-18周)，NOD-糖尿病小鼠发展出胃扩张，与nNOS-/-小鼠类似(图2d)。该扩张反映在由NOD-糖尿病动物得到的胃的重量(图2e)。STZ-糖尿病小鼠的胃(STZ处理后8周)常显示比野生型小鼠的胃大一些，但STZ糖尿病小鼠的胃在统计学上与野生型小鼠的胃没有差异(图2，d和e)。因此NOD-糖尿病小鼠在糖尿病16-18周后发展出胃扩张，与nNOS-/-小鼠类似。
由于nNOS-/-小鼠胃排空延迟反映幽门NO依赖性NANC传递的丧失，我们使用离体器官浴制备物监测了在糖尿病小鼠幽门中的NO依赖性NANC传递。NOC-糖尿病和STZ-糖尿病小鼠幽门对SP，Ach，和SNP响应，这与野生型幽门相似。nNOS-/-幽门在2、5和10Hz几乎完全丧失NANC弛缓，而NOD-前驱糖尿病幽门与野生型小鼠相似，在10Hz达到最大弛缓(图3a)。相比之下，NOD-糖尿病和STZ-糖尿病幽门中的NANC弛缓大大降低(图3a)。为了确定NO介导弛缓的丧失量，我们分析了由代表各组动物的多个幽门得到的响应EFT(10Hz)的第一次NANC弛缓数据(图3b)。STZ-糖尿病和NOD-糖尿病幽门中的NO依赖性NANC弛缓都显著降低，与nNOS-/-幽门相仿(图3b)。数据表明，糖尿病小鼠胃排空延迟反映出丧失NO介导的幽门弛缓。
图2更详细解释如下。
糖尿病小鼠具有胃排空延迟，其不归因于高血糖症和胃扩张。(a)糖尿病小鼠中的胃排空(20％右旋糖)。NOD-前驱糖尿病小鼠(实心圆)，10周龄，其胃排空速率类似于野生型小鼠(实心正方形)。STZ-糖尿病小鼠(空心三角)和NOD糖尿病小鼠(空心圆)表现出显著的胃排空延迟，与nNOS-/-小鼠相似(实心三角)。每个数据点代表每组4-6只动物的平均值(±SEM)。所有糖尿病动物表现出一定程度的胃排空延迟，这反映于所示误差范围(SEM)。在一些情况下，误差范围小，并在标记的范围之内。本实验重复两次，得到相同结果。(b)胰岛素处理后STZ-糖尿病小鼠的血清葡萄糖水平。对STZ-糖尿病小鼠假性操作(n＝5)或经皮下放置胰岛素释放植入物来处理(n＝5；参见方法部分)。由此在指定时间点测定了血清葡萄糖水平。每时间点上的数据是5份测量值的平均值(±SEM)。到12小时，血清葡萄糖水平降低到约100 mg/dL，并保持在近似水平上48小时。(c)胰岛素处理12小时后STZ-糖尿病小鼠的胃排空。在测定胃排空12小时前，STZ-糖尿病小鼠或者被假性操作(STZd)，或者经皮下放置胰岛素释放植入物(STZdS)来处理。所显示的数据对每个时间点是5-7份测量值的平均值(±SEM)。(d)对从野生型，NOD-前驱糖尿病(NODpd)，nNOS-/-，NOD-糖尿病(NODd)和STZ-糖尿病(STZd)小鼠中切下的胃照相，以证明NOD-糖尿病小鼠胃扩张。照片是针对各组动物检测的5-8个样本的代表。(e)禁食4小时后，对野生型，NOD-前驱糖尿病，nNOS-/-，NOD-糖尿病和STZ-糖尿病小鼠的胃称重。所示数据是每组5个样本的平均值(±SEM)。NOD-糖尿病和nNOS-/-小鼠胃的重量明显大于野生型小鼠的胃。针对nNOS-/-胃(与野生型相比)，和NOD糖尿病样本(与NOD前驱糖尿病样本相比)，ap＜0.05。
下面详细解释图3。糖尿病小鼠幽门缺乏NO介导的NANC弛缓：胰岛素逆转处理。(a)与野生型幽门相比，在nNOS-/-幽门中在2、5和10Hz下EFS引发的NO介导NANC弛缓显著降低。NOD-前驱糖尿病幽门与野生型小鼠相似，在10Hz达到最大弛缓。在2，5，和10Hz，NOD-糖尿病幽门几乎不存在NANC弛缓，与nNOS-/-幽门相似，而胰岛素处理(1周)的NOD-糖尿病动物部分恢复NANC弛缓。STZ-糖尿病小鼠幽门NANC弛缓显著降低，与nNOS-/-小鼠幽门相似。胰岛素处理(1周)STZ-糖尿病动物恢复NANC弛缓。在对照实验中，我们比较了对于2、5和10Hz或10、5和2Hz相反顺序的EFS刺激的野生型幽门响应，没有观察到明显差异。所示结果是来自不同动物的5-10个幽门制备物样本的代表。(b)确定糖尿病幽门中对EFS响应的NANC弛缓的量。代表指定组小鼠的数个幽门被用于定量地分析对EFS响应的NANC弛缓程度。所示数据是针对各组小鼠数个测量值的平均(＝SEM)：对于野生型，n＝10；对于nNOS-/-，n＝8；对于NOD-前驱糖尿病，n＝5；对于STZ-糖尿病，n＝8；对于胰岛素处理的NOD-糖尿病(NOD)，n＝5；对于胰岛素处理的STZ-糖尿病(STZ)，n＝8。针对nNOS-/-和STZ-糖尿病(与野生型样本相比)，NOD-糖尿病(与NOD-前驱糖尿病样本相比)，胰岛素处理的NOD-糖尿病样本(与NOD-糖尿病样本相比)，和胰岛素处理的STZ-糖尿病样本(与STZ-糖尿病样本相比)，aP＜0.01。
实施例3：在糖尿病小鼠中丧失nNOS-/-蛋白和mRNA表达
由于糖尿病和nNOS-/-小鼠具有相似的异常胃幽门生理，我们想知道在糖尿病幽门中nNOS表达是否改变。因此，我们通过免疫组化分析了nNOS蛋白表达，并通过原位杂交分析了nNOS mRNA。免疫组化分析显示在野生型(图4a)和NOD-前驱糖尿病幽门的肠肌层神经元中的nNOS不连续染色。在nNOS-/-小鼠(图4a)中不存在染色，证明了抗体的特异性。nNOS染色在NOC-糖尿病中几乎被消除，在STZ-糖尿病幽门有实质性的减少(图4a)。为了定量这些变化，测定了每一高倍视野(hpf)中nNOS-阳性神经元数。nNOS-阳性神经元在STZ-糖尿病幽门中减少约65％，在NOD-糖尿病小鼠中减少约80％(图4b)。原位杂交显示，nNOSmRNA表达在nNOS-/-、NOD-糖尿病和STZ-糖尿病幽门中明显减少(图5a)。nNOS-阳性核在NOD-糖尿病幽门中减少78％，在STZ-糖尿病幽门中减少53％(图5b)。
下面详细解释图4。在糖尿病小鼠中幽门肠肌层nNOS蛋白表达减少：胰岛素处理逆转。(a)nNOS蛋白表达的免疫组化分析。nNOS在野生型而非nNOS-/-幽门肠肌层神经元中存在，而在NOD-糖尿病和STZ-糖尿病小鼠中均丧失nNOS表达。胰岛素处理(1周)NOD-糖尿病和STZ-糖尿病动物后逆转了nNOS表达的丧失。(b)定量nNOS蛋白表达。针对各组动物，在十个显微镜视野中测定每一高倍视野(x40)中nNOS表达性神经元数，其中SEM由误差范围显示。用每组4-6只小鼠的两个不同实验得到这些结果。针对nNOS-/-和STZ-糖尿病样本(与野生型样本相比)，NOD-糖尿病(与NOD-前驱糖尿病样本相比)，胰岛素处理的NOD-糖尿病(与NOD-糖尿病样本相比)，和胰岛素处理的STZ-糖尿病(与STZ-糖尿病样本相比)，^P＜0.01。
为确定糖尿病诱发的nNOS表达减少是幽门特有的，还是所有肠组织的共性，我们通过蛋白质印迹监测了来自NOD-前驱糖尿病，NOD-糖尿病，和胰岛素处理的NOD-糖尿病小鼠的不同肠组织中的nNOS表达(图6)。发现在幽门、食道和回肠中nNOS显著减少(图6)。在胃窦和体(基底)中，发现NOD-糖尿病组织中nNOS表达部分减少(图6)，与先前关于糖尿病大鼠的报道一致(26，27)。nNOS部分减少还在结肠中观察到(图6)。发现在脑中nNOS表达没有变化，说明糖尿病中的nNOS减少可能是肠神经系统(ENS)特有的。因此，在糖尿病小鼠中，在整个肠中发生nNOS负调节，但其在幽门、食道和回肠中最显著。
nNOS蛋白和mRNA水平的降低可能反映nNOS表达的变化，或源自丧失了表达nNOS的神经元。为确定肠神经元丧失是否可用于解释nNOS免疫反应性神经元的减少，我们使用神经元标记物突触泡蛋白(SYN)、微管相关蛋白-2(MAP-2)和神经丝(NF；数据未示出)的抗体来对幽门样本染色。在nNOS-/-、NOD-糖尿病或STZ-糖尿病幽门中，MAP-2和SYN免疫反应性不改变，说明神经元丧失不能用以解释nNOS表达减少(图7)。还监测了血管活性肠肽(VIP)的表达，因VIP和nNOS可能共同聚居在肠肌层神经元中(49-50)。在NOD-糖尿病和STZ-糖尿病幽门中均进行了VIP染色(图7)。这些数据表明nNOS减少并不能反映肠肌层神经元的丧失。
西地那非逆转糖尿病小鼠中的胃排空延迟。据信，在糖尿病动物中发生的胰岛素减少可减少多种蛋白的表达。通过平滑肌细胞中可溶鸟苷酸环化酶激活cGMP生产，nNOS介导平滑肌弛缓。一些NO依赖性平滑肌弛缓疾病，如阳萎，可经抑制破坏cGMP的cGMP特异性磷酸二酯酶-5(PDE5)来进行治疗(52，53)。为确定nNOS丧失是否可解释胃排空延迟，我们使用西地那非。其使用是因为PDE5在幽门中富集(54)。抑制PDE5将允许cGMP在较低NO水平上积聚。我们想知道用西地那非处理糖尿病动物是否促进胃排空。因此，用西地那非(1mg/kg)处理了STZ-糖尿病和NOD-糖尿病小鼠，并监测胃排空。西地那非逆转STZ-糖尿病和NOD-糖尿病小鼠的胃排空延迟，对于西地那非处理的STZ-糖尿病和西地那非处理的NOD-糖尿病动物，胃排空t1-2分别为30和36分钟(图8)。这些数据说明受损的NO信号是导致糖尿病小鼠发展出胃排空延迟的机构。
下面解释图5。在糖尿病小鼠中在幽门肠肌层神经元中nNOSmRNA表达减少：胰岛素处理逆转(a)原位杂交分析nNOS表达。nNOSmRNA表达存在于野生型和已减少的nNOS幽门肠肌层神经元中，nNOS mRNA表达在NOD-糖尿病和STZ-糖尿病小鼠中均显著降低。(b)定量测定nNOS mRNA表达。针对各处理组动物，在十个显微镜视野中测定每一高倍视野中nNOS mRNA阳性核数，其中SEM由误差范围显示。用每组4-6只小鼠的两个不同实验得到这些结果。对于nNOS-/-和STZ-糖尿病样本(与野生型样本相比)，胰岛素处理的NOD-糖尿病(与NOD-糖尿病样本相比)，和胰岛素处理的STZ-糖尿病(与STZ-糖尿病样本相比)，P＜0.01。
下面更详细解释图6。nNOS蛋白在NOD小鼠的整个肠中减少：胰岛素逆转。使用来自NOD-前驱糖尿病，NOD-糖尿病，和胰岛素处理的NOD-糖尿病小鼠的不同肠区域的样本，用蛋白质印迹分析nNOS蛋白表达。在幽门、食道和回肠中nNOS蛋白几乎完全耗竭，在其他肠区域中只有部分减少。在脑中nNOS表达没有明显变化。胰岛素处理(1周)完全逆转nNOS蛋白丧失。结果以双份显示，代表各组的6只动物。
下面更详细解释图7。糖尿病小鼠幽门丧失nNOS表达，而不丧失神经元。通过计算每高倍视野中阳性神经元的数目，定量肠肌层神经元。对STZ-糖尿病或NOD-糖尿病小鼠没有观察到SYN，MAP2，或BIP表达的变化。所示数据为至少10个显微镜视野中测量值的平均(＝SEM)，其中实验者不知组织切片所来源的动物的处理条件。
下面更详细解释图8。PDE5抑制逆转了糖尿病小鼠的胃排空延迟。在测定胃排空前20分钟，NOD-糖尿病和STZ-糖尿病小鼠用西地那非(sf)处理，如方法部分所述。所示数据是针对每数据点代表4只动物的四份测量值的平均(＝SEM)。西地那非处理糖尿病动物逆转了糖尿病动物的胃排空延迟。
实施例4：胰岛素处理恢复nNOS表达和NO依赖性NANC弛缓
NOD-糖尿病和STZ-糖尿病小鼠均具有升高的血清葡萄糖和低胰岛素水平。我们通过用可植入胰岛素装置处理，矫正了这些异常现象(表1)。胰岛素处理1周后，NOD-糖尿病和STZ-糖尿病小鼠的胃排空均恢复正常(图9a)。胰岛素处理还恢复胰岛素处理的NOD-糖尿病或STZ-糖尿病动物幽门中的EFS-诱导的NANC弛缓(图3，b和c)。胰岛素对胰岛素处理的NOD-糖尿病幽门的EFS-诱导弛缓的促恢复作用大于胰岛素处理的STZ-糖尿病幽门中的结果。该结果可能体现了NOD-糖尿病小鼠中所观察到的更显著的nNOS表达丧失(图4b和5b)。
胰岛素处理可能改变许多基因的表达。为确定nNOS表达的诱导是否介导胰岛素对胃排空的作用，在给予nNOS抑制剂7-NI后30分钟，监测了胰岛素处理的STZ-糖尿病和胰岛素处理的NOD-糖尿病小鼠中的胃排空。7-NI逆转胰岛素处理的糖尿病小鼠中正常胃排空恢复(图9b)，表明nNOS催化活性介导胰岛素处理在胃排空中的效果。由于胰岛素恢复糖尿病幽门中的NANC弛缓，测试了0.1mM 7-NI存在下的NANC弛缓。在这些条件下，NANC弛缓完全被阻断，表明nNOS表达也用于解释胰岛素对幽门弛缓的促恢复作用。
胰岛素处理使NOD-糖尿病和STZ-糖尿病幽门中的nNOS蛋白表达返回到接近正常水平(图4，a和b)。原位杂交揭示，胰岛素处理还基本上恢复NOD-糖尿病和STZ-糖尿病幽门中的nNOS mRNA(图5，a和b)。整个肠中nNOS表达减少可被胰岛素完全逆转，尽管糖尿病只在一些肠组织中诱发部分nNOS蛋白减少(图6)。
下面更详细解释图9。胰岛素处理逆转胃排空延迟。(a)胰岛素处理(1周)STZ-糖尿病和NOD-糖尿病小鼠逆转胃排空延迟(20％右旋糖)。所示数据是针对每数据点代表4只动物的四份测量值的平均(＝SEM)。(b)用7-NI抑制nNOS延迟了胰岛素处理的糖尿病小鼠的胃排空。如方法部分所述，糖尿病小鼠用胰岛素处理(1周)，随后用nNOS抑制剂7-NI(50mg/kg)处理。测量胃排空，小鼠在30分钟时处死。所示数据是反映各组5只动物的5份测量值的平均(＝SEM)。对于经7-NI注射的、胰岛素处理的NOD-糖尿病动物(与胰岛素处理的NOD-糖尿病小鼠相比)，经7-NI注射的、胰岛素处理的STZ-糖尿病动物(与胰岛素处理的STZ-糖尿病动物相比)，P＜0.01。
在实施例1-4中，根据需要采用如下材料和方法。
动物：根据实验指示，除禁食时外，允许小鼠随意获取食物和水。在表1中给出了实验中所用动物组的重量和血清葡萄糖水平。野生型小鼠(C57BL/6)购自The Jackson Laboratory(Bar Harbor，Maine，USA)。根据如下靶向基因组nNOS缺失(15)来得到nNOS-/-小鼠，其具有C57BL/6小鼠遗传背景(28)。如别处所述，对STZ-诱发的糖尿病，成年雄性小鼠(C57BL/6)腹膜内注射单一剂量的STZ(200mg/kg，于0.1M柠檬酸钠中)(29)，而对照小鼠用等体积的介质(柠檬酸钠)注射。在STZ注射后8周，将STZ-处理的小鼠用于实验。在STZ处理后，对禁食12小时的动物尾静脉取样，每周用Accu-Check Easy Blood GlucoseMonitor(788型；Boehringer Mannheim，Indianapolis，Indiana，USA)监测血清葡萄糖水平。在注射8周后，野生型动物和STZ糖尿病小鼠的平均血清葡萄糖水平分别是99mg/dL和388mg/dL(表1)。得到8-10周龄成年雄性非肥胖糖尿病(NOD/LtJ[NOD])小鼠(The JacksonLaboratory)。同样每周用Accu-Check监测仪监测血清葡萄糖水平，NOD-前驱糖尿病小鼠和NOD-糖尿病小鼠的平均血清葡萄糖水平分别是88mg/dL和232mg/dL(表1)。对于所指示的实验，NOD-前驱糖尿病小鼠在已证实血清葡萄糖水平后在10周龄时处死，而NOD-糖尿病小鼠在已证实血清葡萄糖水平升高后在30-32周龄时处死。
胰岛素处理使用LinBit，即一种持续释放胰岛素植入物(0.1U/d/植入物；LinShin Canada Inc.，Toronto，Ontario，Canada)进行。在用乙醚短暂麻醉后，迅速地将胰岛素植入物浸入Betadine溶液(McKesson，San Francisco，California，USA)，并随后用12号针植入。监测血清葡萄糖水平，并根据指示，将胰岛素处理的动物在胰岛素处理12小时或1周后用于实验。已显示了胰岛素处理1周后的血清葡萄糖水平(表1)，同样也显示了胰岛素处理12小时后的血清葡萄糖水平(参见图2b)。
根据指示，对胰岛素处理的糖尿病小鼠用nNOS抑制剂7-硝基吲唑(7-NI；Lancaster，Wyndharn，New Hampshire，USA)处理，其中通过两次腹膜内注射(50mg/kg)芝麻油(Sigma Chemical Co.，St.Louis，Missouri，USA)悬浮液，该注射在测定胃排空前24小时和30分钟进行。在其他实验中，NOD-糖尿病和STZ-糖尿病小鼠经腹膜内注射西地那非(1mg/kg，于水中；Pfizer，Groton，Connecticut，USA)，该注射在测定胃排空前20分钟进行。对于所有实验，对照动物类似地注射介质(芝麻油或水)。
胃排空：如前所述，测定了液体胃排空(30)。对于任何使用糖尿病小鼠的实验，在监测胃排空前即确证所有动物的血清葡萄糖水平。用乙醚使成年小鼠暂时(＜30秒)镇静。在不到1分钟内，小鼠完全从镇静中恢复。在暂时镇静过程中，用装有细塑料导管(长8cm)的21号针完成口胃插管。然后，将0.2mL的1mg/mL酚红标记的20％右旋糖(或其他溶液，在已指出的情况下)慢慢灌输到胃中。将小鼠放在洁净的空笼中，直至处死。在指定时间(0-120分钟)，小鼠迅速经断颈处死，切下胃。捆扎十二指肠，接着横向切除下部食道，从体腔中取出胃。所切下的胃用polytron(Brinkmann，Westbury，New York，USA)均浆机在3mL 95％乙醇中均质化。在离心(40,000g 20分钟)后，使用一份上清液来测定酚红含量。建立标准曲线，发现其在1-20微克酚红范围内为直线。在410nm监测酚红含量，当用乙醇提取时，在所述波长下观察到吸收单峰。因此，如图例中所示，胃排空数据表示为所保留酚红的百分比，其针对每一时间点计算成多个动物的数个测量值的平均(±SEM)。排空含酚红食物的50％所需的时间[半排空期t1/2]直接由图表中的数据推出。
器官浴生理：小鼠经断颈处死，从下部食道括约肌到远侧十二指肠的胃肠道从体腔中取出，放置到无Ca2 Krebs-Henseleit(KH)缓冲剂中。在无Ca2 KH中切开幽门括约肌，安放在两个L型组织钩间。然后，将该离体制备物放置到37℃含KH缓冲剂(Sigma Chemical Co.)的25mL腔室中，并连续地用95％O2，5％CO2鼓泡。张力用等长力传感器监测，用图表记录仪记录。针对常规实验，幽门在KH缓冲剂中平衡1小时，施加张力4.9mN。然后，幽门用阿托品(1.0微摩尔)、萘心安(1.0微摩尔)和indomethatin(10.0微摩尔)预处理30分钟，以分别阻断胆碱能、肾上腺素能及前列腺素介导的应答。幽门离体制备物具有规则的位相性收缩，但不发展出明显的自发紧张(紧张性收缩)，而自发紧张促使能够直接测量弛缓。因此，使用物质P(SP)预先收缩幽门肌肉，从而产生紧张性肌肉收缩，和允许测量弛缓。幽门用0.1微摩尔SP收缩，将显示持续紧张性收缩的那些样本用于实验。在SP收缩后10-20秒经电场刺激(ETS；根据指示，40V，2-10Hz，5ms脉冲5或2秒)诱发NANC弛缓。对于定量测定弛缓，如图例所示，使用来自任意给定处理条件的多种幽门，并使用由NANC条件下第一次EFS得到的弛缓。在一些实验中，幽门首先用10Hz刺激，然后用5Hz刺激，然后用2Hz刺激，而在另一些实验中，刺激顺序相反。在野生型幽门中，无论刺激顺序为何，对EFS的响应是相似的。在另一些实验中，针对SP收缩后提供的2、5或10Hz单一刺激，观察到相似的响应。为确认神经元去极化对于引发NANC弛缓的作用，使用retrodotoxin(TTX；0.1微摩尔；Research Biochemical，Natick，Massachusetts，USA)。通过在EFS前与0.1mM N-硝基-[.-精氨酸(L-NNA；Sigma Chemical Co.)或0.1mM 7-NI培养30分钟，确认NANC弛缓的NO依赖性。
免疫组化：对于非糖尿病研究，使用野生型动物或10周龄NOD-前驱糖尿病动物。对于糖尿病研究，使用STZ注射后8周(STZ糖尿病)动物或30周龄NOD小鼠(NOD-糖尿病)。切下幽门或其他组织，立即包埋(Tissue-Tek OCT 4583；Sakura Finetek Inc.，Torrence，California，USA)并置于干冰中，使之冷冻。使用低温恒温器(-19℃；Leica Microm，Alendale，New Jersey，USA)，切制常规切片(10微米)。针对免疫染色，玻片在4.0％多聚甲醛中固定5分钟，用PBS洗涤，和用0.1％TritonX-100的PBS溶液渗透。然后，玻片在4℃下与指定的一级抗体过夜培养，所述抗体为抗nNOS抗体(1∶8,000；DiaSorin，Stillwater，Minnesota，USA)，抗突触泡蛋白(1∶500；Sigma Chemical Co.)，抗VIP抗体(1∶4,000；Calbiochem-Nov-abiochem Corp.，San Diego，California，USA)，和抗Map-Z抗体(1∶200；Boehringer Mannheim)。使用合适的二级抗体和Vectastain ABC试剂盒(Vector Laboratories，Burlingame，California，USA)来目测所述抗原。
原位杂交：如前所述对nNOS进行原位杂交(31，32)。
蛋白质印迹分析：小鼠组织在含如下成分的冰冷缓冲剂中均质化：50mM Tris(pH7.4，25℃)，100mM NaCl，1mM EGTA，和蛋白酶抑制剂(4微克/mL亮肽素，2微克/mL抗痛素，2微克/mL抑肽素，和1mM PMSF)。在离心(1.5分钟，16,000g)后，收集上清液，并测定蛋白含量(考马斯蛋白分析；Pierce Chemical Co.，Rockville，Illinois，USA)。样本(50微克蛋白)进行SDS-PAGE(4-12％梯度凝胶；Bis-tris NuPage；Novex，San Diego，California，USA)，然后转移到PVDF膜(Immobilon-P；Millipore Corp.，Bedford，Massachusetts，USA)上。针对蛋白质印迹分析，印迹在封闭缓冲剂(PBS，0.1％Tween-20，5％脱脂奶)中在25℃培养30分钟。然后，印迹在封闭缓冲剂中与稀释度为1∶1,000的一级抗体(抗nNOS抗体，MAB1265；Transduction Laboratories，Lexington，Kentucky，USA)在25℃培养1小时，并轻微搅拌，接着用封闭缓冲剂洗三次，每次5分钟。然后在封闭缓冲剂中将印迹与稀释度为1∶5,000的二级抗体(山羊抗小鼠IgG；Amersham Life Sciences Inc.，ArlingtonHeights，Illinois，USA)在25℃培养30分钟，接着用封闭缓冲剂洗三次，每次5分钟，接着用PBS洗两次，每次5分钟。利用增强化学发光(Renaissance Western Blot Chemiluminescence Reagent Plus；NEN LifeScience Products Inc.，Boston，Massachusetts，USA)来目测免疫活性蛋白。
统计学分析：数据使用GraphPad Prism软件(2.01版；GraphPadSoftware Inc.，San Diego，California，USA)分析。使用成对，双尾，斯氏检验来分析统计学，除非另外指明，数据以平均值给出(±SEM)。根据指示，将实验小鼠组与合适的对照组进行单一对比。
讨论
胃病是引起糖尿病患者死亡的重要原因。使用两种小鼠糖尿病模型，发现糖尿病小鼠发展出选择性的nNOS蛋白和mRNA减少以及胃排空延迟，连同NO介导NANC神经传递的丧失，其与带有nNOS基因组缺失的小鼠表型相仿。上面的实施例提供了数据，该数据与近期报告的糖尿病大鼠胃样本中降低的nNOS表达和NANC弛缓相一致(25-27)。
至少两类证据证明nNOS缺损是那些小鼠模型的糖尿病性胃病的原因。首先西地那非，一种有效的和选择性的PDE5抑制剂，增强已降低的NO水平的效果，它能恢复糖尿病小鼠的胃排空。其次，用胰岛素处理糖尿病动物能恢复肠肌层nNOS蛋白和mRNA，恢复NO介导的NANC神经传递，和逆转胃排空延迟。因此，糖尿病小鼠胃排空延迟来自肠肌层神经元中可逆nNOS表达丧失，后者可用西地那非逆转。
胃排空源自近侧胃(基底)、窦、幽门和十二指肠的协同作用(10)。nNOS-/-或糖尿病小鼠中基底弛缓丧失可促进胃排空，而幽门或十二指肠弛缓可延迟胃排空。在nNOS-/-和糖尿病小鼠中，nNOS丧失与胃排空延迟相关，与对幽门功能的主要生理效应一致。该发现得到我们研究结果的支持，所述研究发现与基底和窦相比，幽门中nNOS减少，并在这些动物中观察到解剖学变化。令人感兴趣的，在近期诊断出糖尿病的患者中，一些研究者描述了胃排空加速(39，55，56)。这些研究可能反映出早期糖尿病中基底或窦中主导的nNOS丧失。
糖尿病患者出现小肠和结肠及胃运动障碍(5，6)，近期证据表明NO机制调节人小肠运动(66)。在糖尿病中，腹泻可反映出导致细菌过度生长的小肠运动削弱，而便秘则可能来源于结肠运动不良。据信，在除幽门外的肠组织中观察到的nNOS表达降低促进其他糖尿病胃肠综合征。令人感兴趣的，当患者不服用胰岛素或不好好地进行与疾病相关的葡萄糖控制时，糖尿病性胃病和其他糖尿病胃肠综合征可加重(5，6，67)。在重获胰岛素治疗或改善血清葡萄糖水平控制后，症状可改善。因此，如本文报道的可逆nNOS表达降低可能是构成与糖尿病胃肠综合征相关的复发性和缓解性临床进程的基础。
与糖尿病无关的其他胃肠疾病还可能源于肠肌层神经元nNOS调节异常。例如，患肥厚性幽门狭窄婴儿的幽门表现出选择性nNOS丧失(16，17)。在该病症中，nNOS丧失导致幽门肥大和胃排空完全阻塞。在食道中，nNOS表达性神经元的丧失与导致弛缓不能的下部食道括约肌机能障碍相关(68-78)。功能性肠紊乱包括过敏性结肠综合征和功能性消化不良，影响大群可能患有运动障碍的患者(71，72)。近期报道显示，胃排空延迟在这些患者中很普遍(73，74)。
上述实施例涉及治疗。当前，用于治疗糖尿病性胃病的药物包括多潘立酮，甲氧氯普胺，西沙比利，和红霉素(5，6)。这些药物通过增加胃收缩来发挥作用。其有限的临床应用可能反映出如下发现，即糖尿病性胃病异常性主要是在于NANC弛缓，而非胃幽门功能的其他收缩性组分。增强NO效果或其效应物cGMP的药物可能会引起幽门弛缓。发现用PDE5抑制剂西地那非处理糖尿病小鼠能逆转胃排空延迟。该发现与近期证明PDE5在幽门中富集中研究一致(54)。令人感兴趣的，近期报道表明，西地那非可抑制患弛缓不能患者的食道运动性(74)。因此，PDE5选择性抑制剂，如西地那非，对于治疗糖尿病性胃病和相关疾病将是有效的。
因此，一方面，本发明提供了有效预防或治疗糖尿病患者中普遍存在的胃肠机能障碍的方法。在遗传性(非肥胖糖尿病)和毒素引起的(链脲霉素)小鼠糖尿病模型中，本文所述结果证明了胃排空和幽门肌肉非肾上腺素能、非胆碱能弛缓的缺陷，与缺失神经元一氧化氮合成酶基因(nNOS)的小鼠中的缺陷相仿。所述糖尿病小鼠表现出幽门nNOS蛋白和mRNA的显著减少。糖尿病小鼠中nNOS的减少并不源于肠肌层神经元丧失。胰岛素处理可使nNOS表达和幽门功能恢复到正常水平。因此小鼠糖尿病性胃病反映出胰岛素敏感性可逆nNOS丧失。在糖尿病动物中，胃排空延迟可被磷酸二酯酶抑制剂西地那非逆转。本发明具有重要的治疗用途，并可帮助阐明糖尿病性胃病的发病原因。
以下具体文献都引入作为参考，在实施例以及上面的讨论中用一个数字置于括号中来表示。
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已经对本发明参照优选实施方式进行了详细描述。但应理解，在了解了本发明内容之后，本领域技术人员可在本发明精神和范围内进行修改和改进。

Claims (56)

1.一种治疗患有或易患有胃肠疾病的哺乳动物所述疾病的方法，所述方法包括给哺乳动物给予治疗有效量的化合物，根据标准胃排空实验所测，该化合物增加一氧化氮(NO)活性。
2.一种治疗患有或易患有胃肠疾病的哺乳动物所述疾病的方法，所述方法包括给哺乳动物给予治疗有效量的至少一种化合物，根据标准nNOS蛋白表达实验所测，该化合物增加一氧化氮合成酶(nNOS)。
3.权利要求1或2的方法，其中所述哺乳动物被鉴别和选择用于增加NO活性和nNOS水平至少其一的处理，然后将所述化合物给予所鉴别和选择的哺乳动物。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中根据标准cGMP实验所测，给药化合物的量足以增加神经元环3′-单磷酸鸟苷(cGMP)水平。
5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述胃肠疾病的特征在于小肠、大肠、结肠、食道或胃中至少其一运动减弱或运动过强。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述胃肠疾病进一步的特征在于恶心、呕吐、胃灼热、餐后不适、腹泻、便秘和消化不良至少其一。
7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述疾病与糖尿病、神经性食欲缺乏、贪食症、胃酸缺乏、弛缓不能、肛裂、过敏性结肠综合征、肠假性梗阻、硬皮病和胃肠损伤中的至少一种有关。
8.权利要求7的方法，其中所述疾病是糖尿病性胃病。
9.权利要求7的方法，其中肠假性梗阻是结肠假性梗阻(奥格尔维综合征)、特发性胃轻瘫和特发性便秘(巨结肠)中的至少一种。
10.权利要求7的方法，其中胃肠损伤来自外科介入。
11.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述胃肠疾病是肥厚性幽门狭窄、功能性肠紊乱、胃食管反流病(GERD)、巴雷特化生或巴雷特食管中的至少一种。
12.权利要求10的方法，其中所述功能性肠紊乱是过敏性结肠综合征或功能性消化不良至少其一。
13.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述哺乳动物患有或易患有克隆病或溃疡性结肠炎。
14.权利要求1-14中任一项的方法，其中给予PDE抑制剂化合物。
15.权利要求1-14中任一项的方法，其中给予胰岛素、胰岛素生物活性变体或提高胰岛素效果或水平的化合物。
16.权利要求15的方法，其中提高胰岛素效果或水平的化合物是磺酰脲或噻唑烷二酮。
17.一种治疗患有或易患有胃肠疾病的哺乳动物所述疾病的方法，所述方法包括给予哺乳动物治疗有效量的磷酸二酯酶(PDE)抑制剂，根据胃排空实验中所测，其量足以增加一氧化氮(NO)产量。
18.一种治疗患有或易患有胃肠疾病的哺乳动物所述疾病的方法，所述方法包括给予哺乳动物治疗有效量的胰岛素、其生物学活性变体或其他能提高胰岛素效果或水平的化合物，根据标准nNOS蛋白表达实验所测，其量足以增加一氧化氮合成酶(nNOS)水平。
19.权利要求17的方法，其中根据标准PDE或PDE5实验中至少一种实验所测，所述PDE抑制剂降低环单磷酸鸟苷(cGMP)特异性PDE的活性。
20.权利要求17或19的方法，其中所述抑制剂降低5型PDE(PDE5)的活性。
21.权利要求17、19或20的方法，其中根据标准PDE或PDE5实验所测，所述PDE抑制剂的IC50为约0.5mM或更低。
22.权利要求17或19-21中任一项的方法，其中根据标准cGMP实验所测，PDE抑制剂给药量还足以增加神经元环3′-单磷酸鸟苷(cGMP)。
23.权利要求18的方法，其中能提高胰岛素效果或水平的化合物是磺酰脲或噻唑烷二酮。
24.权利要求18或23的方法，其中能提高胰岛素效果或水平的化合物与PDE抑制剂化合物联合给药。
25.权利要求1-24中任一项的方法，其中至少一种化合物是上式I-XIII所示化合物及其可药用的盐和溶剂化物中的任一种。
26.权利要求25的方法，其中给药化合物是至少一种吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮、吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮、喹唑啉-4-酮、嘌呤-6-酮或吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酮或其可药用的盐。
27.权利要求25的方法，其中给药化合物是上面描述的一种或多种式I-V化合物中的至少一种。
28.权利要求25的方法，其中给药化合物是如下化合物中的一种或多种：
5-[2-乙氧基-5-(4-甲基哌嗪-1-基磺酰基)苯基]-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3d]嘧啶-7-酮(西地那非)，
1-乙基-5-[5-(正己基氨磺酰基)-2-正丙氧基-苯基]-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，
1-乙基-5-(5-二乙基氨磺酰基-2-正丙氧基-苯基)-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]-嘧啶-7-酮，
5-[5-(N-环己基甲基-N-甲基氨磺酰基)-2-正丙氧基苯基)-1-乙基-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，
6-(5-溴-2-正丙氧基苯基)-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
3-甲基-6-(5-吗啉代磺酰基-2-正丙氧基苯基)-1-正丙基-1，5-二氢4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
6-[5-(2-羧基乙烯基)-2-正丙氧基苯基]-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
6-[5-(2-叔丁氧羰基乙烯基)-2-正丙氧基苯基]-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
3-甲基-6-[5-(2-吗啉代羰基乙烯基)2-正丙氧基苯基]-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
3-甲基-6-[5-(2-吗啉代羰基乙基)-2-正丙氧基苯基]-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基-磺酰基]苯基}-8-甲基喹唑啉-4-(3H)-酮，
2-{5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基磺酰基]-2-正丙氧基苯基}-8-甲基喹唑啉-4(3H)-酮，
8-甲基-2-{5-[2-(4-甲基-1-哌嗪基羰基)-乙烯基]-2-正丙氧基苯基}喹唑啉-4(3H)-酮，
8-氨甲酰基-2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基磺酰基]苯基}喹唑啉-4(3H)-酮，
8-乙基氨甲酰基-2-(2-正丙氧基苯基)喹唑啉-4(3H)-酮，
2-[2-乙氧基-5-(4-乙氧基羰基哌啶子基-磺酰基]-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，
2-[5-(4-羧基哌啶子基磺酰基)-2-乙氧基苯基]-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，
2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基-磺酰基]苯基}-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，
2-{2-乙氧基-5-[(双-3-吡啶基磺酰基)氨基]-苯基}-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
或其可药用的盐。
29.权利要求1-28中任一项的方法，其中将Viagra给予哺乳动物。
30.权利要求1-29中任一项的方法，其中根据标准nNOS蛋白表达实验所测，给药化合物使胃肠神经元或卡雅尔间质细胞的nNOS增加至少约10％。
31.权利要求1-30中任一项的方法，其中根据标准nNOS蛋白表达实验所测，给药化合物使胃肠神经元或卡雅尔间质细胞的nNOS增加约15％-约50％。
32.权利要求1-31中任一项的方法，其中根据cGMP实验所测，给药化合物使cGMP增加至少约10％。
33.权利要求1-32中任一项的方法，其中根据标准PDE或PDE5活性实验所测，给药化合物使PDE5活性降低至少约10％。
34.权利要求1-33中任一项的方法，其中根据标准PDE或PDE5活性实验所测，给药化合物使PDE5活性降低约20％-约50％。
35.一种预防或治疗哺乳动物糖尿病性胃病的方法，包括给予哺乳动物治疗有效量的一种或多种的上式I-XIII所示化合物或其可药用的盐。
36.权利要求35的方法，其中给药化合物是至少一种的上式I-V所示化合物或其可药用的盐。
37.权利要求35的方法，其中给药化合物是至少一种吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮、吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮、喹唑啉-4-酮、嘌呤-6-酮或吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酮或其可药用的盐。
38.权利要求35的方法，其中给药化合物是如下化合物中的一种或多种：
5-[2-乙氧基-5-(4-甲基哌嗪-1-基磺酰基)苯基]-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3d]嘧啶-7-酮(西地那非)，
1-乙基-5-[5-(正己基氨磺酰基)-2-正丙氧基-苯基]-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，
1-乙基-5-(5-二乙基氨磺酰基-2-正丙氧基-苯基)-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]-嘧啶-7-酮，
5-[5-(N-环己基甲基-N-甲基氨磺酰基)-2-正丙氧基苯基)-1-乙基-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，
6-(5-溴-2-正丙氧基苯基)-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
3-甲基-6-(5-吗啉代磺酰基-2-正丙氧基苯基)-1-正丙基-1，5-二氢4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
6-[5-(2-羧基乙烯基)-2-正丙氧基苯基]-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
6-[5-(2-叔丁氧羰基乙烯基)-2-正丙氧基苯基]-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
3-甲基-6-[5-(2-吗啉代羰基乙烯基)2-正丙氧基苯基]-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
3-甲基-6-[5-(2-吗啉代羰基乙基)-2-正丙氧基苯基]-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基-磺酰基]苯基}-8-甲基喹唑啉-4-(3H)-酮，
2-{5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基磺酰基]-2-正丙氧基苯基}-8-甲基喹唑啉-4(3H)-酮，
8-甲基-2-{5-[2-(4-甲基-1-哌嗪基羰基)-乙烯基]-2-正丙氧基苯基}喹唑啉-4(3H)-酮，
8-氨甲酰基-2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基磺酰基]苯基}喹唑啉-4(3H)-酮，
8-乙基氨甲酰基-2-(2-正丙氧基苯基)喹唑啉-4(3H)-酮，
2-[2-乙氧基-5-(4-乙氧基羰基哌啶子基-磺酰基]-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，
2-[5-(4-羧基哌啶子基磺酰基)-2-乙氧基苯基]-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，
2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基-磺酰基]苯基}-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，
2-{2-乙氧基-5-[(双-3-吡啶基磺酰基)氨基]-苯基}-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
或其可药用的盐。
39.权利要求35的方法，其中给药化合物是Viagra。
40.权利要求35-39中任一项的方法，其中向哺乳动物给予胰岛素、胰岛素生物活性变体或能提高胰岛素效果或水平的化合物。
41.权利要求40的方法，其中提高胰岛素效果或水平的化合物是磺酰脲或噻唑烷二酮。
42.一种预防或治疗哺乳动物糖尿病性胃病的方法，包括向哺乳动物给予治疗量的胰岛素、胰岛素生物活性变体或能提高哺乳动物胰岛素效果或水平的化合物的一种或多种。
43.权利要求35-42中任一项的方法，所述哺乳动物被鉴别为患有糖尿病性胃病，并被选择用于糖尿病性胃病治疗。
44.一种治疗患有或易患有糖尿病、神经性食欲缺乏、贪食症、胃酸缺乏、弛缓不能、肛裂、过敏性结肠综合征、肠假性梗阻、硬皮病、胃肠损伤、克隆病或溃疡性结肠炎的哺乳动物的方法，包括给予哺乳动物有效量的一种或多种的上式I-XIII所示化合物或其可药用的盐。
45.权利要求44的方法，其中给药化合物是至少一种上式I-V所示化合物或其可药用的盐。
46.权利要求44的方法，其中给药化合物是至少一种吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮、吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮、喹唑啉-4-酮、嘌呤-6-酮或吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酮或其可药用的盐。
47.权利要求44的方法，其中给药化合物是如下化合物中的一种或多种：
5-[2-乙氧基-5-(4-甲基哌嗪-1-基磺酰基)苯基]-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3d]嘧啶-7-酮(西地那非)，
1-乙基-5-[5-(正己基氨磺酰基)-2-正丙氧基-苯基]-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，
1-乙基-5-(5-二乙基氨磺酰基-2-正丙氧基-苯基)-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]-嘧啶-7-酮，
5-[5-(N-环己基甲基-N-甲基氨磺酰基)-2-正丙氧基苯基)-1-乙基-3-甲基-1，6-二氢-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，
6-(5-溴-2-正丙氧基苯基)-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
3-甲基-6-(5-吗啉代磺酰基-2-正丙氧基苯基)-1-正丙基-1，5-二氢4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
6-[5-(2-羧基乙烯基)-2-正丙氧基苯基]-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
6-[5-(2-叔丁氧羰基乙烯基)-2-正丙氧基苯基]-3-甲基-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
3-甲基-6-[5-(2-吗啉代羰基乙烯基)2-正丙氧基苯基]-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
3-甲基-6-[5-(2-吗啉代羰基乙基)-2-正丙氧基苯基]-1-正丙基-1，5-二氢-4H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，
2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基-磺酰基]苯基}-8-甲基喹唑啉-4-(3H)-酮，
2-{5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基磺酰基]-2-正丙氧基苯基}-8-甲基喹唑啉-4(3H)-酮，
8-甲基-2-{5-[2-(4-甲基-1-哌嗪基羰基)-乙烯基]-2-正丙氧基苯基}喹唑啉-4(3H)-酮，
8-氨甲酰基-2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基磺酰基]苯基}喹唑啉-4(3H)-酮，
8-乙基氨甲酰基-2-(2-正丙氧基苯基)喹唑啉-4(3H)-酮，
2-[2-乙氧基-5-(4-乙氧基羰基哌啶子基-磺酰基]-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，
2-[5-(4-羧基哌啶子基磺酰基)-2-乙氧基苯基]-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，
2-{2-乙氧基-5-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基-磺酰基]苯基}-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮，
2-{2-乙氧基-5-[(双-3-吡啶基磺酰基)氨基]-苯基}-8-正丙基吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
或其可药用的盐。
48.权利要求44的方法，其中给药化合物是Viagra。
49.权利要求44-48中任一项的方法，其中向哺乳动物给予胰岛素、胰岛素生物活性变体或提高胰岛素效果或水平的化合物。
50.权利要求49的方法，其中提高胰岛素效果或水平的化合物是磺酰脲或噻唑烷二酮。
51.权利要求44-50中任一项的方法，其中哺乳动物被鉴别为患有糖尿病、神经性食欲缺乏、贪食症、胃酸缺乏、弛缓不能、肛裂、过敏性结肠综合征、肠假性梗阻、硬皮病、胃肠损伤、克隆病或溃疡性结肠炎，且所述哺乳动物被选择用于糖尿病、神经性食欲缺乏、贪食症、胃酸缺乏、弛缓不能、肛裂、过敏性结肠综合征、肠假性梗阻、硬皮病、胃肠损伤、克隆病或溃疡性结肠炎的治疗。
52.权利要求1-51中任一项的方法，其中所述哺乳动物是灵长类、啮齿类、兔或驯养动物。
53.权利要求52的方法，其中哺乳动物是人类患者。
54.权利要求1-53中任一项的方法，其中哺乳动物已接受或将要接受至少一种促动力剂的处理。
55.权利要求1-54中任一项的方法，其中所述方法进一步包括向哺乳动物给予治疗有效量的至少一种促动力剂。
57.权利要求54或55的方法，其中所述促动力剂是甲氧氯普胺、多潘立酮、红霉素或西沙比利。
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