CN106498018A

CN106498018A - 一种复合菌制备人参稀有抗癌皂苷Compound K的方法

Info

Publication number: CN106498018A
Application number: CN201610973014.0A
Authority: CN
Inventors: 余晓斌; 顾秋亚; 曹效成; 方磊
Original assignee: SHNAGHAI BOKANG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd; Jiangnan University
Current assignee: SHNAGHAI BOKANG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd; Jiangnan University
Priority date: 2016-11-07
Filing date: 2016-11-07
Publication date: 2017-03-15
Anticipated expiration: 2036-11-07
Also published as: CN106498018B

Abstract

本发明公开了一种复合菌制备人参稀有抗癌皂苷Compound K的方法，属于功能食品和药学领域。本发明采用RB1或人参、西洋参、三七为原料，添加1‑5％的糖和奶粉，采用产β‑葡萄糖苷酶的优选酵母菌和乳酸菌、双歧杆菌，30‑37℃发酵5‑14天，进行复合菌微生物转化，获得含稀有人参皂苷C‑K，所获得的发酵人参粉和三七粉香味浓郁诱人，口感较佳，极大提升了人参和三七的保健功效和营养价值。

Description

一种复合菌制备人参稀有抗癌皂苷Compound K的方法

技术领域

本发明涉及一种复合菌制备人参稀有抗癌皂苷Compound K的方法，属于功能食品和药学领域。

背景技术

人参是一种我国传统的名贵药材，具有大补元气、补脾益肺、生津、安神益智等功效。人参皂苷是人参的主要活性成分，全世界各国科学家们已经发现人参含有128种单体皂苷，能够被现代高科技技术提取并掌握其临床功效的达四十种。人参皂苷可分为3种类型，一类是齐墩果烷型五环三萜类皂苷，其皂苷元为齐墩果酸；另两类是人参二醇型皂苷(如Rb1、Rb2、Rc、Rd、F2、Rg3、Rh2等)和人参三醇型皂苷(如Re、Rg1、Rg2、Rf、Rh1等)，两者均属于达玛烷型四环三萜类皂苷，一般人参中含原人参二醇类皂苷为45％-60％，含原人参三醇类皂苷为12％-20％，含齐墩果酸类皂苷为7％-10％。所以二醇类皂苷占大多数,是其中的主要活性成分。其中人参皂苷Rg3、Rh2、人参皂苷化合物CompoundK(C-K)等仅存于野山参和红参中，并且含量极低，称为稀有人参皂苷。稀有人参皂苷的差别仅在于糖链末端的糖苷键,可以通过水解其糖苷侧基进行高活性人参皂苷，大量药理研究表明，稀有人参皂苷在某些难治性疾病例如肿瘤治疗方面能够表现出独特的疗效，因此稀有人参皂苷作为候选药物被证明具有更为卓越的临床应用价值。

人参的大多数市售制品中.主要成分是含量丰富的天然人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1占白参和红参总皂苷的90％，其中绝大多数天然人参皂苷在胃肠道中吸收或生物活性都很差。人参在胃肠道中是先经过降解脱糖基化才被人体吸收利用的，而这个降解过程包括在胃部酸性条件下和肠道菌作用下发生的脱糖基过程。脱糖基化的人参稀有皂苷才更容易吸收进入血液并保持较高活力。

人参皂苷Rb1、Rb2、Rc能够被人体胃肠道的微生物脱糖基化代谢吸收，在抗癌的药理学研究方面，诸多研究证明稀有人参皂苷及苷元(Rg3，Rh2，CK)比大量人参皂苷有更好的活性，人参皂苷的代谢产物—次级苷、苷元的活性更强。大量制备次级苷、苷元具有重要意义。

目前，得到人参稀有皂苷的制备方法主要有加热法、酸解法、碱解法、Smith降解法、微生物转化法和酶法。化学法可以使皂苷水解.但它们的水解条件都十分剧烈，苷元容易发生脱水或环合，使得苷元结构发生改变，副产物增加，导致产物不易纯化，而且污染环境。生物转化是利用生物细胞产生的一种或多种酶把人参皂苷脱糖基化变成结构相关的更有经济价值的稀有人参皂苷，生物转化法有较高的选择性，克服了化学转化法副产物多、提纯复杂的缺点，并且反应条件温和，毒性小。人参皂苷生物转化主要分酶解法和微生物转化法两种方法。

酶解法是一种选择性水解法，具有高效性、专属性强、不造成环境污染、无毒性等特点。利用酶解法可以达到定向水解糖苷键、生成特定产物的目的。如利用蜗牛酶水解分离原人参皂苷三醇组总皂苷(主要成分为Rg1和Re)，获得了次级人参皂苷20(s)-Rb1。通过使用Ⅳ型人参皂苷糖苷酶，可以将人参皂苷Re转化生成稀有人参皂苷F与Rg1。

人参皂苷的微生物转化法是利用微生物本身具有一种或多种酶，对人参皂苷的某一部位或某几个部位进行特定的转化反应来获得一定产物的方法。微生物转化法具有反应种类多样、选择性高、副产物少、成本廉价等特点。人参皂苷C-K可由人参皂苷Rb1、Rb2、Rc转化获得。

如以三七茎叶总皂苷作为底物，筛选得到一株高效人参皂苷转化菌株一镰刀属真菌串珠镰孢，该菌株能够高效率转化产生人参皂苷C-K。利用微生物Mierobacteriumesteraromatieum GS514的培养液中分离的粗酶催化水解人参皂苷Re和Rg1，结果显示：人参皂苷Re可以定向转化为20(s)一人参皂苷Rg2；人参皂苷Rg1则可以定向转化成20(S)一原人参三醇(PPT)及20(s)一人参皂苷Rh1。菌种黑根霉可以对人参皂苷Re进行转化，转化率为92.16％，转化后的发酵产物被证实是人参皂苷Rg2、Rg2的同分异构体以及人参皂苷Rg5、Rk1。

人参稀有皂苷Rg3Rh2CK比天然人参皂苷具有更强的生物活性和独特的疗效，尤其是CK具有多种功效，具有抑制肿瘤细胞和炎症，对肿瘤细胞具有毒性，抑瘤抗癌；抗过敏作用；减缓老年痴呆症；促进胰岛素分泌抗糖尿病及抗氧化功效；保肝及护肤功效。因而，通过微生物转化人参皂苷成为稀有人参皂苷具有较大的实用价值。

目前的微生物转化法，还存在微生物菌种单一、转化效率低，微生物的安全性尚难以保证的问题。例如发明专利CN20041001800.0一种制备人参皂甙Compound-K的方法，采用霉菌(黑曲霉、犁头霉、黑根霉、绿色木霉)好气发酵技术、固定化细胞技术和固定化酶，直接以人参总皂甙或三七叶为底物，发酵转化制备Compound-K，转化率为5-15％。但是采用的并不是食品安全菌株，后续需要对Compound-K进行分离纯化，步骤繁琐。发明专利CN201510658194.9一种来自乳酸菌重组的β-葡萄萄糖苷酶制备稀有人参皂苷Compound-K的方法，构建了来自泡菜乳酸菌的β-葡萄萄糖苷酶基因的大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达重组酶Bgy1，1.0mg/mL绞股蓝gypenoside XVII与0.1mg/mL Bgy1反应生成0.58mg/mLCompound-K，转化率为89％。该申请虽然转化率较高，但是需要构建重组菌、分离纯化得到特定的β-葡萄萄糖苷酶，步骤繁琐，且需要特定的反应底物。也有专利申请报道，利用双歧杆菌的β-葡萄萄糖苷酶将人参皂苷Rb1转化为稀有人参皂苷CK，也需要先分离纯化得到酶，且转化率也有待提高。发明专利CN 201310650344.2一种阿达青霉发酵原二醇制备人参稀有皂苷CK的方法，采用1-5％的葡萄糖土豆液培养阿达青霉(3.3203)，24-32℃培养36-72h，加入10-100mg/mL的人参二醇甲醇或丙酮溶液，24-32℃继续培养48-120h，离心收集发酵液，浓缩10-20倍，大孔树脂层系分离，CK摩尔转化率为56-78％，HPLC测定CK纯度为70-84％。这一方法使用的是非食品安全菌株，需要对产品CK进行分离纯化，且发酵所需周期长、转化率也有待提高。

综上，目前的微生物转化法制备人参稀有皂苷CK的方法，存在微生物的安全性尚难以保证、过程繁琐、得到的产品需要分离纯化而无法直接食用、生产周期长、转化率有待提高等问题。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种利用复合菌生产制备人参稀有皂苷CK或人参稀有皂苷CK制品的方法。本发明方法通过食品安全的益生菌复合菌发酵，工艺简单，周期较短，得到的发酵产品可直接实用而不需要进行稀有皂苷CK的分离纯化，而且得到的产品营养价值和风味口感较佳，CK含量可达170-200mg/g。

本发明的利用复合菌制备人参稀有皂苷CK或人参稀有皂苷CK制品的方法，以Rb1、人参、西洋参、三七或者这四种物质的加工物中的任意一种以上为原料，以复合菌进行发酵转化，发酵结束后经干燥得到产品；所述复合菌包括酵母菌、A类菌和B类菌；所述酵母菌为假丝酵母或者扣囊复膜酵母中的任意一种或者多种；所述A类菌为植物乳酸菌、干酪乳杆菌或者鼠李糖乳杆菌中的任意一种或多种；所述B类菌为产糖苷水解酶的短双歧杆菌或者乳双歧杆菌中的任意一种或多种。

在本发明的一种实施方式中，所述原料为粉碎至40-80目的粉末原料。

在本发明的一种实施方式中，所述原料为三七提取物。

在本发明的一种实施方式中，所述假丝酵母可以是candidapeltata NRRL Y-6888；所述扣囊复膜酵母可以是Saccharomycopsisfibuligera NRRL Y-2388。

在本发明的一种实施方式中，所述植物乳酸菌可以是lactobacillusplantarumNRRL-4496、ATCC14917；干酪乳杆菌可以是lactobacillus casei ATCC 393；鼠李糖乳杆菌可以是LactobacillusRhamnosus NRRL 442。

在本发明的一种实施方式中，所述乳双歧杆菌可以是Bifidobacterium lactisB94，短双歧杆菌可以是Bifidobacterium breve ATCC 15700。

在本发明的一种实施方式中，所述复合菌，是将分别活化培养至对数中后期或者稳定期的各菌种种子液，按照酵母菌：A类菌：B类菌＝1:(1～2):(1.5～2.5)的体积比例进行菌种混合得到复合菌。

在本发明的一种实施方式中，所述发酵转化，是将复合菌按照总接种量10-20％(v/m)接种到原料中，添加占原料质量3％-～8％的食用糖和1％～4％的奶粉，并调节水分含量40-50％，于30-37℃厌氧培养5～10天，得到富含人参稀有皂苷CK的发酵物。

在本发明的一种实施方式中，所述方法还包括将发酵物烘干，或者添加辅料喷雾干燥。

在本发明的一种实施方式中，所述酵母菌活化培养，是采用4度麦汁加2％乳糖作为培养基，在30℃培养2-3天。

在本发明的一种实施方式中，所述植物乳酸菌或干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌使用MRS培养基活化。

在本发明的一种实施方式中，所述双岐杆菌活化使用的培养基含有：葡萄糖15.85g/L、低聚果糖15.85g/L、胰蛋白胨12.04g/L、牛肉膏7.23g/L、酵母粉9.63g/L、柠檬酸铵2.75g/L、K₂HPO₄·3H₂O 2.75g/L、乙酸钠6.875g/L、吐温-801.0mL/L、MgSO₄·7H₂O 0.2g/L、MnSO₄·H₂O0.05g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L。

在本发明的一种实施方式中，所述双岐杆菌活化培养是在37℃培养1-2天。

在本发明的一种实施方式中，所述方法具体是：将菌株活化，然后按照种子液酵母菌：A类菌：B类菌＝1:(1～2):(1.5～2.5)的比例进行菌种混合得到复合菌，将复合菌按照总接种量10-20％(v/m)接种到Rb1、人参、西洋参或者三七中的任意一种或者多种原料中，添加占原料质量3％-～8％的食用糖和1％～4％的奶粉，并调节水分含量40-50％，于30-37℃厌氧培养5～7天，得到富含人参稀有皂苷CK的发酵物；发酵物能够进一步烘干或者添加辅料喷雾干燥。

在本发明的一种实施方式中，所述厌氧培养是采用有排气装置的玻璃罐，便于发酵过程产生的二氧化碳排出。

本发明的优点和效果：

(1)本发明采用特定的食品安全的发酵菌种，产品安全性更高；以复合益生菌为转化工具，采用多级深层液态或固体发酵，并结合发酵工艺改进，通过特定的酵母菌种转化Rb1为Rd，再通过乳酸菌和短双岐杆菌把Rd转化为人参皂苷CK，并有其他稀有人参皂苷成分；本发明方法能够实现人参皂苷CK的有效转化，转化率较高，人参皂苷CK得率可达170-200mg/g。

(2)本发明可不需要对CK分离提纯，采用益生菌发酵，得到的产品可直接食用或者用于食品，而且得到的产品营养价值和风味口感较佳。

(3)本发明方法步骤简单、易控，生产成本更为低廉，生产周期较短。

具体实施方案

下面是对本发明进行具体描述。

实施例1：复合微生物转化Rb1为Compound-K

假丝酵母NRRL Y-6888、扣囊复膜酵母NRRL Y-2388采用4度麦汁加2％乳糖30℃培养2-3天，植物乳酸菌NRRL-4496、ATCC14917用MRS培养，乳双歧B94、、短双歧杆菌ATCC15700采用培养基(葡萄糖15.85g/L、低聚果糖15.85g/L、胰蛋白胨12.04g/L、牛肉膏7.23g/L、酵母粉9.63g/L、柠檬酸铵2.75g/L、K₂HPO₄·3H₂O 2.75g/L、乙酸钠6.875g/L、吐温-801.0mL、MgSO₄·7H₂O 0.2g/L、MnSO₄·H₂O 0.05g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L)，37℃培养2天。离心收集菌体，菌体混合，用25mmol/L醋酸盐缓冲液(pH6.0)稀释至菌体浓度为10⁹/mL，加入等量的1mg/mL的Rb1，37℃摇瓶培养5天，加入等量的正丁醇萃取，上层正丁醇相减压蒸干，重新溶于甲醇，用TLC法和HPLC法检测转化结果。酵母、乳酸菌、双岐杆菌的混合悬液可将人参皂苷Rbl全部转化为稀有人参皂苷CK，转化率为72.5％，即1mg Rb1可得到0.725mg的CK(Rb1转化成CK，由于分子量降低，故理论转化率为74％左右)。

实施例2：复合微生物固体发酵红参粉产生Compound-K

假丝酵母NRRL Y-6888、扣囊复膜酵母NRRL Y-2388采用4度麦汁加2％乳糖30℃培养2-3天，植物乳酸菌NRRL-4496和ATCC14917、干酪乳杆菌ATCC 393用MRS培养，乳双歧B94、短双歧杆菌ATCC 15700采用培养基(葡萄糖15.85g/L、低聚果糖15.85g/L、胰蛋白胨12.04g/L、牛肉膏7.23g/L、酵母粉9.63g/L、柠檬酸铵2.75g/L、K₂HPO₄·3H₂O 2.75g/L、乙酸钠6.875g/L、吐温-801.0mL、MgSO₄·7H₂O 0.2g/L、MnSO₄·H₂O 0.05g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L)，37℃培养2天。获得酵母、乳酸菌(即A类菌)和双歧杆菌(即B类菌)菌种，以酵母、乳酸菌和双歧杆菌比列为1:1:2比例，以15％接种量接入红参粉(吉林紫鑫药业股份有限公司提供)中，红参粉中添加5％的蔗糖和2％的奶粉，调节水分含量为45％，35℃厌氧6天，发酵成熟红参粉烘干，味道醇香，取样经石油醚脱脂后，用饱和正丁醇萃取，上层正丁醇相减压蒸干，重新溶于甲醇，用HPLC法检测转化CK含量。结果CK含量为70mg/g。

实施例3：复合微生物固体发酵红参粉产生Compound-K

假丝酵母NRRL Y-6888、扣囊复膜酵母NRRL Y-2388采用4度麦汁加2％乳糖30℃培养2-3天，植物乳酸菌NRRL-4496、植物乳酸菌ATCC14917、干酪乳杆菌ATCC 393、鼠李糖乳杆菌NRRL 442用MRS培养，乳双歧、短双歧杆菌采用培养基(葡萄糖15.85g/L、低聚果糖15.85g/L、胰蛋白胨12.04g/L、牛肉膏7.23g/L、酵母粉9.63g/L、柠檬酸铵2.75g/L、K₂HPO₄·3H₂O 2.75g/L、乙酸钠6.875g/L、吐温-801.0mL、MgSO₄·7H₂O 0.2g/L、MnSO₄·H₂O0.05g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L)，37℃培养2天。获得酵母、乳酸菌(即A类菌)和双歧杆菌(即B类菌)菌种，以酵母、乳酸菌和双歧杆菌比列为1:1:2比例，以10％接种量接入红参粉(吉林紫鑫药业股份有限公司提供)中，红参粉中添加3％的蔗糖和4％的奶粉，调节水分含量为40％，37℃厌氧8天，发酵成熟红参粉烘干，味道醇香，取样经石油醚脱脂后，用饱和正丁醇萃取，上层正丁醇相减压蒸干，重新溶于甲醇，用HPLC法检测转化CK含量。结果CK含量为65mg/g，RB1对CK转化率74％(几乎为理论转化率)。同时检测到Rg₃17mg/g，发酵红参粉气味醇香，口感较佳。

实施例4：复合微生物固体发酵三七提取物产生Compound-K

假丝酵母NRRL Y-6888、扣囊复膜酵母NRRL Y-2388采用4度麦汁加2％乳糖30℃培养2-3天，植物乳酸菌NRRL-4496、ATCC14917、鼠李糖乳杆菌NRRL 442用MRS培养，乳双歧、短双歧杆菌采用培养基(葡萄糖15.85g/L、低聚果糖15.85g/L、胰蛋白胨12.04g/L、牛肉膏7.23g/L、酵母粉9.63g/L、柠檬酸铵2.75g/L、K₂HPO₄·3H₂O 2.75g/L、乙酸钠6.875g/L、吐温-801.0mL、MgSO₄·7H₂O 0.2g/L、MnSO₄·H₂O 0.05g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L)，37℃培养2天。获得酵母、乳酸菌(即A类菌)和双歧杆菌(即B类菌)菌种，以酵母、乳酸菌和双歧杆菌比列为1:2:2比例，以15％接种量接入三七提取物(三七叶总皂苷85％、Rb₃10％，购于宝鸡市森瑞商务化工有限公司)，添加5％的蔗糖和2％的奶粉，调节水分含量为45％，35℃厌氧7天，发酵成熟烘干，味道醇香。

按上述方法得到的产品，取样经石油醚脱脂后，用饱和正丁醇萃取，上层正丁醇相减压蒸干，重新溶于甲醇，用HPLC法检测转化CK含量。结果CK含量为200mg/g。发酵三七提取物气味醇香，口感较佳。

实施例5：复合微生物固体发酵三七提取物产生Compound-K

假丝酵母NRRL Y-6888、扣囊复膜酵母NRRL Y-2388采用4度麦汁加2％乳糖30℃培养2-3天；植物乳酸菌NRRL-4496、ATCC14917、干酪乳杆菌ATCC 393、鼠李糖乳杆菌NRRL 442用MRS培养；乳双歧、短双歧杆菌采用培养基(葡萄糖15.85g/L、低聚果糖15.85g/L、胰蛋白胨12.04g/L、牛肉膏7.23g/L、酵母粉9.63g/L、柠檬酸铵2.75g/L、K₂HPO₄·3H₂O 2.75g/L、乙酸钠6.875g/L、吐温-801.0mL、MgSO₄·7H₂O 0.2g/L、MnSO₄·H₂O 0.05g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L)，37℃培养2天。获得酵母、乳酸菌(即A类菌)和双歧杆菌(即B类菌)菌种，以酵母、乳酸菌和双歧杆菌比列为1:2:2比例，以20％接种量接入三七提取物(三七叶总皂苷85％、Rb₃10％，购于宝鸡市森瑞商务化工有限公司)，添加8％的蔗糖和1％的奶粉，调节水分含量为50％，32℃厌氧6天，发酵成熟烘干，味道醇香，取样经石油醚脱脂后，用饱和正丁醇萃取，上层正丁醇相减压蒸干，重新溶于甲醇，用HPLC法检测转化CK含量。结果CK含量为185mg/g。同时，发酵三七提取物气味醇香，口感较佳。

实施例6：复合微生物固体发酵三七提取物产生Compound-K

假丝酵母NRRL Y-6888采用4度麦汁加2％乳糖30℃培养2-3天；植物乳酸菌NRRL-4496、干酪乳杆菌ATCC 393用MRS培养；乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis B94，短双歧杆菌Bifidobacterium breve ATCC 15700采用培养基(葡萄糖15.85g/L、低聚果糖15.85g/L、胰蛋白胨12.04g/L、牛肉膏7.23g/L、酵母粉9.63g/L、柠檬酸铵2.75g/L、K₂HPO₄·3H₂O 2.75g/L、乙酸钠6.875g/L、吐温-801.0mL、MgSO₄·7H₂O 0.2g/L、MnSO₄·H₂O 0.05g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L)，37℃培养2天。

获得酵母、乳酸菌和双歧杆菌菌种，以酵母、乳酸菌和双歧杆菌比列为1:2:2比例，以20％接种量接入三七提取物(三七叶总皂苷85％、Rb₃10％，购于宝鸡市森瑞商务化工有限公司)，添加8％的蔗糖和1％的奶粉，调节水分含量为50％，32℃厌氧6天，发酵成熟烘干，味道醇香，取样经石油醚脱脂后，用饱和正丁醇萃取，上层正丁醇相减压蒸干，重新溶于甲醇，用HPLC法检测转化CK含量。结果CK含量为178mg/g。同时，发酵三七提取物气味醇香，口感较佳。

实施例7：

采用酿酒酵母代替实施例4中的假丝酵母和扣囊复膜酵母，其他步骤与实施例4一致。

按本实施例方法得到的产品，取样经石油醚脱脂后，用饱和正丁醇萃取，上层正丁醇相减压蒸干，重新溶于甲醇，用HPLC法检测转化CK含量。结果CK含量为86mg/g。

实施例8：

采用嗜酸乳酸菌或者动物双歧杆菌代替实施例4中的植物乳酸菌NRRL-4496、ATCC14917和乳双歧、短双歧杆菌，其他步骤与实施例4一致，结果CK含量为22mg/g。

实施例9：

不添加A类菌(即植物乳酸菌NRRL-4496、ATCC14917、鼠李糖乳杆菌NRRL 442)，其他步骤与实施例4一致。结果发现，得到的产品中CK含量为45mg/g。

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims

1.一种利用复合菌制备人参稀有皂苷CK或人参稀有皂苷CK制品的方法，其特征在于，所述方法是以Rb1、人参、西洋参或者三七中的任意一种或者多种为原料，以复合菌进行发酵转化，发酵结束后经干燥得到产品；所述复合菌包括酵母菌、A类菌和B类菌；所述酵母菌为假丝酵母或者扣囊复膜酵母中的任意一种或者多种；所述A类菌为植物乳酸菌、干酪乳杆菌或者鼠李糖乳杆菌中的任意一种或多种；所述B类菌为产糖苷水解酶的短双歧杆菌或者乳双歧杆菌中的任意一种或多种。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述复合菌，是将分别活化培养至对数中后期或者稳定期的各菌种种子液，按照酵母菌：A类菌：B类菌＝1:(1～2):(1.5～2.5)的比例进行菌种混合。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵转化是将复合菌按照总接种量10-20％(v/m)接种到原料中，添加占原料质量3％-～8％的食用糖和1％～4％的奶粉，并调节水分含量40-50％，于30-37℃厌氧培养5～10天，得到富含人参稀有皂苷CK的发酵物。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将发酵物烘干，或者添加辅料喷雾干燥。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述假丝酵母是candidapeltata NRRL Y-6888；所述扣囊复膜酵母是SaccharomycopsisfibuligeraNRRL Y-2388。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乳双歧杆菌是Bifidobacteriumlactis B94，短双歧杆菌是Bifidobacterium breve ATCC 15700。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述复合菌为假丝酵母、扣囊复膜酵母、植物乳酸菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、乳双歧和短双歧杆菌。

8.据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述原料为三七提取物。

9.根据权利要求1-8任一所述方法得到的人参稀有皂苷CK制品。

10.权利要求9所述的人参稀有皂苷CK制品在食品领域、生物领域、制备药物方面的应用。