CN101177421B - 一种制备高纯度紫杉烷类化合物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种制备高纯度紫杉醇、多西他赛等紫杉烷类化合物的方法，以合成、半合成或从植物中提取的紫杉烷类化合物为原料，用水性溶剂体系溶解原料，采用大孔吸附树脂(如Diaion HP系列树脂、Amberlite XAD系列树脂)为固定相，以有机溶剂(如四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)等)的水溶液为洗脱液，采用常压柱层析方法，一步法提纯得到纯度达99.90％以上的高纯度紫杉烷类化合物，且收率高于99.0％。本方法方法简单，操作方便，有利于放大生产。有机溶剂用量少，且可回收循环使用，有利于保护环境。

Description

一种制备高纯度紫杉烷类化合物的方法

技术领域

本发明涉及一种处理紫杉烷类化合物原料的方法。更具体而言，本发明涉及利用大孔吸附树脂层析法处理紫杉烷类化合物原料，从而制备高纯度紫杉烷类化合物的方法。

背景技术

紫杉烷(taxane)类化合物是提取于高等裸子植物红豆杉(Taxusbrevifolia)的树皮、根和叶等部位的一类化合物。在目前已分离到200多种紫杉烷类化合物中，有许多已被证明具有细胞毒性和抗肿瘤活性。

紫杉醇和多西他赛能稳定细胞微管，防止细胞微管解聚，从而防止细胞分裂而抑制癌细胞的生长，因而具有治疗癌症的效果，目前已在临床上广泛应用。

紫杉醇被认为是近三十年来，天然抗癌药物研究领域最重大的发现，目前已成为临床上的首选抗癌药物。美国化学家Wall和Wani等，于1971年首次报道从红豆杉的树皮中分离到紫杉醇，并确认其具有抗癌活性(J.Am.Chem.Soc.，93，2325，1971)。1983年，美国国立癌症研究所(NCI)报告紫杉醇对乳腺癌、结肠癌等实体癌具有抗肿瘤作用。1993年，美国FDA批准将该药用于包括卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌及其它癌症在内的常规化疗。

多西他赛，又名多烯紫杉醇，是法国罗纳普朗克乐安公司开发的半合成紫杉醇衍生物，它是第二代紫杉烷类抗肿瘤药物的代表。1996年，该药物获得美国FDA批准，用于治疗乳腺癌和非小细胞肺癌等癌症。多西他赛以其增加的水溶性及优异的抗癌广谱性日益受到人们的关注。

目前，紫杉醇的工业化生产主要有植物提取和化学半合成两种方法。

植物提取是以天然植物红豆杉的树皮为原料，但由于紫杉醇含量极低，天然红豆杉资源极为有限，而且树皮难于再生，这一方法越来越难于满足紫杉醇生产的需要。

化学半合成方法则首先从欧洲红豆杉的针叶中提取高含量的10-去乙酰巴卡亭III(baccat in III)作为原料，再经化学反应制备得到紫杉醇。由于原料资源丰富，因此半合成方法日益成为紫杉醇主要的生产途径。多西他赛则完全是采用半合成方法生产。

在紫杉烷类化合物的生产过程中会产生多种结构相近的衍生物、同系物，这些杂质的存在会对患者的用药安全，乃至生命安全造成潜在的危险。但是，从紫杉烷类化合物中分离杂质，对活性物质进行提纯是很困难的工作。如何改进分离提纯方法，制备高纯度的紫杉烷类化合物，是目前受到普遍重视的课题。

由于紫杉烷类化合物不溶于水，若要提高纯度，常规的手段是采用大型制备液相色谱提纯，上样量很小，并需要用大量的有机溶剂洗脱，造成了一定的环境污染，且提高了生产成本。

目前已揭示的分离方法有硅胶柱层析法、氧化铝柱层析法和结晶等。

陈建民等(CN97109192.7)以紫杉醇粗提物和液溴反应，随后经过正相填充色谱柱分离，再经过两次结晶得到高纯度的紫杉醇。加拿大植原药物公司(CN99815315.X)用丙酮/水沉淀法制备高纯度紫杉醇。刘开录(CN96102442.9)等用多孔多分子填料作固定相的反相液相色谱分离方法制备高纯度的紫杉醇。

然而，这些方法仍然存在以下不足之处：1)紫杉醇的纯度不高，均不能达到99.9％以上；2)操作较为复杂；3)需要使用大量的有机溶剂，既污染了环境，又提高了生产成本。

因此本领域迫切需要一种操作简便、成本低廉、对环境污染小的紫杉烷类化合物原料处理方法，以得到高纯度紫杉烷类化合物。

发明内容

本发明的目的正是针对现有技术的以上缺点，提供一种处理紫杉烷类化合物原料以得到高纯度紫杉烷类化合物的方法。

在本发明的第一方面，提供了一种方法，所述方法包括如下步骤：

a)将紫杉烷类化合物原料溶于含水互溶性溶剂和水的混合溶剂体系A中形成溶液，其中所述的混合溶剂体系A中水互溶性溶剂与水的体积比为5:95～60:40；

b)以大孔吸附树脂为固定相，对步骤a)所得的溶液进行层析，用含有机溶剂和水的洗脱溶剂体系B进行洗脱；

c)收集含有紫杉烷类化合物的洗脱部分；和

d)去除溶剂，分离得到紫杉烷类化合物。

在本发明方法的一个实施方式中，所述紫杉烷类化合物是紫杉醇、多西他赛或它们的衍生物、或其组合。

在本发明方法的另一实施方式中，所述原料是提取自植物的紫杉烷类化合物、以合成法或半合成法制得的紫杉烷类化合物。

在本发明的一个优选例中，所述原料中紫杉烷类化合物的纯度为80.0～99.5wt％，优选90.0～99.5wt％，最优选为99.5wt％。

在本发明的另一优选例中，所述紫杉烷类化合物原料与溶剂体系A的混合比为2～50克原料/升溶剂体系A，优选3～30克原料/升溶剂体系A，更优选5～10克原料/升溶剂体系A。

在本发明方法的另一实施方式中，溶剂体系A中所述的水互溶性溶剂选自：醇、酮、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺或其组合。

在本发明的一个优选例中，所述醇选自：甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇，优选乙醇。

在本发明的另一优选例中，所述酮选自：丙酮、丁酮或甲基乙基酮。

在本发明的另一优选例中，步骤a)中所述的混合溶剂体系中水互溶性溶剂与水的体积比优选为8:92～50:50，更优选10:90～15:85。

在本发明方法的另一实施方式中，所述大孔吸附树脂选自：Diaion HP系列大孔吸附树脂、Amberlite XAD系列大孔吸附树脂、Duolite PSP、DuoliteS30、Lewapol G-7318、SP-1/2、GDX系列大孔吸附树脂，优选Diaion HP系列大孔吸附树脂或Amberlite XAD系列大孔吸附树脂。

在本发明的一个优选例中，紫杉烷类化合物原料与大孔吸附树脂的用量为：2-80克紫杉烷类化合物/升大孔吸附树脂，优选5-40克紫杉烷类化合物/升大孔吸附树脂，最优选10～15克紫杉烷类化合物/升大孔吸附树脂(柱体积)。

在本发明方法的另一实施方式中，步骤b)洗脱溶剂体系B中的所述有机溶剂为与水互溶的有机溶剂。

在本发明的一个优选例中，洗脱溶剂体系B中的所述有机溶剂选自：醇、酮、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、或它们的组合。

在本发明的一个优选例中，所述醇选自：甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇，优选乙醇。

在本发明的另一优选例中，所述酮选自：丙酮、丁酮或甲基乙基酮。

在本发明的另一优选例中，洗脱溶剂体系B中的所述有机溶剂与步骤a)混合溶剂体系A中所用的水互溶性溶剂相同，并且在洗脱溶剂体系B中有机溶剂的浓度与混合溶剂体系A中水互溶性溶剂的浓度之比≥1.3，更佳地该比值为1.55.0。

在本发明的另一优选例中，步骤b)洗脱溶剂体系中的所述有机溶剂与水的体积比为：10:90～70:30，优选为20:80～50:50，更优选30:70～40:60。

在本发明方法的另一实施方式中，在步骤d)中包括浓缩干燥所得的紫杉烷类化合物。

在本发明的一个优选例中，所述方法还包括将步骤d)所得的紫杉烷类化合物作为原料，重复步骤a)～d)一次或多次，从而制得纯度大于或等于99.9％的紫杉烷类化合物。

在本发明方法的另一实施方式中，所述方法还包括步骤：

e)将步骤d)所得的紫杉烷类化合物与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂混合，从而制得药物组合物。

在本发明的第二方面中，提供了一种纯度高于或等于99.90％的紫杉烷类化合物，所述的紫杉烷类化合物是用前述方法中的任一种制备的。

在本发明的第三方面中，提供了一种药物组合物，它包含采用前述方法中的任一种方法得到的紫杉烷类化合物，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

在另一优选例中，所述紫杉烷类化合物的含量为组合物总重量的1～99.9％；优选为组合物总重量的2～95％，较优选为5～90％，更优选10～80％。

本发明的方法操作简便、成本低廉、对环境污染小，可从紫杉烷类化合物原料以得到高纯度的紫杉烷类化合物，适合于工业应用。

附图说明

图1所示为本发明实施例1所用紫杉醇原料(纯度为99.50％)的高效液相层析(HPLC)图谱。

图2所示为根据本发明方法，通过实施例1制得的紫杉醇提纯产物(合并组分)的HPLC图谱。

具体实施方式

本发明的发明人经过大量摸索和深入研究，发现可利用大孔吸附树脂法，可以极其简便地在水相系统中对紫杉烷类化合物原料进行处理，以制备高纯度紫杉烷类化合物。

具体而言，对于紫杉烷类化合物，采用常规分离方法比如：硅胶柱层析、结晶等，可以将纯度提高到99.5％，但尚未做到将纯度提高到99.9％以上。另外，因为紫杉烷类化合物不溶于水，若要提高纯度，常规的手段是采用大型制备液相色谱提纯，上样量很小，并需要用大量的有机溶剂洗脱，造成了一定的环境污染，且提高了生产成本。

本发明人打破常规，利用水可互溶性溶剂与水的混合溶剂体系，在水相系统中溶解不易溶于水的紫杉烷类化合物原料，然后利用大孔吸附树脂吸附，再采用有机溶剂浓度较高的水性溶剂洗脱体系进行洗脱，制得了纯度提高了的紫杉烷类化合物，该纯度甚至可达到99.9％以上，且收率至少达到90％，在此基础上完成了本发明。

本发明操作简便，收率高，适合于大规模生产。此外，本发明的方法中所用的溶剂可回收循环使用，有利于减少环境污染和资源浪费。

术语说明

如本文所用，术语“紫杉烷类化合物”是指已从红豆杉中提取并分离到的具有紫杉烷结构的化合物或其衍生物，或指合成或半合成的具有紫杉烷结构的一类化合物或其衍生物或上述化合物/衍生物的组合。主要包括但不限于：紫杉醇、多西他赛等。

如本文所用，术语“紫杉烷类化合物原料”或“原料”是指所含紫杉烷类化合物纯度较低的紫杉烷类化合物，通常其纯度低于99.50％。所述原料可为但不限于：通过植物提取法或化学合成或半合成等方法制得的产物。在本发明中，所用的原料可以是自制，也可以是市售的常规原料，优选为粉末形式。

如本文所用，术语“高纯度紫杉烷类化合物”、“本发明的紫杉烷类化合物”和“本发明的活性成分”可互换使用，均表示根据本发明的方法从紫杉烷类化合物原料中提纯得到的活性物质，其纯度等于或高于99.90％(更佳地≥99.95％)。

如本文所用，术语“本发明的组合物”是指含有用本发明方法提纯的高纯度紫杉烷类化合物的组合物。所述的组合物可为药物组合物或其他组合物。

如本文所用，术语“含有”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。

如本文所用，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体。它们符合以下条件：本身不诱导产生对接受该组合物的个体有害的抗体，且给药后或给予保健品后没有过分的毒性。这些载体是本领域普通技术人员所熟知的。例如，在《雷明顿药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Pub.Co.，N.J.1991年)中可找到关于药学上可接受的载体的充分讨论。

如本文所用，术语“有效量”指治疗剂治疗、缓解或预防目标疾病或状况的量，或是表现出可检测的治疗或预防效果的量。可根据某一对象的体型和健康状况、病症的性质和程度、以及选择给予的治疗剂和/或治疗剂的组合来确定精确的有效量。

本发明的方法

本发明的方法包括如下步骤：

a)将紫杉烷类化合物原料溶于包含水互溶性溶剂和水的混合溶剂体系A中形成溶液，其中所述的混合溶剂体系A中水互溶性溶剂与水的体积比为5:95～60:40；

b)以大孔吸附树脂为固定相，对步骤a)所得的溶液进行层析，用包含有机溶剂和水的洗脱溶剂体系B洗脱；

c)收集含有紫杉烷类化合物的洗脱部分；

d)去除溶剂，分离得到紫杉烷类化合物。

在本发明中，步骤a)中所述的水互溶性溶剂为：醇(包括但不限于：甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇，优选乙醇)、酮(包括但不限于丙酮、丁酮、甲基乙基酮)、四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。步骤a)中所述的混合溶剂体系中水互溶性溶剂与水的体积比为5:95～60:40，优选为8:95～50:50，更优选10:90～15:85。

在本发明中，所述紫杉烷类化合物原料与混合溶剂体系的混合比为2～50克原料/升混合溶剂体系A，优选5～30克原料/升混合溶剂体系A，更优选10～15克原料/升混合溶剂体系A。

在本发明中，步骤b)洗脱溶剂体系中的所述有机溶剂为：醇(包括但不限于：甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇，优选乙醇)、酮(包括但不限于丙酮、丁酮、甲基乙基酮)、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺。所述有机溶剂与步骤a)混合溶剂体系中所用的有机溶剂可相同或不同。并且，溶剂体系A中的有机溶剂含量应低于洗脱溶剂体系B中的有机溶剂的含量，以进行有效洗脱。所述有机溶剂与水的体积比为：10:90～70:30，优选为20:80～50:50，更优选30:70～40:60。

本发明所用的大孔吸附树脂是指以苯乙烯、α-甲基苯乙烯、甲基丙烯酸甲酯或丙烯腈等单体配合带两个双键的二乙烯苯等交联，在可以和单体混溶但不溶于共聚体的有机溶剂中作为致孔剂存在，以及在带有分散剂的水中进行悬浮共聚而成的高分子物质。

可使用市售的大孔吸附树脂，包括但不限于：日本三菱化学的Diaion HP系列、美国罗门哈斯的Amberlite XAD系列、美国Diamond Alkali公司的Duolite PSP、Duolite S-30、德国的Lewapol G-7318、捷克的SP-1/2、中国天津试剂二厂的GDX系列等。

可将所述大孔吸附树脂根据需要填充于玻璃层析柱或不锈钢层析柱中。该层析过程可根据需要在常压或加压下进行，优选在常压下进行。

紫杉烷类化合物原料与大孔吸附树脂的用量为：2-80克紫杉烷类化合物/升大孔吸附树脂，优选5-40克紫杉烷类化合物/升大孔吸附树脂，最优选10～15克紫杉烷类化合物/升大孔吸附树脂(柱体积)。

洗脱后分部收集流出液，并对各部分收集液进行检测，合并含有紫杉烷类化合物的部分。所述检测可用本领域已知的对紫杉烷类的检测方法进行。

在本发明的优选实施方式中，所述方法还包括将步骤d)中所得紫杉烷类化合物浓缩干燥的步骤。所述浓缩干燥可采用本领域已知的任何方法，例如旋转蒸发法、真空干燥法等，优选采用真空干燥法。

如果需要得到纯度更高的紫杉烷类化合物，还可将步骤d)所得的紫杉烷类化合物作为原料，重复步骤a)～d)一次或多次。

本发明的方法，还可步骤e)：将步骤d)所得的紫杉烷类化合物与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂混合，从而制得药物组合物。

在本发明的一个实施方式中，所述方法包括如下步骤：

(1)原料的溶解：将纯度为99.50％的半合成紫杉烷类化合物溶解于10～15％的有机溶剂的水溶液。

(2)上样：将大孔吸附树脂填充于常压有机玻璃柱或不锈钢柱中，上样量为10～15克紫杉烷类化合物/L大孔吸附树脂。

(3)洗脱：样品溶液上柱后，用30～40％的有机溶剂的水溶液洗脱，分部收集流出液，对各部分收集液进行检测，合并含有紫杉烷类化合物的部分。

(4)沉淀、过滤或离心：向合并的收集液中加入5倍体积的纯化水，搅拌沉淀，过滤或离心得到高纯度紫杉烷类化合物固体。

本发明的紫杉烷类化合物及其组合物

根据上述方法制得本发明的高纯度紫杉烷类化合物，其纯度可等于或高于99.90％，更佳地等于或大于99.95％。

在本发明中，可用常规方法将本发明的紫杉烷类化合物与可接受的载体、赋形剂或稀释剂相混合，形成本发明组合物。所述载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。

本发明的组合物可以为固态(如颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片)或液态(如口服液)或其他合适的形状。本发明活性成分的含量通常为组合物重量的1～99％，较佳地为2～95％，更佳地为5～90％，最佳地10～80％。

药物组合物及其使用

在本发明中，上文所述的组合物也可为药物组合物，其包含本发明的紫杉烷类化合物与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

药物组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。

通常，在本发明的药物组合物中，本发明的紫杉烷类化合物作为活性成分占总重量的1～99％，较佳地2～95％，较佳地5～90％，更佳为10～80％，其余为药学上可接受的载体以及其他添加剂等物质。

本发明的药物组合物可以通过常规方法制成任何常规的制剂形式，只要是能够使活性成分有效地到达哺乳动物体内的剂型都是可以的。

本发明的药物组合物优选口服给药，口服形式包括但不限于：片剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒等。或者也可以无菌可注射溶液或悬浮液形式(在等渗介质中含有约0.05～5％悬浮剂)进行非肠胃给药。例如，这些药物制剂可含有与载体混合的约25～90％，通常约为5～60％(重量)的活性成分。

一旦配成本发明的药物组合物，可将其直接给予对象。待预防或治疗的对象可以是动物；尤其是人。含本发明活性物质的药物组合物，可以经口服、皮下、皮内、静脉注射等方式应用。治疗剂量方案可以是单剂方案或多剂方案。

本发明的组合物或药物组合物还可与其它抗癌药物联合给药。所述的其它抗癌药物可为例如(但不限于)：TNF-a、TGF-b、IFN-a、鸦胆子乳、足叶乙甙(即依托泊甙)、阿霉素、三苯氧胺、5-氟尿嘧啶、去甲斑螯素、双呋喃氟尿嘧啶、葫芦素、三尖杉酯碱、冬凌草乙素、马蔺子甲素、云芝糖肽、阿糖胞苷、卡波铂、香菇多糖、氟他胺、异环磷酰胺、乌苯美司、醋酸亮丙瑞林、脱氧氟尿苷等。

当两种或两种以上的药物联合给药时，一般具有优于两种药物分别单独给药的效果。优选地，联合施用的药物或其它制剂不干扰本发明紫杉烷类化合物的治疗活性。

本发明的优点

本发明的主要优点包括：

(1)本发明方法回收率高：本发明方法不仅可用于对紫杉烷类化合物原料进行提纯，还特别适用于对纯度已经较高的紫杉烷类化合物原料进行精提，且回收率都很高(通常回收率可达90％以上，最高可达99％或更高)；

(2)本发明方法特别适合制备极高纯度的紫杉烷类化合物：本发明方法可制得纯度高达99.90％的紫杉烷类化合物，

(3)方法简便，操作方便：无需经过复杂的步骤和使用复杂而紧密的仪器，有利于进行大规模生产；

(4)成本低，污染小：本发明方法中所用的溶剂可回收并循环使用，即降低了成本又减小了污染；此外，本发明方法步骤少、对仪器要求低这一特性也有利于降低成本。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。

实施例

实施例1：紫杉醇的提纯

样品检测的高效液相色谱条件

色谱仪：Waters高效液相色谱系统；

色谱柱：Waters Spherisorb ODS(24.6mm×150mm，3μm)；

流动相A：水:乙腈(3:2)；

流动相B：乙腈；

程序：

 

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0-20	100	0
20-60	100→10	0→90
			60-62	10→100	90→0
62-70	100	0

进样量：15μl；

柱温：35℃；

检测波长：227nm；

流速：1.2ml/分钟。

原料描述

本实施例所用原料为市售的纯度约为99％的紫杉醇(其HPLC图谱如图1所示)，相关HPLC参数如表1所示，其中峰4为紫杉醇峰。

表1.实施例1所用原料的HPLC峰相关数据

 

峰号	保留时间	起始时间	终止时间	峰高	峰面积	％峰面积
							1	7.425	7.133	7.883	130	2269	0.035
2	14.892	13.983	15.267	165	3839	0.060
							3	16.379	16.033	16.750	56	1755	0.027
4	19.050	18.267	20.650	233722	6416416	99.497
							5	30.149	29.617	30.700	64	2343	0.036
6	42.977	42.533	43.200	106	1732	0.027
							7	44.596	44.367	45.333	284	5075	0.079
8	48.580	48.350	48.900	802	7436	0.115
							9	54.590	54.350	54.717	191	2115	0.033
10	58.583	58.450	58.883	659	5870	0.091

提纯过程

将5.0升HP20SS树脂(购自日本三菱化学公司)装入直径为130mm，高度为500mm的玻璃层析柱中，并用10升纯化水洗涤树脂。

称取55克上述纯度约为99％的紫杉醇原料，溶于10升15％四氢呋喃水溶液中，然后上HP20SS柱，上样流量为5.0升/小时。上样完毕，用5.0升15％四氢呋喃水溶液洗涤，洗涤流量为5.0升/小时。洗涤结束，用15.0升40％四氢呋喃水溶液洗脱，洗脱流量为5.0升/小时。按体积分段收集洗涤、洗脱流出液，并用高效液相色谱检测分段收集液的纯度，合并含有紫杉醇的组分，共6.0升。

向合并的收集液中加入两倍体积的纯化水(12升)，搅拌沉淀。过滤、干燥后得到固体54.5克。将10mg所得固体溶解于10mL乙腈中，进行HPLC检测。其图谱如图2所示，数据见表2，其中峰2为紫杉醇峰。

表3所示为实施例1中各合并组分的紫杉醇纯度以及按如下公式计算合并产物的收率：

收率(％)＝提纯干燥固体重量/原料重量×100％

表2.实施例1所得提纯紫杉醇的HPLC峰相关数据

 

峰号	保留时间	起始时间	终止时间	峰高	峰面积	％峰面积
							1	2.668	2.517	2.933	106	1486	0.023
2	18.964	18.083	25.067	237180	6423460	99.953
							3	40.698	40.383	41.033	83	1512	0.024

表3实施例1中各流出组分及合并组分的紫杉醇纯度

由表2和表3可见，经一步大孔树脂层析提纯后，紫杉醇的纯度提高到99.96％，且收率亦达到99.09％。结果证明，采用本方法可有效地提纯原料，制得高纯度紫杉醉。

实施例2：多西他赛的提纯

样品检测的高效液相色谱条件

色谱仪：Waters高效液相色谱系统；

色谱柱：Waters Spherisorb ODS2(4.6mm×150mm，3μm)；

流动相：0.043mol/L醋酸铵溶液:乙腈＝45:55；

进样量：20μl；

柱温：35℃；

检测波长：232nm；

流速：1.0ml/分钟。

提纯过程

将100升AMBERLITE XAD1600树脂(购自美国罗门哈斯公司)装入直径为400mm，高度为1100mm的不锈钢层析柱中，用100升纯化水洗涤树脂。

称取1000克多西他赛(纯度99.40％)，溶于180升15％N，N-二甲基甲酰胺(1)MF)的水溶液中，然后上样，上样流量为70升/小时。上样完毕，用100升15％DMF水溶液洗涤，洗涤流量为70升/小时。洗涤结束，用150升35％DMF水溶液洗脱，洗脱流量为70升/小时。分段收集洗涤、洗脱流出液，并用高效液相色谱检测分段收集液的纯度，合并含有多西他赛的组分，共100升。

向合并的收集液中加入两倍体积的纯化水(200升)，搅拌沉淀。离心、干燥后得到固体990克。按实施例1中收率计算公式计算合并产物的收率。

表4实施例2中各流出组分及合并组分的多西他赛纯度

由表4可见，经一步大孔树脂层析提纯后，多西他赛的纯度提高到99.96％，且收率亦达到99.0％。结果证明，采用本方法可有效地提纯原料，制得高纯度多西他赛。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (6)

1.一种分离紫杉烷类化合物的方法，所述方法包括如下步骤：

a)将紫杉烷类化合物原料溶于含水互溶性溶剂和水的混合溶剂体系A中，形成溶液，

其中，溶剂体系A中所述的水互溶性溶剂选自：甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、丁酮、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺或其组合，所述的混合溶剂体系A中水互溶性溶剂与水的体积比为5∶95～60∶40；

b)以大孔吸附树脂为固定相，对步骤a)所得的溶液进行层析，用含有机溶剂和水的洗脱溶剂体系B进行洗脱，其中所述洗脱溶剂体系B中的有机溶剂选自：甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、丁酮、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺或其组合，且其中所述大孔吸附树脂选自：Diaion HP系列、Amberlite XAD系列、DuoliteS-30系列、Lewapol G-7318系列、SP-1/2系列或GDX系列大孔吸附树脂，

c)收集含有紫杉烷类化合物的洗脱部分；和

d)去除溶剂，分离得到紫杉烷类化合物；

所述原料选自提取自植物的紫杉烷类化合物、以合成法或半合成法制得的紫杉烷类化合物或它们的组合；

所述原料中紫杉烷类化合物的纯度为80.0～99.5wt％。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述紫杉烷类化合物是紫杉醇、多西他赛或其组合。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂选自：DiaionHP系列大孔吸附树脂或Amberlite XAD系列大孔吸附树脂。

4.如权利要求1所述所述的方法，其特征在于，在步骤d)中包括浓缩干燥所得的紫杉烷类化合物。

5.一种制备药物组合物的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)按照权利要求1的方法分离紫杉烷类化合物，(2)将权利要求1步骤d)所得的紫杉烷类化合物与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂混合，从而制得药物组合物。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将步骤d)所得的紫杉烷类化合物作为原料，重复步骤a)～d)一次或多次，从而制得纯度大于或等于99.9％的紫杉烷类化合物。

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