CN1570133A - 一种制备人参皂甙Compound－K的方法 - Google Patents
一种制备人参皂甙Compound－K的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1570133A CN1570133A CN 200410018000 CN200410018000A CN1570133A CN 1570133 A CN1570133 A CN 1570133A CN 200410018000 CN200410018000 CN 200410018000 CN 200410018000 A CN200410018000 A CN 200410018000A CN 1570133 A CN1570133 A CN 1570133A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- technology
- immobilization
- ginsenoside compound
- preparing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Abstract
本发明属于药学领域，涉及一种制备人参皂甙Compound－K的方法。本发明采用霉菌好气性发酵技术、固定化细胞技术和固定化酶技术，直接以各种人参总皂甙作为底物，发酵转化制备Compound－K，并将其分离纯化，进行含量分析和结构确证。检测结果证实，本方法所得产物符合Compound K结构。本方法简便易操作，成本低，不需要花费人力和财力进行单体皂甙分离，转化率高达15％，易于制药或保健品工业产业化。
Description
技术领域
本发明属药学领域，涉及一种制备人参皂甙Compound-K的方法，具体涉及Compound-K的分离纯化、结构鉴定和X-Ray分析。
背景技术
人参在我国和东亚的应用已有数千年，作用为滋补强身的药材也已闻名全世界。人参属于五加科(Araliaceae)人参属(Panax)，常用的人参有高丽人参(Panax ginseng C.A.Meyer)在我国即是称之为的普通人参，西洋参(Panax quiquefolium L.)、三七人参(Panaxnotoginseng(Burk)F.H Chen)、竹节参(Panax japonicum C.A.Meyer)等。经过近半世纪的研究从人参植物的根部和其他部位分离了人参皂甙、人参炔醇、人参多糖、多肽、有机酸及酯、甾醇、氨基酸和微量元素，并证明人参皂甙(ginsenoside)是人参功效的主要成分。其作用机理是一些含量较高的皂甙(Rb、Rd、Rg等)作为前药，在体内降解成Rg3、Rh1、Rh2、Compound K等皂甙被机体吸收，从而发挥药理作用。但是这些有效成分在人参中的含量仅为10万分之几，甚至不含。
1972年，I.Yosooka在用土壤细菌水解人参皂甙Rb1、Rb2和Rc获取原人参二醇时意外的发现了Compound-K，并通过元素分析和一些化学方法的分析，推测了其结构(I.Yosooka et al.Chem.Pharm.Bull.1972，20(11)：2418-2421)。近年，生物活性研究发现Compound-K具有抗基因突变(BH.Lee et al.Planta.Med.1998，64：500-503)，抑制肿瘤生长、浸润和转移，诱导细胞调亡等活性(SJ.Lee et al.Cancer lett.1999，144：39-43；Eun-Ah Bae et al.Biol.Pharm.Bull.2002，25(6)：743-747；C.Wakabayashi et al.Biochem.Biophys.Res.Commun.1998：725-730)，逆转肿瘤细胞的多重耐药，提高联合用药的抗肿瘤效果(H.Hasegawa et al.Plant Med.1995，61：409-413)。然而，由于Compound K含量极低，迄今为止人们无法从人参中分离得到。对Compound-K制备的研究仅停留在从人参单体皂甙(Rb1或Rc)在人或鼠的肠道菌群代谢物中发现该化合物，或者用酶法从Rb1或Rc等单体皂甙进行定向转化，但尚未见其大量制备和生产的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备人参皂甙Compound-K的方法。
本发明采用霉菌好气性发酵技术、固定化细胞技术和固定化酶技术，直接以各种人参总皂甙作为底物，对各种人参皂甙的糖边链选择性切除，从而转化制备Compound-K【20-O-β-D-glucopyranosyl-20-(S)-protopanaxadiol】。本方法简便易操作，成本低，转化率高，利于制药或保健品工业。
本发明采用霉菌好气性发酵技术、固定化细胞技术和固定化酶技术，直接转化人参总皂甙，包括三七茎叶总皂甙，栽培人参总皂甙，西洋参总皂甙等的方法，生成Compound-K，并将其分离纯化，进行含量分析和结构确证。所述Compound-K具有下述结构。
本方法通过下述步骤制备Compound K：
(一)获得转化菌种
按本技术领域常规方法，从野山参种植区收集的土壤中分离霉菌。
(二)发酵
采用的培养基可以是葡萄糖-玉米浆-硫酸铵，麦芽汁，马铃薯汁，基础盐培养基或蔡氏培养基；实验温度为25-35℃，pH：5～6；转化底物及投料量为人参总皂甙，发酵液体积，1-5％投料；菌体生长时间为60-72h，转化时间为40-56h。
本方法采用BioFlo 110 14L全自动发酵罐。
(1)摇瓶发酵：孢子悬浮液直接接入发酵培养基，培养60～72小时，人参总皂甙1～5％投料，进行转化。
(2)发酵罐发酵：孢子悬浮液接入种子培养基中，旋转培养。将种子培养液按5-10％比例接入发酵罐，人参总皂甙1～5％投料，转化40～56小时。
(三)固定化技术：
(1)收集菌体搅成糊状，海藻酸钠包埋法制备固定化细胞。
(2)纯化皂甙糖苷酶，以聚乙烯氧化物为载体制备固定化人参皂甙糖苷酶。
(四)提取分离：
酒精浸提，正丁醇萃取，活性炭脱色，浓缩制得浸膏。上硅胶柱分离，制备HPLC精制后甲醇-水重结晶。
(五)分析检测Compound K：
用TLC，HPLC方法，进行Compound K定性和定量分析。
(五)Compound K结构鉴定：
上述Compound K经熔点、核磁共振(NMR)及单晶X-衍射进行结构确认。结果显示，
无色针晶，mp：162-164℃(甲醇-水)，
结晶数据：
Empirical formula：C36H64O8·2H2O Formula weight：658.89
Crystal size：0.508×0.106×0.094mm
colorless，at 293(2)K
Monoclinic：P2(1)，a＝15.992(3)，b＝11.9601(19)，c＝20.127(3)，α＝90°，β＝101.848(4)°，γ＝90°，V＝3767.5(11)3，Z＝4，DX＝1.162Mgm-3，μ＝0.083mm-1
核磁共振谱解析其中13C、1H-NMR与X-Ray结果证实，本方法所得产物符合Compound K结构。
表1是Compound-K核磁共振分析数据表。
表1
No. δC δH(int，mult，J in Hz) No. δC δH(int，mult，J in Hz)
1 39.9 19 16.7 0.87(3H，s)
2 28.9 20 83.5
3 78.3 3.4(1H，dd，10.5，5.1Hz) 21 23.0 1.62(3H，s)
4 40.1 22 36.7
5 56.8 0.79(1H，d，11.0Hz) 23 23.9
6 19.5 24 125.9 5.22(1H，t，7.1Hz)
7 35.7 25 130.8
8 40.6 26 26.4
9 50.8 27 18.5 1.57(6H，s)
10 37.9 28 29.3 1.22(3H，s)
11 31.4 29 17.1 1.03(3H，s)
12 70.5 3.93(1H，ddd-like) 30 18.1 0.97(3H，s)
13 50.0 G-1’98.4 5.17(1H，d，7.8)
14 51.9 2’ 75.4
15 31.6 3’ 79.6
16 27.3 4’ 72.0
17 52.0 5’ 78.6
18 17.1 0.93(3H，s) 6’ 63.3
本方法具有如下优点，
(1)运用霉菌好气性发酵技术将各种人参总皂甙粗提取物中含量较高的皂甙的糖基进行选择性切除，从而获得Compound-K。
(2)由于采用人参总皂甙直接发酵转化，不需要花费人力和财力进行单体皂甙(Rb1、Rc等)的分离，所以成本低。
(3)转化率高，其中，以三七茎叶总皂甙投料计，发酵转化率10-15％，总得率5-8％；以栽培人参总皂甙投料计，发酵转化率5-10％，总得率2-4％)。
(4)发酵培养基简单，转化条件温和，提取分离方便，易于产业化。
附图说明
图1是人参皂甙TLC，
其中，1是三七总皂甙，2是微生物转化后三七总皂甙，
3是转化后三七总皂甙+C-K，4是Compound-k，
5是栽培人参总皂甙，6是转化后人参皂甙，
7是转化后人参皂甙+C-K。
图2是人参皂甙HPLC，
其中，A：人参总皂甙，
B：Compound-K，
C：发酵后人参总皂甙
图3是Compound-K X-Ray结构图，
具体实施方式
实施例1
采集土样烘干，倒入事先灭菌的研钵中研细，涂布于紫外照射过的白纸上，弹到马铃薯平板，28℃培养，挑取霉菌单菌落至斜面培养基培养，进行发酵菌种筛选。
实施例2
黑曲霉(Aspegillus niger)霉菌在蔡氏培养基上生长(28℃，7天)待孢子丰满后接入含葡萄糖-玉米浆-硫酸铵的种子培养基中，25-35℃、200rpm旋转培养。待菌丝体生长茂盛之时，将种子培养液按5-10％比例接入发酵罐，26-28℃，转速200rpm升至800rpm，溶氧20-40％，培养60～72小时。三七茎叶总皂甙2％投料，继续培养40～56小时，进行人参皂甙的转化。HPLC分析，发酵转化率12％，最后提取分离得率5.25％，Compound K含量97％以上。
实施例3
黑曲霉菌(Aspegillus niger)孢子悬浮液接种到含1L葡萄糖-玉米浆-硫酸铵培养基的5L摇瓶，pH5.0，30℃旋转摇床180r.p.m上培养72h，1％栽培人参总皂甙投料，转化48h。发酵转化液酒精提取，过滤减压蒸干，甲醇溶解，HPLC分析，转化率达8％，最后提取分离得率5％，Compound K含量80％以上。
实施例4
犁头霉菌(Absidic corymbifera)接种30ml蔡氏培养基，26℃转速200r.p.m摇床中培养60h，2‰西洋参总皂甙投料，继续转化60h后，停止反应，乙醇提取，过滤，减压蒸干，甲醇溶解，HPLC分析，发酵转化率为6.8％。
实施例5
黑根霉菌(Rhizopus nigricans)接种于Medium325麦芽汁培养液100ml和人参抽提液，培养48h。200r.p.m离心后，除去上清，备用。按40％含菌量加入3％浓度的海藻酸钠溶液，搅匀，连续注入搅拌的0.1MCaCl2溶液中，成线状物(约1mm直径)，然后将其剪成0.5～1cm的线段，得固定化细胞便得固定化细胞。此固定化细胞在悬于人参总皂甙溶液中可获得Compound-K。
实施例6
绿色木霉菌(Trichonderma viride)生长72小时，4000r.p.m离心，上清液以30-70％硫酸铵饱和度获取酶活力部分，透析后，Q-Sepharose纯化皂甙糖苷酶。纯化的人参皂甙糖苷酶聚乙烯氧化物载体混合，4℃搅拌反应3d砂芯漏斗过滤，固定化酶颗粒经醋酸钠缓冲液洗涤。即得固定化人参皂甙糖苷酶。人参总皂甙溶液中可获得Compound-K。
实施例7
TLC：硅胶H；展开剂：CHCl3∶CH3OH∶H2O＝7∶3∶0.5(下层)；显色剂：5％硫酸-乙醇，电吹风吹干显色
实施例8
发酵液酒精提取，减压蒸干，甲醇溶解，HPLC检测：柱：WatersSymmetry C18(4.6×150mm，5μm)；柱温：30℃；流动相：乙腈-水(48∶52)；检测波长：203nm；流速：1ml/min。
实施例9
HPLC检测：柱：Waters NH2(4.6×250mm，7μm)；柱温：30℃；流动相：乙腈-1％磷酸溶液(82∶18)；检测波长：203nm；流速：0.5ml/min。
实施例10
发酵结束后，加入95％酒精浸提，离心除去菌体，减压浓缩，适量水悬浮，水饱和正丁醇萃取，有机相减压浓缩，活性炭回流脱色，过滤除去活性炭，浓缩得浸膏，拌入适量硅胶。取上述样品上硅胶柱，氯仿-甲醇梯度洗脱，TLC跟踪检测。Compound-K组分再上硅胶柱，氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水(2∶1∶4∶1，下层)洗脱，得Compound-K粗品，制备HPLC精制后甲醇-水重结晶。
Claims (8)
1.一种制备人参皂甙Compound-K的方法，其特征是采用霉菌好气性发酵技术、固定化细胞技术和固定化酶技术，直接转化人参总皂甙，生成Compound-K后，进行分离纯化，含量分析和结构确证，所述方法包括下述步骤：
1)分离霉菌菌种；
2)发酵
摇瓶发酵：孢子悬浮液直接接入发酵培养基，培养60～72小时，人参总皂甙1～5％投料，进行转化，
发酵罐发酵：孢子悬浮液接入种子培养基，将种子培养液按5-10％比例接入发酵罐，人参总皂甙1～5％投料，转化40～56小时；
3)固定化
收集菌体，海藻酸钠包埋法制备固定化细胞，
纯化皂甙糖苷酶，以聚乙烯氧化物为载体制备固定化人参皂甙糖苷酶；
4)提取分离
酒精浸提，正丁醇萃取，活性炭脱色，浓缩制得浸膏，上硅胶柱分离，制备HPLC精制后甲醇-水重结晶；
5)TLC，HPLC方法分析检测Compound K；
6)核磁共振和单晶衍射技术Compound K结构鉴定。
2、根据权利要求1所述的制备人参皂甙Compound-K的方法，其特征在于，所述的菌种是曲霉、根霉、绿色木霉和犁头霉霉菌。
3、根据权利要求1所述的制备人参皂甙Compound-K的方法，其特征在于，人参总皂甙为转化底物，包括人参属的三七茎叶总皂甙，栽培人参总皂甙和西洋参总皂甙。
4、根据权利要求1所述的制备人参皂甙Compound-K的方法，其特征在于步骤2的发酵培养基是葡萄糖-玉米浆-硫酸铵，麦芽汁，马铃薯汁，基础盐培养基或蔡氏培养基；PH5～7；温度为25-35℃；人参总皂甙按发酵液体积1-5％投料；菌体生长时间为48-72h；转化时间为24-60h。
5、根据权利要求1所述的制备人参皂甙Compound-K的方法，其特征在于，采用固定化细胞技术固定化发酵生产菌，固定化酶技术固定化所产生的酶。
6、根据权利要求1所述的制备人参皂甙Compound-K的方法，其特征在于，步骤4的硅胶柱层析法是用氯仿-甲醇梯度洗脱进行粗分后，Compound-K组分用下层氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水洗脱得到产物。
7、根据权利要求6所述的制备人参皂甙Compound-K的方法，其中氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水为2∶1∶4∶1。
8、根据权利要求1所述的人参皂甙Compound-K的制备方法，其特征在于，步骤5的HPLC检测条件是，柱：RP-C18；柱温：25-45℃；流动相：乙腈-水；检测波长：203nm；流速：1ml/min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2004100180000A CN100487131C (zh) | 2004-04-27 | 2004-04-27 | 一种制备人参皂甙Compound-K的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2004100180000A CN100487131C (zh) | 2004-04-27 | 2004-04-27 | 一种制备人参皂甙Compound-K的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1570133A true CN1570133A (zh) | 2005-01-26 |
| CN100487131C CN100487131C (zh) | 2009-05-13 |
Family
ID=34479284
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2004100180000A Expired - Fee Related CN100487131C (zh) | 2004-04-27 | 2004-04-27 | 一种制备人参皂甙Compound-K的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN100487131C (zh) |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101139562B (zh) * | 2007-07-02 | 2010-06-09 | 昆明诺唯金参生物工程有限责任公司 | 一种链霉菌发酵三七皂苷制备稀有人参皂苷Compound K的方法 |
| CN101147743B (zh) * | 2006-09-19 | 2010-10-06 | 浙江海正药业股份有限公司 | 人参皂甙Compound-K在制药中的应用 |
| CN102273622A (zh) * | 2010-06-11 | 2011-12-14 | 李源璟 | 长脑参的发酵方法及从中制得的发酵长脑参 |
| CN101921304B (zh) * | 2009-06-17 | 2013-04-03 | 浙江海正药业股份有限公司 | 一种运用大孔树脂纯化人参皂甙compound-K的方法 |
| CN103037879A (zh) * | 2010-05-14 | 2013-04-10 | 株式会社Gch&P | 微量人参皂苷成分得到增加的新型加工人参或加工人参提取物的制备方法 |
| CN103073611A (zh) * | 2013-01-10 | 2013-05-01 | 天津大学 | 一种人参皂苷c-k半水合物晶体及制备方法 |
| CN103146794A (zh) * | 2012-12-22 | 2013-06-12 | 桂林理工大学 | 一种利用微生物发酵提高剑麻皂苷产率的方法 |
| WO2013149570A1 (zh) * | 2012-04-01 | 2013-10-10 | 浙江海正药业股份有限公司 | 人参皂苷c-k化合物多晶型及其制备方法 |
| CN104140931A (zh) * | 2013-12-06 | 2014-11-12 | 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 | 一种阿达青霉发酵原人参二醇制备稀有人参皂苷ck的方法 |
| JP2015511608A (ja) * | 2012-04-01 | 2015-04-20 | 浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＣＯ．，ＬＴＤ． | ジンセノシドｃ−ｋの２つの結晶形およびその製造方法 |
| CN105255970A (zh) * | 2015-10-14 | 2016-01-20 | 延边大学 | 一种来自乳酸菌重组的β-葡萄糖苷酶制备稀有人参皂苷compound K的方法 |
| CN106498018A (zh) * | 2016-11-07 | 2017-03-15 | 江南大学 | 一种复合菌制备人参稀有抗癌皂苷Compound K的方法 |
| CN106692168A (zh) * | 2015-07-28 | 2017-05-24 | 复旦大学 | 人参皂苷compound K在制药中的用途 |
-
2004
- 2004-04-27 CN CNB2004100180000A patent/CN100487131C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101147743B (zh) * | 2006-09-19 | 2010-10-06 | 浙江海正药业股份有限公司 | 人参皂甙Compound-K在制药中的应用 |
| CN101139562B (zh) * | 2007-07-02 | 2010-06-09 | 昆明诺唯金参生物工程有限责任公司 | 一种链霉菌发酵三七皂苷制备稀有人参皂苷Compound K的方法 |
| CN101921304B (zh) * | 2009-06-17 | 2013-04-03 | 浙江海正药业股份有限公司 | 一种运用大孔树脂纯化人参皂甙compound-K的方法 |
| CN103037879B (zh) * | 2010-05-14 | 2016-06-01 | 绿十字生命健康有限公司 | 微量人参皂苷成分得到增加的新型加工人参或加工人参提取物的制备方法 |
| CN103037879A (zh) * | 2010-05-14 | 2013-04-10 | 株式会社Gch&P | 微量人参皂苷成分得到增加的新型加工人参或加工人参提取物的制备方法 |
| CN102273622A (zh) * | 2010-06-11 | 2011-12-14 | 李源璟 | 长脑参的发酵方法及从中制得的发酵长脑参 |
| US9643992B2 (en) | 2012-04-01 | 2017-05-09 | Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd. | Two crystal forms of ginsenoside C-K and method for preparing same |
| WO2013149570A1 (zh) * | 2012-04-01 | 2013-10-10 | 浙江海正药业股份有限公司 | 人参皂苷c-k化合物多晶型及其制备方法 |
| CN103360441A (zh) * | 2012-04-01 | 2013-10-23 | 浙江海正药业股份有限公司 | 人参皂苷c-k化合物多晶型及其制备方法 |
| CN103360441B (zh) * | 2012-04-01 | 2016-08-10 | 浙江海正药业股份有限公司 | 人参皂苷c-k化合物多晶型及其制备方法 |
| US9670245B2 (en) | 2012-04-01 | 2017-06-06 | Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd. | Ginsenoside C-K polymorphic compounds and method for preparing same |
| JP2015511607A (ja) * | 2012-04-01 | 2015-04-20 | 浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＣＯ．，ＬＴＤ． | ギンセノシドｃ−ｋ多形化合物およびその調製方法 |
| JP2015511608A (ja) * | 2012-04-01 | 2015-04-20 | 浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＣＯ．，ＬＴＤ． | ジンセノシドｃ−ｋの２つの結晶形およびその製造方法 |
| CN103146794A (zh) * | 2012-12-22 | 2013-06-12 | 桂林理工大学 | 一种利用微生物发酵提高剑麻皂苷产率的方法 |
| CN103146794B (zh) * | 2012-12-22 | 2014-11-05 | 桂林理工大学 | 一种利用微生物发酵提高剑麻皂苷产率的方法 |
| CN103073611A (zh) * | 2013-01-10 | 2013-05-01 | 天津大学 | 一种人参皂苷c-k半水合物晶体及制备方法 |
| CN103073611B (zh) * | 2013-01-10 | 2015-10-28 | 天津大学 | 一种人参皂苷c-k半水合物晶体及制备方法 |
| CN104140931A (zh) * | 2013-12-06 | 2014-11-12 | 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 | 一种阿达青霉发酵原人参二醇制备稀有人参皂苷ck的方法 |
| CN106692168A (zh) * | 2015-07-28 | 2017-05-24 | 复旦大学 | 人参皂苷compound K在制药中的用途 |
| CN105255970A (zh) * | 2015-10-14 | 2016-01-20 | 延边大学 | 一种来自乳酸菌重组的β-葡萄糖苷酶制备稀有人参皂苷compound K的方法 |
| CN106498018A (zh) * | 2016-11-07 | 2017-03-15 | 江南大学 | 一种复合菌制备人参稀有抗癌皂苷Compound K的方法 |
| CN106498018B (zh) * | 2016-11-07 | 2019-06-07 | 江南大学 | 一种复合菌制备人参稀有抗癌皂苷Compound K的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN100487131C (zh) | 2009-05-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103571897B (zh) | 一种维生素k2及其制备方法 | |
| CN100487131C (zh) | 一种制备人参皂甙Compound-K的方法 | |
| CN102559828B (zh) | 一种通过微生物转化黄芪总皂苷制备黄芪甲苷的方法 | |
| CN1687429A (zh) | 微生物发酵转化含苷类中药及其相应苷元制剂制备的方法 | |
| CN1283778C (zh) | N6－（2－羟乙基）腺苷在制备镇痛药物中的应用 | |
| CN109749941B (zh) | 蝉拟青霉发酵培养基、蝉拟青霉发酵制备麦角甾醇的方法 | |
| CN109504725B (zh) | 一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法和发酵培养基 | |
| CN105085023A (zh) | 一种中药渣发酵制备的叶面肥料及其制备方法 | |
| CN1247767C (zh) | 用以制造樟芝培养物的方法以及由所述方法获得的产物 | |
| CN104372034B (zh) | 一种虎杖毛状根生产白藜芦醇及扩大培养的方法 | |
| CN103667072A (zh) | 一种蛇足石杉内生真菌及其在制备8α,15α-环氧化石杉碱甲的应用 | |
| CN108034681B (zh) | 利用悬浮培养的地黄茎形成层干细胞生产梓醇的方法 | |
| CN1534032A (zh) | 一种高效制备紫杉醇的方法 | |
| CN110878259B (zh) | 冬虫夏草菌丝的发酵方法 | |
| CN1928075A (zh) | 产生阿维菌素b组分的菌株及其利用 | |
| CN1827771A (zh) | 一种微生物多糖及其生产方法和应用 | |
| CN106635840A (zh) | 一种黑曲霉菌株及其发酵百药煎生成新成分的制备方法与应用 | |
| CN1827633A (zh) | 从蝉拟青霉培养物中提取n6－（2－羟乙基）腺苷的方法 | |
| CN102617707B (zh) | 放线菌素d新同系物2-甲基-放线菌素d的制备方法 | |
| CN102329828B (zh) | 用于欧文氏菌制备紫杉醇的培养基及其配制方法和应用 | |
| CN111317068A (zh) | 饲用opo母乳结构脂及其制备方法及其应用 | |
| CN1202099C (zh) | 一种提取与纯化10－去乙酰基巴卡丁ⅲ(10－dabⅲ)的方法 | |
| CN107964555A (zh) | 一种生物富集并生产淫羊藿次苷ⅱ的方法 | |
| CN109055230B (zh) | 一种珍稀药用安络小皮伞野生菌种的获得方法 | |
| CN109456383B (zh) | 一种20(R)-人参皂苷Rh1的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20090513 Termination date: 20200427 |