CN117736307B - 一种能够促进iii型和iv型胶原蛋白分泌的iii型小分子胶原蛋白肽及其制备方法 - Google Patents
一种能够促进iii型和iv型胶原蛋白分泌的iii型小分子胶原蛋白肽及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117736307B CN117736307B CN202410182043.XA CN202410182043A CN117736307B CN 117736307 B CN117736307 B CN 117736307B CN 202410182043 A CN202410182043 A CN 202410182043A CN 117736307 B CN117736307 B CN 117736307B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- collagen peptide
- iii
- type
- skin
- protease
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 63
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 51
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 51
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 51
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 title claims abstract description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 title abstract description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 title abstract description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 244000144972 livestock Species 0.000 claims abstract description 16
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 53
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 39
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 39
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 39
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 30
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 30
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 28
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 18
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 claims description 14
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 14
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 14
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 claims description 13
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 13
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 13
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 13
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 12
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 12
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 12
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 10
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 claims description 8
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 claims description 8
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 8
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 6
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 5
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 5
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 claims description 4
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 4
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 4
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 3
- 238000011027 product recovery Methods 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 33
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 27
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 14
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 11
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 9
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 7
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 6
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 6
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 3
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 3
- 239000002826 coolant Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 3
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 3
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 2
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 2
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 1
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 1
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000015860 Hyaluronidase-3 Human genes 0.000 description 1
- 108050004076 Hyaluronidase-3 Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 101150098499 III gene Proteins 0.000 description 1
- 101150031639 IV gene Proteins 0.000 description 1
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 1
- 206010033474 Pain of skin Diseases 0.000 description 1
- 206010033546 Pallor Diseases 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 description 1
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000010523 cascade reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000004134 energy conservation Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 108010007119 flavourzyme Proteins 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 238000002514 liquid chromatography mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 102220013334 rs368367224 Human genes 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 229940054967 vanquish Drugs 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供一种能够促进III型和IV型胶原蛋白分泌的III型小分子胶原蛋白肽及其制备方法，属于小分子蛋白肽领域。本发明III型小分子胶原蛋白肽的制备方法包括畜禽皮前处理、使用组合酶对畜禽皮进行酶解等步骤。所述的III型小分子胶原蛋白肽可以包括SEQ ID NO.1‑8所示的氨基酸序列中的任意一种或多种。本发明的制备方法生产周期短，所得产品颜色气味好、产品回收率高、含有III型小分子胶原蛋白肽的含量高且具有特定的序列。
Description
技术领域
本发明属于小分子蛋白肽领域，具体涉及一种能够促进III型和IV型胶原蛋白分泌的III型小分子胶原蛋白肽及其制备方法。
背景技术
Ⅲ型胶原蛋白主要存在于婴幼儿皮肤中，是大血管、子宫、肠道等中空器官的主要结构成分，除了作为细胞外基质蛋白，维持皮肤和组织器官的形态和结构，Ⅲ型胶原蛋白还在凝血级联反应中与血小板相互作用，同时也是伤口愈合的重要信号分子。Ⅲ型胶原纤维较细小，用于支撑皮肤柔嫩度，使皮肤细腻和富有弹性。含量越高，越能使皮肤细腻柔嫩，创伤后III型胶原蛋白可以更好地让伤口恢复，不容易留疤痕。
目前市场化销售的可以口服的产品主要是Ⅰ型胶原蛋白肽和Ⅱ型胶原蛋白肽，如公开号为CN116463388A的中国专利中公开了一种水解II型胶原蛋白肽粉的提取方法，所述提取方法包括预处理、脱脂处理、酶解、等电点沉淀和纯化的步骤，该方法有效提高水解度和羟脯氨酸提取率，制备出II型胶原蛋白其等电点在点4.4-6.2范围可调节，使胶原蛋白具有三螺旋结构，制得的水解II型胶原蛋白中蛋白质和硫酸软骨素(干基)含量较高，粗脂肪含量较低。公开号为CN104140992A的中国专利中公开了一种鱼鳞Ⅰ型胶原蛋白肽的规模化制备方法。其以海洋鱼类鱼鳞或淡水鱼类鱼鳞为原料，经碱、酸预处理除杂后，采用一步生物酶解技术直接将鱼鳞中Ⅰ型胶原蛋白定向酶解成分子量分布较为集中的Ⅰ型胶原蛋白肽，再利用连续离心分离协同膜分离技术在常温下对定向酶液分离、纯化和浓缩，得到纯度≥95%，分子量在1000道尔顿以下的鱼鳞Ⅰ型胶原蛋白肽溶液，最后利用喷雾干燥技术快速干燥成品。该方法流程整体简单可行，高效节能，生产周期短，适合大规模生产；生产出来的鱼鳞Ⅰ型胶原蛋白肽产品的纯度高，质量好，其分子量低于1000道尔顿的肽含量达到97%以上。
重组类人源Ⅲ型胶原蛋白多在医美外用行业应用，但可以口服的Ⅲ型胶原蛋白肽产品尚未出现，对于其制备方法有进一步探究的空间。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的在于制备一种可以口服的且含有特定序列的III型小分子胶原蛋白肽的多肽产品，其含有能有促进III型和IV型胶原蛋白分泌的III型小分子胶原蛋白肽。
具体地，本发明提供了一种III型小分子胶原蛋白肽的制备方法。
所述的制备方法中包括以下步骤：
（1）畜禽皮前处理，依次包括：第一次水洗、氯化钠溶液浸泡、氢氧化钠溶液浸泡、第二次水洗；所述的第二次水洗中调节pH和电导率；
（2）步骤（1）处理后畜禽皮使用组合酶酶解，酶解液过滤得清液；
（3）步骤（2）所得清液脱色、过滤、水交换至固形物为0、纳滤得高浓度溶液；
（4）步骤（3）所得高浓度溶液灭菌、干燥得粗粉；
（5）步骤（4）所得粗粉超微粉碎，过筛得成品，即所述III型小分子胶原蛋白肽；
步骤（1）中，优选地，所述的畜禽皮可以为牛皮、猪皮、鸡皮、兔皮中的一种或几种；优选地，为畜禽年龄在180天以内的畜禽皮中的一种或几种。
步骤（1）中所述的第一次水洗和第二次水洗中物料与水的质量比为1：4-5；所述的第一次水洗使用自来水；所述的第二次水洗使用纯化水，第二次水洗时进行搅拌；
步骤（1）中所述的氯化钠溶液的质量分数为1%-2%，氯化钠溶液浸泡时间为1-2h；所述的氢氧化钠溶液的质量分数为2%-3%，氢氧化钠溶液浸泡时间为2-3h；
步骤（1）中所述的pH为6-7，电导率为230-260us/cm。
优选地，所述的pH调节使用盐酸调节，可以是质量分数5%-10%的盐酸。
步骤（1）中所述的所述的畜禽皮前处理还可以包括：去除头部腿部皮毛，剃毛或脱毛，切块。优选地，所述的畜禽皮是物理方法去毛：如热烫或者电动剃毛。
优选地，所述的切块可以是1-3cm*1-3cm的小块，进一步优选可以是2cm*2cm的小块。
优选地，步骤（1）中第一次水洗的自来水的温度为15-25℃，目的在于清洗附着于兔皮原料表面的杂物质，清洗次数优选为1-3次，实际以洗净为准；第二次水洗次数为3-8次，目的在于清洗浸泡过程中的附着物，一般第二次水洗时采用搅拌式，如可以采用搅拌电机，搅拌时间控制在5-15min，搅拌电机可以是20-30Hz。
优选地，所述的步骤（1）中第一次水洗中物料与水的质量比为1：4；第二次水洗中物料与水的质量比为1：5。
具体地，步骤（2）中：
所述的组合酶由以下酶组成：地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶、枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶和黑曲霉来源的蛋白酶。
优选地，所述的地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶为：碱性蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶为：碱性蛋白酶或中性蛋白酶；黑曲霉来源的蛋白酶为风味蛋白酶。
优选地，以重量计，所述的地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶为20-80：60-80：1.5-3。
进一步优选地，以重量计，所述的地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶为20：60：1.5。
优选地，所述的组合酶的添加量为兔皮重量的0.815%-1.615%。
进一步优选地，所述的组合酶的添加量为兔皮重量的0.815%。
具体地，所述的酶解条件包括pH6-8，50-60℃酶解2-4h，升温至80-85℃，保温10-15min，降温至50-55℃。
在一些具体的实施例中，所述的步骤（2）可以包括：
将步骤（1）的物料（前处理后的畜禽皮）输送到提取罐中，加入5倍的低温纯化水（＜20℃），然后升温到70-80℃，保持20-40min，板换降温到50-60℃，调节pH6-8，分别加入地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶，酶解后酶解液经过滤筛，过滤掉残留毛发和杂质。
所述的过滤筛可以包括：
三角筛网：上缝隙1-3mm，下缝隙0.1-0.5mm；60-80目方形振动筛。
具体地，步骤（3）中：
所述的脱色可以是活性炭脱色，所述的活性炭为固形物干重3%-5%的活性炭。
所述的过滤为旋转错流膜过滤。
优选地，所述的旋转错流膜过滤采用的错流过滤膜为20-50nm，优选为30nm；过滤压力为0.2-0.3MPa，优选为0.2MPa。所述的过滤后溶液澄清透亮。
所述的水交换固形物使用50-70℃的水。
所述的纳滤目的在于去除钠离子，优选可以使用科式纳滤膜，所述的科式纳滤膜截留分子量优选为80-100KDa。纳滤压力为1.2-1.3MPa。
所述的高浓度溶液为固形物30%-35%的透亮的高浓度Ⅲ型胶原蛋白肽溶液。5%固形物电导率为450-560us/cm。
具体地，步骤（4）中：
所述的的灭菌为脉冲强光灭菌，干燥为真空带式干燥。
所述的脉冲强光灭菌流速600-800L/h，光照一次15-20J，闪照50-60次。
所述的真空带式干燥真空度-0.1MPa。
所述的真空带式干燥可以采用三段式加热，如：Ⅰ段温度70-80℃，Ⅱ段温度60-70℃，Ⅲ段温度40-60℃。进料速度可以是700-800L/h，喷枪喷嘴直径可以是1.6-2.0mm，受热时间总时间可以是60-80min，最终得到水分含量5%-7%的粗粉，如水分含量5.8%-6.3%的粗粉。所述的真空带式干燥中还可以包括过筛，如通过机器自带10-20目筛网。
具体地，步骤（5）中：
所述的超微粉碎冷却介质-10℃~0℃，粉碎时间：10-120min，优选10-15min。
所述的过筛过50-300目筛网，优选50-80目。
对于以上制备方法中各条件的范围值，本领域技术人员知晓，任意方式的组合均能够实现本发明的技术方案，并达到相同的技术效果。本领域技术人员可以根据以上条件进行任意组合以制备相应产品。
本发明同时保护通过前述的制备方法制备的III型小分子胶原蛋白肽。
另一方面，本发明提供了一种III型小分子胶原蛋白肽。
所述的III型小分子胶原蛋白肽中包括特定肽段。
具体地，所述的III型小分子胶原蛋白肽中包括SEQ ID NO.1-8所示的氨基酸序列中的任意一种或多种。
如所述的III型小分子胶原蛋白肽中可以包括：SEQ ID NO.1-8所示的氨基酸序列中的任意1、2、3、4、5、6、7或8种。
优选地，所述的多肽包括以下任一：
（1）SEQ IN NO.1-7；
（2）SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.8；
（3）SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.4；
（4）SEQ ID NO.4；
（5）SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.6。
另一方面，本发明提供了前述的III型小分子胶原蛋白肽在制备口服胶原蛋白肽产品中的应用。
所述的口服胶原蛋白肽产品中还可以包括其他类型的胶原蛋白肽，作为示例如Ⅰ型胶原蛋白肽和/或Ⅱ型胶原蛋白肽。
所述的口服胶原蛋白肽产品中还可以包括其他食品或保健品或药品上常见的辅料，包括但不限于：赋形剂、调味剂、调色剂、酸碱平衡剂、增稠剂等。
本发明同时保护包括前述的III型小分子胶原蛋白肽的口服胶原蛋白肽产品。
本发明的有益效果：
（1）生产周期短、产品颜色气味好、产品回收率高、且含有III型小分子胶原蛋白肽的含量高且具有特定的序列；
（2）首次在利用了旋转错流膜过滤纯化提高了产品的纯度、回收率、亮度以及热稳定性；
（3）首次利用了脉冲强光杀菌代替了膜过滤除菌和高温灭菌，确保了产品的感官和活性；
（4）首次利用真空低温带式干燥制备Ⅲ型胶原蛋白肽，相比传统喷雾干燥降低了产品最高受热温度，耗能仅为喷雾干燥的三分之一，是冷冻产能的10倍以上，且耗能仅为冷冻干燥能耗的四分之一，且整个进料过程产品处于0-5℃低温状态，确保产品活性。
（5）首次利用超微粉碎再次粉碎产品，达到容易吸收的效果。
附图说明
图1为实施例和对比例产品感官颜色对比照片。
图2为实施例和对比例产品耐酸高温实验对比照片。
图3为实验例5人皮肤成纤维细胞中透明质酸基因的相对表达量。
图4为实验例5人皮肤成纤维细胞中Collagen Ⅰ基因的相对表达量。
图5为实验例5人皮肤成纤维细胞中Collagen Ⅲ基因的相对表达量。
图6为实验例5人皮肤成纤维细胞中Collagen IV基因的相对表达量。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
1、70天屠宰新鲜带毛兔皮（国内正规屠宰场采购）1000kg，去掉头部和腿部，用工业剃毛机剃掉毛，去毛后的皮用切条机和切块机切成2cm*2cm的小块，用25℃自来水，物料（原始去毛皮的重量）（kg）：水（kg）=1：4，清洗一次，然后用25℃ 1.5%的氯化钠溶液浸泡1.5h，物料（kg）：食盐水（kg）=1：4，排水后用25℃的2%的氢氧化钠溶液浸泡3h，物料（kg）：氢氧化钠溶液（kg）=1：4，然后纯化水清洗5次，每次搅拌10min，搅拌电机20HZ，物料（kg）：水（kg）=1：5，清洗过程用6%的食品级盐酸调节pH，清洗结束电导率260us/cm，清洗水pH=6.53。
2、将步骤1的物料输送到提取罐中，加入4倍重量的低温纯化水，然后升温到80℃，保持30min，板换降温到55℃，调节pH6.8，分别加入去毛皮重量的市售地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶（诺维信，Alcalase，2.4L FG）：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶（沧州夏盛酶生物技术有限公司，FDG-2202，酶活≥20万u/g）：黑曲霉来源的蛋白酶（沧州夏盛酶生物技术有限公司，FDG-2251，酶活≥5000u/g）0.2%、0.6%、0.015%，酶解2h，然后升温到80℃，保温15min，再降温到55℃经过三角过滤筛（三角筛网上缝隙2mm+下缝隙0.5mm）+80目方形振动筛，过滤掉残留毛发和杂质，清液流入下道工序。
3、在上述清液中加入固形物干重3%的活性炭，脱色40min，然后过30nm错流过滤膜，过滤压力0.2MPa，过滤后得澄清透亮的Ⅲ型胶原蛋白肽溶液，过滤浓液用60℃水置换至固形物为0，将过滤后物料经二级截留分子量为100Da的科氏纳滤膜，去除钠离子且得到固形物35%的透亮的高浓度Ⅲ型胶原蛋白肽溶液（此时5%固形物电导率为450us/cm），纳滤过程压力1.2MPa。
4、将步骤3物料进入脉冲强光杀菌设备，流速800L/h，光照一次20J，闪照60次，输送至储罐，然后利用螺杆泵输送到真空带式干燥机，真空度-0.1MPa，三段式加热，Ⅰ段温度80℃，Ⅱ段温度60℃，Ⅲ段温度40℃，进料速度800L/h，喷枪喷嘴直径2.0mm，受热时间总时间60min，自带粉碎机装10目筛网，最终的到水分含量5.8%的粗粉。
5、将步骤4的粗粉利用超微粉碎进行再次破碎，冷却介质-10℃-0℃，粉碎时间：15min，粉碎后过65目筛网得到成品。
检测成品含量、多肽序列并进行效果验证。
实施例2
1、120天屠宰新鲜带毛小牛皮（国内正规屠宰场采购）1000kg，去掉头部和腿部，用工业剃毛机剃毛后，用切条机和切块机切成2*2cm的小块，用20℃自来水，物料：水=1：4，清洗一次，然后用20℃ 1.5%的氯化钠溶液浸泡1.5h，物料：食盐水=1：4，排水后用20℃的2%的氢氧化钠溶液浸泡3h，物料：氢氧化钠溶液=1：4，然后纯化水清洗5次，每次搅拌10min，搅拌电机20HZ，物料：水=1：5，清洗过程用6%的食品级柠檬酸调节pH，清洗结束电导率230us/cm，清洗水ph=6.38。
2、将步骤1的物料输送到提取罐中，加入5倍的低温纯化水，然后升温到80℃，保持30min，板换降温到55℃，调节pH8.0，分别加入去毛皮重量的市售地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶0.4%、0.6%、0.015%，酶解2h，然后升温到80℃，保温15min，再降温到55℃经过三角过滤筛（三角筛网上缝隙2mm+下缝隙0.5mm）+80目方形振动筛，过滤掉残留毛发和杂质，清液流入下道工序。
3、在上述清液中加入固形物干重5%的活性炭，脱色40min，然后过30nm错流过滤膜，过滤压力0.2MPa，过滤后得澄清透亮的Ⅲ型胶原蛋白肽溶液，过滤浓液用60℃水交换至固形物为0，将过滤后物料二级截留分子量为100Da的科氏纳滤膜，去除钠离子且得到固形物30%的透亮的高浓度Ⅲ型胶原蛋白肽溶液（此时5%固形物电导率为560us/cm），纳滤过程压力1.3MPa。
4、将步骤3物料进入脉冲强光杀菌设备，流速800L/h，光照一次15J，闪照50次，输送储罐，利用螺杆泵输送到真空带式干燥机，真空度-0.1MPa，三段式加热，Ⅰ段温度80℃，Ⅱ段温度60℃，Ⅲ段温度40℃，进料速度 700L/h，喷枪喷嘴直径1.6mm，受热时间总时间60min，自带粉碎机装10目筛网，最终的到水分含量6.3%的粗粉。
5、将步骤4的粗粉利用超微粉碎进行再次破碎，冷却介质-10℃~0℃，粉碎时间：10min，粉碎后过50目筛网得到成品。
实施例3
和实施例1其它步骤相同，原料调整为乳猪皮，第2步酶制剂调整：将步骤1的物料输送到提取罐中，加入5倍的低温纯化水，然后升温到80℃，保持30min，板换降温到55℃，调节pH6.0，分别加入去毛皮重量的市售地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶0.6%、0.6%、0.015%，酶解3h，然后升温到80℃，保温15min，再降温到55℃经过三角过滤筛（三角筛网上缝隙2mm+下缝隙0.5mm）+80目方形振动筛，过滤掉残留毛发和杂质，清液流入下道工序。
实施例4
和实施例1其它步骤相同，原料调整为鸡皮，第2步酶制剂调整：将步骤1的物料输送到提取罐中，加入5倍的低温纯化水，然后升温到80℃，保持30min，板换降温到55℃，调节pH7.5，分别加入去毛皮重量的市售地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶0.8%、0.8%、0.015%，酶解4h，然后升温到80℃，保温15min，再降温到55℃经过三角过滤筛（三角筛网上缝隙2mm+下缝隙0.5mm）+80目方形振动筛，过滤掉残留毛发和杂质，清液流入下道工序。
实施例5
和实施例1其它步骤相同，第2步酶制剂调整：将步骤1的物料输送到提取罐中，加入5倍的低温纯化水，然后升温到80℃，保持30min，板换降温到55℃，调节pH6.0，分别加入去毛皮重量的市售地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：米曲霉来源的蛋白酶0.8%、0.8%、0.03%，酶解4h，然后升温到80℃，保温15min，再降温到55℃经过三角过滤筛（三角筛网上缝隙2mm+下缝隙0.5mm）+80目方形振动筛，过滤掉残留毛发和杂质，清液流入下道工序。
对比例1
所有步骤均和实施例2相同，仅将原料更换为正规屠宰厂购买的18个月龄牛皮为原料。
对比例2
所有步骤均和实施例3相同，仅将原料更换为正规屠宰厂购买的12月龄猪皮为原料。
对比例3
与实施例1步骤1、2、3都相同，步骤4也采用高压脉冲灭菌，然后装盘进行冷冻干燥，冷阱-45℃，40m2冷冻干燥机，冷冻干燥时间36h，出粉240kg，生产效率仅为真空带式干燥和喷雾干燥的三十分之一，生产不可行。
对比例4
与实施例1比较，步骤1只进行剃毛和切块，水洗，其它步骤相同。
实验例1分子量检测
所有实施例和对比例所得产品，利用GB/T 22729的方法进行平均分子量和相对分子量＜10000u的比例检测，检测结果如表1。
表1 平均分子量和不同分子量范围峰面积百分比（%，λ220nm）
实验例2感官检测
感官检测方法如下：
颜色：分别取3g产品放在白纸上观察颜色；
口感：用50℃纯化水将产品溶解成20%进行品尝；
气味：方法一：打开自封袋直接闻气味；方法二：20g粉倒入80g 50℃的瞬间闻气味
感官颜色对比照片见图1。结合图1，对口感气味描述结果见表2：
表2 口感气味描述结果
实验例3耐酸高温实验
耐酸高温实验：按照36g产品+36g纯化水+1.5g柠檬酸，85℃保温40min观察溶液是否有沉淀，以确保产品能应用在口服液中。
耐酸高温实验对比照片（拍照9组）见图2。
从实验结果可以看出：实施例1-5都为透亮，但是发现分子量越小加热之后颜色越深，对比例4因为前处理，高温高酸实验出现浑浊，不适合做口服液，对比例1、2、3也未出沉淀，说明前处理对物料的高温高酸稳定性有很大影响。
实验例4定性测试
Ⅲ型胶原蛋白肽序列(定性)的测试方法：
液相色谱-质谱为美国Thermo Fisher公司Vanquish液相和Orbitrap Exploris480质谱组成；数据采集与处理软件为Xcalibur4.4；
色谱条件：色谱柱：Peptide BEH C18 130Å；流动相：A-水（0.1 %甲酸）；B-60%乙腈（0.1%甲酸）；梯度：0-60min，5-40%B；60-85min，40-90%B；85-98min，90%B；98-100min，90-5%B；100-110min，5%B；流速：0.2mL/min；柱温：60℃；进样量：5µL。质谱条件：ESI电离；喷雾电压：4.5kV；壳气流速：60arb（约400kPa）；扫描范围（m/z）：400-2000；正离子监测模式；二级质谱扫描（MS/MS）均为数据依赖性扫描；二级质谱碰撞能量为35%。
检测结果如下表3：
表3
注：p表示羟脯氨酸。
从以上实施案例可以看出：
所有案例的产品分子量集中在500-3000Da之间，所有产品的相对分子量小于10000u的比例均达到95%以上；
所有实施例具有Ⅲ型特征肽的检出，但实施例1含有的Ⅲ型特征肽段多，且口感最愉悦，回收率最高；
对比例1和2没有检出，说明对于含有Ⅲ型肽生产的原料具有选择性；
对比例3的颜色口感可以，也含有四种Ⅲ型特征肽段，但因为冷冻干燥的生产效率太低，生产成本是实施案例的上百倍，不具有商业价值。
对比例4 虽有Ⅲ型特征肽段检出，但是颜色口感气味难以入口，且高温实验产生浑浊不能用于口服液生产，因此也不具有商业价值。
综合以上各点最优方为实施例1，因此利用实施例1所得产品做后续功效实验。
实验例5荧光定量PCR检测人皮肤成纤维细胞中透明质酸合成酶3、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、IV型胶原蛋白相关基因的表达
将成纤维细胞（广东博溪生物科技有限公司）分别接种至6孔板，移至培养箱（37℃、5%CO2）中孵育24 h，待细胞铺板率达到50%-60%时，换液加样，每孔2 mL，每组设3个复孔，放置于培养箱（37℃、5% CO2）中孵育培养24h。
相关基因检测设置空白对照组、UVA组与样品组（1.0mg/mL Ⅲ型胶原蛋白肽）。除空白对照组外均进行UVA辐照，辐照剂量为30 J/cm2。辐照结束后，放置于培养箱（37℃、5%CO2）中继续培养24 h。每孔用2 mL的PBS清洗两次，加入1 mL RNAiso Plus（日本TaKaRa公司，货号No.9108），吹打裂解细胞后收样。依据试剂盒（日本TaKaRa公司，货号No.RR036A）说明书，开展RNA提取、反转录及荧光定量PCR，检测相关基因（Collagen Ⅰ，Collagen Ⅲ，collagen IV）的表达量，检测引物信息如下：
实验结果及分析：
人皮肤成纤维细胞相关基因的表达实验结果如图3-图6。
结果表明Ⅲ型胶原蛋白肽对UVA损伤的人成纤维细胞中透明质酸、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、Collagen IV等基因表达均有明显促进表达的作用。
Claims (10)
1.一种III型小分子胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）畜禽皮前处理，依次包括：第一次水洗、氯化钠溶液浸泡、氢氧化钠溶液浸泡、第二次水洗；所述的第二次水洗中调节pH和电导率；
（2）步骤（1）处理后畜禽皮使用组合酶酶解，酶解液过滤得清液；
（3）步骤（2）所得清液脱色、过滤、水交换至固形物为0、纳滤得高浓度溶液；
（4）步骤（3）所得高浓度溶液灭菌、干燥得粗粉；
（5）步骤（4）所得粗粉超微粉碎，过筛得成品，即所述III型小分子胶原蛋白肽；
步骤（1）中所述的畜禽皮的来源畜禽年龄在180天以内；所述的畜禽皮选自兔皮、猪皮、牛皮或鸡皮；
步骤（1）中所述的第一次水洗和第二次水洗中物料与水的质量比为1：4-5；所述的第一次水洗使用自来水；所述的第二次水洗使用纯化水，第二次水洗时进行搅拌；
步骤（1）中所述的氯化钠溶液的质量分数为1%-2%，氯化钠溶液浸泡时间为1-2h；所述的氢氧化钠溶液的质量分数为2%-3%，氢氧化钠溶液浸泡时间为2-3h；
步骤（1）中所述的pH为6-7，电导率为230-260us/cm；
步骤（3）所述的高浓度溶液为固形物30%-35%的溶液；
步骤（2）所述的组合酶由以下酶组成：地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶、枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶和黑曲霉来源的蛋白酶；以重量计，所述的地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶为20-80：60-80：1.5-3；
步骤（2）所述的组合酶的添加量为畜禽皮重量的0.815%-1.615%；所述的酶解条件包括pH6-8，50-60℃酶解2-4h，升温至80-85℃，保温10-15min，降温至50-55℃。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的畜禽皮前处理还包括：去除头部腿部皮毛，剃毛或脱毛，切块。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，以重量计，所述的地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶为20：60：1.5。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中：
所述的脱色为活性炭脱色，所述的活性炭为固形物干重3%-5%的活性炭；
所述的过滤为旋转错流膜过滤；所述的旋转错流膜过滤采用的错流过滤膜为20-50nm；过滤压力为0.2-0.3MPa；水交换固形物使用50-70℃的水；所述的纳滤使用科式纳滤膜，所述的科式纳滤膜截留分子量为80-100KDa，纳滤压力为1.2-1.3MPa。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）所述的灭菌为脉冲强光灭菌，干燥为真空带式干燥。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中：
所述的脉冲强光灭菌流速600-800L/h，光照一次15-20J，闪照50-60次；
所述的真空带式干燥真空度-0.1MPa，采用三段式加热，进料速度700-800L/h，喷枪喷嘴直径1.6-2.0mm，受热时间总时间60-80min，最终得到水分含量5%-7%的粗粉。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中：
所述的三段式加热条件为：Ⅰ段温度70-80℃，Ⅱ段温度60-70℃，Ⅲ段温度40-60℃。
8.权利要求1-7任一项所述的制备方法制备的III型小分子胶原蛋白肽。
9.权利要求8所述的III型小分子胶原蛋白肽在制备口服胶原蛋白肽产品中的应用。
10.包括权利要求8所述的III型小分子胶原蛋白肽的口服胶原蛋白肽产品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410182043.XA CN117736307B (zh) | 2024-02-19 | 2024-02-19 | 一种能够促进iii型和iv型胶原蛋白分泌的iii型小分子胶原蛋白肽及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410182043.XA CN117736307B (zh) | 2024-02-19 | 2024-02-19 | 一种能够促进iii型和iv型胶原蛋白分泌的iii型小分子胶原蛋白肽及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117736307A CN117736307A (zh) | 2024-03-22 |
| CN117736307B true CN117736307B (zh) | 2024-06-07 |
Family
ID=90281744
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410182043.XA Active CN117736307B (zh) | 2024-02-19 | 2024-02-19 | 一种能够促进iii型和iv型胶原蛋白分泌的iii型小分子胶原蛋白肽及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117736307B (zh) |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003238597A (ja) * | 2002-02-15 | 2003-08-27 | Yaizu Suisankagaku Industry Co Ltd | 魚類由来のコラーゲンペプチド及びその製造方法、該コラーゲンペプチドを含有する飲食品及び化粧品 |
| KR20030074577A (ko) * | 2003-09-02 | 2003-09-19 | 주식회사 젤텍 | 멸균된 순수 수용성 콜라겐 펩타이드의 제조방법 |
| KR20090106807A (ko) * | 2008-04-07 | 2009-10-12 | 주식회사 키토라이프 | 어류비늘 콜라겐펩타이드의 제조방법 |
| CN108103131A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-01 | 北京姿美堂生物技术有限公司 | 一种海洋鱼胶原低聚肽粉的制备工艺及其应用 |
| CN111574617A (zh) * | 2020-04-26 | 2020-08-25 | 无锡可尚生物科技有限公司 | 一种防治老年人骨质疏松的胶原蛋白肽及其制备方法 |
| CN111944866A (zh) * | 2020-07-31 | 2020-11-17 | 青海瑞肽生物科技有限公司 | 连续旋蒸脱溶双酶解制备牦牛皮小分子胶原蛋白肽的方法 |
| CN114015739A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-02-08 | 南宁东恒华道生物科技有限责任公司 | 一种用罗非鱼鱼皮制备液体胶原蛋白肽的方法 |
| CN114032269A (zh) * | 2021-10-19 | 2022-02-11 | 华南理工大学 | 一种富含二肽Hyp-Gly的胶原小分子肽及其制备方法和用途 |
| CN116179634A (zh) * | 2023-04-27 | 2023-05-30 | 北京盛美诺生物技术有限公司 | 一种iii型胶原蛋白肽及其制备方法 |
-
2024
- 2024-02-19 CN CN202410182043.XA patent/CN117736307B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003238597A (ja) * | 2002-02-15 | 2003-08-27 | Yaizu Suisankagaku Industry Co Ltd | 魚類由来のコラーゲンペプチド及びその製造方法、該コラーゲンペプチドを含有する飲食品及び化粧品 |
| KR20030074577A (ko) * | 2003-09-02 | 2003-09-19 | 주식회사 젤텍 | 멸균된 순수 수용성 콜라겐 펩타이드의 제조방법 |
| KR20090106807A (ko) * | 2008-04-07 | 2009-10-12 | 주식회사 키토라이프 | 어류비늘 콜라겐펩타이드의 제조방법 |
| CN108103131A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-01 | 北京姿美堂生物技术有限公司 | 一种海洋鱼胶原低聚肽粉的制备工艺及其应用 |
| CN111574617A (zh) * | 2020-04-26 | 2020-08-25 | 无锡可尚生物科技有限公司 | 一种防治老年人骨质疏松的胶原蛋白肽及其制备方法 |
| CN111944866A (zh) * | 2020-07-31 | 2020-11-17 | 青海瑞肽生物科技有限公司 | 连续旋蒸脱溶双酶解制备牦牛皮小分子胶原蛋白肽的方法 |
| CN114032269A (zh) * | 2021-10-19 | 2022-02-11 | 华南理工大学 | 一种富含二肽Hyp-Gly的胶原小分子肽及其制备方法和用途 |
| CN114015739A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-02-08 | 南宁东恒华道生物科技有限责任公司 | 一种用罗非鱼鱼皮制备液体胶原蛋白肽的方法 |
| CN116179634A (zh) * | 2023-04-27 | 2023-05-30 | 北京盛美诺生物技术有限公司 | 一种iii型胶原蛋白肽及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| "Screening and identification of DPP-IV inhibitorypeptides from deer skin hydrolysates by anintegrated approach of LC–MS/MS and in silico analysis";Yan Jin，et.al.,;《JOURNAL OF FUNCTIONAL FOODS》;20151031;第18卷;第344-357页 * |
| Yan Jin，et.al.,."Screening and identification of DPP-IV inhibitorypeptides from deer skin hydrolysates by anintegrated approach of LC–MS/MS and in silico analysis".《JOURNAL OF FUNCTIONAL FOODS》.2015,第18卷第344-357页. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117736307A (zh) | 2024-03-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101871395B1 (ko) | 고수율로 콜라겐을 제조하는 방법 | |
| CN101418328A (zh) | 一种鱼鳞胶原蛋白的制备方法 | |
| CN103740791A (zh) | 深海鳕鱼鱼皮提取胶原蛋白粉的方法 | |
| CN101711591A (zh) | 一种鱼软骨提取物的制备方法及所得的产品 | |
| CN111118093A (zh) | 一种非变性牦牛皮胶原蛋白及其制备方法 | |
| CN1478421A (zh) | 一种海参全粉食品及其制备方法 | |
| CN113185603B (zh) | 一种低免疫原性的海洋医用胶原蛋白及其制备方法及应用 | |
| US20190281851A1 (en) | Pure Collagen Milk Powder and Preparation Method Thereof | |
| CN106350556A (zh) | 一种医用高纯度鱼皮胶原的制备方法 | |
| CN107365824A (zh) | 一种水解鱼胶原蛋白肽粉的制备方法 | |
| CN112410392A (zh) | 一种i型胶原蛋白的提取方法及其应用 | |
| CN110713534A (zh) | 一种具有光老化改善作用的胶原蛋白肽及其制备方法 | |
| WO2007131424A1 (fr) | Procédé de préparation de compositions de protéoglycane et de collagène à faible poids moléculaire, produits résultants et utilisations de ceux-ci | |
| CN117736307B (zh) | 一种能够促进iii型和iv型胶原蛋白分泌的iii型小分子胶原蛋白肽及其制备方法 | |
| CN113512108B (zh) | 海洋鱼皮胶原低聚肽及其制备方法和应用 | |
| CN112501229B (zh) | 一种牛骨胶原肽的生产工艺 | |
| CN113563459A (zh) | 一种胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺 | |
| CN103740793B (zh) | 一种生产鱼皮胶原蛋白的方法 | |
| CN108164595A (zh) | 从鱿鱼皮中提取的胶原蛋白 | |
| CN107629122A (zh) | 鲶鱼鱼内脏蛋白酶提取的鱼皮胶原蛋白 | |
| KR20030074577A (ko) | 멸균된 순수 수용성 콜라겐 펩타이드의 제조방법 | |
| CN114634961B (zh) | 一种具有多种生物活性功能的牡蛎寡聚肽粉的制备方法 | |
| US20030032620A1 (en) | Low molecular weight chondroitin sulphate compound having cosmetic activity | |
| CN107815480A (zh) | 用鲶鱼鱼内脏蛋白酶提取鱼皮胶原蛋白的方法 | |
| CN108396054A (zh) | 一种酶解南极冰鱼制备低聚肽的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant |