LT4904B - Nepeptidiniai gnrh agentai, būdai ir tarpiniai junginiai jiems gauti - Google Patents

Nepeptidiniai gnrh agentai, būdai ir tarpiniai junginiai jiems gauti Download PDF

Info

Publication number
LT4904B
LT4904B LT2001024A LT2001024A LT4904B LT 4904 B LT4904 B LT 4904B LT 2001024 A LT2001024 A LT 2001024A LT 2001024 A LT2001024 A LT 2001024A LT 4904 B LT4904 B LT 4904B
Authority
LT
Lithuania
Prior art keywords
compound
substituted
aryl
unsubstituted alkyl
heteroaryl
Prior art date
Application number
LT2001024A
Other languages
English (en)
Other versions
LT2001024A (lt
Inventor
Mark Brian Anderson
Haresh N. Vazir
David Robert Luthin
Genevieve Deguzman Paderes
Ved P. Pathak
Lance Christopher Christie
Haitao Li
James Faust
Eileen Valenzuela Tompkins
Yufeng Hong
Original Assignee
Agouron Pharmaceuticals,Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agouron Pharmaceuticals,Inc. filed Critical Agouron Pharmaceuticals,Inc.
Publication of LT2001024A publication Critical patent/LT2001024A/lt
Publication of LT4904B publication Critical patent/LT4904B/lt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A61K31/341—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide not condensed with another ring, e.g. ranitidine, furosemide, bufetolol, muscarine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/16—Masculine contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A61P5/04—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin for decreasing, blocking or antagonising the activity of the hypothalamic hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C07D235/14—Radicals substituted by nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/26—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/48—Two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/12—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D307/14—Radicals substituted by nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/56—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Išradime aprašyti nepeptidiniai GnRH agentai, galintys inhibuoti gonadotropiną išlaisvinančio hormono poveikį. Tokie junginiai ir jų farmaciškai priimtinos druskos, multimerai, provaistai ir veiklieji metabolitai yra tinkami žinduolių reprodukciniams sutrikimams ir nuo steroidinių hormonų priklausomiems augliams gydyti bei vaisingumui reguliuoti, kur gonadotropino išlaisvinimo slopinimas yra pageidautinas. taip pat aprašyti šių junginių ir jiems pagaminti tinkančių tarpinių junginių sintezės būdai.ą

Description

Gonadotropiną išlaisvinantis hormonas (GnRH), dar žinomas kaip luteinizuojantį hormoną išlaisvinantis hormonas (LH-RH), vaidina centrinį vaidmenį reprodukcijos biologijoje. Daugybė analogų yra naudojama vis didėjančiam skaičiui klinikinių indikacijų. GnRH dekapeptidas (piro-Glu-HisTrp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 arba p-EHWSYGLRPG-NH2) yra gaminamas vidurinio pagrindinio pogumburio neuronuose iš didesnio pirmtako, vykstant fermentiniams virsmams. Šis dekapeptidas yra išskiriamas pulsuojančiai į hipofizės vartų venos kraujotakos sistemą kur GnRH sąveikauja su didelio giminingumo receptoriais (su 7-transmembraniniu Gbaltymu sujungtais receptoriais) priešakinės hipofizės liaukoje, esančioje prie smegenų pagrindo. Hipofizėje GnRH sukelia gonadotropinių hormonų (gonadotropinu) - luteinizuojančio hormono (LH) ir folikulas stimuliuojančio hormono (FSH) - išsiskyrimą. Sėklidėse ir kiaušidėse LH stimuliuoja atitinkamai testosterono ir estradiolio gaminimąsi. FSH stimuliuoja folikulių augimą moterims ir spermos susidarymą vyrams. Jeigu funkcionavimas yra normalus, laiko atžvilgiu pulsuojantis GnRH išlaisviminas ir jo koncentracijos yra be galo svarbios lytinės steroidogenezės palaikymui ir normalioms reprodukcijos funkcijoms, susijusioms su augimu ir lytiniu brendimu.
Hipofizės atsakas į GnRH metams bėgant labai kinta. GnRH ir gonadotropinai pirmiausiai pasirodo vaisiuje maždaug dešimtą nėštumo savaitę. Jautrumas GnRH mažėja, po trumpo pakilimo per pirmuosius tris mėnesius po gimimo, iki lytinio subrendimo. Prieš lytinį subrendimą FSH atsakas į GnRH yra didesnis nei LH. Kai prasideda lytinis brendimas, jautrumas GnRH padidėja ir po to atsiranda pulsuojanti LH sekrecija. Vėlyvuoju brendimo laikotarpiu ir per reprodukcijos metus vyksta pulsacinis GnRH išsilaisvinimas per visą dieną esant didesniam LH reaktyvumui nei FSH. Pulsuojantis GnRH išlaisvinimas duoda pulsuojantį LH ir FSH išlaisvinimą taigi ir testosterono ir estradiolio išsiskyrimą iš lytinių organų. Po menopauzės FSH ir LH koncentracijos padidėja, ir FSH kiekiai po menopauzės yra didesni nei LH kiekiai.
Nuolatinis GnRH agonistų ir antagonistų įvedimas gyvūnams arba žmogui sukelia ir LH, ir FSH cirkuliuojančių kiekių sumažėjimą GnRH agonistai yra junginiai, kurie imituoja endogeninį GnRH, stimuliuojantį receptorius ant hipofizės liaukos, ir to pasėkoje išsiskiria LH ir FSH. Po trumpalaikio lytinių hormonų kiekio padidėjimo arba-“šuolio”, nuolatinis GnRH agonistų vartojimas duoda GnRH receptorių veiklos sumažėjimą GnRH receptorių veiklos sumažėjimas ir hipofizės desensitizacija sumažina LH ir FSH cirkuliuojančius kiekius. Nepaisant atsiradusio simptomus paaštrinančio staigaus hormonų kiekio padidėjimo, GnRH agonistai yra pasirenkami nuo lytinių hormonų priklausančių patofiziologijų gydymui. Pavyzdžiui, GnRH agonistai buvo naudoti sumažinti testosterono gaminimuisi, tokiu būdu sumažinant prostatos tūrį gerybinės prostatos hiperplazijos (BPH) atveju ir sulėtinant auglio augimą prostatos vėžio atveju. Šie junginiai taip pat buvo naudojami krūties ir kiaušidžių vėžio gydymui.
Neseniai klinikiniams tyrimams tapo prieinami GnRH antagonistai.
GnRH antagonistai turi betarpišką poveikį hipofizei be agonistų atveju stebimo staigaus šuolio. Literatūroje buvo aprašytas GnRH antagonistų (paprastai dekapeptidų) panaudojimas krūties, kiaušidžių ir prostatos vėžiui gydyti. Kitas antagonistų panašiai kaip ir agonistų, panaudojimas yra endometriozė (įskaitant skausmingąją endometriozę), gimdos mioma, kiaušidžių ir pieno liaukos cistinės ligos (įskaitant policistinę kiaušidžių ligą), prostatos hipertrofija, amenorėja (pvz. antrinė amenorėja) ir per daug ankstyvas lytinis brendimas. Šie junginiai taip pat gali būti naudingi priešmenstruacinio sindromo (PMS) simptomų palengvinimui. Be to, antagonistai gali būti taikomi reguliuoti žinduolių patinų gonadotropinu sekrecijai norint stabdyti spermatogenezę (pvz. kai kontraceptikai vyrams) ir gydant vyrus-seksualinius nusikaltėlius. Svarbu paminėti, kad GnRH antagonistai (ir agonistai) rado pritaikymą terapijoje, kur yra pageidautinas grįžtamasis hipofizės-gonados ašies slopinimas.
Jau 50 metų androgenų išsiskyrimo sulaikymas yra efektyviausias sisteminis prostatos metastazinės karcinomos gydymas. Tai kas racionalu, yra paprasta - prostatos liaukos tinkamam augimui, palaikymui ir funkcionavimui yra reikalingi androgenai. Prostatos vėžys ir gerybinė prostatos hiperplazija vis dar yra papūtę vyrų tarpe ir vystosi aplinkoje, kur visą laiką yra androgenų. Taigi, naudojant GnRH antagonistą hipofizėsgonados ašies pertraukimui, sumažinamas androgenų gaminimasis ir gaunama auglio augimo moduliacija. Be to, GnRH antagonistai gali turėti tiesioginį efektą į auglio augimą blokuodami receptorius ant auglio ląstelių.
Šio tipo vėžio, kuris tiesiogiai reaguoja ir į lytinius hormonus, ir į GnRH atveju, antagonistai turėtų efektyviai lėtinti auglio augimą pagal du mechanizmus. Kadangi GnRH receptoriai yra ant daugelio prostatos ir krūties vėžio ląstelių, dabartiniu metu manoma, kad GnRH antagonistai taip pat gali būti efektyvūs gydant auglius, kurie priklauso ne nuo hormonų. Naujos literatūros pavyzdžiai rodo, kad GnRH receptorių yra daugelyje vėžinių ląstelių linijų, įskaitant:
• prostatos vėžį: GnRH agonistai ir in vitro, ir in vivo turi tiesioginį inhibicinį poveikį ir į priklausančių nuo androgenų (LNCaP), ir į nepriklausančių nuo androgenų (DU 145) žmogaus prostatos vėžio ląstelių linijas. Montagnani et ai., Arch. Ital. Urol. Androl. 1997, 69(4), 257-263. GnRH antagonistai inhibuoja beplaukiu pelių nepriklausančio nuo androgeno PC-3 prostatos vėžio augimą. Jungvvirth et ai., Prostate 1997, 32(3), 164-172.
• kiaušidžių vėžį: GnRH receptorių akivaizdus parodymas žmogaus kiaušidžių vėžio atveju duoda loginį pagrindą panaudoti GnRH analogais paremtas terapines strategijas šiai ligai. Srkalovic et ai., Int. J. Oncol.
1998, 12(3), 489-498.
• krūties vėžį: Krūties vėžys yra labiausiai paplitęs virš 40 metų amžiaus moterų vėžinis susirgimas ir yra pagrindinė su vėžiu susijusių moterų mirčių priežastis. Sisteminė endokrininė intervencija yra būdinga daugumai pasirenkamų gydymo būdų, kontroliuojant užleistą krūties vėžį, ypatingai esant priklausomam nuo estrogeno vėžiui. Gonadotropiną išlaisvinančio hormono receptoriaus genai yra ekspresuojami žmogaus krūtyje su fibrocistine liga ir vėžiu. Kottler et ai., Int. J. Cancer 1997, 71(4), 595-599.
Iki šiol prieinami GnRH antagonistai pirmiausia buvo GnRH peptidiniai analogai. Žr., pvz., International Publication No. WO 93/03058. Peptidinių hormonų peptidiniai antagonistai yra dažnai gana veiksmingi, tačiau peptidinių antagonistų naudojimas dažnai yra susijęs su problemomis, kadangi peptidus skaldo fiziologiniai fermentai ir jie dažnai blogai pasiskirsto gydomame organizme. Taigi, kaip vaistai, jie turi ribotą pritaikymą. Iš to seka, kad dabartiniu metu egzistuoja peptidinio hormono GnRH nepeptidinių antagonistų poreikis.
Išradimo santrauka
Šio išradimo tikslas yra sukurti mažos molekulinės masės nepeptidinius GnRH antagonistus, kurie išnaudotų abu aukščiau aprašytus veikimo mechanizmus. Nepeptidiniai GnRH agentai turi tinkamesnes fizikines, chemines ir biologines savybes, lyginant su peptidais ir bus tinkami vaistai ligoms, kurios yra tarpininkaujamos per hipofizės-gonados ašį, ir tiesiogiai taikant į receptorius ant auglio ląstelių. Reikia sukurti vaistus, kurie veiktų į šiuos receptorius ir gydytų ir priklausantį nuo hormonų, ir nuo jų nepriklausantį vėžį.
Kitas šio išradimo tikslas yra pateikti nepeptidinius junginius, kurie yra GnRH agentai (agonistai arba antagonistai), besirišančius su GnRH receptoriais ir tokiu būdu moduliuojančius aktyvumą ypatingai tokius, kurie yra veiksmingi GnRH antagonistai. Dar kitas šio išradimo tikslas yra pateikti efektyvų gydymą individams, kuriems yra reikalingas terapinis GnRH reguliavimas ir pateikti ligų ir būklių, kuriose tarpininkauja GnRH reguliavimas, gydymo būdus.
Tokie tikslai buvo pasiekti panaudojant šio išradimo nepeptidinius GnRH junginius, kurie yra tinkami kaip vaistai indikacijoms, kuriose tarpininkauja GnRH reguliavimas. Šio išradimo junginiai turi privalumą prieš peptidinius junginius, kadangi jie duoda geresnį biopasiskirstymą ir yra atsparūs fiziologinių fermentų vykdomai degradacijai. Šiame išradime taip pat pateikiami šių junginių sintezės būdai bei tarpiniai junginiai, tinkantys šiems junginiams pagaminti.
Išradimas yra skirtas junginiams, kurių bendroji formulė I:
kurioje:
X yra pasirinktas iš C=O, C=S, S=O ir S(O)2;
risi) —J yra 5-naris heterociklinis žiedas, turintis nuo 1 iki 4, geriausia 2 arba 3, heteroatomų, pasirinktų iš N, O ir S, o žiedas gali būti sotus, dalinai nesotus arba pilnai nesotus ir gali būti aromatinis;
R1 ir R2 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H ir žemesniojo alkilo;
R3 yra .pasirinktas iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra pasirinktas iš turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo ir heteroarilo ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose;
R4 ir R5 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose;
R6 ir R7 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, dinta arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra toks, kaip apibūdin aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose; arba R6 ir R7 paimti kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro galintį turėti pakaitų 5- arba 6-narį žiedą kuriame gali būti iki keturių heteroatomų, pasirinktų iš O, N ir S;
R8 yra lipofilinė liekana, pasirinkta iš turinčio ir neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 6-20 ribose; ir
R9 yra pasirinktas iš H ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, geriau žemesniojo alkilo.
Kai kuriuose įgyvendinimo variantuose R1 arba R2 gali būti -OH arba =0; ir/arba R8 taip pat gali būti vandenilis;
ir/arba R gali būti COR arba vandenilis; ir/arba R8 gali turėti bet kokį norimą anglies atomų skaičių;
ir/arba R8 ir R9 taip pat gali sudaryti žiedą ir/arba bet kokios dvi gretimos R grupės, tokios kaip R5 ir R6 arba R3 ir R4, gali sudaryti žiedą tokį, kaip aprašytas prie R6 ir R7;
ir/arba R6 gali būti COR; ir/arba (het) grupė gali turėti pakaitų arba neturėti pakaitų.
Be to, kituose įgyvendinimo variantuose R8 ir/arba R9 gali būti pasirinkti iš heterociklinių grupių arba bet kokio junginio, kuris sudaro amidinį ryšį su I formulės azotu. Tai yra R8 ir R9 gali būti bet kokios grupės, pradedant nuo anglies, prijungtos prie I bendrosios formulės azoto.
Tinkamiausi šio išradimo junginiai yra tie, kurių bendroji formulė II:
O %-R H kurioje kintamieji yra tokie, kaip apibūdinta aukščiau. Ypatingai tinkami yra junginiai, kuriųformulė III:
II.
kurioje R8 yra apibūdintas aukščiau. Tinkamiausios R8 grupės yra: arilas, CH2-arilas, -Chb-heteroarilas, -CHh-cikloalkilas ir -(CH2)nO-arilas, kur n yra sveikas skaičius nuo 1 iki 4.
Tinkamiausi šio išradimo junginiai yra: o
izomerus prie cikloheksilo pakaito; o
H n nh2
T
NH _ įskaitant ir eis-, ir trans-
cooh, ypatingai
COOH izomeras;
och3 jr
Apart aukščiau duotų formulių junginių šio išradimo GnRH agentai apima tokių junginių farmaciškai priimtinas druskas, multimerines formas, provaistus ir veikliuosius metabolitus. Tokie nepeptidiniai agentai yra farmaciškai tinkamesni už peptidinius agentus, nes jie turi geresnį biopasiskirstymąir atsparumą degradacijai, kurią vykdo fiziologiniai fermentai.
Šis išradimas taip pat yra susijęs su farmacinėmis kompozicijomis, į kurias įeina terapiškai efektyvus kiekis šio išradimo GnRH agento derinyje su farmaciškai priimtinu nešikliu arba skiedikliu. Be to, išradimas yra susijęs su žinduolių gonadotropinu sekrecijos reguliavimo būdais, apimančiais šio išradimo GnRH agentų terapiškai efektyvaus kiekio skyrimą.
Šis išradimas taip pat yra susijęs su būdais ir tarpiniais junginiais, tinkančiais I formulės junginiams gauti.
Kitos išradimo ypatybės, tikslai ir privalumai paaiškės iš toliau duodamo smulkaus šio išradimo aprašymo ir tinkamiausių jo įgyvendinimo variantų.
Smulkus išradimo aprašymas ir tinkamiausi jo įgyvendinimo variantai
Kai kurie šio išradimo junginiai turi vieną arba daugiau asimetrinių centrų ir gali duoti enantiomerus, diastereoizomerus ir kitas stereoizomerines formas. Laikoma, kad išradimas apima visus tokius galimus stereoizomerus, o taip pat jų racemines ir optiškai grynas formas. Jeigu čia aprašytuose junginiuose yra olefininiai dvigubieji ryšiai, laikoma, kad išradimas apima ir E, ir Z geometrinius izomerus.
Čia pateikiamose formulėse gali būti tautomerijos reiškinys. Nors šiame aprašyme parodytos formulės vaizduoja tik vieną iš galimų tautomerinių formų, reikėtų suprasti, kad nepaisant to išradimas apima visas tautomerines formas.
Terminas “alkilas” reiškia tiesiosios ir šakotosios grandinės alkilo grupes, turinčias nuo vieno iki dvylikos anglies atomų. Alkilo grupių pavyzdžiais yra metilas (Me), etilas, n-propilas, izopropilas, butilas, izobutilas, antr.-butilas, tret-butilas (tBu), pentilas, izopentilas, tret-pentilas, heksilas, izoheksilas ir pan. Terminas “žemesnysis alkilas” reiškia alkilą turintį 1-8 anglies atomus (Ci.8-alkilas). Tinkami turintys pakaitų alkilai yra: fluormetilas, difluormetilas, trifluormetilas, 2-fluoretilas, 3-fluorpropilas, hidroksimetilas, 2hidroksietilas, 3-hidroksipropilas ir panašūs.
Terminas “alkenilas reiškia tiesiosios ir šakotosios grandinės alkenilo grupes, turinčias nuo 2 iki 12 anglies atomų. Iliustracinės alkileno grupės yra prop-2-enilas, but-2-enilas, but-3-enilas, 2-metilprop-2-enilas, heks-2-enilas ir panašios.
Terminas “alkinilas” reiškia tiesiosios ir šakotosios grandinės alkinilo grupes, turinčias nuo 2 iki 12 anglies atomų. Alkinilo grupių pavyzdžiais yra prop-2-inilas, 3-metilpent-4-inilas, heks-2-inilas ir panašios.
Terminas “karbociklas” reiškia monociklinę arba policiklinę žiedinę struktūrą iš anglies atomų (be heteroatomu), turinčią kiekviename žiede 3-7 anglies atomus, kuri gali būti soti, dalinai soti arba nesoti. Karbociklų pavyzdžiais yra cikloalkilai ir arilai.
Terminas “heterociklas” reiškia monociklinę arba policiklinę žiedinę struktūrą su vienu arba daugiau heteroatomu, pasirinktų iš N, O ir S, ir turinčią nuo 3 iki 7 atomų (anglies atomai plius bet kokie heteroatomai) kiekviename žiede, kuris gali būti sotus, dalinai sotus arba nesotus. Heterociklų pavyzdžiais yra tetrahidrofuranilas, tetrahidropiranilas, azetidinilas, pirolidnilas, piperidinilas, piperazinilas ir panašūs.
Čia naudojamas terminas “cikloalkilai” reiškia sočius karbociklus, turinčius 3-12 anglies atomų, įskaitant biciklines ir triciklines cikloalkilines struktūras. Tinkamais cikloalkilais yra ciklopropilas, ciklobutilas, ciklopentilas, cikloheksilas, cikloheptilas ir panašūs.
Terminai “arilai” ir “heteroarilai” reiškia monociklines ir policiklines nesočias arba aromatines žiedines struktūras, kur “arilas” reiškia karbociklines, o “heteroarilas” - heterociklinės struktūras. Aromatinių žiedinių struktūrų pavyzdžiais yra fenilas, naftilas, 1,2,3,4-tetrahidronaftilas, furilas, tienilas, pirolilas, piridilas, piridinilas, pirazolilas, imidazolilas, pirazinilas, piridazinilas, 1,2,3-triazinilas, 1,2,4-oksadiazolilas, 1,3,4-oksadiazolilas, 1-Htetrazol-5-ilas, indolilas, chinolinilas, benzofuranilas, benzotiofenilas (tianaftalenilas) ir panašios. Tokiose liekanose gali būti vienas arba daugiau tinkamų pakaitų, pavyzdžiui, pakaitų, pasirinktų iš halogeno (F, Cl, Br arba I); žemesniojo alkilo; OH; NO2; CN; CO2H; O-žemesnysis alkilas; arilžemesnysis alkilas; CO2CH3; CONH2; OCH2CONH2; NH2; SO2NH2; OCHF2;
CF3; OCF3; ir panašių. Tokiose liekanose pakaitais taip pat gali būti kondensuotos žiedinės struktūros arba tilteliai, pavyzdžiui OCH2-O.
Terminas “aril-žemesnysis alkilas” reiškia žemesnįjį alkilą kuris turi arilo liekaną. Pavyzdžiais yra benzilas, fenetilas, piridilmetilas, naftilmetilas ir pan. Aril-žemesniajame alkile gali būti pakaitų.
Bendru atveju I formulės kintamųjų įvairiose liekanose arba funkcinėse grupėse gali būti vienas arba daugiau tinkamų pakaitų. Pakaitų pavyzdžiais yra halogenas (F, Cl, Br arba I), žemesnysis alkilas, -OH, -NO2, -CN, -CO2H, O-žemesnysis alkilas, -arilas, -aril-žemesnysis alkilas, -CO2CH3, -CONH2, OCH2CONH2, -NH2, -SO2NH2, halogenalkilas (pvz., -CF3, -CH2CF3), -0halogenalkilas (pvz., -OCF3, -0CHF2) ir pan.
Apart I formulės junginių, šio išradimo GnRH agentai apima I formulės junginių farmaciškai priimtinas druskas, multimerines formas, provaistus ir veikliuosius metabolitus. Tokie nepeptidiniai agentai yra farmaciškai tinkamesni už peptidinius agentus, nes jie turi geresnį biopasiskirstymą ir atsparumą degradacijai, kurią vykdo fiziologiniai fermentai.
Be to, laikoma, kad I formulės junginiai apima, jeigu yra tinkamos, šių junginių solvatuotas ir nesolvatuotas formas. Taigi, I formulė apima junginius, turinčius nurodytą struktūrą įskaitant hidratuotas ir nehidratuotas formas.
Kaip nurodyta aukščiau, šio išradimo GnRH agentai taip pat apima I formulės junginių veiklias tautomerines ir stereoizomerines formas, kurios gali būti nesunkiai gaunamos naudojant žinomus būdus. Pavyzdžiui, optiškai aktyvūs (R) ir (S) izomerai gali būti pagaminami panaudojant stereospecifinę sintezę, pvz. naudojant chiralinius sintonus ir chiralinius reagentus, arba perskiriant raceminius mišinius žinomais būdais.
GnRH agentai taip pat apima I formulės junginių veikliųjų formų multivalentines arba multimerines formas. Tokie “multimerai’’ gali būti pagaminti prijungiant arba sustatant daug veikliojo junginio kopijų labai arti viena kitos, pvz. panaudojant nešiklio liekanos duodamus tiltelius. Gali būti ištirti įvairių dimensijų multimerai (t.y. turintys įvairius veikliojo junginio kopijų skaičius), nustatant receptoriaus surišimo atžvilgiu optimalų multimero dydį. Tokių veikliųjų receptorių rišančių junginių multivalentinių formų su optimaliu atstumu tarp receptorių rišančių liekanų sukūrimas gali sustiprinti receptoriaus surišimą (žr. pavyzdžiui, Lee et ak, Biochem., 1984, 23:4255). Specialistas gali kontroliuoti multivalentiškumą ir atstumus, pasirinkdamas tinkamą nešiklio liekaną arba jungių elementus. Tinkamos liekanos yra kieti molekuliniai nešikliai, turintys daug funkcinių grupių, kurios gali reaguoti su funkcinėmis grupėmis, sujungtomis su šio išradimo junginiais. Daugybė nešiklio liekanų gali būti naudojama labai aktyviems multimerams pagaminti, įskaitant baltymus, tokius kaip BSA (jaučio serumo albuminas) arba HAS, peptidus, tokius kaip pentapeptidai, dekapeptidai, pentadekapeptidai ir panašūs, bei nebiologinius junginius, pasirinktus dėl jų naudingų poveikių į sugebėjimą absorbuotis, transportą ir pastovumą tiksliniame organizme. Funkcinės grupės nešiklio liekanoje, tokios kaip amino-, sulfhidrilo, hidroksilo ir alkilaminogrupės, gali būti pasirinktos taip, kad būtų gaunami stabilūs ryšiai su išradimo junginiais, optimalus atstumas tarp imobilizuotų junginių ir optimalios biologinės savybės.
Be to, šio išradimo GnRH agentai apima I formulės junginių farmaciškai priimtinas druskas. Terminas “farmaciškai priimtina” reiškia druskos formą kuri yra farmakologiškai tinkama ir iš esmės netoksiška subjektui, kuriam yra duodamas GnRH agentas. Farmaciškai priimtinos druskos apima įprastas adityvines druskas su rūgštimis arba adityvines druskas su bazėmis, sudarytas iš tinkamos netoksiškos organinių arba neorganinių rūgščių arba neorganinių bazių. Adityvinių druskų su rūgštimis pavyzdžiais yra druskos, gautos iš neorganinių rūgščių, tokių kaip hidrochlorido rūgštis, hidrobromido rūgštis, hidrojodido rūgštis, sulfato rūgštis, sulfamo rūgštis, fosfato rūgštis ir nitrato rūgštis, ir druskos, gautos iš organinių rūgščių, tokių kaip ptoluensulfonrūgštis, metansulfonrūgštis, etandisulfonrūgštis, izetono rūgštis, oksalo rūgštis, p-bromfenilsulfonrūgštis, karbonato rūgštis, gintaro rūgštis, citrinų rūgštis, benzenkarboksirūgštis, 2-acetoksibenzenkarboksirūgštis, acto rūgštis, fenilacto rūgštis, propiono rūgštis, glikolio rūgštis, stearino rūgštis, pieno rūgštis, obuolių rūgštis, vyno rūgštis, askorbo rūgštis, maleino rūgštis, hidroksimaleino rūgštis, glutamo rūgštis, salicilo rūgštis, sulfanilo rūgštis ir fumaro rūgštis. Adityvinių druskų su bazėmis pavyzdžiais yra druskos su amonio hidroksidais (pvz., ketvirtiniu amonio hidroksidu, tokiu kaip tetrametilamonio hidroksidas), druskos su neorganinėmis bazėmis, tokiomis kaip šarminių arba žemės šarminių metalų (pvz., natrio, kalio, ličio, kalcio arba magnio) hidroksidai, ir druskos su organinėmis bazėmis, tokiomis kaip aminai, benzilaminai, piperidinai ir pirolidinai.
Terminas “provaistas reiškia I formulės junginio metabolinį pirmtaką (arba jo druską), kuris yra farmaciškai priimtinas. Provaistas gali būti neaktyvus, kai jį gauna subjektas, bet in vivo jis yra paverčiamas I formulės veikliuoju junginiu. Terminas “veiklusis metabolitas” reiškia I formulės junginio metabolinį produktą kuris yra farmaciškai priimtinas ir veiksmingas. I formulės junginių provaistai ir veiklieji metabolitai gali būti nustatyti naudojant specialistams žinomus būdus.
Įvairių junginių formų aktyvumo' lygiui GnRH sistemoje nustatyti gali būti naudojamį įvairiausi žinomi testai ir metodikos. Norint nustatyti sąveiką su dominančiu receptoriumi yra naudojami ligando surišimo testai. Kai domina surišimas, gali būti naudojamas žymėtas receptorius, kur žymė yra fiuorescuojanti grupė, fermentas, radioizotopas arba panaši, kuri leidžia registruoti kiekybinį pokytį susijungiant su receptoriumi. Kitu atveju, specialistas gali pateikti antikūną receptoriui, kuris yra žymėtas ir gali duoti signalo stiprinimą. Surišimą taip pat galima nustatyti panaudojant su receptoriumi surišto ligando konkurencinį išstūmimą kur ligandas yra pažymėtas detektuojama žyme. Kai domina agonisto ir/arba antagonisto aktyvumas, gali būti tiriamas sveikas organizmas arba ląstelė ir gali būti matuojami organizmo arba ląstelės funkcijų pokyčiai kaip atsakas į dominančio junginio surišimą. Ląstelių atsakui sekti yra įvairių prietaisų tokių kaip mikrofiziometras, gaunamas iš Molecular Devices, Redvvood City, California. Specialistams yra žinomi in vitro ir in vivo testai, tinkami matuoti GnRH antagonistų aktyvumui. Žr. pvz., Bowers et ai., “LH suppresion in cultured rat pitutary cells treated with 1 ng of LHRH”, Endocrinology, 1980, 106:675-683 (in vitro) ir Corbin et ai., “Antiovulatory activity (AOA) in rats”, Endocr. Res. Commun. 1975, 2:1-23 (in vivo). Konkrečios galimų naudoti testų metodikos yra aprašytos žemiau.
Pavyzdžiui, GnRH receptoriaus antagonistai gali būti funkciškai įvertinti matuojant ekstraląstelinio parūgštėjimo greičių pokytį tokiu būdu. Yra nustatoma junginių geba blokuoti ekstraląstelinio parūgštėjimo, kuriame tarpininkauja GnRH HEK 293 ląstelėse, ekspresuojančiose žmogaus GnRH receptorius, greitį, kaip junginio antagonistinio aktyvumo matas in vitro. Maždaug 100000 ląstelių/kamerai yra imobilizuojama agarozės suspensijos terpėje (Molecular Devices) ir atliekama perfuzija su nebuferinta MEM terpe, naudojant Cytosensor® mikrofiziometrą (Molecular Devices). Ląstelėms leidžiama pasiekti pusiausvyrą kol bazinis parūgštėjimo greitis pasidaro stabilus (maždaug 1 vai.). Nustatomos kontrolinės dozės-atsako į GnRH (nuo 10'11 M iki 10'7 M) kreivės. Prieš stimuliuojant GnRH, junginiai inkubuojami 15 minučių ir įvertinamas antagonistinis aktyvumas. Po inkubacijos su tiriamaisiais junginiais gaunamos pakartotinės dozės-atsako į GnRH kreivės, nesant arba esant įvairioms tiriamojo junginio koncentracijoms. Atliekama Schild’o regresinė junginių analizė norint nustatyti, ar junginiai antagonizuoja GnRH tarpininkaujamus ekstraląstelinio parūgštėjimo greičių padidėjimus dėl konkurencinės sąveikos su GnRH receptoriumi.
Kitame teste gali būti matuojamas bendras inozitolfosfatų susikaupimas, panaudojant ekstrakciją iš ląstelių skruzdžių rūgštimi, o po to atskiriant fosfatus Dowex kolonėlėmis. Panaudojant tripsiną ląstelės yra suskaldomos, paskirstomos į 12 duobučių plokšteles ir pažymimos 3Hmioinozitoliu (0,5 Ci - 2 mCi mililitrui) laikant 16-18 vai. inozitolio neturinčioje terpėje. Po to terpė yra nusiurbiama ir reakcija stabdoma pridedant ledu atšaldytos 10 mM skruzdžių rūgšties, kuri taip pat tarnauja ląstelės lipidų ekstrakcijai. Inozitolfosfatai atskiriami jonų mainų chromatografija per Dowex kolonėles, kurios po to plaunamos 5 ml 10 mM mioinozitolio ir 10 mM skruzdžių rūgšties. Po to kolonėlės plaunamos 10 ml 60 mM natrio formiato ir 5 mM borakso, o bendras inozitolfosfatas eliuuojamas 4,5 ml 1M amonio formiato, 0,1 M skruzdžių rūgšties.
Tinkamiausi šio išradimo GnRH agentai yra tokie, kurie turi nanomolių eilės K, reikšmę.
Tinkamiausi šio išradimo junginiai yra parodyti tolimesnėje lentelėje:
Jung. Nr.
Mol. masė
492,704
492,704
627,869
465,63
431,577
429,6
475,625
446,631
443,627
443,627
443,584
461,599
Šio išradimo farmacinės kompozicijos turi efektyviai GnRH slopinantį kiekį bent vieno šio išradimo GnRH agento ir inertinį arba farmaciškai priimtiną nešiklį arba skiediklį. Šios kompozicijos gali būti pagamintos vienetinių dozių forma, tinkančia norimam vartojimo būdui, pvz., parenteriniam arba peroraliniam.
Gydyti ligoms arba būklėms, kuriose tarpininkaujja GnRH agonizmas arba antagonizmas, šio išradimo kompozicijos yra skiriamos tinkamos vaisto formos pavidalu, pagamintu sumaišant terapiškai efektyvų kiekį (t.y. GnRH moduliuojantį kiekį, kuris yra terapiškai veiksmingas) bent vieno šio išradimo GnRH agento (kaip veikliojo ingrediento) su vienu arba daugiau farmaciškai tinkamų nešiklių arba skiediklių. Tokios kompozicijos gali būti pagaminamos pagal įprastas metodikas, pvz. atitinkamai sumaišant, granuliuojant ir presuojant arba ištirpinant ingredientus žinomais būdais. Esant reikalui, farmacinėse kompozicijose gali būti naudojama vienas arba daugiau skirtingų veikliųjų ingredientų, tokiųkaip skirtingi GnRH antagonistai.
Farmacinis nešiklis gali būti arba kietas, arba skystas. Kietų nešiklių pavyzdžiais yra laktozė, sacharozė, talkas, želatina, agaras, pektinas, gumiarabikas, magnio stearatas, stearino rūgštis ir pan. Iliustraciniais skystais nešikliais yra sirupas, žemės riešutų aliejus, alyvų aliejus, vanduo ir pan. Panašiui būdu, į nešiklį arba skiediklį gali įeiti specialistams žinomos uždelsto išskyrimo arba išskyrimo po tam tikro laiko medžiagos, tokios kaip glicerilmonostearatas arba glicerildistearatas, vienos arba derinyje su vašku, etilceliulioze, hidroksipropilmetilceliuliozė, metilmetakrilatu arba pan.
Gali būti naudojamos įvairiausios farmacinės formos. Pavyzdžiui, jeigu yra naudojamas kietas nešiklis, preparatas gali būti talbletės, kietos želatininės kapsulės, miltelių, žirnelių, piliulių arba pastilių formos. Kieto nešiklio kiekis gali kisti plačiose ribose, pavyzdžiui, nuo maždaug 25 mg iki maždaug 1 g. Jeigu yra naudojamas-skystas nešiklis, preparatas gali būti sirupo, emulsijos, minkštos želatininės kapsulės, sterilių injekcinių tirpalų, suspensijos ampulėje arba buteliuke arba nevandeninės skystos suspensijos formos.
Norint gauti stabilią vandenyje tirpią dozuotą formą I formulės junginio farmaciškai priimtina druska gali būti ištirpinama organinės arba neorganinės rūgšties vandeniniame tirpale, tokiame kaip 0,3 M gintaro rūgšies tirpalas arba, dar geriau, citrinų rūgšties tirpalas. Jeigu tirpi druskos forma nėra prieinama, agentas gali būti ištirpinamas viename arba daugiau tinkamų kotirpiklių. Tinkamų kotirpiklių pavyzdžiais yra alkoholis, propilenglikolis, polietilenglikolis 300, polisorbatas 80, glicerolis ir panašūs, kurių koncentracijos yra nuo 0 % iki 60 % bendro tūrio. Pavyzdiniame įgyvendinimo variante I formulės junginys yra ištirpinamas DMSO ir praskiedžiamas vandeniu. Kompozicija taip pat gali būti I formulės junginio druskos tirpalo atitinkame vandeniniame tirpiklyje, tokiame kaip vanduo, izotoninis valgomosios druskos arba dekstrozės tirpalas, formos.
Šio išradimo farmacinės kompozicijos gali būti pagaminamos naudojant įprastas metodikas, pvz. sumaišymo, ištirpinimo, granuliavimo, žirnelių pagaminimo, nusodinimo, emulgavimo, įkapsuliavimo, įkorporavimo arba liofilizavimo būdus. Farmacinės kompozicijos gali būti sukomponuotos įprastu būdu, naudojant vieną arba daugiau fiziologiškai priimtinų nešiklių, turinčių pagalbinių ir papildomų medžiagų, kurios palengvina veikliojo junginio pavertimą farmacijoje naudojamais preparatais. Atitinkamos receptūros yra pasirinktos atsižvelgiant į pasirinktą vartojimo būdą.
Gaminant injekcijoms skirtus preparatus, šio išradimo agentai gali būti sukomponuojami vandeniniuose tirpaluose, geriausia fiziologiškai priimtinuose buferiuose, tokiuose kaip Hanks’o tirpalas, Ringerio tirpalas arba fiziologinis druskos tirpalas. Vartojimo per gleivinę receptūrose yra naudojamos atitinkamos prasiskverbimą per barjerą didinančios medžiagos ir jos gali būti pasirinktos iš šioje srityje žinomų medžiagų.
Peroraliniam vartojimui agentai gali būti nesunkiai paversti vaisto forma sumaišant veiklųjį ingredientą(us) su specialistams žinomais farmaciškai priimtinais nešikliais. Tokie nešikliai leidžia šio išradimo junginius įkomponuoti į tabletes, piliules, dražė, kapsules, skysčius, gelius, sirupus, tirštas suspensijas, suspensijas ir pan., kurias gydomas pacientas turi sugerti. Peroralinio vartojimo farmaciniai preparatai gali 'būti gaunami, sumaišant vieną arba daugiau agentų su kieta pagalbine medžiaga, jeigu reikia, sumalant gautą mišinį, mišinį paverčiant granulėmis, ir, jeigu norima, pridėjus tinkamų pagalbinių medžiagų pagaminamos tabletės arba tablečių šerdys. Tinkamomis pagalbinėmis medžiagomis yra užpildai, tokie kaip cukrus (pvz., laktozė, sacharozė, manitolis arba sorbitolis); ir celiuliozės preparatai (pvz., kukurūzų krakmolas, kviečių krakmolas, ryžių krakmolas, bulvių krakmolas, želatina, tragakanto der/a, metilceliuliozė, hidroksipropilmetilceliuliozė, natrio karboksimetilceliuliozė ir/arba polivinilpirolidonas (PVP)). Jeigu norima, galima pridėti dezintegrantu, tokių kaip susiūtas PVP, agaras arba algino rūgštis arba jos druska, kaip antai natrio alginatas.
Dražė šerdys yra padengiamos tinkamomis dangomis. Šiam tikslui gali būti naudojami koncentruoti cukraus tirpalai, kuriuose gali būti gumiarabiko,
PVP, Carbopol™ gelio, polietilenglikolio, titano dioksido, lakavimo tirpalų ir/arba vienas arba daugiau tinkamų organinių tirpiklių arba tirpiklių mišinių. į tablečių arba dražė dangas gali būti pridėta dažų arba pigmentų įvairių veikliojo junginio dozių identifikavimui arba charakterizavimui.
Į farmacinių preparatų formas, kurios gali būti vartojamos peroraliniu būdu, įeina iš želatinos padarytos sumaunamos kapsulės, o taip pat ir minkštos, iš želatinos ir plastifikatoriaus, tokio kaip glicerolis arba sorbitolis, padarytos užlydytos kapsulės. Sumaunamose kapsulėse gali būti veiklusis ingredientas mišinyje su vienu arba daugiau užpildų, tokių kaip laktozė, rišikliais, tokiais kaip krakmolai, ir/arba tepalais, tokiais kaip talkas arba magnio stearatas, ir, esant reikalui, stabilizatoriais. Minkštose kapsulėse veikliusis junginys gali būti ištirpintas arba suspenduotas tinkamame skystyje, tokiame kaip riebaliniai aliejai, skystas parafinas arba skystas polietilengiikolis. Be to, gali būti pridėta stabilizatorių. Žandinio vartojimo kompozicijos gali būti pagamintos tablečių arba piliulių formos įprastu būdu.
Vartojimui inhaliacijų būdu šio išradimo junginiai gali būti patogiai pateikiami aerozolinio purškimo iš vienodą slėgį palaikančių flakonų arba pulverizatorių forma, naudojant tinkamą propelentą pvz. dichlordifluormetaną trichlorfluormetaną dichlortetrafluoretaną anglies dioksidą arba kitas tinkamas dujas. Vienodą slėgį palaikančio aerozolio atveju dozė gali būti nustatyta įdedant vožtuvą kad būtų paduodamas apibrėžtas kiekis. Kapsulės ir patronai iš, pavyzdžiui, želatinos, skirti naudoti inhaliatoriuje arba įpūtiklyje, gali būti pagaminami įdedant junginio ir tinkamo miltelių pavidalo pagrindo, tokio kaip laktozė arba krakmolas, mišinį.
Agentai gali būti sukomponuoti parenteriniam vartojimui injekcijų būdu, pvz. dozuotomis injekcijomis, arba nepertraukiamai infuzijai. Injekcijoms skirtos vaisto formos gali būti pateikiamos vienetinėmis dozėmis, pvz. ampulėmis, arba daugelį dozių turinčiuose konteineriuose, pridėjus apsaugančios medžiagos. Kompozicijos gali būti suspensijų, tirpalų arba emulsijų alyvos tipo arba vandeniniuose tirpikliuose formos, ir jose gali būti formą palaikančių agentų kaip antai suspenduojančių stabilizuojančių ir/arba disperguojančių agentų.
Į parenteriniam varojimui skirtas vaisto formas įeina veikliojo junginio vandenyje tirpios formos vandeniniai tirpalai. Be to, gali būti pagamintos veikliųjų junginių suspensijos kaip atitinkamos injekcinės suspensijos aliejuose. Tinkamais lipofiliniais tirpikliais arba skiedikliais yra riebaliniai aliejai, tokie kaip sezamo aliejus, arba sintetiniai riebalų rūgščių esteriai, tokie kaip etiloleatas arba trigliceridai, arba liposomos. Vandeninėse injekcijoms skirtose suspensijose gali būti medžiagų, kurios padidina suspensijos klampumą, tokių kaip natrio karboksimetilceliuliozė, sorbitolis arba dekstranas. Esant reikalui, suspensijose gali būti tinkamų stabilizatorių arba agentų, kurie padidina junginių tirpumą ir galimybę pagaminti labai koncentruotus tirpalus.
Kitu atveju, veiklusis ingredientas gali būti miltelių formoje, kuriuos prieš vartojimą reikia praskiesti tinkamu tirpikliu, pvz. steriliu pirogenų neturinčiu vandeniu. Junginiai taip pat gali būti įdėti ir į rektalines kompozicijas, tokias kaip žvakutės arba sulaikymo klizmos, pvz. turinčias įprastus žvakučių pagrindus, kaip antai kakavos sviestą arba kitus gliceridus.
Apart anksčiau aprašytų vaisto formų, junginiai gali būti sukomponuoti depo preparatų pavidalu. Tokios ilgai veikiančios vaisto formos gali būti vartojamos implantuojant (pavyzdžiui, po oda arba į raumenis) arba kaip intraraumeninės injekcijos. Pavyzdžiui, junginiai gali būti sukomponuoti su tinkamomis polimerinėmis arba hidrofobinėmis medžiagomis (pavyzdžiui, kaip emulsijos priimtiname aliejuje) arba įkomponuoti į jonitinės dervas, arba pagaminti jų sunkiai tirpstantys dariniai, pavyzdžiui, sunkiai tirpstanti druska.
Tinkamo farmacinio nešiklio išradimo hidrofobiniams junginiams pavyzdys yra kotirpiklių sistema, į kurią įeina benzilo alkoholis, nepolinė paviršinio aktyvumo medžiaga, besimaišantis su vandeniu organinis polimeras ir vandeninė fazė. Kotirpiklių sistema gali būti VPD kotirpiklių sistema (VPD yra 3 % masė/tūris benzilo alkoholio, 8 % masė/tūris nepolinės paviršinio aktyvumo medžiagos - polisorbato 80 ir 65 % masė/tūris polietilenglikolio 300 tirpalas, praskiestas iki reikiamo tūrio absoliučiu etanoliu). VPD kotirpiklių sistema (VPD:5W) susideda iš VPD, praskiestos 1:1 5 % dekstroze vandens tirpale. Ši kotirpiklių sistema gerai tirpina hidrofobinius junginius, o gauta kompozicija turi mažą toksiškumą sistemiškai vartojant. Suprantama, kad kotirpiklių sistemos proporcijos gali būti keičiamos priklausomai nuo tirpumo ir toksiškumo charakteristikų. Be to, gali būti keičiama kotirpiklių komponentų tapatybė: pavyzdžiui, vietoj polisorbato 80 gali būti naudojamos kitos mažai toksiškos paviršinio aktyvumo medžiagos; gali būti keičiamas polietilenglikolio frakcijos dydis; galima pridėti vieną arba daugiau biologiškai priimtinų polimerų (pvz. PVP) arba jais pakeisti polietilenglikolį; o dekstrozė gali būti pakeista kitais cukrais arba polisacharidais.
Kitu atveju, hidrofobiniams farmaciniams junginiams gali būti naudojamos kitos įvedimo sistemos. Liposomos ir emulsijos yra gerai žinomi hidrofobinių vaistų įvedimo tirpiklių arba nešiklių pavyzdžiai ir gali būti naudojamos atitinkamiems preparatams pagaminti. Taip pat gali būti naudojami kai kurie organiniai tirpikliai, kaip antai dimetilsulfoksidas, nors tai gali sukelti toksiškumo padidėjimą. Be to, junginiai gali būti įvedami naudojant prolonguoto išskyrimo sistemą tokią kaip kietų hidrofobinių polimerų, kuriuose yra terapinio agento, pusiau laidžias matricas. Buvo rastos įvairios prolonguoto išskyrimo medžiagos ir jas žino specialistai. Prolonguoto išskyrimo kapsulės, priklausomai nuo jų cheminės prigimties, išskiria junginius per laikotarpį nuo kelių savaičių iki daugiau nei 100 dienų. Priklausomai nuo terapinio reagento cheminės prigimties ir biologinio stabilumo gali būti naudojamos papildomos baltymo stabilizavimo strategijos.
Farmacinėse kompozicijose taip pat gali būti tinkamų kietos arba gelio fazės nešiklių arba pagalbinių medžiagų. Tokių nešiklių arba pagalbinių medžiagų pavyzdžiais yra kalcio karbonatas, kalcio fosfatas, cukrai, krakmolai, celiuliozės dariniai, želatina ir polimerai, tokie kaip polietilenglikoliai.
Kai kurie šio išradimo junginiai gali būti pateikiami kaip druskos su farmaciškai priimtinais priešjoniais. Farmaciškai priimtinos druskos gali būti sudarytos su daugeliu rūgščių, įskaitant hidrochlorido, sulfato, acto, pieno, vyno, obuolių gintaro ir panašias rūgštis. Druskos yra linkę geriau tirpti vandeniniuose arba kituose protoniniuose tirpikliuose nei atitinkamos laisvos bazės.
Reikėtų suprasti, kad konkrečios šio išradimo kompozicijose naudojamų agentų dozės keisis priklausomai nuo konkretaus naudojamo komplekso, konkrečios vaistine forma paverstos kompozicijos, vartojimo būdo ir konkrečios gydomos vietos, šeimininko ir ligos. Optimalias dozes išvardintoms būklėms gali nustatyti specialistai, naudodami įprastus dozės nustatymo testus, atsižvelgiant į duoto junginio eksperimentinius duomenis. Peroralinio vartojimo atveju pavyzdinė paprastai vartojama dienos dozė bus nuo maždaug 0,001 iki maždaug 1000 mg/kg kūno masės, gydymo kursus kartojant atitinkamais intervalais. Provaistą vartojimo atveju dozės bus imamos tokios, kurios yra chemiškai ekvivalentinės pilnai veikliųjų junginių dozėms.
Toliau yra duodami konkrečių šio išradimo farmacinių preparatų pavyzdžiai.
Parenterinė kompozicija: Norint pagaminti šio išradimo farmacinę kompoziciją tinkamą vartoti injekcijomis, 100 mg I formulės junginio farmaciškai priimtinos vandenyje tirpios druskos ištirpinama DMSO ir sumaišoma su 10 ml 0,9 % sterilaus valgomosios druskos tirpalo. Gautas mišinys supilamas į vienetines dozuotas formas, tinkamas vartoti injekcijų būdu.
Peroralinė kompozicija: Norint pagaminti peroraliniu būdu vartojamą farmacinę kompoziciją 100 mg I formulės junginio sumaišoma su 750 mg laktozės. Gautas mišinys sudedamas į vienetines dozuotas formas, tinkamas vartoti peroraliniu būdu, tokias kaip kieta želatininė kapsulė.
GnRH REAGENTU IR JUNGINIŲ SINTEZĖ
A. Konstrukcinio bloko pavyzdys
Konstrukciniai blokai naftalino pagrindu: Tinkamas acilinimo agentas pagaminamas panaudojant Frydelio-Kraftso alkilinimų seką kaip parodyta žemiau:
junginys gali būti pagaminamas tokiu būdu:
Į 3 I koncentruotos hidrochlorido rūgšties, esančios didelėje
Erlenmejerio kolboje, dalimis pridedama 2,5-dimetil-2,5-heksandiolio (200 g, 1,37 mmol). Diolis greitai ištirpsta hidrochlorido rūgštyje ir iš tirpalo į nuosėdas iškrenta susidaręs norimas produktas - 2,5-dichlor-2,5-dimetilheksanas. Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 4 valandas. Supilama 1
I 50 % etilacetato heksanuose, atskiriamas organinis sluoksnis ir praunSmas kelis kartus vandeniu (kol pagal pH popierėlį pasidaro neutralus). Organiniai tirpikliai nugarinami vakuume kambario temperatūroje. Negrynas 2,5-dichlor2.5- dimetilheksanas ištirpinamas heksanuose ir perleidžiamas per silikagelio sluoksnį (10:1), išplaunant heksanais. Ši galutinė filtravimo stadija po organinio tirpiklio nugarinimo vakuume duoda baltą kietą medžiagą. Gryno
2.5- dichlor-2,5-dimetilheksano gauta 230 g, 92 % išeiga. 1H BMR (CDCb, δ): 1,96 (4H, s); 1,61 (12H, s).
Naudojant panašią metodiką 2,4-dimetil-2,4-pentandiolis buvo paverstas į 2,4-dichlor-2,4-dimetilpentaną. 1H BMR (CDCb, δ): 2,42 (2H, s); 1,73 (12H, s).
1,1,4,4,6-Pentametil-1,2,3,4-tetrahidronaftalenas 4: į 2,5-dichlor-2,5dimetilheksano 2 (10 g, 54,7 mmol) tirpalą toluene (270 ml, 0,2 M) lėtai per 15 minučių pridedama kieto aliuminio trichlorido (5,47 g, 41 mmol). Reakcija pasibaigia po 10 min., kontroliuojant plonasluoksne chromatografija (TLC) heksanuose. Nesureagavęs aliuminio trichloridas lėtai per 10 min. suskaldomas vandeniu. Dar pridedama tolueno (250 ml) ir ekstrahuojamas produktas iš vandeninio sluoksnio. Organinis sluoksnis perleidžiamas per silikagelio sluoksnelį (40 g), eliuuojant toluenu. Organinis sluoksnis nugarinamas vakuume iki sausos liekanos ir gaunamas 1,1,4,4,6-pentametil1,2,3,4-tetrahidronaftalenas 4 (11 g, 97 % išeiga). BMR: 1,29 (s, 6H), 1,28 (s, 6H), 1,69 (s, 4H), 2,32 (s, 3H), 7,22 (d, 1H), 7,12 (s, 1H), 6,97 (dd, 1H).
Metilo 5-[(3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenil)metil]-2furoatas 6: Į tirpalą kuriame yra 1,1,4,4,6-pentametil-1,2,3,4tetrahidronaftaleno 4 (20 g, 99 mmol) ir metilo 5-(chlormetil)-2-furoato 5 (17,28 g, 99 mmol) metileno chloride (500 ml, 0,2 M) metileno chlorido virimo temperatūroje lėtai pridedama kieto aliuminio trichlorido (16,46 g, 124 mmol). Tirpalas virinamas su grįžtamu šaldytuvu dar dvi valandas. Reakcija kontroliuojama TLC 10 % etilacetato/heksanų tirpale. Reakcijos mišinys atšaldomas iki kambario temperatūros ir per 15 min.‘suskaldomas vandeniu nesureagavęs aliuminio trichloridas. Negrynas produktas ekstrahuojamas metileno chloridu, perleidžiamas per siiikagelį (80 g) ir eliuuojamas metileno chloridu. Tirpiklis nugarinamas vakuume iki sirupo pavidalo liekanos. Negrynas produktas gryninamas perleidžiant per silikageliu (300 g) užpildytą filtravimo kolonėlę. Metilo 5-((3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2naftalenil)metilj-2-furoatas 6 eliuuojamas 2 % etilacetatu/heksanuose ir gaunama 15,4 g (46 % išeiga). BMR: 1,25 (s, 6H), 1,28 (s, 6H), 1,67 (s, 4H), 2,23 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 3,97 (s, 2H), 5,95 (d, 1 H), 7,09 (m, 3H).
5-[(3,5,5,8,8-Pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenil)metil]-2-furankarboksirūgštis 7: į tirpalą kuriame yra metilo 5-((3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8tetrahidro-2-naftalenil)metil]-2-furoato 6 (15,1 g, 44 mmol), MeOH (175 ml) ir vandenyje (175 ml) pridedamas NaOH (3,53 g, 88,3.mmol) tirpalas vandenyje (29 ml), Reakcijos mišinys maišomas per naktį. Pasibaigus reakcijai, sprendžiant pagal TLC, tirpalas parūgštinamas 1M HCI iki pH 2. Negrynas produktas išekstrahuojamas į organinį sluoksnį · naudojant etilacetatą ir sukoncentravus gaunama 5-((3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2naftalenil)metilj-2-furan-karboksirūgštis 7 (15,0 g, 99 % išeiga). BMR: 1,26 (s, 6H), 1,28 (s, 6H), 1,68 (s, 4H), 2,24 (s, 3H), 4,00 (S; 2H), 6,01 (d, 1 H), 7,10 (s, 2H), 7,23 (d, 1H). . \ /
5-[(3,5,5,8,8-Pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenil)metil]-2furoilchloridas 8: Į tirpalą kuriame yra 5-((3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8tetrahidro-2-naftalenil)metil]-2-furan-karboksirūgšties 7 (20,15 g, 61,77 mmol), metileno chloride (310 ml) pridedama tionilo chlorido (45 ml, 617 mmol). Reakcijos mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu *5 vai. ir pridedama kita tionilo chlorido porcija (45 ml, 617 mmol). Reakcijos mišinys maišomas per naktį kambario temperatūroje. Tirpalas sukoncentruojamas iki sirupo pavidalo medžiagos, perleidžiamas per silikagelio sluoksnį (50 g), plaunant 3 % heksanais ir sukoncentravus vakuume gaunamas 5-[(3,5,5,8,8-pentametil5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenil)metil]-2-furoilchloridas 8 (17 g, 80 % išeiga). BMR: 1,26 (s, 6H), 1,28 (s, 6H), 1,68 (s, 4H). 2,25 (s, 3H), 4,00 (s, 2H), 6,11 (d, 1H).7,10(s, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,41 (d, 1H). » ,
Šiomis reakcijos sąlygomis gali būti pagaminami kiti konstrukciniai blokai, kurie turi įvairias funkcines grupes, esančias aukščiau parodytoje bendrojoje formulėje.
A. Acilinimo pavyzdžiai
Tolimesnėje schemoje parodyta keletas pavyzdžių, kuriuose gali būti naudojamos bendrosios žemiau duotos acilinimo metodikos.
Kopuliuojamų su Y reagentų pavyzdžiai
Aminai ištirpinami arba suspenduojami dichlormetane, dichloretane, etilacetate, acetonitrile arba panašiame tirpiklyje (0,2 M koncentracija), po to pridedama chloranhidridinio reagento (1,00 mmol. -ekv.). Į mišinį pridedama trietilamino (5,00 mmol. ekv.), ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 12-48 vai. Tirpikliai nugarinami vakuume. Produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojant atitinkamu eliuavimo tirpikliu (pvz. 3:1 heksanais.etilacetate). Tirpikliai nugarinami vakuume ir gaunamas acilintas produktas.
Kitu atveju, reakcijos mišinys praskiedžiamas dichlormetanu (imamas penkis kartus didesnis dichlormetano tūris). ir plaunamas sočiu natrio rūgščiuoju karbonatu. Organinis sluoksnis džiovinamas magnio sulfatu ir nufiltruojamas. Produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę ir eliuuojamas atitinkamu eliuavimo tirpikliu (pvz. 3:1 heksanais:etilacetate). Tirpikliai nugarinami vakuume ir gaunamas acilintas produktas.
Naudojant bendrąją reakcijos metodiką galima nesunkiai pagaminti daug junginių ir ištirti jų (grynų arba negrynų medžiagų) aktyvumą Ši metodika gerai tinka anilinams, aminams, benzilaminams, hidrazinams, hidrazidams, alkoholiams ir pan.
Žemiau parodyti konkretūs pavyzdžiai, rodantys įvairias pagal bendrąą metodiką gautas struktūras:
Jung. Nr. Struktūrinė formulė
Mol. masė 492,704
492,704
627,869
465,63
O
431,“
429,6
475,625
446,631
443,627
443,627
443,584
461,599 „ ..........r . LT 4904 B
C. Guanidmą turinčių junginių sintezė ir acilinimas
stadija - Blokuoto junginio gavimas panaudojant 1-(N,N’-diBociouanidinmetilinimą: Alternatyviose 1(A) ir 1(B) toliau aprašytose stadijose pateikiamos dvi bendrosios 1-(N,N’-diBoc)-guanidinmetilinimo metodikos.
(A) stadija: Į diamino (2,00 mmol. ekv.) tirpalą THF (0,7 M) supilamas 1 -H-pirazol-1 -(N,N-bis(tret-butoksikarbonil)karboksamidino) (1,00 mmol. ekv.) tirpalas THF (0,7 M). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 3 vai. arba tol, kol pagal TLC nebegalima pastebėti virsmo. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje ir gaunama sirupo pavidalo liekana, kuri ištirpinama etilacetate (~1,5 karto didesnis kiekis nei reakcijoje panaudotas THF tūris, arba liekanai ištirpinti reikalingas tirpiklio kiekis) ir plaunama vandeniu iki neutralaus pH. Organinis sluoksnis plaunamas sočiu NaCI tirpalu, džiovinamas MgSO4 ir sukoncentruojamas. Produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojant atitinkamu tirpikliu (kurį galima nesunkiai nustatyti, pvz,, naudojant 5 % MeOH dichlormetane, kaip išeities tašką). Tirpikliai nugarinami vakuume ir gaunamas 1-(N,N’-diBoc)guanidinmetilo grupę turintis aminas. Blokuotai Ν,Ν’-diBoc-guanidino grupei įvesti į diaminus gali būti naudojami ir kiti reagentai, tokie kaip 1,3-bis(tretbutoksikarbonil)-2-metil-2-tiopseudokarbamidas (CAS No. 107819-90-0). Kitu atveju, vietoj aukščiau aprašyto tirpalo galima tiesiai pridėti kieto 1 -H-pirazol1 -(N, N-bis(tret.-butoksikarbonil)karboksamidino.
1(B) stadija: į diamino (1,00 mmol. ekv.) tirpaląTHF (0,07 M) dalimis (per 10 min.) pridedama kieto 1-H-pirazol-1-(N, N-bis(tretbutoksikarbonil)karboksamidino) (1,00 mmol. ekv.). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 0,5 vai. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje ir gaunama sirupo pavidalo liekana, kuri ištirpinama etilacetate (0,5 karto didesnis kiekis nei reakcijoje panaudotas THF tūris, arba liekanai ištirpinti reikalingas tirpiklio kiekis) ir plaunama du kartus vandeniu. Atskiriami sluoksniai, ir produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojant 100 % etilacetatu nepolinėms priemaišoms pašalinti, po to 100 % izopropilo alkoholiu, ir gaunamas grynas produktas. Tirpikliai nugarinami vakuume ir gaunamas norimas produktas. Tipiškos TLC sąlygos yra 15:85:0,1 metanolio/chloroformo/acto rūgšties. Tipiškos norimo blokuoto junginio išeigos yra 40-44 % ribose.
stadija - Redukcinis amininimas (jeigu reikia): Redukcinis amininimas gali būti vykdomas tinkamu būdu. Aldehidų ir ketonų redukcinį amininimą su natrio triacetoksiborhidridu, žr. pagrindinai: Abdel-Magid et ai., J. Org. Chem., 1996, 61:3849. Žemiau yra aprašytos dvi alternatyvios redukcinio amininimo metodikos.
2(A) stadija: 3,5,5,8,8-Pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftaldehidas (1,00 mmol. ekv.) ir 1-(N,N’-diBoc)-guanidinmetilo grupę turintis aminas (1,00 mmol. ekv.) ištirpinami metanolyje (0,09 M). Tada pridedama 1 % ledinės acto rūgšties tirpalo metanolyje (10 % naudoto metanolio tūrio), o po to NaCNBH3 (1,00 mmol. ekv.), ir reakcijos mišinys maišomas per naktį. Reakcijos mišinys kontroliuojamas TLC, išryškinant tris komponentus (aldehidą norimą produktą ir pradinį guanidino darinį). Reakcija sustabdoma pridedant vandens (50 % naudoto metanolio tūrio), ekstrahuojama dichlormetanu (10 kartų didesniu tūriu nei naudota metanolio) ir plaunama sočiu natrio rūgščiuoju karbonatu. Organinis sluoksnis džiovinamas magnio sulfatu, nufiltruojamas ir sukoncentruojamas. Produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojant atitinkamu eliuavimo tirpikliu (pvz., 3:1 etilacetatu heksanuose nesureagavusiam aldehidui pašalinti, po to eliuuojant 1:1 etilacetatu heksanuose), ir gaunamas norimas redukcinio amininimo produktas. Kai kuriais atvejais pavirinimas su grįžtamu šaldytuvu 2 vai. palengvina imino susidarymo reakciją. Žr. taip pat Abdel-Magid et ai., J. Org. Chem., 1996, 61:3849, kur aprašomas aldehidų ir ketonų redukcinis amininimas natrio triacetoksiborhidridu.
2(B) stadiia: 3,5,5,8,8-Pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftaldehidas (1,00 mmol. ekv.) ir 1-(N,N’-diBoc)-guanidinmetilo grupę turintis aminas (1,00 mmol. ekv.) ištirpinami metanolyje (0,09 M). Tada pridedama NaBH4 (1,00 mmol. ekv.) (etanolyje, panaudojant žemiau duotas mažų kiekių metodikas arba atsargiai dedant kietą medžiagą) ir reakcijos mišinys maišomas per naktį. Reakcijos mišinys kontroliuojamas TLC, išryškinant tris komponentus (aldehidą norimą produktą ir pradinį guanidino darinį). Reakcija sustabdoma pridedant vandens (50 % naudoto metanolio tūrio), ekstrahuojama dichlormetanu (10 kartų didesniu tūriu nei naudota metanolio) ir plaunama sočiu natrio rūgščiuoju karbonatu. Organinis sluoksnis džiovinamas magnio sulfatu, nufiltruojamas ir sukoncentruojamas. Produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojant atitinkamu eliuavimo tirpikliu (jį gali nesunkiai nustatyti specialistas arba, pvz., 3:1 etilacetatu heksanuose nesureagavusiam aldehidui pašalinti, po to eliuuojant 1:1 etilacetatu heksanuose), ir gaunamas norimas redukcinio amininimo produktas. Kai kuriais atvejais pavirinimas su grįžtamu šaldytuvu 2 vai. turėtų palengvinti imino susidarymo reakciją.
stadija - Acilinimas: Redukcinio amininimo reakcijos produktai (1,00 mmol. ekv.) ištirpinami dichlormetane (nuo -0,2 iki 0,05 M, priklausomai nuo substratų tirpumų), po to pridedama trietilamino (2,00 mmol. ekv.) ir 2furoilchloridinio reagento 8 (1,00 mmol. ekv.). Reakcijos mišinys maišomas per naktį kambario temperatūroje. Reakcijos mišinys praskiedžiamas dichlormetanu (5 kartus didesniu kiekiu nei naudota dichlormetano) ir plaunama sočiu rūgščiuoju natrio karbonatu. Organinis sluoksnis džiovinamas magnio sulfatu ir nufiltruojamas. Produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojant atitinkamu eliuavimo tirpikliu (pvz. 3.Ί heksanais:etilacetatu). Tirpiklius nugarinus vakuume, gaunamas acilintas produktas.
stadija - Bazinės grupės deblokavimas: Acilinimo stadijos produktas (1,00 mmol. ekv.) ištirpinamas 25-50 % TFA tirpale dichlormetane (0,02 M) ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje (15-20 minučių; tirpalas pasidaro šiek tiek rausvai oranžinis). Reakcijos mišinys maišomas dar 1 vai. 20 min. arba tol, kol BOC deblokavimas pilnai įvyksta. Reakcija pabaigiama sukoncentruojant vakuume, po to pridedama vandens/acetonitrilo (0,006 M) ir liofilizuojama per naktį. Galutinis junginys gryninamas didelio efektyvumo skystinės chromatografijos (HPLC) metodu. Tirpikliai nugarinami vakuume ir gaunamas produktas (išeigos yra 30-50 % intervale).
Kita Ν,Ν’-bis-BOC guanidinų deblokavimo metodika naudojant alavo tetrachloridą kuri gali duoti atitinkamas guanidinio chlorido druskas, yra aprašyta Miel et ai., Tetrahedron Letters, 1997, 38:7865-7866.
junginys gali būti pagamintas pagal aukščiau parodytas stadijas, išskyrus 2 stadiją kaip parodyta tolimesnėje schemoje:
O
Reagentu paruošimas: Junginių sintezei reikalingi reagentai gali būti gauti arba paruošti pagal šioje srityje žinomas metodikas. Pavyzdžiui, laisvų aminų gavimas iš įprastųjų druskų ir pradiniai tirpalai gali būti naudingi mažos apimties sintezėje. Taip pat žr. Abdel-Magid et ak, “Reductive amination of aldehydes and ketones with sodium triacetoksiborhydride”, J. Org. Chem., 1996, 61:3849.
Laisvų bazių tirpalai metanolyje gali būti pagaminami iš hidrochlorido, dihidrochlorido, hidrobromido arba kitų druskų, kurių laisva bazė yra tirpi metanolyje. Šioje metodikoje, jeigu pridėta natrio metoksido, reikia saugoti, kad nepatektų oras, kadangi aminų laisvos bazės, ypatingai pirminiai aminai iš oro sugeria anglies dioksidą ir sudaro druskas. 10 ml 0,1 M laisvos bazės tirpalo metanolyje gali būti pagaminama tokiu būdu. Į taruotą Erlenmejerio kolbą su magnetinio maišiklio magnetu atsveriama 1,0 mmol monohidrochlorido ir pridedama 7 ml metanolio. Į maišomą suspensiją pridedama 229 μΙ (1,0 mmol, 1 ekv.) natrio metoksido metanolyje (25 % magai masę, 4,37 M), kolba užkemšama ir mišinys intensyviai maišomas 2 valandas. Suspensija kartais pakeičia išvaizdą kadangi susidaro smulkios pieno pavidalo natrio chlorido nuosėdos. Suspensija nufiltruojama per 15 ml vidutinio tankumo stiklo filtrą medžiaga ant filtro perplaunama 1-2 ml metanolio, filtratas perpilamas į 20 ml talpos indą ir praskiedžiamas iki 10 ml metanoliu. Teorinė natrio chlorido išeiga yra beveik 59 mg, bet išskyrimas paprastai nėra kiekybinis, nes natrio chloridas yra šiek tiek tirpus metanolyje. Dihidrochlorido atveju reikia antro natrio metoksido ekvivalento (458 μΙ).
Natrio borhidrido 0,5 M tirpalas etanolyje gali būti pagaminamas tokiu būdu. Natrio borhidridas (520 mg, 13,8 mmol) maišomas gryname (nedenatūruotame) bevandeniame etanolyje (25 ml) -2-3 min. Suspensija nufiltruojama per vidutinio tankumo stiklinį filtrą nedideliam kieKiai neištirpusios kietos medžiagos pašalinti (paprastai apie 5 % nuo visos borhidrido masės, arba 25 mg). Filtratas turi būti bespalvis tirpalas, kuris išskiria labai nedaug vandenilio. Šis tirpalas turi būti naudojamas tuoj pat, nes per kelias valandas jis žymiai suskyla ir gaunamos želatinos pavidalo nuosėdos. Natrio borhidridas yra higroskopinis, taigi gaminant tirpalą atsvėrus kietą medžiagą reikia vengti ją laikyti ore. Natrio borhidrido tirpumas etanolyje kambario temperatūroje yra apie 4 %. Tai atitinka šiek tiek daugiau nei 0,8 M. Tačiau kartais, net ir pamaišius >5 minutes, lieka neištirpęs nedidelis kietos medžiagos kiekis nepriklausomai nuo gaminamos koncentracijos.
Norint atlikti nedidelės apimties I formulės junginių sintezę, žemiau aprašytos reakcijos gali būti vykdomos pagaminant įvairius reagentus, tinkančius aukščiau aprašytai reakcijos schemai. Likusioje aprašymo dalyje visos temperatūros yra duotos Celsijaus laipsniais, o visos dalys ir procentai yra pagal masę, jeigu nenurodyta kitaip.
Įvairios pradinės medžiagos ir kiti reagentai gali būti gaunami iš prekybinių tiekėjų, tokių kaip Aldich Chemical Company arba Lancaster Synthesis Ltd., ir naudojami be papildomo gryninimo, jeigu nenurodyta kitaip. Tetrahidrofuranas (THF) ir Ν,Ν-dimetilformamidas (DMF) yra gauti iš Aldrich SureSeal® buteliuose ir yra naudojami tokie, kokie gauti. Visi tirpikliai gryninami naudojant standartinius žinomus metodus, jeigu nenurodyta kitaip.
Toliau parodytos reakcijos atliktos esant teigiamam azoto slėgiui arba su džiovinimo vamzdeliu kambario temperatūroje G’eigu nenurodyta kitaip) bevandeniuose tirpikliuose, o reakcijos kolbos uždarytos guminėmis pertvaromis, kad substratus būtų galima įleisti švirkštu. Stikliniai indai buvo išdžiovinti krosnyje ir/arba karštyje. Analitinė plonasluoksnė chromatografija buvo vykdoma ant stiklinių silikagelio 60 F 254 plokštelių (Analtech, 0,25 mm) ir eliuuojama atitinkamų santykų (tūris/tūris) tirpiklių mišiniais. Reakcijos buvo tikrinamos TLC ir nutrauktos tada, kai buvo nustatyta, kad susinaudojo pradinė medžiaga.
Plokštelės buvo ryškinamos apipurškiant p-anyžių aldehido reagentu arba fosfomolibdato rūgšties reagentu (Aldrich Chemical, 20 masės % etanolyje) ir aktyvuotos šiluma. Apdorojama paprastai padvigubinant reakcijos tūrį reakcijos tirpikliu arba ekstrakcijos tirpikliu ir tada plaunant nurodytais vandeniniais tirpalais, naudojant jų 25 % pagal tūrį nuo ekstrakcijos tūrio (jeigu nenurodyta kitaip). Produkto tirpalai buvo džiovinami bevandeniu Na2S04, po to filtruojami ir sumažintame slėgyje arba rotoriniu garintuvu nugarinami tirpikliai, ir tai pažymima, kad tirpikliai nugarinti vakuume. Sparčioji kolonėlių chromatografija (Štili et ai., J. Org. Chem., 1978, 43:2923) buvo vykdoma naudojant Baker-grade silikagelį sparčiajai chromatografijai (47-61 mm), ir silikagelio:negrynos medžiagos santykį nuo maždaug 20:1 iki 50:1, jeigu nenurodyta kitaip. Hidrinimas buvo vykdomas esant nurodytiems slėgiams arba normaliame slėgyje.
’H-BMR spektrai buvo užrašyti Bruker prietaisu, dirbančiu 300 MHz dažniu, o 13C-BMR spektrai užrašyti esant 75 MHz. NMR spektrai užrašyti CDCI3 tirpalų (duodama m.d.), etalonu naudojant chloroformą (7,25 m.d. ir 77,00 m.d.), CD3OD (3,4 ir 4,8 m.d. ir 49,3 m.d.) arba, jeigu tinka, vidinį standartą - tetrametilsilaną (0,00 m.d.). Jeigu reikia, yra naudojami kiti BMR tirpikliai. Jeigu duodami smailių multipletiškumai, naudojami tokie sutrumpinimai: s = singletas, d = dubletas, t = tripletas, m = multipletas, pi. = platus, dd = dvigubas dubletas, dt = dvigubas tripletas. Sukinio-sukinio sąveikos konstantos, jeigu duotos, yra duotos hercais.
Infraraudonieji spektrai užrašyti Perkin-Elmer FTIR spektrometru grynų medžiagų, tablečių su KBr arba CDCI3 tirpalų ir duoti bangų skaičiais (cm‘1). Masių spektrai gauti naudojant LSIMS arba elektronų srautą. Visos lydymosi temperatūros yra nekoreguotos.
Konstrukcinio bloko -1-H-pirazol-1-karboksamidino - gavimas
1-H-pirazol-1-karboksamidinas yra pagaminamas pagal Bernatowicz et ai., J. Org. Chem., 1992, 57:2497-2502 (ir jame esantys literatūros šaltiniai) ir po blokavimo di-tret-butildikarbonatu gaunamas 1-H-pirazol-1-(N,N-bis(tretbutoksikarbonil)karboksamidinas) pagal Drake etai., Synth., 1994, 579-582.
1-(N,N’-diBoc)-guanidinometil-4-aminometilcikloheksano gavimas
į 1,4-bis-aminometilciklohėksano 22 (20 g, 0,14 mol) tirpalą THF (200 ml) supilamas 1-H-pirazol-1-(N,N-bis(tret-butoksikarbonil)karboksamidino) 21 (22,0 g, 0,07 mol) tirpalas THF (100 ml). (Atkreipkite dėmesį, kad 1-H-pirazol1-(N,N-bis(tret-butoksikarbonil)karboksamidino) nebūtina ištirpinti THF; į reakciją jį geriau pridėti gryną kaip kietą medžiagą). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 3 valandas. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje ir gaunama sirupo pavidalo liekana, kuri ištirpinama etilacetate (500 ml) ir plaunama vandeniu iki neutralaus pH. Organinis sluoksnis plaunamas sočiu NaCi tirpalu, džiovinamas MgSO4 ir sukoncentruojamas. Produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojamą 5 % MeOH dichlormetane. Tirpikliai nugarinami vakuume ir gaunama 11,6 g (43 % išeiga) 1-H-pirazol-1-(N,N’-diBoc)-guanidinometil-4-aminometilcikloheksano (23 junginys). 1H BMR (CDCb) δ 11,5 (pl.s, 1H), 8,35 (pl.s, 1H), 3,26 (dt, 2H), 2,52 (dd, 2H), 1,82-0,97 (m, 28H, su singletu ties 1,5).
Kitas 1-(N,N’-diBoc)-guanidinometil-4-aminometilcikloheksano gavimo būdas yra toks. į cis/trans 1,4-bis-aminometilcikloheksano (9,0 g, 63,3 mmol) tirpalą THF (903 ml, 0,07 M) dalimis pridedama (per 10 min.) kieto 1-Hpirazol-1-(N,N-bis(tret-butoksikarbonil)karboksamidino) (19,6 g, 63,3 mmol). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 0,5 valandas. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje ir gaunama sirupo pavidalo liekana, kuri ištirpinama etilacetate (500 ml) ir plaunama vandeniu du kartus. Atskiriami sluoksniai ir produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojamą 100 % etilacetatu nepolinėms priemaišoms pašalinti, po to eliuuojama 100 % izopropilo alkoholiu ir gaunamas grynas produktas.
Tirpikliai nugarinami vakuume ir gaunama 10,26 g (42 % išeiga5T-(R^P^ diBoc)-guanidinometil-4-aminometilcikloheksano (23 junginys). 1H BMR (CDCb) δ 11,5 (pl.s, 1H), 8,35 (pl.s, 1H), 3,26 (dt, 2H), 2,52 (dd, 2H), 1,820,97 (m, 28H, su singletu ties 1,5).
Redukcinis amininimas
3,5,5,8,8-Pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftaldehidas (0,2021 g, 0,88 mmol) ir 1-(N,N’-diBoc)-guanidinometil-4-aminometilcikloheksanas (23 junginys, 0,337 g, 0,88 mmol) ištirpinami metanolyje (10 ml). Po to pridedama 1 % ledinės acto rūgšties tirpalo metanolyje (100 μΙ), o po to NaCNBHb (55,4 mg, 0,88 mmol, 1,0 ekv.), ir reakcijos mišinys maišomas per naktį. Reakcija kontroliuojama TLC, išryškinant tris komponentus (aldehidą norimą produktą ir pradinį guanidino darinį). Reakcija nutraukiama pridedant vandens (~5 ml), ekstrahuojama dichlormetanu (-100 ml) ir plaunama sočiu rūgščiuoju natrio karbonatu. Organinis sluoksnis džiovinamas magnio sulfatu, nufiltruojama, sukoncentruojama ir chromatografuojama per kolonėlę, eliuuojant 3:1 etilacetatu heksanuose nesureagavusiam aldehidui pašalinti, po to eliuuojama 1:1 etilacetatu heksanuose, gaunant norimą produktą (25 junginys, cikloheksilas, cis/trans mišinys). Tirpikliai nugarinami vakuume (paprastai bendrosios išeigos yra 50-80 % ribose).
Acilinto darinio gavimas ir guanidino deblokavimas
Redukcinio amininimo produktas 25 (1,0 ekv.) ištirpinamas dichlormetane (10-15 ml), po to pridedama trietilamino (2 ekv.) ir 2furoilchloridinio reagento (1,0 ekv.). Reakcijos mišinys maišomas per naktį kambario temperatūroje. Reakcijos mišinys praskiedžiamas dichlormetanu (50 ml) ir plaunamas sočiu rūgščiuoju natrio karbonatu. Organinis sluoksnis džiovinamas magnio sulfatu, nufiltruojamas ir išgryninamas chromatografuojant per kolonėlę, eliuuojamą naudojant 3:1 heksanus etilacetate. Tirpikliai nugarinami vakuume ir gaunamas 26 junginys.
Acilinimo reakcijos produktas 26 (1,0 ekv.) ištirpinamas 50 % TFA tirpale dichlormetane (20-25 ml) ir reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje (15-20 min.; tirpalas pasidaro šiek tiek rausvai oranžinis). Reakcijos mišinys maišomas dar 1 vai. ir 20 min., kol pilnai įvyksta deblokavimas. Reakcija nutraukiama sukoncentruojant vakuume, po to pridedama vandens/acetonitrilo (~50 ml) ir liofilizuojama per naktį. Galutinis junginys gryninamas HPLC metodais. Tirpiklius nugarinus vakuume, gaunamas 27 junginys.
Tolimesnis aptarimas yra susijęs su pavyzdinių junginių (e)-(k) gavimu. Junginiai (e)-(k) gali būti naudojami, kaip aprašyta aukščiau, atitinkamiems deblokuotiems junginiams (laisvas guanidinas) gauti, hidrolizuojant rūgštinėse sąlygose.
1-(N,N’-diBoc)‘guanidinometil-3-aminometilcikloheksano gavimas nh2 (e)
Į c/Wans-1,3-bis-aminometilcikloheksano (7,5 g, 52,8 mmol) tirpalą THF (30 ml) per 0,5 vai. supilamas 1,3-bis(tret-butoksikarbonil)-2-metil-2tiopseudokarbamido (7,65 g, 26,3 mmol) tirpalas THF (40 ml). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 5 vai. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje ir produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuentu naudojant metileno chlorido/metanolio mišinį; gaunama 2,2 g (22 % išeiga) 1-(N,N’-diBoc)-guanidinometil-3-aminometilcikloheksano ((e) junginys). 1H BMR (CDCb) δ 11,53 (pl.s, 1H), 8,40 (pl.s, 1H), 3,28-3,30 (m, 2H), 2,542,61 (m, 2H), 1,81 (pl.s, 2H), 1,27-1,58 (m, 26H), 0.89 (m, 1H), 0,65 (m, 1H).
Kitu atveju (e) junginį galima pagaminti taip. Į cis/trans-1,3-bisaminometilcikloheksano (10,0 g, 70,3 mmol) tirpalą THF (1000 ml, 0,07 M) dalimis (per 10 min.) sudedamas kietas 1-H-pirazol-1-(N,N-bis(tretbutoksikarbonil)karboksamidinas) (21,8 g, 70,3 mmol). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 0,5 vai. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje, gaunant sirupo pavidalo liekaną, kuri ištirpinama etilacetate (500 ml) ir plaunama du kartus vandeniu. Atskiriami sluoksniai ir produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojant 100 % etilacetatu visokioms nepolinėms priemaišoms pašalinti, po to eliuuojamą 100 % izopropilo alkoholiu, gaunant gryną produktą. Tirpikliai nugarinami vakuume ir gaunama 11,4 g (41 % išeiga) 1-(N,N’-diBoc)-guanidinometil-3aminometilcikloheksano. 1H BMR (CDCb) δ 11,53 (pl.s, 1H), 8,40 (pl.s, 1H), 3,28-3,30 (m, 2H), 2,54-2,61 (m, 2H), 1,81 (pl.s, 2H), 1,27-1,58 (m, 26H), 0,89 (m, 1H), 0,65 (m, 1H).
1-(N,N’-diBoc)-guanidinometH-4-aminometilbenzeno gavimas
Į p-ksililendiamino (6,44 g, 47,4 mmol) tirpalą THF (30 ml) per 0,5 vai. supilamas 1,3-bis(tret-butoksikarbonil)-2-metil-2-tiopseudokarbamido (6,63 g, 22,9 mmol) tirpalas THF (40 ml). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 5 vai. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje ir produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuentu naudojant metileno chlorido/metanolio mišinį; gaunama 8,0 g (92 % išeiga) 1-(N,N’-diBoc)guanidinometil-3-aminometilbenzeno ((f) junginys). 1H BMR (CDCI3) δ 11,54 (pl.s, 1H), 8,56 (pl.s, 1H), 7,29 (s, 4H), 4,60 (d, 2H), 3,86 (s, 2H), 1,64 (pl.s, 2H), 1,52 (s, 9H), 1,48 (s, 9H).
1-(N,N’-diBoc)-guanidinometil-3-aminometHbenzeno gavimas
Į m-ksililendiamino (7,14 g^ 52,2 mmol) tirpalą THF (30 ml) per 0,5 vai. supilamas 1,3-bis(tret-butoksikarbonil)-2-metil-2-tiopseudokarbamido (7,57 g, 26,1 mmol) tirpalas THF (40 ml). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 5 vai. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje ir produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuentu naudojant metileno chlorido/metanolio mišinį; gaunama 7,9 g (80 % išeiga) 1-(N,N’-diBoc)guanidinometil-3-aminometilbenzeno ((g) junginys). 1H BMR (CDCb) δ 11,54 (pl.s, 1H), 8,58 (pl.s, 1H), 7,19-7,34 (m, 4H), 4,62 (d, 2H), 3,86 (s, 2H), 1,83 (pl.s, 2H),1,52(s,9H),1,48(s,9H).
1-(N,N’-diBoc)-guanidin-4-aminobutano gavimas
(h)
Į 1,4-diaminobutano (4,15 g, 47,1 mmol) tirpalą THF (30 ml) per 0,5 vai. supilamas 1,3-bis(tret-butoksikarbonil)-2-metil-2-tiopseudokarbamido (6,83 g, 23,6 mmol) tirpalas THF (40 ml). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 5 vai. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje ir produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuentu naudojant metileno chlorido/metanolio mišinį; gaunama 3.0 g (40 % išeiga) 1-(N,N’40 diBoc)-guanidin-4-aminobutano ((h) junginys). 1H BMR (CDCI3) δ 11,49 (pl.s,
1H), 8,35 (pl.s, 1H), 3,42-3,47 (m, 2H), 2,72-2,76 (t, 2H), 0,86-1,65 (m, 24H).
Kita (h) junginio pagaminimo metodika yra tokia. į 1,4-diaminobutano (6,0 g, 68,1 mmol) tirpalą THF (972 ml, 0,07 M) dalimis (per 10 min.) sudedamas kietas 1-H-pirazol-1-(N,N-bis(tret-butoksikarbonil)karboksamidinas) (21,5 g, 68,1 mmol). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 0,5 vai. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje, gaunant sirupo pavidalo liekaną kuri ištirpinama etilacetate (500 ml) ir plaunama du kartus vandeniu. Atskiriami sluoksniai ir produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojant 100 % etilacetatu visokioms nepolinėms priemaišoms pašalinti, po to 100 % izopropilo alkoholiu, gaunant gryną produktą. Tirpikliai nugarinami vakuume ir gaunama 10,0 g (44 % išeiga) 1-(N,N’-diBoc)-guanidin-4-aminobutano. 1H BMR (CDCI3) δ 11,49 (pl.s, 1H), 8,35 (pl.s, 1H), 3,42-3,47 (m, 2H), 2,72-2,76 (t, 2H), 0,861,65 (m, 24H).
1-N,N-dimetilaminometil-4-aminometilbenzeno gavimas
Į 1-N,N-dimetilaminometil-4-karbonitrilbenzeno (4,8 g, 30 mmol) tirpalą THF supilamas 1M borano tetrahidrofuraninis kompleksas (90 ml). Mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 16 vai. azoto atmosferoje. Atšaldžius iki kambario temperatūros, įpilama 1M HCI tirpalo metanolyje (100 ml). Reakcijos mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 3 vai. Produktas, kuris iškrenta į nuosėdas, nufiltruojamas, plaunamas dietilo eteriu ir išdžiovinus vakuume gaunama 5,9 g (83 % išeiga) produkto hidrochlorido druskos pavidalu ((i) junginys): 1H BMR (DMSO-d6) δ 8,65 (pl.s, 3H), 7,55 (dd, 4H), 4,25 (s, 2H), 3,98 (s, 2H), 2,62 (s, 6H).
1-(N,N’-diBoc)-guanidinometH-2-aminometilbenzeno gavimas
-V
-v
0)
Į o-ksililendiamino (7,14 g, 52,5 mmol) tirpalą THF (30 ml) per 0,5 vai. supilamas 1,3-bis(tret-butoksikarbonil)-2-metil-2-tiopseudokarbamido (7,57 g, 26,1 mmol) tirpalas THF (40 ml). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 5 vai. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje ir produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuentu naudojant metileno chlorido/metanolio mišinį; gaunamas 1-(N,N’-diBoc)-guanidinometil-2aminometilbenzenas ((j) junginys).
Kitu atveju, (j) junginys gali būti pagaminamas būdu, analogišku aukščiau aprašytam alternatyviam (e) junginio pagaminimo būdui.
1-(N,N’-diBoc)-guan!dinometil-2-aminometilcikloheksano gavimas
NH
Į c/s/frans-1,2-bis-aminometilcikloheksano (7,5 g, 52,8 mmol) tirpalą THF (30 ml) per 0,5 vai. supilamas 1,3-bis(tret-butoksikarbonil)-2-metil-2tiopseudokarbamido (7,65 g, 26,3 mmol) tirpalas THF (40 ml). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 5 vai. Tirpiklis nugarinamas sumažintame slėgyje ir produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuentu naudojant metileno chlorido/metanolio mišinį; gaunamas 1-(N,N’diBoc)-guanidinometil-2-aminometilcikloheksanas ((k) junginys).
Kitu atveju (k) junginys gali būti pagaminamas būdu, analogišku aukščiau aprašytam alternatyviam (e) junginio pagaminimo būdui.
D. Pirimidino eilės junginiai
Pirimidinai gali būti naudojami sintezei pagal tokias metodikas:
Pirimidiną turinčių junginių sintezės bendroji metodika yra tokia. į 1,3diamino 29 tirpalą THF pridedama 28, ir reakcijos mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 12 vai. Tirpikliai nugarinami vakuume ir norimas produktas gryninamas chromatografuojant per kolonėlę. Grynas 31 acilinamas pagal aukščiau duotą bendrąją metodiką ir gaunamas 11.
Patyrę specialistai supras, kad pagal aukščiau aprašytas metodikas gali būti pagaminti įvairiausi šio išradimo junginiai. Aukščiau aprašytos cheminės reakcijos turi bendrą pritaikomumą šio išradimo GnRH agentams gauti. Taigi, panaudojant tinkamas modifikacijas, gali būti panašiai pagaminami kiti GnRH agentai, ką nesunkiai supras specialistai, pvz. blokuojant trukdančias grupes, pritaikant naudoti kitus įprastus reagentus ir/arba panaudojant įprastas reakcijos sąlygų modifikacijas.
FARMAKOLOGINIS RADIOLIGANDU SURISIMAS IN VITRO **
Ląstelių membranos, pagamintos iš pastoviai transfekuotų žmogaus GnRH receptoriaus cDNR žmogaus embrioninių inkstų 293 ląstelių, buvo suspenduotos surišimo testo buferyje, turinčiame 50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 2,5 mM MgCL2 ir 0,1 % jaučio serumo albumino. Membranos (baltymo bendras kiekis 5-50 pg duobutėje, turinčioje maždaug 10-100 fmol GnRH receptoriaus) buvo inkubuojamas, imant po dvi vienodos sudėties duobutes, 96 duobučių plokštelėse 200 pi bendrame tūryje su 125l-GnRH-A (maždaug 0,05 nM) ir tiriamaisiais junginiais 1 valandą kambario temperatūroje. Visi junginiai buvo praskiesti 1 % DMSO (galutinė testo koncentracija) turinčiame surišimo testo buferyje. Nespecifinis surišimas buvo nustatytas esant 100 nM GnRH. Reakcijos buvo nutrauktos greitai nufiltruojant per 96 duobučių Packard GF/C filtrus, įmirkytus 0,1 % polietileniminu. Filtrai buvo plaunami tris kartus PBS buferiu, džiovinami ir skaičiuojamas radioaktyvumas Packard Topcount prietaisu, panaudojant skysčių scintiliacijų skaičiavimą.
Testo sąlygos buvo identiškos junginių aktyvumo įvertinimui ir imant kitas rūšis. Kiekvienos rūšies teste buvo panaudotas panašus skaičius GnRH receptorių. Žiurkių GnRH receptorių surišimui membranos buvo pagamintos iš žiurkių hipofizės ir buvo naudojama maždaug 25-30 pg/duobutei bendro membraninio baltymo. Jaučio GnRH receptoriaus surišimui membranos buvo pagamintos iš jaučio hipofizės ir naudota 40-50 pg/duobutei. Pelės GnRH receptoriaus surišimui membranos buvo pagamintos iš 293 ląstelių, pastoviai ekspresuojančių pelės GnRH receptorius, ir buvo naudojama maždaug 25-30 pg/duobutei. Kontrolinių peptidų ir tiriamųjų junginių IC50 reikšmės buvo apskaičiuotos naudojant GraphPad Prism™ programą Radioligando surišimo eksperimento rezultatai parodyti fig.1. 1 lentelėje parodytos įvairių peptidiniu ir nepeptidinių junginių afiniškumo GnRH receptoriams iš keturių gyvūnų rūšių pakartotų eksperimentų vidutinės reikšmės.
Fig.i LT 4904 B
Junginių efektai į 125l-GnRH-A surišimą su hGnRH receptoriais HEK-293 ląstelių membranose
Fig.1. Junginių efektai į 125l-GnRH-A surišimą su hGnRH receptoriais, ekspresuotais HEK-293 ląstelėse. Būvi tirta GnRH (kvadratai) ir 9 (trikampiai) geba išstumti 125l-GnRH-A (maždaug 0,05 nM) surišimą su hGnRH receptoriais. Parodytos reikšmės yra iš vieno būdingo eksperimento, jį dubliuojant.
Pagal aukščiau aprašytą reakcijos schemą buvo sintezuoti įvairūs I formulės junginiai. Negryninti junginiai buvo tirti naudojant aukščiau aprašytą konkurencinio radioligando surišimo testą. GnRH konkurencinio surišimo rezultatai parodyti lentelėje (kiekvienas junginys tirtas imant 1 ir 10 μΜ).
lentelė
Junginys Žmogaus IC50 (nM) Jaučio IC50 (nM) Žiurkės IC50 (nM) Pelės IC50 (nM)
GnRH 7,2±1,5 13±2 33±1,9 11±2
GnRH-A 0,34±0,06 0,3+0,05 0,49±0,1 0,22±0,03
Antidas 0,67±0,09 0,15±0,02 0,19±0,04 0,25±0,05
9 220±33 3800±220 680±120 2300±460
10 130±24 1500±480 390±10 1400±440
11 190±40 320±10 9,0±0,3 50±10
12 230±37 10400±3000 3080±630 7130±1350
13 110±17 530±100 60±8 120±20
14 80±4 1050±30 60±15 290±70
15 100±17 1000±240 70±16 220±50
16 30±6 4380±510 560±50 1290±210
17 80±20 670±120 30±4 80±20
18 55±11 460±90 40±3 115±25
19 50±3 NN NN NN
20 8,0±0,9 NN NN NN
vidurkis±SP. NN = nenustatyta.
BENDRO INOZITOLIO FOSFATU KIEKIO MATAVIMAS
Norint įvertinti junginių, kaip agonistų arba antagonistų, aktyvumą, buvo naudojamas testas, kuriame matuojamas bendras inozitolio fosfatų susikaupimas. 293 ląstelėmis, turinčiomis hGnRH receptorių, buvo padengtos 24 duobučių plokštelės (apytikriai 200000 ląstelių/duobutei), naudojant DMEM terpę. Kitą dieną ląstelės buvo užpiltos [3H]mioinozitoliu (0,5 Ci/ml) 16-18 valandų inozitolio neturinčioje terpėje. Terpė buvo nusiurbta ir ląstelės perplautos serumo neturinčia DMEM. Terpė buvo nusiurbta ir po to ląstelės buvo veikiamos tiriamaisiais junginiais arba tirpikliu 30 min. 37 °C temperatūroje. Po to į ląsteles pridedama pusė maksimalios GnRH koncentracijos (1 nM) arba tirpiklis ir palaikoma 37 °C temperatūroje 45 min., kad nusistovėtų pusiausvyra. Terpė pakeičiama ledo temperatūros 10 mM skruzdžių rūgštimi, kuri sustabdo reakciją ir taip pat tarnauja ląstelių lipidų ekstrakcijai. Inozitolio fosfatai atskiriami panaudojant jonų mainų chromatografiją per Dowex’o kolonėles, kurios plaunamos 2,5 ml 10 mM mioinozitolio ir 10 mM skruzdžių rūgšties. Po to kolonėlės plaunamos 5 ml 60 mM natrio formiato ir 5 mM borakso, ir bendri inozitolio fosfatai eliuuojami 5 ml 1M amonio formiato ir 0,1 M skruzdžių rūgšties. Kolonėlių eliuatai supilami į skysčių scintiliacijos indus, turinčius 15 ml scintiliacijos mišinio ir skaičiuojamas radioaktyvumas skysčių scintiliacijų skaičiavimo būdu. Tipiško eksperimento rezultatai parodyti fig.2.
Fig.2
Junginių poveikis [GnRH stimuliuojamą (1 nM) bendrojo inozitolio fosfato susikaupimą 293 ląstelėse, ekspresuojančiose hGnRH receptorių
[Junginys] log M A*+antidas 9 junginys
Junoinys ECso inM) Kb inM)
GnRH 0,83
Antidas 0,2
9 junginys 30
Fig.2. Junginių poveikis į GnRH stimuliuojamą bendrojo inozitolio fosfato susikaupimą HEK-293 ląstelėse, ekspresuojančiose hGnRH receptorių. Buvo tirta peptidinio antagonisto - antido - ir nepeptidinio antagonisto - 9 junginio - geba blokuoti GnRH stimuliuojamą [3H)inozitolio fosfatų kiekio padidėjimą. Nei vienas iš šių atskirai paimtų junginių nestimuliavo bendro inozitolio fosfatų kiekio padidėjimo (neparodyta), bet abu junginiai galėjo inhibuoti pusės maksimalios GnRH peptido koncentracijos tarpininkaujamą stimuliavimą. Vienas GnRH nuo dozės priklausančiu būdu didino [3H)inozitolio fosfato susikaupimą esant ECso maždaug 0,8 nM. Parodytame eksperimente antido ir 9 junginio Kb reikšmės buvo nustatytos, panaudojant Cheng ir Prusoff metodą (Biochem. Pharmacol. 22:3099-3108,
1973). Parodytos reikšmės yra iš vieno eksperimento, atlikto dubliuojant.
IN VIVO FARMAKOLOGINIAI EFEKTYVUMO TYRIMAS SU GYVŪNAIS
Eksperimento metodika: Sprague-Davvley žiurkių patinėliai (225-250 g) buvo iškastruoti ir palakyti 10 dienų, kad atsigautų po operacijos. Praėjus 10 dienų po kastravimo, gyvuliukams buvo įtaisyti neištraukiami kateteriai į šlaunies veną ir arteriją kad būtų lengviau iš tolo atlikti infuzijas ir paimti kraujo mėginius. Eksperimento dieną gyvuliukams. leidžiama aklimatizuotis procedūriniame kambaryje, jiems gyvenant įprastame narve. Iš visų gyvuliukų buvo paimti kraujo mėginiai palyginimui. Paėmus šiuos mėginius, į veną buvo suleidžiamas arba tirpiklis (10 % DMSO, 10 % kremoforas/fiziologinis druskos tirpalas), antidas (1,0 pg), arba 11 junginys (10 mg/kg). Kraujo mėginiai buvo imami praėjus 10, 60, 90, 120, 180, 240 min. po injekcijų. Kraujas buvo centrifuguojamas, surenkamas serumas ir laikomas -70° temperatūros šaldiklyje iki tyrimo. Serumo mėginiai buvo analizuojami naudojant DSL-4600 ACTIVE LH padengto vamzdelio tipo imunoradiometrinį testavimo rinkinį iš Diagnostic Systems Laboratories, Ine.
Rezultatai ir aptarimas: Lytinės liaukos pašalinimas eliminuoja neigiamą testosterono grįžtamąjį ryšį į pogumburį ir duoda padidintus GnRH, o tuo pačiu ir LH, kiekius. Fig.3 parodyti kontrolinių ir kastruotų žiurkių ir LH, ir testosterono kiekiai, praėjus 10 dienų po operacijos. Laukiama, kad šių žiurkių atveju GnRH antagonistas turėtų sumažinti GnRH tarpininkaujamų LH kiekių padidėjimą. Antidas - peptidinis GnRH antagonistas - sumažina LH kiekius kastruotų žiurkių modelyje (fig.4). 11 junginys - mažos molekulinės masės GnRH antagonistas - taip pat slopina LH kastruotų žiurkių modelyje (fig.4).
Fig.3
Kastruotų žiurkių modelio, naudoto GnRH antagonistams įvertinti, charakterizavimas
Testosteronas (mIU/mL)
Sveikos Kastruotos
Fig.4
Antidas (1,0 ųg; i.v.) mažina LH kiekius kastruotų žiurkių modelyje
junginys (10 mg/kg; i.v.) mažina LH kiekius kastruotų žiurkių modelyje
LH (mIU/mL)
O
Laikas (min) po injekcijos
FARMAKOKINETINIAI TYRIMAI
Eksperimento metodika: Buvo paruoštos žiurkės su intraveniniais kateteriais, įvestais į viršutinę tuščiąją veną padarius pjūvį dešiniojoje išorinėje jungo venos pusėje, ir leidžiama sugyti. Vaistai buvo ištirpinti 10 % DMSO, 10 % kremaforo ir 80 % fiziologinio druskos tirpalo mišinyje ir įvesti i.v. būdu, imant 10 mg/kg dozę. Nurodytu laiku buvo imami kraujo mėginiai ir junginiai buvo išekstrahuojami iš 0,2 ml plazmos butilo chloridu, turinčiu vidinį standartą. Mėginiai buvo analizuojami HPLC metodu, leidžiant per Beta-Basic C18 4x50 mm kolonėlę 1 ml/min. greičiu ir naudojant 40-80 % acetonitrilo 10 mM amonio fosfato buferyje gradientą Mėginiai detektuojami pagal UV sugertį, imant 260 nm bangos ilgį.
Rezultatai ir aptarimas: 11 junginys, kuris turi* puikų afiniškumą žiurkių GnRH receptoriaus atžvilgiu, turi maždaug trijų valandų gyvavimo puslaikį žiurkių plazmoje ir, praėjus 4 valandoms po i.v. injekcijos, jo koncentracija plazmoje yra 100-200 nM (fig. 5).
Fig.5 junginys
Dozė -10 mg/kg; n = 3
S
E ri
Laikas (vai)
Etaloninių peptidų surišimas su žiurkės, pelės jaučio ir žmogaus GnRH receptoriais gerai sutampa su literatūriniais duomenimis. Nepeptidiniai šio išradimo junginiai rodo žymius jų surišimo rodiklių skirtumus tarp rūšių. Kai kurie iš šių junginių rodo didelį afiniškumą (<100 nM) žmogaus GnRH receptoriui. Veiksmingumo prasme visi šie nepeptidiniai junginiai, kurių aktyvumas buvo įvertintas inozitolio fosfato teste, veikia kaip antagonistai į GnRH stimuliuojamą bendrą inozitolio fosfato susikaupimą ląstelėse, turinčiose rekombinantinius žmogaus GnRH receptorius. 11 junginio suleidimas į veną sumažino kastruotų žiurkių patinėlių (chroniško LH kiekio padidėjimo plazmoje modelis) LH kiekius plazmoje. Šis junginys turėjo trijų valandų gyvavimo puslaikį, o koncentracija plazmoje koreliuojasi su efektyvumu. Bendrai paėmus, šie duomenys leidžia manyti, kad šie nepeptidiniai junginiai turi būti naudingi kaip GnRH receptorių antagonistai.
Peptidiniai agonistai ir antagonistai, naudoti kaip etaloniniai junginiai:
L h2n^nh [D-ALA6, DES-GLY10]-LH-RH ETILAMIDAS
Toliau duodami junginių tyrimo duomenys buvo gauti taip:
Ląstelių kultūros
GH3 ląsteles, pastoviai transfekuotas žiurkės GnRH receptoriumi (GGH3), pateikė Dr. VViIliam Chin (Harvard Medical School, Boston, MA). Šios ląstelės buvo plačiai charakterizuotos anksčiau (Kaiser et ai., 1997). Šios ląstelės buvo auginamos mažai gliukozės turinčioje Dulbecco modifikuotoje Eagle terpėje (DMEM), turinčioje: 100 V/ml penicilino/streptomicino, 0,6 g/l G418 ir 10 % šiluma inaktyvuoto fetalinio veršiuko serumo (FBS).
Žmogaus GnRH receptoriaus cDNR buvo įklonuota į plazmidinį ekspresijos vektorių pcDNA 3 (In Vitrogen) ir pastoviai transfekuota į HEH 293 ląsteles (hGnRH-R/293). Šią ląstelių liniją pateikė dr. Stuart Sealfon, Mount
Sinai Medical School, New York, NY. Šios ląstelės buvo auginamos DMEM, papildytoje 0,2 g/l G418 100 V/ml penicilino/streptomicino ir 10 % FBS. Ir
GGH3, ir hGnRH-R/293 ląstelės buvo naudotos ir .bendrojo inozitolio fosfato matavimui, ir junginių veiksmingumo mikrofiziometriniam įvertinimui.
Radioligando paruošimas
Radioligandu buvo naudotas radioaktyviu jodu žymėtas GnRH agonistinis analogas - [des-Gly10,D-Ala6]GnRH etilamidas (125l-GnRH-A). Vienas pg GnRH, praskiestas 0,1 M acto rūgštimi, įdedamas į lodogen®padengtą borsilikatinio stiklo mėgintuvėlį (Pierce), turintį 35 μΙ 0,05 M fosfatinio buferio (pH 7,4-7,6) ir 1 mCi Na[125lj. Reakcijos mišinys purtomas ir inkubuojamas 1 min. kambario temperatūroje. Po 1 min. mišinys purtomas ir leidžiama inkubuotis dar 1 min. Į reakcijos mėgintuvėlį pridedama 2 ml 0,5 M acto rūgšties/1 % BSA, ir mišinys supilamas į C18 Sep-Pak patroną. Patronas plaunamas iš eilės 5 ml H2O ir 5 ml 0,5 M acto rūgšties, po to eliuuojamas 5 x 1 ml 60 % CH3CN/40 % 0,5 M acto rūgšties mišinio. Eliuatas praskiedžiamas 3 x didesniu tūriu HPLC buferio A (0,1 % TFA vandenyje) ir supilamas į C18 kolonėlę. Jodintas produktas eliuuojamas per 20-25 min. 25-100 % CH3CN, turinčio 0,1 % TFA, gradientu. Radioaktyvios frakcijos (750 μΙ/frakcijai) surenkamos į švarius polipropileninius mėgintuvėlius, turinčius 100 μΙ 10 %
BSA. Frakcijų biologinis aktyvumas įvertinamas pagal radioligando surišimą. Specifinis radioligando aktyvumas buvo apytikriai 2200 Ci/mmol.
Mikrofiziometrija
Cytosensor® mikrofiziometras (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) yra realaus laiko, neinvazinė, neradioaktyvi puslaidininkinė sistema ląstelių atsakams į įvairius stimulus kontroliuoti. Ji yra paremta pH jautriu silicio jutikliu, šviesai jautriu potenciometriniu jutikliu, kurie sudaro dalį mikrotūrinio srauto kameros, kurioje yra imobilizuotos auginamos ląstelės (Pitchford et ai.,
1995; Parceet ai., 1989; Owicki, et ai. 1994).
Papildomi literatūros šaltiniai:
Owicki, J.C., L.J. Bousse, D.G. Hafeman,. G.L. Kirk, J.D. Olson, H.G.
Wada, and J. W. Parce. The light-adressable potentiometric sensor: principles and biological applications. Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struc. 23:87-113, 1994.
Parce, J. W., J.C. Owicki, K.M. Kercso, G.B. Sigai, H.G. Wada, V.C. Muir, L.J. Bousse, K.L. Ross, B.l. Sikic, H.M. McConnelI. Detection of cellaffecting agents with a Silicon biosensor. Science 246:243-247, 1989.
Pitchford, S., K. DeMoor, and B.S. Glaeser. nerve growth factor stimulates rapid metabolic responses in PC12 cells. Am. J. Physiol. 268 (Cell Physiol. 37): C936-C943,1995.
GGH3 ląstelės buvo pasėtos mažai buferintoje minimalioje pagrindinėje terpėje (MEM, Sigma), turinčioje 25 mM NaCi ir 0,1 % BSA, imant 500000 ląstelių/kapsulei tankį, ant ląstelių kapsulės taurelių polikarbonatinės membranos (3 pm poringumo) (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Kapsulės taurelės buvo perkeltos į jutiklio kameras, kur jutiklio kameroje ląstelės buvo laikomos prie pat silicio jutiklio, kuris matuoja mažus pH pokyčius jutiklio kameros mikrotūryje. Per ląsteles buvo pumpuojama mažai buferinta terpė maždaug 100 μΙ/min. greičiu iš vieno iš dviejų esančių skysčio rezervuarų. Iš kurio rezervuaro pumpuoti ant ląstelių skystį apsprendžia selekcijos vožtuvas.
Cytosensor® mikrofiziometras kiekvieną sekundę generuoja įtampos signalą kuris yra tiesinė pH funkcija. Norint išmatuoti rūgštėjimo greičius, srautas į jutiklio kamerą kurioje yra ląstelės, periodiškai pertraukiamas, leidžiant ekstraląsteliniame ląstelių skystyje pasigaminti išskiriamiems rūgštiesiems metabolitams. Šiuose eksperimentuose ląstelės buvo laikomos 37 °C temperatūroje dviejų minučių trukmės tekėjimo ciklą kuriame 80 sekundžių per ląsteles buvo leidžiama terpė, po to terpės srautas buvo sustabdytas 40 sekundžių. Šio 40 sekundžių intervalo metu 30 sekundžių buvo matuojami parūgštėjimo greičiai. Tokiu būdu atskiras parūgštėjimo greitis buvo skaičiuojamas kas dvi minutes. Cytosėn'sor® mikrofiziometras turi aštuonis tokius jutiklius, leidžiančius atlikti aštuonis eksperimentus vienu metu. Kiekvienas jutiklis buvo programuojamas atskirai, naudojant su sistema sujungtą kompiuterį.
GGH3 ląstelės buvo iš pradžių laikomos mažai buferintoje MEM terpėje 30-60 min., kad pasiektų pusiausvyrą ir tuo metu buvo matuojami foniniai parūgštėjimo greičiai (matuojama μν/sek.) nesant jokio stimulo. Kai foninis parūgštėjimo greitis pakito mažiau nei 10 procentų per 20 minučių, buvo pradėtas eksperimentas. Prieš parūgštėjimo greičių matavimus ir ekspozicijos, reikalingos gauti maksimalius parūgštėjimo atsakus į įvairius agonistus, trukmę, buvo atlikti priklausomybės nuo laiko eksperimentai, norint nustatyti optimalų ekspozicijos su agonistų laiką. Iš šių laiko eksperimentų buvo nustatyta, kad ląstelės turi būti eksponuojamos su GnRH peptidiniais agonistais mažiausiai vieną minutę prieš pradedant rinkti parūgštėjimo greičio duomenis. Maksimalūs parūgštėjimo greičiai paprastai būna per pirmųjų dviejų minučių ekspozicijos ciklą. Norint nustatyti maksimalų atsaką į GnRH, ląstelės buvo eksponuojamos su agonistų iš viso keturias minutes. Su junginiais ląstelės buvo eksponuojamos 20-60 minučių prieš keturių minučių trukmės stimuliavimą vien tik su GnRH (1,0 nM - 10 μΜ) arba jo derinyje su įvairiomis tiriamojo junginio koncentracijomis. Visi junginiai buvo tiriami esant 1 % galutinei DMSO koncentracijai aukščiau aprašytoje mažai buferintoje MEM terpėje.
Selektyvumo rodikliai
Norint nustatyti junginių susirišimo su GnRH receptoriais specifiškumą junginiai buvo tiriami panaudojant įvarius susirišimo testus ir funkcinius aktyvumo testus. Toliau duodamoje 2 lentelėje parodytas 20 junginio aktyvumas kituose testuose.
lentelė. 20 junginio susirišimo afiniškumas arba funkcinis įvertinimas įvairiuose testuose
Testas Ki (nM)*
Adenozino (neselektyvus) >1000
Alfa 1 adrenerginis (neselektyvus) >1000
Alfa 2 adrenerginis (neselektyvus) >1000
Beta adrenerginis (neselektyvus) >1000
Dopamino (neselektyvus) >1000
D2 dopamino >3200
H1 histamino >1000
H2 histamino *1000
H3 histamino >1000
M2 muskarininis >1000
Muskarininis (neselektyvus) periferinis >1000
Opiato (neselektyvus) >1000
Serotonino pernešiklio >1000
Serotonino (neselektyvus) >1000
5-HT2a 2350
5-HT7 >4400
Estrogeno >1000
Testosterono >1000
L-tipo Ca2+ kanalo >1000
N-tipo Ca2+ kanalo >1000
ATP-jautraus K+ kanalo >1000
Ca2+ aktyvuoto K+ kanalo >1000
Na+ kanalo (1 vieta) >1000
Na+ kanalo (2 vieta) >1000
LTB4 >1000
LTD4 >1000
ΤΧΑ2 >1000
PAF «3000-5000
TRH >1000
Oksitocino >1000
AT1 angiotenzino «3000-5000
Bradikinino 2 >1000
CCKA >1000
ET-A >1000
Galanino >1000
NK1 >1000
NK2 >1000
NK3 «3000-5000 |
VIP (neselektyvus) >1000
Ach E į >1000
Cholino acetiltransferazės >1000
MAO-A >1000
MAO-B >1000
IL8RA (CXCR-1) >10000
GLP-1 >10000
Glukagono 6700
NPY Y1 >10000
CYP3A4 citochromo P450 IC50 1700
Bazinio histamino išskyrimo (žiurkių pieno liaukos ląstelės) EC50 >10000
RARy retinoidinis >10000
RARa retinoidinis >10000
Vazopresino 1 ! >1000 į
*ECso bazinio histamino išsiskyrimo teste
Fig.6 parodytas 136 junginio poveikis į GnRH stimuliuojamą ekstraląstelinio parūgštėjimo greitį GGH3 ląstelėse. GnRH davė GGH3 ląstelių priklausantį nuo dozės ekstraląstelinio parūgštėjimo greičio padidėjimą. 136 junginys sukėlė dozės-atsako į GnRH kreivių poslinkį į dešinę, nesumažindamas maksimalaus atsako į GnRH. Tai duoda pagrindą manyti, kad šis junginys yra konkurentinis receptorinis GnRH. antagonistas šiam receptoriui. Parodytos reikšmės gautos iš vieno eksperimento.
Fig.6
/ »···'
[GnRH] log M
Šio išradimo junginių pagaminimo būdų pavyzdys yra toks:
O OH
4-( 3-metilfenoksi )-2-butanonas:
O
į m-krezolį (4,0 g, 37 mmol) ir metilvinilketoną (3,2 ml 37 mmol) chloroforme (25 ml) pridedama diizopropiletilamino. Mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 16 vai., paliekamas atvėsti iki kambario temperatūros ir nugarinamas. Liekana turi 50 % produkto ir 50 ;% pradinės medžiagos. Pradinė medžiaga buvo atskirta t-butildimetilsililo esterio pavidalu. Produktas buvo išskirtas nufiltruojant per adsorbento sluoksnelį. Išeiga 4,5 g (68 %).
2-Metil-4-(3-metilfenoksi)-2-butanolis:
OH o
į metilmagnio bromidą eteryje (50 ml), pagamintą iš Mg (572 mg, 23,56 mmol) ir Mel (3,34 g, 23,56 mmol), pridedama 4-(3-meti!fenoksi)-2-butanono (2,1 g, 11,78 mmol) 10 ml eterio. Tirpalas maišomas kambario temperatūroje min., po to skaldomas vandeniu ir praskiesta hidrochlorido rūgštimi.
Organinis sluoksnis atskiriamas, džiovinamas natrio sulfatu ir nufiltruojamas per silikagelio sluoksnelį. Bespalvė sirupo pavidalo medžiaga, 1,91 g (83 %).
4.4-7-T rimetilchromanas:
.o.
Į aliuminio chloridą (1,3 g, 9,79 mmol) 40 ml anglies disulfido pridedama 2-metil-4-(3-metilfenoksi)-2-butanolio (1,9 g, 9,79 mmol) 10 ml anglies disulfido. Mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 2 vai. Tirpiklis nugarinamas, liekana praskiedžiama 50 ml etilacetato ir 10 ml vandens. Organinis sluoksnis atskiriamas, džiovinamas natrio sulfatu ir gryninamas leidžiant per sparčiąją kolonėlę. Gelsva sirupo pavidalo medžiaga, 1,5 g (87 %).
Etil-5-r(4,4,7-trimetil-3,4-dihidro-2H-chromen-6-il)metili-2-furoatas ir etil-5f(4,4,7-trimetil-3,4-dihidro-2H-chromen-8-il)metil1-2-furoatas
Į cinko chloridą (950 mg, 6,97 mmol) nitrometane (20 ml) pridedama 4,4,7-trimetilchromano (1,23 g, 6,97 mmol) ir etil-5-chlormetil-2-furoato (656 mg, 3,48 mmol) nitrometane (15 ml). Mišinys maišomas kambario temperatūroje 16 vai. Nugarinama iki sausos liekanos ir trinama su etilacetatu-vandeniu (1:1, 100 ml). Organinis sluoksnis, jį įprastai apdorojus ir nufiltravus per sluoksnelį adsorbento, naudojant heksaną-etilacetatą (9:1), davė šių dviejų junginių mišinį. 1,34 g (46 % pagal chromaną).
N-(2,4,6-trimetoksifenil)-5-f(4,4,7-trimetil-3,4-dihidro-2H-chromen-6-il)metill-2furamidas ir N-(2,4,6-trimetoksifenil)-5-f(4,4.7-trimetil-3.4-dihidro-2H-chromen8-il)metiH-2-furamidas
Į etil-5-[(4,4,7-trimetil-3,4-dihidro-2H-chromen-6-il)metil]-2-furoato ir etil5-[(4,4,7-trimetil-3,4-dihidro-2H-chromen-8-il)metil]-2-furoato mišinį (1,34 g, 3,74 mmol) THF-MeOH-H2O (7:5:5, 20 ml) pridedama ličio hidroksido monohidrato (784 mg, 18,7 mmol). Mišinys maišomas 4 vai. kambario temperatūroje. Mišinys nugarinamas iki sausos liekanos, praskiedžiamas 30 ml etilacetato ir 50 ml vandens. Parūgštinus praskiesta HCI, etilacetato sluoksnis atskiriamas, džiovinamas, nugarinamas ir gaunamas atitinkamų rūgščių mišinys, 1,03 g (kiekybinė išeiga). Rūgščių negalima atskirti naudojant kolonėlių chromatografiją arba kristalinimą į rūgščių mišinį (200 mg, 0,66 mmol) dichlormetane (30 ml) pridedama tionilo chlorido (392 mg, 3,3 mmol). Mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 1 vai. ir nugarinamas. Liekana ištirpinama heksane-etilacetate (9:1, 20 ml) ir nufiltruojama per silikagelio sluoksnelį (0,5 cm x 1,0 cm).
į šią liekaną 10 ml etilacetato pridedama 2,4,6-trimetoksifenilamino hidrochlorido (145 mg, 0,66 mmol), po to diizopropiletilamino (256 mg, 1,98 mmol). Mišinys maišomas kambario temperatūroje 16 vai. Reakcija stabdoma vandeniu (10 ml) ir atskiriamas etilacetato sluoksnis. Kolonėlių chromatografijos ir HPLC derinys duoda 15 mg ir 21 mg atskirų komponentų (12%).
Šio išradimo junginių bioprieinamumas yra parodytas toliau duodamoje lentelėje.
Kai kurių šio išradimo junginių in vivo farmakologija buvo tiriama taip:
In vivo eksperimentai: bendroji dalis
Suaugusių Sprague-Davvley žiurkių patinėliai buvo gauti iš Harlan
Sprague Dawley (San Diego). Gyvuliukai buvo apgyvendinti po du narve ir laikomi kontroliuojamos temperatūros (22+2 °C) kambaryje su 12 vai šviesos/12 vai. tamsos fotoperiodu (apšviečiama 06.00 vai). Žiurkių pašaras (Teklad žiurkių pašaras) ir vanduo iš čiaupo buvo duodami adlibitum.
Gyvuliukų modeliai GnRH antagonistų aktyvumui įvertinti:
Kastruotų žiurkių patinėlių modelis
Pagrindimas:
Chirurginis lytinių liaukų išėmimas pašalina cirkuliuojantį testosteroną ir eliminuoja neigiamąjį testosterono grįžtamąjį ryšį į pogumburį. Dėl to GnRH kiekis padidėja, o tuo pačiu padidėja ir LH kiekis (fig. #7). Reikėtų laukti, kad GnRH antagonistas sumažins GnRH tarpininkaujamą LH kiekių padidėjimą Antidas - GnRH peptidinis antagonistas - sumažina kastruotų žiurkių LH kiekius (fig. #8). Atrodo, kad šis modelis yra tinkamas mažos molekulinės masės GnRH antagonistams įvertinti.
Metodika:
Sprague-Dawley žiurkių patinėliai (200-225 g) buvo iškastruoti įeinant per kapšelį anestezavus halotanu. Prieš tyrimą gyvuliukams leidžiama 14 dienų sveikti po operacijos. Praėjus 13 dienų po kastravimo, gyvuliukai buvo anestezuojami halotanu ir įvedama neištraukiama kanulė į jungo veną. Kanulės įvedimo metodika buvo aprašyta anksčiau (Harms and Ojeda, 1974). Tyrimų dieną gyvuliukams leidžiama aklimatizuotis procedūrų kambaryje, paliekant juos jų narvuose. Iš visų gyvuliukų paimami foniniai kraujo mėginiai. Tuoj pat po foninių mėginių paėmimo, įvairiais įvedimo būdais įvedamas tirpiklis arba tiriamieji junginiai. Naudoti įvedimo būdai buvo: intraveninis (iv), intraraumeninis (im), intraperitoninis (ip), poodinis (sc) ir peroralinis (po). Kraujo mėginiai buvo imami į heparino turinčius mėgintuvėlius daugelyje laiko taškų po medžiagų įvedimo. Kraujas buvo tuoj pat centrifuguojamas, atskiriama plazma ir laikoma -20° šaldiklyje iki tyrimo. Plazmos mėginiai buvo analizuojami naudojant DSL-4600 ACTIVE LH padengto vamzdelio imunoradiometrinį testavimo rinkinį iš Diagnostic Systems Laboratories, Ine.
Junginiu kompozicijos
Kompozicija #1 (pažymėta ženkliuku ’): 10 % DMSO, 10 % kremoforo EL ir 80 % fiziologinio druskos tirpalo.
Kompozicija #2 (pažymėta ženkliuku 2): 10 % kremoforo EL ir 90 % fiziologinio druskos tirpalo.
Rezultatai
Žr. fig. 9-11 ir lentelę.
Sveiki žiurkių patinėliai
Pagrindimas:
Testosteronas yra hormonas, kurį reguliuoja pogumburio-hipofizėsgonados ašis. GnRH išskiriamas pulsuojančiai iš pogumburio ir stimuliuoja priešakinę hipofizės liauką kad išsilaisvintų gonadotropiniai hormonai LH ir FSH. Testosteronas gaminasi tada, kai sėklides stimuliuoja LH. Išskiriamo testosterono kiekis didėja maždaug tiesiai proporcingai prieinamo LH kiekiui (Guyton, 1986). Laukiama, kad GnRH antagonistas sumažins testosterono kiekį inhibuodamas LH.
metodika:
Sprague-Davvley žiurkių patinėliai (250-275 g) buvo apgyvendinti po vieną ir prieš tyrimą jiems leidžiama aklimatizuotis 1 savaitę. Tyrimo dieną gyvuliukams duodamas tirpiklis arba tiriamasis junginys, panaudojant įvairius įvedimo būdus, įskaitant ip, sc arba po. Kraujo mėginiai iš atskirų gyvuliukų paimami, panaudojant širdies punkciją anestezavus halotanu, nustatytuose laiko taškuose po medžiagos įvedimo. Kraujo mėginiai buvo imami į heparino turinčius mėgintuvėlius. Kraujas buvo tuoj pat centrifuguojamas, atskiriama plazma ir laikoma -20° šaldiklyje iki tyrimo. Plazmos mėginiai buvo analizuojami naudojant DSL-4600 ACTIVE testosteronu padengto vamzdelio imunoradiometrinį testavimo rinkinį iš Diagnostic Systems Laboratories, Ine.
metodika:
Sprague-Davvley žiurkių patinėliai (250-275 g) buvo apgyvendinti po vieną ir prieš tyrimą jiems leidžiama aklimatizuotis 1 savaitę. Mes sukūrėme
.......LT 4904 B metodiką, leidžiančią pakartotiną mėginių paėmimą is jungo venos, panaudojant mikrorenataninius (MRE) kateterius, implantuotus prieš 7 dienas iki bandymo. Šios chirurginės procedūros detalės, buvo aprašytos anksčiau (Harms and Ojeda, 1974). Tyrimų dieną gyvuliukams leidžiama aklimatizuotis procedūrų kambaryje, paliekant juos jų narvuose. Iš visų gyvuliukų paimami foniniai kraujo mėginiai. Tuoj pat po foninių mėginių paėmimo, įvairiais įvedimo būdais duodamas tirpiklis arba tiriamieji junginiai. Naudoti įvedimo būdai buvo: intraveninis (iv), intraraumeninis (im) ir peroralinis (po). Kraujo mėginiai buvo imami į heparino turinčius mėgintuvėlius daugelyje laiko taškų po medžiagų įvedimo. Kraujas buvo tuoj pat centrifuguojamas, atskiriama plazma ir laikoma -20° šaldiklyje iki tyrimo. Plazmos mėginiai buvo analizuojami naudojant DSL-4600 ACTIVE testosteronu padengto vamzdelio imunoradiometrinį testavimo rinkinį iš Diagnostic Systems Laboratories, Ine.
metodika: 134 junginio pakartotinio dozavimo tyrimas
Sprague-Dawley žiurkių patinėliai (250-275 g) buvo apgyvendinti po du ir prieš tyrimą jiems leidžiama aklimatizuotis 1 savaitę. Kiekvieną dieną buvo įvedamas tirpiklis arba im, sc arba po būdu tarp 8:00 ir 9:00 vai. ryto septynias dienas. Aštuntą dieną tarp 8:00 ir 9:00 vai. ryto buvo paimami kraujo mėginiai, panaudojant širdies punkciją anestezavus halotanu. Procedūra trunka 45-60 sek. Per kitas 7 dienas viena gyvuliukų grupė toliau gavo tirpiklį, o kita gyvuliukų grupė nebuvo veikiama niekuo. Mėginiai buvo imami taip, kaip aprašyta aukščiau, po šio poveikio režimo 7tos dienos. Tirpikliu veiktų ir neveiktų gyvuliukų testosterono kiekiai nesiskyrė.
Kiekvieną dieną buvo leidžiama im būdu 134 junginio dozė (100 mg/kg) arba tirpiklis tarp 8:00 ir 9:00 vai. ryto septynias dienas. Mėginiai buvo imami taip, kaip aprašyta aukščiau, po 7t0S poveikio dienos.
Visi kraujo mėginiai buvo imami į heparino turinčius mėgintuvėlius. Kraujas buvo tuoj pat centrifuguojamas, atskiriama plazma ir laikoma -20° šaldiklyje iki tyrimo kitą dieną. Plazmos mėginiai buvo analizuojami naudojant DSL-4600 ACTIVE testosteronu padengto vamzdelio imunoradiometrinį testavimo rinkinį iš Diagnostic Systems Laboratories, Ine.
Fig Λ
LH slopinimas antidu kastruotose žiurkėse prikbuso nuo dozes
Rezultatai
Žr. 2 lentelę ir fig. 12-14. Reprezentaciniai brėžiniai
Fį.7
Kastruotų žiurkių modelio, naudoto GnRH antagonistams Įvertinti, charakterizavimas
Sveikos Kastniotos
Fig J9
LH slopinimas Nr.134 junginiu prikbuso nuo dozės
Valandos po apdorojimo
Fig.10
Peroralinis Nr.134 jungine Įvedimas slopina LH kastruotose žiurkėse
; —— Tirpiklis 20mg,'kg j -*· 5 00 mę/fcg
a : j i
Vabndos po apdorojimo
Fig.l 1
Nr.134 junginio IM Įvedimas (20 mg'kg) slopina LH CX žiurkėse >12 vai.
Tirpiklis
T
Nr.134
E z
n o
V
1 i » 14
Vabndos po apdorojimo
X;
Figūrų aprašymas
Fig.7. Stulpelinis grafikas, rodantis kastruotų (CX) ir sveikų žiurkių bazinius LH ir testosterono kiekius. CX žiurkių LH yra padidintas. Testosterono CX žiurkėse nėra.
. Fig.8. Linijinis grafikas, rodantis LH kiekius., 'išreikštus procentais nuo bazinės linijos, tirpikliu ir antidu paveiktuose gyvuliukuose. Antidas (2,0 ir 20 ug; sc) slopina LH CX žiurkėse.
Fig.9. Linijinis grafikas, rodantis LH kiekius, išreikštus procentais nuo bazinės linijos, tirpikliu ir junginiu paveiktuose gyvuliukuose. 134 junginys (1,0, 5,0 ir 10 mg/kg; iv) duoda priklausantį nuo dozės LH slopinimą CX žiurkėse.
Fig. 10. Linijinis grafikas, rodantis LH kiekius, išreikštus procentais nuo bazinės linijos, tirpikliu ir junginiu paveiktuose gyvuliukuose. 134 junginys (20 ir 100 mg/kg; ip) slopina LH CX žiurkėsė.
Fig.11. Linijinis grafikas, rodantis LH kiekius, išreikštus procentais nuo bazinės linijos, tirpikliu ir junginiu paveiktuose gyvuliukuose. 134 junginys (20 ir 100 mg/kg; ip) slopina LH CX žiurkėse.
lentelė. GnRH junginiai kastruotų žiurkių modelyje
Junginys Dozė mg/kg įvedimo būdas % nuo maks. LH slopinimo >50% slopinimo trukmė Kone. plazmoje ribos (μΜ)
Nr.9 1,0/iv 40 @ 0,5 vai. NS NN
Nr.11 10/iv 10/ip 20/po 40 @ 0,5 vai. 50 @ 0,5 vai. NS 3 vai. <1 vai. NS NN
Nr.13 20/iv 63 @ 0,5 vai. <1 vai. NN
Nr.48 10/iv 75 @ 0,5 vai. <1 vai.
20/iv 51 @ 1 vai. 1 vai. 35,7-3,49
N r. 20 10/iv 20/iv 50/im 50/po 100/po 78 @ 0,5 vai. 72 @ 1 vai. 65 @ 1 vai. 59 @ 1 vai. 43 @ 2 vai. 0,5 vai. 1,0 vai. 2 vai. 2 vai. NS NN
Nr.136 5,0/iv 48 @ 1 vai. 1,0 vai. 3,0-0,3
10/iv 74 @2 vai. 6 vai. 3,7-0,28
20/iv 20/ip 98 @ 4 vai. >6 vai. 8,9-0,7
20/po NS NS 0,29
40/po NS NS 0,72
Nr.134 1,0/iv 24 @ 0,5 vai. I 0,53-0,20
5,0/iv 10/iv 20/po 100/po 20/ip 100/ip 20/sc 100/sc 20/im 100/im 70 @ 0,5 vai. 100 @ 0,5 vai. 62 @ 4 vai. 84 @ 4 vai. 80 @ 2 vai. 98 @ 4 vai. 53 @ 8 vai. 80 @ 6 vai. 73 @ 2 vai. 98 @ 2-24 vai. 2 vai. 4 vai. 8 vai. 4 vai. 8 vai. •tik @ 8 vai. 8 vai. 8 vai. • 24 vai. 3.2- 0,11 4.8- 0,16 0,94-0,3 1,27-0,7 1.7- 0.45 1.7- 0,32 0,6-0,3 0,39-0,15 1.3- 0,12 10.8- 0,5
Nr.119 5,0/iv 63 @ 1 vai. 1 vai. 3,1-0,8
10/iv 61 @ 1 vai. 1 vai. 8,13-0,35
20/po 63 @ 2 vai. 2 vai. 0,1
20/ip 79 @ 2 vai. 2 vai. 0,6-0,1
20/sc NS NS 0,2
Nr.183 10/iv 92 @ 1 vai. 8 vai. 1,5-0,89
50/po 60 @ 2 vai. 8 vai. 0,65-0,13
10/im 58 @ 2 vai. NS 0,18-0,08
Nr.206 10/iv 51 @ 1 vai. NS 0,2-0,06
20/po NS NS 0,1*0,05
NS = nėra slopinimo NN = nenustatyta Reprezentaciniai brėžiniai
Fig.12
N r.136 junginys (20 mg/kg ;ip) slopina testosteroną praėjus 6 vai. po jvodimo
Fig.13
Nr.134 jungine peroralinio įvedimo poveikis j testosteroną sveikose žiurkės·
Tirpiklis Nr.136
Valandos po apdorojimo
Fig.14
Nr.136 junginio kasdbninės doaės (100 mg/kg; im) slopina testosteroną žiurkės·
3.0- Prieš apdorojimą po 7 apdorojimo dienų
P <1 e
O s
i
2.0- _
Tirpiklis
Kontrolinis
Nr.134
Figūrų aprašymas
Atstovauja 1 metodikai:
Fig. 12: Stulpelinis grafikas, rodantis tirpikliu ir junginiu paveiktų gyvuliukų testosterono kiekius praėjus 6 vai. po ip injekcijos. 136 junginys slopina testosterono kiekius, lyginant su tirpikliu paveiktais gyvuliukais *=p<0,05, t-testas.
Atstovauja 2 metodikai:
Fig.13: Linijinis grafikas, rodantis tirpikliu ir 134 junginiu paveiktų žiurkių testosterono kiekius 12 valandų eigoje ir 24 vai. taške. Tirpiklis ir 134 junginys buvo įvesti per gerklę panaudojant zondą. Didžiausia 134 junginio dozė slopino testosteroną per visą bandymą..
Atstovauja 3 metodikai:
Fig. 14: Stulpelinis grafikas, rodantis tirpikliu, 134 junginiu paveiktų ir kontrolinių gyvuliukų testosterono kiekius. Balti stulpeliai atitinka testosterono kiekius po pirminio poveikio, o juodi stulpeliai atitinka testosterono kiekius po 7 dienų pakartotinio poveikio. 134 junginys žymiai slopino testosterono kiekius, lyginant su pirminio poveikio kiekiais, tirpikliu ir kontroliniais gyvuliukais. *=p<0,05, t-testas.
lentelė. GnRH junginiai sveikuose žiurkių patinėliuose
Junginys Dozė mg/kg įvedimo būdas Testosterono slopinimo % Slopinimo ' trukmė Kone. plazmoje ribos (μΜ)
Nr.134 20/ip 36 @ 4 vai. 4 vai. 0,2
100/sc 60 @ 24 vai. 24 vai. 0,13
20/po NS @ 2 arba 4 NS 0,15@2 vai.
vai. 0,17@ 4 vai.
100/im * 7 dienos 80 @ 12 vai. 12 vai. 1,3
20/po NS NS 1.1 @ 1 vai.
50/po 75 @4 vai. 8 vai. 2,5-0,22
100/po 80 @ 6 vai. .12 vai. 2,4-0,25
Nr.136 20/ip 72 @ 6 vai. 6 vai. 0,4
40/po 46 @ 4 vai. 4 vai. 0,34
NS = nėra s opinimo
NN = nenustatyta
Pastabos dėl metodikų
Literatūroje buvo aprašyta, kad kai kurios gyvūnų endokrininiuose tyrimuose paprastai naudojamos procedūros, tokios kaip anestezija, maisto trūkumas, chirurginė operacija, gali veikti tiriamųjų hormonų kiekius (B.E. Howland, etai., Experentia, 1974). Luteinizuojantis hormonas ir testosteronas yra jautrūs stresų sukėlėjams. Daugelis pranešimų' apie stresų sukėlėjų poveikį į HPG ašį yra prieštaraujantys net ir tada, kai yra naudojamos tos pačios gyvūnų rūšys ir tie patys stresų sukėlėjai. Pavyzdžiui, buvo aprašyta, kad kai žiurkių patinėlių judėjimas buvo suvaržytas arba jie buvo imobiiizuoti, jie turėjo žemas (Kruhlich et ai., 1974; DuRuisseaų et ai., 1978), normalias (Tache et ai., 1980; Charpenet et ai., 1982; Coliu et ai., 1984) arba padidintas LH koncentracijas (Briski et ai., 1984). Panašiai, buvo aprašyta, kad testosterono kiekiai plazmoje keičiasi po poveikio stresu, bet vėlgi pasirodo, kad duomenys yra prieštaraujantys ir todėl sunku juos interpretuoti. Pavyzdžiui, buvo aprašyta, kad intensyvių fizinių pratimų metu testosterono kiekis plazmoje didėja (Dessypris et ai., 1976), mažėja (Sutton et ai., 1973) arba nepakinta (Lamb, 1975). Imobilizavimo poveikis į testosterono koncentracijas buvo labiau sutampantis tarp įvairių tyrinėtojų gautų duomenų, ir jie stebėjo cirkuliacinių reikšmių sumažėjimą (Tache et ai., 1980; Charpenet et ai., 1982; Coliu et ai., 1984). Vis tik yra priimta, kad stresų sukėlėjai duoda cirkuliuojančio testosterono pokyčius, o panaudoto streso pobūdis, trukmė ir dydis sukelia skirtingus streso indukuotus testosterono koncentracijų pokyčius. Turėdami omenyje LH ir testosterono jautrumą stresui, mes optimizavome metodikas, kad būtų galima įvertinti LH ir testosteroną sąlygomis, kurios sumažina stresą.
Šio išradimo junginiai, kurie buvo pagaminti, yra parodyti pridedamose lentelėse.
Junginiai gali būti pagaminti pagal aukščiau aprašytus bendruosius eksperimentinius principus. Toliau yra duodami konkretūs pavyzdžiai.
JUNGINIAI, TURINTYS PIRIMIDINO GRUPĘ
O
nh2
2-Chlor-N-[(2R)-tetrahidro-2-furanmetil]-4-pirimidinamino (1) ir 4-chlor-N[(2R)-tetrahidro-2-furanmetil]-2-pirimidinamino (2) gavimas
Į 250 ml talpos apvaliadugnę kolbą Įdedama 2,4-dichlorpirimidino (5,0 g, 33,56 mmol) ir 200 ml THF. Į šį tirpalą pridedama trietilamino (14,0 ml, 100,68 mmol) ir (R)-tetrahidrofurfurilamino. Tirpalas maišomas per naktį. Reakcijos mišinys supilamas į vandenį ir ekstrahuojamas metileno chloridu. Organinis sluoknis atskiriamas, plaunamas sočiu NaCi tirpalu, džiovinamas magnio sulfatu ir sukoncentruojamas rotoriniu garintuvu. Negrynas junginys gryninamas ch'romatografuojant per silikagelį, eliuuojant heksanu/etilacetatu (nuo 4:1 t/t iki 1:1 t/t), ir gaunamas 2 (1,3 g) ir 1 (3,98 g).
N-[3-(aminometH)benzH]’2,2,2-trifluoracetamido (3) gavimas į m-ksilendiamino (28,76 g, 211,15 mmol) tirpalą THF (300 ml, 0,7 M) sulašinamas etiltrifluoracetato (10 g, 70,38 mmol) tirpalas THF (50 ml, 1,4 M). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje per naktį. Reakcija kontroliuojama TLC. Tirpiklis sukoncentruojamas, liekana 4N HCI parūgštinama iki pH 2, ištirpinama vandenyje ir plaunama etilacetatu. Atskirtas vandeninis sluoksnis naudojant NH4OH pašarminamas iki pH 11, ir junginys išekstrahuojamas dichlormetanu. Atskirtas organinis sluoksnis plaunamas vandeniu ir sočiu NaCi tirpalu, džiovinamas magnio sulfatu ir sukoncentravus gaunamas 3 (8,71 g, 53 % išeiga).
5-((3,5,5,8,8-Pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenii)metil]-N-(3-{[(2{[(2R)-tetrahidro-2-furanilmetil]amino}-4-pirimidinil)amino]metil}benzil)LT 4904 B
Etilo 3-(aminometil)benzilkarbamato (5) gavimas
Į N-[3-(aminometil)benzil]-2,2,2-trifluoracetamido 3 (10,6 g, 43,1 mmol) tirpalą pridedama etilchlorformiato (1 ekv.), o po to trietilamino. Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 30’ min. Negrynas produktas išekstrahuojamas metileno chloridu ir sukoncentravus gaunamas etilo 3{[(trifluoracetil)amino]metil}benzilkarbamatas 4. Šis negrynas produktas ištirpinamas metanolyje (100 ml) ir 2N K2CO3 (100 ml) ir maišomas per naktį. Reakcijos mišinys pašarminamas iki pH 14 20 % NaOH, ekstrahuojamas metileno chloridu, plaunamas sočiu NaCI ir išdžiovinus magnio sulfatu gaunamas 5 (5,2 g).
Etilo 3{[(2-{[(2R)-tetrahidro-2-furanilmetil]amino}-4-pirimidinil)amino]metil}benzilkarbamato (6) gavimas į etilo 3-(aminometil)benzilkarbamato 5, turinčio 4-chlor-N-[(2R)tetrahidro-2-furanmetil]-2-pirimidino 2, tirpalą chlorbenzene pridedama trietilamino. Reakcijos mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu per naktį. Tirpalas atšaldomas iki kambario temperatūros, supilamas į silikagelio kolonėlę ir eliuuojamas heksanu/etilacetatu (1:1 t/t); gaunamas etilo 3{[(2{[(2R)-tetrahidro-2-furanilmetil]amino}-4-pirimidinil)-amino]metil}benzilkarbamatas 6 (73 % išeiga).
Etilo 3{[(2-{[(2R)-tetrahidro-2-furanilmetil]amino}-4-pirimidinil)-amino]metil}benzilkarbamatas 6 ištirpinamas etilenglikolyje ir kalio hidrokside (1:1 t/t). Tirpalas šildomas 100 °C temperatūroje per naktį. Mišinys atšaldomas iki kambario temperatūros ir ekstrahuojamas chloroformu, plaunamas sočiu NaCI tirpalu, džiovinamas magnio sulfatu ir gaunamas N4-[3-(aminometil)benzil]-N2[(2R)-tetrahidro-2-furanilmetil]-2,4-pirimidindiaminas 7 (82 % išeiga).
5-[(3,5l5,8,8-Pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenil)metil]-N-(3-{[(2{[(2R)-tetrahidro-2-furanilmetil]amino}-4-pirimidinil)amino]metil}benzU)2-furamido (9) gavimas
Etilo 3{[(2-{[(2R)-tetrahidro-2-furanilmetil]amino}-4-pirimidinil)-amino]metiljbenzilkarbamatas 6 ištirpinamas etilenglikolyje ir kalio hidrokside (1:1 t/t). Tirpalas šildomas 100 °C temperatūroje per naktį. Mišinys atšaldomas iki kambario temperatūros ir ekstrahuojamas chloroformu, plaunamas sočiu NaCI tirpalu, džiovinamas magnio sulfatu ir gaunamas N4-[3-(aminometil)benzil]-N2[(2R)-tetrahidro-2-furanilmetil]-2,4-pirimidindiaminas 7 (82 % išeiga). Šis produktas (7) (182 mg, 580 mmol) ir 2-furoilchloridinis reagentas 8 ištirpinami dichlormetane, po to pridedama trietilamino. Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį. Negrynas produktas gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojant etilacetatu/heksanu (4:1 t/t), ir gaunamas 5-((3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2naftalenil)metil]-N-(3-{[(2-{[(2R)-tetrahidro-2-furanilmetil]amino}-4-pirimidinil)amino]metil}benzil)-2-furamidas 9 (159,1 mg). ’H BMR (CDCb): 1,65 (m, 5H),
1,92 (m, 3H), 2,23 (s, 3H), 3,45 (m, 1H), 3,5 (m. 1H), 3,7 (m, 1H), 3.9 (m, 1H),
4,05 (m, 1H), 4,50 (d, 2H), 4,58 (d, 2H), 5,01 (pi, 1Ή), 5,30 (pi, 1 H),5,71 (d,
H), 6,03 (d, 1H), 6,61 (t, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,28 (m, 4H), 7,80 (d. 1H). MS: 622,4 (M+1).
5-((3,5,5,8,8-PentametH-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenH)metil]-N-(3-{[(4{[(2S)-tetrahidro-2-furanilmetil]amino}-2-pirimidinil)amino]metil}benzil)2-furamido (12) sintezė
N-[3-(aminometil)benzil]-5-[(3,5,5,8,8-pentametii-5, G, 7,8-tetrahidro-2naftalenil)metil]-2-furamido (11) gavimas l N-[3-(aminometil)benzil]-2,2,2-trifluoracetamido 3 ir 2-furoilchloridinio reagento 8 tirpalą pridedama trietilamino. Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 1 vai. Negrynas mišinys gryninamas chromatografuojant per silikagelį, eliuuojant heksanu/etilacetatu (4:1 t/t) ir gaunamas 5-((3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenil)metil]-N-(3{[(trifluoracetil)amino]metil}benzil)-2-furamidas 10. Išgrynintas junginys ištirpinamas metanolyje (100 ml) ir kalio karbonato vandeniniame tirpale (2M, 100 ml). Reakcijos mišinys kaitinamas 70 °C temperatūroje per naktį. Tirpalas atšaldomas iki kambario temperatūros, pašarminamas 20 % NaOH iki pH 14, ekstrahuojamas metileno chloridu, plaunamas sočiu NaCI tirpalu ir išdžiovinus magnio sulfatu gaunamas N-[3-(aminometil)benzrl]-5-[(3,5,5,8,8-pentametil5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenil)metil]-2-furamidas 11 (4,97 g, 85,1 % išeiga).
5-[(3,5,5,8,8-Pentametii-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenil)metil]-N-(3-{[(4{[(2S)-tetrahidro-2-furanilmetil]amino}-2-pirimidinil)amino]metil}benzil)2-furamido (12) gavimas . Į N-[3-(aminometil)benzil]-5-[(3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2naftalenil)metil]-2-furamido 11 tirpalą chlorbenzene pridedama 2-chlor-N[(2S)-tetrahidro-2-furanmetil]-4-pirimidinamino ir trietilamino. Reakcijos mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu per naktį. Reakcijos mišinys gryninamas chromatografuojant per silikagelį, o po to HPLC metodu. Gaunamas 5-((3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenil)metil]-N-(3{[(4-{[(2S)-tetrahidro-2-furanilmetil]amino}-2-pirimidinil)amino]metil}benzil)-2furamidas 12.1H BMR (CDCI3): 1,25 (s, 6H), 1,43 (m, 1 H), 1,56 (s, 4H), 1,701,98 (m, 3H), 2,13 (s, 3H), 3,24 (m, 1 H),* 3,61 (m, Ί H),'3,63-3,80 (m, 2H), 3,82 (s, 2H), 3,87-4,06 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 4,60 (d, 2H), 5,37 (d, 1H), 5,92 (d, 1H), 6,3 (pi, 1H), 6,75 (pi, 1H), 6,92 (s, 1H), 6,98 (d, 1 H). 7,0 (s, 1 H), 7,097,26 (m, 4H), 7,4 (s, 1H), 9,5 (pi, 1 H). MS (APCI): 622; 3 (M+1).
HETEROCIKLINĮ ŽIEDĄ TURINČIŲ JUNGINIŲ PAVYZDŽIAI .OH metilvinilketonas JI chloroformas, Dli^EA
CH3Mgl
4-(3-metilfenoksi)-2-butanonas:
į m-krezolį (4,0 g, 37 mmol) ir metilvinilketoną (3,2 ml 37 mmol) chloroforme (25 ml) pridedama diizopropiletilamino. Mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 16 vai., paliekamas atvėsti iki kambario temperatūros ir nugarinamas. Liekana turi 50 % produkto ir 50 % pradinės medžiagos. Pradinė medžiaga buvo atskirta t-butildimetilsililo esterio pavidalu. Produktas buvo išskirtas nufiltruojant per silikgelio sluoksnelį, išplaunant 50 % heksanu/etilacetatu. Išeiga 4,5 g (68 %). Kita gryninimo metodika yra: negrynas reakcijos mišinys nugarinamas, ištirpinamas DMF (0,2 M) ir pridedama 0,5 ekvivalento imidazolo ir 0.5 ekvivalento tBDMSCI. Reakcijos mišinys maišomas 3 vai. kambario temperatūroje, po to tirpikliai nugarinami vakuume. į liekaną įpilama 75 ml etilacetato ir 75 ml vandens (santykis 1/1).
Etilacetato sluoksnis atskiriamas ir džiovinamas Na2S04. Tirpikliai nugarinami vakuume. Negryna medžiaga uždedama ant silikagelio sluoksnelio ir sililintas m-krezolis pašalinamas heksanais. Produktas gaunamas eliuuojant 5-10 % etilacetatu heksanuose. Vakuume nugarinus tirpiklius, gaunamas norimas produktas. 1H BMR (CDCfe): 7,15 (t, 1H), 6,65-6,80 (ιτι, 2H), 4,25 (t, 2H), 2,75 (t, 2H), 2.25 ir 2,35 (2s, po 3H). :“·'
2-MetH-4-(3-metilfenoksi)-2-butanolis:
.OH
Į metilmagnio bromidą eteryje (50 ml), pagamintą iš Mg (572 mg, 23,56 mmol) ir Mel (3,34 g, 23,56 mmol), pridedama 4-(3-metilfenoksi)-2-butanono (2,1 g, 11J8 mmol) 10 ml eterio. Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 30 min., po to skaldomas vandeniu ir praskiestą hidrochlorido rūgštimi. Organinis sluoksnis atskiriamas, džiovinamas natrio sulfatu ir nufiltruojamas per silikagelio sluoksnelį ir gaunama bespalvė sirupo pavidalo medžiaga, 1,91 g (83 %). Masių spektras, naudojant APCI, +maš 177 (M+-OH).
4,4-7-Trimetilchromanas:
.0.
s?
Į aliuminio chloridą (1,3 g, 9,79 mmol) 40 ml anglies disulfido pridedama 2-metil-4-(3-metilfenoksi)-2-butanolio (1,9 g, 9,79 mmol) 10 ml anglies disulfido. Mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 2 vai. Tirpiklis nugarinamas, liekana praskiedžiama 50 ml etilacetato ir 10 ml vandens. Organinis sluoksnis atskiriamas, džiovinamas natrio sulfatu ir išgryninus kolonėlių chromatografijos metodu gaunama ’: gelsva sirupo pavidalo medžiaga, 1,5 g (87 %). 1H BMR (CDCfe): 7,05 (pl.d, 1H), 6,87 (dd, 1 H), 6,69 (d, 1 H), 4,20 (t, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,80 (t, 2H), 1,40 (s, 6H).
Etil-5-[(4,4,7-trimetil-3,4-dihidrO’2H-chromen-6-il)metil]-2-furoatas ir etil· 5-[(4,4l7-trimetH-3l4-dihidro-2H-chromen-8-il)metif]-2-furoatas
Į cinko chloridą (950 mg, 6,97 mmol) nitrometane (20 ml) pridedamas 4,4,7-trimetilchromano (1,23 g, 6,97 mmol) ir etil-5-chlormetil-2-furoato (656 mg, 3,48 mmol) mišinys nitrometane (15 ml). Mišinys maišomas kambario temperatūroje 16 vai. Nugarinama iki sausos liekanos ir trinama su etilacetatu-vandeniu (1:1, 100 ml). Organinis sluoksnis, jį įprastai apdorojus ir nufiltravus per sluoksnelį adsorbento, naudojant heksanus etilacetate (9:1), davė šių dviejų junginių mišinį. 1,34 g (46 % pagal chromaną).
N-(2,4,6-trimetoksifenil)-5-[(4,4,7-trimetil-3,4-dihidro-2H-chromen-6il)metil]-2-furamidas ir N-(2,4,6-trimetoksifenil)-5-[(4,4,7-trimetil-3,4dihidro-2H-chromen-8-il)metil]-2-furamidas
į etil-5-[(4,4,7-trimetil-3,4-dihidro-2H-chromen-6-il)metil]-2-furoato ir etil5-[(4t4)7-trimetil-3,4-dihidro-2H-chromen-8-il)metil]-2-furoato mišinį (1,34 g, 3,74 mmol) THF-MeOH-HsO (7:5:5, 20 ml) pridedama ličio hidroksido monohidrato (784 mg, 18,7 mmol). Mišinys maišomas 4 vai. kambario temperatūroje. Mišinys nugarinamas iki sausos liekanos, praskiedžiamas 30 ml etilacetato ir 50 ml vandens. Parūgštinus praskiesta HCI, etilacetato sluoksnis atskiriamas, džiovinamas, ir nugarinus vakuume gaunamas atitinkamų rūgščių mišinys, 1,03 g (kiekybinė išeiga). Rūgščių negalima atskirti naudojant kolonėlių chromatografiją arba kristalinimą. Į šių rūgščių mišinį (200 mg, 0,66 mmol) dichlormetane (30 ml) pridedama tionilo chlorido (392 mg. 3,3 mmol). Mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 1 vai. ir nugarinamas. Liekana ištirpinama heksane-etilacetate (9:1, 20 ml) ir nufiltruojama per silikagelio sluoksnelį (0,5 cm x 1,0 .cm). Į šią liekaną 10 ml etilacetato pridedama 2,4,6-trimetoksifenilamino hidrochlorido (145 mg, 0,66 mmol), po to diizopropiletilamino (256 mg, 1,98 mmol). Mišinys maišomas kambario temperatūroje 16 vai. Reakcija stabdoma vandeniu (10 ml) ir atskiriamas etilacetato sluoksnis. Kolonėlių chromatografijos ir HPLC derinys duoda 15 mg ir 21 mg atskirų komponentų (12 %). Izomerai buvo atskirti naudojant atvirkštinių fazių HPLC chromatografiją. Linijinis izomeras: 1H BMR (CDCb): 7,46 (pl.s, 1H), 7,23 (pl.s, 1H), 7,14 (pl.s,'1 H), 7,02 (s, 2H), 6,63 (s,
1H), 6,15 (s, 2H), 6,0 (d, 1H), 4,17 (t, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,81, 3,80 (2s, po 3H),
2,21 (s, 3H), 1,81 (t, 2H), 1,29 (s, 6H). M* .466,2. Kampinis izometas: AXC07302: 7,25 (pl.s, 1H), 6,91 (d, 1 H), 6,88 (d; paslėptas, 1H), 6,53 (d, 1H),
5,95 (s, 2H), 5,72 (d, 1H), 3,96 (t, 2H), 3,8 (s, 3H), 3,6 (s, 6H), 2,07 (s, 3H),
1,59 (t, 2H), 1,11 (s, 6H). M+466,1.
AROMATINIŲ JUNGINIŲ PAVYZDŽIAI
A junginys
a. Etilacetatas, trietilaminas, per naktį
B junginys
a. HATU, diizopropiletilaminas, DMF, 24 vai
b.kalio t-butoksidas 20 % MeOH/DMF, 30 min. c. bromidinis reagentas, 20 % MeOH/DMF, 40 vai.
183 junginys
Timolis (1,0 ekv., 33,3 mmol) ir metilo 5-(chlormetil)-2-furoatas (1,0 ekv., 33,3 mmol) ištirpinami nitrometane (120 ml, 0,2 M). Į šį tirpalą azoto atmosferoje supilamas aliuminio trichloridas (1,0 ekv., 33,3 mmol), ištirpintas 25 ml nitrometano, ir 10 min. lėtai virinama su grįžtamu šaldytuvu. Šildymas nutraukiamas ir paliekama azoto atmosferoje per naktį. Reakcija stabdoma pridedant 100 ml vandens ir ekstrahuojama dichlormetanu. Negrynas mišinys nugarinamas iki sausos liekanos ir suleidžiamas ant chromatografines kolonėlės paviršinio sluoksnio (santykis. 1 g negrynos medžiagos/100 g silikagelio). Kolonėlė eliuuojama 7 ir 11 % etilacetato/heksanuose ir gaunamas norimas produktas (2,9 g, 30 %). Esteris'hidrolizuojamas į rūgštį ličio hidroksidu THF/MeOH/H2O (35/25/25).
5-(4-Hidroksi-5-izopropil-2-metilbenzil)-2-furankarboksirūgštis (1,0 ekv.,
3,6 mmol, 0,5M) ir 2,6-dimetoksianilinas (1,0 ekv., 3,6 mmol) ištirpinami DMF.
Į šį mišinį pridedama HATU (1,0 ekv., 3,6 mmol) ir diizopropiletilamino (1,0 ekv., 3,6 mmol) ir maišoma per naktį. Mišinys pakaitinamas 10 min. 45 °C temperatūroje. Tirpalas supilamas į etilacetatą (3x didesnis tūris) ir plaunamas vandeniu. Organinis sluoksnis nugarinamas iki sirupo pavidalo liekanos ir eliuuojamas per trumpą chromatografinę kolonėlę· (1:100 g negrynos medžiagos / g silikagelio) 30 ir 50 % etilacetatu/heksane; gaunamas N-(2,6dimetiksifenil)-5-(4-hidroksi-5-izopropil-2-metilbenzil)-2-furamido (820 mg, 55 % išeiga). 1H BMR (CDCb), m.d.: 7,22 (1H, t, J = 8,68 Hz), 7,08 (1H, d, J =
3,40 Hz), 6,99 (1H, s), 6,64 (2H, d, J = 8,68 Hz), 6,61 (1H, s), 5,97 (1H, d, J =
3,40 Hz), 3,95 (2H, s), 3,85 (6H, s), 3,17 (1 H, pentetas, J = 6,8 Hz), 2,23 (3H, s), 1,25 (3H, s) ir 1,23 (3H, s).
Kalio t-butoksidas (1,05 ekv., 0,128 mmol) ištirpinamas MeOH (24 μΙ). Į aukščiau aprašyto furamido (1,0 ekv., 0,122 mmol, 1M) tirpalą DMF, pridedamas t-butoksido tirpalas ir maišoma 30 min. Supilamas 2brometilmetilo eteris (1,0 ekv., 0,122 mmol) (20 % MeOH/DMF, 1M), maišoma kambario temperatūroje 48 vai. ir išgryninus atvirkštinių fazių HPLC metodu (35-75 % acetonitrilas 0,1 % vandeniniame THF, 90 min) gaunama medžiaga (8,5 mg, 15 % išeiga). 1H BMR (CDCb), m.d.: 7,04 (i H, J = 8,31 Hz, t), 6,85 (1H, J = 3,40Hz, d), 6,80 (1H, s), 6,53 (1H, s), 6,48 (2H, J = 8,31 Hz, d), 5,76 (1H, J = 3,40 Hz, d), 3,88 (2H, J = 3,40/4,53 Hz, dd), 3,78 (2H, s), 3,58 (6H, s), 3,54 (2H, J = 3,40/4,54 Hz, dd), 3,20 (3H, s), 3,07 (1H, J = 7,2 Hz, pentetas), 2,04 (3H, s), 0,97 (3H, s), 0,95 (3H, s).
A junginys
1,1,6-Trimetil-1,2,3,4-tetrahidronaftalenas buvo susintetintas pagal literatūros šaltinį: John J. Parlovv, Tetrahedron, Vol. 49(13), 2577. Po to jis buvo sujungtas su metilo 5-(chlormetil)-2-furoatu pagal Frydelio-Kraftso reakciją kaip pažymėta anksčiau, ir gauti du pagrindiniai regioizomerai. Norimas izomeras buvo atskirtas po hidrolizės, naudojant 3-5 nuoseklius perkristalinimus iš 10 % acetono/heptano (1 g/10 ml) sistemos. Po to rūgštis buvo paversta chloranhidridu, panaudojant tionilo chloridą kaip pažymėta anksčiau.
Į 5-[(3,8,8-trimetil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenil)metil]-2-furoilo chlorido (1,0 ekv., 0,32 mmol, 0,2 M) tirpalą 2 ml etilacetato pridedama 2,4,6trimetoksianilino mono HCI druskos '(1,0 ekv., 0,32 mmol). į šį mišinį pridedama trietilamino (perteklius) ir maišoma per naktį. Negrynas produktas džiovinamas vakuume ir gryninamas leidžiant per trumpą chromatografinę kolonėlę (santykis: 1:100 negrynos medžiagos/silikagelio), kuri eliuuojama 20 ir 30 % etilacetato tirpalu heksane. Kai kuriais atvejais regioizomerai buvo atskirti perkristalinant iš 25 % etilacetato heksanuose (1 g junginio 75 ml tūryje), ir gautas N-(2l4,6-trimetoksifenil)-5-[(3,818-trimetil-516,7,8-tetrahidro-2naftalenil)metil]-2-furamidas (120 mg, 82 % išeiga). 1H BMR (CDCb), m.d.:
7,28 (1H, platus), 7,12 (1H, s), 7,08 (1H, J = 3,40 Hz, d), 6,89 (1H, s), 6,19 (2H, s), 6,00 (1H, J = 3,40 Hz, d), 3,97 (2H, s), 3,83 (3H, s), 3,82 (6H, s), 2,73 (2H, J = 6,05 Hz, t), 2,25 (3H, s), 1,84-1,76 (2H, multipletas), 1,69-1,63 (2H, multipletas), 1,59 (3H, s), 1,26 (6H, s). Elementinė analizė: laukiama C(72,55), H(7,18), N(3,02); rasta C(72,67), H(7,22), N(2,98).
// junginys. Į 3,5-dimetoksianilino (I junginys, 1,53 g, 10 mmol) tirpalą DCM (20 ml) pridedama metansulfonilchlorido (0,88 ml, 10 mmol). Įlašinama TEA (1,40 ml, 10 mmol). Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje 15 vai. Negrynas produktas išdžiovinamas ir gryninamas sparčiosios chromatografijos metodu (30 % etilacetatas/heksanuose); gaunamas II junginys (2,10 g, 91 %), kuris yra balta kieta medžiaga. 1H BMR, (CDCb) 2,96 (s, 3H), 3,71 (s, 6H), 6,20 (d, 1H, J = 3 Hz), 6,34 (d, 2H, J = 3 Hz), 6,76 (s, 1H), APCI-MS m/z 232 (M+H)+.
III junginys. Į (ΟΗ3)4ΝΝΟ3 (1,12 g, 7,89 mmol) tirpalą DCM (10 ml) Įlašinama triflo rūgšties anhidrido. Reakcijos mišinys maišomas 0 °C temperatūroje 1,5 vai. Į lašinamąjį piltuvą supilamas II junginys (1,75 g, 7,51 mmol) 10 ml DCM, ir tirpalas sulašinamas į nitronio trifiato reakcijos mišinį -78 °C temperatūroje. Reakcijos mišinys laikomas -78 °C temperatūroje 30 min., po to laipsniškai sušildomas iki kambario temperatūros. Jis maišomas 15 vai. Reakcija stabdoma 5 % NaHCO3 (50 ml), mišinys maišomas 30 min. Vandeninis sluoksnis ekstrahuojamas DCM (3x20 ml). Sumaišyti DCM sluoksniai džiovinami Na2SO4. Negrynas produktas gryninamas HPLC metodu, ir gaunamas Iii junginys (250 mg. 11 %), kuris yra balta kieta medžiaga. 1H BMR, CDCb) 3,03 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 6,32 (d,
H, J = 3 Hz), 6,88 (d, 1 H, J = 3 Hz), 8,31 (s, 1 H).APCI-MS m/z 275 (M-H)'.
IV junginys. Į III junginio (106 mg, 0,38 mmol) tirpalą EtOH (2 ml) pridedama 20 mg Pd/C ir NH2NH2 (1 ml). Reakcijos mišinys virinamas su grįžtamu šaldytuvu 9 vai. Reakcijos mišinys perleidžiamas per celito sluoksnį.
Tirpalas nugarinamas iki sausos liekanos ir gaunamas IV junginys, kuris yra ruda kieta medžiaga (90 mg, 95 %). Šis junginys naudojamas tiesiogiai tolimesnėje stadijoje.
228 junginys
Į IV junginio (39 mg, 0,16 mmol) ir 5-((3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8tetrahidro-2-naftalenil]-2-furoilo chlorido (60 mg, 0,174 mmol) tirpalą DCM (1 ml) pridedama TEA (44 μΙ, 0,31 mmol). Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį. Po sparčiosios chromatografijos (30 % etilacetatas/heksanuose) gaunamas 228 junginys (65 mg, 74 %), kuris yra balta kieta medžiaga. ’H BMR (CDCb) 1,04 (m, 12H), 1,45 (m, 4H), 2,09 (s,
3H), 2,71 (s, 3H), 3,60 (s, 3H), 3,63 (s; 3H), 3,78 (s, 2H), 5,89 (d, 1H, J = 3 Hz), 6,17 (d, 1 H, J = 3 Hz), 6,58 (d, 1H, J = 3 Hz), 6,85 (s, 1H), 6,90 (s, 1H),
6,96 (d, 1H, J = 3 Hz), 7,90 (s, 1H), 8,24 (s, 1H). APCI-MS m/z 556 (M+H)*
Toliau parodyti kai kurių junginių papildomi pavyzdžiai (BMR).
junginys ’H BMR (CDCb) 1,26 (m, 12H), 1,66 (m, 4H), 2,28 (s, 3H), 3,82 (s, 6H), 3,96 (s, 2H), 6,04 (d, 1 H, J = 6 Hz), 6,60 (s, 1 H), 6,62 (s, 1 H), 7,05 (m, 3H), 7,23 (t,
H, J = 6 Hz), 7,44 (s, 1 H). APCI-MS m/z 462 (M+H)+.
126 junginys ’H BMR (DMSO) 2,20 (s, 3H), 2,27 (s, 6H), 3,71 (s, 6H), 3,98 (s, 2H), 5,93 (d,
1H, J = 3 Hz), 6,68 (s, 1H), 6,69 (s, 1H), 6,86 (d, 2H, J = 3 Hz), 7,10 (d, 1H, J = 3 Hz), 7,23 (t, 1 H, J = 7 Hz), 9,04 (s, 1 H). APCI-MS m/z 379 (M+H)*.
140 junginys ’H BMR (DMSO) 2,20 (s, 3H), 2,28 (s, 6H),2,32 (s, 3H). 2,42 (s, 3H), 3,72 (s.
6H), 4,10 (s, 2H), 6,00 (d, 1H, J = 3 Hz), 6,60 (s, 1H), 6,68 (s, 1H), 6,71 (s,
1H), 7,10 (m, 2H), 7,24 (t, 1H, J = 6 Hz), 9,04 (s, 1H). APCI-MS m/z 458 (M+H)*.
211 junginys 1H BMR (CDCb) 3,76-3,83 (m, 15H), 4,07 (s, 2H), 5,95 (d, 1H, J = 3 Hz), 6,60 (s, 1H), 6,57-6,62 (m, 3H), 6,78 (d, 1H, J = 9 Hz), 7,03 (d, 1H, J = 3 Hz), 7,19 (t. 1 H, J = 6 Hz), 7,46 (s, 1 H). APCI-MS m/z 428 (M+H)+.
220 junginys 1H BMR (CDCb) 3,72-3,77 (m, 15H), 3,90 (s, 2H), 5,78 (d, 1H, J = 3 Hz), 6,08 (s, 2H), 6,52-6,55 (m, 3H), 6,94 (d, 1H, J = 9 Hz), 7,12 (d, 1H, J = 9 Hz), 7,39 (s, 1 H). APCI-MS m/z 428 (M+H)+.
226 junginys 1H BMR (CD3OD) 2,33-2,48 (m, 12H), 3,84 (s, 6H), 4,19 (s, 2H), 5,81 (d, 1H, J = 3 Hz), 6,73 (d, 2H, J = 9 Hz), 7,06 (d, 1H, J = 3 Hz), 7,29 (t, 1H, J = 9 Hz). APCI-MS m/z 472 (M+H)+.
231 junginys 1H BMR (CDCb) 0,67 (t, 3H, J = 6 Hz), 1,27 (m, 6H), 1,70 (m, 2H), 3,62 (s, 3H), 3,80-3,83 (m, 6H), 4,02 (s, 2H), 6,02 (d, 1H, J = 3 Hz), 6,60 (d, 2H, J = 9 Hz), 6,83 (d, 1H, J = 9 Hz), 7,07-7,19 (m, 4H), 7,43 (s, 1H). APCI-MS m/z 438 (M+H)+.
232 junginys 1H BMR (CDCb) 0,66 (t, 3H, J = 6 Hz), 1,23 (m, 6H), 1,54-1,62 (m, 2H), 3,803,81 (m, 12H), 4,01 (s, 2H), 6,00 (d, 1H, J = 3 Hz), 6,81 (d, 1H, J = 9 Hz), 6,82 (d, 1H, J = 3 Hz), 7,06-7,28 (m, 4H). APCI-MS m/z 468 (M+H)+.
KITŲ AROMATINĘ GRUPĘ TURINČIŲ JUNGINIŲ PAVYZDŽIAI
5-(5-CZfc/o/iefcs/7-2-mef//6enz//J-A^(2,4,6-fr/mefofts/fert//7-2-/i/ra/77/Gfo sintezė į 1 junginio (5,0 g, 20,3 mmol) ir metilfuroato (3,5 g, 20,3 mmol) mišinį 100 ml nitrometano kambario temperatūroje supilamas AICI3 (5,4 g, 40,6 mmol) tirpalas CH3NO2 (50 ml). Tirpalas šildomas 70-75 °C temperatūroje per naktį. Tamsiai rudas mišinys atšaldomas iki kambario temperatūros ir lėtai supilamas į 300 ml ledinio vandens. Mišinys ekstrahuojamas etilacetatu. Sukoncentruotas organinis sluoksnis gryninamas chromatografuojant per silikagelį, eliuuojant heksanu/etilacetatu (nuo 15:1 iki 9:1 t/t) ir gaunama 920 mg 2 junginio, kuris po to hidrolizuojamas ir kopuliuojamas su trimetoksianilinu pagal bendrąją metodiką gera išeiga gaunamas junginys. 1H BMR (CDCb): δ 1-23-1,48 (m, 5H), 1,73-1,86 (m, 5H), 2,31 (s, 3H), 2,51 (m, 1H), 3,83 (s, 1H), 4,02 (s, 2H), 6,03 (s, 1H), 7,44 (s, 1H). MS (APCI): 464,2 (M+1).
O
MeO, ,CI '0'
AICI3
CH3NO2
5-(5-Acetil-2,4-dimetilbenzil)-N-(2,4,6-trimetoksifenii)-2-turamido sintezė junginio (14 g, 94,4 mmol), metilfuroato (16,4 g, 94,4 mmol) ir AICI3 mišinys (25 g. 189 mmol) mišinys 200 ml nitrometano maišomas ir kaitinamas 80 °C temperatūroje per naktį. Mišinys apdorojamas ir išgryninus chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojamą heksanu/etilacetatu (9:1 t/t), gaunamas 4 ir 5 mišinys (3:1, iš viso 16.2 g).
Šis 4 ir 5 mišinys (2,0 g) hidrolizuojamas 2N NaOH/MeOH (1:1 t/t) kambario temperatūroje ir gaunamas 6 ir 7 mišinys, kurį perkristalinus iš acetono ir heptano gaunamas 6 (460 mg).
junginys (150 mg, 0,55 mmol) veikiamas tionilo chloridu, kopuliuojamas su trimetoksianilinu ir gaunamas AXC07485 (124 mg). 1H BMR (CDCb): δ 2,31 (s, 3H), 2,50 (s, 3H), 2,54 (s, 3H), 3,80 (s, 9H), 4,02 (s, 2H),
6,00 (d, 1H), 6,16 (s, 2H), 7,08 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,52 (s, 1H). MS (APCI): 438,7 (M+1).
5-(5-lzopropenil-2t4-dimetilbenzil)-N-(2,4,6-trimetoksifenil)-2-furamido
Į 6 junginio (250 mg, 0,92 mmol) tirpalą 5 ml sauso THF 0 °C temperatūroje N2 atmosferoje pridedama metilličio (1,4 M heksanuose, 3 ekv.). Tirpalas maišomas 0 °C temperatūroje 3 vai., skaldomas vandeniu ir ekstrahuojamas etilacetatu. Organinis sluoksnis džiovinamas MgS04 ir sukoncentruojamas sumažintame slėgyje. . Negrynas junginys veikiamas SOCb ir po kopuliavimo su trimetoksianilinu gaunamas AXC07499 (36 mg). 'H BMR (CDCb): δ 1,80 (s, 3H), 2,06 (s, 3H). 2,11 (s, 3H), 3,59 (s, 9H), 3,75 (s, 2H), 4,60 (d, 1 H), 4,95 (d, 1 H), 5,81 (d, 1 H), 5,95 (s, 2H), 6,71 (s, 1 H), 6,79 (s, 1H), 6,89 (d, 1H), 7,18 (s, 1H)„ MS (APCI): 436,2 (M+1).
5-[4,6-Dimetil[ f, 1 ’-bifenil]-3-il)metil]-N-(2,4,6-trimetoksifenil)-2-furamido sintezė
Vykdoma 9 junginio (10 g, 57,3 mmol), metilo furoato (12,7 g, 68,7 mmol) ir AlCb (9,1 g, 68,7 mmol) Frydelio-Kraftso reakcija nitrometane 80 °C temperatūroje 2 valandas. Tirpalas supilamas į 200 ml ledinio vandens ir ekstrahuojamas etilacetatu. Organinis sluoksnis sukoncentruojamas ir išgryninus per silikagelio kolonėlę, eliuuojamą heksanu/etilacetate (9:1, t/t), gaunamas regioizomerų 10 ir 11 mišinys (15,5 g) santykiu 2:1.
Šis mišinys hidrolizuojamas 2N NaOH/MeOH (1:1 t/t) ir gaunamas atitinkamų rūgščių mišinys.
Rūgščių mišinys (2,3 g, 7,4 mmol), benzenboro rūgštis (1,1 g, 8,9 mmol), [P(Ph)3]4Pd ir kalio karbonatas (2N, 1 ml) DMF (20 ml) šildomi 80 °C temperatūroje per naktį. Po apdorojimo vandeniu liekana perleidžiama per silikagelio kolonėlę, eliuuojant heksano/etilacetato/acto rūgšties (7:3:1 t/t/t) mišiniu, ir gaunamas dviejų regioizomerų mišinys, kurį perkristalinus iš heksano ir etilacetato, gaunamas 12 (610 mg). 12 junginys buvo kopuliuojamas su trimetoksianilinu pagal standartinę metodiką ir gera išeiga gaunamas ΑΧ007468. 1H BMR (CDCb): δ 2,24 (d, 3H), 2,33 (d, 3H), 3,82 (s,
6H), 3,84 (s, 3H), 4,02 (s, 2H), 6,03 (d, 1H), 6,18 (s, 2H), 7,06 (s, 2H), 7,12 (s,
H), 7,29-7,40 (m, 5H). MS (APCI): 472,1 (M+1).
5-[5-(2,2-Dimetilpropanoil)-2)4-dimetoksibenzil)-N-(2,4,6-trimetoksifenil)2-furamido sintezė
junginys buvo pagamintas per dvi Frydelio-Kraftso reakcijos stadijas (žr. bendrąją metodiką) iš 13 junginio vidutine išeiga su geru regioselektyvumu. 15 junginys buvo hidrolizuotas ir kopuliuotas su trimetoksianilinu ir gautas norimas junginys. 1H BMR (CDCI3): δ 1,18 (s, 9H), 3,79 (s, 3H), 3,81 (s, 6H), 3,85 (s, 6H), 3,93 (s, 2H), 6,03 (d, 1H), 6,15 (s, 2H), 6,45 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,40 (s, 1H). MS (APCI) 512,1 (M+1).
5-[(3,5,5,8,8‘Pentametil‘5,6,7,8-tetrahidro-2-naftalenil)karbonil]-N-(2,4,6trimetilfenil)-2-furamidas ir 5-[hidroksi-(3,5,5,8,8-pen tametil-5,6,7,8tetrahidro-2-naftalenil)metil]-N-(2,4,6-trimetoksifenii)-2-furamido sintezė
junginio (9,0 g, 27,5 mmol) ir MnO4 (8,2 g, 82,7 mmol) mišinys chloroformo ir dichloretano mišinyje šildomas 70 °C temperatūroje per naktį. Po apdorojimo vandeniu 20 junginys gryninamas chromatografuojant per silikagelio kolonėlę, eliuuojamą heksanu/etilacetatu/acto rūgštimi (90:10:1 t/t/t). AXC07042 gaunamas pagal bendrąją amidinio ryšio sudarymo metodiką. 1H BMR (CDCb): δ 1,26-1,31 (2s, 12H), 1,70 (s, 4H), 3,81 (s, 6H), 3,83 (s, 3H), 6,18 (s, 2H), 7,05 (d, 1H), 7,22 (s, 1 H),· 7,29 (d, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,68 (s, 1H). MS (APCI): 506,2 (M+1).
Šis junginys (50 mg) buvo veikiamas NaBH4 (1,5 ekv.) etanolyje (2 ml) ir dietilo eteryje (0,5 ml). Tirpalas maišomas kambario temperatūroje 1,5 vai., skaldomas vandeniu ir ekstrahuojamas etilacetatu. Sukoncentravus organinį sluoksnį, gaunamas junginys, kuris yra balta kieta medžiaga. 1H BMR (CDCb): δ 1,24, 1,28, 1,29 (3 s, 12H), 1,66, 1,67 (2s, 4H), 2,29 (s, 3H), 2,55 (d, 1H), 3,80 (s, 6H), 3,82 (s, 3H), 5,98 (d, 1H), 6,17 (s, 2H), 7,08, 7,10 (2s, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,41 (s, 1H). MS (APCI). 508,2 (M+1).
5-(5-{1-[(etilamino)karbonH]ciklopropil}-2-metilbenzil)-N-(2,4,6trimetoksifenil)-2-furamido sintezė
aici3, ch3no2
junginio (2,0 g, 11,3 mmol) tirpalas tionilo chloride (8 ml) virinamas su grįžtamu šaldytuvu 3 minutes. Nesureagavęs tionilo chloridas nugarinamas rotoriniu garintuvu. Sukoncentruota liekana ištirpinama CH2CI2. I šį tirpalą pridedama etilamino (perteklius) ir gaunamas 23 junginys (1,3 g). Šis junginys paverčiamas į AXC07888 per 3 stadijas (Frydelio-Kraftso reakcija, hidrolizė ir amidinio ryšio- sudarymas), kaip aprašyta bendrosiose metodikose. 1H BMR (CDCb): δ 0,94-1,02 (m, 5H), 1,59 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 3,17 (kv., 2H), 3,80, 3,81 (2s, 9H), 4,01 (s, 2H), 5,39 (pi, 1H), 6,01 (d, 1H), 6,17 (s, 2H), 7,11 (d, 1H), 7,21 (m, 2H), 7,31 (s, 1H)„ MS(APCI): 493,2 (M+1).
KITI PAVYZDŽIAI
θ'
Tinkamas tarpinis junginys gali būti pagaminamas taip:
Metil-5-(chlormetil)-2-furoato gavimas
37% H2O
HCI
H2SO4
ZnCI2
DMC 20 °C >99%
Reikalingos medžiagos
Medžiagos Kone. Molekulinė masė Kiekis Molių skai- čius Ekvival- entų skaičius Tankis CAS
Metilo 2furoatas 97% 126,11 0,371 kg 2,88 1 1,179 [611-13-2]
Formaldehidas (vand.) 37% 30,03 0,371 I 4,95 1,72 1,083 (50-00-0]
HCI 37% 36,46 2,2 I 22,3 7,74 1.19 [7647-01-01]
h2so4 - 95-98 % 98,08 1,1 I 11 3,82 1,84 [7664-93-9]
Dichlorme- tanas Rea- gentas 84,93 2,2 I - 1,325 [75-09-2]
ZnCI- 98% 136,28 0,520 kg 3,7 1,3 - [7646-85-7]
Dichlorme- tanas Rea- gentas 84,93 ***«*«! - - 1,325 [75-09-2]
NaHCO3 (vand.) Sotus - • - - [144-55-8]
Silikagelis - - 0,600 kg - - - -
Na2SO4 98% - kiek reikia - - - [7757-82-6]
Metilo 5-(chlormetil)-2-furoato (2) 2,88 molių partijos gavimo papunkčiui išdėstyta metodika
Į 12 I trigurklę apvaliadugnę kolbą (a.k.) įstatykite lašinamąjį piltuvą, viršuje įtvirtintą elektrinį maišiklį, termoporą ir kolbą įdėkite į ledo vonią. (Rekomenduojama azoto atmosfera, bet tai nėra būtina).
Į a.k. įpilkite 2,2 I DCM, po to 2,2 I kone. HCI (nežymi egzoterminė reakcija; susidaro du sluoksniai).
Pradėkite maišyti. (Reikia užtikrinti abiejų fazių susimaišymą).
Į ląšinamąjį piltuvą jeigu telpa, įpilkite 1,1 I H2SO4. Reaktorių atšaldykite iki 0-10 °C. Pradėkite pilti sieros rūgštį iš pradžių lašinant, kol sulėtėja egzoterminė reakcija (maždaug 1Λ tūrio), po to padidinkite pylimo greitį iki silpnos srovelės. (Dėl atsargos temperatūrą laikykite žemiau 20 °C).
Pakeiskite šaldymo vonią į kambario temperatūros vandens vonią. (Ji sugers šilumą toliau pilant rūgštį, bet reakcijos labai nesulėtins).
Į a.k. įdėkite 0,371 kg metilo 2-furoato iš karto. (Egzoterminės reakcijos nepastebėta, žalias/rudas tirpalas),
Įdėkite 0,520 kg ZnCI2 mažomis dalimis. (Šiek tiek burbuliuoja įtariamas HCI dujų susidarymas; egzoterminė reakcija kontroliuojama vandens vonia).
Į perplautą lašinamąjį piltuvą įpilkite 0,371 I formaldehido. Suleiskite jį į reakciją per 2,5-3,5 vai. (Vandens vonios pagalba temperatūra palaikoma artima kambario temperatūrai; lėtesnis supylimas duoda mažiau polimerizacijos reakcijų tarp “laisvo” formaldehido).
Maišykite per naktį kambario temperatūroje.
Kai pagal TLC (žr. toliau) reakcija pasibaigia, atskirkite ir išpilkite vandeninį sluoksnį. Organinį sluoksnį nufiltruokite per 0,550 kg silikagelio sluoksnį (sausai užpildyta, apie 10 cm storio). Eliuuokite maždaug 4 I DCM, kol pagal TLC daugiau nebeišsiplauna produktas. (Užtikrinkite, kad ši stadija būtų vykdoma esant gerai ventiliacijai, nes net ir filtrate vis dar yra šiek tiek rūgšties garų).
Sukoncentruokite iki alyvos, kurios spalva yra nuo geltonos iki rudos (maždaug 0,51).
Pridėkite tokį patį tūrį DCM (maždaug 0,5 I). Perplaukite 2 x 0,2 I distiliuoto vandens. Po to organinį sluoksnį perplaukite 0,05 I sotaus NaHCCh ir 0,15 I distiliuoto vandens. (Užtikrinkite, kad pH būtų 7-10; vandeniniame sluoksnyje nebus produkto nuostolių).
Atskirkite ir išpilkite vandeninį sluoksnį, o organinį sluoksnį džiovinkite Na2SO4. Nufiltruokite per 0,05 kg silikagelio (apie 5 cm storio). Eliuuokite DCM, kol produktas nebeišsiplauna.
Sukoncentruokite vakuuminiu garintuvu, naudojant paprastą vakuumą.
Po to per naktį vakuumuokite alyvą gilaus vakuumo siurbliu. (Geltona rusva alyva).
Išeigų ribos: 95-100 %.
Grynumo ribos: 95-98 % (HPLC A%).
Kiti komentarai
Stebėjimas: reakcija sekama TLC (254 nm), naudojant 30 %
EtOAc/heksanai. (Pradinės medžiagos Rf-0,52, produkto Rf-0,40).
HPLC: TFA metodas (metodika ir spektras pridėtas). Pradinės medžiagos sulaikymo laikas = 12,67 min., produkto sulaikymo laikas = 17,37 min.
BMR: 1H (CDCb) (spektras pridėtas) 3,93 (s, 3H), 4,63 (s, 2H), 6,52 (d, 1H), 7,18 (d, 1H).
Jeigu reakcija pilnai neįvyko, kas 4 vai. galima pridėti formaldehido (10 % pradinio tūrio). Temperatūros poveikis nebuvo plačiai tirtas, bet patogu laikyti vonios temperatūrą kiekvienai stadijai nurodytame intervale. Organiniame sluoksnyje esančių rūgščių garai, net ir nufiltravus, sukelia manipuliavimo ne traukoje problemas, todėl reikia stengtis, kad medžiaga nebūtų išimama iš traukos, kol pH nėra neutralizuotas. Jeigu padidinamas formaldehido pylimo greitis, polimero susidarymas neleis reakcijai pilnai įvykti dėl formaldehido susinaudojimo. Prieš pradedant dirbti šiuo būdu, turi būti susitarta su saugos skyriumi, kad būtų pasiruošta pašalinti didelį tūrį rūgšties, esančios vandeniniame sluoksnyje. Šiam vandeniniam rūgšties sluoksniui neutralizuoti reikia didelio tūrio bazės, gaunamas didelis šilumos išsiskyrimas ir neutralizacijai reikia ilgo laiko, todėl ji yra nerekomenduotina. Galutinį produktą reikia laikyti šaltai, kadangi šio produkto stabilumo duomenų nėra. Laikant produktą Nalgeno konteineryje -20 °C temperatūroje, produktas išsikristalina, medžiaga šiek tie patamsėja, bet tai atrodo neturi reikšmės tolesnėms reakcijoms, kuriose naudojamas šis produktas.
Šio išradimo junginiai turėtų būti tinkami gydant:
1. nuo hormonų priklausančias vėžio/auglių formas,
2. nuo hormonų nepriklausančias vėžio/auglių formas dėl tiesioginės sąveikos,
3. panaudojimui kituose veikimo mechanizmuose.
Laikoma, kad Pareiškėjų išradimas apima daug kitų įgyvendinimo variantų, kurie čia nėra konkrečiai aprašyti; taigi, šis aprašymas neturi būti aiškinamas kaip apribotas aukščiau duotais pavyzdžiais arba tinkamiausiais įgyvendinimo variantais.
289 i! 2869 : 1 I hr 0.33 ! 1.5 hr , 4% <20 mg/kg)
i į i 1 . e C* E į O’ m! 1 Im 43 •M 2.5 hr u J= i· 43 j ; į į J 1
i i ! 1 d» cn j ·
O, cn : d d
i 1 J į 1 o: d' d ! d O: i i
s j U' u u' fc· 1
J J5| -C •e 43 4=
.· o\. d <N σ' Ό
j t * *·: ’ H d 1
» t i t i d 1 į <n‘
1 Į d d oo cn
i 1 s _.
i 1 J Off 00 00
i ί ¥ <:
! i 00
t f g: E E:
ί 1 oi o : Οί
1 d d d!
1 1
tč gi
i s 1 00: SO cn;
t ί į ! u· u. ui
J i -C JS -C:
i i i į d di
* ; Φ—« rf i cn ·
j Ό d O
į d O d
fc·'
-C b· 43 u· _C
d
**
χθ· d o 1 mi o r* — rr rf · rf
</*> : o rf m o d. d — cn
C*> Ό *ΖΊ Oi Os n* «5 <n -Ί·: cn
tn, 1 > 1 r> .....t ,, 1 cn rf n cn — cn
i cn ί 1 t d: m o! 1 i o ί i d cn' οοί m
00. 00' m cn! Tf , cn Ov 0\: o d tt. vn
dt ! t » cn • j V>: 1 1 vo •n V). d; i ! ‘ ! Ό
V)>
O\
Ό
3\:
Ό cn r* m
t*:
rr
Ci ci
P*
C0
O! s
i : ~S· ' f i . : op ’ ? & ; i s; ? E. X“\ 1 ε S Į, į o» ’ & <Si^=-S ' *£į· f3 00 /E
s E i-a š v e-
! 2; o; o i o! : o o. o IM
•Π: O: ci:
oo ©;
o;
O’
1Λ·
cn;
cn £
?3 fm; β5* >0 r*; —
vv
Λ; 'T
Im ’
-C.
«n?
e £
o m
£ vV » » v->
o oo
O* ©’
Ό.
©:
© cii «e — cn oo cn tj·.
©j © r© o
-4v->
c*: oo cn:
cn
JS * O* ci:
»n ci u! *2 ©·
J5.
v©
JC
JS cn
Oi cn •c, -c «-Μ* \O •4 xj·’ •C ci s©.
oo
O cn cn ©;
m o
Cl cn c © ci \o cn ci ~ cn cn cc* ci d
v> ©: w
Ό cn
Ci
CM
Ci cn m oo un cj © m
V) c
V>
©
Ci o
Ci cn ©
cn ©
r©: c*1 oo <n \O; —
Ci d
cn.
\o © ©
ΜΊ © cn ©
© © 9 »* Ci
9 ci ' ci
C* ci
n C· «m Ci v> >6 00
Ci Cl ci Ci Ci
Ci c< Ci ci Ci Ci Ci
100
101
102
103
104
j ; · ; ί ί I : * ‘ ’ 1 ! ; : - :
• t • ί : ’ : ' ’ i , : ‘ ’ » : : * i J į ·
105
106
H ’ ‘ Π ; H ‘ ''i * » · t « · 1 • :
ί ' f i · i i · j · i : · ί > ; . : < , , ί ; i ··.’ · · j . Į » : j * si I
107
550
108
ί i t 1 1 i 1 i ! į t Antagonist
S o o eo r-»
o «Ο CM o co o «
O 5 • 1 10400
- o δ r— * *Λ T CM Q tn o O § « o CM \^r O <o CM 5
v >& % <27 0—7, _y^\ O a-/ p * Z y-z < % vv O \7
tn CJ co CM h* CM co CM . s cr m tn 8 CM
109
Io s σ 0 $ t % c O σ σ S Į Į į «5 C O σ σ 5 i 1
1880 CM j ( 1 | i i ro
§ s i i g
1 i i i i 04
ro o s 12500
o 2 ro 5300 1200 215 2100
v • o S o >10000 f 7
\·ο < i i ! 1 >5 i C y * f i V i 8 \ex
o·/ o»< i <Z“l ! f 1 \ / 1
& \=/ i X Z ’ >Od — i K7
ro CM n ro ro ro ; i > ! ί i ; 1 ! 1 i 1 v iro ro iro l ! i 1 1 1 SS P) r-. n
110
i 1 i
oee 490 o CO OI O s
220 o 04 8 ! 330
_ 1400 1780 0
8 CO r*. r <7 370 0000l< 190 o s § X“\ § lO <7 320(130*)
/“V-0 t <7 y o \S V ✓ X * S V Z X 1
37.5 CO co 38-5 σ> [co o 04 < co
111
112
O
CO o
o
CM o
CM o
r*
CM
O
CM
CM g
CM
O
CO o
oCM
O
CO
CJ
113 s
co
CN
O
SS o
o
CO!
Oi
OI o
CO:
O 't:
Si i
O r>»·
O o
co
Si '•r i s
r*.
I co i tn cn in
I ° I co ico ho
ICO
114 LT 4904 B
Antaaonlst (rat) į
8 S 1010
in 3 0911 068 j
οει o co CO •
>10000 OO lO CM ........................7JP o ’ 06 1
= s/V' ·*»-* 1 S“ o O-O ✓v )C 0^1 yj / \ f i— X z & K> O <7
62 20 63 64 65 to co (O 67 CD CO
115
117
1 ** -1*· : j - ·! Γ ’
06
• _ rs.
O f— o o § O O S s
CO co r** CM o
CO CN CN —
Λ
•
9 9 o r*. o 00 1 1 S 5 o CN
ui m CN o CN i*5
CN 00 CN
- .
tu O O
(''Ί tu—4-“· — —z“° z* y—— ft °%3
1 \ 7 \ / \ \ / s s < (~y
¥ 8 O—/
O X_Į 7* _| /
O w \ / O \ / ζ /
< > \ ✓ \7
i >cx X\ /\ 'N/' ν' A A
in
co co b· o o o T—
m co 00 co 03 00 O) σι
118
·’. > <;·/. . -t r ~ >
CM 'T CSI o CO
r>. CM o s I o S r—· g CO • s § § o
S - lO ίό — • o e ę ✓ A 0 v Λ CO o θ’ 8 r*.
£\-s s· -£ σ i y* f f \z y ί /v 1 '•c \ i ę -£Cj °>I -o; / z \ s iv /CA >- J-· / \ / iv ąJ<
Ί Si O) CO Φ cn l CM V 105 tn 5 s s r**· cn
119
i Į i 1 j i i 1 !
CO § §
220 90 L 6000 >10000 8 °\ s - CN 1 250
o co S 585 >10000 O Q S 5 0 ____; V— z . *V \-z J: CM CM
I <S X X vJ < f y—f 2r ’k y-< · κ/Λ/ Λ λ ί χ\ ζχ -<\_z X į ^_z v z z 3—, <CJ J Zx •o w v_/ vy’ /V/n
co 0) s io 102 103 104 105
120
• $ > ' <·;· I t 1
o 'T
O 5 *Λ o s CM o sr 7 o v Pk o co rx fx 8 n
8 8 7 (O O 3 P J % 1 χ / /Γ~\ x y i o <r co
4 lb ę y \_f į \ / °“K
8 K o co o O o T- >- s
121
i 1 i i i i ! r i i i i ' t i ’ ΐ I ί i i * i
! ί ί < ' ί ί i
o co 5 390 i 430 8Γ «Ο: '“ί
>10000
* 1 t i ; Į . ί • ί 1 ί ί
B1 8 o r** o 06 8; 8
8 ' eo CO 8: r— .
-į? _ X
af S 5 . ί δ
CA_ Y į<- p < / Z \Ζ™λ/ Vy Λ 1
2 115 co 117 118 119 i { į ί ο 1 04 04
122
123
' · t; c 3 o c < ! I 1 i Antagonist
CO «Ο 00 O O CT
590 n § xr
ct 009 L....... . 490 O 1440, sr c> i u į 1 8 CM P
V 5 t “k
130 n CM CT CT CT V“ co T m CT T“ co CT r- CT
124
o r-~ įO 150 1 320 'σ o
O g co 530 35 b
8 CM O, i o r“* ? o . 8 r·» 3000(solubility?) /λ' 1870 /v^ 230 /λ'' -200
t r* 1
138 139 140 r· 142 143 <<r 145
125
r*» * . *' Λ; b A '· K:··^ *·. ' H i «·' *A ! «· ’
m co CO CM to CM o co
co <> co Of r·^ r— CM CM
Λ S t CM f u O 8 O CO O m o J· 1 8 r** n § 8 </ j?
z
<0 h* T“ CO r· σ> o m 4^ T“ m r“ CM ΙΛ , T* co m m
126
400 o
270 m
210 620 0601 3 390 300
e J I. >10000
/ i 1 y y δ
& >& 1c & & >& jį
155 156 h- m 158 159 o (O T- 161 162
127
I »·· X 1 - * ' f. ί· «Λ & σ 2 $ 1 ' : j·1'. ’.
o 2 to CM CM
o to ΓΧ g
I o & x™\ c- £ Ώ Ώ i s CM O to CM CM S
</ £ s? X I 1 >įb
n (D τί- Φ IO to (O CO T“ h. to CD CO Oi to o h-
128
1 1 i 1 ί i ! I ( I I I I Antagonist
570 O r**’
385 CT 5
1140 CT 1 2800 8 CM >10000 S s e I 7.4 £ CO 5 ° P
ΐ Q— •Sri^Lr.0 6fa * į \z 1 4x
171 172 173 174 175 i 176 r* r* 178
129
Antagonlsf 1 1 1 l 1 i
2.7 270
io 04 250
§ S «0 190 430 6.8 § O s 7310
V' \-zx 1 1 8 X
179 1Θ0 5 CM CD ** 05 «0 CD w CD CD 00 r-
130
131
I i 1 t ! Į Antagonlsf i _
I ,14 2
35 9.6 co CM
« /s Σ =3 *Λ S C <o g I | 1040 780(lnsol.>3uM) CM O š e £ CM i 1230
I 1 t i !! 7
s m cn 196 r- O) 861 199 200 i I 200.5 1
132
133
134
135
i i 1 i 1 i ; i j i ’ Į ί i
850 720 2 i '· 04 1 j '· o-
O In 2130 io Į *O • 5.7
i : ! -
174 240 i 1..................27 Q O lO £ 8 • o —
t S ·*·( o c o—TV-O / \_Z\ X rS · o i ! Ίφ O · i V—f— \ / Γ °— i ζ o— o_Q_: O; O i Q ' Oeę ' - / { «“jC
225 226 227 1 CO CM CM 229 230 231 I CM O CM
136
137
i i ] ' i ί 1 1
CO co 2 Į ; -
8. CO: w! ; ;
>
IO fK £ i δ 95 o 2 2000 >10000 *A
Y' Λ·Ο C / 33 \_z O·^ >r > o_/\ /S—< L·/ \Zz*® \ f 1 o-/ ί £ ! o <_y · ό V X 1 X / 1 • 'H-
i CM R g § ΑΧ007047 ; i ui io r— m «ο v to £. 8 8 Š < S o § 5
138
Σ c
Ve*
8| υ
A’t
Oi
i! Ve*' 8! o| oi I t i I I
8 o s
Ϊ 8; r-v!
c Ve* 8 υ > £ o: i
2
5 8Į
cj 3Į 1
S5 U Į
co -j i
CM i co;
8!
m
CM'
z-J Σι si 1 <2' ! 8! i i
*i ! i
<· Į
Qi
cm!
O i
8'
8i
2!
O £i
X ιό!
T
Σ!
SI rs.! >— · Ti j
CM*
8'
CO:
Σ!
Si
Oi
2έΙ oi <oi
Λί
Oi
V·
139
1 I 1 1 i i į i ί i į t
i Į 1 Į ! i < i ί 1 1 • 1 1 1 Į 10000
i Į i 7
ί i i ! | į i ! 7
i i 1 į i 8 : 2 1 t 1 i
1 1 1 S ’· i i i 1 ' i
i Į i 1 i i i i · A
1 O
i i Į i 1 1 i i 1 ΐ ;
140
1 i 1 ( >10000 ! i i i ‘ 1 i ! i ; • 1
! ; i i 1 I : i i ' i :· i : ! i
— >10000 i ! « i i i ! L.
*Λ i I ί ΐ ! Į i j ! !
>3200 : i i * •
- i . i 1 i i i į i ’ i i
i i Į i Į 8 i i : i : į Į 1 >
i 1 i 1 i Į i 1 tf)l i 1 • i : 1 ; ’ * : 1 i Ϊ !
141
j 1 1 i 1 , I ! i ! i ; t i 1
i ♦ t « t Į i .. i . • Į ! ; 1 ! ; ' * ; ' i . Į · 1 . · 1 • i
t • i 1 1 t i 1 ; ! i 1 1 i 1 1 !
Γ 1 Į į J ; : i j
į i i ii- ' i i ·: i i . 1 '
i Į • 1 ! ; i j ; i
i I I I . 1 1 ; ! * : i ί • · 1
« * i i I i i i i · ί i ; ! ί 1 ! I i i i ! j ; | i
142
I I i i i I i Į Į Į i 1 ί Į i ί · i ' i 1
! ! I I 1 1 ................ 6300
• 1 i >1.0000 .......
1 ; j i it··
f · : j i 8 • CM CO Λ.
i i i i * i Ϊ : i ί ΐ 1 * » ί 1 iii;
i 1 i . < i ; ! ; I ! ; » · 8 ; ; : Ši i _:_:_i-
I ; i Į
143
144
145
>10000 i i Į ; ! j · i : ί J i ; i
6700 i t i ? ί ί ‘ i • · t i : ! j l : ! į 5 · i 1 1 • » ; i : t
>10000 i , ; • ' ; I ; j ’ i » t i · i i > i i i i ! i Į
>10000 • . i Į Į : ! Į i i ; !
>3200 i
MM 1 : Į Į
>4400 : ; 1 i 1 ; i i • i i i : t
— o o t i » ! i i : Į i ! Į i ί 1 i ! ! : i
146
! » * i · ' I i f ! , ί : i ! ! ! i
• i ; 1 ί i ; 1 ' 1 1 t i »
i : 1 ! 1 i i i : i 1
i i 1 1 • j
I ! : · ; iii 1 1 1 i · į ji’ :
I 1 i 1 ! ί i ; ι I i Į j · 1 i i
I i l· ! I j ! Į ; i ' ! i : ; I : ! . ii;· J ; ’ 1
i i I J |
• s:
I co·
147
• 1 i į 1
, i 1 1 i 1 ! ί :· t Į į
i · • ί ! i i i 1 ! 1 · 1
1 1 Į ; i ; i ' i i ;
i i
Į 1 1 1 1 1 ; ' 1 ! i 1 Į
1 i i Į 1 ·
! 1 ! i f t i i ; ί ί '' 1 ; į · :
148
149
i ! Į i i 1 1 1 i i ί i : ! ! : 11' 1
• i i • ! ‘
1 i i •
• : 1 1 i i 1 Į
ί ! • i Ii I l s 1 i 1 i 1 · i ί » t ·
ί j i : I : 1 1 1 ! ί : : ! i : - ί
1 1 ί · i ! : i i ί : i ί .
ij i i : : : Į 1 ί ! i · j į ! i iii:! ! si. i iii·:!
150
t I j i 1 1 j 1 ! t i 1 i 1 Į ί i 5 J ; ί 1 ; : i i * i r
f 1 i 1 1 1 1 1 1 i 1 i • j . ·; : ι i
ί • 1 I i i — • > i ; : ; ' i i Į
f t i i 1 1 i 1 j · ϊ ' i : i !
; i < ’ 1 t i , 1 • 1 1 : 1 i i 1 •
t 1 i · . i ! : 1 ί i Į < 1 ; : 1
i i i ! i ! 1 ; 1 1 . : * ! ! ! i I 1 1 : i ;
Ϊi i ! ! i i i ί ! ΐ ! ? ; i i i ; ! 1 ί ! » « : ; ! i I
151
152
1 i 1 t 1 1 i i 1 1 j 1 » 1 I ! 1 ’ i 1 1 i i
1 1 1 t 1 , 1 1 1 1 i i i . ! i
— • ‘ j į i Į | Į i
- ! ! i i 1 » 1 1 ! i
Į t } i i i i ί 1 ; ! • I 1 : : Į i 1
1 1 1 i 1 1 i i i
— -, ΐ 1 ·: i i ! 1 i i ; ί 1 i ' j i 1
I • • į ! Į i ' i ! iii! i i ί j Iii·
153
ii' ' į i i J } i Iii;' i i , i '
• ; ·. i 1 t Į i I , » · · * S • i i : ί
> i > i : i ; t ‘ · 1 : 1
i i i i ! Į
. . 1 ii Į i • : · ! , ; i»' ·
i • i J . : į ’ . i i : i į i *
t 1 1 | ! i i i ! ί 1 ; i ! ' f f ί ! : ’ Ϊ ii?;·
f 1 1 ! ; ; i i ; i ; ’ · Į i 1 i i , ί ! ! i i j ; < ! ! 1 ! 1 Į i • ; : Į : i ; , · «
154
! j i i ! i i : • Ji. ’ 1 ! ! : : i ί i 1 f J _
1 1 t 1 ! ί ; i : Į i ί· ί i i ! i i : ί i i : · !
i 1 1 t 1 1 ΐ i t i J * 1 i : 1 t • J • ; J i i i į i i j ! ;
1 * { : i i i 1 ! ; ! !
8: S ...........160
j i 8i j i ! i · ! 1 | CT; i ! ί 1 ί ' i III 1 1 i i !
I I 1 1 — -: , 8! i Si
i 8 A ’ • 1 i Į 1 t 1
O. i £· i 'l
i CO i1 cn* i ! ®l «Β 1 t oi
155
i 1 i
1 - !
i i ί s
i 1 j
— 8 S ϊ » 1 «
i i t i
1 ! § O* A i
— 1 • • i
155
157
Į i * » 1 ’ ! 1 '· t ;
t • - į i t 1 » • 1
• t 1 i i ’ ί į į • i
i ! 1 i •
i 5 ' --- — - — - -- - - —-
I I I 1 I 1 i i i j 1 : ; i : ·· 1 • 1 > < i 5 ’
1 : . ? 1 1 I ‘ · l : : : ’ 1 1 . »
— — i . 1 i : i į i ' į iii: i ; i
158
I 1 i 1 1 j 1 1 ί I i 1 i ’ ! ί » i ; 1 t i
1 1 1 i 1 1 1 i i 1 ; t ί : i ; 1 ! ! ‘ :
1 t i . : ' • * i : ! t · 1 1 1 i į i L
: ! i ; • · * ! i ; : ! i i i ; ; :
i 8 ! · s • -
O ! i ' r^: 1 ; ' j 1 ! i ' ί 1 ' !
1 ; i ' ! i ' : 1 i ; · f 1 · • · ;
-i i 1 \ \ \ ė ii 0 l *-;· i i £
159
iii:! ? * » 1 Ϊ ii ιίΐ·' i ii ’ '
ΐ \ i : ΐ 1 į ; : i ί Į ’ i i ; ; j ' ’ Ϊ 1 1 Į ! i t * . ί
į ! i i 1 : i i i i ! ! i Į » i i i Į
Į i 1 : 1 i » t i i i i j ; t i L.
1 ! i i i 1 i i i ‘ i 1 J . i
i : i į i ! i : t . i · Į i
I i ί j 1 · i · i , ; : 1 5 ; ' 1 : i
1 » Į ; : i i I Į ' Į . S ; : ί ·°ί I i o
160
i t Į i 1 Į t * i 1 i
• • · ! į i 1 1
Į i Į ' 1 ’ 1 i i i i 1
į 1 . i t 1 i ; i ! i i i : i i 1
i ! i j i i ί : ί i i ί i j i i i 1
i j • 1
-1 j1—; ; r ί 1 i i i i : j į iii! >
į 1 I i i ! i t Į i . i : i i ; i ! o i Į ! ZZ ·
161
' i ' i ’ , i : . i : ί
I · Į 1
• ; Į < 1 i i i
į i ; i • 1 1
• i į *
I : ί 1 ! i • · » : 1 : · 1
i i 1 i . į • 1
— -, ! i ! Į i ! * · 1 i \ i ’
162
i Į į i i į i i Į , i i i i i i
i i I I 1 } 1 1 i t j i 1 1 1 j i j » ‘ 1 i ; ’ i · ' ' : - i i ! ! » Į i
— ! į i ; Į · : : i ! i ΐ i i i
i i i 1 1 ! * 1 t . j ; ; i 1 i ! i • I
: 1 1 j i i I 1 } 1 į ' ! : 1 ? : « » 1 ·:
i i i : ! i : : ί i 1 1 1 i ί ! i 1
i 1 1 t ί ' 1 ii ' į ! : i ' ί 1 · I i ; : i i : i !
! 1 i 1 i?
1 Oi
i !
i ι 2»
! C1
i ' <>:
! 1 O·
163
! 1 i!:! ii ! ' t ; t i 1 | · · 1
• į J j • j : !
1 t i Į
i i • 1 1 •
! 1 ί i - ; J ! J!::
- į : ί ; Į '· i ! •
..... -------1- I I į 1 i · i J 1 į · i · 1 i ; 1 į I
! i * iii į i i ; s 1 ii- ii i ; i 1 į ? ·
164
165
I S : : · i ! ' i ; * i > i i i I ! ‘ '
1 , ; |
1 : i » i i ! ί -.....
: i t J i ; 1 Į 1
: i f 1 · · ii 1 1 i i : : ! i ‘ i ! i i :
1 ί 1 ! i : i : : ί ί 1 : 1 ! = ' 1 : !
I I i 1 ί j i i ! i ! i : i
i ! • : ! i : : i i i i • ! i i i * i ; : ‘ ’ i J i
166
:!''! |ii ' ! j i i Į i ! i i 1 · · 1 i i i . -
i , * 1 Į i i i Γ i i ; i Į • 1 ; · ! i Į ’ i ’ · 1 < ! I • ί ’
1 i i i i į i 1 i : i i i i i ‘ 1 i Į 1 i i 1 ·
i 1
'iii 1 : · i ; i ! : i i ; i į
į ! 1 J 1 J t 1 1 i Į |
Į PI I i i ί ! ; ii .ii'
i ! i i i i Į ί i i 'ii!; i ' ! ; '
167
Į 1 • f
• i ; i Į Į : 1 - 1 : · : i !
1 Į i i ; i Į 1 1
• : ί ; i ; i •
- Į į i i 1 t ! '
i į i i 1 M ; Į
i 1 « « 1 i » ! į ' i * ’ · į · • j
Į i i 1 J 1 i ; 1 : i i ; 1 : . • : i
168
1 1 j Į ! į
1 1 1 t Į i 1 1 i 1 · Į .* i i 1 1 ; i - ί J J ί ί • » 1 ’
i į i i 1 » ' 1 Į j i ; ‘ • ! J i į 1
Į : i i • 1 1
I 1 i 1 į t • i j i ί i
! ! ' 1 : i į i l ;
• i 1 į i 1 ' : . ! • . J
j;-1 : * į 1 1 » į i : i ! : · i 1 1 ' ' i ! 1
169
JUNGINYS FORMULĖ Suformuota iš S%R 10μΜ hGnRHR
320 9
321 i -> - * 55
322 ***.·* .w 9' 4
323 g 4 ? 1
324 M ·* s s·· 27
325 f į 3
326 51
327 0
328 33
329 f Λ ό 31
330 A 10
331 *,·% r2 ę 49
170
171
172
356 /- % i Į 17
357 * ί l : Λ- ** ί
r -2
358 t ·*. &
<£. 9
359 '30 •X *
55
360 ΑΛΑ, - K
- 4
361 «« *· χ. Λ -- ·<“ 4
362
1
363 n
f 14
364 *„·* . · * · t iii i • / i y Į d '··, 21
365 • ·*,?? šr 0 v 47
366 ί » ι II: 1 Λv-· : y ! 0 : L 37
367
Λ ** s F s \ * 15
173
368 •Λ * M !
i S Į 1 I 56
369 i 1
d- 11
370 &
N d 37
371
A i 55
372 *<* C s NG 1
373 ?2
Z/* 19
374
c N 13
375 Λ
·*/ Bi 16
376 T * «1 50
377 « *** i ( . 39
378 -ιϊΐ : ΛΛ
f* \s\ -4
379 ?2 e * ; -f 4
174
175
392 : 0
393 p T 44
394 Λ ·<. M- . V i o I ' A --
:¾ 57
395
p f 40
396 λ
< 55
397 X » : 7S • 'Ί
ta X ,*< -y* 43
398 A ! &; 44
399 \ i A ! -Z χ .; λ i -^s 41
176
177
412 ί t i ,' 49
413
** 7»
16
414
0 1 1 10
415 1
b 18
416 t*
į 34
417
. J·
- ( ^z\ 1 1 20
418 *·» ·* «* *
1 42
419 - ·' ?'
-i • ··. 36
420 f 28
421 ' T# A · *
Ξ 48
422 r 34
423 1 *>>£*?
Λ 49
178
179
436 58
437 fl ·« J t 40
438 fl f b 7
439 č> 23
440 ?? £ * *s 22
441 *w“ fl •8 P 17
442 f 50
443 jfl A 19
444 £ 32
445 fl h 22
446 ·*·>> 55
447 į 18
180
448 **· k L 46
449 y 42
450 ’XC
6
451 .· Λ į
7 i p 24
452 $ •
- ? 55
453
v 50
454 ’l X ’ Λ '<* !
P : 36
455 * ’v’*** i ; i ·
- 1
0 i 58
181
JUNGINYS FORMULĖ ’ | S%R 10μΜ hGnRHR
456 i -12
457 A J -3
458 F ( i σ 29
459 yry· 53
460 f·* F l; -4
461 A j 53
462 v* /- j- 0
463 K Jį -5
463 A £ 7
465 A i t Q 32
466 % 30
467 f- -1
182
468
469
V*
Tft
I **'·* l AV l A *
470 ! .A ·*' V 1 6
471 F
y -4
472 ij
' · 42
473 ' *···?
1 -14
474 4 M '•Ml’SZS
1 2 '
t
I 39
475 *· ό i J' ί
- i i -3
476 i I I
i 20
477
•n’ ’z I I
0 I 47
478 A ** I I !
.A ! 3
479 ’ΧΡ Λ ***
Ύ- i -3
183
480 ! ? i‘ !Ą. . t r‘. 1 ·» -2
481 i 5
482 ! '·'? 'S P 34
483 i Ά ‘ J. *·* i -C i 0 -10
484 -W A '· ‘ -1
485 - r •e i J -5
486 ’JC -r i 33
487 I ?£ P i 3
488 •f ·\ *, ;v l. 1 : . -r i ? i Ė i -3
489 Ą * ? • 1 n -1
490 I ' ?? ; i > '** ' P- ' : Z ' | 4
491 j >< ; e* Į i 'į i i į 9
184
492 T ί -7
493 F H -6
494 «Λ 4 -7
495 / J 4
496 l· -6
497 r>- §.. 2
498 J 58
499 n b b 1
500 fe -4
501 fa -3
502 f * -2
503 $ i -3
185
504 r 46
505 F •n į 7
506 $ ·«< A 3
507 J -4
508 7
509 F i. 16
510 y k 23
511 J 47
512 f- 51
513 i 9
514 f f 2
515 f 11
186
516 J) 21
517 k 34
518 56
519 j a 0
520 f -3
521 *·* į 51
522 b λ·» 9
523 J -4
524 j 35
525 J -9
526 F i 9
527 / 10
187
528 r 0 22
529 t -3
530 6 -4
531 i « 4
532 r 12
533 29
534 &·= 9
535 i 43
536 $ 38
537 ΤΛ 7* 32
538 •*v*s ·*» 17
539 a 19
188
540 fa 0
541 fa s- 9
542 42
543 X“ 0 31
544 ’V 27
545 . v I t I I -t* fa J 28
546 į 29
547 *>Q> 24
548 *w* T * 12
549 «Λ* fa ofa 48
550 f 3
551 / 21
189
552 Ą 58
553 >5 M t> t* 34
554 0 27
555 / 0 0 21
556 •V» f Λ • 10
557 10
558 / 24
559 *,·» T s- 26
560 f ! 7
561 f i 0
562 F 8 30
563 ]$ F 0 13
190
564 A •1 45
565 ¢- v 48
566 < Ό 3
567 cn Λ J. - >- -1
568 i F 28
569 58
570 / 48
571 “b 36
572 *,·» A d“ 41
573 Ss < 37
574 A RB 13
575 fV,“ -3
191
576 «Λ 15
577 f 30
578 i 17
579 -ą 10
580 18
581 & «< 0 ·* 43
582 f -2
583 -3
584 F 15
585 - v* p 3 52
586 & 57
587 i. . 29
192
588 *·» J *·* 4
589 35
590 & -2
591 (m 48
592 *wn K 17
593 ί 2
594 J 16
595 24
596 i- -1
597 4 11
598 §? -4
599 β 0 28
193
600 7 3 i -4
601 f 17
602 cb 44
603 -4
604 py 4
605 rTV* ·*** T 19
606 32
607 t -2
608 f 8
609 p 47
610 < ·% d <Γ° 0
611 *,·» 1 ** 11
194
612 P' 9
613 3~o 53
614 X S- JT 48
615 $ f -J 7
616 -į 29
617 U 1 / . -2
618 ’ifi M y 9
619 cT 5
620 £ 3
621 p; 43
622 43
623 2
195
624 Τ’- 8
625 f- •4 8
626 10
627 4' -θ
628 -? * 35
629 $ 17
630 58
631 n 43
632 / ii 21
633 f 10
634 'V*- *** <· *1 1
635 Sį <?' 27
196
636 y 17
637 55
638 Λ 53
639 ΤΪΓ M 57
640 r 2
641 E ą 23
642 _ V* /S 19
643 ’u? k. A 23
644 *a & §· ·* 22
645 51
646 M 0
647 'i N J 35
197
648 J i k 4
649 J 28
650 F J 4
651 i i3i I-—- 15
652 *.·» ?& Ϊ: 19
653 / ν' 6
654 $ 34
655 «V» J 2
656 $ £ 52
657 *·* 3
658 35
659 y •*O -2
198
660 •v «t -4
661 ę t 41
662 I ** 3
663 iš į t 25
664 *·* 1
665 ·**· A 12
666 24
667 po 39
668 «*·ς £ * ·* '/s 6
669 _ v* A i ·% -3
670 16
671 f 4 12
199
672 Λ 23
673 2
674 Λ 10
675 r -5
676 j -4
677 y tfb 54
678 F 17
679 T5 1
680 M.·* ΧλΛ **** Λ· 0
681 *A F 6
682 F į> <&> 59
683 Λ f 23
200
684 7?- 4 f 2
685 M v· β 19
686 & s 0. i J 37
687 *V°S p \i 7
688 k. 0
689 34
690 25
691 / 7
692 k -2
693 /' 8 55
694 0 (f 11
695 4 35
201
696 Α~ •A 21
697 F 1 ··
698 F 9 59
699 ΎΪΓ ςΓ σ’ -1
700 30
701 $ w 0 ό -1
702 / ·» 28
703 T® Q7> 5
704 •V* y 4
705 • 23
706 Λ n 3
707 K-S 0
202
708 įp -4
709 f j 15
710 I I
f 4
711 $ d 0-0 2
712 1
713 -r*. F f. 2
714 & 52
715 « v* f* S* 1
716 *·* y 35
717 $ d 19
718 f 0 -i f n 34
719 T d 28
203
720 y) -1
721 2
722 & i c 12
723 -¾ 20
724 6
725 «*Λ fa j -1
726 γ§ •l 11
727 *Λ As JL 3
728 0
729 'V 2
730 **r- fa 8
731 37
204
732 F -¾ 28
733 '-F 42
734 28
735 •VL·*“ /· -1
736 *·* T 0 ·* 37
737 F 36
738 ~ V* k X) 16
739 *A N O1* 42
740 *·* % 15
741 :¾ V Λ. •r· “* 11
742 ·** k Λ 5
743 F* -z-0 0
205
744 •v* A *0 0
745 $ <>Λ 58
746 Ύ?ι Λ 0 Λ 25
747 7? 4' 10
748 12
749 'ν'* «. M. 0 b 17
750 34
751 t 4
752 A 70 27
753 r 1
754 J2 37
755 8 2
206
756 /5 0 ų •H 38
757 į# ji” 1
758 I 6Λ 9
759 J 21
760 10
761 -¾ 12
762 2=5 <n> 3
763 Q J H 5
764 *,·* Λ, 18
765 ·*·» -τ' v 15
766 η. 6
767 W»R~ 3~ 42
207
768 F 3
769 <τλ •F i '7 2
770 n 3
771 > Ν' 0
772 & h -4
773 -F~ F Λ 3
774 fi 3
775 P 3 38
776 ? f. 3
777 31
778 / 6
779 p- 1 2
208
780 .L 1
781 f 44
782 s· 15
783 i; 25
784 ? f 31
785 & Q o 9
786 $ y 34
787 p 0 k -3
788 $ -y 6
789 Λ 14
790 ?? r 0
791 $ & 29
209
792 β 5
793 f 13
794 F <r 0
795 F i -H 0
796 f€T Ά 0 1 v 19
797 V- Λ '.U Λλ -A * -1
798 įę * 29 ’
799 JŽ & 42
800 f 1
801 *·*“ f l· 31
802 v* . 31
803 s 54
210
804 7* 5
805 v?? 51
806 i 10
807 f 39
808 ( £, 9
809 V i 38
810 $ f '1 0
811 •*7? 57
812 *w* T5' į 10
813 V1 - c A· -2
814 c s- 6
815 f- 9
211
816 29
817 j 4? 7
818 β s 50
819 **· C“O -2
820 §b • -2
821 ·*». y 7
822 « v H' 0
823 Q -< 33
824 Te? K 6
825 * 26
826 •ΜΪΛ j 53
827 f 1
212
828 r & 56
829 s 0 Ϊ 4
830 ΰ 38
831 f į 27
832 ·*·* 2
833 o-b 26
834 i 0
835 f 36
213
FORMULĖ % Inhib. @ 1uM hGnRH Kartoja @1uM hGnRH
i 40 49
•CJ* / i 57 58
( 0 86 93
r 26' 26
b 20 24
j f 15 15
f·) F į 27 31
? 62 67
i 50 62
f i -7 0
f J 63 69
f r -21 -26
214
2$ y 38 .·» 41
^<\·—o 86 90
f i z* 52 54
7* & 75 92
«V 3 *·· 47 52
yK k i M 49 50
«Λ f- jh. * 60 62
.•Y 23 36
•fb 11 6
*w* 7* Λ 16 23
v 4 v -29 -31
/- !' o 67 70
215
-27 « -29
F P i 13 • 8
F i i -25 I ! i -25
F -36 -37
'r ii i” •S ! t 13 t 33
>
b -10 -8
• 31 45
-13 -9
? k 102 107
-21 i -36
k •
/ 59 66
« *λ F- i 78 81
216
i 87 92
b -29 -30
#' ^OS. -17 -29
F ·*Λ į 44 45
-r V* d 57 64
•v* y F 18 9
-21 -23
i 33 89
F l -12 -9
i. 83 86
ž J 63 64
& -< §- 66 76
217
f 83 84
y? 4 X U» 24 35
7* i •v -22 -25
-34 -38
b ol· -4 2
*w* 8 55 60
r 22 28
J* 80 • 90
β L -14 -5
j* i -20 -26
»„w -¾ 0 22 25
/ -12 0
218
t ϋ J 35 35
/ / -17 -31
$ T. s Q 0 -2 4
4 -11 -8
r 32 44
F- s i 0 -5 0
i t σ -1 -9
-21 -5
F 6 fį b 17 25
/: %, 11 13
F į v d 27 38
& t· t 84 89
219
r b 35 42
i 0 -3 8
p 32 36
-f,·* į 71. 76
,'»* I 1 i 1 -Λ. L \i 100 X 101
2^ X -16 -2
$ ¢/ v· 51 56
L P k 21 23
J v 30 44
i '0 -6 -7
į H 85 85
*A k 101 99
220
V» /' 44 49
f t J 18 22
26 87
6 P 79 91
Λ 0 b -12 14
Λ 5- -1 12
b 69 74
/ Į 67 69
·*„·* -2 3
*·* f 82 85
% -6 2
v*- / ob 56 57
221
/ -11 -8
4. 3 -7 4
16 3
/ 13 . 19
*A p -7 -7
.-b 86 88
f 59 60
f b 70 72
«*Λ~ F 17 26
k -4 15 26
4 19 25
¥ •s -7 4
222
C 3- -11 -9
*·»— I ·*·» /»1 -10 -6
20 23
7- 0 t ·» -11 24
b 79 82
i 81 89
/' ii 68 68
* * Sį c? -1 6
«Α p ' « n 76 83
*A ΛΓ •S -10 13
«Λ p j) 69 75
> 48 55
223
4 84 86
§ 89 92
*λ A b 82 85
•»wn A 1 41
f -3 2
62 69
J? 77 84
’tf? i 55 63
T -11 -7
-$« -20 -30
f -4 0
s- 10 2
224
fa £ -7 15
S- -7 9
7$ r & -10 -5
NC *s ? 3>o -12 -9
$ m“ 31 42
-rS ji- £ 61 70
fa -23 -8
i <fa> 17 28
f 72 72
fa 51 54
«Λ i- 35 36
61 71
225
3% 0 ό -6 6
r -18 -7
0 £ -25 3
*-·* p 0 0 -2 3
% -4 1
0 A c 15 16
p <č> 14 27
v -3 -5
p <δ 38 * 45
i 52 52
•v* i -0 68 71
p 19 29
226
•v* f 53 64
& 15 21
’ČS M S? 69 71
75 £ 78 84
f- 17 • ♦ 20
»WA y 53 58
y J -4 -7
*A į -14 -6
f į 40 41
a -22 9
β 0 p. -20 -7
A.A F 0 0 -24 9
227
? k -18 6
p 0 24 3
i. 58 63
$ -f 44. 48
k y J 49 f 58
f <b 16 32
*Λ — -6 0
$ -T -δ- 26 • 34
f & -40 17
* ·» -6 16
*w* P i •k 55 61
Ko -18 5
228
-10 -15
f % -11 -29
0 ¥ -20 * -21
*·> f -16 -29
F 0 į -4 -7
MC M $> Λ ΟΌ -19 -22
?5 0 -4 11
0 0 3 7
_ Ά*· r -15 -20
? -į -5 62
f j -10 -9
ž ž 11 16
229
*·* 0 0 -12 -6
F- b 15 19
\11 X 16 24
?cę λ į ν(» -11. -5
f d 42 53
J & f 93 95
$> -č’ 87 90
K 0 0 -11 -17
J 0 -1 -7
φ J 1 1
/ 42 44
f f 3> 2 21
230
F- 4 59 62
b 93 95
*Λ T 10 9
Q-<1, 7 9
/ - >$' 11 15
*w* -22 -4
$ -5 6
β 4 •k 76 79
A 4 -5 8
/ -10 -6
·*«·* A 77 79
A 81 85
231
*v** p. β 48 52
29 32
P 81 82
J' Ė 68 69
f j 74 81
?S i 45 45
V* V) fa 28 35
f T 20 28
K X 13 7
ί 14 20
K 3- 14 21
$ •4 0 * -12 1
232
f r 38 39
K τ 15 17
$ 21 22
T p 28 45
T'ys·' y A 20 22
F •J 16 7
v -2 9
*„·* 2 4
& j 27 48
/ -26 11
Λ į 10 2
f 17 23
233
<? -1 -3
r 12 8
*«·* /' % -8 3
78 85
$ -l· •f i ! -2 6
/ A 54 54
57 60
•v* Λ ·“·» 94 96
16 22
X -10 -3
T5 A -6 14
Λ -17 -27
234
** Ϊ -13 -5
V v' ‘k -10 -15
fu J j> 75 77
<<N **** i. 4.. i -10 -13
- 43 48
:-o7 Y b 49 52
y? j 62 68
12 14
A -2 6
ύ?Γ M' t 41 44
f. F 25 28
& $ -12 -9
235
FORMULĖ % Inhib. @10uM mGnRh
82
β s ( >> 103
’oV Λ oJ 101
$ ·< i Ϊ00
*.·* i k j S 99
A >g 80
M 93
t 65
**,n F i 96
A s 83
3 Ή 63
4 I j 63
236
«. v* Λ Λ 46
*•5 1 71
104
** ? <r- 65
f 94
*vn iri' Ή 21
_ V* W X) 84
2# >- «X) 100
*«* F 0 j 66
99
9
? F 89
237
*w** $ 0 δ 102
f 86
p' 82
Į •v 101
• M * ** JL 63
(F- 59
A * 26
„ v* k 'e 14
/ 91
J 93
RUR, ·*% J. 65
% 73
238
«L V* 96
g ( 66
r •t 89
β 73
- <ž. 22
A *0 100
0 į 97
$ n 79
*v·* 4 d? 100
2$ A’”' A- 79
*v·» A = 0 95
99
239
/s 73
•V» 97
į- 58
S- -ry 34
f o&s 43
fi ·(** >0 74
?' i 91
<wx °3 •s 66
T 100
T .JO 97
_ 5Γ ? X) 100
*w·* A -f 102
240
*·*. ^3 ·* 23
*·* c b 72
·*·* 8- 86
Z2 A .75
, ,b 99
?s .Λ 89
/ 75
Α- ς £ 41
77
<r d 98
Ή 98
1 101
241
«•e- 101
T» * 90
P 91
64
p fa 97
įs 4” 94
p -D 22
F 98
y 49
*A r- d < 88
F ·. 98
fi 64
242
j 25
•K M <£ę Λ. 88
si -23
>” & 12
„ v f .- Ί d 99
K 69
7§ 0 0 92
f 3- 72
*,«. 40
«•s 49
%
44
·? 51
243
*Λ 5 % 4
A 16
? % 9
n 98
f >* 94
fl £ 67
/ 26
J 71
81 v° 28
fl *( ę. **c 90
·**» y C-flD 103
•v» 95
244
r 0 73
J n 96
Ύ?? •i ” b K 101
fa ·< 0 1 ·* 98
fa .. «< 103
fa 0 l ·* 95
y ·* 58
fa i 90
H 8
fa £ * 103
w* 75
- V1 r 98
245
82
$ 104
C c 100
94
Rf *l'( 1 >··· ?· 88
f· 99
? i 61
102
e σ 17
v* X 47
ofe 74
i 86
246
F v 97
F 57
K Λ 87
fi y •100
l· 70
i Λ 5
•v*
-c 8- 95
**k ? Λ 94
β £ 99
L 101
94
*«* i 97
247
r 86
•*v* /- 17
-r i 1 101
ši 69
r c* 92
*v** 0 cf 91
? H* 100
F % t 44
r 64
a 3' 59
Λ 3- 63
y 75
248
Oo 13
ζί< i $ v 81
46
.¾ 63
·*,·* \n 72
$ •i Q •t 67
F ά ą b 96
’Ί·' ΟΧ *·* Λ. 31
*ν·* y 98
? ) O 98
*vn J5 f 69
f 100
249
-3 101
•v* ? 95
i '1 101
j S 94
13
*v* T 0 63
20
ί 96
Λ 31
? % 36
*·* ? •4 89
0 sb 73
250
f 70
43
0 λ- 71
f 48
P” 84
'T?? 3 J 104
•VL* F 88
•VL* $ ‘Į 69
2# 0 69
F 2° 33
s 0 79
2# 0 88
251
/ 53
83
43
y? f 99
ΛΛ p £ 84
K 4 28
•v* 83
f Ύ1 74
Λ (yO 53
? P 90
55
f b 65
252
*A. 90
3 72
Λ 84
'i** fi cfr .56
MS 9«, 72
«#*. &r *A. -3. 81
P J 73
F 28
F R? 91
5 •v 52
9 d 60
*·* 7 83
253
:φ i 96
**w·* f 76
p 104-
91
$0 100
F j 72
z 98
f 76
f F 97
K P q 63
$ 5> * 58
& *i $ 35
254
101
J 0 o- 36
1 & 58
s* 91
.F'·- 76
?? Λ 80
f &- 74
· ·* §§ 30
T8 87
F & 103
r 66
«Λ T ’J 89
255
j# k 97
F
X 20
v 14
cho 27
„..v* 1 1 1 -Α- τι > 42
F v ?- */ n 93
& 4 λΛ 102
*·* A ώ 103
-¾ & 103
& 103
*«·· F- p 105
&· Ί- RS 82
256
fa 62
fa 59
29
fa 67
ji- . f J 101
fa h •s 73
•«Λ 3 86
*v* JS » 85
į. ~ 52
fa 0 r^· 73
fa 69
fa i 103
257
Q 94
* ·> “fl 1 i 98
-»·» P- 5?. 90
77
, 9 Λ U *t.u •L 72
*r * 'fl 1 M ?- 49
'p 76
£ 85
1 46
f 92
0 37
V 58
258
l 106
£ 73
$ •A Č 81
•v* j σ- .97
Λ. ’ <V 98
•*VA F <Λ 100
?
•i 88
& < 84
f” s 53
F -i 72
<1 8 57
K f ( ·* 65
259
f 83
«.·* 78
k; % 86
J 65
89
Λ 77
t 99
& <P° 101
7? R <* 23
34
r 84
°4> 46
260
fl ę 79
$ *< £ 82
102
.X '76
v* rn - 7' i •Į 99
V», . 100
·*-·» f 90
fl j 103
21
fl fe 43
fl $ 25
f 50
261
f k 25
31
F 61
*«·* & -< 91
-r cQi 0 94
- v p 91
f f* 91
<Λ *< Λ 98
£į 57
« v p Λ 48
β Ύ-' 101
* ·% F 95
262
G' N GG 104
I ·**. -n 95
$ οΛ. 28
Ί'Γ» >·· s A 42
i & 47
**wn >x Λ <K 39
G 93
A- 79
A Λ 44
-¾ f * 65
£ 66
ę * 60
263
% 37
i 105
p- •l 77
52
T 96
n 92
»*vn 2$ F 9> 90
ė 1 99
VL·' ** f‘y\ X **t i ·% 97
* 99
b 97
*A l 103
264
F 104
f- (
4 r ·* 99
265
1 FORMULE % Inhib.@10uM hGnRH 1 Kartoja 10uM hGnRH
-25 -25
-15 -20
·* ·* -17 -28
v į * -4 -4
/ -10 -5
266
267
*7
268
269
270
271
272
273
274
275
276
277
278
279
280
281
282
283
284
285
286
287
288
289
290
291
292
293
294
295
296
297
298
299
300
301
302
303
304
305
306
307
308
309
310
311
312
313
314
315
316
317
318
319
320
321
322
323
324
325
326
327
328
329
330
331
332
333
334
y *»
KOęr
Cf* )*
N
.v
335
336
337
338
339
340
341
342
343
344
M£ ck ®s “u * 1 3 O' <*»
ύ
Γ' ųP Z-.'V f O. xf
f »s Τ' Pk X v
?* *σ®* >P -p p
M, 0
v\r i’V V-
Ρ» Hf <h kP 0<V 0<
r -V· (° CM,
&k .R' f *.
Q.kS ·? e ( «,
345
346
347
348
349
I
350
351
352
353
354
355
356
357
358
359
360
361
362
363
364
365
366
367
368
369
370
371
372
373
374
375
376
377
378
379
380
381
382
383
384
385
386
387
p
388 d
f •r pKP
«* °s
PI v
o
nx
<n <n '= i · <n CH »4
Ο^φ
°Λφ
W ’oi
389
390
391
392
393
394
395
396
397
M' mc <n (Λ
M/>-S
Oi
o 'f'· {£ ..r.
w •Λ,
Ρ» o
r°S
398
399
400
401
402
403
v.
404
405
O ·4-
'M
406
FORMULE i% Inhib. @10uM hGnRH Kartoja @10uM hGnRH
F b I I i i į 1 7
**. » fa d I i I I 89 94
p fi •t • i 38 32
fa- P- i i ! i 17 18
•*w* f p 12 2
i : -13 -7
p c- j 15 11
β ž i i i 23 39
„ v II 1 1 ’·»*., J p »» | I I 23 I 10
i p. i 72 73
7# i 1 A-' 1 ·» i t į 104 94
f &: ! 18 ! 28
407
Ί,Λ ? *' •5 ;C 1 51 I j i i 41
2¾ Į ί
-r C· i 14 i 18
ΖΊ
- 99 95
A V K X r( X I 102 96
·** ’il A'A ~r & t i i 1 i 101 95
? S. Į 38 43
70) Λ ** -F 110 91
F n Vv ζ • 35 20
*v* y č 71 63
„ ν' 1 1 Ί Λ-' ^r m’ , V K 12 10
? j i i 13 i 7
F č * t 22 22
408
7 F 9 12
F *< Ą 13 13
A «. 14 15
F •i 17 5
F «< ? 28 18
& *< •v' Y £ 26 18
·*·» i 50 54
*„* / 13 14
< 1 17
?' $ 6 15
'F A ί 4 9
<Č 21 27
409
$ 42 35
*·* s •V“ 74 74
i 45 55
r 20 23
*^o 66 68
ž 33 34
i 37 33
i 17 30
F- T- -1 17
j ·** 29 20
j V 32 20
22 25
410
12 11
r-C V 9 9
X' y 15 10
- V1 21 26
V1 K 7 i 28 33
fl l· 38 37
fl < 14 17
H y 25 38
fl t. 19 9
·»* fl n 14 9
v* fC v 41 35
/ otf *·* 20 18
411
j O 26 22
10 8
y 8 • 25
- v* 4 12 29
< 21 '26
’/5 24 26
kg 18 5
V* / y< 23 14
15 26
·*·* 36 29
•v* 4 P 38 38
čf* 12 17
412
fa H X 13 22
'fa ό 72 68
*l 1 i >·' 17 5
fa $ 12 23
n 39 49
fa s -8 18
r 3 5
!% s, 10 20
?? •F t 9 14
4 23 21
ί 14 7
f / 21 18
413
y 90 92
A JK 105 95
F 40 28
$ -< 27 22
y ~4 18 32
X*’ && 39 39
yj -P 4 20
_ **** X- «» 37 50
% '·* 46 57
F % 43 56
/ 27 46
% 34 36
414
f 29 42
y? > <K~ 24 16
% 42 46
£ 21 22
f 91 77
y? 36 23
29 43
$į 54 52
f •s 108 102
103 102
*vn p if •k 99 95
Λ A 25 19
415
% 26 29
«. v* /· •f 23 15
« /v* F p b 24 47
39 24
£ -83 -104
r?r 'į <^· 25 40
*b 36 40
7? F' O-CO 17 19
? -Q * 19 26
98 96
Į 88 86
v* t 62 65
416
Y 89 89
Q •v 91 99
/ 15 10
f 91 69
K b 28 43
38 38
$> F 47 26
$ <K 91 92
t *s 100 99
68 90
F < 39 42
fr. 27 27
417
p 27 37
4 P 66 79
f (P 58 53
7% 8 * 62 59
?' 21 26
y / 20 37
/' d 35 25
*Λ P- 33 18
δ 52 55
a 85 87
65 62
f -9 -27
418
% 23 27
.ΰ 11 10
·*,·* F <į 113 115
s=į 90 91
X S 108 102
p 5 45 46
tf 12 15
**w*v k % 39 35
k 4 fk 31 27
J” M -45 -65
/: 1 -4
f 11 23
419
y 61 74
*WA 102 95
82 71
p $ 81 79
** & 0- »1 * l 28 17
/ 13 11
ą- -'Λ $ 29 31
/ F-j 32 30
f ΰ 0 31 36
** r- P J 72 77
p * 22 7
*·* P f- 35 27
I
420
f 37 38
7 % 26 26
$ 81 86
❖ 38 27
% 20 24
% 22 6
% -1 12
% 35 25
«Λ / 2 7
*,·* c G -3 11
A 0 «0 0 1
$ < 19 34
i
421
?- 100 92
-T s 101 86
22 30
Λ 62 79
f- 48 57
f 18 23
*·» F 22 26
f 25 9
ό -19 -5
F p ό 1 11
14 14
A 68 76
422
0 74 86
P 21 23
P J · 15 22
•u*· ? 24 25
y 12 9
·»·* f 20 24
f 21 9
·*νΛ ? 103 96
Λ 19 23
/ K 10 27
/ 34 36
11 13
i
423
f 4 1 8
7? K F 16 31
ί 101 101
4 45 47
Ύξ? 4c 18 29
$ s 35 38
K ? 10 20
- v ? ~<A 80 90
*·» 4 v 30 32
4 67 67
*w* f 3 31 34
v» / 72 76
424
21 23
f y<~ 10 15
*v·* b -d/ *·» 14 17
f F •s 22 24
44 47
y d. 36 38
?- Ar 50 52
F 30 32
r 90 94
f ϋ> 24 25
Į 20 9
A 15 20
425
F- 55 58
-13 -4
P 12 15
/- Į •s 13 16
v* & 78 85
','? 4 60 63
*.·* Λο* ·** 1 X -52 -56
17 23
f 59 60
K $ 45 52
$ & 19 6
s ė ·* 42 46
426
56 59
r 57 61
?? c -5 15
F F 24 33
«ν' / 25 30
Ύ?? įA K 100 109
j A* 31 33
X 34 38
j 20 24
F y 97 98
F 58 63
**«·* <*< 55 57
427
'fa 30 36
fa 21 21
Λ 87 89
fa %· 8 9
% 8 9
fa fap 6 7
F 17 26
fa 16 23
43 48
fa %· 10 18
fa v 14 4
fa <4 21 24
428

Claims (12)

  1. IŠRADIMO APIBRĖŽTIS
    1. Junginys, kurio formulė yra pasirinkta iš grupės, susidedančios iš.
    arba jo farmaciškai priimtina druska, multimeras, provaistas arba veiklusis metabolitas.
  2. 2. Junginys, kurio formulė yra pasirinkta iš grupės, susidedančios iš:
    arba jo farmaciškai priimtina druska, multimeras. provaistas arba veiklusis metabolitas.
  3. 3. Junginys, kurio formulė:
    429 arba jo farmaciškai priimtina druska, multimeras, provaistas arba veiklusis metabolitas.
  4. 4. Junginys, kurio formulė yra pasirinkta iš grupės, susidedančios iš:
    arba jo farmaciškai priimtina druska, multimeras, provaistas arba veiklusis metabolitas.
  5. 5. Junginys, kurio formulė:
    arba jo farmaciškai priimtina druska, multimeras, provaistas arba veiklusis metabolitas.
  6. 6. Junginys, kurio formulė yra pasirinkta iš grupės, susidedančios iš:
    .o ir
    I'J'J arba jo farmaciškai priimtina druska, multimeras, provaistas arba veiklusis metabolitas.
  7. 7. Farmacinė kompozicija, besiskirianti tuo, kad į ją Įeina terapiškai efektyvus kiekis junginio, jo farmaciškai priimtinos druskos, multimero, provaisto arba veikliojo metabolito pagal bet kurį iš 1-6 punktų ir farmaciškai priimtinas nešiklis arba skiediklis.
  8. 8. Terapiškai efektyvaus kiekio junginio, jo farmaciškai priimtinos druskos, multimero, provaisto arba veikliojo metabolito pagal bet kurį iš 1-6 punktų panaudojimas vaisto, skirto žinduolių gonadotropinu sekrecijai reguliuoti, gamyboje.
  9. 9. Junginys, kurio formulė I:
    kurioje:
    X yra pasirinktas iš C=O, C=S, S=O ir S(O)2;
    hef?
    —' yra 5-naris heterociklinis žiedas, turintis nuo 1 iki 4 heteroatomų pasirinktų iš N, O ir S; šis žiedas gali būti sotus, dalinai nesotus arba pilnai nesotus ir gali būti aromatinis;
    R1 ir R2 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H ir žemesniojo alkilo;
    R3 yra pasirinktas iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo. arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra pasirinktas iš turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo. heterociklo. arilo ir heteroarilo ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose;
    431
    R4 ir R5 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo. heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose;
    R6 ir R7 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo. alkinilo, cikloalkilo. heterociklo, arilo. heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR. kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose; arba R6 ir R7 paimti kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro galintį turėti pakaitų 5- arba 6-narį žiedą kuriame gali būti iki keturių heteroatomų, pasirinktų iš O, N ir S;
    kur bent vienas iš R3, R4, R5, R6 ir R7 yra ne vandenilis;
    R8 yra lipofilinė liekana, pasirinkta iš turinčio ir neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 6-20 ribose: ir
    R9 yra pasirinktas iš H ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo; arba jo farmaciškai priimtina druska, multimeras, provaistas arba veiklusis metabolitas.
  10. 10. Junginys, kurio formulė I:
    N'
    R' .R kurioje.
    X yra pasirinktas iš C=O, C=S, S=O ir S(O)2;
    yra 5-naris heterociklinis žiedas, turintis nuo 1 iki 4 heteroatomų pasirinktų iš N, O ir S; šis žiedas gali būti sotus, dalinai nesotus arba pilnai nesotus ir gali būti aromatinis;
    R1 ir R2 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H ir žemesniojo alkilo;
    432
    R3 yra pasirinktas iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo. heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra pasirinktas iš turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo ir heteroarilo ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose:
    R4 ir R5 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose;
    R6 ir R7 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo. alkinilo. cikloalkilo, heterociklo. arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR. kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose: arba R6 ir R7 paimti kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro galintį turėti pakaitų 5- arba 6-narį žiedą kuriame gali būti iki keturių heteroatomų, pasirinktų iš O, N ir S;
    kur bent vienas iš R3, R4, R5, R6 ir R7 yra ne vandenilis;
    R8 yra lipofilinė liekana, pasirinkta iš turinčio ir neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 6-20 ribose: ir
    R9 yra pasirinktas iš H ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo;
    arba R1 ir R2 gali būti -OH arba =0: ir/arba R8 taip pat gali būti vandenilis;
    ir/arba R gali būti COR arba vandenilis; ir/arba R8 gali turėti bet kokį norimą anglies atomų skaičių;
    ir/arba R8 ir R9 taip pat gali sudadryti žiedą ir/arba bet kokios gretimos
    R grupės, kaip antai R5 ir R6 arba R3 ir R4, gali sudaryti žiedą toki kaip aprašytas R6 ir R7 grupių atveju;
    ir/arba R6 gali būti COR; ir/arba (het) grupėje gali būti arba nebūti pakaitų.
    433 arba R8 ir/arba R9 gali būti pasirinkti iš heterociklinių grupių arba bet kokių junginių, kurie sudaro amidinį ryšį su I formulės azotu; arba jo farmaciškai priimtina druska, multimeras, provaistas arba veiklusis metabolitas.
  11. 11. Farmacinė kompozicija, besiskirianti tuo, kad į ją įeina:
    (a) terapiškai efektyvus kiekis junginio, kurio formulė I:
    kurioje:
    X yra pasirinktas iš C=O, C=S, S=O ir S(O)2:
    yra 5-naris heterociklinis žiedas, turintis nuo 1 iki 4 heteroatomų, pasirinktų iš N, O ir S; šis žiedas gali būti sotus, dalinai nesotus arba pilnai nesotus ir gali būti aromatinis:
    R1 ir R2 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H ir žemesniojo alkilo,
    R3 yra pasirinktas iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo. arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra pasirinktas iš turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo ir heteroarilo ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose;
    R4 ir R5 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo. alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR. kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose;
    R6 ir R7 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H. halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR. kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių
    434 galimų pakaitų) yra 1-12 ribose: arba R6 ir R7 paimti kartu su atomais, prie kurių jie yra prijungti, sudaro galintį turėti pakaitų 5- arba 6-narį žiedą kuriame gali būti iki keturių heteroatomu, pasirinktų iš O, N ir S;
    kur bent vienas iš R3, R4, R5, R6 ir R7 yra ne vandenilis;
    R8 yra lipofilinė liekana, pasirinkta iš turinčio ir neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo. heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 6-20 ribose: ir
    R9 yra pasirinktas iš H ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo; arba jo farmaciškai priimtinos druskos, multimero, provaisto arba veikliojo metabolito; ir (b) farmaciškai priimtinas nešiklis arba skiediklis.
  12. 12. Junginio, kurio formulė I:
    kurioje:
    X yra pasirinktas iš C=O, C=S, S=O ir S(O)2;
    —' yra 5-naris heterociklinis žiedas, turintis nuo 1 iki 4 heteroatomu, pasirinktų iš N, O ir S; šis žiedas gali būti sotus, dalinai nesotus arba pilnai nesotus ir gali būti aromatinis;
    R1 ir R2 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H ir žemesniojo alkilo;
    R3 yra pasirinktas iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo. arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra pasirinktas iš turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo. arilo ir heteroarilo ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose,
    R4 ir R5 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo. alkinilo, cikloalkilo, heterociklo,
    435 arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose;
    R6 ir R7 nepriklausomai vienas nuo kito yra pasirinkti iš H, halogeno ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR. kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 1-12 ribose; arba R6 ir R' paimti kartu su atomais prie kurių jie yra prijungti, sudaro galintį turėti pakaitų 5- arba 6-narį žiedą kuriame gali būti iki keturių heteroatomu, pasirinktų iš O, N ir S;
    kur bent vienas iš R3, R4, R5, R6 ir R7 yra ne vandenilis;
    R® yra lipofilinė liekana, pasirinkta iš turinčio ir neturinčio pakaitų alkilo, alkenilo, alkinilo, cikloalkilo, heterociklo, arilo, heteroarilo, CH2OR, OR ir C(O)OR, kur R yra toks, kaip apibūdinta aukščiau, ir kur bendras esančių anglies atomų skaičius (neįskaitant jokių galimų pakaitų) yra 6-20 ribose; ir
    R9 yra pasirinktas iš H ir turinčio arba neturinčio pakaitų alkilo; arba jo farmaciškai priimtinos druskos, multimero, provaisto arba veikliojo metabolito terapiškai efektyvaus kiekio panaudojimas vaisto, skirto gonadotropinu sekrecijos reguliavimui žinduoliams, kuriems reikalingas toks reguliavimas, gamyboje.
LT2001024A 1998-08-20 2001-03-19 Nepeptidiniai gnrh agentai, būdai ir tarpiniai junginiai jiems gauti LT4904B (lt)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US9752098P 1998-08-20 1998-08-20

Publications (2)

Publication Number Publication Date
LT2001024A LT2001024A (lt) 2001-11-26
LT4904B true LT4904B (lt) 2002-04-25

Family

ID=22263796

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
LT2001024A LT4904B (lt) 1998-08-20 2001-03-19 Nepeptidiniai gnrh agentai, būdai ir tarpiniai junginiai jiems gauti

Country Status (33)

Country Link
EP (1) EP1105120B1 (lt)
JP (1) JP2002535244A (lt)
KR (1) KR20010085402A (lt)
CN (1) CN1379666A (lt)
AP (1) AP2001002053A0 (lt)
AT (1) ATE291423T1 (lt)
AU (1) AU759310B2 (lt)
BG (1) BG105362A (lt)
BR (1) BR9913374A (lt)
CA (1) CA2341346A1 (lt)
CZ (1) CZ2001523A3 (lt)
DE (1) DE69924387D1 (lt)
EA (1) EA200100255A1 (lt)
EE (1) EE200100102A (lt)
ES (1) ES2237966T3 (lt)
GE (1) GEP20043315B (lt)
HR (1) HRP20010206A2 (lt)
HU (1) HUP0103622A3 (lt)
ID (1) ID29244A (lt)
IL (1) IL141396A0 (lt)
IS (1) IS5846A (lt)
LT (1) LT4904B (lt)
LV (1) LV12732B (lt)
NO (1) NO20010309L (lt)
NZ (1) NZ509252A (lt)
OA (1) OA11599A (lt)
PL (1) PL356984A1 (lt)
SI (1) SI20746A (lt)
SK (1) SK2262001A3 (lt)
TR (1) TR200100631T2 (lt)
WO (1) WO2000020358A2 (lt)
YU (1) YU13701A (lt)
ZA (1) ZA200100831B (lt)

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10199033I2 (de) * 1992-04-22 2003-01-09 Ligand Parmaceuticals Inc Retinoid-x Rezeptor selektive Verbindungen
BR0010655A (pt) * 1999-03-24 2002-02-13 Anormed Inc Compostos heterocìclicos para ligação ao receptor de quimiocina
CO5370679A1 (es) * 1999-06-01 2004-02-27 Smithkline Beecham Corp Inhibidores fab 1
TWI243164B (en) 2001-02-13 2005-11-11 Aventis Pharma Gmbh Acylated indanyl amines and their use as pharmaceuticals
JP2005501006A (ja) * 2001-06-06 2005-01-13 アグロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド 非ペプチドＧｎＲＨ薬、医薬組成物、その利用法、これら物質とその中間体の調製方法
CN101624391A (zh) 2001-06-11 2010-01-13 病毒化学医药公司 用作黄病毒感染抗病毒剂的噻吩衍生物
ES2367422T3 (es) 2001-10-09 2011-11-03 Amgen Inc. Derivados de imidazol como agentes antiinflamatorios.
GB0126292D0 (en) * 2001-11-01 2002-01-02 Smithkline Beecham Plc Compounds
JP2005170790A (ja) * 2002-01-09 2005-06-30 Ajinomoto Co Inc Ｎ−アルキルスルフォニル置換アミド誘導体
US6521395B1 (en) * 2002-01-30 2003-02-18 Eastman Kodak Company Infrared couplers for incorporating and recovering metadata
WO2003068769A1 (en) * 2002-02-12 2003-08-21 Pfizer Inc. Non-peptide compounds affecting the action of gonadotropin-releasing hormone (gnrh)
TW200304820A (en) * 2002-03-25 2003-10-16 Avanir Pharmaceuticals Use of benzimidazole analogs in the treatment of cell proliferation
BR0312123A (pt) 2002-06-13 2005-03-29 Pfizer Agentes de gnrh não peptìdicos, composições farmacêuticas e métodos para o seu uso
ES2270129T3 (es) * 2002-11-20 2007-04-01 Paradigm Therapeutics Ltd. Compuestos heterociclicos del silicio y su utilizacion en el tratamiento de enfermedades o condiciones asociadas a gnrh (hormona liberadora de gonadotropina).
CN100451004C (zh) * 2003-03-31 2009-01-14 大正制药株式会社 嘧啶衍生物
US20050197350A1 (en) * 2003-03-31 2005-09-08 Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. Novel quinoline, tetrahydroquinazoline, and pyrimidine derivatives and methods of treatment related to the use thereof
US7429603B2 (en) * 2003-04-25 2008-09-30 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. C-fms kinase inhibitors
US7427683B2 (en) * 2003-04-25 2008-09-23 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. c-fms kinase inhibitors
JP2006526660A (ja) * 2003-06-05 2006-11-24 バーテックス　ファーマシューティカルズ　インコーポレイテッド Ｖｒ１レセプターのモジュレーター
RU2303594C2 (ru) * 2003-07-09 2007-07-27 Пэредайм Терапьютикс Лтд. Кремнийорганические соединения и их применение
US20070111967A1 (en) * 2003-07-09 2007-05-17 Miller David J Organosilicon compounds and their use
KR20060033904A (ko) * 2003-07-10 2006-04-20 패러다임 테라퓨틱스 리미티드 규소 화합물과 그 용도
US20050182061A1 (en) * 2003-10-02 2005-08-18 Jeremy Green Phthalimide compounds useful as protein kinase inhibitors
US20090291915A1 (en) * 2004-12-17 2009-11-26 Graham Andrew Showell Silicon Compounds and Their Use
BRPI0610283A2 (pt) 2005-05-13 2010-10-19 Virochem Pharma Inc composto, uso do mesmo na preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma infecção por vìrus de hepatite c, composição farmacêutica e combinação farmacêutica
US8193206B2 (en) 2005-06-14 2012-06-05 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Pyrimidine compounds
JP5118029B2 (ja) 2005-06-14 2013-01-16 タイゲン バイオテクノロジー カンパニー，リミテッド ピリミジン化合物
WO2007000582A1 (en) * 2005-06-28 2007-01-04 Takeda Cambridge Limited Heterocyclic non-peptide gnrh antagonists
EP1910385B1 (en) * 2005-08-04 2013-07-24 Sirtris Pharmaceuticals, Inc. Benzothiazoles and thiazolopyridines as sirtuin modulators
JP5255559B2 (ja) 2006-03-31 2013-08-07 アボット・ラボラトリーズ インダゾール化合物
US20080070987A1 (en) * 2006-05-12 2008-03-20 Francesc Yraola Font Meta-xylylenediamine vanadate salts
TW200916472A (en) 2007-06-20 2009-04-16 Sirtris Pharmaceuticals Inc Sirtuin modulating compounds
CN101883760A (zh) * 2007-10-11 2010-11-10 沃泰克斯药物股份有限公司 用作电压-门控钠通道抑制剂的杂芳基酰胺类
JPWO2009057199A1 (ja) * 2007-10-31 2011-03-10 財団法人乙卯研究所 レチノイドプロドラッグ化合物
AU2008355098B2 (en) 2008-04-21 2012-11-15 Gpcr Therapeutics, Inc Heterocyclic compounds
UY31984A (es) * 2008-07-16 2010-02-26 Boehringer Ingelheim Int DERIVADOS DE 1-(3,4-difluorobencil)-6-oxo-1,6-dihidropirimidin-5-carboxamidas N-sustituidas y de 2-(3,4-difluorobencil)-3-oxo-2,3-dihidro-1H-pirazol-4-carboxamidas N-sustituidas.
WO2010056847A2 (en) 2008-11-13 2010-05-20 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Lyophilization formulation
CN103168032A (zh) 2010-08-05 2013-06-19 安美基公司 抑制间变性淋巴瘤激酶的苯并咪唑和氮杂苯并咪唑化合物
CN102050823A (zh) * 2010-10-27 2011-05-11 华东理工大学 新型光稳定剂-鸟嘌呤类似物的合成及表征
WO2012112567A1 (en) * 2011-02-15 2012-08-23 Georgetown University Small molecule inhibitors of agbl2
US9493451B2 (en) 2011-05-16 2016-11-15 Bionomics Limited Amine derivatives as potassium channel blockers
JP6021910B2 (ja) 2011-07-26 2016-11-09 サノフイ ３−ヘテロアロイルアミノ−プロピオン酸誘導体及び医薬としてのそれらの使用
EP2776411B1 (en) * 2011-11-07 2019-06-26 The University of Queensland Modulators of c3a receptors
ES2858511T3 (es) * 2012-10-17 2021-09-30 Exonate Ltd Compuestos útiles para tratar neovascularización ocular
GB201300304D0 (en) * 2013-01-08 2013-02-20 Kalvista Pharmaceuticals Ltd Benzylamine derivatives
WO2017070235A1 (en) * 2015-10-19 2017-04-27 Attenua, Inc. Antitussive compositions and methods
CN118206529A (zh) 2017-09-04 2024-06-18 C4医药公司 二氢苯并咪唑酮
WO2020181232A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 C4 Therapeutics, Inc. Heterocyclic compounds for medical treatment

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993003058A2 (en) 1991-07-01 1993-02-18 University Technologies International Inc. NON-DESENSITIZING ANALOGS OF GnRH AND OTHER BIOLOGICALLY ACTIVE LIGANDS

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3499002A (en) * 1968-06-20 1970-03-03 Robins Co Inc A H 1-carbamoyl-3-aroylpyrrolidines
NL6913261A (lt) * 1968-09-09 1970-03-11
US3932444A (en) * 1972-04-28 1976-01-13 E. I. Du Pont De Nemours & Co. 4-Imidazolylsulfonylimidazoles
US4013647A (en) * 1976-03-23 1977-03-22 American Home Products Corporation Morpholine containing tetrazole-5-carboxamide derivatives
GB1491776A (en) * 1976-09-08 1977-11-16 Pfizer Ltd Thiadiazoles
US4096153A (en) * 1977-01-21 1978-06-20 American Home Products Corporation Arylene-bis-tetrazole-5-carboxamides
US5236928A (en) * 1991-03-19 1993-08-17 Merck & Co., Inc. Imidazole derivatives bearing acidic functional groups at the 5-position, their compositions and methods of use as angiotensin II antagonists
EP0619814A1 (en) * 1991-12-31 1994-10-19 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Oxadiazole derivatives having acetylcholinesterase-inhibitory and muscarinic agonist activity
DE69628705T2 (de) * 1995-08-24 2004-05-13 Basf Ag Isoxazole- und Isothiazole-5-carboxamid Derivate, deren Herstellung und deren Verwendung als Herbizide
SK77498A3 (en) * 1995-12-14 1999-01-11 Merck & Co Inc Nonpeptide derivatives, pharmaceutical composition containing them and their use
US6150352A (en) * 1996-05-20 2000-11-21 Merck & Co., Inc. Antagonists of gonadotropin releasing hormone
US5878393A (en) * 1996-09-09 1999-03-02 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. High quality concatenative reading system

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993003058A2 (en) 1991-07-01 1993-02-18 University Technologies International Inc. NON-DESENSITIZING ANALOGS OF GnRH AND OTHER BIOLOGICALLY ACTIVE LIGANDS

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MONTAGNANI M M ET AL.: "Effects of LHRH agonists on the growth of human prostatic tumor cells: ‘in vitro’ and ‘in vivo’ studies", ARCH ITAL UROL ANDROL, 1997, pages 257 - 263

Also Published As

Publication number Publication date
LT2001024A (lt) 2001-11-26
HRP20010206A2 (en) 2004-02-29
DE69924387D1 (de) 2005-04-28
PL356984A1 (en) 2004-07-12
ZA200100831B (en) 2002-08-22
IS5846A (is) 2001-02-16
NZ509252A (en) 2004-05-28
ES2237966T3 (es) 2005-08-01
IL141396A0 (en) 2002-03-10
ATE291423T1 (de) 2005-04-15
TR200100631T2 (tr) 2002-08-21
KR20010085402A (ko) 2001-09-07
CA2341346A1 (en) 2000-04-13
WO2000020358B1 (en) 2001-01-04
WO2000020358A3 (en) 2000-11-16
CN1379666A (zh) 2002-11-13
BG105362A (en) 2001-12-31
LV12732B (en) 2002-03-20
JP2002535244A (ja) 2002-10-22
AU2470900A (en) 2000-04-26
YU13701A (sh) 2005-06-10
SK2262001A3 (en) 2002-12-03
NO20010309D0 (no) 2001-01-19
CZ2001523A3 (cs) 2002-05-15
WO2000020358A2 (en) 2000-04-13
AP2001002053A0 (en) 2001-03-31
GEP20043315B (en) 2004-02-10
SI20746A (sl) 2002-06-30
NO20010309L (no) 2001-04-11
AU759310B2 (en) 2003-04-10
HUP0103622A2 (hu) 2002-04-29
EP1105120A2 (en) 2001-06-13
EP1105120A4 (en) 2001-12-19
EE200100102A (et) 2002-06-17
LV12732A (en) 2001-10-20
BR9913374A (pt) 2001-05-15
HUP0103622A3 (en) 2003-01-28
OA11599A (en) 2004-08-23
EP1105120B1 (en) 2005-03-23
ID29244A (id) 2001-08-16
EA200100255A1 (ru) 2002-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
LT4904B (lt) Nepeptidiniai gnrh agentai, būdai ir tarpiniai junginiai jiems gauti
US7101878B1 (en) Non-peptide GNRH agents, methods and intermediates for their preparation
US6833372B2 (en) Non-peptide GnRH agents, Pharmaceutical compositions, and methods for their use
KR101238430B1 (ko) 이미다조［4,5-ｄ］피리미딘, 그들의 용도 및 제조방법
KR20010041656A (ko) 비-펩타이드 성선자극호르몬-방출 호르몬 제제
EP2861562B1 (en) Pyrazole derivatives as inhibitors of stat3
KR20060132850A (ko) 이미다조[4,5-ｃ]피리딘 화합물 및 항바이러스 치료 방법
JP2001525399A (ja) 選択的β３アドレナリン作動性作動薬
US6903132B2 (en) Non-peptide GnRH agents, pharmaceutical compositions and methods for their use
JP5117377B2 (ja) 抗腫瘍化合物及びその医薬組成物
CN108484601B (zh) 含有2，8-二氮杂螺[4.5]癸烷片段的苯并噻嗪-4-酮类化合物及其制备方法
MXPA01001834A (en) NON-PEPTIDE GnRH AGENTS, METHODS AND INTERMEDIATES FOR THEIR PREPARATION
CN107235960A (zh) 酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的用途
MXPA00008537A (en) NON-PEPTIDE GnRH AGENTS
CN107304180A (zh) 苯甲酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的用途
HK1009389A (en) Carbazole analogues as selective b3 adrenergic agonists