CN1215725A - 三萜衍生物及含有它们的内皮素－受体拮抗剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了式(Ⅰ)三萜衍生物及其药学上可接受的盐:其中R1代表氢或可代谢的酯残基;R2代表氢或－R3R4,其中R3代表SO3－,－CH2COO－,－COCOO－,或－COR5COO－(R5代表低级亚烷基或低级亚链烯基),以及R4代表氢或可代谢的酯残基。它具有抗内皮素活性并被用于预防和治疗由内皮素过量分泌所造成的疾病。

Description

三萜衍生物及含有它们的内皮素-受体拮抗剂
本发明涉及在药物领域有用的化合物及其应用，更具体地讲，涉及新的能与内皮素竞争其受体并可用于预防和治疗由内皮素过量分泌造成的疾病的三萜衍生物，以及含有它们的药物组合物。
已被M.Yanagisawa等人于Nature,332,PP.441,1988中公开的内皮素是一种由21种氨基酸组成的内皮衍生的血管收缩肽，并且被认为通过激活细胞膜上的特异性受体而对包括血管，气管等不同组织和器官起作用。现已认定这种肽能导致平滑肌收缩，并且认为这种肽过量分泌可能导致各种循环疾病如高血压，心肌缺血(coronaryischemia)，脑病，肾病，各种器官的循环衰竭，以及哮喘。
据报道TXA2-受体拮抗剂和TXA2合成酶抑制剂等可以阻止内皮素过量分泌后细胞内钙离子浓度的增加，但是，迄今为目止尚没有关于抗内皮素的特异性拮抗剂的报道，因而需要开发能够抑制内皮素不同作用的药物。在此种情况下，本发明者进行了广泛研究并发现从Myrica Cerifera L中所提取的某些三萜衍生物特别能与内皮素竞争其受体(PCT/JP/91/01707,WO92/12991,USP5,248,807)。
本发明者怀着开发更多具有高活性内皮素拮抗剂的目的经过继续努力现已发现某些新三萜衍生物能够用于实现上述目的。
因此，本发明提供了式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐：其中：R1代表氢或可代谢的酯残基；R2代表氢或-R3-R4，其中R3代表-SO3-,-CH2COO-,-COCOO-,或-COR5COO-(R5代表低级亚烷基或低级亚烯基)，R4代表氢或低级烷基。
尽管所有式(Ⅰ)化合物是高活性内皮素拮抗剂并用于本发明目的，但优选那些其中R1代表氢的化合物，较优选其中R1代表氢且R2代表-COCH=CHCO2H的那些化合物。
对本发明来讲，在此处所公开和权利要求保护的下列术语限定如下。
R1定义中术语“可代谢的酯残基”独立表示能够在生物内分解而再形成具有生物活性羧酸的酯残基。可代谢的酯残基的实例包括(1-酰氧基)低级烷基如新戊酰氧基甲基，乙酰氧甲基，1-乙酰氧基乙基等等；(1-烷氧羰氧基)低级烷基如1-(乙氧羰氧基)乙基，1-(异丙羰氧基)乙基等等，以及(5-甲基-1,3-二氧环戊烯4-基)甲基等。
术语“低级亚烷基”指由式-(CH2)n-(n=1-6)表示的C1-C6亚烷基，优选C1-4亚烷基如亚甲基，1,2-亚乙基，1,3-亚丙基等。
术语“低级亚链烯基”是指C2-C6亚链烯基，如1,2-亚乙烯基，1,3-亚丙烯基，1,4-亚丁烯基等。优选由式-(CH=CH)m-(m=1-3)所示的那些基团。
R4定义中的术语“低级烷基”指直链或支链C1-C6烷基，如甲基，乙基，丙基，叔丁基。本发明化合物(Ⅰ)可与碱金属(钠，钾等)，碱土金属(钙，镁等)，铵或有机碱(三乙铵、三甲铵等)成盐。
本发明化合物(Ⅰ)可与无机酸(HCl,H2SO4等)，有机酸(苯磺酸，对-甲苯磺酸等)等成盐。
具有内皮素受体拮抗活性的本发明式(Ⅰ)化合物是新化合物。尽管它们的制备可按本专业已知的方法来进行，但它们可按下列方法有效制备。
如此，化合物(Ⅰ)可通过使式(Ⅴ)化合物(该化合物已公开于WO92/12991内)：与相应的醛于Honer-Emmons反应的反应条件下在胺如三乙胺以及碳酸铯或溴化锂存在下反应来制备。起始化合物(Ⅴ)可由经按类似于WO92/12991中所述的方法通过提取从蜡果杨梅中得到的物质衍生得到。简言之，是将植物的枝条用极性溶剂(如，醇如甲醇，乙醇，异丙醇，正丁醇，仲丁醇，叔丁醇；丙酮；或乙腈)室温提取数天。所得溶液用与水不混溶的有机溶剂(如，氯代烃象氯仿，二氯甲烷；乙酸乙酯；或正丁醇)进一步提取并将提取液进行硅胶色谱分离。将分离出的物质然后进行化学改性得到式(Ⅳ)Myricerone：化合物(Ⅴ)通过将化合物(Ⅳ)与二甲膦酰乙酸反应而得。
化合物(Ⅴ)然后与式(Ⅲ)醛：
其中R2的定义同上，R6代表叔丁氧羰基(以下简写作BOC)或氢，在Horner-Emmons反应的反应条件反应。将所得缩合产物脱保护和/或化学改性得到本发明的化合物Ⅰ。
Horner-Emmons反应可按下述两种方法中的任何一种来进行。
方法1：
式(Ⅰ)羧酸，例如，其中R2代表-COCH=CHCO2H的式(Ⅰ)化合物的制备可直接通过使化合物(Ⅴ)与具有所要取代基的醛(Ⅲ)，例如其中R2代表-COCH=CHCO2Me且R6代表氢的化合物(Ⅲ)，在适当溶剂如二甲基甲酰胺(DMF)，二甲亚砜(DMSO)，乙腈或类似溶剂中于二氮杂环十一碳烯(DBU)，氯化锂等存在于0-50℃，优选室温反应0.1-24hr，优选0.5-2hr，用乙酸乙酯，二氯甲烷等提取反应混合物得到甲基酯，并水解所述甲基酯来进行。
方法2：
方法2具有能够十分容易制备化合物(Ⅰ)的各种衍生物的优点。其中R2代表氢的式(Ⅰ)胺的制备可通过下述方法进行：使化合物(Ⅴ)与醛(Ⅲ)(其中R2代表氢且R6代表BOC)按类似于方法1所述的方法反应，用苯甲醚和三氟乙酸于0-50℃，优选室温处理形成的缩合产物0.1-24小时，优选0.5-2hr使其脱保护，并利用，例如，硅胶柱色谱手段纯化产物。所得胺被进一步用于制备各种衍生物。
根据下面所示的实验结果可以很清楚地知道本发明化合物(Ⅰ)具有内皮素受体拮抗活性，不仅可被用于预防和治疗循环疾病如血管收缩，高血压等病症，还可用于降低免疫抑制剂孢菌素的毒性。
对于临床使用，本发明化合物可按常规方法与常用载体，稀释剂，赋形剂一同被制成适于口服，胃肠外或肛门给药的适当制剂。
尽管本发明化合物的适宜日剂量依据各因素而变化，所述因素如欲要的治疗效果，给药途径，病人的年龄和体重等，但对于成年患者，日剂量通常口服为10mg至2g，优选50mg-1g，胃肠外给药为5mg-2g，优选50mg-1g，以1-4次分剂量给用。
下列实施例被用于进一步说明本发明，不能被认作限制本发明。
制备1
制备Myricerol(4)
Figure A9810922700071
(2)R=H,R’=反-二羟基肉桂酰基(3)R=R’=反-羟基肉桂酰基(4)R=R’=H
1)将蜡果杨梅的枝条(170kg)室温下用甲醇提取，得到提取物(9.6kg)。将提取物分成数份(每份500g)并分别分配在乙酸乙酯(1.5L)和水(1L)之间。将所得乙酸乙酯溶液(总计2.4kg)分成数分(每份200g)并分别通过ODS硅胶(Chromatorex ODS,Fuji-Division Chemical Ltd.,800g)色谱分离，用甲醇/水(85∶15)洗脱，得到含有化合物(1)和(2)的馏分(a)(总计135.4g)和主要包含化合物(3)的馏分(b)(总计226.5g)。
将馏分(a)进行乙酰化作用继之采用离心液-液分配色谱法分离(洗脱剂：正己烷/甲苯/甲醇/水，70∶30∶35∶15)，得到含乙酰化化合物(1)的馏分(171g)和含乙酰化化合物(2)的馏分(56g)。从前一馏分可得到乙酰化化合物(1)(23g)。
将乙酰化化合物(2)(56g)二等分并将各部分溶于10％甲醇含水氢氧化钾溶液(700ml，含水量，10％)。将溶液在氩气氛中加热回流72hr。加入水(100ml)，然后将混合物减压蒸馏除去甲醇，用稀HCl调节至pH6，并用乙酸乙酯(300ml)(×3)提取。将乙酸乙酯溶液用水洗涤并蒸去乙酸乙酯。向残余物中加入甲醇并滤出所形成的沉淀。母液经ODS硅胶色谱分离，用甲醇/水(85∶15)洗脱并滤出所分离出的结晶。合并第一批和第二批并用甲醇重结晶得到化合物(4)(13.5g)。
主要包含化合物(3)的馏分(b)(226g)用碱按与上述所述的相同方式处理得到化合物(4)(43g)。M.P.250-251℃。Myricerol(4)。
[α]D 25+65.3°(CHCl3)·
MS m/z 472(C30H48O4)·
R(CHCl3):3054,1695cm-1·
1H NHR(CDCl3)δ:5.85(1H,br-t,H-12),3.78(1H,d,J=12.2Hz,H-27),3.19(1H,d,J=12.2Hz,H-27),3.22(1H,dd,J=15.6,5.2Hz,H-3),2.93(1H,dd,J=14.0,4.6Hz,H-18),0.98,0.96,0.91,0.88,0.76,0.71(各3H,S,H-23,H-24,H-25,H-26,H-29,H-30)。
13C NMR(CDCl3)δ:38.1(C-1),26.9(C-2),78.8(C-3),
38.7(C-4),54.9(C-5),18.2(C-6),32.3(C-7),39.8(C-8),
48.4(C-9),37.1(C-10),24.1(C-11),129.5(C-12),
137.9(C-13),47.5(C-14),24.5(C-15),22.5(C-16),
46.0(C-17),40.5(C-18),45.0(C-19),30.8(C-20),33.5(C-21),
32.5(C-22),28.0(C-23),15.8(C-24),15.5(C-25),18.3(C-26),
62.9(C-27),181.4(C-28),33.0(C-29),23.8(C-30)。
2)或者，将按似上述1)的方法由蜡果杨梅枝条(100kg)所得到的乙酸乙酯可溶性部分(1.6 kg)进行硅胶色谱分离(洗脱剂：甲醇/水，85∶15)并收集包含化合物(1)(7g)的部分和随后的包含化合物(2)和(3)的混合物(142g)部分。后-馏分用碱按上述方式处理得到化合物(4)的粗晶体，将该结晶重结晶得到化合物(4)(36g)。
制备2
制备Homer-Emmons试剂(化合物Ⅴ)
Figure A9810922700091
1)制备化合物1
室温及氮气氛下于10分钟内向制备1所制备的Myricerol(4)(10.19g,21.55mmole)的吡啶(80ml)溶液内滴加入乙酐(80ml,0.86mole)并室温搅拌混合物3.5hr。待冷至0℃后，在5分钟内向混合物内滴加入甲醇(69ml,1.70mole)。将混合物室温搅拌30分钟并倾到冰冷却的浓HCl(90ml)/水(200ml)/二氯甲烷(400ml)的混合物内。分出有机层后，水层用二氯甲烷(400ml)提取。各有机层用1 NHCl(300ml)，盐水(300ml)(×2)洗涤，无水硫酸镁干燥并浓缩，得到粗产物形式化合物1(12.0g、21.55mmole产量100％)。M.P.185-186℃。
化合物1：
1H NMR(CDCl3)δppm:0.72(s,3H),0.84(s,3H),0.87(s,3H),0.86(s,3H),0.93(s,6H),0.8-2.0(m,22H),2.03(s,3H),2.05(s,3H),2.88(dd,J=4.6Hz,J=13.8Hz,1H),4.04(ABq,A部分,J=12.7Hz,1H),4.16(ABq,B部分，J=12.7Hz,1H),4.47(dd,J=6.6Hz,J=9.4Hz,1H),5.57(br s,1H).
IR(CHCl3):1718,1690cm-1。
2)化合物2的制备
在室温及氮气氛下向二乙酸酯1(12.0g,21.55mmole)中加入5％KOH的甲醇溶液(300ml，水含量，5％)。将混合物室温搅2hr，冷却至0℃，用4NHCl(60ml)中和并减压蒸去甲醇。残余物溶于冰冷却的水(400ml)，/乙酸乙酸(600ml)中。分出有机层后，水层用二氯甲烷(200ml)提取。各有机层用盐水(400ml)洗涤，无水硫酸镁干燥。并浓缩。残余物溶于四氢呋喃(THF)(50ml)中。加入硅胶(50g)后，将混合物浓缩并利用柱色谱纯化(SiO2),500g；二氯甲烷→乙酸乙酯/乙酸甲酯(1∶4)→乙酸乙酯)，得到目标化合物2(6.38,12.40mmole产率58％)。M.P.257-258℃；[α]D+103.5°(C=1.0/CHCl3)。
化合物2：
1HNMR(CDCl3)δppm:0.72(s,3H),0.76(s,3H),0.87(s,3H),0.90(s,3H),0.93(s,3H),0.98(s,3H),0.9-2.0(m,22H),2.02(s,3H),2.88(dd,J=4.2Hz,J=13.6Hz,1H),3.22(dd,J=5.4Hz,J=10.0Hz,1H),4.05(ABq,A部分，J=12.4Hz,1H),4.17(ABq,B部分，J=12.4Hz,1H),5.57(t,J=3.1Hz,1H)。
IR(CHCl3):3510,1722,1692cm-1。
13CNMR(CDCl3)δppm:15.5,15.6,18.2,18.3,21.3,22.7,23.4,23.6,23.8,27.0,28.0,30.6,32.4,33.0,33.0,33.6,37.2,38.5,38.7,39.9,40.7,44.9,44.9,46.1,48.7,55.2,66.3,78.8,127.2,137.2,171.1,182.1。
3)化合物3的制备
将化合物2(18.13g,35.23mmole)和氯仿(600ml)的混合物用丙酮(300ml)稀释。在室温及氮气氛条件下向所形成的溶液内滴加入琼斯试剂(CrO3/H2SO4，约2.43M硫酸溶液(21.75ml,52.85mmole)并将混合物在同样温度下搅拌30分钟。向此混合物内滴加入甲醇(42.94ml,1.06mole)并室温搅拌20分钟。将反应混合物倾入水(400ml)中并用氯仿提取(800ml)(×2)。有机层用水(400ml)洗涤，无水硫酸镁干燥并浓缩，得到粗产物(17.39g,33.92mmole，产率96％)。[α]D+108.5(C1.0/CHCl3)。
化合物3：
1HNMR(CDCl3)δppm:0.78(s,3H),0.88(s,3H),0.94(s,3H),1.02(s,3H),1.03(s,3H),1.08(s,3H),0.9-2.0(m,20H),2.01(s,3H),2.3-2.7(m,2H),2.90(dd,J=4.2Hz,J=13.6Hz,1H),4.05(ABq,A部分，J=12.6Hz,1H),4.20(ABq,B部分，J=12.6Hz,1H),5.59(br,s,1H)。
IR(CHCl3):1725,1696cm-1。
13C NMR(CDCl3)δppm:15.2,18.1,19.5,21.2,21.4,22.6,23.3,23.6,23.8,26.4,30.6,32.0,32.3,32.4,33.5,34.0,36.9,39.0,39.8,40.7,44.7,45.0,46.3,47.4,47.9,55.1,65.9,127.0,137.0,170.8,183.7,217.4。
4)化合物(Ⅳ)(Myricerone)的制备
向化合物3(17.38g,33.9mmole)中加入5％KOH甲醇溶液(870ml，水含量，5％)并将此混合物于65℃搅拌3hr，冷至室温并减压蒸馏除去甲醇至有白色晶体沉淀为止。残余物用冰冷却的4NHCl(200ml)/二氯甲烷(600ml)酸化并分出有机层。水层用二氯甲烷提取(300ml)(×2)。各有机层用水(400ml)洗涤(×2)，无水硫酸镁干燥并用色谱法纯化(SiO2、140g；二氯甲烷→乙酸乙酯/二氯甲烷(1∶9→1∶6→1∶4)，得到目标化合物(Ⅳ)(13.0g,27.62mmole，产率81％)。M.P.,226-227℃；[α]D+91.3℃(c1.1/CHCl3)。
化合物(Ⅳ)
1HNMR(CDCl3)δppm:0.76(s,3H),0.92(s,3H),0.97(s,3H),1.01(s,6H),1.08(s,3H),1.0-2.1(m,20H),2.3-2.6(m,2H),2.94(dd,J=4.5Hz,J=13.5Hz,1H),3.24(ABq,A部分，J=11.8Hz,1H),3.78(ABq,B部分，J=11.8Hz,1H),5.87(br,s,1H)。
IR(CHCl3):3510,1696cm-1。
13C NMR(CDCl3)δppm:15.5,18.3,19.5,21.3,22.4,23.8,24.1,24.4,26.5,30.8,32.0,32.2,33.0,33.5,34.0,36.8,38.7,39.7,40.4,44.9,46.2,47.3,47.5,47.6,54.7,63.1,129.4,137.7,183.4,217.4。
5)化合物(Ⅴ)的制备
于室温及氮气氛条件下向二甲膦酰乙酸(7.07g,42.1mmole)的二氯甲烷(100ml)溶液内加入亚硫酰氯(9.21ml,126mmole)，并将混合物室温搅拌4hr，浓缩得到酰基氯(7.85g)。
于-78℃及氮气氛条件下向化合物(Ⅳ)(6.60g,14.0mmole)的二氯甲烷(70ml)溶液内滴加入吡啶(4.53ml,56mmole)，与此同时内温升至-73℃。于25分钟内向混合物内滴加入上面所制的酰基氯(7.85g,14.0mmole)的二氯甲烷(70ml)溶液，与此同时内温升至-68℃。于-75℃搅拌40分钟后，减压蒸去溶剂。残留物悬浮于THF(84ml)并冷至0℃。向此悬浮液内加入2NNaOH(14ml,28mmole)并将混合物于0℃搅拌1hr。将反应混合物倾入冰冷却的1NHCl(50ml)/乙酸乙酯(200ml)内并分出有机层。水层用乙酸乙酯(150ml)提取(×2)。待各有机层用盐水(100ml)(×2)洗涤后，将它们合并，用无水硫酸镁干燥并浓缩。残留物利用柱争谱纯化(SiO2,150g；乙酸乙酯/正己烷(1∶1)→乙酸乙酯→氯仿/甲醇(100∶1→50∶1→21∶1))，得到目标化合物(Ⅴ)→(7.43g,11.97mmoloe，产率85％)。M.P.,110→113℃；[α]D22+83.9°(C1.0/CHCl3)。
化合物(Ⅴ)
1HNMR(CDCl3)δppm:0.80(s,3H),0.89(s,3H),0.94(s,3H),1.02(s,3H),1.04(s,3H),1.08(s,3H),1.0-2.0(m,20H),2.3-2.7(m,2H),2.8-3.0(m,1H),2.95(d,2JPH=22.0Hz,2H),3.78(s,3H),3.83(s,3H),4.13(ABq,A部分，J=12.9Hz,1H),4.32(ABq,B部分，J=12.9Hz,1H),5.60(br,s,1H)。
IR(CHCl3):2944,1728,1696,1263cm-1。
13C NMR(CDCl3)δppm:15.3,18.0,]9.5,21.4,22.7,22.8,23.5,23.7,26.5,30.6,32.2,32.4,32.8,32.9,33.6,34.0,34.9,37.0,39.0,39.9,40 8,45.3,46.3,46.4(d,1Jcp=144Hz),47.4,53.1(d,2JCOP=6.4Hz),53.2(d,2Jcop=6.4Hz),66.8,127.4,137.0,165.3(d,2JCCP=6.4Hz),183.2,217.3。
制备3
醛[Ⅲ]的制备
Figure A9810922700131
醛[Ⅲ]可按Somei等人在Chem.Pharm.Bull.28:2515(1980)中所提出的方法来制得。
向羟基硝基苯甲醛[Ⅰ]的乙酸/水(1∶1)(20ml)溶液内加入三氯化钛的水溶液(25ml)并室温搅拌混合物10分钟。反应混合物倾到水/乙酸乙酯内。水层用碳酸钠调节至pH8并用乙酸乙酯提取。乙酸乙酯提取液用无水硫酸镁干燥并浓缩到约20ml，得到化合物[Ⅱ]的乙酸乙酯溶液。
在冰冷却下，此溶液内加入吡啶(0.46ml)和3-甲氧羰基丙烯酰氯(442mg)。0℃搅拌30分钟后，将反应混合物用乙酸乙酯提取。浓缩提取液并分离出固体沉淀，过滤得到粉末状目标醛[Ⅲ](432mg，产率29％)。
化合物[Ⅲ]
1HNMR(CDCl3+CD3OD)δppm:3.85(s,3H),6.91(d,1H,J=15.4Hz),7.12(d,1H,J=15.4Hz),7.14(d,1H,J=2.8Hz),7.18(dd,1H,J=8.8,2.8Hz),8.58(d,1H,J=8.8Hz),9.86(s,1H).
                    实施例1
化合物(Ⅰ)(R1=H；R2=-C(O)CH=CHCO2H)的制备
Figure A9810922700141
1)化合物1m的制备([Ⅲ]和(Ⅴ)的缩合作用)
向上述制备2中所得的Homer-Emmons试剂(化合物Ⅴ)(621mg,1mmole)和醛[Ⅲ](299mg,1.2mmole)的二甲基甲酰胺(6ml)溶液内加入二氮杂环双环十一碳烯(DBU)(0.358ml)和氯化锂(93ml)，并将此混合物室温搅拌1.5小时，将反应混合物用乙酸乙酯提取并通过硅胶色谱分离(洗脱剂：氯仿/甲醇)，得到化合物1m(670mg，产率90％)。
化合物1m：
1HNMR(CDCl3)δppm:0.83(s,3H),0.84(s,3H),0.93(s,3H),1.03(s,3H),1.04(s,3H),1.07(s,3H),1.0-2.1(m,20H),2.2-2.8(m,2H),2.8-3.0(m,1H),3.84(s,3H),4.16,4.40(ABq,2H,J=13.0Hz),5.61(br,s,1H),6.27(d,1H,J=16.0Hz),6.90(dd,1H,J=8.8,2.8Hz),6.94(d,1H,J=15.2Hz),7.07(d,1H,J=2.8Hz),7.21(d,1H,J=15.2Hz),7.44(d,1H,J=8.8Hz),7.74(d,1H,J=16.0Hz)。
化合物1m即是化合物1b的前体也是本发明所要的化合物。
2)化合物1b的制备
向甲基酯1m(5mg,6.6μmole)的甲醇(300μl)溶液内加入1NNaOH(100μl)。室温搅拌混合物1.5小时并用乙酸乙酯提取。减压浓缩提取液。残留物用硅色谱纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/乙酸/水，30∶1∶1)，得到化合物1b(3.5mg，产率73％)。
3)化合物1C的制备
向上述制备的化合物1b(21.9mg,0.03mmole)的水(1.2ml)悬浮液内加入0.1NNaOH(600μl)并将所得溶液冻干，得到二钠盐(化合物1C)(21.5mg，产率93％)。
                   实施例2
化合物(Ⅰ)(R1=H；R2=H)的制备
Figure A9810922700161
1)制备2-氨基-5-羟基化合物(1)的另一种方法
ⅰ)醛(Ⅲ)的制备
按照E.Georgavakis等人在Helv.Chim.Acta.,62:234(1979)中所述方法，制得粗2-氨基-5-羟基苯甲醛。将由吲唑所制得的2-氨基-5-羟基苯甲醛(400mg,3.39mmole)溶于乙酸乙酯(约100ml)内。向此溶液内加入三乙胺(2.36g)。二碳酸二叔丁酯(di-tert-butyldicarbonate)((Boc)2O)(37g)和催化量二甲氨基吡啶(DMAP)。混合物于室温搅拌1小时，用氯仿提取并通过硅胶色谱纯化(正-己烷/乙酸乙酯，4∶1)，得到醛(Ⅲ)(454mg，产率56％)。
醛(Ⅲ):
1H NMR(CDCl3)δppm:15.6(s,9H),6.65(d,1H,J=8.8Hz),7.12(dd,1H,J=8.8,2.8Hz),7.30(d.1H=,J=2.8Hz),9.82(s,1H).
ⅱ)羟保护基的胺(Ⅵ)的制备
向化合物(Ⅴ)(294mg,0.47mmole)和上述制备的醛(Ⅲ)(135mg,1.2eq)的异丙醇(4ml)溶液内加入碳酸铯(618mg,4eq)。将混合物室温搅拌1.5小时，用乙酸乙酯提取，并浓缩。残留物通过利用硅胶色谱纯化(己烷/乙酸乙酯，1∶1)，得到缩合产物(Ⅵ)(350mg，产率93％)。
化合物(Ⅵ)：
1H NMR(CDCl3)δppm:0.83(s,3H),0.86(s,3H),0.93(s,3H),1.03(s,3H),1.03(s,3H),1.08(s,3H),1.57(s,9H),1.1-2.1(m,20H),2.2-2.6(m,2H),2.8-3.0(m,1H),4.12,4.42(ABq,2H,J=11.8Hz),5.64(br,s,1H),6.25(d,1H,J=15.6Hz),6.76(d,1H,J=9.0Hz),7.04(dd,1H,J=9.0,2.6Hz),7.20(d,1H,J=2.6Hz),7.75(d,1H,J=15.6Hz).
ⅲ)脱保护制备胺1a
向化合物(Ⅵ)(330mg 0.45mmole)的苯甲醚(3ml)溶液内加入三氟乙酸(3.0ml)。将混合物室温搅拌2小时并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱纯化(乙酸乙酯)，得到化合物1a(210mg，产率74％)。
               实施例3
Figure A9810922700181
1a→1d,1g,1h,1e,1k,1i,1m
利用实施例2中所制的化合物1a作原料制得化合物1b-1e,1g-1i及1k。化合物   R1         R2
   1b      H    COCH=CHCOOH(trans)
   1c      Na   COCH=CHCOONa(trans)
   1d      H    COCH=CHCOOH(cis)
   1g      H    COCOOH
   1h      H    COCH2COOH
   1e      H    CO(CH)2CCOOH
   1i      H    CO(CH2)3COOH
   1k      H    SO3H
1)化合物1b的制备
ⅰ)于-78℃向化合物1a(10mg)的二氯甲烷(150μl)溶液内加入吡啶(13μl)，然后加入3-乙氧羰基丙烯酰氯(32μl,2eq.)。室温搅拌反应混合物1小时并用乙酸乙酯提取。将提取液减压浓缩。残留物通过硅胶色谱纯化(氯仿/甲醇，50∶1)，得到化合物(Ⅶ)(7.2mg，产率60％)。
化合物Ⅶ)
1H NMR(CDCl3+CD3OD)δppm:0.82(s,3H),0.86(s,3H),0.93(s,3H),1.04(s,6H),1.06(s,3H),1.34(t,3H,J=7.2Hz)1.1-2.1(m,20H),2.2-2.7(m,2H),2.8-3.0(m,1H),4.28(q,2H,J=7.2Hz),4.15,4.40(ABq,2H,J=13.2Hz),5.61(br,s,1H),6.24(d,1H,J=15.8Hz),6.89(dd,1H,8.6,2.8Hz),6.94(d,1H,J=15.4Hz),7.05(d,1H,J=2.8Hz),7.20(d,1H,J=15.4Hz),7.47(d,1H,J=8.6Hz),7.74(d,1H,J=15.8Hz).
ⅱ)向乙基酯(Ⅶ)(5mg,6.6μmole)的甲醇(300μl)溶液内加入lNNaOH(100μl)。将混合物室温搅拌1.5小时并用乙酸乙酯提取，减压浓缩提取液。残留物经硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/乙酸/水，30∶1∶1)，得到化合物1b(3.5mg,73％)。
2)化合物1c的制备
向上述1)中所制的化合物1b(21.9mg,0.03mmole)的水(1.2ml)悬浮液内加入0.1NNaOH(600μl)并将所得溶液冻干，得到二钠盐1c(21.5mg，产率93％)。
3)化合物1d的制备
0℃及氮气氛中向化合物1a(3.2mg,0.005mmole)的二氯甲烷(0.2ml)悬浮液内加入马来酐(1.0mg,0.01mmole)和吡啶(0.8μl,0.01mmole)。混合物室温搅拌1.5小时，用乙酸乙酯稀释并倾入冰冷却的1NHCl中。分出有机层并将水层用乙酸乙酯提取。将有机层合并并用盐水洗涤，无水硫酸镁干燥并浓缩。残留物经柱色谱纯化(SiO2，乙酸乙酯→乙酸乙酯/乙酸/水(30∶1∶1)，得到化合物1d(3.32mg，产率91％)。
4)化合物1e的制备
于0℃及氮气氛条件下向化合物1a(3.2mg,0.005mmole)的二氯甲烷(0.2ml)悬浮液内加入琥珀酐(1.0mg,0.01mmole)和吡啶(0.8μ1,0.01mmole)。将混合物溶于DMF(30μl)内并室温搅拌所形成的溶液1小时。加入催化量DMAP后，将混合物室温搅拌1小时，用乙酸乙酯稀释并倾入冰冷的1NHCl中。分出有机层并将水层用乙酸乙酯提取。各有机层用盐水洗涤，无水硫酸镁干燥并浓缩。残余物经柱色谱纯化(SiO2，乙酸乙酯→乙酸乙酯/乙酸/水(30∶1∶1)，得到化合物1e(2.00mg,产率55％)。
5)化合物1g的制备
于-78℃向化合物1a(11.6mg)和吡啶(4.5μl)的二氯甲烷(0.2ml)溶液内加入一甲基草酰氯(1.9μl,1.1eq)。混合物于-40℃搅拌10分钟并提取以及用色谱法纯化，得到化合物1g的甲基酯(8.5mg,64％)。于0℃向此甲基酯(7.4mg)的甲醇(0.3ml)溶液内加入1NNaOH(0.15ml)并搅拌混合物2小时。提取反应混合物并利用色谱法纯化，得到化合物1g(30mg,41％)。
6)化合物1h的制备
ⅰ)向化合物1a(6.3mg,0.01mmole)的二氯甲烷(0.3ml)悬浮液内加入DMF(30μl)得到一溶液。于-50℃及氮气氛条件下向此溶液内加入吡啶(1.2μl,0.015mmole)和1M乙氧羰基乙酰氯的二氯甲烷溶液(11μl,0.011mmole)。于-50℃搅拌5分钟后，混合物用乙酸乙酯稀释并倾入冰冷却的1NHCl中。分出有机层并将水层用乙酯乙酯提取。各有机层用盐水洗涤。无水硫酸镁干燥并浓缩。残留物和柱色谱纯化(SiO2，乙酸乙酯/正己烷(2∶1)→乙酸乙酯)，得到化合物1h的乙基酯(4.0mg，产率54％)。
1H NMR(CDCl3)δppm:0.81(s,3H),0.87(s,3H),0.94(s,3H),1.03(s,6H),1.07(s,3H),1.34(t,J=7.0Hz,3H),1.0-2.1(m,20H),2.2-2.6(m,2H),2.8-3.0(m,1H),3.54(s,2H),4.30(q,J=7.0Hz,2H),4.18(ABq,A部分,J=13.3Hz,1H),4.39(ABq,B部分，J=13.3Hz,1H),6.28(d,J=15.8Hz,1H),6.82(dd,J=2.6Hz,8.8Hz,1H),6.99(d,J=1.6Hz,1H),7.39(d,J=8.8Hz,1H),7.75(d,J=15.2Hz,1H).
ⅱ)于0℃及氮氛条件下向上述ⅰ)所制备的乙基酯(4.0mg,0.00536mmole)的甲醇(100μl)溶液中加入2NNaOH(50μl,0.10mmole)。混合物于0℃搅拌30分钟，用乙酸乙酯稀释并倒入冰冷却的1NHCl中。分出有机层并将水层用乙酸乙酯提取。各有机层用盐水洗涤，无水硫酸镁干燥并浓缩。残留物用柱色谱纯化(SiO2，氯仿/甲醇(50∶1→10∶1)→乙酸乙酯→乙酸乙酯/乙酸/水(30∶1∶1))，得到化合物1h(1.9mg，产率50％)。
7)化合物1i的制备
于0℃及氮气氛下向化合物1a(5.0mg 0.0079mmole)的DMF(50μ1)溶液内加入吡啶(1.3μl,0.0158mmole)和戊二酸酐(1.4mg,0.0119mmole)。室温搅拌16小时后，混合物用乙酸乙酯稀释并颂入冰冷却的1NHCl内。分出有机层并将水层用乙酸乙酯提取。各有机层用盐水洗涤，无水硫酸镁干燥并浓缩。残留物经柱色谱纯化(SiO2、氯仿/甲醇(50∶1)→(20∶1)→(10∶1)→(6∶1))得到化合物1i(3.0mg,51％)。
8)化合物1K的制备
室温和氮气条件下向化合物1a(29.5mg 0.0167mmole)的DMF(0.5ml)溶液内加入三氧化硫和三甲胺的配合物(32.5mg,0.233mmole)。室温搅拌50分钟后，将混合物浓缩并利用柱色谱纯化(SiO2，乙酸乙酯/乙酸/水(30∶1∶1)→(15∶1∶1)→(8∶1∶1)→(4∶1∶1))，得到化合物1K(4.42mg，产率13％)。
                     实施例4
制备化合物1n(R1=H；R2=CH2COOH)
化合物1n可基本上按类似于实施例2所述的方法制备。
1)制备醛
ⅰ)向吲唑(1.0g,8.3mM)的甲醇(10μl)溶液内加入28％甲醇钠的甲醇溶液(3.53ml,18.26mmole)和溴乙酸(1.41g,9.96mmole)，并将混合物加热回流2小时。待再加入等量甲醇钠和溴乙酸后，将混合物再加热回流1小时。将加入步骤再重复两次并将混合物冷至0℃。待加入乙酸乙酯后，混合物用1NHCl调节至pH5。分出有机层并将水层用乙酸乙酯提取。各有机层溶液用盐水洗涤，无水硫酸镁干燥并浓缩。残留物经柱色谱纯化(SiO2，乙酸乙酯→乙酸乙酯/乙酸/水，(40∶1∶1)→(30∶1∶1)→(8∶1∶1))得到1-羧甲基吲唑(487mg，产率33％)。
1H NMR(DMSO)δppm:5.27(s,2H),7.16(dd,J=7.0Hz,J=8.0Hz,1H),7.39(dd,J=7.0Hz,J=8.0Hz,1H),7.64(d,J=8.0Hz,1H),7.77(d,J=8.0Hz,1H),8.09(s,1H)。
ⅱ)向1-羧甲基吲唑(236mg,1.34mmole)的THF(2ml)溶液内加入重氮甲烷的乙醚溶液，直到淡黄色不再逐渐消失为止。浓缩该溶液并将残留物通过柱色谱纯化(SiO2，乙酸乙酯/己烷，(1∶3)→(1∶2))，得到1-甲氧羰基甲基吲唑(182mg，产率71％)。
1H NMR(CDCl3)δppm:3.75(s,3H),5.18(s,2H),7.19(ddd,J=1.0Hz,J=6.0Hz,J=8.0Hz,1H),7.34(dd,J=1.0Hz,J=8.0Hz,1H),7.43(ddd,J=1,0Hz,J=6.0Hz,J=8.0Hz,1H),7.76(dd,J=1.0Hz,J=8.0Hz,1H),8.07(s,1H).
ⅲ)在一石英光敏装置内将1-甲氧羰甲基吲唑(100mg,0.526mmole)溶于二噁烷(2ml)内并用0.1N硫酸(200ml)稀释。待向溶液内鼓入氮气20分钟后，将反应混合物冷至0℃，并用高压汞灯(450瓦)照射20分钟，用乙酸乙酯提取(×2)。乙酸乙酯提取液用盐水洗涤，无水硫酸镁干燥并浓缩，得到5-羟基-2-甲氧羰基甲氨基苯甲醛(大约8g)。
1H NMR(CDCl3)δppm:3.79(s,3H),4.03(s,2H),6.49(d,J=9.6Hz,1H),7.02(d,J=2.8Hz,1H),7.02(dd,J=2.8Hz,J=9.6Hz,1H),9.80(s,1H).
ⅳ)0℃氮气氛下向上述ⅲ)所制的粗产物的乙酸乙酯溶液内加入吡啶(85μl,1.05mmole)和乙酐(55μl,0.579mmole)。待0℃搅拌1小时及室温搅拌15分钟后，向混合物内加入吡啶(425μl,5.25mmole)和乙酐(55μl,0.579mmole)。将混合物室温搅拌20分钟，再加入吡啶425μl,5.25mmole)和乙酐(99μl,105mmole)并继续在室温下搅拌1小时。将反应混合物倾入冰冷却的1NHCl中并用乙酸乙酯提取。有机溶液用盐水洗涤，无水硫酸镁干燥并浓缩。残留物利用柱色谱纯化(SiO2；乙酸乙酯/二氯甲烷，1∶9)，得到5-乙酰氧基-2-甲氧羰基甲苯甲醛(89mg，产率67％)。
1H NMR(CDCl3)δppm:2.30(s,3H),3.80(s,3H),4.04(s,2H),6.55(d,J=9.0Hz,1H),7.16(dd,J=2.6Hz,J=9.0Hz,1H),7.28(d,J=2.6Hz,1H),8.63(br,s,1H),9.82(s,1H).
ⅴ)室温及氮气氛下向上述醛(6.0mg,0.024mmole)的DMF(0.2ml)溶液加入合物(ⅴ)(12.4mg,0.02mmole),DBU(12.0μl,0.08mmole)和氯化锂(3.4mg,0.08mmole)并将混合物室温搅拌1小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并倾入到冰冷却的1NHCl内。分出有机溶液并将水层用乙酸乙酯提取。各有机层用盐水洗涤，硫酸镁干燥并浓缩。残留物经用柱色谱纯化(SiO2；氯仿→氯仿/甲醇，(100∶1)→(50∶1))得到加成产物(即，化合物1n的甲基酯，R=CHCO2Me)(10.5mg，产率70％)。
1H NMR(CDCl3)δppm:0.83(s,3H),0.87(s,3H),0.94(s,1H),1.02(s,3H),1.03(s,3H),1.08(s,3H),1.0-2.1(m,20H),2.29(s,3H),2.2-2.6(m,2H),2.8-3 0(m,1H),3.80(s,3H),3.94(s,2H),4.13(ABq,A部分，J=12.6Hz,1H),4.43(ABq,B部分，J=12.6Hz,1H),5.69(br s,1H),6.27(d,J=15.6Hz,1H),6.54(d,J=8.8H,1H),7.01(dd,J=2.7Hz,J=8.8Hz,1H),7.11(d,J=2.7Hz,1H),7.76(d,J=15.6Hz,1H).
ⅵ)0℃及氮气氛下向上步骤所制化合物(9.7mg,0.013mmole)的甲醇(200μl)溶液内加入2NNaOH(100μl,0.20mmole)。0℃搅拌1小时后，混合物用乙酸乙酯稀释并用1NHCl酸化。分出有机层并将水层用乙酸乙酯提取。各有机层用盐水洗涤，无水硫酸镁干燥并浓缩。残留物经用柱色谱纯化(SiO2；氯仿/甲醇(50∶1)→(20∶1)→乙酸乙酯→乙酸乙酯/乙酸/水(30∶1∶1))得到化合物1n(5.4mg，产率60％)。
上述实施例中所制的化合物(Ⅰ)的光谱数据总结如下。
化合物1a：
Rf:0.35(己烷/乙酸乙酯；1∶1).
1H NMR(CD3OD)δppm:0.87(s,3H),0.89(s,3H),0.95(s,3H),1.04(s,3H),1.07(s,6H),1.1-2.1(m,20H),2.3-2.6(m,2H),2.9-3.1(m,1H),4.15,4.50(ABq,2H,J=12.6Hz),5.63(br s,1H),6.22(d,1H,J=15.8Hz),6.70(d,1H,J=1.5H),6.84(t,1H,J=1.5Hz),7.86(d,1H,J=15.8Hz).
化合物1b：
Rf:0.65(乙酸乙酯/乙酸/水；30∶1∶1).
1H NMR(CD3OD)δppm:0.85(s,3H),0.87(s,3H),0.94(s,J=3H),1.03(s,6H),1.05(s,3H),1.1-2.0(m,20H),2.3-2.6(m,2H),2.8-3.0(m,1H),4.11,4.49(ABq,2H,J=12.6Hz),5.59(br,s,1H),6.36(d,1H,J=16.0Hz),6.84(d,1H,J=15.6Hz),6.89(dd,1H,J=8.6,2.6Hz),7.12(d,1H,J=2.6Hz),7.14(d,1H,J=8.6Hz),7.20(d,1H,J=15.6Hz),7.66(d,1H,J=16.0Hz).
化合物1c:
1H NMRδppm(D2O)DSS(Me3SiCH2CH2CH2SO3Na)标准，0.73(s,3H),0.80(s,3H),0.87(s,3H),0.97(s,3H),1.00(s,6H),1.1-2.0(m,20H),2.2-2.6(m,2H),2.7-3.0(m,1H),4.05,4.41(ABq,2H.,J=12.4Hz),5.58(br,s,1H),6.34(d,1H,J=16.0Hz),6.87,6.92(ABq,2H,J=16.0Hz),7.00(dd,1H,J=8.6,2.0Hz),7.19(d,1H,J=8.6Hz),7.21(d,1H,J=2.0Hz),7.58(d,1H,J=16.0Hz).
化合物1d：
Rf:0.67(乙酸乙酯/乙酸/水；30∶1∶1).
1H NMR(CD3OD)δppm:0.85(s,3H),0.87(s,3H),0.95(s,3H),1.03(s,3H),1.05(s,6H),1.0-2.0(m,20H),2.2-2.6(m,2H),2.8-3.0(m,1H),4.12(ABq,A部分，J=12.5Hz,1H),4.48(ABq,B部分，J=12.5Hz,1H),5.62(br,s,1H),6.35(d,J=15.8Hz,1H),6.40(d,J=12.4Hz,1Hz),6.49(d,J=12.4Hz,1H),6.88(dd,J=2.8Hz,J=8.8Hz,1H),7.11(d,J=2.8Hz,1H),7.21(d,J=8.8Hz,1H),7.71(d,J=15.8Hz,1H).
化合物1e：
Rf:0.75(乙酸乙酯/乙酸/水；30∶1∶1).
1H NMR(CD3OD)δppm:0.86(s,3H),0.89(s,3H),0.95(s,3H),1.03(s,3H),1.06(s,6H),1.0-2.6(m,24H),2.6-2.8(m,2H),2.8-3.0(m,1H),4.15(ABq,A部分，J=12.9Hz,1H),4.50(ABq,B部分，J=12.9Hz,1H),5.63(br,s,1H),6.33(d,J=15.8Hz,1H),6.85(dd,J=2.6Hz,J=8.8Hz,1H),7.07(d,J=2.6Hz,1H),7.12(d,J=8.8Hz,1H),7.72(d,J=15.8Hz,1H).
化合物1g:
Rf:0.4(乙酸乙酯/己酸/水；15∶1∶1).
1H NMR(CDCl3)δppm:0.85(s,6H),0.93(s,3H),1.02(s,6H),1.06(s,3H),1.1-2.1(m,20H),2.8-3.1(m,1H),4.0-4.4(m,2H),5.60(br,s,1H),6.38(d,1H,J=16.0Hz),6.8-7.0(m,1H),7.11(br s,1H),7.4-7.5(m,1H),7.79(d,1H,J=16.0Hz).
化合物1h:
Rf:0.57(乙酸乙酯/乙酸/水；30∶1∶1)
1H NMR(CD3OD)δppm:0.86(s,3H),0.89(s,3H),0.90(s,3H),0.96(s,3H),1.03(s,3H),1.06(s,3H),1.0-2.1(m,20H),2.2-2.6(m,2H),2.9-3.1(m,1H),3.40(s,2H),4.14(ABq,A部分，J=12.0Hz,1H),4.50(ABq,B部分，J=12.0Hz,1H),5.63(br,s,1H),6.34(d,J=16.0Hz,1H),6.86(dd,J=2.6Hz,J=8.8Hz,1H),7.08(d,J=2.6Hz,1H),7.21(d,J=8.8Hz,1H),7.76(d,J=10.0Hz,1H).
化合物1i:
Rf:0.18(氯仿/甲醇；6∶1)
1H NMR(CD3OD)δppm:0.86(s,3H),0.91(s,3H),0.96(s,3H),1.03(s,3H),1.05(s,6H),1.0-2.1(m,22H),2.2-2.6(m,6H),2.9-3.1(m,1H),4.15(ABq,A部分，J=12.5Hz,1H),4.50(ABq,B部分，J=12.5Hz,1H),5.63(br,s,1H),6.33(d,J=15.8Hz,1H),6.86(dd,J=2.6Hz,J=8.8Hz,1H),7.09(d,J=2.6Hz,1H),7.09(d,J=8.8Hz,1H),7.70(d,J=15.8Hz,1H).
化合物1k：
Rf:0.29(乙酸乙酯/乙酸/水；8∶1∶1)
1H NMR(CD3OD)δppm:0.86(s,3H),0.89(s,3H),0.95(s,3H),1.03(s,3H),1.05(s,3H),1.07(s,3H),1.0-2.1(m,20H),2.3-2.5(m,2H),2.9-3.1(m,1H),4.15(ABq,A部分，J=12.6Hz,1H),4.46(ABq,B部分，J=12.6Hz,1H),5.68(br,s,1H),6 28(d,J=16.0Hz,1H),6.81(dd,J=2.6Hz,J=8.8Hz,1H),7.00(d,J=2.6Hz,1H),7.40(d,J=8.8Hz,1H),8.16(d,J=16.0Hz,1H).
化合物1n：
Rf:0.78(乙酸乙酯/乙酸/水，30∶1∶1)
1H NMR(CD3OD)δppm:0.86(s,3H),0.89(s,3H),0.95(s,3H),1.03(s,3H),1.05(s,3H),1.06(s,3H),1.0-2.1(m,20H),2.2-2.6(m,2H),2.9-3.1(m,1H),3.80(s,2H),4.15(ABq,A部分，J=13.1Hz,1H),4.49(ABq,B部分，J=13.1Hz,1H),5.67(br,s,1H),6.26(d,J=15.8Hz,1H),6.56(d,J=8.7Hz,1H),6.78(dd,J=2.7Hz,J=8.7Hz,1H),6.88(d,J=2.7Hz,1H),7.89(d,J=15.8Hz,1H).
利用下述试验实施例所述方法评估本发明化合物(Ⅰ)的内皮素受体拮抗效应。使用公开于WO/92/12991(实施例1)中的化合物(50-235)作为对照物。
                   试验1
对125I-内皮素-1与其受体结合的抑制效应
在有或无本发明化合物(Ⅰ)存在下将取自大鼠主动脉的平滑肌A7r5细胞在37℃用25PM125I-内皮素-1培养1小时。待反应完成之后，通过玻璃纤维滤器过滤分离膜部分结合的125I-内皮素-1并用伽马计数器测定其放射性。通过从总结合中减去在10-7M非放射性内皮素-1存在下所测的非特异性结合计算特异性结合。到抑制50％内皮素-1与其受体特异性结合所需要的化合物(Ⅰ)的浓度(nM)(即IC50)列于下表1中。
                      试验2
抑制内皮素-1诱导的细胞溶质钙离子浓度增大
向小杯内放入已载有2μMfura-2(Dojin)的大鼠主动脉平滑肌A7r5细胞悬浮液(Dainippon Pharmaceutical Co.,Ltd)。利用钙分析仪(CAF100,Nippon Bunhkou Co.)测定荧光强度的变化。在测定中于340mn和380nm进行激发并于510nm处记录。按照Grynkiewicz等在J.Biol.Chem.,260,pp.3440-3450,1985中所述方法计算细胞溶质钙离子浓度。
该试验通过下述步骤进行：向小杯内的细胞悬浮液中加入本发明化合物(Ⅰ)，培养1分钟，加入10-8M内皮素-1，测量荧光强度的变化。达到抑制50％内皮素-1诱导的细胞溶质钙离子浓度的增大所需化合物(Ⅰ)的浓度(nM)(即IC50)见下表1所示。
                         表1
Figure A9810922700271
活性数据IC50(nM)
化合物   (Ca2+)     结合     R2
    1a     4.5     24     H
    1b     2.6     0.5     COCH=CHCOOH(trans)
    1c     2.6     0.7     COCH=CHCOONa(t)a)
    1d     3.0     3.4     COCH=CHCOOH(Cis)
    1n     3.0     3.0     CH2COOH
    1g     2.5     1.8     COCOOH
    1h     5.6     9.0     COCH2COOH
    1e     3.5     3.6     CO(CH2)2COOH
    1i     4.6     6.6     CO(CH2)3COOH
    1m     2.7     5.0     COCH=CHCOOMe(t)
    1k     2.8     2.9     SO3H
   50-235b)     10     76
a:R1=Na
b：
Figure A9810922700281
                          实验3
在分离的大鼠胸主动脉内抑制内皮素-1诱导的收缩
在37℃同时通入混合气体(95％O2+5％CO2)下将分离自大鼠胸主动脉的模Stip样品悬浮于改性的Locke-Ringer溶液内，并记录等长张力。本试验中使用取自每个大鼠的四块样品。这样在测量等长张力之前将三块样品用不同浓度的化合物1C(二钠盐；实施实施例1或3中所制)(10-8M,3×10-8M，和10-7M)处理10分钟并将所余的一块样品不进行处理。测量后，画出内皮素-1浓度-收缩曲线，该曲线表明化合物1C能将浓度-收缩曲线整理成浓度-依赖方式，且PA2值为8.8。
                    实验4
在被刺毁脑脊髓大鼠内抑制内皮素-1诱导的高血压
在乙醚麻醉下将不锈钢杆(直径：2mm)从右眼眶插入到大鼠的脊柱尾端。将所产生的被刺毁脑脊髓的大鼠置于人工呼吸状态并记录血压变化。静脉给药(内皮素-1和实施例1或3中所制化合物1C)。化合物1C在剂量为0.01和1mg/kg之间能够以剂量依赖方式降低血压。
如上所述，本发明化合物(Ⅰ)能与内皮素竞争其受体并因而能特异性地抑制内皮素的生物活性。因此，本发明化合物(Ⅰ)能用于预防和治疗由内皮素过量分泌所造成的疾病如高血压，心肌缺血，脑病，肾病，各种的器官的循环衰竭，以及哮喘。

Claims (2)

1．式(Ⅲ)的化合物或其药学上可接受的盐其中R2为氢或-R3-R4，其中R3代表-SO3-,-CH2COO-,-COCOO-，或-COR5COO-，R5代表低级亚烷基或低级亚链烯基；R4为氢或低级烷基，和R6为叔丁氧羰基或氢。
2．根据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为-COR5COO-；
R5为-CH=CH-和R6为氢。
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