CN1255680C - 液相色谱仪 - Google Patents
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Abstract
一种液相色谱仪，通过捕获用流路，利用能够各自独立设定流量的输液泵供应2种稀释液。一种稀释液经过馏分回路，将保存在该馏分回路的分级成分和流动相导入捕获柱。另一种稀释液在该馏分回路的下游与经过该馏分回路的流路合流，一边将来自该流路的流动相稀释，一边导入捕获柱。通过在该捕获柱上捕获试样成分而浓缩。
Description
技术领域
本发明涉及一种高速液相色谱仪等的液相色谱仪，具体涉及具有将分离的成分捕获在捕获柱上并进行浓缩的功能的液相色谱仪。
背景技术
以前的二维高速液相色谱法，通过第一维分析，在柱的下游侧分级含有1个以上分析对象成分的洗脱液，使分析对象成分吸附在捕获柱等上，通过洗脱捕获柱吸附的分析对象成分，再通过第二维分析进行再分析。
在使捕获柱吸附分析对象成分时，为提高捕获柱对分析对象成分的吸附效率，在洗脱液中同时流入作为稀释液的使溶剂强度变弱的流动相。采用电阻管确定该洗脱液与稀释液的混合比率即稀释率。
在向捕获柱流入浓缩液时，将通过第一维分析分级的洗脱液输送到捕获柱的液体与进行稀释的稀释液之间的比率，在很大程度上左右吸附效率，但是，在以前的装置中，由于稀释率的选择采用电阻管，稀释率被限制在1/3、1/6、1/10这几个值内，不能适应各种稀释率。
发明内容
本发明的目的是，在将通过第一维分析分离、分级的试样成分和洗脱液导入捕获柱中时，能够自由设定将它们输送到捕获柱的液体与稀释液之间的比率。
在本发明中，在向捕获柱流入稀释液时，通过利用各个泵输送将通过第一维分析分级的洗脱液输送到捕获柱的液体和进行稀释的稀释液，由此能够自由选择稀释率。
即，本发明的液相色谱仪，具有：输液机构，具有通过切换阀使第1第一维分析用流动相和稀释液切换的第1输液泵，和通过切换阀使第2第一维分析用流动相和稀释液切换的第2输液泵，两个输液泵可以相互独立地设定流量；分级用流路，利用由第1、第2第一维分析用流动相构成的洗脱液，将从试样注入部注入的试样导入第一维分析柱并进行分离，与洗脱液一起分级分离的成分，保存在分取部；捕获用流路，利用稀释液将保存在上述分取部的成分和洗脱液输送到捕获柱，在捕获柱上捕集上述成分并进行浓缩，使所述稀释液流入捕获柱的流路，由与上述第1输液泵连接经由所述分取部的第一稀释液流路和与上述第2输液泵连接在所述分取部下游侧使稀释液与第1稀释液流路合流的第2稀释液流路构成；分析流路，通过第二维分析用流动相将捕集在上述捕获柱上的成分导入第二维分析柱上并进行分析。
这样，由于能够在捕获用流路上独立设定第1、第2稀释液流路的流量，所以能够自由设定稀释率。
与以往在设定稀释率时采用稀释电阻管的方法相比，由于不需要调整稀释电阻管，能够减少工时，降低生产成本。此外，在采用稀释电阻管时，由于在管壁上混入异物等，对稀释流量也有微妙变化，但通过利用输液泵设定稀释流量，一般能够得到稳定的稀释流量。
在优选的方式中，设置在上述第1、第2稀释液流路的输液泵的至少一方兼作上述第一维分析用流动相的输液泵，在该输液泵的上游设置可切换上述第一维分析用流动相和稀释液的供给的切换阀。这样，通过在第一维分析用流动相和稀释液中共用输液泵，有助于降低液相色谱仪装置的成本。
此外，在其他优选的方式中，在上述捕获柱上连接NMR(核磁共振)用置换流路，至少将捕获柱内存在的流动相置换成氘化溶剂。由此，被捕获柱捕获的成分不洗脱，而直接被继续捕获，通过将流动相置换成氘化溶剂，可进行NMR分析，由于能够将置换的容量限定在捕获柱和之相连接的很小流路上，也能够抑制高价的氘化溶剂的使用量。
附图说明
图1是表示在第一维分析工序状态下的第1实施例的流路图。
图2是表示在浓缩工序状态下的同一实施例的流路图。
图3是表示在第二维分析工序状态下的同一实施例的流路图。
图4是表示第2实施例的流路图。
具体实施方式
下面，参照附图详细说明实施例。
图1表示第1实施例。
为供给第一维分析用流动相和稀释液，设置能够相互独立地设定流量的2台输液泵2a和2b。在输液泵2a上连接第一维分析用流动相有机溶剂4a和稀释液6a的流路。有机溶剂4a和稀释液6a借助切换阀10，从防止混入气体的在线脱气装置8与输液泵2a连接，通过切换阀10能够切换连接有机溶剂4a和稀释液6a的任何流路。同样，在另一输液泵2b上连接第一维分析用流动相水4b和稀释液6b的流路。水4a和稀释液6a也借助切换阀10，从在线脱气装置8与输液泵2b连接，通过切换阀10能够切换连接水4b和稀释液6b的任何流路。
稀释液6a和6b相同，可根据流动相4a、4b，选择使用能够提高捕获柱的吸附效率的溶剂。
输液泵2a和2b的下游的流路，借助切换阀12，与混合两流路的液体的混合器14连接，在以混合器14混合的溶液的流路，借助试样导入部即自动取样器16，与第一维分析柱18连接。
分析柱18的下游的流路与UV(紫外线)检测器20连接，用检测器20检测分析柱18分离的成分。
检测器20的下游的流路，借助切换阀22，与馏分回路24连接。馏分回路24在2个分配阀26a和26b的之间并列具有多条流路，能够在各自的流路保存分级的成分和流动相。在切换阀22也可以连接与废液管相连的流路。
在阀12和22的之间连接2个流路，一方的流路分支并与切换阀28连接。捕获柱30与切换阀28连接，此外，也连接第二维分析柱32。在分析柱32的下游的流路连接有UV检测器34。
为了供给第二维分析用流动相，设置2台输液泵36a和36b。在输液泵36a、36b上，借助在线脱气装置39，分别连接第二维分析用流动相有机溶剂38a和水38a用的流路。借助混合两流路的液体的混合器40，将在输液泵36a和36b的下游流路连接在切换阀28上。
42是柱温箱，使柱18和30保持为固定温度。
作为分析柱18、32，可根据要分离的成分，选择使用正相柱、反向柱、离子交换柱、亲和色谱柱、GPC(凝胶浸透色谱法)柱等。作为捕获柱30，可以使用与分析柱18、32同类的、较短的柱。
下面，说明该实施例的操作。
第一维分析
图1表示第一维分析及分级工序。流路中用粗线表示的部分是表示该工序的工作流路。在以下的图的说明中也相同。
在利用切换阀10选择流动相4a和4b的状态下，输液泵2a与2b进行输液。流动相经过切换阀12，由混合器14混合，经过自动取样器16后，流入分析柱18。从自动取样器16注入的试样被分析柱18分离、洗脱，由检测器20检测。如用检测器20进行峰值检测，根据其信号，分配阀26a和26b工作，在任一馏分回路24分级的试样成分能够与流动相一起被保存。
每次利用检测器20进行峰值检测，切换分配阀26a和26b，并保存在各个馏分回路24中分级的试样成分与流动相。
用从分析柱18流出的流动相，将没有保存在馏分回路24的部分排向废液管。
在此工序中也进行调节，在经过在线脱气装置39去除气泡的状态下，分别由输液泵36a和36b供给第二维分析用流动相38a和38b，用混合器40混合后输送，流动相流向第二维分析柱32并进行浓缩。
浓缩
下面，图2表示在捕获柱30上捕获并浓缩保存在馏分回路24的分级成分的工序。
切换切换阀10，由输液泵2a和2b供给稀释液6a和6b。由输液泵2b供给的稀释液通过切换阀12、22，从分配阀26b通向规定的馏分回路24，保存在该馏分回路24的分级成分和流动相从切换阀26a通过切换阀22、28，导入捕获柱30。此时，从泵2a经过切换阀12，供给稀释液6a，与经过分流回路24的流路合流，一边稀释从该流路供给的流动相，一边导入捕获柱30。通过在捕获柱30捕获试样成分，进行浓缩。经过捕获柱30的流动相和稀释液经过切换阀28，排向废液管。
在此工序中也进行调节，在第二维分析柱32中流动流动相并进行浓缩。
第二维分析
图3表示第二维分析工序的图。
在经过在线脱气装置39去除气泡的状态下，分别由输液泵36a和36b供给第二二维分析用流动相38a和38b，用混合器40混合后输送。该混合的流动相经过切换阀28，到达捕获柱30，洗脱捕获柱30捕获的试样成分后，从切换阀28导入第二维分析柱32。导入分析柱32的试样成分进一步被该分析柱32分离，洗脱后用检测器34检测。
作为高速液相色谱仪，通过第二维分析能够达到目的。此外，在检测器34的下游也能够连接定性分析用的质量分析仪(MS)。此时，经过检测器34的洗脱液经过适当的界面转换，导入质量分析仪，进行由检测器34检测的试样成分的定性分析。
实施例2
图4表示在第1实施例中附加置换NMR分析用氘化溶剂的功能的第2
实施例。
作为图1的实施例的第二维分析用流动相，作为第二维分析的有机溶剂38a，采用氘代有机溶剂，采用重水作为水38b。此外，在从切换阀12、22的流路、混合器40及切换阀28的之间插入切换阀50，借助该切换阀50连接流路，以便能够用重水置换。
在本实施例中，在捕获柱30中浓缩试样成分后，在将该成分导入分析柱32之前，利用输液泵36b供给重水38b，从切换阀50，不经过混合器40，从切换阀28，经捕获柱30，从切换阀28导入到废液管。由此，在捕获柱30内及切换阀28和捕获柱30之间的流路用重水进行置换。由此，能够不洗脱捕获柱30捕集的成分地直接继续捕集。
下面，切换切换阀50和28，利用输液泵36a供给氘代有机溶剂38a，利用输液泵36b供给重水38b，进行梯度分析。此时，氘代有机溶剂38a被送入混合器40，重水38b经过切换阀50，送入混合器40，由混合器40混合氘代有机溶剂38a和重水38b，成为梯度分析用流动相，该流动相经过切换阀28，到达捕获柱30，洗脱捕获柱30捕集的试样成分，从切换阀28导入第二维分析柱32。导入分析柱32的试样成分进一步由该分析柱32分离，洗脱后由检测器34检测。
在本实施例中，流动相置换成氘代溶剂，可进行NMR分析。
Claims (3)
1.一种液相色谱仪，具有：
输液机构，具有通过切换阀使第1第一维分析用流动相和稀释液切换的第1输液泵，和通过切换阀使第2第一维分析用流动相和稀释液切换的第2输液泵，两个输液泵可以相互独立地设定流量；
分级用流路，利用由第1、第2第一维分析用流动相构成的洗脱液，将从试样注入部注入的试样导入第一维分析柱并进行分离，与洗脱液一起分级分离的成分，并保存在分取部；
捕获用流路，利用稀释液将保存在上述分取部的成分和上述洗脱液输送到捕获柱，在捕获柱上捕集上述成分并进行浓缩，使所述稀释液流入捕获柱的流路，由与上述第1输液泵连接经由所述分取部的第一稀释液流路和与上述第2输液泵连接在所述分取部下游侧使稀释液与第1稀释液流路合流的第2稀释液流路构成；
分析流路，通过第二维分析用流动相将捕集在上述捕获柱上的成分导入第二维分析柱上并进行分析。
2.如权利要求1所述的液相色谱仪，其中，
上述分取部具有馏分回路，该馏分回路并列具有通过分配阀可选择的多条流路。
3.如权利要求1所述的液相色谱仪，其中，
在上述捕获柱上连接NMR用置换流路，至少将捕获柱内存在的流动相置换为氘代溶剂。
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