CN1571676A - Glp－1和胰岛素的双相混合物 - Google Patents

Glp－1和胰岛素的双相混合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及包括一种双相混合物的药物制剂，该混合物包括固相中的胰高血糖素样肽(GLP－1)，和液相中的胰岛素。

Description

GLP-1和胰岛素的双相混合物
本发明涉及包括胰高血糖素样肽(GLP-1)固相和胰岛素液相的双相混合物。所述双相混合物可用于治疗诸如糖尿病的疾病。
长期以来，糖尿病治疗的目标一直是施用能导致胰岛素分泌方式类似于正常个体体内的内源胰岛素分泌方式的药物。每日对胰岛素的生理需求是有波动的，并且可以分成两个阶段：(a)吸收阶段，需要胰岛素的脉冲处理与进食相关的血液葡萄糖波动，和(b)吸收后阶段，需要持续输送胰岛素，以便调节肝脏葡萄糖输出，用于保持最佳空腹血糖。
一旦口服治疗不能有效控制2型糖尿病的血糖，实现接近正常的血糖控制就变得极为重要，并因此减少了与糖尿病相关的并发症。当口服治疗失败时，现有的唯一替代方案是用胰岛素治疗患者，必须根据进食相关的葡萄糖变化和在空腹期间肝脏葡萄糖的输出而对胰岛素的施用剂量和时间进行控制，以便使葡萄糖有效正常化，同时降低低血糖的危险。与处理进食相关的血液葡萄糖波动相关的吸收阶段的控制，可以用通过商业渠道获得的调节胰岛素和单体胰岛素类似物有效进行。不过，与在空腹期间，特别是在两餐之间和在睡眠时间，肝脏葡萄糖输出的处理相关的吸收阶段的控制，不能用这些胰岛素有效实现。
业已开发出了能够长时间发挥作用的各种商业化胰岛素制剂，以便更方便地治疗吸收后阶段。不过，对于2型糖尿病来说，从涉及口服用药的治疗向涉及注射胰岛素的治疗的过渡，通常是相对困难的，必须谨慎施用胰岛素，以避免在两餐之间以及在睡眠时间出现诸如低血糖的并发症。因此，需要一种出现低血糖的风险更低的、治疗2型糖尿病的、更方便的治疗方法。
作为治疗2型糖尿病，特别是不再能够通过口服用药控制血糖的患者的治疗剂，胰高血糖素样肽-1(GLP-1)表现出极好的前景。GLP-1多肽具有多种生理学上的重要活性。例如，业已证实，GLP-1能刺激胰岛素释放，降低胰高血糖素分泌，抑制胃肠排空，以及促进葡萄糖利用[Nauck，M.A.等(1993)Diabetologia 36：741-744；Gutniak，M.等(1992)New England J.of Med.326：1316-1322；Nauck，M.A.等，(1993)J.Clin.Invest.91：301-307]。另外，某些动物研究表明，GLP-1实际上可以保护β细胞，抑制β细胞程序死亡，并且诱导β细胞增殖。最令人激动的发现之一是，GLP-1活性是葡萄糖依赖型的。当葡萄糖含量降低到一定阈值水平时，GLP-1是没有活性的。因此，不存在与用GLP-1治疗相关的低血糖的危险。
Van Antwerp等在WO 01/0022 3中业已提供了具有天然GLP-1和胰岛素的组合物。不过，Van Antwerp关注的是适合用输液泵连续输液的热稳定性组合物。这种组合物通过其他用药方式的用途是受限制的，因为溶液中的天然GLP-1会被很快地清除，并且具有5分钟左右的半衰期。
美国专利6,268,343中业已披露了GLP-类似物的衍生物。这些衍生物具有较长的作用时间，它们通常被说成是可溶性组合物，它任选包括抗糖尿病制剂，包括胰岛素。
不过，在本发明之前一直不了解是否可以将不溶性GLP-1和胰岛素溶液配制在一起，以便这两种试剂在化学上和物理学上都是稳定的，并且保持需要的活性和时间作用。悬浮液中的不溶性GLP-1沉淀物或晶体和溶液中的胰岛素的分子相互作用，可能破坏任一种制剂的活性和时间作用。另外，在单独配制时，为了获得化学和物理稳定性，每一种试剂所需要的条件是不同的。
本发明着眼于能提供最佳血糖控制，具有较小的低血糖危险的稳定的双相混合物。所述双相混合物包括GLP-1固相和胰岛素液相。GLP-1固相包括不溶性GLP-1沉淀物或晶体。不溶性GLP-1提供了导致GLP-1具有较长作用时间的缓慢的吸收速度，可将它用于控制在空腹期间，特别是在两餐之间和在睡眠期间处理肝脏葡萄糖输出，以及与进食相关的血液葡萄糖波动。所述胰岛素液相包括可以控制与进食相关，特别是在每天的第一餐之后的血糖波动处理的胰岛素，此时，葡萄糖水平有可能是最高的。
在本发明的一种形式中，本发明提供了一种包括双相混合物药物制剂，该混合物包括存在于固相中的胰高血糖素样肽(GLP-1)化合物，和存在于液相中的胰岛素。GLP-1化合物优选具有选自下组的序列：SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，和SEQ ID NO：6。胰岛素优选包括常规人胰岛素或单体胰岛素类似物。单体胰岛素类似物优选选自：AspB28，AspB28-ProB29，LysB28，LysB28-ProB29，LeuB28，LeuB28-ProB29，ValB28，ValB28-ProB29，AlaB28，AlaB28-ProB29，des B28-30，和des B27。所述单体胰岛素类似物任选是LysB3-GluB29。所述药物制剂可任选包括等渗剂。所述药物制剂可任选包括防腐剂。
本发明提供了一种制备适用于药物制剂中的双相混合物的方法，包括将固相的GLP-1化合物与液相的胰岛素混合，以便GLP-1保持固相，并且保留持续的药代动力学特征，而胰岛素保持在所述液相中，并且保持短时间作用特征。
本发明提供了一种施用所述药物制剂的方法，包括给有需要的患者施用有效量的所述包括双相混合物的制剂。
本发明提供了一种治疗选自下组的医学状况的方法：非胰岛素依赖型糖尿病，胰岛素依赖型糖尿病，高血糖，肥胖，手术之后的分解代谢改变，心肌梗塞，应激诱导的高血糖和中风，该方法包括给有需要的患者施用有效量的所述包括双相混合物的药物制剂。
本发明提供了将所述包括双相混合物的药物制剂用于制备用于治疗选自下组的医学状况的药物的用途：人类对象的非胰岛素依赖型糖尿病，胰岛素依赖型糖尿病，高血糖，肥胖，治疗性体重减轻，哺乳动物的手术之后的分解代谢改变，心肌梗塞，应激诱导的高血糖和中风。
在说明书中使用的表示氨基酸的三字母缩写代码，与PCT管理指导的附录2，附录C的表3中所列举的代码一致，以及与37C.F.R.§1.822(d)(1)(2000)一致。
对于本文所披露的本发明来说，下面的术语和缩略语的定义如下。
本文所使用的术语“GLP-1固体”表示双相混合物的一种相。GLP-1固相包括存在于水溶液中的不可溶的GLP-1沉淀或晶体，其中，不可溶的GLP-1沉淀或晶体具有持续的药代动力学曲线。不可溶的GLP-1沉淀或晶体包括GLP-1化合物和锌。不可溶的GLP-1沉淀或晶体还任选包括一种碱性多肽。
本文所使用的术语“GLP-1”或“GLP-1化合物”表示多肽，所述多肽包括天然存在的截短的GLP-1多肽(GLP-1(7-37)OH和GLP-1(7-36)NH2)，GLP-1片段，GLP-1类似物，以及它们的衍生物。对于本发明来说，GLP-1化合物还包括Exendin-3和Exendin-4，以及它们的类似物和衍生物。本发明的GLP-1化合物具有结合GLP-1受体，并且启动导致促胰岛素(insulinotropic)活性的信号传导途径的能力。下面将更深入地讨论适用于本发明的GLP-1化合物的例子。
本文所使用的术语“持续的药代动力学曲线”表示生物学活性GLP-1化合物在循环系统中有效水平的时间长度。所述持续的药代动力学曲线优选是这样的，单次注射能适当控制空腹期间肝脏葡萄糖输出。更优选的是，GLP-1化合物在血清中的有效水平可保持大约12-大约24小时，最优选保持大约20-大约24小时。
术语“促胰岛素活性”表示反应于升高的葡萄糖水平刺激胰岛素分泌的能力，以便导致细胞对葡萄糖的摄取，并且降低血浆葡萄糖水平。促胰岛素活性可以通过本领域已知方法评估，包括使用体内实验和测定GLP-1受体结合活性或受体激活的体外分析方法。例如，采用胰岛细胞或胰岛素瘤细胞的分析方法，所述方法分别披露于Gelfand等的EP 619,322(参见实施例1)，和美国专利号5,120,712中。促胰岛素活性是通过测定胰岛素水平或C-肽水平在人体中进行常规测定的。对于本发明来说，促胰岛素活性是使用披露于实施例1中的方法确定的。如果在存在GLP-1化合物的条件下，胰岛细胞分泌胰岛素的水平高于本底水平的话，该GLP-1化合物就具有促胰岛素活性。本发明所涉及的双相混合物优选包括GLP-1化合物，它的促胰岛素活性等于或高于GLP-1(7-37)OH。更优选的是，所述GLP-1化合物具有高于GLP-1(7-37)OH的促胰岛素活性。
本文所使用的术语“胰岛素溶液”表示双相混合物中的第二种相。胰岛素液相包括含有可溶性胰岛素的水溶液，其中，胰岛素具有短时间作用特征。所述短的时间特征优选与诸如Humulin，Humalog，Novolog等的市售胰岛素相当。胰岛素包括常规胰岛素，胰岛素类似物，或与胰岛素受体结合的常规胰岛素的胰岛素衍生物或胰岛素类似物，它能启动循环葡萄糖的利用。所述胰岛素优选能够对抗与进食相关的血液葡萄糖波动，并且将葡萄糖水平恢复到正常生理学范围。更优选的是，胰岛素能对抗与进食相关的血糖波动，并且在进食后数小时内将葡萄糖水平恢复到正常生理学范围。更优选的是，胰岛素能对抗与进食相关的血糖波动，并且在进食后1小时之内将葡萄糖水平恢复到正常生理学范围。最优选的是，胰岛素能在每天的第一餐之后对抗与进食相关的血糖波动，并且在进食后数小时内将葡萄糖水平恢复到正常生理学范围。
双相混合物：
本发明涉及包括固相中的GLP-1化合物和液相中的胰岛素的各种双相混合物。GLP-1和胰岛素在双相混合物中的最终浓度可以根据这两种相的比例而改变。另外，所述浓度会根据所使用的GLP-1化合物和胰岛素的氨基酸组成和效力而改变。双相混合物中GLP-1的最终浓度为大约0.1mg/mL-大约10mg/mL。更优选的是，GLP-1的最终浓度为大约0.1mg/mL-大约8mg/mL，更优选大约0.1mg/mL-大约7mg/mL。最优选的是，GLP-1的最终浓度为大约0.1-大约6mg/mL。胰岛素的最终浓度低于大约100U/mL(例如，对于Humulin或Humalog，100U/mL相当于大约3.5mg/mL)。双相混合物中胰岛素的最终储存浓度优选低于大约75U/mL。更优选的是胰岛素的最终浓度低于50U/mL，最优选的是，胰岛素的最终浓度为大约25U/mL。技术人员可以理解的是，诸如Humulin，Humalog，Novolog的市售胰岛素的重量(mg)被标准化成每毫升的单位数。
药物制剂：
本发明涉及包括适合给需要它的患者施用的双相混合物的药物制剂。所述药物制剂优选能在正常保存条件下长时间保持稳定。在4℃或环境温度下，所述时间优选超过6个月，在4℃或环境温度下，所述时间优选超过1年，更优选在4℃或环境温度下所述稳定时间超过2年。
GLP-1与胰岛素的重量比是这样的，在施用所述药物制剂之后，GLP-1和胰岛素的血浆水平保持在它们的有效范围内。通常，GLP-1与胰岛素的比例为大约99∶1(重量∶重量)-10∶90(w/w)，更优选的是比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)(参见实施例6)。更优选的是，GLP-1与胰岛素的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。最优选的是，GLP-1与胰岛素的比例为大约85∶15(w/w)。
优选将其促胰岛素活性在GLP-1(7-37)OH的2倍以内的GLP-1的血清水平在大约30pmol/L-大约200pmol/L的水平上保持至少足以控制空腹期间的肝脏葡萄糖输出的时间。活性比GLP-1(7-37)OH低的GLP-1化合物的最佳血清水平可以较高，或活性比GLP-1(7-37)OH低的GLP-1化合物的血清水平可以较低。因此，可以根据悬浮液中GLP-1化合物的活性将GLP-1化合物的浓度向上或向下调节。
胰岛素的血清水平优选是这样的，它能对抗与进食相关的血糖波动，并且将血浆葡萄糖水平恢复到正常水平，通常，血糖水平为大约120-125mg/dL。一般，每天的总胰岛素剂量为大约0.3-大约1.5U/kg。不过，每天的总的进食时间胰岛素剂量通常为每天胰岛素总剂量的50％，或大约0.15U/kg-大约1U/kg，优选大约0.3-大约1U/kg。
本发明的各种药物制剂优选包括可以药用的缓冲液。不过，所述缓冲液的选择，浓度和pH是这样的，以便将GLP-1保持在固相中，并且保持持续的药代动力学特征，并且，将胰岛素保留在液相中，并且保持对抗与进食相关的血液葡萄糖波动的短时间作用特征。可以药用的缓冲液的例子包括磷酸缓冲液，如磷酸二氢钠，TRIS，甘氨酰甘氨酸，马来酸盐，乙酸钠，柠檬酸钠，酒石酸钠，或氨基酸，如甘氨酸，组氨酸，赖氨酸，或精氨酸。其他可以药用的缓冲液为本领域所公知。所述缓冲液优选选自下列一组：磷酸，TRIS，马来酸盐和甘氨酸。更优选的缓冲液是TRIS，甘氨酸或这两者。
TRIS浓度优选为大约1mM-100mM。所述浓度更优选为大约10mM-大约50mM，最优选的是，所述缓冲液为大约15mM。甘氨酸的浓度优选为大约10mM-大约50mM，更优选的是甘氨酸浓度为大约20mM-大约30mM，更优选的是甘氨酸浓度为大约23mM-大约29mM。
调节所述药物制剂的pH，以便提供可接受的稳定性，从而保持GLP-1固体的持续的药代动力学曲线，和胰岛素溶液的短时间作用特征，并且是肠胃外施用可以接受的。优选将pH调节到大约7.0-大约8.5，更优选将pH调节到大约7.4-8.0，更优选将pH调节到大约7.4-7.8。最优选将pH调节到大约7.5。
本发明的药物制剂可任选包括防腐剂。不过，防腐剂的选择和浓度可以是这样的，GLP-1保持在固相中，并且保持持续的药代动力学曲线，以及胰岛素保持在液相中，并且保持短时间作用特征。防腐剂是指被添加到药物制剂中，以便发挥抗微生物剂作用的化合物。肠胃外制剂必须符合防腐剂作用是商业上的活性多用途制品的规定。本领域已知的有效的，并且在肠胃外制剂中可以接受的防腐剂是酚类防腐剂，烷基对羟基苯甲酸酯类，苄醇，氯丁醇，间苯二酚和其它相似的防腐剂及其各种混合物。酚类衍生物的例子包括甲酚和苯酚或甲酚和苯酚的混合物。甲酚的例子包括间甲酚，邻甲酚，对甲酚，氯甲酚，或它们的混合物。烷基对羟基苯甲酸酯表示C1-C4烷基对羟基苯甲酸酯，或它们的混合物。烷基对羟基苯甲酸酯的例子包括甲基对羟基苯甲酸酯，乙基对羟基苯甲酸酯，丙基对羟基苯甲酸酯，或丁基对羟基苯甲酸酯。所述浓度必须足以保持抑制微生物生长的防腐效果。所述防腐剂优选是苯酚衍生物。更优选的是，所述防腐剂是甲酚。更优选的是，所述防腐剂是间甲酚。
防腐剂在最终混合物中的优选浓度为大约1.0mg/mL-大约20.0mg/mL。防腐剂在最终混合物中的更优选的浓度范围为大约2.0mg/mL-大约8.0mg/mL，大约2.5mg/mL-大约4.5mg/mL和大约2.0mg/mL-大约4.0mg/mL。防腐剂在最终混合物中的最优选的浓度为3.0mg/mL。
本发明的药物制剂可以任选包括等渗剂。不过，等渗剂的选择和浓度应当是这样的，GLP-1保持在固相中，并且保持持续的药代动力学曲线，而胰岛素保持在液相中，并且保持短时间作用特征。等渗剂是指生理学上可以承受的，并且赋予该制剂合适的渗透压，以便防止水通过细胞膜的净流动的化合物。所述化合物的例子包括甘油，盐，例如，氯化钠，和糖，例如葡萄糖，甘露糖醇和蔗糖。所述化合物通常以已知浓度用于所述目的。可以添加一种或多种等渗剂，以便调节离子强度或渗透压。优选的等渗剂是氯化钠。氯化钠的浓度优选为大约110mM。
本发明的优选药物制剂包括GLP-1固相和LysB28-ProB29胰岛素液相，如Humalog。GLP-1与LysB28-ProB29胰岛素的比例优选为大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述药物制剂包括GLP-1固相和AspB28胰岛素液相，如Novolog。GLP-1与AspB28胰岛素的比例优选为大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述药物制剂包括GLP-1固相和常规人胰岛素液相，如Humulin。GLP-1与常规人胰岛素的比例优选为大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述药物制剂包括GLP-1固相和LysB3-GluB29胰岛素液相。GLP-1与LysB3-GluB29胰岛素的比例优选为大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述药物制剂包括Val8-GLP-1固相和LysB28-ProB29胰岛素液相，如Humalog。Val8-GLP-1与LysB28-ProB29胰岛素的比例优选为99∶1(w/w)-大约10∶90(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述药物制剂包括Val8-GLP-1固相和AspB28胰岛素液相，如Novolog。Val8-GLP-1与AspB28胰岛素的比例优选为大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述药物制剂包括Val8-GLP-1固相和常规人胰岛素液相，如Humalin。Val8-GLP-1与常规人胰岛素的比例优选为大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述药物制剂包括Exendin-3固相或Exendin-4固相和LysB28-ProB29胰岛素液相，如Humalog。Exendin-3或Exendin-4与LysB28-ProB29胰岛素的比例优选为大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述药物制剂包括Exendin-3固相或Exendin-4固相，和AspB28胰岛素液相，如Novolog。Exendin-3或Exendin-4与AspB28胰岛素的比例优选为大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述药物制剂包括Exendin-3固相或Exendin-4固相，和常规人胰岛素液相，如Humulin。Exendin-3或Exendin-4与常规人胰岛素的比例优选为大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述药物制剂包括Exendin-3固相或Exendin-4固相，和LysB3-GluB29胰岛素液相。GLP-1与LysB3-GluB29胰岛素的比例优选为大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
施用可以通过具有普通的医师所公知的任何途径进行。本发明的药物制剂优选是通过肠胃外途径施用的。肠胃外施用包括肌内、皮下、静脉内、真皮内、和腹膜内施用途径。更优选的是肌内和皮下施用途径。
优选的是，在注射时本发明的药物制剂所产生的葡萄糖曲线与分开施用悬浮液中的GLP-1固相和胰岛素溶液所获得的曲线相同或更好。例如，注射药物制剂所产生的HbAlc水平与分开施用悬浮液中的GLP-1固相和胰岛素溶液所观察到的HbAlc水平相同或更低。另外，注射药物制剂优选会模拟正常个体的内源胰岛素分泌。更优选的是，在注射时，所述药物制剂会导致好于分开施用悬浮液中的GLP-1固体和胰岛素溶液所获得的葡萄糖曲线。
本发明的药物制剂适合治疗疾病或状况，其中，施用GLP-1或胰岛素的生理学作用能改善所述疾病或状况。
包括患有以下疾病的对象：非胰岛素依赖型糖尿病，胰岛素依赖型糖尿病，中风(参见Efendic的WO 00/16797)，心肌梗塞(参见Efendic的WO 98/08531)，肥胖(参见Efendic的WO 98/19698)，手术之后的分解代谢改变(参见Efendic的美国专利号6,006,753)，功能性消化不良症和肠激惹综合征(参见Efendic的WO99/64060)。还包括需要用基础GLP-1化合物进行预防性治疗的对象，例如，有发生非胰岛素依赖型糖尿病的危险的对象(参见WO 00/07617)。其他对象包括患有葡萄糖耐量低减或空腹葡萄糖受损的对象，就患者的身高或体格而言，其体重高于正常体重大约25％的患者，进行过部分胰腺切除的对象，单亲或双亲患有非胰岛素依赖型糖尿病的对象，曾患有妊娠糖尿病的对象，和曾患有急性或慢性胰腺炎，具有发生非胰岛素依赖型糖尿病的危险的对象。
可以将本发明的药物制剂用于使血糖水平正常化，抑制胰腺β-细胞破坏，诱导β-细胞增殖，刺激胰岛素基因转录，上调IDX-1/PDX-1或其他生长因子，改善β-细胞功能，激活静息的β-细胞，将细胞分化成β-细胞，刺激β-细胞复制，抑制β-细胞程序死亡，调节体重，并且诱导体重下降。
本发明的药物制剂优选具有可持续大约12-大约24小时的持续的药代动力学曲线，最优选的是具有可持续大约20-大约24小时的持续的药代动力学曲线。因此，本发明药物制剂的施用方法包括每天在早餐和晚餐之前施用两个合适的剂量，最优选的是每天在早餐之前施用一次。
GLP-1化合物：
本发明的GLP-1化合物可以通过本领域已知的多种方法制备，如固相合成化学方法，从天然来源中纯化GLP-1分子，重组DNA技术，或所述方法的组合。例如，用于制备GLP-1肽的方法披露于以下美国专利号中：5,118,666；5,120,712；5,512,549；5,977,071和6,191,102。
可用于本发明的GLP-1化合物包括天然存在的截短的GLP-1多肽(GLP-1(7-37)OH和GLP-1(7-36)NH2)，GLP-1类似物，Exendin3和Exendin-4。
两种天然存在的截短的GLP-1肽如式I，SEQIDNO：1所示。
         7   8   9   10  11  12  13  14  15  16  17
         His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-
         18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28
         Ser-Tyr-Leu-G1u-Gly-Gln-A1a-A1a-Lys-Glu-Phe-
         29  30  31  32  33  34  35  36  37
         Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Xaa
其中：37号位置上的Xaa是Gly或-NH2
GLP-1化合物优选具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列，或者是修饰过的，以便有一个，两个，三个，四个或五个氨基酸与SEQ ID NO：1不同。
例如，本领域已知的某些GLP-1化合物包括GLP-1(7-34)和GLP-1(7-35)，GLP-1(7-36)，Gln9-GLP-1(7-37)，D-Gln9-GLP-1(7-37)，Thr16-Lys18-GLP-1(7-37)，和Lys18-GLP-1(7-37)。诸如GLP-1(7-34)和GLP-1(7-35)的GLP-1化合物披露于美国专利号5,118,666中。其他已知的生物活性GLP-1类似物披露于以下文献中：美国专利号5,977,071；美国专利号5,545,618；美国专利号5,705,483；美国专利号5,977,071；U.S.美国专利号6,133,235；Adelhorst等，J.Biol.Chem.269：6275(1994)；和Xiao，Q.等(2001)，Biochemistry 40：2860-2869。
GLP-1化合物还包括多肽，其中，业已将一个或多个氨基酸添加到GLP-1(7-37)OH或它的片段或类似物的N-末端和/或C-末端。优选在GLP-1(7-37)OH的N-末端添加1-6个氨基酸和/或在它的C-末端添加1-8个氨基酸。优选的是，这种类型的GLP-1化合物具有最多达大约39个的氨基酸。“延长的”GLP-1化合物中的氨基酸是通过与GLP-1(7-37)OH中相应氨基酸的相同编号表示的。例如，通过在GLP-1(7-37)OH的N-末端添加两个氨基酸所获得的GLP-1化合物的N-末端氨基酸在5号和6号位置上；而在GLP-1(7-37)OH的C-末端添加一个氨基酸所获得的GLP-1化合物的C-末端氨基酸是在38号位置上；延长的GLP-1化合物的1-6号氨基酸优选与GLP-1(1-37)OH上的相应位置上的氨基酸相同或者是其保守性取代。延长的GLP-1化合物的38-45号氨基酸优选与Exendin-3或Exendin-4的相应位置上的氨基酸相同或者是其保守性取代。Exendin-3和Exendin-4的氨基酸序列如式II，SEQ ID NO：2所示。
        7   8   9   10  11  12  13  14  15  16  17
        His-Xaa-Xaa-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-
        18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28
        Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-
        29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39
        Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-
        40  41  42  43  44  45
        Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH2
其中：8号位置上的Xaa是Ser或Gly；和
9号位置上的Xaa是Asp或G1u。
Exendin-3具有位于8号位置上的Ser和位于9号位置上的Asp。Exendin-4具有位于8号位置上的Gly和位于9号位置上的Glu。本发明的其他GLP-1化合物包括式2(SEQ ID NO：2)，其中，C-末端Ser是酸性形式的，而不是酰胺化形式的。另外，本发明的GLP-1化合物包括Exendin-3和Exendin-4激动剂，如在被收作本文参考的以下文献中所披露的：WO99/07404，WO99/25727，WO99/25728，WO99/43708，WO00/66629，和US2001/0047084A1。
一组优选的GLP-1化合物如式III(SEQ ID NO：3)所示：
        7   8   9   10  11  12  13  14  15  16  17
        Xaa-Xaa-Xaa-Gly-Xaa-Xaa-Thr-Xaa-Asp-Xaa-Xaa-
        18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28
        Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Phe-
        29  30  31  32  33  34  35  36  37  38  39
        Ile-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-
        40  41  42  43  44  45
        Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa
其中：
7号位置上的Xaa是L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，α-氟甲基-组氨酸或α-甲基-组氨酸；
8号位置上的Xaa是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；
9号位置上的Xaa是Glu，Asp，Lys，Thr，Ser，Arg，Trp，Phe，Tyr，或His；
11号位置上的Xaa是Thr，Ala，Gly，Ser，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，Arg，His，或Lys；
12号位置上的Xaa是His，Trp，Phe，或Tyr。
14号位置上的Xaa是Ser，Ala，Gly，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；
16号位置上的Xaa是Val，Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Tyr，Glu，Asp，Trp，His，Phe，或Lys；
17号位置上的Xaa是Ser，Ala，Gly，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；
18号位置上的Xaa是Ser，Ala，Gly，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，His，Pro，Arg，或Lys；
19号位置上的Xaa是Tyr，Phe，Trp，Glu，Asp，Gly，Gln，Asn，Arg，Cys，或Lys；
20号位置上的Xaa是Leu，Ala，Gly，Ser，Thr，Ile，Val，Glu，Asp，Met，或Lys；
21号位置上的Xaa是Glu，Asp，或Lys；
22号位置上的Xaa是Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；
23号位置上的Xaa是Gln，Asn，Arg，Glu，Asp，His，或Lys；
24号位置上的Xaa是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Arg，Glu，Asp，或Lys；
25号位置上的Xaa是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；
26号位置上的Xaa是Lys，Arg，Gln，Glu，Asp，Trp，Tyr，Phe，或His；
27号位置上的Xaa是Glu，Asp，Ala，His，Phe，Tyr，Trp，Arg，Leu，或Lys；
30号位置上的Xaa是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，His，或Lys；
31号位置上的Xaa是Trp，Phe，Tyr，Glu，Asp，Ser，Thr，Arg，或Lys；
32号位置上的Xaa是Leu，Gly，Ala，Ser，Thr，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；
33号位置上的Xaa是Val，Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Glu，Asp，Arg，或Lys；
34号位置上的Xaa是Lys，Arg，Glu，Asp，Asn，或His；
35号位置上的Xaa是Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，Arg，Trp，Tyr，Phe，Pro，His，或Lys；
36号位置上的Xaa是Arg，Lys，Glu，Asp，Thr，Ser，Trp，Tyr，Phe，Gly，或His；
37号位置上的Xaa是Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，His，Lys，Arg，Trp，Tyr，Phe，Pro，Pro-NH2或缺失；
38号位置上的Xaa是Arg，Lys，Glu，Asp，Ser，或His，或缺失；
39号位置上的Xaa是Arg，Lys，Glu，Asp，Ser，或His，或缺失；
40号位置上的Xaa是Asp，Glu，Gly，或Lys，或缺失；
41号位置上的Xaa是Phe，Trp，Tyr，Glu，Asp，Ala，或Lys，或缺失；
42号位置上的Xaa是Ser，Pro，Lys，Glu，或Asp，或缺失；
43号位置上的Xaa是Ser，Glu，Asp，Pro，或Lys，或缺失；
44号位置上的Xaa是Gly，Glu，Asp，Pro，或Lys，或缺失；和
45号位置上的Xaa是Ala，Val，Glu，Asp，Ser，或Lys，或Ala-NH2，Val-NH2，Glu-NH2，Asp-NH2，Ser-NH2，或Lys-NH2，或缺失，或其C-1-6-酯，或酰胺，或C-1-6-烷基酰胺，或C-1-6-二烷基酰胺；其前提是，37，38，39，40，41，42，43，或44号位置上的氨基酸缺失时，所述氨基酸的下游的每一个氨基酸也缺失。
一组优选的GLP-1化合物是：
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGRG 或 G-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIDGGPSSGRPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGRGSSGDPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGRPSSGDPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGDPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGDPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGDPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLFEQAAKEFIAWLVKGRPSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGRPSSGDPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKGGPSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLVKGGPSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKGGPSSGDPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGGSSGDPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGPGSSGDPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGSPSGDPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGDPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGDPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGDAPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGDPAPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGDPPAS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGDAAAS  或S-NH2
HVEGTFTSDWSSYLEGQAAKEFIAWLIKGGPSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDWSSYLEGQAAKEFIAWLIKGGPSSGAPPPH  或H-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLIKGGPSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLIKGGPSSGDPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDWSSYLEGQAAKEFIAWLIKGGPSSGAPPPSH  或H-NH2
HVEGTFTSDWSSYLEGQAAKEFIAWLIKGGPHSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGGPSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGGPSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGRGSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKGRGSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDWSSYLEEQAAKEFIAWLIKGRGSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGRGHSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGRGHSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDWSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPHSSGAPPPSH  或H-NH2
HVEGTFTSDWSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGAPPPSH  或H-NH2
HVEGTFTSDVSWYLEGQAVKEFIAWLIKGGPHSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKGGPSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKGGPSSGAPPPSH  或H-NH2
HVEGTFTSDWSSYLEEQAVKEFIAWLIKGGPSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDWSSYLEEQAVKEFIAWLIKGGPSSGAPPPSH  或H-NH2
HVEGTFTSDWSSYLEEQAVKEFIAWLIKGGPHSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDWSKYLEEQAVKEFIAWLIKGGPSSGAPPPSH  或H-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKGGPSSGAPPPRG  或G-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKGGPSSGAPPPRG  或G-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGGPSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVDGGPSSGRPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVDGGPSSGRPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVDGGPSSGKPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVDGGPSSGRG  或G-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGGPSWGAPPPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGAPPPGPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGAPPPGPSGPS  或S-NH2
HVEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLVKGGPSSGAPPPS  或S-NH2
另一组优选的GLP-1化合物如式IV(SEQ ID NO：4)所示：
        7   8   9   10  11  12  13  14  15  16  17
        His-Xaa-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-
        18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28
        Ser-Tyr-Leu-Glu-Xaa-Xaa-Ala-Ala-Lys-Xaa-Phe-
        29  30  31  32  33  34  35  36  37
        Ile-Xaa-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-R
其中：
8号位置上的Xaa是Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr；
22号位置上的Xaa是Asp，Glu，Gln，Asn，Lys，Arg，Cys，或半胱磺酸；
23号位置上的Xaa是His，Asp，Lys，Glu，或Gln；
27号位置上的Xaa是Ala，Glu，His，Phe，Tyr，Trp，Arg，或Lys；
30号位置上的Xaa是Glu，Asp，Ser，或His；
R是：Lys，Arg，Thr，Ser，Glu，Asp，Trp，Tyr，Phe，His，-NH2。
另外，本发明的GLP-1化合物优选还具有其他组合的取代氨基酸。本发明涉及包括式V(SEQ ID NO：5)的氨基酸序列的GLP-1化合物。
      Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-
      Glu-Xaa22-Gln-Ala-Xaa25-Lys-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Lys-
      Gly-Arg-Xaa37
其中：
Xaa7是：L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，α-氟甲基-组氨酸，或α-甲基-组氨酸；
Xaa8是：Ala，Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr；
Xaa12是：Phe，Trp，或Tyr；
Xaa16是：Val，Trp，Ile，Leu，Phe，或Tyr；
Xaa18是：Ser，Trp，Tyr，Phe，Lys，Ile，Leu，或Val；
Xaa19是：Tyr，Trp，或Phe；
Xaa20是Leu，Phe，Tyr，或Trp；
Xaa22是：Gly，Glu，Asp，或Lys；
Xaa25是：Ala，Val，Ile，或Leu；
Xaa27是：Glu，Ile或Ala；
Xaa30是：Ala或Glu；
Xaa33是：Val或Ile；和
Xaa37是：Gly，His，-NH2，或不存在。
本发明还涉及包括具有式VI(SEQ ID NO：6)的氨基酸序列的GLP-1化合物。
    Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-
    Xaa22-Gln-Ala-Xaa25-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Xaa33-Lys-Gly-Arg-
    Xaa37
其中：
Xaa7是：L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，α-氟甲基-组氨酸，或α-甲基-组氨酸；
Xaa8是：Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr；
Xaa16是：Val，Phe，Tyr或Trp；
Xaa18是：Ser，Tyr，Trp，Phe，Lys，Ile，Leu，或Val；
Xaa22是：Gly，Glu，Asp，或Lys；
Xaa25是：Ala，Val，Ile，或Leu；
Xaa33是：Val或Ile；和
Xaa37是：Gly，-NH2，或不存在。
最优选的GLP-1化合物包括GLP-1类似物，其中，所述类似物或片段的主链包括除了8号位置上的丙氨酸以外的氨基酸(8号位置类似物)。8号位置上的优选的氨基酸是甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸，更优选的是缬氨酸或甘氨酸。
其他优选的GLP-1化合物是GLP-1类似物，它具有GLP-1(7-37)OH的序列，所不同的是，8号位置上的氨基酸优选是甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸，更优选的是缬氨酸或甘氨酸。而22号位置上的是谷氨酸，赖氨酸，天冬氨酸，或天冬酰胺，更优选的是谷氨酸或赖氨酸。
其他优选的GLP-1化合物是GLP-1类似物，它具有GLP-1(7-37)OH的序列，所不同的是，8号位置上的氨基酸优选是甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸，更优选的是缬氨酸或甘氨酸，而30号位置上的是谷氨酸，天冬氨酸，丝氨酸，或组氨酸，更优选的是谷氨酸。
其他优选的GLP-1化合物是GLP-1类似物，它具有GLP-1(7-37)OH的序列，所不同的是，8号位置上的氨基酸优选是甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸，更优选的是缬氨酸或甘氨酸，而37号位置上的是谷氨酸，赖氨酸，精氨酸，苏氨酸，丝氨酸，谷氨酸，天冬氨酸，色氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸，更优选的是组氨酸。
其他优选的GLP-1化合物是GLP-1类似物，它具有GLP-1(7-37)OH的序列，所不同的是，8号位置上的氨基酸优选是甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸，更优选的是缬氨酸或甘氨酸，而22号位置上的是谷氨酸，赖氨酸，天冬氨酸，或精氨酸，更优选的是谷氨酸或赖氨酸，而27号位置上的是丙氨酸，赖氨酸，精氨酸，色氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸，或组氨酸，更优选的是丙氨酸。
在本文中用于描述GLP-1化合物的命名方法中，取代氨基酸及其位置，在其母体结构前面示出。例如，Val8-GLP-1(7-37)OH表示这样的GLP-1化合物，其中，正常情况下存在于GLP-1(7-37)OH(式I，SEQ ID NO：1)的8号位置上的丙氨酸被缬氨酸所取代。
其他优选的GLP-1化合物包括：Val8-GLP-1(7-37)OH，Gly8-GLP-
1(7-37)OH，Glu22-GLP-1(7-37)OH，Asp22-GLP-1(7-37)OH，Arg22-GLP-1(7-37)OH，
Lys22-GLP-1(7-37)OH，Cys22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-
Asp22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Arg22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Lys22-GLP-1(7-37)OH，
Val8-Cys22-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Asp22-GLP-1(7-
37)OH，Gly8-Arg22-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Lys22-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Cya22-GLP-
1(7-37)OH，Glu22-GLP-1(7-36)NH2，Asp22-GLP-1(7-36)NH2，Arg22-GLP-1(7-36)NH2，
Lys22-GLP-1(7-36)NH2，Cys22-GLP-1(7-36)NH2，Val8-Glu22-GLP-1(7-36)NH2，Val8-
Asp22-GLP-1(7-36)NH2，Val8-Arg22-GLP-1(7-36)NH2，Val8-Lys22-GLP-1(7-36)NH2，
Val8-Cys22-GLP-1(7-36)NH2，Gly8-Glu22-GLP-1(7-36)NH2，Gly8-Asp22-GLP-1(7-
36)NH2，Gly8-Arg22-GLP-1(7-36)NH2，Gly8-Lys22-GLP-1(7-36)NH2，Gly8-Cys22-
GLP-1(7-36)NH2，Lys23-GLP-1(7-37)OH，Val8-Lys23-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Lys23-
GLP-1(7-37)OH，His24-GLP-1(7-37)OH，Val8-His24-GLP-1(7-37)OH，Gly8-His24-
GLP-1(7-37)OH，Lys24-GLP-1(7-37)OH，Val8-Lys24-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Lys23-
GLP-1(7-37)OH，Glu30-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu30-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Glu30-
GLP-1(7-37)OH，Asp30-GLP-1(7-37)OH，Val8-Asp30-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Asp30-
GLP-1(7-37)OH，Gln30-GLP-1(7-37)OH，Val8-Gln30-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Gln30-
GLP-1(7-37)OH，Tyr30-GLP-1(7-37)OH，Val8-Tyr30-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Tyr30-
GLP-1(7-37)OH，Ser30-GLP-1(7-37)OH，Val8-Ser30-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Ser30-
GlP-1(7-37)OH，His30-GLP-1(7-37)OH，Val8-His30-GLP-1(7-37)OH，Gly8-His30-
GLP-1(7-37)OH，Glu34-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu34-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Glu34-
GLP-1(7-37)OH，Ala34-GLP-1(7-37)OH，Val8-Ala34-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Ala34-
GLP-1(7-37)OH，Gly34-GLP-1(7-37)OH，Val8-Gly34-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Gly34-
GLP-1(7-37)OH，Ala35-GLP-1(7-37)OH，Val8-Ala35-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Ala35-
GLP-1(7-37)OH，Lys35-GLP-1(7-37)OH，Val8-Lys35-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Lys35-
GLP-1(7-37)OH，His35-GLP-1(7-37)OH Val8-His35-GLP-1(7-37)OH，Gly8-His35-GLP-
1(7-37)OH，Pro35-GLP-1(7-37)OH，Val8-Pro35-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Pro35-GLP-1(7-
37)OH，Glu35-GLP-1(7-37)OH Val8-Glu35-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Glu35-GLP-1(7-
37)OH，Val8-Ala27-GLP-1(7-37)OH，Val8-His37-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-Lys23-
GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-Glu23-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-Ala27-GLP-1(7-
37)OH，Val8-Gly34-Lys35-GLP-1(7-37)OH，Val8-His37-GLP-1(7-37)OH，and Gly8-
His37-GLP-1(7-37)OH.
更优选的GLP-1化合物是Val8-GLP-1(7-37)OH，Gly8-GLP-1(7-37)OH，Glu22-GLP-1(7-37)OH，Lys22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Lys22-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Lys22-GLP-1(7-37)OH，Glu22-GLP-1(7-36)NH2，Lys22-GLP-1(7-36)NH2，Val8-Glu22-GLP-1(7-36)NH2，Val8-Lys22-GLP-1(7-36)NH2，Gly8-Glu22-GLP-1(7-36)NH2，Gly8-Lys22-GLP-1(7-36)NH2，Val8-His37-GLP-1(7-37)OH，Gly8-His37-GLP-1(7-37)OH，Arg34-GLP-1(7-36)NH2，and Arg34-GLP-1(7-37)OH.
其他优选的GLP-1化合物包括：Val8-Tyr12-GLP-1(7-37)OH，Val8-Tyr12-GLP-1(7-36)NH2，Val8-Trp12-GLP-1(7-37)OH，Val8-Leu16-GLP-1(7-37)OH，Val8-Tyr16-GLP-1(7-37)OH，Gly8-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Leu25-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu30-GLP-1(7-37)OH，Val8-His37-GLP-1(7-37)OH，Val8-Tyr12-Tyr16-GLP-1(7-37)OH，Val8-Trp12-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Tyr12-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Tyr16-Phe19-GLP-1(7-37)OH，Val8-Tyr16-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Trp16-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Leu16-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Ile16-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Phe16-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Trp18-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Tyr18-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Phe18-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Ile18-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Lys18-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Trp19-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Phe19-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Phe20-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-Leu25-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-Ile25-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-Val25-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-Ile27--GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-Ala27-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-Ile33-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-His37-GLP-1(7-37)OH，Val8-Asp9-Ile11-Tyr16-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Tyr16-Trp19-Glu22-GLP-1(7-37)OH，Val8-Trp16-Glu22-Val25-Ile33-GLP-1(7-37)OH，Val8-Trp16-Glu22-Ile33-GLP-1(7-37)OH，Val8-Glu22-Val25-Ile33-GLP-1(7-37)OH，and Val8-Trp16-Glu22-Val25-GLP-1(7-37)OH.
锌晶体：
可以将GLP-1化合物掺入锌晶体中。优选进行碱标准化步骤。将GLP-1溶液的pH调节到大约9.5-大约11.5。该步骤似乎能减少所述肽中β-折叠构象的含量，并且增加α-螺旋构象的含量，这对于某些GLP-1化合物的可溶性和生物可利用性来说是重要的。该步骤还可起着在随后的处理步骤之前维持所述肽处于优选的α-螺旋构象的作用。因此，这一关键步骤将大批肽中的变异“标准化”成可再现性更高的均匀的溶液。
所述碱标准化溶液中的肽浓度优选超过5mg/mL。该浓度更优选为大约10mg/mL-大约30mg/mL。溶解肽的其他优选浓度范围为大约5mg/mL-大约25mg/mL，大约8mg/mL-大约25mg/mL，以及大约10mg/mL-大约20mg/mL。最优选的浓度为大约15mg/mL。
含水碱性溶液优选仅包括用于溶解所述肽的水和诸如氢氧化钠，氢氧化钾或氢氧化铵的碱。更优选的碱是氢氧化钠。
所述碱标准化步骤的pH优选为大约10.0-大约11.0。更优选的是，所述pH为大约10.5。可以在环境温度下将含有所述溶解肽的碱性溶液静置大约5分钟-大约3小时时间，所述温度通常为大约20-25℃，不过，该范围并不构成对温度范围的限制。还可以轻轻地搅拌所述碱溶液。更优选的是，将所述溶解的碱性肽溶液在环境温度下静置大约1小时。本领域技术人员可以理解的是，对于该步骤来说，可以方便地确定每一种肽的pH，时间，温度和搅拌条件的组合，这种条件组合能确保充分的肽构象“标准化”，并且避免或减少所述肽可能发生的化学降解。
用于制备选定肽的晶体的方法的下一个步骤是添加甘氨酸。诸如甘氨酸的氨基酸能结合锌离子，所述锌离子还能与肽中的组氨酸残基非常紧密地结合。因此，对锌离子结合的竞争可以在肽晶体的形成中发挥作用，并且在随后的结晶组合物的稳定性中发挥作用。添加到碱性肽溶液中的甘氨酸可以是固体形式的或母液形式的。甘氨酸优选是作为固体添加的。所添加的甘氨酸优选是无碱基形式的。所得到的溶解在碱性肽溶液中的甘氨酸的浓度为大约5mM-大约250mM。更优选的甘氨酸浓度范围为大约10mM-大约150mM，大约20mM-大约100mM，大约40mM-大约80mM，以及大约55mM-大约65mM。最优选的是，所述甘氨酸的浓度为大约60mM。
可以在添加甘氨酸之后，任选重新调节所述碱性肽溶液的pH。如果调节pH的话，优选将pH调节到大约9.0-大约11.0。更优选的是，将pH调节到大约9.2-大约9.8，最优选的是，将pH调节到大约9.5。
任选对添加了甘氨酸的碱性肽溶液进行过滤。如果在溶液中出现未溶液的颗粒、粉尘或絮状物的任何迹象的话，建议进行过滤。如果必要，这还是所述方法中的一个好的场所，在这里可以通过实施无菌过滤步骤对所述溶液进行消毒。所述过滤可以用无菌非致热过滤器进行，所述过滤器具有低的蛋白结合率，和0.45微米或更小的孔径。所述过滤器优选是孔径为0.22微米或更小的无菌非致热、低蛋白结合率过滤器，最优选的是，所述过滤器是无菌0.22微米Millexe过滤器(Millipore Corporation，Waltham，MA，USA)。
形成晶体的过程的下一个步骤是向所述碱性肽溶液中添加占最终体积大约2％-大约20％的选自下组的醇：乙醇和异丙醇，以及每摩尔所述肽添加大约0.5摩尔-大约2.5摩尔的锌。所述锌和乙醇可以添加在一种含水母液中或按顺序用一个或多个步骤分别添加。所述醇优选是在锌之前添加的。
所添加的醇优选占碱性肽-氢-醇溶液的最终体积的大约2％-大约20％。更优选的是，所述醇占最终体积的大约5％-大约15％。更优选的是，所述醇占最终体积的大约6％-大约12％。最优选的是所述醇占最终体积的大约9％。所述醇优选是乙醇。
在这一阶段所添加的锌是锌离子。所述锌能够以多种形式添加，不过优选用稀盐酸酸化的氧化锌溶液和诸如乙酸锌或氯化锌的盐的形式。更优选的是用稀盐酸酸化的氧化锌溶液。
在该处理步骤中，优选以每摩尔肽1.0摩尔-大约2.25摩尔的锌的比例添加锌。添加锌的其他优选范围包括每摩尔肽添加1.1-2.0摩尔锌，每摩尔肽添加1.3-1.7摩尔锌，和每摩尔肽添加1.4-1.6摩尔锌。最优选的是，每摩尔肽添加大约1.5摩尔的锌。
添加到所述肽溶液中的含锌的溶液优选是缓慢添加的和/或以小的增加量添加的，这样可以减少肽的局部沉淀和/或可能在添加位点形成的锌复合物。更优选的是，甘氨酸同样是在该步骤中添加的含锌溶液的一种成分。例如，锌-甘氨酸溶液可以通过将氧化锌溶解在稀盐酸中，使pH为大约1.6，然后添加固体甘氨酸制备。添加足够量的甘氨酸，以便将该溶液的pH提高到大约pH2-大约pH3。例如，可以用稀氢氧化钠将锌-甘氨酸溶液的pH进一步提高。锌-甘氨酸溶液的优选pH范围为大约pH4.0-大约pH6.0。锌-甘氨酸溶液的更优选pH范围为大约pH5.0-大约pH5.5。正如前面所指出的，甘氨酸具有对锌的结合亲和力，这种亲和力可能与所述肽的锌结合竞争。因此，甘氨酸在被添加到所述溶液中的含有锌的溶液中的存在，使得锌溶液可以更快地添加，因为减少了局部沉淀问题。另外，通过使锌-甘氨酸溶液的pH高于2.0，并且优选大约pH4.0-大约pH6.0，使得该溶液可以用过滤器进行消毒过滤，该过滤器的生产商推荐用它处理，例如pH2-10的溶液，然后再将它导入无菌肽组合物中。所述锌-甘氨酸溶液优选包括大约50mM-大约70mM甘氨酸，和大约20mM-大约200mM锌。
选定肽的起始结晶化的最后一个步骤是将该溶液的pH调节到大约pH7.5-大约pH10.5，并且让所述肽形成晶体。用于调节该溶液pH的优选的试剂溶液包括稀HCl，稀乙酸和稀NaOH。
选定肽结晶化的优选pH范围包括大约pH8.0-大约pH10.0，大约pH7.5-大约pH9.5，大约pH8.5-大约pH9.2，大约pH9.0-大约pH9.5，大约pH7.5-大约pH8.5，大约pH8.7-大约pH9.5，和大约pH9.2-大约pH10.0。
本领域技术人员可以理解的是，结晶化的优选pH取决于多种因素，这些因素包括肽的性质以及它的浓度，醇浓度，锌浓度，该溶液的离子强度和结晶化的温度。举例来说，肽Val8-Glu30-GLP-1(7-37)OH只能在pH大约7.7-大约8.1的范围内在选定的乙醇和锌浓度下产生晶体，而肽Val8-His37-GLP-1(7-37)OH在pH大约9.8-大约10.4的范围内，能在大的锌和乙醇浓度范围内产生晶体。
本领域技术人员还可以理解的是，对于特定组合的条件来说，确定结晶化的最佳pH的一种优选方式是凭经验确定，就是说缓慢添加酸化溶液，优选以小的增量添加稀HCl或稀乙酸，并且在添加每一个增量之后观察所出现的情况。一般，在添加酸性溶液的地方会出现少量局部沉淀区。当轻微的涡旋搅拌以逐渐延长的时间进行，以便完全重新溶解所述沉淀时，就是停止添加所述酸的最佳时间，并且使结晶化能够从所述透明的或略微浑浊的溶液开始进行。
本领域技术人员还可以理解的是，人们为结晶化而选择的pH和温度将对结晶化进行的速度，结晶产率，和所形成的晶体的大小和均匀性产生影响。所述选定肽的结晶化pH优选为大约pH8.0-大约pH10。更优选的pH为大约8.7-大约9.5。其他优选的结晶化pH范围为大约8.8-大约9.3，大约9.0-大约9.5，大约8.5-大约9.3。最优选的是，所述结晶化是在大约pH9.1的条件下进行的。
结晶化的温度优选为大约10℃-大约30℃。更优选的是，结晶化的温度为大约15℃-大约28℃。最优选的是，结晶化的温度为环境温度，或大约20℃-大约25℃。
上述结晶化步骤优选是彻底的，就是说在大约3-大约72小时内，90％或90％以上的肽主要是以结晶形式沉淀的。更优选的是，所述结晶化是在大约10-大约48小时内完成的，最优选的是，所述结晶化是在大约16-大约26小时内完成的。结晶化的完成可以通过多种方法确定，包括对存在于所述组合物的一份样品中的肽的HPLC分析。本文的方法5披露了可以采用的一种这样的方案。根据上述方法的步骤所产生的晶体优选是薄片状晶体。通过该方法所产生的晶体可以通过显微镜检查。
将原始母液中晶体悬浮液的pH降低到这样一种pH值：在该pH下97％或以上的肽成为不可溶的。该方法的这一部分优选在确定最初结晶化完成之后数小时内开始。优选用盐酸或乙酸的稀溶液降低pH，其中，所述酸溶液是缓慢添加的，并且以增量部分添加的。本领域技术人员可以理解的是，所述结晶化的第二阶段可以发生的优选pH取决于多种因素，包括所述肽的性质以及它的浓度，醇浓度，锌浓度，悬浮液的离子强度和结晶化的温度。所述pH优选比进行最初结晶化的pH低大约0.2-2.0个pH单位，更优选的是，所述pH比进行最初结晶化的pH低大约0.5-1.5个pH单位，最优选比进行最初结晶化的pH低大约0.8-1.3个pH单位。结晶化的所述第二阶段的温度优选为环境温度，或大约20℃-大约25℃。对于Val8-GLP-1(7-37)OH来说，优选的pH为大约7.5-大约8.5。更优选的pH为大约7.8-大约8.2。
将肽晶体悬浮液的pH降低到所述组合物中98％或以上，更优选99％或以上的肽在组合物中可溶。在此结晶化的第二阶段形成的其它沉淀物包括晶体。优选地，此结晶化的第二阶段形成的其它沉淀物将主要是具有与在结晶化的第一阶段所形成的晶体相当的形态和大小分布的晶体。
结晶化的第二阶段优选是足够彻底的，就是说，97％或以上的肽是不可溶的，使得随后的步骤可以在结晶的第二阶段开始之后30小时以内开始，更优选在18小时内开始，更优选在6小时内开始，最优选在2小时内开始。沉淀产率的定量可以通过多种方式确定，包括对存在于一份悬浮液样品中的肽进行HPLC分析。
上述步骤会产生含有来自最初结晶阶段的原始母液中的不可溶的GLP-1沉淀物或晶体的母悬浮液。所述母悬浮液能够以它的存在形式与胰岛素溶液混合，或所述母悬浮液可任选包括其他合适的可以药用的赋形剂。
所述GLP-1母悬浮液可任选包括可以药用的缓冲液，如TRIS，马来酸盐，磷酸盐，琥珀酸盐，甘氨酰甘氨酸或乙二酸盐，以及一种或多种等渗剂，如氯化钠，其他盐，甘油或甘露糖醇。以上成分可以作为一种单独的溶液添加，作为组合溶液添加或以任何顺序分别添加。在上述成分中，优选的缓冲液选自下列一组：TRIS，马来酸盐，和甘氨酰甘氨酸，优选的等渗剂是氯化钠。更优选的缓冲液是TRIS。
将优选量的TRIS添加到GLP-1母悬浮液中，如果TRIS是所述选定的缓冲液的话，TRIS在最终组合物中的浓度为大约5mM-大约40mM。TRIS在最终组合物中的更优选的浓度范围为大约10mM-大约20mM。TRIS在最终组合物中的最优选的浓度为大约15mM。
将优选量的马来酸盐添加到GLP-1母悬浮液中，如果马来酸盐是选择的缓冲液的话，马来酸盐在最终组合物中的浓度为大约2mM-大约20mM。马来酸盐在最终组合物中的更优选的浓度范围为大约5mM-大约15mM。马来酸盐在最终组合物中的最优选的浓度为大约9mM。
如果选择氯化钠作为GLP-1母悬浮液肽组合物的成分的话，添加优选量的氯化钠，以便所添加的氯化钠在所述母悬浮液中为大约30mM-大约200mM。所添加的氯化钠在所述母悬浮液中更优选的浓度为50mM-大约150mM。其他优选的氯化钠浓度范围为大约80mM-大约120mM，大约70mM-大约130mM，和大约90mM-大约130mM。添加到所述母悬浮液中的氯化钠的最优选量为大约110mM。
尽管在所述方法的这一阶段可以将任何可以药用的防腐剂添加到GLP-1母悬浮液中，但优选酚类防腐剂或苄醇。酚类防腐剂的例子包括苯酚，氯甲酚，间甲酚，邻甲酚，对甲酚，乙基对羟基苯甲酸酯，甲基对羟基苯甲酸酯，丙基对羟基苯甲酸酯，丁基对羟基苯甲酸酯，百里酚，或它们的混合物。更优选的防腐剂是苄醇，间甲酚，苯酚，甲基对羟基苯甲酸酯和它们的混合物。最优选的可以药用的防腐剂是间甲酚。
制备GLP-1母悬浮液的方法的最后一个步骤是将最终pH调节到大约6.0-大约8.5，优选大约pH6.5-大约pH8.0，更优选大约pH7.0-大约pH8.0。尽管可以将多种酸化和/或碱性化制剂溶液中的任一种用于这种pH调节，但优选使用稀HCl，稀NaOH和稀乙酸。更优选的试剂溶液是稀HCl和稀NaOH。所述组合物要调节到的优选pH，在某种程度上取决于选择的肽，肽浓度，推荐的施用途径和选择的缓冲液。
在TRIS作为选择的缓冲液时，优选将pH调节到大约6.5-大约8.5。更优选的是，将pH调节到大约7.0-大约7.8，大约7.2-大约7.8，大约7.5-大约8.5，或大约7.0-大约8.0。在选择TRIS时，将GLP-1母悬浮液的最佳pH调节到大约7.5。在马来酸盐作为选择的缓冲液时，将pH调节到大约6.0-大约7.5。更优选的是，将pH调节到大约6.4-大约7.5。大约6.4-大约7.0，或大约6.0-大约7.0。在选择马来酸盐作为缓冲液时，将GLP-1母悬浮液的最佳pH调节到大约6.5。
鱼精蛋白复合物：
在另一种实施方案中，所述GLP-1固相可以是包括GLP-1化合物和碱性多肽的复合物。所述复合物任选包括诸如锌的二价金属离子。所述复合物可以是结晶或非晶材料，或结晶和非晶材料的混合物。结晶复合物主要由单个的或成簇的微晶体，棒，针或片或它们的混合物。非晶复合物包括一种沉淀物，但是缺少结晶状态的物质，和确定的形式或结构。碱性多肽包括，但不局限于碱性蛋白或多胺。碱性蛋白或多胺的例子是聚赖氨酸，聚精氨酸，聚鸟氨酸，鱼精蛋白，腐胺，精胺，亚精胺，和组蛋白。优选的碱性多肽是聚精氨酸，鱼精蛋白，聚赖氨酸，和聚鸟氨酸。更优选的是聚赖氨酸，聚精氨酸和鱼精蛋白。最优选的是鱼精蛋白。鱼精蛋白是以与核酸的盐样组合形式存在于精子细胞核中的一类强碱性蛋白的总称。市场上销售的鱼精蛋白可以从成熟的鱼精子中分离，并且通常是作为硫酸盐形式获得的。特定鱼精蛋白的肽组成可以根据获得的它的鱼的所属的科、属或种而改变。来自鲑鱼或鳟鱼的鱼精蛋白可以分离成两种，三种或三种以上主要蛋白级份，所述蛋白级份可以进一步地分离。不同的母体肽由大约30个氨基酸组成，其中超过20个是精氨酸。鱼精蛋白的平均分子量为大约4，300。市售鱼精蛋白硫酸盐是大约80％的鱼精蛋白。
所述复合物可以通过将GLP-1化合物溶液与碱性多肽溶液混合制备。GLP-1化合物溶液优选是缓冲过的溶液，并且是通过将GLP-1化合物溶解在选定缓冲液中制备的。缓冲液的例子包括，但不局限于TRIS，甘氨酸，精氨酸，和磷酸盐。优选的缓冲液是TRIS。缓冲液的浓度应当是这样的：减弱氢离子浓度的改变，这种改变原本有可能因为化学反应而发生。GLP-1溶液的pH为大约pH6-大约pH10，优选大约pH7-大约pH10，更优选大约pH8-大约pH10，更优选大约pH9-大约pH10。GLP-1化合物溶液的pH可以根据被溶解的GLP-1化合物的等电点(pI)进行调节，以便优化将会溶解在缓冲过的GLP-1溶液中并且在其中保持可溶状态的GLP-1化合物的量。例如，优选将Val8-GLP-1(7-37)OH溶解在TRIS缓冲溶液中，其中，将pH调节到9.0。
碱性多肽溶液优选是通过将碱性多肽溶解在选定缓冲液中制备的缓冲溶液。缓冲液的例子包括，但不局限于TRIS，甘氨酸，精氨酸，和磷酸盐。优选的缓冲液是TRIS。缓冲液的浓度应当是这样的，可以减少氢离子浓度的变化，这种变化原本有可能因为化学反应而发生。所述缓冲过的多肽溶液的pH为大约pH6-大约pH10，优选大约pH7-大约pH10，更优选大约pH8-大约pH10，最优选大约pH9-大约pH10。碱性多肽在溶液中的浓度为大约1.0-大约20.0mg/mL。不过，最终，碱性多肽的浓度将会是这样的，当所述碱性多肽溶液被添加到GLP-1化合物溶液中时，获得了GLP-1化合物与碱性多肽的理想的比例。例如，优选将鱼精蛋白溶解在pH9.0的Tris缓冲的溶液中。
为了诱导复合物形成和减少所述复合物对反应容器的附着，将选自乙醇，丙醇，异丙醇和甲醇，或它们的混合物的醇添加到缓冲过的GLP-1化合物溶液，缓冲过的碱性多肽溶液或同时添加到这两种溶液中。一旦混合了缓冲过的GLP-1化合物溶液和缓冲过的碱性多肽溶液，醇的最终浓度优选为大约0.2-大约10％(体积与体积的比例)(v/v)。最优选的乙醇浓度为大约4％-5％(v/v)。
所述复合物是通过将缓冲过的GLP-1化合物溶液与缓冲过的碱性多肽溶液混合制备的。首先形成了非晶沉淀物的悬浮液。不过，如果主要是需要晶体复合物的话，将所述悬浮液温育大约18-24小时。尽管温育的温度并不重要，所述温度优选为大约5℃-大约35℃，以避免所述肽的变性，并且保持所形成的晶体基质。所述温度优选为大约25℃。温育的时间和温度量可以根据需要的是非晶复合物，结晶复合物，或非晶和结晶复合物的混合物而改变。
要混合在一起的GLP-1溶液和碱性肽溶液的量可以根据GLP-1化合物和碱性多肽和醇在每一种溶液中的浓度进行调节，以便在最终的混合物中GLP-1化合物与碱性多肽的比例为大约4∶1-大约10∶1(w/w)。GLP-1化合物与碱性多肽的最终比例影响其形态学，以及所述复合物的最终产率。例如，通常能导致由单个和成簇的微晶，棒，针，片，或它们的混合物的结晶复合物的比例为大约5∶1(w/w)(GLP-1化合物∶碱性多肽)，而4∶1(w/w)的比例(GLP-1化合物∶碱性多肽)会额外导致更大的成簇的微晶体，棒，针和片。
在大约4∶1-大约5∶1的比例(GLP-1化合物与碱性多肽的重量比)下，复合物的形成的产率通常接近100％。不过，可以将GLP-1化合物与碱性多肽的比例提高到超过5∶1(GLP-1化合物∶碱性多肽)，即使如此，它会导致产率的降低。GLP-1化合物在GLP-1溶液中的浓度和碱性多肽在碱性多肽溶液中的浓度可以调节，以便GLP-1化合物与碱性多肽的比例为大约6∶1-大约10∶1(w/w)，更优选大约7∶1-大约9∶1(w/w)(GLP-1化合物∶碱性多肽)。在该比例下复合物的形成的产率低于95％，通常低于90％。
在另一种实施方案中，将诸如锌的二价金属离子添加到GLP-1/鱼精蛋白复合物的悬浮液中，以便提高复合物的产率和改变它的溶解特性。所述复合物的溶解特性可以根据相对所存在的GLP-1化合物的量而添加的锌的量而改变。这种用于控制溶解特性的方法是有用的，因为所述复合物的溶解特性决定了在输送位点的药代释放速度。因此，通过控制溶解特性，人们可以控制所述药物的药代动力学特性。另外，将所述悬浮液浸泡在锌的溶液中可以驱动所述复合物形成到完成。
锌优选是作为盐添加到的。锌盐的典型例子包括乙酸锌，溴化锌，氯化锌，氟化锌，碘化锌和硫酸锌。本领域技术人员可以理解的是，还可以使用多种其他的锌盐。优选使用氧化锌，乙酸锌和氯化锌。可以将pH为大约5-大约6的缓冲过的锌溶液添但到GLP-1化合物/碱性多肽复合物的悬浮液中。用于缓冲锌溶液的优选缓冲液是甘氨酸。任选将pH为大约1-大约2的酸性锌溶液添加到所述悬浮液中。锌与GLP-1化合物的优选的最终摩尔比低于大约2∶1。尽管温育的温度不是关键的，所述悬浮液通常是在大约5℃-大约25℃的温度下，在存在锌的条件下温育大约18-大约24小时。
胰岛素：
胰岛素肽可以通过本领域众所周知的多种方法制备，如固相合成化学，从天然来源中纯化胰岛素，重组DNA技术，或所述方法的组合。
本发明胰岛素肽的例子包括常规人胰岛素和单体胰岛素类似物。优选的单体胰岛素类似物的例子是人胰岛素，其中，β链的28号位置上的脯氨酸被天冬氨酸，赖氨酸，亮氨酸，缬氨酸，或丙氨酸所取代，而β链的29号位置上的赖氨酸是赖氨酸或脯氨酸(AspB28或AspB28-ProB29，LysB28或LysB28-ProB29，LeuB28或LeuB28-ProB29，ValB28或ValB28-ProB29，AlaB28或AlaB28-ProB29)；缺失β链的28，29和30号氨基酸(desB28-30)；或缺失β链的27号氨基酸(des B27)。更优选的单体胰岛素类似物是LysB28-ProB29和AspB28。在被收作本文参考的美国专利申请号5,474,978和700,662中披露了各种单体胰岛素类似物的制备。
单体胰岛素类似物的其他例子包括它的衍生物或生理学上可以耐受的盐，其中，在B链的B3号位置上的天冬酰胺(Asn)被天然存在的碱性氨基酸残基所取代，并且B链的B27，B28或B29号位置上的至少一个氨基酸残基被另一种天然存在的氨基酸残基所取代。任选用Asp，Gly，Ser，Thr或Ala取代A链的21号位置上的天冬酰胺(Asn)，和使β链的B1号位置上的苯丙氨酸(Phe)和B链的B30号位置上的氨基酸残基不存在。B3优选是His，Arg，或Lys。B27，B28，或B29优选是Ile，Asp，或Glu。这类优选单体胰岛素类似物是LysB3-GluB29。在被收作本文参考的美国专利号6,221,633中披露了这类单体胰岛素类似物的制备。
制备双相混合物的方法
本发明还提供了一种制备适用于药物制剂中的双相混合物的方法，包括将GLP-1固体与胰岛素溶液混合。能够以固体形式将不可溶的GLP-1沉淀或晶体添加到含有胰岛素的溶液中，或可以将固体可溶性胰岛素溶解在含有不可溶的GLP-1沉淀和晶体的悬浮液中。另外，能够以任何顺序将不可溶的GLP-1沉淀或晶体和可溶的胰岛素添加到缓冲溶液中。GLP-1母悬浮液和胰岛素母液优选是分别制备的，然后以需要的比例混合在一起。优选用胰岛素溶液稀释GLP-1悬浮液。GLP-1悬浮液和胰岛素溶液是以如下方式混合的，GLP-1保持在固相中，并且保持持续的药代动力学曲线，而胰岛素保持在液相中，并且保持短的时间作用特征。
所述方法优选包括以大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)的比例将GLP-1悬浮液与实施例5的LysB28-ProB29胰岛素溶液混合，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述方法包括以大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)的比例将GLP-1悬浮液与AspB28胰岛素溶液混合，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述方法包括以大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)的比例将GLP-1悬浮液与常规人胰岛素溶液混合，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述方法包括以大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)的比例将实施例3的Val8-GLP-1悬浮液与实施例5的LysB28-ProB29胰岛素溶液混合，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述方法包括以大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)的比例将实施例3的Val8-GLP-1悬浮液与AspB28胰岛素溶液混合，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述方法包括以大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)的比例将实施例3的Val8-GLP-1悬浮液与常规人胰岛素溶液混合，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述方法包括以大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)的比例将Exendin-3悬浮液或Exendin-4悬浮液与实施例5的LysB28-ProB29胰岛素溶液混合，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述方法包括以大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)的比例将Exendin-3悬浮液或Exendin-4悬浮液与AspB28胰岛素溶液混合，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
在另一种实施方案中，所述方法包括以大约99∶1(w/w)-10∶90(w/w)的比例将Exendin-3悬浮液或Exendin-4悬浮液与常规人胰岛素溶液混合，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-15∶85(w/w)，更优选的比例为大约85∶15(w/w)-大约50∶50(w/w)。
所述方法任选包括将一种缓冲液添加到GLP-1悬浮液，胰岛素溶液，或GLP-1和胰岛素的双相混合物中的额外步骤。所述悬浮液优选是TRIS，甘氨酸，或这两者。
所述方法任选包括将一种防腐剂添加到GLP-1悬浮液，胰岛素溶液，或GLP-1和胰岛素的双相混合物中的额外步骤。
所述方法任选包括将一种等渗剂添加到GLP-1悬浮液，胰岛素溶液，或GLP-1和胰岛素的双相混合物中的额外步骤。
所述方法任选包括将一种防腐剂添加到GLP-1悬浮液，胰岛素溶液，或GLP-1和胰岛素的双相混合物中的额外步骤。
通过以下实施例对本发明进行说明，这些实施例不是要以任何方式限定本发明。
实施例1
促胰岛素活性测定
在Ficoll梯度上分离胰腺组织的胶原酶消化物(Hank′s平衡盐溶液中的27％，23％，20.5％，和11％的Ficoll溶液，pH7.4)。从20.5％/11％的界面处收集胰岛，洗涤，并且在立体显微镜下面用手剔除外分泌和其他组织。在37℃和95％的空气/5％CO2的条件下，在补充了10％胎牛血浆和含有11mM葡萄糖的RPMI1640培养基中温育所述胰岛过夜。将要研究的GLP-1化合物制备成一定的浓度，优选用配制成含有10％胎牛血浆和6.7mM葡萄糖的RPMI培养基中的3-30nM。然后通过移液管将大约8-10个分离的胰岛转移到96孔微量滴定板上的250微升含有GLP-1化合物的培养基中，在37℃，95％空气，5％CO2的条件下，在存在GLP-1化合物的情况下，将所述胰岛温育90分钟。然后采集不含胰岛细胞的培养基的等分样品，并且使用Equate胰岛素RIA试剂盒(Binax，Inc.，Portland，ME)通过放射免疫分析方法分析100微升样品中所存在的胰岛素的量。
实施例2
Val8-GLP-1(7-37)OH的锌结晶化
将Val8-GLP-1(7-37)OH以大约20mg/mL的浓度溶解在大约15mL的注射用无菌水中。用NaOH将pH调节到大约10.8，并且在环境温度下放置大约30分钟。向该肽溶液中添加66.8mg甘氨酸，并且用用NaOH将pH调节到大约9.5。
然后通过0.22微米Millext-GV(Millipore Corporation，Waltham，MA，USA)消毒过滤膜装置对所述溶液进行加压过滤。
向搅拌过的消毒的过滤液中添加3.3mL无菌50％(体积)乙醇溶液，该溶液是用无水酒精和注射用水制备的。
向该搅拌过的溶液中添加0.89mL消毒过滤的缓冲的氧化锌溶液，该溶液是通过将大约1.221mg氧化锌，大约12mL10％盐酸，大约85mL注射用水，和528.7mg甘氨酸而制备的。用大约3-4mL的10％NaOH将所述氧化锌溶液的pH调节到5.68，并且用注射用水将最终体积调节到100mL。
用NaOH将所得到的Val8-GLP-1溶液的pH调节到大约9.1。在温和搅拌大约5分钟之后，严密覆盖所述结晶化溶液，并且在环境温度下静置以便结晶化。此时测定的Val8-GLP-1浓度为大约12.9mg/mL，甘氨酸浓度为大约50mM，乙醇浓度为大约9％，而氧化锌浓度为7mM(0.46mg/mL)。
在大约24小时之后，所述结晶化过程完成。分析通常发现大多为薄的、片状晶体，产率超过98％。
实施例3
制备Val8-GLP-1母悬浮液
向15mL实施例2所述的完全结晶化的悬浮液中搅拌添加15mL消毒过滤溶液，该溶液包括大约30mM TRIS，220mM NaCl，和6mg/mL间甲酚，pH大约为7.5。
按上述方法制备的稳定悬浮液包括大约6.5mg/mL薄的、片状Val8-GLP-1(7-37)OH晶体，大约24.8mM甘氨酸，大约3mg/mL间甲酚，大约110mM氯化钠，大约4.3％体积的乙醇，大约0.23mg/mL锌，大约15mM TRIS，pH大约为7.5。
实施例4
胰岛素的制备
以大约200U/mL的浓度将LysB28-ProB29胰岛素溶解在大约15mL的0.01N HCl中。向该溶液中添加68mg甘氨酸，并且用NaOH将pH调节到7.5。所得到的溶液通过0.22微米的Millex-GV(Millipore Corporation，Waltham，MA，USA)消毒过滤膜装置进行加压过滤。
实施例5
制备LysB28-ProB29胰岛素溶液。
向15mL实施例4中所披露的LysB28-ProB29胰岛素溶液中搅拌添加15mL消毒过滤的溶液，该溶液包括大约30mM TRIS，220mMNaCl，和6mg/mL间甲酚，pH大约为7.5。
按上述方法制备的稳定的药用溶液包括大约100U/mL的LysB28-ProB29胰岛素，大约30mM的甘氨酸，大约3mg/mL间甲酚，大约110mM氯化钠，大约15mM TRIS，pH大约为7.5。
实施例6
Val8-GLP-1悬浮液/LysB28-ProB29胰岛素溶液混合物
以两种不同的比例将实施例3的Val8-GLP-1悬浮液与实施例5的LysB28-ProB29胰岛素溶液混合。
混合物A(85∶15，GLP-1∶胰岛素，重量∶重量)是通过将15mLVal8-GLP-1母悬浮液与5mL LysB28-ProB29胰岛素母液混合制备的。所得到的混合物含有大约4.9mg/mL(1.4mM)Val8-GLP-1，大约25U/mL LysB28-ProB29胰岛素，大约26mM甘氨酸，大约0.17mg/mL锌，大约15mM TRIS，大约110mM氯化钠，大约3.2％体积的乙醇，大约3mg/mL间甲酚，pH大约为7.5。
混合物B(38∶62，GLP-1∶胰岛素，重量∶重量)是通过将5mLVal8-GLP-1母悬浮液与15mL LysB28-ProB29胰岛素母液混合制备的。所得到的混合物含有大约1.6mg/mL(0.48mM)Val8-GLP-1，大约75U/mL LysB28-ProB29胰岛素，大约29mM甘氨酸，大约0.06mg/mL锌，大约15mM TRIS，大约110mM氯化钠，大约1.1％体积的乙醇，大约3mg/mL间甲酚，pH大约为7.5。
实施例7
混合物的稳定性研究
在5℃和30℃下，在第2周和第4周测试实施例6所述混合物的稳定性。使用诸如Coulter LS 230(Coulter Electronics Limited，Luton，Beds，England)的激光散射颗粒分析仪确定体积直径分布。还通过反相HPLC层析分析所述样品，以便确定总蛋白浓度和可溶性蛋白浓度。有关数据归纳如下。
在5℃下的混合物A
通过Coulter测定的大小：
V平均(μm) 10％＜(μm) 50％＜(μm) 90％＜(μm)
 开始     7.61     1.84     7.15     14.1
 2周     7.50     1.89     6.98     13.8
 4周     7.33     1.77     6.84     13.5
Val8-GLP-1 HPLC分析：
    总效力(mg/mL)     立即可利用的(mg/mL)   上清液(mg/mL)
开始     5.14     0.012     0.003
 2周     4.69     0.020     0.014
 4周     5.02     0.020     0.022
LysB28-ProB29胰岛素HPLC分析：
    总效力(mg/mL)     立即可利用的(mg/mL)   上清液(mg/mL)
开始     0.98     0.95     0.85
 2周     0.90     0.96     0.87
 4周     0.92     0.84     0.88
在30℃下的混合物A
通过Coulter测定的大小：
  V平均(μm)   10％＜(μm)   50％＜(μm)  90％＜(μm)
 开始     7.61     1.84     7.15     14.1
 2周     8.02     1.96     7.53     14.7
 4周     7.25     1.72     6.82     13.4
Val8-GLP-1HPLC分析
    总效力(mg/mL)     立即可利用的(mg/mL)   上清液(mg/mL)
开始     5.14     0.012     0.003
 2周     4.95     0.016     0.130
 4周     5.40     0.015     0.034
LysB28-ProB29胰岛素HPLC分析：
    总效力(mg/mL)     立即可利用的(mg/mL)   上清液(mg/mL)
开始     0.98     0.95     0.85
 2周     0.94     0.97     0.90
 4周     0.86     0.86     0.94
在5℃下的混合物B
通过Coulter测定的大小：
  V平均(μm)   10％＜(μm)   50％＜(μm)   90％＜(μm)
开始     7.61     1.84     7.15     14.1
 2周     7.50     1.82     7.07     13.8
 4周     7.72     1.75     6.98     13.6
Val8-GLP-1 HPLC分析：
    总效力(mg/mL)     立即可利用的(mg/mL)   上清液(mg/mL)
开始     1.71     0.014     0.002
 2周     1.82     0.020     0.043
 4周     1.66     0.018     0.019
LysB28-ProB29胰岛素HPLC分析：
    总效力(mg/mL)     立即可利用的(mg/mL)   上清液(mg/mL)
开始     2.59     2.60     2.52
 2周     2.63     2.72     2.60
 4周     2.56     2.46     2.65
在30℃下的混合物B
通过Coulter测定的大小：
  V平均(μm)   10％＜(μm)   50％＜(μm)  90％＜(μm)
开始     7.61     1.84     7.15     14.1
 2周     8.10     1.94     7.70     14.8
 4周     7.29     1.70     6.85     13.4
Val8-GLP-1 HPLC分析：
    总效力(mg/mL)     立即可利用的(mg/mL)   上清液(mg/mL)
开始     1.71     0.014     0.002
 2周     1.98     0.019     0.180
 4周     1.88     0.015     0.017
LysB28-ProB29胰岛素HPLC分析：
   总效力(mg/mL)     立即可利用的(mg/mL)     上清液(mg/mL)
开始     2.59     2.60     2.52
 2周     2.78     2.86     2.74
 4周     2.59     2.75     2.78
实施例8
体内研究
按实施例6所述方法制备Val8-GLP-1悬浮液/LysB28-ProB29胰岛素溶液混合物。
将该混合物注射到单一位点，以便施用0.74U/kg的LysB28-ProB29胰岛素(1.5nmol/kg Val8-GLP-1悬浮液)，启动3小时的高血糖(150mg/dl)钳，并且连续记录葡萄糖输液速度。定期采集血液样品，以便确定血浆葡萄糖、胰岛素、C-肽、和免疫反应性GLP-1浓度。在研究的当天测定血浆葡萄糖浓度，然后冷冻(-80℃)其余的样品，并且在随后的时间分析激素浓度测定值。
                              序列表
<110>伊莱利利公司
<120>GLP-1和胰岛素的双相混合物
<130>x-14815
<150>60/350676
<151>2001-10-19
<160>6
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>31
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(31)..(31)
<223>31号位置上的Xzz是Gly或不存在
<220>
<221>MOD_RES
<222>(30)..(30)
<223>当31号位置上的Xaa不存在时，30号位置上的
     Arg是酰胺化的
<400>1
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Xaa
          20                    25                    30
<210>2
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成构建体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>3号位置上的Xaa是Asp或Glu
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)..(39)
<223>酰胺化
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>2号位置上的Xaa是Ser或Glu
<400>2
His Xaa Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
            20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
        35
<210>3
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>1号位置上的Xaa是脱氨基-组氨酸、2-氨基-组氨酸、
     β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基-组氨酸或α-甲基-组氨酸
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>1号位置上的Xaa是L-组氨酸、D-组氨酸或修饰过的残基
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>3号位置上的Xaa是Glu，Asp，Lys，Thr，Ser，Arg，Trp，Phe，Tyr，
     或His
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>2号位置上的Xaa是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，
     或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>5号位置上的Xaa是Thr，Ala，Gly，Ser，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，
     Arg，His，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(6)..(6)
<223>6号位置上的Xaa是His，Trp，Phe，或Tyr
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>8号位置上的Xaa是Ser，Ala，Gly，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，
     或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(10)..(10)
<223>10号位置上的Xaa是Val，Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Tyr，Glu，
        Asp，Trp，His，Phe，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(11)..(11)
<223>11号位置上的Xaa是Ser，Ala，Gly，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，
       或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(12)..(12)
<223>12号位置上的Xaa是Ser，Ala，Gly，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，
       His，Pro，Arg，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(13)..(13)
<223>13号位置上的Xaa是Tyr，Phe，Trp，Glu，Asp，Gly，Gln，Asn，Arg，
       Cys，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(14)..(14)
<223>14号位置上的Xaa是Leu，Ala，Gly，Ser，Thr，Ile，Val，Glu，Asp
      ，Met，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(15)..(15)
<223>15号位置上的Xaa是Glu，Asp，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(16)..(16)
<223>16号位置上的Xaa是Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp
      ，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(17)..(17)
<223>17号位置上的Xaa是Gln，Asn，Arg，Glu，Asp，His，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(19)..(19)
<223>19号位置上的Xaa是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp
     ，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(20)..(20)
<223>20号位置上的Xaa是Lys，Arg，Gln，Glu，Asp，Trp，Tyr，Phe，或
     His
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(21)..(21)
<223>21号位置上的Xaa是Glu，Asp，Ala，His，Phe，Tyr，Trp，Arg，Leu
     ，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(24)..(24)
<223>24号位置上的Xaa是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp
      ，His，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(25)..(25)
<223>25号位置上的Xaa是Trp，Phe，Tyr，Glu，Asp，Ser，Thr，Arg，或
      Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(26)..(26)
<223>26号位置上的Xaa是Leu，Gly，Ala，Ser，Thr，Ile，Val，Glu，Asp
      ，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(29)..(29)
<223>29号位置上的Xaa是Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp
     ，Arg，Trp，Tyr，Phe，Pro，His，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(30)..(30)
<223>30号位置上的Xaa是Arg，Lys，Glu，Asp，Thr，Ser，Trp，Tyr，Phe
      ，Gly，或His
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(31)..(31)
<223>31号位置上的Xaa是Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp
      ，His，Lys，Arg，Trp，Tyr，Phe，Pro，Pro-NH2，或不存在
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(32)..(32)
<223>32号位置上的Xaa是Arg，Lys，Glu，Asp，Ser，His，或不存在
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(33)..(33)
<223>33号位置上的Xaa是Arg，Lys，Glu，Asp，Ser，His，或不存在
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(34)..(34)
<223>34号位置上的Xaa是Asp，Glu，Gly，Lys，或不存在
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(35)..(35)
<223>35号位置上的Xaa是Phe，Trp，Tyr，Glu，Asp，Ala，Lys，或不存在
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(36)..(36)
<223>36号位置上的Xaa是Ser，Glu，Asp，Pro，Lys，或不存在
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(37)..(37)
<223>37号位置上的Xaa是Ser，Glu，Asp，Pro，Lys，或不存在
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(38)..(38)
<223>38号位置上的Xaa是Gly，Glu，Asp，Pro，Lys，或不存在
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(39)..(39)
<223>39号位置上的Xaa是Ala，Val，Glu，Asp， Ser，Lys，Ala-NH2，Val-
     NH2，Glu-NH2，Asp-NH2，Ser-NH2，Lys-NH2，is absent，不存在或是
     修饰过的残基。
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)..(39)
<223>39号位置的Xaa是酰胺经的，C-1-6-酯，C-1-6-烷基酰胺或
     C-1-6-二烷基酰胺
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(27)..(27)
<223>27号位置上的Xaa是Val，Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Glu，Asp
     ，Arg，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(28)..(28)
<223>28号位置上的Xaa是Lys，Arg，Glu，Asp，Asn，或His
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(18)..(18)
<223>18号位置上的Xaa是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Arg，Glu
      ，Asp，或Lys
<400>3
Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Thr Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1               5                   10                  15
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
            20                  25                  30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
        35
<210>4
<211>31
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成构建体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>2号位置上的Xaa是Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(21)..(21)
<223>21号位置上的Xaa是Ala，Glu，His，Phe，Tyr，Trp，Arg，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(24)..(24)
<223>24号位置上的Xaa是Glu，Asp，Ser，或His
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(16)..(16)
<223>16号位置上的Xaa是Asp，Glu，Gln，Asn，Lys，Arg，Cys，
     或半胱磺酸
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(17)..(17)
<223>17号位置上的Xaa是His，Asp，Lys，Glu，或Gln
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(31)..(31)
<223>31号位置上的Xaa是Lys，Arg，Thr，Ser，Glu，Asp，Trp，lyr，Phe
      ，His，或不存在
<220>
<221>MOD_RES
<222>(30)..(30)
<223>在不存在31号位置上的Xaa时，30号位置上的Arg是酰胺化的
<400>4
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Xaa Ala Ala Lys Xaa Phe Ile Xaa Trp Leu Val Lys Gly Arg Xaa
            20                  25                  30
<210>5
<211>31
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成构建体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>1号位置上的Xaa是L-组氨酸、D-组氨酸或是修饰过的残基
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>1号位置上的Xaa是脱氨基-组氨酸、2-氨基-组氨酸、
     β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基-组氨酸或α-甲基-组氨酸
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>2号位置上的Xaa是Ala，Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(6)..(6)
<223>6号位置上的Xaa是Phe，Trp，或Tyr
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(10)..(10)
<223>10号位置上的Xaa是Val，Trp，Ile，Leu，Phe，或Tyr
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(13)..(13)
<223>13号位置上的Xaa是Tyr，Trp，或Phe
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(14)..(14)
<223>14号位置上的Xaa是Leu，Phe，Tyr，或Trp
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(16)..(16)
<223>16号位置上的Xaa是Gly，Glu，Asp，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(19)..(19)
<223>19号位置上的Xaa是Ala，Val，Ile，或Leu
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(21)..(21)
<223>21号位置上的Xaa是Glu，Ile，或Ala
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(24)..(24)
<223>24号位置上的Xaa是Ala或Glu
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(27)..(27)
<223>27号位置上的Xaa是Val，或Ile
<220>
<221>MOD_RES
<222>(30)..(30)
<223>当31号位置上的Xaa不存在时，30号位置上的Arg是酰胺化的
     或是Arg
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(31)..(31)
<223>31号位置上的Xaa是Gly，His，或不存在
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(12)..(12)
<223>Xaa at position 12 is Ser，Trp，Tyr，Phe，Lys，Ile，Leu，or Val
<400>5
Xaa Xaa Glu Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Xaa Lys Xaa Phe Ile Xaa Trp Leu Xaa Lys Gly Arg Xaa
            20                  25                  30
<210>6
<211>31
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>1号位置上的Xaa是脱氨基-组氨酸、2-氨基-组氨酸、
     β-羟基组氨酸、高组氨酸、α-氟甲基-组氨酸或α-甲基-组氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(30)..(30)
<223>当31号位置上的Xaa不存在时，30号位置上的Arg是酰胺化的
     或是Arg
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>1号位置上的Xaa是L-组氨酸、D-组氨酸或是修饰过的残基
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>2号位置上的Xaa是Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(10)..(10)
<223>10号位置上的Xaa是Val，Phe，Tyr，或Trp
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(12)..(12)
<223>12号位置上的Xaa是Ser，Tyr，Trp，Phe，Lys，Ile，Leu，或Val
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(16)..(16)
<223>16号位置上的Xaa是Gly，Glu，Asp，或Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(19)..(19)
<223>19号位置上的Xaa是Ala，Val，Ile，或Leu
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(27)..(27)
<223>27号位置上的Xaa是Val或Ile
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(31)..(31)
<223>31号位置上的Xaa是Gly或不存在
<400>6
Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Xaa Tyr Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Xaa Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Xaa Lys Gly Arg Xaa
            20                  25                  30

Claims (24)

1.一种包括双相混合物的药物制剂，所述混合物包括固相中的GLP-1化合物和液相中的胰岛素。
2.如权利要求1的药物制剂，其中，所述GLP-1化合物具有选自下组的序列：SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，和SEQ ID NO：6。
3.如权利要求2的药物制剂，其中，所述序列是SEQ ID NO：2。
4.如权利要求2的药物制剂，其中，所述序列是SEQ ID NO：3。
5.如权利要求1-4中任意一项的药物制剂，其中，所述胰岛素是常规人胰岛素或单体胰岛素类似物。
6.如权利要求5的药物制剂，其中，所述常规人胰岛素在B28号位置上的Pro被Asp，Lys，Leu，Val或Ala所取代，而B29号位置上的Lys是Lys或Pro；des(B28-B30)-人胰岛素；或des(B27)-人胰岛素。
7.如权利要求5的药物制剂，其中，所述单体胰岛素类似物选自：AspB28，AspB28-ProB29，LysB28，LysB28-ProB29，和LysB3-GluB29。
8.如权利要求7的药物制剂，其中，所述单体胰岛素类似物是AspB28。
9.如权利要求7的药物制剂，其中，所述单体胰岛素类似物是LysB28-ProB29。
10.如权利要求7的药物制剂，其中，所述单体胰岛素类似物是LysB3-GluB29。
11.如权利要求1的药物制剂，其中，所述GLP-1化合物具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3的序列，而所述胰岛素是常规人胰岛素。
12.如权利要求1的药物制剂，其中，所述GLP-1化合物具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3的序列，而所述胰岛素是AspB28，AspB28-ProB29，或LysB3-GluB29。
13.如权利要求1-12中任意一项的药物制剂，还包括一种等渗剂。
14.如权利要求1-13中任意一项的药物制剂，还包括一种防腐剂。
15.一种制备适用于权利要求1-14中任意一项的药物制剂中的双相混合物的方法，其中，所述方法包括将固相中的GLP-1化合物与液相中的胰岛素混合，以便GLP-1保持在固相中，并且保持持续的药代动力学曲线，而胰岛素保持在液相中，并且保持短时间作用特征。
16.一种施用权利要求1-14中任意一项的药物制剂的方法，其中，该方法包括给有需要的患者施用有效量的所述混合物的步骤。
17.一种治疗选自非胰岛素依赖型糖尿病，胰岛素依赖型糖尿病，高血糖，肥胖，手术之后的分解代谢改变，心肌梗塞，应激诱导的高血糖和中风的医学状况的方法，包括给有需要的患者施用有效量的权利要求1-14中任意一项的药物制剂。
18.如权利要求17的方法，其中，所述状况是非胰岛素依赖型糖尿病。
19.如权利要求17的方法，其中，所述状况是胰岛素依赖型糖尿病。
20.如权利要求17的方法，其中，所述状况是肥胖。
21.权利要求1-14中任意一项的药物制剂的用途，其中，所述用途是用于制备用于治疗选自下组的医学状况的药物：人类对象的非胰岛素依赖型糖尿病，胰岛素依赖型糖尿病，高血糖，肥胖，治疗性体重减轻，哺乳动物手术之后的分解代谢改变，心肌梗塞，应激诱导的高血糖和中风。
22.如权利要求21的用途，其中，所述药物的制备是用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病。
23.如权利要求21的用途，其中，所述药物的制备是用于治疗胰岛素依赖型糖尿病。
24.如权利要求21的用途，其中，所述药物的制备是用于治疗肥胖。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106559984A (zh) * 2014-05-29 2017-04-05 韩美药品株式会社 用于治疗糖尿病的包含长效胰岛素类似物缀合物和长效促胰岛素肽缀合物的组合物
US10647753B2 (en) 2015-08-28 2020-05-12 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analogs and use thereof
US11396534B2 (en) 2016-09-23 2022-07-26 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analogs with reduced affinity to insulin receptor and use thereof
US11752216B2 (en) 2017-03-23 2023-09-12 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof

Families Citing this family (102)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK1808438T3 (da) 1999-06-29 2014-10-27 Mannkind Corp Rensning og stabilisering af peptid og proteiner i lægemidler
US9006175B2 (en) 1999-06-29 2015-04-14 Mannkind Corporation Potentiation of glucose elimination
DE60224284T2 (de) 2001-06-28 2008-12-18 Novo Nordisk A/S Stabile formulierung von modifiziertem glp-1
US8765167B2 (en) 2001-10-12 2014-07-01 Monosol Rx, Llc Uniform films for rapid-dissolve dosage form incorporating anti-tacking compositions
US7357891B2 (en) 2001-10-12 2008-04-15 Monosol Rx, Llc Process for making an ingestible film
US8900498B2 (en) 2001-10-12 2014-12-02 Monosol Rx, Llc Process for manufacturing a resulting multi-layer pharmaceutical film
US10285910B2 (en) 2001-10-12 2019-05-14 Aquestive Therapeutics, Inc. Sublingual and buccal film compositions
US8900497B2 (en) 2001-10-12 2014-12-02 Monosol Rx, Llc Process for making a film having a substantially uniform distribution of components
US8603514B2 (en) 2002-04-11 2013-12-10 Monosol Rx, Llc Uniform films for rapid dissolve dosage form incorporating taste-masking compositions
US20190328679A1 (en) 2001-10-12 2019-10-31 Aquestive Therapeutics, Inc. Uniform films for rapid-dissolve dosage form incorporating anti-tacking compositions
US11207805B2 (en) 2001-10-12 2021-12-28 Aquestive Therapeutics, Inc. Process for manufacturing a resulting pharmaceutical film
US20070281003A1 (en) 2001-10-12 2007-12-06 Fuisz Richard C Polymer-Based Films and Drug Delivery Systems Made Therefrom
US20110033542A1 (en) 2009-08-07 2011-02-10 Monosol Rx, Llc Sublingual and buccal film compositions
BR0306706A (pt) * 2002-01-08 2007-03-27 Lilly Co Eli peptìdeo glp-1 estendido, métodos de estimulação do receptor de glp-1 em um indivìduo necessitando de normalização de glicose sanguìnea, de tratamento de um indivìduo profilaticamente para diabetes independente de insulina, de redução ou de manutenção do peso corporal, de tratamento da obesidade, e de tratamento de doenças, em um indivìduo necessitando do mesmo, uso de um composto de glp-1, processo de preparação de uma formulação farmacêutica, e, formulação farmacêutica
ES2425392T3 (es) 2002-03-20 2013-10-15 Mannkind Corporation Cartucho para un aparato de inhalación
US20080260838A1 (en) * 2003-08-01 2008-10-23 Mannkind Corporation Glucagon-like peptide 1 (glp-1) pharmaceutical formulations
AU2003303646B2 (en) 2002-12-31 2010-03-04 Altus Pharmaceuticals Inc. Human growth hormone crystals and methods for preparing them
JP2006523609A (ja) * 2002-12-31 2006-10-19 アルタス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド タンパク質結晶およびイオン性ポリマーの複合体
BRPI0410972C1 (pt) 2003-06-03 2021-05-25 Novo Nordisk As método para aumentar a vida de armazenagem de uma composição farmacêutica, composição farmacêutica, e, método para tratamento de hiperglicemia
WO2004105790A1 (en) 2003-06-03 2004-12-09 Novo Nordisk A/S Stabilized pharmaceutical peptide compositions
RU2421238C2 (ru) 2003-11-20 2011-06-20 Ново Нордиск А/С Пептидная композиция, содержащая пропиленгликоль, являющаяся оптимальной для изготовления и применения в инъекционных устройствах
TWI353250B (en) 2003-12-16 2011-12-01 Ipsen Pharma Sas Glp-1 pharmaceutical compositions
US20060252693A1 (en) * 2004-01-29 2006-11-09 Wolfgang Glaesner Glucagon-like peptide-1 analogs
CN101010305B (zh) 2004-08-20 2010-08-11 曼金德公司 二酮哌嗪合成的催化反应
KR101644250B1 (ko) 2004-08-23 2016-07-29 맨카인드 코포레이션 약물 전달용 디케토피페라진염, 디케토모르포린염 또는 디케토디옥산염
EP1789434B1 (en) 2004-08-31 2013-11-20 Novo Nordisk A/S Use of tris(hydroxymethyl) aminomethane for the stabilization of peptides, polypeptides and proteins
PL1817048T3 (pl) 2004-11-12 2014-07-31 Novo Nordisk As Stabilne preparaty peptydów insulinotropowych
EP1814581B1 (en) * 2004-11-12 2016-03-16 Novo Nordisk A/S Stable formulations of peptides comprising an acylated glp-1 analogue and a basal insuline
AU2005310367A1 (en) * 2004-12-03 2006-06-08 Mederio Ag A medical product comprising a glucagon-like peptide medicament intended for pulmonary inhalation
EP1904525A4 (en) 2005-06-30 2009-10-21 Ipsen Pharma GLP-1 PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS
AU2006290227B2 (en) 2005-09-14 2012-08-02 Mannkind Corporation Method of drug formulation based on increasing the affinity of crystalline microparticle surfaces for active agents
JPWO2007049695A1 (ja) * 2005-10-26 2009-04-30 中外製薬株式会社 凝集性ｇｌｐ−１アナログおよび徐放性医薬組成物
ES2507098T3 (es) 2005-11-07 2014-10-14 Indiana University Research And Technology Corporation Análogos de glucagón que muestran solubilidad y estabilidad fisiológicas
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
DK1986679T3 (da) 2006-02-22 2017-11-20 Mannkind Corp Fremgangsmåde til forbedring af mikropartiklers farmaceutiske egenskaber omfattende diketopiperazin og et aktivt indholdsstof
WO2007113205A1 (en) * 2006-04-03 2007-10-11 Novo Nordisk A/S Glp-1 peptide agonists
US8669228B2 (en) 2007-01-05 2014-03-11 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting enhanced solubility in physiological pH buffers
GEP20135944B (en) 2007-02-15 2013-10-25 Indiana Unversity Research And Tech Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
CN101969927A (zh) * 2007-10-24 2011-02-09 曼金德公司 预防glp-1不良影响的方法
US8785396B2 (en) 2007-10-24 2014-07-22 Mannkind Corporation Method and composition for treating migraines
EP2214647A2 (en) * 2007-10-24 2010-08-11 MannKind Corporation Delivery of active agents
CA2707861A1 (en) 2007-10-30 2009-05-07 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon antagonists
US8980830B2 (en) 2007-10-30 2015-03-17 Indiana University Research And Technology Corporation Peptide compounds exhibiting glucagon antagonist and GLP-1 agonist activity
DK2597103T3 (en) * 2007-11-16 2017-02-13 Novo Nordisk As Stable pharmaceutical compositions comprising liraglutide and degludec
US8485180B2 (en) 2008-06-13 2013-07-16 Mannkind Corporation Dry powder drug delivery system
CA2728230C (en) 2008-06-13 2017-10-17 Mannkind Corporation A dry powder inhaler and system for drug delivery
CA2727161A1 (en) 2008-06-17 2009-12-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting enhanced solubility and stability physiological ph buffers
PE20100255A1 (es) 2008-06-17 2010-04-25 Univ Indiana Res & Tech Corp Co-agonistas del receptor de glucagon/glp-1
BRPI0915282A2 (pt) 2008-06-17 2017-02-07 Univ Indiana Res & Tech Corp agonistas mistos baseados no gip para o tratamento de distúrbios metabólicos e obesidade
AU2009259883B2 (en) 2008-06-20 2015-02-05 Mannkind Corporation An interactive apparatus and method for real-time profiling of inhalation efforts
EP3412300A1 (en) 2008-06-27 2018-12-12 Duke University Therapeutic agents comprising elastin-like peptides
TWI494123B (zh) 2008-08-11 2015-08-01 Mannkind Corp 超快起作用胰島素之用途
LT3228320T (lt) * 2008-10-17 2020-03-10 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Insulino ir glp-1 agonisto derinys
EP2376097A4 (en) 2008-12-19 2012-10-03 Univ Indiana Res & Tech Corp AMID-BASED PEPTIDE PRODRUGS OF THE GLUCAGON SUPERFAMILY
US8314106B2 (en) 2008-12-29 2012-11-20 Mannkind Corporation Substituted diketopiperazine analogs for use as drug delivery agents
US8538707B2 (en) 2009-03-11 2013-09-17 Mannkind Corporation Apparatus, system and method for measuring resistance of an inhaler
MX2011009167A (es) 2009-03-12 2011-09-15 Genentech Inc Combinaciones de compuestos inhibidores de fosfoinositida 3-cinasa y agentes quimioterapeuticos para el tratamiento contra neoplasia hemotopoyeticas malignas.
SG176738A1 (en) 2009-06-12 2012-01-30 Mannkind Corp Diketopiperazine microparticles with defined specific surface areas
EP2443146B1 (en) 2009-06-16 2016-10-05 Indiana University Research And Technology Corporation Gip receptor-active glucagon compounds
EP2496295A1 (en) 2009-11-03 2012-09-12 MannKind Corporation An apparatus and method for simulating inhalation efforts
WO2011075393A2 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
EP2528618A4 (en) 2010-01-27 2015-05-27 Univ Indiana Res & Tech Corp GLUCAGON ANTAGONISTE AND GIP AGONISTS CONJUGATES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF METABOLISM DISEASES AND ADIPOSITAS
CN103179976A (zh) 2010-05-13 2013-06-26 印第安纳大学研究及科技有限公司 呈现g蛋白偶联受体活性的胰高血糖素超家族肽
EP2569000B1 (en) 2010-05-13 2017-09-27 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon superfamily peptides exhibiting nuclear hormone receptor activity
US8790704B2 (en) 2010-06-10 2014-07-29 Monosol Rx, Llc Combination peptide-nanoparticles and delivery systems incorporating same
EP2582421A1 (en) 2010-06-21 2013-04-24 MannKind Corporation Dry powder drug delivery system and methods
RU2580317C2 (ru) 2010-06-24 2016-04-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Пептидные пролекарства, принадлежащие к суперсемейству амид-содержащих глюкагонов
US9149959B2 (en) 2010-10-22 2015-10-06 Monosol Rx, Llc Manufacturing of small film strips
NZ612297A (en) 2010-12-22 2015-10-30 Univ Indiana Res & Tech Corp Glucagon analogs exhibiting gip receptor activity
ES2625858T3 (es) 2011-04-01 2017-07-20 Mannkind Corporation Paquete de tipo blíster para cartuchos farmacéuticos
UA113626C2 (xx) * 2011-06-02 2017-02-27 Композиція для лікування діабету, що містить кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат інсулінотропного пептиду тривалої дії
CN103732215B (zh) * 2011-06-10 2017-07-11 莫诺索Rx有限责任公司 组合肽纳米颗粒及掺入其的递送系统
WO2012174472A1 (en) 2011-06-17 2012-12-20 Mannkind Corporation High capacity diketopiperazine microparticles
KR20140043793A (ko) 2011-06-22 2014-04-10 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 글루카곤/glp-1 수용체 공동-작용물질
US20140221283A1 (en) 2011-06-22 2014-08-07 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
CA2852536A1 (en) 2011-10-24 2013-05-02 Mannkind Corporation Methods and compositions for treating pain
ES2672880T3 (es) 2011-11-17 2018-06-18 Indiana University Research And Technology Corporation Péptidos de la superfamilia de glucagón que muestran actividad de receptor de glucocorticoides
CN104583232B (zh) 2012-06-21 2018-04-13 印第安纳大学研究及科技有限公司 展现gip受体活性的胰高血糖素类似物
WO2014012069A2 (en) 2012-07-12 2014-01-16 Mannkind Corporation Dry powder drug delivery systems and methods
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
EP2911690A1 (en) 2012-10-26 2015-09-02 MannKind Corporation Inhalable influenza vaccine compositions and methods
BR112015014800A2 (pt) 2012-12-21 2017-10-10 Sanofi Sa derivados da exendina-4 funcionalizada
JP2016505601A (ja) * 2012-12-26 2016-02-25 ウォックハート リミテッド 医薬組成物
EP3587404B1 (en) 2013-03-15 2022-07-13 MannKind Corporation Microcrystalline diketopiperazine compositions, methods for preparation and use thereof
BR112016000937A8 (pt) 2013-07-18 2021-06-22 Mannkind Corp formulações farmacêuticas de pó seco, método para a fabricação de uma formulação de pó seco e uso de uma formulação farmacêutica de pó seco
EP3030294B1 (en) 2013-08-05 2020-10-07 MannKind Corporation Insufflation apparatus
TW201609795A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 作為雙重ｇｌｐ－１／ｇｉｐ受體促效劑的艾塞那肽－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）胜肽類似物
WO2015086730A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
WO2015086729A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
TW201609797A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
US10307464B2 (en) 2014-03-28 2019-06-04 Mannkind Corporation Use of ultrarapid acting insulin
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
US10561806B2 (en) 2014-10-02 2020-02-18 Mannkind Corporation Mouthpiece cover for an inhaler
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
AR105284A1 (es) 2015-07-10 2017-09-20 Sanofi Sa Derivados de exendina-4 como agonistas peptídicos duales específicos de los receptores de glp-1 / glucagón
JP2019519487A (ja) 2016-05-05 2019-07-11 アクエスティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 送達増強エピネフリン組成物
US11273131B2 (en) 2016-05-05 2022-03-15 Aquestive Therapeutics, Inc. Pharmaceutical compositions with enhanced permeation
TWI783890B (zh) 2017-08-24 2022-11-11 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 Glp-1組成物及其用途
AU2021208601A1 (en) 2020-02-18 2022-07-28 Novo Nordisk A/S Glp-1 compositions and uses thereof

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5118666A (en) * 1986-05-05 1992-06-02 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone
US5120712A (en) * 1986-05-05 1992-06-09 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone
DE3837825A1 (de) * 1988-11-08 1990-05-10 Hoechst Ag Neue insulinderivate, ihre verwendung und eine sie enthaltende pharmazeutische zubereitung
US5514646A (en) * 1989-02-09 1996-05-07 Chance; Ronald E. Insulin analogs modified at position 29 of the B chain
US5545618A (en) * 1990-01-24 1996-08-13 Buckley; Douglas I. GLP-1 analogs useful for diabetes treatment
DK36392D0 (da) * 1992-03-19 1992-03-19 Novo Nordisk As Anvendelse af kemisk forbindelse
DK72793D0 (da) * 1993-06-21 1993-06-21 Novo Nordisk As Nyt produkt
ES2163451T3 (es) 1993-09-17 2002-02-01 Novo Nordisk As Insulina acilada.
US6011007A (en) * 1993-09-17 2000-01-04 Novo Nordisk A/S Acylated insulin
US5705483A (en) * 1993-12-09 1998-01-06 Eli Lilly And Company Glucagon-like insulinotropic peptides, compositions and methods
GB9409496D0 (en) 1994-05-12 1994-06-29 London Health Ass Method for improving glycaemic control in diabetes
US5461031A (en) * 1994-06-16 1995-10-24 Eli Lilly And Company Monomeric insulin analog formulations
US5547929A (en) * 1994-09-12 1996-08-20 Eli Lilly And Company Insulin analog formulations
US5512549A (en) * 1994-10-18 1996-04-30 Eli Lilly And Company Glucagon-like insulinotropic peptide analogs, compositions, and methods of use
US5948751A (en) * 1996-06-20 1999-09-07 Novo Nordisk A/S X14-mannitol
ATE264871T1 (de) * 1996-07-26 2004-05-15 Aventis Pharma Gmbh Insulinderivate mit erhöhter zinkbindung
US6268343B1 (en) * 1996-08-30 2001-07-31 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
US7235627B2 (en) * 1996-08-30 2007-06-26 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
UA65549C2 (uk) * 1996-11-05 2004-04-15 Елі Ліллі Енд Компані Спосіб регулювання ожиріння шляхом периферійного введення аналогів та похідних glp-1 (варіанти) та фармацевтична композиція
DE19726167B4 (de) * 1997-06-20 2008-01-24 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Insulin, Verfahren zu seiner Herstellung und es enthaltende pharmazeutische Zubereitung
JP2001513512A (ja) 1997-08-08 2001-09-04 アミリン・ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 新規なエキセンディン作動剤化合物
DK1032587T4 (da) 1997-11-14 2013-04-08 Amylin Pharmaceuticals Llc Hidtil ukendte exendinagonist-forbindelser
BR9815670A (pt) 1997-11-14 2000-10-17 Amylin Pharmaceuticals Inc Compostos agonistas de exendina
CO4970787A1 (es) 1997-12-23 2000-11-07 Lilly Co Eli Composiciones insolubles de insulina y derivados de insulina que controlan la glucosa sanguinea
WO1999043708A1 (en) * 1998-02-27 1999-09-02 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives of glp-1 and exendin with protracted profile of action
DE69942307D1 (de) * 1998-02-27 2010-06-10 Novo Nordisk As N-terminal veränderte glp-1 abkömmlinge
WO1999043706A1 (en) * 1998-02-27 1999-09-02 Novo Nordisk A/S Derivatives of glp-1 analogs
EP1056774A1 (en) * 1998-02-27 2000-12-06 Novo Nordisk A/S N-terminally truncated glp-1 derivatives
CA2358107C (en) 1998-12-22 2011-08-23 Eli Lilly And Company Shelf-stable formulation of glucagon-like peptide-1
CA2372214A1 (en) 1999-04-30 2000-11-09 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Modified exendins and exendin agonists
CA2369839A1 (en) 1999-06-25 2001-01-04 Minimed, Inc. Compositions of insulin and insulin-related peptide for treating diabetes
US6277877B1 (en) * 2000-08-15 2001-08-21 Pfizer, Inc. Substituted n-(indole-2-carbonyl)glycinamides and derivates as glycogen phosphorylase inhibitors
IL161848A0 (en) 2001-12-20 2005-11-20 Lilly Co Eli Insulin moldecule having protracted time action

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106559984A (zh) * 2014-05-29 2017-04-05 韩美药品株式会社 用于治疗糖尿病的包含长效胰岛素类似物缀合物和长效促胰岛素肽缀合物的组合物
US10647753B2 (en) 2015-08-28 2020-05-12 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analogs and use thereof
US11396534B2 (en) 2016-09-23 2022-07-26 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analogs with reduced affinity to insulin receptor and use thereof
US11752216B2 (en) 2017-03-23 2023-09-12 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
CA2463803A1 (en) 2003-05-01
US7179788B2 (en) 2007-02-20
MXPA04003569A (es) 2004-07-23
EP1448222A4 (en) 2006-05-17
JP2005508360A (ja) 2005-03-31
US20040254107A1 (en) 2004-12-16
WO2003035099A1 (en) 2003-05-01
EP1448222A1 (en) 2004-08-25

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