CN1244568C - 从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法 - Google Patents
从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1244568C CN1244568C CN 03135916 CN03135916A CN1244568C CN 1244568 C CN1244568 C CN 1244568C CN 03135916 CN03135916 CN 03135916 CN 03135916 A CN03135916 A CN 03135916A CN 1244568 C CN1244568 C CN 1244568C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- taxol
- content
- purification
- products
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Abstract
本法用大孔吸附树脂如AB-8、D101、D201、AK-9作固定相,40~70%极性溶剂如乙醇、丙酮的水溶液为流动相,柱层析法分离纯化紫杉醇,流出液流速为0.6~1.5升/小时,每小时收集1份,至紫杉醇浓度低于0.2毫克/毫升时终止,按时间分段收集流出液;流出液中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品A;流出液中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品B。本法便于将9~20%的紫杉醇粗产品分离纯化为40~60%的紫杉醇中间产品;一次性收率高达80%;操作安全,不使用易燃、易爆或有毒溶剂;上样量大,大孔吸附树脂与样品的重量比高达10比0.9~1.5,是一般层析上样量的15倍;可除去粗产品中的水溶性杂质。
Description
(一)技术领域
本发明涉及植物提取物的分离纯化领域,具体是一种从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法。
(二)技术背景
紫杉醇是近二十年来世界上发现的最有希望的抗癌药物,对治疗乳腺癌、卵巢癌、食道癌、肺癌、肝癌等癌症均有良好疗效,对癌细胞有极强的杀伤力,而毒副作用极小。因此成为目前药品行业研究的重点。
紫杉醇属于二萜类生物碱。最开始是从天然植物红豆杉中提取分离紫杉醇。红豆杉是珍稀物种,天然红豆杉资源极为有限,而且红豆杉生长缓慢,天然红豆杉无法满足紫杉醇生产的需要量。为了开辟紫杉醇的新的来源,人们研究了从人工种植的曼地亚红豆杉中提取分离紫杉醇、红豆杉细胞培养生产紫杉醇及多种生物合成、半合成、全合成紫杉醇工艺。无论采用何种工艺,由于紫杉醇合成率低、成本高,所以紫杉醇价格昂贵。另外从多种结构相近的衍生物、同系物的混合物中分离纯化出紫杉醇药物,特别是紫杉醇与三尖杉宁碱的分离,是很困难的工作。分离纯化过程中收率稍有升降,即意味着珍贵的紫杉醇的得失多少,效益上将有巨大差异。所以如何改进紫杉醇的分离纯化工艺,是目前普遍重视的课题。
目前的分离方法主要有硅胶柱层析法、氧化铝柱层析法,纯化方法主要有C18柱层析、氟苯基柱层析等反相层析法和硅胶柱层析正相层析法。
有关紫杉醇的分离纯化工艺的专利申请有多件,如:加拿大植原药物公司1999年申请的中国专利99815315.X“从含紫杉醇物质生产紫杉醇的高产率提取方法”用丙酮/水沉淀法制备高纯度紫杉醇,复旦大学1998年申请的中国专利“一种清洁纯化紫杉醇的方法”使用填充色谱柱正构烷烃淋洗纯化紫杉醇粗产物,梅县梅雁生物工程研究所2001申请的中国专利“从红豆杉细胞培养液滤液中富集提取紫杉醇的方法”将大孔吸附树脂与试液充分混合进行吸附富集,有机溶剂洗脱被树脂吸附的紫杉醇,浓缩得到高含紫杉醇的浓缩物。
现有的分离纯化方法的不足之处在于,紫杉醇一次收率(即从投料开始,经过按顺序的工艺流程,而得到的产出物收得率,以有效成份紫杉醇计算。不包括副产出物的反复投入)仅为70%;而且要使用易燃、易爆或有毒溶剂,如氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、乙腈等,对人体有害,污染环境,生产操作过程危险性高;此外上样量小,一般硅胶柱层析时硅胶与样品的比例为150比0.9~1.0。
(三)发明内容
本发明的目的是提供一种收率高、且生产操作安全的从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法。
本发明的从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法,包含下述步骤:
①紫杉醇含量为9~20%的紫杉醇粗产品为原料样品;
②用大孔吸附树脂作固定相,大孔吸附树脂与样品的重量比为10比0.9~1.4;
③用能与水混溶的、浓度为40~70%极性溶剂水溶液为流动相;
④用柱层析法分离纯化紫杉醇,样品溶液从大孔吸附树脂的层析柱顶端上样;
⑤流动相洗脱时,层析柱内流出液流速为0.6~1.5升/小时;
⑥按时间分段收集经层析后的流出液,每小时收集1份,至HPLC检测紫杉醇浓度低于0.2毫克/毫升时终止,按时间段收集的流出液分为三部分;
⑦第I部分流出液中基本无紫杉醇,集中处理,回收溶剂;
⑧第II部分流出液中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品A;
⑨第III部分流出液中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品B。
本发明从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法的优点为:1、分离纯化效果好,很方便地将紫杉醇含量为9~20%的紫杉醇粗产品纯化为含紫杉醇40~60%的紫杉醇中间产品;2、收率高,紫杉醇一次性收率高达80%左右;3、操作安全,不使用易燃、易爆或有毒溶剂;4、上样量大,大孔吸附树脂与样品的重量比高达10比0.9~1.5,是一般硅胶柱层析时硅胶上样量的15倍;5、可除去紫杉醇粗产品中的水溶性杂质。
(四)具体实施方式
实施例1
①原料样品中紫杉醇含量为15.6%的紫杉醇粗产品100克,其中紫杉醇净含量15.6克;
②紫杉醇样品原料溶于300毫升95%(V/V)极性溶剂乙醇中,然后加水至乙醇浓度为60%(V/V),样品与乙醇水溶液重量比约为1比5;
③大孔吸附树脂AB-8 1000克,与样品的重量比为10比1,装入外径6厘米可充填高度100厘米的玻璃层析柱内;
④从大孔吸附树脂的层析柱顶端上样,即将样品溶液倒入层析柱中,调节层析柱出口阀门,控制层析柱内溶液流速为1升/小时;
⑤ 按时间分段收集经层析后的流出液,每小时收集1份,至HPLC检测紫杉醇浓度为0.2毫克/毫升时终止;
⑥1~4份流出液为第I部分,其中基本无紫杉醇,集中处理,回收溶剂;
⑦5~20份流出液为第II部分,其中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品A8.35克,其中含紫杉醇37.4%,即紫杉醇净含量为3.12克,占原料中紫杉醇的20%;
⑧21~终止的流出液为第III部分,其中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品B18.2克,其中含紫杉醇54.2%,即紫杉醇净含量为9.86克,占原料中紫杉醇的63.2%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量共为12.98克,占原料中紫杉醇的83.2%,即紫杉醇的一次性收率为83.2%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量平均为48.9%。
实施例2
使用大孔吸附树脂D101,①~⑥步其它条件与实施例1相同;
⑦5~20份流出液为第II部分,其中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品A8.55克,其中含紫杉醇38.5%,即紫杉醇净含量为3.29克,占原料中紫杉醇的21.09%;
⑧21~终止的流出液为第III部分,其中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品B17.5克,其中含紫杉醇53.5%,即紫杉醇净含量为9.36克,占原料中紫杉醇的60.01%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量共为12.65克,占原料中紫杉醇的81.1%,即紫杉醇的一次性收率为81.1%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量平均为48.6%。
实施例3
使用大孔吸附树脂D201,①~⑥步其它条件与实施例1相同;
⑦5~20份流出液为第II部分,其中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品A8.765克,其中含紫杉醇40.2%,即紫杉醇净含量为3.52克,占原料中紫杉醇的22.57%;
⑧21~终止的流出液为第III部分,其中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品B18.5克,其中含紫杉醇50.2%,即紫杉醇净含量为9.19克,占原料中紫杉醇的59.53%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量共为12.81克,占原料中紫杉醇的82.1%,即紫杉醇的一次性收率为82.1%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量平均为47.0%。
实施例4
使用大孔吸附树脂AK-9,①~⑥步其它条件与实施例1相同;
⑦5~20份流出液为第II部分,其中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品A8.60克,其中含紫杉醇37.8%,即紫杉醇净含量为3.25克,占原料中紫杉醇的20.84%;
⑧21~终止的流出液为第III部分,其中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品B17.4克,其中含紫杉醇51.2%,即紫杉醇净含量为8.91克,占原料中紫杉醇的57.11%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量共为12.16克,占原料中紫杉醇的77.9%,即紫杉醇的一次性收率为77.9%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量平均为46.8%。
实施例5
①与实施例1相同;
②紫杉醇样品原料溶于200毫升极性溶剂丙酮中,然后加水至丙酮浓度为40%(V/V),样品与丙酮水溶液重量比约为1比6;
③~⑤与实施例1相同;
⑥1~2份流出液为第I部分,其中基本无紫杉醇,集中处理,回收溶剂;
⑦3~6份流出液为第II部分,其中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品A11.5克,其中含紫杉醇30.2%,即紫杉醇净含量为3.59克,占原料中紫杉醇的23.0%;
⑧17~终止的流出液为第III部分,其中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品B19.7克,其中含紫杉醇48.3%,即紫杉醇净含量为9.52克,占原料中紫杉醇的61.0%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量共为12.11克,占原料中紫杉醇的42.0%,即紫杉醇的一次性收率为42.0%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量平均为84.0%。
实施例6
①原料样品中紫杉醇含量为9.5%的紫杉醇粗产品140克,其中紫杉醇净含量13.3克;
②紫杉醇样品原料溶于300毫升95%(V/V)极性溶剂乙醇中,然后加水至乙醇浓度为70%(V/V),样品与乙醇水溶液重量比约为1比4;
③与实施例1相同;
④从大孔吸附树脂的层析柱顶端上样,即将样品溶液倒入层析柱中,调节层析柱出口阀门,控制层析柱内溶液流速为0.6升/小时;
⑤与实施例1相同;
⑥第1份流出液为第I部分,其中基本无紫杉醇,集中处理,回收溶剂;
⑦2~16份流出液为第II部分,其中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品A8.72克,其中含紫杉醇30.2%,即紫杉醇净含量为2.63克,占原料中紫杉醇的19.8%;
⑧16~终止的流出液为第III部分,其中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品B20.55克,其中含紫杉醇41.8%,即紫杉醇净含量为8.59克,占原料中紫杉醇的64.59%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量共为11.22克,占原料中紫杉醇的84.4%,即紫杉醇的一次性收率为84.4%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量平均为38.3%。
实施例7
①原料样品中紫杉醇含量为11.8%的紫杉醇粗产品95克,其中紫杉醇净含量11.2克;
②紫杉醇样品原料溶于300毫升95%(V/V)极性溶剂乙醇中,然后加水至乙醇浓度为50%(V/V),样品与乙醇水溶液重量比约为1比6;
③与实施例1相同;
④从大孔吸附树脂的层析柱顶端上样,即将样品溶液倒入层析柱中,调节层析柱出口阀门,控制层析柱内溶液流速为1.5升/小时;
⑤与实施例1相同;
⑥1~6份流出液为第I部分,其中基本无紫杉醇,集中处理,回收溶剂;
⑦7~23份流出液为第II部分,其中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品A4.59克,其中含紫杉醇36.1%,即紫杉醇净含量为1.66克,占原料中紫杉醇的14.79%;
⑧24~终止的流出液为第III部分,其中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品B11.98克,其中含紫杉醇56.2%,即紫杉醇净含量为6.73克,占原料中紫杉醇的60.1%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量共为8.39克,占原料中紫杉醇的74.9%,即紫杉醇的一次性收率为74.9%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量平均为50.6%。
实施例8
①原料样品中紫杉醇含量为18.6%的紫杉醇粗产品120克,其中紫杉醇净含量22.32克;
②紫杉醇样品原料溶于300毫升95%(V/V)极性溶剂乙醇中,然后加水至乙醇浓度为65%(V/V),样品与乙醇水溶液重量比约为1比4.5;
③与实施例1相同;
④从大孔吸附树脂的层析柱顶端上样,即将样品溶液倒入层析柱中,调节层析柱出口阀门,控制层析柱内溶液流速为1.2升/小时;
⑤与实施例1相同;
⑥1~3份流出液为第I部分,其中基本无紫杉醇,集中处理,回收溶剂;
⑦4~18份流出液为第II部分,其中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品A11.31克,其中含紫杉醇38.3%,即紫杉醇净含量为4.33克,占原料中紫杉醇的19.41%;
⑧19~终止的流出液为第III部分,其中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品B27.34克,其中含紫杉醇52.9%,即紫杉醇净含量为14.46克,占原料中紫杉醇的64.8%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量共为18.79克,占原料中紫杉醇的84.2%,即紫杉醇的一次性收率为84.2%。
紫杉醇中间产品A和B中的紫杉醇净含量平均为48.6%。
Claims (9)
1一种从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法,包含下述步骤:
①紫杉醇含量为9~20%的紫杉醇粗产品为原料样品;
②用大孔吸附树脂作固定相,大孔吸附树脂与样品的重量比为10比0.9~1.4;
③用能与水混溶的、浓度为40~70%极性溶剂水溶液为流动相;
④用柱层析法分离纯化紫杉醇,样品溶液从大孔吸附树脂的层析柱顶端上样;
⑤流动相洗脱时,层析柱内流出液流速为0.6~1.5升/小时;
⑥按时间分段收集经层析后的流出液,每小时收集1份,至HPLC检测紫杉醇浓度低于0.2毫克/毫升时终止;
⑦流出液中紫杉醇含量小于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品A;
⑧流出液中紫杉醇含量大于三尖杉宁碱含量,浓缩干燥得紫杉醇中间产品B。
2如权利要求1所述的从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法,其特征为:
其中的所述的大孔吸附树脂为AB-8、或D101、或D201、或AK-9。
3如权利要求1或2所述的从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法,其特征为:
其中所述的极性溶剂为乙醇、或丙酮。
4如权利要求1至3中任一项所述的从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法,其特征为:
其中所述的极性溶剂水溶液的浓度为55~65%。
5如权利要求4所述的从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法,其特征为:
其中所述的极性溶剂水溶液的浓度为58~62%。
6如权利要求1至5中任一项所述的从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法,其特征为:
其中所述的大孔吸附树脂与样品的重量比为10比0.9~1.2。
7如权利要求6所述的从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法,其特征为:
其中所述的大孔吸附树脂与样品的重量比为10比0.95~1.05。
8如权利要求1至7中任一项所述的从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法,其特征为:
其中所述的层析柱内流出液流速为0.8~1.2升/小时。
9如权利要求8所述的从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法,其特征为:
其中所述的层析柱内流出液流速为0.9~1.1升/小时。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 03135916 CN1244568C (zh) | 2003-09-22 | 2003-09-22 | 从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 03135916 CN1244568C (zh) | 2003-09-22 | 2003-09-22 | 从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1526708A CN1526708A (zh) | 2004-09-08 |
CN1244568C true CN1244568C (zh) | 2006-03-08 |
Family
ID=34286366
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN 03135916 Expired - Fee Related CN1244568C (zh) | 2003-09-22 | 2003-09-22 | 从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN1244568C (zh) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1331859C (zh) * | 2005-01-04 | 2007-08-15 | 四川华申科技开发有限公司 | 分离紫杉醇和三尖杉磷碱的方法 |
CN101177421B (zh) * | 2006-11-07 | 2010-12-15 | 上海天伟生物制药有限公司 | 一种制备高纯度紫杉烷类化合物的方法 |
CN102260227B (zh) * | 2011-06-21 | 2013-10-30 | 沈阳化工大学 | 一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法 |
CN112521349B (zh) * | 2020-11-11 | 2023-04-07 | 福建齐衡科技有限公司 | 一种紫杉醇的纯化方法 |
-
2003
- 2003-09-22 CN CN 03135916 patent/CN1244568C/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN1526708A (zh) | 2004-09-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN100343205C (zh) | 一种中药活性物质分离方法 | |
CN1266059A (zh) | 通过在聚合树脂柱上的工业制备低压色谱分离和纯化紫杉醇和其它相关的紫杉烷类化合物 | |
CN1107150A (zh) | 使用离子交换介质提高红豆杉烷产率的方法 | |
CN1160345C (zh) | 从含紫杉醇物质生产紫杉醇的高产率提取方法 | |
CN1923829A (zh) | 一种采用聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法与用途 | |
CN1244568C (zh) | 从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法 | |
CN1166780C (zh) | 从紫杉属植物大量生产紫杉醇的方法 | |
CN1171857C (zh) | 大孔吸附树脂法富集与纯化辣椒碱的方法 | |
CN1570133A (zh) | 一种制备人参皂甙Compound-K的方法 | |
CN102311413A (zh) | 一种从桑白皮中提取桑辛素a的方法 | |
CN103145722B (zh) | 一种高速逆流色谱分离提纯埃博霉素的方法 | |
CN1246316C (zh) | 大豆异黄酮主要单体组分的分离方法 | |
CN1247510C (zh) | 一种从生姜中分离6-姜酚的方法 | |
CN1202099C (zh) | 一种提取与纯化10-去乙酰基巴卡丁ⅲ(10-dabⅲ)的方法 | |
CN101045718A (zh) | 一种分离提纯10-去乙酰基巴卡亭ⅲ的方法 | |
CN1298712C (zh) | 从红豆杉枝叶中初分离10-去乙酰基巴卡亭ⅲ的方法 | |
CN102626429A (zh) | 水浴提取板栗总苞多酚的方法 | |
US20070190623A1 (en) | Process for purification and recovery of paclitaxel compounds | |
CN1142163C (zh) | 一种从粘细菌发酵液中分离提纯埃博霉素的方法 | |
CN1244566C (zh) | 一种从种植红豆杉叶枝中制备紫杉醇的方法 | |
CN101033218A (zh) | 从紫杉属提取紫杉醇和9-二氢-13-乙酰基巴卡丁ⅲ的方法 | |
CN106084251B (zh) | 一种气溶胶中腐殖酸的分离、分级提取方法 | |
CN1680290A (zh) | 姜酚肟及其合成与应用 | |
CN1627942A (zh) | 黄花蒿离析苦艾素的方法 | |
CN1442413A (zh) | 用可再生资源提取药用紫杉醇及其衍生物的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20060308 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |