SK2262001A3 - Non-peptide gnrh agents, methods and intermediates for their preparation - Google Patents

Non-peptide gnrh agents, methods and intermediates for their preparation Download PDF

Info

Publication number
SK2262001A3
SK2262001A3 SK226-2001A SK2262001A SK2262001A3 SK 2262001 A3 SK2262001 A3 SK 2262001A3 SK 2262001 A SK2262001 A SK 2262001A SK 2262001 A3 SK2262001 A3 SK 2262001A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
substituted
compound
heterocycle
unsubstituted alkyl
aryl
Prior art date
Application number
SK226-2001A
Other languages
English (en)
Inventor
Mark Brian Anderson
Haresh N Vazir
David Robert Luthin
Genevieve Deguzman Paderes
Ved P Pathak
Lance Christopher Christie
Yufeng Hong
Eileen Valenzuela Tompkins
Haitao Li
James Faust
Original Assignee
Agouron Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agouron Pharma filed Critical Agouron Pharma
Publication of SK2262001A3 publication Critical patent/SK2262001A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A61K31/341—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide not condensed with another ring, e.g. ranitidine, furosemide, bufetolol, muscarine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/16—Masculine contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A61P5/04—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin for decreasing, blocking or antagonising the activity of the hypothalamic hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C07D235/14—Radicals substituted by nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/26—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/48—Two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/12—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D307/14—Radicals substituted by nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/56—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

Oblasť techniky
Vynález sa všeobecne týka zlúčenín, ktoré ovplyvňujú pôsobenie ľudského hormónu uvoľňujúceho gonadotropín (GnRH). Zvlášť sa týka nepeptidových GnRH antagonistov alebo agonistov a ich prípravy. Tieto nepeptidové GnRH činidlá majú výhodné fyzikálne, , chemické a. biologické vlastnosti a sú vhodné ako liečivá pri chorobách alebo stavoch vyžadujúcich moduláciu hormonálnej činnosti hypofýzy. Zlúčeniny podľa tohoto vynálezu odstraňujú degradačné a distribučné problémy peptidových činidiel.
Doterajší stav techniky
Hormón uvoľňujúci gonadotropín (GnRH)·, známy tiež ako hormón uvoľňujúci luteinizačný hormón (LHRH), zohráva ústrednú úlohu v biológii reprodukcie. Používa sa široká paleta rôznych analógií pre stále rastúci počet klinických indikácií. Dekapeptid GnRH (pyro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 alebo p-EHWSYGLRPG-NH2) sa vytvára enzymatickým procesom z prekurzora v neurónoch centrálneho bazálneho hypotalamu. Dekapeptid sa vyplavuje do vstupného cirkulačného systému hypofýzy, kde GnRH reaguje s receptormi s vysokou afinitou (7transmembránové G-proteínové párové receptory) v žľaze adenohypofýzy umiestnenej v báze mozgu. V hypofýze GnRH spúšťa uvoľňovanie gonadotropných hormónov (gonadotropínov): luteinizačného hormónu (LH) a hormónu stimulujúceho folikuly (FSH). LH stimuluje produkciu testosterónu a estradiolu v semenníkoch respektíve vo vaječníkoch. FSH reguluje folikulárny vývoj u žien a tvorbu spermií u mužov. Pokiaľ fungujú správne, sú vyplavovanie a koncentrácia GnRH rozhodujúce pre udržiavanie gonádovej genézy steroidov a normálnej reprodukcie s ohľadom na rast a sexuálny vývoj.
Pituitárna odozva na GnRH sa v priebehu života výrazne mení. GnRH a gonadotropíny sa prvý raz objavujú v plode asi v desiatom týždni tehotenstva. Citlivosť na GnRH po krátkom raste behom prvých troch mesiacov po narodení klesá až do počiatku puberty. Pred pubertou je odozva FSH na GnRH väčšia ako odozva LH. Na začiatku puberty citlivosť na GnRH vzrastá a vzniká pulzačná sekrécia LH. V pozdnej puberte a behom reprodukčného obdobia života sa behom dňa objavuje pulzačné uvoľňovanie GnRH, pričom citlivosť LH je väčšia ako citlivosť FSH. Pulzačné uvoľňovanie GnRH má za následok pulzačné uvoľňovanie LH a FSH a následne uvoľňovanie testosterónu a estradiólu z gonád (pohlavných žliaz). Po menopauze koncentrácie FSH a LH rastú, pričom hladiny FSH sú vyššie než hladiny LH.
Trvalé podávanie agonistov a antagonistov GnRH zvieratám alebo človekovi znižuje cirkulujúce hladiny tak LH ako aj FSH. Agonisty GnRH sú zlúčeniny, ktoré napodobujú endogénny GnRH, aby podnietili receptory v hypofýze, čo má za následok uvoľňovanie LH a FSH. Po prechodnom vzraste produkcie hormónov pohlavných žliaz alebo „zábleskovej odozve, má stále podávanie agonistov GnRH za následok „down-regulation (vymizenie receptorov z bunkového povrchu po obsazení receptora ligandom) GnRH receptorov. Receptorová „down-regulation GnRH a znecitlivenie hypofýzy vedie k poklesu hladiny cirku.lácie LH a FSH. Napriek dráždiacemu symptómu hormonálneho „záblesku sa GnRH agonisty používajú pri liečbe patofyziologických príznakov závislých na pohlavných steroidoch. Napríklad GnRH agonisty sa používajú na zníženie produkcie testosterónu a následné zníženie objemu prostaty pri benígnej prostatickej hyperplázii (BPH) a na spomalenie rastu nádoru u rakoviny prostaty. Tieto zlúčeniny sú tiež požívané na liečenie rakoviny prsníka a vajéčnikov.
Pre klinické hodnotenie sa v poslednom čase stali dostupnými tiež antagonisty GnRH. Antagonisty GnRH majú okamžitý účinok na
I hypofýzu bez pozorovateľného „záblesku spojeného s agonistmi.
V literatúre sa uvádza použitie antagonistov GnRH (obvykle dekapeptidov) na liečenie rakoviny prsníka, vaječníkov a prostaty. Iné využitie tak antagonistov, ako aj. agonistov zahŕňa endometriózu (Vrátane bolestivého variantu) , maternicový myóm, prsnikové cystické choroby (vrátane polycystického ochorenia vaječníkov), hypertrofiu prostaty, amenoreu (napr. sekundárna amenorea) a predčasnú pubertu. Tieto zlúčeniny môžu byť tiež užitočné pre úlavu od symptómov premenštruačného syndrómu (PMS). Antagonisty ' sa môžu ďalej použiť na reguláciu sekrécie gonadotropínov u samcov cicavcov (napr. ako samčia antikoncepcia) a na liečenie mužských sexuálnych delikventov. Dôležité je, že GnRH antagonisty (a agonisty) našli využitie pre liečbu, pri ktorej sa vyžaduje ireverzibilné potlačenie spojenia hypofýza-gonády.
Prítomnosť GnRH receptorov v bunkách adenohypofýzy ponúka možnosť vývoja liekov pôsobiacich na tieto receptory pre liečenie tak hormonálne závislých, ako aj hormonálne nezávislých druhov rakoviny.
Už viac . ako .50 rokov je najúčinnejšpu metódou . systematického liečenia metastázujúcej rakoviny prostaty deprivácia androgénu. Logické zdôvodnenie je prosté: žľaza prostaty potrebuje androgény pre riadny rast, vyživovanie a funkčnosť. Ale rakovina prostaty a benígna hyperplazia prostaty sú u mužov bežné a vyvíjajú sa v prostredí trvalo vystavenému pôsobeniu androgénu. Takže využitie, antagonistov GnRH k prerušeniu spojenia hypofýzagonády znižuje produkciu androgénu a moduluj e rast nádoru. Okrem toho antagonisty GnRH môžu mať aj priamy vplyv na rast nádoru tým, že blokujú receptory v bunkách nádoru. U týchto druhov rakoviny, ktoré reagujú tak na pohlavné hormóny, ako aj priamo na GnRH, by mali antagonisty pôsobiť na spomalenie rastu nádoru dvomi mechanizmami. Pretože v mnohých bunkách rakoviny prostaty a prsníka sú prítomné receptory GnRH, uvažuje sa v poslednom čase, že antagonisty GnRH môžu byť účinný aj pri liečbe hormonálne nezávislých nádorov. Súčasná literatúra uvádza príklady prítomnosti receptorov GnRH v rakovinných bunkách v týchto prípadoch:
• Rakovina prostaty: agonisty GnRH pôsobia u človeka tak in vitro, ako aj in vivo priamo spomalenie rastu nádoru, ktorý je na androgéne závislý (LNCaP), ako aj nezávislý (DU 145), Montagnani a kol. Árch. Ital. Urol. Androl. 1997, 69(4), 257263. Antagonista GnRH spomaľuje rast na androgéne nezávislého PC-3 nádoru u laboratórnej myši, Jungwirth a kol., Prostate 1997, 32(3), 164-172.
• Rakovina vaječníkov: demonštrácia receptorov GnRH v bunkách nádoru ľudskej rakoviny vaječníkov poskytuje dôvod pre použitie terapeutického prístupu založeného na GnRH analógiách pri tomto ochorení, Srkkalovic a kol., Int. J. Oncol. 1998, 12(3), 489-498.
• Rakovina prsníka: rakovina prsníka je najrozšírenejším typom rakoviny u žien vo veku nad 40 rokov a je hlavnou príčinou ich úmrtia na rakovinu. Systematická endokrinná intervencia predstavuje hlavnú voľbu liečenia pokročilej rakoviny prsníka, zvlášť pri rakovine závislej na estrogéne. Gény pre hormón uvoľňujúci gonadotropín a jeho receptor sú prítomné v prsníku postihnutom fibŕocystickou chorobou a rakovinou, Kottler a kol., Int. J. Cancer 1997, 71(4), 595-599.
Až doteraz boli antagonisty GnRH peptidy analogické GnRH.
Napríklad medzinárodne zverejnený patent č. WO 93/03058.
Peptidový antagonisty pepťidových hormónov sú často celkom účinný, ale ich použitie je často spojené s problémami, pretože peptidy sú degradované fyziologickými enzýmami a často ťažko distribuovatelné vo vnútri liečeného organizmu. Z toho vyplýva, že ich účinnosť ako liekov je limitovaná a ďalej, že v súčasnosti existuje potreba nepeptidových antagonistov peptidového hormónu GnRH.
Podstata vynálezu
Predmetom predloženého ' vynálezu je vývoj nepeptidových antagonistov GnRH s malou molekulou, ktoré využívajú obidva vyššie uvedené mechanizmy pôsobenia. Nepeptidové GnRH činidlá majú pri porovnaní s peptidovými výhodné fyzikálne, chemické a biologické vlastnosti a budú vhodnými liečivami na choroby liečené ovplyvňovaním spojenia hypofýza-gonády a priamym cielením na receptory v nádorových bunkách. Existuje potreba vývoja liekov pôsobiacich na tieto receptory, a tým liečenia rakovinových nádorov závislých aj nezávislých na hormónoch.
Ďalším predmetom, vynálezu., je pQskytnutie nepeptidových zlúčenín, ktoré sú činidlami GnRH (agonisty alebo antagonisty, ale zvlášť tých, ktoré sú účinnými antagonistmi GnRH) a ktoré sa viažu na receptory GnRH,. a tým modulujú ich činnosť. Ďalším predmetom vynálezu je poskytnutie účinnej terapie pre jedinca, ktorý potrebuje terapeutickú reguláciu GnRH a poskytnutie spôsobov ošetrovania chorôb a stavov sprostredkovaných reguláciou GnRH.
Tieto zámery vynálezu boli dosiahnuté prostredníctvom nepeptidových GnRH zlúčenín podía tohoto vynálezu, ktoré sú výkonnými farmakami pri indikáciách sprostredkovaných reguláciou GnRH. Zlúčeniny podlá vynálezu sú farmakologicky výhodnejšie než peptidové zlúčeniny, pretože majú lepšiu schopnosť biodistribúcie a odolnosť k degradácií fyziologickými enzýmami.
Vynález ďalej poskytuje spôsoby syntézy týchto zlúčenín aj medziproduktov vhodných pre ich výrobu.
Predmetom vynálezu sú zlúčeniny so všeobecným vzorcom I:
X sa volí medzi C=0, C=S, S=0 a S(0)2;
5-členný heterocyklus obsahujúci od do 4, najlepšie od 2 do 3 heteroatómov volených z N, 0 a S, kde cyklus môže byť nasýtený, čiastočne nenasýtený alebo úplne nenasýtený a môže byť aromatický;
R1 a R2 sa nezávisle volia z H a nižšieho alkylu;
R3 môže byť H, halogén alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, alkylidén, alkylidín, cykloalkyl, heterocyklus, aryl, heteroaryl alebo CH2OR, OR alebo C(O)OR, kde R je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, alkylidén, alkylidín, cykloalkyl, heterocyklus, aryl alebo heteroaryl a kde celkový počet atómov uhlíka je v rozmedzí od 1 do 12 (bez zahrnutia voliteľných substituentov)
R4 a R5 sa nezávisle volia z H, halogénu a substituovaného alebo nešubstituováného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu alebo CH2OR, OR alebo C (O) OR, kde R je definované vyššie a kde celkový počet atómov uhlíka je v rozmedzí od 1 do 12 (bez zahrnutia voliteľných substituentov);
R6 a R7 1 sa nezávisle volia z H, halogénu a substituovaného alebo . nesubstituôvaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu alebo CH2OR, OR alebo C(O)OR, kde R je definované vyššie a kde celkový počet atómov uhlika je v rozmedzí od 1 do 12 (bez zahrnutia voliteľných substituentov) ; alebo R6 a R7 spolu s atómami, na ktoré sú naviazané, tvoria ľubovoľne substituovaný 5- alebo 6členný kruh obsahujúci až 4 heteroatómy vybrané z 0, N a S;
R® je lipofilný zvyšok volený zo substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidinu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu alebo CH2OR, OR alebo C(O)OR, kde R je definované vyššie a kde celkový počet atómov uhlika je v rozmedzí od 1 do 12 (bez zahrnutia voliteľných substituentov); a
R9 môže byť H a substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, najlepšie nižší alkyl.
V niektorých usporiadaniach môže byť R1 alebo R2 -OH alebo =0; a/alebo R® môže tiež byť vodík;
- a/alebo R môže byť COR alebo vodík; a/alebo R® môže mať akýkoľvek požadovaný počet uhlíkových atómov;
- a/alebo R® a R9 môžu tvoriť cyklus; a/alebo akékoľvek susediace R skupiny, napríklad R5 a R6 alebo R3 a R4 môžu tvoriť cyklus, ako je opísané pre R6 a R7;.
- a/alebo R6 môže byť COR; a/alebo (het) skupina môže byť substituovaná alebo nesubstituovaná.
Ďalej v niektorých ďalších usporiadaniach R® a/alebo R9 môžu byť heterocyklické skupiny alebo akékoľvek zlúčeniny, ktoré tvoria amidovú väzbu s dusíkom vo vzorci I. To znamená, že R® a R9 môžu byť akékoľvek skupiny začínajúce uhlíkom naviazaným na dusík všeobecného vzorca I.
Výhodné zlúčeniny podľa tohoto vynálezu majú všeobecný vzorec
II.
kde premenné skupiny vo vzorci sa definujú vyššie.
Zvlášť výhodné zlúčeniny majú vzorec III:
III kde R8 sa definuje vyššie. Výhodné skupiny R8 obsahujú: aryl, -CH2-aryl, -CH2-heteroaryl, -CH2-cykloalkyl, a - (CH2) nO-aryl, pričom n je celé čislo od 1 do 4.
Výhodné zlúčeniny podľa predloženého vynálezu zahrnujú:
vrátane obidvoch cis- aj trans- izomérov
NH2 cyklohexylovom substituentovi;
H N.
H N
O
N
H
COOH
predovšetkým izomér:
Okrem zlúčenín s vyššie uvedenými vzorcami obsahujú GnRH činidlá podlá tohoto vynálezu farmaceutický prijateľné soli, multimérne formy, „prelieky a účinné meťabolity týchto zlúčenín. Tieto nepeptidové činidlá sú farmakologicky výhodnejšie než činidlá peptidové, pretože majú lepšiu schopnosť biodistribúcie a odolnosť k degradácii fyziologickými enzýmami.
Predmetom tohto vynálezu sú tiež farmaceutické zmesi obsahujúce terapeutické účinné množstvo GnRH podľa tohoto vynálezu v kombinácii s farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom. Okrem toho sú predmetom vynálezu spôsoby regulácie sekŕé'čie gonadotropínov u cicavcov zahrnujúce podanie terapeuticky účinných množstiev GnRH činidiel podľa tohoto vynálezu.
Predmetom vynálezu sú tiež spôsoby a medziprodukty vhodné pre výrobu zlúčenín podľa vzorca I.
Ďalšie charakteristiky, predmety a výhody tohoto vynálezu budú zrejmé z následného detailného opisu vynálezu a jeho výhodných uskutočnení.
Detailní opis vynálezu a výhodné uskutočnenia
Niektoré zlúčeniny podľa tohoto vynálezu obsahujú jedno alebo viacej centier asymetrie a tak umožňujú viac enantiomérov, diastereoizomérov a iných stereoizomérnych foriem. Vynález je zamýšľaný tak, aby zahrnoval všetky možné stereoizoméry, aj ich racemické zmesi a opticky čisté formy. Pokiaľ tu opisované zlúčeniny obsahujú olefinické dvojné, väzby, opäť sa berú do úvahy obidva geometrické izoméry E i Z.
Uvádzané chemické vzorce'môžu vykazovať fenomén tautomérie. Aj keď štruktúrne vzorce v tejto špecifikácii zobrazujú len jednu z možných tautomérnych foriem, tento vynález zahrnuje všetky tautomérne formy.
Výraz „alkyl sa vzťahuje k nerozvetveným a rozvetveným reťazcom alkylových skupín, ktoré obsahujú od jedného do dvanástych atómov uhlíka. Príkladmi týchto skupín sú metyl (Me), etyl, propyl, izopropyl, butyl, izobutyl, sek-butyl, terc-butyl (tbu), pentyl, ižopentyl, terc-pentyl, hexyl apod. Výraz „nižší alkyl označuje alkyl, ktorý má 1 až 8 uhlíkových atómov (Ci_8alkyl). Vhodné substituované alkyly sú fluórmetyl, difluórmetyl, trifluórmetyl, 2-fluóretyl, 3-fluórpropyl, hydroxymetyl, 2hydroxyetyl, 3-hydroxypropyl apod.
Výraz „alkylidén sa vzťahuje k nerozvetveným a rozvetveným reťazcom alkylidénových skupín, ktoré obsahujú od jedného do dvanástych atómov uhlíka. Príkladmi týchto skupín sú propáp-2ylidén, bután-2-ylidén, bután-3-ylidén, 2-metylpropán-2-ylidén, hexán-2-ylidén apod.
Výraz „alkylidín sa vzťahuje k nerozvetveným a rozvetveným reťazcom alkylidínových skupín, ktoré obsahujú od jedného do dvanástych atómov uhlíka. Príkladmi týchto skupín sú propán-2ylidín, 3-metylpentán-4-ylidín, hexán-2-ylidín apod.
Výraz „karbocyklus sa vzťahuje k monocyklickéj alebo polycyklickéj uhlíkovej štruktúre (bez heteroatómov), ktorá obsahuje od 3 do 7 atómov uhlíka v každom cykle. Tieto štruktúry môžu byť nasýtené, čiastočne nenasýtené alebo nenasýtené. Príkladmi sú cykloalkyly a cykloaryly.
Výraz „heterocyklus sa vzťahuje k monocyklickým alebo polycyklickým štruktúram s jedným alebo viacerými heteroatómami - N, O alebo S, ktoré obsahujú od 3 do 7 atómov (uhlik plus akýkoľvek heteroatóm) v každom cykle a ktoré môžu byť nasýtené, čiastočne nenasýtené alebo nenasýtené. Príkladmi sú tetrahydrofuryl, tetrahydropyryl, azetidyl, pyrolidyl, piperidyl, piperazyl apod.
Tu používaný výraz „cykloalkyl sa vzťahuje k nasýteným karbocyklom s 3 až 12 atómami uhlíka. Tieto cykly môžu byť bicyklické až tricyklické. Vhodné sú cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl apod.
Výraz „aryl a „heteroaryl sa vzťahuje k monocyklickým a polycyklickým nenasýteným alebo aromatickým štruktúram, kde „aryl označuje karbocykly a „heteroaryl heterocykly. Príkladmi sú fenyl, naftyl, 1,2,3,4-tetrahydronaftyl, furyl, tienyl, pyrolyl, pyridyl, pyridinyl, pyrazolyl, imidazolyl, pyrazínyl, pyridazínyl, 1,2,3-triazinyl, 1,2, 4-oxadiazolyl, 1-Htetrazol-5-yl, indolyl, chinolyl, benzofuryl, benzotiofenyl (tionaftyl) apod.. Tieto skupiny môžu byť lubovolne substituované jedným alebo viacerými vhodnými substituentmi, ktorými môžu byť napr. halogén (F, Cl, Br alebo J), nižší alkyl, OH, N02, CN, CO2H, O-nižší alkyl, aryl-nižší alkyl, CO2CH3, CONH2z OCH2CONH2, NH2, SO2NH2, OCHF2, CF3, OCF3., apod. Takéto zvyšky môžu byť tiež lubovolne substituované kondenzovanými cyklami alebo môstikmi, napr. OCH2-O.
Výraz „aryl-nižší alkyl znamená nižší alkyl nesúci aryl. Napríklad benzyl, fényléťyl, pyridylmetyl, naftylmetyl, apod. Aryl-nižší alkyl môže byť lubovolne substituovaný.
Jednotlivé zvyšky alebo funkčné skupiny v premenných vo vzorci I môžu byť obecne lubovolne substituované jedným alebo viacerými odpovedajúcimi substituentmi. Typické substituenty sú halogén (F, CL, Br alebo J), nižší alkyl, -OH, -NO2, -CN, -CO2H, -O-nižší alkyl, -aryl, -aryl-nižší alkyl, -CO2CH3, -CONH2, -OCH2CONH2, NH2, -SO2NH2, halogénalkyl (napr. -CF3, -CH2CF3), -O-halogénalkyl (napr. -OCF3, -OCHF2) apod.
Okrem zlúčenín podlá vzorca I zahrnujú GnRH činidlá podlá tohoto vynálezu farmakologicky prijateľné soli, multimérne formy, prelieky a aktívne metabolity zlúčenín vzorca I. Takéto nepeptidové činidlá sú farmakologicky výhodnejšie než peptidové činidla, pretože majú lepšiu schopnosť biodistribúcie a odolnosť k degradácii fyziologickými enzýmami.
Vzorec I je naviac zamýšľaný tak, aby prípadne pokrýval rovnako solváty ako aj nesolvátované formy týchto zlúčenín. Vzorec I takto zahrnuje zlúčeniny s uvedenou štruktúrou vrátane hydrátov aj nehydratovaných foriem.
Ako bolo uvedené vyššie, GnRH činidlá podlá tohoto vynálezu tiež zahrnujú účinné tautomérne a stereoizomérne formy zlúčenín podlá vzorca í, ktoré je možné ľahko získať technikami známymi v obore. Napríklad opticky aktívne (R) a (S) izoméry sa pripravia stereošpecifickou syntézou, napr. s požitím chirálnych reagencií alebo racemických zmesí konvenčnými technikami.
GnRH činidlá ďalej zahrnujú multivalentné a multimérne formy účinných foriem zlúčenín podľa vzorca I. Tieto „multiméry môžu byť pripravené reťazením alebo umiestnením násobných kópií účinných zlúčenín do tesnej blízkosti vedľa seba, napr. na skelet tvorený zvyškom nosiča. Multiméry rôznych rozmerov (t.j. nesúce rôzny počet kópií účinných zlúčenín) sa môžu testovať na optimálnu veľkosť s ohľadom na väzbu na receptor. Prítomnosť týchto multivalentných foriem účinných zlúčenín s optimálnymi rozstupmi medzi zvyškami viažucimi sa na receptory môžu zlepšiť schopnosť väzby na receptory (napr. Lee a kol.> Biochem. 1984, 23, 4255). Výrobca môže, riadiť multivalentnosť a priestorové usporiadanie volbou vhodných nosičov alebo jednotiek v reťazci. Vhodnými nosičmi sú molekulárne zvyšky obsahujúce velký počet funkčných skupín, ktoré môžu reagovať s funkčnými skupinami účinných zlúčenín podľa tohoto vynálezu. Existuje široká paleta nosičových zvyškov (nosičov), ktoré môžu tvoriť yysoko účinné multiméry zahrnujúce proteíny ako je BSA (bovinné sérum albumínu) alebo HAS, peptidy, ako napr. pentapeptidy, dekapeptidy, pentadekapéptidy atd., aj nebiologické zlúčeniny pre ich výhodné schopnosti sa absorbovať, prenášať sa a ich životnosť vo vnútri cieľového organizmu. Funkčné skupiny na nosičovej časti ako sú sulfanyl, hydroxyl a alkyl aminoskupiny sa volia tak, aby sa dosiahlo stabilné spojenie so zlúčeninami podľa tohoto vynálezu, optimálne priestorové usporiadanie medzi nepohyblivými zlúčeninami a optimálných biologických vlastností.
GnRH činidlá podľa tohoto vynálezu zahrnujú aj farmaceutický prijateľné soli zlúčenín podľa vzorce I. Výraz „farmaceutický prijateľný označuje soli, ktoré sú farmakologicky prijateľné a zásadne netoxické pre subjekt, na ktorý GnRH činidlo pôsobí. Farmaceutický prijateľné soli zahrnujú konvenčné soli kyselín alebo zásad tvorené z vhodných netoxických organických alebo anorganických kyselín alebo anorganických zásad. Príkladmi solí kyselín sú soli odvodené od anorganických kyselín ako1 je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina jodovodíková, kyselina sírová, kyselina sulfónamidová, kyselina fosforečná a kyselina dusičná a soli odvodené od organických kyselín, ako sú kyselina p-toluénsulfónová, kyselina metánsulfónová, kyselina etánsulfónová, kyselina etándi sulfónová, kyselina izotiónová, kyselina šťaveľová, brómfenylsulfónová, kyselina kyselina citrónová, kyselina, uhličitá, kyselina benzoová, kyselina kyselina pj antárová,
2-acetoxybenzoová, kyselina octová, propionová, kyselina mliečna, kyselina jablčná, kyselina kyselina fenyloctová, glykolová, kyselina steárová, kyselina vínna, kyselina maleínová, kyselina hydroxymaleínová, kyselina kyselina askorbová, kyselina glutámová, kyselina salicylová, kyselina sulfanylová a kyselina fumárová. Príkladmi solí odvodených od zásad sú soli odvodené z hydroxidu amónneho (napr. kvartérne hydroxidy amónia ako je tetrametylamónium hydroxid) , odvodené z anorganických zásad ako sú hydroxidy alkalických kovov a kovov alkalických zemín (napr. sodík, draslík, lítium, vápnik alebo horčík) a odvodené z organických zásad ako sú aminy, benzylamíny, piperidíny a pyrolidíny.
Výraz „preliek označuje metabolický prekurzor zlúčeniny podlá vzorca I (alebo jej soli), ktorý je farmaceutický prijateľný. „Preliek môže byť neaktívny pri podávaní subjektovi, ale in vivo sa zmení na účinnú zlúčeninu podľa vzorca I. Výraz „aktívny metabolit označuje produkt metabolizmu (premeny) zlúčeniny podľa vzorca I, ktorý je farmaceutický prijateľný a účinný. „Preliek a „aktívne metabolity zlúčenín podľa vzorca I sa môžu určovať.technikami známymi v obore.
Pre určenie stupňa účinnosti rôznych foriem zlúčenín v GnRH systéme existuje celá š'kála známych analytických metód a techník. Pre určenie interakcie s receptormi, kedy je predmetom záujmu receptor, sa používa metóda viazania ligandov. Pokiaľ je predmetom záujmu väzba, používa sa značkovanie receptorov; značkou môže byť fluorescent, enzým, rádioizotop -apod., ktorý registruje kvantitatívne zmeny väzieb na receptor. Užívateľ môže tiež použiť značkovanú protilátku k receptorovi, čo umožňuje zosilnenie signálu. Väznosť sa tiež môže určovať nahradením značkovaného ligandu naviazaného na receptor. Pokiaľ je predmetom skúmania účinnosť agonistu a/alebo antagonistu, môže sa skúmať intaktný organizmus alebo bunka a môže sa merať zmena funkcie organizmu alebo bunky v závislosti na väzbe skúmanej zlúčeniny. Existuje rad dostupných zariadení pre detekciu odozvy bunky, napr. mikrofyziometer od Molecular Devices, Redwood City, California. V obore sú známe analytické metódy vhodné pre meranie účinnosti GnRH antagonistov in vitro aj in vivo, napr.
Bowers a kol., „LH suppression in cultured rat pituitary cells treated with 1 ng if LHRH, Endocrinology, 1980, 106, 675-683 (in vitro,) a Corbin a kol., „Antiovulatory activity (AOA) in rats, Endocr. Res. Commun. 1975, 2, 1-23 (in vivo) . Protokoly k jednotlivým využiteľným testom sú opísané nižšie.
Napríklad antagonisty GnRH-receptoru sa môž funkčne hodnotiť meraním zmeny extracelulárnej miery kyslosti nasledujúcim spôsobom. Schopnosť zlúčenín blokovať extracelulárnu mieru kyslosti sprostredkovaná GnRH v bunkách HEK 293 vyjadrujúcich ľudské GnRH receptory určuje mieru účinnosti zlúčeninyantagonisty in vitro. Približne 100000 buniek/komoru sa znehybní v agarózovej suspenzií (Molecular Devices) a premýva sa nepufrovaným MEM prostriedkom za použitia Cytosenzor® Mikrofyziometru (Molecular Devices). Bunky sa nechajú dospieť do rovnováhy, až sa kyslosť nemení (asi 1 hodinu). Zmerajú sa krivky závislosti na navážke GnRH (10-11 M až 10-7 M) . Zlúčeniny sa pred stimuláciou GnRH nechajú 15 minút zrieť a potom sa vyhodnotí účinnosť antagonistu. Po vyzretí s testovanými zlúčeninami sa opakovane merajú krivky závislosti na navážke GnRH v prítomnosti alebo v neprítomnosti rôznych koncentrácií testovaných zlúčenín. Uskutočni sa Schildová regresná analýza, aby sa zistilo, či zlúčeniny antagonizujúce GnRH zvýšia extracelulárnu mieru kyslosti v priebehu interakcie s GnRH receptorom.
V inom teste sa môže merať akumulácia celkového fosfátu inozitolu extrakciou z 'buniek kyselinou mravčou a následnou separáciou fosfátov v Dowexových kolónach. Bunky sa rozdelia trypsínom do dvoch 12-dávkových misiek a označia 3Hmyoinozitolom (0.5 Ci - 2 mCi na ml) po dobu 16-18 hodín v prostredí bez inozitolu. Prostredie sa potom odsaje a bunky sa vymývajú buď IX HBSS, 20 mM HEPES (pH 7.5) alebo bezsérovým DMEM, IX HBSS, 20 mM HEPES (pH 7.5) obsahujúcim agonistu a potom sa pridá 20 mM LiCl a bunky sa nechajú na potrebnú dobu zrieť.
Prostredie sa opäť odsaje a reakcia sa zastavi pridaním ladovej 10 mM kyseliny mravčej, ktorá taktiež extrahuje bunkové tuky. Inozitol sa separuje ionomeničovou chromatografiou na Dowexových kolónach, ktoré sa potom vymyjú 5 ml 10 mM myoinozitolu a 10 mM kyselinou mravčou. Kolóny sa opäť vymyjú 10 ml 60 mM mravčanom sodným a 5 mM bóraxom a všetok fosfát inozitolu sa eluuje 4.5 ml 1 M mravčanu amónneho a 0.1 M kyselinou mravčou.
Výhodné GnRH činidlá podľa tohoto vynálezu sú tie, ktoré majú hodnotu Ki asi 10 μΜ alebo menej. Najvýhodnejšie sú tie činidlá, ktoré majú hodnotu v nanomolárnom rozmedzí.
Výhodné tabuľke: zlúčeniny podľa vynálezu sú uvedené v nasledujúcej
17 \ 0 443,627
18 \ 0 443,627
19 443,584
20 461,599
Farmaceutické zmesi podlá vynálezu obsahujú účinné množstvo najmenej jedného GnRH činidla podlá vynálezu potlačujúce GnRH a inertný alebo farmaceutický prijateľný nosič alebo riedidlo. Tieto zmesi sa môžu pripraviť vo forme dávkovacej jednotky vhodnej pre požadovaný spôsob podávania, napr. orálne alebo parenterálne.
Pri liečbe chorôb alebo ošetrení stavov sprostredkovaných GnRH agonizmom alebo antagonizmom sa . farmaceutické zmesi podľa vynálezu podávajú ako vhodné preparáty pripravené kombináciou terapeuticky účinného množstva (t.j. GnRH-modulujúce množstvo postačujúce k dosiahnutiu terapeutickej účinnosti) najmenej jedného GnRH činidla podľa vynálezu (ako aktívnej zložky) a jedného alebo viacerých farmaceutický vhodných nosičov alebo riedidla. Tieto preparáty sa môžu pripraviť konvenčnými procedúrami, napr. vhodným miešaním, granulovaním a lisovaním alebo rozpúšťaním prísad známymi spôsobmi. Podlá potreby sa môže použiť vo farmaceutickej zmesi jedna alebo viacej účinných prísad, ako sú rôzny GnRH antagonisty.
Farmaceutický nosič môže byť buď pevný alebo kvapalný. Príkladom pevných nosičov môžu byť laktóza, sacharóza, mastenec, želatína, agar, pektín, živica, stearát horečnatý, kyselina steárová apod. Nosič alebo riedidlo môže tiež obsahovať oneskorovacie alebo spomalovacie látky známe v obore, ako sú glyceryl monostearát alebo glyceryl distearát a to buď samostatne alebo v kombinácii s voskom, etylcelulózou, hydroxypropylmetylcelulózou, metylmetakrylátom apod.
Môže sa použiť široká škála farmaceutických foriem. Napríklad, keď je nosič pevný, môže byť preparát vo forme tabliet, tvrdých kapsulí zo želatíny, prášku, piluliek, pastiliek alebo zdravotných cukríkov. Množstvo pevného nosiča sa môže pohybovať v širokom rozmedzí od asi 25 mg do asi 1 g. Keď je nosič kvapalný, môže byť preparát vo forme sirupu, emulzie, mäkkých kapsulí zo želatíny, sterilného roztoku vhodného pre injekcie, suspenzie v ampule alebo liekovke alebo nevodnej kvapalnej suspenzie.
Pre získanie stabilnej vo vode rozpustnej dávkovatelnej formy, sa môže farmaceutický prijatelná sol zlúčeniny podlá vzorca I rozpustiť vo vodnom roztoku Organickej alebo anorganickej kyseliny, napr. v 0.3 M roztoku kyseliny jantárovej alebo výhodnejšie kyseliny citrónovej. Pokiaľ nie je k dispozícii rozpustná forma, môže sa činidlo rozpustiť v jednom alebo Príkladom vhodných byť etylalkohol, propylénglykol, polysorbát 80, glycerín apod.
viacerých vhodných spolurozpúšťadlách. spolurozpúšťadiel môžu polyetylénglykol
300, v koncentráciách od 0 do % celkového objemu. Príkladom je zlúčenina podľa vzorca I rozpustená v DMSO a zriedená vodou.
Zmes môže byť tiež vo forme roztoku soli zlúčeniny podlá vzorca I vo vhodnom vodnom rozpúšťadle, ako sú voda, izotonický soľný roztok alebo roztoky dextrózy.
Farmaceutické zmesi podľa tohoto vynálezu sa môžu vyrábať konvenčnými technikami, t.j. miešaním, rozpúšťaním, granuláciou, tvorbou dražé, plavením, emulgovaním, opúzdrovaním, zachytávaním alebo lyofilizáciou. Farmaceutické zmesi sa môžu vytvárať konvenčnými spôsobmi použitím jedného alebo viacerých prijateľných fyziologických nosičov obsahujúcich základy a pomocné prostriedky uľahčujúce spracovanie účinných zlúčenín na farmaceutické preparáty. Vhodný postup sa volí s ohľadom na spôsob aplikácie.
Pri príprave preparátov vhodných pre injekcie sa môžu činidlá podľa vynálezu vytvárať vo vodných roztokoch, najlepšie vo fyziologicky kompatibilných pufroch, ako je Hanksov roztok, Ringerov roztok alebo pufrovaný fyziologický roztok. Pre transmukozálnu aplikáciu sa volí vhodný prostriedok penetrácie z prostriedkov známych z oboru.
Pre orálne podávanie sa môžu činidlá ľahko . pripraviť kombináciou účinnej látky s farmaceutický prijateľnými nosičmi známymi v obore. Tieto nosiče umožnia, aby zmesi podľa vynálezu boli formované do tabliet, piluliek, dražé, kapsulí, tekutín, gélov, sirupov, suspenzií apod. pre orálne užívanie. Farmaceutické preparáty pre orálne užívanie sa môžu vytvoriť kombináciou jedného alebo viacerých aktívnych činidiel s pevnými základmi, rozomletím výslednej zmesi do granulí a spracovaním zmesi granulí s ďalšími prídavnými prostriedkami na tablety alebo jadrá dražé. Vhodné pevné základy sú plnivá ako napr. cukry (laktóza, sacharóza, manitol alebo sorbitol) a celulózové prípravky (napr. kukuričný škrob, obilný škrob, ryžový škrob, zemiakový škrob, želatína, živica, metylcelulóza, hydroxypropylmetylcelulóza, sodná sól karboxymetylcelulózy a/alebo polyvinyl pyrolidón (PVP). Ak je treba, pridávajú sa dezintegračné činidlá ako sú zosieťovaný polyvinylpyrolidón (PVP), agar alebo kyselina alginová alebo jej sol, napr. alginát sodný.
Jadrá dražé sa poťahujú vhodnými polevami. Pre tieto účely sa môže použiť koncentrovaný roztok sacharózy, ktorý môže voliteľne obsahovať arabskú gumu, PVP, Carbopol™ gél, polyetylénglykol, oxid titaničitý, roztoky laku a/alebo jedno alebo viacej organických rozpúšťadiel. K poťahom tabliet alebo dražé sa môže pre uľahčenie identifikácie alebo charakterizácie rôznych kombinácii účinných látok pridať farbivá.
Farmaceutické preparáty vhodné pre orálne užívanie ďalej zahrnujú tvrdé polené kapsule vyrábané zo želatíny aj mäkké zatavené kapsule vyrábané zo želatíny a zmäkčovadla napr. glycerolu alebo sorbitolu. Tvrdé kapsule môžu obsahovať účinné činidlo (činidlá) vo zmesi s jedným alebo viacerými plnivami napr. laktózou, spájadlami, ako sú škroby a/alebo mastidlami, ako je mastenec, stearát horečnatý a voliteľne so stabilizátormi. V mäkkých kapsulách môže byť účinná látka rozpustená alebo suspendovaná vo vhodnej kvapaline napr. v mastnom oleji, tekutom parafíne alebo kvapalnom plyetylénglykole. Okrem toho sa môžu pridať stabilizátory.
Pre ústne užívanie môžu mať zmesi formu tabliet alebo pastiliek vyrobených konvenčným spôsobom.
Pre užívanie inhaláciou môžu byť zlúčeniny podľa tohoto vynálezu pohodlne podávané vo forme aerosólových sprejov z tlakovaných balení alebo rozprašovačov s využitím vhodnej pohonnej látky, napr. dichlórdifluórmetánu, trichlórfluórmetánu, dichlórtetrafluóretánu, oxidu uhličitého alebo iných vhodných plynov. V prípade tlakových aerosólov môže byť dávkovacia jednotka opatrená ventilom, ktorý umožní dodať odmeranú dávku. Kapsule a zásobníky pre použitie v inhalátoroch alebo insuflátoroch môžu byť napr. zo želatíny a môžu byť pripravené z práškovej zmesi činidla a vhodného práškového základu napr. laktózy alebo škrobu.
Činidlá sa môžu pripravovať pre parenterálnu aplikáciu injekciami, napr. jednorázovú injekciu alebo kontinuálnu infúziu. Preparáty pre injekcie sa môžu pripraviť s pridaným konzervačným prostriedkom v jednodávkovej forme, napr. v ampulách, alebo v multidávkových kontajneroch. Zmesi môžu mať formu suspenzií, roztokov alebo emulzií v olejových alebo vodných .riedidlách a môžu obsahovať pomocné činidlá napr. suspenzné, stabilizačné a/alebo disperzné.
Farmaceutická formulácia pre parenterálnu aplikáciu zahrnuje vodné roztoky účinných zlúčenín vo forme rozpustnej vo vode. Okrem toho sa môžu pripraviť suspenzie účinných látok ako vhodné olejové injekčné suspenzie. Vhodnými lipofilnými rozpúšťadlami alebo riedidlami sú mastné oleje ako'napr. sezamový olej alebo syntetické estery mastných kyselín ako napr. etyloleát alebo triglyceridy alebo lipozómy. Vodné suspenzie pre injekcie môžu obsahovať látky zvyšujúce viskozitu suspenzie, ako je sodná sol karboxymetylcelulózy, sorbitol alebo dextrán. Suspenzie tiež môžu' voliteľne obsahovať vhodné stabilizátory alebo činidlá zvyšujúce rozpustnosť zlúčenín, aby bolo možné pripr.aviť roztoky s vysokou koncentráciou.
Účinná zložka vo forme prášku môže byť eventuálne pred použitím zmiešaná s vhodným riedidlom^ napr. so sterilnou vodou bez pýrogénu. Zlúčeniny môžu byť tiež formulované ako rektálne zmesi, ako sú čipky alebo retenčné výplachy, napr. obsahujúce konvenčné základy čípkov ako je kakaové maslo a iné glyceridy.
Okrem formulácií uvedených vyššie ša môžu zlúčeniny vytvárať tiež ako depótne preparáty. Tieto dlhodobo pôsobiace prípravky môžu byť aplikované implantáciou (napríklad podkožné alebo intramuskulárne) alebo intramuskulárnou injekciou. Zlúčeniny môžu byť teda napríklad formulované s vhodnými polymérnymi alebo hydrofóbnymi látkami (napr. ako emulzie vo vhodnom oleji) alebo ionomeničovými živicami alebo ako ťažko rozpustné deriváty napr. ako ťažko rozpustné soli.
Príkladom farmaceutického nosiča pre hydrofóbne zlúčeniny podľa vynálezu je systém rozpúšťadiel obsahujúci benzylalkohol, nepolárny detergent, organický polymér miešateľný s vodou a vodnou fázou. Týmto systémom môže byť VPD systém (VPD je roztok 3 % hm. benzyl alkoholu, 8 % hm. nepolárneho detergentu polysorbátu 80 a 65 % hm. polyetylén-glykolu 300 doplnený na plný objem absolútnym etanolom) . VPD systém (VPD : 5W) obsahuje VPD zriedený v pomere 1:1 5 % roztokom dextrózy vo vode. Tento systém dobre rozpúšťa hydrofóbne zlúčeniny a výsledný prípravok má nízku toxicitu pri systémovej aplikácii. Ako bude zrejmé, vzájomné pomery vhodného systému rozpúšťadiel sa môžu meniť podľa charakteristík rozpustnosti a toxicity. Okrem toho sa môžu meniť aj komponenty systému: napr. miesto polysorbátu 80 sa môžu použiť iné nízko toxické nepolárne detergenty; môže sa meniť podiel polyetylénglykolu; k polyetylénu sa môže pridať jeden alebo viacej iných biokompatibilných polymérov (napr. PVP) alebo ho nahradiť; miesto dextrózy sa môžu použiť iné cukry alebo polysacharidy.
Eventuálne sa môžu použiť aj iné dodávkové systémy. Známymi príkladmi dopravných médií alebo nosičov pre hydrofóbne lieky sú lipozómy a emulzie a môžu sa tiež využiť pri formulácii vhodných preparátov. Môžu sa využiť aj určité organické rozpúšťadlá ako napr. dimetylsulfoxid, ale to môže spôsobiť vzrast toxicity. Okrem toho sa môže dosiahnuť dodávky - lieku systémom dlhodobého uvoľňovania, ako sú semipermeabilné matrice pevného hydrofóbneho polyméru obsahujúce terapeutické činidlo. V obore je známy a dostupný celý rad týchto prostriedkov. Dlhodobo uvoľňujúce kapsule môžu v závislosti na svojej chemickej povahe uvoľňovať zlúčeniny po dobu od niekoľko týždňov až počas 100 dní.
V závislosti na chemickej povahe a biologickej stabilite terapeutického činidla sa môžu lahko využiť aj ďalšie techniky pre stabilizáciu proteínov.
Farmaceutické zmesi môžu tiež obsahovať vhodné pevné alebo gélové nosiče alebo základy. Príkladom môžu byť uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, cukry, škroby, deriváty celulózy, želatína a polyméry ako napr. polyetylénglykoly.
Niektoré zlúčeniny podlá vynálezu sa môžu využívať ako soli farmaceutický kompatibilných proti iónov. Farmaceutický kompatibilné soli sa môžu vytvárať z mnohých kyselín, vrátane chlorovodíkovej, sírovej, octovej, mliečnej, vínnej, jablčnej, jantárovej apod. Soli bývajú ľahšie rozpustné vo vodných a v iných protónových rozpúšťadlách než odpovedajúce zlúčeniny s voľnými bázami.
Bude vhodné, keď sa aktuálne dávkovanie činidiel použitých vo zmesiach podľa tohoto vynálezu bude meniť podľa konkrétneho použitého komplexu, konkrétnej zmesi, spôsobu podávania/ lokalizácie a liečenej choroby. Optimálne dávkovanie pre daný súbor podmienok môžu pracovníci skúsený v obore zistiť konvenčnými testmi s ohľadom na experimentálne údaje pre danú zlúčeninu. Obecne používaná denná dávka pre orálnu aplikáciu bude napr. asi od 0,001 do asi 1000 mg/kg telesnej hmotnosti pri liečebnom postupe opakovanom v príslušných intervaloch. Aplikácia „preliekov sa môže dávkovať v hmotnostných pomeroch, ktoré sú chemicky ekvivalentné hmotnostným pomerom úplne účinných zlúčenín.
Príklady typických farmaceutických príprav preparátov podľa tohoto vynálezu sú uvedené nižšie.
Parenterálna zmes: K príprave farmaceutickej zmesi podía tohoto vynálezu vhodnej pre injekčnú aplikáciu sa 100 mg farmaceutický prijateľnej vo vode rozpustnej soli zlúčeniny podľa vzorce I rozpustí v DMSO a potom sa zmieša s 10 ml 0,9 % sterilného soľného roztoku. Výsledná zmes sa vloží do dávkovacej jednotky vhodnej pre injekčnú aplikáciu.
Orálna zmes: K príprave orálne aplikovateľnej farmaceutickej zmesi sa 100 mg zlúčeniny podľa vzorce 1 zmieša so 750 mg laktózy. Výsledná zmes sa vloží do dávkovacej jednotky vhodnej pre orálnu aplikáciu, ako je napr. tvrdá želatínová kapsula.
SYNTÉZA GnRH REAGENCIÍ A ZLÚČENÍN
A. Príklad stavebného bloku:
Stavebné bloky na bázy naftalénu: Vhodné acylačné činidlo sa pripraví postupnou Friedel-Craftsovou alkyláciou:
aici3 ch2ci2
SOCI2 LiOH *-------- Z -------h2o/thf
Zlúčenina 2 sa môže pripraviť takto:
2,5-dimetyl-2,5-hexándiol (200 g, 1,37 M) sa pridá ako pevný podiel k 3 litrom koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej vo veľkej Erlenmeyerovej banke. Diol sa rýchlo rozpusti v kyseline chlorovodíkovej a požadovaný produkt 2,5-dichlór-2,5dimetylhexán sa priebežne vyzráža z roztoku. Reakcia prebieha za stáleho miešania pri laboratórnej teplote 4 hodiny. K hexánu sa pridá 1 liter 50 % octanu etylnatého a organické látky sa oddelia a premyjú niekoľkokrát vodou (až sa nefarbi pH papierik). Organické rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu pri laboratórnej teplote. Surový 2,5-dichlór-2,5-dimetylhexán sa rozpustí v hexáne, filtruje sa cez silikagél (pomer 10 : 1) a vymyje sa hexánom. Tieto záverečné filtračné kroky poskytnú bielu pevnú látku.. Výťažok čistého 2,5-dichlór-2,5-dimetylhexán je 230 g, t.j. 92 %.
1H NMR (CDC13, delta): 1.96-(4H, s); 1.61 (12H,s).
S použitím podobnej procedúry sa 2,4-dimetyl-2,4-pentándiol konvertuje na 2,4-dichlór-2,4-dimetylpentán.
1H NMR (CDC13, delta): 2.42 (2H, s); 1.73 (12H,s).
1,1, 4, 4,6-pentametyl-l,2,3,4-tetrahydronaftalén 4: K roztoku 2, 5-dichlór-2,5-dimetylhexánu 2 .(10 g, 54,7 mM) v toluéne (270 ml, 0,2 M) sa pomaly pridáva chlorid hlinitý (5,47 g, 41 mM) ako pevná látka po 15 minútových prestávkach. Reakcia skončí po 10 minútach, čo sa indikuje testovaním hexánu pomocou TLC (chromatografia na tenkej vrstve). Nezreagovaný chlorid hlinitý sa pomaly chladí vodou po dobu 10 minút. Produkt sa vyextrahuje z vodnej vrstvy pridaním dodatočných 250 ml toluénu. Organická vrstva sa nechá prejsť cez silikagél (40 g) a vymyje sa toluénom. Potom sa odparí do sucha vo vákuu, aby sa získal 1,1, 4, 4, 6-pentametyl-l,2,3,4-tetrahydronaftalén £ (11 g, 97 % výťažnosť).
NMR 1,29 (s, 6H), 1,28 (s, 6H) , 1,69 (s, 4H) , 2,32 (s, 3H) ,
7, 12 (s, 1H) , 6, 97 (dd, 1H) .
Metyl 5-[(3,5,5,8,8-pentametyl-5, 6, 7, 8-tetrahydro-2-naftyl)metyl]-2-furoát 6: K roztoku obsahujúcemu 1,1, 4, 4,6-pentametyl1,2,3,4-tetrahydronaftalén 4. (20 g, 99 mM) a metyl 5(chlórmetyl)-2-furoát 5 (17,28 g, 99 mM) v metylénchloride (500 ml 0,2 M) sa pomaly pridá chlorid hlinitý (16,46 g, .124 mM) ako pevná látka pri refluxnej teplote metylénchloridu. Roztok sa zahrieva pod spätným chladičom ďalšie dve hodiny. Reakcia sa monitoruje TLC v 10 % roztoku octan etylnatý/hexán. Reakčná zmes sa ochladí na laboratórnu teplotu a nezreagovaný chlorid hlinitý sa chladí vodou 15 minút. Surový produkt sa extrahuje metylénchloridom, nechá sa prejsť cez silikagél (80 g) a vymýva sa metylénchloridom. Roztok sa odparí vo vákuu do konzistencie sirupu a čistí sa silikagélom (300 g) na filtračnej kolóne. Metyl 5- [ (3,5,5,8,8-pentametyl-5,6, 7, 8-tetrahydro-2-naftyl)metyl]-2-furoát 6 sa eluuje 2 % roztokom octan etýlnatý/ hexány. Výťažok je 15,4 g (46 %) .
NMR 1,25 (s, 6H), 1,28 (s, 6H) , 1,67 (s, 4H) , 2,23 (s, 3H) ,
3, 89(š,3H), 3,97(s,2H) 5,95 (d, 1H) , 7,09 (m, 3H) .
Kyselina metyl 5-[ (3,5,5,8,8-pentametyl-5, 6, 7, 8-tetra-hydro-2naftyl)metyl]-2-furoátová 7: K roztoku, ktorý obsahuje metyl 5[(3,5,5,8,8-pentametyl-5,6,7,8-tetrahydro-2-naftyl)-metyl] -2furoát 6 (15,1 g, 44 mmol) v MeOH (175 ml) a vodu (175 ml) sa pridá roztok NaOH (3,53 g, 88,3 mmol) vo vode (29 ml). Reakčná zmes sa mieša cez noc. Po dokončení reakcie identifikovanom TLC sa roztok okyslí 1 M HC1 na pH 2. Surový produkt sa extrahuje do organickej fáze etylacetátom a koncentruje sa za vzniku kyseliny metyl 5- [ (3,5,5,8,8-penta-metyl-5, 6, 7, 8-tetrahydro-2-naftyl) metyl]-2-furoátovej 7 (15,0 g, 99% výťažok).
NMR 1,26 (s, 6H), 1,28 (s, 6H) , 1,68 (s, 4H) , 2,24 (s, 3H) , 4,00(s, 2H), 6,01 (s, 2H) , 7,10 (s, 2H) 7,23 (d, 1H) .
5-[(3,5,5,8,8-pentametyl-5,6,7,8-tetrahydro-2-naftyl)metyl] -2furoyl chlorid Θ : K roztoku, ktorý obsahuje kyselinu metyl 5[(3,5,5,8,8-pentametyl-5,6,7,8-tetrahydro-2-naftyl)metyl] - 229 furoátovú 7 (20,15 g, 61,77 mmol) v metylénchloride (310 ml) sa pridá tionyl chlorid (45 ml, 617 mmol) . Reakcia prebieha pod spätným chladičom 5 hodín a potom sa pridá ďalšia dávka tionyl chloridu (45 ml, 617 mmol). Reakcia prebieha za stáleho miešania pri teplote miestnosti cez noc. Roztok sa koncentruje na sirup a prejde vrstvou silikagélu (50 g), vymýva sa 3 % hexánmi a koncentruje sa vo vákuu za vzniku 5-[(3,5,5,8,8-pentametyl5, 6, 7, 8-tetrahydro-2-naftyl)metyl]-2-furoyl chloridu E3 (17 g, 80 % výťažok) .
NMR 1,26 (s, 6H), 1,28 (s, 6H)', 1, 68 (s, 4H) , 2)25 (s, 3H) ,
4,00 (s, 2H), 6,11 (d, 1H), 7,10 (s, 1H) , 7,11 (s, 1H) , 7,41 (d, 1H) .
Za týchto reakčných podmienok sa môžu pripraviť ďalšie stavebné bloky, ktoré obsahujú rôzne funkčné, skupiny obsiahnuté v skôr uvedenom obecnom vzorci.
B. Príklady acylácie:
Nasledujúce schéma ukazuje niekoľko príkladov, ktoré môžu použiť obecnú metódu syntézy pre acyláciu uvedenú nižšie.
hydrazíny
Amíny sa rozpustia alebo suspendujú v dichlórmetáne, dichlóretáne, octane etylnatom apod. (0,2 M), potom sa pridá acidochloridové činidlo (1,00 mmol ekv.). K zmesi sa pridá trietylamin (5,00 mmol. ekv.) a reakcia prebieha za stáleho miešania pri teplote miestnosti 12 až 48 hodín. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu. Produkt sa čistí chromatografiou na kolóne so silikagélom a eluuje sa vhodným elučným činidlom (napr. 3 : 1 hexán/octan etylnatý). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku produktu acylácie.
Ako alternatíva sa reakčná zmes zriedi dichlórmetánom (použije sa päť násobné množstvo) a premyje sa vodným hydrouhličitanom sodným. Organická vrstva sa suší síranom horečnatým a filtruje sa. Produkt sa čistí chromatografiou na kolóne so silikagélom a eluuje sa vhodným elučným činidlom (napr. 3 : 1 hexán/octan etylnatý). Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu za vzniku produktu acylácie.
Použitie všeobecného reakčného protokolu umožňuje prípravu a testovanie veľkého množstva zlúčenín buď ako čistých alebo znečistených látok. Tento reakčný protokol funguje dobre pre anilíny, benzylamíny, hydrazíny, hydrazidy, alkoholy atp.
Typické príklady ukazujú rozmanitosť štruktúr acylovaných podľa obecnej procedúry:
Zlúč. č. Štruktúra Molekulová hmotnosť
9- τχΑ H N χΐΗ h2 492,704
10 \ / ° [ II 1 lí H | < VA H U /\ HN. J nh2 MH 492,704
C. Syntézy a acylácie zlúčenín obsahujúcich guanidín:
Krok 1 - Príprava chránených zlúčenín
1- (N, N '-diBoc) guanidinometyláciou:
Alternatívne kroky 1 (A) a 1 (B) .poskytujú dve obecné 1-(NZN'diBoc)-guanidinometylačné procedúry.
Krok 1 (A) : K roztoku diamínu (2,00 mmol ekv.) v THF (0,7 M) sa pridá roztok 1-Jí-pyrazol-l- (N^N-bis (terc-butoxykarbonyl) karboxyamidinu) (1,00 mmol ekv.) v THF (0,7 M). Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 3 hodiny, pokiaľ sa zaznamenáva transformácia pomocou TLC. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku až do sirupovitého zvyšku, ktorý sa extrahuje octanom etylnatým (asi
1,5 krát väčší objem než bol objem THF pri reakcii alebo taký, ktorý práve stačí na rozpustenie zvyšku) a premýva sa vodou až do neutrálneho pH. Organická vrstva sa premyje slanou vodou, vysuší sa nad MgSO4 a koncentruje sa. Produkt sa čistí na chromatografickej kolóne na silikagéli a eluuje sa vhodným elučným činidlom (ktoré sa môže ľahko určiť, napr. 5 % MeOH ako východzie). Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu za vzniku amínu spojeného skupinou 1-(N,N'-diBoc)-guanidinometylu. Pre umiestnenie skupiny -(N,N '-diBoc)-guanidínu sa okrem predchádzajúcich môžu použiť aj iné reagencie, napríklad 1,3-bis(tercbutoxykarbonyl)-2-metyl-2-tiopseudourea (CAS No. 107819-90-0), eventuálne sa môže pridať 1-H-pyrazol-l-(Ν,Ν-bis(tercbutoxykarbonyl)karboxyamidín) skôr ako pevná látka, než ako vyššie opísaný roztok.
Krok 1(B): K roztoku diamínu (1,00 mmol ekv.) ako pevná po častiach pridá (po 10 minútach)
1- (N,N-bis (terc-butoxy-karbonyl) karboxyamidín) Roztok sa mieša pri teplote miestnosti po odstráni za zníženého tlaku látka (1,00 dobu
1-íf-pyrazolmmol ekv.).
sa rozpustí v objem THF pri
0,5 hodiny, až do sirupového octane etylnatom (0,5-krát väčší reakcii alebo taký, ktorý práve a dvakrát sa premyje vodou. Vrstvy
Rozpúšťadlo sa zvyšku, ktorý objem než bol stačí na rozpustenie rezídua) sa oddelia a produkt sa čistí na chromatografickej kolóne na silikagéli a eluuje sa 100 % octanom etylnatým pre odstránenie akýchkoľvek nepolárnych nečistôt a potom 100 % izopropyl alkoholom, aby sa získal čistý produkt. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu za vzniku žiadaného produktu. Typické TLC podmienky sú 15 : 85 : 0,1 metanol/chloroform/kyselina octová. Výťažok je v rozmedzí od 40 do 44 % požadovanej chránenej zlúčeniny.
Krok 2 - Redukčná aminácia (volitelná) :
Vhodným spôsobom sa môže uskutočniť redukčná aminácia.
Redukčná aminácia aldehydov a ketónov s triacetoxyborohydridom sodným je obecne opísaná: Abdel-Magid a kol., J. Org.Chem., 1996, 61, 3849. Dve varianty redukčne-aminačných procesov sa opisujú nižšie.
Krok 2 (A) : 3,5, 5, 8,8-pentametyl-5, 6, 7, 8-tetrahydro-2-naftaldehyd (1,00 mmol ekv.) a amín spojený 1- (N,N '-diBoc) -guanidinometylovou skupinou (1,00 mmol ekv.) sa rozpustí v metanole (0,09 M) . Potom sa pridá 1 % roztok ľadovej kyseliny octovej v metanole (10 % množstva použitého metanolu) a následne NaCNBH3 (1,00 mmol ekv.) a reagencie sa miešajú cez noc. Reakcia sa overuje pomocou TLC na troch zložkách (aldehyd, požadovaný produkt a východzí derivát guanidínu). Reakcia sa ukončí pridaním vody (50 % množstva použitého metanolu), extrahuje sa dichlórmetánom (10krát množstvo použitého metanolu) a premýva sa nasýteným roztokom hydrouhličitanu sodného. Organická vrstva sa vysuší nad síranom horečnatým, filtruje sa a koncentruje. Produkt sa čistí na chromatografickej kolóne na silikagéli a eluuje vhodným elučným činidlom (napr. 3 : 1 octanu etylnatého v hexánoch, aby sa odstránil nezreagovaný aldehyd a následnou eluciu 1 : 1 octanom etylnatým v hexánoch) , aby sa získal požadovaný produkt redukčnej aminácie. V niektorých prípadoch uľahčí reakciu tvorby imínov zahrievanie pod spätným chladičom po dobu 2 hodín. Viď tiež: Abdel-Magid a kol., J. Org. Chem., 1996 61, 3849, kde sa opisuje redukčná aminácia aldehydov a ketónov s triacetoxyborohydridom sodným.
Krok 2 (B) : 3,5, 5, 8, 8-pentametyl-5, 6, 7,8-tetrahydro-2-naftaldehyd (1,00 mmol ekv.) a amín spojený 1-(Ν,Ν'-diBoc)-guanidinometylom (1,00 mmol ekv.) sa rozpustí v metanole (0,09 M). Potom sa pridá NaBH4 (1,00 mmol ekv.) (buď v etanole podľa dodatočných poloprevádzkových procedúr opísaných nižšie alebo opatrne ako pevná látka) a reagencie sa miešajú cez noc. Reakcia sa kontroluje TLC pomocou troch zložiek (aldehyd, požadovaný produkt a východzí derivát guanidínu). Reakcia sa ukončí pridaním vody (50 % množstva použitého metanolu), extrahuje sa dichlórmetánom (10 násobné množstvo použitého metanolu) a premýva sa nasýteným roztokom hydrouhličitanu sodného. Organická vrstva sa vysuší nad síranom horečnatým, filtruje sa a koncentruje. Produkt sa čistí na chromatografickej kolóne na silikagéli a eluuje sa vhodným elučným činidlom (ktoré ľahko vyberie odborník v technike alebo napr. 3 : 1 octanu etylnaťého' v hexánoch pre odstránenie nezreagovaného aldehydu a následnou elúciou 1 : 1 octanom etylnatým v hexánoch pre získanie požadovaného produktu redukčnej aminácie. V niektorých prípadoch uľahčí reakciu tvorby imínov zahrievanie pod spätným chladičom po dobu 2 hodín.
Krok 3 - Äcylácia:
Výsledné produkty redukčnej aminácie (1,00 mmol ekv.) sa rozpustia v dichlórmetáne (asi 0,2 až 0,05 M v závislosti na rozpustnosti substrátov), potom sa pridá trietylamín (2,00 mmol ekv.) a 2-furoyl chloridové činidlo 8 (1,00 mmol ekv.). Reagencie sa miešajú pri teplote miestnosti cez noc. Reakčná zmes sa zriedi dichlórmetánom (5 násobné množstvo dichlórmetánu použitého v reakcii) a premyje sa nasýteným roztokom hydrouhličitanu sodného. Organická vrstva sa vysuší nad síranom horečnatým a filtruje sa. Produkt sa čistí na chromatografickej kolóne na silikagéli a eluuje vhodným elučným činidlom (napr. 3 : 1 hexány: octan etylnatý). Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu za vzniku požadovaného produktu acylácie.
Krok 4 — Odstránenie ochrannej skupiny zo základnej skupiny:
Produkt acylácie (1,00 mmol ekv.) sa rozpustí v roztoku 25-50% TFA v dichlórmetáne (0,02M) a reagencie sa miešajú pri teplote miestnosti (15-20 minút; roztok bude slabo červeno oranžový). Potom prebieha reakcia za stáleho miešania ďalšiu 1 hodinu a 20 minút až do úplného odstránenia BOC skupiny. Reakcia sa ukončí koncentrovaním vo vákuu a následným pridaním roztoku voda/acetonitril (0,006 M) a lyofilizáciou cez noc. Výsledná zlúčenina sa čisti vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC). Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu (výťažok kolisa od 30% do 50%) .
I '
I
Alternatívny postup odstránenia BOC skupiny, ktorý používa tetrachlór a ktorý poskytuje odpovedajúce guanidínchloridy je opísaný v Miel a kol., Tetrahedŕon Letters, 1997, 38, 7865-7866.
Zlúčenina 9 sa môže pripraviť podlá krokov uvedených vyššie s výnimkou kroku #2, ako ukazuje nasledujúce schéma.
^NH2 ^NH2
Príprava reagencií:
Reagencie vhodné pre syntézu zlúčenín sa môžu získať alebo pripraviť technikami známymi v obore. Pre maloprevádzku môže byť napríklad užitočné si pripraviť volné amíny ž obecných foriem solí a zásobné reakčné roztoky. Viď tiež Abdel-Magid a kol. „Reductive amination of aldehydes and ketones with triacetoxyborohydride, J. Org. Chem., 1996, 61, 3849.
Roztoky volných báz v metanole sa môžu pripraviť z hydrochloridu, dihydrochloridu, hydrobromidu alebo iných solí, pokiaľ je voľná báza rozpustná v metanole. Pri tejto procedúre by sa mala venovať veľká pozornosť tomu, aby sa po pridaní metoxidu sodného zabránilo prístupu vzduchu, pretože amínové voľné báze a zvlášť primárne amíny absorbujú vzdušný oxid uhličitý a v metanole vytvárajú sa môže soli. 10 ml 0,1 monohydrochloridu do pripraviť tarovanej takto.
M roztoku volnej
Naváži sa 1,0 báze mmol miešadlom a pridá sa
Erlenmeyerovej banky s vloženým ml metanolu. Do miešaného kalu sa pridá
229 ml (1,0 mmol ekv.)
4,37 M), banka sa
Kal sa časom zmení v roztoku metoxidu sodného v metanole (25% uzavrie a zmes sa prudko mieša 2 hodiny, jemný mliečny precipitát tvoriaceho sa chloridu sodného. Kal sa zfiltruje cez 15-ml strednú sklenenú fritu, ktorá sa premyje 1-2 ml metanolu, filtrát sa prenesie do 20 ml ampulky a zriedi sa 10 ml metanolu. Teoretická výťažnosť chloridu sodného je skoro 59 mg, ale opätovné získanie obvykle nie je kvantitatívne kvôli nepatrnej rozpustnosti v metanole. Pre dihydrochlorid je treba druhý ekvivalent metoxidu sodného (458 ml),
0,5 M roztok boránu sodného v etanole sa môže pripraviť nasledovne. Borán sodný (520 mg, 13,8 mmol) sa mieša v čistom (nedenaturovanom) bezvodom etanole (25 ml) 2-3 minúty. Suspenzia sa filtruje cez strednú sklenenú fritu, aby sa odstránilo malé množstvo nerozpustenej pevnej látky (obvykle asi 5% celkovej hmotnosti boránu alebo 25 mg) . Filtrát môže vyzerať ako bezfarebný roztok, ktorý uvoľňuje len trochu vodíka. Tento roztok je treba ihneď spracovať, pretože sa behom niekoľkých málo hodín rozkladá za vzniku rôsolovitého precipitátu. Borán sodný je hygroskopický, preto sa vyhneme vystaveniu okolitému vzduchu tým, že sa roztok spracuje ihneď po navážení pevného podielu. Borán sodný má rozpustnosť v etanole pri teplote miestnosti asi 4 %, čo predstavuje približne 0,8 M roztok. Niekedy však zostáva malé percento nerozpustené bez ohľadu na pripravovanú koncentráciu, dokonca aj po miešaní dlhšom než 5 minút.
Pre syntézy zlúčenín podľa vzorca I v malom merítku j é možné použiť nižšie opísané reakcie pre prípravu rôznych reaktantov vhodných pre vyššie uvedené reakčné schéma. Všetky teploty v nasledujúcom opise sú v stupňoch Celsia a všetky podiely a percentuálne údaje sú hmotnostné, pokiaľ nie je uvedené ináč.
Rad východzich látok a iných reagencií sa môže kúpiť od komerčných dodávateľov, napríklad Aldrich Chemical Company alebo Lancaster Synthesis Ltd. a použiť bez ďalšieho čistenia, pokiaľ nie je uvedené ináč. Tetrahydrofurán (THF) a N,N-dimetylformamid (DMF) sú kúpené od firmy Aldrich v SureSeal® fľaškách a používajú sa bez ďalších úprav. Všetky rozpúšťadlá sa čistia štandardnými spôsobmi známymi v obore, pokiaľ nie je uvedené ináč.
Ďalej uvedené reakcie sa uskutočňujú pod miernym pretlakom dusíka alebo s využitím sušiacej trubici pri teplote miestnosti (pokiaľ nie je uvedené ináč), v bezvodých rozpúšťadlách a reakčné banky sú opatrené gumovými uzávermi pre dávkovanie substrátov a reagencií injekčnou striekačkou. Laboratórne sklo sa suší v sušiarni a/alebo v peci. Analytická chromatografia na tenkej vrstve sa robí na silikagéli nanesenom na sklenených platničkách (60°F 254 plates, Analtech (0,25 mm)) a eluuje sa pri príslušných pomeroch rozpúšťadiel (objem/objem). Reakcie sa monitorujú TLC a koniec sa indikuje spotrebou východzieho materiálu.
Po elúcii sa platničky zviditeľnia p-anizaldehydovým sprejom alebo činidlom na bázy kyseliny fosfomolybdénovej (Aldrich Chemical, 20 % hmotn. v etanole) a aktivujú sa teplom. Reakcie sa typicky ukončujú zdvojnásobením reakčného objemu reakčným alebo extrakčných rozpúšťadlom a následným premytím určenými vodnými roztokmi, ktorých objem je 25% extrakčného objemu, pokiaľ nie je uvedené ináč. Roztoky produktov sa pred filtráciou sušia nad bezvodým Na2SO4 a odparujú sa za zníženého tlaku na rotačnej odparke, čo sa označuje ako odstránenie rozpúšťadiel vó vákuu. Rýchla chromatografia (Still a kol., Org. Chem., 1978, 43, 2923) sa uskutočňuje na silikagéle s Bakerovým triedením (47-61 mm) a pri pomere silikagél:surový materiál asi 20:1 až 50:1, pokiaľ nie je uvedené ináč. Hydrogenolýza sa uskutočňuje pri určenom tlaku alebo za tlaku okolia.
1H-NMR spektra sa zaznamenávajú na prístroji Bruker pri 300 MHz a 13C-NMR spektra pri 75 MHz. NMR spektrá sa získavajú z roztokov v CDC13 (uvádzané v ppm), s použitím chloroformu (7,25 ppm a 77,00 ppm) alebo CD3OD (3,4 a 4,8 ppm a 49,3 ppm) ako referenčného štandardu alebo použitím tetrametylsilanu ako vnútorného štandardu (0,00 ppm), pokiaľ to je vhodné. Podľa potreby sa použijú aj iné rozpúšťadlá pre NMR. Keď sa v záznamoch jedná o duplicitné maximá, používajú sa tieto skratky: s = singlet, d = dublet, t = triplet, m = multiplet, br = rozšírený, dd = dublet dubletov, dt = dublet tripletov. Väzbové konštanty, pokiaľ sú dané, sa uvádzajú v Hertzoch.
Infračervené spektrá sa snímajú prístrojom Perkin-Elmer FT-IR Spektrometer ako čisté oleje, KBr ; tablety alebo ako CDC13 roztoky a pokiaľ sa uvádzajú, sú vo vlnových dĺžkach (cm-1) .
Hmotnostné spektrá sa získavajú použitím LSIMS. Všetky body topenia nie sú korigované.
Príprava stavebného bloku 1-H-pyrázol-l-karboxamidínu:
1-H-pyrazol-l-karboxyamidín sa pripravuje podía Bernatowicza a kol., J. Org. Chem., 1992, 57, 2497-2502 (a odkazov v tejto práci uvádzaných) a chráni sa di-terc-butylkarbonátom za vzniku 1-íf-pyrazol-l- (Ν,ΛΓ-bis (terc-butoxy-karbonyl) karboxamidínu) podľa Draka a kol., Synth., 1994, 579-582.
Príprava 1- (N,N '-diBoc) -guanidinometyl-4-aminometylcyklohexánu:
K roztoku 1,4-bis-aminometyl-cyklohexánu 22 (20 g, 0,14 mol) v THF (200 ml) sa pridá roztok 1-H-pyrazol-l-(NzN-bis (tercbutoxykarbonyl) karboxyamidin) 21 (22,0 g, 0,07 mol) v THF (100 ml). (Za povšimnutie stoji, že 1-H-pyrazol-l-(Z\Z,W-bis (tercbutoxykarbonyl)karboxyamidin) sa nemusí rozpúšťať v THF; je lepšie, keď sa pridá ako pevná látka.) Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 3 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku za vzniku sirupovitého zvyšku, ktorý sa extrahuje etylacetátom (500 ml) a premyje vodou do neutrálneho pH. Organická vrstva sa premyje fyziologickým roztokom, vysuší nad MgSO4 a koncentruje sa. Produkt sa čistí chromatografiou na silikagélovej kolóne a eluuje 5% roztokom MeOH v dichlórmetáne. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a získa sa 11,6 g (43% výťažok) 1- (N,l\T-diBoc) -guanidinometyl-4-aminometylcyklohexánu. XH NMR (CDC13) Ô 11,5 (br s, 1H) , 8,35 (br, s 1H) , 3,26 (dt, 2H) , 2,52 (dd, 2H), 1,82-0,97 (m, 28H, so singletom 1,5).
Redukčná aminácia:
3,5,5,8,8-pentametyl-5,6,7,8-tetrahydro-2-naftaldehyd (0,2021 g, 0,88 mmol) a 1- (N,N '-diBoc) -guanidinometyl-4-aminometylcyklohexán (zlúčenina 23, 0,337g, 0,88 mmol) sa rozpustia v metanole (10 ml) . Potom sa pridá 1% roztoku ľadovej kyseliny octovej v metanole (100 μΐ) a následne NaCNBH3 (55,4 mg, 0,88 mmol, 1,0 ekv.) a reakcia sa nechá prebiehať za stáleho miešania cez noc. Reakcia sa monitoruje TLC na troch zložkách (aldehyd, výsledný produkt a východzí derivát guanidínu). Reakcia sa ukončí pridaním vody (asi 5 ml), extrakciou dichlórmetánom (asi
100 ml) a premytím nasýteným roztokom hydrouhličitanu sodného. Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje sa, koncentruje a chromatografuje sa na kolóne (elučné činidlo hexán:etylacetát, 1:3), aby sa odstránil nezreagovaný aldehyd, nasledovanou elúciou (hexán:etylacetát, 1:1), ktorá poskytne požadovaný produkt (zlúčenina 25, cyklohexyl, zmes cis/trans). Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu (výťažnosť je v rozmedzí 50 až 80 %) .
Príprava acylovaného derivátu a následné odstránenie ochrannej skupiny z guanidínu:
Produkt redukčnej aminácie 25 (1,0 ekv.) sa rozpustí v dichlórmetáne (10-15 ml), pridá sa trietylamín (2 ekv.) a 2furoyl chloridové činidlo (1,0 ekv.). a reakcia sa nechá prebiehať za stáleho miešania pri teplote miestnosti cez noc. Zriedi sa 50 ml dichlórmetánu a premyje sa nasýteným roztokom hydrouhličitanu sodného. Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje sa a čistí sa chromatografiou na kolóne (elučné činidlo hexán:etylacetát, 1:3). Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu za vzniku zlúčeniny 26.
Produkt acylačnej reakcie 26 (1,0 ekv.) sa rozpustí v roztoku 50% TFA v dichlórmetáne (20-25 ml) a reagencie sa miešajú pri teplote miestnosti (15-20 minút, roztok sa stáva slabo červeno oranžovým) . Reagencie sa miešajú ďalšiu 1 hodinu a 20 minút, až je odstránenie ochrannej skupiny kompletné. Reakcia sa ukončí koncentrovaním vo vákuu, následným pridaním zmesi voda/acetonitril (asi 50 ml) a lyofilizáciou cez noc. Výsledná zlúčenina sa čistí metódami HPLC. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu za vzniku zlúčeniny 27.
Nasledujúca diskusia sa týka príkladov zlúčenín (e)-(k). Zlúčeniny (e)-(k) sa môžu použiť, ako sa opisuje vyššie, k výrobe odpovedajúcich nechránených (bez guanidinylu) zlúčenín hydrolýzou v kyslom prostredí.
Príprava 1- (N,N '-diBoc) -guanidinometyl-3-aminometylcYklohexánu:
(e)
K roztoku cis/trans-1,3-bis-aminometyl-cyklohexánu (7,5 g, 52,8 mmol) v THF (30 ml) sa pridá v priebehu 0,5 hodiny roztok 1,3-bis(terc-butoxykarbonyl)-2-metyl-2-tiopseudomočoviny (7, 65 g, 26,3 mmol) v THF (40 ml). Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 5 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a produkt sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu (elučné činidlo je zmes metylénchlorid/metanol) za vzniku 2,2 g (22% výťažok) 1-x-diBoc)-guanidinometyl-3-aminometylcyklohexánu
(zlúčenina (e)).
3Η NMR (CDCla) Ô 11,53 (br s, 1H), 8,40 (br, s 1H), 3,28-3,30
(m, 2H), 2,54-2,61 (m, 2H), 1,81 (br s, 2H), 1, 27-1,58 (m, 26H),
0,89 (m, 1H), 0,65 (m, 1H) .
Alternatívne sa zlúčenina (e) môže pripraviť takto. K roztoku
cis/trans-1,3-bis-aminometyl-cyklohexánu (10,0 g, 70,3 mmol) v THF (1000 ml, 0,07 M) sa pridá (v priebehu 10 minút) odpovedajúci podiel pevného 1-ÍT-pyrazol-l-(ΛΓ,ΛΖ-bis (tercbutoxykarbonyl) karboxyamidínu) (21,8 g, 70,3 mmol). Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 0,5 hodiny. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku za vzniku sirupovitého zvyšku,
Al ktorý sa extrahuje etylacetátem (500 ml) a dvakrát sa premyje vodou. Vrstvy sa oddelia, produkt sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu a eluuje 100% etylacetátom, aby sa odstránili všetky nepoláme nečistoty. Nasleduje elúcia 100%-ným izopropylalkoholom za vzniku čistého produktu. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu za vzniku 11,4 g (41% výťažok) 1-(N,N'diBoc)-guanidinometyl-3-aminometylcyklohexánu.
NMR (CDC13) δ 11,53 (br s, 1H) , 8,40 (br, s 1H) , 3,28-3,30 (m, 2H) , 2,54-2,61 (m, 2H) , 1,81 (br s, 2H) , 1,27-1, 58 (m, 26H) , 0,89 (m, 1H), 0,65 (m, 1H) .
Príprava 1- (N, N '-diBoc) -guanidinometyl-4-aminometYlbenzénu:
(f)
K roztoku p-xylyléndiamínu (6,44 g, 47,4 mmol) v THF (30 ml) sa pridá v priebehu 0,5 hodiny roztok 1,3-bis(tercbutoxykarbonyl)-2-metyl-2-tiopseudomočoviny (6,63 g, 22,9 mmol) v THF (40ml). Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 5 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a produkt sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu (elučné činidlo je zmes metylénchlorid/metanol) za vzniku 8,0 g (92% výťažok) 1diBoc)-guanidinometyl-4-aminometylbenzénu (zlúčenina (f)).
NMR (CDC13) δ 11,54 (br s, IH), 8,56 (br, s IH) , 7,29 (s, 4H) , 4,60 (d, 2H), 3,86 (s, 2H) , 1,64 (br s, 2H) , 1,52 (s, 9H) , 1,48 (s, 9H).
Príprava 1-(N,N '-diBoc)-guanidinometyl-3-aminometylbenzénu:
K roztoku m-xylyléndiamínu (7,14 g, 52,5 mmol) v THF (30 ml) sa pridá v priebehu 0,5 hodiny roztok l,3-bis(tercbutoxykarbonyl)-2-metyl-2-tiopseudomočoviny (7,57 g, 26,1 mmol) v THF (40 ml). Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 5 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a produkt sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu (elučné činidlo je zmes metylénchlorid/metanol) za vzniku 7,9 g (80% výťažok) 1-(N,N'~ diBoc)-guanidinometyl-3-aminometylbenzénu (zlúčenina (g)).
XH NMR (CDCI3) δ 11,54 (br s, IH) , 8,58 (br, s IH) , 7,19-7,34 (m, 4H) , 4,62 (d, 2H) , 3,86 (s, 2H) , 1,83 (br s, 2H) , 1,52 (s,
9H), 1,48 (s, 9H).
Príprava 1- (Ν,ΛΓ'-diBoc) -guanidinometyl-3-aminobutánu:
K roztoku 1-4-diaminobutánu (4,15 g, 47,1 mmol) v THF (30 ml) sa pridá v priebehu 0,5 hodiny roztok l,3-bis(tercbutoxykarbonyl)-2-metyl-2-tiopseudomočoviny (6,83 g, 23,6 mmol) v THF (40ml). Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 5 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a produkt sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu (elučné činidlo je zmes metylénchlorid/metanol) za vzniku 3,0 g (40% výťažok) 1-(N,N'~ diBoc)-guanidinometyl-4-diaminobutánu (zlúčenina (h)).· XH NMR (CDCla) δ 11,49 (br s, 1H), 8,35 (br, s 1H), 3,42-3,47 (m, 2H), 2,72-2,76 (t, 2H) , 0,86-1, 65 (m, 24H) .
Alternatívny postup prípravy zlúčeniny (h) je tento. K roztoku 1,4-diaminobutánu (6,0 g, 68,1 mmol) v THF (972 ml, 0,07 M) sa pridá (v priebehu 10 minút) odpovedajúci podiel pevného 1-Hpyrazol-1-(N, N-bis (terc-butoxykarbonyl) karboxyamidinu) (21,5 g, 68,1 mmol). Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 0,5 hodiny. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku za vzniku sirupovitého zvyšku, ktorý sa extrahuje etylacetátom (500 ml) a dvakrát sa premyje vodou. Vrstvy sa oddelia, produkt sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu a eluuje 100% etylacetátom, aby sa odstránili všetky nepoláme nečistoty. Nasleduje elúcia 100%-ným izopropylalkoholom za vzniku čistého produktu. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu za vzniku 10,0 g (44% výťažok) 1-(N,N'-diBoc)-guanidinometyl-3-aminobutánu.
ľH NMR (CDCls) δ 11,49 (br s, 1H) , 8,35 (br, s 1H) , 3,42-3,47 (m, 2H) , 2,72-2,76 (t, 2H) , 0, 86-1, 65 (m, 24H) .
Príprava l-N’/N-dimetylaminometyl-4-aminometylbenzénu:
K roztoku l-NzN-dimetylaminometyl-4-karbonitrilbenzénu (4,8 g, 30 mmol) v THF sa pridá roztok 1 M komplexu borán tetrahydrofurán (90 ml) . Zmes sa zahrieva pod spätným chladičom v dusíkovej atmosfére 16 hodín. Po ochladení na teplotu miestnosti sa pridá IM roztok HC1 v metanole (100 ml) . Reakčná zmes sa zahrieva pod spätným chladičom 3 hodiny. Produkt (precipitát) sa oddelí filtráciou, premyje dietyléterom a vysuší vo vákuu za poskytnutia 5,9 g (83% výťažok) produktu ako hydrochloridovej soli (zlúčenina (i)):
XH NMR (DMSO-de) δ 8,65 (br s, 3H) , 7,55 (dd, 4H) , 4,25 (s,
2H) , 3,98 (s, 2H) , 2, 62 (s, 6H) .
Príprava 1- (N,N '-diBoc) -guanidinometyl-2-aminometylbenzénu:
NH.
G)
K roztoku o-xylyléndiamínu (7,14 g, 52,5 mmol) v THF (30 ml) sa pridá v priebehu 0,5 hodiny roztok 1,3-bis(tercbutoxykarbonyl)-2-metyl-2-tiopseudomočoviny (7,57 g, 26,1 mmol) v THF (40ml). Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 5 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a produkt sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu (elučné činidlo je zmes metylénchlorid/metanol) za vzniku 1- (Ν,Ν'-diBoc)-guanidinometyl3-aminometylbenzénu (zlúčenina (j)).
Alternatívne sa zlúčenina (j) môže pripraviť spôsobom analogickým príprave zlúčeniny (e) .
Príprava 1- (N,N '-diBoc) -guanidinometyl-2-aminometylcyklohexánu :
(k)
K roztoku cis/trans-1,2-bis-aminometyl-cyklohexánu (7,5 g, 52,8 mmol) v.THF (30 ml) sa pridá v priebehu 0,5 hodiny roztok 1, 3-bis(terc-butoxykarbonyl)-2-metyl-2-tiopseudomočoviny (7,65 g, 26,3 mmol) v THF (40ml). Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 5 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a produkt sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu (elučné činidlo je zmes metylénchlorid/metanol) za poskytnutia diBoc)-guanidinometyl-3-aminometylcyklohexánu (zlúčenina (k)). Alternatívne sa zlúčenina (k) môže pripraviť spôsobom analogickým vyššie uvedenej príprave zlúčeniny (e).
D. Pyrimidinové zlúčeniny
Pyrimidíny sa môžu využiť podlá nasledujúcich postupov:
Obecný postup prípravy zlúčenín obsahujúcich pyrimidín je tento. K roztoku .1,3 diamínu 29 v THF sa pridá 28 a zahrieva sa pod spätným chladičom 12 hodín. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a adičná zlúčenina sa čistí chromatografiou na kolóne. Čis.tý 31 sa acyluje podlá obecnej procedúry uvedenej vyššie a získa sa 11.
Odborníkom v technike bude zrejmé, že vyššie uvedenými spôsobmi sa môže pripraviť rad zlúčenín podlá tohoto vynálezu. Vyššie uvedené chemické reakcie sú obecne využiteľné pre prípravu GnRH činidiel podľa vynálezu. Odborníci v technike ocenia, že sa takto môžu podobne pripraviť aj iné GnRH činidlá pomocou vhodnej modifikácie, napr. chránením pred rušivými skupinami, úpravami konvenčných činidiel pre použitie a/alebo rutinnými zmenami reakčných podmienok.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1: Účinky zlúčenín na väzbu 125I-GnRH-A na hGnRH receptory vyjadrené pre HEK-293 bunky. Skúmala sa schopnosť GnRH () a zlúčeniny 9 (A) nahradiť 125I-GnRH-A (približne 0,05 nM) pri väzbe na hGnRH receptory. Uvedené hodnoty pochádzajú z jedného reprezentatívneho pokusu uskutočneného dvojmo.
Obr. 2: Účinky zlúčenín na celkovú akumuláciu fosfátu inozitolu stimulovanú GnRH v HEK-293 bunkách vyjadrené pre hGnRH receptor. Skúmala sa schopnosť peptidového antagonistu Antide a nepeptidovej zlúčeniny 9 blokovať' GnRH-stimulovaný vzrast fosfátov [3H] inozitolu. Jtni jedna zlúčenina sama o sebe nespôsobila vzrast celkového obsahu fosfátov [3H]inozitolu (nie je uvedené), ale obidve zlúčeniny boli schopné inhibovať stimuláciu sprostredkovanú polovičnou maximálnou koncentráciou GnRH peptidu.. GnRH sám zvyšoval v závislosti na dávkovaní akumuláciu fosfátov [3H] inozitolu s EC50 o približne 0,8 nM. V uvedenom experimente boli hodnoty Kb Antide stanovené podlá metódy Cheng a Prusoff (Biochem. Pharmacol., 1973, 22, 3099-3108). Uvedené hodnoty pochádzajú z jedného pokusu uskutočneného dvojmo.
Obr. 3: Ilustrácia hladiny LH a testosterónu v krvnej plazme kontrolných a kastrovaných potkanov 10 dni po operácii.
Obr. 4A: Ilustrácia ako Antide (1,0 pg; iv) potlačuje hladiny LH v modeli kastrovaných potkanov.
Obr. 4B: Ilustrácia ako zlúčenina 11 (1,0 pg; iv) potlačuje hladiny LH v modele kastrovaných potkanov.
Obr. 5: Ilustruje afinitu zlúčeniny 11 k potkaniemu GnRH receptoru, s biologickým polčasom 3 hodiny, pričom jej koncentrácia v plazme bola 4 hodiny po intravenóznom podaní 100 až 200 nM.
Obr. 6: Vplyv zlúčeniny 136 na GnRH-stimulovaný vzrast extracelulárneho stupňa kyslosti u GGH3 buniek. GnRH vytvára vzrast extracelulárneho stupňa kyslosti GGH3 buniek závislý na navážke. Zlúčenina 136 spôsobuje posunutie krivky závislosti na navážke GnRH doprava bez zníženia maxima odozvy na GnRH. To nasvedčuje tomu, že táto zlúčenina je konkurenčný receptorový antagonista GnRH voči tomuto receptoru. Uvedené hodnoty pochádzajú z jedného experimentu.
Obr. 7: Graf ukazuje bazálne hladiny LH a testosterónu u kastrovaných (CX) a intaktných potkanov. LH u CX potkanov je zvýšený. Testosterón u CX potkanov chýba.
Obr. 8: Čiarový diagram ukazuje hladiny LH vyjadrené percentami bazálneho LH u zvierat, ktorým bolo aplikované vehikulum a u zvierat, ktorým bol aplikovaný Antide. Antide (2,0 a 20 pg; sc) potlačuje LH u CX potkanov.
Obr. 9: Čiarový diagram ukazuje hladiny LH vyjadrené percentami bazálneho LH u zvierat,' ktorým bolo aplikované vehikulum a u zvierat, ktorým bola aplikovaná zlúčenina 134. Zlúčenina 134 (1,0, 5,0, a 10 mg/kg; iv) má za následok potlačenie LH u CX potkanov, ktoré je závislé na dávkovaní.
Obr. 10: Čiarový diagram ukazuje hladiny LH vyjadrené percentami bazálneho LH u zvierat, ktorým bolo aplikované vehikulum a u zvierat, ktorým bola aplikovaná zlúčenina 134. Zlúčenina 134 (20 alebo 100 mg/kg; orálne) má za následok potlačenie LH u CX potkanov.
Obr. 11: Čiarový diagram ukazuje hladiny LH vyjadrené percentami bazálneho LH u zvierat, ktorým bolo aplikované vehikulum a u zvierat, ktorým bola aplikovaná zlúčenina 134. Zlúčenina 134 (20 mg/kg; im) má za následok potlačenie LH u CX potkanov.
Obr. 12: Stĺpcový graf ukazuje hladiny testosterónu 6 hodin po perorálnej aplikácii u zvierat,, ktorým bolo aplikované vehikulum a u zvierat, ktorým bola aplikovaná zlúčenina 136. Zlúčenina 136 potlačuje hladiny testosterónu v porovnaní s vehikulom *=p<0.05, t-test (protokol 1) .
!
Obr. 13: Čiarový diagram ukazuje hladiny testosterónu po orálnej aplikácii u zvierat, ktorým bolo aplikované vehikulum a u zvierat, ktorým bola aplikovaná zlúčenina 134 v priebehu 12 a 24 hodín po aplikácii. Vehikulum a zlúčenina boli podávané žalúdočnou sondou. Najvyššia dávka zlúčeniny 134 potlačuje testosterón v priebehu celého testu (protokol 2).
Obr. 14: Stĺpcový graf ukazuje hladiny testosterónu u zvierat, ktorým bolo aplikované vehikplum a u zvierat, ktorým bola aplikovaná zlúčenina 134 a u kontrolnej skupiny zvierat. Prázdne stĺpce znázorňujú hladiny testosterónu pred liečbou a plné stĺpce po 7 dňoch každodennej aplikácie. Zlúčenina 134 výrazne potlačuje hladiny testosterónu v porovnaní s vehikulom, kontrolnou .skupinou a aj so stavom pred liečbou. *=p<0.05, ttest (protokol 3).
Príklady uskutočnenia vynálezu
Väzba farmakologických rádioligandov in vitro
Bunkové membrány pripravené z. ludských zárodkových obličkových buniek naočkované cDNA pre testovanie ludského GnRH receptora sa suspendovali v analyzačnom pufre obsahujúcom: 50 mM HEPES, 1 mM
EDTA, 2,5 mM MgCl2 a 0,1 % hovädzieho albumínového séra.
Membrány (5 - 50 pg celkového proteínu na sondu obsahujúcej približne 10-100 fmol GnRH receptora) sa inkubovali dvojmo na
96-sondových platniach pri 200 μΐ celkového objemu s 125I-GnRH-A
5Ί (približne 0,05 nM) a testovanými zlúčeninami pri teplote miestnosti po dobu jednej hodiny. Všetky zlúčeniny boli zriedené na 1% DMSO (konečná koncentrácia pre analýzu) analyzačným pufrom. Nešpecifické naviazanie bolo pozorované v prítomnosti 100 nM GnRH. Reakcie sa ukončili rýchlou filtráciou na 96sondážnych Packard GF/C filtroch namočených ' v1 0,1% polyetyléniminu. Filtre sa premyli trikrát PBS pufrom, vysušili sa a analyzovali sa na Packard Topcount kvapalinovom scintilačnom počítači.
J
Podmienky analýz boli rovnaké pre vyhodnocovanie účinnosti zlúčenín aj pre iné živočíšne druhy. Použil sa aj podobný počet GnRH receptorov pre analýzu každého druhu. Pre skúmanie väzby potkaních GnRH receptorov sa membrány' pripravili z potkanej hypofýzy a použilo sa približne 25-30 gg celkového membránového proteínu na sondu. Pre skúmanie väzby hovädzieho GnRH receptora sa membrány pripravili z hovädzej hypofýzy a použilo sa približne 40-50 gg/sondu. Pre skúmanie väzby myšieho GnRH receptora sa membrány pripravili z buniek 293 naočkovaných myšími GnRH receptormi a použilo sa približne' 40-50 gg/sondu. Hodnoty IC50 pre kontrolné peptidy a testované zlúčeniny sa počítali s použitím GrapfPadPrism™ softwaru. Výsledky pokusu s naviazaním rádioligandov sú uvedené na Obr. 1. Tabulka 1 ukazuje priemerné hodnoty hromadných experimentov afinity rôznych peptidov a nepeptidových zlúčenín k GnRH receptorom pre štyri živočíšne druhy.
Rôzne zlúčeniny podľa vzorca I sa pripravili podľa vyššie opísanej reakčnej schémy. Nečistené zlúčeniny sa testovali s použitím vyššie opísaného testu na väzbu rádioligandov.
Výsledky týchto testov uvádza tabulka 1 (každá zlúčenina sa testovala v množstve 1 alebo 10 μΜ).
Tabuľka 1
Zlúčenina Ľudský IC50 (nM) Hovädzí IC50 (nM) Potkaní (nM IC50 Myší IC50 (nM)
GnRH 7,2 ±1,5 13 ± 2 33 ±· L/9. 11 ± 2
GnRH-A 0,34 ± 0,06 0,3 ± 0,05 0,49 ± 0,1 0,22 ± 0,03
Antide 0, 67 ± 0,09 0,15 ± 0,02 0, 19 ± 0, 04 0,25 ± 0,05
9 220 ± 33 3800 ± 220 680 ± 120 2300 ± 460
130 ± 24 1500 ± 480 390 ± 10 1400 ± 440
M 190 ± 40 320 ±10 9,0 ± 0,3 50 ± 10
12 230 ± 37 10400 ± 3000 3080 ± 630 7130 ± 1350
13 110 ± 20 530 ± 100 60 ± 8 120 ± 20
14 80 ± 4 1050 ± 30 60 ± 15 290 ± 70
15 100 ± 17 1000 ± 240 70 ± 16 220 ± 50
16 30 ± 6 4380 ± 510 560 ± 50 1290 ± 210
12 80 ± 20 670 ± 120 30 ± 4 80 ± 20
12 55 ± 11 460 ± 90 40 ± 3 115 ± 25
19 50 ± 3 NE NE . NE
20 8,0 ± 0,9 NE NE NE
Hodnoty sú priemery ± Δ najmenej troch merani uskutočnených dvojmo. NE = neurčené.
Meranie celkových fosfátov inozitolu.
Pre vyhodnotenie účinnosti zlúčenín ako agonistov a antagonistov sa využilo meranie akumulácie celkového množstva fosfátov inozitolu. Bunky 293 obsahujúce hGnRH receptor sa umiestnili na
24-sondové platá (približne 200000 buniek/sondu) s použitím DMEM média. Nasledujúci deň sa bunky preniesli s [3H]myoinozitolom (0,5 Ci/ml) na 16-18 hodín do média bez inozitolu. Médium sa odčerpalo a bunky sa prepláchli DMEM bez séra. Médium sa opäť odčerpalo a na bunky sa nechali 30 minút pôsobiť pri teplote 37 °C testované zlúčeniny alebo vehikulum. Potom sa pridala polovičná maximálna koncentrácia GnRH (1 nM) alebo vehikula a pri 37 °C sa všetko ponechalo dospieť do rovnováhy po 45 minút.
I
Média sa odstránili ľadovou kyselinou mravčou (10 mM) , ktorá zastavila reakciu a tiež poslúžila na odstránenie bunkových lipidov. Fosfáty inozitolu sa odseparovali iónomeničovou chromatografiou na Dowexových kolónach, ktoré sa vymyli 2,5 ml 10 mM myoinozitolu a 10 mM kyselinou mravčou. Potom sa kolóny vymyli 5 ml 60 mM mrávčanu sodného a 5 mM bóraxu a všetky fosfáty inozitolu sa eluovali 5 ml 1 M mravčanu amónneho a 0,1 M kyselinou mravčou. Eluáty z kolóny sa pridali do ampuli pre kvapalinovú scintiláciu obsahujúcich 15 ml scintilačnej zmesi a podrobili sa kvapalinovej scintilácii. Výsledok charakteristického experimentu uvádza Obr. 2.
Farmakologická štúdia účinnosti u zvierat in vivo
Protokol o experimente: Samce Sprague-Dawley (225-250 g) potkanov sa vykastrovali a ponechali 10 dní v pooperačnej rehabilitácii. Desať dní po kastrácii sa zvieratám zaviedli vnútrožilné a arteriálne katetry pre zaistenie infúzie a odberu krvných vzoriek. V deň experimentu sa zvieratá aklimatizovali v laboratóriu vó svojich domovských klietkach. Od všetkých zvierat sa odobrali bazálne vzorky krvi. Následné základné dávkovanie či už vehikula (10% DMSO, 10% kremofór/fyziologický roztok), Antide 1,0 gg alebo zlúčeniny 11 (10 mg/kg) sa robilo intravenózne. Vzorky krvi sa Odoberali 10, 60, 90, 120, 180 a 240 minút po injekcii. Krv sa odstredila, plazma sa odobrala a skladovala pri -70 °C až do testov. Vzorky séra sa analyzovali na DSL-4600 ACTIVE LH imunorádiometrickom prístroji od Diagnostic Systems Laboratories, Inc.
Výsledky a diskusia: Odstránenie gonád eliminuje negatívnu spätnú väzbu testosterónu na hypotalámus, čo má za následok zvýšenie GnRH a následne aj LH. Obr. 3 ilustruje hladiny LH a testosterónu v krvnej plazme u kontrolných a kastrovaných potkanov 10 dní po operácii. U týchto potkanov by sa očekávalo, že GnRH antagonista bude redukovať zvýšenie hladín LH sprostredkované GnRH. Antide a peptidový GnRH antagonista redukujú LH u kastrovaného potkana (Obr. 4) . Tiež zlúčenina 11 a GnRH antagonista s malou molekulou znižuje LH u kastrovaného potkana (Obr. 4).
Farmakokinetické štúdie
Protokol o experimente: Potkany sa pripravili katetrizáciou do hlavnej dutej žily incíziou do pravej jugulárnej žily a nechali sa zotaviť. Lieky sa rozpustili v zmesi 10 % DMSO, 10 % kremafóru a 80 % fyziologického roztoku a aplikovali sa intravenózne v dávke 10 mg/kg. Vzorky krvi sa odoberali v určených časoch a zlúčeniny sa extrahovali z 0,2 ml plazmy butylchloridom obsahujúcim vnútorný štandard. Vzorky sa analyzovali HPLC na Beta-Basoc C18 4x50 mm kolóne s použitím gradientu 40 až 80 % acetonitrilu v 10 mM pufru fosforečnanu amónneho, pri prietoku 1 ml/min ’s využitím UV detektoru s absorbanciou 260 nm.
Výsledky a diskusia: Zlúčenina 11, ktorá mala výbornú afinitu k GnRH receptoru u potkana, mala biologický polčas v plazme potkana asi 3 hodiny a jej koncentrácia v plazme 4 hodiny po intravenóznej injekcii bola 100 až 200 nM (Obr. 5).
Väzba referenčných peptidov na potkanie, myšie, hovädzie a ľudské GnRH receptory je v dobrej zhode s údajmi uvádzanými v literatúre. Nepeptidové zlúčeniny podľa predloženého vynálezu vykazujú vo väzobných profiloch značné rozdiely medzi živočíšnymi druhmi. Niektoré z týchto zlúčenín vykazujú vysokú afinitu (menšiu než 100 nM) k ľudskému GnRH receptoru. Z funkčného hľadiska všetky nepeptidové zlúčeniny skúmané v testoch na celkový fosfát inozitolu účinkujú ako antagonisty GnRH-stimulovanéj akumulácii celkového obsahu fosfátu inozitolu v bunkách obsahujúcich rekombinantné ľudské GnRH receptory. Intravenózna aplikácia zlúčeniny 11 znižuje hladiny LH v plazme kastrovaných potkaních samcov, čo je model pri chronicky zvýšených hladinách LH v plazme. Tato zlúčenina má biologický polčas 3 hodiny a koncentrácia v plazme je v korelácii s účinnosťou. Tieto údaje ukazujú, že nepeptidové zlúčeniny vynálezu by mali mať použitie ako antagonisty GnRH receptora.
Peptidový agonisty a antagonisty použitý ako referenčné zlúčeniny:
Antide
Leuprolide
GnRH-A
[D-ALA6, DES-GLY10J-LH-RH ETYLAMID
Nasledujúce údaje o zlúčeninách sa získali takto:
Bunkové kultúry
GH3 bunky naočkované potkaním GnRH receptorom (GGH3) poskytol
Dr. William Chin (Harvard Medical School, Boston, MA) . Tieto bunky už boli skôr obsiahlo opísané (Kaiser a kol., boli vypestované v modifikovaného médiom nízko
Eagle glukózovom médiu (DMEM) obsahujúcom:
1997). Bunky
Dulbecco
100 j/ml penicilín/streptomycín, inaktivovaného fetálneho
0, 6 hovädzieho g/1 G418 a 10% séra (FBS).
tepelne
Pre GnRH receptor bola cDNA do HEK 293
Vitrogen) a naočkovaná postup poskytol Dr. Stuart Sealfon, New York, klonovaná do pcDNA 3 (In buniek (hGnRH-R/293) . Tento
Mount Sinai Medical School,
NY. Tieto bunky boli vypestované v DMEM doplnenom 0,2 g/1 G418 100 j/ml penicilín/streptomycín a 10% FBS. GGH3 aj hGnRH-R/293 bunky sa použili tak pre meranie celkového obsahu fosfátu inozitolu, ako aj pre mikrofyziometrické stanovenie účinnosti zlúčeniny.
Príprava rádioligandu
Ako rádioligand sa použil rádioaktivným jódom značený analóg GnRH [des-Gly10, D-Ala6]GnRHetylamid (125I-GnRH-A) . Jeden pg GnRH-A zriedený 0,1 M kyselinou octovou sa pridal do trubice z borosilikátového skla (Pierce) potiahnuté prípravkom Iodogen® obsahujúci 35 μΐ 0,05 M fosfátového pufru (pH 7,4 až 7,6) a 1 mCi Na[125I]. Reakčná zmes sa ponechala vyzrieť za vírenia po 1 minútu pri teplote miestnosti. Potom sa ponechala vyzrieť za vírenia ďalšiu minútu. Do reakčnej trubice sa pridali 2 ml 0,5 M kyseliny octovej/1% BSA a zmes sa pridala do zásobníku C18 Sep
Pak. Zásobník sa postupne vymýval 5 ml H20 a 5 ml 0,5 M kyseliny octovej a potom eluoval 5 x 1 ml 60 % CH3CN/40 % 0,5 M kyseliny octovej. Eluát sa zriedil trojnásobným objemom HPLC pufru A (0,1 % TFA v H20) a previedol sa do kolóny C18. Produkt jodizácie sa eluoval po dobu 20 až 25 minút gradientom 25 až' 100% CH3CN obsahujúcim 0,1 % TFA. Rádiaktívne frakcie (750 μΙ/frakciu) sa zberali do čistých polypropylénových skúmaviek obsahujúcich 100 μΐ 10% BSA. Frakcie sa hodnotili z hľadiska biologickej účinnosti pri naviazaní rádioligandu. Špecifická aktivita rádioligandu bola približne 2200 Ci/mmol.
Mikrofyziometria
Cytosensor®Microphysiometer (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) je polovodičový, nerádioaktívny, neinvazívny systém pracujúci v reálnom čase, slúžiaci k monitorovaniu reakcií bunky na rôzne podnety. Je založený na kremíkovom senzore citlivom na pH, na svetlom adresovateľnom potenciometrickom senzore, ktorý tvorí časť mikroobjemovej plávajúcej komôrky, v ktorej sú pestované bunky imobilizované (Pitchford a kol., 1995; Parce a kol., 1989; Owicki a kol., 1994).
Ďalšie odkazy:
Owicki, J.C., L.J. Bousse, D.G. Hafeman, G.L. Kirk, J.D. Olson, H.G. Wada a J.W. Parce. The light-addressable potentiometric sensor: principles and biological applications. Ann. Rev. Biophys. Biomol. Strúc. 1994, 23, 87-113.
Parce, J.W., J.C. Owicki, K.M. Kercso, G.B. Sigal, H.G. Wada,
V.C. Muir, L.J. Bousse, K.L. Ross, B.I. Sikic, H.M. McConnell.
Detection of cell-affecting agents with a silicon biosensor.
Science 1989, 246, 243-247.
Pitchford, S., K. DeMoor a B.S. Glaeser. Nerve growth factor stimulates rapid metabolic responses in PC12 cells. Am. J. Physiol. 1995, 268 {Celí Physiol. 37), C936-C943,.
GGH3 bunky sa naočkovali v slabo pufrovanom základnom médiu (MEM, Sigma) obsahujúcom 25 mM NaCl a 0,1% BSA s hustotou 500,000 buniek/kapsľu do polykarbonátovej membrány (s pórovitosťou 3 |im) pohárikov kapsle na bunky (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) . Poháriky z kapsle sa preniesli do senzorových komôrok, kde sa bunky držali v tesnej blízkosti silikónového senzora, ktorý meria malé zmeny’ pH v mikroobjeme senzorovej komôrky. Slabo pufrované médium sa kontinuálne čerpá cez bunky prietokovou rýchlosťou asi 100 μΐ/min z jedného zásobníka do druhého. Ktorá látka a z ktorého zásobníka vniká k bunkám určuje výberový ventil.
Cytosensor®Microphysiometer generuje každú sekundu napäťový signál, ktorý je lineárnou funkciou pH. Pre umožnenie merania stupňa kyslosti sa periodicky prerušuje tok do senzorovej komôrky, aby produkty acidobázických reakcií mali možnosť prejsť do extracelulárných látok buniek. Pri pokusoch sa bunky udržovali na 37 °C pri dvojminútových cykloch, pri ktorých sa bunky'80 sekúnd premývali médiami a žatým sa prietok médií na 40 sekúnd, zastavil. Behom týchto 40 sekúnd sa merali po dobu 30 sekúnd stupne kyslosti. Týmto spôsobom sa jednotlivé stupne kyslosti merali každé dve minúty. Prístroj Cytosensor®Mcrophysiometer obsahuje osem takýchto senzorových jednotiek umožňujúcich uskutočňovať osem simultánnych experimentov. Každá jednotka je naprogramovaná individuálne a využíva počítač pripojený k systému.
GGH3 bunky sa ponechali 30-60 minút dospieť do rovnováhy v slabo pufrovanom médiu MEM. Behom tejto doby sa monitorovali (merané v μν/sec) základné stupne kyslosti bez prítomnosti akýchkoľvek podnetov. Experimenty začali, keď sa základný stupeň kyslosti menil menej než o desať percent za dvadsať minút. Pred vlastným meraním stupňa kyslosti sa uskutočnili experimenty v závislosti na čase, aby sa zistila optimálna doba pôsobenia agonistu pred acidifikáciou a doba pôsobenia potrebná k získaniu maxima acidifikačnej odozvy rôznych agonistov. Z týchto pokusov vyplynulo, že by sa bunky mali vystaviť GnRH peptidovým agonistom najmenej jednu minútu pred meraním stupňov kyslosti. Maximá stupňa kyslosti sa obvykle objavovali behom prvého dvojminútového cyklu. Pre zachytenie maxima odozvy na GnRH sa bunky vystavili pôsobeniu agonistov celkom štyri minúty. Zlúčeniny sa ponechali pôsobiť na bunky 20-60 minút pred štyrminútovým pôsobením samotného GnRH (1,0 nM - 10 μΜ) alebo GnRH v kombinácii s rôznymi skúšobnými koncentráciami jednotlivých zlúčenín. Všetky zlúčeniny sa testovali v konečnej koncentrácii 1 % DMSO v slabo pufrovanom MEM prostredí opísanom vyššie.
Profily selektivity
Pre stanovenie špecifičnosti afinity zlúčenín k GnRH receptorom sa testovala účinnosť zlúčenín v rôznych funkčných a väzobných vzorkách. Tabuľka 2 uvádza účinnosť zlúčeniny 20 v rôznych vzorkách.
Tabulka 2. Väzobná afinita alebo funkčná dávka zlúčeniny 20 v rôznych testoch
Vzorka Kí (nM) *
Adenozin (neselektívny) >1000
Alpha 1 adrenergikum (neselektívne) >1000.
Alpha 2 adrenergikum (neselektívne) >1000
Beta adrenergíkum (neselektívne) >1000
Dopamín (neselektívny) >1000
D2 Dopamín >3200
Hl Histamín >1000
H2 Histamín «1000
H3 Histamín >1000
M2 Muskarín >1000
Muskarinický (neselektívny) periferálny >1000
Opiát (neselektívny) >1000
Prenášač sérotonínu >1000
Sérotonín (neselektívny) >1000
5-HT2a 2350
5-HTi >4400
Estrogén >1000
Testosterón >1000
L-Typ Ca2+ Channel >1000
N-Typ Ca2+ Channel >1000
ATP-sens. K+ Channel >1000
Ca2+- aktivovaný K+ Channel >1000
Na+ Channel (poloha 1) >1000.
Na+ Channel (poloha 2) >1000
LTB4 >1000
LTD4 >1000
PAF . «3000-5000
TRH >1000
Oxytocín >1000
AT1 Angiotenzín «3000-5000
Bradykinín 2 >1000
CCKA >1000
ET-A >1000
Galanín >1000
NK1 >1000 .
NK2 >1000
NK3 «3000-5000
VIP (neselektivny) >1000
AchE >1000
Cholínová acetyltransferáza >1000
ΜΆΟ-Α . >1000
MAO-B >1000
IL8RA(CXCR-1) >10000
GLP-1 >10000
Glukagón 6700
NPY Yl >10000
CYP3A4 cytochróm P450 IC50 1700
Basal Histamíne Release (rat mast cells) EC 50 >10000
RARy Retinoid >10000
RXRa Retinoid >10000
Vasopressín 1 >1000
*EC50 pre základný test uvoľňovania histamínu
Obr. 6 ukazuje vplyv zlúčeniny 136 na GnRH-stimulovaný vzrast extracelulárneho stupňa kyslosti u GGH3 buniek. GnRH vytvára na navážke závislý vzrast extracelulárneho stupňa kyslosti GGH3 buniek. Zlúčenina 136 spôsobuje posunutie krivky závislosti na navážke GnRH doprava bez zníženia maxima odozvy na GnRH. To nasvedčuje tomu, že táto zlúčenina je konkurenčný receptorový antagonista GnRH voči tomuto receptoru. Uvedené hodnoty pochádzajú z jedného experimentu.
Príklad spôsobov prípravy zlúčenín podía vynálezu:
4-(3-metylfenôxy)-2-butanon
O
K m-krezolu (4,0 g, 37 mmol), mmol) v chloroforme sa pridá (25 sa zahrieva pod spätným chladičom metylvinylketónu (3,2 ml, 37 ml) diizopropyletylamín. Zmes 16 hodín, nechá sa ochladiť na teplotu, miestnosti a odparí sa. Zvyšok obsahuje 50 % produktu a % východzej látky. Východzia látka sa odstráni ako terc70 butyldimetylsilyléter. Produkt sa izoluje filtráciou. Výťažnosť je 4,5 g (68 %) .
2-Metyl-4(3-metylfenoxy)-2-butanol:
OH
K roztoku metylmagnéziumbromidu v éteri (50 ml) pripraveného z MG (572 mg, 23,56 mmol) a Mel (3,34 g, 23, 56 mmol) sa pridá 4(3-metylfenoxy)-2-butanón (2,1 g, 11,78 mmol) v 10 ml éteru. Roztok sa mieša 30 minút pri teplote miestnosti, potom sa ochladí vodou a zriedi kyselinou chlorovodíkovou. Organická vrstva sa odseparuje, vysuší nad síranom sodným a filtruje sa cez kremičitý filter. Bezfarebný sirup 1,91 g (83 %) .
4,4,7-trimetyl chromán
O.
K chloridu hlinitému (1,3 g, 9,79 mmol) v 40 ml sírouhlíka sa pridá 2-metyl-4 (3-metylfenoxy) -2-butanol (1,9 g, 9,79 mmol) v 10 ml sírouhlíka. Zmes sa zahrieva pod spätným chladičom 2 hodiny.
Rozpúšťadlo sa odparí, zvyšok sa zriedi 50 ml octanu etylnatého a 10 ml vody. Organická vrstva sa odseparuje, vysuší nad síranom sodným a vyčistí na rýchlej kolóne. Svetlo žltý sirup 1,5 g (87
%) ·
Etyl-5- [ (4,4,7-trimetyl-3, 4-dihydro-2ŕf-chromén-6-yl)metyl] -2furoát a etyl-5-[ (4,4,7-trimetyl-3, 4-dihydro-22f-chromén-8yl)metyl]-2-furoát:
K chloridu zinočnatému (950 mg, 6,97 mmol) v nitrometáne (20 ml) sa pridá zmes 4,4,7-trimetyl chrománu (1,23 g, 6,97 mmol) a etyl-5-chlorometyl-2-furoátu (656 mg, 3,48 mmol) v nitrometáne (15 ml) . Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 16 hodín. Odparí sa do sucha a rozotrie sa v etylacetáte s vodou (1:1, 100 ml).
Organická vrstva sa spracuje obvyklým spôsobom a filtruje sa s použitím hexánu:etylacetátu (9:1) za vzniku zmesi požadovaných zlúčenín. 1,34 g (46 % chrománu).
N- (2,4,6-trimetoxyfenyl)-5-[(4,4,7-trimetyl-3, 4-dihydro-2Hchromén-6-yl)metyl]-2-furamid a N-(2,4, 6-trimetoxyfenyl)-5[ (4,4,7-trimetyl-3, 4-dihydro-2H-chromén-8-yl)metyl] -2-furamid:
K zmesi etyl-5-[ (4,4,7-trimetyl-3, 4-dihydro-2H-chromén-6yl) metyl]-2-furoátu a etyl-5-[ (4, 4,7-trimetyl-3, 4-dihydro-2/íchromén-8-yl)metyl]-2-furoátu (1,34 g, 3,74 mmol) v THF : MeOH :
Η20 (7 : 5 : 5, 20 ml) sa pridá monohydrát hydroxidu litneho
(784 mg, 18, 7 mmol). Zmes sa mieša 4 hodiny pri teplote
miestnosti. Zmes sa odparí do sucha a zriedi sa 30 ml octanu
etylnatého a 50 ml vody. Po okyslení zriedenou HC1 sa etyl
acetátová vrstva oddelí, vysuší a odparí za vzniku zmesi
odpovedajúcich kyselín, 1,03 g (kvantitatívne). Kyseliny nie je možné oddeliť chromatografiou na kolóne alebo kryštalizáciou. K zmesi kyselín (200 mg, 0,66 mmol) v dichlórmetáne (30 ml) sa pridá tionylchlorid (392 mg, 3, 3 mmol) . Zmes sa zahrieva pod spätným chladičom 1 hodinu a. odparí sa. Zvyšok sa rozpustí v hexáne : etylacetáte (9 : 1, 20 ml) a filtruje sa cez silikagélovú zátku (0,5 cm x 1,0 cm).
K zvyšku v 10 ml etylacetátu sa pridá hydrochlorid 2,4,6trimetoxyfenylamínu (145 mg, 0,66 mmol) a následne diizopropyletylamín (256 mg, 1,98 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 16 hodín. Reakcia sa ukončí vodou (10 ml) a etylacetátová vrstva sa odseparuje. Kombinácia čistenia na kolóne a HPLC poskytla 15 mg a 21 mg požadovaných zložiek (12 %).
Biologická dostupnosť zlúčenín podľa tohoto vynálezu je uvedená v nasledujúcich tabuľkách 3 a 4.
Farmakologické testovanie niektorých zlúčenín podľa vynálezu in vivo bola následovné:
Experimenty in vivo obecne:
Dospelé samce Sprague-Dawleyových potkanov sa kúpili od Harlan
Spŕague Dawley (San Diego). Zvieratá sa umiestnili v klietkach po dvoch a chovali sa v miestnosti s riadenou teplotou (22 ± 2 °C) v svetelnom režime 12 hod. svetlo/12 hod. tma (svetlo od
6:00 hod.). Potkanie krmivo (krmivo Teklad) a voda z vodovodu sa podávali ad libitum.
Zvierací model určenia účinnosti GnRH antagonistov:
Model kastrovaných potkaních samcov
Zdôvodnenie: Chirurgické odstránenie gonád odstráni cirkuláciu testosterónu a eliminuje spätnú väzbu testosterónu ’ na hypotalámus. Výsledkom je zvýšenie GnRH a v dôsledku toho aj zvýšenie LH (Obr. 1) . Predpokladá sa, že GnRH antagonisty budú znižovať vzrast hladín LH sprostredkovaných GnRH. Antide a peptidový antagonisty GnRH znižujú hladiny1 LH u kastrovaných myší (Obr. 8). Tento model sa zdá byť vhodný pre hodnotenie GnRH antagonistov s malými molekulami.
Protokol: Samce Sprague-Dawleyových (200 - 225 g) potkanov boli vykastrovaný mieškovým prístupom pod anestéziou halotánu. Pred výskumom sa im ponechala lehota 14 dní na rekonvalescenciu. Trinásty deň po kastrácii sa zvieratá opäť anesteziovali halotánom a zaviedla sa im imanentná kanyla do jugulárnej žily. Detaily tohto postupu boli už skôr opísané (Harms and Ojeda, 1974).'
V deň experimentu sa zvieratá nechali aklimatizovať v laboratóriu vo svojich domovských klietkach. Odobrali sa bazálne vzorky krvi od všetkých zvierat. Hneď nato sa rôznymi spôsobmi aplikovalo ’ vehikulum alebo testované zlúčeniny. Používané spôsoby aplikácie boli intravenózne (iv), intramuskulárne (im), intraperitoneálne (ip), podkožné (subkutánne sc) a orálne (po). Vzorky krvi sa odoberali v rôznych časoch po aplikácii do skúmaviek obsahujúcich heparín. Krv sa okamžite odstredila, plazma sa odobrala a skladovala pri -20 °C až do testov. Vzorky plazmy sa analyzovali na DSL-4600 ACTIVE imunorádiometrickóm prístroji od Diagnostic Systems Laboratories, Inc s testosterónom potiahnutými skúmavkami.
Formulácia zlúčenín:
Formulácia #1 (označená horným indexom 1) : 10 % DMSO, 10 %
Kremofór EL a 80 % fyziologický roztok.
Formulácia #2 (označená horným indexom 2): 10 % Kremofór EL a 90 % fyziologický roztok.
Výsledky: Viď Obr. 9 až 11 a tabuľku 3.
Intaktné samce potkanov
Zdôvodnenie: Testosterón je hormón regulovaný osou hypotalámushypofýza-gonády. GnRH je vyplavovaný z hypotalámu a stimuluje predný lalok hypofýzy k uvoľňovaniu gonadotropných hormónov LH a FSH. Testosterón sa vytvára, pokiaľ sú semenníky stimulované LH. Množstvo vylučovaného testosterónu je približne priamo úmerné množstvu dostupného LH (Guyton, 1986). Predpokladá sa, že GnRH antagonisty znižujú hladinu testosterónu tlmením LH.
Protokol 1: Samce Sprague-Dawleyových (250-275 g) potkanov boli ubytovaný po jednom. Pred testovaním sa im dal týždeň na aklimatizáciu.
V deň experimentu sa im rôznymi spôsobmi (ip, sc alebo po) aplikovalo vehikulum alebo testované zlúčeniny. Vzorky krvi sa odoberali v dopredu určených časoch po aplikácii kardiopunkciou pod anestéziou do skúmaviek obsahujúcich heparín. Krv sa okamžite odstredila, plazma sa odobrala a skladovala pri -20 °C až do testov. Vzorky plazmy sa analyzovali na DSL-4600 ACTIVE imunorádiometrickom prístroji od Diagnostic Systems Laboratories, Inc s testosterónmm potiahnutými skúmavkami.
Protokol 2: Samce Sprague-Dawleyových (250-275 g) potkanov boli ubytovaný po jednom. Pred testovaním sa im ponechal týždeň na
Ί5 aklimatizáciu. Vyvinuli sme techniku dovoľujúcu opakované vzorkovanie z jugulárnej žily použitím katerov microrenathane (MRE) implantovaných 7 dní pred testovaním. Detaily chirurgického postupu už boli skôr opísané (Harms and Ojeda, 1974).
V deň experimentu sa zvieratá nechajú aklimatizovať v laboratóriu vo svojich domovských klietkach. Odberajú sa bazálne vzorky krvi od všetkých zvierat. Hneď nato sa rôznymi spôsobmi aplikuje vehikulum alebo testované zlúčeniny. Používané spôsoby aplikácie sú intravenózne (iv), intramuskulárne (im)., intraperitoneálne (ip), podkožné (subkutánne sc) a orálne (po). Vzorky krvi sa odberajú v rôznych časoch po aplikácie do skúmaviek obsahujúcich heparín. Krv sa okamžite odstredila, plazma sa odobrala a skladovala pri -20 °C až do testov. Vzorky plazmy sa analyzovali na DSL-4600 ACTIVE imunorádiometrickom prístroji od Diagnostic Systems Laboratories, Inc s testosterónom potiahnutými skúmavkami.
Protokol 3: Opakovaná štúdia dávkovania zlúčeniny 134
Samce Sprague-Dawleyových (250-275 g) potkanov sa ubytovali po dvoch. Pred testovaním sa im nechal týždeň na aklimatizáciu. Sedem po sebe idúcich dní sa im každé ráno medzi 8:00 a 9:00 hod. aplikovalo vehikulum (im alebo sc alebo po). Ôsmy deň medzi 8:00 a 9:00 hod. ráno sa odobrali vzorky krvi kardiopunkciou pod anestéziou. Procedúra sa ukončila behom 45-60 sekúnd. Ďalších sedem dni sa jednej skupine zvierat aplikovali ďalšie dávky vehikula, zatiaľ čo druhej skupine sa liečba ukončila. Po siedmych dňoch tohoto režimu sa odobrali vzorky rovnakým spôsobom ako u predchádzajúcich protokolov. Hladiny testosterónu u zvierat, ktorým sa podávalo vehikulum a u zvierat, ktorým sa nepodávalo, neboli rozdielne.
Ί6
Sedem dní sa každé ráno uskutočnila medzi 8:00 a 9:00 hod. ráno aplikácia zlúčeniny 134 (100 mg/kg) alebo vehikula. Po siedmych dňoch tohoto režimu sa odobrali krvné vzorky do skúmaviek s heparinom. Krv sa okamžite odstredila, plazma sa odobrala a skladovala pri -20 °C až do testov. Vzorky plazmy sa analyzovali na DSL-4600 ACTIVE imunorádiometrickom prístroji od Diagnostic Systems Laboratories, Inc s testosterónom potiahnutými skúmavkami.
Výsledky: Viď tabuľku 4 a Obr. 12 až 14.
Tabulka 3 GnRH zlúčeniny - model kastrovaných potkanov
Zlúčenina Dávka mg/kg spôsob % Max LH potlačenie £ 50 % potlačenie Čas Rozmedzie koncentrácií V plazme μΜ
č. 9 1,0/iv 40 @ 0,5 h NS ND
č. 11 10/iv 10/ip 20/po 85 @ 0,75 h 50 @ 0,5 h NS 3 h < 1· h NS ND
č. 13 20/iv 63 @ 0,5 h < 1 h ND
č. 48 10/iv 20/iv 75 @ 0,5 h 51 @ 1 h < 1 h 1 h 35,7-3,49
č. 20 10/iv 78 @ 0,5 h 0.5 h ND
20/iv 72 @ 1 h 1.0 h
50/im 65 0 1 h 2 h
50/po 59 @ 1 h 2 h
100/po 43 @ 2 h NS
č. 136 5,O/iv 48 @ 1 h 1.0 h 3,0-0,3
10/iv 74 0 2 h 6 h 3,7-0,28
20/iv 98 0 4 h > 6 h 8,9-0,7
20/ip
Č. 134 2,O/iv 24 @ 0,5 h 0,53-0,20
5,O/iv 70 0 0,5 h 3,2-0,11
10/iv 100 0 0,5 h 2 h 4,8-0,16
20/po 62 @ 4 h 4 h 0,94-0,3
100/po 84 @ 4 h 8 h 1,27-0,7
20/ip 80 @ 2 h 4 h 1,7-0,45
100/ip 98 @ 4 h 8 h 1,7-0,32
20/sc 53 @ 8 h len 0 8 h 0,6-0,3
100/sc 80 0 6 h 8 h 0,39-0,15 ·
20/im 73 @ 2 h 8 h 1,3-0,12
100/im 98 @ 2-24 h 24 h 10, 8-0, 5
Č. 119 5,O/iv 63 0 1 h 1 h 3,1-0,8
10/iv 61 @ 1 h 1 h 8,13-0,35
20/pó 63 @ 2 h 2 h 0,1
20/ip 79 @ 2 h 2 h 0,6-0,1
20/sc NS NS 0,2
č. 183 10/iv 92 @ 1 h 8 h 1,5-0,89
50/po 60 0 2 h 8 h 0,65-0,13
10/im 58 0 2 h NS 0,18-0,08
č. 206 10/iv 51 @ 1 h NS 0,2-0, 06
20/po NS NS 0,1-0,05
NS = nie je potlačené, ND = nie je stanovené
Tabulka 4 GnRH zlúčeniny - model intaktných potkanov
Zlúčenina Dávka mg/kg spôsob % Potlačenia testosterónu Potlačenie Čas Rozmedzie koncentrácií V plazme μΜ
č. 134 20/ip 36 @ 4 h 4 h 0,2
100/sc 60 @ 24 h 24 h 0,13
20/po NS02 alebo 4 h NS 0,15 @ 2 h
0,17 @ 4 h
100/im * 7 80 @ 12 h 12 h 1,3
dní
NS NS 1,1 0 1 h
20/po 75 0 4 h 8 h 2,5-0,22
50/po 80 @ 6 h 12 h 2,4-,025
100/po
č. 136 20/ip 72 0 6 h 6 h 0,4
40/po 46 0 4 h 4 h 0,34
NS = nie je potlačené ND = nie je stanovené
Procedurálne poznámky
Je zdokumentované, že niektoré procedúry bežne používané pri endokrinologických štúdiách na zvieratách, ako sú anestézia, pôst, chirurgické zákroky môžu mať vplyv na študované hladiny hormónov (B.E. Howland a kol., Experentia, 1974.) Luteinizačný hormón a testosterón sú citlivé na stresory. Rad štúdií si protirečí, čo sa týka účinkov stresorov na osi HPG, dokonca aj keď sa jedná o rovnaký živočíšny druh a rovnaké stresory. Napríklad samce potkanov, ktoré sú obmedzené v pohybe alebo znehybnené, majú podlá štúdii nízke, (Kruhlich a kol., 1974; DuRuisseau a kol., 1978), normálne (Tache a kol., 1980; Charpenet a kol., 1982; Collu a kol., 1984) alebo zvýšené koncentrácie LH (Briski a kol, 1984) . Podobne hladiny testosterónu v plazme sa podlá štúdii v stresových situáciách menia, ale opäť sa v údajoch objavujú rozpory a ich interpretácia je obtiažna. Napríklad behom intenzívneho fyzického výkonu sa hladiny testosterónu podlá niektorých prací zvyšujú (Dessypris a kol., 1976), znižujú (Sutton a kol., 1973) alebo sa nemenia (Lamb, 1975). Účinky znehybnenia na koncentrácie testosterónu sú vo väčšine výskumných správ konzistentnejšie opisované ako pokles hodnôt (Tache a kol., 1980; Charpenet a kol., 1982;· Collu a kol., 1984). Všeobecne sa však prijíma, že koncentrácia testosterónu je stresom ovplyvnená v závislosti na druhu a dobe trvania stresu. Preto sme vzali do úvahy citlivosť LH a testosterónu na stres a optimalizovali sme protokoly tak, aby LH a testosterón boli vyhodnocované za podmienok, ktoré stres minimalizujú.
Zlúčeniny podlá vynálezu, ktoré boli pripravené sa uvádzajú v pripojených tabuľkách.
Zlúčeniny sa môžu pripraviť podlá obecných postupov uvedených vyššie. Charakteristické príklady sa uvádzajú ďalej.
Zlúčeniny obsahujúce pyrimidín
Príprava 2-chloro-H- [ (22?) -tetrahydro-2-furánmetyl ] -4-pyrimidínamínu 1^ a 4-chloro-N-[ (22?)-tetrahydro-2-furánmetyl]-2-pyrimidínamínu 2:
Do 251 ml banky s okrúhlym dnom sa vloží 2,4-dichlórpyrimidín (5,0 g, 33, 56 mmol) a 200 ml THF. K tomuto roztoku sa pridá trietylamín (14,0 ml, 100, 68 mmol) a [J?]-tetrahydrofurfurylamín. Roztok sa mieša cez noc. Reakčná zmes sa naleje do vody a extrahuje metylénchloridom. Oddelená organická vrstva sa premyje nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom hoŕečnatým a koncentruje na rotačnej odparke. Produkt sa čistí chromatografiou na silikagéle hexánom/etylacetátom (4:1 V/V až 1:1 V/V) za vzniku 2 (1,3 g) a 1 (3,98 g).
Príprava N-[3-(aminometyl)benzyl]-2,2,2-trifluóracetamidu 3:
K roztoku m-xyléndiamínu (28,76 g, 211,15 mmol) v THF (300 ml, 0,7 M) sa pridáva po kvapkách roztok etyltrifluóracetátu (10 g, 70, 38 mmol) v THF (50 ml, 1,4 M). Roztok sa mieša pri teplote miestnosti cez noc. Reakcia sa monitoruje TLC. Rozpúšťadlo sa koncentruje a zvyšok sa okyslí 4N HC1 na pH 2, rozpustí sa vo vode a premyje sa etylacetátom. pH oddelenej vodnej vrstvy sa upraví NH4OH na hodnotu 11 a zlúčenina sa extrahuje dichlórmetánom. Odseparovaná organická vrstva sa premyje vodou/nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší nad síranom horečnatým a zakoncentruje za vzniku 3 (8,71 g, 53 % výťažok).
Syntéza 5-[(3,5,5,8,8-pentametyl-5,6,7,8-tetrahydro-2naftyl)metyl]-N- (3-{ [ (2—{ [ (2R)-tetrahydro-2-furylmetyl]amino}-4pyrimidínyl)amino]metyl}benzyl) -2-furamidu 9.
Príprava etyl-3-(aminometyl)benzylkarbamátu 5.
K roztoku N-[3-(aminometyl)benzyl]-2,2,2-trifluóracetamidu 3 (10,6 g, 43,1 mmol) sa pridá chloromaravčan etylnatý (1 ekv.) a následne trietylamín. Reakcia sa nechá prebiehať za stáleho miešania pri teplote miestnosti 30 minút. Produkt sa extrahuje chloridom metylnatým a zakoncentruje sa za vzniku 3{[(trifluóracetyl)amino]metyl)benzylkarbamátu 4. Produkt sa rozpustí v metanole (100 ml) a 2N K2CO 3 (100 ml) a mieša sa cez noc. Upraví sa pH reakčnej zmesi na hodnotu 14 pomocou 20% NaOH, zmes sa extrahuje metylénchloridom, premyje sa nasýteným roztokom chloridu sodného a vysuší sa nad síranom hoŕečnatým za vzniku 5 (5,2 g).
Príprava etyl-3-{ [ (2— { [2R]-tetrahydro-2-furanylmetyl ] amino}-4pyrimidínyl)amino]metyl)benzylkarbamátu 6.
K roztoku etyl-3- (aminometyl)benzylkarbamátu 5 a 4-chloro-N·[ (2R)-tetrahydro-2-furánmetyl] -2-pyrimidínamínu 2 v chlórbenzéne sa pridá trietylamin. Reakčná zmes sa zahrieva pod spätným chladičom cez noc. Roztok sa ochladí na teplotu miestnosti, nanesie na silikagélovú kolónu a eluuje sa hexánom/etylacetátom (1:1 V/V) za vzniku etyl-3-{[(2-{[2R]-tetrahydro-2-furylmetyl] amino}-4-pyrimidínyl) amino]metyl)benzylkarbamátu 6 (73% výťažok).
Etyl-3- { [ (2- { [2R] -tetrahydro-2-furylmetyl] amino}-4-pyrimidinyl)amino]metyl)benzylkarbamát 6 sa rozpustí v etylénglykole a hydroxide draselnom (1:1 V/V). Roztok sa zahrieva cez noc na 100 °C. Zmes sa ochladí na teplotu miestnosti, a extrahuje chloroformom, premyje nasýteným roztokom chloridu sodného a suší nad síranom hoŕečnatým za vzniku ^-[S-íaminometylbenzyl])-^2[ (2R)-tetrahydro-2-furylmetyl]-2, 4-pyrimidíndiamínu Ί_ (82% výťažok). ,
Príprava 5-[(3,5,5,8,8-pentametyl-5,6,7,8-tetrahydro-2naftyljmetyl]-N-(3-{ [ (2-{ [ (2R)-tetrahydro-2-furylmetyl]amino}-4pyrimidínyl) amino]metyl }benzyl) -2-furamidu 9.
Etyl-3-{[(2— {[2R]-tetrahydro-2-furylmetyl]amino}-4-pyrimidínyl)aminojmetyl)benzylkarbamát 6 sa rozpustí v etylénglykole a hydroxide draselnom (1 : 1 V/V). Roztok sa zahrieva cez noc na 100 °C. Zmes sa ochladí na teplotu miestnosti, a extrahuje chloroformom, premyje nasýteným roztokom chloridu sodného a suší nad síranom hoŕečnatým za vzniku N4-[3-(aminometyl-benzyl])-N284 [(2R)-tetrahydro-2-furylmetyl]-2, 4-pyrimidíndiamínu 7 (82% výťažok). Tento produkt 7 (182 mg,. 5,80 mmol) a 2-furoyl chlorid reagencie 8 sa rozpustia v dichlórmetáne a následne v trietylaminu. Reakcia prebieha za stáleho miešania cez noc.·. Surová zlúčenina sa vyčistí na kolóne so silikagélom elúciou etylacetátom/hexánom (4:1 V/V) za vzniku 5-[(3,5,5,8,8-pentametyl-5, 6,7,8-tetrahydro-2-naftyl) metyl] -N- (3— { [ (2— { [ (2R) tetrahydro-2-furylmetyl] amino}-4-pyrimidínyl) amino]metyl} benzyl)-2-furamidu 9 (159,1 mg).
XH NMR (CDC13) δ 1,19 (s, 6H) , 1,22 (s 6H) , 1,26 (s, 6H) , 1,65
(m,. 5H) , 1,92 (m, 3H) , 2,23 (s, 3H) , 3,45 (m, 1H) , 3,7 ( m, 1H) ,
3,9 ( m, 3H), 4,05 (m, 1H), 4,50 (d, 2H) , 4,58 (d, 2H) , 5, 01
(brd, 1H), 5,30 ( brd, 1H) , 5,71 (d, 1H) , 6,03 (d, 1H) , 6/61. (t,
1H), 6,99 (s, 1H) , 7,06 (s, 1H) , 7,07 (s, 1H) , 7,28 (m, 4H),
7,80 (d, 1H). MS: 622,4 (M+1).
Syntéza 5-[(3,5,5,8,8-pentametyl-5,6,7,8-tetrahydro-2naftyl)metyl] -N- (3-{ [ (4 — { [ (2S) -tetrahydro-2-furylmetyl] amino}-4pyrimidínyl)amino]metyl}benzyl) -2-furamidu 12.
Príprava N- [3- (aminometyl) benzyl ] -5- [(3,5,5,8,8-pentametyl5,6,7,8-tetrahydro-2-naftyl)metyl] -2-furamidu 11.
K roztoku N-[3-(aminometyl)benzyl]-2,2,2-trifluóracetamidu a 2-furoylchloridu reagencie 8 sa pridá trietylamín. Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti .1 hodinu. Surová zmes sa čistí chromatografiou na silikagéle elúciou hexánom/etylacetátom (4:1 V/V) za vzniku 5-[ (3,5,5,8,8-pentametyl-5, 6, 7, 8-tetrahydro2-naftyl)metyl]-2-furamidu 10. Vyčistená zlúčenina sa rozpustí v metanole (100 ml) a roztoku uhličitanu draselného vo vode (2 M, 100 ml) . Reakcia prebieha pri teplote 70 °C cez noc. Roztok sa ochladí na teplotu miestnosti, pH sa upraví 20% roztokom NaOH na pH 14, extrahuje sa metylénchloridom, premyje sa nasýteným roztokom chloridu sodného a vysuší sa nad síranom horečnatým za vzniku N- [3-(aminometyl)benzyl]-5-[(3, 5, 5, 8, 8-pentametyl5, 6, 7, 8-tetrahydro-2-naftyl)metyl]-2-furamidu 11 (4,97 g, 85,1% výťažok).
Príprava 5-[(3,5,5,8,8-pentametyl-5,6,7,8-tetrahydro-2naftyl)metyl] -N- (3—{ [ (4-{[ (2S)-tetrahydro-2-furylmetyl]amino]-4pyrimidínyl) amino]metyl}benzyl) -2-furamidu 12.
K roztoku N-[3-(aminometyl)benzyl]-5-[(3,5,5,8,8-pentametyl5, 6, 7, 8-tetrahydro-2-naftyl)metyl]-2-furamidu 11 v chlórbenzéne sa pridá 2-chloro-N-[(2S)-tetrahydro-2-furylmetyl]-4pyrimidínamin a trietylamín. Reakčná zmes sa zahrieva pod spätným chladičom cez noc. Ochladená zmes sa potom čistí chromatografiou na silikagéle a následne HPLC za vzniku 5[ (3,5, 5, 8,8-pentametyl-5, 6, 7, 8-tetrahydro-2-naftyl)metyl]-N- (3{ [(4—{[(2S)-tetrahydro-2-furylmetyl]amino}-4-pyrimidínyl) amino]metylJbenzyl)-2-furamidu 12.
ľH NMR (CDC13) δ 1,01 (s, 6H) , 1,25 (s 6H) , 1,43 (m, 1H) ,1,56 (s, 4H) , 1,70-1, 98 (m, 3H) , 2,13(s, 3H) , 3,24 (m, 1H) , 3,63-3,80 (m, 2H), 3,82 (s, 2H), 3, 87-4,06 (m, 1H), 4,37-4, 60 (d,2H),
5,73 (d, 1H) , 5,92 (d, 1H) , 6,3 (brd, 1H) , 6,75 (brd, 1H) ,6,92 (s, 1H) , 6,98 (d, 1H), 7,0 (s, 1H) , 7,09-7, 26 (m, 4H) , 7,4(s,
1H) , 9,5 (brd, 1H) . MS (APCI): 622,3 (M+l).
Príklady zlúčenín obsahujúcich heterocykly
Metylvinylketón ----------►
Chloroform, DIPEA
O
AICI3, CS2, reflux
O'
4-(3-metylfenoxy)-2-butanón:
O
K m-krezolu (4,0 g, 37 mmol a metylvinylketónu (3,2 ml, 37 mmol) v chloroforme (25 ml) sa pridal diizopropyletylamin. Zmes sa zahrieva pod spätným chladičom 16 hodín, nechá sa schladnúť na teplotu miestnosti a odparí sa. Zvyšok obsahuje 50 % produktu a 50% východzej látky. Východzia látka sa odseparuje ako tercbutyldimetylsilyléter. Produkt sa izoluje filtráciou cez silikagél s použitím 50% hexánu/etylacetátu. Výťažok je 4,5 g (68 %). Ako alternatíva k tomuto čisteniu sa reakčná zmes odparí, rozpustí v DMF (0,2 M) a pridá sa 0,5 ekv. imidazolu a 0,5 ekv. tBDMSCl. Reakcia prebieha za stáleho miešania 3 hodiny pri teplote miestnosti a potom sa rozpúšťadlá odstránia vo vákuu. K zvyšku sa pridá 75 ml etylacetátu a 75 ml vody (pomer 1/1). Etylacetátová vrstva sa odseparuje a vysuší nad Na2SO4. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu. Surová látka sa nanesie na sikagél a silylovaný m-krezo,l sa odstráni hexánmi. Produkt sa získa elúciou 5-10 % etylacetátu v hexánoch. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu za vzniku požadovaného produktu.
rH (CDCI3) : 7,15 (t, IH) , 6, 65-6, 80 (m, 2H) , 4,25 (t, 2H) , 2,75 (t, 2H), 2,25 a 2,35 (2s, 3H každý).
2-metyl -4-(3-metylfenoxy)-2-butanol:
O
K roztoku metylbromidu horečnatého v éteri (50 ml), pripraveného z Mg (572 mg, 23,56 mmol) a Mel (3,34 g, 23,56 mmol), sa pridá 4-(3-metylfenoxy)-2-butanón (2,1 g, 11,78 mmol) v 10 ml éteru. Roztok sa mieša 30 minút pri teplote miestnosti a potom sa reakcia ukončí vodou a roztok sa zriedi kyselinou chlorovodíkovou. Organická vrstva sa odseparuje, vysuší sa nad síranom sodným a zfiltruje sa silikagélom za vzniku bezfarebného sirupu 1,91 g (83 %) hmotnostná spektrálna analýza s použitím APCI +ve 177 (m+-0H).
4,4,7-trimetylchromán:
O.
K chloridu hlinitému (1,3 g, 9,79 mmol) v 40 ml sírouhlíku sa pridá 2-metyl-4-(3-metylfenoxy)-2-butanol (1,9 g, 9,79 mmol) v 10 ml sírouhlíku. Zmes sa zahrieva pod spätným chladičom 2 hodiny. Rozpúšťadlá sa odparia, zvyšok sa zriedi 50 ml etylacetátu a 10 ml vody. Organická.vrstva sa odseparuje,’ vysuší sa nad síranom sodným a čistí sa na chromatografickej kolóne za vzniku svetlo žltého sirupu 1,5 g (87 %).
XH (CDC13) : 7,05 (br d, 1H) , 6,87 (dd, 1H) , 6,69 (d, 1H) , 4,20 (t, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,80 (t, 2H) , 1,40 (s, 6H) .
Etyl-5- [ (4,4,7-trimetyl-3,4-dihydro-2H-chromén-6-yl)metyl] -2furoát a etyl-5-[ (4,4,7-trimetyl-3,4-dihydro-2H-chromén-8yl)metyl]-2-furoát:
K chloridu zinočnatému (950 mg, 6,97 mmol) v nitrometáne (20 ml) sa pridá zmes 4,4,7-trimetylchrománu (1,23 g, 6,97 mmol) a etyl-5-chlorometyl-2-furoátu (656 mg, 3,48 mmol) v nitrometáne (15 ml) . Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 16 hodín. Odparí sa do sucha a rozotrie sa v etylacetáte s vodou (1:1, 100 ml). Organická vrstva sa spracuje obvyklým spôsobom a zfiltruje sa s použitím hexánu:etylacetátu (9:1) za vzniku zmesi požadovaných zlúčenín. 1,34 g (46 % chrománu).
N- (2,4,6-trimetoxyfenyl)-5-[(4,4,7-trimetyl-3,4-dihydro-2Hchromén-6-yl)metyl]-2-furamid a N- (2,4,6-trimetoxyfenyl)-5[ (4,4,7-trimetyl-3,4-dihydro-2H-chťomén-8-yl)metyl] -2-furamid:
K zmesi etyl-5-[(4,4,7-trimetyl-3,4-dihydro-2H-chromén-6yl)metyl]-2-furoátu a etyl-5-[(4,4,7-tŕimetyl-3,4-dihydro-2Hchromén-8-yl)metyl]-2-furoátu (1,34 g, 3,74 mmol) v THF-MeOH-H2O (7:5:5, 20 ml) sa pridá monohydrát hydroxidu lítneho (784 mg, 18,7 mmol). Zmes sa mieša 4 hodiny pri teplote miestnosti. Zmes sa odparí do sucha a zriedi sa 30 ml octanu etylnatého a 50 ml vody. Po o.kyslení zriedenou HC1 sa etylacetátová vrstva oddelí, vysuší a odparí za vzniku zmesi odpovedajúcich kyselín, 1,03 g (kvantitatívne) . Kyseliny sa . nemohli oddeliť za použitia chromatografie na kolóne alebo kryštalizácie. K zmesi kyselín (200 mg, 0,66 mmol) v dichlórmetáne (30 ml) sa pridá tionylchlorid (392 mg, 3,3 mmol). Zmes sa zahrieva pod spätným chladičom 1 hodinu a odparí sa. Zvyšok sa rozpustí v hexáne:etylacetáte (9:1, a zfiltruje sa cez silikagélovú zátku (0,5 cm x 1,0 cm).
K zvyšku v 10 ml etylacetátu sa pridal hydrochlorid 2,4,6trimetoxyfenylaminu (145 mg, 0,66 mmol) a následne diizopropyletylamin (256 mg, 1,98 mmol). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 16 hodín. Reakcia sa ukončí vodou (10 ml) a etylacetátová vrstva sa odseparuje. Kombinácia čistenia na kolóne a HPLC poskytne 15 mg a 21 mg požadovaných zložiek (12 %) . Izoméry sa oddelia použitím HPLC chromatografie s reverznou fázou.
Lineárny izomér:
XH (CDC13) : 7,46 (br s, 1H), 7,23 (br s, 1H), 7,14 (br s, 1H), 7,02 (s, 2H) , 6,63 (s, 1H) , 6,15 (s, 2H) , 6,0 (d, 1H) , 4,17 (t, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,81, 3,80 (2s, 3H každý), 2,21 (s, 3H), 1,81 (t, 2H) , 1,29 (s, 6H) . M+ pri 466,2. Angulárny izomér: AXC07302: 7,25 (br s, 1H), 6,91 (d, 1H), 6,88 (d, skrytá, 1H), 6,53 (d, 1H), 5,95 (s, 2H), 5,72 (d, 1H)·, 3,96 (t, 2H) , 3,8 (s, 3H), 3,6 (s, 6H), 2,07 (s, 3H), 1,59 (t, 2H) , 1,11 (s, 6H) . M+ pri 466, 1.
Príklady aromatických zlúčenín
Zlúčenina A
a. je butylacetát, trietylamín
a. : HATU, diizopropyletylamín, DMF, 24 hodín
b. : t-butoxid draselný v 20 % MeOH/DMF, 30 minút
c. : bromačné činidlo, 20 % MeOH/DMG, 48 hodín
Zlúčenina 183
Tymo.l (1,0 ekv., 33,3 mmol) a métyl-5- (chlorometyl) -2-furoát (1,0 ekv., 33,3 mmol) sa rozpustia v nitrometáne (120 ml, 0,2 M). Pod dusíkom sa pridá chlorid hlinitý (1,0 ekv., 33,3 mmol) rozpustený v 25 ml nitrometánu a zmes sa zahrieva pod spätným chladičom počas 10 minút. Zahrievanie sa ukončí a zmes sa nechá pod dusíkom cez noc. Reakcia sa ukončí 100 ml vody a extrahuje sa dichlórmetánom. Surová zmes sa odparí do sucha a nanesie sa na chromatografickú kolónu (pomer 1 g zmesi/100 g silikagelu). Kolóna sa eluuje 7 a 11 % etylacetátom v hexánoch za vzniku požadovaného produktu (2,9 g, 30 %) . Ester sa hydrolyzuje na kyselinu hydroxidom lítnym v THF/MeOH/H2O (35/25/25).
Roztok obsahujúci kyselinu 5-(4-hydroxy-5-izopropyl-2-metylbenzyl)-2-furoovú (1,0 ekv., 3,6 mmol, 0,5 M) a 2, 6-dimetoxyanilin (1,0 ekv., 3,6 mmol) sa rozpustia v DMF. K tejto zmesi sa pridá di-izopropyletylamín (1,0 ekv., 3,6 mmol) a HATU (1,0 ekv., 3,6 mmol) a zmes sa mieša cez noc. Potom sa zahrieva 10 minút na 45 °C. Roztok sa naleje do octanu etylnatého (3-násobný objem) a premyje sa vodou. Organická vrstva sa odparí na sirup a eluuje z chromatografickej kolóny (1:100 g zmesi/g silikagélu) 30 a 50 % etylacetátu v hexáne za vzniku N- (2,6-dimetoxyfenyl)5-(4-hydroxy-5-izopropyl-2-metylbenzyl)-2-furamidu (820 mg, 55% výťažok).
1HNMR (CDCla) : 7,22 ppm (1H, t, J=8,68 Hz), 7,08 ppm (1H, d, J=3,40 Hz), 6,99 ppm (1H, s), 6,64 ppm (2H, d, J=8,68 Hz), 6,61 ppm (1H, s), 5,97 ppm (1H, d, J=3,40 Hz), 3,95 ppm (2H, s), 3,85 ppm (6H, s), 3,17 ppm (1H, pentet, J=6,8 Hz), 2,23 ppm (3H, s), 1, 25 ppm (3H, s) a 1,23 ppm . (3H, s) .
V MeOH (24 μΐ) sa rozpustí terc-butoxid draselný (1,05 ekv., 0,128 mmol). K roztoku furamidu uvedenému vyššie (1,0 ekv., 0,122 mmol, IM) v DMF sa pridá roztok terc-butoxidu a mieša sa 30 minút. Pridá sa 2-brómetylmetyléter (1,0 ekv., 0,122 mmol) v 20 % MeOH (DMF, IM), mieša sa pri teplote miestnosti 48 hodín a čistí sa reverznou HPLC (90 minút 35-75% acetonitril v 0,1% vodnom TFA) za vzniku (8,5 mg, 15% výťážok).
XHNMR (CDCI3) :' 7,04 ppm (1H, J=8,31 Hz, t), 6,85 ppm (1H,
J=3,40, d), 6,80 ppm (1H, s), 6,53 ppm (1H, s), 6,48 (2H, J=8,31
Hz, d), 5,76 (ΪΗ, J=3,40 Hz, d), 3,88 (2H, J=3, 40/4,53 Hz, dd) ,
3,78 (2H, s), 3,58 (6H, s), 3,54 (2H, J=3, 40/4,54 Hz, dd) , 3,20 (3Η, s), 3,07 (1H, J=7,2 Hz, pentet), 2,04 (3H, s), 0,97 (3H,
s) , 0, 95 (3H, s) .
Zlúčenina A
I ( ‘
1,1, 6-trimetyl-l,2,3,4-tetrahydronaftalén sa syntetizuje podľa odkazu: John J. Parlow, Tetrahedron 49 (13) 2577. Potom sa spoji Friedel-Craftsovou reakciou s 5-(chlorometyl)-2-furoátom za vzniku dvoch hlavných regio-izomérov. Požadovaný izomér sa po hydrolýze oddelí tromi až piatymi postupnými rekryštalizáciami
l.
zo systému 10 % acetón/heptán (lg/lOml). Kyselina sa prevedie na chlorid tionylchloridom postupom uvedeným vyššie.
K roztoku 5-[(3, 8,8-trimetyl-5, 6, 7, 8-tetrahydro-2-naftyl) metyl]-2-furoyl chloridu (1,0 ekv., 0,32 mmol, 0,2 M) v 2 ml etylacetátu sa pridá 2,4,4 trimetoxyanilínová mono soľ HCL (1,0 ekv., 0,32 mmol). K tejto zmesi sa pridá trietylamín (nadbytok) a mieša sa cez noc. Surový produkt sa suší vo vákuu a čistí sa na chromatografickej kolóne (1:100 produkt:silikagél) elúciou 20 a 30 percentným· roztokom etylacetát/hexány. ,V niektorých prípadoch sa regio-izoméry separujú rekryštalizáciou z 25 % roztoku etylacetát/hexány (1 g/75 ml zlúčeniny/objem) za vzniku N- (2,4,6-trimetoxyfenyl)-5-[(3,8,8-trimetyl-5, 6, 7, 8-tetrahydro2-naftyl)metyl]-2-furamidu (120 mg, 82 % výťažnosť).
^NMR (CDC13) : 7,28 ppm (1H, br), :7,12 (1H, s), 7,08 (1H,
J=3,40 Hz, d), 6,89 (lH,s), 6,19 (2H, s), 6,00 (1H, J=3,40 Hz,
d), 3,97 (2H, s), 3,83 (3H, s), 3,82 (6H, s), 2,73 (2H, J=6,05
Hz, t), 2,25 (3H, s), 1,84-1,76(2H, múltiplet), 1,69-1,63 (2H, multiplet), 1,59 (3H, s), 1,26 (6H, s); prvky: očakávané
C(72,55), H(7,18), N(3,02); v skutočnosti C (72, 67), H)7,22),
N(2,98) .
Zlúčenina 228
III
IV
. Zlúčenina II. K roztoku 3,5-dimetoxyanilínu (zlúčenina I, 1,53 g, 10 mmol) v DCM (20 ml) sa pridá metánsulfonylchlorid (0,88 ml, 10 mmol) a po kvapkách TEA (1,40 ml, 10 ,mmol) . Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 15 hodín. Surový produkt sa vysuší a vyčistí rýchlou chromatografiou (30 % etylacetát/hexány) za vzniku zlúčeniny II (2,10 g, 91 %) ako bielej pevnej látky.
NMR Ô (300Hz, CDC13) . 2,96(s, 3H) , 3,71 (s, 6H) , 6,20 (d, 1H, J=3 Hz), 6,34 (d, 2H, J=3 Hz), 6,76 (s, 1H) . APCI-MS m/z 232 (M+H)+.
Zlúčenina III. K roztoku (CH3)4NN03 (1,12 g, 7,89 mmol) v DCM (10 ml) sa po kvapkách pridá triflic anhydrid (anhydrid kyseliny ťrifluórmetánsulfónovej) . Reakčná zmes sa mieša pri O °C 1,5 hodiny. Do deličky sa vloží zlúčenina II (1,75 g, 7,51 mmol) v 10 ml DCM a roztok sa pridá k reakčnej zmesi nitrónium triflát pri -78 °C. Na tejto teplote sa zmes udržuje 30 minút a postupne sa ohrieva na teplotu miestnosti. Žatým sa mieša 15 hodín. Reakcia sa ukončí 5 % NaHCO3 (50 ml) a zmes sa mieša ďalších 30 minút. Vodná vrstva sa extrahuje DCM (3x20 ml). Kombinovaná DCM vrstva sa vysuší nad Na2SO4. Produkt sa vyčistí HPLC za vzniku zlúčeniny III (250 mg, 11%) ako bielej pevnej látky.
ςΗ NMR δ (300Hz, CDC13) 3,03 (s, 3H) , 3,87 (s, 3H) , 3,90 (s, 3H) , 6,32 (d, 1H, J=3Hz) , 6,88 (d, 1H, J=3Hz) , 8,31 (s, 1H) . APCI-MS m/z 275 (M-H)”.
Zlúčenina IV. K roztoku zlúčeniny III (106 mg, 0,38 mmol) v EtOH (2 ml) sa pridá 20 mg Pd/C a NH2NH2 (1 ml) . Reakčná zmes sa zahrieva pod spätným chladičom 9 hodín a preleje sa cez celitovú ucpávku. Roztok sa vysuší za vzniku hnedej pevnej zlúčeniny IV (90 mg, 95 %) . Tato zlúčenina sa použila ihneď pre ďalší krok.
Zlúčenina 228
K roztoku zlúčeniny IV (39 mg, 0,16 mmol) v DCM (1 ml) a 5[ (3,5,5,8,8-pentametyl-5,6,7,8-tetrahydro-2-naftalenyl]-2-furoyl chloridu (60 mg, 0,174 mmol) v DCM (1 ml) sa pridá TEA (44 μΐ,
0,31 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti cez noc. Rýchla chromátografia (30 % etylacetát/hexány) poskytne zlúčeninu 228 (65 mg, 74 %) ako bielu pevnú látku.
NMR δ (300Hz, CDC13) 1,04 (m, 12H) , 1,45 (m, 4H) , 2,09 (s,
3H) , 2,71(s, 3H), 3,60 (s, 3H) , 3,63 (s, 3H) , 3,78 (s, 2H) , 5,89
(d, 1H, J=3Hz), 6,17 (d, 1H, J=3Hz) , 6, 58 (d, 1H, J=3Hz) 6,85
(s, 1H), 6, 90 (s, 1H, J=3Hz), 7,90 (s, 1H) , 6,96 (d, 1H, J=3Hz),
7,90 (s, 1H) , 8,24 (s, 1H) . APCI-MS m/z 556 (M+H) + .
Ďalšie príklady (NMR) niektorých zlúčenín
Zlúčenina 20
XH NMR δ (300Hz, CDCI3) 1,26 (m, 12H), 1, 66 1 (m, 4H), 2,28 (s
3H) , 3,82 (s, 6H) , 3,96 (s, 2H), 6,04 (d, 1H, J=6Hz), 6, 60 (s
1H) , 6, 62 • (s, 1H) , 7,05 (m, 3H), 7,23 (t, 1H, J=6Hz), 7,44 (s
1H). APCI-MS m/z 462 (M+H)+.
Zlúčenina 126 ]H NMR δ (300Hz, DMSO) 2,20 (s, 3H) , 2,27 (s, 6H) , 3,71 (s, 6H) , 3,98 (s, 2H), 5,93 (d, 1H, J=3Hz) , 6,68 (s, 1H) , 6,69 (s, 1H) , 6,86 (d, 2H, J=3Hz) , 7,10 (d, 1H, J=3Hz),· 7,23 (t, 1H, J=7Hz),
9,04 (s, 1H). APCI-MS m/z 379 (M+H)+.
Zlúčenina 140 ΤΗ NMR δ (300Hz, DMSO) 2,28 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,42 (s, 3H) ,
3,72 (s, 6H) , 4,10 (s, 2H) , 6,00 (d, 1H, J=3Hz) , 6,60 (s, 1H) ,
6,68 (s, 1H) , 6,71 (s, 1H) , 7,10 (m, 2H) , 7,24 (t, 1H, J=6Hz),
9,04 (s, 1H). APCI-MS m/z 458 (M+H)+.
Zlúčenina 211 3H NMR δ (300Hz, CDC13) 3,76-3,83 (m, 15H) , 4,07 (s, 2H) , 5,95 (d, 1H, J=3Hz), 6,60 (s, 1H) , 6, 57-6, 62 (m, 3H) , 6,78 (d, 1H,
J=9Hz) , 7,03 (d, 1H, J=3Hz) , 7,09 (t, 1H, J=6Hz) , 7,46 (s, 1H) . APCI-MS m/z 428 (M+H)+.
Zlúčenina 220 XH NMR δ (300Hz, CDCI3) 3,72-3,77 (m, 15H) , 3,90 (s, 2H) , 5,78 (d, 1H, J=3Hz) , 6,08 (s, 2H),' 6,52-6,55 (m, 2H) , 6,94 (d, 1H, J=9Hz) , 7,12 (t, 1H, J=9Hz) , 7,39 (s, 1H, ) . APCI-MS m/z 428 (M+H)+.
Zlúčenina 226 ΤΗ NMR δ (300Hz, CD3OD) 2,33-2, 48 (m, 12H) , 3,84 (s, 6H) , 4,19 (s, 2H) , 5,81 (d, 1H, J=3Hz) , 6,73 (d, 2H, J=9Hz) , 7,06 (d, 1H,
J=3Hz), 7,29 (t, 1H,J=9Hz). APCI-MS m/z 472 (M+H)+.
Zlúčenina 231 ľH NMR Ô (300Hz, CDCI3) 0,67 (t, 3H, J=6Hz) , 1,27 (m, 6H) , 1,70 (m, 2H), 3,62 (s, .3H), 3, 80-3, 83 (m, 6H) , 4,02 (s, 2H) , 6,02 (d, 1H, J=3Hz) , 6,60 (d, 2H, J=9Hz) , 6,83 (d, 1H, J=3Hz) , 7,07-7,19 (m, 4H), 7,43 (s, 1H). APCI-MS m/z 438 (M+H)+.
Zlúčenina 232 3Η NMR δ (300Hz, CDC13) 0,66 (t, 3H, J=6Hz) , 1,23 (m, 6H) , 1,541,62 (m, 2H) , 3,80-3,81 (m, 12H) , 4,01 (s, 2H) , 6,00 (d, 1H,
J=3Hz), 6,81 (d, 2H, J=9Hz) , 6,82 (d, 1H, J=3Hz), 7,06-7,28 (m,
4H), 7,43 (s, 1H). APCI-MS m/z 468 (M+H)+.
Príklady ďalších zlúčenín obsahujúcich aromáty
Syntéza 5-(5-cyklohexyl-2-metylbenzyl)-N-(2,4,6-trimetoxyfenyl)2-furamidu.
K zmesi zlúčeniny 1 (5,0 g, 20,3 mmol) a metyl furoátu (3,5 g, 20,3 mmol) v 100 ml nitrometánu sa pridá pri teplote miestnosti roztok A1C13 (5,4 g, 40,3 mmol) v CH3NO2 (50 ml). Roztok sa zahrieva na 70-75 °C cez noc. Tmavo hnedá zmes sa ochladí na teplotu miestnosti, pomaly sa naleje do 300 ml ladovej vody a extrahuje etylacetátom. Koncentrovaná organická vrstva sa čistí chromatografiou na silikagéle a eluuje hexánom/etylacetátom (15:1 až 9:1 V/V) za vzniku 920 mg zlúčeniny 2, ktorá, sa následne hydrolyzovala a párovala s trimetoxyanilínom podía obecného postupu, aby sa získal dobrý výťažok.
3H NMR (CDCI3) : Ô 1,23-1, 48 (m, 5H) , 1,73-1, 86 (m, 5H) , 2,31 (s, 3H) , 2,51 (m, 1H) , 3,83 (s, 1H) , 4,02 (s, 2H) , 6,03 (s, 1H) ,
7,44 (s, 1H) . MS (APCI) : '464,2 (M+1)/'
100
Ο
101
Syntéza 5- (5-acetyl-2,4-dimetylbenzyl) -N- (2,4,6-trimetoxyfenyl) 2-furamidu.
Zmes zlúčeniny 3 (14 g, 94,4 mmol), metyl furoátu (16,4 g,
94,4 mmol) a A1C13 (25 g, 198 mmol) v 200 ml nitrometánu sa mieša pri 80 °C cez noc. Zmes sa čistí na kolóne so silikagélom, elúcia hexánom/etylacetátom (9:1 V/V) za vzniku zmesi zlúčenín 4 a 5 (3:1, celkom 16,2 g).
Zmes zlúčenín 4 a 5 (2,0 g) sa hydrolyzovala v 2 N NaOH/MeOH (1:1, V/V) pri teplote miestnosti za vzniku zmesi zlúčenín 6 a 7, ktorá sa rekryštalizovala z acetónu a heptánu za vzniku 6 (460 mg) .
Zmes 6 (150 mg, 0,55 mmol) sa spracovala tionylchloridom a párovala sa s trimetoxyanilínom za vzniku AXCO7485 (124 mg).
3H NMR (CDC13) : δ 2,31 (s, 3H) , 2,50 (s, 3H) , 2,54 (s, 3H) , 3,80 (s, 9H), 4,02 (s, 2H) , 6,00 (d, lh) , 6,16 (s, 2h) 7,08 (s, 1H) , 7,35 (s, 1H) , 7,52 (s, 1H) , MS (APCI) : 464,2 (M+1).
102
Syntéza 5- (5-izopropenyl-2,4-dimetylbenzyl) -N- (2,4,6-trimetoxyfenyl)-2-furamidu.
K roztoku zlúčeniny 6 (250 mg,. 0,92 mmol) v 5 ml suchého THF sa pri 0 °C pod N2 pridá metyllítium (1,4 M v hexánoch, 3 ekv.). Roztok sa mieša pri 0 °C 3 hodiny, reakcia sa ukončí vodou a extrakciou s etylacetátom. Organická vrstva sa vysuší nad síranom horečnatým a koncentruje sa za zníženého tlaku. Surová zlúčenina sa spracuje SOC12 a páruje sa s trimetoxyanilínom za vzniku AXC07499 (36 mg).
XH NMR (CDC13) : δ 1,80 (s, 3h) , 2,11 (s, 3h0), 3,59 (s, 9H), 3,75 (s, 2H), 4,60 (d, 1H) , 4,95 (d, 1H) , 5,81 (d, 1H) , 5,95 (s, 2H), 6,71 (s, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,89 (d, 1H) , 7,18 (s, 1H). MS (APCI): 436,2 (M+1).
103
Syntéza 5- [ (4,6-dimetyl [1, ľ-bifenyl] -3-yl)metyl] -N- (2,4,6-trimetoxyfenyl) -2-furamidu.
Uskutoční sa Friedel-Craftsova reakcia so zlúčeninou 9 (10 g, 57,3 mmol), metylfuroátom (12,7 g, 68,7 mmol) a A1C13 (9,1 g, 68,7 mmol) v nitrometáne pri 80 °C po dobu dvoch hodín. Roztok sa naleje do 200 ml ladovej vody a extrahuje sa etylacetátom. Organická vrstva sa zakonCentruje a vyčisti na silikagélovej kolóne elúciou hexánóm/etylacetátom (9 : 1 V/V) za vzniku izomérov 10 a 11 (15,5 g) v pomere 2:1.
104
Zmes sa hydrolyzuje v 2 N NaÔH/MeOH (1:1 V/V) za vzniku zmesi analogických kyselín.
Zmes kyselín (2,3 g, 7,4 mmol), kyselina fenylboritá (1,1 g, 8,9 mmol), [P(Ph)3]4Pd a uhličitan draselný (2 N, 11 ml) v DMF (20 ml) sa zahrieva na 80 °C cez noc. Po odstránení vodnej fáze sa zvyšok premyje na silikagélovej kolóne elúciou zmesí rozpúšťadiel hexán/etylacetát/kyselina octová (7:3:1 V/V/V) za vzniku zmesi 2 izomérov, ktorá ša rekryštalizuje z hexánu a etylacetátu za vzniku 12. (610 mg) . Zlúčenina 12 sa spáruje štandardným spôsobom s trimetoxyanilínom za vzniku AXC07468 s dobrým výťažkom.
XH NMR (CDCls) : δ 2,24 (d, 3H) , 2,33 (d, 3H) , 3,82 (s, 6H) ,
3,84 (s, 3H) , 4,02 (s, 2H), 6,03 (d, 1H) , 6,18 (s, 2H) , 7,06 (s, 2H), 7,02 (s, 1H), 7,29-7,40 (m, 5H). MS (APCI): 472,1 (M+1).
105
Syntéza 5-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-2,4-dimetoxybenzyl]-N(2,4,6-trimetoxyfenyl)-2-furamidu.
O
AICI3, CH2CI2, rt
Zlúčenina 15 sa pripraví vo dvoch krokoch Friedel-Craftsovou reakciou (viď obecný postup) zo zlúčeniny 13 s priemerným výťažkom a dobrou selektivitou izomérov.
Zlúčenina 15 sa hydrolyzuje a spáruje s trimetoxyanilínom za vzniku požadovanej zlúčeniny.
2H NMR (CDCI3) : δ 1,18 (s, 9H) , 3,79 (s, 3H) , 3,81 (s, 6H) ,
3,85 (s, 6H) , 3, 93 (s, 2H) , 6,03 (d, IH) , 6,15 (s, 2H) , 6,45 (s,
IH) , 6,86 (s, IH) , 7,11 (s, IH) , 7,40 (s, IH) . MS (APCI): 512,1 (M+1).
106
Syntéza 5-[(3,5,5,8,8-pentametyl-5,6,7,8-tetrahydro-2naftyl) karbonyl ] -N- (2,4,6-trimetoxyfenyl) -2-furamidu a 5- [hydroxy (3,5,5,8,8-pentametyl-5,6,7,8-tetrahydro-2naftyl)metyl] -N- (2,4,6-trimetoxyfenyl) -2-furamidu.
Zmes zlúčeniny 19 (9,0 g, 27,5 mmol) a MnO4 (8,2 g, 82,7 mmol) v zmesi rozpúšťadiel chloroformu a dichlóretánu sa zahrieva na 70 °C cez noc. Po oddelení vodnej fáze sa zlúčenina 20 čistí na kolóne silikagélu a eluuje hexánom/etylacetátom/kyselinou octovou (90 :10 :1 V/V/V) . AXC07042 sa získa obecným postupom pre tvorbu amidovej väzby.
ľH NMR (CDC13) : δ 1,26-1,31 (2s, 12H) , 1,70 (s, 4H) , 3,81 (s,
6H) , 3,83 (s, 3H) , 6,18 (s, 2H) , 7,05 (d, 1H) , 7,22 (s, 1H) ,
107
7,29 (d, IH), 7,52 (s, IH) , 7,68 (s, (M+l) .
IH) . MS (APCI): 506,2
Zlúčenina (50 mg) sa spracovala NaBH4 (1,5 ekv.) v etanole (2 ml) a dietylétere (0,5 ml).
Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 1,5 hodiny, reakcia sa ukončí vodou a extrahuje sa etylacetátom. Organická vrstva sa koncentruje za vzniku
zlúčeniny ako bielej pevnej látky.
NMR (CDCla) : δ 1,24, 1, 28, 1, 29 (3s, 12H), 1,66, 1, 67 (2s,
4H) , 2,29 (s, 3H), 2,55 (d, IH), 3,80 (s, 6H) , 3,82 (s, 3H) ,
5,98 (d, IH) , 6,17 (s, 2H), 7,08, 7,10 (2s, 2H), 7,38 (s, IH) ,
7,41 (s, IH). MS (APCI): 508,2 (M+l).
108
Syntéza 5— (5 —{1— [ (etylamino) karbonyl ] cyklopropyl} -2-metylbenzyl] -N- (2,4,6-trimetoxyfenyl) -2-furamidu.
1) . SOCI2
-----►
2) . NH2Et
Roztok (2,0 g,
11,3 mmol) v
tionylchloride sa zahrieva pod spätným chladičom minúty.
Nezreagovaný tionylchlorid sa odstráni na rotačnej odparke. Zakoncentrovaný zvyšok sa rozpusti v CH2C12.
K tomuto roztoku sa pridá etylamín (nadbytok) za vzniku zlúčeniny 23 (1,3 troch krokoch
g) . Tato zlúčenina sa prevedie na AXC07555 v (Friedel-Craftsovou reakciou, hydrolýzou a amidáciou), ako je opísané v obecných postupoch.
NMR (CDCI3) :
δ 0,94-1,02 (m,
5H),
1,59 (m, 2H), 2,34 (s,
1H) ,
6, 01 (d, 1H),
6,17
7,11 (d, 1H) , 7,21 (m, 2H) ,
7,31
1H). MS (APCI):
493,2 (M+l).
3H) ,
3,17 (q, 2h),
3, 80,
3,81 (2s,
9H),
4,01 (s, 2H) , 5,39 (brd,
109
Ďalšie príklady:
110
NaOH
THF*
DIPEA HATU DMF ---►
Vhodné medziprodukty sa môžu pripraviť následovne:
Príprava metyl-5-(chlorometyl)-2-furoátu
> 99%
37% v HZO
111
Požadované materiály
Materiál Kone. Mol. hmôt. Množstvo Počet mol. Počet ekv. Hustota CAS
Metyl-2-furoát 97% 126,11 0,371 kg 2,88 1 1,179 ' [611-13-2]
Formaldehyd (aq) 37% 30,03 0,371 L 4,95 1,72 1,083 [50-00-0]
HC1 37% 36,46 2,2 L 22,3 7,74 1,19 [7647-01-0]
H2SO4 95-98% 98,08 1,1 L 11 3,82 1,84 [7664-93-9]
Dichlórmetán Činidlo 84,93 2,2 L - - 1,325 [75-09-2]
ZnCl2 98% 136,28 0,520 kg 3,7 1,3 - [7646-85-7]
Dichlórmetán Činidlo 84,93 ******l - - 1,325 [75-09-2]
NaHCO3(aq) Nasýtený - - - - [144-55-8]
Silikagél - - 0,600 kg - - -
Na2SC>4 98% - Podľa potreby - - - [7757-82-6]
Detailný postup pre dávku metyl-5-(chloro-metyl)-2-furoátu (2) v rozsahu 2,88 Mol.
o 12 1 trojhrdlová banka (e.b.) sa vybaví dodatočným dávkovacím lievikom; elektrickým miešadlom, termočlánkom a ladovým kúpeľom; (doporučuje sa aj dusíkový kryt, ale ten nemusí byť potrebný).
o Do (e.b) sa nadávkuje 2,2 1 DCM a následne 2,2 1 koncentrovanej HC1; (nie je pozorovaná žiadna významná exotermická reakcia; vytvoria sa dve vrstvy) o Začína sa miešať; (zaistí sa adekvátne miešanie obidvoch fáz) o Nadávkuje sa 1,1 1 H2SO4 do dávkovacieho lieviku, pokiaľ to veľkosť dovolí. Reaktor sa ochladí na 0-10 °C. Začína sa pridávať kyselina sírová spočiatku po kvapkách dokiaľ sa neukludní exotermická reakcia (približne 1/2 dávky) a žatým sa zvyšuje pridávané množstvo až do tenkého pramienku, (teplota sa z bezpečnostných dôvodov udržuje pod 20 °C)
112 o Náplň v chladiacom kúpeli sa vymení za vodu s teplotou miestnosti (bude fungovať ako zberač tepla pre nasledujúcu reakciu bez jej výrazného spomalenia) o Nadávkuje sa (do e.b.) naraz 0,371 kg metyl 2-furoátu. (žiadna významná exote.rmická reakcia, zelenohnedý roztok) o Dávkuje sa postupne 0,520 kg ZnC12- (objavujú sa bublinky pravdepodobne plynný HC1; exotermická reakcia kontrolovaná vodným kúpeľom) o Dávkuje sa 0,371 1 formaldehydu do vymytého dávkovacieho lieviku. Pridáva sa po dobu viac ako 2,5 - 3,5 hodiny, (teplota sa udržuje na teplote miestnosti vodným kúpeľom; pomalé pridávanie spôsobuje menšiu polymeráciu „voľného formaldehydu) o Mieša sa cez noc pri teplote miestnosti o Keď TLC indikuje koniec reakcie (viď nižšie) odpustí sa vodná vrstva. Organická vrstva sa zfiltruje cez 0,550 kg kremennej vrstvy (vysušená, asi 10 cm silná). Eluuje sa približne 4 1 DCM až TLC neindikuje žiadny vychádzajúci produkt (je treba sa uistiť, že tento krok prebieha pri riadnej ventilácii, pretože i vo filtráte môžu byť pary kyseliny) o Koncentruje sa za vzniku oleja zafarbeného v rozpätí od žltej po hnedú (približne 0,5 1) o Dávkuje sa rovnaké množstvo DCM, asi 0,5 1. Premyje sa 2 x 0,2 1 destilovanej vody. Potom sa organická vrstva premyje roztokom 0,05 1 nasýteného roztoku NaHCO3 v 0,15 1 destilovanej vode (zaistiť pH 7-10., žiadne významné straty vo vodnej vrstve) o Odpustí sa vodná vrstva a organická vrstva sa vysuší
Na2SO4. Filtruje sa cez kremenný filter (0,05 kg, asi 5 cm silný) . Eluuje sa DCM až do okamžiku, keď nevychádza žiadny produkt. Koncentruje sa na rotačnej odparovačke za tlaku okoliá. Potom sa olej umiestni cez noc do vysoko výkonnej vákuovej pumpy (žltý až svetlo hnedý olej)
113
Výťažok: 95-100%
Stupeň čistoty: 95-98% (HPLC A%)
Ďalšie poznámky
Optika: Reakcia je sledovaná TLC. (254 nm) s použitím 30% EtOAc/hexány (r.f. východzieho materiálu - 0,52, r.f. produktu 0,40) .
HPLC: Postup TFA (postup a spektrá sú pripojené). Retenčný čas (rt) východzieho materiálu ~ 12,67 min., rt produktu = 17,37 min.
NMR: XH (CDCI3) (spektrá pripojené) 3,93 (s, 3H), 4,63 (s, 2H), 6,52 (d. IH), 7,18 (d, IH).
Pokiaľ sa reakciu nedarí ukončiť, môže sa každé štyri hodiny pridať 10 % pôvodného objemu formaldehydu. Účinky teploty neboli študované v širšom rozsahu, ale je vhodné udržovať teploty v rozmedzí určenom pre každý krok. Pary kyselín obsiahnuté v organickej vrstve aj po filtrácii môžu spôsobiť problémy pri manipulácii mimo digestor, preto musí byť venovaná pozornosť pri prenášaní látok mimo digestor až do neutralizácie pH. Pokiaľ sa zvyšuje pomer pridaného formaldehydu, môže polymerizácia brániť dokončeniu reakcie tým, že sa spotrebováva formaldehyd. Pred začiatkom procesu sa musia prijať bezpečnostné opatrenia, aby sa umožnilo zberať veľké objemy kyseliny obsiahnuté vo vodnej vrstve. Neutralizácie kyseliny vo vodnej vrstve sa nedoporučujú, lebo vyžadujú veľké objemy zásad, uvoľňuje sa značné množstvo tepla a vyžadujú dlhý čas. Finálny produkt by sa mal udržiavať v chlade, pretože nie sú k dispozícii žiadne údaje o jeho stabilite. Skladovanie produktu v Nalgenovom kontajneri pri -20 °C spôsobuje kryštalizáciu produktu a jeho mierne tmavnutie, ale zdá sa že nemá žiadny vplyv na ďalšie reakcie z tohto materiálu.
Zlúčeniny podľa tohoto vynálezu môžu byť vhodné pre liečbu:
1. na hormónoch závislých karcinómov a tumorov
114
2. na priamom pôsobení hormónov nezávislých karcinómov a tumorov
3. pri pôsobení iných mechanizmov
Je zrejmé, že predložený vynález zahrnuje rad ďalších uskutočnení, ktoré sa tu nešpecifikujú, preto by sa tieto prednostné uskutočnenia nemali brať ako obmedzujúce vyššie uvedenými príkladmi.
Nasledujúce zlúčeniny sa vyrobili spôsobmi diskutovanými vyššie. Niektoré vlastnosti niektorých zlúčenín sa tiež merali vyššie diskutovanými technikami. S%R je zvyškový substrát. Čím je S%R bližšie k nule, tým’viac sa inhibičný účinok blíži 100 %.
115
Funkcia GnRH Antagonista Antagonista Antagonista . Antagonista .Antagonista
o o o o o; o O
X- O o o m o o o
o v CN LO
CN r— r“ CN
o
ΰ
E
o o o O o· o o o
CO o sr co LD
o CO LO CO hs
o i
o 00 O o o o o
o ’q* CN CO *o
CO m CO] CO r^. co
'«S* CO r— CO CN
bGnRHIC50
o o o
CN T uo
s O LD iO
jl ✓-x /-\ /*> o!
o o o ' ô o
NT CM eoi NT
o o o! o
CN CO O* CN
CM »— - CN!
štruktúra 3-, t! — O-C °-G ' * <?Ί y=J
o o o < \_/ xx S < <_/ /V./x
s Ä & >8c & >cx
>ó
«3
c
c
(U
><J
N o y— Ύ~ CN CO *3·
cn t- CN V CN CN CN
116
• 1 1-------------------------------------------------------------------------------------------------- Antagonista
950 ο οο r*
260 ο οο ο 00
ο •‘σ ο Ο ο ’Τ ο
ο V ο ο ο ο λ ο ο ο ο 7 ο $ ο ΙΟ J2 ο oo ο U5 • ο <Ν ο οΟ <Ν 5
f f Λ Q X J< <? \7 >C
25 CD ΟΙ h* OJ οο οι σ> OJ ο CO m ό CO OJ τ—
117
118
830 o o q- 280 o 3
o CM CM o o 330
CM
o -q O o o CO §
CM t“ •q·
7800 370 190 530| o «ςχ o * to O s-z CO o
g 130'
ď § 320C
r o 7
[ ž e -S ď t \==/ 8
Q=Z 4 OssZ o=z o—/
< ŕ X=J \=J c
& K7 ~4 <> \7 ť? >=/ „ z\_v\ 1 <7 M
LO m
h* CO CO CO CO CO O) CO O 5 CM CO
119
120
'
ο ο n o o
ο Ό O CN o·
X Ό o CM CN
ο Ο o O o
CN Γ*** rx o
CM CM lO
ο Ο O o O
CQ Ο CO o CO
Ο ο O i o o
CN CN v
Ο ο o o o i o Q o
m 00 UJ 00 o rv O CO
CN CN o CN ΙΌ /
Λ—\ -<5 ď Λ
0- < > /“X -IX c Ύ-σ Cy
o- xu y—s
0= c c 0= \=η cQ / Oe c o= í r Oxc Q
K? >b< <7 x_Z o \7 < / \S <7 <7
OJ CO xŕ m ir> <o CD
ιη ΙΩ LO in m in
121
122
Antagonista (potkan)
o CM ^r CO 0L01
IO s 1160 068
O CO 380 — ”
co 2500 LO CM 710 3500 o o
Ο
'Ä
Q-** C? x' 1 3 > ~°\
Ä 1b o \<\Z /\ /x <7
οι CD 1 1 o 1 Od CO CO CD ΙΌ CD <o CO bco CO CD
123
1 Antagonista (potkan) L
o m o. o
CO v
CM
o s o o o
ÍŇ 1 s
o
v
o o o o o O io! o
LO o o 00 1/Λ · 001 00
CM **/
r •
í j o·/ K Or Cl·0 C- 1 í C· F
J1 x s. x 1 )-1 f 7 < < f “4 ' K7 <7
p- A v y* y x z
CD o OJ CO CO m CO
<0 r- r*· b* b- b* b*
124
•
8450 1300 370 5Ó10 8080 1 9200 o ^r Γ-. o rx hx
000( ο ο ο ο ν ο ο 250 0000 L ο ο ο CXI 0000 L 620 o § CO
ο=/ ο Λ ζ.„ e 0=/ Í
q. ο=Ζ ζ* *ω ί C o= Λ ''‘Z
\7 ζ~λ Κ7 ~\=/' —ä ~\7 Ä <7 \ Zx r/y,
b- CO Γ' σ> ο C0 S . C\J CO CO 00 Tľ CO
125
>10000 O Ĺô 2050 3310
12000 s o 00 2570 270
ď o»/ °*K vx· e
m 00 (O CO 86.5 1 i co 1
Γ o
o
O o ô1 o
ST CO o LO
CO fs. CM O
CM 04 -
o o o o
o LQ *2 CN
o CN u5
U. .O _ 0
u._Z-“· 2-41
r /—\ .—/
Q
0=/ Q«V ΰ 0=/
< / o / o
s\ Z\ s. ? X. S s\ zx K7
! 00 cn o
1 CO CO cn σ>
126
i .
CM sr ;1300 CN o co
o o o o n o o
CM r* o CO m 00 O o o
2
<
80 O IO o o 1700
80C CQ o 00
8
o
v
o
e. 00l<
& Q? < 1 Ä-
$ ! í ζ t oc t
8 Oa/ Ô
\S I >—J H >-v í t \7 A / \7 Á
i i 1 1 CM ' í 1 l f 1 in }
CM CO 1 Í xT m (D r-
CD 0) 1 σ> 1 o σ> CD O) CD
127
• _ 1 i i
ID o
OJ
o OJ 108 ooc o Fx s 9 o o io
Ό 00001 o • '
Λ
ΐ '
o CO S 585 1180 o o n (00001 OJ Ol •
v
o
o! o
o n A IL
7 0 j-y u—Z-14· 5“°
/ /7 o«^
°K 0 o 8 °=< >—j o \ 1
& * c . i Z . \ / XX /\ z\ X/( o ΧΞΧ
o T“ OJ co Tŕ 1 m
o CD Y“ Y“ T“
128
*
ο
ST
ο ο ο ο Ο Ο
·— V co ο
b> r— Ο» CO
OJ
ο ο
ο ο §
ο ο
r—
Λ Λ
•
ο ο ιθ ο ο ο Ο
ο ο rv ο C0 ο
ο ο ο ο ο <Ό
CM r*· CN CXI
Ο
Ο
S
7 α £
χ/“ζ
U. ί
ο Α .e 0—/ °ί
Μ Ä ο ><>< Á
(0 b. CO ο> ο OJ CO
Ο ο ο ο
T“ Ύ—· Ύ~
129
— —
οοοζ I 1 1 | 5130 390 3000 Ο CO ST - 1300 . ο Ο ο Ο Λ
ÍOOOO 0009 Ο Γ**· °-b·“· 1810 380 12000 >10000 0011
ο—/ δ * ζ 1 \_y 1 δ
115 116 r- 00 119 Ο CM cy -r-
130
_ 1 1 1 1 i i i
o m o • oj 04
CO O
1260 750 o S • 016 170 o o CO
325’
730 1 ο r*4 LO 1000 10 m * o ĹÔ 220 12000
y CO OJ r~ f
Υ> L δ s_ \<·ιδ \ι ο=/ -ď _Äď On/ é >V-O O C \ - J >”
y —<7 Sb y >G
122 123 124 125 126 127 128 129
131
Antagonista Antagonista
cn 'P CO o o CO
069 <o vr § v
3000 009 o 3 o o o ď §
1 / i P P
$ > L rt T c
Ä K7 M <7 Ä y A Ä
130 cn T*“ CXJ cn CO cn cn T“ ID cn CO cn r* cn
132
ο o o
lO CN o
ΙΟ r— CO
Ο CO o m
3 8 CO
ο o o o o O Q
ο r— lO rx CO O
CM r— r~ R* CO CN CN
1 I
Q í 0
8 t> % 8 < <
C 0_7 P p P
p ci f ΖΣ v \ϊ Oe/1
x Q JR 8 o 8 o
>o< >O< >8< Kľx >o< >o< xľx
co cn o Ί“ CM CO m
CO co M M· M xr 'M' xr
T“ T· r- T“ ▼· T“ *“
133
ΙΌ co CO CN ,— o
ui CN CO
CO Ο co CN -- CN
rl CN
Ο CN o o CO o ô O
Ο o co O o CN ΙΌ
CO
Ο
§ Ž ž U x X P V V
Λ ρ P č Q r^o j 2 ςχ
€ c % / ς£ Q /
£> p> ť P b P
V ó Ch—ŕ o·^ \cx 'xx ^CE
Al p P Ρί °7$-| O-P “b
& Ä Ä & Ä Ä Á Ä Ä
(Ο h- ao CD o v· CXJ CO
τΐ* Tŕ ΙΌ m m m in
T“ *“ T— t— ’T“
134
400 •o
. i 270 io •
Ο OJ OJ 620 1090 s 390 300
§ O o ’Ä
ž_y O k .2y 1 9Č >«/ k
Ä \7 S Ä Ä M K7 Ä
155 156 157 158 159 160 S T“ OJ CO r-
135
Antagonista
130 m 22
o γ*- o CO
' v>
ο ο ο r** 260 o <T O co OJ 50
. I Γ>> '
τ—1 Z
ΌΟγξλ Ο ď ο=/ 0—< FA 9/ Or N_ď y >-\
Ä \=/ . \7 <7 ' 0— 7
co ď) ω C0 1^- CO O) o
T- τ—
136
Antagonista
570 sr cp r< •
385 CO 5.7
140 o o o o 0 04 3 7.4 U? 00
CO OJ
8 8 ľ >10000 i e B δ <]
-¾ \>_r O— é δ o. O^r-o J“ 1 <=
Ä X Á K7 Á & M <7 7
OJ CO •Xŕ in (O r- CO
T“ T“
137
Antagonista
2.7 o Γ-Χ CM
LO CM 250
ο ο Ο tn ο ο ο 6.8 o o o CM o
Ο ο y dL ’x ZI o=Z
Q °ί \ 0— Έ 0^ /
Ä \7 >& Q >8 1 -Q—
ο ľ*» Ο T“ CM CO t}- LO co
Ί—
138
0006 o o CN o ΤΓ o o CM sr o CO 4240 m CO CM OOOOl·
tr: .1¼0¾ 1 1 —0 ^y- 1<
r*, co T 00 00 1“ CD 00 o σ> T 190.5 5 OJ o CO CD
139
Antagonista
«5 CO
m CO 9.6 co OJ
co I cn 760 1040 7? Í r- cm o e δ e CM V o c? CJ
f f 1 I I k
194 195 196 197 198 O) CD T“ 200 200.5
140
CXJ O 83
58 23
•
380 ΙΟΙ CN 130 >70 52 >00 >20
ó . • CO
Cj! O 7! ΤΛ
( X
I- o«v Ό ©X z81 °*C o= Λη °<
Q— P < w P w je
C x—/ * _#y_ ‘ Hz (X x '°y- \
: 1 CN CO in CD L' OD
OJ cxj 1 CN CN CXJ CXJ CXJ CM
141
142
i i 1 i 1
CM Ch i Ό 1 o i i i 1
C\l r“ '
.
o CM -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 | 6460 LO Γχ co o LO O - 1660 >10000
o- ''Q^^^XqZ' t _h-
r- oj CO OJ cn c\i o OJ OJ OJ OJ OJ OJ OJ CO OJ OJ OJ CM
143
-
O o v q- t>
co
0L91 2130 m • i íô 1 ΐ < rs L0
rx. o o o CO o
CM o o CN CO
o
7
-U Οα **^Α*·ο** U ''“O** ^hj-íL t δ J e*^*l 7% 1 o***
-¼ b-\ > \ p— \S o >=< 0=/ \ \ / O— “7\— &
m co b- CO O) O T“ CM
CM CM CM CM CM CM CO CM CM
144
CO O SOL có
LO 290
o o >10000 3720 1 903 >10000 7830 o CO 3.2
/cA Cl & Oyý-tj o— y <5= Oe\ C_y 0=/ y f \7 y O-/V-D ✓ x_f 1
233 234 235 236 237 238 299 300
145
» : 1
38 £ ι— •
ο οι 8
. οι •
, •
m V 167 ο οι CO ο ο ο ο
οι 10000 ο ο
ο
Λ Λ
ο·** 1'
1 ο= _R' Ά ί ο=^ °*a r Φ **Άι
c? ν/*δ \7 Ζ A
b•^· ιη ο ost 350
b* <ο >* b. b*
CXJ C0 ο ο AXC( ο
C0 C0 ο ο C0 < 3 <
146
GLP-1 IC50(nM) >10000
Z c o 10 O c o o o o 3 0 0099 3200
z-x 2 c O io U r > > CL· Z 9700 2550
|IL8 IC50 (nM) 6400 >10000
Σ c 52 < Q CM Q 550 150
z“x s c x_-* s σ x 1 ID 1200
s s Sc ŕ T LÓ 1270 o o CO
Σ S n i< T Cĺ c O O CO iO O*
147
1 ; ι ; ι 1 I i 1 t * 1 ! 1 I 1 . t j t | 1
00001 1
>10000
i i o ! ; § ! i O i Λ
i § •
• i i o o ; O ’q· A
: 1 ; i 1 ; g i O ' m v ! Λ
O ; ; r» i Í ' i ; i • . 1 i ! !
148
>10000 i
7900
>10000
1 1 >10000
>3200
§ Λ
LO 00
Page 34
149
150
>10000
6300 •
>10000
1 >10000
>3200
. >4400
.
151
152
—-----
1 1 i i 1 1 1 1 I 1 1
153
>10000
6700
• , ο ο ο ο Λ • ,
>10000
>3200
.
>4400 •
_ 9 (potkan) i 1 ---------------------------------------------------------------------1
154
1
• • 1
1 1 ! (
1
..... i i ! f 1 1 :
1 1 i 1 1 t 1 1 1
8 (potkan) — 1 I 1 j ΐ
155
. •
1 i i i i t i í
156
......
-
•
i | i i 1 i
1
1 i 1 j 1 i
157
......
ι
158
159
160
•
1
_
•
1 1 1 i 1 i i í i i 1 I í
161
162
. •
. 2400 091
1 3720
Ο ο Λ 2400
13 (rpH)13(hP 6,3&8 potkan Ρ1,
163
1 I 1 ! 1 1 1 í i 1 ; i 1 i | ! 1 1 i I
! 1 i f : i ; i 1
i i 1 i • ! : í i 1 • í < (
i
2300
< l • l « 1
>4400 r ! i 1 i i f t
1 i i i i I i ! i
164
•
.
_
ι 1 1 | i { ι i 1 ι i
165
•
. • .
3400
I 1 2710
•
17(potkan)
166
167
1 i i 1 -
1 l 1 i i i 1 ! i ΐ
i i ! 1
1 i i i
. 1 i | i
1 i
!
11 (potkan)
168
i
I I : ; : i 1
_ _
i 1 i 1 1 I 1 i
1 i 1
169
170
1
1 i ·. i i
.
J
. 1 i i i i i
171
Tato tabulka ukazuje biodostupnosť zlúčenín podľa vynálezu.
Vlastnosti sa určovali s použitím vyššie opísaných metód.
172
mg/kg)
173
174
175
176
mg/kg)
177
CO; os i o
CO: CA o
ťS: n. co
178
179
ι 180
181
• ; c*. s r^. · 1 (N! σν i ] cn t V) οχ m 1 5019
©x Oi
1 r* · ; VO*
O' Í σχ
<N; cn.
182
183
Nasledujúce zlúčeniny sa vyrobili a testovali s použitím vyššie uvedených postupov. Údaje sú v dvoch častiach a ukazujú väzbu zlúčeniny na receptor.
184
Zlúčenina Mol. štruktúra Tvorené z S%R 10 μΜ hGnRHR
320 7 ó; 9
321 7 -J 55
322 F $ 4
323 f 1
324 z & 27
325 f 3
326 51
327 í ok. 0
328 f Á? 33
329 F Λ 6 31
330 10.
331 ·«. v F ť 49
185
332 1
333 p ci. 28
334 V1 J4 34
335 J 2
336 Ϊ 57
337 6
338 26
339 e 17
340 1··. p P 28
341 · ·> 7' Ä 20
342 P CP 45
343 33
186
344 y 57
345 40
346 ŕ -14
347 f e 2
348 % ------------------------------------------------------------------------------------:------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 49
349 Y 47
350 γύΥ*1 •/•V JL Λ . 10
351 <{ 24
352 β 51
353 Ή -4
354 M,·» ? ' -5
355 ŕ ? 20
187
356 .¾ 17
357 f 8 -2
358 9
359 55
360 g M 4
361 r ť 4
362 1
3β3 d
364 ť 21
365 ť s 47
366 f g 37
367 pg 15
188
368 % 56
369 . v* 7 1 11
370 f * 37
371 £ 55
372 / 1
373 K 19
374 Λ 13
375 “* ·* f® *<K 16
376 £ 50
377 f á 39
378 / K -4
379 ŕ »t y • 4
189
380 A 29
381 34
382 Α· 0' Z· 8
383 *·* 9 7
384 í Ó 21
385 A- 4 41
386 /- 27
387 K 52
388 Á 30
389 •ŕ* . 3
390 % 55
391 K A 48
190
392 s. 0
393 z 44
394 57
395 ž- 40
396 F -ŕ 55
397 K 43 .
398 <k 44
399 ŕ 41
191
Zlúčenina Mol. štruktúra S%R 1 uM hGnRHR
400 f) 28
401 32
402 18
403 *v·^“ ľ 44
404 Λ 13
405 f . J 40
406 $ b 30
407 Íj 20
408 4) 16
409 ŕ- 32
410 21
411 f J) 28
192
412 78 49
413 β 16
414 k 10
415 b 18
416 t 34
417 ŕ 20
418 ŕ i 42
419 36
420 f 28
42Ϊ F 48
422 F s 34
423 i 49
193
424 i 31
425 r 42
426 f t • 30
427 h 20
428 •8 46
429 λ ŕ 40
430 f 55
431 /5 47
432 T í 42
433 ľ • 54
434 r 6
435 8 12
194
436 A 58
437 d 40
438 7
439 é 23
440 22
441 : 17
442 i 50
443 $ i) 19
444 ŕ <ŕ 32
445 4 <> 22
446 f i 55
447 f í) 18
195
448 Λ 46
449 ŕ 42
450 Λ 6
451 $ ί * 24
452 Ί> 55
453 ά h 50
454 £ 36
455 f 58
196
1 Zlúčenina Mol. štruktúra S%R 10 uM mGnRHR
456 -12
457 ď -3
458 F J 29
459 f 53
460 f f Q -4
461 53
462 ľ ϋ 0
463 K } -5
463 F t 7
465 32
466 % 30
467 &
-1
197
468 í -10
469 L -9
470 F ι ó
471 ľ -4
472 f 42
473 f- q b . -14
474 t 39
475 i) -3
476 L 20
477 t 47
478 f Ϊ 3
479 -3
198
480 b -2
481 / % 5
482 J % 34
483 b 10
484 § -1
485 J -5
486 A 33
487 ľ 3
488 é -3
489 A Á -1
490 A » 4
491 6 / 9
199
492 f ί> b -7
493 -ó
494 -7
495 <* 4
496 r r -ó
497 2
498 í 58
499 b b 1
500 f . -4
501 Ť b -3
502 f jy * -2
503 -3
200
504 F 4 d 46
505 r 0 7
506 4. 3
507 J -4
508 Λ 7
509 í 16
510 í V 23
511 F 47
512 r 51
513 f é 9
514 r p J 2
515 *·» P i 11
201
516 ŕ +b 21
517 Y 34
518 56
519 k 0
520 *A F 1 -3
521 f 51
522 9
523 0 -4
524 Λ 35
525 it -9
526 / i 9
527 <ŕ ,0
202
528 7 ι 22 .
529 k -3
530 7 b p -4
531 r 4
532 12
533 29
534 ŕ 9
535 1 43
536 z 38
537 i 32
538 _ v* ý •v 17
539 a. 19
203
540 ŕ 0
541
¥ 9
542 3- 42
543 0 31
544 β 9 Ύ 27
545 ľ 28
546 29
547 .$ 24
548 F 12
549 Cr$ 48
550 O\ 3
551 * H F 21
204
552 ť- 58
553 f 34
554 β Ä 27
555 9 0 21
556 f ý1 10
557 h 4 . 10
558 5¾ 1 24
559 f &· 26
560 f í *< 7
561 / í 0
562 •ΛΑ r 30
563 0 13
205
564 f * 45
565 y 48
566 ? -δ 3
567 -1
568 t- 28
569 58
570 / 48
571 f -b 36
572 ύ 41
573 37
574 F zC z·* 13 .
575 -3
206
576 ίΎΥη 15
577 Q 30
578 / 17
579 rVV'*' 1
10
580 18
581 43
582 *W*T & *2
583 3¾
w -3
584 k 15
585 f§ 52
586 v* :
k 1 57
587 i i I i I í ; 29
207
58S A Q 0 4
589 A í 1 ' 35
590 -2
591 «£ “ J*
Ä 48
592 P- 17
593 A l 2
594 J 16
595 A
€ 24
596 Λ j- -1
597 11
598 A
f -4
599 A s 28
208
600 J* -4
601 f i 17
602 F A 44
603 e -4
604 fí? 4
605 *v*· 5 19
606 J-Q) 32
607 č •i -2
608 r z* 8
609 i 47
610 M cŕ° 0
611 r 11
209
612 9
613 ŕ> 53
614 48
615 F Λ 7
616 -s 29
617 / -2
616 9
619 <r 5
620 3
621 V 43
622 i b 43
623 /J* 2
210
624 A 8
625 8
626 10
627 4 -6
628 t 35
629 «V»' ľ b“ 17
630 $ 58
631 X 43
632 ľ- 21
633 F K · 10
634 1
635 1 1 i 27
211
636 p r 17
637 - V* y 55
638 J * * Ä 53
639 f 57
640 f J r/ 2
641 Q 23
642 19
643 F d. 23
644 í •x 22
645 $ 51
646 0
647 p s<í' 35
212
648 ·$ 4
649 28
650 7 4
651 K 15
652 19
653 ó
654 ? < 34
655 F J 2
656 f % 52
657 «·» ľTV^ 3
658 P 1 35
659 F1 -2
213
660 -4
661
l 41
662 Ŕ ·* 3
663 f •c 25
664 T5 (Λ 1
665 12
666 24
667
' 39
668 7¾
-n 6
669 { -3
670 16
671 4 12
214
672 Λ 23
673 Ί. 2
674 10
675 ¥ -5
676 J -4
677 v 8b : 54
678 f i. 17
679 • b 1
680 0
681 6
682 F 1 59
683 Λ 23
215
684 í 2
685 f*' ί 19
686 0 ι j 37
687 J 7
688 rf'? 0
689 °3·. 34
690 25
691 7
692 r -2
693 f 55
694 ď 11
695 dr 35
216
696 -p-L 21
697 F j 1
698 f 59
699 X ď ď -1
700 1 X M. • 30
701 ô -1
702 x 28
703 v* 5
704 / 4
705 ŕ s- 23
706 f x 3
707 x i 0
217
708 -4
709 ŕ i 15
710 4
711 n 2
712 1
713 f 2
714 P- J* 52
715 .ŕ f J* 1
716 ' 35
717 P 19
718 ? c 34
719 p 0 28
218
720 f i -1
721 / 2
722 í f 12
723 20
724 f cP 6
725 7« i w -1
726 *w·» (T 11
727 K T) 3
728 1 0
729 <? 2
730 .. V*·* ? y 8
731 37
219
732 F w 28
733 F 42
734 ? b 28
735 ? -1
736 í5 p 37
737 36
738 A X) 16
739 ŕ CH 42
740 3- : 15
741
5- 11
742 í5 Λ 5
743 x <X) 0
220
744 V* ť Ο 0
745 . oť*· 58
746 25
747 / 10
748 . 12
749 K 0 b 17
750 F 0 í 34
751 F l 4
752 vr ? 27
753 r 1
754 ŕ 37
755 ŕ 2
221
756 η. 38
757 ŕ S'- 1
758 9
759 / n 21
760 j 10
761 / : 12
762 f <ľb 3
763 / 5
764 18
765 í 15
766 6
767 f 2' 42
222
768 3
769 2
770 M,*» z 3
771 K 0
772 β -4
773 • f λ 3
774 A P 3
775 f 3- 38
776 f 0· 3
777 31
778 I i I z 6
779 i i l i 2
223
780 J* I 1
781 r 1 < 44
782 r 15
783 f * 25
784 r: 31
785 0 9
786 f 34
787 s 0 -3
788 A 6
789 A 14
790 / N 0
791 29
224
792 A 0 < 5
793 $ č 13
794
p 0
795 í 0
796 ť 19
797 γτΥ^ <Γ -1
798
1 29
799 42
800 1
801 ’ή,Τ' A (ŕ 31
802 31
803 54
225
804 5
805 í 51
806 i 10
807 t 39
808 y- r o> 9
809
í 38
810 0
811 . 1 57
812 f % 10
813 %
K -2
814 ŕ 6
815 β l· 9
226
816 29
817 ‘ 7
818 s 50
819 p (po -2
820 f *. -2
821 v* P p 7
822 0 0
823 Q λ 33
824 6
825 26
826 f 53
827 & t 1
227
828 f b 56
829 r ς b 4
830 Ccc ti 38
831 27
832 2
833 op 26
834 A 0
835 A 36
228
Mol. štruktúra % Inhib. @ luM hGnRH i Opakovanie @luM hGnRH
V . '1 40 49 ,
í Q 57 58
P l 86 93
f 26 26
b 20 24
$ i 15 15
x 27 31
f b 62 67
f i 50
é -7 0
0 63
f & -26
229
f 38 41
^-<\·—o 1 86 90
í λ- •52 54
ä
75 92
J 47 52
r 49 50
ŕ * 60 62·
,
23 36
? 4c 11 6
f 16 23
Λ 1
•Q Ý -29 ! -31
i i 1 1 67 70
230
% j 1 ’ -27 -29
f 13 8
i i -25 -25
r 1 -36 ’ -37
L i
t 13 33
1
b -10 -8
F i. 31 45
-13 -9
? k 102 107
-21 -36
' 59 66
ί 78 81
231
87 92
ŕ 4 -29 -30
-17 -29
x 44 45
x J 57 64
F 18 9
• -21 -23
f- 33 89
x L -12 . -9
F l 83 86
í 63 64
x í 66 76
233
234
235
Á 44 49
F 18 22
f b J-' 26 87
i 79 91
0 b -12 14
Λ í -1 12
b 69 74
F í 67 69
-2 3
f 82 85
í % -6 2
f 56 57
236
f & -11 -8
-7 4
ľ . 16 3
13 19 .
-7 -7
% 86 88
59 60
i 70 72
f 17 26
15 26
Λ t 19 25
-7 4
237
r -n -9
-10 -6
20 23
f -11 24
Y b 79 82
.ŕ x 81 89
j* í> 68 68
ó -1 6
f 76 83
* -10 13
i ** 69 75
^4) 48 55
238
ľ) i 1 i 84 86
y k a 1 i i I 89 ' 92
b I • 82 í 85
! i 1 1 i I . I 41
fi 1 i
Ar -3 2
F £ i i 62 69
1 i 1 1 77 84
á ' 55 63
i -n i -7
1 1 1
A i -20 í -30
? i I i
Éb 1 -4 ί 0
f f*\ i i 1 1
b 10 ! 2
239
? í -7 15
-7 . 9
s- -10 -5
-12 -9
/ J· 31 . 42
61 70
F 4 -23 -8
f 17 • 28
r 72 72
f 51 54
f k 35 36
/ cb 61 71
240
ó -ó 6
f' -18 ' -7
-25 3
ύ -2 3
C -4 1
f ϋ % s J5. 16
7 $ 14 27
K' -3 -5
V ? í 38 45
ΐ 52 52
f í *0 68 • 71
19 29
241
53 64
15 1 21
? b • 69 71
F 78 84
r 17 20
53 58
ľ Μ -4 -7
-14 , -6
40 41
¢. -22 9
V* I <·* -20 -7
-24 9
242
18 ó
f 24 3
$ i 58 63
Λ 44 48
F 49 58
F 16 32
-6 0
f 26 34
á -40 17
£ -ó 16
J® ( 55 61
-18 5
243
F -10 -15
f -11 -29
F -20 -21
f Ä -16 -29
ŕ i -4 -7
f- 0Ό -19 : -22
-4 11
b 3 7
f -15 -20
? -b -5 62
f Á -10 -9
á 11 16
244
A 0 P -12 -6
ŕ i 15 19
. 16 24
K -11 -5
*„·* é 42 53
93 95
87 90
-11 -17
A 0 -ó -1 -7
y 1 1
%n T4 / 42 44
p ΐ 2 21
245
i 59 62
í 93 ' 1 95
. 10 9
7 9
f 11 15
% -22 -4
ŕ -5 6
f 76 79
f Á. -5 8
-10 -6
k 77 79
81 85
246
. 48 52
f fí 29 32
f í> •81 82
f cl· 68 69
?- 74 81
r 45 45
28 35
Λ 20 28
13 7
ľ 14 20
A 14 21
*·» I · * -12 1
247
f s 38 39
'G 15 17
í • 21 22
ý 28 45
20 22
r 16 · 7
K -2 9
f . -¾ 2 4
$ t 27 48
Fir -26 11
r 10 2
ŕ 4> 17 23
248
0 -1 -3
12 8
f -8 3
e J* 78 85
ť -2 6
ť Λ 54 54
►b 57 60
F Λ Ml 94 96
ť 16 22
ľ -10 -3
-6 14
Λ í -17 -27
249
-13 -5
-10 -15
4> 75 77
** JL -10 -13
f 43 48
p í) 49 52
£ 62 68
ŕ 12 14
r -2 6
e 41 44
f 25 28
r -12 -9
250
Mol. štruktúra % Inhib. @l0uM mGnRH
82
F 103
Λ d ď ΙΟΙ
f 100
99
80
93
f 65
ŕ 96
b 83-
0 < *1 63
r i 63
251
r 46
’β» 71
104
ď- 65
r 94
21
ζΌ 84
100
f 66
r: 99
¥ 9
f 89
252
I ** 102
f 86
Vy*. f 82
J 101
-ť 63
59
Á 26
r 14
9,1
J 93
65
/ 73
253
96
•F s c 6ó
*w·* í 89
73
22
Z 100
f i 97
M,*> Z 79
& <fí> 100
Z 79
/ 95
ŕ 99
254
V* T ď 73
97
F l
e . 58
34
43
r 74
J 91
K 66
Y 100
f 97
X) 100
/ & 102
255
23
? b 72
A &· 86
75
ľ 99
f -¾ 89
Λ 75
r ŕ 41
> 77
f f ď 98
98
1 101
256
V*· T 101
5- 90
p 91
64
/ 97
94
p Ί 22
f 98
•*v·* ? 49
k 88
c- 98
p 64
257
? F 25
88
-23
f 12
í* ·. 99
Á 69
f 0 92
**· r 72
40
•F 49
1 44
258
á' 51
4
16
r % 9
98
/ 94
í ▼ * 67
26
71
f 28
f 90
p C^O 103
259
95
Á**» 73
f 96
9 Λ 101
.Τ' 98
f
ď 103
95
f 58
T J n 90
8
<*. Á ** ^*. 103
75
«rf
260
η 98
82
I *·* • 104
f 100
-ý 94
Ť 88
F r 99
ŕ t '
K !% 102
0 17
r 47
f ob 74
261
f i 86
Λ 97
r • 57
87
f 100
f 70
5
f ' 95
f 94
99
f k 101
η. 94
262
fi 97
p- 86
AA 17
f J 101
69
F í 92
A- 91
? 3- 100
f .8 . 44
f 64
Λ 3' 59
*ν·Τy 3- 63
263
X £ 75
Οό 13
. 81
46
x Ä 63
x fv 72
f λ 67
ť 96
% 31
98
f 1 0· 98
f 69
264
ŕ N 100
101
f . 95
f i 101
T 94
T 7^ . 13
*Äi <0 63
“$ : 1 / 20
í 96
Sr “ Λ 31
36
0 * 89
265
A 73
/ 8 70
K S 43
Q A· 71
s 48
p- 84
J* 3 J 104
<r 88
69
A' 0 69
f 33
9 0 79
266
0 88
/ 53
V 83
43
i 99
ý 84
-Kb 28
T Μ 83 ,
r 74
a 53
P P 90
V 2 55
267
4 -b Ó5
90
• 72
ľ 84
56
72
K 81
J 73
f 3> 28
r J 91
ň 52
p ď 60
268
269
35
ŕ i- 101
n· ó- '. 36
i 58 .
? 91
76
80
74
30
87
-ŕ b 103
66
270
J® 89
b 1 97
A . 20
4· V 14
27
f 42
-l 93
102
i1· 103
/Cy·' 4 103
103
f 105
271
·<·% Λ A 82
F οχ 62
F J • 59
29
67
β [ 101
F s •t 73
'i 86
/ 85
Á 52
? Ά· 73
$ $) 69
272
f 103
F 94
ŕ t . 98
£ 90
? Q. 77
/ * 72
Á ** 49
r 76
r 85
46
β r Z- 92
273
0 37
v 58
í 106
73
81
97
*ν*> 98
(Λ 100
γ 88
F i. 84
f y 53
f i 72
274
i 57
k ( 65
ŕ r • 83
r- 78
v 86
f 65
89
ŕ Λ 77
á b 99
101
v* z vfi 23
’** A· 34
275
r • 84
46
r • 79
82
p 102
76
p 99
í 100
r 90
/ 103
K K 21
f 43
276
$ 25
k 50
' 25
f 31
61
Λ 91
F 94
f 91
f — 91
/- 98
57
Λ ’ 6b ď > 48
277
X 101
x 95
X • 104
X 95
X <A 28
Í 42
f Jb 47
·*·* * ** Á· 39
x 93
x 79
Λ i « 44
4 65
278
$ 66
}· 60
Α % · . 37
7 105
Μ 77
ν' Ά* • 52
Α· 3' 96
* 92
$ -Α ϊ- 90
? ι W 99
ρ· ·\ 97
J 99
279
•x 97
f ι 103
f j . 104
F l 99
280
Mol. štruktúra %lnhib.@10uM hGnRH Opakovanie© 1 OuM hGnRH
P
-25 -25
ľ
ý·· -15 -20
f
Vo -17 -28
> . -4 -4
f-
-10 -5
281
282
283
284
285
286
287
288
289
290
291
292
293
294
295
296
297
298
299
300
301
302
303
304
305
306
307
308
309
310
311
312
313
314
315
316
317
318
319
320
I
321
322
323
324
325
326
327
328
329
330
331
332
333
334
335
336
337
338
339
340
341
342
343
344
345
346
347
348
349
350
351
352
353
354
355
356
357
358
359
360
361
362
363
364
365
366
367
368
369
370
371
372
373
374
375
376
377
378
379
380
381
382
383
384
385
386
387
388
389
390
391
392
393
394
395
396
397
398
399
400
401
402
403
404
405
406
407
408
409
410
411
412
413
415
416
417
418
419
420
421
Mol. štruktúra % Inhib. @10uM hGnRHCpeitoyane@10uM hGnRH
1 7
T d 89 94
T 38 32
T 17 18
T 12 2
? 0P0 -13 -7
ý Č 15 11
A $ 23 39
N 23 10
ŕ (Á 72 73
ž5 A 104 94
f 18 28
422
P í 51 41
p d 14 18
s . 99 95
f 102 96
f 101 95
ŕ K 38 43
no 91
35 20
£ 71 63
Ä 12 10
13 7
β 7 22 22
423
f 9 12
ľ 13 13
. 14 15
r 17 5
r 28 18
ŕ 26 18
f 50 54
í? 13 14
f 1 17
? ó 15
á i 4 9
f i 21 27
424
f 42 35
Η v 74 74
ť . 45 55
t 20 23
66 68
f Č 33 34 ·
ŕ 37 33
17 30
ŕ -1 17
/ 29 20
F / . 32 20
$ č 22 25
425
12 11
ŕ ť 9 9
/ (? . 15 10
í5 21 26
t 28 33
ľ 38 37
14 17
y 25 ' 38
fs 19 9
•ý 14 9
p ť- 41 35
c& **. 20 18
426
ŕ 26 . 22
Č 10 8
í . 8 25
12 29
21 26
24 26
18 5
M·* / 23 14
$ Λ. 15 26
β 36 29
v* T b 38 38
f 12 17
427
Y 13 22
Λ ó 72 68
-¾ . 17 5
č 12 23
n 39 49
f 4 -8 18
3 5
10 20
Ý· 9 14
23 21
í 14 7
J 21 18
428
*<* p- 90 92
F Λ 105 95
T5 .40 28
P 27 22
f 18 32
39 39
**«> ľ 4 20
f o> λ> x 37 50
46 57
? %· 43 56
27 46
^% 34 36
429
29 42
24 16
% 42 46
f 21 22
ŕ 91 77
36 23
29 43
54 52
f Ή 108 102
f 8 103 102
ί 99 95
/ Λ. Α 25 19
430
? % 26 29
23 15
y g 24 47
39 24
ŕ -83 -104
25 40
36 40
ŕ cko 17 19
$ s * 19 26
Μ 98 96
88 86
Ρ V. 62 65
431
F (2- 89 89
91 99
f . 15 10
f h 91 69
28 43
38 38
47 26
Ô. 91 92
F Ó- 100 99
68 90
F 39 42
ô; 27 27
432
p 27 37
á P 66 79
M 04 ŕ (7 .58 53
á í 62 59
F ? 21 26
f / 20 37
f 35 25
f 33 18
f 52 55
ž8 e 85 87
i 65 62
f -9 -27
433
% 23 27
í 11 10
.113 115
Ζγγ*> r*» 1 90 91
s 108 102
r 45 46
12 15
% 39 35
? 31 27
p -45 -65
f ý 1 -4
F F 11 23
434
f 61 74
f 102 95
<( .82 71
? 81 79
28 17
£ 13 11
29 31
32 30
f 31 36
f / t 1 72 77
22 7
'•v0' / A* 35 27
435
X 37 38
x x % 26 26
.81 86
φ 38’ 27
x. % 20 24
c 22 6
c -1 12
r 35 25
X 2 7
ŕ -3 11
-X 0 1
ŕ 19 34
436
F 100 92
s 101 86
í .22 30
p) 62 79
R·^ » J 48 57
18 23
p 22 26
25 9
7- d -19 -5
ľ- 1 11
φ·.^' 14 14
Λ P. 68 76
437
Ó 74 86
ŕ P 21 23
f . .15 22
*Λ ŕ č 24 25
p 12 9
f 20 24
r k 21 9
103 96
p 19 23
r 10 27
f J 34 36
ŕ 11 13
438
P Ή 1 8
v F A 16 31
F Ť 101 101
/ 45 47
ŕ 18 29
s 35 38
10 20
80 90
5 30 32
J. 67 67
P P 31 34
•t 72 76
439
í 21 23
10 15
. 14 17
F % 22 24
á 4 44 47
ŕ •ti „ 36 38
á s- 50 52
ľ 30 ' 32
í 90 94
24 25
í n/ 20 9
^- A 15 20
440
4 55 58
f -13 -4
P p . 12 15
f Á k 13 16
*·» f 78 85
f 4 60 63
-52 -56
•b-· 17 23
p -8- . 59 60
❖ 45 52
ŕ 19 6
42 46
441
K 56 59
57
β N . -5 15
r P 24 33
f λ'·' 25 30
K 100 109
31 33
& • 34 38
f f 20 24
f 97 98
r 58 63
55 57
442
30 36
21 21
Λ . 87 89
? 8 9
%· 8 9
f 6 7
>0*> 17 ζό
Α· 16 23
43 48
f %· 10 18
ρ· 14 4
21 24
443

Claims (12)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Zlúčenina so vzorcom vybraným zo skupiny pozostávajúcej sa z:
    alebo jej farmaceutický prijatelná soľ, multimér, preliek alebo· účinný metabolit.
  2. 2. Zlúčenina so vzorcom vybraným zo skupiny pozostávajúcej sa z:
    H
    444 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, multimér, alebo účinný metabolit.
    preliek
  3. 3. Zlúčenina so vzorcom:
    preliek alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, multimér, alebo účinný metabolit.
    445
  4. 4. Zlúčenina so vzorcom vybraným zo skupiny pozostávajúcej sa z:
    alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, multimér, preliek alebo účinný metabolit.
  5. 5. Zlúčenina so vzorcom:
    alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, ' multimér, preliek alebo účinný metabolit.
  6. 6. Zlúčenina so vzorcom vybraným zo skupiny pozostávajúcej sa z:
    N
    446 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, multimér, preliek alebo účinný metabolit.
  7. 7. Farmaceutická zmes obsahujúca: terepauticky účinné množstvo zlúčeniny, farmaceutický prijateľnej soli, multiméru, prelieku alebo účinného metabolitu, ako sa definuje v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 6 a farmaceutický prijateľný nosič alebo riedidlo.
  8. 8. Spôsob regulácie sekrécie genadotropinov u cicavcov, zahrnujúci aplikáciu terapeuticky účinného množstva zlúčeniny, farmaceutický prijateľnej soli, multiméru, prelieku alebo účinného metabolitu, ako sa definuje v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 6.
  9. 9. Zlúčenina so vzorcom I:
    kde X sa vyberie zo skupín C=0, C=S,
    S=0 a S(0)2/
    447 je päťčlenný heterocyklus obsahujúci až 4 heteroatómy volené z N, O a S, ktorý môže byť nasýtený, čiastočne nenasýtený alebo úplne nenasýtený a môže byť aromatický,
    R1 a R2 sa nezávisle vyberú z H a nižšieho alkylu,
    R3 sa zvoli z H, halogénu a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidinu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu, CH2OR, OR a C(O)OR, kde R sa volí zo substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidinu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu a heteroarylu a kde celkový počet uhlíkových atómov je (bez volených substituentov) v rozmedzí 1 až 12,
    R4 a R5 sa nezávisle volia z H, halogénu a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidinu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu, CH2OR, OR a C(O)OR, kde R sa definuje vyššie a kde celkový počet atómov . uhlíka je (bez .volených substituentov) v rozmedzí 1 až 12,
    R6 a R7 sa nezávisle volia z H, halogénu a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidinu, ' cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu, CH2OR, OR alebo C(O)OR, kde R sa definuje vyššie a kde celkový počet atómov uhlíka je v rozmedzí 1 až 12 (nezahrnuje voliteľné substituenty) ; alebo R6 a R7 spolu s atómmi na ktoré sú naviazané tvoria ľubovoľne substituovaný 5alebo 6-členný cyklus obsahujúci až štyri heteroatómy vybrané z O, N a S, kde prinajmenšom jeden z R3, R4, R5, R6 a R7 je iný než vodík,
    R8 je lipofilný zvyšok volený zo substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidinu,
    448 cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu alebo CH2OR, OR alebo C(O)OR, kde R sa definuje vyššie a kde celkový počet atómov uhlíka je v rozmedzí 6 až 20 (nezahrnuje voliteľné substituenty) a
    R9 je volený z H a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, multimér, preliek alebo účinný metabolit.
  10. 10. Zlúčenina so vzorcom I:
    kde X sa vyberie zo skupín C=O, C=S, S=O a S(O)2, je päťčlenný heterocyklus obsahujúci 1 až 4 heteroatómy volené z N, O a S, ktorý môže byť nasýtený, čiastočne nenasýtený alebo úplne nenasýtený a môže byť aromatický,
    R1 a R2 sa nezávisle vyberú z H a nižšieho alkylu,
    R3 sa zvolí z H, halogénu a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu, CH2OR, OR a C(O)OR, kde R sa volí zo substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu a heteroarylu a kde celkový počet uhlíkových atómov je (bez ' volených substituentov) v rozmedzí 1 až 12,
    449
    R4 a R5 sa nezávisle volia z H, halogénu a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu, CH2OR, OR a C(O)OR, kde R sa definuje vyššie a kde celkový počet atómov uhlíka je (bez volených , substituentov) v rozmedzí 1 až 12,
    R6 a R7 sa nezávisle volia z H, halogénu a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu, CH2OR, OR alebo C (O) OR, kde R sa definuje vyššie a kde celkový počet atómov uhlíka je v rozmedzí 1 až 12 (nezahrnuje voliteľné substituenty); alebo R6 a R7 spolu s atómmi na ktoré sú naviazané tvoria ľubovoľne substituovaný 5-
    alebo 6-členný cyklus obsahujúci až štyri heteroatómy vybrané z 0, N a S, kde prinajmenšom jeden z R3, R4, R5, R6 a R7 je iný než vodík, R8 je lipofilný zvyšok volený zo substituovaného alebo
    nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, árylu, heteroarylu alebo CH2OR, OR alebp C (O) OR, kde R sa definuje vyššie a kde celkový počet atómov uhlíka je v rozmedzí 6 až 20 (nezahrnuje voliteľné substituenty) a
    R9 je volený z H a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu alebo R1 alebo R2 môže byt -OH alebo =0; a/alebo R8 môže byť tiež vodík;
    a/alebo R môže byť COR alebo vodík; a/alebo R8 môže obsahovať akýkoľvek požadovaný počet uhlíkových atómov;· a/alebo R8 a R9 môže tiež tvoriť kruh; a/alebo akékoľvek susediace R skupiny, ako R5 a R6 alebo R3 a R4 môžu tvoriť kruh tak, ako je opísané pre R6 a R7;
    450 a/alebo R6 môže byť COR; a/alebo heterocyklická skupina, ktorá môže byť substituovaná alebo nesubstituovaná;
    alebo R8 a/alebo R9 môžu byť vybrané z heterocyklických skupín alebo akýchkoľvek zlúčenín, ktoré tvoria amidovú väzbu s dusíkom vo vzorci I;
    alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, multimér, preliek alebo účinný metabolit.
  11. 11. Farmaceutická zmes obsahujúca:
    (a) terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny podľa vzorca I:
    kde X sa vyberie zo skupín C=O, C=S, S=O a S(O)2/ je päťčlenný heterocyklus obsahujúci 1 až 4 heteroatómy volené z N, O a S, ktorý môže byť nasýtený, čiastočne nenasýtený alebo úplne nenasýtený a môže byť aromatický,
    R1 a R2 sa nezávisle vyberú z H ,a nižšieho alkylu,
    R3 sa zvolí z H, halogénu a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, hetéroarylu, CH2OR, OR a C (O) OR, kde R sa volí zo substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu a heteroarylu a kde celkový: počet uhlíkových atómov je (bez volených substituentov) v rozmedzí 1 až 12,
    451
    R4 a R5 sa nezávisle volia z H, halogénu a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu, CH2OR, OR a C(O)OR, kde R sa definuje vyššie a kde celkový počet atómov úhlíka je (bez volených substituentov) v rozmedzí 1 až 12,
    R6 a R7 sa nezávisle volia z H, halogénu a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu, CH2OR, OR alebo C(O)OR, kde R sa definuje vyššie a kde celkový počet atómov uhlíka je v rozmedzí 1 až 12 (nezahrnuje volitelné substituenty); alebo R6 a R7 spolu s atómmi na ktoré sú naviazané tvoria ľubovolne substituovaný 5-
    alebo 6-členný cyklus obsahujúci až štyri heteroatómy vybrané z 0, N a S, kde prinajmenšom jeden z R3, R4, R5, R6 a R7 je iný než vodík, R8 je lipofilný zvyšok volený zo substituovaného alebo
    nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu alebo CH2OR, OR alebo C(O)OR, kde R sa definuje vyššie a kde celkový počet atómov uhlíka je v rozmedzí 6 až 20 (nezahrnuje voliteľné substituenty) a
    R9 je volený z H a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, multimér, preliek alebo účinný metabolit, (b) farmaceutický prijateľný nosič alebo riedidlo.
  12. 12. Spôsob regulácie šekrécie gonadotropínov u cicavcov, zahrnujúci podávanie cicavcom, ktorý túto reguláciu potrebujú, terapeuticky účinného množstva zlúčeniny so vzorcom I:
    452 kde X sa vyberie zo skupín C=0, C=S, S=O a S(O)2, je päťčlenný heterocyklus obsahujúci .1 až 4 heteroatómy volené z N, 0 a S, ktorý môže byť nasýtený, čiastočne nenasýtený alebo úplne nenasýtený a môže byť aromatický,
    R1 a R2 sa nezávisle vyberú z H a nižšieho alkylu,
    R3 sa zvolí z H, halogénu a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu, CH2OR, OR a C(O)OR, kde R sa volí zo substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu a, heteroarylu a kde celkový počet uhlíkových atómov je (bez volených substituentov) v rozmedzí 1 až 12,
    R4 a R5 sa nezávisle volia z H, halogénu a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu, CH2OR, OR a C(O)OR, kde R sa definuje vyššie a kde celkový počet atómov uhlíka je (bez volených substituentov) v rozmedzí 1 až 12,
    R6 a R7 sa nezávisle volia z H, halogénu a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu,
    453 cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu, CH2OR, OR alebo C(O)OR, kde R sa definuje vyššie a kde celkový počet atómov uhlíka je v rozmedzí 1 až 12 (nezahrnuje voliteľné substituenty) ; alebo R6 a R7 spolu s atómmi na ktoré sú naviazané tvoria ľubovoľne substituovaný 51 alebo β-členný cyklus obsahujúci až štyri heteroatómy vybrané z 0, N a S, kde prinajmenšom jeden z R3, R4, R5, R6 a R7 je iný než vodík,
    R8 je lipofilný zvyšok volený zo substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, alkylidénu, alkylidínu, cykloalkylu, heterocyklu, arylu, heteroarylu alebo CH2OR, OR alebo C(O)OR, kde R sa definuje vyššie a kde celkový počet atómov uhlíka je v rozmedzí 6 až 20 (nezahrnuje voliteľné substituenty) a
    R9 je volený z H a substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, multimér, preliek alebo účinný metabolit.
SK226-2001A 1998-08-20 1999-08-20 Non-peptide gnrh agents, methods and intermediates for their preparation SK2262001A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US9752098P 1998-08-20 1998-08-20
PCT/US1999/018790 WO2000020358A2 (en) 1998-08-20 1999-08-20 NON-PEPTIDE GnRH AGENTS, METHODS AND INTERMEDIATES FOR THEIR PREPARATION

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK2262001A3 true SK2262001A3 (en) 2002-12-03

Family

ID=22263796

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK226-2001A SK2262001A3 (en) 1998-08-20 1999-08-20 Non-peptide gnrh agents, methods and intermediates for their preparation

Country Status (33)

Country Link
EP (1) EP1105120B1 (sk)
JP (1) JP2002535244A (sk)
KR (1) KR20010085402A (sk)
CN (1) CN1379666A (sk)
AP (1) AP2001002053A0 (sk)
AT (1) ATE291423T1 (sk)
AU (1) AU759310B2 (sk)
BG (1) BG105362A (sk)
BR (1) BR9913374A (sk)
CA (1) CA2341346A1 (sk)
CZ (1) CZ2001523A3 (sk)
DE (1) DE69924387D1 (sk)
EA (1) EA200100255A1 (sk)
EE (1) EE200100102A (sk)
ES (1) ES2237966T3 (sk)
GE (1) GEP20043315B (sk)
HR (1) HRP20010206A2 (sk)
HU (1) HUP0103622A3 (sk)
ID (1) ID29244A (sk)
IL (1) IL141396A0 (sk)
IS (1) IS5846A (sk)
LT (1) LT4904B (sk)
LV (1) LV12732B (sk)
NO (1) NO20010309L (sk)
NZ (1) NZ509252A (sk)
OA (1) OA11599A (sk)
PL (1) PL356984A1 (sk)
SI (1) SI20746A (sk)
SK (1) SK2262001A3 (sk)
TR (1) TR200100631T2 (sk)
WO (1) WO2000020358A2 (sk)
YU (1) YU13701A (sk)
ZA (1) ZA200100831B (sk)

Families Citing this family (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0983992B1 (en) * 1992-04-22 2005-10-26 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Compounds having selectivity for retinoid x receptors
CA2368047A1 (en) * 1999-03-24 2000-09-28 Anormed Inc. Chemokine receptor binding heterocyclic compounds
AR024158A1 (es) * 1999-06-01 2002-09-04 Smithkline Beecham Corp Compuestos antibacterianos
TWI243164B (en) 2001-02-13 2005-11-11 Aventis Pharma Gmbh Acylated indanyl amines and their use as pharmaceuticals
AU2002312348A1 (en) * 2001-06-06 2002-12-16 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Non-peptide gnrh agents, pharmaceutical compositions and methods for their uses, and processes for preparing them
PT1401825E (pt) 2001-06-11 2009-10-23 Virochem Pharma Inc Compostos e métodos para o tratamento ou para a prevenção de infecções com flavivírus
US7132438B2 (en) 2001-10-09 2006-11-07 Amgen Inc. Benzimidazole derivatives
GB0126292D0 (en) * 2001-11-01 2002-01-02 Smithkline Beecham Plc Compounds
JP2005170790A (ja) * 2002-01-09 2005-06-30 Ajinomoto Co Inc Ｎ−アルキルスルフォニル置換アミド誘導体
US6521395B1 (en) * 2002-01-30 2003-02-18 Eastman Kodak Company Infrared couplers for incorporating and recovering metadata
WO2003068769A1 (en) * 2002-02-12 2003-08-21 Pfizer Inc. Non-peptide compounds affecting the action of gonadotropin-releasing hormone (gnrh)
TW200304820A (en) * 2002-03-25 2003-10-16 Avanir Pharmaceuticals Use of benzimidazole analogs in the treatment of cell proliferation
MXPA04012566A (es) * 2002-06-13 2005-04-19 Pfizer Agentes no peptidicos reguladores de la gnrh, composiciones farmaceuticas y procedimientos para su uso.
JP2006510725A (ja) * 2002-11-20 2006-03-30 パラダイム・セラピューティクス・リミテッド 複素環式ケイ素化合物、ならびにＧｎＲＨ（ゴナドトロピン放出ホルモン）と関係のある疾患または状態の治療におけるその使用
CN101475528A (zh) * 2003-03-31 2009-07-08 大正制药株式会社 新的喹啉、四氢喹唑啉和嘧啶衍生物以及与其应用有关的治疗方法
EP1464335A3 (en) * 2003-03-31 2007-05-09 Taisho Pharmaceutical Co. Ltd. Quinoline, tetrahydroquinoline and pyrimidine derivatives as mch antagonist
US7427683B2 (en) * 2003-04-25 2008-09-23 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. c-fms kinase inhibitors
CA2536964A1 (en) * 2003-04-25 2004-11-11 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. C-fms kinase inhibitors
EP1628661A2 (en) * 2003-06-05 2006-03-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of vr1 receptor
DK1648906T3 (da) * 2003-07-09 2008-02-04 Takeda Cambridge Ltd Organo-silicium-forbindelser og deres anvendelse
US7407649B2 (en) 2003-07-10 2008-08-05 Paradigm Therapeutics Ltd Silicon compounds and their use
WO2005039564A1 (en) * 2003-10-02 2005-05-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Phthalimide compounds useful as protein kinase inhibitors
US20090291915A1 (en) * 2004-12-17 2009-11-26 Graham Andrew Showell Silicon Compounds and Their Use
CN101218224B (zh) 2005-05-13 2013-05-08 Viro化学制药公司 治疗或预防黄病毒感染的组合物和方法
US8193206B2 (en) 2005-06-14 2012-06-05 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Pyrimidine compounds
NZ564222A (en) 2005-06-14 2011-10-28 Taigen Biotechnology Co Ltd Pyrimidine compounds
CA2613162A1 (en) * 2005-06-28 2007-01-04 Takeda Cambridge Limited Heterocyclic non-peptide gnrh antagonists
DK1910384T3 (da) * 2005-08-04 2012-12-17 Sirtris Pharmaceuticals Inc Imidazo [2,1-b] thiazol-derivater som sirtuinmodulerende forbindelser
CN101437519A (zh) 2006-03-31 2009-05-20 艾博特公司 吲唑化合物
WO2007131996A1 (en) * 2006-05-12 2007-11-22 Genmedica Therapeutics Sl Meta-xylylenediamine vanadate salts
CL2008001822A1 (es) 2007-06-20 2009-03-13 Sirtris Pharmaceuticals Inc Compuestos derivados de tiazolo[5,4-b]piridina; composicion farmaceutica que comprende a dichos compuestos; y uso del compuesto en el tratamiento de la resistencia a la insulina, sindrome metabolico, diabetes, entre otras.
NZ584475A (en) * 2007-10-11 2012-07-27 Vertex Pharma Heteroaryl amides useful as inhibitors of voltage-gated sodium channels
CN101888991A (zh) 2007-10-31 2010-11-17 财团法人乙卯研究所 类视色素前体药物化合物
EA019289B1 (ru) 2008-04-21 2014-02-28 Тайджен Байотекнолоджи Ко., Лтд. Производные аминопиридина, аминопиримидина и амино-1,3,5-триазина
UY31984A (es) * 2008-07-16 2010-02-26 Boehringer Ingelheim Int DERIVADOS DE 1-(3,4-difluorobencil)-6-oxo-1,6-dihidropirimidin-5-carboxamidas N-sustituidas y de 2-(3,4-difluorobencil)-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxamidas N-sustituidas.
TW201021855A (en) 2008-11-13 2010-06-16 Taigen Biotechnology Co Ltd Lyophilization formulation
WO2012018668A1 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Amgen Inc. Benzimidazole and azabenzimidazole compounds that inhibit anaplastic lymphoma kinase
CN102050823A (zh) * 2010-10-27 2011-05-11 华东理工大学 新型光稳定剂-鸟嘌呤类似物的合成及表征
WO2012112567A1 (en) * 2011-02-15 2012-08-23 Georgetown University Small molecule inhibitors of agbl2
CA2836311A1 (en) 2011-05-16 2012-11-22 Bionomics Limited Amine derivatives as potassium channel blockers
CN103827097B (zh) * 2011-07-26 2016-03-16 赛诺菲 3-杂芳酰基氨基-丙酸衍生物及其作为药物的用途
WO2013067578A1 (en) * 2011-11-07 2013-05-16 The University Of Queensland Modulators of c3a receptors
AU2013333657B2 (en) * 2012-10-17 2018-04-26 Exonate Limited Compounds useful for treating ocular neovasculan
GB201300304D0 (en) * 2013-01-08 2013-02-20 Kalvista Pharmaceuticals Ltd Benzylamine derivatives
WO2017070235A1 (en) * 2015-10-19 2017-04-27 Attenua, Inc. Antitussive compositions and methods
EP3679027A1 (en) 2017-09-04 2020-07-15 C4 Therapeutics, Inc. Dihydrobenzimidazolones
EP3935050A4 (en) 2019-03-06 2023-01-04 C4 Therapeutics, Inc. HETEROCYCLIC COMPOUNDS FOR MEDICAL TREATMENT

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3499002A (en) * 1968-06-20 1970-03-03 Robins Co Inc A H 1-carbamoyl-3-aroylpyrrolidines
NL6913261A (sk) * 1968-09-09 1970-03-11
US3932444A (en) * 1972-04-28 1976-01-13 E. I. Du Pont De Nemours & Co. 4-Imidazolylsulfonylimidazoles
US4013647A (en) * 1976-03-23 1977-03-22 American Home Products Corporation Morpholine containing tetrazole-5-carboxamide derivatives
GB1491776A (en) * 1976-09-08 1977-11-16 Pfizer Ltd Thiadiazoles
US4096153A (en) * 1977-01-21 1978-06-20 American Home Products Corporation Arylene-bis-tetrazole-5-carboxamides
US5236928A (en) * 1991-03-19 1993-08-17 Merck & Co., Inc. Imidazole derivatives bearing acidic functional groups at the 5-position, their compositions and methods of use as angiotensin II antagonists
JPH06509075A (ja) 1991-07-01 1994-10-13 ユニヴァーシティ　テクノロジーズ　インターナショナル　インコーポレイテッド ＧｎＲＨ及び他の生物学的に活性なリガンドの非感度低下性類縁体
WO1993013083A1 (en) * 1991-12-31 1993-07-08 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Oxadiazole derivatives having acetylcholinesterase-inhibitory and muscarinic agonist activity
ATE243204T1 (de) * 1995-08-24 2003-07-15 Basf Ag Isoxazole- und isothiazole-5-carboxamid derivate, deren herstellung und deren verwendung als herbizide
JP3092946B2 (ja) * 1995-12-14 2000-09-25 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド ゴナドトロピン放出ホルモン拮抗剤
CA2254769A1 (en) * 1996-05-20 1997-11-27 Merck & Co., Inc. Antagonists of gonadotropin releasing hormone
US5878393A (en) * 1996-09-09 1999-03-02 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. High quality concatenative reading system

Also Published As

Publication number Publication date
WO2000020358B1 (en) 2001-01-04
DE69924387D1 (de) 2005-04-28
WO2000020358A3 (en) 2000-11-16
LV12732A (en) 2001-10-20
EP1105120B1 (en) 2005-03-23
ATE291423T1 (de) 2005-04-15
NZ509252A (en) 2004-05-28
LV12732B (en) 2002-03-20
ES2237966T3 (es) 2005-08-01
IL141396A0 (en) 2002-03-10
HUP0103622A2 (hu) 2002-04-29
EA200100255A1 (ru) 2002-02-28
NO20010309D0 (no) 2001-01-19
YU13701A (sh) 2005-06-10
ID29244A (id) 2001-08-16
LT4904B (lt) 2002-04-25
HRP20010206A2 (en) 2004-02-29
JP2002535244A (ja) 2002-10-22
GEP20043315B (en) 2004-02-10
BR9913374A (pt) 2001-05-15
AU759310B2 (en) 2003-04-10
CN1379666A (zh) 2002-11-13
EE200100102A (et) 2002-06-17
CA2341346A1 (en) 2000-04-13
NO20010309L (no) 2001-04-11
BG105362A (en) 2001-12-31
KR20010085402A (ko) 2001-09-07
TR200100631T2 (tr) 2002-08-21
CZ2001523A3 (cs) 2002-05-15
AP2001002053A0 (en) 2001-03-31
SI20746A (sl) 2002-06-30
LT2001024A (en) 2001-11-26
ZA200100831B (en) 2002-08-22
IS5846A (is) 2001-02-16
WO2000020358A2 (en) 2000-04-13
HUP0103622A3 (en) 2003-01-28
PL356984A1 (en) 2004-07-12
EP1105120A4 (en) 2001-12-19
OA11599A (en) 2004-08-23
AU2470900A (en) 2000-04-26
EP1105120A2 (en) 2001-06-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK2262001A3 (en) Non-peptide gnrh agents, methods and intermediates for their preparation
US7101878B1 (en) Non-peptide GNRH agents, methods and intermediates for their preparation
EP1334972B1 (en) Non-peptide compounds affecting the action of gonadotropin-releasing hormone (GnRH)
KR20010041656A (ko) 비-펩타이드 성선자극호르몬-방출 호르몬 제제
US20050250846A1 (en) Non-peptide GnRH agents, pharmaceutical compositions and methods for their use
JP2014129406A (ja) ＴＮＦαシグナル伝達のモジュレータ
US6617347B1 (en) Selective β3 adrenergic agonists
CN103442566A (zh) 治疗癌症的化合物
AU2001264694A1 (en) Use of pyrazole derivatives for treating infertility
WO2001087287A2 (en) Use of pyrazole derivatives for treating infertility
US20040010033A1 (en) Non-peptide GnRH agents, methods and intermediates for their preparation
US20040198799A1 (en) Methods of increasing endogenous testosterone levels
KR20180085814A (ko) 치환된 5,6-디히드로-6-페닐벤조[f]이소퀴놀린-2-아민의 제조 방법
KR20110053434A (ko) Ａ３ 아데노신 수용체 알로스테릭 조절인자
CN104744451A (zh) 一种1-(3-氨基丙基)取代环状胺类化合物、其制备方法、药物组合物及用途
MXPA01001834A (en) NON-PEPTIDE GnRH AGENTS, METHODS AND INTERMEDIATES FOR THEIR PREPARATION
JP2005530685A (ja) 選択的鎮痛剤
MXPA00008537A (en) NON-PEPTIDE GnRH AGENTS