CN102260227B

CN102260227B - 一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法

Info

Publication number: CN102260227B
Application number: CN 201110167134
Authority: CN
Inventors: 陈家祥; 聂宁; 马婧舒
Original assignee: Shenyang University of Chemical Technology
Current assignee: Shenyang University of Chemical Technology
Priority date: 2011-06-21
Filing date: 2011-06-21
Publication date: 2013-10-30
Anticipated expiration: 2031-06-21
Also published as: CN102260227A

Abstract

一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法，属于天然产物及林产化工分离技术方法，其特征在于，该方法包括以下制作过程：（1）将两种大孔树脂按照一定质量比混合均匀后，装入玻璃柱中，制成混合树脂填充柱；（2）将红豆杉粗提物用1：5的溶剂搅拌溶解，然后向其中加入吸附剂，搅拌至溶剂挥干，装入填充柱顶端，然后加入梯度的洗脱剂进行洗脱，收集各梯度馏分，浓缩后得到含量显著提高的紫杉醇和相关紫杉烷类物质。本发明所用的原料范围广，能对各种含有紫杉醇及相关紫杉烷类物质的粗提物进行分离；所用的树脂为商品化常见树脂，廉价易得；所用的溶剂均为低毒、易回收的常见溶剂。本发明生产成本较低。

Description

一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法

技术领域

本发明属于天然产物及林产化工分离技术方法，具体涉及一种高效分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法。

背景技术

紫杉醇是红豆杉植物中存在的一种复杂的次生代谢产物。临床表明，紫杉醇对包括卵巢癌、乳腺癌在内的多种癌症具有显著的抗肿瘤作用。与长春碱、秋水仙碱的作用机制不同，紫杉醇是目前所知的唯一一种可以促进微管聚合和稳定已聚合微管的药物。

紫杉醇在红豆杉植物中的含量很低，仅有十万分之几到万分之几之间。因此从植物中提取紫杉醇粗品到临床应用，需要进过复杂的工艺对其进行分离纯化。紫杉醇分离纯化工艺主要包括三个阶段，首先是将紫杉醇从植物材料中分离出来，第二阶段是将提取出的紫杉醇浸膏进行纯化前的预分离，第三阶段就是对紫杉醇进行深加工，使其达到临床所需的纯度。在三个阶段中，对浸膏中紫杉醇的预分离最为关键，它直接影响到下一阶段纯化的难易程度和成本消耗。因为提取和深加工的工艺方法较为成熟和固定，而预分离则有多种方法和手段，所达到的效果也不相同。

红豆杉植物粗提物中，除了紫杉醇外，还有其它一些相关的相似成分，如，10-脱乙酰基巴卡亭、10-脱乙酰基紫杉醇等。这些物质虽没有显著的抗癌效果，但可以通过其它手段转化成为紫杉醇，因此，也有较高的加工价值。

目前，文献报道的对紫杉醇及相关类似物粗品进行预纯化的方法主要包括：有机溶剂萃取、固相柱萃取等，其中，有机溶剂萃取分离效率差、毒性大、且成本高，固相萃取分离效率高、但是处理量小、成本高。因此紫杉醇及相关紫杉烷类物质的预分离需要一种克服以上弊端、降低生产成本的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效、快速预分离红豆杉植物提取物中紫杉醇和相关紫杉烷类物质的方法，该方法所用的原料范围广，能对各种含有紫杉醇及相关紫杉烷类物质的粗提物进行分离；所用的树脂为商品化常见树脂，廉价易得；所用的溶剂均为低毒、易回收的常见溶剂。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法，该方法包括以下制作过程：（1）将两种大孔树脂按照一定质量比混合均匀后，装入玻璃柱中，制成混合树脂填充柱；（2）将红豆杉粗提物用1：5的溶剂搅拌溶解，然后向其中加入吸附剂，搅拌至溶剂挥干，装入填充柱顶端，然后加入梯度的洗脱剂进行洗脱，收集各梯度馏分，浓缩后得到含量显著提高的紫杉醇和相关紫杉烷类物质。

所述的一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法，其所述的大孔树脂包括D101、S-8、X-5，AB-8、NK-2、NKA-2、D3520、WLD-3、DA-201中的任意两种；两种树脂混合质量比例为1:4~1:1。

所述的一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法，其所述的红豆杉粗提物包括东北红豆杉、南方红豆杉、曼地亚红豆杉、欧洲红豆杉和中华红豆杉等红豆杉属植物提取物的一种或几种；包括植物部位，如树皮、树枝、针叶以及果实提取物的一种或几种。

所述的一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法，其所述的溶剂包括乙醇、甲醇、乙腈、丙酮，及乙醇、甲醇、乙腈、丙酮与水混溶、回收的有机溶剂。

所述的一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法，其所述的吸附剂包括树脂、硅藻土、硅胶、聚酰胺、氧化铝。

所述的一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法，其所述的洗脱剂包括乙醇、甲醇、乙腈、丙酮，及乙醇、甲醇、乙腈、丙酮与水的混合溶剂。

本发明的优点与效果是：

本发明所用的原料范围广，能对各种含有紫杉醇及相关紫杉烷类物质的粗提物进行分离；所用的树脂为商品化常见树脂，廉价易得；所用的溶剂均为低毒、易回收的常见溶剂。本发明生产成本较低。

具体实施方案

以下通过实例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。

该方法的操作步骤为：

首先制备混合树脂填充柱，将任意两种大孔吸附树脂以质量比混合均匀后，装入玻璃柱中，将红豆杉粗提物用有机溶剂搅拌溶解，然后向其中加入吸附剂，搅拌至溶剂挥干，装入填充柱顶端，然后加入梯度的洗脱剂进行洗脱，收集各梯度馏分，浓缩、真空干燥后得到紫杉醇和相关紫杉烷类物质含量显著提高的粗产品。

其中，混合树脂采用D101、S-8、X-5，AB-8、NK-2、NKA-2、D3520、WLD-3、DA-201的两种混合物；红豆杉粗提物采用东北红豆杉、南方红豆杉、曼地亚红豆杉、欧洲红豆杉和中华红豆杉等红豆杉属植物提取物的一种或几种；包括植物各部位，如树皮、树枝、针叶以及果实提取物的一种或几种。两种树脂的质量比控制在1:4~1:1之间；粗提物与溶解溶剂比为1:5；粗提物与吸附剂的比控制在1:5~1:10之间；梯度洗脱剂采用醇、甲醇、乙腈、丙酮等有机溶剂与水混合形成的溶剂。

实施例1：

将15 g D101树脂和15 g NKA-2树脂于烧杯中搅拌混合均匀，装入玻璃柱中。称取1.0 g 红豆杉枝叶提取物浸膏，加入10 mL无水乙醇搅拌溶解。将称好的5 g D3520树脂加入到样品溶液中进行搅拌吸附，待溶剂挥干后装入填充柱的顶端。用去离子水对填充柱进行平衡后，依次用300 mL 35%乙醇溶液、300 mL 45%乙醇溶液和300 mL 55%的乙醇溶液进行梯度洗脱。将上述洗脱液减压浓缩，回收溶剂，于80 ℃真空干燥后分别得到富含10-去乙酰基巴卡亭、10-去乙酰基-7-木糖紫杉醇和紫杉醇的粗产品。

实施例2：

将20 g DA-201树脂和5 g AB-8树脂于烧杯中搅拌混合均匀，装入玻璃柱中。称取1.5 g 红豆杉枝叶提取物浸膏，加入9 mL丙酮搅拌溶解。将上述样品溶液用8 g 硅胶搅拌吸附，待溶剂挥干后装入填充柱。用去离子水对填充柱进行平衡后，依次用350 mL 40%丙酮溶液、350 mL 50%丙酮溶液和350 mL 60%的丙酮溶液进行梯度洗脱。将上述洗脱液减压浓缩回收溶剂，于80 ℃真空干燥后分别得到富含10-去乙酰基巴卡亭、10-去乙酰基-7-木糖紫杉醇和紫杉醇的粗产品。

实施例3：

将30 g D3520树脂和45 g X-5树脂于烧杯中搅拌混合均匀，装入玻璃柱中。称取5 g 红豆杉枝叶提取物浸膏，加入25 mL乙醇搅拌溶解。搅拌下加入5 g 硅藻土对样品溶液进行吸附，待溶剂挥干后装入填充柱的顶端。用去离子水对填充柱进行平衡后，依次用900 mL 35%乙腈溶液、900 mL 45%乙腈溶液和900 mL 55%的乙腈溶液进行梯度洗脱。分别将上述洗脱液减压浓缩回收溶剂，于80 ℃真空干燥后得到富含10-去乙酰基巴卡亭、10-去乙酰基-7-木糖紫杉醇和紫杉醇的粗产品。

实施例4：

将15 g WLD-3树脂和25 g S-8树脂于烧杯中搅拌混合均匀，装入玻璃柱中。称取1.3 g 红豆杉枝叶提取物浸膏，加入10 mL无水乙醇搅拌溶解。将称好的5 g D3520树脂加入到样品溶液中进行搅拌吸附，待溶剂挥干后装入填充柱的顶端。用去离子水对填充柱进行平衡后，依次用330 mL 35%乙醇溶液、330 mL 45%乙醇溶液和330 mL 55%的乙醇溶液进行梯度洗脱。分别将上述洗脱液减压浓缩回收溶剂，于80 ℃真空干燥后得到富含10-去乙酰基巴卡亭、10-去乙酰基-7-木糖紫杉醇和紫杉醇的粗产品。

Claims

1.一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法，其特征在于，该方法制作过程为：将15 g D101树脂和15 g NKA-2树脂于烧杯中搅拌混合均匀，装入玻璃柱中；称取1.0 g 红豆杉枝叶提取物浸膏，加入10 mL无水乙醇搅拌溶解；将称好的5 g D3520树脂加入到样品溶液中进行搅拌吸附，待溶剂挥干后装入填充柱的顶端；用去离子水对填充柱进行平衡后，依次用300 mL 35%乙醇溶液、300 mL 45%乙醇溶液和300 mL 55%的乙醇溶液进行梯度洗脱；将上述洗脱液减压浓缩，回收溶剂，于80 ℃真空干燥后分别得到富含10-去乙酰基巴卡亭、10-去乙酰基-7-木糖紫杉醇和紫杉醇的粗产品。

2.一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法，其特征在于，该方法制作过程为：将20 g DA-201树脂和5 g AB-8树脂于烧杯中搅拌混合均匀，装入玻璃柱中；称取1.5 g 红豆杉枝叶提取物浸膏，加入9 mL丙酮搅拌溶解；将上述样品溶液用8 g 硅胶搅拌吸附，待溶剂挥干后装入填充柱；用去离子水对填充柱进行平衡后，依次用350 mL 40%丙酮溶液、350 mL 50%丙酮溶液和350 mL 60%的丙酮溶液进行梯度洗脱；将上述洗脱液减压浓缩回收溶剂，于80 ℃真空干燥后分别得到富含10-去乙酰基巴卡亭、10-去乙酰基-7-木糖紫杉醇和紫杉醇的粗产品。

3.　一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法，其特征在于，该方法制作过程为：将30 g D3520树脂和45 g X-5树脂于烧杯中搅拌混合均匀，装入玻璃柱中；称取5 g 红豆杉枝叶提取物浸膏，加入25 mL乙醇搅拌溶解；搅拌下加入5 g 硅藻土对样品溶液进行吸附，待溶剂挥干后装入填充柱的顶端；用去离子水对填充柱进行平衡后，依次用900 mL 35%乙腈溶液、900 mL 45%乙腈溶液和900 mL 55%的乙腈溶液进行梯度洗脱；分别将上述洗脱液减压浓缩回收溶剂，于80 ℃真空干燥后得到富含10-去乙酰基巴卡亭、10-去乙酰基-7-木糖紫杉醇和紫杉醇的粗产品。

4.　一种分离紫杉醇及相关紫杉烷类物质的方法，其特征在于，该方法制作过程为：将15 g WLD-3树脂和25 g S-8树脂于烧杯中搅拌混合均匀，装入玻璃柱中；称取1.3 g 红豆杉枝叶提取物浸膏，加入10 mL无水乙醇搅拌溶解；将称好的5 g D3520树脂加入到样品溶液中进行搅拌吸附，待溶剂挥干后装入填充柱的顶端；用去离子水对填充柱进行平衡后，依次用330 mL 35%乙醇溶液、330 mL 45%乙醇溶液和330 mL 55%的乙醇溶液进行梯度洗脱；分别将上述洗脱液减压浓缩回收溶剂，于80 ℃真空干燥后得到富含10-去乙酰基巴卡亭、10-去乙酰基-7-木糖紫杉醇和紫杉醇的粗产品。