CN1265596A - 含异黄酮的组合物 - Google Patents

含异黄酮的组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN1265596A
CN1265596A CN98807930A CN98807930A CN1265596A CN 1265596 A CN1265596 A CN 1265596A CN 98807930 A CN98807930 A CN 98807930A CN 98807930 A CN98807930 A CN 98807930A CN 1265596 A CN1265596 A CN 1265596A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compositions
daidzein
equol
composition
microbial strains
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN98807930A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1251692C (zh
Inventor
内山成人
上野友美
今泉记代子
久米村惠
正木恭介
清水精一
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Otsuka Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Publication of CN1265596A publication Critical patent/CN1265596A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1251692C publication Critical patent/CN1251692C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C11/00—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions
    • A23C11/02—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins
    • A23C11/10—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins containing or not lactose but no other milk components as source of fats, carbohydrates or proteins
    • A23C11/103—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins containing or not lactose but no other milk components as source of fats, carbohydrates or proteins containing only proteins from pulses, oilseeds or nuts, e.g. nut milk
    • A23C11/106—Addition of, or treatment with, microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1236—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using Leuconostoc, Pediococcus or Streptococcus sp. other than Streptococcus Thermophilus; Artificial sour buttermilk in general
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/13—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using additives
    • A23C9/1315—Non-milk proteins or fats; Seeds, pulses, cereals or soja; Fatty acids, phospholipids, mono- or diglycerides or derivatives therefrom; Egg products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L11/00—Pulses, i.e. fruits of leguminous plants, for production of food; Products from legumes; Preparation or treatment thereof
    • A23L11/60—Drinks from legumes, e.g. lupine drinks
    • A23L11/65—Soy drinks
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L21/00—Marmalades, jams, jellies or the like; Products from apiculture; Preparation or treatment thereof
    • A23L21/10—Marmalades; Jams; Jellies; Other similar fruit or vegetable compositions; Simulated fruit products
    • A23L21/15—Marmalades; Jams; Jellies; Other similar fruit or vegetable compositions; Simulated fruit products derived from fruit or vegetable juices
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065—Microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A23L33/11—Plant sterols or derivatives thereof, e.g. phytosterols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/185—Vegetable proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/12—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for climacteric disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)

Abstract

本发明提供了一种组合物,该组合物含有作为基本成分的含黄豆苷原的物质和能够将黄豆苷原代谢为雌马酚的微生物菌株。该组合物在预防和减缓包括绝经期综合症在内的中老年妇女不明临床综合症有效,迄今为止没有发现预防和减缓这类综合症的有效方法。

Description

含异黄酮的组合物
技术领域
本发明涉及一种含异黄酮的组合物，具体地说涉及这样一种新组合物，它包括含黄豆苷原的物质和能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株，或者包括由所述微生物菌株作用于所述含黄豆苷原的物质而产生的雌马酚，所述组合物用于预防并减缓不明临床综合症以及与中老年妇女绝经期有关的症状。
背景技术
由日本国家癌症中心和Helsinki大学(芬兰)进行的有备案的合作研究致力于研究日本性别特异性肿瘤疾病，例如男性前列腺癌和女性乳腺或卵巢癌，比欧洲和美洲人群发生率低的原因在于，日本人大量摄取含各种异黄酮的豆类食品，以至很好地调整了激素平衡(H.Adlercreutz，等，(1992)柳叶刀(Lancet)，339，1233；H.Adlercreutz，等，(1992)柳叶刀，342，1209-1210)。
最近，对于异黄酮具有类雌激素(女性荷尔蒙)活性的事实已受到越来越多的关注(A.Molteni等，(1995)营养学杂志，125，751S-756S)，曾报道这些化合物对绝经期雌激素分泌衰退或停止后造成的骨质疏松(D.Agnusdei等，(1995)骨和矿物质，19(增刊)，S43-S48)以及绝经期综合症有效(D.D.Baird，等，(1995)临床内分泌代谢杂志，80，1685-1690；A.L.Murkies，等，(1995)Maturitas.，21，195-198)。
Margaret Lock(M.Lock，等，(1988)Maturitas.，10，317-332)进行的调查结果显示，日本妇女绝经期综合症发生率比加拿大妇女的发生率低很多。基于该报道，H.Adlercreutz及其同事推测日本妇女大量摄取加工后的豆制品例如豆腐、味噌、酱油等，因此这些食物中含有的植物雌激素(类异黄酮)导致绝经期综合症的发生率降低。该作者在进行了公知的反映实际摄取类异黄酮吸收量的尿液排泄物(24小时的尿液)比较试验后进一步报道，日本妇女类异黄酮的尿分泌比西方妇女高十倍(C.Herman，等，(1995)，营养学杂志，125，757S-770S)。
因此，认为黄豆苷原、染料木苷原、黄豆苷、染料木苷等类异黄酮的摄取对于减缓和防止绝经期后骨质疏松和绝经期综合症有效。特别是据报道，由于近年来的长寿倾向，绝经期后妇女的平均寿命增长到30多岁，减缓和预防绝经期后可能形成的各种疾病和综合症已经具有越来越重要的意义，因为这将改善生活质量(QOL)。
然而，上述报道，即关于日本中老年妇女摄取类异黄酮量和尿排泄类异黄酮量的调查报告仅反应了部分乡村地区的结果，而且没有提供实质信息。另外，绝经期综合症的几率和类异黄酮摄取量之间的相关性还未曾彻底地分析和显示。
因此，本发明的目的在于提供一种新的组合物，它对于防止和减缓中老年妇女所谓不明临床综合症，包括绝经期综合症有效，对于这类疾病还没有有效的防止或减缓方法。
为了实现上述目的，本发明人首先在包括城市在内的广阔地理区域内进行了饮食调查，测定尿的类异黄酮排泄，并且问卷调查了绝经期前后妇女的绝经期综合症(不明临床综合症)。
根据上面的描述，对福冈饮食学家协会的116名年龄在40到60岁之间的妇女进行的调查结果显示，摄取类异黄酮的平均量为黄豆苷原9毫克(mg)/天，染料木苷原13mg/天。类异黄酮的平均尿排泄量为黄豆苷原19.6微摩尔(μmol)/天，染料木苷原10.0μmol/天，黄豆苷原的代谢物雌马酚的平均排泄量为11.9μmol/天(检测受试者的平均值)。偶然发现，虽然所有受试者都检测到黄豆苷原和染料木苷原，但是95位受试者中仅有46位(51.6％)检测到雌马酚。
另外，集中了月经障碍妇女和处于绝经期前后5年内的妇女作为绝经期受试者，问卷调查包括17项，它们用于常规诊断绝经期综合症[作为Kupperman绝经期指数(Kupperman H.S.，等，(1953)，临床内分泌代谢杂志，13，688-703)的17项修正，即1.热潮，2.排汗，3.伤风的局部知觉，4.呼吸短缺状况，5.肢体麻木状况，6.感觉迟钝，7.睡眠困难，8.睡眠不宁，9.易怒，10.神经过敏，11.忧郁，12.眩晕，恶心，13.虚弱(疲劳)，14.肩膀僵硬，关节疼痛，肌肉疼痛，15.头痛，16.心悸，17.麻刺感]，和计算简化绝经期指数(SMI)。SMI值不低于20的受试者作为高绝经期综合症组，SMI值不高于19的受试者作为低绝经期综合症组，分别比较了两组类异黄酮的摄取量和类异黄酮的尿排泄量。
结果发现黄豆原苷的摄取量无组间差异，高绝经期综合症组染料木苷原的摄取量较低，p＝0.0643。至于类异黄酮的尿排泄，无论黄豆苷原还是染料木苷原均没有发现组间差异，但是高绝经期综合症组雌马酚的排泄显著降低(p＜0.01)。
从上述结果中本发明人发现在各种异类黄酮中绝经期妇女不明临床综合症与染料木苷原的摄取量和雌马酚的尿排泄量密切相关。
过去一直在探讨总类异黄酮的摄取量和尿排泄量与其生理作用之间的关系，而没有具体考虑某种类异黄酮例如黄豆苷原和染料木苷原的作用，但是本发明人在日本中老年妇女中展开的调查结果却清楚地表明，不但总类异黄酮的摄取量和尿排泄量，而且染料木苷原的摄取量和雌马酚的尿排泄量，特别是黄豆苷原到雌马酚的代谢转化率，与绝经期妇女不明综合症关系十分密切。
本发明人对健康成年志愿者(25-33岁)进行的另一项研究发现，单次摄入含有类异黄酮的代表食品豆奶后，类异黄酮(黄豆苷原和染料木苷原)的尿排泄以剂量相关模式增长，但是对于尿排泄显示无雌马酚的受试者，即使豆奶的摄取量增加两倍，尿中仍然检测不到雌马酚，表明黄豆苷原到雌马酚的代谢途径存在个体差异。
有报道黄豆苷原的代谢产物-雌马酚在含类异黄酮的食品，例如加工的豆制品中检测不到，而且它也不能从常规饮食中摄入体内(K.Reinli等，(1996)，营养学与癌症(Nutr.Cancer)，26，123-148)。
基于上述发现，本发明人进行了深入研究，结果成功地研制出一种新的组合物，该组合物含有具有促进黄豆苷原代谢成为雌马酚能力(代谢活性)的微生物菌株和黄豆苷原或一种含黄豆苷原组合物的适当物质；和另一种新组合物，该组合物含有由所述微生物菌株消化黄豆苷原而产生的雌马酚。随后本发明人发现摄取上述任意一种组合物都能够有效地防止和减缓中老年妇女的不明临床综合症，从而形成本发明。
发明内容
一方面本发明提供了一种食品或药品形式的组合物，该组合物含有作为基本成份的一种含黄豆苷原的物质和一种能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株(该组合物在下文将被称为“含异黄酮的组合物”)。
另一方面本发明提供了一种食品或药品形式的组合物，该组合物含有雌马酚，该雌马酚是由能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株作用于含黄豆苷原的物质而产生的(该组合物在下文将被称为“含雌马酚的组合物”)。
本发明进一步提供所述含异黄酮的组合物和含雌马酚的组合物，其中能够将黄豆苷原代谢称为雌马酚的微生物菌株为至少一种选自卵形类杆菌、中间型链球菌和constellatus链球菌的菌株。更具体地说，所述含异黄酮的组合物和含雌马酚的组合物中所述微生物菌株为至少一种选自类杆菌E-23-15，它的保藏号为FERM BP-6435，链球菌E-23-17，它的保藏号为FERM BP-6436、和链球菌A6G-225，保藏号为FERM BP-6437的菌株。
本发明还提供所述含异黄酮的组合物和含雌马酚的组合物，它们还含有至少一种有利于维持和促进所述微生物菌株生长的成份，例如至少一种选自半乳糖苷蔗糖、大豆低聚糖、乳果糖、乳糖醇和果糖低聚糖的物质。
本发明还提供所述含异黄酮的组合物和含雌马酚的组合物，其中所述含黄豆苷原的物质还含有至少一种选自染料木苷原、黄豆苷和染料木苷的成份，优选大豆异黄酮。
本发明进一步涉及将所述含异黄酮的组合物和含雌马酚的组合物用于预防和治疗中老年妇女不明临床综合症，包括绝经期综合症。
本发明还提供了食品形式的所述含异黄酮的组合物和含雌马酚的组合物，所述食品形式包括饮料、奶制品、发酵牛奶、棒状食品、颗粒状食品、粉末状食品、胶囊状食品和片状食品。
本发明进一步提供药物制剂形式的所述含异黄酮的组合物和含雌马酚的组合物，其中所述药物制剂形式包括水溶液、乳剂、颗粒剂、粉剂、胶囊和片剂。
本发明进一步提供了预防和治疗中老年妇女不明临床综合症或绝经期综合症的方法，该方法包括给所述需要预防或治疗的中老年妇女服用有效量的所述含异黄酮组合物和含雌马酚组合物。
本发明还提供了能够利用含黄豆苷原的物质或黄豆苷原生产雌马酚的微生物在制备所述含异黄酮的组合物和含雌马酚的组合物中的应用，这些组合物对防止和治疗中老年妇女不明临床综合症和绝经期综合症有效。
本发明进一步提供了一种生产雌马酚的方法，该方法包括使能够将黄豆苷原代谢为雌马酚的微生物菌株作用于黄豆苷原。
本发明还提供了一种选自类杆菌E-23-15(保藏号为FERM BP-6435)、链球菌E-23-17(保藏号为FERM BP-6436)、和链球菌A6G-225(保藏号为FERM BP-6437)的微生物菌株。
下面将详细描述本发明的含异黄酮的组合物。
在本发明的含异黄酮的组合物中，含黄豆苷原的物质作为其中的基本成分之一。该含黄豆苷原的物质不仅包括如所指的黄豆苷原，还包括黄豆苷原糖苷形式的黄豆苷以及大量含黄豆苷原和/或黄豆苷的物质。黄豆苷原主要存在于大豆、野葛及类似未加工食品、它们的加工产品例如豆腐、冻油豆腐片、豆奶等、以及它们的发酵产品例如日本豆豉、酱油、味噌、一种印尼全大豆发酵食品等中。在本发明中，任何这类未加工食品、加工产品和发酵产品都可以用作所述含黄豆苷原的物质。特别地，这类物质不仅含有黄豆苷原还含有其他具有类雌激素活性的类异黄酮，例如染料木苷原、黄豆苷、染料木苷等，染料木苷原和黄豆苷原等的部分甲基化前体生原单宁A和芒柄花黄素(formonetin)，也可以有效地应用于本发明。
在本发明的实施中含黄豆苷原的物质优选还包括来源于大豆的大豆异黄酮，例如商品如来自福冈的“Fujiflavone(商品名)P10”，来源于植物的类异黄酮，例如红三叶草、alphalpha等。
在本发明的含异黄酮的组合物中，具有从黄豆苷原生成雌马酚能力(代谢活性)的微生物菌株作为另一个基本成分。微生物包括卵形类杆菌、中间型链球菌、和constellatus链球菌。在这些微生物中特别优选的是类杆菌E-23-15(FERM BP-6435)、链球菌E-23-17(FERMBP-6436)和链球菌A6G-225(FERM BP-6437)，所有这些微生物均从人粪便中分离得到，并由发明人登记保藏。
下面将详细描述这些微生物菌株的细菌学特征。
(1)类杆菌E-23-15，FERM BP-5435
I.培养学特征
将这种菌株在填满钢丝棉的无氧瓶中于37℃无氧培养48小时，它们在Eggerth-gagnon(EG)琼脂、Blood Liver(BL)琼脂、或Gifu厌氧培养基(GAM)上生长良好或中度生长。菌落为圆形，凸面隆起状，中心和周边光滑或轻微粗糙。菌落在EG琼脂上为灰白色，在BL琼脂上为灰棕色。形态学上它是革兰氏阴性杆菌，表现为从球杆菌、单杆菌、伸长杆菌等的多态现象，但细胞发生是单一的或非链状的。未发现孢子发生。
II.生理学特征
(1)优选生长温度：37℃
(2)优选生长pH：7.0
(3)明胶液化：+
(4)可溶性淀粉的水解：+
(5)七叶苷的水解：+
(6)吲哚的产生：-
(7)脲酶：-
(8)过氧化氢酶：-
(9)碳源的同化：
      L-阿拉伯糖              +
      D-木糖                  +
      D-葡萄糖                +
      蔗糖                    +
      L-鼠李糖                +
      D-棉子糖                +
      D-甘露醇                +
      吲哚                    +
      乳糖                    +
      麦芽糖                  +
      水杨苷                  +
      明胶                    +
      甘油                    +
      D-纤维素二糖            +
      D-甘露糖                +
      D-松三糖                +
      D-山梨醇                +
      D-海藻糖                +
(10)利用了蛋白胨或葡萄糖后的有机酸组成：
使用糖发酵试验中应用的PYF(蛋白胨-酵母提取物-Fildes)培养基(约含5％蛋白胨)，并在PYF培养基中添加终浓度为0.5％的葡萄糖，于37℃厌氧培养上述菌株72小时，用HPLC分析终培养物中的有机酸。结果(单位：mM)显示在下表中。
    有机酸    PYF培养  葡萄糖-PYF培养
    马来酸     0.02      1.19
    琥珀酸     0.01      3.20
     乳酸     0.01      4.94
     甲酸     0.03      0.66
     乙酸     0.29      2.62
   焦谷氨酸     0.01       nd
     丙酸      nd       nd
    异丁酸     1.71      0.23
    正丁酸     0.36       nd
    异戊酸      nd      0.19
    正戊酸      nd       nd
nd＝未检测到
上述形态学和生化特征、糖发酵试验和有机酸产物谱表明该菌株是革兰氏阴性棒状卵形类杆菌或单形类杆菌，但由于它利用鼠李糖的能力断定它是一种属于卵形类杆菌的微生物。因此该菌株命名为类杆菌E-23-15，并于1997年7月7日保藏在国立生命科学和人体技术研究所(NIBH，Higashi 1-1-3，Tsukuba-shi，Ibaraki，Japan)，登记号为FERM P-16312。该保藏于1998年7月22日转为布达佩斯保藏，授予登记号FERM BP-6435。
(2)链球菌E-23-17(FERM BP-6436)
I.培养学特征
将这种菌株在填满钢丝棉的无氧瓶中于37℃无氧培养48小时，它们在EG琼脂、BL琼脂、或GAM上生长良好或中度生长。菌落为中心凸面状隆起的圆形或圆锥形，表面玻璃样或颗粒状质地，边缘光滑或轻微粗糙。菌落在EG琼脂上为透明到灰棕色。形态学上它是革兰氏阳性球形、椭圆形或具有略尖的末端。细胞发生单个或双球，形成不规则的集合。不形成链。该菌株无孢子发生。
II.生理学特征
(1)优选生长温度：37℃
(2)优选生长pH：7.0
(3)明胶液化：-
(4)可溶性淀粉的水解：-
(5)七叶苷的水解：+
(6)吲哚的产生：-
(7)脲酶：-
(8)过氧化氢酶：-
(9)碳源的同化：
     L-阿拉伯糖                +
     D-木糖                    -
     D-葡萄糖                  +
     蔗糖                      -
     L-鼠李糖                  +
     D-棉子糖                  -
     D-甘露醇                  +
     吲哚                      -
     乳糖                      +
     麦芽糖                    +
     水杨苷                    +
     明胶                      -
     甘油                      -
     D-纤维素二                +
     糖
     D-甘露糖                  +
     D-松三糖                  -
    D-山梨醇                       ±
    D-海藻糖                       +
(10)利用蛋白胨或葡萄糖后的有机酸组成：
使用糖发酵试验中应用的PYF(蛋白胨-酵母提取物-Fildes)培养基(约含5％蛋白胨)，该PYF培养基中另添加终浓度为0.5％的葡萄糖，于37℃厌氧培养上述菌株72小时，用HPLC分析终培养物中的有机酸。结果(单位：mM)显示在下表中。
    有机酸    PYF培养   葡萄糖-PYF培养
    马来酸     0.04         nd
    琥珀酸     2.37        0.02
     乳酸     0.02         nd
     甲酸     0.03        0.03
     乙酸     3.32        0.07
   焦谷氨酸     0.03         nd
     丙酸     3.24         nd
    异丁酸     4.17        1.11
    正丁酸      nd         nd
    异戊酸     4.50         nd
    正戊酸      nd         nd
nd＝未检测到
上述形态学和生化特征、糖发酵试验和有机酸产物谱表明该菌株是革兰氏阳性球形Luminococcus productus或constellatus链球菌，但是该菌株在利用蔗糖、D-木糖和D-棉子糖的能力方面与Luminococcusproductus的典型培养菌株存在差异。因此本发明人命名该菌株为链球菌E-23-17，并于1997年7月7日保藏在国立生命科学和人体技术研究所(NIBH，Higashi 1-1-3，Tsukuba-shi，Ibaraki，Japan)，登记号为FERM P-16313。该保藏于1998年7月22日转为布达佩斯保藏，授予登记号FERM BP-6436。
(3)链球菌A6G-225(FERM BP-6437)
I.培养学特征
将这种菌株在填满钢丝棉的无氧瓶中于37℃无氧培养48小时，它们在EG琼脂、BL琼脂、或GAM上生长良好或中度生长。菌落为中心凸面状隆起的圆形或圆锥形，表面玻璃样或颗粒样质地，边缘光滑或轻微粗糙。菌落在EG琼脂上为透明到灰白色。形态学上它是革兰氏阳性球形、椭圆形或具有略尖的末端。细胞发生单个或双球，形成不规则的集合。不形成链。该菌株也无孢子发生。
II.生理学特征
(1)优选生长温度：37℃
(2)优选生长pH：7.0
(3)明胶液化：-
(4)可溶性淀粉的水解：-
(5)七叶苷的水解：+
(6)吲哚的产生：-
(7)脲酶：-
(8)过氧化氢酶：-
(9)碳源的同化：
     L-阿拉伯糖                 -
     D-木糖                     -
     D-葡萄糖                   +
     蔗糖                       +
     L-鼠李糖                   -
     D-棉子糖                   +
     D-甘露醇                   -
     吲哚                       -
     乳糖                       +
     麦芽糖                     +
    水杨苷                         +
    明胶                           -
    甘油                           -
    D-纤维素二                     +
    糖
    D-甘露糖                       +
    D-松三糖                       -
    D-山梨醇                       -
    D-海藻糖                       -
(10)利用蛋白胨或葡萄糖后的有机酸组成：
使用糖发酵试验中应用的PYF(蛋白胨-酵母提取物-Fildes)培养基(约含5％蛋白胨)，该PYF培养基中另添加终浓度为0.5％的葡萄糖，于37℃厌氧培养上述菌株72小时，用HPLC分析终培养物中的有机酸。结果(单位：mM)显示在下表中。
    有机酸    PYF培养   葡萄糖-PYF培养
    马来酸      nd        Nd
    琥珀酸     0.21       0.03
     乳酸      nd      35.36
     甲酸     0.55       1.66
     乙酸     1.35       0.54
   焦谷氨酸      nd        Nd
     丙酸      nd        Nd
    异丁酸     2.04        Nd
    正丁酸      nd        Nd
    异戊酸      nd        Nd
    正戊酸      nd        Nd
nd＝未检测到
上述形态学和生化特征、糖发酵试验和有机酸产物谱表明该菌株属于革兰氏阳性中间型链球菌，但是该菌株在利用L-鼠李糖和D-海藻糖的能力方面与中间型链球菌的典型培养菌株存在差异。因此本发明人命名该菌株为链球菌A6G-225，并于1997年7月7日保藏在国立生命科学和人体技术研究所(NIBH，Higashi 1-1-3，Tsukuba-shi，Ibaraki，Japan)，登记号为FERM P-16314。该保藏于1998年7月22日转为布达佩斯保藏，授予登记号FERM BP-6437。
本发明人分离到的上述三种微生物菌株的最显著特征在于具有利用黄豆苷原转化为雌马酚的能力。黄豆苷原包括作为异黄酮糖苷，例如黄豆苷，糖苷配基的黄豆苷原。黄豆苷由所述微生物利用转化成黄豆苷原，然后从该黄豆苷原生成雌马酚。
关于能够产生雌马酚的微生物还未见报道。因此，本发明进一步提供了能够产生雌马酚的新的微生物菌株。
在本发明含异黄酮的组合物中用作基本成分的上述微生物菌株通常为该微生物的活菌株。然而，不限于此，还包括它的培养物、其粗产物或纯化产物，以及它们的冻干品。它的含量没有特别限制，但可以根据微生物类型，在其他因素中明智地选择。例如，对于发酵牛奶中的中间型链球菌，细菌数最好控制在约108到109个细胞/毫升(ml)范围内。通过用稀释样品接种琼脂培养基确定细菌数，37℃厌氧培养所述接种的培养基，对形成的菌落记数。对于其他微生物菌株，同样以上述方式作为经验法则确定数目。
本发明含异黄酮的组合物中还优选含有特别适合特定微生物菌株维持和生长的营养成分。所述营养成分包括各种低聚糖，例如半乳糖苷蔗糖、大豆低聚糖、乳果糖、乳糖醇、果糖低聚糖、和半乳糖低聚糖。这类营养成分在配方中的量没有特别限制，但通常优选约为本发明组合物总重量的1-3％(重量)范围内。
通常通过混合预定量的所述基本成分和其他任选成分制备本发明的组合物，然后将所述混合物加工成为合适的食品或药物制剂形式，用作食品的形式包括如饮料、奶制品、发酵奶、棒状品、颗粒状物、粉状品、胶囊、片状品等，用作药物制剂的形式包括如水溶液、乳剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、片剂等。可以应用常规方法生产上述剂型。在上述剂型的生产中用到的载体包括食用载体和药物可接受赋形剂和稀释剂。具体对于食品时，优选可口的并能改善味觉的载体。
具体的优选载体的实例包括如海藻糖(Hayashibara产)、环糊精、Benekote BMI(Kao Corporation产)等掩蔽剂。
所述含黄豆苷原的物质、特定的微生物菌株、和任选的用于维持和促进所述微生物生长的成分的混合比例没有特别严格的限制。然而，对于100克(g)本发明组合物，含黄豆苷原的物质的比例优选该组合物中含有约10-50mg黄豆苷原。在同样100g本发明组合物中，微生物的比例优选109到1010个细胞(活细胞)，低聚糖的比例优选约在1-5g范围内。
因为本发明含异黄酮的组合物含有上述微生物菌株(主要是活细胞)，在加工成终产品的过程中，该组合物最好不要受热和/或受压。因此，在将本发明的组合物加工成为棒状、颗粒状、粉状、片状等形式时，最好加入所述微生物的冻干细胞或用适当包衣材料包衣的冻干细胞。
本发明的组合物可以任意添加各种其他具有营养价值的食品添加剂或各种制药领域常规使用的添加剂。上述食品添加剂包括钙、维生素B、维生素D、维生素C、维生素E、和维生素K(具体说是来源于蒸豆发酵菌的MK-7(甲基萘醌-7))。可以加入物质的其他实例包括锌和硒。
得到的本发明含异黄酮的组合物用于防止和治疗不明临床综合症、绝经期后的骨质疏松和其他绝经期综合症以及中老年妇女综合症。使需要接受这种预防和治疗的中老年妇女服用或摄取有效量的本发明上述组合物，可以成功地实现这种预防和治疗目的。该组合物的有效量没有特别限制，只要它能成功地预防和治疗不明临床综合症、绝境期后的骨质疏松或绝经期综合症。通常，有效量优选如下，每天约摄取10-50mg黄豆苷原，及至少约10mg染料木苷原。
下面详细描述本发明的含雌马酚的组合物。
本发明的含雌马酚的组合物包括使能够利用黄豆苷原生产雌马酚的微生物菌株作用于含黄豆苷原的物质而得到的雌马酚。
微生物菌株可以与上述本发明的含异黄酮的组合物中用到的微生物相同。所述微生物作用的含黄豆苷原的物质也可以与本发明含异黄酮的组合物中提到的物质相同，因此包括分离形式和纯化形式的黄豆苷原、含黄豆苷原的食物、其加工产品和发酵产品、大豆异黄酮和来源于野葛、红三叶草、alphalpha等的异黄酮、含这类异黄酮的产品例如豆腐、豆奶、煮过的大豆、日本豆豉、大豆胚轴提取物等。
本发明的含雌马酚的组合物非常安全，因为就象前面提到的该组合物的活性成分是一种天然物质。而且，因为该组合物通过微生物制备，因此它不仅不存在化学物质等的污染物，还具有高产量和低成本的优点。
可以通过常规发酵技术，利用所述含黄豆苷原的物质，优选大豆异黄酮或含大豆异黄酮的食物作为底物制备本发明的含雌马酚的组合物。
更具体地说，该技术包括对溶液形式的底物进行灭菌，将预定的微生物菌株加入其中，在厌氧条件或恒定的需氧条件下37℃培养该混合物约48-96小时，以便进行发酵。(如果需要，可以加入pH控制剂、还原物质(例如酵母提取物、维生素K1))。
以中间型链球菌作为例子，可以如下述具体地进行上述培养过程。首先，将黄豆苷原以0.01-0.5mg/ml范围的浓度溶解于用于培养厌氧菌的改良GAM(改良的Gifu厌氧培养基)。使微生物在改良GAM中生长约14小时制备种子培养物，然后将该种子培养物接种到上述含黄豆苷原的GAM中。接种量可以为培养基体积的1/100。接种后的培养基在37℃恒定条件下厌氧培养48-96小时。
本发明进一步提供了一种利用所述微生物菌株制备雌马酚的方法。
在上述发酵系统中，可以加入一种特别适于所述微生物维持和生长的营养物质。该营养物质包括低聚糖，例如半乳糖苷蔗糖、大豆低聚糖、乳果糖、乳糖醇、果糖低聚糖、和半乳糖低聚糖。所述营养物质的量没有特别限制，但是通常优选约为本发明组合物总重量的1-3％(重量)范围内。
由此可以得到所需的含雌马酚的培养液。
可以用常规方法从该发酵液中分离和纯化雌马酚。典型的程序可以包括将发酵液吸附到离子交换树脂(例如DIAION HP20，MitsubishiKasei Corporation)上，用甲醇洗脱目标物质，然后浓缩活性组分至干，这样就得到了粗雌马酚。
通过将上述制备的含雌马酚的培养液或从中分离出来的雌马酚与其他任选食品材料调配，制备适当的食品或药物制剂形式的本发明含雌马酚的组合物。
食品形式包括饮料、奶制品、发酵奶、棒状物、颗粒、粉末、胶囊、和片状物。药物制剂形式包括水溶液、乳剂、颗粒剂、粉剂、胶囊、和片剂。可以用已知技术生产上述食品或药物剂型。在生产这些剂型中用到的载体可以是任何食用载体和药物可接受赋形剂和稀释剂。具体到食品，载体优选可口且能够改善味觉的载体。
在得到的本发明组合物中雌马酚的含量没有特别限制，但是应该可以根据想要的是食品形式还是药物制剂形式确定该含量。然而，以总组合物量为100g计，雌马酚的重量通常优选约为10-50mg。
对于本发明组合物的摄取量没有具体限制，但是通常如此选择，即服用该组合物后雌马酚的尿排泄量不低于5μmol/天。
本发明的含雌马酚的组合物用于防止和治疗中老年妇女不明临床综合症、典型的绝经后骨质疏松综合症和绝经期综合症。
本发明的最佳实施方式
为了进一步详细描述本发明，如下提供了制备本发明的含异黄酮组合物和含雌马酚组合物的实施例。然而应当理解，本发明的范围不因这些实施例而受到限制。实施例1
饮料的制备
按照下列配方称重混合各成分，以提供饮料形式的本发明的组合物。
        水溶性大豆蛋白质发酵液                  10ml
       半乳糖苷蔗糖(含量为55％)                 10.0g
            维生素和矿物质                      q.s.
                 香精                           q.s.
                  水                            q.s.
                 总量                           150ml
上述水溶性大豆蛋白质发酵液通过如下方法制备，即将2.2g水溶性大豆蛋白质溶解于10ml水中，然后向其中加入108个链球菌A6G-225(FERM BP-6437)细胞，最后于37℃培养该混合物48小时。实施例2
发酵奶的制备
按照下列配方称重并混合各成分，以提供发酵奶形式的本发明的含异黄酮组合物。
           水溶性大豆蛋白质                    2.2g
        半乳糖苷蔗糖(含量为55％)               10.0g
           链球菌A6G-225发酵奶                 100ml
              维生素和矿物质                   q.s.
                    香精                       q.s.
                     水                        q.s.
                    总量                       50ml
水溶性大豆蛋白质约含3-4％黄豆苷原(高效液相分析结果；下文同样分析)。通过将108个链球菌A6G-225(FERM BP-6437)细胞加入到1升牛奶中，并于37℃培养该混合物24小时制备链球菌A6G-225发酵奶。实施例3
发酵豆奶冻干品的制备
将1ml浓度约为107个细胞/ml的链球菌A6G-225(FERM BP-6437)悬浮液，作用于100g豆奶，于37℃进行乳酸发酵24小时，以制备雌马酚。冷冻干燥该产物。该冻干粉中雌马酚的含量为0.1-0.3％(重量)。
按照下列配方称重并混合上述粉末和其他成分，以提供发酵豆奶冻干品形式的本发明组合物。
          发酵豆奶冻干品                    2.2g
              赋形剂                        q.s.
          维生素和矿物质                    q.s.
               香精                         q.s.
               总量                         20g
17g玉米淀粉用作赋形剂。实施例4
粉状物的制备
按照下列配方称重并混合各成分，以提供粉末形式的本发明的组合物。
           粗大豆异黄酮粉                    4.1g
       半乳糖苷蔗糖(含量为55％)              10.0g
         链球菌E-23-17冻干品                 1.0g
            维生素和矿物质                   q.s.
                  香精                       q.s.
                  总量                       20g
链球菌E-23-17冻干品如下制备，使链球菌E-23-17(FERM BP-6436)在适当的液体生长培养基(GAM液体培养基)中生长(37℃，24-48小时)，冷冻干燥得到的培养物。该冻干粉末中细菌细胞的含量为109-1010个细胞/g。实施例5
颗粒物的制备
按照下列配方称重并混合各成分，以制备颗粒物形式的本发明的组合物。
          粗大豆异黄酮粉                    4.1g
      半乳糖苷蔗糖(含量为55％)              10.0g
        链球菌E-23-17冻干品                 1.0g
               山梨醇                       q.s.
           维生素和矿物质                   q.s.
                香精                        q.s.
                总量                        20g
与实施例4中相同的冻干粉用作链球菌E-23-17冻干品。实施例6
雌马酚的微生物制品
用水溶性大豆异黄酮材料(“Fujiflavone P10”，Fujicco)作为底物，将1ml含107-109个链球菌A6G-225(FERM BP-6437)细胞的培养厌氧细菌的GAM悬浮液加入到2.2％的上述底物水溶液中。在37℃，恒定条件下厌氧培养该混合物96小时，发酵液中生成的雌马酚的含量通过HPLC测定。上述水溶液中黄豆苷的含量为1.083mg/ml，黄豆苷原的含量为0.014mg/ml。
结果发现，尽管水溶性大豆异黄酮材料中没有检测到雌马酚，但是培养96小时后的发酵液中雌马酚的含量为613.0±8.7μg/ml(5次检测的平均值±标准差)。该发酵液中没有检测到黄豆苷和黄豆苷原。
用含0.01mg/ml黄豆苷原(Funakoshi产，纯度≥99％)的底物溶液(5mg黄豆苷原悬浮于2ml特级甲醇，然后用BHI(脑心浸剂)培养基稀释到50ml)替换上述水溶性大豆异黄酮材料，然后用如上述同样的方法制备雌马酚。结果发现，培养96小时后的发酵液中，雌马酚的含量为17.4±1.4μg/ml(5次检测的平均值±标准差)。
因此，显然通过应用本发明的微生物，可以利用黄豆苷原高效生产雌马酚。实施例7
饮料的制备
           含雌马酚的发酵液                    1.55g
                葡萄糖                         5.00g
                柠檬酸                         0.5g
            维生素和矿物质                     q.s.
                 香精                          q.s.
                  水                           q.s.
                 总量                          200ml
以实施例6中的同样方式，即将1ml含107-109个链球菌A6G-225(FERM BP-6437)细胞的培养厌氧细菌的GAM悬浮液加入到2.2％水溶性大豆异黄酮材料(“Fujiflavone P10”，Fujicco)的水溶液中，在37℃，恒定条件下厌氧培养该混合物96小时。按照上述配方混合如此得到含雌马酚的发酵液和其他成分，制备饮料形式的本发明的组合物。实施例8
棒状物的制备
            含雌马酚的发酵液                 1.55g
                  黄油                       20.0g
                   糖                        20.0g
                   盐                        少量
                   蛋                        1/2
                 小麦粉                      80.0g
             维生素和矿物质                  q.s.
                  香精                       q.s.
                  牛奶                       30.0g
用实施例7中描述的含雌马酚的发酵液按照上述配方，制做生面团，放入适当的棒状模具中成型，然后放入烤箱中于170℃烘烤15分钟，从而制的棒状饼。实施例9
果冻的制备
            含雌马酚的发酵液                 1.55g
                  果汁                       50.0g
                   糖                        50.0g
                  琼脂                       2.5g
             维生素和矿物质                  q.s
                  香精                       q.s.
用实施例7中描述的含雌马酚的发酵液按照上述配方，混合各种成分，加热到90℃并不断搅拌以使琼脂溶解，然后全部注入适当的杯子中，使凝胶在5-10℃冷却，从而制得果冻形式的本发明的组合物。
工业实用性
当摄取或服用食品或药品形式的本发明的组合物后，证明对预防和减缓中老年妇女不明临床综合症或绝经期综合症有效。

Claims (32)

1.一种将含黄豆苷原的物质和能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株作为基本成分的组合物。
2.根据权利要求1的组合物，其中能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株为至少一种选自卵形类杆菌、中间型链球菌和constellatus链球菌的菌株。
3.根据权利要求1的组合物，其中能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株为至少一种选自保藏号为FERM BP-6435的类杆菌E-23-15，保藏号为FERM BP-6436的链球菌E-23-17，和保藏号为FERMBP-6437的链球菌A6G-225的菌株。
4.根据权利要求1的组合物，该组合物进一步含有至少一种有利于维持和生长能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株的成分。
5.根据权利要求4的组合物，其中有利于维持和生长能够使黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株的成分为至少一种选自半乳糖苷蔗糖、大豆低聚糖、乳果糖、乳糖醇和果糖低聚糖的物质。
6.根据权利要求1的组合物，其中含黄豆苷原的物质进一步含有至少一种选自染料木苷原、黄豆苷和染料木苷的成分。
7.根据权利要求1的组合物，其中含黄豆苷原的物质为大豆异黄酮。
8.根据权利要求1的组合物，该组合物用于预防和治疗中老年妇女不明临床综合症，包括绝经期综合症。
9.权利要求8的组合物，该组合物为食品形式。
10.根据权利要求9的组合物，其中食品形式选自饮料、奶制品、发酵奶、棒状品、颗粒物、粉状物、胶囊和片剂。
11.权利要求8的组合物，该组合物为药物制剂形式。
12.根据权利要求11的组合物，其中药物制剂形式选自水溶液、乳剂、颗粒剂、粉剂、胶囊和片剂。
13.预防和治疗中老年妇女不明临床综合症或绝经期综合症的方法，该方法包括给需要所述预防和治疗的中老年妇女服用有效量的权利要求1的组合物。
14.一种微生物的应用，该微生物能够利用含黄豆苷原的物质或黄豆苷原加工出雌马酚用于有效预防和治疗中老年妇女不明临床综合症或绝经期综合症的本发明组合物的制备。
15.一种含雌马酚的组合物，其中雌马酚是由能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株作用于含黄豆苷原的物质而得到的。
16.根据权利要求15的组合物，其中能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株为至少一种选自卵形类杆菌、中间型链球菌和constellatus链球菌的菌株。
17.根据权利要求15的组合物，其中能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株为至少一种选自保藏号为FERM BP-6435的类杆菌E-23-15，保藏号为FERM BP-6436的链球菌E-23-17，和保藏号为FERM BP-6437的链球菌A6G-225的菌株。
18.根据权利要求15的组合物，该组合物进一步含有至少一种有利于维持和生长能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株的成分。
19.根据权利要求15的组合物，其中有利于维持和生长能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株的成分为至少一种选自半乳糖苷蔗糖、大豆低聚糖、乳果糖、乳糖醇和果糖低聚糖的物质。
20.根据权利要求15的组合物，其中所述含黄豆苷原的物质进一步含有至少一种选自染料木苷原、黄豆苷和染料木苷的成分。
21.根据权利要求15的组合物，其中含黄豆苷原的物质为大豆异黄酮。
22.根据权利要求15的组合物，该组合物用于预防和治疗中老年妇女不明临床综合症，包括绝经期综合症。
23.权利要求22的组合物，该组合物为食品形式。
24.根据权利要求23的组合物，其中所述食品形式选自饮料、奶制品、发酵奶、棒状品、颗粒物、粉状物、胶囊和片剂。
25.权利要求22的组合物，该组合物为药物制剂形式。
26.根据权利要求25的组合物，其中所述药物制剂形式选自水溶液、乳剂、颗粒剂、粉剂、胶囊和片剂。
27.预防和治疗中老年妇女不明临床综合症或绝经期综合症的方法，该方法包括给需要所述预防和治疗的中老年妇女服用有效量的权利要求15的组合物。
28.一种微生物的应用，该微生物能够利用含黄豆苷原的物质或黄豆苷原加工出雌马酚用于有效预防和治疗中老年妇女不明临床综合症或绝经期综合症的本发明组合物的制备。
29.制备雌马酚的方法，该方法包括使能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株作用于黄豆苷原。
30.根据权利要求29的方法，其中能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株为至少一种选自卵形类杆菌、中间型链球菌和constellatus链球菌的菌株。
31.根据权利要求29的方法，其中能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株为至少一种选自保藏号为FERM BP-6435的类杆菌E-23-15，保藏号为FERM BP-6436的链球菌E-23-17，和保藏号为FERMBP-6437的链球菌A6G-225的菌株。
32.一种选自保藏号为FERM BP-6435的类杆菌E-23-15，保藏号为FERM BP-6436的链球菌E-23-17，和保藏号为FERM BP-6437的链球菌A6G-225的微生物菌株。
CNB988079305A 1997-08-08 1998-08-04 能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株及利用该菌株生产雌马酚的方法 Expired - Fee Related CN1251692C (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP21460497 1997-08-08
JP214604/1997 1997-08-08

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2005100976518A Division CN1322140C (zh) 1997-08-08 1998-08-04 含异黄酮的组合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1265596A true CN1265596A (zh) 2000-09-06
CN1251692C CN1251692C (zh) 2006-04-19

Family

ID=16658472

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2005100976518A Expired - Fee Related CN1322140C (zh) 1997-08-08 1998-08-04 含异黄酮的组合物
CNB988079305A Expired - Fee Related CN1251692C (zh) 1997-08-08 1998-08-04 能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株及利用该菌株生产雌马酚的方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2005100976518A Expired - Fee Related CN1322140C (zh) 1997-08-08 1998-08-04 含异黄酮的组合物

Country Status (11)

Country Link
US (3) US6716424B1 (zh)
EP (2) EP1025850B1 (zh)
JP (1) JP4310601B2 (zh)
KR (1) KR100517660B1 (zh)
CN (2) CN1322140C (zh)
AU (1) AU735713B2 (zh)
CA (1) CA2298679A1 (zh)
DE (1) DE69832516T2 (zh)
ES (1) ES2249837T3 (zh)
TW (1) TW580517B (zh)
WO (1) WO1999007392A1 (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1681386B (zh) * 2002-07-24 2010-05-26 儿童医院医疗中心 含有对映体牛尿酚的组合物和产物及其制备方法
CN102726683A (zh) * 2005-12-06 2012-10-17 大塚制药株式会社 含雌马酚的大豆胚轴发酵物
CN102919738A (zh) * 2007-06-13 2013-02-13 大塚制药株式会社 含雌马酚的提取物、其制备方法、雌马酚的提取方法及含雌马酚的食品
US8822432B2 (en) 2006-06-20 2014-09-02 Unitika Ltd. Equol production accelerating composition
CN104830813A (zh) * 2007-12-27 2015-08-12 大塚制药株式会社 与雌马酚合成有关的酶
CN105707899A (zh) * 2008-09-19 2016-06-29 大塚制药株式会社 含有维持了雌马酚产生能力的雌马酚产生微生物的发酵制品及其制备方法
CN115697086A (zh) * 2020-05-21 2023-02-03 株式会社大赛璐 用于闭经后无更年期障碍的满40岁以上女性的qol改善用组合物

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000302667A (ja) * 1999-04-23 2000-10-31 Kobe Tennenbutsu Kagaku Kk 豊胸促進剤
US6436446B1 (en) * 1999-07-30 2002-08-20 Pharmavite Llc Composition for increasing bone density
JP2002330723A (ja) * 2001-02-28 2002-11-19 Samjo Celltech Ltd 大豆胚芽を用いた麹およびその製造方法、ならびにそれを用いて製造された醤類
US20050215493A1 (en) * 2002-05-01 2005-09-29 Masaki Miyake Calcium-containing tissue strengthening agents and use thereof
US8668914B2 (en) * 2002-07-24 2014-03-11 Brigham Young University Use of equol for treating skin diseases
WO2004039327A2 (en) 2002-10-29 2004-05-13 Colorado State University Research Foundation Use of equol for treating androgen mediated diseases
US8580846B2 (en) 2002-10-29 2013-11-12 Brigham Young University Use of equol for ameliorating or preventing neuropsychiatric and neurodegenerative diseases or disorders
US7025998B2 (en) * 2003-05-30 2006-04-11 Rotta Research Laboratorium S.P.A. Phytoestrogens and probiotic for women's health
CN1826059B (zh) * 2003-06-30 2011-09-28 大塚制药株式会社 含有产生雌马酚的乳酸菌的组合物
EP2305272A1 (en) * 2004-04-28 2011-04-06 Brigham Young University Use of equol for treating skin diseases
KR100494568B1 (ko) * 2004-09-16 2005-06-10 다카라코리아바이오메디칼(주) 디하이드로다이드제인을 에쿠올로 대사할 수 있는 신규미생물
JP4723849B2 (ja) * 2004-11-17 2011-07-13 株式会社ファンケル ダイフラクトースアンハイドライド含有経口組成物
JP4811760B2 (ja) * 2004-12-27 2011-11-09 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 ダイゼイン資化によるエコール生成能を改善するための腸内細菌およびその利用
KR101409194B1 (ko) * 2005-11-02 2014-06-19 가부시키가이샤 야쿠르트 혼샤 에쿠올 농도 조절제
CA2644815C (en) * 2006-03-14 2011-10-04 The Procter & Gamble Company Absorbent articles with lotions
JP5517613B2 (ja) * 2007-05-28 2014-06-11 不二製油株式会社 エクオール非産生者用の血中エクオール産生促進組成物
AU2013203101B2 (en) * 2007-06-13 2015-07-09 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Equol-containing extract, method for production thereof, method for extraction of equol, and equol-containing food
US20100256067A1 (en) * 2007-10-18 2010-10-07 Yvonne Evelien Bruggeman Liquid edible composition comprising isoflavones
JP2009232712A (ja) * 2008-03-26 2009-10-15 Glico Dairy Products Co Ltd エクオール産生組成物，エクオール産生方法及びエクオール含有組成物
EP2133080A1 (de) 2008-06-13 2009-12-16 Haelan Schweiz GmbH Zusammensetzungen enthaltend Equol
EP2154133A1 (de) 2008-08-14 2010-02-17 System Biologie AG Synthese von Equol
IT1392101B1 (it) * 2008-12-12 2012-02-09 Zuccari Societa A Responsabilita Limitata In Breve Zuccari S R L Composizione comprendente isoflavoni
CN102317435B (zh) * 2009-02-25 2014-08-06 株式会社益力多本社 雌马酚产生菌及其利用
WO2011034126A1 (ja) * 2009-09-18 2011-03-24 不二製油株式会社 エクオールの不斉合成法
IT1404171B1 (it) * 2011-02-10 2013-11-15 Paladin Pharma S P A Composizione per l'uso nel trattamento dei problemi/disturbi della menopausa e nel trattamento dell'invecchiamento generale dell'organismo
ITPI20110034A1 (it) * 2011-04-01 2012-10-02 Funcional Food Res S R L Preparazione alimentare funzionale ad uso femminile.
ITMI20111283A1 (it) * 2011-07-08 2013-01-09 Paladin Pharma S P A Composizione comprendente microorganismi del genere enterococcus thailandicus ed equolo, metodo di preparazione ed uso della stessa come agente prebiotico
KR101307947B1 (ko) 2011-11-30 2013-09-12 씨제이제일제당 (주) 싸이코스를 유효성분으로 하는 에쿠올 농도 상승제
WO2016038061A1 (en) 2014-09-10 2016-03-17 System Biologie Ag Synthesis of isoflavanes and intermediates thereof
JP2017200451A (ja) * 2016-05-06 2017-11-09 株式会社ノエビア 飲料
KR102064055B1 (ko) * 2018-02-08 2020-01-08 신선옥 에쿠올이 생성된 발효커피생두, 그 제조방법 및 그 추출물
JP7202800B2 (ja) * 2018-07-13 2023-01-12 ライオン株式会社 水分散性組成物、食品組成物、水分散液及び泡立ち抑制方法

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5035393A (zh) * 1973-08-01 1975-04-04
US4268434A (en) 1979-01-09 1981-05-19 Higerd Thomas B Immunosuppressive extracellular product from oral bacteria
JPS59199630A (ja) * 1983-04-26 1984-11-12 Takeda Chem Ind Ltd 卵巣機能低下症治療剤
JPS60199396A (ja) 1984-03-22 1985-10-08 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd イソフラボン誘導体の製法
US5229113A (en) 1987-04-07 1993-07-20 Lubrizol Genetics, Inc. Bradyrhizobium japonicum nodulation inducing factor
JPH01268640A (ja) 1988-04-18 1989-10-26 Mitsuo Nakajima 生理機能活性剤
JPH0284142A (ja) 1988-06-08 1990-03-26 Takeda Chem Ind Ltd ラクチトール含有ジャム類
JPH04356479A (ja) 1991-06-01 1992-12-10 Kuraray Co Ltd イソフラボン化合物及び骨粗鬆症治療剤
JP3181650B2 (ja) * 1991-12-27 2001-07-03 オリエンタルバイオ株式会社 動脈硬化予防食品
JPH05328929A (ja) * 1992-05-27 1993-12-14 Fujitsuko Kk 大豆加工食品およびその製法
AU6635994A (en) * 1993-04-16 1994-11-08 Tufts University School Of Medicine Method for treatment of menopausal and premenstrual symptoms
JPH09157268A (ja) * 1995-12-08 1997-06-17 Nippon Kayaku Co Ltd ７−ヒドロキシイソフラボンの製造方法及びその精製方法
JP3170196B2 (ja) 1996-02-29 2001-05-28 矢崎総業株式会社 端子板の接続構造
JP3489930B2 (ja) * 1996-03-08 2004-01-26 株式会社ヤクルト本社 がん予防食品
US5902578A (en) * 1996-03-25 1999-05-11 Abbott Laboratories Method and formula for the prevention of diarrhea

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1681386B (zh) * 2002-07-24 2010-05-26 儿童医院医疗中心 含有对映体牛尿酚的组合物和产物及其制备方法
CN102726683A (zh) * 2005-12-06 2012-10-17 大塚制药株式会社 含雌马酚的大豆胚轴发酵物
CN102845685A (zh) * 2005-12-06 2013-01-02 大塚制药株式会社 含雌马酚的大豆发酵物
CN103947960A (zh) * 2005-12-06 2014-07-30 大塚制药株式会社 含雌马酚的大豆胚轴发酵物及其制备方法
US8822432B2 (en) 2006-06-20 2014-09-02 Unitika Ltd. Equol production accelerating composition
CN102919738A (zh) * 2007-06-13 2013-02-13 大塚制药株式会社 含雌马酚的提取物、其制备方法、雌马酚的提取方法及含雌马酚的食品
CN102934774B (zh) * 2007-06-13 2014-03-05 大塚制药株式会社 含雌马酚的提取物、其制备方法、雌马酚的提取方法及含雌马酚的食品
CN102919738B (zh) * 2007-06-13 2016-05-11 大塚制药株式会社 含雌马酚的提取物、其制备方法、雌马酚的提取方法及含雌马酚的食品
CN104830813A (zh) * 2007-12-27 2015-08-12 大塚制药株式会社 与雌马酚合成有关的酶
CN105707899A (zh) * 2008-09-19 2016-06-29 大塚制药株式会社 含有维持了雌马酚产生能力的雌马酚产生微生物的发酵制品及其制备方法
CN115697086A (zh) * 2020-05-21 2023-02-03 株式会社大赛璐 用于闭经后无更年期障碍的满40岁以上女性的qol改善用组合物

Also Published As

Publication number Publication date
EP1025850A1 (en) 2000-08-09
US20080131412A1 (en) 2008-06-05
US7345089B2 (en) 2008-03-18
DE69832516D1 (de) 2005-12-29
US20040141954A1 (en) 2004-07-22
EP1656942A2 (en) 2006-05-17
WO1999007392A1 (fr) 1999-02-18
AU735713B2 (en) 2001-07-12
DE69832516T2 (de) 2006-07-27
AU8463198A (en) 1999-03-01
KR20010022669A (ko) 2001-03-26
TW580517B (en) 2004-03-21
CA2298679A1 (en) 1999-02-18
CN1251692C (zh) 2006-04-19
CN1322140C (zh) 2007-06-20
US7939060B2 (en) 2011-05-10
ES2249837T3 (es) 2006-04-01
JP4310601B2 (ja) 2009-08-12
US6716424B1 (en) 2004-04-06
EP1025850B1 (en) 2005-11-23
EP1025850A4 (en) 2002-08-14
KR100517660B1 (ko) 2005-09-30
CN1757743A (zh) 2006-04-12
EP1656942A3 (en) 2008-02-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1251692C (zh) 能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株及利用该菌株生产雌马酚的方法
Zhou et al. Applied modern biotechnology for cultivation of Ganoderma and development of their products
CN1145493C (zh) 动脉硬化防止材料
CN1826059A (zh) 含有产生雌马酚的乳酸菌的组合物
CN1662655A (zh) 含有β－葡聚糖的油脂组合物以及生产β－葡聚糖的新型微生物
CN106085881B (zh) 一种黑曲霉菌株及其应用
CN1856568A (zh) 发酵和培养的方法、植物发酵提取物、植物发酵提取物粉末以及含有植物发酵提取物的组合物
JP5631862B2 (ja) エコール産生細菌及びその利用
WO2009074004A1 (fr) Procédé destiné à la préparation d'un vin de santé à base de cordyceps
WO2007052740A1 (ja) エクオル濃度調節剤
CN1259923C (zh) 扰乱内分泌的物质的吸收剂及含有该吸收剂的食物和饮料
CN1812801A (zh) 降低血清尿酸水平的组合物
CN1853513A (zh) 一种具有缓解体力疲劳作用的运动饮料
CN103060243A (zh) 一株副干酪乳杆菌副干酪亚种菌株
CN1320121C (zh) 制备蘑菇乳酸发酵溶液的方法及由此制备的蘑菇乳酸发酵溶液
CN106222010A (zh) 一种生物活性窖泥及其制备方法
CN101270336A (zh) 热带假丝酵母zd-3菌株及其用途及用以生产生物蛋白饲料的方法
CN114921361B (zh) 具有改善酒精性肝损伤的植物乳杆菌zy08及其应用
KR100606241B1 (ko) 항당뇨의 효과가 증강된 홍삼청국장 제조방법
JP5283363B2 (ja) モナコリンｋ生産性に優れた紅麹菌株
CN102093966A (zh) 水貂源植物乳杆菌mdl1118及其应用
KR20090087974A (ko) 복분자박, 복분자잎, 줄기 발효 사료 첨가제의 제조방법
CN1563398A (zh) 一种雅致放射毛霉用于生产神经酰胺的用途
KR102125363B1 (ko) 곡주 제조용 분말형 효모 제조방법
CN1536069A (zh) 大规模生产虫草菌和灵芝菌的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20060419