CN103656484B - 一种治疗痴呆的中药组合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药领域,具体涉及一种中药组合物及其制备方法与应用,其特征在于,该组合物是由包含以下重量配比的中药原料组成:夏天无提取物1~40;姜黄提取物5~80;丁香提取物0~50。本发明采用现代中药提取技术,得到夏天无、姜黄和丁香活性部位的提取物,制备成多种剂型。本发明得到的中药组合物能降低脑缺血引起的脑组织损伤,有效预防和治疗老年性痴呆、血管性痴呆和血管性后遗症。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域,具体涉及一种中药组合物及其制备方法与应用。该组合物能降低脑缺血引起的脑组织损伤,有效预防和治疗血管性痴呆。
背景技术
痴呆是一种由大脑病变引起的综合征,常见的有两种:阿尔茨海默病(又名老年性痴呆或早老性痴呆)和血管性痴呆。
老年性痴呆是一种大脑原发性退行性变性疾病,起病徐缓,病程呈进行性,病因迄今不明。患者表现为全面性痴呆,即记忆、智能(包括理解、推理、抽象概括和计算等)、语言、操作等方面有所衰退,性格发生改变,有的还出现精神症状。血管性痴呆是脑血管病变(包括出血性和缺血性)引起脑组织血液供应障碍而导致脑机能衰退的结果。患者多有明显的脑血管意外病史,如脑出血、脑血栓的形成等。虽然出现记忆力下降、智力下降,但日常生活能力、理解力、判断力以及待人接物的礼仪习惯等均能在较长时间内保持良好状态,人格也保持得较完整,所以也称为局限性痴呆。老年性痴呆和血管性痴呆都是老年人常见疾病,两者可以单独发生,也可并存或先后发生。脑血管疾病亦常使老年性痴呆加重。
现有文献、专利等资料表明,虽然国内治疗血管性痴呆的技术较多,但以中药大复方为主。其中CN200610078843.9专利以姜黄为君药,配以三七、石菖蒲等10味中药用于治疗血管性痴呆,该项专利在2010年8月获得授权,其药效试验证实该组合物具有改善动物模型的血管性痴呆症状的效果,但是这种效果不排除该药物中人参、三七发挥的重要的治疗作用;CN200510027631.3专利和CN200610161493.2专利提出夏天无提取物、夏天无总生物碱能够提高VD鼠模型学习记忆能力,主要是夏天无提取物的显现的N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂的生物活性,同时还能够增加模型脑中的5-羟色胺和多巴胺的含量,可以在一定程度上防治血管性痴呆。现有文献提示,姜黄提取物能够治疗血管性痴呆可能与其降低VD小鼠血清中MDA含量、升高SOD活性、降低脑中葡萄糖含量的作用机制有关;丁香酚能通过嗅觉传导路进入中枢神经系统而改善VD模型学习能力,对血管性痴呆有一定的治疗作用。虽然研究表明单味药材有治疗痴呆的效果,但未见夏天无、姜黄和丁香药材两两组合或者三个组合用于治疗血管性痴呆的报道。与现有技术相比,本发明中药组合物的组方与现有技术存在明显的不同,与大复方的药物相比较,本发明的中药组合物的组方大为精简。而且经试验证明该组合物与单味药材相比有非常好的技术效果,在防治血管性痴呆方面有明显的技术优势。
国内外研究均提示,随着年龄的增长,痴呆的发病率和患病率均成逐渐增高的趋势,80岁以上老人痴呆患病率可高达20%。随着人口的老龄化,痴呆的绝对数增多,将对人类造成严重的社会影响。因此研究治疗血管性痴呆的药物具有重要的社会价值和经济价值。
发明内容
有鉴于此,本发明要解决的技术问题在于提供一种中药组合物及其制备方法与应用。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
一种中药组合物,其特征在于该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物1~40;姜黄提取物5~80;丁香提取物0~50。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物27;姜黄提取物50;丁香提取物20。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物36;姜黄提取物45;丁香提取物25。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物18;姜黄提取物60;丁香提取物30。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物36;姜黄提取物45;丁香提取物22。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物1;姜黄提取物80;丁香提取物50。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物40;姜黄提取物5;丁香提取物1。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物2;姜黄提取物75;丁香提取物2。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物23;姜黄提取物77;丁香提取物1。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物5;姜黄提取物8;丁香提取物5。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物40;姜黄提取物80;丁香提取物50。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物1;姜黄提取物80。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物40;姜黄提取物5。
优选的,该中药组合物由包括以下重量份的原料药制成:夏天无提取物20;姜黄提取物40。
本发明的夏天无提取物可以为市售,或为夏天无总碱提取物,或采用以下方法制备:取夏天无药材,加5~25倍量的水或40~95%乙醇提取1~3次,滤过,合并滤液,浓缩,浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,或用1%HCl调pH至3~4后上阳离子交换树脂,依次用水或碱水、10~30%乙醇洗脱除杂,再以40~95%的乙醇或含5%氨水的乙醇溶液洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥,得夏天无提取物。
本发明的姜黄提取物可以为市售,或为姜黄总萜提取物,或采用以下方法制备:取药材,粉碎成粗粉,以5~25倍量60~95%乙醇提取1~3次或超临界CO2萃取,提取液或萃取液浓缩、干燥,得姜黄提取物。
本发明的丁香提取物为市售或采用以下方法制备:取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法或超临界CO2萃取挥发油;或以5~25倍量60~95%乙醇提取1~3次,提取液浓缩,干燥,得丁香提取物。
本发明的中药组合物,按重量配比取夏天无提取物、姜黄提取物、丁香提取物,混合,加入中药制剂中的常规药用辅料,采用药剂学中常规的制药方法,制剂成型,即得;按重量比取夏天无提取物、姜黄提取物,混合,加入中药制剂中的常规药用辅料,采用药剂学中常规的制药方法,制剂成型,即得;按重量比取夏天无提取物,以β-环糊精包合物,香提取物,以β-环糊精包合;加入姜黄提取物,混合,再加入中药制剂中的常规药用辅料,采用药剂学中常规的制药方法,制剂成型,即得。
该中药组合物可制备成临床上可接受的任何一种药剂,包括胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、散剂、液体制剂、注射液及注射用粉针。
发明人对本发明的提供的技术方案进行了实验研究,用来证明本发明的技术效果,下述实验用于进一步说明本发明的技术效果,但不限制本发明。
一、实验药物:
组方一(G1):丁香提取物;
组方二(G2):夏天无提取物;
组方三(G3):姜黄提取物;
组方四(G4):丁香提取物27;夏天无提取物50;姜黄提取物20
组方五(G5):丁香提取物36;夏天无提取物40;姜黄提取物25
组方六(G6):丁香提取物18;夏天无提取物60;姜黄提取物30
组方七(G7):丁香提取物36;夏天无提取物45;姜黄提取物22
组方八(G8):丁香提取物1;夏天无提取物80;姜黄提取物50
组方九(G9):丁香提取物40;夏天无提取物5;姜黄提取物1
组方十(G10):丁香提取物2;夏天无提取物75;姜黄提取物2
组方十一(G11):丁香提取物23;夏天无提取物77;姜黄提取物1
组方十二(G12):丁香提取物5;夏天无提取物8;姜黄提取物5
组方十三(G13):丁香提取物40;夏天无提取物80;姜黄提取物50
组方十四(G14):丁香提取物1;夏天无提取物80
组方十五(G15):丁香提取物40;夏天无提取物5
组方十六(G16):丁香提取物20;夏天无提取物40
组方十七(G17):夏天无;
组方十八(G18):姜黄;
组方十九(G19):丁香;
二、组方提取物样品的制备:
组方一:取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法提取挥发油,得组方提取物G1。
组方二:取夏天无药材,加75%乙醇回流提取2次,每次10倍量回流1.5小时,滤过,合并滤液,减压浓缩至无醇味,加水稀释后上D101大孔吸附树脂柱,以水、15%乙醇洗脱除杂,收集70%乙醇洗脱液,浓缩,干燥,得组方提取物G2。
组方三:取姜黄药材,粉碎成粗粉,以80%乙醇提取2次,每次8倍量回流1.5小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得组方提取物G3。
组方四:取丁香药材,粉碎成粗粉,以超临界CO2萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加水煎煮3次,每次5倍量回流1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),用1%HCl调pH至3.5后上阳离子交换树脂柱,依次用水、50%乙醇洗脱除杂,再以含5%氨水的75%的碱性乙醇溶液洗脱,收集洗脱液,减压浓缩、干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以超临界CO2萃取,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A27∶B50∶C 20,即得组方提取物G4。
组方五:取丁香药材,粉碎成粗粉,以25倍量70%乙醇回流提取1小时,提取液减压浓缩,干燥,得提取物A;取夏天无药材,加40%乙醇25倍量回流1.5小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用3%NaOH、10%乙醇洗脱除杂,再以40%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以25倍量95%乙醇回流提取2小时,提取液减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A 36∶B 50∶C 20,即得组方提取物G5。
组方六:取丁香药材,粉碎成粗粉,以5倍量95%乙醇回流提取3次,每次1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩至干,得提取物A;取夏天无药材,加95%乙醇5倍量回流3次,每次1.5小时,滤过,合并滤液,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用4%NaOH、30%乙醇洗脱除杂,再以95%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以25倍量95%乙醇回流提取2小时,提取液减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A 18∶B 60∶C 30,即得组方提取物G6。
组方七:取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加75%乙醇12倍量提取2次,第一次1.5小时,第二次1小时,滤过,合并滤液,浓缩,浓缩液或用1%HCl调pH至4后,上阳离子交换树脂,依次用水、30%乙醇洗脱除杂,再以含5%氨水的75%碱性乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩、干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以12倍量70%提取2次,第一次2小时,第二次1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A36∶B45∶C 30,即得组方提取物G7。
组方八:取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加80%乙醇15倍量回流2次,每次1.5小时,滤过,合并滤液,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用5%NnaOH、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以80%乙醇15倍量回流2次,每次1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A1∶B 80∶C 50,即得组方提取物G8。
组方九:取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加70%乙醇10倍量回流2次,每次1小时,滤过,合并滤液,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水、30%乙醇洗脱除杂,再以65%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以70%乙醇回流2次,每次12倍量1.5小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A40∶B 5∶C 1,即得组方提取物G9。
组方十:取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加65%乙醇11倍量回流2次,每次1小时,滤过,合并滤液,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水、1N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以60%乙醇回流2次,每次10倍量1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A1∶B 80∶C 1,即得组方提取物G10。
组方十一:取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加70%乙醇20倍量回流提取2小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或1N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以70%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以75%乙醇回流2次,每次12倍量1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A40∶B 80∶C 1,即得组方提取物G11。
组方十二:取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加75%乙醇13倍量回流提取2次,每次1小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或2N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以80%乙醇回流2次,每次10倍量1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A1∶B 5∶C 1,即得组方提取物G12。
组方十三:取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加75%乙醇10倍量回流提取2次,每次1小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或2N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以75%乙醇回流2次,每次12倍量1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A40∶B 80∶C 50,即得组方提取物G13。
组方十四:取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加75%乙醇10倍量回流提取2次,每次1小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或2N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;将上述2种提取物按如下重量比混合:A1∶B80,即得组方提取物G14。
组方十五:取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加75%乙醇15倍量回流提取2次,每次1小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或2N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;将上述2种提取物按如下重量比混合:A40∶B5,即得组方提取物G15。
组方十六(G16):取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加75%乙醇15倍量回流提取2次,每次1小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或2N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;将上述2种提取物按如下重量比混合:A20∶B 40,即得组方提取物G16。
组方十七:按重量配比取夏天无,以10倍量的75%乙醇加热回流提取2次,滤过,合并滤液,减压浓缩,真空干燥,得组方提取物G17;
组方十八:按重量配比取姜黄,以10倍量的75%乙醇加热回流提取2次,滤过,合并滤液,减压浓缩,真空干燥,得组方提取物G18;
组方十九:按重量配比取丁香,以10倍量的75%乙醇加热回流提取2次,滤过,合并滤液,减压浓缩,真空干燥,得组方提取物G19;
二、组方一~组方十六(G1~G19)的药效评价
发明人开展了组方一-组方十九的相关药效作用实验。以下是主要研究结果。
1.G1~G19体外抑制乙酰胆碱酯酶、β-分泌酶活性
1.1抑制乙酰胆碱酯酶活性
取96孔板一块,每孔依次加入40μL 0.1M磷酸钠缓冲液(PH7.4)、20μL 2mM 5,5-二硫双硝基苯甲酸(DTNB),10μL待测样品(G1~G10,终浓度为100μg/mL)、10μL乙酰胆碱酯酶溶液(约0.1U),于37℃孵育10分钟。然后加入20μL 2mM底物碘化硫代乙酰胆碱,37℃继续孵育10分钟。加入30μL1%SDS终止酶反应,置酶标仪上,405nm测定光吸收值。DMSO和他克林溶液分别为溶剂对照和阳性药对照,他克林终浓度为1.17μg/mL。样品对乙酰胆碱酯酶的抑制率计算如下:
抑制率=(DMSO溶剂对照OD405值-样品OD405值)/DMSO溶剂对照OD405值×100%
实验结果见表1。G1~G19均具有一定的抑制乙酰胆碱酯酶的活性,其中G2、G4~G16的抑制率≥50%。G4~G16复方组明显优于G1~G3、G17~G19单味药组,G11组抑制率最高,达到88.23%。
表1G1~G19乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选结果
1.2抑制β-分泌酶活性
β-分泌酶:取384孔黑色酶标板一块,加入10μL BACE1底物(750nM)及10μL待测样品(G1~G10,终浓度为83μg/mL),使用振荡器轻轻振荡,时间3分钟,然后加入BACE1酶(2Unit/mL)开始反应,反应条件:37℃,60min。最后加入BACE1终止液终止酶反应。置酶标仪上检测荧光强度,其中激发波长545nm,发射波长585nm。β-分泌酶荧光检测试剂盒购自invitrogen公司,Amyloid Precursor Proteinβ-Secretase Inhibitor(Calbiochem)为β-分泌酶抑制剂的阳性药,终浓度为1.67μg/mL。
实验结果见表2。G1~G19均具有一定的β-分泌酶抑制活性,G3~G16抑制率超过50%,其中G11抑制率高达90%。G4~G16复方组明显优于G1~G3、G17~G19单味药组。
表2G1~G19对β-分泌酶抑制活性筛选结果
2.G1~G19对血管性痴呆模型大鼠脑组织的影响
2.1永久结扎双侧颈总动脉(2VO)法
将动物按体重随机分为22组,即假手术组、模型组、尼莫地平组,G1~G19组。采用永久结扎双侧颈总动脉(2VO)法制作VD动物模型。具体方法如下:大鼠术前12h禁食,4h禁水。用10%水合氯醛(0.30mL/100g)腹腔注射麻醉,保证手术期间有自主呼吸。仰卧固定,颈部去毛、强力碘消毒后沿颈正中切开,分离出双侧颈总动脉,注意保护迷走神经,并套以双重“0”号线,在双侧颈总动脉的近心端及远心端分别结扎,并从中间离断,以确保阻断动脉血流。手术中注意无菌操作,手术切口给予庆大霉素注射液2mL,缝合切口。术后将动物送至通风良好的动物房进行饲养。假手术组大鼠麻醉后只分离双侧颈总动脉,但不结扎、不离断动脉。术后3d开始灌胃给药,给药15d后评价G1~G19对血管性痴呆模型大鼠脑组织的影响。
断头取脑,置于-20℃低温冰箱冷冻20min;去除嗅球、小脑和低位脑干,冠状切片,每片厚2mm,将脑片置于玻璃皿中,加入1%TTC溶液,37℃水浴中避光孵育20min,待显色完全后置于甲醛溶液中固定。将梗死区与切下的5等份脑分别称重,计算梗死区占总脑切片的质量百分比,即梗死范围。其余脑组织置于10%福尔马林内固定,常规取材、石蜡包埋,切片厚4~5μm,HE染色,观察大脑海马区的锥体细胞有无变性、坏死,排列状况,有无炎细胞浸润等病变。实验结果见表3。
表3G1~G19对血管性痴呆模型大鼠脑梗死的影响
(永久结扎双侧颈总动脉法)
与模型组比较,**P<0.01,*P<0.05
与模型组比较,G1~G19和尼莫地平均可使脑梗死范围显著缩小(P<0.01,0.05)。
病理检测结果显示:
假手术组大鼠海马各区锥体细胞排列整齐,层次清楚,锥体细胞核大而圆,核仁明显、数目多。
模型组大鼠海马区的锥体细胞出现不同程度的病变,表现为锥体细胞数量减少,排列紊乱、层次欠清,核固缩的锥体细胞明显增多,病变严重区域锥体细胞几乎全部消失,为固缩核的细胞占据。病变部位主要位于1区,2区,或1区、2区交界处,病变程度多数为中度或重度。
尼莫地平组大鼠海马各区组织学表现与假手术组相同。各区病变程度较模型组明显减轻,仅3只海马1区与2区交界处锥体细胞出现变性、坏死的改变,间质无明显炎细胞浸润。
G1、G2、G3、G17、G18、G19组大鼠海马各区病变程度较模型组有一定减轻,每组有3-5只大鼠的海马区锥体细胞核固缩,病变程度多数为中度。
G4~G16各组大鼠海马各区病变程度较模型组均明显减轻,每组有2-3只大鼠的海马区个别锥体细胞核固缩,病变程度轻度。其它大鼠锥体细胞为多层、排列整齐,细胞无变性、坏死,间质无炎细胞浸润等病变。
2.2中动脉栓塞(MCAO)法
将动物按体重随机分成22组,即假手术组、模型组、尼莫地平组,G1~G19组。参照Longa法制作右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。大鼠称重,10%水合氯醛溶液(0.30mL/100g)腹腔注射麻醉,仰卧固定于手术台上。游离右侧颈总动脉(CCA)及其分支颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)。结扎ECA的分支枕动脉、甲状腺上动脉及颈外动脉末支,分离ICA的颅外分翼腭动脉(PPA)并结扎。用动脉夹夹闭CCA和ICA,在ECA残端距CCA分支约3mm处剪一小口,由ECA向CCA分支插入直径为0.23mm的尼龙线,导入ICA,松开夹闭ICA的动脉夹,尼龙线继续沿ICA颅内走向轻柔缓慢推进,插入深度约18mm。将尼龙线与ECA残端一并结扎,轻开CCA,此时尼龙线插至大脑前动脉,正好封闭大脑中动脉开口,阻断大脑中动脉血流。缺血2h后,将尼龙线轻轻拔出并缝合皮下筋膜及皮肤,则造模完成。假手术组除不插尼龙线阻塞血管外,其他操作与手术组相同。术后第1天即灌胃给药或等体积溶媒,每日1次,连续给药28天后评价G1~G16对大鼠脑组织的影响。
断头取脑,置于-20℃低温冰箱冷冻20min;去除嗅球、小脑和低位脑干,冠状切片,每片厚2mm,将脑片置于玻璃皿中,加入1%TTC溶液,37℃水浴中避光孵育20min,待显色完全后置于甲醛溶液中固定。将梗死区与切下的5等份脑分别称质量,计算梗死区占总脑切片的质量百分比,即梗死范围。其余脑组织置于10%福尔马林内固定,常规取材、石蜡包埋,切片厚4~5μm,HE染色,观察大脑海马区的锥体细胞有无变性、坏死,排列状况,有无炎细胞浸润等病变。实验结果见表4。
表4G1~G19对血管性痴呆模型大鼠脑梗死的影响
(中动脉栓塞法)
与模型组比较,**P<0.01,*P<0.05
与模型组比较,各药物组均可使脑梗死范围显著缩小(P<0.01,0.05)。其中G4~G16优于G1~G3组和G17~G19。
病理检测结果显示:
假手术组大鼠海马各区锥体细胞排列整齐,层次清楚,锥体细胞核大而圆,核仁明显、数目多。模型组大鼠海马区的锥体细胞出现较重的病变,表现为锥体细胞数量减少,排列紊乱、层次欠清,核固缩的锥体细胞明显增多,病变严重区域锥体细胞几乎全部消失,为固缩核的细胞占据。病变部位主要位于1区,2区,病变程度多数为重度。尼莫地平组大鼠海马各区组织学表现与假手术组相同。各区病变程度较模型组明显减轻,仅1只海马1区锥体细胞出现变性、坏死的改变,间质无明显炎细胞浸润。
G1~G3各组大鼠海马各区病变程度较模型组减轻,各有4只大鼠的海马区锥体细胞核固缩,呈中度病变,其它大鼠未见病变。G4~G16各组大鼠海马各区病变程度较模型组均明显减轻,每组有2-3只大鼠的海马区个别锥体细胞核固缩,其它大鼠未见病变。
3.G1~G19对血管性痴呆模型大鼠学习记忆功能的影响
将动物按体重随机分为23组,即假手术组、模型组、多奈哌齐组、银杏叶片组、G1~G19组。采用永久结扎双侧颈总动脉(2VO)法制作VD动物模型。具体方法如下:大鼠术前12h禁食,4h禁水。用10%水合氯醛(0.30mL/100g)腹腔注射麻醉,保证手术期间有自主呼吸。仰卧固定,颈部去毛、强力碘消毒后沿颈正中切开,分离出双侧颈总动脉,注意保护迷走神经,并套以双重“0”号线,在双侧颈总动脉的近心端及远心端分别结扎,并从中间离断,以确保阻断动脉血流。手术中注意无菌操作,手术切口给予庆大霉素注射液2mL,缝合切口。术后将动物送至通风良好的动物房进行饲养。假手术组大鼠麻醉后只分离双侧颈总动脉,但不结扎、不离断动脉。术后3d开始灌胃给药,给药15d后评价G1~G19对血管性痴呆模型大鼠学习记忆功能的影响。
3.1跳台法
大鼠DTT-2型跳台仪只有两个反应箱,分为两间,箱底铺以可通36V连续电刺激的铜栅,每间左后角置一直径和高度均为10cm的橡皮垫作为跳台,此为大鼠回避电击的安全区。训练时同时将每批两只大鼠分别放入跳台仪的两个格子中。先适应环境3min,然后通电,大鼠在铜栅上受到电击,多数正常反应是跳到橡皮垫上,逃避电击。跳下时以大鼠双足同时接触铜栅为触电,视为错误反应,如此训练5min。24h后重新测试,测试时先将大鼠放在橡皮垫上,同时开始记时,记录大鼠第一次跳下时间,此为触电潜伏期(即为错误潜伏期),并记录5min内跳到铜栅上的次数(即为错误次数),作为观察指标。
实验结果见表5。
表5G1~G19对血管性痴呆模型大鼠学习记忆功能的影响(跳台法)
与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,**P<0.01,*P<0.05
与假手术组比较,模型组大鼠5min内错误次数明显增加,潜伏期明显缩短,说明模型复制成功;与模型组相比,G1、G2、G3潜伏期延长,G4~G16组、多奈哌齐组、银杏叶片组大鼠的5min内错误次数明显减少,潜伏期显著延长,具有统计学意义(P<0.01)。其中G11组较优。
3.2水迷宫法
水迷宫由起始点、四个盲端、终点台阶和相应通路结构组成。终点处有一爬梯,大鼠可爬出水面获得休息。实验时,水迷宫内水高9cm,水温控制在25℃±1℃。训练前,先将大鼠放在爬梯附近使其自行爬上两次,之后分三个阶段进行训练。第一阶段:用挡板在A处挡死,使大鼠从A处开始训练;第二阶段:用挡板在B处挡死,由此开始训练;第三阶段:由起点C处开始训练。每一阶段学习训练两次,休息2h后再进行下一阶段训练。因大鼠数量较多,可分阶段每日进行训练,连续训练3d。全部训练完毕后使大鼠休息2h,再将其放于爬梯附近使其自行爬上2次,然后直接将其放于起点C处,记录大鼠游完全程到达爬梯的时间(潜伏期)和进入盲端的次数(错误次数),3min不能游出者按3min记,以此作为学习成绩。本实验,各组动物分阶段连续训练3d,第4天,大鼠于末次给药1h后进行起点至终点的训练。记录大鼠3min内游完全程到达爬梯的时间(潜伏期)和进入盲端的次数(错误次数)。实验结果见表6。
表6G1~G19对血管性痴呆模型大鼠学习记忆功能的影响(水迷宫法)
与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,**P<0.01,*P<0.05
与正常对照组比较,模型组大鼠3min内进入盲端的错误次数明显增加,游完全程达岸时间明显延长,说明记忆障碍模型复制成功;与模型组相比,G4~G16组、多奈哌齐组、银杏叶片组大鼠3min内进入盲端的错误次数明显减少,游完全程达岸时间显著缩短,具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。
4.G1~G19对血管性痴呆模型大鼠相关生化指标的影响
4.1G1~G19对血管性痴呆模型大鼠大脑皮层胆碱乙酰转移酶活性的影响
将动物按体重随机分为22组,即假手术组、模型组、哈伯因组,G1~G19组。采用永久结扎双侧颈总动脉(2VO)法制作VD动物模型。具体方法如下:大鼠术前12h禁食,4h禁水。用10%水合氯醛(0.30mL/100g)腹腔注射麻醉,保证手术期间有自主呼吸。仰卧固定,颈部去毛、强力碘消毒后沿颈正中切开,分离出双侧颈总动脉,注意保护迷走神经,并套以双重“0”号线,在双侧颈总动脉的近心端及远心端分别结扎,并从中间离断,以确保阻断动脉血流。手术中注意无菌操作,手术切口给予庆大霉素注射液2mL,缝合切口。术后将动物送至通风良好的动物房进行饲养。假手术组大鼠麻醉后只分离双侧颈总动脉,但不结扎、不离断动脉。术后3d开始灌胃给药,给药15d后评价G1~G19对大鼠海马及皮层ChAT活性的测定。
断头处死动物,迅速取脑置于冰盒上,取出大脑,分离左侧海马和皮层,脑组织称重,按照重量和体积比1∶10的比例,加入冰冷生理盐水匀浆,4℃,3500r/min,离心10min,取上清立即测定。ChAT的测定是以乙酰辅酶A和胆碱为底物,在ChAT的作用下,反应的生成物和显色剂结合,在324nm处测定吸光度,以此计算ChAT的活力。具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。
实验结果见表7。
表7G1~G19对血管性痴呆模型大鼠大脑皮层胆碱乙酰转移酶活性的影响
与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,**P<0.01,*P<0.05
与模型组比较,G4~G16组可不同程度改善血管性痴呆模型大鼠海马和皮层ChAT活性降低,提示药物可能促进乙酰胆碱在脑内的合成。
4.2G1~G19对血管性痴呆模型大鼠血清SOD活性、MDA含量的影响
将动物按体重随机分为22组,即假手术组、模型组、银杏叶片组,G1~G19组。采用永久结扎双侧颈总动脉(2VO)法制作VD动物模型。具体方法如下:大鼠术前12h禁食,4h禁水。用10%水合氯醛(0.30mL/100g)腹腔注射麻醉,保证手术期间有自主呼吸。仰卧固定,颈部去毛、强力碘消毒后沿颈正中切开,分离出双侧颈总动脉,注意保护迷走神经,并套以双重“0”号线,在双侧颈总动脉的近心端及远心端分别结扎,并从中间离断,以确保阻断动脉血流。手术中注意无菌操作,手术切口给予庆大霉素注射液2mL,缝合切口。术后将动物送至通风良好的动物房进行饲养。假手术组大鼠麻醉后只分离双侧颈总动脉,但不结扎、不离断动脉。术后3d开始灌胃给药,给药15d后评价G1~G19对血管性痴呆模型大鼠血清SOD和MDA的影响。
大鼠经乙醚麻醉,目内眦静脉取血,分离血清,按照试剂盒说明书分别采用黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸显色法测定总SOD活力和MDA含量。实验结果见表8。
表8G1~G19对血管性痴呆模型大鼠血清SOD活性、MDA含量的影响
与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01
与模型组相比,G1、G4~G16组可显著提高总SOD活力,降低MDA含量,推测G1、G4~G16具有神经保护作用,其机制可能与促进自由基清除、减轻脂质过氧化反应有关,其中以G4~G16较优。
4.3G1~G19对血管性痴呆模型大鼠脑组织谷氨酸含量的影响
将动物按体重随机分为22组,即假手术组、模型组、尼莫地平组,G1~G19组。采用永久结扎双侧颈总动脉(2VO)法制作VD动物模型。具体方法如下:大鼠术前12h禁食,4h禁水。用10%水合氯醛(0.30mL/100g)腹腔注射麻醉,保证手术期间有自主呼吸。仰卧固定,颈部去毛、强力碘消毒后沿颈正中切开,分离出双侧颈总动脉,注意保护迷走神经,并套以双重“0”号线,在双侧颈总动脉的近心端及远心端分别结扎,并从中间离断,以确保阻断动脉血流。手术中注意无菌操作,手术切口给予庆大霉素注射液2mL,缝合切口。术后将动物送至通风良好的动物房进行饲养。假手术组大鼠麻醉后只分离双侧颈总动脉,但不结扎、不离断动脉。术后3d开始灌胃给药,给药15d后评价G1~G19对血管性痴呆模型大鼠脑组织谷氨酸含量的影响。
快速断头,低温条件下,剥离双侧海马,收集于1.5mL离心管内并标记,置-80℃冰箱保存备用。取海马约50mg,加200μL无水乙醇在冰台上磨成匀浆,吸出200μL匀浆液,在16000r/min、4℃条件下离心20min,取80μL上清液HPLC测定氨基酸含量。实验结果见表9。
表9G1~G19对血管性痴呆模型大鼠脑组织谷氨酸含量的影响
与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,**P<0.01
与假手术组组比较,模型组大鼠谷氨酸含量显著升高;与模型组比较,G2~G16组均可显著降低谷氨酸含量(P<0.01,0.05)。其可能通过降低兴奋性神经递质谷氨酸对抗血管性痴呆损伤。
4.4G1~G19对血管性痴呆模型大鼠炎症因子IL-6、TNF-α的影响
将动物按体重随机分为22组,即假手术组、模型组、尼莫地平组,G1~G19组。采用永久结扎双侧颈总动脉(2VO)法制作VD动物模型。具体方法如下:大鼠术前12h禁食,4h禁水。用10%水合氯醛(0.30mL/100g)腹腔注射麻醉,保证手术期间有自主呼吸。仰卧固定,颈部去毛、强力碘消毒后沿颈正中切开,分离出双侧颈总动脉,注意保护迷走神经,并套以双重“0”号线,在双侧颈总动脉的近心端及远心端分别结扎,并从中间离断,以确保阻断动脉血流。手术中注意无菌操作,手术切口给予庆大霉素注射液2mL,缝合切口。术后将动物送至通风良好的动物房进行饲养。假手术组大鼠麻醉后只分离双侧颈总动脉,但不结扎、不离断动脉。术后3d开始灌胃给药,给药15d后评价G1~G19对大鼠炎症因子IL-6、TNF-α的影响。
断头取脑。取缺血侧脑组织用TNF-α的ELISA试剂盒测定脑组织中TNF-α的表达。取血3mL,于3000×g离心5min,取上清,于-70℃保存,待用。按照放射免疫试剂盒测定IL-6。实验结果见表10。
表10G1~G19对血管性痴呆模型大鼠炎症因子IL-6、TNF-α的影响
与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,**P<0.01,*P<0.05
与模型组比较,G1、G4~G16组均可降低IL-6、TNF-α含量。IL-6是由T细胞、成纤维细胞、单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞等产生,是一种具有广泛生物学功能的细胞因子,参与机体免疫应答和炎症反应,可受IL-1β、TNF-α的调节而上调。TNF-α在脑缺血后诱发的白细胞浸润和组织损伤中起重要作用,可引起多核白细胞聚集和激活并释放炎症介质,因此通过各种措施阻断TNF-α的表达可减少缺血性神经元损伤。结果提示G1、G4~G16减轻脑缺血组织的炎症反应是其治疗血管性痴呆的机制之一。
5.G1~G19对AD模型大鼠学习记忆及海马AchE、ChAT活性的影响
AD大鼠分组及模型制作:将SD雄性大鼠按体重随机分为22组,即假手术组、模型组、多奈哌齐组、G1~G19组。大鼠用质量浓度为200g·L-1乌拉坦3mL·kg-1腹腔注射麻醉后,固定于脑立体定向仪上。参照大鼠脑立体定位图谱,以前囟为零点,AP=-3·5mm,ML=2·0mm,DV=3·0mm为穿刺点,钻孔穿颅,用微量注射器将Aβ25~35各1μL(10μg)在5min缓慢注入,留针5min,对照组注射等量的生理盐水,退针缝合伤口。术前3d及术后18d药物处理组灌胃给予相应药物,模型组给予等量溶剂。
5.1大鼠空间学习记忆能力测试(水迷宫法)
水迷宫由起始点、四个盲端、终点台阶和相应通路结构组成。终点处有一爬梯,大鼠可爬出水面获得休息。实验时,水迷宫内水高9cm,水温控制在25℃±1℃。训练前,先将大鼠放在爬梯附近使其自行爬上两次,之后分三个阶段进行训练。第一阶段:用挡板在A处挡死,使大鼠从A处开始训练;第二阶段:用挡板在B处挡死,由此开始训练;第三阶段:由起点C处开始训练。每一阶段学习训练两次,休息2h后再进行下一阶段训练。因大鼠数量较多,可分阶段每日进行训练,连续训练3d。全部训练完毕后使大鼠休息2h,再将其放于爬梯附近使其自行爬上2次,然后直接将其放于起点C处,记录大鼠游完全程到达爬梯的时间(潜伏期)和进入盲端的次数(错误次数),3min不能游出者按3min记,以此作为学习成绩。本实验,各组动物分阶段连续训练3d,第4天,大鼠于末次给药1h后进行起点至终点的训练。记录大鼠3min内游完全程到达爬梯的时间(潜伏期)和进入盲端的次数(错误次数)。实验结果见表11。
表11G1~G19对AD模型大鼠学习记忆功能的影响(水迷宫法)
与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,**P<0.01,*P<0.05
与正常对照组比较,模型组大鼠3min内进入盲端的错误次数明显增加,游完全程达岸时间明显延长,说明记忆障碍模型复制成功;与模型组相比,G2、G3组大鼠3min内进入盲端的错误次数减少,游完全程达岸时间缩短,与模型组比较有差异(P<0.05);G4~G16组、多奈哌齐组大鼠3min内进入盲端的错误次数明显减少,游完全程达岸时间显著缩短,具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。
5.2脑匀浆AchE、ChAT活力的测定
行为学测试完成后迅速处死大鼠,在冰盘上断头取脑,取右侧脑组织分离出海马及周围组织,用冰生理盐水冲洗,除去血液,滤纸吸干,称脑质量。在冰浴条件下制成10%组织匀浆,离心取上清,用比色法测定脑组织中AchE、ChAT的活力,所有操作按照南京建成生物工程研究所试剂盒说明书进行。实验结果见表12。
表12G1~G19对AD模型大鼠海马AchE、ChAT活性的影响
与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,**P<0.01,*P<0.05
与模型组相比,G2、G4~G16组可显著降低大鼠脑内AchE活性,提高ChAT活性,推测G2、G4~G16抗AD作用机制可能与保护中枢胆碱能系统有关。
本发明的有益效果
发明人通过深入系统研究,筛选出了能活血化瘀、抗炎、抑制乙酰胆碱酯酶和β-分泌酶、改善VD模型动物学习记忆能力的中药配方,即由夏天无提取物、姜黄提取物、丁香提取物3味原料组成的复方。
虽然现有技术中,提示姜黄提取物、夏天无提取物、丁香提取物有预防和治疗血管性痴呆的作用,不过本发明的组合物治疗效果更好,而且组合物与单味提取物以及单味药材的比较试验显示,组合物的确有非常好的技术效果,疗效上明显优于单味药材提取物的疗效。
与现有技术中治疗血管性痴呆的大复方相比,本发明药味不同,且本发明的原料药少。与现有技术相比,本发明同样具有以下作用:
1.能够抑制乙酰胆碱酯酶和β-分泌酶的活性,促进乙酰胆碱在脑中的合成;
2.缩小脑梗死范围,明显减轻海马区锥体细胞病变程度,降低海马区和皮层中ChAT活性;
3.能够提高VD模型总SOD活性,降低MDA含量和神经性递质谷氨酸含量,从而保护神经、对抗血管性痴呆损伤;
4.能够降低IL-6和TNF-α的含量,减轻脑缺血组织的炎症反应,有效降低脑缺血引起的脑组织损伤,明显减轻痴呆症状;
本发明尤其适用于血管性痴呆(VD)的预防和治疗,对老年性痴呆(AD)也具有明显的防治作用。
具体实施方式
本发明公开了一种治疗血管性痴呆疾病的中药组合物及其的制备方法,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明当中。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
实施例1
取丁香药材,粉碎成粗粉,以超临界CO2萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加水煎煮3次,每次5倍量回流1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),用1%HCl调pH至3.5后上阳离子交换树脂柱,依次用水、50%乙醇洗脱除杂,再以含5%氨水的75%的碱性乙醇溶液洗脱,收集洗脱液,减压浓缩、干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以超临界CO2萃取,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A27∶B 50∶C20,得组方提取物,加入中药制剂中的常规药用辅料,制成滴丸剂。
实施例2
取丁香药材,粉碎成粗粉,以25倍量70%乙醇回流提取1小时,提取液超滤,得超滤液A;取夏天无药材,加40%乙醇25倍量回流1.5小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用3%NaOH、10%乙醇洗脱除杂,再以40%的乙醇洗脱,收集洗脱液,超滤,得超滤液B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以25倍量95%乙醇回流提取2小时,提取液超滤,得超滤液C。将上述3种超滤液按如下重量比混合:A36∶B 50∶C 20,得混合液,加入中药制剂中的常规药用辅料,冷冻干燥,制成注射用粉针。
实施例3
取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加75%乙醇12倍量提取2次,第一次1.5小时,第二次1小时,滤过,合并滤液,浓缩,浓缩液或用1%HCl调pH至4后,上阳离子交换树脂,依次用水、30%乙醇洗脱除杂,再以含5%氨水的75%碱性乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩、干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以12倍量70%提取2次,第一次2小时,第二次1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A36∶B 45∶C 30,得组方提取物,加入中药制剂中常用辅料,制成散剂。
实施例4
取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加80%乙醇15倍量回流2次,每次1.5小时,滤过,合并滤液,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用4%NaOH、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以80%乙醇15倍量回流2次,每次1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A1∶B 80∶C 50,得组方提取物,加入中药制剂中的常规药用辅料,制成口服液。
实施例5
取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加70%乙醇10倍量回流2次,每次1小时,滤过,合并滤液,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水、30%乙醇洗脱除杂,再以65%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以70%乙醇回流2次,每次12倍量1.5小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A40∶B 5∶C 1,即组方提取物,加入中药制剂中的常规药用辅料,制成颗粒剂。
实施例6
取丁香药材,粉碎成粗粉,以5倍量95%乙醇回流提取3次,每次1小时,滤过,得滤液A;取夏天无药材,加95%乙醇5倍量回流3次,每次1.5小时,滤过,合并滤液,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用4%NaOH、30%乙醇洗脱除杂,再以95%的乙醇洗脱,收集洗脱液,超滤,得滤液B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以25倍量95%乙醇回流提取2小时,提取液滤过,得滤液C,将上述滤液按如下重量比混合:A18∶B 60∶C 30,得混合滤液,加入中药制剂中的常规药用辅料,制成注射剂。
实施例7
取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加65%乙醇11倍量回流2次,每次1小时,滤过,合并滤液,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或1N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,以β-环糊精包合,得夏天无包合物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以60%乙醇回流2次,每次10倍量1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,以β-环糊精包合,得姜黄包合物C。将上述提取物A和包合物B、C按如下重量比混合:A 1∶B80∶C 1,得组方提取物,加入中药制剂中的常规药用辅料,制成胶囊剂。
实施例8
取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加70%乙醇20倍量回流提取2小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或1N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以70%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以75%乙醇回流2次,每次12倍量1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A 40∶B 80∶C 1,得组方提取物,加入中药制剂中的常规药用辅料,制成胶囊。
实施例9
取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加75%乙醇13倍量回流提取2次,每次1小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或2N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以80%乙醇回流2次,每次10倍量1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,得提取物C。将上述3种提取物按如下重量比混合:A1∶B 5∶C 1,得组方提取物,加入中药制剂中的常规药用辅料,制成软胶囊。
实施例10
取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加75%乙醇10倍量回流提取2次,每次1小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或2N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,以β-环糊精包合,得夏天无包合物B;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以75%乙醇回流2次,每次12倍量1小时,滤过,合并滤液,减压浓缩、干燥,以β-环糊精包合,得姜黄包合物C。将上述提取物A和包合物B、C按如下重量比混合:A 40∶B80∶C 50,得组方提取物,加入中药制剂中的常规药用辅料,制成散剂。
实施例11
取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加75%乙醇10倍量回流提取2次,每次1小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或2N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;将上述2种提取物按如下重量比混合:A 1∶B 80,得组方提取物,加入中药制剂中的常规药用辅料,制成浓缩丸剂。
实施例12
取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加75%乙醇15倍量回流提取2次,每次1小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或2N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B;将上述2种提取物按如下重量比混合:A40∶B 5,得组方提取物,加入中药制剂中的常规药用辅料,制成片剂。
实施例13
取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法萃取挥发油,得提取物A;取夏天无药材,加75%乙醇15倍量回流提取2次,每次1小时,滤过,滤液减压浓缩至1∶1(药液体积V/生药重量W),浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,依次用水或2N氨水、30%乙醇洗脱除杂,再以75%的乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩、干燥,得提取物B,以β-环糊精包合,得夏天无包合物B;将上述提取物A和夏天无包合物B按如下重量比混合:A20∶B 40,得组方提取物,加入中药制剂中的常规药用辅料,制成水丸剂。
Claims (18)
1.一种治疗痴呆的中药组合物,其特征在于,该中药组合物由以下重量份的原料药制成:夏天无提取物1~40;姜黄提取物5~80;丁香提取物0~50;该中药组合物中各组分的制备方法为:取夏天无药材,加5~25倍量的水或40~95%乙醇提取1~3次,滤过,合并滤液,浓缩,浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,或用1%HCl调pH至3~4后上阳离子交换树脂,依次用水或碱水、10~30%乙醇洗脱除杂,再以40~95%的乙醇或用含5%氨水的75%碱性乙醇溶液洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥,得夏天无提取物;姜黄药材,粉碎成粗粉,以5~25倍量60~95%乙醇提取1~3次或超临界CO2萃取,提取液或萃取液浓缩、干燥,得姜黄提取物;丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法或超临界CO2萃取挥发油;或以5~25倍量60~95%乙醇提取1~3次,提取液浓缩,干燥,得丁香提取物。
2.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物由以下重量份的原料药制成:夏天无提取物27;姜黄提取物50;丁香提取物20。
3.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物由以下重量份的原料药制成:夏天无提取物36;姜黄提取物40;丁香提取物25。
4.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物由以下重量份的原料药制成:夏天无提取物18;姜黄提取物60;丁香提取物30。
5.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物由以下重量份的原料药制成:夏天无提取物36;姜黄提取物45;丁香提取物22。
6.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物由以下重量份的原料药制成:夏天无提取物1;姜黄提取物80;丁香提取物50。
7.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物由以下重量份的原料药制成:夏天无提取物40;姜黄提取物5;丁香提取物1。
8.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物由以下重量份的原料药制成:夏天无提取物2;姜黄提取物75;丁香提取物2。
9.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物由以下重量份的原料药制成:夏天无提取物23;姜黄提取物77;丁香提取物1。
10.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物由以下重量份的原料药制成:夏天无提取物5;姜黄提取物8;丁香提取物5。
11.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物由以下重量份的原料药制成:夏天无提取物40;姜黄提取物80;丁香提取物50。
12.根据权利要求1~11中任一权利要求所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物中各组分的制备方法为:取夏天无药材,加5~25倍量的水或40~95%乙醇提取1~3次,滤过,合并滤液,浓缩,浓缩液直接上大孔吸附树脂柱,或用1%HCl调pH至3~4后上阳离子交换树脂,依次用水或3~5%NaOH或1~2N氨水、10~30%乙醇洗脱除杂,再以40~95%的乙醇或用含5%氨水的75%碱性乙醇溶液洗脱,收集洗脱液,浓缩,干燥,得夏天无提取物;取姜黄药材,粉碎成粗粉,以5~25倍量60~95%乙醇提取1~3次或超临界CO2萃取,提取液或萃取液浓缩、干燥,得姜黄提取物;取丁香药材,粉碎成粗粉,以水蒸汽蒸馏法或超临界CO2萃取挥发油;或以5~25倍量60~95%乙醇提取1~3次,提取液浓缩,干燥,得丁香提取物。
13.据权利要求1~11中任一权利要求所述的中药组合物,其特征在于,按重量配比取夏天无提取物、姜黄提取物、丁香提取物,混合;加入中药制剂中的常规药用辅料,采用药剂学中常规的制药方法,制剂成型,即得。
14.权利要求1~11中任一权利要求所述的中药组合物,其特征在于,取夏天无提取物,以β-环糊精包合;丁香提取物,以β-环糊精包合;加入姜黄提取物,混合,再加入中药制剂中的常规药用辅料,采用药剂学中常规的制药方法,制剂成型,即得。
15.权利要求1~11中任一权利要求所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物制备成临床上可接受的胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、散剂、液体制剂或注射用粉针。
16.权利要求1~11中任一权利要求所述的中药组合物,其特征在于,该中药组合物制备成临床上可接受的注射液。
17.权利要求1~11中任一权利要求所述的中药组合物在制备治疗痴呆药物中的应用。
18.权利要求1~11中任一权利要求所述中的药组合物在制备治疗血管性痴呆药物中的应用。
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