CN113563459A - 一种胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，属于食品工业技术领域。它包括以下步骤：（1）鱼皮预处理：购买新鲜鱼，取鱼皮，并清洗干净，直至鱼皮表面的鱼鳞去除干净；（2）碱液处理：将步骤（1）中预处理后的鱼皮，转移到反应釜中，并添加碱液，处理后添加碳酸氢钠溶液处理，最后用去离子水清洗干净；（3）酶解处理：将步骤（2）中碱液处理后的鱼皮，转移到料液槽中，并添加复合酶液，处理后沥干即可；（4）离心处理：将步骤（3）中酶解处理后的鱼皮，转移到离心机中，离心后取上清液；（5）超滤处理：将步骤（4）中离心处理的上清液，转移到超滤膜进行过滤，最后进行真空冷冻干燥。制备得到的胶原蛋白肽可满足市场需求。
Description
技术领域
本发明属于食品工业技术领域，具体地说，涉及一种胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺。
背景技术
胶原蛋白，是结缔组织中极其重要的一种结构蛋白，是动物体内含量最多、分布最广的蛋白质，约占体内蛋白质总量的25%~30%，而分子量过大的胶原蛋白在人体的吸收利用率低，需经过生物技术降解至分子量到200~10000Da范围的胶原蛋白肽，人体才能有效吸收。研究证明蛋白质水解物的平均分子量是决定其生物学性质最重要的因素之一，蛋白肽组分的理化、功能特性与其分子量大小有关。
通过猪皮、牛皮提取胶原蛋白肽的应用较为广泛，但是鱼皮价格低廉、来源丰富和提取比较容易，且无陆生动物疫病的风险。我国是世界上最大的淡水鱼养殖国，随着淡水鱼类加工业的快速发展，加工过程中产生大量的鱼皮及鱼鳞等废弃物，如不充分利用，污染环境的同时还对资源造成极大的浪费，因此研究从鱼类下脚料中提取胶原蛋白肽具有深远意义。
中国专利申请公布号CN102621213A公开了一种胃蛋白酶法大分子胶原蛋白热变性程度的评价方法，将原料浸泡溶解、加热、酶解后得到分子量在30万Da以上的完整三螺旋结构胶原蛋白，并对胶原蛋白的热变性程度进行评价。中国专利CN102676620 B公开了一种高分子量鱿鱼皮胶原蛋白的制备方法，选用截留分子量为100kda的超滤膜对酶解液进行超滤，得到大分子胶原蛋白肽的同时回收小分子胶原蛋白肽。中国专利申请公开号103627763A公开了一种安康鱼皮胶原蛋白肽分子量的分级方法，安康鱼皮酶解液经过一级板式超滤膜截留分子量在10000道尔顿以上的胶原蛋白肽，然后经过二级卷式超滤膜截留分子量在2000道尔顿以上的胶原蛋白肽，再后经过卷式纳滤膜截留分子量在200道尔顿以上的胶原蛋白肽。以上方法制备的胶原蛋白肽之间分子量大小差距甚远，分布不集中，最终通过超滤分级来得到不同分子量区段的胶原蛋白肽，工艺复杂且成本较高。
发明内容
1、要解决的问题
针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，工艺简单，具体来说，制备的蛋白满足使用要求。
2、技术方案
为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。
一种胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，包括以下步骤：
（1）鱼皮预处理：购买新鲜鱼，取鱼皮，并清洗干净，直至鱼皮表面的鱼鳞去除干净；
（2）碱液处理：将步骤（1）中预处理后的鱼皮，转移到反应釜中，并添加碱液，处理后添加碳酸氢钠溶液处理，最后用去离子水清洗干净；
（3）酶解处理：将步骤（2）中碱液处理后的鱼皮，转移到料液槽中，并添加复合酶液，处理后沥干即可；
（4）离心处理：将步骤（3）中酶解处理后的鱼皮，转移到离心机中，离心后取上清液；
（5）超滤处理：将步骤（4）中离心处理的上清液，转移到超滤膜进行过滤，最后进行真空冷冻干燥。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（1）中新鲜鱼的品种为鲢鱼。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液与鱼皮之间的质量比为20：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液的温度为50℃；
步骤（2）中碳酸氢钠与鱼皮之间的质量比为5：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液包括中性蛋白酶和木瓜蛋白酶及水；
上述中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、水三者质量比为1：5：100。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液的温度为37℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的离心力为12000g。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的温度为4℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（5）中超滤膜的孔径为1000道尔顿。
3、有益效果
相比于现有技术，本发明的有益效果为：
本发明的提取工艺得到的胶原蛋白肽主要用于小规模使用，且纯度可满足市场需求。与传统的技术比对后，可以发现，充分利用鲢鱼的鱼皮，合理设置酶解处理液的比例关系，并设置多种酶之间的有效混合，优化碱液处理方法，使得制备的蛋白满足需求。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。
实施例1
最佳实施例
本实施例的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，包括以下步骤：
（1）鱼皮预处理：购买新鲜鱼，取鱼皮，并清洗干净，直至鱼皮表面的鱼鳞去除干净；
（2）碱液处理：将步骤（1）中预处理后的鱼皮，转移到反应釜中，并添加碱液，处理后添加碳酸氢钠溶液处理，最后用去离子水清洗干净；
（3）酶解处理：将步骤（2）中碱液处理后的鱼皮，转移到料液槽中，并添加复合酶液，处理后沥干即可；
（4）离心处理：将步骤（3）中酶解处理后的鱼皮，转移到离心机中，离心后取上清液；
（5）超滤处理：将步骤（4）中离心处理的上清液，转移到超滤膜进行过滤，最后进行真空冷冻干燥。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（1）中新鲜鱼的品种为鲢鱼。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液与鱼皮之间的质量比为20：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液的温度为50℃；
步骤（2）中碳酸氢钠与鱼皮之间的质量比为5：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液包括中性蛋白酶和木瓜蛋白酶及水；
上述中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、水三者质量比为1：5：100。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液的温度为37℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的离心力为12000g。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的温度为4℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（5）中超滤膜的孔径为1000道尔顿。
对比例1
本实施例的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，包括以下步骤：
（1）鱼皮预处理：购买新鲜鱼，取鱼皮，并清洗干净，直至鱼皮表面的鱼鳞去除干净；
（2）碱液处理：将步骤（1）中预处理后的鱼皮，转移到反应釜中，并添加碱液，处理后添加碳酸氢钠溶液处理，最后用去离子水清洗干净；
（3）酶解处理：将步骤（2）中碱液处理后的鱼皮，转移到料液槽中，并添加复合酶液，处理后沥干即可；
（4）离心处理：将步骤（3）中酶解处理后的鱼皮，转移到离心机中，离心后取上清液；
（5）超滤处理：将步骤（4）中离心处理的上清液，转移到超滤膜进行过滤，最后进行真空冷冻干燥。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（1）中新鲜鱼的品种为鲢鱼。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液与鱼皮之间的质量比为20：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液的温度为50℃；
步骤（2）中碳酸氢钠与鱼皮之间的质量比为5：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液包括中性蛋白酶和木瓜蛋白酶及水；
上述中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、水三者质量比为5：5：100。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液的温度为37℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的离心力为12000g。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的温度为4℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（5）中超滤膜的孔径为1000道尔顿。
对比例2
本实施例的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，包括以下步骤：
（1）鱼皮预处理：购买新鲜鱼，取鱼皮，并清洗干净，直至鱼皮表面的鱼鳞去除干净；
（2）碱液处理：将步骤（1）中预处理后的鱼皮，转移到反应釜中，并添加碱液，处理后添加碳酸氢钠溶液处理，最后用去离子水清洗干净；
（3）酶解处理：将步骤（2）中碱液处理后的鱼皮，转移到料液槽中，并添加复合酶液，处理后沥干即可；
（4）离心处理：将步骤（3）中酶解处理后的鱼皮，转移到离心机中，离心后取上清液；
（5）超滤处理：将步骤（4）中离心处理的上清液，转移到超滤膜进行过滤，最后进行真空冷冻干燥。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（1）中新鲜鱼的品种为鲢鱼。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液与鱼皮之间的质量比为20：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液的温度为50℃；
步骤（2）中碳酸氢钠与鱼皮之间的质量比为5：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液包括中性蛋白酶和木瓜蛋白酶及水；
上述中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、水三者质量比为1：1：100。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液的温度为37℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的离心力为12000g。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的温度为4℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（5）中超滤膜的孔径为1000道尔顿。
对比例3
本实施例的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，包括以下步骤：
（1）鱼皮预处理：购买新鲜鱼，取鱼皮，并清洗干净，直至鱼皮表面的鱼鳞去除干净；
（2）碱液处理：将步骤（1）中预处理后的鱼皮，转移到反应釜中，并添加碱液，处理后添加碳酸氢钠溶液处理，最后用去离子水清洗干净；
（3）酶解处理：将步骤（2）中碱液处理后的鱼皮，转移到料液槽中，并添加复合酶液，处理后沥干即可；
（4）离心处理：将步骤（3）中酶解处理后的鱼皮，转移到离心机中，离心后取上清液；
（5）超滤处理：将步骤（4）中离心处理的上清液，转移到超滤膜进行过滤，最后进行真空冷冻干燥。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（1）中新鲜鱼的品种为鲢鱼。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液与鱼皮之间的质量比为25：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液的温度为50℃；
步骤（2）中碳酸氢钠与鱼皮之间的质量比为10：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液包括中性蛋白酶和木瓜蛋白酶及水；
上述中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、水三者质量比为1：5：100。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液的温度为37℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的离心力为12000g。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的温度为4℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（5）中超滤膜的孔径为1000道尔顿。
对比例4
本实施例的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，包括以下步骤：
（1）鱼皮预处理：购买新鲜鱼，取鱼皮，并清洗干净，直至鱼皮表面的鱼鳞去除干净；
（2）碱液处理：将步骤（1）中预处理后的鱼皮，转移到反应釜中，并添加碱液，处理后添加碳酸氢钠溶液处理，最后用去离子水清洗干净；
（3）酶解处理：将步骤（2）中碱液处理后的鱼皮，转移到料液槽中，并添加复合酶液，处理后沥干即可；
（4）离心处理：将步骤（3）中酶解处理后的鱼皮，转移到离心机中，离心后取上清液；
（5）超滤处理：将步骤（4）中离心处理的上清液，转移到超滤膜进行过滤，最后进行真空冷冻干燥。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（1）中新鲜鱼的品种为鲢鱼。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液与鱼皮之间的质量比为10：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液的温度为60℃；
步骤（2）中碳酸氢钠与鱼皮之间的质量比为2：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液包括中性蛋白酶和木瓜蛋白酶及水；
上述中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、水三者质量比为1：5：100。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液的温度为37℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的离心力为12000g。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的温度为4℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（5）中超滤膜的孔径为1000道尔顿。
对比例5
本实施例的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，包括以下步骤：
（1）鱼皮预处理：购买新鲜鱼，取鱼皮，并清洗干净，直至鱼皮表面的鱼鳞去除干净；
（2）碱液处理：将步骤（1）中预处理后的鱼皮，转移到反应釜中，并添加碱液，处理后添加碳酸氢钠溶液处理，最后用去离子水清洗干净；
（3）酶解处理：将步骤（2）中碱液处理后的鱼皮，转移到料液槽中，并添加复合酶液，处理后沥干即可；
（4）离心处理：将步骤（3）中酶解处理后的鱼皮，转移到离心机中，离心后取上清液；
（5）超滤处理：将步骤（4）中离心处理的上清液，转移到超滤膜进行过滤，最后进行真空冷冻干燥。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（1）中新鲜鱼的品种为鲢鱼。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液与鱼皮之间的质量比为20：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液的温度为50℃；
步骤（2）中碳酸氢钠与鱼皮之间的质量比为5：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液包括中性蛋白酶及水；
上述中性蛋白酶、水两者质量比为1：100。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液的温度为37℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的离心力为12000g。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的温度为4℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（5）中超滤膜的孔径为1000道尔顿。
对比例6
本实施例的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，包括以下步骤：
（1）鱼皮预处理：购买新鲜鱼，取鱼皮，并清洗干净，直至鱼皮表面的鱼鳞去除干净；
（2）碱液处理：将步骤（1）中预处理后的鱼皮，转移到反应釜中，并添加碱液，处理后添加碳酸氢钠溶液处理，最后用去离子水清洗干净；
（3）酶解处理：将步骤（2）中碱液处理后的鱼皮，转移到料液槽中，并添加复合酶液，处理后沥干即可；
（4）离心处理：将步骤（3）中酶解处理后的鱼皮，转移到离心机中，离心后取上清液；
（5）超滤处理：将步骤（4）中离心处理的上清液，转移到超滤膜进行过滤，最后进行真空冷冻干燥。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（1）中新鲜鱼的品种为鲢鱼。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液与鱼皮之间的质量比为20：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（2）中碱液的温度为50℃；
步骤（2）中碳酸氢钠与鱼皮之间的质量比为5：1。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液包括木瓜蛋白酶及水；
上述木瓜蛋白酶、水两者质量比为1：5：100。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（3）中复合酶液的温度为37℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的离心力为12000g。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（4）中离心机的温度为4℃。
上述所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺中，步骤（5）中超滤膜的孔径为1000道尔顿。
对比例7
中国发明专利，申请号：CN201810396564.X，公开号：CN108314726B，公开了一种大鲵皮胶原蛋白提取方法和由该方法提取得到的胶原蛋白产品，其具体方案如下：
“提取方法的步骤如下：（1）通过如下方式获取大鲵皮：将大鲵皮去除残存肉后，切成0.5cm*0.5cm大小，放入4℃冷库备用；
（2）脂肪去除：去除残肉后切小的大鲵皮先放入10体积%的异丙醇水溶液当中（料液比为1:10），浸泡24小时，每6小时换液一次，泡完之后首先用自来水漂洗5次，再用蒸馏水漂洗5次，获得无脂肪大鲵皮；
（3）去除色素：已经去除脂肪的大鲵皮放入浓度为0.1M的NaOH水溶液中浸泡，料液比为1:20，浸泡时间为24小时，每6小时换液一次，浸泡完之后首先用自来水漂洗5次，再用蒸馏水漂洗5次，获得无色素大鲵皮；
（4）提取：将已经去除色素的大鲵皮放入浓度为0.1M的柠檬酸水溶液（即第一酸液）中，6小时后取出，用纱布粗过滤，滤液于5000r/min离心20分钟，离心完后获得粗提液；
（5）一次析出：上清液中加入5 M的NaCl水溶液（第一盐液），使NaCl浓度约为0.9M，静置24小时分层，以6000r/min离心20分钟，获得一次析出胶原蛋白；
（6）二次析出：向一次析出胶原蛋白中加入0.5 M的醋酸水溶液（第二酸液）使其溶解，取上清液加入5 M的NaCl水溶液（第二盐液），使NaCl浓度约为0.9 M，获得二次析出胶原蛋白；
（7）透析（MW=500），在蒸馏水中透析3天，每12小时换液一次；
（8）真空冷冻干燥；
（9）收集干粉，并称量所得干粉的重量（W）；实验重复三次，数据为三次独立实验的平均值”。
对比例8
中国发明专利，申请号：CN201210187819.4，公开号：CN102703555B，公开了一种小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法，其具体方案如下：
“在10 kg罗非鱼鱼皮中加入50L的含有20%(v/v)无水乙醇的0.01M NaOH溶液，在20°C下浸泡12h，利用自来水漂洗干净后，加入50L的0.05M HCl溶液在20°C下浸泡1h，用自来水漂洗至pH为3后，利用分离式高浓磨浆机将处理后的鱼皮磨碎，在90°C下加热60min，然后利用氢氧化钠将其pH调整至8.0，然后加入2 g的胶原蛋白酶，在55°C下酶解4h，利用盐酸将酶解液的pH调整到5.0，加入20 g的木瓜蛋白酶，在55°C下酶解1h后，利用截留分子量为5000道尔顿的超滤膜进行分离，未能通过超滤膜的溶液回收到木瓜蛋白酶酶解步骤继续使用，通过超滤膜的滤液利用100°C加热5min灭酶，然后利用截留分子量为200道尔顿的钠滤膜进行脱盐浓缩，可以获得Brix为25%的胶原蛋白肽溶液7L，然后将pH调整至4.5，加入35g活性炭，在40°C下脱色脱腥酶解15min后，利用碟式离心机去除活性炭，然后利用大孔吸附树脂在常温下对其脱色脱腥15min，最后利用喷雾干燥机进行喷雾干燥，可以获得1.5kg左右水分含量为7%(w/w)的小分子鱼皮胶原蛋白肽粉”。
对比例9
中国发明专利，申请号：CN201510603688.7，公开号：CN105039483A，公开了一种鱼皮鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法，其具体方案如下：
“本发明实施例中，本发明实施例中，一种鱼皮鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法，包括以下 步骤：
步骤一：鱼皮的处理
以鱼皮为原料，用7.5倍原料重的含0.05mol/L的NaOH溶液在浸泡温度为30℃下浸泡5.5h，去除杂蛋白和脂肪后用清水漂洗至中性，利用13倍原料重的0.35mol/L的HCl 溶液在浸泡温度为30℃下浸泡3h，再用清水漂洗至pH为5后，磨碎制备成鱼皮的胶原蛋 白溶液。
步骤二：鱼鳞的处理
1)预处理：将鱼鳞放入水槽内，加入鱼鳞重量16.5倍的水，浸泡3.5小时，使得鱼鳞复水。
2)脱钙：将复水后的鱼鳞送入耐酸水槽中，加入鱼鳞重量14.5倍的1.5％盐酸浸泡4 小时，使得鱼鳞中的钙转化成氯化钙溶解出来。
3)中和去杂质：在经过脱钙后得到的浸泡有鱼鳞的溶液中加入0.4％氢氧化钠溶液中 和至中性，使得氯化钙形成氢氧化钙沉淀出来。
4)水洗：将步骤3)中中和去除杂质的鱼鳞用清水清洗，将洗净的鱼鳞放入网眼周转 筐淋水。
5)溶胶：将步骤4)洗净的鱼鳞放入反应釜，添加鱼鳞重量13.5倍的脱盐水，加热蒸煮0.9小时，制得水溶性胶原蛋白溶液。
6)固液分离过滤：先将制得的水溶性胶原蛋白溶液冷却到温度为42℃，然后用滤网 对水溶性胶原蛋白溶液进行过滤，去除水溶性胶原蛋白溶液中的鱼鳞；将去除鱼鳞后的水 溶性胶原蛋白溶液存储于储存罐内备用。
步骤三：胶原蛋白肽的制备
1)水解、酶解：将鱼皮的胶原蛋白溶液与过滤后的水溶性胶原蛋白溶液加入反应釜 内，在75℃热水下加热55min，降温至50℃，再加入原料重量0.5％的木瓜蛋白酶和胶原蛋白酶组成的复合酶，在50℃下酶解4.5h；再加入原料重量0.2％的菠萝蛋白酶，在40℃ 下酶解2.5h；制备成酶解胶原蛋白肽溶液。
2)胶原蛋白过滤分离：将制得的酶解胶原蛋白肽溶液使用超滤器过滤；使得分子量 为5000道尔顿以上的大分子胶原蛋白和水解胶原蛋白溶液分离；将蛋白酶和未完全酶解 的高分子胶原蛋白截留并添加到步骤1)中继续使用。
3)灭酶、脱色、脱腥：用90℃对超滤获得的滤液加热15min进行灭酶，然后再加入溶液重量的1.0％的活性炭进行脱色脱腥，接着利用离心机去除活性炭。
4)干燥：经喷雾干燥或冷冻干燥后得到淡黄色或白色粉状、复溶性好、略带腥味的鱼皮鱼鳞胶原蛋白肽”。
对比例10
中国发明专利，申请号：CN201811117450.3，公开号：CN109207541B，公开了河鲀鱼皮胶原蛋白肽提取工艺及应用，其具体方案如下：
“本发明公开了河鲀鱼皮胶原蛋白肽提取工艺及应用，提取工艺包括以下步骤。
S1.原料处理：将河鲀鱼皮剪去并将与鱼皮粘连的鱼肉也一同刮擦除去后洗净、剪碎，冷冻干燥后备用。
S2.浸泡：将步骤S1处理后的鱼皮浸泡在质量浓度为5％～10％的氯化纳或碳酸钠溶液中，连接搅拌6h，过滤后蒸馏水水洗，重复3次。通过该步骤，可去除鱼皮中的非胶原蛋白。
S3.酶解：将步骤S2得到的鱼皮加入蒸馏水，用碱性蛋白酶水解提取胶原蛋白肽，酶解温度为45℃～65℃，酶解时间为4h～5h，加酶量为6000U/g～10000U/g，料液比为1：(10～30)，通过添加调节液控制PH为8～11。PH调节液为0.01mol/L HCL或0.01mol/L NaOH溶液。
S4.灭酶：酶解结束后沸水浴加热10min，使酶失活。
S5.离心：离心10min，转速8000rpm，制得上清液即为粗提取的胶原蛋白肽液。
S6.超滤：将离心得到的上清涂进行超滤分离，通过分子量≤10kDa的超滤膜，分离得到胶原蛋白肽液。
S7.将步骤S6得到的胶原蛋白肽液冻干得到胶原蛋白肽粉末”。
实施例2
选择实施例1制备的产品及对比例1-10制备的产品，进行如下的试验：
参考专利如下：授权公告号为CN109207541B的中国发明专利，名称为河鲀鱼皮胶原蛋白肽提取工艺及应用。
其中实施例1制备的胶原蛋白肽粉末的得率为13.5%；
其中对比例1制备的胶原蛋白肽粉末的得率为12.7%；
其中对比例2制备的胶原蛋白肽粉末的得率为11.6%；
其中对比例3制备的胶原蛋白肽粉末的得率为10.4%；
其中对比例4制备的胶原蛋白肽粉末的得率为8.2%；
其中对比例5制备的胶原蛋白肽粉末的得率为7.6%；
其中对比例6制备的胶原蛋白肽粉末的得率为7.3%；
其中对比例7制备的胶原蛋白肽粉末的得率为4.8%；
其中对比例8制备的胶原蛋白肽粉末的得率为3.9%；
其中对比例9制备的胶原蛋白肽粉末的得率为10.2%；
其中对比例10制备的胶原蛋白肽粉末的得率为9.6%。
以上内容是结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，不能认定本发明具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的构思的前提下，还可以做出若干简单的推演或替换，都应当视为属于本发明所提交的权利要求书确定的保护范围。
Claims (9)
1.一种胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，其特征在于：
包括以下步骤：
（1）鱼皮预处理：购买新鲜鱼，取鱼皮，并清洗干净，直至鱼皮表面的鱼鳞去除干净；
（2）碱液处理：将步骤（1）中预处理后的鱼皮，转移到反应釜中，并添加碱液，处理后添加碳酸氢钠溶液处理，最后用去离子水清洗干净；
（3）酶解处理：将步骤（2）中碱液处理后的鱼皮，转移到料液槽中，并添加复合酶液，处理后沥干即可；
（4）离心处理：将步骤（3）中酶解处理后的鱼皮，转移到离心机中，离心后取上清液；
（5）超滤处理：将步骤（4）中离心处理的上清液，转移到超滤膜进行过滤，最后进行真空冷冻干燥。
2.根据权利要求1所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，其特征在于：
步骤（1）中新鲜鱼的品种为鲢鱼。
3.根据权利要求1所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，其特征在于：
步骤（2）中碱液与鱼皮之间的质量比为20：1。
4.根据权利要求3所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，其特征在于：
步骤（2）中碱液的温度为50℃；
步骤（2）中碳酸氢钠与鱼皮之间的质量比为5：1。
5.根据权利要求1所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，其特征在于：
步骤（3）中复合酶液包括中性蛋白酶和木瓜蛋白酶及水；
上述中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、水三者质量比为1：5：100。
6.根据权利要求5所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，其特征在于：
步骤（3）中复合酶液的温度为37℃。
7.根据权利要求1所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，其特征在于：
步骤（4）中离心机的离心力为12000g。
8.根据权利要求1所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，其特征在于：
步骤（4）中离心机的温度为4℃。
9.根据权利要求1所述的胶原蛋白肽生产过程中蛋白提取工艺，其特征在于：
步骤（5）中超滤膜的孔径为1000道尔顿。
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- 2021-08-10 CN CN202110915229.8A patent/CN113563459A/zh not_active Withdrawn
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication | ||
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