CN1379666A - 非－肽GnRH药物、制备它们的方法和中间体 - Google Patents

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Abstract

本发明公开能够抑制促性腺激素－释放激素的作用的非－肽GnRH药物。此类化合物及其药学上可接受的盐、多聚体、前药和活性代谢产物适合于治疗哺乳动物的生殖疾病和类固醇激素－依赖性肿瘤以及调节生育率,即抑制促性腺激素释放有效的疾病。还公开了合成该化合物的方法和用于其制备的中间体。

Description

非-肽GnRH药物、制备它们的方法和中间体
本发明的技术领域和工业应用
本发明一般涉及影响人促性腺激素-释放激素(GnRH)作用的化合物。更具体地说，它涉及非-肽GnRH拮抗剂或激动剂及它们的制备。这些非-肽GnRH药物具有有益的物理、化学和生物学特性，因而是用于通过脑垂体-生殖腺轴(pituitary-gonadal axis)的调节介导的疾病或病症的有用的药物。本发明化合物避免了肽药物的降解和生物分布问题。
发明背景
促性腺激素-释放激素(GnRH)，也称作促黄体生成素-释放激素(LH-RH)，在繁殖的生物学方面起着重要的作用。大量的各种类似物已用于增加临床适应症的数目。GnRH十肽(pyro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2，即p-EHWSYGLRPG-NH2)是在下丘脑中间基底部的神经元中由较大的前体经酶加工而产生的。该十肽以脉冲的方式释放进入垂体门脉循环系统，在那里GnRH与位于脑基底的垂体前叶的高亲和力受体(7-跨膜G-蛋白偶联受体)相互作用。在垂体中，GnRH触发两种促性腺激素的释放：促黄体生成素(LH)和促卵泡激素(FSH)。LH在睾丸和卵巢中分别刺激睾酮和雌二醇的产生。FSH刺激女性卵泡的生长和男性精子的形成。当正常的生理功能进行时，GnRH的脉冲-定时释放和浓度水平对于生殖腺的类固醇生成及对于与生长和性发育有关的正常生殖功能都是至关重要的。
垂体对GnRH的应答在一生中有很大的变化。GnRH和促性腺激素在妊娠的大约10周时首先在胎儿中出现。在出生后的头3个月期间出现短暂升高后，对GnRH的敏感性降低，直至青春期开始。青春期前，FSH对GnRH的应答比LH的应答更强。一旦青春期开始，对GnRH的敏感性增加，而脉冲LH的分泌接着发生。青春期后期和整个生殖年龄期，每日24小时无时不发生GnRH的脉冲释放，同时LH的反应性比FSH的反应性更强。脉冲GnRH的释放引起脉冲LH和FSH的释放，并且因此引起睾酮和雌二醇从生殖腺中释放出来。绝经后，FSH和LH的浓度升高，而绝经后FSH水平高于LH水平。
长期给予动物或人GnRH激动剂和拮抗剂引起LH和FSH两者的循环水平降低。GnRH激动剂为模拟内源性GnRH刺激垂体上的受体，引起LH和FSH释放的化合物。在生殖腺激素产生短暂升高或“潮红(flare)”应答后，长期给予GnRH激动剂引起GnRH应答的下调。GnRH受体下调和垂体的脱敏引起LH和FSH的循环水平降低。不管是否经历症状加重的激素潮红现象，GnRH激动剂总是用于性-类固醇-依赖性病理生理学过程的选择性治疗。例如，GnRH激动剂已用于减少睾酮的生成，由此减少良性前列腺增生(BPH)的前列腺体积并减慢前列腺癌的肿瘤生长。这些化合物也被用于治疗乳腺癌和卵巢癌。
最近，GnRH拮抗剂已用于临床评价。GnRH拮抗剂具有对垂体的快速作用，而无观察到的与激动剂有关的潮红现象。GnRH拮抗剂(通常为十肽)的用途已在文献中报道用于治疗乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌。类似激动剂的拮抗剂的其它用途包括：子宫内膜异位(包括伴有疼痛的子宫内膜异位)、子宫肌瘤、卵巢和乳房囊性疾病(包括多囊性卵巢疾病)、前列腺肥大、闭经(如继发性闭经)和早熟性青春期。这些化合物也可以用于经前综合征(PMS)症状的缓解。而且，拮抗剂可用于调节雄性哺乳动物中促性腺激素的分泌，以抑制精子发生(如男性避孕药)，并用于治疗男性性罪犯。重要的是，发现GnRH拮抗剂(和激动剂)可用于需要可逆性地抑制垂体-生殖腺轴的治疗中。
垂体前叶细胞和几种肿瘤细胞类型的GnRH受体的存在提供了开发作用于这些受体以治疗激素-依赖性和激素非依赖性两类癌的药物的机会。
50年来，雄激素剥夺一直是治疗转移性的前列腺癌的最有效的系统疗法。道理很简单，前列腺的正常生长、维持和功能均需要雄激素。但是，前列腺癌和良性前列腺增生在男性中已很常见，而且持续接触雄激素的环境还在发展。因此，使用阻断垂体-生殖腺轴的GnRH拮抗剂可减少雄激素的产生并引起肿瘤生长调节。而且，GnRH拮抗剂可通过阻断肿瘤细胞上的受体，而具有直接影响肿瘤生长的作用。对于对性激素和GnRH两者直接反应的这些肿瘤类型而言，拮抗剂通过两种机制应能有效减慢肿瘤生长。由于GnRH受体存在于许多前列腺癌和乳腺癌细胞中，目前推测GnRH拮抗剂也可有效治疗非-激素-依赖性肿瘤。最近的文献实施例说明，GnRH受体存在于一些癌细胞系中，包括：
●前列腺癌：GnRH激动剂在体外和体内对雄激素-依赖性(LNCaP)和雄激素-非依赖性(DU 145)人前列腺癌细胞系的生长均发挥直接抑制作用。Montagnani等，Arch.ltal.Urol.Androl.1997，69(4)，257-263。GnRH拮抗剂抑制裸小鼠中雄激素-非依赖性PC-3前列腺癌的生长。Jungwirth等，Prostate 1997，32(3)，164-172。
●卵巢癌：The demonstration of GnRH receptors in human ovariancancers provides a rationale for the use of therapeutic approaches based onGnRH analogues in this malignancy.Srkalovic等，Int.J.Oncol.1998，12(3)，489-498。
●乳腺癌：乳腺癌是40岁以上妇女中最常见类型的癌症，是导致女性与癌症有关的死亡的首要原因。系统性内分泌干预疗法代表控制晚期乳腺癌，尤其是患有雌激素-依赖性癌症的主要治疗选择。促性腺激素-释放激素及其受体的基因已表达在有纤维囊性疾病和癌症的人乳腺中。Kottler等，Int.J.Cancer.1997，71(4)，595-599。
因此，可获得的GnRH拮抗剂基本是GnRH的肽类似物。见，例如，国际公布号WO 93/03058。肽激素的肽拮抗剂往往是相当有效的；然而，由于肽被生理上的酶降解且常常在接收治疗的有机体内分布较差，肽拮抗剂的应用一般也产生了有关的问题。因此，它们作为药物的有效性受到了限制。结果，目前存在着对肽激素GnRH的非-肽拮抗剂的需求。
发明概述
本发明的一个目的是开发利用上述两种作用机制的小分子非-肽GnRH拮抗剂。非-肽GnRH剂与肽比较具有有利的物理、化学和生物学特性，因而将是用于通过垂体-生殖腺轴介导的疾病并直接靶向于肿瘤细胞上的受体的有用的药物。有一种开发作用于这些受体以治疗激素-依赖性和激素-非依赖性癌的药物的需求。
本发明的另一个目的是提供为GnRH药物(激动剂或拮抗剂)的非-肽化合物，它们结合GnRH受体并因此调节活性，特别是提供为有效的GnRH拮抗剂的非-肽化合物。本发明的另一个目的是对需要治疗性调节GnRH的个体提供有效的治疗并提供治疗由GnRH调节介导的疾病和病症的方法。
通过本发明的非-肽GnRH化合物已达到这些目的，这些化合物用作治疗由GnRH调节介导的适应症的药物。本发明化合物具有比肽化合物有利的药学上的优点，因为它们提供更好的生物分布和对生理上的酶降解的耐受性。本发明还提供合成所述化合物以及用于制备该化合物的中间体化合物的方法。
本发明涉及通式I的化合物，
Figure A9981228500101
其中：
X选自C＝O、C＝S、S＝O和S(O)2；
Figure A9981228500111
为含有1-4个，优选2或3个选自N、O和S的杂原子的5元杂环，其中所述环可以是饱和的、部分不饱和的，或完全不饱和的，且可以是芳环；
R1和R2独立选自H和低级烷基；
R3选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R4和R5独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R6和R7独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；或R6和R7与它们所结合的原子一起形成一个任选含有多至4个选自O、N和S的杂原子的任选取代的5元或6元环；
R8为亲脂性的部分，选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为6-20；和
R9选自H、取代的和未取代的烷基，优选低级烷基。
在一些实施方案中，R1或R2可以是-OH或＝O；和/或R8也可以是氢；
和/或R可以是COR或氢；和/或R8可以具有任何所需数目的碳原子；
和/或R8和R9也可以形成环；和/或任何相邻的R基团，如R5和R6或R3和R4可以形成环，如对R6和R7所描述的环；
和/或R6可以是COR；和/或所述(杂)基团可以是取代的或未取代的。
在另一个实施方案中，R8和/或R9也可选自杂环基或与式I的氮形成酰胺键的任何化合物。即，R8和R9可以是由结合于通式I的氮的碳起始的任何基团。
本发明的优选化合物具有通式II：
Figure A9981228500121
式中的变量如上定义。
特别优选的化合物含有式III：
Figure A9981228500122
其中R8如上定义。优选的R8基团包括：芳基、-CH2-芳基、-CH2-杂芳基、-CH2-环烷基和-(CH2)n-O-芳基，其中n为1-4的整数。
本发明的优选化合物包括：包括在环己基取代基上的顺式和反式两种异构体；
Figure A9981228500131
Figure A9981228500141
除去上式的化合物外，本发明的GnRH药物包括这些化合物的药学上可接受的盐、多聚体(multimeric)形式、前药和活性代谢产物。这些非-肽药物具有比肽药物有利的药学上的优点，因为它们提供更好的生物分布和对生理的酶降解的耐受性。
本发明还涉及含有治疗有效量的本发明的GnRH药物和药学上可接受的载体或稀释剂混合的药用组合物。而且，本发明涉及调节哺乳动物中促性腺激素分泌的方法，包括给予治疗有效量的本发明的GnRH药物。
本发明还涉及用于制备式I化合物的中间体的方法和中间体。
本发明的其它特征、目的和优点将通过下面的本发明的详细叙述及其优选的实施方案而变得显而易见。
发明详述和优选的实施方案
本发明的一些化合物含有一个或多个不对称中心，因而可以产生对映体、非对映异构体和其它立体异构形式。本发明意欲包括所有此类可能的立体异构体以及它们的外消旋和旋光纯形式。当在此描述的化合物含有烯双键时，它们计划包括E和Z两种几何异构体。
在此涉及的化学结构式可以显示出互变异构现象。由于在本说明书中所示的化学结构式仅仅描述可能的互变异构形式的一种，尽管如此，仍应该理解，本发明包括所有的互变异构形式。
术语“烷基”指具有1-12个碳原子的直链-或支链烷基。烷基的实例包括甲基(Me)、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基(tBu)、戊基、异戊基、叔戊基、己基、异己基等。术语“低级烷基”指具有1-8个碳原子的烷基(C1-8烷基)。合适的取代的烷基包括氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、2-氟乙基、3-氟丙基、羟甲基、2-羟乙基、3-羟丙基等。
术语“链烯基”指具有2-12个碳原子的直链-和支链烯基。举例说明的链烯基包括丙-2-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、2-甲基丙-2-烯基、己-2-烯基等。
术语“链炔基”指具有2-12个碳原子的直链-和支链炔基。链炔基的实例包括丙-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、己-2-炔基等。
术语“碳环”指每个环具有3-7个碳原子的单环或多环碳环结构(不具有杂原子)，所述环可以是饱和的、部分饱和的或不饱和的。碳环的实例包括环烷基和芳基。
术语“杂环”指每个环具有一个或多个选自N、O和S的杂原子，且具有3-7个原子(碳原子加任何杂原子)的单环或多环结构，所述环可以是饱和的、部分饱和的或不饱和的。杂环的实例包括四氢呋喃基、四氢吡喃基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基等。
在此所用的术语“环烷基”指具有3-12个碳原子的饱和碳环，包括二环和三环环烷基结构。合适的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。
术语“芳基”和“杂芳基”指不饱和的单环和多环或芳族环结构，所带的“芳基”指为碳环的芳基，“杂芳基”指为杂环的芳基。芳环结构的实例包括苯基、萘基、1，2，3，4-四氢萘基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡唑基、咪唑基、吡嗪基、哒嗪基、1，2，3-三嗪基、1，2，4-噁二唑基、13，4-噁二唑基、1-H-四唑基-5-基、吲哚基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基(硫茚基)等。这些部分可以由一个或多个合适的取代基任选取代，例如，选自卤素(氟、氯、溴或碘)、低级烷基、OH、NO2、CN、CO2H、O-低级烷基、芳基、芳基低级烷基、CO2CH3、CONH2、OCH2CONH2、NH2、SO2NH2、OCHF2、CF3、OCF3等的取代基。这些部分也可被稠合的环结构或桥基如OCH2-O任选取代。
术语“芳基-低级烷基”意指带有芳基的烷基。例子包括苄基、苯乙基、吡啶甲基、萘甲基等。芳基低级烷基可被任选取代。
一般来说，对于式I的变量，各种部分或官能基团可以由一个或多个合适的取代基任选取代。合适的取代基的实例包括卤素(氟、氯、溴或碘)、低级烷基、-OH、-NO2、-CN、-CO2H、-O-低级烷基、-芳基、-芳基低级烷基、-CO2CH3、-CONH2、OCH2CONH2、NH2、-SO2NH2、卤代烷基(如-CF3、-CH2CF3)、-O-卤代烷基(如-OCF3、-OCHF2)等。
除了式I化合物，本发明的GnRH药物还包括式I化合物的药学上可接受的盐、多聚体形式、前药和活性代谢产物。这些非-肽药物具有比肽药物有利的药学上的优点，因为它们提供更好的生物分布和对生理的酶降解的耐受性。
另外，当应用时，式I化合物打算包括溶剂化物以及该化合物的未拆分形式。因此，式I化合物包括具有指明结构的化合物，包括水合物以及非水合物形式。
如上面所指，根据本发明的GnRH药物也包括式I化合物的活性互变异构形式和立体异构形式，其可以采用本领域已知的技术容易地获得。例如，通过立体特异性合成方法，如采用手性合成子和手性试剂可以制备旋光性(R)和(S)异构体，或者采用常规技术可以拆分外消旋混合物。
GnRH药物进一步包括式I化合物的活性形式的多价或多聚体形式。这样的“多聚体”可以通过将活性化合物的彼此十分相似的多个复制品，采用由载体部分提供的支架结构连接或定位来制备。可以测试各种大小的多聚体(即带有不同数目的活性化合物的复制品)，以达到与受体结合相符的最佳大小的多聚体。提供具有受体-结合部分之间的最佳间距的活性受体-结合化合物的这种多价形式，可增强受体结合力(见，例如，Lee等，Biochem.，1984，23：4255)。技术人员通过选择合适的载体部分或连接单位，可以控制多价和间距。有用的部分包括含有多个官能团的分子载体，该官能团可与本发明活性化合物有关的官能团反应。各种载体部分可被用来构建高活性的多聚体，包括蛋白质如BSA(牛血清白蛋白)或HAS，肽如五肽、十肽、十五肽等，以及非-生物的化合物，后者是根据其在靶生物体内对吸收力、转运和持久性的有益作用进行选择的。可以选择载体部分上的官能团，如氨基、巯基、羟基和烷基氨基，以获得对本发明化合物的稳定的连键、固定化合物之间的最佳间距和最佳生物学特性。
另外，本发明的GnRH药物包括式I化合物的药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的”指的是药学上可接受的且对被给予GnRH药物的对象基本无毒的盐形式。药学上可接受的盐包括由合适的无毒有机酸或无机酸或无机碱形成的常规的酸加成盐或碱加成盐。酸加成盐的实例包括衍生自下列无机酸的酸加成盐：例如盐酸、氢溴酸。氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸，以及衍生自下列有机酸的酸加成盐：例如对甲苯磺酸、甲磺酸、乙-二磺酸、羟乙磺酸、草酸、对-溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、乙酸、苯乙酸、丙酸、羟基乙酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、谷氨酸、水杨酸、对氨基苯磺酸和富马酸。示例性的碱加成盐包括衍生自氢氧化铵的碱加成盐(例如，氢氧化季铵如氢氧化四甲基铵)，衍生自无机碱如碱金属或碱土金属(如钠、钾、锂、钙或镁)的氢氧化物的碱加成盐，以及衍生自有机碱如胺、苄胺、哌啶和吡咯烷的碱加成盐。
术语“前药”指的是药学上可接受的式I化合物(或其盐)的代谢前体。前药给予患者时，可以是无活性的，但在体内转化成式I的活性化合物。术语“活性代谢产物”指的是药学上可接受的和有效的式I化合物的代谢产物。式I化合物的前药和活性代谢产物可以用本领域已知的技术测定。
可以采用多种已知的测定法和技术测定各种形式的化合物在GnRH系统中的活性水平。采用配体-结合测定以测定与相关受体的相互作用。在结合具有重要性时，可以使用标记的受体，其中标记为荧光剂、酶、放射同位素等，其记录受体结合的可定量变化。或者，技术人员可提供抗体给受体，其中抗体是标记的，其可使信号放大。结合也可通过配体结合受体的竞争替换测定，其中配体是用可检测的标记物标记的。当激动剂和/或拮抗剂活性具有重要性时，可以研究完整的有机体或细胞，并可测量有机物或细胞对相关化合物结合的应答的功能变化。测定细胞应答的各种装置都是可以获得的，例如，从Molecular-Devices，Redwood City，California获得的微生理仪(microphysiometer)。用于测定GnRH拮抗剂活性的体外和体内测定法是本领域已知的。见，例如，Bowers等，“用1ng LHRH处理的培养的大鼠垂体细胞中的LH抑制”，Endocrinology，1980，106：675-683(在体外)和Corbin等，“在大鼠中的抗排卵活性(AOA)”，Endocr.Res.Commun.1975，2：1-23(在体内)。可以采用的具体测试方案描述于下。
例如，通过如下的测定细胞外酸化率的变化，可以功能性地评价GnRH-受体拮抗剂。测定化合物阻断由表达人GnRH受体的HEK 293细胞中GnRH介导的细胞外酸化率的能力作为化合物的体外拮抗活性的测量。大约100000个细胞/室被固定在琼脂悬浮液培养基(Molecular-Devices)，并使用Cytosensor_Microphysiometer(MolecularDevices)灌注未缓冲的MEM培养基。使细胞平衡，直至基础酸化率保持稳定(约1小时)。绘制对GnRH(10-11M至10-7M)的对照剂量-反应曲线。使化合物温育15分钟，然后用GnRH刺激，并评价拮抗剂活性。用试验化合物温育后，获得在各种浓度的试验化合物存在或不存在下对GnRH的重复剂量-反应曲线。对化合物进行Schild回归分析，以确定化合物是否通过与GnRH受体的竞争性相互作用来拮抗GnRH介导的细胞外酸化率的增加。
在另一个试验中，总磷酸肌醇酯的聚集可通过从细胞中提取甲酸，接着在Dowex柱上分离磷酸酯进行测量。用胰蛋白酶将细胞裂解到两个12-孔板，并在无肌醇的培养基中用3H-肌醇(0.5Ci-2mCi/ml)预标记12-18小时。然后抽吸培养基，用1X HBSS、20mM HEPES(pH7.5)或无血清的DMEM、1X HBSS、含有激动剂的20mM HEPES(pH7.5)漂洗细胞，然后加入20mM LiCl，将细胞温育所需的时间。抽吸培养基，通过加入冰冷的10mM甲酸(它也用于提取细胞脂质)终止反应。通过在Dowex柱上进行离子交换层析分离磷酸肌醇酯，然后用5ml10mM肌醇和10mM甲酸洗涤。然后用10ml 60mM甲酸钠和5mM硼砂洗涤柱，用4.5ml 1M甲酸铵、0.1M甲酸洗脱总的磷酸肌醇酯。
本发明的优选GnRH药物包括具有约10μM或更低的Ki值的GnRH药物。特别优选的GnRH药物为具有纳摩尔范围内的Ki值的GnRH药物。
本发明的优选化合物示于下表中：化合物号                    结构式                                      分子量9               
Figure A9981228500201
                        492.70410    
Figure A9981228500211
                  492.70411                             627.86912        465.6313    
Figure A9981228500214
      431.57714    
Figure A9981228500215
      429.615             475.62516    
Figure A9981228500217
    446.63117              443.62718    
Figure A9981228500219
       443.62719    
Figure A99812285002110
            443.58420    
Figure A9981228500221
                 461.599
根据本发明的药用组合物包含有效的GnRH-抑制量的至少一种根据本发明的GnRH药物和惰性的或药学上可接受的载体或稀释剂。这些组合物可以制备为适合于所需给药方式(如胃肠外或口服)的单位剂型。
为治疗经GnRH激动作用或拮抗作用介导的疾病或病症，本发明的药用组合物可以以合适的制剂给予，该制剂通过将治疗有效量(即有效达到治疗效果的GnRH-调节量)的至少一种本发明的GnRH药物(作为活性成分)与一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂混合来制备。这样的组合物可以根据常规方法，例如以已知的方式通过适当地混合、制粒及压制或溶解活性成分来制备。任选地，一种或多种不同的活性成分，如不同的GnRH拮抗剂可以用于药用组合物中。
药用载体可以是固体或液体。示例性的固体载体包括乳糖、蔗糖、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。示例性的液体载体为糖浆、花生油、橄榄油、水等。类似地，载体或稀释剂可以包括本领域已知的延时或定时-释放的物质，如甘油一硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯，这些载体可以单独使用或与蜡、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、异丁烯甲酯等组合使用。
可以使用多种药用形式。例如，如果使用固体载体，制剂可以是片剂、硬明胶胶囊、粉剂、丸剂、锭剂或糖锭剂。固体载体的量可以在较宽的范围内变化。示例性的用量范围在约25mg至约1g。如果使用液体载体，制剂可以是糖浆剂、乳剂、软明胶胶囊，在安瓿或管形瓶中的无菌注射液、悬浮液，或非水液体悬浮液。
为获得稳定的、水溶性剂型，可以将药学上可接受的式I化合物的盐溶于有机酸或无机酸的含水溶液中，例如，0.3M琥珀酸水溶液或(更优选)柠檬酸。如果可溶性的盐形式不能获得，可使药物溶于一种或多种合适的共溶剂中。合适的共溶剂的实例包括醇、丙二醇、聚乙二醇300、多乙氧基醚、甘油等，其浓度范围为总体积的0％-60％。在一个示例性的实施方案中，将式I化合物溶于DMSO中并用水稀释。组合物也可以是式I化合物的盐形式在合适的溶媒，如水或等渗盐水或葡萄糖溶液中的溶液形式。
本发明的药用组合物可以采用常规技术。例如混合、溶解、制粒、制锭剂、磨碎、乳化、包囊、包封或冻干过程制备。采用含有所选的赋形剂或辅助剂以便利将活性成分加工成药用制剂的一种或多种生理学上可接受的载体，以常规方法配制药用组合物。合适的制剂根据所选的给药途径选择。
对于制备注射剂来说，本发明的药物可以在水溶液，优选在生理学上可配伍的缓冲液，如Hanks’s溶液，Ringer’s溶液或生理盐水缓冲液中配制。对于透粘膜给药，适合渗透过屏障的渗透剂可以用于制剂中并且可以从本领域已知的渗透剂中选择。
对于口服给药，所述药物可以通过使活性成分与本领域已知的药学上可接受的载体混合而容易地配制。此类载体能够使本发明的化合物配制成片剂、丸剂、锭剂、胶囊、液体剂、凝胶剂、糖浆剂、浆液剂、悬浮液等，以便口服给予待治疗的病人。口服使用的药用制剂可以通过使一种或多种药物与固体赋形剂混合来获得，任选将得到的混合物磨碎成颗粒，如果需要，在加入合适的辅助剂后加工颗粒混合物，以得到片剂或锭剂芯。合适的赋形剂包括填充剂，例如糖(如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇)和纤维素制剂(如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、树胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP))。如果需要，可以加入崩解基，例如交联PVP、琼脂、藻酸或其盐如藻酸钠。
锭剂芯被提供合适的包衣。为此目的，可以使用浓糖溶液，其可任选含有阿拉伯胶、PVP、CarbopolTM凝胶、聚乙二醇、二氧化钛、漆溶液和/或一种或多种合适的有机溶剂。可将染料或颜料加入片剂或锭剂包衣中，以鉴别或区分活性化合物剂量的不同组合。
适合于口服给药的药物形式包括由明胶制成的推入配合胶囊以及由明胶和增塑剂(如甘油或山梨醇)制成的软的密封胶囊。推入配合的胶囊可含有与一种或多种下列成分混合的活性成分：填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉和/或润滑剂如滑石粉或硬脂酸镁，以及(任选含有)稳定剂。在软胶囊中，可将活性化合物溶于或悬浮于合适的液体如脂肪油、液体石蜡或液体丙二醇中。另外，可加入稳定剂。对于颊下给药，组合物可以采用用常规方法配制的片剂或糖锭剂形式。
对于吸入给药，本发明所用的化合物可以以从加压包装或雾化器中，采用合适的抛射剂如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或另一种合适的气体的气溶胶的形式方便地传递。在加压气溶胶的情况下，剂量单位可通过提供传递计量量的阀确定。用于吸入器或吹入器的胶囊和明胶的药筒可以配制为含有药物和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
所述药物可以配制为经注射，例如经大剂量注射或连续输注的胃肠外给药的形式。用于注射的制剂可以以单位-剂型，如安瓿或多剂量容器的形式，并加入防腐剂进行制备。组合物可以采取这样的形式如在油性或水性溶媒中的悬浮液、溶液或乳液，且可含有配制剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
用于胃肠外给药的药用制剂包括水-可溶性形式的活性化合物的水溶液。另外，活性化合物的悬浮液可以配制为合适的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或溶媒包括脂肪油如芝麻油或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯、甘油三酯或脂质体。含水注射悬浮液可含有增加悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。悬浮液可任选含有合适的稳定剂或增加化合物溶解度的物质，以用于制备高浓度的溶液。
或者，活性成分可以是粉末形式，使用前再用合适的溶媒如无菌、无热源水配制。化合物也可以配制为直肠组合物，例如，含有常规栓剂基质如可可酯或其它甘油酯的栓剂或保留灌肠剂。
除了如上所述的制剂外，化合物也可以配制为贮库制剂。这样的长效制剂可以通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射给予。因此，例如，化合物可以用合适的多聚体或疏水物质(例如，作为在可接受的油中的乳剂)或离子交换树脂，或作为微溶的衍生物，例如作为微溶的盐配制。
用于本发明疏水性化合物的示例性药用载体为含有苄醇、非极性表面活性剂、与水可混溶的有机聚合物和含水相共溶剂体系。共溶剂体系可以是VPD共溶剂体系(VPD是3％w/v苄醇、8％w/v非极性表面活性剂多乙氧基醚和65％w/v聚乙二醇300组成的无水乙醇的溶液)。VPD共溶剂体系(VPD∶5W)由5％葡萄糖的水溶液以1∶1稀释的VPD组成。这种共溶剂体系能很好地溶解疏水化合物，生成的制剂对于系统给药仅产生低的毒性。显而易见，合适的共溶剂体系的比例可根据溶解度和毒性特征而变化。而且，共溶剂各成分的选择可以是变化的：例如，可以使用其它低毒性的非极性表面活性剂代替多乙氧基醚；聚乙二醇所占的部分比例可以变化；可以加入一种或多种其它生物可配伍的聚合物(如PVP)或取代聚乙二醇；可以用其它糖或多糖取代葡萄糖。
或者，可以使用其它用于疏水药用化合物的传递系统。已知脂质体和乳液是用于疏水性药物传递的溶媒或载体的实例，并可用于配制合适的制剂。也可以使用某些有机溶剂如二甲亚砜，虽然这可引起毒性的增加。另外，使用缓释体系，例如含有治疗剂的半渗透固体疏水性聚合物基质，可以获得药物传递。各种缓释物质是可获得的并为本领域技术人员所知。缓释胶囊可以在持续几周或长达100天的时期内释放该化合物，这取决于它们的化学性质。根据治疗剂的化学性质和生物学稳定性，可以容易地使用其它使蛋白稳定的技术。
药用组合物也可以含有合适的固体相或凝胶相载体或赋形剂。此类载体或赋形剂的实例包括碳酸钙、磷酸钙、糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物如聚乙二醇。
本发明的某些化合物可以作为具有药学上可配伍的相反离子的盐提供。药学上可接受的盐可由许多酸形成，包括盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等诸如此类的酸。盐比相应的游离碱形式更容易溶于含水溶剂或其它质子溶剂中。
应该懂得，本发明组合物中使用的药物的实际剂量将根据下列因素变化：所用的具体复合物、配制的具体组合物、给药方式，及所治疗的具体部位、宿主和疾病。对于给定条件的最佳剂量，可以由本领域技术人员根据给定化合物的实验数据，采用常规剂量测定试验确定。对于口服给药而言，所用的例举的日剂量一般为约0.001-约1000mg/kg体重，经适宜间隔的重复疗程。前药的给予可以以化学上相当于所有活性化合物的重量水平的的重量水平给予。
根据本发明的具体药用制剂的实例提供如下。
胃肠外组合物：为制备适合于注射给药的本发明的药用组合物，将100mg式I化合物的药学上可接受的水溶性盐溶于DMSO中，然后与10ml 0.9％无菌盐水混合。将得到的混合物加入到适合于注射给药的单位剂型中。
口服组合物：为制备可口服给予的药用组合物，将100mg式I化合物与750mg乳糖混合。将得到的混合物加入到适合于口服给药的单位剂型，例如硬明胶胶囊中。
GnRH试剂和化合物的合成A.结构单元实施例
萘基结构单元：通过顺序Friedel-Crafts烷基化作用制备有用的烷化剂并显示如下：
Figure A9981228500271
可如下制备化合物2：
将2，5-二甲基-2，5-己二醇(200g，1.37mol)作为固体分次加入到在一个大的Erlenmeyer烧瓶中的3L浓盐酸中。所述二醇迅速溶解于盐酸中，所需的产物2，5-二氯-2，5-二甲基己烷随着其形成而从溶液中沉淀出来。于室温下搅拌该反应物4小时。加入1L 50％乙酸乙酯的己烷溶液，分离有机层，用水洗涤数次(直至经pH试纸显示中性)。于室温下真空除去有机溶剂。使粗品2，5-二氯-2，5-二甲基己烷溶于己烷中并通过硅胶垫(10∶1比率)，用己烷洗脱。最后进行过滤步骤，在真空除去有机溶剂后得到白色固体。收获230g(收率92％)的纯2，5-二氯-2，5-二甲基己烷。1H NMR(CDCl3，δ)：1.96(4H，s)；1.61(12H，s)。
采用类似的方法，将2，4-二甲基-2，4-戊二醇转化为2，4-二氯-2，4-二甲基戊烷。1H NMR(CDCl3，δ)：2.42(2H，s)；1.73(12H，s)。
1，1，4，4，6-五甲基-1，2，3，4-四氢萘4：用15分钟的时间向2，5-二氯-2，5-二甲基己烷2(10g，54.7mmol)的甲苯(270ml，0.2M)溶液中缓慢加入为固体的三氯化铝(5.47g，41mmol)。如通过tlc在己烷中测定所显示，该反应在10分钟后完成。用10分钟用水缓慢猝灭未反应的三氯化铝。加入额外的甲苯(250ml)，以从水溶液中提取产物。使有机层通过硅胶垫(40g)并用甲苯洗脱。真空蒸发有机层至干，得到1，1，4，4，6-五甲基-1，2，3，4-四氢萘4(11g，收率97％)。NMR 1.29(s，6H)；1.28(s，6H)，1.69(s，4H)，2.32(s，3H)，7.22(d，1H)，7.12(s，1H)，6.97(dd，1H)。
5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酸甲酯6：在二氯甲烷的回流温度下，向含有1，1，4，4，6-五甲基-1，2，3，4-四氢萘4(20g，99mmol)和5-(氯甲基)-2-糠酸甲酯5(17.28g，99mmol)的二氯甲烷(500ml，0.2M)溶液中缓慢加入为固体的三氯化铝(16.46g，124mmol)。使该溶液再回流2小时。在10％乙酸乙酯/己烷溶液中用tlc监测该反应。使反应物冷却至室温，用15分钟用水猝灭未反应的三氯化铝。用二氯甲烷提取粗产物并通过硅胶(80g)，用二氯甲烷洗脱。真空蒸发溶剂至浆状物。粗产物通过过滤柱用硅胶(300g)纯化。用2％乙酸乙酯/己烷洗脱得到15.4g(收率46％)的5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酸甲酯6。NMR 1.25(s，6H)；1.28(s，6H)，1.67(s，4H)，2.23(s，3H)，3.89(s，3H)，3.97(s，2H)，5.95(d，1H)，7.09(m，3H)。
5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酸7：向含有5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酸甲酯6(15.1g，44mmol)的甲醇(175ml)和水(175ml)溶液中，加入氢氧化钠(3.53g，88.3mmol)的水(29ml)溶液。将该反应混合物搅拌过夜。经tlc判断反应完成后，用1M HCl将该溶液酸化至pH2。用乙酸乙酯将粗产物提取到有机层中，浓缩得到5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酸7(15.0g，收率99％)。NMR 1.26(s，6H)；1.28(s，6H)，1.68(s，4H)，2.24(s，3H)，4.00(s，2H)，6.01(d，1H)，7.10(s，2H)，7.23(d，1H)。
5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酰氯8：向含有5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酸7(20.15g，61.77mmol)的二氯甲烷(310ml)溶液中，加入亚硫酰氯(45ml，617mmol)。将该反应物回流5小时，加入另一份亚硫酰氯(45ml，617mmol)。于室温下搅拌该反应物过夜。将该溶液浓缩至浆状物并通过硅胶垫(50g)，用3％己烷洗脱，并真空浓缩得到5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酰氯8(17g，收率80％)。NMR 1.26(s，6H)；1.28(s，6H)，1.68(s，4H)，2.25(s，3H)，4.00(s，2H)，6.11(d，1H)，7.10(s，1H)，7.11(s，1H)，7.41(d，1H)。
在含有各种包括在如上所示通式中的官能基团的这些反应条件下制备另外的结构单元。B.酰化实施例
下一个方案显示几个实施例，它们可采用下面给出的通用合成方法进行酰化。
                 偶合至Y的试剂实施例
使胺溶解于或悬浮于二氯甲烷、二氯乙烷、乙酸乙酯、乙腈或其它类似物中(浓度0.2M)，接着加入酰氯试剂(1.00mmol当量)。向该混合物中加入三乙胺(5.00mmol当量)，于室温下搅拌该反应物12-48小时。真空除去溶剂。产物经硅胶柱层析纯化，用合适的洗脱溶剂(如3∶1己烷∶乙酸乙酯)洗脱。真空除去溶剂得到酰化产物。
作为一种替代方案，用二氯甲烷(使用5倍量的二氯甲烷)稀释反应混合物，用饱和碳酸氢钠洗涤。经硫酸镁干燥有机层并过滤。产物经硅胶柱层析纯化，用合适的洗脱溶剂(如3∶1己烷∶乙酸乙酯)洗脱。真空除去溶剂得到酰化产物。
采用通用的反应方案，可以容易地制备大量的化合物并测定它们的为纯净物质或不纯物质的活性。对苯胺、胺、苄胺、肼、酰肼、醇等的反应方案进行顺利。
显示根据通用方法酰化的各种结构的特定实施例如下所示：
  化合物号                结构式                           分子量
    9             
Figure A9981228500301
          492.704
   10             
Figure A9981228500302
           492.704
   11             
Figure A9981228500303
                  627.86912       465.6313           431.57714    
Figure A9981228500313
      429.615    
Figure A9981228500314
        475.62516    
Figure A9981228500315
    446.63117    
Figure A9981228500316
         443.62718    
Figure A9981228500317
      443.62719    
Figure A9981228500318
            443.58420    
Figure A9981228500319
                 461.599C.含有胍的化合物的合成和酰化：
步骤1  用1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基化作用保护的化合物的制备：下面另外的步骤1(A)和1(B)提供两种通用的1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基化方法。
步骤1(A)：向二胺(2.00mmol当量)的THF(0.7M)溶液中加入1-H-吡唑-1-(N，N-双(叔丁氧基羰基)甲脒)(1.00mmol当量)的THF(0.7M)溶液。于室温下搅拌该溶液3小时，或直至经tlc(薄层层析)未观察到进一步的转化。减压蒸发溶剂得到浆状残留物，使其溶于乙酸乙酯(约1.5倍体积量的用于该反应中的THF或溶解获得一定量的残留物所需溶剂的体积)中，用水洗涤直至pH呈中性。用盐水洗涤有机层，经硫酸镁干燥并浓缩。产物经硅胶柱层析纯化，用合适的洗脱溶剂(溶剂可以容易地确定，例如用在二氯甲烷中的5％MeOH作为起点)洗脱。真空除去溶剂得到1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-连接的-胺。此外，可以使用其它的试剂以代替在二胺上的N，N’-二Boc-胍单位，例如1，3-双(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(CAS号107819-90-0)。或者，可以直接加入为固体(而非如上所述为液体)的1-H-吡唑-1-(N，N-双(叔丁氧基羰基)甲脒)。
步骤1(B)：向二胺(1.00mmol当量)的THF(0.07M)溶液中分次加入(用10分钟的时间)为固体的1-H-吡唑-1-(N，N-双(叔丁氧基羰基)甲脒)(1.00mmol当量)。于室温下搅拌该溶液0.5小时。减压除去溶剂得到浆状残留物，使其溶于乙酸乙酯(约0.5倍体积量的用于该反应中的THF或溶解所获得一定量的残留物所需溶剂的体积)中，用水洗涤两次。分层，产物经硅胶柱层析纯化，用100％乙酸乙酯洗脱，以除去任何非极性不纯物，然后用100％异丙醇洗脱，得到纯产物。真空除去溶剂得到所需产物。典型的TLC条件是15∶85∶0.1的甲醇/氯仿/乙酸。一般收率范围在40％-44％所需保护的化合物。
步骤2  还原胺化作用(任选)：以合适的方式实现还原胺化作用。至于用三乙酰氧基硼氢化钠对醛和酮的还原胺化作用。一般见：Abdel-Magid等，J.Org.Chem.，1996，61：3849。另外两种还原胺化作用的方法如下所述。
步骤2(A)：使3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘-醛(1.00mmol当量)和1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-连接的-胺(1.00mmol当量)溶于甲醇(0.09M)中。然后加入1％冰醋酸的甲醇溶液(所用甲醇的10％体积)，接着加入NaCNBH3(1.00mmol当量)，搅拌该反应物过夜。通过TLC分析反应物，显示3种成分(醛、所需产物和原料胍衍生物)。通过加入水(所用甲醇的50％体积)终止反应，用二氯甲烷(所用甲醇的10倍体积)提取，用饱和碳酸氢钠洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤并浓缩。产物经硅胶柱层析纯化，用合适的洗脱溶剂洗脱(如，3∶1乙酸乙酯的己烷溶液，以除去未反应的醛，接着用1∶1乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)，获得所需还原胺化产物。在某些情况下，温热至回流2小时将有利于亚胺形成的反应。也见，Abdel-Magid等，J.Org.Chem.，1996，61：3849，它描述了用三乙酰氧基硼氢化钠对醛和酮的还原胺化作用。
步骤2(B)：使3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘-醛(1.00mmol当量)和1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-连接的-胺(1.00mmol当量)溶于甲醇(0.09M)中。然后加入NaBH4(1.00mmol当量)(在乙醇中，通过下面给出的其它小规模方法，或小心地作为固体)并搅拌该反应物过夜。通过TLC分析反应物，显示3种成分(醛、所需产物和原料胍衍生物)。通过加入水(所用甲醇的50％体积)终止反应，用二氯甲烷(所用甲醇的10倍体积)提取，用饱和碳酸氢钠洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤并浓缩。产物经硅胶柱层析纯化，用合适的洗脱溶剂洗脱(这可容易地由技术人员确定，例如，用3∶1乙酸乙酯的己烷溶液除去未反应的醛，接着用1∶1乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)，获得所需还原胺化产物。在某些情况下，温热至回流2小时将有利于亚胺形成的反应。
步骤3  酰化作用：使从还原胺化作用得到的产物(100mmol当量)溶于二氯甲烷(约0.2-0.05M，取决于底物的溶解度)，接着加入三乙胺(2.00mmol当量)和2-呋喃甲酰氯试剂8(1.00mmol当量)。于室温下(RT)搅拌该反应物过夜。用二氯甲烷(所用二氯甲烷量的5倍)稀释该反应混合物，用饱和碳酸氢钠洗涤。经硫酸镁干燥有机层并过滤。产物经硅胶柱层析纯化，用合适的洗脱溶剂(如3∶1己烷∶乙酸乙酯)洗脱。真空除去溶剂，得到酰化产物。
步骤4  碱性(basic)基团的去保护：将得自酰化步骤的产物(1.00mmol当量)溶于25-50％ TFA的二氯甲烷(0.02M)溶液中，于室温下搅拌该反应物(15-20分钟；溶液变成淡橙红色)。再搅拌该反应物1小时20分钟或直至BOC去保护完成。通过真空浓缩终止反应，接着加入水/乙腈(0.006M)并冻干过夜。最终化合物经高效液相色谱(HPLC)方法纯化。真空除去溶剂得到产物(收率范围30％-50％)。
一种使用四氯化锡除去N，N’-双-BOC胍的替代方法(它可产生相应的的氯化胍鎓盐)描述于Miel等，Tetrahedron Letters，1997，38：7865-7866。
根据以上所示的步骤，但步骤2除外，可以制备化合物9，如以下方案所示：
试剂的制备：用于合成化合物的试剂可以获得或根据本领域已知的技术制备。例如，对于小规模反应来说，从常见的盐形式和贮备的试剂溶液制备游离胺可能是有用的。也见Abdel-Magid等，“用三乙酰氧基硼氢化钠对醛和酮的还原胺化作用’J.Org.Chem.，1996，61：3849。
当游离碱在甲醇中是可溶性的时候，该游离碱的甲醇溶液可以由盐酸、二盐酸、氢溴酸或其它盐制备。在该方法中，甲醇钠一旦加入，即应小心以防止接触空气，因为胺游离碱，尤其是伯胺，会从空气中吸收二氧化碳而形成盐。10ml量的0.1M游离碱的甲醇溶液可如下制备。称取1.0mmol一盐酸盐装入到带有搅拌棒配衡Erlenmeyer烧瓶中，加入7ml甲醇。向搅拌的淤浆中，加入229ml(1.0mmol，1当量)甲醇钠的甲醇液(25wt％，4.37M)，塞好烧瓶，剧烈搅拌该混合物2小时。随着一种精细的、乳白色氯化钠沉淀的形成过程，该淤浆不时改变外观颜色。通过一15ml中号多孔玻璃漏斗过滤淤浆，用1-2ml甲醇洗涤滤饼，将滤液转移至一20ml管形瓶中，用10ml甲醇稀释。氯化钠的理论收率接近59mg，但由于在甲醇中的低溶解度，收获通常是未定量的。对于二盐酸盐，需要第二份等当量的甲醇钠(458ml)。
如下可制备0.5M硼氢化钠的乙醇溶液。在纯(非变性)的无水乙醇(25ml)中搅拌硼氢化钠(520mg，13.8mmol)约2-3分钟。通过一中号多孔玻璃漏斗过滤悬浮液，以除去少量不溶的固体(一般为硼氢化物总量的约5％，或25mg)。滤液应呈现为仅放出少量氢的无色溶液。这种溶液应立即使用，因为它会在几小时内明显分解，引起胶凝状沉淀形成。硼氢化钠是吸湿性的，所以在称取固体后，应立即制成溶液以免接触空气。硼氢化钠在室温下在乙醇中具有约4％的溶解度。这相应为略多于0.8M。然而，即使在搅拌≥5分钟后，有时仍有少量(百分比)的固体保持未溶，而不管制备的浓度是多少。
为进行式I化合物的小规模合成，可以进行下述的反应，以制备用于上述反应方案中的各种反应物。除非另外说明，对本说明书的其它部分而言，在以下描述中，所有温度均为摄氏度，所有的部分和百分比均以重量计。
各种原料和其它试剂可从供应商，如Aldrich Chemical Company或Lancaster Synthesis Ltd.购得，且无需进一步纯化而使用，除非另外指明。四氢呋喃(THF)和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)可购自Aldrich的SureSeal_瓶且收到即可使用。除非另外指明，所有的溶剂采用本领域的标准方法纯化。
以下提出的反应在正压氮气下或带有干燥管的情况下，于室温下(除非另外说明)，在无水溶剂中进行，且反应烧瓶配有橡胶皮隔，以便通过注射器导入底物和试剂。玻璃仪器是烘干的和/或加热干燥的。在玻璃衬底的硅胶60°F254板(Analtech(0.25mm))上进行分析薄层层析，用合适的溶剂比率(v/v)洗脱。经TLC分析该反应物，通过原料的消耗判断反应终止。
倾斜平板(tip plates)用对-茴香醛喷雾试剂或磷钼酸试剂(AldrichChemical，20wt％在乙醇中)显色并加热活化。后处理一般通过用反应溶剂或提取溶剂使反应物体积增加一倍，然后用25％(体积)提取体积的指定的水溶液洗涤来进行(除非另外指明)。经无水硫酸钠干燥产物溶液，然后过滤，在旋转蒸发器上减压蒸发溶剂，真空除去溶剂。用Baker-grade快速硅胶(47-61mm)和硅胶∶粗品物质比率约20∶1-50∶1(除非另外说明)进行快速柱层析(Still等，A.J.Org，Chem.，1978，43：2923)。在指定的压力下或于环境压力下进行氢解。
1H-NMR谱用Bruker仪(在300MHz处操作)记录，而13C-NMR谱在75MHz处操作下记录。使用氯仿作为参照标准(7.25ppm和77.00ppm)或CD3OD(3.4和4.8ppm和49.3ppm)，或者合适时用内四甲基硅烷标准(0.00ppm)，获得为CDCl3溶液(以ppm记录)的NMR谱。如需要时使用其它NMR溶剂。当记录峰的裂分情况时，使用下列缩写：s＝单峰，d＝双峰，t＝三峰，m＝多峰，br＝宽峰，dd＝两个双峰，dt＝两个三峰，给出偶合常数时，以Hertz记录。
红外光谱在Perkin-Elmer FT-IR光谱仪上作为纯油、作为KBr片或作为CDCl3溶液记录，且当以波数(cm-1)记录时。质谱用LSIMS或电子喷雾获得。所有熔点未校正。
结构单元1-H-吡唑-1-甲脒的制备：
根据Bematowicz等，J.Org.Chem.，1992，57：2497-2502(和其中的参考文献)的方法制备1-H-吡唑-1-甲脒，并根据Drake等，Synth.，1994，579-582的方法，用二碳酸二叔丁酯保护，得到1-H-吡唑-1-(N，N-双(叔丁氧基羰基)甲脒)。
1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-4-氨基甲基环己烷的制备：
Figure A9981228500381
向1，4-双-氨基甲基-环己烷22(20g，0.14mol)的THF(200ml)溶液中加入1-H-吡唑-1-(N，N-双(叔丁氧基羰基)甲脒)21(22.0g，0.07mol)的THF(100ml)溶液。(注意1-H-吡唑-1-(N，N-双(叔丁氧基羰基)甲脒)不需要溶于THF中；最好将它作为纯的固体加入该过程中)。于室温下搅拌该溶液3小时。减压除去溶剂得到浆状残留物，将其溶于乙酸乙酯(500ml)中并用水洗涤直至pH呈中性。用盐水洗涤有机层，经硫酸镁干燥并浓缩。产物经硅胶柱层析纯化，用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱。真空除去溶剂得到11.6g(收率43％)1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-4-氨基甲基环己烷(化合物23)。1H NMR(CDCl3)δ11.5(br s，1H)，8.35(br s，1H)，3.26(dt，2H)，2.52(dd，2H)，1.82-0.97(m，28H，在1.5有单峰)。
1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-3-氨基甲基环己烷的一种替代制备方法如下。向顺式/反式1，4-双-氨基甲基-环己烷(9.0g，63.3mmol)的THF(903ml，0.07M)溶液中分次加入(用10分钟的时间)为固体的1-H-吡唑-1-(N，N-双(叔丁氧基羰基)甲脒)(19.6g，63.3mmol)。于室温下搅拌该溶液0.5小时。减压除去溶剂得到浆状残留物，将其溶于乙酸乙酯(500ml)中并用水洗涤二次。分层，产物经硅胶柱层析纯化，用100％乙酸乙酯洗脱以除去任何非极性不纯物，接着用100％异丙醇洗脱，得到纯产物。真空除去溶剂得到10.2g(收率42％)1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-4-氨基甲基环己烷。1H NMR(CDCl3)δ11.5(br s，1H)，8.35(br s，1H)，3.26(dt，2H)，2.52(dd，2H)，1.82-0.97(m，28H，在1.5有单峰)。
还原胺化作用：
使3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘-醛(0.2021g，0.88mmol)和1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-4-氨基甲基环己烷(化合物23，0.337g，0.88mmol)溶于甲醇(10ml)中。然后，加入1％冰醋酸的甲醇(100μl)溶液，接着加入NaCNBH3(55.4mg，0.88mmol，1.0当量)，搅拌该反应物过夜。通过TLC分析反应物，显示3种成分(醛、所需产物和原料胍衍生物)。通过加入水(约5ml)终止反应，用二氯甲烷(约100ml)提取，用饱和碳酸氢钠洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤、浓缩并经柱层析，用3∶1乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，以除去未反应的醛，接着用1∶1乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，获得所需产物(化合物25，环己基，顺式/反式混合物)。真空除去溶剂(典型的一般收率范围在50-80％)。
制备酰化衍生物，接着使胍去保护：
Figure A9981228500401
使得自还原胺化作用的产物25(1.0当量)溶于二氯甲烷(10-15ml)中，接着加入三乙胺(2当量)和2-呋喃甲酰氯试剂(1.0当量)。于室温下搅拌该反应物过夜。用二氯甲烷(50ml)稀释该反应物，用饱和碳酸氢钠洗涤。经硫酸镁干燥有机层、过滤并经柱层析纯化，用3∶1己烷的乙酸乙酯溶液洗脱。真空除去溶剂，得到化合物26。
将得自酰化反应的产物26(1.0当量)溶于50％TFA的二氯甲烷(20-25ml)溶液中，于室温下搅拌该反应物(15-20分钟；溶液变成淡橙红色)。再搅拌该反应物1小时20分钟或直至去保护完成。通过真空浓缩终止反应，接着加入水/乙腈(约50ml)并冻干过夜。最终化合物经HPLC方法纯化。真空除去溶剂得到化合物27。
以下的讨论涉及示例性化合物(e)-(k)的制备。化合物(e)-(k)可以如上所述，通过在酸性条件下水解，用于制备相应的去保护(游离胍基)化合物。
1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-3-氨基甲基环己烷的制备：
在0.5小时内，向顺式/反式-1，3-双-氨基甲基环己烷(7.5g，52.8mmol)的THF(30ml)溶液中加入1，3-双(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(7.65g，26.3mmol)的THF(40ml)溶液。于室温下搅拌该溶液5小时。减压除去溶剂，产物经硅胶柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇的混合物作为洗脱剂，得到2.2g(收率22％)1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-3-氨基甲基环己烷(化合物(e))。1H NMR(CDCl3)δ11.53(br s，1H)，8.40(br s，1H)，3.28-3.30(m，2H)，2.54-2.61(m，2H)，1.81(br s，2H)，1.27-1.58(m，26H)，0.89(m，1H)，0.65(m，1H)。
或者，化合物(e)可以如下制备。向顺式/反式1，3-双-氨基甲基环己烷(10.0g，70.3mmol)的THF(1000ml，0.07M)溶液中分次加入(用10分钟的时间)为固体的1-H-吡唑-1-(N，N-双(叔丁氧基羰基)甲脒)(21.8g，70.3mmol)。于室温下搅拌该溶液0.5小时。减压除去溶剂得到浆状残留物，使其溶于乙酸乙酯(500ml)中，用水洗涤两次，分层，产物经硅胶柱层析纯化，用100％乙酸乙酯洗脱，以除去任何非极性不纯物，然后用100％异丙醇洗脱，得到纯产物。真空除去溶剂得到11.4g(收率41％)的1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-3-氨基甲基环己烷。1H NMR(CDCl3)δ11.53(br s，1H)，8.40(br s，1H)，3.28-3.30(m，2H)，2.54-2.61(m，2H)，1.81(br s，2H)，1.27-1.58(m，26H)，0.89(m，1H)，0.65(m，1H)。
1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-4-氨基甲基苯的制备：
Figure A9981228500421
在0.5小时内，向对-亚二甲苯基二胺(6.44g，47.4mmol)的THF(30ml)溶液中加入1，3-双(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(6.63g，22.9mmol)的THF(40ml)溶液。于室温下搅拌该溶液5小时。减压除去溶剂，产物经硅胶柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇的混合物作为洗脱剂，得到8.0g(收率92％)1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-4-氨基甲基苯(化合物(f))。1H NMR(CDCl3)δ11.54(br s，1H)，8.56(br s，1H)，7.29(s，4H)，4.60(d，2H)，3.86(s，2H)，1.64(br s，2H)，1.52(s，9H)，1.48(s，9H)。
1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-3-氨基甲基苯的制备：
Figure A9981228500422
在0.5小时内，向间-亚二甲苯基二胺(7.14g，52.5mmol)的THF(30ml)溶液中加入1，3-双(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(7.57g，26.1mmol)的THF(40ml)溶液。于室温下搅拌该溶液5小时。减压除去溶剂，产物经硅胶柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇的混合物作为洗脱剂，得到7.9g(收率80％)1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-3-氨基甲基苯(化合物(g))。1H NMR(CDCl3)δ11.54(br s，1H)，8.58(br s，1H)，7.19-7.34(m，4H)，4.62(d，2H)，3.86(s，2H)，1.83(br s，2H)，1.52(s，9H)，1.48(s，9H)。
1-(N，N’-二Boc)-胍-4-氨基丁烷的制备：
Figure A9981228500431
在0.5小时内，向1，4-二氨基丁烷(4.15g，47.1mmol)的THF(30ml)的溶液中加入1，3-双(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(6.83g，23.6mmol)的THF(40ml)溶液。于室温下搅拌该溶液5小时。减压除去溶剂，产物经硅胶柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇的混合物作为洗脱剂，得到3.0g(收率40％)1-(N，N’-二Boc)-胍基-4-氨基丁烷(化合物(h))。1H NMR(CDCl3)δ11.49(br s，1H)，8.35(br s，1H)，3.42-3.47(m，2H)，2.72-2.76(t，2H)，0.86-1.65(m，24H)。
制备化合物(h)的一种替代方法如下。向1，4-二氨基丁烷(6.0g，68.1mmol)的THF(972ml，0.07M)的溶液中分次加入(用10分钟的时间)为固体的1-H-吡唑-1-(N，N-双(叔丁氧基羰基)甲脒)(21.5g，68.1mmol)。于室温下搅拌该溶液0.5小时。减压除去溶剂得到浆状残留物，将其溶于乙酸乙酯(500ml)中并用水洗涤两次。分层，产物经硅胶柱层析纯化，用100％乙酸乙酯洗脱以除去任何非极性不纯物，接着用100％异丙醇洗脱，得到纯产物。真空除去溶剂得到10.0g(收率44％)1-(N，N’-二Boc)-胍基-4-氨基丁烷。1H NME(CDCl3)δ11.49(br s，1H)，8.35(brs，1H)，3.42-3.47(m，2H)，2.72-2.76(t，2H)，0.86-1.65(m，24H)。
1-N，N-二甲基氨基甲基-4-氨基甲基苯的制备：
向1-N，N-二甲基氨基甲基-4-腈苯(4.8g，30mmol)的THF溶液中加入1M硼烷四氢呋喃复合物(90ml)的溶液。在氮气下，于回流温度下加热该混合物16小时。冷却至室温后，加入1M HCl的甲醇(100ml)溶液。于回流下加热该反应混合物3小时。过滤收集沉淀的产物，用乙醚洗涤，真空干燥得到5.9g(收率83％)的产物，为盐酸盐(化合物(i))：1HNMR(DMSO-d6)δ8.65(br s，3H)，7.55(dd，4H)，4.25(s，2H)，3.98(s，2H)，2.62(s，6H)。
1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-2-氨基甲基苯的制备：
Figure A9981228500442
在0.5小时内，向邻-亚二甲苯基二胺(7.14g，52.5mmol)的THF(30ml)溶液中加入1，3-双(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(7.57g，26.1mmol)的THF(40ml)溶液。于室温下搅拌该溶液5小时。减压除去溶剂，产物经硅胶柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇的混合物作为洗脱剂，得到1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-3-氨基甲基苯(化合物(j))。
或者，以类似于上述化合物(e)的替代制备方法，可以制备化合物(j)。
1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-2-氨基甲基环己烷的制备：
Figure A9981228500451
在0.5小时内，向顺式/反式-1，2-双-氨基甲基环己烷(7.5g，52.8mmol)的THF(30mml)溶液中加入1，3-双(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫代假脲(7.65g，26.3mmol)的THF(40ml)溶液。于室温下搅拌该溶液5小时。减压除去溶剂，产物经硅胶柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇的混合物作为洗脱剂，得到1-(N，N’-二Boc)-胍基甲基-2-氨基甲基环己烷(化合物(k))。
或者，以类似于上述化合物(e)的替代制备方法，可以制备化合物(k)。
D.嘧啶化合物
可根据下面的方法使用嘧啶化合物：
Figure A9981228500461
制备含有嘧啶的化合物的通用方法如下。向1，3二胺29的THF溶液中加入28并将内容物回流12小时。真空除去溶剂，所需的加合物经柱层析纯化。根据上面给出的通用方法酰化纯的31得到11。
技术人员应该理解，根据以上技术可以制备本发明的各种化合物。上述化学反应具有制备本发明的GnRH药物的普遍的可应用性。因此，通过合适的修改，例如通过保护干扰基团，通过更换而使用其它常规试剂，和/或通过常规修改反应条件，可以类似地制备其它的GnRH药物，这对本领域技术人员来说，将是容易理解的。
体外药理学的放射配体结合
从用cDNA稳定转染的人胚肾293细胞中制备细胞膜，以使人GnRH受体悬浮于结合测定缓冲液中，该缓冲液含有：50mMHEPES、1mM EDTA、2.5mM氯化镁和0.1％牛血清白蛋白。于室温下，在96-孔板上，将膜(每孔5-50μg总蛋白，含有约10-100 fmol GnRH受体)与125I-GnRH-A(约0.05nM)和试验化合物一起以200μl总体积温育1小时，一式两份。在结合测定缓冲液中，将所有的化合物稀释为具有1％DMSO的浓度(最终测定浓度)。非特异性结合在100nM GnRH存在下进行。通过快速过滤到用0.1％聚乙烯亚胺浸泡的96-孔PackardGF/C滤器上。用PBS缓冲液洗涤滤器3次，干燥并在Packard Topcount上通过液体闪烁计数器进行计数。
用于评价其它物种中的化合物活性的测定条件是相同的。类似数目的GnRH受体用于各物种测试。对于大鼠GnRH受体结合试验，从大鼠垂体中制备膜，使用约25-30μg/孔的总膜蛋白。对于牛GnRH受体结合试验，从牛垂体中制备膜，并以40-50μg/孔的浓度使用。对于小鼠GnRH受体结合试验，从稳定表达小鼠GnRH受体的293细胞中制备膜并以约25-30μg/孔的浓度使用。采用GraphPad PrismTM软件计算对照肽和试验化合物的IC50值。放射配体结合实验的结果示于图1中。表1显示各种肽和非-肽化合物在得自4个物种的GnRH受体中的亲和力的多重试验的平均值。
      图1.化合物对125I-GnRH-A结合于HEK-293细胞膜中的hGnRH受体的影响
图1.化合物对125I-GnRH-A结合于表达在HEK-293细胞中的hGnRH受体的影响。测定GnRH(方形)和9(三角形)代替125I-GnRH-A(约0.05nM)结合hGnRH受体的能力。所示的值来自一个重复进行两次的代表性的实验。
一般根据上述的通用反应方案合成式I的各种化合物。采用上述的竞争放射配体结合分析法测试粗品化合物。GnRH竞争结合分析的结果示于表中(每种化合物在1或10μM的浓度下试验)。
                                            表1
  化合物     人IC50(nM)    牛IC50(nM)    大鼠IC50(nM)    小鼠IC50(nM)
  GnRH     7.2±1.5     13±2       33±1.9      11±2
 GnRH-A     0.34±0.06     0.3±0.05       0.49±0.1      0.22±0.03
抗排卵肽     0.67±0.09     0.15±0.02       0.19±0.04      0.25±0.05
    9     220±33     3800±220       680±120      2300±460
    10     130±24     1500±480       390±10      1400±440
    11     190±40     320±10       9.0±0.3      50±10
    12     230±37     10400±3000       3080±630      7130±1350
    13     110±20     530±100       60±8      120±20
    14     80±4     1050±30       60±15      290±70
    15     100±17     1000±240       70±16      220±50
    16     30±6     4380±510       560±50      1290±210
    17     80±20     670±120       30±4      80±20
    18     55±11     460±90       40±3      115±25
    19     50±3     ND       ND      ND
    20     8.0±0.9     ND       ND      ND
值是至少进行3次试验(一式两份)的均值±SE。
ND＝未测定。
总磷酸肌醇酯的测定
为评价化合物作为激动剂或拮抗剂的活性，采用测定总磷酸肌醇酯的聚集的分析法。使用DMEM培养基，将含有hGnRH受体的293细胞接种于24-孔板上(约200000细胞/孔)。次日，在无肌醇的培养基中，用[3H]肌醇(0.5Ci/ml)负载细胞16-18小时。抽吸培养基，用无血清DMEM冲洗细胞。抽吸培养基，然后于37℃用试验化合物或媒介物处理细胞30分钟。再将半数最大浓度的GnRH(1nM)或媒介物加入到细胞中并使其于37℃平衡45分钟。用冰冷的10mM甲酸替代培养基，甲酸能停止该反应，同时还起提取细胞脂质的作用。通过在Dowex柱上进行离子交换层析分离磷酸肌醇酯，用2.5ml 10mM肌醇和10mM甲酸洗涤柱。然后用5ml 60mM甲酸钠和5mM硼砂洗涤柱，用5ml 1M甲酸铵、0.1M甲酸洗脱总的磷酸肌醇酯。将柱的洗脱液加入含有15ml闪烁合剂的液体闪烁管形瓶中并经液体闪烁计数器计数。典型的实验结果示于图2中。
       图2.化合物对GnRH(1nM)-刺激的总磷酸肌醇酯在表达hGnRH受体的293细胞中的聚集的影响
Figure A9981228500491
化合物            EC50(nM)    Kb(nM)GnRH               0.83抗排卵肽                         0.29号化合物                        30
图2.化合物对GnRH-刺激的总磷酸肌醇酯在表达hGnRH受体的HEK-293细胞中的聚集的影响。测定肽拮抗剂、抗排卵肽和非-肽化合物9阻断GnRH-刺激的增加[3H]磷酸肌醇酯的能力。任一种化合物单独刺激总[3H]磷酸肌醇酯的增加(未显示)，但两种化合物能够抑制由半数最大浓度的GnRH肽介导的刺激作用。GnRH单独使用剂量-依赖性地增加[3H]磷酸肌醇酯聚集，其EC50约为0.8nM。在所示的实验中，通过Cheng和Prusoff(Biochem.Pharmacol.22：3099-3108，1973)的方法确定抗排卵肽和化合物9的Kb值。所示的值来自一个重复进行两次的实验。
动物体内药效研究
实验方案：阉割雄性Sprague-Dawley(225-250g)大鼠并允许10天的手术后恢复。阉割10天后，对动物留置股静脉和动脉导管，以便于远距离输注和血液取样。在实验的当天，使动物适应它们居住的笼子。从所有的动物中抽取基础血样。基础抽样后，静脉给予媒介物(10％DMSO、10％ cremophor/盐水)、抗排卵肽(1.0μg)或化合物11(10mg/kg)。注射后10、60、90、120、180、240分钟抽取血样。离心血液，收集血清并于-70℃下在冰箱中贮存直至分析。用得自Diagnostic Systems Laboratories，Inc.的DSL-4600 ACTIVE LH包衣的-管式免疫放射试剂盒分析血清样品。
结果和讨论：生殖腺的除去消除睾酮对下丘脑的负反馈，引起GnRH升高以及随之而来的LH升高。图3说明在手术10天后对照大鼠和阉割大鼠中的LH和睾酮两者的血浆水平。在这些大鼠中，期望GnRH拮抗剂将减少由GnRH介导的LH水平升高。抗排卵肽，一种肽的GnRH拮抗剂，减少阉割大鼠模型中的LH(图4)。化合物11，一种小分子GnRH拮抗剂，也抑制阉割大鼠模型中的LH(图4)。
                  图3
      用于评价GnRH拮抗剂的阉割大鼠模型的鉴定
                      图4
  抗排卵肽(1.0μg；静脉注射)抑制阉割大鼠模型中的LH水平
Figure A9981228500511
        化合物11(10mg/kg；静脉注射)抑制阉割大鼠
                   模型中的LH水平
Figure A9981228500512
药代动力学研究
实验方案：通过切开大鼠右外侧颈静脉，在上腔静脉中插入静脉导管并允许恢复。将药物溶于10％ DMSO、10％ cremaphor和80％盐水混合物中并以10mg/kg的剂量静脉给予。在指定的时间采取血样，用含有内标的丁基氯从0.2ml血浆中提取化合物。在Beta-Basic C184×50mm柱上，用40-80％乙腈在10mM磷酸铵缓冲液中的梯度液，以1ml/min的流速经HPLC分析样品。检测样品在260nm处的UV吸光度。
结果和讨论：化合物11(对大鼠GnRH受体具有优良的亲和力)在大鼠血浆中具有约3小时的半衰期并在静脉注射后4小时具有100-200nM的血浆浓度(图5)。
                         图5
                      化合物11
                  剂量-10mg/kg；n＝3
Figure A9981228500521
参照肽对大鼠、小鼠、牛和人GnRH受体的结合与文献中报道的结合非常一致。本发明的非-肽化合物在其结合模式中显示显著的物种差别。这些化合物中有几种对人GnRH受体表现出高亲和力(＜100nM)。所有这些非-肽化合物在磷酸肌醇酯测定中评价其功能活性时，作为在含有重组人GnRH受体的细胞中的GnRH-刺激的总磷酸肌醇酯聚集的拮抗剂起作用。静脉给予化合物11减少阉割的雄性大鼠(一种慢性升高血浆LH水平的模型)的LH的血浆水平。该化合物具有3个小时的半衰期，且血浆浓度与疗效相关。总体考虑，这些数据提示，这些非-肽化合物应具有作为GnRH受体拮抗剂的用途。
用作参照化合物的肽激动剂和拮抗剂：
Figure A9981228500541
[D-ALA6、DES-GLY10]-LH-RH乙酰胺
这些化合物对以下试验的数据获得如下：细胞培养
用大鼠GnRH受体(GGH3)稳定转染的GH3细胞由Dr.William Chin(Harvard Medical School，Boston，MA)提供。这些细胞在先前已进行过多方面的鉴定(Kaiser等，1997)。这些细胞在含有下列成分的低葡糖Dulbecco’s改良Eagle’s培养基(DMEM)中生长：100U/ml青霉素/链霉素、0.6g/L G418和10％热-灭活的胎牛血清(FBS)。
将对人GnRH受体的cDNA克隆到质粒表达载体，pcDNA3(在Vitrogen)中，并稳定转染到HEK 293细胞(hGnRH-R/293)。该细胞系由Dr.Stuart Sealfon，Mount Sinai Medical School，New York，NY提供。这些细胞生长在补充有0.2g/L G418 100 U/ml青霉素/链霉素和10％ FBS的DMEM中。GGH3和hGnRH-R/293两种细胞用于总磷酸肌醇酯的测量和化合物效力的微生理功能测定评估。放射配体的制备
GnRH的放射性碘化的激动剂类似物，[des-Gly10，D-Ala6]GnRH乙酰胺(125I-GnRH-A)用作放射配体。将以0.1M乙酸稀释的1μg GnRH-A加入到Iodogen_-包被的硼硅酸盐玻璃试管(Pierce)中，管中含有35μl0.05M磷酸盐缓冲液(pH7.4-7.6)和1mCi的Na[125I]。使该反应混合物旋转并于室温下温育1分钟。1分钟后，使该混合物旋转并再温育1分钟。将2ml 0.5M乙酸/1％ BSA加入到反应试管中，将混合物加入到C18 Sep-Pak柱中。用5ml水和5ml 0.5M乙酸的顺序洗涤该柱，然后用5×1ml 60％乙腈/40％ 0.5M乙酸稀释。洗脱液用3×体积的HPLC缓冲液A(0.1％TFA在水中)稀释并装填到C18柱中。用含有0.1％ TFA的25-100％乙腈的梯度液洗脱碘化的产物20-25分钟。将放射活性的部分(750μl/部分)收集到含有100μl 10％BSA的清洁的聚丙烯试管中。通过放射配体结合评价各部分的生物学活性。放射配体的特异性活性约2200Ci/mmol。微生理功能测定
Cytosensor_微生理功能测定仪(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)是一种用于监测对各种刺激的细胞应答的快速、无损伤、无放射活性的半导体-基体系。它是以pH-敏感的硅传感器，即光-可致(addressable)电势传感器为基础的，该传感器形成微体积流室的一部分，培养的细胞固定在其中(Pitchford等，1995；Parce等，1989，Owicki等，1994)。其它的参考文献：Owicki，J.C.，L.J.Bousse，D.G.Hafeman，G.L.Kirk，J.D.Olson，H.G.Wada，及J.W.Parce.光-可致电势传感器：原理和生物学应用。Ann.Rev.Biophys.Biomol.Struc.23：87-113，1994。Parce，J.W.，J.C.Owicki，K.M.Kercso，G.B.Sigal，H.G.Wada，V.C.Muir，L.J.Bousse，K.L.Ross，B.I.Sikic，H.M.McConnell.具有硅生物传感器的影响细胞的药物的检测。Science 246：243-247，1989。Pitchford，S.，K.DeMoor，及B.S.Glaeser.神经生长因子刺激PC12细胞的快速代谢应答。Am.J.Physiol.268(Cell Physiol 37)：C936-C943，1995。
将GGH3细胞以500000细胞/胶囊的密度接种到在细胞胶囊杯(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)的聚碳酸酯膜(3μm孔率度)上的含有25mM氯化钠和0.1％BSA的低-缓冲的极限必需培养基(MEM，Sigma)中。将胶囊杯转移到传感器室中，在传感器室中，细胞紧密地附着在硅传感器上，它测量传感器室中微体积pH的细微变化。将低-缓冲培养基以约100μl/min的速率从两个液体贮存池中的一个连续抽送透过细胞。选择阀决定那一个贮存池的液体灌注(perifused)到细胞中。
Cytosensor_微生理功能测定仪产生电压信号，它是pH、每秒的线性函数。为了测定酸化率，流向传感室(装有细胞)的流被周期性地间断，使排泄出酸性代谢产物，以组成细胞的细胞外液。在这些试验中，细胞于37℃维持两分钟流过的周期，即细胞用培养基灌注80秒钟，接着停止培养基流40秒钟。在这40秒钟间隔期间，测量30秒钟间隔的酸化率。在这种方式中，每两分钟计算一次酸化率。Cytosensor_微生理功能测定装置含有8个这样的传感器单元，允许同时进行8个试验。利用联接于该系统的计算机独立地使每个单元程序化。
使GGH3细胞在低-缓冲的MEM培养基中初步平衡30-60分钟，其中基础酸化率(测量为μV/秒)是在无任何刺激的情况下进行监测的。当基础酸化率在20分钟的时期内变化低于10％时，试验开始。进行时程试验以确定在测量酸化率之前的接触激动剂的最佳时间和获得对各种激动剂的峰酸化应答需要接触的持续时间。从这些时程试验中，可以确定，在收集酸化率数据前，应使细胞接触GnRH肽激动剂至少1分钟。峰酸化率通常发生在第一个两分钟的接触周期内。为捕获对GnRH的峰应答，使细胞接触激动剂总共4分钟。细胞接触化合物20-60分钟后，用GnRH(1.0nM-10μM)单独或与各种试验浓度的每种化合物一起刺激4分钟。所有的化合物以1％ DMSO的最终浓度在如上所述的低-缓冲的MEM培养基中进行试验。选择性模式
为了测定化合物对GnRH受体结合的特异性，用各种结合和功能分析法测试化合物的活性。以下表2显示化合物20在其它分析法中的活性。
表2.化合物20在各种分析法中的结合亲和力或功能评价
            分析法      Ki(nM)*
        腺苷(非-选择性)     ＞1000
    α1肾上腺素能(非-选择性)     ＞1000
    α2肾上腺素能(非-选择性)     ＞1000
    β肾上腺素能(非-选择性)     ＞1000
        多巴胺(非-选择性)     ＞1000
           D2多巴胺     ＞3200
            H1组胺     ＞1000
            H2组胺     ≈1000
            H3组胺     ＞1000
            M2毒蕈     ＞1000
    毒蕈(非-选择性)外周的     ＞1000
       阿片剂(非-选择性)     ＞1000
        血清素转运蛋白     ＞1000
     血清素(非-选择性)     ＞1000
           5-HT2a      2350
           5-HT7     ＞4400
           雌激素     ＞1000
            睾酮     ＞1000
     L-型Ca2+通道     ＞1000
     N-型Ca2+通道     ＞1000
    ATP-敏感的K+通道     ＞1000
    Ca2+-激活的K+通道     ＞1000
    Na+通道(位点1)     ＞1000
    Na+通道(位点2)     ＞1000
          LTB4     ＞1000
          LTD4     ＞1000
          TXA2     ＞1000
          PAF     ≈3000-5000
          TRH     ＞1000
        催产素     ＞1000
     AT1血管紧张肽     ≈3000-5000
        缓激肽2     ＞1000
         CCKA     ＞1000
         ET-A     ＞1000
        Galanin     ＞1000
          NK1     ＞1000
          NK2     ＞1000
          NK3     ≈3000-5000
     VIP(非-选择性)     ＞1000
         AchE     ＞1000
    胆碱乙酰基转移酶     ＞1000
         MAO-A     ＞1000
         MAO-B     ＞1000
     IL-8RA(CXCR-1)     ＞10000
         GLP-1     ＞10000
      胰高血糖素     6700
               NPY Y1     ＞10000
    CYP3A4细胞色素P450 IC50     1700
    基础组胺释放(大鼠肥大细胞)EC50     ＞10000
          RARγ维生素A类     ＞10000
          RARα维生素A类     ＞10000
           血管升压素1     ＞1000
*EC50用于基础组胺释放分析
图6显示化合物136对GnRH-刺激的GGH3细胞的细胞外酸化率增加的作用。GnRH产生GGH3细胞的细胞外酸化率的剂量-依赖性增加。化合物136引起对GnRH的剂量-依赖性曲线的向右漂移，而不降低对GnRH的最大应答。这提示该化合物是对这种受体的GnRH竞争性受体拮抗剂。所示的值来自一个试验。
图6
Figure A9981228500591
制备本发明化合物的方法的一个实例如下：4-(3-甲基苯氧基)-2-丁酮：
Figure A9981228500602
向在氯仿(25m1)中的间-甲苯酚(4.0g，37mmol)、丁烯酮(3.2ml，37mmol)中加入二异丙基乙胺。将该混合物加热回流16小时，使冷却至室温并蒸发。残留物具有50％的产物和50％的原料。分离为叔丁基二甲基甲硅烷基醚的原料。产物通过塞柱过滤分离。得量4.5g(68％)。
2-甲基-4(3-甲基苯氧基)-2-丁醇：
Figure A9981228500603
向由镁(572mg，23.56mmol)和Mel(3.34g，23.56mmol)制备的溴化甲基镁的乙醚(50ml)溶液中加入在10ml乙醚中的4-(3-甲基苯氧基)-2-丁酮(2.1g，11.78mmol)。于室温下搅拌该溶液30分钟，此后用水和稀盐酸猝灭。分离有机层，经硫酸钠干燥，通过硅胶柱过滤。无色浆状物1.91g(83％)。4，4，7-三甲基苯并二氢吡喃：
Figure A9981228500611
向在40ml二硫化碳中的氯化铝(1.3g，9.79mmol)中加入在10ml二硫化碳中的2-甲基-4(3-甲基苯氧基)-2-丁醇(1.9g，9.79mmol)。将该混合物加热回流2小时，蒸发溶剂，用50ml乙酸乙酯和10ml水稀释残留物。分离有机层，经硫酸钠干燥，通过快速柱纯化。淡黄色浆状物1.5g(87％)。
乙基-5-[(4，4，7-三甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-6-基)甲基]-2-糠酸酯，及乙基-5-[(4，4，7-三甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-8-基)甲基]-2-糠酸酯：
Figure A9981228500612
向在硝基甲烷(20ml)中的氯化锌(950mg，6.97mmol)中加入在硝基甲烷(15ml)中的4，4，7-三甲基苯并二氢吡喃(1.23g，6.97mmol)和乙基-5-氯甲基-2-糠酸酯(656mg，3.48mmol)。于室温下搅拌该混合物16小时。蒸发至干并用乙酸乙酯-水(1∶1，100ml)研磨。有机层经常规后处理，用己烷∶乙酸乙酯(9∶1)进行塞柱过滤，得到这两种化合物的混合物。1.34g(46％基于苯并二氢吡喃)。
N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-5-[(4，4，7-三甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-6-基)甲基]-2-糠酰胺和N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-5-[(4，4，7-三甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-8-基)甲基]-2-糠酰胺：
向在THF-MeOH-H2O(7∶5∶5，20ml)中的乙基-5-[(4，4，7-三甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-6-基)甲基]-2-糠酸酯和乙基-5-[(4，4，7-三甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-8-基)甲基]-2-糠酸酯(1.34g，3.74mmol)中加入氢氧化锂一水合物(784mg，18.7mmol)。于室温下搅拌该混合物4小时。将该混合物蒸发至干，用30ml乙酸乙酯和50ml水稀释。用稀盐酸酸化后，分离乙酸乙酯层，干燥并蒸发，得到相应的酸的混合物，1.03g(定量)。该酸不能用柱层析或结晶方法分离。
向酸(200mg，0.66mmol)在二氯甲烷(30ml)的混合物中加入亚硫酰氯(392mg，3.3mmol)。将该混合物回流1小时并蒸发。使残留物溶于己烷-乙酸乙酯(9∶1，20ml)中并通过硅胶塞柱(0.5cm×1.0cm)过滤。
向在10ml乙酸乙酯中的残留物中加入2，4，6-三甲氧基苯胺盐酸盐(145mg，0.66mmol)，接着加入二异丙基乙胺(256mg，1.98mmol)。于室温下搅拌该混合物16小时。用水(10ml)猝灭该反应物，分离乙酸乙酯层。联合使用柱和HPLC进行纯化，得到15mg和21mg两种组分(12％)。
本发明化合物的生物利用度示于下表中。
本发明的某些化合物的体内药理学测试如下：体内试验：通用方法
从Harlan Sprague Dawley(San Diego)购买成年雄性Sprague-Dawley大鼠。每个笼子关养2只动物并维持在控制的室温下(22+2℃)，同时维持12小时光照/12小时黑暗的光周期(0600h的光)。自由给予大鼠啮齿动物饲料(chow)(Teklad大鼠饲料)和自来水。评价GnRH拮抗剂活性的动物模型：阉割的雄性大鼠模型基本原理：
生殖腺的手术摘除除去了循环血液中的睾酮并消除睾酮对下丘脑的负反馈。结果使GnRH升高以及随之而来的LH升高(图7)。期望GnRH拮抗剂将减少由GnRH介导的LH水平升高。抗排卵肽，一种GnRH肽拮抗剂，减少阉割大鼠的LH水平(图8)。这种模型似乎适合于评价小分子GnRH拮抗剂。方案：
在卤烷麻醉下，经阴囊途径阉割雄性Sprague-Dawley大鼠(200-225g)。在研究前，允许动物有14天的手术后恢复。在阉割后的第13天，用卤烷麻醉动物，对动物留置颈静脉导管。插入导管方法的细节以前已有描述[Harms和Ojeda，1974]。在试验的当天，使动物适应它们居住的笼子。从所有的动物中抽取基础血样。基础抽样后，立即经各种途径给予媒介物或试验化合物。采用的给药途径为静脉内(iv)、肌内(im)、腹腔(ip)、皮下(sc)和口服(po)。在治疗后的多个时间点将血液样品抽到含有肝素的试管中。立即离心血液，收集血浆并于-20℃下在冰箱中贮存直至分析。用得自Diagnostic Systems Laboratories，Inc.的DSL-4600 ACTIVE LH包被的-管式免疫放射测定试剂盒分析血浆样品。化合物的制剂：
制剂1号(用上标1指明)：10％ DMSO、10％ Cremophor EL和80％生理盐水。
制剂2号(用上标2指明)：10％ Cremophor EL和90％生理盐水。结果：
见图9-11和表。完整的雄性大鼠基本原理：
睾酮为由下丘脑-垂体-生殖腺轴调节的激素。GnRH以脉冲形式从下丘脑分泌出来并刺激垂体前叶以释放促性腺激素LH和FSH。当睾丸被LH刺激时，即产生睾酮。所分泌的睾酮的量的增加与获得的LH的量大致成正比(Guyton，1986)。期望GnRH拮抗剂通过抑制LH减少睾酮水平。方案1：
使雄性Sprague-Dawley大鼠(250-275g)单独关养并在研究前使动物适应1周。在研究的当天，经各种途径，包括ip、sc或po给予动物媒介物或试验化合物。在治疗后的预定时间点从被卤烷麻醉的个体动物中，经心脏穿刺获得血样。将血液样品抽到含有肝素的试管中。立即离心血液，收集血浆并于-20℃下在冰箱中贮存直至分析。用得自Diagnostic Systems Laboratories，Inc.的DSL-4000 ACTIVE睾酮包被的-管式免疫放射测试试剂盒分析血浆样品。方案2：
使雄性Sprague-Dawley大鼠(250-275g)单独关养并在研究前使动物适应1周。我们开发出一种技术，即通过在研究前7天使用microrenathane(MRE)导管可从颈静脉重复取样。手术步骤的细节以前已有描述[Harms和Ojeda，1974]。在研究的当天，使动物适应它们居住的笼子。从所有的动物中抽取基础血样。基础抽样后，立即经各种途径给予媒介物或试验化合物。采用的给药途径为静脉内(iv)、肌内(im)和口服(po)。在治疗后的多个时间点将血液样品抽到含有肝素的试管中。立即离心血液，收集血浆并于-20℃下在冰箱中贮存直至分析。用得自Diagnostic Systems Laboratories，Inc.的DSL-4000 ACTIVE睾酮包被的-管式免疫放射测试试剂盒分析血浆样品。方案3：化合物134号的重复给药研究
使雄性Sprague-Dawley大鼠(250-275g)成对关养并在研究前使动物适应1周。每日在上午8：00至9：00之间经im、sc或po给予媒介物进行处理，共7天。在第8天上午8：00至9：00之间，在卤烷麻醉下，经心脏穿刺抽取血样。整个过程在45-60秒钟内完成。在下一个7天中，使一组动物继续接收媒介物处理，而另一组动物不接收处理。在这种处理方案后的第7天，如上述收集样品。媒介物处理的动物和未处理的动物之间的睾酮水平没有差别。
每日在上午8：00至9：00之间经im给予化合物134(100mg/kg)或媒介物，共进行7天。在处理后第7天如上所述收集样品。
所有的血液样品收集到含有肝素的试管中。立即离心血液，收集血浆并于-20℃下在冰箱中贮存直至第二天分析用。用得自DiagnosticSystems Laboratories，Inc.的DSL-4000 ACTIVE睾酮包被的-管式免疫放射测试试剂盒分析血浆样品。结果
见表2和图12-14。
代表性的图
      图7用于评价GnRH拮抗                                           图8抗排卵肽对阉割大鼠的
      剂的阉割大鼠模型的特征                                           LH的剂量依赖性抑制
Figure A9981228500661
         
Figure A9981228500662
      图9  化合物134(iv)对LH的                                      图10口服给予化合物134
         抑制是剂量依赖性的                                            抑制阉割大鼠的LH          
Figure A9981228500664
      图11IM给予化合物134
      (20mg/kg)抑制CX大鼠的LH＞12小时
Figure A9981228500665
图的说明图7：条形图显示阉割(CX)和完整大鼠的基础LH和睾酮水平。CX大鼠中的LH升高。CX大鼠中的睾酮缺乏。图8：线图显示媒介物和抗排卵肽处理的动物的LH水平，表示为基础LH的百分率。抗排卵肽(2.0和20ug；sc)抑制CX大鼠的LH。图9：线图显示媒介物和化合物处理的动物的LH水平，表示为基础LH的百分率。化合物134(1.0、5.0和10mg/kg；iv)产生CX大鼠的LH的剂量依赖性抑制作用。图10：线图显示媒介物和化合物处理的动物的LH水平，表示为基础LH的百分率。化合物134(20或100mg/kg；ip)抑制CX大鼠的LH。图11：线图显示媒介物和化合物处理的动物的LH水平，表示为基础LH的百分率。化合物134(20m/kg；im)抑制CX大鼠的LH。
表1在阉割大鼠模型中的GnRH化合物
化合物   剂量mg/kg途径    最大LH抑制％  ≥50％抑制的持续时间   血浆浓度的范围μM
   No.9     1.0/iv    40于0.5hr        NS        ND
   No.11     10/iv10/ip20/po    85于0.75hr50于0.5hrNS       3hr＜1hrNS        ND
   No.13     20/iv     63于0.5hr      ＜1hr        ND
   No.48     10/iv20/iv     75于0.5hr51于1hr      ＜1hr1hr 35.7-3.49
   No.20     10/iv20/iv50/im50/po100/po     78于0.5hr72于1hr65于1hr59于1hr43于2hr      0.5hr1.0hr2hr2hrNS        ND
   No.136     5.0/iv10/iv20/iv20/ip20/po40/po     48于1hr74于2hr98于4hrNSNS     1.0hr6hr≥6hrNSNS      3.0-0.33.7-0.288.9-0.70.290.72
   No.134     1.0/iv5.0/iv10/iv20/po100/po20/ip100/ip20/sc100/sc20/im100/im     24于0.5hr70于0.5hr100于0.5hr62于4hr84于4hr80于2hr98于4hr53于8hr80于6hr73于2hr98于2-24hr 2hr4hr8hr4hr8hr仅为8hr8hr8hr24hr      0.53-0.203.2-0.114.8-0.160.94-0.31.27-0.71.7-0.451.7-0.320.6-0.30.39-.151.3-0.1210.8-0.5
  No.119     5.0/iv10/iv20/po20/ip20/sc      63于1hr61于1hr63于2hr79于2hrNS      1hr1hr2hr2hrNS      3.1-0.88.13-0.350.10.6-0.10.2
  No.183     10/iv50/po10/im      92于1hr60于2hr58于2hr      8hr8hrNS      1.5-0.890.65-.130.18-.08
  No.206     10/iv20/po      51于1hrNS      NSNS      0.2-0.060.1-0.05
NS＝未抑制
ND＝未测定代表性的图
        图12化合物136(20mg/kg；IP)                                  图13口服给予化合物134
          在处理后6小时抑制睾酮                                     对完整大鼠的睾酮的作用
Figure A9981228500691
       
Figure A9981228500692
        图14每日给予化合物134(100mg/kg；
             im)抑制大鼠的睾酮图的说明方案1的描述：图12：条形图显示媒介物和化合物处理的动物经ip注射后6小时的睾酮水平。与媒介物处理的动物比较，化合物136抑制睾酮的水平*＝P＜0.05，t检验。方案2的描述：图13：线图显示媒介物和化合物134处理的大鼠的12小时时程和24小时时间点的睾酮水平。媒介物和化合物134经口管饲给予。化合物134的最高剂量在研究的整个过程抑制睾酮。方案3的描述：图14：条形图显示媒介物、化合物134和对照剂处理的动物的睾酮水平。空心条表示预处理的睾酮水平，而实心条表示重复处理7天后的睾酮水平。与预处理、媒介物和对照-处理的动物比较，化合物134显著抑制睾酮水平。*＝P＜0.05，t检验。
表2  完整雄性大鼠中的GnRH化合物
化合物   剂量mg/g途径   睾酮抑制％ 抑制持续时间    血浆浓度的范围μM
 134号     20/ip100/sc20/po100/im*7天20/po50/po100/po    36于4hr60于24hrNS于2或4hr80于12hrNS75于4hr80于6hr      4hr24hrNS12hrNS8hr12hr       0.20.130.15于2hr0.17于4hr1.31.1于1hr2.5-0.222.4-0.25
 136号     20/ip40/po    72于6hr46于4hr      6hr4hr        0.40.34
NS＝未抑制
ND＝未确定方法注释
已经证实，通常用于动物内分泌研究的一些方法，例如麻醉、禁食、手术可影响被研究的激素水平(B.E.Howland等，Experentia，1974)。黄体生成素和睾酮对应激子是敏感的。关于应激子对HPG轴的作用的大量报道是相互矛盾的，即使使用相同的物种和应激子亦是如此。例如，已有报道，经受限制或固定术的雄性大鼠具有低的(Kruhlich等，1974；DuRuisseau等，1978)、正常的(Tache等，1980；Charpenet等，1982；Collu等，1984)或升高的LH浓度(Briski等，1984)。类似地，有报道血浆睾酮水平在暴露于应激的情况后会改变，但其后的数据似乎是矛盾的，因而很难解释清楚。例如，有报道在激烈的体育锻炼期间，血浆睾酮水平增加(Dessypris等，1976)、降低(Sutton等，1973)或维持不变(Lamb，1975)。固定术对睾酮浓度的作用是比较一致的，大多数研究报道，睾酮浓度的循环值降低(Tache等，1980；Charpenet等，1982；Collu等，1984)。然而，可以接收的是，应激子确实引起循环睾酮的变化，且所用的应激类型、持续时间和强烈程度引起不同的应激-诱导睾酮浓度变化。考虑到LH和睾酮对应激状态的敏感性，我们优化了在最小应激状态下评价LH和睾酮的方案。
已经制备的本发明化合物示于附表中。
化合物可以采用上面提供的通用实验方法制备。特定的实例给出如下。包含嘧啶的化合物2-氯-N-[(2R)-四氢-2-呋喃甲基]-4-嘧啶胺1和4-氯-N-[(2R)-四氢-2-呋喃甲基]-4-嘧啶胺2的制备：
向250ml的园底烧瓶中装入2，4-二氯嘧啶(5.0g，33.56mmol)和200ml THF。向该溶液中加入三乙胺(14.0ml，100.68mmol)和[R]-四氢糠基胺。将该溶液搅拌过夜。将反应混合物倾入水中并用二氯甲烷提取。用盐水洗涤分离的有机层，经硫酸镁干燥并在旋转蒸发器上浓缩。粗品化合物经硅胶层析纯化，用己烷/乙酸乙酯(4∶1 v/v至1∶1 v/v)洗脱，得到2(1.3g)和1(3.98g)。N-[3-(氨基甲基)苄基]-2，2，2-三氟乙酰胺3的制备
向间-二甲苯二胺(28.76g，211.15mmol)的THF(300ml，.7M)溶液中滴加三氟乙酸乙酯(10g，70.38mmol)的THF(50ml，1.4M)溶液。于室温下将该溶液搅拌过夜。通过TLC监测该反应。浓缩溶剂，用4N HCl将残留物酸化至pH2并溶于水中，用乙酸乙酯洗涤。用氢氧化铵将分离的水层碱化至pH11，用二氯甲烷提取化合物。用水/盐水洗涤分离的有机层，经硫酸镁干燥并浓缩，得到3(8.71g，收率53％)。5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-N-(3-{[(2-{[(2R)-四氢-2-呋喃甲基]氨基}-4-嘧啶基)氨基]甲基}苄基)-2-糠酰胺9。3-(氨基甲基)苄基氨基甲酸乙酯5的制备
向N-[3-(氨基甲基)苄基]-2，2，2-三氟乙酰胺3的溶液(10.6g，43.1mmol)中加入氯甲酸乙酯(1当量)，接着加入三乙胺。于室温下搅拌该反应物30分钟。用二氯甲烷提取粗产物，浓缩得到3-{[(三氟乙酰基)氨基]甲基}苄基氨基甲酸乙酯4。使粗产物溶于甲醇(100ml)和2N碳酸钾(100ml)中并搅拌过夜。用20％氢氧化钠将该反应混合物碱化至pH14，用二氯甲烷提取，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥得到5(5.2g)3-{[(2-{[(2R)-四氢-2-呋喃甲基]氨基}-4-嘧啶基)氨基]甲基}苄基氨基甲酸乙酯6的制备
向3-(氨基甲基)苄基氨基甲酸乙酯5和4-氯-N-[(2R)-四氢-2-呋喃甲基]-4-嘧啶胺2的氯苯溶液中加入三乙胺。将该反应混合物回流过夜。冷却该溶液至室温并装填到硅胶柱上，用己烷/乙酸乙酯(1∶1 v/v)洗脱，得到3-{[(2-{[(2R)-四氢-2-呋喃甲基]氨基}-4-嘧啶基)氨基]甲基}苄基氨基甲酸乙酯6(收率73％)。
使3-{[(2-{[(2R)-四氢-2-呋喃甲基]氨基}-4-嘧啶基)氨基]甲基}苄基氨基甲酸乙酯6溶于乙二醇和氢氧化钾(1∶1 v/v)中。将该溶液加热至100℃过夜。使该混合物冷却至室温并用氯仿提取，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥得到N4-[3-(氨基甲基)苄基]-N2-[(2R)-四氢-2-呋喃甲基]-2，4-嘧啶二胺7(收率82％)。5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-N-(3-{[(2-{[(2R)-四氢-2-呋喃甲基]氨基}-4-嘧啶基)氨基]甲基}苄基)-2-糠酰胺9的制备
使3-{[(2-{[(2R)-四氢-2-呋喃甲基]氨基}-4-嘧啶基)氨基]甲基}苄基氨基甲酸乙酯6溶于乙二醇和氢氧化钾(1∶1 v/v)中。将该溶液加热至100℃过夜。使该混合物冷却至室温并用氯仿提取，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥得到N4-[3-(氨基甲基)苄基]-N2-[(2R)-四氢-2-呋喃甲基]-2，4-嘧啶二胺7(收率82％)。使该产物，即7(182mg，.580mmol)和2-糠酰氯试剂8溶于二氯甲烷中，接着溶于三乙胺中。于室温下搅拌该反应物过夜。粗品化合物经硅胶柱纯化，用乙酸乙酯/己烷(4∶1 v/v)洗脱，得到5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-N-(3-{[(2-{[(2R)-四氢-2-呋喃甲基]氨基}-4-嘧啶基)氨基]甲基}苄基)-2-糠酰胺9(159.1mg)。1H NMR(CDCl3)□□□□□□□□s□□□□□□□□□□□□□s□□□□□□□1.65(m，5H)，1.92(m，3H)，2.23(s，3H)，3.45(m，1H)，3.5(m，1H)，3.7(m，1H)，3.9(m，3H)，4.05(m，1H)，4.50(d，2H)，4.58(d，2H)，5.01(brd，1H)，5.30(brd，1H)，5.71(d，1h)，6.03(d，1H)，6.61(t，1H)，6.99(s，1H)，7.06(s，1H)，7.07(s，1H)，7.28(m，4H)，7.80(d，1H)。MS：622.4(M+1)。5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-N-(3-[[(4-{[(2S)-四氢-2-呋喃甲基]氨基}-2-嘧啶基)氨基]甲基}苄基)-2-糠酰胺12的合成。N-[3-(氨基甲基)苄基]-5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酰胺11的制备
向N-[3-(氨基甲基)苄基]-2，2，2-三氟乙酰胺3和2-糠酰氯试剂8的溶液中加入三乙胺。于室温下搅拌该反应混合物1小时。粗品混合物经硅胶层析纯化，用己烷/乙酸乙酯(4∶1 v/v)洗脱，得到5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-N-(3-{[(三氟乙酰基)氨基]甲基}苄基)-2-糠酰胺10。使纯化的化合物溶于甲醇(100ml)和在水(2M，100ml)中的碳酸钾中。将该反应物加热至70℃过夜。使该溶液冷却至室温，用20％氢氧化钠碱化至pH14，用二氯甲烷提取，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥得到N-[3-(氨基甲基)苄基]-5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酰胺11(4.97g，85.1％)。5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-N-(3-[[(4-{[(2S)-四氢-2-呋喃甲基]氨基}-2-嘧啶基)氨基]甲基}苄基)-2-糠酰胺12的制备
向N-[3-(氨基甲基)苄基]-5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酰胺11的氯苯溶液中加入2-氯-N-[(2S)-四氢-2-呋喃甲基]-4-嘧啶胺和三乙胺。将反应混合物回流过夜。然后通过硅胶层析，接着经HPLC纯化冷却的混合物。得到5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-N-(3-[[(4-{[(2S)-四氢-2-呋喃甲基]氨基}-2-嘧啶基)氨基]甲基}苄基)-2-糠酰胺12。1H NMR(CDCl3)：□□□□□□□□s□□□□□□□1.25(s，6H)，1.43(m，1H)，1.56(s，4H)，1.70-1.98(m，3H)，2.13(s，3H)，3.24(m，1H)，3.61(m，1H)，3.63-3.80(m，2H)，3.82(s，2H)，3.87-4.06(m，1H)，4.37-4.60 4.37(d，2H)，4.60(d，2H)，5.73(d，1H)，5.92(d，1H)，6.3(brd，1H)，6.75(brd，1H)，6.92(s，1H)，6.98(d，1H)，7.0(s，1H)，7.09-7.26(m，4H)，7.4(s，1H)，9.5(brd，1H)。MS(APCI)：622.3(M+1)。包含杂环化合物的实例
Figure A9981228500771
4-(3-甲基苯氧基)-2-丁酮：
Figure A9981228500772
向在氯仿(25ml)中的间-甲苯酚(4.0g，37mmol)、丁烯酮(3.2ml，37mmol)中加入二异丙基乙胺。将该混合物加热回流16小时，使冷却至室温并蒸发。残留物具有50％的产物和50％的原料。分离为叔丁基二甲基甲硅烷基醚的原料。通过硅胶塞柱过滤，用50％的己烷/乙酸乙酯分离产物。得量4.5g(68％)。作为一种替代的纯化方法，蒸发粗反应混合物，溶于DMF(0.2M)，加入0.5当量咪唑和0.5当量tBDMSCl。于室温下搅拌该反应物3小时，然后真空除去溶剂。向残留物中加入75ml乙酸乙酯和75ml水(比率1/1)。分离乙酸乙酯层，经硫酸钠干燥。真空除去溶剂。将粗物质置于硅胶垫上，用己烷除去甲硅烷基化的间-甲苯酚。通过用在己烷中的5-10％乙酸乙酯洗脱获得产物。真空蒸发溶剂得到所需产物。1H(CDCl3)7.15(t，1H)，6.65-6.80(m，2H)，4.25(t，2H)，2.75(t，2H)，2.25和2.35(2s，各为3H)。2-甲基-4(3-甲基苯氧基)-2-丁醇：
Figure A9981228500781
向由镁(572mg，23.56mmol)和MeI(3.34g，23.56mmol)制备的溴化甲基镁的乙醚(50ml)溶液中加入在10ml乙醚中的4-(3-甲基苯氧基)-2-丁酮(2.1g，11.78mmol)。于室温下搅拌该溶液30分钟，此后用水和稀盐酸猝灭之。分离有机层，经硫酸钠干燥，通过硅胶塞柱过滤得到无色浆状物1.91g(83％)，用APCI进行质谱分析+ve 177(M+-OH)。4，4，7-三甲基苯并二氢吡喃：
向在40ml二硫化碳中的氯化铝(1.3g，9.79mmol)中加入在10ml二硫化碳中的2-甲基-4(3-甲基苯氧基)-2-丁醇(1.9g，9.79mmol)。将该混合物加热回流2小时。蒸发溶剂，用50ml乙酸乙酯和10ml水稀释残留物。分离有机层，经硫酸钠干燥，通过柱层析纯化得到淡黄色浆状物1.5g(87％)。1H(CDCl3)7.05(br d，1H)，6.87(dd，1H)，6.69(d，1H)，4.20(t，2H)，2.35(s，3H)，1.80(t，2H)，1.40(s，6H)。乙基-5-[(4，4，7-三甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-6-基)甲基]-2-糠酸酯，及乙基-5-[(4，4，7-三甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-8-基)甲基]-2-糠酸酯：
向在硝基甲烷(20ml)中的氯化锌(950mg，6.97mmol)中加入在硝基甲烷(15ml)中的4，4，7-三甲基苯并二氢吡喃(1.23g，6.97mmol)和乙基-5-氯甲基-2-糠酸酯(656mg，3.48mmol)的混合物。于室温下搅拌该混合物16小时。蒸发其至干并用乙酸乙酯-水(1∶1，100ml)研磨。有机层经常规后处理，用己烷∶乙酸乙酯(9∶1)进行塞柱过滤，得到这两种化合物的混合物。1.34g(46％基于苯并二氢吡喃)。N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-5-[(4，4，7-三甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-6-基)甲基]-2-糠酰胺和N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-5-[(4，4，7-三甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-8-基)甲基]-2-糠酰胺：
Figure A9981228500792
向在THF-MeOH-H2O(7∶5∶5，20ml)中的乙基-5-[(4，4，7-三甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-6-基)甲基]-2-糠酸酯和乙基-5-[(4，4，7-三甲基-3，4-二氢-2H-苯并吡喃-8-基)甲基]-2-糠酸酯(1.34g，3.74mmol)的混合物中加入氢氧化锂一水合物(784mg，18.7mmol)。于室温下搅拌该混合物4小时。将该混合物蒸发至干，用30ml乙酸乙酯和50ml水稀释。用稀盐酸酸化后，分离乙酸乙酯层，干燥并真空蒸发，得到相应的酸的混合物，1.03g(定量)。该酸不能用通常的柱层析或结晶方法分离。向酸(200mg，0.66mmol)在二氯甲烷(30ml)中的混合物中加入亚硫酰氯(392mg，3.3mmol)。将该混合物回流1小时并蒸发。使残留物溶于己烷-乙酸乙酯(9∶1，20ml)中并通过硅胶塞柱(0.5cm×1.0cm)过滤。向在10ml乙酸乙酯中的残留物中加入2，4，6-三甲氧基苯胺盐酸盐(145mg，0.66mmol)，接着加入二异丙基乙胺(256mg，1.98mmol)。于室温下搅拌该混合物16小时。用水(10ml)猝灭该反应物，分离乙酸乙酯层。联合使用柱和HPLC进行纯化，得到15mg和21mg两种组分(12％)。用反相HPLC层析分离异构体。线性异构体：1H(CDCl3)7.46(br s，1H)，7.23(br s，1H)，7.14(br s，1H)，7.02(s，2H)，6.63(s，1H)，6.15(s，2H)，6.0(d，1H)，4.17(t，2H)，3.93(s，3H)，3.81，3.80(2s，各为3H)，2.21(s，3H)，1.81(t，2H)，1.29(s，6H)。M+在466.2处。角向异构体：AXC07302：7.25(br s，1H)，6.91(d，1H)，6.88(d，掩蔽，1H)，6.53(d，1H)，5.95(s，2H)，5.72(d，1H)，3.96(t，2H)，3.8(s，3H)，3.6(s，6H)，2.07(s，3H)，1.59(t，2H)，1.11(s，6H)。M+在466.1处。芳族化合物的实例
                     化合物A
              a.乙酸乙酯，三乙胺，过夜
                     化合物B
Figure A9981228500802
            a.HATU，二异丙基乙胺，DMF 24小时b.叔丁醇钾在20％甲醇/DMF中，30分钟，c.溴化物试剂，20％甲醇/DMF，48小时
Figure A9981228500803
                         化合物183
使百里酚(1.0当量，33.3mmol)和5-(氯甲基)-2-糠酸甲酯(1.0当量，33.3mmol)溶于硝基甲烷(120ml，0.2M)。在氮气下，将溶于25ml硝基甲烷中的三氯化铝(1.0当量，33.3mmol)加入到上面的溶液中并加热至缓慢回流10分钟。关闭热源并在氮气下放置过夜。用100ml水猝灭反应并用二氯甲烷提取。将粗混合物蒸发至干并装填到塞状层析柱(1g粗品/100g硅胶比率)上。用7％和11％乙酸乙酯/己烷洗柱，得到所需产物(2.9g，30％)。通过用在THF/甲醇/水(35/25/25)中的氢氧化锂将酯水解为酸。
使含有5-(4-羟基-5-异丙基-2-甲基苄基)-2-糠酸的溶液(1.0当量，3.6mmol，0.5M)和2，6-二甲氧基苯胺(1.0当量，3.6mmol)溶于DMF中。向该混合物中加入HATU(1.0当量，3.6mmol)和二异丙基乙胺(1.0当量，3.6mmol)并搅拌过夜。将该混合物于45℃加热10分钟。将该溶液倒入乙酸乙酯(3×体积)中并用水洗涤。将有机层蒸发至浆状物，经塞柱层析(1∶100g粗品/g硅胶)，用30和50％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到：N-(2，6-二甲氧基苯基)-5-(4-羟基-5-异丙基-2-甲基苄基)-2-糠酰胺(820mgs，收率55％)。1HNMR(CDCl3)7.22ppm(1H，t，J＝8.68Hz)，7.08ppm(1H，d，J＝3.40Hz)，6.99ppm(1H，s)，6.64ppm(2H，d，J＝8.68Hz)，6.61ppm(1H，s)，5.97ppm(1H，d，J＝3.40Hz)，3.95ppm(2H，s)，3.85ppm(6H，s)，3.17ppm(1H，五重峰，J＝6.8Hz)，2.23ppm(3H，s)，1.25ppm(3H，s)和1.23ppm(3H，s)。
使叔丁醇钾(1.05当量，0.128mmol)溶于甲醇(24μl)中。向上面的糠酰胺(1.0当量，0.122mmol，1M)的DMF溶液中加入叔丁醇化物溶液并搅拌30分钟。加入2-溴乙基甲醚(1.0当量，0.122mmol)(20％甲醇/DMF，1M)，于室温下搅拌48小时，经反相HPLC(方法：35-75％ 90分钟乙腈在0.1％ TFA水溶液中)纯化得到(8.5mgs，收率15％)。1HNMR(CDCl3)7.04ppm(1H，J＝8.31Hz，t)，6.85ppm(1H，J＝3.40，d)，6.80ppm(1H，s)，6.53ppm(1H，s)，6.48(2H，J＝8.31Hz，d)，5.76(1H，J＝3.40Hz，d)，3.88(2H，J＝3.40/4.53Hz，dd)，3.78(2H，s)，3.58(6H，s)，3.54(2H，J＝3.40/4.54Hz，dd)，3.20(3H，s)，3.07(1H，J＝7.2Hz，五重峰)，2.04(3H，s)，0.97(3H，s)，0.95(3H，s)。
                         化合物A
由参考文献：John J.Parlow Tetrahedron 49卷(13)2577的方法合成1，1，6-三甲基-1，2，3，4-四氢萘。然后通过前述的Friedles-Crafts反应将其与5-(氯甲基)-2-糠酸甲酯结合，得到两种主要的区域异构体。水解后，采用从10％丙酮/庚烷(1g/10ml)体系中连续重结晶3-5次的方法分离所需异构体。然后如前所述用亚硫酰氯将所述酸转化为酰氯。
向5-[(3，8，8-三甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酰氯(1.0eq，0.32mmol，0.2M)在2ml乙酸乙酯中的溶液中加入2，4，6-三甲氧基苯胺一盐酸盐(1.0eq，0.32mmol)。将三乙胺(过量)加入该混合物中并搅拌过夜。真空干燥粗产物，通过塞柱层析(1∶100粗物质/硅胶比率)，用20％和30％乙酸乙酯/己烷溶液洗脱。在某些情况下，通过在25％乙酸乙酯/己烷(1g/75ml化合物/体积)中重结晶分离区域异构体，得到N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-5-[(3，8，8-三甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-2-糠酰胺(120mg，收率82％)。1H NMR(CDCl3)7.28ppm(1H，宽峰)，7.12(1H，s)，7.08(1H，J＝3.40Hz，d)，6.89(1H，s)，6.19(2H，s)，6.00(1H，J＝3.40Hz，d)，3.97(2H，s)，3.83(3H，s)，3.82(6H，s)，2.73(2H，J＝6.05Hz，t)，2.25(3H，s)，1.84-1.76(2H，多重峰)，1.69-1.63(2H，多重峰)，1.59(3H，s)，1.26(6H，s)元素：理论值C(72.55)，H(7.18)，N(3.02)；实测值C(72.67)，H(7.22)，N(2.98)。
                       化合物228
Figure A9981228500821
化合物II  向3，5-二甲氧基苯胺(化合物I，1.53g，10mmol)的DCM(20ml)溶液中加入甲烷磺酰氯(0.88ml，10mmol)。滴加TEA(1.40ml，10mmol)。于室温下搅拌该反应混合物15小时。使粗产物干燥并经快速层析(30％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到为白色固体的化合物II(2.10g，91％)。1HNMR□□□□□Hz，CDCl3)2.96(s，3H)，3.71(s，6H)，6.20(d，1H，J＝3Hz)，6.34(d，2H，J＝3Hz)，6.76(s，1H)。APCI-MS m/z 232(M+H)+。化合物III  向(CH3)4NNO3(1.12g，7.89mmol)的DCM(10ml)的溶液中滴加三氟甲磺酸酐。于0℃搅拌该反应混合物1.5小时。将在10ml DCM中的化合物II(1.75g，7.51mmol)放入滴液漏斗中并于-78℃将该溶液加入到三氟甲磺酸硝鎓反应混合物中。于-78℃维持该反应混合物30分钟并逐渐温热至室温。搅拌15小时。用5％碳酸氢钠(50ml)猝灭反应，搅拌该混合物30分钟。用DCM(3×20ml)提取水层。经硫酸钠干燥合并的DCM层。粗产物经HPLC纯化，得到白色固体的化合物III(250mg，11％)。1H NMR□□□□□Hz，CDCl3)3.03(s，3H)，3.87(s，3H)，3.90(s，3H)，6.32(d，1H，J＝3Hz)，6.88(d，1H，J＝3Hz)，8.31(s，1H)。APCI-MS m/z 275(M-H)-。化合物IV  向化合物III(106mg，0.38mmol)的乙醇(2ml)溶液中加入20mg Pd/C和NH2NH2(1ml)。使该反应混合物回流9小时。使反应混合物通过硅藻土垫。蒸干该溶液得到棕色固体的化合物IV(90mg，95％)。这种化合物可直接用于下一步骤。
                              化合物228
向化合物IV(39mg，0.16mmol)、5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基]-2-糠酰氯(60mg，0.174mmol)的DCM(1ml)的溶液中加入TEA(44μl，0.31mmol)。于室温下搅拌该反应混合物过夜。快速层析(30％乙酸乙酯/己烷)得到化合物228(65mg，74％)为白色固体。1H NMR□□□□□□Hz，CDCl3)1.04(m，12H)，1.45(m，4H)，2.09(s，3H)，2.71(s，3H)，3.60(s，3H)，3.63(s，3H)，3.78(s，2H)，5.89(d，1H，J＝3Hz)，6.17(d，1H，J＝3Hz)，6.58(d，1H，J＝3Hz)，6.85(s，1H)，6.90(s，1H)，6.96(d，1H，J＝3Hz)，7.90(s，1H)，8.24(s，1H)。APCI-MS m/z 556(M+H)+。一些化合物的其它实施例(NMR)如下所述化合物201H NMR□□□□□□Hz，CDCl3)1.26(m，12H)，1.66(m，4H)，2.28(s，3H)，3.82(s，6H)，3.96(s，2H)，6.04(d，1H，J＝6Hz)，6.60(s，1H)，6.62(s，1H)，7.05(m，3H)，7.23(t，1H，J＝6Hz)，7.44(s，1H)。APCI-MS m/z 462(M+H)+。化合物1261H NMR□□□□□□Hz，DMSO)2.20(s，3H)，2.27(s，6H)，3.71(s，6H)，3.98(s，2H)，5.93(d，1H，J＝3Hz)，6.68(s，1H)，6.69(s，1H)，6.86(d，2H，J＝3Hz)，7.10(d，1H，J＝3Hz)，7.23(t，1H，J＝7Hz)，9.04(s，1H)。APCI-MSm/z 379(M+H)+。化合物1401H NMR□□□□□□Hz，DMSO)2.28(s，3H)，2.32(s，3H)，2.42(s，3H)，3.72(s，6H)，4.10(s，2H)，6.00(d，1H，J＝3Hz)，6.60(s，1H)，6.68(s，1H)，6.71(s，1H)，7.10(m，2H)，7.24(t，1H，J＝6Hz)，9.04(s，1H)。APCI-MS m/z458(M+H)+。化合物2111H NMR□□□□□□Hz，CDCl3)3.76-3.83(m，15H)，4.07(s，2H)，5.95(d，1H，J＝3Hz)，6.60(s，1H)，6.57-6.62(m，3H)，6.78(d，1H，J＝9Hz)，7.03(d，1H，J＝3Hz)，7.19(t，1H，J＝6Hz)，7.46(s，1H)。APCI-MS m/z 428(M+H)+。化合物2201H NMR□□□□□□Hz，CDCl3)3.72-3.77(m，15H)，3.90(s，2H)，5.78(d，1H，J＝3Hz)，6.08(s，2H)，6.52-6.55(m，2H)，6.94(d，1H，J＝9Hz)，7.12(t，1H，J＝9Hz)，7.39(s，1H)。APCI-MS m/z 428(M+H)+。化合物2261H NMR□□□□□□Hz，CD3OD)2.33-2.48(m，12H)，3.84(s，6H)，4.19(s，2H)，5.81(d，1H，J＝3Hz)，6.73(d，2H，J＝9Hz)，7.06(t，1H，J＝3Hz)，7.29(t，1H，J＝9Hz)。APCI-MS m/z 472(M+H)+。化合物2311H NMR□□□□□□Hz，CDCl3)0.67(t，3H，J＝6Hz)，1.27(m，6H)，1.70(m，2H)，3.62(s，3H)，3.80-3.83(m，6H)，4.02(s，2H)，6.02(d，1H，J＝3Hz)，6.60(d，2H，J＝9Hz)，6.83(d，1H，J＝3Hz)，7.07-7.19(m，4H)，7.43(s，1H)。APCI-MS m/z 438(M+H)+。化合物2321H NMR□□□□□□Hz，CDCl3)0.66(t，3H，J＝6Hz)，1.23(m，6H)，1.54-1.62(m，2H)，3.80-3.81(m，12H)，4.01(s，2H)，6.00(d，1H，J＝3Hz)，6.81(d，2H，J＝9Hz)，6.82(d，1H，J＝3Hz)，7.06-7.28(m，4H)。APCI-MS m/z 468(M+H)+。其它含有芳环的化合物的实施例
Figure A9981228500861
5-(5-环己基-2-甲基苄基)-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-2-糠酰胺的合成
于室温下，向化合物1(5.0g，20.3mmol)和糠酸甲酯(3.5g，20.3mmol)在100ml硝基甲烷中的混合物中加入氯化铝(5.4g，40.6mmol)的CH3NO2(50ml)溶液。将该溶液加热至70-75℃过夜。将深棕色的混合物冷却至室温并缓慢倾入到300ml冰水中。用乙酸乙酯提取该混合物。浓缩的有机层经硅胶层析纯化，用己烷/乙酸乙酯(15∶1至9∶1 v/v)洗脱，得到920mg化合物2，然后将其水解并根据通用方法与三甲氧基苯胺偶合，得到高收率的化合物。1HNMR(CDCl3)□1.23-1.48(m，5H)，1.73-1.86(m，5H)，2.31(s，3H)，2.51(m，1H)，3.83(s，1H)，4.02(s，2H)，6.03(s，1H)，7.44(s，1H)MS(APCI)：464.2(M+1)5-(5-乙酰基-2，4-二甲基苄基)-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-2-糠酰胺的合成
将化合物3(14g，94.4mmol)、糠酸甲酯(16.4g，94.4mmol)和氯化铝(25g，189mmol)在200ml硝基甲烷中的混合物搅拌并加热至80℃过夜。处理该混合物并经硅胶柱纯化，用己烷/乙酸乙酯(9∶1 v/v)洗脱，得到化合物4和5的混合物(3∶1，总16.2g)。于室温下，在2N氢氧化钠/甲醇(1∶1 v/v)中水解4和5(2.0g)的混合物，得到6和7的混合物，将其在丙酮和庚烷中重结晶提供6(460mg)。
用亚硫酰氯处理化合物6(150mg，.55mmol)并与三甲氧基苯胺偶合得到AXC07485(124mg)。1HNMR(CDCl3)□2.31(s，3H)，2.50(s，3H)，2.54(s，3H)，3.80(s，9H)，4.02(s，2H)，6.00(d，1H)，6.16(s，2H)，7.08(s，1H)，7.35(s，1H)，7.52(s，1H)。MS(APCI)：438.7(M+1)5-(5-异丙烯基-2，4-二甲基苄基)-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-2-糠酰胺的合成
Figure A9981228500881
于0℃、氮气下，向化合物6(250mg，.92mmol)的5ml无水THF的溶液中加入甲基锂(1.4M在己烷中，3当量)。于0℃搅拌该溶液3小时，用水猝灭并用乙酸乙酯提取。经硫酸镁干燥有机层，减压浓缩。用SOCl2处理粗品化合物并与三甲氧基苯胺偶合得到AXC07499(36mg)。1HNMR(CDCl3)□1.80(s，3H)，2.06(s，3H)，2.11(s，3H)，3.59(s，9H)，3.75(s，2H)，4.60(d，1H)，4.95(d，1H)，5.81(d，1H)，5.95(s，2H)，6.71(s，1H)，6.79(s，1H)，6.89(d，1H)，7.18(s，1H)。MS(APCI)：436.2(M+1)。5-[(4，6-二甲基[1，1’-联苯]-3-基)甲基]-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-2-糠酰胺的合成
于80℃，在硝基甲烷中进行化合物9(10g，57.3mmol)、糠酸甲酯(12.7g，68.7mmol)和氯化铝(9.1g，68.7mmol)的Friedal Crafts反应2小时。将该溶液倾入200ml冰水中并用乙酸乙酯提取。浓缩有机层并经硅胶柱纯化，用己烷/乙酸乙酯(9∶1 v/v)洗脱，得到比率2∶1的区域异构体10和11的混合物(15.5g)。
在2N氢氧化钠/甲醇(1∶1 v/v)中水解该混合物，得到酸类似物的混合物。
将酸的混合物(2.3g，7.4mmol)、苯硼酸(1.1g，8.9mmol)、[P(Ph)3]4Pd和碳酸钾(2N，11ml)在DMF(20ml)中加热至80℃过夜。经水处理后，使残留物通过硅胶柱并用溶剂己烷/乙酸乙酯/乙酸的混合物(7∶3∶1 v/v/v)洗脱，得到2种区域异构体的混合物，经在己烷和乙酸乙酯中重结晶得到12(610mg)。通过标准方法使化合物12与三甲氧基苯胺偶合，得到高收率的AXC07468。1HNMR(CDCl3)□2.24(d，3H)，2.33(d，3H)，3.82(s，6H)，3.84(s，3H)，4.02(s，2H)，6.03(d，1H)，6.18(s，2H)，7.06(s，2H)，7.12(s，1H)，7.29-7.40(m，5H)。MS(APCI)：472.1(M+1)。5-[5-(2，2-二甲基丙酰基)-2，4-二甲氧基苄基]-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-2-糠酰胺的合成
Figure A9981228500901
以两步的的Friedal Crafts反应(见通用方法)，由化合物13制备化合物15，得到中等收率的具有好的区域选择性的化合物15。水解化合物15并与三甲氧基苯胺偶合，得到化合物。1HNMR(CDCl3)□1.18(s，9H)，3.79(s，3H)，3.81(s，6H)，3.85(s，6H)，3.93(s，2H)，6.03(d，1H)，6.15(s，2H)，6.45(s，1H)，6.86(s，1H)，7.11(s，1H)，7.40(s，1H)。MS(APCI)：512.1(M+1)。5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)羰基]-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-2-糠酰胺和5-[羟基(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-2-糠酰胺的合成
Figure A9981228500911
将化合物.19(9.0g，27.5mmol)和四氧化锰(8.2g，82.7mmol)在混合溶剂氯仿和二氯乙烷中的混合物加热至70℃过夜。经水处理后，使化合物20通过硅胶柱并用己烷/乙酸乙酯/乙酸的混合物(90∶10∶1 v/v/v)洗脱。通过用于酰胺键形成的通用方法获得AXC07042。1HNMR(CDCl3)□1.26-1.31(2s，12H)，1.70(s，4H)，3.81(s，6H)，3.83(s，3H)，6.18(s，2H)，7.05(d，1H)，7.22(s，1H)，7.29(d，1H)，7.52(s，1H)，7.68(s，1H)。MS(APCI)：506.2(M+1)。
用硼氢化钠(1.5当量)在乙醇(2ml)和乙醚(0.5ml)中处理化合物(50mg)。于室温下搅拌该溶液1.5小时，用水猝灭并用乙酸乙酯提取。浓缩有机层，得到白色固体的化合物。1HNMR(CDCl3)□1.24，1.28，1.29(3s，12H)，1.66，1.67(2s，4H)，2.29(s，3H)，2.55(d，1H)，3.80(s，6H)，3.82(s，3H)，5.98(d，1H)，6.17(s，2H)，7.08，7.10(2s，2H)，7.38(s，1H)，7.41(s，1H)。MS(APCI)：508.2(M+1)。5-(5-{1-[(乙基氨基)羰基]环丙基}-2-甲基苄基)-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-2-糠酰胺的合成
Figure A9981228500921
将22(2.0g，11.3mmol)的亚硫酰氯(8ml)溶液加热至回流3分钟。通过旋转蒸发器除去未反应的亚硫酰氯。使浓缩的残留物溶于二氯甲烷中。向该溶液中加入乙胺(过量)得到化合物23(1.3g)。如通用方法中所述，经三步(Friedal Crafts反应，水解和酰胺键形成)使化合物转化为AXC07555。1HNMR(CDCl3)□0.94-1.02(m，5H)，1.59(m，2H)，2.34(s，3H)，3.17(q，2H)，3.80，3.81(2s，9H)，4.01(s，2H)，5.39(brd，1H)，6.01(d，1H)，6.17(s，2H)，7.11(d，1H)，7.21(m，2H)，7.31(s，1H)。MS(APCI)：493.2(M+1)。其它实施例：
Figure A9981228500931
可如下制备有用的中间体：甲基-5-(氯甲基)-2-糠酸酯
Figure A9981228500941
                       所需的原料
  原料    浓度   分子量     用量   摩尔数   当量数     密度       CAS
  2-糠酸甲酯    97％   126.11    0.371kg     2.88     1     1.179     [611-13-2]
   甲醛(水溶液)    37％   30.03    0.371L     4.95     1.72     1.083     [50-00-0]
    HCl    37％   36.46     2.2L     22.3     7.74     1.19     [7647-01-0]
   硫酸   95-98％   98.08     1.1L     11     3.82     1.84     [7664-93-9]
  二氯甲烷    试剂   84.93     2.2L      -      -     1.325     [75-09-2]
   氯化锌    98％   136.28    0.520kg     3.7     1.3       -     [7646-85-7]
  二氯甲烷    试剂   84.93    ******L      -      -     1.325     [75-09-2]
  碳酸氢钠(水溶液)    饱和     -    *****L      -      -       -     [144-55-8]
  硅胶     -     -    0.600kg      -      -       -         -
  硫酸钠    98％     -   根据需要      -      -       -     [7757-82-6]
用于每批2.88摩尔规模批生产5-(氯-甲基)-2-糠酸甲酯(2)的步骤-一个12L 3-颈园底烧瓶(r.b.)装配有一个加料漏斗；顶部电动搅拌器；热电偶；及冰浴。(推荐氮气保护，但可以不是必需的)-将2.2L DCM装入到r.b.中，接着装入2.2L浓盐酸。(未观察到明显的放热反应；形成两层)-开始搅拌。(确保两相充分混合)-如空间足够的话，将1.1L硫酸装入加料漏斗。冷却反应器至0-10℃。开始滴加硫酸，直至放热反应减慢(加入约1/2)，然后增加加入速率到澄清的流。(为安全起见，维持温度低于20℃)-将冷浴更换为室温下的水。(它将起受热器的作用，以使随后的加入不会明显减慢反应速率)-将0.371kg 2-糠酸甲酯一次性装入r.b.中。(未有明显的放热反应，绿/棕色溶液)-分次装入0.520kg氯化锌。(有些气泡-疑为HCl气体；通过水浴控制放热反应)-将0.371L甲醛装入淋洗过的加料漏斗中。用2.5-3.5小时加入到反应器中。(通过水浴将温度维持于室温下；缓慢加入在“游离”的甲醛间引起较少的聚合反应)-于室温下搅拌过夜。-当反应经TLC(见下述)显示完成时，放出水层。通过0.550kg硅胶塞柱(干燥填充，约10cm厚)过滤有机层。用约4L DCM洗脱，直至经TLC显示没有进一步的产物分离出来。(采用适当的通风，确保该步骤进行，因为仍存在一些酸蒸汽，即使在滤液中)-浓缩得到颜色范围由黄到棕色的油(约0.5L)-装入等量的DCM，约0.5L。用2×0.2L蒸馏水洗涤。然后用在0.15L蒸馏水中的0.05L饱和碳酸氢钠洗涤有机层。(确保pH7-10，在水层中没有明显产物损失)-放出水层，用硫酸钠干燥有机物。通过0.05kg硅胶(约5cm厚)过滤。用DCM洗脱，直至没有进一步的产物分离出来。-用house真空经旋转蒸发浓缩。然后将油置于高真空泵上过夜。(黄到浅棕色的油)
收率范围：95-100％
纯度范围：95-98％(HPLC A％)进一步的注解
观察：通过TLC(254nm)，采用30％乙酸乙酯/己烷(r.f.原料-0.52，r.f.产物-0.40)。
HPLC：TFA方法(方法和所附光谱)。原料rt＝12.67min.，产物rt＝17.37min。
NMR：1H(CDCl3)(所附光谱)3.93(s，3H)，4.63(s，2H)，6.52(d，1H)，7.18(d，1H)。
如果该反应已进行完全，每4小时可加入10％甲醛原体积的甲醛。温度的作用未进行广泛的研究，但将罐温维持在每一步骤指定的范围是有利的。甚至在过滤后，存在于有机层中的酸蒸汽仍使得在通风橱外操作成为问题，因此，在通风橱外转移物质时应该小心，直至pH显中性。如果甲醛的加入速率增加，聚合物的形成将由于甲醛的消耗而使反应不能进行完全。在开始该过程之前，应该进行带有安全隔离室的布置，以使这种配置可容纳从水层排出的大量的酸。中和含水的酸层需要大量的碱，产生大量的热，并需要延长的加入时间，因而不打算推荐。由于未获得该产物稳定性资料，终产物应该保持冷却。将产物保持于-20℃的Nalgene容器中会引起产物结晶出稍微变黑的物质，但使用这种物质对以后的反应似乎没有影响。
本发明化合物应用于治疗：1.激素依赖性癌症/肿瘤2.通过直接相互作用的激素非依赖性的癌症/肿瘤3.使用其它作用机制。
相信申请者的发明包括许多未在此专门描述的其它实施方案，因此，本公开不应理解为限制于前述实施例或优选的实施方案。
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Figure A9981228501001
腹膜内给药后的生物利用度：
    134 38％(20mg/kg)
    169 70％(20mg/kg)
    177 8％(20mg/kg)
门静脉输注：
   136 36％生物利用度(20mg/kg)
经CYP3A4代谢：
   20  3.4pmol/min/pmol
         狗      猴
  pmol/min/mg   pmol/min/mg
       1μM        1μM
    2520     7366
    2159     9277
    3071     5959
    1960     5019
  2301   5940
  2456   3120
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 GnRH Kb(nM)    5-HT7 Ki(nM)   5-HT2a KI(nM) D2 DA KI(nM) IL8 IC50(nM) NPYY1 IC50(nM)   胰高血糖素IC50(nM) GLP-1 IC50(nM)
          30
          95             1270             1200          550         6400           9700                 6600
            1800          150 ＞10000           2550                 3200 ＞10000
     170 ＞4500 ＞4000     1400 ＞10000 ＞10000      10000
      85 ＞4400 ＞3200 ＞10000 ＞10000       7900 ＞10000
＞4400 ＞3200 ＞10000 ＞10000       6300 ＞10000
9(大鼠) ＞4400 ＞3200 ＞10000 ＞10000       6700 ＞10000
8(大鼠)
13(rpH)13(hP) ＞4400       3720       2400
  6.3&8大鼠Pl， 2400 160
＞4400       2300
17(大鼠)       2710       3400
9(大鼠)
11.0(大鼠)
0.9nM(大鼠)
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按照条约第19条的修改
1.具有选自下式的化合物：或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
2.具有选自下式的化合物：
Figure A9981228504322
或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
3.具有下式的化合物：
Figure A9981228504323
或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
4.具有选自下式的化合物：
Figure A9981228504331
或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
5.具有下式的化合物：或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
6.具有选自下式的化合物：
Figure A9981228504333
或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
7.药用组合物包含：治疗有效量的权利要求1-6中任一项所定义的化合物、药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物，及药学上可接受的载体或稀释剂。
8.调节哺乳动物促性腺激素分泌的方法，包括给予治疗有效量的权利要求1-6中任一项所定义的化合物、药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
9.式I化合物，或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物：
其中X选自C＝O、C＝S、S＝O和S(O)2；
Figure A9981228504342
为含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5元杂环，其中所述环可以是饱和的、部分不饱和的，或完全不饱和的，且可以是芳环；
R1和R2独立选自H和低级烷基；
R3选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R4和R5独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R6和R7独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；或R6和R7与它们所结合的原子一起形成一个任选具有多至4个选自O、N和S的杂原子的任选取代的5元或6元环；
其中R3、R4、R5、R6和R7中至少一个不是氢；
R8为亲脂性的部分，选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为6-20；和
R9选自H、取代的和未取代的烷基。
10.式I化合物或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物：
其中X选自C＝O、C＝S、S＝O和S(O)2；
Figure A9981228504352
为含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5元杂环，其中所述环可以是饱和的、部分不饱和的，或完全不饱和的，且可以是芳环；
R1和R2独立选自H和低级烷基；
R3选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R4和R5独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R6和R7独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；或R6和R7与它们所结合的原子一起形成一个任选具有多至4个选自O、N和S的杂原子的任选取代的5元或6元环；
其中R3、R4、R5、R6和R7中至少一个不是氢；
R8为亲脂性的部分，选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为6-20；和
R9选自H、取代的和未取代的烷基；
或者R1或R2可以是-OH或＝O；和/或R8也可以是氢；
和/或R可以是COR或氢；和/或R8可以具有任何所需数目的碳原子；
和/或R8和R9也可以形成环；和/或任何相邻的R基团，如R5和R6或R3和R4可以形成环，如对R6和R7所定义的环；
和/或R6可以是COR；和/或所述(杂)基团可以是取代的或未取代的；
或R8和/或R9可选自杂环基或与式I的氮形成酰胺键的任何化合物。
11.药用组合物包含：
(a)治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物：
Figure A9981228504361
其中X选自C＝O、C＝S、S＝O和S(O)2；
Figure A9981228504362
为含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5元杂环，其中所述环可以是饱和的、部分不饱和的，或完全不饱和的，且可以是芳环；
R1和R2独立选自H和低级烷基；
R3选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R4和R5独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R6和R7独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；或R6和R7与它们所结合的原子一起形成一个任选具有多至4个选自O、N和S的杂原子的任选取代的5元或6元环；
R8为亲脂性的部分，选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为6-20；
R9选自H、取代的和未取代的烷基；
(b)药学上可接受的载体或稀释剂。
12.调节哺乳动物促性腺激素分泌的方法，包括给予需要这种调节的哺乳动物治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物：
Figure A9981228504371
其中X选自C＝O、C＝S、S＝O和S(O)2；
为含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5元杂环，其中所述环可以是饱和的、部分不饱和的，或完全不饱和的，且可以是芳环；
R1和R2独立选自H和低级烷基；
R3选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R4和R5独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R6和R7独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；或R6和R7与它们所结合的原子一起形成一个任选具有多至4个选自O、N和S的杂原子的任选取代的5元或6元杂环；
R8为亲脂性的部分，选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为6-20；
R9选自H、取代的和未取代的烷基。

Claims (10)

1.具有选自下式的化合物：
Figure A9981228500021
或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
2.具有选自下式的化合物：
Figure A9981228500022
或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
3.具有下式的化合物：
Figure A9981228500023
或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
4.具有选自下式的化合物：
Figure A9981228500031
或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
5.具有下式的化合物：
Figure A9981228500032
或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
6.具有选自下式的化合物：
Figure A9981228500033
或其药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
7.药用组合物包含：治疗有效量的权利要求1-6中任一项所定义的化合物、药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物，及药学上可接受的载体或稀释剂。
8.调节哺乳动物促性腺激素分泌的方法，包括给予治疗有效量的权利要求1-6中任一项所定义的化合物、药学上可接受的盐、多聚体、前药或活性代谢产物。
9.式I化合物：其中X选自C＝O、C＝S、S＝O和S(O)2；
Figure A9981228500042
为含有1-4个，优选2或3个选自N、O和S的杂原子的5元杂环，其中所述环可以是饱和的、部分不饱和的，或完全不饱和的，且可以是芳环；
R1和R2独立选自H和低级烷基；
R3选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R4和R5独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R6和R7独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；或R6和R7与它们所结合的原子一起形成一个任选具有多至4个选自O、N和S的杂原子的任选取代的5元或6元环；
R8为亲脂性的部分，选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为6-20；和
R9选自H、取代的和未取代的烷基。
10.式I化合物
Figure A9981228500051
X选自C＝O、C＝S、S＝O和S(O)2；
为含有1-4个，优选2或3个选自N、O和S的杂原子的5元杂环，其中所述环可以是饱和的、部分不饱和的，或完全不饱和的，且可以是芳环；
R1和R2独立选自H和低级烷基；
R3选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R4和R5独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；
R6和R7独立选自H、卤素、取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义；且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为1-12；或R6和R7与它们所结合的原子一起形成一个任选具有多至4个选自O、N和S的杂原子的任选取代的5元或6元环；
R8为亲脂性的部分，选自取代的和未取代的烷基、链烯基、链炔基、环烷基、杂环、芳基、杂芳基、CH2OR、OR和C(O)OR，其中R如上定义，且其中存在的碳原子总数(不包括任何任选的取代基)范围为6-20；和
R9选自H、取代的和未取代的烷基；
或者R1或R2可以是-OH或＝O；和/或R8也可以是氢；
和/或R可以是COR或氢；和/或R8可以具有任何所需数目的碳原子；
和/或R8和R9也可以形成环；和/或任何相邻的R基团，如R5和R6或R3和R4可以形成环，如对R6和R7所定义的环；
和/或R6可以是COR；和/或所述(杂)基团可以是取代的或未取代的；
或R8和/或R9可选自杂环基或与式I的氮形成酰胺键的任何化合物。
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