CN116179634A - 一种iii型胶原蛋白肽及其制备方法 - Google Patents
一种iii型胶原蛋白肽及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116179634A CN116179634A CN202310465757.7A CN202310465757A CN116179634A CN 116179634 A CN116179634 A CN 116179634A CN 202310465757 A CN202310465757 A CN 202310465757A CN 116179634 A CN116179634 A CN 116179634A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- collagen
- protease
- fermentation
- enzymolysis
- crude
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 70
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 70
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 70
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 53
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 19
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 claims abstract description 51
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 48
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims abstract description 48
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 30
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 29
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 19
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 claims abstract description 15
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims abstract description 14
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000008395 clarifying agent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 52
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 33
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 19
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 claims description 18
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 16
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 14
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 14
- 241000238366 Cephalopoda Species 0.000 claims description 13
- 235000006886 Zingiber officinale Nutrition 0.000 claims description 13
- 235000008397 ginger Nutrition 0.000 claims description 13
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 claims description 12
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 10
- 241000222290 Cladosporium Species 0.000 claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 9
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 9
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 9
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 claims description 8
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims description 8
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims description 7
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims description 7
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 7
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims description 7
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 7
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 claims description 7
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 claims description 7
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 7
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 7
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 7
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 7
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 7
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 claims description 7
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 7
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 6
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 6
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 6
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 6
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 5
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 241000276438 Gadus morhua Species 0.000 claims description 2
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 claims description 2
- 241000276707 Tilapia Species 0.000 claims description 2
- 235000015241 bacon Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 2
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 claims description 2
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 claims description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims description 2
- 244000273928 Zingiber officinale Species 0.000 claims 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 abstract description 15
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 6
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 abstract description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 13
- 241000234314 Zingiber Species 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 4
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 4
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 4
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 241001019659 Acremonium <Plectosphaerellaceae> Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037118 bone strength Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000011978 dissolution method Methods 0.000 description 1
- 230000009982 effect on human Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000011167 hydrochloric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- ILXAOQAXSHVHTM-UHFFFAOYSA-M sodium;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;chloride Chemical compound [Na+].[Cl-].OCC(N)(CO)CO ILXAOQAXSHVHTM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- -1 tissue engineering Substances 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 229940054967 vanquish Drugs 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/10—Process efficiency
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于多肽制备技术领域,具体公开了一种III型胶原蛋白肽及其制备方法,包括:S1、原料脱脂、超声、发酵得总蛋白粗提物;S2、酸性条件下提取胶原蛋白粗提物;S3、加澄清剂去除杂蛋白;S4、加凝结芽孢杆菌发酵得到III型胶原蛋白;S5、加复合蛋白酶酶解、模仿葡萄球菌发酵;S6、分离纯化得III型胶原蛋白肽成品。本发明制备的III型胶原蛋白肽,其平均分子量为300‑3000道尔顿,含有III型胶原蛋白的标志性肽段,安全无毒副作用,易于消化,可以作为药品、化妆品、保健食品和食品的原料,并且能够添加至酸性饮料中,能够促进机体生成III型胶原蛋白。
Description
技术领域
本发明属于多肽制备技术领域,具体涉及一种III型胶原蛋白肽及其制备方法。
背景技术
胶原蛋白肽是将大分子胶原蛋白经蛋白酶降解后制成的小分子肽类产品,具有较高的消化吸收性。胶原蛋白肽能够促进骨的形成,增强低钙水平下的骨胶原结构,从而提高骨强度,以达到预防骨质疏松的作用;胶原蛋白肽还具有保护胃黏膜和抗溃疡、抗过敏的作用;特别的是,胶原蛋白肽还具有极好的美容效果,有提高皮肤水分、减少皱纹,抗衰老等作用,因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用,其作为口服美容产品的基本原料,也已经为广大消费者接受。
胶原蛋白有20多种类型,目前对于I型和II胶原蛋白肽的研究较多,已经实现工业化生产。如王琳在《Ⅰ型胶原蛋白的制备、鉴定及其抗UVA氧化损伤作用的初步研究》中,以猪皮为材料,比较了酸溶法、酶解法、中性盐溶液法三种粗提的方法,发现酶解法进行粗提得率最高,并结合高效液相色谱进行分离纯化制得Ⅰ型胶原蛋白,该方法具有高效性、高选择性,所得Ⅰ型胶原蛋白具有防止UVA氧化损伤的作用。专利CN114085285A公开了一种具有骨关节养护功效的高纯II型胶原蛋白肽的制备方法及其应用,经软骨除杂、骨粒清洗、骨粒酶解、多级过滤、纳滤除杂浓缩、树脂精制除杂、杀菌、浓缩、喷雾干燥步骤制得高纯II型胶原蛋白肽,该方法能够大大提高II型胶原蛋白肽的含量,实现速溶性较好的胶原蛋白颗粒粉的制备。
目前III型胶原蛋白肽的制备主要集中在胶原蛋白的重组表达,即由基因重组技术制备的经设计、修饰后的特定基因编码的氨基酸序列或其片段,或是这类功能性氨基酸序列片段的组合。而从动物组织中提取III胶原蛋白的研究较少。
专利CN101717804A公开了一种医用级III型胶原的制备方法,具体是新鲜新生犊牛皮作为原料进行前处理,然后用限制胃蛋白酶降解法和盐析法提取I和III型胶原混合物,接着用Tris-NaCl缓冲液溶解掉大部分的I型胶原,Tris-HCl缓冲液使胶原变性制得III型胶原。
尽管目前对于III型胶原蛋白肽的开发研究已经取得了一定的进展,但从动物组织提取III胶原蛋白仍存在难度大、纯度低、成本高等严峻问题。因此,开发一种III型胶原蛋白肽的制备方法至关重要。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于弥补现有技术的不足,提供一种III型胶原蛋白肽及其制备方法,所得III型胶原蛋白肽的含有III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量为300-3000道尔顿,能够用于改善皮肤水分,促进机体内III型胶原蛋白生成,起到延缓组织老化的作用。
为了实现上述技术目的,本发明采取如下技术方案。
第一方面,一种III型胶原蛋白肽的制备方法,包括:
S1、原料脱脂、超声、发酵得总蛋白粗提物;
S2、酸性条件下提取胶原蛋白粗提物;
S3、加澄清剂去除杂蛋白;
S4、凝结芽孢杆菌发酵得到III型胶原蛋白;
S5、复合蛋白酶酶解、模仿葡萄球菌发酵;
S6、分离纯化得III型胶原蛋白肽成品。
本申请通过采用上述方法,优化了从动物组织中提取III型胶原蛋白肽的生产条件,特别是通过凝结芽孢杆菌发酵、复合蛋白酶酶解、模仿葡萄球菌发酵工艺相互协调、共同作用,获得III型胶原蛋白肽,其含有III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量在300-3000道尔顿范围之间,并且安全无毒副作用,易于消化,可以作为药品、化妆品、保健食品和食品的原料,并且能够添加至酸性饮料中,能够用于改善皮肤水分,促进机体内III型胶原蛋白生成。
在一个优选的实施方式中,所述步骤S1的具体操作为:将原料浸于NaOH溶液中浸泡,取出后水洗至中性,然后按照料液质量比1:5-40与水混合,超声1-3次,取出物料并重新加入到1-10倍体积的水中,按照料液重量接种一定量的枝孢菌和/或法马塔假丝酵母发酵,得到总蛋白粗提物。
进一步地,步骤S1中,所述原料是动物皮、鳞或骨中的一种,优选为罗非鱼、鳕鱼、羊皮、牛皮、禽类皮中的任一种。
进一步地,步骤S1中,所述NaOH溶液的质量分数为0.1-5%,浸泡时间为4-18h。
进一步地,步骤S1中,所述超声的功率为150-400W,超声风速为5-500m/s,超声时间为10-80min,超声次数为1-3次。
进一步地,步骤S1中,所述枝孢菌的接种量为1-8×105cfu/g,法马塔假丝酵母的接种量为1-8×105cfu/g。
进一步地,步骤S1中,所述发酵温度为25-35℃,发酵时间为2-10h。
在另一个优选的实施方式中,所述步骤S2的具体操作为:总蛋白粗提物加入到2-50倍质量的纯化水中,调节总蛋白粗提物的pH值至2-5,加热至50-90℃,保温提胶2-8h,制得胶原蛋白粗提物。
在另一个优选的实施方式中,所述步骤S3的具体操作为:调节胶原蛋白粗提物pH为2-7,加入澄清剂,静置2-8h去除杂蛋白,取上清液备用。
进一步地,步骤S3中,所述澄清剂为大豆多糖、蛋清和土豆淀粉的混合物,混合质量比为1:2-4:1-3;澄清剂的加入量为胶原蛋白粗提物质量的0.5-3%。
在另一个优选的实施方式中,所述步骤S4的具体操作为:向步骤S3所得上清液中加入凝结芽孢杆菌,调节pH至6-7.5,40-55℃下发酵2-6h得到III型胶原蛋白。
进一步地,步骤S4中,所述凝结芽孢杆菌的添加量为溶液质量的0.1-1%。
在另一个优选的实施方式中,所述步骤S5的具体操作步骤为:将III型胶原蛋白调节pH值为7.5-8.0,加入复合蛋白酶酶解,得到酶解液;调节酶解液pH至6-7.5,按酶解液重量接种一定量的模仿葡萄球菌发酵,得酶解发酵液。
进一步地,步骤S5中,所述复合蛋白酶为碱性蛋白酶和自制蛋白酶的组合,自制蛋白酶为生姜蛋白酶和鱿鱼内脏蛋白酶,三种酶的质量比为2.5-4:0.8-1.5:1,优选为3:1:1;复合蛋白酶的加入量为III型胶原蛋白质量的0.5-2%,酶解温度为50-60℃,酶解时间为2-8h。
进一步地,步骤S5中,模仿普通球菌为自行从湖南腊肉中分离,通过表型和生化鉴定为模仿葡萄球菌,模仿普通球菌的接种量为1-9×108cfu/g;发酵温度为35-40℃,发酵时间为2-6h。
在另一个优选的实施方式中,步骤S6中,所述分离纯化步骤包括超滤、纳滤、喷雾干燥。
进一步地,步骤S6中,所述超滤所用超滤膜的截留分子量在1-10kD,超滤膜为聚砜类、聚酰胺类卷式膜中的任一种。
进一步地,步骤S6中,所述纳滤膜的截留分子量100-2000D,纳滤膜为聚酰胺、磺化聚醚砜、磺化聚砜中空纤维膜中的任一种。
进一步地,步骤S6中,所述喷雾干燥的进风温度设置为160-220℃,出风温度设置为90-120℃。
本申请中采用膜过滤的方法进行分离纯化,用超滤、纳滤去除无机盐和水溶性游离氨基酸等,均在常温下操作、无相态变化、高效节能,不会影响小分子肽的活性,并且生产过程中不产生污染。
第二方面,由第一方面所述方法制备得到的III型胶原蛋白肽,该III型胶原蛋白肽的平均分子量在300-3000道尔顿之间,含有III型胶原蛋白的标志性肽段。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本申请提供了一种III型胶原蛋白肽的制备方法,通过凝结芽孢杆菌发酵、复合蛋白酶酶解、模仿葡萄球菌发酵工艺相互配合共同作用,使制备的III型胶原蛋白肽的平均分子量为300-3000道尔顿,含有III型胶原蛋白的标志性肽段,具有安全无毒副作用,易于消化,可以作为药品、化妆品、保健食品和食品的原料,并且能够添加至酸性饮料中,能够用于改善皮肤水分,促进机体内III型胶原蛋白生成,起到延缓组织老化的作用。
具体实施方式
以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面的理解本发明,但不以任何方式限制本发明。下述内容仅仅是对本申请要求保护的范围的示例性说明,本领域技术人员可以根据所公开的内容对本申请的发明作出多种改变和修饰,而其也应当属于本申请要求保护的范围之中。
在本发明的具体实施方式中,提供了一种III型胶原蛋白肽的制备方法,包括:
S1:将原料浸于质量分数为0.1-5‰的NaOH溶液中浸泡4-18h,水洗至中性,按照料液比1:5-40与水混合,在功率为150-400W、风速为5-500m/s的条件下超声1-3次,每次超声10-80min;超声后的物料取出并重新加入到1-10倍体积的水中,按照料液重量接种枝孢菌和/或法马塔假丝酵母,枝孢菌的接种量为1-8×105cfu/g,法马塔假丝酵母1-8×105cfu/g,25-35℃下发酵2-10h得到总蛋白粗提物;
S2:总蛋白粗提物加入到2-50倍质量的纯化水中,加入pH调节剂(NaOH和/或HCl溶液,pH调节剂的质量分数为5-30%)调整pH值为2-5,加热至50-90℃,保温提胶2-8h,制得胶原蛋白粗提物;
S3:调节胶原蛋白粗提物pH为2-7,将1g大豆多糖、蛋清和土豆淀粉按照质量比1:2-4:1-3混合均匀制得澄清剂,将澄清剂加入到胶原蛋白粗提物中,澄清剂的加入量为胶原蛋白粗提物质量的0.5-3%,静置2-8h去除杂蛋白,取上清液备用;
S4:上清液中加入溶液质量0.1-1%的凝结芽孢杆菌,调节pH至6-7.5,40-55℃下发酵时间2-6h得到III型胶原蛋白;
S5:调节pH至7.5-8.0,加入III型胶原蛋白质量0.5-2%的复合蛋白酶(复合蛋白酶为碱性蛋白酶和自制蛋白酶的组合,自制蛋白酶为生姜蛋白酶和鱿鱼内脏蛋白酶,三种酶的质量比为2.5-4:0.8-1.5:1,优选为3:1:1),50-60℃下酶解2-8h,得到酶解液;用盐酸溶液、氢氧化钠溶液调节pH至6-7.5,按照料液重量接种1-9×108cfu/g的模仿葡萄球菌,35-40℃下发酵2-6h,得酶解发酵液;
S6:用截留分子量为1-10kD的超滤膜进行超滤,截留分子量100-2000D的纳滤膜进行纳滤,在进风温度160-220℃℃、出风温度90-120℃条件下进行喷雾干燥即得III型胶原蛋白肽成品。
本发明使用的枝孢菌购自上海宝录生物科技有限公司;法马塔假丝酵母为湖南腊肉中自行分离,通过表型和生化实验鉴定为法马塔假丝酵母;凝结芽孢杆菌购自山东中科嘉亿生物工程有限公司,人III型胶原蛋白试剂盒购自上海初态生物科技有限公司。
本申请中,利用酸性pH调节剂或碱性调节剂对物料进行pH调节;其中,酸为可溶性酸,具体为柠檬酸、乳酸、苹果酸、盐酸、醋酸、磷酸、酒石酸中的一种或几种的混合物;碱为可溶性碱,具体为NaOH、Na2CO3、NaHCO3、K2CO3、KHCO3、CaCO3、CaO中的任一种或几种的混合物。
下面以具体实施例的方式对本发明作进一步的说明。本发明实施例中所使用的各种化学试剂如无特殊说明均通过常规商业途径获得。
实施例1
一种III型胶原蛋白肽的制备方法,包括:
S1:将1000g羊皮浸于10kg质量分数为0.5%的NaOH溶液中浸泡12h,水洗至中性,按照料液比1:10与水混合,在功率为200W、风速为150m/s的条件下超声2次,每次超声60min,超声后的羊皮取出并重新加入到10倍体积的水中,按照料液重量接种枝孢菌2×105cfu/g和法马塔假丝酵母3×105cfu/g,30℃下发酵8h得到总蛋白粗提物;
S2:总蛋白粗提物加入10kg纯化水,调节pH值为2.5,加热至60℃,保温提胶4h,制得胶原蛋白粗提物;
S3:调节胶原蛋白粗提物pH为2.5,将1g大豆多糖、4g蛋清和2g土豆淀粉混合均匀制得澄清剂,加入到胶原蛋白粗提物中,静置4h去除杂蛋白,取上清液备用;
S4:上清液中加入溶液重量0.5%的凝结芽孢杆菌,调节pH至7.5,50℃下发酵3h得到III型胶原蛋白;
S5:调节pH至7.5,加入9g碱性蛋白酶、3g自制的生姜蛋白酶和3g鱿鱼内脏蛋白酶,55℃下酶解4h得到酶解液,调节pH至7.5,按照酶解液重量接种2×108cfu/g的模仿葡萄球菌,37℃下发酵4h得酶解发酵液;
S6:用截留分子量为10kD的聚砜超滤膜对酶解发酵液进行超滤,截留分子量100D的聚酰胺纳滤膜进行纳滤,在进风温度190℃、出风温度90℃条件下进行喷雾干燥即得III型胶原蛋白肽成品。
采用质谱方法对本实施例所得成品进行测定,液相色谱-质谱为美国ThermoFisher公司Vanquish液相和Orbitrap Exploris 480质谱组成,结果显示成品里包含III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量为1267道尔顿。
实施例2
一种III型胶原蛋白肽的制备方法,其步骤与实施例1的区别在于,步骤S5中的复合酶为7.5g碱性蛋白酶、4g自制的生姜蛋白酶和3g鱿鱼内脏蛋白酶。其余步骤与实施例1均相同。采用质谱方法对本实施例所得成品进行测定,结果显示成品里包含III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量为1348道尔顿。对本实施例所得成品进行测定,结果显示成品里包含III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量为1348道尔顿。
实施例3
一种III型胶原蛋白肽的制备方法,其步骤与实施例1的区别在于,步骤S5中的复合酶为12g碱性蛋白酶、3g自制的生姜蛋白酶和3g鱿鱼内脏蛋白酶。其余步骤与实施例1均相同。对本实施例所得成品进行测定,结果显示成品里包含III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量为1052道尔顿。
实施例4
一种III型胶原蛋白肽的制备方法,其步骤与实施例1的区别在于,步骤S5中的复合酶为3g碱性蛋白酶、3g自制的生姜蛋白酶和3g鱿鱼内脏蛋白酶。其余步骤与实施例1均相同。对本实施例所得成品进行测定,结果显示成品里包含III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量为1495道尔顿。
对比例1
一种III型胶原蛋白肽的制备方法,其步骤与实施例1的区别在于,步骤S5中的复合酶为9g碱性蛋白酶、3g自制的生姜蛋白酶,无鱿鱼内脏蛋白酶。其余步骤与实施例1均相同。对本对比例所得成品进行测定,结果显示成品里不包含III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量为1467道尔顿。
对比例2
一种III型胶原蛋白肽的制备方法,其步骤与实施例1的区别在于,步骤S5中的复合酶为9g碱性蛋白酶、3g鱿鱼内脏蛋白酶,无自制的生姜蛋白酶。其余步骤与实施例1均相同。对本对比例所得成品进行测定,结果显示成品里不包含III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量为1726道尔顿。
对比例3
一种III型胶原蛋白肽的制备方法,其步骤与实施例1的区别在于,步骤S5中的复合酶替换为9g碱性蛋白酶,无鱿鱼内脏蛋白酶、自制的生姜蛋白酶。其余步骤与实施例1均相同。对本对比例所得成品进行测定,结果显示成品里不包含III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量为1863道尔顿。
对比例4
一种III型胶原蛋白肽的制备方法,包括:
S1:将1000g羊皮浸于10kg质量分数为0.5%的NaOH溶液中浸泡12h,水洗至中性,按照料液比1:10与水混合,在功率为200W、风速为150m/s的条件下超声2次,每次超声60min,超声后的羊皮取出并重新加入到10倍体积的水中,按照料液重量接种枝孢菌2×105cfu/g和法马塔假丝酵母3×105cfu/g,30℃下发酵8h得到总蛋白粗提物;
S2:总蛋白粗提物加入10kg纯化水,调节pH值为2.5,加热至60℃,保温提胶4h,制得胶原蛋白粗提物;
S3:调节胶原蛋白粗提物pH为2.5,将1g大豆多糖、4g蛋清和2g土豆淀粉混合均匀制得澄清剂,加入到胶原蛋白粗提物中,静置4h去除杂蛋白,取上清液备用;
S4:调节上清液pH至7.5,加入9g碱性蛋白酶、3g自制的生姜蛋白酶和3g鱿鱼内脏蛋白酶,55℃下酶解4h得到酶解液,调节pH至7.5,按照酶解液重量接种2×108cfu/g的模仿葡萄球菌,37℃下发酵4h得酶解发酵液;
S5:用截留分子量为10kD的聚砜超滤膜对酶解发酵液进行超滤,截留分子量100D的聚酰胺纳滤膜进行纳滤,在进风温度190℃、出风温度90℃条件下进行喷雾干燥即得成品。对本对比例所得成品进行测定,结果显示成品里不包含III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量为2425道尔顿。
对比例5
一种III型胶原蛋白肽的制备方法,包括:
S1:将1000g羊皮浸于10kg质量分数为0.5%的NaOH溶液中浸泡12h,水洗至中性,按照料液比1:10与水混合,在功率为200W、风速为150m/s的条件下超声2次,每次超声60min,超声后的羊皮取出并重新加入到10倍体积的水中,按照料液重量接种枝孢菌2×105cfu/g和法马塔假丝酵母3×105cfu/g,30℃下发酵8h得到总蛋白粗提物;
S2:总蛋白粗提物加入10kg纯化水,调节pH值为2.5,加热至60℃,保温提胶4h,制得胶原蛋白粗提物;
S3:调节胶原蛋白粗提物pH为2.5,将1g大豆多糖、4g蛋清和2g土豆淀粉混合均匀制得澄清剂,加入到胶原蛋白粗提物中,静置4h去除杂蛋白,取上清液备用;
S4:上清液中加入溶液重量0.5%的凝结芽孢杆菌,调节pH至7.5,50℃下发酵3h得到III型胶原蛋白;
S5:调节pH至7.5,加入9g碱性蛋白酶、3g自制的生姜蛋白酶和3g鱿鱼内脏蛋白酶,55℃下酶解4h得到酶解液;
S6:用截留分子量为10kD的聚砜超滤膜对酶解发酵液进行超滤,截留分子量100D的聚酰胺纳滤膜进行纳滤,在进风温度190℃、出风温度90℃条件下进行喷雾干燥即得成品。对本对比例所得成品进行测定,结果显示成品里不包含III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量为2298道尔顿。
对比例6
一种III型胶原蛋白肽的制备方法,包括:
S1:将1000g羊皮浸于10kg质量分数为0.5%的NaOH溶液中浸泡12h,水洗至中性,按照料液比1:10与水混合,在功率为200W、风速为150m/s的条件下超声2次,每次超声60min,超声后的羊皮取出并重新加入到10倍体积的水中,按照料液重量接种枝孢菌2×105cfu/g和法马塔假丝酵母3×105cfu/g,30℃下发酵8h得到总蛋白粗提物;
S2:总蛋白粗提物加入10kg纯化水,调节pH值为2.5,加热至60℃,保温提胶4h,制得胶原蛋白粗提物;
S3:调节胶原蛋白粗提物pH为2.5,将1g大豆多糖、4g蛋清和2g土豆淀粉混合均匀制得澄清剂,加入到胶原蛋白粗提物中,静置4h去除杂蛋白,取上清液备用;
S4:调节上清液pH至7.5,加入9g碱性蛋白酶,55℃下酶解4h得到酶解液;
S5:用截留分子量为10kD的聚砜超滤膜对酶解发酵液进行超滤,截留分子量100D的聚酰胺纳滤膜进行纳滤,在进风温度190℃、出风温度90℃条件下进行喷雾干燥即得成品。对本对比例所得成品进行测定,结果显示成品里不包含III型胶原蛋白的标志性肽段,平均分子量为2761道尔顿。
结果
上述实施例1-4所述方法制得的胶原蛋白肽中含有III型胶原蛋白的标志性肽段,而对比例1-6制得的胶原蛋白肽中不含有III型胶原蛋白的标志性肽段,由此可知,凝结芽孢杆菌发酵、复合蛋白酶酶解、模仿葡萄球菌发酵工艺会影响III型胶原蛋白的提取,各工艺相互配合共同作用,可有效提取III型胶原蛋白。
以上述实施例、对比例所得产品为样品,测试其对人成纤维细胞分泌III型胶原蛋白的影响,测试方法如下:
将处于对数生长期的HSF细胞(人皮肤成纤维细胞)使用0.25%胰酶消化后铺至12孔板中,过夜培养至细胞汇合率为80-90%;将本申请得到的III型胶原蛋白肽分别稀释100mg/L,加入细胞上清液,空白组为生理盐水,轻轻混匀后继续培养,培养3天后,得到的培养物离心,取上清液用人III型胶原蛋白试剂盒检测。
测得结果如下表1所示。
表1
组别 | III型胶原蛋白浓度(pg/mL) |
空白组 | 12.46±2.51 |
实施例1 | 43.51**±4.86 |
实施例2 | 38.22**±3.53 |
实施例3 | 39.69**±2.57 |
实施例4 | 36.42**±3.18 |
对比例1 | 16.44±1.87 |
对比例2 | 17.05±2.48 |
对比例3 | 15.96±2.13 |
对比例4 | 17.79±3.61 |
对比例5 | 14.93±2.83 |
对比例6 | 17.28±2.09 |
注:**为与空白组相比,p<0.01。
从实验结果可以看出,实施例1-4得到的III型胶原蛋白能够特异性促进III型胶原蛋白生成,与空白组差异显著,对比例1-6与空白组对比,差异不显著,由此可知,本发明通过,凝结芽孢杆菌发酵、复合蛋白酶酶解、模仿葡萄球菌发酵工艺相互配合,可制得III型胶原蛋白肽,能促进机体内III型胶原蛋白生成。
以上内容仅仅是对本发明的构思所作的举例和说明,所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代,只要不偏离发明的构思或者超越本说明书所定义的范围,均应属于本发明的保护范围。
Claims (18)
1.一种III型胶原蛋白肽的制备方法,其特征在于,包括:
S1、原料脱脂、超声、发酵得总蛋白粗提物;
S2、酸性条件下提取胶原蛋白粗提物;
S3、加澄清剂去除杂蛋白;
S4、凝结芽孢杆菌发酵得到III型胶原蛋白;
S5、复合蛋白酶酶解、模仿葡萄球菌发酵;
S6、分离纯化得III型胶原蛋白肽成品。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤S1的具体操作为:将原料浸于NaOH溶液中浸泡,取出后水洗至中性,然后按照料液质量比1:5-40与水混合,超声1-3次,取出物料并重新加入到1-10倍体积的水中,按照料液重量接种一定量的枝孢菌和/或法马塔假丝酵母发酵,得到总蛋白粗提物。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述原料是动物皮、鳞或骨中的任一种。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述原料是罗非鱼、鳕鱼、羊皮、牛皮、禽类皮中的任一种。
5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述枝孢菌的接种量为1-8×105cfu/g,法马塔假丝酵母的接种量为1-8×105cfu/g。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤S2的具体操作为:总蛋白粗提物加入到2-50倍质量的纯化水中,调节总蛋白粗提物的pH值至2-5,加热至50-90℃,保温提胶2-8h,制得胶原蛋白粗提物。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤S3的具体操作为:调节胶原蛋白粗提物pH为2-7,加入澄清剂,静置2-8h去除杂蛋白,取上清液备用。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述澄清剂为大豆多糖、蛋清和土豆淀粉的混合物,混合质量比为1:2-4:1-3;澄清剂的加入量为胶原蛋白粗提物质量的0.5-3%。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤S4的具体操作为:向步骤S3所得上清液中加入凝结芽孢杆菌,剂调节pH至6-7.5,40-55℃下发酵2-6h得到III型胶原蛋白。
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述凝结芽孢杆菌的添加量为溶液质量的0.1-1%。
11.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤S5的具体操作为:将III型胶原蛋白调节pH值为7.5-8.0,加入复合蛋白酶酶解,得到酶解液;调节酶解液pH至6-7.5,按酶解液重量接种一定量的模仿葡萄球菌发酵,得酶解发酵液。
12.根据权利要求11所述的方法,其特征在于,所述复合蛋白酶为碱性蛋白酶和自制蛋白酶的组合,自制蛋白酶为生姜蛋白酶和鱿鱼内脏蛋白酶,三种酶的质量比为2.5-4:0.8-1.5:1。
13.根据权利要求12所述的方法,其特征在于,所述复合蛋白酶中碱性蛋白酶、生姜蛋白酶、鱿鱼内脏蛋白酶的质量比为1:2-4:1-3。
14.根据权利要求11所述的方法,其特征在于,所述复合蛋白酶的加入量为III型胶原蛋白质量的0.5-2%。
15.根据权利要求10所述的方法,其特征在于,所述模仿普通球菌为自行从湖南腊肉中分离,通过表型和生化鉴定为模仿葡萄球菌,模仿普通球菌的接种量为1-9×108cfu/g。
16.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤S6中的分离纯化步骤包括超滤、纳滤、喷雾干燥。
17.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述超滤所用超滤膜的截留分子量在1-10kD,超滤膜为聚砜类、聚酰胺类卷式膜中的任一种;纳滤膜的截留分子量100-2000D,纳滤膜为聚酰胺、磺化聚醚砜、磺化聚砜中空纤维膜中的任一种。
18.权利要求1-17任一项所述方法制备得到的III型胶原蛋白肽,其特征在于,其平均分子量为300-3000道尔顿。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310465757.7A CN116179634B (zh) | 2023-04-27 | 2023-04-27 | 一种iii型胶原蛋白肽及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310465757.7A CN116179634B (zh) | 2023-04-27 | 2023-04-27 | 一种iii型胶原蛋白肽及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN116179634A true CN116179634A (zh) | 2023-05-30 |
CN116179634B CN116179634B (zh) | 2023-08-18 |
Family
ID=86452671
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202310465757.7A Active CN116179634B (zh) | 2023-04-27 | 2023-04-27 | 一种iii型胶原蛋白肽及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN116179634B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117736307A (zh) * | 2024-02-19 | 2024-03-22 | 北京盛美诺生物技术有限公司 | 一种能够促进iii型和iv型胶原蛋白分泌的iii型小分子胶原蛋白肽及其制备方法 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1802437A (zh) * | 2003-04-11 | 2006-07-12 | 寰宇生物研发公司 | 通过微生物发酵提取胶原蛋白的方法 |
KR20150107222A (ko) * | 2014-03-13 | 2015-09-23 | 전북대학교산학협력단 | 박테리아 배양 산물을 이용한 콜라겐의 추출 방법 |
CN109486891A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-03-19 | 广东海洋大学 | 一种小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法 |
CN109517868A (zh) * | 2018-12-12 | 2019-03-26 | 江苏大学 | 一种延缓衰老的鱼源胶原蛋白肽的制备方法 |
CN113151342A (zh) * | 2021-03-09 | 2021-07-23 | 南京东万生物技术有限公司 | 一种人源化胶原蛋白制备工艺和方法 |
US20210309723A1 (en) * | 2018-11-06 | 2021-10-07 | Gelita Ag | Recombinant production of a collagen peptide preparation and use thereof |
CN114634549A (zh) * | 2022-03-30 | 2022-06-17 | 北京盛美诺生物技术有限公司 | 一种胶原三肽产品及其制法和应用 |
CN115717148A (zh) * | 2022-12-02 | 2023-02-28 | 南京医事达生物科技有限公司 | 一种人源iii型胶原蛋白低聚肽大规模工业制备方法 |
WO2023029161A1 (zh) * | 2021-09-06 | 2023-03-09 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 天然胶原材料及天然胶原材料的制备方法、用途 |
-
2023
- 2023-04-27 CN CN202310465757.7A patent/CN116179634B/zh active Active
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1802437A (zh) * | 2003-04-11 | 2006-07-12 | 寰宇生物研发公司 | 通过微生物发酵提取胶原蛋白的方法 |
KR20150107222A (ko) * | 2014-03-13 | 2015-09-23 | 전북대학교산학협력단 | 박테리아 배양 산물을 이용한 콜라겐의 추출 방법 |
US20210309723A1 (en) * | 2018-11-06 | 2021-10-07 | Gelita Ag | Recombinant production of a collagen peptide preparation and use thereof |
CN109517868A (zh) * | 2018-12-12 | 2019-03-26 | 江苏大学 | 一种延缓衰老的鱼源胶原蛋白肽的制备方法 |
CN109486891A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-03-19 | 广东海洋大学 | 一种小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法 |
CN113151342A (zh) * | 2021-03-09 | 2021-07-23 | 南京东万生物技术有限公司 | 一种人源化胶原蛋白制备工艺和方法 |
WO2023029161A1 (zh) * | 2021-09-06 | 2023-03-09 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 天然胶原材料及天然胶原材料的制备方法、用途 |
CN114634549A (zh) * | 2022-03-30 | 2022-06-17 | 北京盛美诺生物技术有限公司 | 一种胶原三肽产品及其制法和应用 |
CN115717148A (zh) * | 2022-12-02 | 2023-02-28 | 南京医事达生物科技有限公司 | 一种人源iii型胶原蛋白低聚肽大规模工业制备方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
ZENGLIU SONG等: "Characterization and comparison of collagen extracted from the skin of the Nile tilapia by fermentation and chemical pretreatment", 《FOOD CHEMISTRY》, vol. 340, pages 1 - 8 * |
刘丽莉等: "Bacillus cereus MBL13-U胶原蛋白酶的分离纯化及其降解动力学分析", 《食品与发酵工业》, no. 12, pages 17 - 23 * |
帕尔哈提・柔孜等: "4种动物骨骼的化学成分与生物活性研究进展", 《现代食品科技》, no. 05, pages 343 - 352 * |
李军等: "鲢鱼骨胶原多肽的制备及其抗氧化活性研究", 《食品与发酵工业》, vol. 46, no. 02, pages 222 - 230 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117736307A (zh) * | 2024-02-19 | 2024-03-22 | 北京盛美诺生物技术有限公司 | 一种能够促进iii型和iv型胶原蛋白分泌的iii型小分子胶原蛋白肽及其制备方法 |
CN117736307B (zh) * | 2024-02-19 | 2024-06-07 | 北京盛美诺生物技术有限公司 | 一种能够促进iii型和iv型胶原蛋白分泌的iii型小分子胶原蛋白肽及其制备方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN116179634B (zh) | 2023-08-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101948900B (zh) | 一种从牛软骨提取水解胶原蛋白的方法 | |
US5356637A (en) | Method for preparing an enzymatic hydrolysate | |
CN102199646B (zh) | 一种利用鱼皮制备胶原蛋白肽的方法 | |
CN110037163A (zh) | 一种复合植物蛋白肽的制备方法 | |
CN112062834B (zh) | 一种深海鱼鱼皮胶原蛋白肽及其提取制备方法 | |
CN106359631B (zh) | 一种纯胶原蛋白奶粉及其制备方法 | |
CN116179634B (zh) | 一种iii型胶原蛋白肽及其制备方法 | |
CN108753893A (zh) | 海参肽及其酶解提取工艺 | |
US20070017447A1 (en) | Avian eggshell membrane polypeptide extraction via fermentation process | |
WO2004090151A2 (en) | Method for extracting collagen comprising microbial fermentation | |
CN110973342B (zh) | 一种刺参低聚肽及其制备方法和应用 | |
CN102228125B (zh) | 海藻活性肽的制备方法 | |
CN103194512A (zh) | 促进乳酸菌增殖和提高存活性的大豆多肽及制备方法与应用 | |
CN113234181A (zh) | 一种硫酸软骨素的制备方法 | |
CN103014109B (zh) | 复合酶水解乳清蛋白制备蛋白胨的方法及所得蛋白胨 | |
WO2010044688A1 (en) | A method of producing peptide preparations for oral administration | |
CN113136409B (zh) | 一种食品级低盐分海洋鱼低聚肽的制备方法 | |
CN108048513A (zh) | 一种胶原蛋白酶联合新型微生物蛋白酶水解制备乌参胶原蛋白低聚肽的方法 | |
CN113604532A (zh) | 一种牦牛骨胶原蛋白肽的制备方法 | |
CN112941134A (zh) | 全羊小分子肽提取工艺 | |
CN102031279A (zh) | 一种超低分子胶原蛋白的提取方法 | |
KR20090056497A (ko) | 반추위 보호 대두 펩타이드의 제조 방법 및 그 용도 | |
CN109402208B (zh) | 一种鳖肽的提取方法 | |
CN108546725B (zh) | 一种利用马血制备的生物活性肽及其制备方法 | |
CN112210579B (zh) | 一种罗非鱼钙离子结合肽及其制备方法与应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240409 Address after: 100020 room 1201, 12th floor, building 1, nongguang Nanli, Chaoyang District, Beijing 12005 Patentee after: Beijing Qingyan Bozhi Health Management Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: Room 3-31-7-1306, No. 3 Chongwenmenwai Street, Dongcheng District, Beijing, 100062 Patentee before: BEIJING SEMNL BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Country or region before: China |
|
TR01 | Transfer of patent right |