KR101871395B1 - 고수율로 콜라겐을 제조하는 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 pH적정법을 이용한 콜라겐 제조방법에 관한 것으로, 콜라겐을 고수율로 추출하면서도 불쾌한 냄새가 제거된 콜라겐을 제조할 수 있어, 추가적인 가공 과정 없이도 화장료 및 식품 등과 같이 냄새에 민감한 제품에 적용 가능하다.
Description
본 발명은 고수율로 콜라겐을 제조하는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 pH 적정법을 이용하여 고수율로 콜라겐을 수득할 수 있는 방법에 관한 것이다.
콜라겐은 동물성 소재에서 유래된 섬유 상의 구조 단백질로서 동물의 피부, 뼈, 연골, 힘줄, 인대, 혈관 기타 결합 조직에 풍부하게 존재하며, 체단백질의 약 30% 이상을 차지한다. 콜라겐은 2중 나선구조를 하고 있는 근원섬유단밸질과 달리 3중 나선구조의 형태로 존재하며, 트로포콜라겐(tropocollagen)을 기본단위로 한다. 구성 아미노산의 조성은 형태에 따라 다소 차이가 있으나, 일반적으로 글리세린, 프롤린 및 하이드록시프롤린이 주를 이룬다.
콜라겐의 구성비는 생체의 연령 변화에 따라 변화하는데, 연령이 증가함에 따라 콜라겐의 함량이 감소한다. 고령화에 따른 콜라겐 감소는 세포의 신진대사인 수분대사 조절에 영향을 주어 노화의 진행이 빨라지고, 각 조직 중의 수분함량을 감소시켜 결합조직의 원활함과 피부의 탄력도 없어진다. 그에 따라, 현대에는 콜라겐을 인체에 보충하여 피부노화를 방지하고 주름을 방지하는 다양한 제품들이 출시되고 있다.
특히, 콜라겐이 화장료로 사용되는 경우 주름개선뿐만 아니라 보습성이 좋아지며 텍스쳐 또한, 개선되어 사용감이 향상되는 효과가 있어, 화장료로서의 가치가 크게 증가하는 추세다. 또한, 콜라겐은 겔 형성, 보수성 및 유화안정성 등의 기능적 특성을 지니고 있어 기능성 식품소재로서도 중요하게 인식되고 있다.
위와 같은 배경하에, 대량으로 산업적으로 적합한 콜라겐을 생산하고자 다양한 콜라겐 추출방법이 연구 중에 있지만, 그 연구 결과가 미비한 실정이다. 예컨대, 대한민국 공개특허 제10-2009-0105984호에서는, 눈다랑어 껍질에 아세트산을 처리하여 콜라겐을 추출하는 방법을 개시하고 있다. 그러나 기존의 콜라겐 추출 방법은 수율이 낮아 의료기기, 화장품 등을 생산하는 산업에서 활용이 어렵고 원료수급을 위한 비용이 극단적으로 지출되는 문제점이 있었다. 특히, 강제적으로 콜라겐의 농도를 올리기 위해 동결건조를 수행하기 때문에 고가의 장비 및 숙련된 운용자가 필요해 콜라겐 제조에 어려움이 많은 실정이다.
본 발명에서는 pH 적정법을 사용하여 동물 조직으로부터 고수율로 콜라겐을 수득할 수 있는 방법을 개발하여 제공하고자 한다.
본 발명은 동물 피부 조직을 유기산 용액에 담근 후 팽윤시킴으로써, 피부 상피층 및 피하지방이 제거된 진피를 회수하는 단계 (a); 상기 단계 (a) 후, 염화수소 수용액을 넣어 pH 2.4~2.7을 만들고 알갱이가 보이지 않도록 분쇄하여 균질화하는 단계 (b); 상기 단계 (b) 후, 단백질분해효소를 넣어 교반함으로써 항원성이 있는 텔로펩타이드 부분을 제거하는 단계 (c); 상기 단계 (c) 후, 수산화나트륨 수용액을 사용하여 pH 8.0~8.5로 적정하여 단백분해효소를 불활성화시키는 단계 (d);
상기 단계 (d) 후, 염화수소 수용액을 넣어 pH 2.2~2.6으로 적정하여 용액 상태의 콜라겐을 만든 후, 원심분리를 통해 침전물을 제거하고 상등액을 회수하는 단계 (e); 상기 단계 (e) 후, 가압식 여과기(Filter press)를 사용하여 포어사이즈(pore size) 0.6~1.0 μm로 1단계, 포어사이즈 0.44~0.46 μm로 2단계, 포어사이즈 0.1~0.3 μm로 3단계의 여과를 순차적으로 수행하여 포어사이즈별 3번의 여과과정을 수행하는 단계 (f); 및, 상기 단계 (f) 후, NaOH를 첨가해 pH 9~11로 적정하여 콜라겐을 침전시키고, 탈수하여 콜라겐을 회수하는 단계 (g);를 포함하는 것을 특징으로 하는 콜라겐의 제조방법을 제공한다.
한편, 본 발명의 콜라겐의 제조방법에 있어서, 상기 동물은, 일 예로 돼지, 소, 말, 염소, 닭, 오리, 거위, 고래 및 상어 중 선택된 어느 하나 이상인 것일 수 있다.
한편, 본 발명의 콜라겐의 제조방법에 있어서, 상기 유기산 용액은, 일 예로 아스코르브산, 시트르산 및 이들의 혼합 용액 중에서 선택된 어느 하나의 유기산 용액인 것일 수 있다.
한편, 본 발명의 콜라겐 제조방법에 있어서, 상기 염화수소 수용액의 농도는, 바람직하게 32~35% (v/v)인 것이 좋다.
한편, 본 발명의 콜라겐 제조방법에 있어서, 상기 단백질분해효소는, 일 예로 펩신, 브로멜라인, 키모파파인, 키모트립신, 콜라게나제, 피신, 파파인, 펩티다제 및 트립신 중 선택되는 어느 하나인 것일 수 있다.
한편, 본 발명의 콜라겐 제조방법에 있어서, 상기 단계 (f) 후 단계 (g) 전에, 바람직하게 포어사이즈 (pore size) 0.4~0.6 um 및 포어사이즈 0.1~0.3 um 필터를 순차적으로 사용해 최종 여과하는 단계 (f-1);을 추가로 수행하는 것이 좋다.
본 발명의 pH 적정법을 이용한 콜라겐 제조방법은 기존의 염석침전법보다 고수율로 콜라겐을 수득할 수 있다. 또한, 추출과정에서 사용되는 산 특유의 냄새가 나지 않는 콜라겐을 제조할 수 있다.
도 1은 돼지껍데기를 유기산 용액으로 팽윤시켜 지방을 제거하는 단계이다.
도 2는 돼지 껍데기에 염화수소 수용액을 넣어 분쇄하여 균질화 하는 단계이다.
도 3은 단계 (c)에서 분쇄한 돼지 껍데기에 펩신을 넣어 텔로펩타이드 부분을 제거하는 단계이다.
도 4는 단계 (d)에서 수산화나트륨 수용액을 사용하여 효소를 불활성화 시키는 단계이다.
도 5는 단계 (d)에서 콜라겐 함유 용액의 제조를 위한 염화수소 수용액을 첨가하는 단계이다.
도 6은 단계 (e)에서 침전물 및 불순물을 제거하고 상등액을 회수하는 단계이다.
도 7은 단계 (f)에서 가압식 여과기를 이용하여 3단계로 여과하는 단계이다.
도 2는 돼지 껍데기에 염화수소 수용액을 넣어 분쇄하여 균질화 하는 단계이다.
도 3은 단계 (c)에서 분쇄한 돼지 껍데기에 펩신을 넣어 텔로펩타이드 부분을 제거하는 단계이다.
도 4는 단계 (d)에서 수산화나트륨 수용액을 사용하여 효소를 불활성화 시키는 단계이다.
도 5는 단계 (d)에서 콜라겐 함유 용액의 제조를 위한 염화수소 수용액을 첨가하는 단계이다.
도 6은 단계 (e)에서 침전물 및 불순물을 제거하고 상등액을 회수하는 단계이다.
도 7은 단계 (f)에서 가압식 여과기를 이용하여 3단계로 여과하는 단계이다.
본 발명에서는 기존의 염석침전 방법을 대체할 수 있는 콜라겐 수득방법을 개발하고자 예의 노력하였고, 그 결과 pH 적정법에 의한 콜라겐 수득방법을 개발하였다. 본 발명에서 개발한 pH 적정법에 의한 콜라겐 수득방법은 기존의 염석침전 방법에 비해 콜라겐 수득률이 현저히 높게 나타났다.
이를 바탕으로 본 발명은 돼지, 소, 말, 염소, 닭, 오리, 거위, 고래 및 상어 중 선택된 어느 하나 이상의 본 발명은 동물 피부 조직을 유기산 용액에 담근 후 팽윤시킴으로써, 피부 상피층 및 피하지방이 제거된 진피를 회수하는 단계 (a); 상기 단계 (a) 후, 염화수소 수용액을 넣어 pH 2.4~2.7을 만들고 알갱이가 보이지 않도록 분쇄하여 균질화하는 단계 (b); 상기 단계 (b) 후, 단백질분해효소를 넣어 교반함으로써 항원성이 있는 텔로펩타이드 부분을 제거하는 단계 (c); 상기 단계 (c) 후, 수산화나트륨 수용액을 사용하여 pH 8.0~8.5로 적정하여 단백분해효소를 불활성화시키는 단계 (d); 상기 단계 (d) 후, 염화수소 수용액을 넣어 pH 2.2~2.6로 적정하여 용액 상태의 콜라겐을 만든 후, 원심분리를 통해 침전물을 제거하고 상등액을 회수하는 단계 (e); 상기 단계 (e) 후, 가압식 여과기(Filter press)를 사용하여 포어사이즈(pore size) 0.6~1.0 μm로 1단계, 포어사이즈 0.44~0.46 μm 로 2단계, 포어사이즈 0.1~0.3 μm로 3단계의 여과를 순차적으로 수행하여 포어사이즈별 3번의 여과과정을 수행하는 단계 (f); 및, 상기 단계 (f) 후, NaOH를 첨가해 pH 9~11로 적정하여 콜라겐을 침전시키고, 탈수하여 콜라겐을 회수하는 단계 (g);를 포함하는 것을 특징으로 하는 콜라겐의 제조방법을 제공한다.
이하, 본 발명의 콜라겐 제조방법에 대해 각 단계별로 세분화해서 구체적으로 설명하기로 한다.
<단계 (a): 진피 회수 단계>
본 단계는 동물 피부 조직을 유기산 용액에 담근 후 팽윤시킴으로써, 피부 상피층 및 피하지방이 제거된 진피를 회수하는 과정이다. 콜라겐은 피부의 진피 층에 많이 존재하는데, 본 단계를 통해 피부 조직으로부터 진피층을 회수할 수 있게 된다. 또한, 본 단계를 통해 피부 상피층 및 피부조직에 부착되어 있는 피하지방을 제거할 수 있다.
본 단계에서 사용하는 동물 피부 조직은 돼지, 소, 말, 염소, 닭, 오리, 거위, 고래 및 상어 중 선택된 어느 하나 이상의 동물로부터 유래한 피부 조직을 사용할 수 있다.
본 단계에서는 피부 조직을 200~750 mm2의 크기로 절편하여 사용할 수 있다.
본 발명에서는 사용하는 유기산 용액은 바람직하게 아스코르브산 용액, 시트르산 용액 및 이들의 혼합 용액 중 선택되는 어느 하나일 수 있으며, 아스코르브산 용액, 시트르산 용액 및 이들의 혼합 용액을 사용하면, 산 냄새가 발생하지 않는 콜라겐을 수득할 수 있다. 이때, 사용하는 아스코르브산 용액, 시트르산 용액 및 이들의 혼합 용액은 0.05~2 M의 농도로 사용할 수 있으며, 바람직하게는 0.1 M 내지 1.0 M 일 수 있다.
본 단계의 수행시간은 실시 온도에 따라서 상이해 질 수 있으나, 일반적으로는 5~72시간, 바람직하게는 12~60시간 동안 수행하는 것이 좋다.
본 단계는 피부 조직에 유기산 용액 침투를 용이하게 하는 추가 공정을 포함할 수 있다. 예를 들어, 액체 스트림을 형성하거나, 초음파 또는 고주파수에 의한 수파를 생성시킬 수 있다.
본 단계는 추가적인 불순물의 제거과정을 더 포함할 수 있으며, 예를 들어, 칼이나 끌 등의 도구를 이용한 물리적 제거 또는 세제 등의 화학물질을 이용한 화학적 제거를 더 포함할 수도 있다.
본 단계는 진피 회수 후, 세척하는 단계를 더 포함할 수도 있는데, 세척에는 정제수, 증류수, 식염수 및 기타 완충용액을 사용할 수 있다.
<단계 (b):
균질화
단계>
본 단계는 상기 단계 (a) 후, 염화수소 수용액을 넣어 pH 2.4~2.7을 만들고 알갱이가 보이지 않도록 분쇄하여 균질화하는 과정이다.
본 단계에서 염화수소 수용액의 농도는 바람직하게 32~35% (v/v)인 것이 좋다.
<단계 (c): 단백질분해효소 처리에 의한
텔로펩타이드
제거 단계>
본 단계는 상기 단계 (b) 후, 단백질분해효소를 넣어 교반함으로써 항원성이 있는 텔로펩타이드 부분을 제거하는 과정이다.
단백분해효소는 단백질의 펩티드 결합을 가수분해하는 효소를 의미한다. 본 단계에서 사용되는 단백분해효소는 콜라게나아제를 제외한 당업계에 공지된 임의의 효소일 수 있으며, 펩신, 브로멜라인, 키모파파인, 키모트립신, 콜라게나제, 피신, 파파인, 펩티다제 및 트립신 중 선택되는 어느 하나일 수 있다.
본 발명의 단백분해효소는 단계 (a)에서 수득한 진피의 총량을 기준으로 0.1 중량% 내지 20 중량% 범위로 사용될 수 있으며, 바람직하게는 1 중량% 내지 10 중량%, 가장 바람직하게는 2 중량% 내지 8 중량% 범위로 사용될 수 있다.
상기 텔로펩타이드는 콜라겐의 양쪽 말단에 약 12~27개의 아미노산으로 구성된 것으로, 텔로펩타이드의 배열순서(peptide sequence)는 각각의 종마다 다르나, 면역반응을 일으키는 주된 원인이 된다. 본 단계에서는 단백질분해효소 처리를 통해 텔로펩타이드를 제거하여 면역반응의 유도를 방지할 수 있다.
<단계 (d): 단백질분해효소 불활성화 단계>
본 단계는 상기 단계 (c) 후, 수산화나트륨 수용액을 사용하여 pH 8.0~8.5로 적정하여 단백질분해효소를 불활성화시키는 과정이다.
본 단계에서 수산화나트륨으로 단백질분해효소를 불활성화시킴으로써, 다음 단계에 단백질분해효소가 영향을 미치지 않도록 한 것이다.
<단계 (e): 콜라겐 함유 상등액 제조 단계>
본 단계는 상기 단계 (d) 후, 염화수소 수용액을 넣어 pH 2.2~2.6로 적정하여 용액 상태의 콜라겐을 만든 후, 원심분리를 통해 침전물을 제거하고 상등액을 회수하는 과정이다. 이때, 침전물은 이물질을 의미하고, 상등액은 콜라겐이 함유된 용액이다.
한편, 본 단계의 염화수소 수용액의 농도는 바람직하게 32~35% (v/v)인 것을 사용하는 것이 좋다.
본 단계에서는 콜라겐이 용액 상태로 회수되는데, 원심분리를 통해 침전물을 버리고 상등액을 회수함으로써, 콜라겐이 함유된 용액을 수득할 수 있다. 본 단계를 통해 여과 및 정제과정의 효율을 상승시킬 수 있다.
<단계 (f): 여과 단계>
본 단계는 상기 단계 (e) 후, 가압식 여과기(Filter press)를 사용하여 포어사이즈(pore size) 0.6~1.0 μm로 1단계, 포어사이즈 0.44~0.46 μm 으로 2단계, 포어사이즈 0.1~0.3 μm로 3단계의 여과를 순차적으로 수행하여 포어사이즈별 3번의 여과과정을 수행하는 과정이다.
본 단계의 여과를 통해 콜라겐이 정제되어 가는데, 본 단계의 포어사이즈별 3단계에 여과과정을 통해, 콜라겐의 회수 수율을 현저히 높일 수 있다.
한편, 본 발명의 콜라겐 제조방법에 있어서, 상기 단계 (f) 후 단계 (g) 전에, 바람직하게 포어사이즈 (pore size) 0.4~0.6 um 및 포어사이즈 0.1~0.3 um 필터를 순차적으로 사용해 최종 여과하는 단계 (f-1);을 추가로 수행하는 것이 좋다.
<단계 (g): 콜라겐 회수 단계>
본 단계는 상기 단계 (f-1) 후, NaOH를 첨가해 pH 9~11으로 적정하여 콜라겐을 침전시키고, 탈수하여 콜라겐을 회수하는 과정이다. 본 단계를 통해 최종적으로 콜라겐이 회수될 수 있다.
이하, 본 발명의 내용에 대해 하기 실시예 및 실험예를 통해 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예 및 실험예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[
실시예
1: 본 발명의 pH
적정법에
의한 돼지껍질로부터 콜라겐 제조]
<단계 (a): 돈피 채취 및 팽윤 단계>
본 단계는 돈피를 채취하여 팽윤시켜 지방 및 불순물을 제거하는 단계이다. 국립축산과학원이 보유하고 있는 α-gal 유전자가 제거된 형질전환 돼지껍질을 제공받아 사용하였다. 돼지의 등쪽 피부를 수술용 칼을 이용하여 채취하였다. 채취된 피부 조직을 폭 5cm, 길이 15cm의 크기로 절단한 후 1 M(pH 2.3~2.4) 아스코르브산 용액 혹은 시트르산 용액에 담근 다음, 4℃에서 24시간 동안 팽윤(swelling)시켜 상피층 및 피하 지방을 제거하였다.
분리된 진피는 멸균 정제수로 세척한 후, 체에 걸러서 물기를 제거한 후에 50g 씩 포장하여 80℃에서 보관하였다.
<단계 (b): 돈피를 분쇄하여 균질화하는 단계 및 효소 활성화 단계>
본 단계는 돈피를 균질화하는 단계이다. 냉동보관된 진피를 해동시킨 후, 진피(dermis) 50g에 35% 염화수소(HCl) 수용액을 첨가하여 pH를 2.5로 맞춘 후, 알갱이가 보이지 않도록 분쇄하여 균질화한 후, 하루동안 냉장 보관하였다.
<단계 (c): 단백질분해효소 첨가 단계>
상기 단계 (b)의 균질화 후, 용액에 펩신(5g, ≥400 units/mg)을 첨가하고 4℃에서 24시간 동안 교반하여 항원성이 있는 텔로펩타이드 부분을 제거하였다.
<단계 (d): 효소 불활성화 단계>
본 단계는 효소 불활성화를 위하여 수산화나트륨 수용액을 사용하여 적정하는 단계이다. 상기 단계 (c)의 최종 과정에서 교반한 용액에 10M 수산화 나트륨 수용액을 넣어 pH 8로 적정하였다.
<단계 (e): pH 조절단계 및 이물제거 단계>
본 단계는 염화수소 수용액을 넣어 적정하여 용액상태의 콜라겐을 만드는 단계이다. 35% 염화수소 수용액을 넣어 pH 2.4로 적정하여 용액상태의 콜라겐을 만든 후, 원심분리를 통해 침전물을 제거하고 상등액을 회수하여 불순물을 제거하였다.
<단계 (f): 여과 단계>
본 단계는 가압식 여과기(Filter press)를 사용하여 포어사이즈(pore size)별로 여과하는 단계이다. 0.7 um로 1단계, 포어사이즈 0.45 um으로 2단계, 포어사이즈 0.2 um로, 포어사이즈별로 3번 여과(Pre-Filtration) 하였다. 그 후, 포어사이즈 (pore size) 0.5 um 및 포어사이즈 0.2 um 앱솔루트 필터를 순차적으로 사용해 최종 여과단계(f-1)를 수행하였다.
<단계 (g): 침전 단계 및 콜라겐 회수 단계>
본 단계는 상기 단계 (f-1) 후, 10M NaOH를 첨가해 pH 10으로 적정하여 침전시킨 후, 탈수하여 콜라겐을 회수하였다.
[
비교예
1: 염석 침전법에 의한 돼지껍질로부터 콜라겐 수득]
상기 실시예 1과 동일하게 하되, 상기 <단계 (e): pH 조절단계 및 이물제거 단계>를 염석 침전법에 의한 것으로 치환하여 돼지껍질로부터 콜라겐을 제조하였다. 즉, 상기 단계 (d)를 수행한 용액에 5M의 NaCl 용액을 점적하여 첨가하고, 4℃에서 12시간 교반한 후, 탈수하여 콜라겐 침전물을 수득하였다. 이후, 상기 실시예 1에 기재된, 단계 (f)~(g)는 수행하지 않고, 콜라겐 수득단계를 마무리하였다.
[
실험예
1: 콜라겐 함량 측정]
상기 실시예 1 및 비교예 1로부터 회수한 수득물 중 콜라겐 함량 측정하였다. 실시예 1 또는 비교예 1로부터 회수된 수득물 1g을 채취하여 콜라겐의 수득률을 측정하여 비교하였다. 이에 대한 결과는 표 1과 같았다.
구분 | 3회 평균 흡광도 |
콜라겐 수득 수율 (%) | 비고 |
실시예 1로부터 회수된 수득물 1g | 0.6099 | 4.4 | |
비교예 1로부터 회수된 수득물 1g | 0.3171 | 1.9 |
상기 실험결과에서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에서 제조된 콜라겐 수득률은 약 4.4%로 확인되었으며, 비교예 1에서 제조된 콜라겐의 수득률은 1.9%로 확인되어 실시예 1의 수득률이 비교예의 2배 이상의 수득률을 나타내어 pH적정법이 염석침전법보다 수율이 월등히 높다는 것을 확인할 수 있었다.
[
실험예
2: 악취 평가]
상기 실시예 1로부터 제조된 콜라겐에서 발생하는 냄새를 평가하기 위하여, 1L 용량의 봉지에 상기 실시예 1에서 제조된 콜라겐 10 ml를 넣고, 패널 10명을 대상으로 하기 표 2에 나타난 바와 같은 기준에 의거 악취를 평가하고, 이의 평균값을 구하였다. 이때, 대조군으로 유기산을 아세트산으로 변경하여 상기 실시예 1의 방법과 동일하게 제조된 콜라겐을 사용하였다.
구분 | 악취강도 |
1 | 무취 |
2 | 겨우 감지 가능한 냄새 |
3 | 어떤 냄새인지 알수 있는 가벼운 냄새 |
4 | 가볍게 감지할 수 있는 냄새 |
5 | 강한 냄새 |
6 | 강렬한 냄새 |
상기 악취 평가 결과를 표 3에 나타내었다.
구분 | 실시예 1 콜라겐 | 대조군 (아세트산 사용) |
악취 강도 | 2 | 5 |
상기 실험 결과에서 확인되는 바와 같이, 본 발명에 따른 콜라겐의 경우 악취가 거의 없었지만, 아세트산을 사용한 대조군의 경우 악취 강도가 심한 것이 확인되었다.
상기 결과로부터 본 발명의 유기산을 사용하는 경우에 악취 감소 효과가 현저하여 추가적인 공정으로 냄새를 제거하는 과정 없이 화장료 및 식품 원료 등으로 직접적으로 사용 가능함이 확인되었다.
Claims (6)
- 돈피를 아스코르브산 또는 시트르산 용액에 담근 후 팽윤시킴으로써, 피부 상피층 및 피하지방이 제거된 진피를 회수하는 단계 (a);
상기 단계 (a) 후, 상기 단계 (a)에서 얻은 진피에 35% 염화수소 수용액을 넣어 pH 2.4~2.7로 만들고 알갱이가 보이지 않도록 분쇄하여 균질화하는 단계 (b);
상기 단계 (b) 후, 상기 단계 (b)에서 균질화하여 얻은 용액에 펩신을 넣어 교반함으로써 항원성이 있는 텔로펩타이드 부분을 제거하는 단계 (c);
상기 단계 (c) 후, 상기 단계(c)에서 항원성이 있는 텔로펩타이드 부분을 제거하여 얻은 용액에 수산화나트륨 수용액을 사용하여 pH 8.0~8.5로 적정하여 펩신을 불활성화시키는 단계 (d);
상기 단계 (d) 후, 상기 단계 (d)에서 얻은 펩신을 불활성화시켜 얻은 용액에 35% 염화수소 수용액을 넣어 pH 2.4로 적정하여 용액 상태의 콜라겐을 만든 후, 원심분리를 통해 침전물을 제거하고 상등액을 회수하는 단계 (e);
상기 단계 (e) 후, 상기 단계 (e)에서 얻은 상등액에 가압식 여과기(Filter press)를 사용하여 포어사이즈(pore size) 0.6~1.0 μm로 1단계, 포어사이즈 0.44~0.46 μm로 2단계, 포어사이즈 0.1~0.3 μm로 3단계의 여과를 순차적으로 수행하여 포어사이즈별 3번의 여과 과정을 수행하는 단계 (f); 및,
상기 단계 (f) 후, 상기 단계 (f)에서 얻은 여과액에 NaOH를 첨가해 pH 10으로 적정하여 콜라겐을 침전시키고, 탈수하여 콜라겐을 회수하는 단계 (g);를 포함하는 것을 특징으로 하는 콜라겐의 제조방법.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 단계 (f) 후 단계 (g) 전에,
포어사이즈 (pore size) 0.4~0.6 um 및 포어사이즈 0.1~0.3 um 필터를 순차적으로 사용해 최종 여과하는 단계 (f-1);을 추가로 수행하는 것을 특징으로 하는 콜라겐의 제조방법.
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