CN1492765A

CN1492765A - 用于预防和治疗痴呆的草药组合物

Info

Publication number: CN1492765A
Application number: CNA01822900XA
Authority: CN
Inventors: 郑章铉; 郑圭镕; 琴坰树
Original assignee: NEUROMEDIX CO Ltd
Current assignee: NEUROMEDIX CO Ltd
Priority date: 2001-02-08
Filing date: 2001-11-29
Publication date: 2004-04-28
Also published as: KR100360674B1; KR20020066173A; US20020146467A1; WO2002062366A1; JP2004520392A; EP1357923A1

Abstract

本发明涉及用于预防和治疗痴呆的草药组合物，它包括代替常规草药组合物中人参的何首乌(何首乌)、远志(小扁豆)、丁香(丁香)和姜(姜)以便以最低的用量达到最大的抗痴呆作用。

Description

用于预防和治疗痴呆的草药组合物

发明背景

发明领域

本发明涉及用于预防和治疗痴呆的草药组合物，该组合物包括代替常规草药组合物中的主要成分人参的何首乌(polygoni multifloriRadix)(何首乌(polygonum multiflorum Thunberg))作为主要成分和其它最佳含量的成分，该组合物对痴呆、尤其是老年性痴呆提供了最大活性，与常规产品相比不仅副作用最低而且药理和临床特性得到改善。

相关领域的描述

近来大量痴呆问题和老年性痴呆迅速增加。迄今为止，除对痴呆表现出极其有限作用的几种治疗药物外，已知尚不能预防或治愈痴呆，不过，在东方或西方国家已经进行了深入的研究以开发用于预防或治疗痴呆的药物或食品。仍然在进行的深入研究已经集中在老年性痴呆和阿尔茨海默病(AD)上，在生化、遗传和医学方面它们称作“进行性认知和智力能力丧失。更具体地说，痴呆的主要症状包括认知功能低下和语言、判断和知觉血管痉挛性能力方面的精神障碍以及获得新知识中的严重困难。个性改变和激动不安迅速显现且最终导致死亡。

对大脑内在活性产生不良影响的痴呆是与由各种因素诱发的大脑基本疾患相关的特定症状。例如，在大多数情况下，大脑因实质的损失而在体积上显著萎缩且脑室膨胀，大量大脑皮层细胞、小脑中的Purkinje细胞或脊髓上的真核细胞消失。对这些症状的原因尚不了解，但已经注意到它们明显与神经递质乙酰胆碱(ACh)的水平相关。

商购的抗痴呆药物包括Cognex和Done Pezyl，已知它们可抑制主要对大脑神经系统起作用的乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性，由此增加大脑乙酰胆碱的含量，进而改善和治疗包括痴呆在内的胆碱能功能异常。

然而，大部分常规的抗痴呆药可以在外周神经系统中产生严重的胆碱能作用且具有极短的半衰期，并且可以产生严重的副作用诸如肝毒性(《英国精神病学杂志》(Br.J.Psychiatry)，138，46，1981)。此外，已经广泛用于治疗痴呆的Cognex(9-氨基-1，2，3，4-四氢吖啶，THA)在口服给药过程中可显著有效地强化AD患者的认知能力(《新英格兰药物杂志》(N，Engl.J.Med.，315，1241，1986)，但是仍然出现许多不良反应，诸如震颤、头晕和细胞毒性。因此，升高ACh水平可能是另一种通过改善胆碱能途径代谢并抑制AchE活性来预防或治疗痴呆的药理学观念。

另一方面，对应于美国专利US6,010,702的同族韩国专利公开号1999-85202中公开了含有人参作为主要成分的可以抑制AChE活性且严重副作用程度较低的草药提取物。

这些草药提取物对痴呆表现出一定程度的作用，但它们在有效性方面不十分可靠。并且尽管这些草药提取物对老年性痴呆表现出一定程度的作用，仅预期这些草药提取物的作用机理不同于其它痴呆药物的作用机理。特别是常规草药提取物中的主要成分人参的应用产生了一些不良反应，诸如对患心血管疾病的患者而言发生心悸和功能性内环境稳定失衡。普遍认为人参可恢复内在能量，但因文献中报导的下列原因而又阻止将人参用作抗痴呆药物。

人参可以因其副作用而导致患有精神活动过度、神经衰弱、高血压或动脉粥样硬化的患者症状恶化。此外，在汉方药物理论(oriental medicine theory)中众所周知不应将人参用于患有肺结核、哮喘和咳嗽的患者(Bonchogujin，《树木与土壤》(Tree andSoil)1999；《补充和可选药物的专业手册》(ProfessionalHandbood of Complementary and Alternative medicine)；Charles W.Fetrow，and Juan R.Avila.1999，P282-291)且近来有临床报告怀疑其用途。

此外，给予的这类草药提取物组合物相对过量，导致产生了预料不到的副作用和毒性。

发明概述

尽管所述的草药提取物与其它药物相比表现出较少的副作用，但是没有足够的有关确切治疗功效和其它副作用的临床研究。因此，仍然强烈需要开发更有效的草药提取物，目的是给一般公众提供草药提取物作为预防和治疗痴呆的保健食品，更重要的是将剂量和副作用均减小到最低限度。

在这种情况下，本发明者开发了在美国注册的(美国专利号US6,010,072)用于治疗痴呆的第一种草药提取物组合物，并且基于含有某些草药的药物可以减少任何不良反应并对AChE具有抑制作用的判断，为开发对AChE具有抑制作用而几乎没有上述不良反应的新草药进行了进一步深入的研究。作为再现功效筛选和毒性试验的结果，在组合物中将某些补药加入到对AChE具有抑制作用的常规草药提取物中，已经证实本发明的草药组合物在预防和治疗痴呆方面具有优良的作用，该作用通过改善血液循环紊乱和促进葡萄糖在神经元中的代谢来实现。结果，本发明者完成了本发明。

因此，本发明的一个目的是提供用于预防和治疗痴呆的与常规草药组合物相比具有改善的药理和临床特性的优良草药组合物，该目的通过用何首乌(polygoni multiflori Radix)(何首乌(polygonummultiflorum Thunberg))取代人参作为常规组合物中的主要成分来实现。

附图简述

当结合附图考虑时，本发明的上述目的和特征根据下列对本发明的描述将变为显而易见，其中：

附图1表示假拟组和OVX大鼠的体重改变，其中结果表示为来自10只大鼠的平均值±S.E.(相对于治疗的OVX大鼠*p＜0.05)；

附图2表示假拟组和OVX大鼠中NeuroClean对相对大脑重量的作用，其中结果表示为来自10只大鼠的平均值±S.E.(*p＜0.05)；

附图3表示NeuroClean对大脑血流和平均动脉血压的作用，其中结果表示为来自7只大鼠的平均值±S.E.(*p＜0.05，**p＜0.001)；

附图4表示OVX大鼠通过NeuroClean大脑ATP含量的增加，其中结果表示为10只大鼠的平均值±S.E.(*p＜0.05，**p＜0.001)；

附图5表示OVX大鼠通过NeuroClean大脑胆碱含量的增加，其中结果表示为10只大鼠的平均值±S.E.(*p＜0.05，**p＜0.001)；

附图6表示OVX大鼠通过NeuroClean大脑胆碱乙酰转移酶活性的增加，其中结果表示为10只大鼠的平均值±S.E.(*p＜0.05，**p＜0.001)；

附图7表示OVX大鼠通过NeuroClean大脑乙酰胆碱含量的增加，其中结果表示为10只大鼠的平均值±S.E.(*p＜0.05，**p＜0.001)；且

附图8表示OVX大鼠通过NeuroClean增加脑神经元ATP和ACh含量的假设的药理学机理。

发明详述

本发明提供了草药提取物组合物，它包括10-50重量份的何首乌(何首乌)和选自下列成分中的至少三种成分：5-20重量份的茯苓(茯苓)、2-20重量份的Aurantii nobilis Pericarpium(温州蜜柑)、1-5重量份的甘草(甘草)、1-10重量份的半夏(半夏)和1-10重量份的姜(姜)。

本发明的草药组合物可以进一步包括至少一种选自下列成分的成分：1-10重量份的远志(小扁豆)、1-10重量份的丁香(丁香)、1-15重量份的天南星(日本南星)、1-15重量份的天麻(天麻)、1-10重量份的石菖蒲、1-15重量份的OstericumKoreanum或姜黄(姜黄)、1-8重量份的Caulis Phyllostachyos或Folium Phyllostachyos(桂竹)、1-8重量份的BombycisBatryticatus(Bombyx mori L.)、1-8重量份的Fructusimmaturus ponciri(枸桔)、2-20重量份的香附子(香附子)和1-10重量份的广木香(Saussurea lappa Clarke)。

用常规方法提取本发明的优选草药组合物，其中所述的提取物包括10-50重量份的何首乌、1-15重量份的天麻、1-10重量份的石草蒲、1-15重量份的Ostericum Koreanum或姜黄、1-8重量份的Caulis Phyllostachyos或Folium Phyllostachyos、1-8重量份的Bombycis Batryticatus、1-8重量份的Fructus immaturusponciri、5-20重量份的茯苓、2-20重量份的Aurantii nobilisPericarpium、1-5重量份的甘草和1-10重量份的姜以及可选的1-10重量份的Pinelliae Tuber。

也用常规方法提取本发明的另一种优选的草药组合物，其中所述的提取物包括10-50重量份的何首乌、1-10重量份的远志、1-10重量份的丁香、1-10重量份的姜、1-10重量份的天南星、1-10重量份的天麻、1-8重量份的石菖蒲、1-10重量份的姜黄、1-8重量份的Folium Phyllostachyos、1-8重量份的BombycisCorpus、1-8重量份的Fructus ponciri seu aurantii immaturusponciri、5-20重量份的茯苓、1-10重量份的半夏、1-10重量份的Aurantii nobilis Pericarpium和1-5重量份的甘草。

可以将这些提取物用作草药药物或补益用饮料，因为它们已经表现出预防和治疗痴呆的极佳作用。如果认为必要，可以将该草药组合物配制成丸剂、提取液制剂、颗粒剂、输液剂、煎剂、片剂、胶囊剂或溶于蒸馏水的非肠道用制剂，不过最优选丸剂。

不能确定草药中各成分以其自身性质抗AChE的机理，但是作为对具有不同组成的某些草药的可重复的相差无几的研究结果，已经证实具有上述草药成分和组成比例的草药具有最佳的治疗功效。

按照汉方药物理论，尽管草药药物组成相似，但是各种组合物的预期的功效和毒性十分不同。因此，本发明的草药组合物是为了提高预防和治疗痴呆的治疗功效并将毒性降低至最低限度，由此提供最大的作用。

认为常规的草药组合物的某些缺点在于当给予临床剂量时，过量药物成分的应用已经导致了不良反应和毒性。由于活性成分之一人参的应用与某些不良反应有关，诸如心悸、患诸如高血压这样的心血管疾病的患者体内的血液循环障碍、肺结核、哮喘和咳嗽，所以可能容易发生总体内环境失衡。因此，优选不向本发明的组合物中加入人参。在这一点上，即使最优选要维持该组合物的药理功效和临床功效而又要保持几乎没有副作用，筛选用于预防和治疗痴呆的新的活性成分是十分困难的。因此，有效活性成分在该组合物中的应用代表了完全不同成分的组合。

本发明的特征在于用何首乌代替了常规领域中使用的人参，由此提高了预防和治疗痴呆的药理功效和临床功效而减少了副作用。

本发明中的主要成分何首乌含有大黄酚(cresophanol)、大黄酸(rein)、大黄素、physhion及其苷类作为活性组分；据报导这些组分对人体内能和血液的作用可有效提高肝功能、额外的力量和血液营养。不同于人参，据报导何首乌具有抗衰老特性，诸如较好的肾功能、恢复毛发功能和较好的身体情况，正如几篇文献中所示的(《民族心理学杂志》(Journal of Ethnopharmacology，75(2001)，141-164)。特别地，主要证实何首乌可治疗老年性神经疾病和血液循环障碍，诸如心痛、瘫痪和癫痫。认为何首乌与其它草药成分的充分组合可以有效预防和治疗痴呆。

本发明的特征在于基于几篇文献和临床理论通过用何首乌替代人参作为主要成分而使抗痴呆作用最大化并完全除去与使用人参相关的不良反应。何首乌自身具有极佳的助肝脏和促进血液循环作用以及与其它草药成分的协同作用。然而，过量使用何首乌可能对心脏系统和消化系统产生不良影响；就少量使用而言，抗痴呆作用是预料之外的。

可以与何首乌共同使用的优选成分有天麻、石菖蒲、姜黄、Folium Phyllostachyos、Bombycis Batryticatus、Fructusimmaturus ponciri、茯苓、Aurantii nobilis Pericarpium、甘草、姜和可选的半夏。

此外，包括何首乌作为主要成分、Aurantii nobilisPericarpium、甘草和半夏以及可选的姜的组合物提供来自本发明预期的作用。本发明组合物与常规草药组合物相比表现出对痴呆的改善的功效而没有任何不良作用的原因是将何首乌用作主要成分。

此外，当本发明的组合物包括何首乌作为主要成分时，远志、丁香、天南星、半夏和姜与常规组合物中相比也表现出对痴呆的优良作用和降低的毒性，这是由于草药中的药理协同作用所导致的。因此，当将何首乌用作本发明草药组合物中的主要成分时，注意到上述成分对痴呆提供了改善的功效而几乎没有不良反应。

按照本发明，本发明的组合物可以包括汉方药物领域中称作引药(leading drug)的丁香和何首乌。结果证实进一步改善了大脑的功能。在药理学方面，丁香的应用引导组合物中包含的其它活性组分，从而导致大脑的功能在药理和临床作用方面得到较好的促进。然而，如果丁香的用量过小，那么它可以降低抗痴呆作用，而就使用过量的丁香而言，可以发生呕吐和腹痛。

同时，证实石菖蒲可治疗大脑疾患，诸如痴呆和健忘症。由于石菖蒲自身在常规组合物中的应用不可能表现出足够的抗痴呆作用，所以本发明者等已经使用了另一种可以与石菖蒲混合的草药成分。结果，基于中药的汉方理论，本发明者等已经发现同时使用石菖蒲与远志表现出药理协同作用。通过添加少量的远志与石菖蒲，本发明的组合物成功地表现出较好的药理作用。然而，过量使用远志与石菖蒲可能与血液循环障碍和消化不良相关，而就使用少量远志与石菖蒲而言，抗痴呆作用可能在没有任何与石菖蒲的协同作用的情况下而降低。

此外，姜在本发明组合物中的应用可以缓和与诸如半夏等这类组分相关的各种毒性。特别地，半夏含有许多包括麻黄碱在内的毒性生物碱，长期或过量地应用它可以产生血液循环障碍和神经性刺激。因此，本发明的组合物可以通过使用半夏除去各种毒性的而使抗痴呆作用最大化。然而，少量姜可以产生任何毒性作用，但就过量使用姜而言，本发明组合物的临床功效可能会降低。

姜黄优选Ostericum Koreanum，这是因为它与其它成分具有较好的相容性。

特别地，本发明各种草药成分的合理应用可以促进体内大脑血流，由此给大脑神经元提供足量的葡萄糖作为能源以有利于神经元中葡萄糖的代谢。

提高的能量代谢为大脑神经元提供了持续的稳态，同时通过诱导神经递质的分泌和分离而防止了大脑神经元变性。

因此，本发明的药理学机理是可显著有效地预防和治疗特征在于渐进性认知丧失的痴呆。

如上所述，本发明的抗痴呆组合物包括何首乌作为活性组分以及其它草药成分，诸如远志、丁香和姜。因不同的含量比例而具有较好药理作用且几乎没有不良作用的本发明的组合物可十分有效地预防和治疗痴呆。此外，本发明的组合物在长期用于一般公众时成为划时代的抗痴呆药物和优良的保健食品。

注意到本发明草药组合物的显著药理特性是应用何首乌作为活性组分和各成分的最佳含量比例所产生的。合适的组合物包含在本发明的各种制备实施例和实施例中且通过实验实施例证实了该组合物在预防和治疗痴呆中的功效且没有不良作用。

由水或醇提取本发明草药组合物中的各成分。例如，用水加热4-10小时或用醇加热2.5小时来提取所述的混合物、过滤并蒸发而得到一种粉末，通过添加添加剂来进一步配制该粉末而得到适宜的制剂之一。

当将本发明的草药组合物作为丸剂经口服给药以使对患老年性痴呆的患者获得所需治疗作用时，可以将提取物粉末给予成年人(60kg)每天2-4次，剂量为每次5-15g、优选7.5-12.5g。

考虑到毒性和不良作用已经确定了给药剂量。当将过量的该草药组合物长期给药时，它尚未表现出严重的副作用且就少量给药而言产生了优良的治疗作用。

当将含有人参作为有效成分的草药提取物给予患者时，需要进行特别地护理，因为大部分患者含有高血压。然而，可以将本发明的草药组合物安全地给予患高血压、其它血液循环疾患或肝病的患者而副作用极低且由此预计它非常适合于用作功能性保健食品。

由于具有抗痴呆作用的常规草药组合物尚未标准化或商品化为人们广泛应用，所以它限于单一药物处方或具有高价的地域性治疗。然而，本发明的草药组合物对有效组合进行了标准化并可以由普通公众简单服用来预防或治疗痴呆。

此外，本发明的草药组合物有效地改善了记忆或使头脑清醒。为了这一目的，与治疗痴呆的剂量相比需要将剂量降至30-70％。

基于下文中所示的下列制备实施例和实验实施例来更具体地解释本发明的组成和作用。然而，这些实施例和实验实施例用于进一步理解本发明，因此本发明的范围并非在任何方面受这些实施例和实验实施例的限制。

本发明的实验实施例1-11特别比较了实施例1和作为对比例1的属于美国专利US 6,010,702的实施例1的组合物的功效。为了直接比较的目的，采用与美国专利US 6,010,702的实验实施例相同的步骤进行本发明的实验实施例1-11。

实施例1

医用草药商购自Korea Medicinal Herb Association并得到Wonkwang University的汉方药学院(College of OrientalMedicine)的植物学家鉴定。由如下的15种医用草药组合制备实施例1的组合物：何首乌(20g)；远志(3g)；丁香(1g)；天南星(7g)；天麻(8g)；石菖蒲(4g)；Ostericum Koreanum(8g)；Caulis Phyllostachyos(3g)，Bombycis Corpus(3g)，FructusPonciri seu aurantii immaturus(3g)；茯苓(8g)；半夏(8g)，Aurantii nobilis Pericarpium(7g)，甘草(2g)和姜(4g)。将该混合物置于0.8L水中，缓慢加热并回流4-10小时。然后通过滤纸过滤液相溶液，并在冻干机上干燥滤液而得到浅棕色的粉末(10.0g)。

实施例2-7

制备具有下表1中所示成分的由15种医用草药组合制备的粉末组合物。

表1

成分	用量(g)
成分	用量(g)								实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5	实施例6	实施例7
何首乌	20	15	18	20	20	30	30		实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5	实施例6	实施例7
何首乌	20	15	18	20	20	30	30	远志	3	4	2	5	4	4	3
丁香	1	1.5	2	3	3	1	1	远志	3	4	2	5	4	4	3
丁香	1	1.5	2	3	3	1	1	天南星	7	8	5	10	8	8	8
天麻	8	7	8	8	8	8	8	天南星	7	8	5	10	8	8	8
天麻	8	7	8	8	8	8	8	石菖蒲	4	4	3	3	3	2	3
OstericumKoreanum	8	4	8	8	10	10	5	石菖蒲	4	4	3	3	3	2	3
OstericumKoreanum	8	4	8	8	10	10	5	BambusaeCaulis InTaeniam	3	4	4	4	3	3	3
BombycisCorpus	3	4	4	4	3	3	2	BambusaeCaulis InTaeniam	3	4	4	4	3	3	3
BombycisCorpus	3	4	4	4	3	3	2	FructusPonciri seuaurantiiimmaturus	3	4	4	4	3	3	2
茯苓	8	7	8	8	10	10	10	FructusPonciri seuaurantiiimmaturus	3	4	4	4	3	3	2
茯苓	8	7	8	8	10	10	10	半夏	8	7	10	10	8	8	8
AurantiinobilisPericarpium	7	8	10	10	10	8	8	半夏	8	7	10	10	8	8	8
AurantiinobilisPericarpium	7	8	10	10	10	8	8	甘草	2	2	2	2	2	2	2
姜	4	10	2	8	8	5	10	甘草	2	2	2	2	2	2	2
姜	4	10	2	8	8	5	10	水	0.8L	1L	0.8L	1.5L	-	-	-
乙醇	-	-	-	-	0.8L	1.5L	1.5L	水	0.8L	1L	0.8L	1.5L	-	-	-
乙醇	-	-	-	-	0.8L	1.5L	1.5L	产率	10.0	9.9	10.2	12.0	10.8	12.5	13.0

实施例8-10

由具有表2中所列含量的15种医用草药的组合制备实施例8-10的组合物。

通过用10倍(v/w)量的H₂O将混合的草药煎煮2小时来制备该处方的提取物。过滤后，再将残余物煮沸2小时。将滤液彼此混合并通过冻干机(Labconco，Preezone)冻干。将提取物保存在4℃下至使用为止。提取物的产率约为干组分重的16％。将全部经确认的样本(HM2001-45)寄存在Wonkwang大学药学院(WonkwangUniversity School of Medicine)药理学系(Department ofPharmacology)的植物标本室。

表2

成分	用量(g)
	用量(g)			实施例8	实施例9	实施例10
	何首乌	27.2	30	实施例8	实施例9	实施例10	16
远志	何首乌	27.2	30	-	-	2	16
远志	丁香	-	-	-	-	2	1.2
天南星	丁香	-	-	-	-	8	1.2
天南星	天麻	8	7	-	-	8	8
石菖蒲	天麻	8	7	4	4	4	8
石菖蒲	姜黄	8	6	4	4	4	8
Caulis Phyllostachyos	姜黄	8	6	4	4	4	8
Caulis Phyllostachyos	Bombycis Corpus	4	4	4	4	4	4
Fructus Ponciri seu aurantiiimmaturus	Bombycis Corpus	4	4	4	4	4	4
Fructus Ponciri seu aurantiiimmaturus	茯苓	12	8	4	4	4	8
半夏	茯苓	12	8	-	7	8	8
半夏	Aurantii nobilis Pericarpium	12	8	-	7	8	8
甘草	Aurantii nobilis Pericarpium	12	8	2	2	2	8
甘草	姜	4	4	2	2	2	4

对比例1

将人参(50g)、天南星(15g)、天麻(15g)、石菖蒲(10g)，Ostericum Koreanum(10g)、Bambusae Caulis In Taeniam(10g)、Bombycis Corpus(10g)、Fructus ponciri seu aurantiiimmaturus(10g)、茯苓(10g)、半夏(10g)和Aurantii nobilisPericarpium(6g)以及甘草(6g)组成的混合物置于1L水中、缓慢加热并回流6-8小时。然后通过滤纸过滤液相溶液，并在冻干机上完全干燥滤液而得到棕色粉末(2.7g)。

对比例2

将含有与实施例1相同成分和组成比例的草药混合物用1L乙醇提取3小时。然后通过滤纸过滤液相溶液，并在冻干机上完全干燥滤液而得到棕色粉末(3.0g)。

实验实施例1：对AChE的抑制活性

为了评价本发明提取物对AChE的抑制活性，将由实施例1制备的各提取物粉末(0.025、0.05和0.1mg/ml)加入到从溶于1ml PBS(磷酸盐缓冲液：0.1M，pH7.4)的电鳗(AChE：Sigma Cat.No.C-2888)中提取的酶(1,000个单位)中。通过Ellman’s偶联试验、在412nm处使用UV-可见光分光光度计、应用酶的速度常数因子Km(Micaelis常数)、Vmax(最大速度)和作为偶联试剂的5，5-二硫-双-(2-硝基苯甲酸：DTNB)测定基于各AChE的活性。正如下表2中所示，本发明的提取物对AChE的抑制作用显示在0.05mg/ml和0.1mg/m剂量下，本发明的提取物诱导酶活性分别下降了30.3％和80.4％。

表3

草药的用量(mg/ml)	酶活性的丧失(％)
草药的用量(mg/ml)	酶活性的丧失(％)			实施例1	对比例1
0	0	0		实施例1	对比例1
0	0	0	0.025	15.2	13.6
0.05	30.3	21.0	0.025	15.2	13.6
0.05	30.3	21.0	0.1	80.4	59.8

考虑到THA(商品名：Cognex)对AChE表现出最大为大约40％的抑制作用(参考文献：Keio J.Med.，36，381，1987)和美国专利US6,010,702的常规提取物表现出大约59.8％的抑制作用(对比例1)这一事实，可以可靠地说本发明的草药提取物对AChE的抑制活性(80.4％)十分显著。

实验实施例2：对AChE的抑制活性

通过体内研究评价本发明提取物对AChE的抑制作用，在开始给药前将20周龄的大鼠分成由各7只动物组成的2组(实验组和对照组)。将含有由实施例1制备的溶于100ml蒸馏水的0.5g粉末的溶液以3ml的每日剂量经口服连续给予数天，而对照组不给予药物。10天后，摘除大鼠的大脑并称大脑的总重。然后将5ml PBS(0.1M，pH7.4)加入到大脑中、完全切碎并缓慢搅拌3-5小时。进一步将2ml PBS(0.1M，pH7.4)加入到该大脑细胞的溶液中以便搅拌，在4℃下以1,000rpm离心(Hettich Rotina 48R)10分钟并通过滤膜(CAMEO 25ES硝基纤维孔径：0.45mm)纯化。

通过Ellman偶联试验(参考文献：Ellman，G.L.，《生物化学与药理学》(Biochem.Pharmacol.)，7，88，1961)，在412nm处使用UV-可见光分光光度计测定大鼠大脑的AChE活性。由此通过Michaelis-Menten等式计算间隔时间点处所有底物上的酶反应率。将纯化的大脑在含有790μl的PBS(1.0M，pH7.3)、60μl底物的5ml溶液(ATcH：乙酰硫胆碱)和作为偶联试剂的120μl DTNB(二硫代硝基苯甲酸)的5mM溶液的1ml石英池中保温约3分钟，然后将提取自治疗组和对照组的各10μl大脑溶液加入到石英池中以便评价AChE活性，结果如下表3中所示。

表4

分类	AChE的平均起始速率(AU/s)	AChE活性丧失(％)
分类	AChE的平均起始速率(AU/s)	AChE活性丧失(％)	正常大鼠	3.100×10^-3	0
口服给予对比例1草药提取物的大鼠(3ml/天)	2.384×10^-3	23.1	正常大鼠	3.100×10^-3	0
口服给予对比例1草药提取物的大鼠(3ml/天)	2.384×10^-3	23.1	口服给予实施例1草药提取物的大鼠(3ml/天)	2.042×10^-3	34.1

从体内试验中可以注意到当将本发明的草药提取物对大鼠连续给药10天时，与不使用药物的大鼠相比AChE活性下降了34.1％。这一结果与对比例1的活性(23.1％)相比得到了非常明显的改善。因此，已经证实本发明的草药提取物对AChE具有改善的抑制作用。

实验实施例3：神经递质乙酰胆碱浓度的比较

商购3周龄的雌性Sprague-Dawley大鼠(经测试不含致热原)并使它们寄居在23-25℃光照/黑暗循环中以生长至用于本研究中的20周龄大鼠(250-350g)。按照与实验实施例2中相同的方式将由本发明实施例3制备的草药提取物经口服连续给予由7只动物组成的各实验组大鼠10天。给药5天和10天后，尸解全部大鼠并测定大脑重量。用含有0.2％tripton X-100的10ml PBS(磷酸盐缓冲液：0.1M，pH7.4)匀浆大脑细胞并在4℃下离心(1,000rpm)以便从大脑细胞溶液中分离乙酰胆碱。用安装有电极检测器的HPLC检测由此分离的乙酰胆碱。制备确切浓度的乙酰胆碱的某些标准图以便在相同条件(流速：10ml/分钟，检测范围：3，9062nA，溶剂：0.1M PBS，pH7.4)下分析提取自大鼠大脑的各20μl样品。对由7只大鼠组成的各组在所述时间间隔对其大脑给予草药提取物以便比较其由此经生化分离的乙酰胆碱水平与正常大鼠的乙酰胆碱水平，结果如下表4中所示。

表5

天	乙酰胆碱的用量(μM)	乙酰胆碱的增加率(％)	大鼠数量
天	乙酰胆碱的用量(μM)	乙酰胆碱的增加率(％)	大鼠数量	0(正常大鼠)	107.7	0	7
5(对比例1)	165.1(139.6)	53.3(29.6)	7	0(正常大鼠)	107.7	0	7
5(对比例1)	165.1(139.6)	53.3(29.6)	7	10(对比例1)	241.2(193.4)	123.9(79.6)	7

上述结果表明使用本发明草药提取物的大鼠体内神经递质乙酰胆碱的实际浓度得到增加，由此反映出这类草药提取物对体内AChE的实际抑制作用。乙酰胆碱的浓度在给予该草药提取物5天和10天后分别增加了53.3％和123.9％。本发明的草药提取物对AChE的有效抑制作用是日本专利JP7-25760中公开的组合物的5倍以上，是对比例1组合物的2-倍以上，而对AChE的抑制作用至少是用于预防和治疗痴呆的合成抗痴呆药物的4倍(Keio J.Med.，36，381，1987)。特别地，已经作为其它应用目的在临床上使用几千年的天然存在的草药几乎没有使用常规药物的医疗中遇到的不良反应(参考文献：实验实施例11)。

实验实施例4：丸剂及其功效筛选

每天将通过混合5g蜂蜜与100g由实施例4制备的草药粉末制备的1g干燥丸剂溶于水(10ml)，将其对20周龄Sprague-Dawley大鼠连续口服给药10天。10天后按照与实验实施例2和3相同的方式测定大脑中AChE的活性和乙酰胆碱水平。本实验结果显示丸剂随乙酰胆碱浓度的增加对AChE具有与实验实施例2和3中相同的抑制活性。

实验实施例5：粉剂及其功效筛选

将由实施例5制备的100g草药粉末精细粉碎、过18号筛(850μg)，随后加入乳糖(200g)作为稀释剂以便制备粉剂。每天将各0.7g粉剂溶于水(10ml)以便将其对20周龄Sprague-Dawley大鼠连续口服给药10天。10天后按照与实验实施例2和3相同的方式测定大脑中AChE的活性和乙酰胆碱水平。本实验结果显示粉剂随乙酰胆碱浓度的增加对AChE具有与实验实施例2和3中相同的抑制活性。

实验实施例6：片剂及其功效筛选

将100g由实施例6制备的草药粉末与25g乳糖和5g淀粉混合并添加滑石(5g)，用压片机配制该混合物以制备薄膜包衣片。每天将各0.7g片剂溶于水(10ml)以便将其对20周龄Sprague-Dawley大鼠连续口服给药10天。10天后按照与实验实施例2和3相同的方式测定大脑中AChE的活性和乙酰胆碱水平。本实验结果显示片剂随乙酰胆碱浓度的增加对AChE具有与实验实施例2和3中相同的抑制活性。

实验实施例7：颗粒剂及其功效筛选

将100g由实施例7制备的草药粉末与25g乳糖和5g淀粉混合，过筛(12-45号)以制备颗粒剂。每天将各1.0g该颗粒剂溶于水(10ml)以便将其对20周龄Sprague-Dawley大鼠连续口服给药10天。10天后按照与实验实施例2和3相同的方式测定大脑中AChE的活性和乙酰胆碱水平。本实验结果显示颗粒剂随乙酰胆碱浓度的增加对AChE具有与实验实施例2和3中相同的抑制活性。

实验实施例8：胶囊剂及其功效筛选

将100g由实施例1制备的草药粉末装填入胶囊(3号，0.3ml)。每天将各0.7g该胶囊剂溶于水(10ml)以便将其对20周龄Sprague-Dawley大鼠连续口服给药10天。10天后按照与实验实施例2和3相同的方式测定大脑中AChE的活性和乙酰胆碱水平。本实验结果显示胶囊剂随乙酰胆碱浓度的增加对AChE具有与实验实施例2和3中相同的抑制活性。

实验实施例9：输液剂及其功效筛选

将含有与实施例1相同成分和组成比例的草药混合物精细粉碎并加入纯水(200ml)、沉淀3小时。加入热纯水(700ml)并对所得溶液混合几次、冷却并通过棉花过滤。向该溶液中加入50g蜂蜜作为兴奋剂(cordial)。将各3ml渗滤剂对20周龄Sprague-Dawley大鼠连续口服给药10天。10天后按照与实验实施例2和3相同的方式测定大脑中AChE的活性和乙酰胆碱水平。本实验结果显示渗滤剂随乙酰胆碱浓度的增加对AChE具有与实验实施例2和3中相同的抑制活性。

实验实施例10：煎剂及其功效筛选

向含有与实施例1相同成分和组成比例的草药混合物中加入纯水(900ml)并混合几次、加热30分钟以上并在热状态下过滤。向所得溶液中加入50g蜂蜜作为调味剂。将各3ml煮沸的药剂对20周龄Sprague-Dawley大鼠连续口服给药10天。10天后按照与实验实施例2和3相同的方式测定大脑中AChE的活性和乙酰胆碱水平。本实验结果显示煎剂随乙酰胆碱浓度的增加对AChE具有与实验实施例2和3中相同的抑制活性。

实验实施例11：血清中的大鼠肝功检测试验

将20周龄Sprague-Dawley大鼠分成安慰剂组(8只大鼠)和实验组(9只大鼠)。将500mg实施例1制备的草药粉末溶于纯水(1000ml)且然后在每天早晨10点将各3ml的该溶液对治疗组连续口服给药10天。10天后，处死动物以便采集血样。在4℃下以1500rpm将血样离心10分钟以分离血清。然后按照常规方法对这类血清进行肝功检测试验。正如下表5中所示的，注意到两组在AST、ALT、ALP和BUN上均具有几乎相似的水平，由此反映出本发明的草药提取物没有早期肝毒性。特别地，本发明的草药提取物表现出远低于对比例1对照组的肝毒性。

表6血液中不同参数的浓度

组	AST(IU/l)	ALT(IU/l)	ALP(IU/l)	BUN(IU/l)	n
组	AST(IU/l)	ALT(IU/l)	ALP(IU/l)	BUN(IU/l)	n	安慰剂	171.3±26.6	56.4±14.8	433.3±181.3	21.2±3.0	8
实验组	135.1±28.2	56.8±11.4	430.1±89.3	21.5±1.9	9	安慰剂	171.3±26.6	56.4±14.8	433.3±181.3	21.2±3.0	8
实验组	135.1±28.2	56.8±11.4	430.1±89.3	21.5±1.9	9	对照组	112.2±38.1	58.1±14.8	421.3±101.1	22.3±2.3	9

实验实施例12：卵巢切除术试验

通过修改已经用作大脑神经元疾病的药物的传统处方来制备称作Neuoclean(NC)的草药组合物并研究它对切除卵巢(OVX)的大鼠体内的大脑腺苷三磷酸(ATP)和乙酰胆碱(ACh)含量的作用。对雌性Sprague-Dawley大鼠实施卵巢切除术并维持12周耗尽卵巢类固醇激素，随后以500mg/kg体重/天口服给予NC14周。给予NC显著降低了OVX大鼠体重增加的高比率且还减少了因卵巢切除术导致的大脑重量下降(p＜0.05)。以50mg/kg体重过量输注(superfusion)显著增加了大脑血流速率，但没有改变平均动脉血压。卵巢类固醇激素的丧失显著减少了大脑ATP、胆碱和ACh含量且这类减少可以通过用NC治疗OVX大鼠而得到完全恢复(p＜0.01)。另外，NC还显著升高了因OVX而下降的大脑胆碱乙酰转移酶的活性(p＜0.01)。这些结果共同提示NC的药理特性与改善因卵巢类固醇激素丧失而下降的大脑能量和胆碱能神经递质合成途径有关，并且NC可以成为治疗包括痴呆在内的大脑神经元功能异常的有希望的草药药物。

尽管许多因素可以成为阿尔茨海默病的原因，但是一致的发现是中枢胆碱能系统低下，其特征在于突触前胆碱能标记物诸如乙酰胆碱(ACh)和胆碱乙酰转移酶减少(ChAT，Coyle等1983：Soininen等1995)。这种相关性和由胆碱能机能减退诱发的记忆力低下的产生已经提示要明显关注胆碱能替代疗法。另外还认为产生脑神经元能量的腺苷三磷酸(ATP)的葡萄糖代谢下降看起来可诱发串联性的紊乱，这些紊乱导致阿尔茨海默病患者中的异常淀粉样形成、膜损伤、神经元变性和认知低下(Hoyer 1996：Meier-Ruge等1994)。回顾性研究提示卵巢类固醇激素与大脑神经元的记忆和认知功能尤其相关且其丧失可能导致包括AD在内的神经变性疾病发生(McEwen等1997：Paganini-Hill和Henderson 1994)。在动物研究中，因卵巢切除术(OVX)导致的卵巢类固醇激素丧失使大鼠海马和额大脑皮层中高亲和性胆碱摄取量减少(O’Malley等1987)并导致学习和记忆功能受到破坏(Singh等1994：Toriizuka等2000)。因此，广泛认为ATP和胆碱含量不足可能与特征在于学习和记忆低下的进行性神经变性的发展有关。

另一方面，在Hanbang(韩国传统草药)中存在各种通常规作大脑血管系统紊乱相关的疾病的处方的传统配方药物。这些药物的药理学观念在于它们通过除去可以累积在外周血管系统中的生物有害物质而促进大脑血液循环。考虑到其药理特性，我们新近制备了一种新型草药药物Neuroclean(NC)，它可以用于预防和/或治疗因大脑血流紊乱(CBF)导致的大脑神经元功能异常。我们推断NC可以促进因各种病理性原因而下降的大脑神经元血液循环，并且这种增加的大脑血液循环可以改善大脑神经元葡萄糖代谢和胆碱能途径，从而使大脑ATP和ACh含量升高。为了阐明这种假说，本发明研究了NC对OVX大鼠体内大脑神经元ATP和ACh含量改变的药理学特性。

[动物治疗和组织制备]

6周龄雌性Sprague-Dawley大鼠获自韩国实验动物中心(KoreaExperimental Animal Center)(Cheonan，Korea)且在24-26℃下的12小时光照和黑暗循环条件下前期饲养1周后使用。使它们在实验期间自由获得商购啮齿动物饲料(Samyang，Korea)和自来水。在7周时在戊巴比妥钠(戊巴比妥50mg/kg体重)麻醉下摘除实验动物的两侧卵巢并维持12周以便使卵巢类固醇激素丧失。对对照组大鼠实施假拟手术(sham operation)。将溶于H₂O的NC提取物以500mg/kg体重/天经口服给予14周。对照组动物经口服接受等体积的水而不是草药。将给药体积调整至2ml/kg体重。在开始实验14周后，用乙醚麻醉并处死全部动物。在从腹部静脉内采集血样后立即摘除大脑并用冰冷的磷酸缓冲盐水(PBS，pH7.4)洗涤，随后测定大脑重量。在冰上尽快解剖大脑皮层并保持在-80℃下至使用为止。

[大脑血流的监测]

按照Dirnagl等(1989)的方法并稍加修改来测定CBF。简单地说，用氟烷麻醉雄性Sprague-Dawley大鼠(200-250g)并给气管插管。给股动脉之一插套管以便记录平均动脉血压(MABP)并给另一股静脉插套管以便输注草药提取物。实施小颅骨切除术(2×2mm)以便暴露顶叶皮层，除去硬脑膜并在该部位过量输注Ringer溶液(37℃，pH7.4)。在该过量输注部位用以立体定位方式位于皮层表面上的激光多普勒探针(Vasamedic，St Paul，MN)连续监测CBF。将CBF值表示为与静止水平相比的百分比增加。在本实验结束时通过超剂量的氟烷使心脏停跳后获得CBF的零值。尽管激光多普勒流量法并不能定量，但是它可以十分准确地监测CBF的相对改变(Dirnagl等1989)。

[大脑ATP含量的测定]

通过使用我们先前报导中所述的微量化学发光法(Ma等2000)测定额顶大脑皮层中的胞内ATP含量。在所有的方案中，对任意指定大鼠而言均至少以一式两份测定胞内ATP含量。通过向0.1g组织重量中添加500μl的10％三氯乙酸(TCA)/1mM EDTA来提取大脑ATP并使之均浆。为使提取完全，用涡旋混合器(Thermolyne 37600)使样品振动2分钟。在4℃下短暂离心含有变性组织的溶液并将10μl上清液转入装有390μl含有0.5mM EDTA的Tris/乙酸盐缓冲液(pH7.75)的聚苯乙烯试管(BioOrbit，Sweden)中。将试管置于发光计(BioOrbit 1251)中。在用自动分液器加入100μl ATP监测试剂后，用计算机驱动的系统自动测定光密度，持续10秒。在我们的检测系统中光密度的产生为线性方式，每管为10^-14-10^-11mol ATP。

[大脑胆碱含量的测定]

通过使用我们先前报导中所述的化学发光法(Ma等2000)测定额顶大脑皮层中的胞内胆碱含量。简单地说，用玻璃特氟隆研钵将大脑皮层(0.1g)在10倍量(v/w)7％的高氯酸中匀化并以3000rpm(Beckman，Avanti 30)离心10分钟。然后用2M K₂CO₃中和上清液并通过短暂离心除去高氯酸钾沉淀。通过自动添加100μl的试剂在发光计(BioOrbit 1251)中分析总计20μl稀释样品与380μl甘氨酸缓冲液(pH8.6)中的胆碱。每天新鲜制备所述试剂使用且这些试剂中含有1ml的2mg/ml辣根微过氧化物酶、60μl的10mM 3-氨基苯二酰肼(luminol)和50U的胆碱氧化酶的甘氨酸缓冲液(pH8.6)溶液。添加试剂后的5秒-25秒之间光产生的总量与该系统中1pmol至100nmol/管之间的胆碱含量成线性关系。对任意指定大鼠而言均至少以一式两份测定细胞胆碱含量。

[大脑胆碱乙酰转移酶活性]

按照Fonnum(1975)的方法并稍加修改来测定额顶大脑皮层中的胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性。简单地说，通过使用超声处理器在含有0.2％Triton X-100的10mM EDTA中匀化大脑皮层(100mg)并以1000g离心(Beckman，Avanti 30)10分钟。将上清液在终体积为300μl的含有NaCl(300mM)、磷酸盐缓冲液(40mM，pH7.4)、硫酸扁豆毒碱(0.1mM)、EDTA(10mM)、氯化胆碱(10mM)、[³H]乙酰辅酶A(100nCi，0.2mM)和Triton X-100(0.05％)的混合物中保温。将混合物在37℃下保温15分钟。在保温期结束时，用2.5ml的10mM磷酸钠缓冲液(pH7.4)稀释该保温培养基并加入含有15mg四苯基硼酸钠和10ml甲苯的3ml乙腈以用于提取ACh。使标记和未标记的ACh分配进入甲苯相，而未反应的底物保留在水相中。通过Beckman(LS 6500)闪烁计数器测定放射性。

[大脑乙酰胆碱含量的测定]

按照先前报导(Israel和Lesbats 1982)中具体描述的活性发光法测定额顶大脑皮层中的ACh含量。简单地说，如下进行组织样品的提取和氧化：用1ml的5％TCA提取大脑皮层(100mg)并通过乙醚洗涤除去TCA，随后以1,000g离心10分钟。在使残余乙醚蒸发后，中和水相并缓冲。通过添加10μl的0.5％偏高碘酸钠氧化样品(100μl)。将氧化的样品(50μl)与含有10ml的0.2M磷酸钠缓冲液(pH8.6)、100μl胆碱氧化酶(250U/ml)、50μl辣根过氧化物酶(II型，2mg/ml)和100μl 3-氨基苯二酰肼(1mM)的反应混合物彼此混合。随后加入5μl的乙酰胆碱酯酶(1,000U/ml)以引起ACh水解，使用发光计(BioOrbit 1251)测定发射光。按照Lowry等(1951)的方法测定蛋白质。

[试剂]

胆碱氧化酶、微过氧化物酶、ATP和氯化胆碱获自Sigma(St.Louis，MO，USA)。ATP监测试剂和[乙酰基-³H]乙酰辅酶A(1.6Ci/mmol)分别商购自BioOrbit(Sweden)和NEN Dupomt(Boston，MA，USA)。所有其它化学品均为来自商品来源的最高等级。

[统计学分析]

将本研究中获得的数值表示为平均值±S.E.。通过ANOVA和student’s t检验进行统计学显著性分析并将p＜0.05看作具有统计学显著性。

结果

[体重和大脑重量改变]

正如附图1中所示，与假拟组动物相比，本研究期限内的OVX大鼠体重显著增加且在卵巢切除术后26周时观察到假拟组与OVX大鼠的体重之间存在显著性差异(p＜0.01)。通过以500mg/kg体重/天口服给药NC 14周基本上降低了OVX大鼠中体重的增加率。口服给予NC显著降低了OVX大鼠体重的增加率(p＜0.05)，而假拟组大鼠没有出现这种情况。有意义的是注意到用NC治疗OVX大鼠显著改善了OVX大鼠中的行为活动和体表特征，诸如皮毛情况。

附图2表示用和不用NC治疗的假拟组和OVX组大鼠中的大脑重量改变。与假拟组大鼠相比，OVX组大鼠中大脑重量与体重的相对重量显著降低(p＜0.05)。通过用NC治疗OVX组大鼠14周部分恢复了这种下降(p＜0.05)。相反，NC没有影响假拟组大鼠中的大脑重量与体重的相对重量。

[大脑血流]

本研究通过使用激光多普勒系统和电微量转导器测定了NC对CBF和MABP的作用且结果如附图3中所示。CBF在用普通Ringer溶液过量输注过程中是稳定的。用NC过量输注(10-200mg/kg体重)以剂量依赖性方式增加了静止CBF。在50、100、200mg/kg处的增加值平均为静止CBF的110.5±1.74％、118.3±2.28％和127.6±3.35％。这些增加明显不同于静止CBF值(p＜0.05-0.01)。尽管NC仅在200mg/kg体重浓度下显著增加MABP(105.4±0.03％的静止值)，但是本研究中测试的全部剂量均没有显著改变MABP。

[大脑ATP和胆碱含量]

本研究测定假拟组和OVX组大鼠中额顶大脑皮层的胞内ATP含量且结果如附图4中所示。在卵巢切除术后26周，与假拟动物中的这些结果(27.9±1.24)相比，OVX组大鼠中的大脑ATP含量(21.2±1.45×10^-9mol/mg蛋白质)显著降低(p＜0.05)。口服给予NC完全恢复了OVX组大鼠中因卵巢类固醇激素丧失而下降的大脑ATP含量，但这种结果没有在假拟组大鼠中出现。

正如附图5中所示，假拟组大鼠中额顶大脑皮层的胆碱含量(1.17±0.058×10^-7mol/mg蛋白质)因卵巢类固醇激素丧失26周而显著下降。通过NC给药最后14周显著恢复了OVX组大鼠减少的大脑胆碱含量(0.85±0.034)(p＜0.01)。然而，NC给药没有显著改变假拟组大鼠中的大脑胆碱含量。

[胆碱乙酰转移酶活性和乙酰胆碱含量]

附图6表示假拟组和OVX组大鼠额顶大脑皮层中的ChAT活性。在卵巢切除术后26周时，与假拟组大鼠中的结果相比(41.5±1.53)，OVX组大鼠中大脑皮层的ChAT活性(32.6±1.50nmol/小时/mg蛋白质)显著降低(p＜0.05)。通过NC治疗14周完全恢复了OVX组大鼠降低的大脑ChAT活性(p＜0.01)。然而，NC给药没有显著改变假拟组大鼠中的大脑ChAT活性。

正如附图7中所示，在卵巢切除术后26周时，与假拟组大鼠中的结果相比(438.4±15.24)，OVX组大鼠中大脑ChAT含量(369.4±23.27pmol/mg蛋白质)显著降低(p＜0.05)。通过NC治疗OVX组大鼠14周使这些下降完全恢复(p＜0.01)。然而，NC没有影响假拟组大鼠中的大脑ChAT含量。

在本发明中，注意到了新配制的草药药物NC对作为更年期紊乱模型的OVX大鼠中大脑能量代谢途径和胆碱能神经递质产生的作用。

以50mg/kg体重过量输注NC显著增加了CBF，但不会影响MABP。大脑ATP、胆碱和ACh含量因卵巢类固醇激素丧失26周而显著下降，并且还在OVX组大鼠的额顶大脑皮层的ChAT活性中观察到了类似的现象。重要的是通过用500mg/kg体重/天的NC治疗OVX组大鼠14周使这些下降完全恢复。在本研究中获得的结果提示了NC可能的药理学特性，表明NC增加CBF、大脑神经元ATP、胆碱和ACh含量以及因卵巢类固醇激素丧失而下降的ChAT活性。

人大脑的正常生理性老化与大脑萎缩和神经元死亡有关，并且神经元系统中与老化相关的改变可能部分是由于激素改变所导致的(Birge 1997)。我们现有和先前的研究(Ma等2000)可以观察到因卵巢切除术而导致的大脑重量与体重相对重量的下降，并且通过用NC治疗OVX组大鼠部分恢复了下降的大脑重量。在药理学方面，这一结果可以表明NC在因激素改变导致的大脑神经元异常发展中可能的作用。近期的研究提示女性发生AD的危险高于男性(Gibbs1998)。在阿尔茨海默型老年性痴呆(SDAT)的初期晚期发作(incipient late-onset)中，发现大脑葡萄糖利用和血流在大脑皮层的所有区域中均减少(Hoyer 1996；Wolf和Grotta 2000)。关于这些提示和推定的NC药理学特性，本研究首先确定；NC对CBF的作用并观察到CBF因NC过量输注而增加(附图2)。在OVX组大鼠中，NC治疗没有显著改变血清葡萄糖含量，而显著升高了大脑葡萄糖含量(p＜0.05，数据未显示)。难以解释与大脑葡萄糖含量改变相关的确切生化机理，因为在本研究中获得的结果可能是由与增加的CBF导致的葡萄糖摄取与其利用之间相关性有关的复杂生化途径所产生的。然而，我们可以考虑大脑葡萄糖含量的增加可能与葡萄糖通过细胞膜增加摄取有关。这一假说可以得到附图4中所示结果的支持，从而表明NC显著增加了因卵巢切除术而下降的大脑ATP含量。

低葡萄糖更新能够合成最小量ATP以维持生命(Meier-Ruge等1994)。低葡萄糖更新可以减少ATP产生且这一结果可以更明确地宣布了发生大脑痴呆疾病的症状学(Erecinska和Siber 1989；Hoyer1991)。本研究可以观察到与假拟组动物相比，OVX组大鼠中的大脑ATP含量减少了24％(附图4)。这些减少可能与因卵巢类固醇激素丧失而导致的大脑葡萄糖更新下降有关，从而导致先前报导中所证实的大脑ATP产生减少(Brige 1997；Erecinska和Siber 1989；Hoyer 1991)。有意义的是通过用NC治疗OVX组大鼠显著升高了下降的大脑ATP含量。因此，我们考虑这些结果可能是由于使用NC导致CBF增加和大脑葡萄糖更新所导致的，并且NC诱发的大脑ATP含量增加的病理生理作用可能与维持OVX组大鼠大脑皮层中的各种细胞功能有关。此外，NC增加OVX组大鼠中下降的大脑ATP含量这一事实提示了葡萄糖利用/更新增加的可能性，随后乙酰辅酶A的产生可能增加，其中乙酰辅酶A是ACh合成的必不可少的底物(Sims等1981)。

此外，大脑胆碱含量的病理改变还涉及学习和记忆丧失(Wurtman 1992)，这是因为胞内胆碱含量减少导致ACh产生减少(Soininen等1995)。Ehrenstein等(1997)证实了患SDAT大脑中Ach丧失的胆碱渗漏假说，Simpkins等(1997)也报导了卵巢类固醇激素缺乏导致额皮质和海马中高亲和性胆碱摄取和ChAT活性下降。在本研究中，我们观察到卵巢类固醇激素丧失26周导致OVX组大鼠中大脑胆碱和ACh含量下降，并且在大脑ChAT活性方面也观察到了类似下降的程度。这些结果几乎与先前的结果(Ma等2000；Torrizuka 2000)一致。有意义的是通过用NC治疗OVX组大鼠14周显著恢复了下降的大脑胆碱、ACh和ChAT活性，从而提示NC可以在改善因卵巢类固醇激素丧失而导致的ACh合成下降方面具有药理作用。

正如附图8中所示，我们考虑到了4种涉及NC对OVX组大鼠中大脑神经元功能异常的药理学特性的可能性。首先，我们考虑到NC增加CBF且这一结果可以影响大脑葡萄糖更新的代谢途径，因为NC增加大脑神经元葡萄糖和ATP含量。其次，大脑胆碱含量下降可能是由于高亲和性胆碱摄取下降(Simpkins等1997)和/或胆碱渗漏通过细胞膜增加(Ehrenstein等1997)所导致的。这些病理改变部分可以通过NC诱发的大脑ATP含量增加而得到恢复，这是因为绝对胞内ATP浓度在维持诸如细胞膜结构、受体和转运活性这样的细胞生理过程方面是重要的(Erecinska和Silver 1989)。第三，NC可以通过对因卵巢类固醇激素丧失而下降的ChAT活性的直接作用或通过对神经内分泌过程的间接激活来增加额顶大脑皮层中的ACh含量。第四，因卵巢切除术而下降的大脑ACh含量可能是由于大脑葡萄糖更新和胆碱含量下降所导致的，这是因为因葡萄糖更新减少导致的大脑胆碱和乙酰辅酶A含量下降导致ACh产生减少(Hoyer 1996；Soininen等1995)。因此，NC不仅会加速葡萄糖代谢而产生ATP，而且会增加主要用于合成胆碱能神经递质Ach的胞内底物浓度。

总之，这些发现提示大鼠体内卵巢类固醇激素的丧失导致大脑ATP、胆碱、ACh含量和ChAT活性下降且这些减少可以通过NC治疗而恢复。因此，可以理解的是NC可以成为能够改善因绝经后改变和大脑血液循环紊乱导致的学习和记忆低下的痴呆的药物。

如上所述，本发明用于预防和治疗痴呆的草药组合物包括替代常规草药组合物中的人参作为主要成分的何首乌且进一步包括常规组合物中不加入的成分远志、丁香和姜。这种新型组合物表现出对痴呆的极佳抑制作用而几乎没有不良作用和毒性。

因此，因没有不良作用和毒性而可以将具有适宜各成分比例的本发明草药组合物长期大量给药，并且还可以将其作为预防和治疗痴呆的营养补充饮料用于任何人。

Claims

1.用于预防和治疗痴呆的草药组合物，它包括10-50重量份的何首乌和选自下列成分中的至少三种成分：5-20重量份的茯苓、2-20重量份的Aurantii nobilis Pericarpium、1-5重量份的甘草、1-10重量份的半夏和1-10重量份的姜。

2.权利要求1所述的草药组合物，进一步包括选自下列成分中的至少一种成分：1-10重量份的远志、1-10重量份的丁香、1-15重量份的天南星、1-15重量份的天麻、1-10重量份的石菖蒲、1-15重量份的Ostericum Koreanum或姜黄、1-8重量份的CaulisPhyllostachyos或Folium Phyllostachyos、1-8重量份的Bombycis Batryticatus、1-8重量份的Fructus immaturusponciri、2-20重量份的香附子和1-10重量份的广木香。

3.权利要求2所述的草药组合物，其中用常规提取法提取10-50重量份的何首乌、1-15重量份的天麻、1-10重量份的石菖蒲、1-15重量份的Ostericum Koreanum或姜黄、1-8重量份的CaulisPhyllostachyos或Folium Phyllostachyos、1-8重量份的Bombycis Batryticatus、1-8重量份的Fructus immaturusponciri、5-20重量份的茯苓、2-20重量份的Aurantii nobilisPericarpium、1-5重量份的甘草和1-10重量份的姜的草药混合物。

4.权利要求1所述的草药组合物，其中用常规提取法提取10-50重量份的何首乌、1-10重量份的远志、1-10重量份的丁香、1-10重量份的姜、1-10重量份的天南星、1-10重量份的天麻、1-8重量份的石菖蒲、1-10重量份的姜黄、1-8重量份的FoliumPhyllostachyos、1-8重量份的Bombycis Batryticatus、1-8重量份的Fructus immaturus ponciri、5-20重量份的茯苓、1-10重量份的半夏、1-10重量份的Aurantii nobilis Pericarpium和1-5重量份的甘草的草药混合物。

5.权利要求1-4中任意一项的草药组合物，其中通过使用水或醇的常规提取方法来提取所述的组合物。

6.权利要求1-4中任意一项的草药组合物，用作预防和治疗痴呆的有效成分。

7.权利要求6所述的草药组合物，其中将所述的组合物配制成各种剂型，诸如丸剂、提取液制剂、粉剂、颗粒剂、输液剂、煎剂、片剂、胶囊剂和非肠道用制剂。

8.权利要求1-4中任意一项的营养补充食品，用作预防和治疗痴呆的有效成分。

9.权利要求8所述的营养补充食品，其中将所述的组合物被配制成各种剂型，诸如丸剂、提取液制剂、粉剂、颗粒剂、输液剂、煎剂、片剂、胶囊剂和非肠道用制剂。