CN117024411A - 作为hpk1抑制剂的异喹啉 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及作为HPK1抑制剂的异喹啉。描述了异喹啉化合物以及它们作为HPK1(造血激酶1)抑制剂的用途。所述化合物在治疗HPK1依赖性病症和增强免疫应答方面有用。亦描述了抑制HPK1的方法、治疗HPK1依赖性病症的方法、用于增强免疫应答的方法以及用于制备所述异喹啉化合物的方法。

Description

作为HPK1抑制剂的异喹啉
相关申请的交叉引用
本申请是中国申请号为201880033672.9、发明名称为“作为HPK1抑制剂的异喹啉”且申请日为2018年3月30日的专利申请(PCT申请号为PCT/US2018/025573)的分案申请。本申请要求2017年3月30日提交的国际专利申请号PCT/CN2017/078790和2018年2月15日提交的国际专利申请号PCT/CN2018/076908的优先权的权益，该申请的内容通过引用其整体并入本文。
序列表
本申请包含序列表，其已经以ASCII格式电子提交，并且通过引用其整体并入本文。在2018年3月13日创建的所述ASCII副本命名为P34138_WO-2_SL.TXT，其大小为21KB。
技术领域
本发明涉及调节HPK1功能的化合物，其可用于治疗由HPK1介导的疾病和病况例如癌症。
背景技术
肿瘤学家们用于治疗癌症的主要治疗方式是手术切除、放射疗法和经典化疗药物。不幸的是，对于许多肿瘤或多种形式的癌症来说，手术切除不是可行的选择。此外，放射疗法和化疗药物不仅仅靶向患病的细胞，因而最终损害健康的细胞。通过利用抗原的肿瘤特异性表达或肿瘤细胞内特定蛋白质的不当过度表达或不当活化，正在开发更特异性靶向肿瘤细胞的疗法，但肿瘤细胞倾向于发生突变而且可对特异性靶向肿瘤细胞的药物产生抗性。
已出现一种新的癌症治疗范例，其利用患者自身的免疫系统，来克服被许多癌症所用的免疫逃避策略，并增强抗肿瘤免疫力。一种这样的策略为抑制免疫应答的负调节因子，其通常起到维持外周耐受的功能，允许肿瘤抗原被识别为非自身实体。
造血祖细胞激酶1(HPK1)为树突细胞活化及T和B细胞应答的负调节因子的实例，其可靶向增强抗肿瘤免疫力。HPK1主要由造血细胞(包括早期祖细胞)表达。在T细胞中，据信，HPK1通过磷酸化Ser376处的SLP76(Di Bartolo et al.(2007)JEM 204:681-691)和Thr254处的Gads减少信号传导微团簇的持久性来负调节T细胞活化，这导致与经磷酸化的SLP76和Gads结合的14-3-3蛋白质的募集，而从含LAT的微团簇中释放出SLP76-Gads-14-3-3配合物(Lasserre et al.(2011)J Cell Biol 195(5):839-853)。HPK1也可响应于通常由肿瘤分泌的前列腺素E2而被激活，从而有助于肿瘤细胞从免疫系统中逃逸。
发明内容
本文提供酶HPK1的拮抗剂。所述化合物具有式I或Ia所示的结构，或者为其药学上可接受的盐、代谢物、前药或衍生物。进一步提供制备式I或Ia化合物的方法。
所述化合物可用于抑制HPK1激酶活性、增强免疫应答和治疗HPK1依赖性病症。因此，还提供药物组合物，其包含式I或Ia化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物和药学上可接受的载体。提供抑制HPK1的方法，其包括使HPK1与有效量的式I或Ia化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物接触。提供治疗HPK1依赖性病症的方法，其包括向有此需要的受试者给药式I或Ia化合物或其药物制剂。还提供用于治疗HPK1依赖性病症的试剂盒，该试剂盒包含含有式I或Ia化合物的药物组合物；以及使用说明。
具体实施方式
本文公开式I或Ia的化合物及其药物组合物，它们为HPK1(造血祖细胞激酶1)的抑制剂或调节因子。因此，所述化合物和组合物可用于治疗由HPK1介导的疾病和病症。治疗方法的一个实例为，受试者患有癌症的情况。该化合物不仅可用于对抗癌症，还可有利地用于增强有此需要的受试者的免疫应答。
现在，将在下文中更全面地描述本文公开的主题。然而，受益于前述说明书中呈现的教导，本发明所属领域的技术人员将想到本文所阐述的本发明的许多变型和其它实施方案。因此，应该理解的是，本发明不限于所公开的特定实施方案，且那些变型和其它实施方案旨在涵盖在所附权利要求的范围内。换句话说，本文所描述的主题涵盖所有替代、变型和等同物。若所并入的文献、专利和类似材料中的一个或多个与本申请不同或相矛盾，包括但不限于定义的术语、术语用法、所描述的技术等，则以本申请为准。除非另有限定，否则本文使用的所有技术和科学术语具有的含义与本领域普通技术人员通常理解的相同。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献都通过引用其整体并入本文。
定义
术语“取代基”是指替代分子上氢原子的原子或原子团。术语“取代的”是指特定的分子带有一个或多个取代基。术语“一种所述式…的化合物”、“一种式…的化合物”、“多种所述式…的化合物”或“多种式…化合物”是指选自式I或Ia所定义的化合物的种类的任何化合物。
如本文所用，术语“烷基”是指含有1至12个碳原子的直链的或支链的烃基基团。术语“低级烷基”是指C1-C6烷基链。烷基基团的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基和正戊基。烷基基团可任选地经一个或多个取代基取代。
术语“烯基”是指2-8个碳原子(C2-C8)、优选(C2-6)的直链或支链一价烃基，其具有至少一个不饱和位点，即碳-碳sp2双键，其中所述烯基基团可任选地、独立地经一个或多个本文所述的取代基取代，并包括具有“顺式”和“反式”取向的基团，或者“E”和“Z”取向的基团。实例包括但不限于乙烯基(—CH═CH2)、烯丙基(—CH2CH═CH2)，等等。
术语“亚烯基”(亚烯基)是指2-8个碳原子(C2-C8)、优选(C2-6)的直链或支链二价烃基，其具有至少一个不饱和位点，即碳-碳sp2双键，其中所述亚烯基基团可任选地、独立地经一个或多个本文所述的取代基取代，并且包括具有“顺式”和“反式”取向的基团，或者“E”和“Z”取向的基团。实例包括但不限于亚乙烯基(ethylenylene)或亚乙烯基(vinylene)(-CH═CH-)、烯丙基(—CH2CH═CH—)，等等。
术语“烷氧基”是指-O-烷基基团。烷氧基基团可任选地经一个或多个取代基取代。
术语“卤代烷基”是指经一个或多个卤素取代基取代的烷基基团。卤代烷基基团的实例包括二氟甲基(CHF2)、三氟甲基(-CF3)和2,2,2-三氟乙基。
如本文所用，术语“卤素(halogen)”、“卤素(hal)”或“卤代”是指-F、-Cl、-Br或-I。
如本文所用，所述名称“(CO)”和“C(O)”用于是指羰基部分。适合的羰基部分的实例包括但不限于酮和醛部分。
术语“环烷基”是指烃的3-8元单环或7-14元双环体系，该体系具有至少一个饱和的环或具有至少一个非芳族环，其中该非芳族环可具有一定不饱和度。环烷基基团可任选地经一个或多个取代基取代。在一个实施方案中，环烷基基团各个环的0个、1个、2个、3个或4个原子可以被取代基取代。环烷基基团的代表性实例包括环丙基、环戊基、环己基、环丁基、环庚基、环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基、环己二烯基，等等。
术语“芳基”是指烃的单环、双环或三环芳族环体系。芳基基团可任选地经一个或多个取代基取代。在一个实施方案中，芳基基团各个环的0个、1个、2个、3个、4个、5个或6个原子可被取代基取代。芳基基团的实例包括苯基、萘基、蒽基、芴基、茚基、薁基，等等。
术语“杂芳基”是指芳族5-8元单环或双环，其中所述杂原子选自O、N或S，其余的环原子为碳(除非另有说明，否则具有适当的氢原子)。杂芳基基团可任选地经一个或多个取代基取代。在一个实施方案中，杂芳基基团各个环的0个、1个、2个、3个或4个原子可被取代基取代。杂芳基基团的实例包括吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、唑基、/>二唑基、咪唑基、噻唑基、异/>唑基、喹啉基、吡唑基、异噻唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、异喹啉基、吲唑基，等等。
术语“杂环烷基”或“杂环基”是指非芳族3-8元单环、7-12元双环或10-14元三环环系，其包含1-3个杂原子(若为单环的)、1-6个杂原子(若为双环的)或1-9个杂原子(若为三环的)，所述杂原子选自O、N、S、B、P或Si，其中该非芳族环体系为完全饱和的。杂环烷基基团可任选地经一个或多个取代基取代。在一个实施方案中，杂环烷基基团各个环的0个、1个、2个、3个或4个原子可被取代基取代。代表性的杂环烷基基团包括哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二氧杂环戊基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、噻吩基，等等。
术语“羟基烷基”是指进一步经一个或多个羟基基团取代的烷基取代基。该烷基部分可以进一步任选地经一个或多个取代基取代。
取代基和/或变量的组合，只有在这种组合产生正确的价态时，才是允许的。除非上下文另有说明，否则连字符(-)是指所述侧基或基团的连接点。
术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指不同能量的结构异构体，其可通过低能垒相互转化。例如，质子互变异构体(也称为质子移变异构体)包括通过质子迁移的相互转化，例如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过重组一些成键电子的相互转化。
术语“手性”是指具有镜像配偶体不可重叠性的分子，而术语“非手性”是指可与其镜像配偶体重叠的分子。
术语“非对映异构体”是指具有两个或更多个不对称中心并且其分子不为彼此的镜像的立体异构体。
术语“对映异构体”是指化合物的两种立体异构体，它们是彼此不可重叠的镜像。两种对映异构体的等摩尔混合物称为“外消旋混合物”或“外消旋体”。
术语“异构体”或“立体异构体”是指具有相同化学组成但原子或基团在空间中的排列不同的化合物。
关于手性中心的命名，术语“d”和“1”(或+和-)构型如IUPAC建议所定义。
“溶剂合物”表示一个或多个溶剂分子与本发明化合物的缔合或配合物。形成溶剂合物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。术语“水合物”表示溶剂分子为水的配合物。
“代谢物”是通过在体内代谢特定化合物或其盐而产生的产物。可使用本领域已知的常规技术鉴定化合物的代谢物，并使用如本文所述的那些技术确定它们的活性。此产物可由例如所述给药的化合物的氧化、羟基化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱酯化、酶切等产生。因此，本发明包括本发明化合物的代谢物，包括通过以下方法产生的化合物，该方法包括使本发明化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间段。
短语“药学上可接受的”是指该物质或组合物在化学和/或毒理学上与包含制剂所述的其它成分和/或用其治疗所述的受试者相容。
本文使用的短语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的药学上可接受的有机盐或无机盐。示例性盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、糖质酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲烷磺酸盐(methanesulfonate)“甲磺酸盐(mesylate)”、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、双羟萘酸盐(即1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸))盐、碱金属(例如钠和钾)盐、碱土金属(例如镁)盐和铵盐。药学上可接受的盐可涉及包含另一种分子，该分子例如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其它抗衡离子。该抗衡离子可为任何有机或无机部分，其稳定母体化合物上的电荷。此外，药学上可接受的盐可在其结构中具有多于一个带电原子。在多个带电原子为药学上可接受的盐的一部分的实例中，该盐可以具有多个抗衡离子。因此，药学上可接受的盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡离子。
如本文所用的“载体”包括药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，它们对所用剂量和浓度的细胞或哺乳动物是无毒的。所述生理学上可接受的载体通常为pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载体的非限制性实例包括缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯基吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物(包括葡萄糖、甘露糖或糊精)；螯合剂如EDTA；糖醇如甘露醇或山梨糖醇；成盐的抗衡离子如钠；以及/或非离子表面活性剂，例如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。在某些实施方案中，所述药学上可接受的载体为非天然存在的药学上可接受的载体。
本文中“抑制剂”一词的使用意指抑制HPK1活性的分子。本文中的“抑制”意指，与不存在该抑制剂时所述酶的活性相比，降低该目标酶的活性。在一些实施方案中，术语“抑制”意指HPK1活性降低至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约25％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约95％。在其它实施方案中，抑制意指HPK1活性降低约5％至约25％、约25％至约50％、约50％至约75％或约75％至100％。在一些实施方案中，抑制意指HPK1活性降低约95％至100％，例如活性降低95％、96％、97％、98％、99％或100％。可使用各种技术测量这种降低，这些技术为本领域技术人员可掌握的，其包括体外激酶测定。
如本文所用，“HPK1拮抗剂”或“HPK1抑制剂”为一种分子，该分子降低、抑制或以其它方式减少HPK1的一种或多种生物活性(例如，丝氨酸/苏氨酸激酶活性、在TCR激活后募集到TCR复合物、与蛋白质结合配偶体(例如SLP76)相互作用)。使用所述HPK1拮抗剂的拮抗作用不一定表明完全消除HPK1活性。相反，该活性可减少统计学上显著的量，包括例如，与适当的对照相比，减少HPK1活性的至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％或100％。在一些实施方案中，所述HPK1拮抗剂降低、抑制或以其它方式减少HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在这些实施方案的一些实施方案中，所述HPK1拮抗剂降低、抑制或以其它方式减少由HPK1介导的SLP76和/或Gads的磷酸化作用。本发明化合物直接与HPK1结合并抑制其激酶活性。
“特异性拮抗剂”是指一种试剂，其降低、抑制或以其它方式减少限定靶标的活性大于不相关靶标的活性。例如，HPK1特异性拮抗剂将HPK1的至少一种生物活性降低一定量，该一定量在统计学上大于所述拮抗剂对任何其它蛋白质(例如，其它丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制作用。在一些实施方案中，所述拮抗剂对所述靶标的IC50为所述拮抗剂对非靶标的IC50的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％、1％、0.1％、0.01％、0.001％或更低。本发明化合物可为或不为特异性HPK1拮抗剂。特异性HPK1拮抗剂降低HPK1的生物活性的量，该量在统计学上大于该拮抗剂对任何其它蛋白质(例如，其它丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制作用。在某些实施方案中，所述HPK1拮抗剂特异性地抑制HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在这些实施方案的一些实施方案中，该HPK1拮抗剂对HPK1的IC50为该HPK1拮抗剂对另一种丝氨酸/苏氨酸激酶或其它类型激酶(例如酪氨酸激酶)的IC50的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、0.1％、0.01％、0.001％或更低。
术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”是指治疗性治疗和预防的或预防性措施，其中所述目的为预防或减缓(减轻)不期望的生理变化或病症，例如癌症的发展或扩散。出于本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于减轻症状、减轻疾病程度、稳定(即，不恶化)疾病状态、延迟或减缓疾病进展、改善或缓解所述疾病状态以及缓解(无论是部分亦或全部)，无论是可检测的还是不可检测的。与预期生存期(若不接受治疗)相比，“治疗”还可意味着延长生存期。需要治疗的患者包括，已患有该病况或病症的那些患者，以及倾向于患有该病况或病症的那些患者或者要预防该病况或病症的那些患者。
术语“给药”或“给予”包括将所述化合物引入受试者以实现其预期功能的途径。可使用的给药途径的实例包括注射(皮下、静脉内、肠胃外、腹膜内、鞘内)、局部、口服、吸入、直肠和经皮。
术语“有效量”包括在必要的剂量和时间段内有效实现所需结果的量。有效量的化合物可根据例如受试者的疾病状态、年龄和体重等因素以及该化合物在该受试者中引发所需响应的能力而变化。可调整剂量方案以提供最佳治疗响应。有效量也可为其中治疗有益效果不超过所述抑制剂化合物的任何毒性或有害作用(例如副作用)的量。
本文所用的短语“全身给药”、“全身地给药”、“外周给药”和“外周地给药”意指给药化合物、药物或其它物质，使其进入所述患者的系统以及因此经历新陈代谢和其它类似过程。
短语“治疗有效量”意指本发明化合物的量，该量(i)治疗或预防特定疾病、病况或病症，(ii)减弱、改善或消除特定疾病、病况或病症的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述特定疾病、病况或病症的一种或多种症状的发作。在癌症的情况下，所述治疗有效量的药物可减少癌细胞的数量；减小肿瘤大小；抑制(即，在某种程度上减缓并且优选地停止)癌细胞浸润到外周器官中；抑制(即，在某种程度上减缓并且优选地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与该癌症相关的一种或多种症状。到该药物可阻止生长和/或杀死现有癌细胞的程度时，它可为细胞抑制性和/或细胞毒性的。对于癌症治疗，可通过例如评估该疾病进展时间(TTP)和/或确定应答率(RR)来测量疗效。
术语“受试者”是指动物例如哺乳动物，包括但不限于灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。在某些实施方案中，所述受试者为人。
术语“异常细胞生长”、“不受调节的细胞生长”和“过度增殖性病症”在本申请中可互换使用。除非另有说明，否则本文所用的“异常细胞生长”是指不受正常调节机制支配的细胞生长(例如，丧失接触抑制)。
术语“癌症”是指受试者中以不受调节的细胞生长为特征的所述病况，其中所述癌细胞能够局部侵入和/或转移至不连续的部位。如本文所用，“癌症细胞”、“癌细胞”或“肿瘤细胞”是指以这种不受调节的细胞生长和侵入性质为特征的细胞。术语“癌症”涵盖所有类型的癌症，包括但不限于所有形式的癌，黑色素瘤、胚细胞瘤(blastoma)、肉瘤(sarcoma)、淋巴瘤(lymphoma)和白血病(leukemia)，包括但不限于膀胱癌、膀胱肿瘤(bladdercarcinoma)、脑肿瘤(brain tumor)、乳腺癌、宫颈癌(cervical cancer)、结肠直肠癌、食道癌(esophageal cancer)、子宫内膜癌(endometrial cancer)、肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma)、喉癌(laryngeal cancer)、肺癌、骨肉瘤(osteosarcoma)、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌(prostate cancer)、肾癌(renal carcinoma)和甲状腺癌(thyroid cancer)、急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia)、急性髓性白血病(acute myeloidleukemia)、室管膜瘤(ependymoma)、尤文氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、胶质母细胞瘤(glioblastoma)、成神经管细胞瘤(medulloblastoma)、神经母细胞瘤(neuroblastoma)、骨肉瘤、横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、横纹肌样癌(rhabdoid cancer)和肾母细胞瘤(nephroblastoma，维尔姆斯瘤)。
“化疗剂”为可用于治疗癌症的化合物或生物制剂。化疗剂的实例包括烷基化剂类，例如塞替派和环磷酰胺烷基磺酸盐如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮杂环丙烷类，例如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙撑亚胺和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylomelamine)；多聚乙酰(acetogenins)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚，/>)；β-拉帕醌(beta-lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙碱；桦木酸；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康(topotecan)/>CPT-11(伊立替康)/>乙酰喜树碱(acetylcamptothecin)、东莨菪素(scopolectin)和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素；培美曲塞；凯利他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；足叶草素(podophyllotoxin)；足叶草酸(podophyllinic acid)；替尼泊苷(teniposide)；念珠藻素类(cryptophycins)(具体为念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；软珊瑚醇(eleutherobin)；潘卡他汀(pancratistatin)；TLK-286；CDP323，口服α-4整合素抑制剂；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑制素(spongistatin)；氮芥，例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlomaphazine)、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、二氯甲基二乙胺氧化物盐酸盐、美法仑、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、氯乙环磷酰胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝基脲，例如卡莫司汀(carmustine)、吡葡亚硝脲(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，例如烯二炔抗生素(例如卡里奇霉素，尤其卡里奇霉素γ1I和卡里奇霉素ω1I(参见，例如Nicolaou et al.,Angew.Chem Intl.Ed.Engl.,33：183-186(1994))；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素A；埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔抗生素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、重氮丝氨酸(azaserine)、博莱霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、卡拉比星(carabicin)、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、道诺霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素(doxorubicin，包括/>吗啉代-阿霉素、氰基吗啉代-阿霉素、2-吡咯啉基-阿霉素、阿霉素HCl脂质体注射液/>和脱氧阿霉素)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycin)(例如丝裂霉素C)、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲霉素(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物，例如甲氨蝶呤、吉西他滨(gemcitabine)/>替加氟(tegafur，/>)、卡培他滨(capecitabine)/>埃博霉素(epothilon)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，例如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，例如环胞苷(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；抗肾上腺剂，例如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸(folic acid)补充剂，例如弗罗林酸(frolinicacid)；乙酰葡醛酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；倍曲布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地佛法明(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依洛尼塞(elfornithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓(gallium nitrate)；羟基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；洛尼代宁(lonidainine)；美登木素(maytansinoids)，例如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他汀(pentostatin)；苯来美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；/>多糖配合物(JHS Natural Products，Eugene，OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲兰(sizofiran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；单端孢霉烯(trichothecene)(尤其T-2毒素、维拉库林A(verracurin A)、杆孢菌素A(roridin A)和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；格塞图辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside)(“Ara-C”)；噻替派(thiotepa)；紫杉烷(taxoid)，包括紫杉醇(paclitaxel)/>白蛋白工程化的紫杉醇纳米颗粒制剂(ABRAXANETM)和多西他赛(doxetaxel)/>苯丁酸氮芥(chloranbucil)；6-硫代鸟嘌呤(6-thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤；铂类似物，例如顺铂(cisplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)/>铂；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱(vincristine)/>奥沙利铂(oxaliplatin)；亚叶酸(leucovovin)；长春瑞滨(vinorelbine)/>诺消灵(novantrone)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；伊班膦酸盐(ibandronate)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇(retinoid)，例如视黄酸(retinoic acid)；任何以上化疗剂的药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及上述两种或多种化疗剂的组合，例如CHOP(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松龙(prednisolone)组合治疗的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATINTM)与5-FU和亚叶酸组合的治疗方案的缩写)。
化疗剂的其它实例包括抗激素剂，其用于调节、减少、阻断或抑制可促进癌生长的激素的作用，且其通常为系统或全身治疗的形式。它们本身可为激素。实例包括抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERMs)，包括例如他莫昔芬(包括他莫昔芬)、雷洛昔芬/>屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬/>抗孕酮；雌激素受体下调剂(ERD)；雌激素受体拮抗剂，例如氟维司群(fulvestrant)/>用来抑制或停止卵巢的药剂，例如，促黄体激素释放激素(leutinizing hormone-releasing hormone)(LHRH)激动剂例如醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)(/>和/>)、醋酸戈舍瑞林(goserelinacetate)、醋酸布舍瑞林(buserelin acetate)和曲普瑞林(tripterelin)；抗雄激素，例如氟他胺，尼鲁米特和比卡鲁胺；和抑制调节肾上腺中雌激素产生的酶芳香酶的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)/>依西美坦(exemestane)/>福美司坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、伏氯唑(vorozole)/>来曲唑(letrozole)/>和阿那曲唑(anastrozole)此外，化疗剂的此类定义包括二膦酸盐，例如氯膦酸盐(例如/>或/>)、依替膦酸盐/>NE-58095、唑来膦酸/唑来膦酸盐阿仑膦酸盐/>帕米膦酸盐/>替鲁膦酸盐或利塞膦酸盐/>以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制涉及异常细胞增殖的信号通路方面的基因表达的那些反义寡核苷酸，例如PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGFR)；疫苗，例如/>疫苗和基因疗法疫苗，例如/>疫苗、/>疫苗和/>疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如，/>)；抗雌激素，例如氟维司群；EGFR抑制剂如厄洛替尼(erlotinib)或西妥昔单抗(cetuximab)；抗VEGF抑制剂如贝伐单抗(bevacizumab)；arinotecan；rmRH(例如，/>)；17AAG(格尔德霉素衍生物，即热休克蛋白(Hsp)90毒物)，以及任何以上化疗剂的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
亦涵盖在“化疗剂”的定义中的有：(i)抗激素剂，其用于调节或抑制激素对肿瘤的作用，例如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括，例如他莫昔芬(包括枸橼酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬、LY117018、奥那司酮和/>(枸檬酸托瑞米芬)；(ii)抑制调节肾上腺中雌激素产生的酶芳香酶的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特、/>(醋酸甲地孕酮)、/>(依西美坦；Pfizer)、福美司坦、法倔唑、/>(伏氯唑)、(来曲唑；Novartis)和/>(阿那曲唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是那些抑制涉及异常细胞增殖的信号通路方面的基因表达的那些反义寡核苷酸，例如PKC-α、Ralf和H-Ras；(vii)核酶如VEGF表达抑制剂(例如，/>)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，例如基因治疗疫苗，例如/> 和rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂例如rmRH；(ix)抗血管生成剂，例如贝伐单抗(/>Genentech)；和(x)任何上述化疗剂的药学上可接受的盐、酸和衍生物。
在一些实施方案中，所述化疗剂为免疫治疗剂。如本文所用，“免疫治疗剂”为增强免疫系统帮助对抗癌症(特异性或非特异性地)的化合物。免疫疗法包括单克隆抗体和增强免疫系统的非特异性免疫疗法，例如细胞因子、白细胞介素(例如，IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21)、干扰素(例如，IFN-α、IFN-β、IFN-γ)、GM-CSF、沙利度胺(thalidomide)、(Celgene)、来那度胺(lenalidomide)(/>Celgene)、泊马度胺(pomalidomide)(/>Celgene)、咪喹莫特(imiquimod)(/>Valeant)。可用作化疗剂的单克隆抗体的非限制性实例包括曲妥珠单抗(trastuzumab)(Genentech)、贝伐单抗(/>Genentech)、西妥昔单抗(cetuximab)Bristol-Myers Squibb)、帕尼单抗(panitumumab)(/>Amgen)、伊匹单抗(ipilimumab)(/>Bristol-Myers Squibb)、利妥昔单抗(rituximab)(Genentech)、阿仑单抗(alemtuzumab)(/>Genzyme)、奥法木单抗(ofatumumab)(/>Genmab)、吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)(Wyeth)、本妥昔单抗(brentuximab vedotin)(/>SeattleGenetics)、90Y-标记的替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)(/>Biogen Idec)、131I-标记的托西莫单抗(tositumomab)(/>GlaxoSmithKline)、曲妥珠单抗-美坦新偶联物(ado-trastuzumab emtansine)(/>Genentech)、博纳吐单抗(blinatumomab)(/>Amgen)、帕妥珠单抗(pertuzumab)(/>Genentech)、奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)(/>Genentech)、纳武单抗(nivolumab)(/>Bristol-Myers Squibb)、派姆单抗(pembrolizumab)(/>Merck)、彼地利株单抗(pidilizumab)(CureTech)、MPDL3280A(在WO2010/077634中描述，通过引用其整体并入本文)、MDX-1105(在WO2007/005874中描述，通过引用其整体并入本文)和MEDI4736(在WO2011/066389和US2013/034559中描述，通过引用各个的整体并入本文)。另一种有用的免疫治疗剂为AMP-224(在WO2010/027827和WO2011/066342中描述，通过引用各个的整体并入本文)。
化合物
本文所公开的化合物为式I或Ia的化合物或其盐(例如，药学上可接受的盐)、溶剂合物(例如，水合物)、前药、代谢物或衍生物。这些化合物是有用的HPK1抑制剂。
在一个方面，提供式I的化合物：
或其盐(例如，药学上可接受的盐)、溶剂合物(例如，水合物)、前药、代谢物或衍生物，其中：
R1为氢、卤素、氰基、C1-6烷基、C3-7环烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、羟基、C1-6烷氧基、经任选取代的氨基或经任选取代的酰氨基；
R2为(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)或(h)：
(a)5-10元杂芳基或5-10元杂环基，其具有1-4个选自O、S和N的杂原子；以及任选地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代；
或
(b)任选地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代的C6-10芳基；或
(c)氢、卤素、氰基、–NRbC(O)Ra、–NRbSO2Ra、–SO2NRaRb；或–SO2Ra；其中Ra各自独立地为C1-6烷基，且Rb独立地为氢或C1-6烷基；或Ra和Rb与它们所连结的原子一起形成经任选取代的5-10元杂环基；或
(d)–ORa1或–(C1-6亚烷基)–ORa1；其中Ra1各自独立地为任选地经C6-10芳基取代的C1-6烷基；5-10元杂芳基；或5-10元杂环基；其中所述C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基经任选取代；或
(e)C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，它们各自任选地经1至5个取代基取代；或
(f)C3-8环烷基，其任选地经1至5个取代基取代；
(g)–C(O)NRa2Rb2或–NRa2(CO)Rb2，其中Ra2各自独立地为氢或C1-6烷基，且Rb2为氢、C1-6烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基或5-10元杂环基；或Ra2和Rb2与它们所连结的原子一起形成经任选取代的5-10元杂环基；其中所述C1-6烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基经任选取代；或
(h)5-10元杂芳基与选自5元或6元杂芳基、5-10元杂环基、C6-10芳基和C3-7环烷基的环稠合，其中R2的所述5-10元杂芳基和该稠合环任选地经1至4个取代基取代；
R3为氢、氰基、卤素、经任选取代的C1-6烷基、经任选取代的C2-9杂环基或经任选取代的C1-6烷氧基；和
R4为A-C(O)-或D；
A为C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-9杂芳基、C2-9杂环基、–NHRg或–ORh；其中A的所述C1-6烷基、C3-7环烷基、7C2-9杂芳基和C2-9杂环基任选地独立地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代；
Rg和Rh独立地为C1-6烷基、C2-6烯基、C3-7环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基或C2-9杂环基；其中Rg和Rh的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C3-7环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基和C2-9杂环基任选地独立地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代；和
D为氢、C6-10芳基或具有1-4个选自O、S和N的杂原子的5-10元杂芳基；或5-10元杂芳基与选自5元或6元杂芳基、5-10元杂环基、C6芳基和C3-8环烷基的环稠合；其中D的所述5-10元杂芳基和所述稠合环任选地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代。
在式(I)的一般结构的一个方面：
R1为氢、卤素、氰基、C1-6烷基、C3-7环烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、羟基、C1-6烷氧基、经任选取代的氨基或经任选取代的酰氨基；
R2为(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)或(h)：
(a)5-10元杂芳基或5-10元杂环基，其具有1-4个选自O、S和N的杂原子；以及任选地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代；
或
(b)任选地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代的C6-10芳基；或
(c)氢、–NHSO2Ra、–SO2NRaRb；或–SO2NH2；其中Ra各自独立地为C1-6烷基，且Rb为氢或C1-6烷基；或
(d)–ORa1或–(C1-6亚烷基)–ORa1；其中Ra1各自独立地任选地经C6-10芳基取代的C1-6烷基；5-10元杂芳基；或5-10元杂环基；其中所述5-10元杂芳基和5-10元杂环基经任选取代；或
(e)C1-6烷基，其任选地经1至5个取代基取代；或
(f)C3-8环烷基，其任选地经1至5个取代基取代；
(g)–C(O)NRa2Rb2，其中Ra2各自独立地为氢或C1-6烷基，且Rb2为氢、C1-6烷基、5-10元杂芳基或5-10元杂环基，其中所述5-10元杂芳基和5-10元杂环基经任选取代；或
(h)5-10元杂芳基，其与选自5元或6元杂芳基、5-10元杂环基、C6芳基和C3-7环烷基的环稠合，其中R2的所述5-10元杂芳基和该稠合环任选地经1至4个取代基取代；
R3为氢、氰基、卤素、经任选取代的C1-6烷基、经任选取代的C2-9杂环基或经任选取代的C1-6烷氧基；和
R4为A-C(O)-或D；
A为C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-9杂芳基、C2-9杂环基、–NHRg或–ORh；其中A的所述C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-9杂芳基和C2-9杂环基任选地独立地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代；
Rg和Rh独立地为C1-6烷基、C2-6烯基、C3-7环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基或C2-9杂环基；其中Rg和Rh的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C3-7环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基和C2-9杂环基任选地独立地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代；和
D为氢或具有1-4个选自O、S和N的杂原子的5-10元杂芳基；或5-10元杂芳基，其与选自5元或6元杂芳基、5-10元杂环基、C6芳基和C3-8环烷基的环稠合；其中D的所述5-10元杂芳基和所述稠合环任选地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代。
在式(I)的一般结构的一个方面：
R1为氢、卤素、甲基、CF3、CHF2、CH2OH或氰基；
R2为：
5-10元杂芳基或5-10元杂环基，其具有1-4个选自O、S和N的杂原子；和任选地经1个、2个、3个或4个取代基R6、R7、R8和R8取代，它们各自独立地选自：
i.支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基或C1-6亚烯基，其中所述烷基、烯基和亚烯基可任选地经1至4个羟基、卤素、腈、氨基、单(C1-6)烷基氨基-、二(C1-6)烷基氨基-、-SO2Ry、SONRy、–(CO)NRyRz或-NRy(CO)Rz取代，其中在各种情况下，Ry和Rz独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基或卤素取代；
ii.NRyRz-C(O)-，其中Ry和Rz各自独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基或卤素取代；
iii.羟基(C1-6)烷基；
iv.C1-6烷氧基，其中所述烷氧基可任选地经1至4个羟基或卤素取代；
v.C3-9环烷基、经取代或未经取代的C6芳基、经取代或未经取代的5元杂芳基或C2-9杂环基；
vi.卤素；
vii.氨基；
viii.氰基；
ix.–NRy(CO)Rz，其中Ry和Rz各自独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基或卤素取代；
x.–SO2R’，其中R’为H或C1-6烷基；
xi.–SO2NR’R”，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；和
xii.其中嵌入所述杂环基的碳与它所连的氧一起可形成羰基；或R2为C6-10芳基，其具有1个、2个、3个或4个选自支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C3-4环烷基的取代基，其中所述烷基、烯基、亚烯基和环烷基可经氨基、羟基、腈、卤素和酰胺取代；氰基、羟基、卤素、腈、氨基、单(C1-6)烷基氨基-、二(C1-6)烷基氨基-、-SO2Rc、SONRd、–(CO)NRcRd或-NRc(CO)Rd，
其中Rc和Rd各自独立地选自氢和C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基或卤素取代；或
R2为氢或–SO2NH2；
R3为氢、氰基或卤素；和
R4为A-C(O)-，其中，A为：
i.C3-7环烷基、C2-9杂芳基或C2-9杂环基，其中所述环烷基、杂芳基或杂环基可任选地经1个、2个、3个或4个R5取代，其中R5选自氢、支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基，其中所述烷基、烯基和亚烯基可经氨基、C1-6烷氧基、羟基、腈、卤素、-SO2Re和酰胺取代；卤素、羟基(C1-6)烷基、卤代(C1-6)烷基、氰基、氰基(C1-6)烷基、羟基、C1-6烷氧基、氨基、C2-9杂芳基、-SO2Re和NReRf-C(O)-，其中Re和Rf独立地选自氢和支链的或直链的C1-6烷基；
或者，所述环烷基或杂环基与2个R5一起形成双环或螺环，其中2个连至不同碳的R5与各自所连至的碳一起形成双环，或2个连至相同碳的R5与各自所连至的碳一起形成螺环；和
ii.–NHRg，其中Rg选自：
a.支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基和C3-7环烷基，其中所述烷基、烯基、亚烯基、杂环基和环烷基可任选地经羟基、卤素、-CF2、-CF3、氨基、二(C1-6)烷基氨基、单(C1-6)烷基氨基、氰基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、–SO2R’、–SO2NR’R”、–(CO)NR’R”或-NR’(CO)R”取代，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；和
b.C2-9杂芳基或C6-10芳基，其中所述杂芳基具有1-4个选自O、S和N的杂原子；以及其中所述芳基和杂芳基可任选地经1个、2个、3个或4个选自支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基、C3-7环烷基、羟基、卤素、-CF2、-CF3、氨基、二(C1-6)烷基氨基、单(C1-6)烷基氨基、氰基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、-SO2R’、–SO2NR’R”、–(CO)NR’R”和–NR’(CO)R”的取代基取代，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；
或R4为D，其中D为：
5-10元杂芳基，其具有1-4个选自O、S和N的杂原子；且任选地经1个、2个、3个或4个取代基取代。
在一个方面，提供式(Ia)的化合物：
或其盐(例如，药学上可接受的盐)、溶剂合物(例如，水合物)、前药、代谢物或衍生物，其中：
R1为氢、卤素、甲基、CF3、CHF2、CH2OH或氰基；
R2为(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)或(h):
(a)5-10元杂芳基或5-10元杂环基、其具有1-4个选自O、S和N的杂原子；且任选地经1个、2个、3个或4个取代基R6、R7、R8和R8’取代，它们各自独立地选自：
i.支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基或C1-6亚烯基，其中所述烷基、烯基和亚烯基可任选地经1至4个独立地选自羟基、卤素、腈、氨基、单(C1-6烷基)氨基-、二(C1-6烷基)氨基-、-SO2Ry、-S(O)NRy、–(CO)NRyRz和-NRy(CO)Rz的取代基取代，其中Ry和Rz，在各种情况下，独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代；
ii.NRyRz-C(O)-，其中Ry和Rz各自独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代；
iii.羟基(C1-6烷基)；
iv.C1-6烷氧基，其中所述烷氧基可任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代；
v.C3-9环烷基、经取代或未经取代的C6芳基、经取代或未经取代的5元杂芳基或C2-9杂环基；
vi.卤素；
vii.氨基；
viii.氰基；
ix.–NRyC(O)Rz，其中Ry和Rz各自独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代；
x.–SO2R’，其中R’为H或C1-6烷基；
xi.–SO2NR’R”，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；
xii.–NR’C(O)OR”、–NR’SO2NR”或-NR’S(O)R”，其中R’独立地为H或C1-6烷基，且R”独立地为C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)或C6-10芳基，其任选地经C1-6烷基取代；和
xiii.其中嵌入所述杂环基的碳与它所连的氧一起可形成羰基；或(b)C6-10芳基，其具有1个、2个、3个或4个选自支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C3-4环烷基的取代基，其中所述烷基、烯基、亚烯基和环烷基可经氨基、羟基、氰基、卤素、酰胺、单(C1-6烷基)氨基-、二(C1-6烷基)氨基-、-SO2Rc、-S(O)NRd、-C(O)NRcRd和-NRcC(O)Rd取代，
其中Rc和Rd各自独立地选自氢和C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基或卤素取代；或
(c)氢、–NHSO2Ra、–SO2NRaRb；或–SO2NH2；其中Ra各自独立地为C1-6烷基，且Rb为氢或C1-6烷基；或
(d)–ORa1或-(C1-6烷基)–ORa1；其中各自Ra1独立地为任选地经C6-10芳基取代的C1-6烷基；5-10元杂芳基；或5-10元杂环基；其中所述5-10元杂芳基和5-10元杂环基任选地经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代；或
(e)C1-6烷基，其任选地经1至4个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基、单(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、C3-8环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基的取代基取代；其中所述C3-8环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基任选地经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代；或
(f)C3-8环烷基，其任选地经1至4个独立地选自C1-6烷基、羟基、卤素、氰基、氨基、单(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基的取代基取代；其中所述5-10元杂芳基和5-10元杂环基任选地经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代；
(g)–C(O)NRa2Rb2，其中Ra2各自独立地为氢或C1-6烷基，且Rb2为氢、C1-6烷基、5-10元杂芳基或5-10元杂环基，其中所述5-10元杂芳基和5-10元杂环基任选地经1至4个独立地选自C1-6烷基、C3-7环烷基、氧代、羟基、卤素和氰基的取代基取代；或
(h)5-10元杂芳基，其与选自5元或6元杂芳基、5-10元杂环基、C6芳基和C3-7环烷基的环稠合，其中R2的所述5-10元杂芳基和该稠合环任选地经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代；
R3为C1-6烷基、氢、氰基或卤素；和
R4为A-C(O)-或D，其中，A为：
i.C3-7环烷基、C2-9杂芳基或C2-9杂环基，其中所述环烷基、杂芳基或杂环基可任选地经1个、2个、3个或4个R5取代，其中R5选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-6烯基、C2-6亚烯基、卤素、氰基、羟基、C1-6烷氧基、经任选取代的C2-9杂芳基、-SO2Re、-NReRf、-NReC(O)Rf和NReRf-C(O)-；其中R5的所述C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-6烯基、C2-6亚烯基可任选地经1至4个独立地选自C1-6烷氧基、羟基、卤素、氰基、-SO2Re、-NReRf和-C(O)NReRf的取代基取代，其中Re和Rf在每次出现时独立地选自氢和支链的或直链的C1-6烷基；
或者，所述环烷基或杂环基与2个R5一起形成双环或螺环，其中2个连至不同原子的R5与各自所连至的碳一起形成双环，或2个连至相同原子的R5与各自所连至的碳一起形成螺环；ii.–NHRg或-ORh，其中Rg和Rh独立地选自：
a.支链的或直链的C1-6烷基、C3-5环烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基和C3-7环烷基，其中所述烷基、烯基、亚烯基、杂环基和环烷基可任选地经1至4个独立地选自羟基、卤素、-CHF2、-CF3、氨基、二(C1-6烷基)氨基、单(C1-6烷基)氨基、氰基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、–SO2R’、–SO2NR’R”、–C(O)NR’R”和-NR’C(O)R”的取代基取代，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；和
b.C2-9杂芳基或C6-10芳基，其中所述杂芳基具有1-4个选自O、S和N的杂原子；以及其中所述芳基和杂芳基可任选地经1个、2个、3个或4个选自支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基、C3-7环烷基、羟基、卤素、-CHF2、-CF3、氨基、二(C1-6烷基)氨基、单(C1-6烷基)氨基、氰基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、-SO2R’、–SO2NR’R”、–C(O)NR’R”和-NR’C(O)R”的取代基取代，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；或
iii.C1-6烷基，其任选地经1至4个独立地选自羟基、卤素、氰基、C1-6烷氧基、氨基、单(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、C3-7环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基的取代基取代；其中
所述C3-7环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基任选地经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代；和
D为氢或5-10元杂芳基，其具有1-4个选自O、S和N的杂原子；且任选地经1个、2个、3个或4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代；或5-10元杂芳基，其与选自5元或6元杂芳基、5-10元杂环基、C6芳基和C3-8环烷基的环稠合，其中D的所述5-10元杂芳基和该稠合环任选地经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代。
在一些实施方案中，所述化合物为式I或Ia，其不为一种或多种选自N-(8-氨基-3-异喹啉基)-N'-乙基-脲、5-[(8-氨基-3-异喹啉基)氨基]-2-吡嗪甲腈和5-[(8-氨基-3-异喹啉基)氨基]-3-[(1R)-2-(二甲基氨基)-1-甲基乙氧基]-2-吡嗪甲腈的化合物和它们的盐。在所述式I或Ia的化合物的一些实施方案中，R2和R3的至少一个不为氢。在所述式I或Ia的化合物的一些实施方案中，R2不为氢。
在所述式I或Ia的化合物的多个实施方案中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基任选地经1至5个取代基取代。在一些实施方案中，C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-9环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基、5-10元杂芳基、5-10元杂环基或C2-9杂环基可独立地任选地经1至5个R30取代。
在一些实施方案中，在各种情况下，R30独立地为C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-9环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基、C2-9杂环基、卤素、氰基、氧代、-C(O)NR31R32、-C(O)OR33、-C(＝NR36)R34、-C(＝NR36)NR31R32、-C(＝NOR36)R34、氰基、氢、卤素、-R31R32、-NR35C(O)R34、-NR35C(O)NR31R32、-NR35C(O)OR33、–NR35S(O)R36；–NR35SO2R36、–NR35SO2NR31R32、-OR33、-OC(O)R34、-OC(O)NR31R32、-S(O)R36；-SO2R36或-SO2NR31R32；其中R30的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-9环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基、C2-9杂环基任选地经1至4个R40取代；或2个R30基团与它们所连至的母体部分一起形成任选地经1至4个R40取代的环；
R31和R32各自独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-9环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基或C2-9杂环基，它们各自独立地任选地经1至4个R40取代；或R31和R32与它们所连至的氮原子一起形成任选地经1至4个R40取代的C3-7杂环基；
R33、R34和R35各自独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-9环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基或C2-9杂环基，它们各自独立地任选地经1至4个R40取代；
R36为任选地经1至4个R40取代的C1-6烷基。
R40在各种情况下独立地选自卤素、氰基、氧代、-NR41R42、-SO2NR41R42、-C(O)NR41R42、-C(O)OR43、-OR43、-NR43C(O)R44、-NR43C(O)OR43、-NR43C(O)NR41R42、–NR43SO2R45、-SO2R45、C1-6烷基、C3-7环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基或C2-9杂环基；或2个R40基团与它们所连至的母体部分一起形成任选地经1至3个选自C1-6烷基、C1-6卤代烷基、羟基和氧代的取代基取代的环；R40的所述C1-6烷基、C3-7环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基或C2-9杂环基独立地经1至3个任选地选自C1-6烷基、C1-6卤代烷基、羟基和氧代的取代基取代。
R41和R42各自独立地为氢或C1-6烷基；或R41和R42与它们所连至的氮原子一起形成任选地经1至3个选自C1-6烷基、C1-6卤代烷基、羟基和氧代取代基取代的C3-7杂环基；
R43和R44各自独立地为氢或C1-6烷基；和
R45为C1-6烷基。
在所述式I或Ia的化合物的一些实施方案中，R5的经任选取代的C2-9杂芳基任选地经C1-6烷基取代，该C1-6烷基任选地经1至4个独立地选自羟基、卤素、氰基、C1-6烷氧基、氨基-(C1-6烷氧基)-和C2-9杂环基的取代基取代，且该C2-9杂环基任选地经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代。
R1的有用值如上所述。在一个实施方案中，R1为氢且所有其它变量如式I或Ia所描述。在一个实施方案中，R1为卤素且所有其它变量如式I或Ia所描述。在该实施方案的一个方面中，R1为氟且所有其它变量如式I或Ia所描述。在一个实施方案中，R1为氰基且所有其它变量如式I或Ia所描述。
R3的有用值如上所述。在一个实施方案中，R3为氢和所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案中所描述。在一个实施方案中，R3为卤素且所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案中所描述。在该实施方案的某一方面，R3为氟、氯或溴，且所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案中所描述。在一个特定的方面，R3为氟，且所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案中所描述。
R4的有用值如上所述。在某些方面，R4为A-C(O)-，其中，A为C3-6环烷基，其可任选地经1个或2个R5取代，且所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案中所描述。在某些方面，A为C3-5环烷基，其可任选地经1个或2个R5取代，且所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案中所描述。在一个特定的方面，A为环丙基，其可任选地经1个或2个R5取代，且所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案中所描述。
在其中所有其它变量如上述任一实施方案定义的实施方案中，R2为–A-C(O)-。在一些实施方案中，A为经任选取代的C1-6烷基、经任选取代的C3-7环烷基、经任选取代的C2-9杂芳基、经任选取代的C2-9杂环基、–NHRg或-ORh。
在一些实施方案中，A为：
i.C3-7环烷基、C2-9杂芳基或C2-9杂环基，其中所述环烷基、杂芳基或杂环基可任选地经1个、2个、3个或4个R5取代，其中R5选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-6烯基、C2-6亚烯基、卤素、氰基、羟基、C1-6烷氧基、经任选取代的C2-9杂芳基、-SO2Re、-NReRf、-NReC(O)Rf、-NReSO2Rf和NReRf-C(O)-；其中R5的所述C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-6烯基、C2-6亚烯基可任选地经1至4个独立地选自C1-6烷氧基、羟基、卤素、氰基、-SO2Re、-NReRf、-NReC(O)Rf和-C(O)NReRf的取代基取代，其中Re和Rf在每次出现时独立地选自氢、支链的或直链的C1-6烷基和C3-7环烷基；
或者，所述环烷基或杂环基与2个R5一起形成双环或螺环，其中2个连至不同原子的R5与各自所连至的碳一起形成双环，或2个连至相同原子的R5与各自所连至的碳一起形成螺环；
ii.–NHRg或-ORh，其中Rg和Rh独立地选自：
a.支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基和C3-7环烷基，其中所述烷基、烯基、亚烯基、杂环基和环烷基可任选地经1至4个独立地选自羟基、卤素、-CHF2、-CF3、氨基、二(C1-6烷基)氨基、单(C1-6烷基)氨基、氰基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、–SO2R’、–SO2NR’R”、–C(O)NR’R”、-NR’C(O)R”、–NR’C(O)OR”、–NR’C(O)NR”R’”、–NR’SO2NR”R’”或-NR’S(O)R”的取代基取代，其中R’和R”’独立地为H或C1-6烷基，且R”独立地为C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)或C6-10芳基，其任选地经C1-6烷基取代；或R”和R’”与它们所连至的氮一起形成经取代或未经取代的杂环基；和
b.C2-9杂芳基或C6-10芳基，其中所述杂芳基具有1-4个选自O、S和N的杂原子；以及其中所述芳基和杂芳基可任选地经1个、2个、3个或4个选自支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基、C3-7环烷基、羟基、卤素、-CHF2、-CF3、氨基、二(C1-6烷基)氨基、单(C1-6烷基)氨基、氰基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、-SO2R’、–SO2NR’R”、–C(O)NR’R”和-NR’C(O)R”的取代基取代，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；或
iii.C1-6烷基，其任选地经1至4个独立地选自羟基、卤素、氰基、C1-6烷氧基、氨基、单(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、C3-7环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、5-10元杂环基、–SO2R’、–SO2NR’R”、–C(O)NR’R”、-NR’C(O)R”、–NR’C(O)OR”、–NR’C(O)NR”R’”、–NR’SO2NR”R’”和-NR’S(O)R”的取代基取代；
其中R’和R”’独立地为H或C1-6烷基，且R”独立地为C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)或C6-10芳基，其任选地经C1-6烷基取代；或R”和R’”与它们所连至的氮一起形成经任选取代的C3-7杂环基。
在一些实施方案中，A为C3-7环烷基、C2-9杂芳基或C2-9杂环基，其中所述环烷基、杂芳基或杂环基可任选地经1个、2个、3个或4个R5取代，其中R5选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-6烯基、C2-6亚烯基、卤素、氰基、羟基、C1-6烷氧基、经任选取代的C2-9杂芳基、-SO2Re、-NReRf、-NReC(O)Rf、-NReSO2Rf和NReRf-C(O)-；其中R5的所述C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-6烯基、C2-6亚烯基可任选地经1至4个独立地选自C1-6烷氧基、羟基、卤素、氰基、-SO2Re、-NReRf、-NReC(O)Rf和-C(O)NReRf的取代基取代，其中Re和Rf在每次出现时独立地选自氢、支链的或直链的C1-6烷基和C3-7环烷基；或所述环烷基或杂环基与2个R5一起形成双环或螺环，其中2个连至不同原子的R5与各自所连至的碳一起形成双环，或2个连至相同碳的R5与各自所连至的碳一起形成螺环。
在一些实施方案中，A为经任选取代的C3-7环烷基。
在一些实施方案中，A为C1-6烷基，其任选地经1至4个独立地选自羟基、卤素、氰基、C1-6烷氧基、氨基、单(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、C3-7环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基、–SO2R’、–SO2NR’R”、–C(O)NR’R”、-NR’C(O)R”、–NR’C(O)OR”、–NR’C(O)NR”R’”、–NR’SO2NR”R’”或-NR’S(O)R”的取代基取代，其中R’和R”’独立地为H或C1-6烷基，且R”独立地为C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)或C6-10芳基，其任选地经C1-6烷基取代；或R”和R’”与它们所连至的氮一起形成经取代或未经取代的杂环基；其中所述C3-7环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基经任选取代(例如，经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代)。
R5的有用值如上所述。在一个实施方案中，R5选自氢、氟、氰基、NH2-C(O)-、C2-9杂芳基、氰基(C1-6)烷基和羟基(C1-6)烷基，且所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案中所描述。在该实施方案的特定方面中，R5为氟或氰基，且所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案中所描述。
在一个实施方案中，R5为C2-9杂芳基。在该实施方案的特定方面中，所述C2-9杂芳基为经任选取代的杂芳基，其含有至少一个氮。在该实施方案的特定方面中，所述杂芳基为经任选取代的5元杂芳基，其含有1个或2个氮原子。在该实施方案的特定方面中，所述5元杂芳基为经任选取代的吡唑。
在一个实施方案中，至少一个R5为氰基(C1-6)烷基。在该实施方案的特定方面中，至少一个R5为氰基-CH2-。
在一个实施方案中，R5为氢。
在一个实施方案中，R5为如上所述的除了氢以外的基团，且所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案中所描述。
在其中R5不为氢的一个实施方案中，R4为A-C(O)-，其中，A为：其中，v为0、1、2、3或4；X、Y和Z各自独立地不存在或为-CH2-，和其中，若存在，则各个X、Y和Z上的0个、1个或2个H可为R5；且所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案中所描述。
在一个实施方案中，A为其中，v为0、1或2，且所有其它变量如式I或Ia所定义或如本文所述的任一实施方案中所描述。
在一个实施方案中，A为且所有其它变量如式I或Ia所定义或如上文所述的任一实施方案中所定义。
在一个实施方案中，R5不为氢，且R4为A-C(O)-，其中，A为且所有其它变量如式I或Ia所定义或如上文所述的任一实施方案中所定义。/>
在一个实施方案中，A为其中，v为0、1或2，且所有其它变量如式I或Ia所定义或如上文所述的任一实施方案中所定义。
在一个实施方案中，R5不为氢，且R4为A-C(O)-，其中，A为且所有其它变量如式I或Ia所定义或如上文所述的任一实施方案中所定义。
在一些实施方案中，R4为其中、v为0、1、2或3；以及R5选自C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-6烯基、C2-6亚烯基、卤素、氰基、羟基、C1-6烷氧基、经任选取代的C2-9杂芳基、-SO2Re、-NReRf、-NReC(O)Rf、-NReSO2Rf和NReRf-C(O)-；其中所述R5的C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-6烯基、C2-6亚烯基可任选地经1至4个独立地选自C1-6烷氧基、羟基、卤素、氰基、-SO2Re、-NReRf、-NReC(O)Rf和-C(O)NReRf的取代基取代，其中Re和Rf在每次出现时独立地选自氢、支链的或直链的C1-6烷基和C3-7环烷基。
在其中所有其它变量如上述任一实施方案定义的实施方案中，R5选自氢、氟、氰基、NH2-C(O)-、烷基-(C1-6)烷氧基-、经任选取代的C2-9杂芳基和氰基(C1-6)烷基。在这些实施方案中，R5为氟或氰基。在这些实施方案中，R5为氢。在这些实施方案中，R5为经任选取代的C2-9杂芳基或氰基(C1-6)烷基。在这些实施方案中，R5为氰基-CH2-。在一些实施方案中，至少一个R5为C1-6烷基(例如，甲基)。
在其中所有其它变量如上述任一实施方案定义的实施方案中，所述化合物中至少一个R5为经任选取代的C2-9杂芳基。
在其中所有其它变量如上述任一实施方案定义的实施方案中，化合物中至少一个的R5为经任选取代的C2-9杂芳基，其为含有1个或2个氮原子的经任选取代的5元杂芳基其。
在其中所有其它变量如上述任一实施方案定义的实施方案中，所述化合物中所述经任选取代的5元杂芳基为经任选取代的吡唑。
在其中所有其它变量如上述任一实施方案定义的实施方案中，所述化合物中所述经任选取代的吡唑为其中该波浪线表示连至所述环丙基环的连接点；且其中RB1为支链的或直链的C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基、卤素、腈、氨基、-O-(C1-6)烷基、-O-(C1-6)烷基氨基-、二(C1-6)烷基氨基-或-NRy(CO)Rz取代，其中，在各种情况下，Ry和Rz独立地为氢或C1-6烷基；或-SO2R’，其中R’为C1-6烷基。
在其中所有其它变量如上述任一实施方案定义的实施方案中，所述化合物中RB1为经任选取代的直链的C1-6烷基。
在其中所有其它变量如上述任一实施方案定义的实施方案中，所述化合物中该经任选取代的直链的C1-6烷基为甲基。
在一些实施方案中，R4为其中v为2，一个R5为甲基和第二个R5为1-甲基吡唑-4-基。
在一些实施方案中，R4为
在一些实施方案中，R4为/>在一些实施方案中，R4为/>在一些实施方案中，R4为/>在一些实施方案中，R4为/>
在一些实施方案中，式I或Ia的化合物选自化合物编号195、196、197、198、279、280、281、282和358，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，R4为A-C(O)-，其中A为–NHRg或-ORh，其中Rg和Rh独立地为C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基、C3-7环烷基、C2-9杂芳基或C6-10芳基；它们各自可任选地如本文所详述地被取代。在一些实施方案中，Rg和Rh独立地选自：
a.支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基和C3-7环烷基，其中所述烷基、烯基、亚烯基、杂环基和环烷基可任选地经1至4个独立地选自羟基、卤素、-CHF2、-CF3、氨基、二(C1-6烷基)氨基、单(C1-6烷基)氨基、氰基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、–SO2R’、–SO2NR’R”、–C(O)NR’R”、-NR’C(O)R”、–NR’C(O)OR”、–NR’C(O)NR”R’”、–NR’SO2NR”R’”或-NR’S(O)R”的取代基取代，其中R’和R”’独立地为H或C1-6烷基，且R”独立地为C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)或C6-10芳基，其任选地经C1-6烷基取代；或R”和R’”与它们所连至的氮一起形成经取代或未经取代的杂环基；和
b.C2-9杂芳基或C6-10芳基，其中所述杂芳基具有1-4个选自O、S和N的杂原子；以及其中所述芳基和杂芳基可任选地经1个、2个、3个或4个选自支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基、C3-7环烷基、羟基、卤素、-CHF2、-CF3、氨基、二(C1-6烷基)氨基、单(C1-6烷基)氨基、氰基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、-SO2R’、–SO2NR’R”、–C(O)NR’R”和-NR’C(O)R”的取代基取代，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基。
在实施方案中，R4为A-C(O)-，其中，A为：ii.–NHRg，其中Rg选自：a.支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基和C3-7环烷基，其中所述烷基、烯基、亚烯基、杂环基和环烷基可任选地经羟基、卤素、-CF2、-CF3、氨基、二(C1-6)烷基氨基、单(C1-6)烷基氨基、氰基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、–SO2R’、–SO2NR’R”、–(CO)NR’R”或-NR’(CO)R”取代，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；和b.C2-9杂芳基或C6-10芳基，其中所述杂芳基具有1-4个选自O、S和N的杂原子；以及其中所述芳基和杂芳基可任选地经1个、2个、3个或4个选自支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基、C3-7环烷基、羟基、卤素、-CF2、-CF3、氨基、二(C1-6)烷基氨基、单(C1-6)烷基氨基、氰基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、–SO2R’、–SO2NR’R”、–(CO)NR’R”和-NR’(CO)R”的取代基取代，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基，且所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案所描述。
在其中所有其它变量如上述任一实施方案定义的实施方案中，R2为D。在一些实施方案中，D为5-10元杂芳基，其具有1-4个选自O、S和N的杂原子；且任选地经1个、2个、3个或4个取代基取代，其中2个连至不同原子的所述取代基与各自所连至的原子一起形成双环或三环，其中所述双环或三环经任选取代；或所述5-10元杂芳基与选自5元或6元杂芳基、5-10元杂环基、C6芳基和C3-8环烷基的环稠合，其中D的所述5-10元杂芳基和所述稠合环经任选取代，其中所述稠合环形成经任选取代的双环或三环体系。
在一些实施方案中，D为氢或5-10元杂芳基，该5-10元杂芳基具有1-4个选自O、S和N的杂原子；且其经任选取代(例如，经1个、2个、3个或4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基取代)；或5-10元杂芳基，其与选自5元或6元杂芳基、5-10元杂环基、C6芳基和C3-8环烷基的环稠合，其中D的所述5-10元杂芳基和所述稠合环经任选取代(例如，经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基取代)。
在一个实施方案中，R4为D，其中，D为经任选取代的杂芳基，其含有至少一个氮。在实施方案中，所述杂环基为经任选取代的5元杂环基，其含有1个或2个氮原子。在实施方案中，所述5元杂环基为经任选取代的吡唑。
在一个实施方案中，所述经任选取代的吡唑为其中该波浪线表示连至该N的连接点；且其中RA为支链的或直链的C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基、卤素、腈、氨基、单(C1-6)烷基氨基-、二(C1-6)烷基氨基-或-NRy(CO)Rz取代，其中，在各种情况下，Ry和Rz独立地为氢或C1-6烷基。
在一个实施方案中，RA为经羟基、卤素、腈或氨基取代的直链的C1-6烷基。
在一个实施方案中，所述直链的C1-6烷基为经腈取代的乙基。
在一个实施方案中，RA为
在一个实施方案中，RA为
在一些实施方案中，所述经任选取代的吡唑与另一个环的部分稠合形成经任选取代的双环或三环，例如，具有稠合至1,5键的另一个环的部分的3-吡咯基。在一些实施方案中，D为双环(或其中出现进一步的环稠合的三环)，其为
其中X’和Y’各自独立地为C、N、S或O；以及其中所述双环任选地经1个、2个、3个或4个独立地选自氢、羟基、氨基和C1-6烷基的取代基取代；以及其中2个所述取代基与它们所连至的原子一起可形成C3-C5螺环或C2-9杂芳基环；其中所述C2-9杂芳基环可稠合至所述双环形成三环。在这些实施方案的一些实施方案中，X’或Y’的至少一个为N。
在一些实施方案中，D为
在一些实施方案中，式I或Ia的化合物选自化合物编号228、229、230、247、276、315和316，或其药学上可接受的盐。
在其中所有其它变量如本文详述任一实施方案中所定义的实施方案中，所述化合物中D为5元杂芳基，其具有所述式或6元杂芳基，其具有所述式/>其中：
Q为NR20、CR20、O或S；
T各自独立地为N或CR21；
Z各自独立地为N或C，其条件为只有1个Z为N；
R20和R21各自独立地为氢、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤素、羟基或氰基；和
R22和R23与它们所连至的原子一起形成双环；其中所述双环可含有一个或多个选自N、S和O的杂原子；以及其中所述双环任选地经1个、2个、3个、4个或5个R30取代；
其中R30各自独立地为C1-6烷基、C2-6烯基、C3-7环烷基、C3-7杂环基、卤素、氰基、氧代、-NR31R32、-SO2NR31R32、-C(O)NR31R32、-C(O)OR33、-OR33、-NR33C(O)R34、–NR33SO2R35或-SO2R35；其中R30的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C3-7环烷基和C3-7杂环基任选地经1至4个R40取代；或2个R30基团与它们所连至的母体部分一起形成任选地经1至4个R40取代的环；
R31和R32各自独立地为氢或C1-6烷基；或R31和R32与它们所连至的氮原子一起形成任选地经14个R40取代的C3-7杂环基；
R33和R34各自独立地为氢或C1-6烷基；
R35为C1-6烷基；
R40各自独立地选自卤素、氰基、氧代、-NR41R42、-SO2NR41R42、-C(O)NR41R42、-C(O)OR43、-OR43、-NR43C(O)R44、–NR43SO2R45或-SO2R45；C1-6烷基、C1-6卤代烷基[例如，-CHF2或-CF3]、C2-9杂芳基、C6-10芳基、氧代；或2个R40基团与它们所连至的母体部分一起形成任选地经1至3个选自C1-6烷基、C1-6卤代烷基、羟基和氧代的取代基取代的环；
R41和R42各自独立地为氢或C1-6烷基；或R41和R42与它们所连至的氮原子一起形成任选地经1至3个选自C1-6烷基、C1-6卤代烷基、羟基和氧代的取代基取代的C3-7杂环基；
R43和R44各自独立地为氢或C1-6烷基；以及
R45为C1-6烷基。
在一些实施方案中，D为：
其中q为0、1、2、3、4、5或6；R36独立地为氢或R30；以及R20和R30如本文所详述。在这些实施方案的一些实施方案中，R20为氢、C1-6烷基(例如，甲基)、卤素(例如，氟)、羟基或C1-6烷氧基(例如，甲氧基)。在一些实施方案中，R20为H、Me、F或OH。在这些实施方案的一些实施方案中，R36为氢或C1-6烷基(例如，甲基)。在这些实施方案的一些实施方案中，q为0。
在一些实施方案中，D为：
其中q为0、1、2、3、4、5或6；以及R20和R30如本文所详述。在这些实施方案的一些实施方案中，q为0。在这些实施方案的一些实施方案中，R20为氢、C1-6烷基(例如，甲基)、卤素(例如，氟)、羟基或C1-6烷氧基(例如，甲氧基)。在一些实施方案中，R20为H、Me、F或OH。
在一些实施方案中，D为：
其中R36独立地为氢或R30；以及R20和R30如本文所详述。在一些实施方案中，R36为氢或C1-6烷基(例如，甲基)；以及R20为氢。
在一些实施方案中，其中D为
其中p为0、1、2、3或4；R36独立地为氢或R30；以及R20和R30如本文所详述。在一些实施方案中，p为0。在一些实施方案中，R36为氢或C1-6烷基(例如，甲基)；以及R20为氢。
在一些实施方案中，其中D为
其中X为CH2、N、O或S；n为1、2、3或4；p为0、1、2、3或4；R36为氢或R30；以及R20和R30如本文所详述。在这些实施方案的一些实施方案中，X为CH2和n为1。在一些实施方案中，R36为氢或C1-6烷基(例如，甲基)；以及R20为氢。
在一些实施方案中，其中D为
其中q为0、1、2、3、4、5或6；G独立地为C或N；G’独立地为N、NR46、CR47、S或O；R46和R47独立地为氢或R40，且R20和R40如本文所详述。在一些实施方案中，2个基团R46和R47一起形成环。在这些实施方案的一些实施方案中，1个G为C且另一个G为N。在一些实施方案中，每一个G为C。在一些实施方案中，至少一个G’为N。在一些实施方案中，至少一个G’为CR47。在一些实施方案中，R47为H。在一些实施方案中，R20为氢。
在一些实施方案中，其中D为其中R20和R46如本文所详述。在一些实施方案中，R46为氢或C1-6烷基(例如，甲基)；以及R20为氢。
在一些实施方案中，其中D为
在一些实施方案中，其中D为
其中Q为NR20、O或S；X为CR38aR38b、NR36、S或O；X’为CR39aR39b、NR36、S、SO2或O；R36、R37a、R37b、R38a和R38b独立地为氢或R30；R39a和R39b独立地为氢或R30，或R39a和R39b与它们所连至的碳原子一起形成C3-7环烷基或C3-7杂环基；且R20和R30如本文所详述。在这些实施方案的一些实施方案中，Q为NR20。在这些实施方案的一些实施方案中，Q为S。在一些实施方案中，X为CH2或NR36。在一些实施方案中，X’为CH2。在一些实施方案中，X’为SO2。在一些实施方案中，X’为CR39aR39b，其中R39a和R39b与它们所连至的碳原子一起形成环丙基。在一些实施方案中，R36为氢或C1-6烷基(例如，甲基)；以及R20为氢。
在一些实施方案中，其中D为其中X、X’、R20和R36如本文所详述。在这些实施方案的一些实施方案中，X为CH2或NR36。在一些实施方案中，X’为CH2。在一些实施方案中，X’为SO2。在一些实施方案中，X’为CR39aR39b，其中R39a和R39b与它们所连至的碳原子一起形成环丙基。在一些实施方案中，R36为氢或C1-6烷基(例如，甲基)。在一些实施方案中，R20为氢。
在式I或Ia的化合物的一些方面，R2为：
(a)C6-10芳基、5-10元杂芳基或5-10元杂环基，其具有1-4个选自O、S和N的杂原子；以及任选地经1个、2个、3个或4个取代基R6、R7、R8和R8’取代，所述取代基R6、R7、R8和R8’各自独立地选自：
i.支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基或C1-6亚烯基，其中所述烷基、烯基和亚烯基可任选地经1至4个独立地选自羟基、卤素、腈、氨基、单(C1-6烷基)氨基-、二(C1-6烷基)氨基-、-SO2Ry、-S(O)NRy、–(CO)NRyRz、-NRzSO2Ry、-NRy(CO)ORz、-NRy(CO)NRyRz和-NRy(CO)Rz的取代基取代，其中在各种情况下，Ry和Rz独立地为氢或经任选取代的C1-6烷基(例如，任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代的烷基)；
ii.NRyRz-C(O)-，其中Ry和Rz各自独立地为氢或经任选取代的C1-6烷基(例如，任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代的烷基)；
iii.羟基(C1-6烷基)；
iv.羟基或经任选取代的C1-6烷氧基(例如，任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代的烷氧基)；
v.经取代或未经取代C3-9环烷基、经取代或未经取代的C6芳基、经取代或未经取代的5元杂芳基或经取代或未经取代的C2-9杂环基；
vi.卤素；
vii.经取代或未经取代的氨基；
viii.氰基；
ix.–NRyC(O)Rz，其中Ry和Rz各自独立地为氢或经任选取代的C1-6烷基(例如，任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代的烷基)；
x.–SO2R’，其中R’为H或C1-6烷基；
xi.–SO2NR’R”，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；或R’和R”与它们所连至的氮一起形成经取代或未经取代的杂环基；
xii.–NR’C(O)OR”、–NR’C(O)NR”R’”、–NR’SO2NR”R’”或-NR’S(O)R”，其中R’和R”’独立地为H或C1-6烷基，且R”独立地为C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)或C6-10芳基，其任选地经C1-6烷基取代；或R”和R’”与它们所连至的氮一起形成经取代或未经取代的杂环基；和
xiii.其中嵌入所述杂环基的碳与它所连的氧一起可形成羰基；或
(b)C6-10芳基，其具有1个、2个、3个或5个选自支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C3-4环烷基的取代基，其中所述烷基、烯基、亚烯基和环烷基可经氨基、羟基、氰基、卤素、酰胺、单(C1-6烷基)氨基-、二(C1-6烷基)氨基-、-SO2Rc、-S(O)NRd、-C(O)NRcRd和-NRcC(O)Rd取代，
其中Rc和Rd各自独立地选自氢和C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基或卤素取代；或
(c)氢、–NHSO2Ra、–SO2NRaRb；或–SO2NH2；其中Ra各自独立地为C1-6烷基，且Rb为氢或C1-6烷基；或
(d)–ORa1或-(C1-6烷基)–ORa1；其中Ra1各自独立地为任选地经C6-10芳基取代的C1-6烷基；5-10元杂芳基；或5-10元杂环基；其中所述5-10元杂芳基和5-10元杂环基任选地经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代；或
(e)C1-6烷基，其任选地经1至5个独立地选自羟基、卤素、氰基、氨基、单(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、酰氨基、磺酰基、磺酰胺、C3-8环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基的取代基取代；其中所述C3-8环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基任选地经取代(例如，经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代)；或
(f)C3-8环烷基，其任选地经1至4个独立地选自C1-6烷基、羟基、卤素、氰基、氨基、单(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、酰氨基、磺酰基、磺酰胺、5-10元杂芳基和5-10元杂环基的取代基取代；其中所述5-10元杂芳基和5-10元杂环基任选地经取代(例如，经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代)；
(g)–C(O)NRa2Rb2或-SO2NRa2Rb2，其中Ra2各自独立地为氢或C1-6烷基，且Rb2为氢、C1-6烷基、5-10元杂芳基或5-10元杂环基，其中所述5-10元杂芳基和5-10元杂环基任选地经取代(例如，经1至4个独立地选自C1-6烷基、C3-7环烷基、氧代、羟基、卤素和氰基的取代基取代)；或Ra2和Rb2与它们所连至的氮一起形成经取代或未经取代的杂环基(例如，哌啶、哌嗪、吡咯烷)；或
(h)5-10元杂芳基，其与选自5元或6元杂芳基、5-10元杂环基、C6芳基和C3-7环烷基的环稠合，其中R2的所述5-10元杂芳基和所述稠合环任选地经取代(例如，经1至4个独立地选自羟基、氧代、C1-6烷基或C1-6烷氧基的取代基取代)。
在其中所有其它变量如上文所定义的实施方案中，R2的有用值为经任选取代的C2-9杂芳基或经任选取代的C2-9杂环基(例如，C3-7杂环基)。在一个实施方案中，R2为经任选取代的5-10元杂芳基或经任选取代的5-10元杂环基；和所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一任一实施方案所定义。在该实施方案的一个方面中，R2为5元杂芳基。在该实施方案的一个方面中，R2为5元杂环基。在该实施方案的一个方面中，R2为6元杂芳基。在该实施方案的一个方面中，R2为6元杂环基。在该实施方案的一个方面中，R2为7元杂芳基。在该实施方案的一个方面中，R2为7元杂环基。在该实施方案的一个方面中，R2为8元杂芳基。在该实施方案的一个方面中，R2为8元杂环基。在该实施方案的一个方面中，R2为9元杂芳基。在该实施方案的一个方面中，R2为9元杂环基。在该实施方案的一个方面中，R2为10元杂芳基。在该实施方案的一个方面中，R2为10元杂环基。在各种情况下，所述杂芳基或杂环基可任选地经1个、2个、3个取代基R6、R7和R8取代。
在一些实施方案中，R6、R7和R8各自独立地选自：
i.支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基或C1-6亚烯基，其中所述烷基、烯基和亚烯基可任选地经1至4个独立地选自羟基、卤素、腈、氨基、单(C1-6烷基)氨基-、二(C1-6烷基)氨基-、-SO2Ry、-S(O)NRy、–(CO)NRyRz和-NRy(CO)Rz的取代基取代，其中Ry和Rz，在各种情况下，独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代；
ii.NRyRz-C(O)-，其中Ry和Rz各自独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代；
iii.羟基(C1-6烷基)；
iv.C1-6烷氧基，其中所述烷氧基可任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代；
v.C3-9环烷基、经取代或未经取代的C6芳基、经取代或未经取代的5元杂芳基或C2-9杂环基；
vi.卤素；
vii.氨基；
viii.氰基；
ix.–NRyC(O)Rz，其中Ry和Rz各自独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代；
x.–SO2R’，其中R’为H或C1-6烷基；
xi.–SO2NR’R”，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；
xii.–NR’C(O)OR”、–NR’SO2NR”或-NR’S(O)R”，其中R’独立地为H或C1-6烷基，且R”独立地为C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)或C6-10芳基，其任选地经C1-6烷基取代；以及
xiii.其中嵌入所述杂环基的碳与它所连的氧一起可形成羰基。
在一个实施方案中，R2选自：
/>
它们各自经任选取代。在一些实施方案中，上述部分各自可任选地经1个、2个或3个取代基R6、R7和R8取代；以及所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一任一实施方案所定义。
在一些实施方案中，R2选自：
/>
它们各自经任选取代。在一些实施方案中，上述部分各自可任选地经1个、2个或3个取代基R6、R7和R8取代；以及所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在其中所有其它变量如上述任一实施方案定义的实施方案中，R2的有用值为
在其中所有其它变量如上述任一实施方案定义的实施方案中，R2为
在其中所有其它变量如上文任一实施方案所定义的实施方案中，其中R2为
在其中所有其它变量如上文任一实施方案所定义的实施方案中，其中R2为
在一个实施方案中，R2为以及所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在一些实施方案中，R2为其中R6、R7和R8各自独立地选自氢、羟基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和单(C1-6烷基)氨基；或R6、R7和R8中的两个可形成双环。
在一个实施方案中，R2为以及所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在这些实施方案的一些实施方案中，R6和R7选自氢、氨基和C1-6烷基。在一些实施方案中，R6为C1-6烷基(例如，甲基)。在一些实施方案中，R7为氢或氨基。在一些实施方案中，R7为氢。在一些实施方案中，R7为氨基。在一些实施方案中，R6为C1-6烷基(例如，甲基)，且R7为氢或氨基。
在一个实施方案中，R2为以及所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案中，R6可为氢、经任选取代的C1-6烷基或羟基(C1-6)烷基，且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的一个方面中，R6可为C1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、戊基和己基，且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的特定方面，R6为甲基且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在这些实施方案的一些实施方案中，R6为C1-6烷基，其任选地经羟基、-CF2、-CF3或卤素取代。/>
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在一个实施方案中，R2为以及所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在一个实施方案中，R2为以及所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在一个实施方案中，R2为以及所有其它变量如式I或Ia所定义，或如上述的任一实施方案中所定义。在该实施方案中，R6可为经任选取代的支链的或直链的C1-6烷基，可经1个至4个羟基或卤素取代；和所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在一个实施方案中，R2为以及所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在一个实施方案中，R2为以及所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在一个实施方案中，R2为以及所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案中，R6可为经任选取代的支链的或直链的C1-6烷基；以及所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的一个方面中，R6可为C1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、戊基和己基，且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的特定方面，R6为甲基和所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
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在一个实施方案中，R2为以及所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在一个实施方案中，R2为且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的特定方面，R6可为经任选取代的支链的或直链的C1-6烷基；且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的一个方面中，R6可为C1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、戊基和己基，且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的特定方面，R6为甲基和所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在一个实施方案中，R2为
且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的特定方面，R6可为氢或经任选取代的支链的或直链的C1-6烷基，R7可为氢或经任选取代的支链的或直链的C1-6烷基，且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的一个方面中，R6可为C1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、戊基和己基，且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的特定方面，R6为甲基且所有其它变量如式I或Ia所描述或如本文所述的任一实施方案所定义。在该实施方案的特定方面，R6和R7各自为氢且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的特定方面，R8为氢，且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在一个实施方案中，R2为且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在一个实施方案中，R2为且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在一个实施方案中，R2为且所有其它变量如式I或Ia所定义或如上述的任一实施方案中所定义。在该实施方案中，R6可为经任选取代的支链的或直链的C1-6烷基，其可经1个至4个羟基或卤素取代；和所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的一个方面中，R6可为C1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、戊基和己基，且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在一个特定的方面，R6为甲基。
在一个实施方案中，在5-10元杂环基中，R6、R7和R8的一个为O且与它所连至的碳一起形成羰基；且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的特定方面，R2为其中，R7为氢或C1-5烷基；且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在一个实施方案中，在5-10元杂环基中，R6、R7和R8的一个为O且与它所连至的碳一起形成羰基；且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案的特定方面，R2为且所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。在该实施方案中，R7和R8独立地选自氢或支链的或直链的C1-6烷基，其可经1个至4个羟基或卤素取代；和所有其它变量如式I或Ia中所定义或如本文所描述的任一实施方案所定义。
在实施方案中，本文描述的主题涉及具有以下结构之一的化合物：
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在一个实施方案中，其中所有其它变量如上文任一实施方案所定义，提供包含任一化合物编号1、2、3、4、5、6、7、8、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、30、31、32、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、54、55、56、57、59、60、61、62、63、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、113、115、116、117、118、119、122、123、124、125、126、127、128、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、143、144、145、146、147、148、149、150、151、153、154、155、156、157、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225和226的化合物。
在一些实施方案中，本公开提供式I或Ia的化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自表1、表2和/或表3中的一种或多种化合物。在一些实施方案中，所述化合物选自表1的化合物编号9-12、29、33-36、53、58、64、83、84、96、97、111、112、114、120、121、129、137、141、142、152和158，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述化合物选自表2的化合物编号231-390，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述化合物选自表3的化合物编号391-528，或其药学上可接受的盐。
表1
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表2
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表3
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在一些实施方案中，所述化合物选自表1中的化合物编号1-230或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述化合物选自化合物编号1、2、3、4、5、6、7、8、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、30、31、32、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、54、55、56、57、59、60、61、62、63、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、113、115、116、117、118、119、122、123、124、125、126、127、128、130、131、132、133、134、135、136、138、139、140、143、144、145、146、147、148、149、150、151、153、154、155、156、157、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229和230或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述化合物选自化合物编号9-12、29、33-36、53、58、64、83、84、96、97、111、112、114、120、121、129、137、141、142、152和158或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述化合物选自表2中的化合物编号231-390或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述化合物选自表3中的化合物编号391-528或其药学上可接受的盐。
本文所述的式I或Ia化合物或其盐可以立体异构的形式存在(例如，其含有一个或多个不对称碳原子)。所述单独的立体异构体(对映异构体和非对映异构体)和它们的混合物涵盖在本文所公开的主题的范围内。同样地，应理解的是，式I或Ia的化合物或盐可以不同于式中所示的互变异构形式存在，并且这些也涵盖在本文所公开的主题的范围内。应理解的是，本文所公开的主题包括本文所描述的特定基团的组合和子集。本文所公开的主题的范围包括立体异构体的混合物以及纯化的对映异构体或对映异构/非对映异构富集混合物。应理解的是，本文所公开的主题包括本文所定义的特定基团的组合和子集。
本文所公开的主题还包括本文所述化合物的同位素标记形式，但事实上，一个或多个原子被具有原子质量或质量数不同于自然界中通常发现的原子质量或质量数的原子取代。可掺入本文所述化合物中的同位素及其药学上可接受的盐的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl、123I和125I。
本文所公开的主题包括式I或Ia化合物的前药、代谢物、衍生物和药学上可接受的盐。所述式I或Ia化合物的代谢物包括通过方法制备的化合物，该方法包括使式I或Ia化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间段。
若式I或Ia化合物为碱，则可通过本领域可用的任何适合的方法制备所需的药学上可接受的盐，例如用无机酸处理该游离碱，该无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等，或使用有机酸处理该游离碱，该有机酸例如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷酸(如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羟基酸(如柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(如天冬氨酸或谷氨酸)、芳族酸(如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(如对甲苯磺酸或乙磺酸)等。
若式I或Ia的化合物为酸，则可以通过任何适合的方法制备所需的药学上可接受的盐，例如，用无机或有机碱处理该游离酸，例如胺(伯、仲、叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等。适合的盐的说明性实例包括但不限于衍生自氨基酸(例如甘氨酸和精氨酸)、氨、伯胺、仲胺、叔胺和环胺(例如哌啶、吗啉和哌嗪)的有机盐，以及衍生自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。
式I或Ia化合物可为“前药”的形式，其包括具有可在体内代谢的部分的化合物。通常，所述前药通过酯酶或通过其它机制在体内代谢为活性药物。前药及其用途的实例为本领域熟知的(参见，例如Berge et al.(1977)"Pharmaceutical Salts",J.Pharm.Sci.66:1-19)。所述前药可在化合物的最终分离和提纯过程中原位制备，或者通过使提纯的化合物以其游离酸形式或羟基与适当的酯化剂分别反应来制备。通过用羧酸处理，可将羟基基团转化为酯。前药部分的实例包括经取代和未经取代的、支链的或无支链的低级烷基酯部分(例如，丙酸酯)、低级烯基酯、二-低级烷基-氨基低级烷基酯(例如，二甲基氨基乙基酯)、酰氨基低级烷基酯(例如，乙酰氧基甲基酯)、酰氧基低级烷基酯(例如，新戊酰氧基甲基酯)、芳基酯(苯基酯)、芳基-低级烷基酯(例如，苄基酯)、经取代的(例如，经甲基、卤素或甲氧基取代基取代的)芳基和芳基-低级烷基酯、酰胺、低级烷基酰胺、二-低级烷基酰胺和羟基酰胺。还包括通过体内其它机制转化为活性形式的前药。在一些方面，本发明所述的化合物为本文任何所述式的前药。
一般合成方案
式I或Ia的化合物或其前体可通过所述实施例的程序和一般通过方案1和2制备，式I或Ia中的R基团如式I或Ia所述。
方案1
方案1显示了制备式I或Ia化合物的一般合成方法，式I或Ia中的R2为A-C(O)-。化合物A与活化的酰基化合物A-C(O)-X’的反应导致3-氨基基团的酰化，得到化合物B。Pd催化的化合物B与硼酸酯R2-B(OR)2的偶联得到化合物C。Pd催化的化合物C与受保护的胺的偶联得到化合物D。化合物D的脱保护得到式(I-A)的产物，其中A、R1和R2如式I或Ia所定义。
提供用于制备式(I-A)化合物的方法，其包括使化合物C与受保护的胺(例如，HN＝C(Ph)2或Boc-NH2)反应，形成化合物D，且将化合物D置于胺脱保护的条件，形成化合物(I-A)，其中A、R1和R2如式I或Ia所定义。该方法可以进一步包括酰化化合物A(包括使化合物A与A-C(O)-X反应，其中X为卤素，例如Br或I)形成化合物B；使化合物B与硼酸酯R2-B(OR)2(其中R为烷基或芳基，或所述两个OR基团与硼原子一起形成环)和Pd催化剂反应形成C。
方案2
方案2显示了制备式I或Ia化合物的一般合成方法，式I或Ia中的R2为D。Pd催化的化合物A与硼酸酯R2-B(OR)2或经保护的胺的偶联，当所需R2基团为氨基基团时，得到化合物E。Pd催化的化合物E与化合物D-X的偶联得到化合物F。Pd催化的化合C与经保护的胺的偶联，得到化合物G。化合物G的脱保护得到式(I-D)的产物，式(I-D)中的D、R1和R2如式I或Ia所定义。
提供用于制备式(I-D)化合物的方法，其包括使化合物F与经保护的胺(例如，HN＝C(Ph)2或Boc-NH2)形成化合物D，并将化合物D置于胺脱保护的条件中，形成化合物(I-A)，其中A、R1和R2如式I或Ia所定义。该方法可进一步包括使化合物A与硼酸酯R2-B(OR)2(其中R为烷基或芳基，或所述两个OR基团与硼原子一起形成环)和Pd催化剂反应，形成化合物E；以及使化合物E与化合物D-X(其中X为离去基团，例如Cl、Br或I)和Pd催化剂反应，形成化合物F。当所需基团R2为经任选取代的氨基基团时，该方法可进一步包括将化合物A与经保护的胺(例如，HNRR’，其中R和R’为胺保护基团)和Pd催化剂反应，形成化合物E；以及使化合物E与化合物D-X(其中X为离去基团，例如Cl、Br或I)和Pd催化剂反应，形成化合物F。
组合物
可将本发明化合物与药学上可接受的载体一起配制成药物组合物。
式I或Ia的化合物可根据标准的药学实践配制成药物组合物。根据这一方面，提供药物组合物，其包含式I或Ia的化合物与药学上可接受的稀释剂或载体的联合。
通过将式I或Ia的化合物与载体、稀释剂或赋形剂混合，制备典型的制剂。适合的载体、稀释剂和赋形剂为本领域技术人员熟知，其包括材料例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或可溶胀聚合物、亲水或疏水材料、明胶、油、溶剂、水等等。所用的具体载体、稀释剂或赋形剂将取决于应用所述式I或Ia化合物的方式和目的。通常，基于施用于哺乳动物的本领域技术人员公认安全(GRAS)的溶剂来选择溶剂。通常，安全溶剂为无毒的水性溶剂，例如水和其它在水中可溶或可混溶的无毒溶剂。适合的水性溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如，PEG 400、PEG 300)等，以及它们的混合物。该制剂还可包括一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂(opaquingagents)、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、调味剂和其它已知的添加剂，以提供所述药物(即，式I或Ia化合物或其药物组合物)的优雅展示或有助于制造该药物产品(即药物)。
可使用常规的溶解和混合程序制备制剂。例如，在上述一种或多种赋形剂存在下，原料药物(即，式I或Ia的化合物或式I或Ia化合物的稳定形式(例如，与环糊精衍生物或其它已知的配合剂的配合物))溶于适合的溶剂中。式I或Ia的化合物通常配制成药物剂型，以提供易于可控制的药物剂量并使患者遵守能够处方方案。
取决于用于给药该药物的方法，用于施用的药物组合物(或制剂)可以多种方式包装。通常，用于分配的物品包括以适当的形式在其中存储药物制剂的容器。适用的容器是本领域技术人员熟知的，其包括例如瓶子(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金属圆筒等材料。该容器还可以包括防篡改组件，以防止对包装内容物的不慎接触。此外，该容器上贴附标签，用于描述该容器的内容。标签还可包括适当的警告。
可制备用于各种给药途径和给药类型的药物制剂。例如，具有所需纯度的式I或Ia化合物可任选地与药学上可接受的稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂(Remington’sPharmaceutical Sciences(1980)16th edition,Osol,A.Ed.)，以冻干制剂、经研磨的粉末或水溶液的形式混合。可在环境温度、适当的pH和所需的纯度，通过与生理学上可接受的载体(即在所用剂量和浓度下对接受者无毒的载体)混合进行配制。制剂的pH主要取决于具体用途和化合物的浓度，但可在约3至约8的范围内。在pH为5的乙酸盐缓冲液中的制剂为适合的实施方案。
所述式I或Ia的化合物可为无菌的。特别是，用于体内给药的制剂应该为无菌的。这种无菌化容易通过用无菌过滤膜过滤完成。
该化合物通常可作为固体组合物、冻干制剂或作为水溶液储存。
包含式I或Ia化合物的药物组合物可以一种方式(即给药的量、浓度、时序安排、疗程、媒剂和给药途径)配制、服药和给药，且与良好的医学实践一致。在这方面考虑的因素包括所治疗的具体病症、所治疗的具体哺乳动物、各个患者的临床状况、该病症的原因、该药剂的递送部位、给药方法、给药时序安排以及医学从业者已知的其它因素。所给药化合物的“治疗有效量”将受这些考虑因素的控制，且其为预防、改善或治疗凝血因子介导的病症所需的最小量。在一些实施方案中，该量低于对宿主有毒的量或使宿主更容易出血的量。
可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在所使用的剂量和浓度下对接受者无毒，它们包括缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲基氯化铵；氯化苯甲烃铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，例如对羟基苯甲酸甲基酯或对羟基苯甲酸丙基酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)的多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物(包括葡萄糖、甘露糖或糊精)；螯合剂如EDTA；糖类如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子如钠；金属配合物(例如，锌-蛋白质配合物)；和/或非离子表面活性剂如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。该活性药物成分也可包裹于微胶囊中，例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊，例如在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳状液、纳米颗粒和纳米胶囊)中或粗乳状液中，分别为羟基甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲基酯)微胶囊。这些技术公开于Remington’s Pharmaceutical Sciences16th edition,Osol,A.Ed.(1980)中。
可制备式I或Ia化合物的缓释制剂。缓释制剂适合的实例包括含有式I或Ia化合物的固体疏水聚合物的半透性基质，该基质为成型制品的形式，例如薄膜或微胶囊。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(甲基丙烯酸2-羟基乙基酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸(US3773919)、L-谷氨酸和L-谷氨酸γ-乙基酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)组成的可注射微球)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
所述制剂包括适于本文详述的给药途径的制剂。该制剂可方便地以单位剂型存在且可通过药学领域熟知的任何方法制备。技术和制剂通常在Remington’s PharmaceuticalSciences(Mack Publishing Co.,Easton,PA)中找到。这些方法包括使所述活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体联合的步骤。通常，通过将所述活性成分与液体载体或细碎固体载体或它们两者均匀且紧密地结合来制备该制剂，然后，若需要，则使该产物成型。
适于口服给药的式I或Ia化合物的制剂可制备成离散的单位，例如丸剂、胶囊、扁囊剂或片剂，它们每个含有预定量的式I或Ia化合物。
可通过在适当的机器上压缩自由流动形式的所述活性成分(例如粉末或颗粒)来制备压缩的片剂，其任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性试剂或表面分散剂混合。可通过在适当的机器上模塑粉末状活性成分经惰性液体稀释剂润湿的混合物来制备模制片剂。该片剂可任选地经包衣或刻痕，并任选地配制成便于从中缓慢或控制释放该活性成分。
可制备片剂、锭剂、糖锭剂、水性或油性悬浮液、可分散的粉末或颗粒、乳液、硬胶囊或软胶囊(例如明胶胶囊)、糖浆剂或酏剂用于口服用途。可根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方法，制备意欲用于口服用途的式I或Ia化合物的制剂，且该组合物可含有一种或多种包括甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的试剂，以提供适口的制剂。含有所述活性成分与无毒的、药学上可接受的赋形剂(其适于制备片剂)的掺和物的片剂是可接受的。这些赋形剂可为，例如，惰性稀释剂，例如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可以是未经包衣的，或可通过已知技术包衣，这些技术包括微囊化以延迟在胃肠道中的崩解和吸附，从而在更长的时间内提供持续作用。例如，可施用延时材料，如可单独施用或与蜡一起施用单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
为了治疗眼睛或其它外部组织，例如口腔和皮肤，所述制剂优选地作为含有活性成分的局部软膏或乳膏，以例如0.075至20％w/w的量施用。当配制成软膏时，该活性成分可与石蜡基或水混溶性软膏基质一起施用。或者，该活性成分可配制成具有水包油乳膏基质的乳膏。
若需要，则该乳膏基质的水相可包括多元醇，即具有两个或更多个羟基基团的醇，例如丙二醇、1,3-丁二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)及它们的混合物。局部制剂可期望地包括增强该活性成分通过皮肤或其它受影响区域的吸收或渗透的化合物。这种皮肤渗透促进剂的实例包括二甲基亚砜和相关类似物。
乳液的油相可以已知的方式、由已知的成分构成。虽然该相可仅包含乳化剂，但它也可包含至少一种乳化剂和脂肪或油或者脂肪和油两者的混合物。与亲脂性乳化剂包括在一起的亲水性乳化剂可起到稳定剂的作用。含有或不含稳定剂的乳化剂一起构成所谓的乳化蜡，并且蜡与油和脂肪一起构成所谓乳化软膏基质(该基质形成乳膏制剂的油性分散相)。适用于制剂的乳化剂和乳化稳定剂包括60、/>80、鲸蜡硬脂醇(cetostearyl alcohol)、苄醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和十二烷基硫酸钠。
式I或Ia化合物的水性悬浮液含有与适于制备水性悬浮液的赋形剂的掺和物中的所述活性物质。这种赋形剂包括悬浮剂，例如羧基甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素、聚维酮、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍树胶和阿拉伯树胶，以及分散剂或润湿剂，例如天然存在的磷脂(例如，卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂族醇(例如十七碳亚乙基氧基鲸蜡醇，heptadecaethyleneoxycetanol)的缩合产物、环氧乙烷与偏酯(其衍生自脂肪酸和己糖醇酐)的缩合产物(例如，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。该水性悬浮液还可含有一种或多种防腐剂(如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂(例如蔗糖或糖精)。
式I或Ia的化合物的药物组合物可为无菌可注射制剂的形式，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。可根据已知技术，使用那些上述的适合的分散剂或湿润剂和悬浮剂，配制该悬浮液。该无菌可注射制剂也可为在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂(如1,3-丁二醇)中的无毒的可注射溶液或悬浮液。该无菌注射制剂也可制备成冻干粉末。可使用的可接受的媒剂和溶剂为水，林格氏溶液(Ringer’s solution)和等渗氯化钠溶液。此外，通常可使用无菌非挥发油用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用任何温和的非挥发油，其包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸同样可用于注射剂的制备。
将根据所治疗的宿主和特定的给药方式，改变可与载体材料组合以制备单一剂型的活性成分的量。例如，意欲用于向人口服给药的延时释放制剂可含有约1至1000mg活性物质，该活性物质与适当和方便的量的载体物质(其可占总组合物的约5至约95％(重量：重量))混合。该药物组合物可制备成提供容易可测量的给药量。例如，意欲用于静脉内输注的水溶液可含有每毫升溶液约3至500μg的活性成分，以便可以约30mL/小时的速率进行输注适合体积。
适用于肠胃外给药的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使该制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌悬浮液液体，其可包括悬浮剂和增稠剂。
适于对眼睛局部给药的制剂还包括滴眼剂，其中所述活性成分溶解或悬浮在适合的载体中，尤其是在活性成分的水性溶剂中。在此制剂中，该活性成分优选以约0.5至20％w/w的浓度存在，例如约0.5至10％w/w，例如约1.5％w/w。
适于在口腔中局部给药的制剂包括含有在调味基底中的所述活性成分的糖锭剂，该基底通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；糖果锭剂(pastilles)，其包含在惰性基底中的所述活性成分，该基底例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶；以及含有在适合的液体载体中的所述活性成分的漱口剂。
用于直肠给药的制剂可作为栓剂存在，其具有适合的基底(包括例如可可脂或水杨酸酯)。
适用于肺内或鼻内给药的制剂具有例如0.1至500微米的粒径(包括粒径在0.1至500微米之间，其增量的微米数例如0.5、1、30微米、35微米等等)，该制剂通过鼻腔通道快速吸入或通过口腔吸入来给药以到达肺泡囊。适合的制剂包括所述活性成分的水溶液或油溶液。可根据常规方法制备适用于气溶胶或干粉给药的制剂，并且该制剂可与其它治疗剂(例如迄今为止用于治疗或预防如下所述病症的化合物)一起递送。
适合于阴道给药的制剂可作为阴道栓剂、棉塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂，泡沫剂或喷雾制剂提供，除活性成分外，该制剂还含有本领域已知的适当载体。
所述制剂可以包装在单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶，且可以冷冻干燥(冻干)条件储存，该条件仅需要添加无菌液体载体(例如水)用于使用前立即注射。现用现配的注射溶液和悬浮液由前述类型的无菌粉末、颗粒和片剂制备。优选的单位剂量制剂是含有如本文所述每日剂量或单位每日亚剂量或其适当部分的活性成分的那些制剂。
所述主题还提供兽医用组合物，其包含至少一种如上定义的活性成分以及因此的兽用载体。该兽用载体为可用于给药所述组合物的材料，并且可以为固体、液体或气体材料，其另外在兽医领域中是惰性的或可接受的并且与活性成分相容。这些兽医用组合物可肠胃外给药、口服给药或通过任何其它所需的途径给药。
在特定实施方案中，包含本发明化合物的药物组合物进一步包含化疗剂。在这些实施方案的一些实施方案中，所述化疗剂为免疫治疗剂。
方法
本发明化合物可用于抑制所述酶HPK1的活性。HPK1，也称为丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶1或MAP4K1，是Ste20相关的丝氨酸/苏氨酸激酶的生发中心激酶亚家族的成员。HPK1通过磷酸化和激活MAP3K蛋白(包括MEKK1、MLK3和TAK1)起到MAP4K的作用，导致MAPK Jnk的激活。
在实施方案中，本文所公开的主题涉及抑制HPK1的方法，该方法包括使HPK1与有效量的本文所述的式I或Ia化合物或药物组合物接触。
在实施方案中，本文所公开的主题涉及用于增强在有此需要的受试者中的免疫应答的方法，其中该方法包括向所述受试者给药有效量的本文所述的式I或Ia的化合物或药物组合物。在该实施方案的某些方面，相对于给药所述化合物或药物组合物之前，受试者中的T细胞具有增强的引发、增强的活化、增强的迁移、增强的增殖、增强的存活和增强的细胞溶解活性中的至少一种。在该实施方案的某些方面，所述T细胞活化的特征在于相对于给药所述化合物或药物组合物之前，γ-IFN+CD8T细胞频率升高或T细胞产生的IL-2水平或颗粒酶B水平升高。在该实施方案的某些方面，相对于给药所述化合物或药物组合物之前，T细胞的数量升高。在该实施方案的某些方面，所述T细胞为抗原特异性CD8T细胞。在该实施方案的某些方面，相对于给药所述化合物或药物组合物之前，受试者中的抗原呈递细胞具有增强的成熟和活化。在该实施方案的某些方面，所述抗原呈递细胞为树突细胞。在该实施方案的某些方面，抗原呈递细胞成熟的特征在于CD83+树突细胞的频率增加。在该实施方案的某些方面，所述抗原呈递细胞活化的特征在于树突细胞上CD80和CD86的升高的表达。
在本文所述的方法中，将式I或Ia的化合物或其药物组合物给药至患有癌症的受试者，如本文其它地方所述。
在实施方案中，本文公开的主题涉及治疗HPK1依赖性病症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药有效量的如本文所述的式I或Ia化合物或药物组合物。在该实施方案的某些方面，所述HPK1依赖性病症为癌症。在该实施方案的某些方面，所述癌症包含选自结肠直肠癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、血液系统恶性肿瘤和肾细胞癌的至少一种癌症。在该实施方案的某些方面，所述癌症具有升高的T细胞浸润水平。在该实施方案的某些方面，相对于给药所述化合物或组合物之前，所述受试者中的癌细胞选择性地具有MHC I类抗原表达的增加表达。
在本文所述的方法中，该方法可进一步包括向所述受试者给药化疗剂。在该实施方案的某些方面，该化疗剂与所述化合物或所述组合物同时给药至所述受试者。在该实施方案的某些方面，在给药所述化合物或所述组合物之前，将该化疗剂给药所述受试者。在该实施方案的某些方面，在给药所述化合物或所述组合物之后，将该化疗剂给药至所述受试者。
HPK1多核苷酸和多肽是本领域已知的(Hu et al.(1996)Genes Dev.10：2251-2264，其通过引用整体并入本文)。HPK1多核苷酸和多肽的非限制性实例包含如SEQ ID NO：1所示的人HPK1多核苷酸(GenBank登记号No.NM_007181.5的核苷酸141–2642)和该编码的人HPK1多肽(如SEQ ID NO：2所示的登记号No.NP_009112.1)。人中存在HPK1的较短的821个氨基酸的同等型，其编码序列和氨基酸序列分别在SEQ ID NO：3和1中列出(分别为GenBank登记号No.NM_001042600.2和GenBank登记号No.NP_001036065.1的核苷酸141-2606)。
HPK1多肽包含多种保守结构基序。为了便于参考，将讨论这样的基序，因为它们涉及较长的人HPK1同等型(其在SEQ ID NO：2中列出，包含833个氨基酸残基)。HPK1多肽包含氨基末端的Ste20样激酶结构域(该结构域跨越氨基酸残基17-293)，其包括来自氨基酸残基23-46的ATP结合位点。该激酶结构域之后是四个富含脯氨酸(PR)的基序，其充当含SH3的蛋白质的结合位点，所述含SH3的蛋白质例如CrkL、Grb2、HIP-55、Gads、Nck和Crk。所述四个PR基序分别跨越氨基酸残基308-407、394-402、432-443和468-477。HPK1响应TCR或BCR刺激而被磷酸化并被激活。TCR-和BCR-诱导的第381位酪氨酸(位于PR1和PR2之间)的磷酸化介导经由SLP-76或BLNK SH2结构域与T细胞中的SLP-76的结合或与B细胞中的BLNK的结合，且该磷酸化为激活所述激酶所需。在HPK1的C末端发现的同源柠檬酸结构域(citronhomology domain)(大约跨越残基495-800)可充当调节结构域并且可参与大分子相互作用。
本发明化合物直接与HPK1结合并抑制其激酶活性。在一些实施方案中，本发明化合物减少、抑制或以其它方式减少所述HPK1介导的SLP76和/或Gads的磷酸化。
本发明化合物可为或可不为特异性HPK1拮抗剂。特异性HPK1拮抗剂通过在统计学上大于该拮抗剂对任何其它蛋白质(例如，其它丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制作用的量降低HPK1的生物活性。在某些实施方案中，本发明化合物特别地抑制HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在这些实施方案的一些实施方案中，HPK1拮抗剂对HPK1的IC50为该HPK1拮抗剂对另一种丝氨酸/苏氨酸激酶或其它类型激酶(例如酪氨酸激酶)的IC50的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、0.1％、0.01％、0.001％或更低。
本发明化合物可用于抑制HPK1的方法中。这些方法包括使HPK1与有效量的本发明化合物接触。“接触”意指使该化合物足够接近分离的HPK1酶或表达HPK1的细胞(例如，T细胞、B细胞、树突细胞)，使得该化合物能够结合HPK1并抑制HPK1的活性。通过将该化合物给予受试者，可使该化合物在体外或体内与HPK1接触。
本领域已知的用于测量HPK1的激酶活性的任何方法可用于确定HPK1是否已被抑制，包括体外激酶测定、使用对HPK1的磷酸化靶标(例如SLP76和Gads)具有特异性的抗体的免疫印迹，或测量HPK1激酶活性的下游生物学效应，例如14-3-3蛋白质募集到磷酸化SLP7和Gads上，从含LAT的微团簇中释放SLP76-Gads-14-3-3配合物，或T细胞或B细胞激活。
本发明化合物可用于治疗HPK1依赖性病症。如本文所用，“HPK1依赖性病症”是一种病理病况，其中HPK1活性为该病理病况的发生或维持所必需的。在一些实施方案中，所述HPK1依赖性病症为癌症。
本发明化合物还可用于在有此需要的受试者中增强免疫应答。这些方法包括给药有效量的本发明化合物(即式I或Ia的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物)。
如本文所用，“增强免疫应答”是指对抗原的任何免疫原性应答的改善。对抗原的免疫原性应答的改善的非限制性实例包括增强树突细胞的成熟或迁移、增强T细胞(例如，CD4T细胞、CD8T细胞)的活化、增强T细胞(例如，CD4T细胞、CD8T细胞)的增殖、增强B细胞增殖、增加T细胞和/或B细胞的存活、改善抗原呈递细胞(例如，树突细胞)的抗原呈递、改善抗原清除、增加T细胞产生的细胞因子(例如，白细胞介素-2)、增加对前列腺素E2诱导的免疫抑制的抵抗力，以及增强CD8T细胞的引发和/或细胞溶解活性。
在一些实施方案中，相对于在给药式I或Ia化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者中的CD8T细胞具有增强的引发、活化、增殖和/或细胞溶解活性。在一些实施方案中，所述CD8T细胞引发的特征在于CD8T细胞中CD44升高的表达和/或增强的细胞溶解活性。在一些实施方案中，所述CD8T细胞活化的特征在于γ-IFN+CD8T细胞频率的升高。在一些实施方案中，所述CD8T细胞为抗原特异性T细胞。
在一些实施方案中，相对于在给药式I或Ia化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物之前，所述受试者中的抗原呈递细胞具有增强的成熟和活化。在一些实施方案中，所述抗原呈递细胞为树突细胞。在一些实施方案中，所述抗原呈递细胞的成熟的特征在于CD83+树突细胞的频率增加。在一些实施方案中，所述抗原呈递细胞的活化的特征在于，在树突细胞上的CD80和CD86升高的表达。
在一些实施方案中，相对于在给药式I或Ia化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者中细胞因子IL-10和/或趋化因子IL-8(鼠KC的人同源物)的血清水平降低。
所述TCR的参与导致HPK1活化，其作为TCR诱导的AP-1应答途径的负调节物。据信，HPK1通过减少信号传导微团簇的持久性来负调节T细胞活化，减少该持久性是通过在Ser376(Di Bartolo et al.(2007)JEM 204:681-691)和Thr254的Gads上磷酸化SLP76来实现，这导致与磷酸化的SLP76和Gads结合的14-3-3蛋白质的募集，从含LAT的微团簇中释放SLP76-Gads-14-3-3配合物，导致T细胞功能障碍，包括无反应性和耗竭(Lasserre et al.(2011)J Cell Biol 195(5):839-853)。
在免疫功能障碍的背景下，术语“功能障碍”是指对抗原刺激的免疫应答性降低的状态。该术语包括可能发生抗原识别的耗竭和/或无反应性两者的共同要素，但随后的免疫应答对控制感染或肿瘤生长无效。
如本文所用，术语“功能障碍”还包括对抗原识别的不感受或不响应，具体地，将抗原识别转化为下游T细胞效应子功能例如增殖、细胞因子产生(例如，IL-2、γ-IFN)和/或靶细胞杀伤的能力受损。
术语“无反应性”是指对抗原刺激的无应答状态，其由通过T细胞受体递送的不完全或不充分的信号引起(例如，在没有ras-激活的情况下细胞内Ca+2的增加)。在没有共刺激的情况下，在用抗原刺激时也可产生T细胞无反应性，导致该细胞即使在共刺激的情况下也变得对随后抗原激活不感受。白细胞介素-2的存在通常可超调该无应答状态。无反应性T细胞不经历克隆扩增和/或获得效应子功能。
术语“耗竭”是指作为T细胞功能障碍状态的T细胞耗竭，该功能障碍源自在许多慢性感染和癌症期间发生的持续TCR信号传导。它与无反应性的区别在于，它不是通过不完全的或不充分的信号传导产生的，而是通过持续信号传导产生的。它被限定为效应子功能差、抑制性受体的持续表达和不同于功能性效应子或记忆T细胞的转录状态的转录状态。耗竭阻止了对感染和肿瘤的最佳控制。耗竭可来自外源性负调节途径(例如，免疫调节细胞因子)以及细胞内在的负调节(共刺激)途径(PD-1、B7-H3、B7-H4等)。
在一些实施方案中，将式I或Ia化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物给药质受试者，导致T细胞功能的增强。
“增强T细胞功能”意指诱导、引起或刺激T细胞，以具有持续或扩增的生物学功能，或者更新或重新激活耗尽或失活的T细胞。增强T细胞功能的实例包括：增加细胞因子(例如，γ-干扰素、IL-2、IL-12和TNFα)的分泌、增加增殖、相对于干预前的这种水平增加抗原应答性(例如，病毒、病原体或肿瘤清除)，以及增加由CD8T细胞(例如颗粒酶B等)产生的效应颗粒。在一个实施方案中，所述增强水平为至少50％，或者60％、70％、80％、90％、100％、120％、150％、200％。测量该增强的方式为本领域普通技术人员所已知。
因此，本发明公开所述的式I或Ia化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物可用于治疗T细胞功能障碍性病症。“T细胞功能障碍性病症”是T细胞的病症或病况，其特征在于对抗原刺激的响应性降低。在一个特定的实施方案中，T细胞功能障碍性病症是与HPK1激酶活性增加特异性相关的病症。在另一个实施方案中，T细胞功能障碍性病症为其中的T细胞是无反应性的或具有降低的分泌细胞因子、增殖或执行细胞溶解活性的能力的病症。在一个具体方面，所述降低的响应性导致对表达免疫原的病原体或肿瘤的无效控制。以T细胞功能障碍为特征的T细胞功能障碍性病症的实例包括未解决的急性感染、慢性感染和肿瘤免疫。
因此，本发明化合物可用于治疗需要增强免疫原性，例如增加肿瘤免疫原性以治疗癌症的病况。
“免疫原性”是指特定物质引发免疫应答的能力。肿瘤是免疫原性的，并且增强肿瘤免疫原性有助于通过所述免疫应答清除肿瘤细胞。
“肿瘤免疫”是指肿瘤逃避免疫识别和清除的过程。因此，作为一个治疗概念，当这种逃避减弱时，肿瘤免疫被“治疗”，且该肿瘤被免疫系统识别和攻击。肿瘤识别的实例包括肿瘤结合、肿瘤缩小和肿瘤清除。
在一个方面，本文提供治疗有此需要的受试者的癌症的方法，其包括向受试者给药有效量的式I或Ia化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物。在一些实施方案中，所述受试者患有黑色素瘤。该黑色素瘤可处于早期阶段或晚期阶段。在一些实施方案中，所述受试者患有结肠直肠癌。该结肠直肠癌可处于早期阶段或晚期阶段。在一些实施方案中，所述受试者患有非小细胞肺癌。该非小细胞肺癌可处于早期阶段或晚期阶段。在一些实施方案中，所述受试者患有胰腺癌。该胰腺癌可处于早期阶段或晚期阶段。在一些实施方案中，所述受试者患有血液系统恶性肿瘤。该血液系统恶性肿瘤可处于早期阶段或晚期阶段。在一些实施方案中，所述受试者患有卵巢癌。该卵巢癌可处于早期阶段或晚期阶段。在一些实施方案中，所述受试者患有乳腺癌。该乳腺癌可处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，所述受试者患有肾细胞癌。该肾细胞癌可处于早期阶段或晚期阶段。在一些实施方案中，所述癌症具有升高的T细胞浸润水平。
本发明化合物可以本领域已知的任何适合的方式给药。在一些实施方案中，式I或Ia所述的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物，通过静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、经皮、腹膜内、眶内、植入、吸入、鞘内、室内、肿瘤内或鼻内给药。
在一些实施方案中，连续地给药所述HPK1拮抗剂。在其它实施方案中，间歇地所述HPK1拮抗剂。此外，用有效量的HPK1拮抗剂治疗受试者可包括单次治疗或可包括一系列治疗。
应理解是，活性化合物的适当剂量取决于许多因素，这些因素在普通技术医师或兽医的知识范围内。该活性化合物的剂量可例如取决于以下因素变化：受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食、给药时间、给药途径、排泄速率和任何药物组合。
还应理解的是，在特定治疗过程中，用于治疗的式I或Ia化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物的有效剂量可增加或减少。诊断测定的结果可导致剂量的变化，且使该剂量的变化变得明显。
在一些实施方案中，所述HPK1拮抗剂以约0.001μg/kg至约1000mg/kg的剂量给药至所述受试者，所述剂量包括但不限于约0.001μg/kg、约0.01μg/kg、约0.05μg/kg、约0.1μg/kg、约0.5μg/kg、约1μg/kg、约10μg/kg、约25μg/kg、约50μg/kg、约100μg/kg、约250μg/kg、约500μg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约25mg/kg、约50mg/kg、约100mg/kg和约200mg/kg。
在一些实施方案中，提供治疗有此需要的受试者的癌症的方法，其包括向受试者给药有效量的式I或Ia化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物，该方法进一步包含施用其它疗法。该其它疗法可为放射疗法、手术(例如，乳房肿瘤切除术和乳房切除术)、化学疗法、基因疗法、DNA疗法、病毒疗法、RNA疗法、免疫疗法、骨髓移植、纳米疗法、单克隆抗体疗法或前述疗法的组合。该其它疗法可为辅助或新辅助疗法的形式。在一些实施方案中，该其它疗法为给药抗转移剂。在一些实施方案中，该其它疗法为给药副作用限制剂(例如，旨在减轻治疗副作用的发生和/或严重性的药剂，例如止吐剂等)。在一些实施方案中，该其它疗法为放射疗法。在一些实施方案中，该其它疗法为手术。在一些实施方案中，该其它疗法为放射疗法和手术的组合。在一些实施方案中，该其它疗法是γ辐射。在一些实施方案中，该其它疗法为靶向PI3K/AKT/mTOR途径的疗法、HSP90抑制剂、微管蛋白抑制剂、凋亡抑制剂和/或化学预防剂的疗法。
所述其它疗法可为一种或多种化疗剂。因此，所述治疗癌症的方法可包含将本发明公开的所述HPK1拮抗剂与至少一种化疗剂联合给药。
如本文所用，“与...联合”是指，在另一种治疗方式之外还施用一种治疗方式。因此，“与...联合”是指在向所述受试者施用其它治疗方式之前、期间或之后施用一种治疗方式。
例如，所述HPK1拮抗剂和化疗剂可依次(在不同时间)或同时(在同一时间)给药。所述HPK1拮抗剂和化疗剂可通过相同的给药途径或通过不同的给药途径给药。
在某些实施方案中，所述HPK1拮抗剂与另一种免疫疗法联合施用。例如，该HPK1拮抗剂可与靶向PDL1/PD1途径的化疗剂或生物制剂组合。已知的抑制性检查点途径涉及通过PD-1受体的信号传导。该程序性死亡1(PD-1)受体及其配体PD-L1和PD-L2为与CTLA-4相同的共调节分子家族的一部分。请参阅：http://www.onclive.com/web-exclusives/the-role-of-anti-pd-l1-immunotherapy-in-cancer/2#sthash.cGfYa1T1.dpuf。阻断PD-L1与PD-1和CD80的结合的化疗剂或生物制剂可阻止由PD-L1介导的T细胞活化的抑制/压制。程序性细胞死亡配体-1(PD-L1)在抗原呈递细胞(APC)和其它免疫细胞上广泛表达。它在来自大范围人类癌症的肿瘤细胞上被上调，并且涉及抗肿瘤T细胞免疫的抑制。PD-L1是一种与活化的T细胞、B细胞和其它骨髓细胞上的受体PD-1和CD80结合的细胞表面蛋白。已经发现与活化的T细胞上的PD-1结合的PD-L1干扰T细胞增殖并抑制免疫应答。PD-L1在癌细胞上的过度表达可使这些细胞免于免疫检测和消除。肿瘤细胞上高水平的PD-L1表达与增加的肿瘤侵袭性和预后不良有关。阻断PD-L1与PD-1结合的化疗剂或生物制剂包括抗PD-L1抗体，特别是例如度伐单抗(durvalumab)、纳武单抗、匹地利株单抗(pidlizumab)、MPDL3280A、MK-3475和BMS-936559等。
在另一个实例中，HPK1拮抗剂可与靶向OX40和其配体OX40L(其为TNF超家族的成员)的化疗剂或生物制剂组合。OX40在活化的CD4(+)和CD8(+)T细胞以及许多其它淋巴和非淋巴细胞上表达。从OX40到常规T细胞的共刺激信号促进分裂和存活，响应于抗原产生效应子和记忆群体时增加效应子和记忆群体的克隆扩增。OX40另外抑制T调节细胞的分化和活性，进一步放大这一过程。OX40和OX40L还调节T细胞、抗原呈递细胞、自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞的细胞因子产生，并调节细胞因子受体信号传导。作为已知控制T细胞最突出的共刺激分子之一，刺激OX40已证明是癌症治疗性免疫策略的靶标。某些OX40激动剂包括GBR830，以及在Linch,et al.,Frontiers in Oncology,v.5,pp.1-10(2015)中公开的那些激动剂，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，本发明还提供本文所述的式I或Ia的化合物或本文所述的药物组合物，其用于如本文所述的抑制HPK1的方法，或用于如本文所述的在有此需要的受试者中增强免疫应答的方法，和/或用于如本文所述的治疗HPK1依赖性病症的方法。
在一些实施方案中，本发明还提供本文所述的式I或Ia化合物或本文所述的药物组合物，其用于如本文所述的抑制HPK1的方法。
在一些实施方案中，本发明还提供本文所述的式I或Ia化合物或本文所述的药物组合物，其用于如本文所述的在有此需要的受试者中增强免疫应答的方法。
在一些实施方案中，本发明还提供本文所述的式I或Ia化合物或本文所述的药物组合物，其用于治疗如本文所述的HPK1依赖性病症的方法中。
在一些实施方案中，本发明还提供本文所述的式I或Ia化合物的用途或本文所述的药物组合物的用途，其用于制备用于抑制HPK1的药物、用于制备在有此需要的受试者中增强免疫应答的药物、和/或用于制备治疗HPK1依赖性病症的药物。
在一些实施方案中，本发明还提供本文所述的式I或Ia化合物的用途或本文所述的药物组合物的用途，其用于制备用于抑制HPK1的药物中。
在一些实施方案中，本发明还提供本文所述的式I或Ia化合物的用途或本文所述的药物组合物的用途，其用于制备用于在有此需要的受试者中增强免疫应答的药物。
在一些实施方案中，本发明还提供本文所述的式I或Ia化合物的用途或本文所述的药物组合物的用途，其用于制备用于治疗HPK1依赖性病症的药物中。
在一些实施方案中，本发明还提供本文所述的式I或Ia化合物的用途或本文所述的药物组合物的用途，其用于如本文所述的抑制HPK1的方法中，用于如本文所述的在有此需要的受试者中增强免疫应答的方法中，和/或用于如本文所述的治疗HPK1依赖性病症的方法中。
在一些实施方案中，本发明还提供本文所述的式I或Ia化合物的用途或本文所述的药物组合物的用途，其用于如本文所述的抑制HPK1的方法中。
在一些实施方案中，本发明还提供本文所述的式I或Ia化合物的用途或本文所述的药物组合物的用途，其用于如本文所述的在有此需要的受试者中增强免疫应答的方法中。
在一些实施方案中，本发明还提供本文所述的式I或Ia化合物的用途或本文所述的药物组合物的用途，其用于如本文所述的治疗HPK1依赖性病症的方法中。
在一些实施方案中，在停止治疗后所述治疗导致受试者的持续响应。“持续响应”是指在停止治疗后对减少肿瘤生长的持续作用。例如，与给药阶段开始时的大小相比，所述肿瘤大小可以保持相同或更小。在一些实施方案中，该持续响应的持续时间至少与治疗持续时间相同，至少为治疗持续时间长度的1.5倍、2.0倍、2.5倍或3.0倍。
本文公开的治疗方法可导致部分或完全响应。如本文所用，“完全响应”或“CR”是指所有靶病灶的消失；“部分响应”或“PR”是指靶病灶的最长直径之和(SLD)至少减少30％，以基线SLD为参考；以及“稳定疾病”或“SD”是指既没有靶病灶的充分缩小以符合PR的要求，也没有足够的增大以符合PD的要求，以自治疗开始以来最小的SLD为参考。如本文所用，“总应答率”(ORR)是指完全应答(CR)率和部分应答(PR)率之和。
本文公开的治疗方法可导致增加经给药所述HPK1拮抗剂的所述受试者的无进展生存期和总体生存期。如本文所用，“无进展生存期”(PFS)是指治疗期间和治疗后的时间长度，在治疗期间所治疗的疾病(例如癌症)不恶化。无进展生存期可包括患者经历完全响应或部分响应的时间量，以及患者经历稳定疾病的时间量。
如本文所用，“总体生存率”是指在特定持续时间后，组中可存活的受试者的百分比。
在一些实施方案中，给药HPK1拮抗剂的受试者为哺乳动物，例如家养动物(例如，牛、绵羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如人和非人类灵长类动物，例如猴子)、兔和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。在一些实施方案中，所治疗的受试者为人。
需要治疗癌症的所述受试者可为表现出癌症症状的人、已经被诊断患有癌症的人、从癌症中缓解的受试者或者具有增加的患癌症风险的受试者(例如，遗传倾向、某些饮食或环境暴露)。
通过说明而非限制的方式提供以下实施例。
实施例
材料和方法
方法A：在Agilent 1100HPLC(配有Agilent MSD质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用Agilent SunFire-C18 3.5μm，4.6x50柱和2.0ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从95％水和0.05％TFA(溶剂A)以及5％乙腈和0.05％TFA(溶剂B)开始的梯度，在1.3分钟内升至100％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定1.2分钟。
方法B：在Agilent 1200HPLC(配有Agilent MSD质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用Agilent SunFire-C18 3.5μm，4.6x50柱和2.0ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从95％水和0.01％TFA(溶剂A)以及5％乙腈和0.01％TFA(溶剂B)开始的梯度，在1.4分钟内升至5％溶剂A和95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定1.0分钟。
方法C：在Agilent 1200HPLC(配有Agilent MSD质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用Agilent Xbridge-C18，3.5μm，4.6x50mm柱和1.8ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从95％水和10mM NH4HCO3(溶剂A)与5％乙腈(溶剂B)开始的梯度，在1.3分钟内升至5％溶剂A和95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定1.2分钟。
方法D：在Agilent 1200HPLC(配有Agilent MSD质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用Agilent Xbridge-C18，3.5μm，4.6x50mm柱和1.8ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从95％水和10mM NH4HCO3(溶剂A)与5％乙腈(溶剂B)开始的梯度，在1.6分钟内升至5％溶剂A和95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定1.0分钟。
方法E：在Agilent 1200HPLC(配有Agilent MSD质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用Agilent SunFire-C18 3.5μm，4.6x50柱和2.0ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从95％水和0.01％TFA(溶剂A)与5％乙腈和0.01％TFA(溶剂B)开始的梯度，在1.5分钟内升至5％溶剂A和95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定1.0分钟。
方法F：在Agilent 1200HPLC(配有Agilent MSD质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用Agilent Xbridge-C18，3.5um，4.6x50mm柱和1.8ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从90％水和10mM NH4HCO3(溶剂A)与10％乙腈(溶剂B)开始的梯度，在1.5分钟内升至5％溶剂A和95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定1.0分钟。
方法G：在Agilent 1200HPLC(配有Agilent MSD质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用Agilent Xbridge-C18，3.5μm，4.6x50mm柱和1.8ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从95％水和10mM NH4HCO3(溶剂A)与5％乙腈(溶剂B)开始的梯度，在1.4分钟内升至5％溶剂A和95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定1.0分钟。
方法H：在Agilent 1200HPLC(配有Agilent MSD质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用Gemini-Nx3μ，C18，3μm，4.6x50mm柱和1.8ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从90％水和10mM NH4HCO3(溶剂A)与10％乙腈(溶剂B)开始的梯度，在1.5分钟内升至5％溶剂A和95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定1.0分钟。
方法I：在Agilent 1200HPLC(配有Agilent MSD质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用XBridge-C18，3.5μm，4.6x50mm柱和1.8ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从95％水和10mM NH4HCO3(溶剂A)与5％乙腈(溶剂B)开始的梯度，在1.6分钟内升至5％溶剂A和95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定1.0分钟。
方法J：在与Agilent MSD(6140)质谱仪联用的Agilent 1290UHPLC上进行实验，使用ESI作为电离源。该LC分离使用Phenomenex XB-C18，1.7μm，50×2.1mm柱以及0.4ml/分钟的流速。溶剂A为含有0.1％FA的水，且溶剂B为含有0.1％FA的乙腈。在7分钟内，该梯度由2-98％溶剂B组成，并在平衡1.5分钟后，在1.5分钟内保持98％B。LC柱温度为40℃。在220nm和254nm处收集UV吸光度，并且对所有实验应用质谱全扫描。
方法J*：在Shimadzu 20AD HPLC(配有Shimadzu LCMS2020质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源和Shim-Pack XR-ODS C18 2.2μm，3.0x50柱，以及1.2ml/分钟的流速。所述溶剂系统是从95％水和0.05％TFA(溶剂A)与5％乙腈和0.05％TFA(溶剂B)开始的梯度，在2.0分钟内升至95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定0.7分钟。
方法K：在Shimadzu LC-20AD(配有LCMS-2020质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用Shim-Pack XR-ODS 2.2μm，3.0x50柱和1.2ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从95％水和0.05％TFA(溶剂A)和5％乙腈和0.05％TFA(溶剂B)开始的梯度，在2.0分钟内升至5％溶剂A和95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定0.7分钟。
方法K*：在Shimadzu 20AD HPLC(配有Shimadzu LCMS-2020质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源及使用Shim-Pack XR-ODS 2.2μm，3.0x50柱和1.2ml/分钟的流速。所述溶剂系统是从95％水和0.05％TFA的(溶剂A)与5％乙腈和0.05％TFA(溶剂B)开始的梯度，2分钟内升至95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定0.7分钟。
方法L：在Shimadzu LC-30AD(配有LCMS-2020质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用Ascentis Express C18 2.7μm，3.0x50mm柱和1.0ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从95％水和0.05％TFA(溶剂A)与5％乙腈和0.05％TFA(溶剂B)开始的梯度，在2.0分钟内升至5％溶剂A和95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定0.7分钟。
方法L*：在Shimadzu 30AD HPLC(配有Shimadzu LCMS-2020质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源和使用Ascentis Express C18 2.7μm，2.1x50柱和1.0ml/分钟的流速。所述溶剂系统是从95％水和0.05％TFA(溶剂A)与5％乙腈和0.05％TFA(溶剂B)开始的梯度，在2.0分钟内升至95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定0.7分钟。
方法M：在Shimadzu LC-20ADXR(配有LCMS-2020质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用poroshell HPH-C18，2.7um，3.0x50柱和1.2ml/分钟流速。所述溶剂体系是从95％水和5mM NH4HCO3(溶剂A)与5％乙腈(溶剂B)开始的梯度，在2.0分钟内升至95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定0.7分钟。
方法M*：在Shimadzu 20AD XR HPLC(配有Shimadzu LCMS2020质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源和使用poroshell HPH-C18，2.7μm，3.0x50柱以及1.2ml/分钟的流速。所述溶剂系统是从95％水和5mM碳酸氢铵(溶剂A)与5％乙腈(溶剂B)开始的梯度，在2.0分钟升至95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定0.7分钟。
方法N：在Shimadzu LC-30AD(配有LCMS-2020质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用CAPCELL CORE C18，2.7μm，2.1x50mm柱和1.0ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从95％水和0.1％FA(溶剂A)与5％乙腈和0.1％FA(溶剂B)开始的梯度，在2.0分钟内升至5％溶剂A和95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定0.7分钟。
方法N*：在Agilent 1290UHPLC(与Agilent MSD(6140)质谱仪联用)上进行实验，使用ESI作为电离源。使用Phenomenex XB-C18，1.7μm，50×2.1mm柱和0.4ml/分钟的流速进行LC分离。溶剂A为含有0.1％ FA的水及溶剂B为含有0.1％ FA的乙腈。在7分钟内将该梯度包括2-98％溶剂B并在平衡1.5分钟后保持98％B 1.5分钟。LC柱温为40℃。在220nm和254nm处收集UV吸光度，并且对所有实验应用质谱全扫描。
方法O：在Shimadzu LC-30AD(配有LCMS-2020质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用kinetex EVO C18，2.7μm，2.1x50柱和1.2ml/分钟流速。所述溶剂体系是从95％水和6.5mM NH4HCO3(溶剂A)与5％乙腈(溶剂B)开始的梯度，在2.0分钟内升至95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定0.7分钟。
方法O*：在Waters Acquity UPLC(配有Waters LCT Premier XE质谱仪)上进行实验，使用ESI电离。使用Acquity UPLC BEH C18，1.7μm，2.1×50mm柱和0.6ml/分钟的流速进行LC分离。MPA(流动相A)为水和0.05％TFA以及MPB(流动相B)为含有0.05％TFA的乙腈。在5分钟内该梯度包括2-98％ MPB并在平衡0.5分钟后保持98％B 0.5分钟。LC柱温为40℃。在220nm和254nm处收集UV数据，并且对所有实验应用质谱全扫描。
方法P：在Shimadzu LC-20AD(配有LCMS-2010质谱仪)上进行实验，使用ESI作为电离源，使用Shim-Pack XR-ODS 2.2um，3.0x50柱和1.2ml/分钟的流速。所述溶剂体系是从95％水和0.05％TFA(溶剂A)与5％乙腈和0.05％TFA(溶剂B)开始的梯度，在2.0分钟内升至5％溶剂A和95％溶剂B。该最终溶剂体系进一步保持恒定0.7分钟。LC柱温为40℃。在220nm和254nm处收集UV吸光度，并且对所有实验应用质谱全扫描。
化合物的合成
合成的中间体
实施例I.1
中间体1：6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺
步骤1：2,2-二乙氧基乙亚氨酸甲基酯
向搅拌中的二乙氧基乙腈(7.0g，54.2mmol)的干燥甲醇(50mL)溶液中添加甲醇钠的甲醇溶液(4.2mL,20％,8.4mmol)。在添加后，在室温搅拌反应混合物48小时。将反应浓缩至干燥并将残余物溶于氯仿，且有机层用水洗涤，干燥并浓缩，得到2,2-二乙氧基乙亚氨酸甲基酯(8.37g，95％产率)，其为无色油状物，无需进一步提纯用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.95(s,1H),4.82(s,1H),3.65(s,3H),3.51(q,J＝7.2Hz,4H),1.14(t,J＝7.2Hz,6H)。
步骤2：4-溴-2-氯-苯基)甲胺
向50mL圆底烧瓶中添加BH3-THF(1.0M在THF中，32.5mL，32.5mmol)和在THF(10mL)中的4-溴-2-氯苯甲腈(1.76g，8.13mmol)。将混合物加热至回流2小时。反应混合物通过添加HCl水溶液淬灭(10wt％产率)。通过添加NaOH水溶液将pH调节至8(5wt％产率)，并用二氯甲烷萃取。干燥有机层，过滤并浓缩，得到(4-溴-2-氯-苯基)甲胺(1.62g，90％产率)，其无需进一步提纯用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝220.0。
步骤3：N-[(4-溴-2-氯-苯基)甲基]-2,2-二乙氧基-乙脒
将2,2-二乙氧基乙亚氨酸甲基酯(2.7g，16.8mmol)逐滴添加至搅拌中的(4-溴-2-氯-苯基)甲胺(2.47g，11.2mmol)的甲醇(100mL)溶液中。在室温将该混合物搅拌2小时。将反应浓缩至干燥并将残余物溶于二氯甲烷。有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩为粗品N-[(4-溴-2-氯-苯基)甲基]-2,2-二乙氧基-乙脒(3.76g，89％产率)，其为白色固体，无需进一步提纯用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝349.0。
步骤4：6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺
在0℃、在N2中，向粗品N-[(4-溴-2-氯-苯基)甲基]-2,2-二乙氧基-乙脒(1.9g，5.05mmol)中添加浓H2SO4(14.9g,152mmol)。在室温搅拌反应混合物16小时。反应混合物冷却至0℃并添加1M NaOH溶液以调节pH至7。残余物经二氯甲烷萃取。合并的有机层用盐水洗涤并干燥(Na2SO4)，然后浓缩至干燥。粗品经快速柱色谱提纯(乙酸乙酯:石油醚＝1:3)，得到6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(410mg，33％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝256.9。
实施例I.2
中间体2：N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)环丙烷甲酰胺
向冷却中(0℃)的6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(900mg，2.1mmol)和吡啶(166mg，2.1mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物添加环丙烷羰酰氯(263mg，2.52mmol)。将反应在0℃搅拌1小时。反应混合物通过添加NH4Cl饱和水溶液淬灭并用二氯甲烷萃取。干燥有机物，过滤并浓缩。粗品经快速柱色谱提纯(40％在石油醚中的二氯甲烷)，得到(N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)环丙烷甲酰胺(550mg，74％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝324.9。
实施例I.3
中间体3：8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-胺
步骤1：4-氨基-2-氯-3-氟苯甲腈
向密封管中添加氰化铜(I)(1.2g，13.37mmol)、4-溴-3-氯-2-氟苯胺(1g，4.46mmol)和1-甲基-2-吡咯烷酮(8mL)。在微波反应器中，在170℃加热混合物1小时。通过添加NH4Cl饱和溶液(20mL)淬灭反应混合物并过滤。滤液经乙酸乙酯萃取(3x100mL)。合并的有机层用盐水洗涤(3x10mL)，用Na2SO4干燥，通过硅胶垫过滤，并浓缩至干燥，得到4-氨基-2-氯-3-氟苯甲腈(700mg，92％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝171.1。
步骤2：2-氯-3-氟-4-碘苯甲腈
在65℃、在N2中，向CuI(3341mg，17.59mmol)在乙腈(50mL)中的悬浮液添加亚硝酸叔丁酯(1811mg，17.59mmol)。将该混合物在65℃搅拌10分钟。随后将4-氨基-2-氯-3-氟苯甲腈(2g，11.73mmol)添加至反应混合物中。将该混合物在65℃搅拌12小时。用Na2S2O4饱和水溶液(30mL)和水性NH4Cl(30mL)淬灭混合物，并用乙酸乙酯萃取(3x300mL)。合并的有机层用盐水洗涤(2x10mL)，在Na2SO4上干燥并过滤。浓缩滤液，得到粗产物，其经快速色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到2-氯-3-氟-4-碘苯甲腈(1g，30％产率)，其为黄色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(dd,J＝5.6,8.2Hz,1H),7.22(dd,J＝1.4,8.2Hz,1H)。
步骤3：(2-氯-3-氟-4-碘苯基)甲胺
在0℃，将2-氯-3-氟-4-碘苯甲腈(1g，3.55mmol)添加至硼烷-THF(35.53mL，1M在THF中，35.53mmol)的THF(30mL)溶液中。随后将混合物温热至室温并搅拌过夜。反应溶液经逐滴添加HCl溶液(6M,2mL)淬灭。该混合物用NaHCO3水溶液中和至pH＝8，并用二氯甲烷萃取(2x200mL)。合并的有机层用水(2x10mL)和盐水(1x10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到(2-氯-3-氟-4-碘苯基)甲胺(400mg，粗品)，其无需进一步提纯直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝285.9。
步骤4：N-(2-氯-3-氟-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒
向2,2-二乙氧基亚胺代乙酸甲基酯(0.3g，1.88mmol)的甲醇(5mL)溶液中添加(2-氯-3-氟-4-碘苯基)甲胺(250mg，0.88mmol)。将反应混合物在25℃搅拌12小时，并随后浓缩至干燥。残余物溶于二氯甲烷(20mL)，用水(2x10mL)和然后盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到N-(2-氯-3-氟-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒(360mg，粗品)，其为黄色固体。其无需提纯直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝415.0。
步骤5：8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-胺
将N-(2-氯-3-氟-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒(0.36g，0.87mmol)和浓H2SO4(10mL,26.05mmol)的溶液在60℃搅拌12小时。将混合物冷却至0℃并添加NaOH以调节至pH为9。残余物经二氯甲烷萃取(5x100mL)。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-胺(0.25g，粗品)，其为黄色固体，其直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝322.9。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.00(s,1H),8.08(d,J＝5.6Hz,1H),6.70(s,1H)。
实施例I.4
中间体4：7-溴-8-氯-6-碘异喹啉-3-胺
步骤1：4-氨基-3-溴-2-氯苯甲腈
向4-氨基-2-氯苯甲腈(1.5g，9.83mmol)的乙腈(30mL)溶液中添加1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮(1.5g，5.25mmol)。将溶液在25℃搅拌2小时。反应经添加NaHSO3饱和溶液(30mL)淬灭，并用乙酸乙酯萃取(50mLx2)。浓缩有机层。该粗产物经快速色谱提纯(10％石油醚中的乙酸乙酯)，得到4-氨基-3-溴-2-氯苯甲腈和4-氨基-5-溴-2-氯苯甲腈的混合物(850mg，5/2比率的区域异构体，26％产率)，其为黄色固体。该混合物将直接用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(s,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,2.6H),6.80(s,1H),6.65(d,J＝8.4Hz,2.6H),4.81(bs,5H),4.71(bs,2H)。
步骤2：3-溴-2-氯-4-碘苯甲腈
向CuI(51.63g，271.74mmol)在乙腈(300mL)中的悬浮液添加亚硝酸叔丁酯(33.59g，326.09mmol)。将该混合物在65℃搅拌10分钟。将4-氨基-3-溴-2-氯苯甲腈和4-氨基-5-溴-2-氯苯甲腈(3/4比率，25g，108.7mmol)的混合物添加至反应混合物。将该混合物在65℃搅拌12小时。用Na2S2O4饱和溶液(30mL)淬灭混合物并用乙酸乙酯萃取(3x50mL)。合并的有机层用盐水洗涤(10mL)，用Na2SO4干燥并过滤。滤液经浓缩并经快速柱色谱提纯(5％石油醚中的乙酸乙酯)，得到3-溴-2-氯-4-碘苯甲腈(5g，31％产率)，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)7.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(d,J＝8.0Hz,1H)。
步骤3：(3-溴-2-氯-4-碘苯基)甲胺
向3-溴-2-氯-4-碘苯甲腈(3g，8.76mmol)的THF(30mL)溶液中添加硼烷-THF(30mL,1M在THF中，30mmol)。在N2下，在65℃将该混合物搅拌3小时。混合物通过添加甲醇(10mL)和HCl(12N,10mL)淬灭。将反应浓缩至干燥。将残余物溶于乙酸乙酯(100mL)并用水萃取(50mLx2)。弃置有机层，通过加入饱和NaHCO3溶液将水层的pH调节至pH为9。该混合物经乙酸乙酯萃取(50mLx3)。合并的有机层用水洗涤(10mLx2)然后用盐水洗涤(10mL)，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到(3-溴-2-氯-4-碘苯基)甲胺(3g，99％产率)，其为黄色油状物。它将直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝345.9。
步骤4：N-(3-溴-2-氯-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒
向(3-溴-2-氯-4-碘苯基)甲胺(2.5g，7.22mmol)的甲醇(20mL)溶液中添加2,2-二乙氧基亚胺代乙酸甲基酯(3.75g，23.26mmol)。将溶液在25℃搅拌12小时。将反应浓缩至干燥。将残余物溶于二氯甲烷(20mL)，用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到N-(3-溴-2-氯-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒(3g，87％产率)，其为黄色固体。它直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝474.9。
步骤5：7-溴-8-氯-6-碘异喹啉-3-胺
将硫酸(10mL)和N-(3-溴-2-氯-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙脒(3g，6.31mmol)的混合物在60℃搅拌12小时。将反应混合物冷却至0℃并随后添加NaOH溶液以调节pH至9。残余物经二氯甲烷萃取(100mLx3)。合并的有机层用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩，得到7-溴-8-氯-6-碘异喹啉-3-胺(2.4g，99％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝382.8。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.99(s,1H),8.32(s,1H),6.56(s,1H),6.49(s,2H)。
实施例I.5
中间体5：7-溴-8-氯异喹啉-3-胺
步骤1：(3-溴-2-氯苯基)甲胺
将1-溴-2-氯-3-甲基苯(1.0g，4.87mmol)、NBS(1.3g，7.3mmol)和过氧化苯甲酰(11mg，0.05mmol)在四氯化碳(10mL)中的混合物在80℃加热18小时。浓缩该混合物，随后添加二氯甲烷(10mL)和水(10mL)。有机层在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物重新溶于乙醇(10mL)，并添加NH4OH(10mL,4.87mmol)。然后，在室温搅拌混合物2小时。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(正相，硅胶，二氯甲烷\甲醇＝20:1)，得到(3-溴-2-氯苯基)甲胺(500mg，46％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝220.0。
步骤2：N-(3-溴-2-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙脒
将2,2-二乙氧基乙亚氨酸甲基酯(548mg，3.4mmol)逐滴添加至搅拌中的(3-溴-2-氯苯基)甲胺(500mg，2.27mmol)的甲醇(100mL)溶液中。在室温搅拌混合物16小时。将反应浓缩至干燥。将残余物溶于二氯甲烷，并用盐水洗涤该有机溶液。将有机萃取物干燥(Na2SO4)并浓缩，得到该粗产物N-(3-溴-2-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙脒(500mg，1.43mmol，63％产率)，其为黄色油状物，无需进一步提纯用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝351.0。
步骤3：7-溴-8-氯异喹啉-3-胺
在0℃、在惰性气氛(N2)下，将粗品N-(3-溴-2-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙脒(500mg，1.43mmol)置于圆底烧瓶中，并添加浓H2SO4(4207mg，42.9mmol)。在室温将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入冰水中。添加NH4OH以调节pH至8。通过过滤收集固体，得到7-溴-8-氯异喹啉-3-胺(300mg，81％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝257.0。
实施例I.6
中间体6：三氟甲磺酸8-溴-7-氯异喹啉-3-基酯
步骤1：(2-溴-3-氯苯基)甲胺
将2-溴-1-氯-3-甲基苯(500mg，2.43mmol)、NBS(649mg，3.65mmol),过氧化苯甲酰(5mg，0.02mmol)和四氯化碳(10mL)中的混合物在80℃加热18小时。随后浓缩该混合物。随后添加二氯甲烷(10mL)和水(10mL)。有机层在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物溶于乙醇(10mL)，并添加(5mL,2.43mmol)。在室温搅拌混合物2小时。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(正相，硅胶，二氯甲烷\甲醇＝20:1)，得到(2-溴-3-氯苯基)甲胺(300mg，1.36mmol，55％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝220.0。
步骤2：N-(2-溴-3-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙酰胺
向(2,2-二乙氧基乙酰基)氧基钠(270mg，1.59mmol)、(2-溴-3-氯苯基)甲胺(350mg，1.59mmol)、HOBT(321mg，2.38mmol)、EDCI(454mg，2.38mmol)和DMF(50mL)的混合物添加DIPEA(819mg，6.35mmol)。在室温搅拌混合物18小时。然后添加水(50mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(30mLx2)。合并的有机萃取物用水洗涤(50mLx3)然后用盐水洗涤(20mL)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩，得到N-(2-溴-3-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙酰胺(500mg，89％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝351.0。
步骤3：8-溴-7-氯异喹啉-3-醇
将N-(2-溴-3-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙酰胺(500mg，1.43mmol)和浓H2SO4(10mL,14.26mmol)的混合物在室温搅拌3小时。将混合物倒入冰水中。添加氢氧化铵，以调节该混合物至pH为8。该混合物经乙酸乙酯萃取(30mLx2)。有机层用水(20mLx3)和盐水(20ml)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩，得到8-溴-7-氯异喹啉-3-醇(270mg，73％产率)，其为黄色固体，无需进一步提纯用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝258.0。
步骤4：三氟甲磺酸8-溴-7-氯异喹啉-3-基酯
将8-溴-7-氯异喹啉-3-醇(270mg，1.04mmol)、二氯甲烷(10mL)和DIPEA(404mg，3.13mmol)的混合物冷却至0℃。缓慢添加三氟甲磺酸酐(383.1mg,1.36mmol)。然后在室温搅拌混合物16小时。添加NH4Cl的饱和水溶液(10mL)。该混合物经二氯甲烷萃取(10mLx2)。有机层在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经制备型TLC提纯(正相，硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到三氟甲磺酸8-溴-7-氯异喹啉-3-基酯(290mg，71％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝391.0。
实施例I.7
中间体7：三氟甲磺酸8-溴-7-氟异喹啉-3-基酯
步骤1：(2-溴-3-氟苯基)甲胺
向2-溴-3-氟苯甲腈(1.5g，7.5mmol)的THF(10mL)溶液中添加BH3-THF(2M在THF中，11.2mL,22.4mmol)。所得溶液在60℃加热2小时。将混合物冷却至0℃。添加1N HCl溶液淬灭反应。添加1N NaOH溶液以调节混合物的pH至8。该混合物经二氯甲烷萃取(20mLx2)。有机萃取物用水(20mLx3)和盐水(20ml)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩，得到(2-溴-3-氟苯基)甲胺(850mg，56％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝206.0。
步骤2：N-(2-溴-3-氟苄基)-2,2-二乙氧基乙酰胺
将(2,2-二乙氧基乙酰基)氧基钠(667mg，3.92mmol)、(2-溴-3-氟苯基)甲胺(800mg，3.92mmol)、HOBT(793mg，5.88mmol)和DIPEA(2.0g，15.68mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温搅拌18小时。随后添加水(50mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(30mLx2)。有机层用水(50mLx3)和盐水(20ml)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。该粗产物经快速色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到N-(2-溴-3-氟苄基)-2,2-二乙氧基乙酰胺(820mg，62％产率)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝336.0。
步骤3：8-溴-7-氟异喹啉-3-醇
将N-(2-溴-3-氟苄基)-2,2-二乙氧基乙酰胺(953mg，2.85mmol)和浓H2SO4(10mL,28mmol)的混合物在室温搅拌3小时。将混合物倒入冰水中。添加氢氧化铵以调节pH至8。该混合物经乙酸乙酯萃取(30mLx2)。有机层用水(20mLx3)和盐水(20mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩，得到粗品8-溴-7-氟异喹啉-3-醇(500mg，72％产率)，其为黄色固体，无需进一步提纯用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝243.9。
步骤4：三氟甲磺酸8-溴-7-氟异喹啉-3-基酯
将8-溴-7-氟异喹啉-3-醇(500mg，2.07mmol)、二氯甲烷(10mL)和DIPEA(799mg，6.2mmol)的混合物冷却至0℃。缓慢添加三氟甲磺酸酐(757mg，2.69mmol)。在室温搅拌混合物3小时。添加NH4Cl饱和水溶液(10mL)。该混合物经二氯甲烷萃取(10mLx2)。合并的有机萃取物在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经制备型TLC提纯(正相硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到三氟甲磺酸8-溴-7-氟异喹啉-3-基酯(600mg，77％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝373.9。
实施例I.8
中间体8：(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-
环丙烷甲酰胺
步骤1：7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺
在70℃、在氩气下，将7-溴-8-氯-6-碘-异喹啉-3-胺(3.6g，9.39mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(2.5g，11.41mmol)、Pd(PPh3)4(750mg，0.65mmol)、K2CO3(3.8g，27.54mmol)在1,4-二噁烷(160mL)和水(40mL)中的混合物搅拌23小时。将反应混合物冷却至室温。添加乙酸乙酯，且该混合物经盐水洗涤(100mL)。分离有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:2至乙酸乙酯)，得到7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(2.9g，89％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝348.0。
步骤2：(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在0℃，将草酰氯(3.0g，23.62mmol)逐滴添加至(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酸(1.2g，10.8mmol)的悬浮液中。将该混合物在0℃搅拌1小时。混合物在室温蒸发，以去除二氯甲烷和过量的草酰氯。将残余物重新悬浮于二氯甲烷(5mL)中，并在0℃逐滴添加至7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(2.9g，8.32mmol)和吡啶(10mL,123.64mmol)在二氯甲烷(50mL)中的混合物中。然后在0℃将反应混合物搅拌0.5小时。反应混合物经二氯甲烷(100mL)稀释并用H2O(50mL)洗涤。分离有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:1至1:2)，得到(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(2.85g，78％产率)，其为浅棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝441.0。
实施例I.9
中间体9：(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)硼酸
在氮气下，将双(频哪醇合)二硼(976mg，3.84mmol)、6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(900mg，3.5mmol)、Pd(dppf)Cl2(127mg，0.17mmol)和乙酸钾(1370mg，13.98mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在100℃搅拌3小时。添加乙酸乙酯(50mL)。将混合物过滤并浓缩，得到粗品(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)硼酸(830mg，78％产率)，其为黄色油状物，无需进一步提纯直接使用。LCMS(ESI)：[M+H]+＝223.1。
实施例I.10
中间体10：(±)-反式-N-(6-溴-8-氯异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将乙二酰氯(1330mg，10.49mmol)、(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酸(582mg，5.24mmol)和一滴DMF在二氯甲烷(5mL)中的混合物在室温搅拌0.5小时。将反应浓缩至干燥。在0℃，向6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(450mg，1.75mmol)在二氯甲烷(5mL)和吡啶(1mL)的溶液中分批添加残余物。在室温，将该混合物搅拌1小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝4:1至石油醚:乙酸乙酯＝2:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(200mg，32.6％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝352.0。
实施例I.11
中间体11：(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺
步骤1：(±)-顺式-2-氟环丙烷甲酰氯
向(±)-顺式-2-氟环丙烷甲酸(2.1g，20.18mmol)的二氯甲烷(10mL)和DMF(0.10mL)溶液中逐滴添加乙二酰氯(3.33g，26.23mmol)。将该混合物在25℃搅拌2小时。将反应混合物在真空中浓缩，得到黄色残余物，其随后直接用于下一步骤中。
步骤2：(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺
向6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(2.0g，7.77mmol)的二氯甲烷(10mL)和吡啶(1.88mL,23.3mmol)溶液中添加(±)-顺式-2-氟环丙烷甲酰氯(2.38g，19.42mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中的溶液。将该混合物在25℃搅拌2小时并随后浓缩。添加水(10mL)并随后添加1NHCl溶液，以调节混合物的pH至6。该混合物经二氯甲烷萃取(10mLx3)。有机层经盐水洗涤(20ml)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经快速色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝4:1)，得到(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(2.3g，86％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝343.0。
实施例I.12
中间体12：(±)-反式-8-氯-3-((反式)-2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基硼酸
在密封管中，将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(300mg，0.86mmol)、双(频哪醇合)二硼(261mg，1.03mmol)、乙酸钾(210mg，2.14mmol)和Pd(dppf)Cl2(31mg，0.04mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物在80℃搅拌3小时。浓缩该混合物，得到(±)-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]硼酸(240mg，59％产率)，其为黑色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝316.0。
实施例I.13
中间体13：N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯
将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(3.6g，11.2mmol)、N-叔丁氧基羰基-N-[4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(10g，23mmol)、Pd(dppf)Cl2(0.82g，1.1mmol)、碳酸钾(3.4g，25mmol)在1,4-二噁烷(100mL)和水(10mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。将反应过滤。产物经乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物合并，并在真空下浓缩。残余物经快速色谱提纯(40％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到标题化合物，其为黄色油状物(3.4g，61％)。
实施例I.14
中间体14：8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
步骤1：7-溴-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
在0℃，向7-溴-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(1g，4.37mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液中逐滴添加LiHMDS(8.73mL，8.73mmol，1mol/L)。在0℃、在氮气下，搅拌所得溶液0.5小时。然后添加二碳酸二叔丁基酯(2.85g，13.07mmol)，并将反应在室温搅拌2小时。将反应用甲醇淬灭(50mL)。在真空中浓缩溶剂。残余物经硅胶快速色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚，1/4)，得到7-溴-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(800mg,2.43mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝329.2。
步骤2：8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
在氮气下，在90℃将7-溴-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(6.2g，18.83mmol)、二频哪醇二硼(23.93g，94.22mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(2.76g，3.77mmol)和乙酸钾(5.55g，56.62mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物搅拌2.5小时。在真空中浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，经乙酸乙酯/石油醚(30％)洗脱，得到8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(5g，13.29mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝376.3。
实施例I.15
中间体15：2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸
步骤1：二苯基(丙基)锍四氟硼酸盐
在0℃，向四氟硼酸银(2g，10.31mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中添加1-碘丙烷(1.75g，10.31mmol)和二苯硫醚(5.76g，30.93mmol)。将反应在35℃搅拌15小时。将混合物过滤并且在真空中浓缩滤液。残余物经二氯甲烷-乙醚洗涤，得到二苯基(丙基)锍四氟硼酸盐(2g，6.32mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝229。
步骤2：2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸叔丁基酯
在-78℃，向二苯基(丙基)锍四氟硼酸盐(1.50g，4.75mmol)的1,2-二甲氧基乙烷(30mL)和二氯甲烷(3mL)溶液中添加二异丙基氨基锂(5.54ml,11.09mmol)。在-78℃将所得混合物搅拌1小时。然后添加(Z)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯酸叔丁基酯(330mg，1.58mmol)并在-78℃至25℃搅拌15小时。将反应用水淬灭。所得混合物经二氯甲烷萃取并用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空中浓缩滤液，得到2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸叔丁基酯(350mg，1.40mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝251。
步骤3：2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸
将反式-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸叔丁基酯(350mg，1.4mmol)和2,2,2-三氟乙酸(8mL)的二氯甲烷(3mL)溶液在25℃搅拌1小时。在真空中浓缩该混合物。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％HCl)，得到2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸(260mg，1.34mmol)，其为棕色油状物。产物混合物由4种立体异构体构成，其中吡唑相对于甲酸为反式且(+/-)-2,2-二甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酸为杂质。LCMS(ESI)[M+H]+＝195。
实施例I.16
中间体16：2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
步骤1：2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙腈
将3,5-二溴-1H-吡唑(1.0g，4.43mmol)和碳酸钾(1.22g，8.85mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的混合物在25℃搅拌10分钟。添加溴乙腈(796.59mg，6.64mmol)并将反应在25℃搅拌2小时。过滤后，滤液经乙酸乙酯稀释(30mL)。将反应用水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空中浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/二氯甲醇(1/1)洗脱，得到2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙腈(950mg,3.59mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝264。
步骤2：2-[3-溴-5-(2-甲基丙-1-烯基)吡唑-1-基]乙腈
在氮气下，将2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙腈(1.0g，3.77mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基丙-1-烯-1-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(687.29mg，3.77mmol)、Pd(dppf)Cl2(552.64mg，0.75mmol)和碳酸钾(1.56g，11.32mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(2mL)中的混合物在100℃搅拌1小时。过滤后，在真空中浓缩滤液。残余物经硅胶快速色谱提纯，经乙酸乙酯/石油醚(1/3)洗脱，得到2-[3-溴-5-(2-甲基丙-1-烯基)吡唑-1-基]乙腈(700mg，2.92mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝240。
步骤3：2-溴-5,5-二甲基-6,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将2-[3-溴-5-(2-甲基丙-1-烯基)吡唑-1-基]乙腈(700mg，2.92mmol)在甲磺酸(15mL)中的混合物在65℃搅拌3天。将反应用冰水淬灭。用氢氧化钠水溶液将反应混合物调节至pH为9-10。所得溶液经二氯甲烷萃取并用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ NH4HCO3)，得到2-溴-5,5-二甲基-6,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(300mg，1.16mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝258。
步骤4：2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将2-溴-5,5-二甲基-6,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(100mg，0.39mmol)和叔丁醇钾(52.07mg，0.46mmol)在四氢呋喃(10mL)中的混合物在25℃搅拌10分钟。添加碘甲烷(82.52mg，0.58mmol)。将反应在25℃搅拌1小时。将反应在真空下浓缩，并在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(80mg，0.29mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝272。
实施例I.17
中间体17：2-溴-4-亚甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
步骤1：3,5-二溴-1H-吡唑
在N2下，向3L三颈圆底烧瓶中添加在二甲基四氢呋喃(1000mL)中的化合物1(200g，656mmol，1.0eq)并随后将该溶液冷却至-78℃。1小时内，在-78℃将n-BuLi(2.5M,525mL,2.0eq)逐滴添加至上述溶液中，并将混合物在-78℃搅拌3小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3/1,Rf＝0.51)显示反应完成，且形成了一个主要的新点。在0℃，合并2个反应并将反应混合物倒入水(1000mL)中，用2N HCl将该溶液的pH值酸化至4～5。所得溶液经乙酸乙酯萃取(1000mL,800mL,400mL)。合并的有机相经盐水洗涤(800mL)，用无水Na2SO4干燥并在真空下浓缩，得到标题化合物(284g，1.26mol,95.8％产率)，其为黄色固体。该粗产物无需进一步提纯直接用于下一步骤中。
步骤2：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁基酯
向3,5-二溴-1H-吡唑(137g，607mmol，1.0eq)的MeCN(959mL)溶液中添加2-氯乙酸叔丁基酯(137g，910mmol，131mL,1.5eq)、K2CO3(137g，989mmol，1.63eq)和TBAI(11.0g，29.7mmol，0.049eq)。将所得溶液在25℃搅拌12小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1，Rf＝0.74)显示反应完成，且形成了一个主要的新点。过滤反应混合物，滤饼用EtOAc(500mLx3,300mL,200mL)洗涤。浓缩合并的滤液，得到残余物。将残余物溶于EtOAc(2.0L)，用水(1.0L)和盐水(1.0L)洗涤。有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，得到标题化合物(744g，粗品)，其为棕色油状物。1H NMR：(400MHz,CDCl3)：δ6.35(s,1H),4.80(s,2H),1.46(s,9H)。
步骤3：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸
向化合物2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁基酯(248g，729mmol，1.0eq)的DCM(140mL)溶液中添加TFA(2.08kg,18.2mol,1.35L,25eq)，并将所得溶液加热至80℃并搅拌2小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1,Rf＝0.03)显示反应完成，且形成了一个主要的新点。将反应重复两次。在减压下浓缩合并的反应混合物，得到粗产物。该粗产物用石油醚/乙酸乙酯(4/1，1.0L)稀释，并将所得悬浮液在25℃搅拌1小时，然后过滤。收集滤饼，并在真空中干燥，得到标题化合物(471g，1.66mol,75.8％产率)，其为乳白色固体。1H NMR：(400MHz,DMSO)δ13.3(br s,1H),6.70(s,1H),4.96(s,2H)。
步骤4：N-烯丙基-2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酰胺
在0℃，向2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸(157g，553mmol，1.0eq)的DMF(1.10L)溶液中添加DIPEA(357g，2.77mol,482mL,5.0eq)和EDCI(138g，719mmol，1.3eq)，将所得溶液在0℃搅拌30分钟。然后添加HOBt(97.1g，719mmol，1.3eq)，并将混合物在0℃继续搅拌30分钟。然后在0℃添加丙-2-烯-1-胺(47.4g，830mmol，62.2mL,1.5eq)，并将混合物温热至25℃，并搅拌16小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1，Rf＝0.60)显示反应完成，且形成了一个主要的新点。再将反应重复两次。合并三个批次的反应，且将反应混合物倒入冰水(12.0L)中，用乙酸乙酯萃取(2.00L,2.00L,1.00L)。合并的有机相经盐水洗涤(2.0L)，并随后在真空中浓缩，得到粗产物。粗产物在硅胶上经柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得到标题化合物(340g，1.05mol,63.5％产率)，其为白色固体。1H NMR：(400MHz,CDCl3)δ6.41(s,1H),5.89(br s,1H),5.79(m,1H),5.08-5.17(m,2H),4.85(s,2H),3.86-3.93(m,2H)。
步骤5：N-烯丙基-2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-(4-甲氧基苄基)乙酰胺
向N-烯丙基-2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酰胺(103g，319mmol，1.0eq)的THF(721mL)溶液中添加KOH(32.2g，574mmol，1.8eq)、18-冠醚-6(3.37g，12.8mmol，0.04eq)和1-(氯甲基)-4-甲氧基-苯(64.9g，415mmol，56.5mL,1.3eq)，然后将混合物在25℃搅拌64小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1,Rf＝0.50)显示形成了一个主要的新的点。将反应再重复两次。合并三个批次的反应，并向反应混合物添加水(1.00L)，用1M HCl将pH值调节至7～8，然后用EtOAc萃取(1.00L,800mLx3)。合并的有机相经盐水洗涤(800mL)，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，得到粗产物。粗产物在硅胶上经柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得到标题化合物(320g，722mmol，75.5％产率)，其为黄色油状物。
步骤6：2-溴-6-(4-甲氧基苄基)-4-亚甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
在Ar下，向N-烯丙基-2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-(4-甲氧基苄基)乙酰胺(50.0g，113mmol，1.0eq)的DMF(1.0L)溶液中添加K2CO3(31.2g，226mmol，2.0eq)、Pd(PPh3)4(17.0g，14.7mmol，0.13eq)，然后将混合物在120℃搅拌16小时。将反应再重复6次。合并7个批次的反应，并将反应混合物在真空中浓缩，以除去溶剂，得到残余物。然后向残余物中添加水(2.0L)，用乙酸乙酯萃取(2.0L，1.0L，1.0L)。合并的有机相经盐水洗涤(1.0L)并浓缩，得到粗产物。粗产物在硅胶上经柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得到标题化合物(74.1g，204mmol，25.9％产率，98.7％纯度)，其为白色固体。
1H NMR：(400MHz,CDCl3)δ7.21(d,J＝8.8Hz,2H),6.86-6.92(m,2H),6.52(s,1H),5.50(s,1H),5.20(s,2H),5.02(s,1H),4.58(s,2H),4.13(s,2H),3.83(s,3H)。
步骤7：2-溴-4-亚甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将2-溴-6-(4-甲氧基苄基)-4-亚甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮-(3.90g，10.8mmol，1.0eq)、TFA(38.4g，336mmol，24.9mL,31.3eq)和三氟甲磺酸(16.2g，108mmol，9.5mL,10eq)的DCM(28mL)溶液在25℃搅拌12小时。浓缩反应混合物，得到残余物。向残余物中添加水(100mL)，然后用NaHCO3饱和水溶液将pH值调节至6～7，用EtOAc萃取(100mLx3，60mLx3)。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，得到粗产物。粗产物在硅胶上经柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到标题化合物(1.90g，7.85mmol，72.9％产率)，其为灰色固体。1H NMR：(400MHz,CDCl3)δ6.88(s,1H),6.54(s,1H),5.55(s,1H),5.21(s,1H),5.08(s,2H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H)。
实施例I.18
中间体18：2-溴-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
步骤1：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙酰胺
在室温，将2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸(15g，52.84mmol)、甲基(丙-2-烯-1-基)胺(5.7g，80.15mmol)、N,N-二异丙基乙胺(27g，208.9mmol)和HATU(30g，78.9mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(500mL)溶液搅拌16小时。所得混合物经乙酸乙酯稀释并随后用氯化钠溶液洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(2/3)洗脱，得到2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙酰胺(16.3g，92％)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝338.0。
步骤2：2-溴-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮/>
在80℃，将2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙酰胺(5g，14.84mmol)、乙酸钯(166mg，0.74mmol)、三苯基膦(388mg，1.48mmol)、TBAB(4.8g，14.890mmol)和乙酸钾(4.2g，42.80mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的混合物搅拌10小时。过滤后，在真空中浓缩滤液。残余物在硅胶柱上提纯，经乙酸乙酯/石油醚(2/1)洗脱，得到2-溴-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(3.2g，84％)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝258.1。
实施例I.19
中间体19：2-溴-6-异丙基-4-亚甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
在25℃，向N-烯丙基-2-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-异丙基-乙酰胺(6.3g，17.26mmol)、二乙酸钯(386.5mg，1.73mmol)、三苯基膦(904.29mg，3.45mmol)和溴化四丁基铵(5.56g，17.26mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(150mL)中的混合物中添加乙酸钾(4.87g，51.77mmol)。将所得混合物在90℃搅拌12小时。反应混合物经乙酸乙酯稀释并随后用水洗涤。有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤并在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(2/3)洗脱，得到2-溴-6-异丙基-4-亚甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(2.34g，8.23mmol，47.7％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝284。
实施例I.20
中间体20：2'-溴-6'-甲基-5',6'-二氢螺[环丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-7'(8'H)-酮
在室温，将三甲基碘化亚砜(1.29g，5.86mmol)和叔丁醇钾(656mg，5.85mmol)在二甲基亚砜(30mL)中的混合物搅拌30分钟。然后添加2-溴-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(500mg，1.95mmol)的二甲基亚砜(3mL)溶液。随后在50℃搅拌混合物12小时。反应混合物经乙酸乙酯稀释并随后用水洗涤。有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤并在真空下浓缩。残余物经硅胶柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)提纯，得到2'-溴-6'-甲基-5',6'-二氢螺[环丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>]-7'(8'H)-酮(120mg，23％)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝270。
实施例I.21
中间体21：2-溴-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
步骤1：2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲基酯
向3-溴-5-甲基-1H-吡唑(100g，621.12mmol)、2-氯乙酸甲基酯(101.11g，931.68mmol)和K2CO3(154.29g,1118mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1L)溶液添加TBAI(11.46g，31.06mmol)。在20℃，将所得溶液搅拌12小时。反应混合物用EA(5000mL)稀释。用水(300mLx3)洗涤该溶液并合并有机层。有机层在无水硫酸钠上干燥，并在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，经PE/DCM(60/40)洗脱，得到2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲基酯(120g,82.9％产率)，其为白色固体。
步骤2：2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲基酯
将2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲基酯(50.0g，214.54mmol)和AIBN(3.52g，21.45mmol)的四氯化碳(1500mL)溶液在室温搅拌5分钟。添加1-溴-2,5-吡咯烷二酮(40.09g，225.26mmol)。将该混合物在80℃搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用PE/EA(92/8)洗脱，得到2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲基酯(35.5g，53％产率)，其为白色固体。
步骤3：2-(3-溴-5-(氰基甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸甲基酯
将2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲基酯(35.4g，113.48mmol)和氰化钠(8.87g，181.02mmol)的二甲基亚砜(550mL)溶液在室温搅拌1小时。将反应溶液用EA(2.5L)稀释。将该溶液用水洗涤(200mLx5)，并合并有机层。有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤并在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用DCM/MeOH(99/1)洗脱，得到2-(3-溴-5-(氰基甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸甲基酯(17.6g，60％产率)，其为白色固体。
步骤4：2-(5-(2-氨基乙基)-3-溴-1H-吡唑-1-基)乙酸甲基酯
向2-[3-溴-5-(氰基甲基)吡唑-1-基]乙酸甲基酯(3.0g，11.62mmol)的甲醇(600mL)溶液中添加PtO2(600mg，2.64mmol)。在25℃，将该混合物在10atm的氢气中搅拌15小时。过滤混合物。将滤液无需提纯直接用于下一步骤中。
步骤5：2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
向2-[5-(2-氨基乙基)-3-溴-吡唑-1-基]乙酸甲基酯的溶液(600mL)添加TEA(70mL)。将该混合物在25℃搅拌15小时。在真空中浓缩所得溶液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用DCM/MeOH(98/2)洗脱，得到2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(在两个步骤中，1.12g,41.9％产率)，其为白色固体。
步骤6：2-溴-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
在20℃，向2-溴-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂(469.53mg，2.17mmol)和叔丁醇钾(365.74mg，3.26mmol)在四氢呋喃(20mL)中的混合物添加碘甲烷(616.86mg，4.35mmol)。在20℃搅拌所得溶液1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到2-溴-6-甲基-4,5,7,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>(400mg，1.74mmol，80％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝244。
实施例I.22
中间体22：2-溴-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(3.0g，13.04mmol)和NaH(1.56g，39.12mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(75mL)溶液在0℃搅拌10分钟。然后添加2-碘丙烷(11.08g，65.2mmol)。将该混合物在25℃搅拌1小时。将反应用水淬灭。在真空下浓缩该混合物。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ NH4HCO3)，得到2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(2.1g,7.7166mmol，59.2％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝272。
实施例I.23
中间体23：8-溴-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂
步骤1：2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-硫酮
将2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(314mg，1.36mmol)和Lawsson试剂(551.4mg，1.36mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。将反应在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-硫酮(265mg，78.9％)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝246.0。
步骤2：2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-胺
将2-溴-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-硫酮(265.0mg，1.07mmol)、2,2-二乙氧基乙-1-胺(1.42g，10.7mmol)和碳酸银(590mg，2.14mmol)在四氢呋喃(10mL)中的混合物在80℃搅拌1小时。在真空中浓缩溶剂。残余物经反相柱提纯，用水(0.05％TFA)/CH3CN(85/15)洗脱，得到2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-胺(295mg，80％)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝345.0。
步骤3：8-溴-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂
将2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-胺(228mg，0.66mmol)和浓盐酸(0.17mL,0.66mmol)的乙酸(5mL)溶液在80℃搅拌1小时。将反应在真空下浓缩。残余物经反相柱提纯，用水(0.05％TFA)/ACN(85/15)洗脱，得到8-溴-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>(150mg，89.7％)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝253.0。
示例性化合物
实施例1：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物1)
步骤1：(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(350mg，1.0mmol)、2-甲基-4-氰基苯基硼酸(193mg，1.2mmol)、Pd(PPh3) 4 (115mg，0.1mmol)和Na2CO3(212mg，2mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和水(1mL)中的混合物在Ar下、在90℃搅拌3小时。该混合物经浓缩并经柱色谱提纯(乙酸乙酯/己烷＝1:3)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(380mg，86％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝387.1。
步骤2：(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.26mmol)、二苯甲酮亚胺(94mg，0.52mmol)、Pd(OAc)2(12mg，0.05mmol)、Xantphos(60mg，0.1mmol)和Cs2CO3(168mg，0.52mmol)在DMF(6mL)和甲苯(6mL)中的混合物在氩气下在130℃搅拌2.5小时。添加乙酸乙酯(20mL)。该混合物经盐水洗涤(3x50mL)，用Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发。残余物经柱色谱提纯(乙酸乙酯/己烷＝1:3)，得到(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(130mg，74％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝532.1。
步骤3：(±)-反式-N-[8-氨基-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(130mg，0.19mmol)在二氯甲烷(10mL)、水(1mL)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)中的混合物在25℃搅拌1小时。反应混合物经NH4OH中和(37％产率)至pH＝7-8。该混合物经浓缩并经柱色谱提纯(乙酸乙酯/己烷＝1:2)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(65mg，93％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.842，[M+H]+＝368.1，方法＝C。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),9.35(s,1H),8.24(s,1H),7.81(s,1H),7.73(d,J＝8.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),6.88(s,1H),6.54(d,J＝1.2Hz,1H),6.39(s,2H),2.78-2.73(m,1H),2.29(s,3H),2.16-2.11(m,1H),1.62-1.57(m,1H),1.45-1.44(m,1H)。
实施例2：
N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(化合物2)
步骤1：N-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]环丙烷甲酰胺
在手套箱中，将N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)环丙烷甲酰胺(270mg，0.83mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(500mg，0.91mmol)、Pd(dppf)Cl2(121mg，0.17mmol)和Na2CO3(175mg，1.66mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在90℃加热18小时。将反应经浓缩并经制备型TLC提纯(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)，得到N-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]环丙烷甲酰胺(240mg，72％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝338.0。
步骤2：N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
在150℃，将N-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]环丙烷甲酰胺(120mg，0.36mmol)、二苯甲酮亚胺(77mg，0.43mmol)、Cs2CO3(347mg，1.07mmol)、Pd(OAc)2(16mg，0.07mmol)和XantPhos(41mg，0.07mmol)在DMF(3mL)和甲苯(3mL)中的混合物在微波中加热3小时。将混合物过滤并浓缩。添加THF(5mL)和1,4-二噁烷中的HCl(4M,3mL,12mmol)，然后在室温搅拌30分钟。将混合物过滤并浓缩。该粗产物经制备型HPLC提纯，得到N-[8-氨基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]环丙烷-甲酰胺(21mg，18.6％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.781,[M+H]+＝319.2，方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H),9.31(s,1H),8.44(d,J＝4.8Hz,1H),8.40(s,1H),8.26(s,1H),7.34(d,J＝4.8Hz,1H),6.88(s,1H),6.54(s,1H),6.33(s,2H),2.29(s,3H),2.07-2.04(m,1H),0.83-0.80(m,4H)。
实施例3：
(±)-顺式-N-[8-氨基-6-[4-(羟基甲基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(化合物3)
步骤1：(±)-顺式-N-[8-氯-6-[4-(羟基甲基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
在Ar下、在80℃，将(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(170mg，0.49mmol)、1-羟基-3H-氧杂硼杂环戊并[3,4-c]吡啶(1g，7.41mmol)、PdCl2dppf(150mg，0.21mmol)、K2CO3(200mg，1.45mmol)在1,4-二噁烷(16mL)和水(4mL)中的混合物搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释(100mL)，并用盐水洗涤(20mL)。分离有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-[4-(羟基甲基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(140mg，77％产率)，其为浅棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝372.0。
步骤2：(±)-顺式-N-[6-[4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-吡啶基]-8-氯-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
将(±)-顺式-N-[8-氯-6-[4-(羟基甲基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(140mg，0.38mmol)、叔丁基二甲基氯硅烷(500mg，3.32mmol)、三乙胺(600mg，5.94mmol)在二氯甲烷(15mL)中的混合物回流过夜。反应混合物经浓缩并所得残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/EA＝2:1至1:1)，得到(±)-顺式-N-[6-[4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-吡啶基]-8-氯-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(110mg，59％产率)，其为浅棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝486.2。
步骤3：(±)-N-[6-[4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-吡啶基]-3-[(顺式-2-氟环丙烷羰基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将(±)-顺式-N-[6-[4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-吡啶基]-8-氯-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(95mg，0.20mmol)、BocNH2(300mg，2.56mmol)、Pd2dba3(40mg，0.04mmol)、BrettPhos(40mg，0.07mmol)、t-BuONa(40mg，0.42mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释(100mL)，并用饱和NH4Cl(20mL)洗涤。分离有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:1至1:2)，得到(±)-N-[6-[4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-吡啶基]-3-[(顺式-2-氟环丙烷羰基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(35mg，31％产率)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝567.3。
步骤4：(±)-顺式-N-[8-氨基-6-[4-(羟基甲基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
将(±)-N-[6-[4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-吡啶基]-3-[(顺式-2-氟环丙烷羰基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(35mg，0.062mmol)在甲醇(2mL)和4N HCl-二噁烷(2mL,8mmol)中的混合物在30℃搅拌2小时。浓缩反应混合物。残余物溶于甲醇(1mL)，通过添加7N NH3/甲醇将pH调节直至获得pH＝9-10，并浓缩。该粗产物经快速色谱提纯(C18，NH4HCO3/甲醇/水)，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-[4-(羟基甲基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(11mg，50％产率)，其为浅棕色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.216,[M+H]+＝353.1，方法＝A；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.25(s,1H),8.57(d,J＝5.2Hz,1H),8.43(s,1H),8.33(s,1H),7.74(d,J＝5.2Hz,1H),7.02(s,1H),6.67(d,J＝1.6Hz,1H),4.99-4.95(m,0.5H),4.83-4.79(m,0.5H),4.67(s,2H),2.18-2.13(m,1H),1.88-1.77(m,1H),1.27-1.18(m,1H)。
实施例4：
N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(化合物4)
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步骤1：N-(8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
向8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-胺(0.25g，0.78mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中添加吡啶(3mL)和环丙烷甲酰氯(0.3g，2.84mmol)。将该混合物在25℃搅拌3小时。浓缩该溶液。残余物经快速柱色谱提纯(30％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到N-(8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(35mg)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝390.9。
步骤2：N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
向N-(8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(35mg，0.09mmol)和4-甲基吡啶-3-硼酸(13mg，0.1mmol)在水(2mL)和THF(5mL)中的溶液中添加Na2CO3(27mg，0.25mmol)和Pd(dppf)Cl2(7mg，0.01mmol)。在65℃搅拌溶液3小时。冷却后，浓缩有机层。该粗品随后经快速柱色谱提纯(50％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(20mg，63％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝356.1。
步骤3：N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
在微波反应器中，将N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(20mg，0.06mmol)、二苯甲酮亚胺(15mg，0.08mmol)、Pd(OAc)2(3mg，0.01mmol)、Xantphos(5mg，0.01mmol)、Cs2CO3(51mg，0.16mmol)、DMF(3mL)和甲苯(1mL)中的混合物加热在145℃1小时。添加水(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mLx3)。有机层用水洗涤(30mLx3)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物重新溶于HCl的1,4-二噁烷溶液(0.73mL,4M,2.93mmol)，并在室温搅拌混合物12小时。浓缩该溶液。残余物经10mL的石油醚和5mL的乙酸乙酯的混合物洗涤。该粗品经反相制备型HPLC提纯，得到N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(3mg，16％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.819,[M+H]+＝337.0，方法＝C；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.05(s,1H),8.54(d,J＝4.8Hz,1H),8.48(s,2H),8.26(s,1H),7.26(d,J＝7.2Hz,1H),7.06(d,J＝6.4Hz,1H),4.45(bs,2H),2.26(s,3H),1.63-1.60(m,1H),1.16-1.14(m,2H),0.94-0.92(m,2H)。
实施例5：
N-(8-氨基-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(化合物5)
步骤1：N-(7-溴-8-氯-6-碘异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
向7-溴-8-氯-6-碘异喹啉-3-胺(3g，7.82mmol)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中添加吡啶(3mL)和环丙烷甲酰氯(3g，28.7mmol)。在25℃搅拌溶液3小时。浓缩该溶液。残余物经快速柱色谱提纯(5％在二氯甲烷中的甲醇)，得到N-(7-溴-8-氯-6-碘异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(1.2g，34％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝450.9。
步骤2：N-(7-溴-8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
向N-(7-溴-8-氯-6-碘异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(300mg，0.66mmol)和4-甲基吡啶-3-硼酸(100mg，0.73mmol)在水(2mL)和THF(5mL)中的混合物添加Na2CO3(200mg，1.89mmol)和Pd(dppf)Cl2(50mg，0.06mmol)。将该混合物在65℃搅拌3小时。冷却后，浓缩有机层。该粗材料随后经快速柱色谱提纯(50％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到N-(7-溴-8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3基)环丙烷甲酰胺(110mg，40％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝416.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ11.21(s,1H),9.43(s,1H),8.55-8.53(m,2H),8.37(s,1H),7.94(s,1H),7.42(d,J＝5.2Hz,1H),2.10-2.07(m,4H),0.86-0.85(m,4H)。
步骤3：N-(8-氯-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
在微波反应器中，将N-(7-溴-8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3基)环丙烷甲酰胺(300mg，0.72mmol)和CuCN(300mg，3.33mmol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(3mL)中的混合物在200℃加热1小时。该混合物经乙酸乙酯稀释(10mL)，得到棕色沉淀物。将混合物过滤并浓缩。残余物用氢氧化铵(5mL)稀释，并在室温搅拌1小时。该混合物经二氯甲烷萃取(30mLx2)并用水洗涤(20mLx2)。有机层经浓缩并经制备型HPLC提纯，得到N-(8-氯-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(120mg，46％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝363.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ9.48(s,1H),8.62-8.61(m,2H),8.47(s,1H),8.40(s,1H),7.64(s,1H),7.31(d,J＝4.8Hz,1H),2.27(s,3H),1.68-1.62(m,1H),1.19-1.15(m,2H),1.01-0.98(m,2H)。
步骤4：N-(8-氨基-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
在手套箱中，将N-(8-氯-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(20mg，0.06mmol)、二苯甲酮亚胺(15mg，0.08mmol)、Pd(OAc)2(3mg，0.01mmol)、Xantphos(5mg，0.01mmol)、Cs2CO3(50mg，0.15mmol)、DMF(3mL)和甲苯(1mL)中的混合物添加至反应管中。然后密封反应，并在微波反应器中在145℃加热1小时。添加水(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mLx3)。有机层用水洗涤(30mLx3)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物重新溶于HCl的1,4-二噁烷溶液中(0.72mL，4M，2.87mmol)。在室温搅拌混合物12小时。浓缩该溶液，用10mL的石油醚和5mL的乙酸乙酯的混合物洗涤。残余物经制备型HPLC提纯，得到N-(8-氨基-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(4mg，21％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.688,[M+H]+＝344.1，方法＝F；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.04(s,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),8.47(s,1H),8.46(s,1H),8.25(s,1H),7.27(d,J＝5.2Hz,1H),6.99(s,1H),5.43(bs,2H),2.28(s,3H),1.60-1.57(m,1H),1.17-1.15(m,2H),0.97-0.96(m,2H)。
实施例6：
N-(8-氨基-7-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(化合物6)
步骤1：N-(7-溴-8-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
向N-(7-溴-8-氯-6-碘异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(250mg，0.55mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(126mg，0.61mmol)在水(3mL)和THF(10mL)中的溶液中添加Na2CO3(166mg，1.57mmol)和Pd(dppf)Cl2(41mg，0.05mmol)。在N2下、在85℃，将反应溶液搅拌12小时，然后浓缩至干燥。残余物溶于乙酸乙酯(10mL)，用水和盐水洗涤，在MgSO4上干燥并浓缩。粗品经快速柱色谱提纯(50％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到N-(7-溴-8-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(150mg，67％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝405.0。
步骤2：N-(8-氯-7-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
在微波反应器中，将N-(7-溴-8-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(150mg，0.37mmol)和CuCN(154mg，1.71mmol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(3mL)中的混合物在200℃加热1小时。反应混合物用氢氧化铵(5mL)稀释，并在室温搅拌1小时。该混合物经二氯甲烷萃取(30mLx2)。合并的有机层用水洗涤(20mLx2)，干燥并浓缩。残余物经快速柱色谱提纯(50％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到N-(8-氯-7-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(50mg，38％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝352.1。
步骤3：N-(8-氨基-7-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
在手套箱中，将N-(8-氯-7-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(50mg，0.14mmol)、二苯甲酮(39mg，0.21mmol)、Pd(OAc)2(8mg，0.03mmol)、Xantphos(13mg，0.02mmol)、Cs2CO3(129mg，0.4mmol)、DMF(3mL)和甲苯(1mL)中的混合物添加至密封管中。在微波反应器中，将所得混合物在145℃加热1小时。添加水(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mLx3)。合并的有机层用水洗涤(30mLx3)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物溶于HCl的1,4-二噁烷溶液(1.85mL,4M,7.41mmol)。在室温搅拌混合物13小时。将反应溶液浓缩，用10mL石油醚和5mL的乙酸乙酯的混合物洗涤。残余物经制备型HPLC提纯，得到N-(8-氨基-7-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(5mg，11％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.724,[M+H]+＝333.1，方法＝H；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.27(s,1H),8.28(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),7.12(s,1H),4.00(s,3H),1.33-1.32(m,1H),1.04-1.03(m,2H),0.95-0.92(m,2H)。
实施例7：
(±)-[8-氨基-3-[(顺式-2-氟环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-
甲酰胺(化合物13)
步骤1：5-溴-2-氯-4-甲基-嘧啶
将亚硝酸叔丁酯(16g，155mmol)逐滴添加至5-溴-4-甲基-2-嘧啶基胺(5g，26.59mmol)和氯化苄基三乙基铵(27g，118.54mmol)在二氯甲烷(200mL)中的混合物中。将反应混合物在25℃搅拌2小时。反应混合物用H2O(50mL)稀释，用饱和NaHCO3中和，并用二氯甲烷萃取(300mLx3)。合并所有二氯甲烷层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到5-溴-2-氯-4-甲基-嘧啶(2.5g，45％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝208.9。
步骤2：5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲腈
将5-溴-2-氯-4-甲基嘧啶(2.5g，12.08mmol)、氰化钠(600mg，12.24mmol)和DABCO(500mg，4.46mmol)在二甲基亚砜(40mL)和水(40mL)中的混合物搅拌过夜。反应混合物用H2O稀释(100mL)并用乙酸乙酯萃取(80mL x3)。合并乙酸乙酯层，用盐水洗涤(50mLx2)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)，得到5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲腈(1.75g，73％产率)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝199.9。
步骤3：5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲酸甲基酯
将5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲腈(1.35g，6.82mmol)在浓HCl(20mL)和甲醇(20mL)中的混合物回流2小时。浓缩反应混合物。残余物用水稀释(20mL)，通过添加饱和NaHCO3调节至pH为7，并用乙酸乙酯萃取(30mLx3)。合并所有乙酸乙酯层，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)，得到5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲酸甲基酯(940mg，60％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝233.0。
步骤4：5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲酸
将5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲酸甲基酯(300mg，1.3mmol)和LiOH一水合物(160mg，3.81mmol)在THF(5mL)和水(5mL)中的混合物在25℃搅拌2小时。浓缩反应混合物以除去THF。残余水层用水稀释(20mL)并用乙酸乙酯洗涤(20mLx2)。通过添加浓HCl将水层酸化至pH为4-5。添加氯化钠直至饱和，产物随后用乙酸乙酯萃取(40mLx5)。将合并的萃取物合并，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲酸(230mg，81％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝219.0。
步骤5：5-溴-N,4-二甲基-嘧啶-2-甲酰胺
在0℃，将草酰氯(200mg，1.57mmol)逐滴添加至5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲酸(230mg，1.06mmol)在DMF(0.1mL)和二氯甲烷(5mL)中的混合物。将反应混合物在25℃搅拌0.5小时并浓缩。残余物重新溶于二氯甲烷(2mL)中，并在0℃，逐滴添加至CH3NH2(2M在THF中，2mL，4mmol)和吡啶(0.51mL,6.33mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中。将反应混合物在25℃搅拌1小时，并蒸发。残余物经硅胶柱色谱提纯(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1:4)，得到5-溴-N,4-二甲基-嘧啶-2-甲酰胺(240mg，98％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝230.0。
步骤6：[4-甲基-2-(甲基氨基甲酰基)嘧啶-5-基]硼酸
在氩气下、在80℃，将双(频哪醇合)二硼(200mg，0.79mmol)、5-溴-N,4-二甲基-嘧啶-2-甲酰胺(100mg，0.43mmol)、PdCl2dppf(20mg，0.03mmol)、乙酸钾(120mg，1.22mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物搅拌过夜。将[4-甲基-2-(甲基氨基甲酰基)嘧啶-5-基]硼酸的反应混合物直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝196.1。
步骤7：(±)-5-[8-氯-3-[(顺式-2-氟环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-甲酰胺
在氩气下、在80℃，将(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(100mg，0.29mmol)、[4-甲基-2-(甲基氨基甲酰基)嘧啶-5-基]硼酸(反应混合物约，约8mL约，约0.43mmol)、PdCl2dppf(20mg，0.03mmol)、K2CO3(120mg，0.87mmol)和水(2mL)中的混合物搅拌2小时。反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释(100mL)并用盐水洗涤(30mL)。分离有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)，得到(±)-5-[8-氯-3-[(顺式-2-氟环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-甲酰胺(20mg，17％产率)，其为浅棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝414.0。
步骤8：(±)-5-[8-(二苯亚甲基氨基)-3-[(顺式-2-氟环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-甲酰胺
在氩气下，将(±)-5-[8-氯-3-[(顺式-2-氟环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-甲酰胺(20mg，0.048mmol)、二苯甲酮亚胺(80mg，0.44mmol)、Pd2dba3(10mg，0.01mmol)、Xantphos(10mg，0.02mmol)、Cs2CO3(40mg，0.12mmol)在DMF(1mL)和甲苯(1mL)中的混合物在130℃搅拌1.5小时。反应混合物冷却至室温。残余物经乙酸乙酯稀释(80mL)并用水洗涤(20mL)。分离有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:2至二氯甲烷/乙酸乙酯＝1:3)，得到(±)-5-[8-(二苯亚甲基氨基)-3-[(顺式-2-氟环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-甲酰胺(12mg，44％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝559.2。
步骤9：(±)-5-[8-氨基-3-[(顺式-2-氟环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-甲酰胺
将(±)-5-[8-(二苯亚甲基氨基)-3-[(顺式-2-氟环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-甲酰胺(12mg，0.021mmol)在水(0.1ml)、2,2,2-三氟乙酸(0.5ml)和二氯甲烷(3ml)中的混合物在30℃搅拌1小时。蒸发反应混合物。将残余物溶于甲醇(1mL)，用7N在甲醇中的NH3中和直至pH为9-10，并经快速色谱提纯(C18,甲醇/水至甲酸/甲醇/水)，得到(±)-5-[8-氨基-3-[(顺式-2-氟环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-甲酰胺的甲酸盐(3.4mg，37％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.493,[M+H]+＝395.1，方法＝E；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.27(s,1H),8.77(s,1H),8.52(brs,1H),8.36(s,1H),7.09(s,1H),6.72(s,1H),4.99-4.79(m,1H),3.04(s,3H),2.65(s,3H),2.18-2.13(m,1H),1.88-1.78(m,1H),1.27-1.19(m,1H)。
实施例8：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(6-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物14)
步骤1：(±)-5-(8-氯-3-(顺式-2-氟环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-6-甲基-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁基酯
将(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(80mg，0.23mmol)、6-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯并咪唑-1-甲酸叔丁基酯(83mg，0.23mmol)、Pd(dppf)Cl2(17mg，0.02mmol)和K2CO3(96mg，0.70mmol)在1,4-二噁烷(6mL)和水(1mL)中的混合物在90℃搅拌4小时。浓缩反应混合物。残余物经制备型TLC提纯(正相硅胶，uv 254nm，二氯甲烷/甲醇＝30/1)，得到(±)-5-[8-氯-3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-6-甲基-苯并咪唑-1-甲酸叔丁基酯(70mg，60％产率)，其为黄色油状物。
步骤2：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(6-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-5-[8-氯-3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-6-甲基-苯并咪唑-1-甲酸叔丁基酯(60mg，0.12mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(142mg，1.21mmol)、Pd2(dba)3(23mg，0.03mmol)、NaOtBu(34mg，0.36mmol)、tBuBrettPhos(13mg，0.03mmol)和1-甲基-2-吡咯烷酮(4mL)。将该混合物在110℃搅拌2小时。在真空中浓缩反应混合物。残余物经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(6-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(5mg，11％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.335,[M+H]+＝376.1，方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.23(s,1H),8.30(s,1H),8.16(s,1H),7.59-7.47(m,2H),7.03(s,1H),6.76(s,1H),4.99-4.78(m,1H),2.40(s,3H),2.20-2.12(m,1H),1.87-1.76(m,1H),1.27-1.17(m,1H)。
实施例9：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-环丙基哒嗪-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
(化合物15)
步骤1：8-氯-6-(环丙基乙炔基)异喹啉-3-胺
将乙炔基环丙烷(500mg，7.56mmol)、CuI(50mg，0.26mmol)、6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(200mg，0.78mmol),Et3N(785mg，7.77mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(62mg，0.08mmol)在DMF(2mL)中的混合物在110℃加热16小时。反应溶液经乙酸乙酯稀释，用饱和NH4Cl水溶液(20mLx3)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经制备型TLC提纯(正相硅胶，二氯甲烷/甲醇＝25/1)，得到8-氯-6-(2-环丙基乙炔基)异喹啉-3-胺(170mg，81％产率)，其为黄色固体。
步骤2：8-氯-6-(5-环丙基哒嗪-4-基)异喹啉-3-胺
将1,2,4,5-四嗪(80mg，0.97mmol)和8-氯-6-(2-环丙基乙炔基)异喹啉-3-胺(60mg，0.25mmol)在对二甲苯(3mL)中的溶液在140℃搅拌18小时。将反应溶液浓缩。残余物经制备型TLC提纯(正相硅胶，二氯甲烷/甲醇＝30/1)，得到8-氯-6-(5-环丙基哒嗪-4-基)异喹啉-3-胺(40mg，55％产率)，其为黄色油状物。
步骤3：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(5-环丙基哒嗪-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
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在0℃，向(±)-8-氯-6-(5-环丙基哒嗪-4-基)异喹啉-3-胺(100mg，0.34mmol)在二氯甲烷(10mL)和吡啶(0.08mL,1.01mmol)中的溶液中添加顺式-2-氟环丙烷甲酰氯(0.13g，1.08mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液。将该混合物在20℃搅拌1小时，随后在真空下浓缩。残余物经制备型TLC提纯(正相，硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝4:1)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-环丙基哒嗪-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(100mg，77％产率)，其为黄色固体。
步骤4：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-环丙基哒嗪-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-环丙基哒嗪-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(80mg，0.21mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(244mg，2.09mmol)、Pd2(dba)3(19mg，0.02mmol)、NaOtBu(59mg，0.62mmol)、tBuBrettPhos(10mg，0.02mmol)和1-甲基-2-吡咯烷酮(3mL)。将该混合物在110℃搅拌2小时。在真空中浓缩反应混合物。残余物经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(5-环丙基哒嗪-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(8mg，10％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.566,[M+H]+＝364.1，方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.28(s,1H),9.00(s,1H),8.78(s,1H),8.37(s,1H),7.18(s,1H),6.80(s,1H),4.99-4.78(m,1H),2.21-2.08(m,2H),1.88-1.76(m,1H),1.27-1.17(m,3H),1.12-1.06(m,2H)。
实施例10：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(7-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物16)
步骤1：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(7-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在氩气气氛下、在110℃，将(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(300mg，0.87mmol)、7-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(280mg，1.08mmol)、Pd(dppf)Cl2(60mg，0.08mmol)、K2CO3(350mg，2.54mmol)在1,4-二噁烷(6mL)和水(1mL)中的混合物搅拌3小时。将反应浓缩至干燥。然后，该粗产物经柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚＝1:1)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(7-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(280mg，64％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝396.1。
步骤2：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(7-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将(±)-顺式-N-[8-氯-6-(7-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(280mg，0.71mmol)、3,4-二氢-2H-吡喃(1.0mL,10.96mmol)和三氟乙酸(0.1mL,1.34mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液回流加热过夜。添加5mL饱和NaHCO3溶液将反应稀释。随后分离有机层，干燥(Na2SO4)并浓缩。粗品随后在硅胶上经柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚＝1:10)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(7-甲基-3-四氢吡喃-2-基-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(160mg，46％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝480.2。
步骤3：(±)-3-(顺式-2-氟环丙烷甲酰氨基)-6-(7-甲基-3-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
将(±)-顺式-N-[8-氯-6-(7-甲基-3-四氢吡喃-2-基-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(50mg，0.10mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(120mg，1.02mmol)、Xantphos(25mg，0.04mmol)、Pd2(dba)3(20mg，0.02mmol)、叔丁醇钠(50mg，0.52mmol)在干燥DMF(2.0mL)和干燥甲苯(2.0mL)中的混合物在115℃搅拌过夜。将反应浓缩。残余物溶于乙酸乙酯(15ml)。该混合物用20mL的饱和盐水溶液洗涤。随后分离有机层，干燥(Na2SO4)并浓缩。粗品在硅胶上经柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚，1/5至1/1)，得到(±)-N-[3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-(7-甲基-3-四氢吡喃-2-基-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，60％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝477.1。
步骤4：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(7-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将(±)-N-[3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-(7-甲基-3-四氢吡喃-2-基-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.06mmol)在甲醇(1mL)和HCl(4M，在二噁烷中，1.0mL,4mmol)中的溶液在室温搅拌1小时。该反应经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(7-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(9mg，38％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝377.2,Rt(分钟)＝1.42，方法＝E；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.25(s,1H),8.43(s,1H),8.33(s,2H),7.06(s,1H),6.76(d,J＝1.6Hz,1H),4.99-4.79(m,1H),2.65(s,3H),2.18-2.13(m,1H),1.88-1.77(m,1H),1.27-1.18(m,1H)。
实施例11：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-异丙基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物17)
步骤1：5-异丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑
在惰性气氛下、在110℃，将4-溴-3-异丙基-1H-吡唑(380mg，2.01mmol)、Pd(dppf)Cl2(140mg，0.19mmol)、乙酸钾(800mg，8.16mmol)、双(频哪醇合)二硼(4750mg，18.71mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物搅拌5小时。将反应浓缩至干燥。粗品随后在硅胶上经柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚＝1:1)，得到5-异丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(400mg,28％产率)，其为红色液体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝237.2。
步骤2：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(5-异丙基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
密封管中含有5-异丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(400mg，0.56mmol)、Pd(dppf)Cl2(35mg，0.05mmol)、K2CO3(200mg,1.45mmol)和(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(150mg，0.44mmol)在1,4-二噁烷(6mL)和水(1mL)中的反应混合物。在微波中，将反应混合物在130℃加热1小时。将反应浓缩至干燥。粗品随后在硅胶上经柱色谱提纯(乙酸乙酯)，得到粗品(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-异丙基-1H-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(200mg，50％产率)，其为黄色液体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝373.1。
步骤3：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(5-异丙基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-异丙基-1H-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(200mg，0.22mmol)、3,4-二氢-2H-吡喃(1.0mL,10.96mmol)和三氟乙酸(0.1mL,1.34mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液回流过夜。随后将反应浓缩至干燥。粗品随后在硅胶上经柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(80mg，70％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝457.2。
步骤4：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-异丙基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在130℃、在惰性气氛下，将(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(70mg，0.15mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.85mmol)、Xantphos(35mg，0.06mmol)、Pd2(dba)3(25mg，0.03mmol)和Cs2CO3(200mg，0.62mmol)在干燥DMF(1mL)和干燥甲苯(1mL)中的混合物搅拌4小时。随后将反应经浓缩并经反相色谱提纯(在水中的甲醇40-60/0.05％氨)，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(5-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(25mg，37％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝438.2。
步骤5：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-异丙基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(5-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(25mg，0.06mmol)在1,4-二噁烷中的HCl(4M,1.0mL,4.0mmol)中的溶液在室温搅拌30分钟。所得混合物经反相色谱提纯(在水中的甲醇60％/0.05％氨)，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(5-异丙基-1H-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(9mg，43％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.57,[M+H]+＝354.1，方法＝E；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.17(s,1H),8.26(s,1H),7.69(s,1H),7.07(s,1H),6.83(d,J＝0.9Hz,1H),4.99-4.92(m,0.5H),4.83-4.79(m,0.5H),3.45-3.44(m,1H),2.17-2.13(m,1H),1.87-1.79(m,1H),1.37-1.35(d,J＝6.8Hz,6H),1.27-1.18(m,1H)。
实施例12：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(1-乙基-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)异喹啉-3-
基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物18)
/>
步骤1：4-碘-5-甲基吡啶-2-醇
将4-碘-2-甲氧基-5-甲基-吡啶(700mg，2.81mmol)、碘化三甲基硅烷(752mg，3.76mmol)在乙腈(10mL)中的混合物加热至回流2小时。随后将反应浓缩至干燥。该粗产物随后在硅胶上经柱色谱提纯(乙酸乙酯)，得到4-碘-5-甲基-吡啶-2-醇(500mg，71％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝235.9。
步骤2：1-乙基-4-碘-5-甲基吡啶-2(1H)-酮
将4-碘-5-甲基-吡啶-2-醇(480mg，2.04mmol)和氢化钠(60％，在矿物油中，200mg，5mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温搅拌20分钟。随后添加碘乙烷(0.5mL，6.25mmol)。在室温搅拌混合物1小时。该混合物经反相色谱提纯(在水中的甲醇60％/0.1％氨)，得到1-乙基-4-碘-5-甲基-吡啶-2-酮(250mg，47％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝264.0。
步骤3：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(1-乙基-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将1-乙基-4-碘-5-甲基-吡啶-2-酮(120mg，0.46mmol)、Pd(dppf)Cl2(30mg，0.04mmol)、磷酸钾(400mg，1.89mmol)和(±)-[8-氯-3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]硼酸(140mg，0.45mmol)在1,4-二噁烷(6mL)和水(1mL)中的混合物在100℃搅拌1小时。将反应浓缩至干燥。粗品随后在硅胶上经柱色谱提纯(乙酸乙酯)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(1-乙基-5-甲基-2-氧代-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(70mg，37％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝400.1。
步骤4：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(1-乙基-5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在惰性气氛下，将(±)-顺式-N-[8-氯-6-(1-乙基-5-甲基-2-氧代-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(50mg，0.13mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(155mg，1.32mmol)、Xantphos(30mg，0.05mmol)、Pd2(dba)3(25mg，0.03mmol)和Cs2CO3(200mg，0.62mmol)在干燥DMF(2mL)和干燥甲苯(2mL)中的混合物在112℃搅拌过夜。反应随后经浓缩并经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ HCl)，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(1-乙基-5-甲基-2-氧代-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(8.1mg，17％产率)，其为甲酸盐(黄色固体)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.44,[M+H]+＝381.1，方法＝A；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.24(s,1H),8.32(s,1H),7.58(s,1H),6.96(s,1H),6.63(d,J＝0.8Hz,1H),6.49(s,1H),4.97-4.80(m,1H),4.108(q,J＝7.2Hz,2H),2.17-2.14(m,1H),2.05(s,3H),1.86-1.79(m,1H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H),1.25-1.20(m,1H)。
实施例13：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物19)
步骤1：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(2-甲氧基-5-甲基吡啶-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将4-碘-2-甲氧基-5-甲基-吡啶(255mg，1.02mmol)、Pd(dppf)Cl2(40mg，0.05mmol)、K3PO4(350mg，1.65mmol)、[8-氯-3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]硼酸(220mg，0.71mmol)在1,4-二噁烷(6mL)和水(1mL)中的混合物在100℃搅拌1小时。浓缩反应混合物至干燥。粗品随后在硅胶上经柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(100mg，35％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝386.1。
步骤2：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(2-甲氧基-5-甲基吡啶-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在115℃、在氩气下，将(±)-顺式-N-[8-氯-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(100mg，0.26mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(200mg，1.71mmol)、Xantphos(60mg，0.10mmol)、Pd2(dba)3(50mg，0.05mmol)、Cs2CO3(420mg，1.29mmol)在干燥DMF(2mL)和干燥甲苯(2mL)中的混合物搅拌4小时。将反应浓缩至干燥。粗品随后在硅胶上经柱色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱，得到粗品(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(25mg)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝367.2。
步骤3：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(35mg，0.05mmol)和碘三甲基硅烷(30mg，0.15mmol)在乙腈(10mL)中的混合物加热至回流2小时。然后添加0.5mL的饱和Na2S2O3溶液并将反应浓缩。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的甲醇40-50/0.05％氨)，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(5-甲基-2-氧代-1H-吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(9mg，53％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI):RT(分钟)＝1.45,[M+H]+＝353.1，方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.53-11.49(m,1H),10.81(s,1H),9.32(s,1H),8.27(s,1H),7.28(s,1H),6.85(s,1H),6.49(s,1H),6.34(s,2H),6.19(s,1H),5.0-4.83(m,1H),2.28-2.22(m,1H),1.91(s,3H),1.71-1.63(m,1H),1.21-1.14(m,1H)。
实施例14：
1-(8-氨基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-3-异丙基脲(化合物20)
/>
步骤1：8-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-胺
向密封管中添加6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(300mg，1.17mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡唑(364mg，1.75mmol)、Pd(dppf)Cl2(105mg，0.14mmol)、Na2CO3(375mg，3.54mmol)、1,4-二噁烷(15mL)和水(1.5mL)。用N2鼓泡混合物2分钟，并在100℃搅拌2.5小时。将混合物在真空中浓缩并随后经柱色谱提纯(硅胶柱，石油醚/乙酸乙酯从1:1至0:100，uv 254nm)，得到8-氯-6-(1-甲基吡唑-4-基)异喹啉-3-胺(290mg，94％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝259.1。
步骤2：1-(8-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-3-异丙基脲
向压力管中添加8-氯-6-(1-甲基吡唑-4-基)异喹啉-3-胺(280mg，1.08mmol)、异氰酸异丙基酯(1mL,10.18mmol)和DBU(494mg，3.25mmol)。将混合物在100℃搅拌4小时。该混合物经浓缩并经柱色谱提纯(20g硅胶柱，用石油醚/乙酸乙酯从1:1至0:100洗脱)，得到1-[8-氯-6-(1-甲基吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-3-异丙基-脲(200mg，52％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝344.1。
步骤3：1-(8-氨基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-3-异丙基脲
向密封管中添加1-[8-氯-6-(1-甲基吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-3-异丙基-脲(180mg，0.52mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(500mg，4.27mmol)、Pd2(dba)3(100mg，0.11mmol)、NaOtBu(150mg，1.56mmol)、tBuBrettPhos(60mg，0.12mmol)和1-甲基-2-吡咯烷酮(15mL)。将该混合物在110℃搅拌2小时。反应混合物在真空下浓缩。残余物经柱色谱提纯(10mmol/LNH4HCO3水溶液/乙腈从100:0至1:5)，得到1-[8-氨基-6-(1-甲基吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-3-异丙基-脲(31mg，18％产率)，其为浅棕色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.167,[M+H]+＝325.2，方法＝B；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ：8.94(s,1H),7.92(s,1H),7.78(s,1H),7.35(s,1H),7.06(s,1H),6.76(d,J＝1.6Hz,1H),3.92-3.85(m,1H),3.85(s,3H),1.15(d,J＝6.4Hz,6H)。
实施例15：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物21)
步骤1：4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶
在氩气下，将4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(500mg，2.54mmol)、双(频哪醇合)二硼(1289mg，5.08mmol)、Pd(dppf)Cl2(186mg，0.25mmol)和乙酸钾(497mg，5.08mmol)在1,4-二噁烷(18mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。该混合物经浓缩并经柱色谱提纯(乙酸乙酯/己烷＝1:1)，得到4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(480mg，78％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝245.1。
步骤2：(±)-反式-N-[8-氯-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在氩气下，将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(180mg，0.51mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(150mg，0.62mmol)、Pd(PPh3)4(59mg，0.05mmol)和Na2CO3(109mg，1.03mmol)在1,4-二噁烷(2mL)和水(0.1mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。该混合物经浓缩并经柱色谱提纯(乙酸乙酯/己烷＝2:1)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(210mg，65％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝388.1。
步骤3：(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在0℃，向(±)-反式-N-[8-氯-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.16mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加NaH(13mg，0.32mmol)。将该混合物在0℃搅拌0.5小时。随后添加4-甲基苯磺酸甲基酯(30mg，0.16mmol)。将反应在0℃搅拌2小时。该粗品混合物经制备型反相HPLC提纯(C-18，乙腈/水+0.05％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(110mg，53％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝402.1。
步骤4：(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在氩气下，将(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(110mg，0.09mmol)、Pd2(dba)3(16mg，0.02mmol)、Xantphos(20mg，0.04mmol)、Cs2CO3(57mg，0.18mmol)和二苯甲酮亚胺(48mg，0.26mmol)在DMF(3ml)和甲苯(3mL)中的混合物在130℃搅拌2.5小时。添加乙酸乙酯(80mL)。该混合物经盐水洗涤(3x50mL)，用Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发。残余物经柱色谱提纯(乙酸乙酯/己烷，1:1)，得到(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(31mg，59％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝547.3。
步骤5：(±)-反式-N-[8-氨基-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(31mg，0.06mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)在二氯甲烷(10mL)和水(2mL)中的混合物在25℃搅拌2小时。反应混合物经NH4OH中和至pH＝7-8。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯(C18，乙腈/水+0.05％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(16mg，69％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.479，[M+H]+＝383.1，方法＝A；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.13(s,1H),9.37(s,1H),8.36(d,J＝4.8Hz,1H),8.32(s,1H),7.62(d,J＝3.2Hz,1H),7.28(s,1H),7.27(d,J＝4.8Hz,1H),7.04(d,J＝1.2Hz,1H),6.69(d,J＝3.2Hz,1H),6.44(s,2H),3.88(s,3H),2.80-2.75(m,1H),2.18-2.13(m,1H),1.63-1.58(m,1H),1.47-1.42(m,1H)。
实施例16：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物22)
步骤1：(±)-反式-N-[8-氯-6-[1-(对甲苯基磺酰基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在0℃，向(±)-反式-N-[8-氯-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(170mg，0.27mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加NaH(22mg，0.54mmol)。将该混合物在0℃搅拌0.5小时。添加对甲苯磺酰氯(104mg，0.54mmol)并将反应混合物在0℃搅拌2小时。混合物经反相制备型HPLC提纯(C-18；乙腈/水+0.05％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-[1-(对甲苯基磺酰基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(169mg，79％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝542.1。
步骤2：(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-[1-(对甲苯基磺酰基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
/>
在氩气下，将(±)-反式-N-[8-氯-6-[1-(对甲苯基磺酰基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(170mg，0.22mmol)、Pd2(dba)3(40mg，0.04mmol)、Xantphos(50mg，0.09mmol)、Cs2CO3(140mg，0.43mmol)和二苯甲酮亚胺(118mg，0.65mmol)在DMF(6mL)和甲苯(6mL)中的混合物在130℃搅拌2.5小时。添加乙酸乙酯(180mL)。该混合物经盐水洗涤(3x50mL)，用Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发。残余物经柱色谱提纯(乙酸乙酯/己烷＝1:1)，得到(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-[1-(对甲苯基磺酰基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，67％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝687.2。
步骤3：(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-[1-(对甲苯基磺酰基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.15mmol)和TBAF(152mg，0.58mmol)在THF(15mL)中的混合物在50℃搅拌24小时。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯(C18；乙腈/水+0.05％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(68mg，88％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝533.2。
步骤4：(±)-反式-N-[8-氨基-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(68mg，0.13mmol)在乙腈(10mL)、2,2,2-三氟乙酸(1mL)和水(10mL)中的混合物在25℃搅拌20分钟。反应混合物经NH4OH中和至pH＝7-8。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯(C18，乙腈/水+0.05％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(35mg，74％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.392,[M+H]+＝369.1，方法＝A。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.80(s,1H),11.11(s,1H),9.36(s,1H),8.31(s,1H),8.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.56(t,J＝2.8Hz,1H),7.28(s,1H),7.23(d,J＝4.8Hz,1H),7.04(d,J＝1.2Hz,1H),6.67(q,J＝1.7Hz,1H),6.42(s,2H),2.79-2.75(m,1H),2.17-2.12(m,1H),1.62-1.57(m,1H),1.47-1.42(m,1H)。
实施例17：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-(3-乙基-1-甲基-6-氧代-2-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物23)
步骤1：6-溴-1-甲基-吡啶-2-酮
向6-溴-1H-吡啶-2-酮(5.0g，28.74mmol)和K2CO3(7.93g，57.47mmol)在乙腈(100mL)中的混合物添加碘甲烷(8.16g，57.47mmol)。将该混合物搅拌过夜。然后过滤该混合物。滤液经浓缩并经快速柱色谱提纯(50％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到6-溴-1-甲基-吡啶-2-酮(4.5g，83％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝189.9。
步骤2：6-溴-5-碘-1-甲基-吡啶-2-酮
在室温，将6-溴-1-甲基-吡啶-2-酮(3.7g，19.68mmol)和NIS(4.43g，25.58mmol)在DMF(15mL)中的混合物搅拌2天。该混合物经制备型TLC提纯(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得到6-溴-5-碘-1-甲基-吡啶-2-酮(1.1g，18％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝313.9；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.68(d,J＝9.6Hz,1H),6.27(d,J＝9.6Hz,1H),3.77(s,3H)。
步骤3：6-溴-1-甲基-5-乙烯基-吡啶-2-酮
在N2下、在60℃，将6-溴-5-碘-1-甲基-吡啶-2-酮(1000mg，3.19mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1471mg，9.56mmol)、Pd(PPh3)4(367mg，0.32mmol)和K2CO3(879mg，6.37mmol)在1,4-二噁烷(50mL)和水(2mL)中的混合物搅拌18小时。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)，得到6-溴-1-甲基-5-乙烯基-吡啶-2-酮(600mg，68％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝216.0。
步骤4：6-溴-5-乙基-1-甲基-吡啶-2-酮
向25mL烧瓶中添加6-溴-1-甲基-5-乙烯基-吡啶-2-酮(500mg，2.34mmol)、Pt/C(80mg，2.34mmol)和乙酸乙酯(15mL)，在室温、H2气氛下搅拌混合物10分钟。将混合物过滤并且浓缩滤液。该粗产物经制备型TLC提纯，用石油醚/乙酸乙酯(2:1)洗脱，得到6-溴-5-乙基-1-甲基-吡啶-2-酮(470mg，89％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝218.0。
步骤5：6-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-5-乙基-1-甲基-吡啶-2-酮
向密封管中添加(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)硼酸(494mg，2.22mmol)、6-溴-5-乙基-1-甲基-吡啶-2-酮(400mg，1.85mmol)、Pd(dppf)Cl2(151mg,0.21mmol)、K3PO4(355mg，1.68mmol)、乙酸钠(414mg，5.05mmol)、乙腈(20mL)和水(2mL)。用N2鼓泡混合物2分钟，并在90℃搅拌3小时。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(石油醚/乙酸乙酯，1/4)，得到6-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-5-乙基-1-甲基-吡啶-2-酮(210mg，26％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝314.1。
步骤6：(±)-反式-N-(8-氯-6-(3-乙基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向6-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-5-乙基-1-甲基-吡啶-2-酮(180mg，0.57mmol)和吡啶(0.14mL,1.72mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中添加(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酰氯(111mg，0.86mmol)。将该混合物在25℃搅拌30分钟。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(3-乙基-1-甲基-6-氧代-2-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(120mg，45％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝407.1。
步骤7：(±)-反式-N-[8-氨基-6-(3-乙基-1-甲基-6-氧代-2-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在手套箱中，向密封管中添加氨基甲酸叔丁基酯(345mg，2.95mmol)、Pd2(dba)3(54mg，0.06mmol)、Cs2CO3(288mg，0.88mmol)、Xantphos(57mg，0.12mmol)、(±)-反式-N-[8-氯-6-(3-乙基-1-甲基-6-氧代-2-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(120mg，0.29mmol)、DMF(3mL)和甲苯(3mL)。将该混合物在110℃搅拌18小时。将混合物溶于乙酸乙酯(50ml)并用盐水洗涤。随后分离有机层，干燥(Na2SO4)并浓缩至干燥。粗品随后经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(3-乙基-1-甲基-6-氧代-2-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(25.5mg，22％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.528,[M+H]+＝388.1，方法＝A；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.30(s,1H),8.32(s,1H),7.58(d,J＝9.2Hz,1H),6.96(s,1H),6.64(d,J＝9.2Hz,1H),6.56(s,1H),3.30(s,3H),2.67-2.62(m,1H),2.22-2.10(m,3H),1.62-1.53(m,2H),1.3(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例18：
(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(1,4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(化合物24)
(±)-反式-N-[8-氨基-6-(1,4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(化合物25)
步骤1：3-溴-1,4-二甲基-吡啶-2-酮
向3-溴-4-甲基-1H-吡啶-2-酮(600mg，3.19mmol)和K2CO3(880mg，6.38mmol)在乙腈(100mL)中的混合物中添加碘甲烷(905mg，6.38mmol)。将该混合物在室温搅拌过夜。然后过滤该混合物，浓缩并经快速柱色谱提纯(50％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到3-溴-1,4-二甲基-吡啶-2-酮(570mg，88％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝202.0。
步骤2：3-(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)-1,4-二甲基吡啶-2(1H)-酮
向密封管中添加3-溴-1,4-二甲基-吡啶-2-酮(350mg，1.73mmol)、(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)硼酸(462mg，2.08mmol)、Pd(dppf)Cl2(141mg，0.19mmol)、K3PO4(332mg，1.57mmol)、乙酸钠(387mg，4.72mmol)、乙腈(20mL)和水(2mL)。用N2鼓泡混合物2分钟，并在90℃搅拌3小时。该混合物经浓缩并经快速柱色谱提纯(100％乙酸乙酯)，得到3-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-1,4-二甲基-吡啶-2-酮(240mg，43％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝300.1。
步骤3：(±)-顺式-N-[8-氯-6-(1,4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
向冷却中(0℃)的(±)-顺式-2-氟环丙烷甲酸(83mg，0.80mmol)、3-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-1,4-二甲基-吡啶-2-酮(200mg，0.67mmol)和吡啶(0.54mL,6.67mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物添加POCl3(102mg，0.67mmol)。在室温搅拌混合物1小时。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(1,4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(239mg，92％产率)，其为灰色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝386.1。
步骤4：(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(1,4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺和反式-N-[8-氨基-6-(1,4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
在手套箱中，向密封管中添加氨基甲酸叔丁基酯(668mg，5.7mmol)、Pd2(dba)3(104mg，0.11mmol)、Cs2CO3(557mg，1.71mmol)、Xantphos(110mg，0.23mmol)、(±)-顺式-N-[8-氯-6-(1,4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(220mg，0.57mmol)、DMF(3mL)和甲苯(3mL)。将该混合物在110℃搅拌18小时。将混合物溶于乙酸乙酯(50ml)并用盐水洗涤。然后分离有机物，干燥(Na2SO4)，并浓缩至干燥。该粗产物随后经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(1,4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(29.6mg，14％产率)，其为黄色固体，和反式-N-[8-氨基-6-(1,4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(13mg，6％产率)，其为黄色固体。
(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(1,4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺：LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.543,[M+H]+＝367.1，方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.21(s,1H),8.28(s,1H),7.58(d,J＝6.8Hz,1H),6.91(s,1H),6.58(s,1H),6.40(d,J＝6.8Hz,1H),4.98-4.78(m,1H),3.59(s,3H),2.17-2.13(m,1H),2.01(s,3H),1.87-1.76(m,1H),1.26-1.17(m,1H)。(±)-反式-N-[8-氨基-6-(1,4-二甲基-2-氧代-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺：LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.524,[M+H]+＝367.1，方法＝B；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.21(s,1H),8.21(s,1H),7.58(d,J＝6.8Hz,1H),6.89(s,1H),6.58(s,1H),6.40(d,J＝6.8Hz,1H),4.97-4.78(m,1H),3.59(s,3H),2.49-2.39(m,1H),2.01(s,3H),1.55-1.47(m,1H),1.41-1.36(m,1H)。
实施例19：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(6-甲氧基-2-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物26)
步骤1：6-甲氧基-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶
向密封管中添加3-溴-6-甲氧基-2-甲基-吡啶(1.2g，5.94mmol)、双(频哪醇合)二硼(1.81g，7.13mmol)、Pd(dppf)Cl2(434mg，0.59mmol)、乙酸钾(1164mg，11.88mmol)和1,4-二噁烷(10mL)。将该混合物在95℃搅拌16小时。随后浓缩该混合物并经制备型TLC提纯(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝15/1)，得到2-甲氧基-4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(1.4g，94％产率)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝250.0。
步骤2：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(6-甲氧基-2-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将6-甲氧基-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(725mg，2.91mmol)、(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(500mg，1.46mmol)、PdCl2(dppf)(106mg，0.15mmol)和K2CO3(602mg，4.37mmol)在1,4-二噁烷(3mL)和水(0.5mL)中的混合物用N2吹洗3遍。将混合物在90℃搅拌3小时。添加水(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mLx2)。有机层用水洗涤(20mLx3)然后用盐水洗涤(20mL)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经制备型TLC提纯(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(370mg，66％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝386.0。
步骤3：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(6-甲氧基-2-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在手套箱中，向密封管中添加氨基甲酸叔丁基酯(151mg，1.3mmol)、Pd2(dba)3(23mg，0.03mmol)、Cs2CO3(126mg，0.39mmol)、Xantphos(25mg，0.05mmol)、(±)-顺式-N-[8-氯-6-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(50mg，0.13mmol)和甲苯(1mL)。将该混合物在130℃搅拌2小时。添加水(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mLx2)。有机层用水(20mLx3)和盐水(20mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经制备型TLC提纯(硅胶，二氯甲烷/甲醇＝20/1)，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(13mg，27％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.738,[M+H]+＝367.0。方法＝G；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.22(s,1H),8.29(s,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),6.98(s,1H),6.71(d,J＝8.0Hz,1H),6.69(d,J＝1.6Hz,1H),4.99-4.80(m,1H),3.96(s,3H),2.44(s,3H),2.18-2.14(m,1H),1.86-1.79(m,1H),1.25-1.22(m,1H)。
实施例20：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(2-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物27)
向(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(100mg，0.27mmol)在乙腈(4mL)中的混合物添加碘三甲基硅烷(0.04mL,0.27mmol)。将混合物在90℃搅拌1小时。添加水(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mLx2)。有机层用水洗涤(20mLx3)然后用盐水洗涤(20mL)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。该混合物经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(6-羟基-2-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(50mg，52％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.348,[M+H]+＝353.0。方法＝G；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.20(s,1H),8.29(s,1H),7.62(d,J＝9.2Hz,1H),6.97(s,1H),6.65(d,J＝1.2Hz,1H),6.48(d,J＝9.2Hz,1H),4.98-4.80(m,1H),2.35(s,3H),2.18-2.13(m,1H),1.86-1.79(m,1H),1.24-1.20(m,1H)。
实施例21：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物28)
步骤1：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(350mg，1.02mmol)、5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡唑(386mg，1.32mmol)、Pd(dppf)Cl2(92mg，0.13mmol)、K3PO4(214mg，1.02mmol)和乙酸钠(253mg，3.09mmol)、乙腈(20mL)和水(2mL)。用N2鼓泡混合物2分钟，并在90℃搅拌3小时。添加水(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mLx2)。有机层经盐水洗涤(20mL)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经制备型TLC提纯(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(350mg，80％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝429.7。
步骤2：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在手套箱中，向密封管中添加氨基甲酸叔丁基酯(956mg，8.16mmol)、Pd2(dba)3(149mg，0.16mmol)、Cs2CO3(1.33g,4.08mmol)、Xantphos(158mg，0.33mmol)、(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(350mg，0.82mmol)和甲苯(5mL)。将该混合物在110℃搅拌2小时。添加水(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mLx2)。有机层用水洗涤(20mLx3)然后用盐水洗涤(20mL)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩，得到粗产物(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(0.3g，90％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝410.7。
步骤3：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
向(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(200mg，0.49mmol)在THF(3mL)中的混合物添加1,4-二噁烷中的HCl(4M，在1,4-二噁烷中，8mL,32mmol)。在室温搅拌混合物16小时。浓缩该混合物。添加7M在甲醇中的NH3溶液以调节混合物的pH至8。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(20mg，12.6％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.417,[M+H]+＝326.7。方法＝G；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.14(s,1H),8.27(s,1H),7.81(s,1H),7.14(s,1H),6.90(d,J＝1.6Hz,1H),4.99-4.79(m,1H),2.52(s,3H),2.19-2.12(m,1H),1.87-1.79(m,1H),1.25-1.20(m,1H)。
实施例22：
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(5-氧代吡咯烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物30)
在手套箱中，向密封管中添加氨基甲酸叔丁基酯(202mg，1.73mmol)、Pd2(dba)3(31mg，0.03mmol)、Cs2CO3(168mg，0.52mmol)、Xantphos(33mg，0.07mmol)、(1S,2S)-N-[8-氯-6-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(10mg，0.03mmol)、DMF(0.5mL)和甲苯(0.5mL)。将该混合物在110℃搅拌16小时。添加水(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mL x2)。有机萃取物用水洗涤(20mLx3)然后用盐水洗涤(20mL)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。混合物经反相制备型HPLC提纯，得到(1S,2S)-N-[8-氨基-6-(5-氧代吡咯烷-3-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(10mg，17％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.401,[M+H]+＝329.7。方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.14(s,1H),8.24(s,1H),6.99(s,1H),6.69(s,1H),4.99-4.78(m,1H),3.86-3.76(m,2H),3.51-3.47(m,1H),2.81-2.74(m,1H),2.59-2.53(m,1H),2.14-2.11(m,1H),1.79-1.73(m,1H),1.22-1.20(m,1H)。
实施例23：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(4-乙基-6-(羟基甲基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物31)
步骤1：(±)-5-(8-氯-3-(顺式-2-氟环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-4-乙基吡啶甲酸甲基酯
将(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(130mg，0.38mmol)、4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲酸甲基酯(227mg，0.78mmol)、Pd(dppf)Cl2(26mg，0.04mmol)、K2CO3(156mg，1.14mmol)在1,4-二噁烷(1mL)和水(0.2mL)中的混合物用N2吹洗3遍。将混合物在90℃搅拌2小时。添加水(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mLx2)。合并的萃取物用水洗涤，然后用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经制备型TLC提纯(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得到(±)-5-[8-氯-3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-乙基-吡啶-2-甲酸甲基酯(150mg，92％产率)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝428.7。
步骤2：(±)-5-(8-氨基-3-(顺式-2-氟环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-4-乙基吡啶甲酸甲基酯
在手套箱中，向密封管中添加氨基甲酸叔丁基酯(410mg，3.51mmol)、Pd2(dba)3(64mg，0.07mmol)、Cs2CO3(342mg，1.05mmol)、Xantphos(67mg，0.1400mmol)、(±)-5-[8-氯-3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-乙基-吡啶-2-甲酸甲基酯(150mg，0.35mmol)、甲苯(1mL)和DMF(1mL)。将该混合物在130℃搅拌2小时。添加水(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mLx2)。有机层用水(20mLx3)和盐水(20mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经制备型TLC提纯(硅胶，二氯甲烷/甲醇，20/1)，得到(±)-5-[8-氨基-3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-乙基-吡啶-2-甲酸甲基酯(60mg，42％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝409.7。
步骤3：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(4-乙基-6-(羟基甲基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在0℃，向(±)-5-[8-氨基-3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-乙基-吡啶-2-甲酸甲基酯(60mg，0.15mmol)在甲醇(5mL)中的混合物添加NaBH4(111mg，2.94mmol)。在室温搅拌混合物5小时。添加水(2mL)淬灭反应。该混合物经浓缩并重新悬浮于二氯甲烷和甲醇的溶液(10:1，10mL)中。将混合物过滤并且用二氯甲烷和甲醇的溶液(10:1)洗涤。将滤液浓缩并经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-[4-乙基-6-(羟基甲基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(12mg，21％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.565,[M+H]+＝381.7。方法＝C；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.25(s,1H),8.31(s,1H),8.30(s,1H)7.56(s,1H),6.99(s,1H),6.67(d,J＝1.6Hz,1H),4.98-4.75(m,1H),4.75(s,2H),2.74(q,J＝7.2Hz,2H),2.18-2.15(m,1H),1.88-1.85(m,1H),1.23-1.20(m,1H),1.18(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例24：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物32)
使用与本文描述的那些类似的方法合成所述化合物。LC/MS和NMR数据示于表A-1。
实施例25：
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物37)
步骤1：3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶
将6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(1g，3.88mmol)和(1S,2S)-2-氟环丙烷甲酸(0.49g，4.66mmol)在二氯甲烷(10mL)和吡啶(0.5mL)中的混合物在0℃搅拌0.5小时，然后添加POCl3(0.4mL,4.29mmol)。随后将反应在室温搅拌1小时。反应混合物经乙酸乙酯稀释(10mL)并用饱和NaHCO3将pH调节至7-8。随后分离有机层，干燥(NaSO4)并浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚:乙酸乙酯，1:1)，得到标题化合物(1g，62.5％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝345.0。
步骤2：(1S,2S)-N-(8-氯-6-(4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将(1S,2S)-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(150mg，0.44mmol)、4-甲基噁唑烷-2-酮(53mg，0.52mmol)、Xanphos(25mg，0.04mmol)、Pd2(dba)3(40mg，0.04mmol)和K3PO4(277mg，1.31mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:1至石油醚/乙酸乙酯＝1:2)，得到标题化合物，其为黄色固体(140mg，61％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝364.1。
步骤3：3-((1S,2S)-2-氟环丙烷甲酰氨基)-6-(4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将氨基甲酸叔丁基酯(241mg，2.06mmol)、(1S,2S)-N-[8-氯-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(150mg，0.41mmol)、Pd2(dba)3(74mg，0.08mmol)、Brettphos(44mg，0.08mmol)和tBuONa(118mg，1.23mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物在90℃搅拌6小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚:乙酸乙酯＝2:1至石油醚:乙酸乙酯＝1:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(70mg，14.8％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝445.2。
步骤4：(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将N-[3-[[(1S,2S)-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.16mmol)在1,4-二噁烷中的HCl(1mL,4M)中的混合物在室温搅拌1小时。将反应浓缩至干燥。残余物溶于甲醇(2mL)，并用饱和NaHCO3调节pH至7-8。混合物经反相制备型HPLC提纯，得到标题化合物，其为棕色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.54,[M+H]+＝345.1，方法＝C。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),9.19(s,1H),8.19(s,1H),7.00(d,J＝2.0Hz,1H),6.92(d,J＝1.6Hz,1H),6.32(s,2H),5.01-4.83(m,1H),4.71–4.68(m,1H),4.58-4.54(m,1H),4.06–4.03(m,1H),2.28–2.21(m,1H),1.71–1.61(m,1H),1.29(d,J＝6.0Hz,3H),1.19–1.12(m,1H)。
实施例26：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(喹啉-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物38)
步骤1：喹啉-4-基硼酸
在氩气下、在80℃，将4-溴喹啉(1.0g，4.81mmol)、双(频哪醇合)二硼(12.0g，47.26mmol)、PdCl2dppf(0.7g，0.96mmol)、乙酸钾(1.4g，14.29mmol)在1,4-二噁烷(100mL)中的混合物搅拌2小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:1至二氯甲烷:甲醇＝1:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(2g，粗品)。LCMS(ESI)[M+H]+＝256.1。
步骤2：(±)-反式-N-(8-氯-6-(喹啉-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在氩气下，将反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(800mg，2.28mmol)、喹啉-4-硼酸(100mg，0.58mmol)、Pd(PPh3)4(67mg，0.06mmol)和K2CO3(239mg，1.73mmol)在1,4-二噁烷(4mL)和水(1mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝4:1至石油醚/乙酸酯＝2:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(100mg，25.3％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝399.1。
步骤3：(±)-反式-2-氰基-N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(喹啉-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
在微波反应器中，将反式-N-[8-氯-6-(4-喹啉基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(90mg，0.23mmol)、二苯甲酮亚胺(123mg，0.68mmol)、Pd2(dba)3(41mg，0.04mmol)、Xantphos(13mg，0.02mmol)和Cs2CO3(220mg，0.67mmol)在DMF(3mL)和甲苯(1mL)中的混合物在150℃加热1小时。反应经乙酸乙酯稀释并用盐水洗涤。随后分离有机萃取物，干燥(Na2SO4)并浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝4:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(40mg，33％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝544.2。
步骤4：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(喹啉-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-喹啉基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(40mg，0.07mmol)和TFA(0.5mL,6.71mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物以及两滴水在室温搅拌3小时。将反应浓缩至干燥。残余物溶于乙酸乙酯(10mL)并用饱和NaHCO3水溶液调节pH至7-8。将混合物浓缩至干燥，并经硅胶柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚＝2:1至乙酸乙酯)，得到标题化合物，其为黄色固体(18.5mg，64％产率)。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.573,[M+H]+＝380.1，方法＝B。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),9.41(s,1H),8.96(d,J＝4.4Hz,1H),8.28(s,1H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.95(d,J＝8.4Hz,1H),7.82–7.78(m,1H),7.62–7.58(m,1H),7.51(d,J＝4.4Hz,1H),7.07(s,1H),6.73(d,J＝1.6Hz,1H),6.49(s,2H),2.77-2.72(m,1H),2.15 -2.11(m,1H),1.60-1.58(m,1H),1.45-1.40(m,1H)。
实施例27：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物39)
步骤1：3,5-二溴-4-乙基吡啶
在-78℃，向二异丙胺(3.5mL,24.8mmol)在THF(50mL)中的溶液中分批添加n-BuLi(2.5M，在己烷中，10.5mL，26.25mmol)。在室温搅拌混合物15分钟。在-78℃、在N2下，向反应混合物随后添加3,5-二溴吡啶(5.0g，21.11mmol)。在-78℃搅拌1小时后，在-78℃添加碘乙烷(3.29g，21.11mmol)。随后在室温搅拌混合物16小时。然后，将反应用饱和NH4Cl溶液(100mL)洗涤。然后分离有机物，干燥(Na2SO4)并浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝20:1)，得到标题化合物，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝265.9。
步骤2：5-溴-4-乙基吡啶-3-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下将3,5-二溴-4-乙基-吡啶(2.4g，9.06mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.0g，8.54mmol)、K2CO3(2.5g，18.12mmol)、CuI(0.86g，4.53mmol)和N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(0.4g，4.55mmol)在1,4-二噁烷(60mL)中的混合物在100℃搅拌4小时。将反应过滤并浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝10:1至石油醚/乙酸乙酯＝4:1)，得到标题化合物，其为白色固体(1.01g，37％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝301.0。
步骤3：4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将双(频哪醇合)二硼(1.26g，4.98mmol)、N-(5-溴-4-乙基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(1.0g，3.32mmol)、PdCl2dppf(0.24g，0.33mmol)和乙酸钾(0.98g，9.96mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。将反应浓缩至干燥并经硅胶柱色谱提纯(乙酸乙酯)，得到标题化合物，其为黑色油状物(490mg，25％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝349.3。
步骤4：(±)-5-(8-氯-3-((顺式)-2-氟环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-4-乙基吡啶-3-基氨基甲酸叔丁基酯
将(±)-N-[4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(250mg，0.72mmol)、顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(150mg，0.44mmol)、PdCl2dppf(52mg，0.07mmol)、K3PO4(304mg，1.43mmol)和乙酸钠(117mg，1.43mmol)在乙腈(4mL)和水(1mL)中的混合物在氩气下在90℃搅拌3小时。将反应浓缩至干燥。残余物随后经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝4:1至石油醚/乙酸乙酯＝1:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(70mg，20.1％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝485.2。
步骤5：(±)-N-[6-[5-(叔丁氧基羰基氨基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将N-[5-[8-氯-3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-乙基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.08mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(96mg，0.82mmol)、Pd2(dba)3(8mg，0.01mmol)、Brettphos(5mg，0.01mmol)和tBuONa(23mg，0.24mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在90℃加热1小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:1至乙酸乙酯/石油醚＝2:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(20mg，34.7％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝566.3。
步骤6：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将(±)-N-[6-[5-(叔丁氧基羰基氨基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-[[(顺式)-2-氟环丙烷羰基]氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(20mg，0.04mmol)在HCl的1,4-二噁烷溶液(1mL,4M)中的混合物在室温搅拌1小时。将反应浓缩至干燥。残余物溶于甲醇(2ml)，并用饱和NaHCO3将pH调节至7-8。混合物经反相制备型HPLC提纯(在水中的5-95％甲醇和1％NH4HCO3)，得到标题化合物，其为黄色固体(11.6mg，83.5％产率)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.54,[M+H]+＝366.2，方法＝F。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),9.30(s,1H),8.24(s,1H),7.94(s,1H),7.57(s,1H),6.79(s,1H),6.48(s,1H),6.31(s,2H),5.21(s,2H),5.02-4.84(m,1H),2.46-2.41(m,2H),2.27-2.24(m,1H),1.69-1.62(m,1H),1.18 -1.14(m,1H),0.98(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例28：
3-氨基-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)丙酰胺(化合物40)
步骤1：3-(6-溴-8-氯异喹啉-3-基氨基)-3-氧代丙基氨基甲酸叔丁基酯
将6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(150mg，0.58mmol)、3-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(165mg，0.87mmol)在二氯甲烷(2mL)和吡啶(0.5mL)中的混合物在0℃搅拌0.5小时。添加POCl3(89mg，0.58mmol)至反应混合物，然后在室温搅拌混合物1小时。反应混合物用10mL水洗涤，并用饱和NaHCO3水溶液将pH调节至7-8。随后分离有机层，并干燥(NaSO4)，然后浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝4:1至石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(200mg，70％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝430.0。
步骤2：3-(8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-3-氧代丙基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将N-[3-[(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)氨基]-3-氧代-丙基]氨基甲酸叔丁基酯(195mg，0.45mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(120mg，0.55mmol)、Pd(PPh3)4(53mg，0.05mmol)和K2CO3(188mg，1.36mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:1至100％乙酸乙酯)，得到标题化合物，其为黄色固体(190mg，59％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝441.2。
步骤3：3-(3-氨基丙酰氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将氨基甲酸叔丁基酯(470mg，4.01mmol)、N-[3-[[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-3-氧代-丙基]氨基甲酸叔丁基酯(180mg，0.41mmol)、Cs2CO3(398mg，1.22mmol)、Pd2(dba)3(37mg，0.04mmol)和Brettphos(21mg，0.04mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:1至乙酸乙酯/石油醚＝2:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(150mg，38％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝522.3。
步骤4：3-氨基-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)丙酰胺
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将N-[3-[[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-3-氧代-丙基]氨基甲酸叔丁基酯(150mg，0.29mmol)在1,4-二噁烷中的HCl(4.0M,2mL,8mmol)中的混合物在室温搅拌1小时。将反应浓缩至干燥并将残余物溶于甲醇(2mL)，并用饱和NaHCO3调节pH至7-8。混合物直接用反相制备型HPLC提纯(5-95％甲醇和1％ NH4HCO3)，得到标题化合物，其为黄色固体(39.5mg)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.45,[M+H]+＝322.2，方法＝F。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.23(s,1H),8.40(d,J＝5.2Hz,1H),8.39(s,1H),8.33(s,1H),7.39(d,J＝5.2Hz,1H),6.99(s,1H),6.68(d,J＝1.2Hz,1H),3.05(t,J＝6.8Hz,2H),2.66(t,J＝6.8Hz,2H),2.37(s,3H)。
实施例29：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-异丙基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物41)
步骤1：5-异丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑
在氩气下、在100℃，将4-溴-3-异丙基-1H-吡唑(2.0g，10.58mmol)、Pd(dppf)Cl2(1.0g，1.37mmol)、乙酸钾(4.8g，48.98mmol)、双(频哪醇合)二硼(25.0g，98.45mmol)在1,4-二噁烷(100mL)中的混合物搅拌过夜。将反应浓缩至干燥，且该粗品随后经硅胶柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚，1/10至1/1)，得到3-异丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(1.28g，39％产率)，其为黄色液体。LCMS(ESI):[M+H]+＝237.2。
步骤2：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(5-异丙基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在微波反应器中，将含有3-异丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(600mg，1.91mmol)、Pd(dppf)Cl2(100mg，0.14mmol)、K2CO3(560mg，4.06mmol)、(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(520mg，1.51mmol)、1,4-二噁烷(10mL)和水(1.5mL)的反应混合物的压力管在130℃加热80分钟。将反应浓缩至干燥，且该粗品随后经硅胶柱色谱提纯(乙酸乙酯)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(3-异丙基-1H-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(220mg，37％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝373.1。
步骤3：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(5-异丙基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-异丙基-1H-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(220mg，0.59mmol)、3,4-二氢-2h-吡喃(2.0mL，21.92mmol)、TFA(0.5mL，6.71mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液回流加热过夜。将反应浓缩至干燥，且该粗品随后经硅胶柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚，1/4至1/1)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(230mg，84％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝457.2。
步骤4：(±)-顺式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(3-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺和(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(3-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
在氩气气氛下，将(±)-顺式-N-[8-氯-6-[1-四氢吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.2mmol)、二苯甲酮亚胺(182mg，1.0mmol)、Xantphos(58mg，0.1mmol)、Pd2(dba)3(46mg，0.05mmol)和Cs2CO3(170mg，0.52mmol)在干燥DMF(3.0mL)和干燥甲苯(3.0mL)中的混合物在130℃搅拌4小时。将反应浓缩。残余物溶于乙酸乙酯(15ml)并用20mL盐水洗涤。随后分离有机层，干燥(Na2SO4)并浓缩至干燥。该粗品随后经硅胶柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚，1:3至1:1)，得到(±)-顺式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(3-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(77mg，61％产率)，其为黄色液体。(LCMS(ESI):[M+H]+＝602.3)和(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(3-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(43mg,32％产率)，其为黄色固体(LCMS(ESI)：[M+H]+＝602.3)。
步骤5：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(5-异丙基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
将(±)-顺式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(3-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(120.0mg，0.20mmol)在1,4-二噁烷中的HCl(2.0mL,4M,8mmol)中的溶液在室温搅拌1小时。反应经浓缩并所得残余物经反相制备型HPLC提纯(在水中的甲醇0-40/0.1％ HCl)，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(3-异丙基-1H-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(30mg，43％产率)，其为红色固体(HCl盐)。LCMS(ESI)：[M+H]+＝354.2,RT(分钟)＝1.53，方法＝B；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.43(s,1H),8.39(s,1H),7.70(s,1H),7.29(s,1H),7.03(s,1H),5.10-5.06(m,1H),3.62-3.57(m,1H),2.20-2.17(m,1H),1.99-1.89(m,1H),1.42(d,J＝6.8Hz,6H),1.39-1.30(m,1H)。
实施例30：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(5-异丙基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物42)
将(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(3-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(115mg，0.19mmol)在HCl的1,4-二噁烷溶液(2.0mL,4M,8mmol)中的溶液在室温搅拌1小时。反应经浓缩，并且所得残余物经反相制备型HPLC提纯(在水中的甲醇0-50/0.1％ HCl)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(3-异丙基-1H-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(45mg，65％产率)，其为红色固体(HCl盐)。LCMS(ESI)：[M+H]+＝354.2,RT(分钟)＝1.59，方法＝B；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.41(s,1H),8.37(s,1H),7.68(s,1H),7.30(s,1H),7.03(s,1H),5.08-5.05(m,1H),3.62-3.58(m,1H),2.46-2.38(m,1H),1.75-1.65(m,1H),1.58-1.50(m,1H),1.42(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例31：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物43)
步骤1：甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑
将6-溴-1-甲基-吡啶-2-酮(500mg，2.66mmol)、双(频哪醇合)二硼(675mg，2.66mmol)、Pd(dppf)Cl2(97mg，0.13mmol)和乙酸钾(781mg,7.98mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在100℃加热12小时。该混合物经乙酸乙酯稀释(50mL)，过滤并浓缩，得到粗产物1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基硼酸(320mg)，其为灰色固体，无需进一步提纯用于下一步骤中。LCMS(ESI)：[M+H]+＝154.1。
步骤2：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(1-甲基-6-氧代-2-吡啶基)硼酸(106mg，0.70mmol)、(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(160mg，0.47mmol)、Pd(dppf)2Cl2(42mg，0.06mmol)、K3PO4(98mg，0.47mmol)、乙酸钠(116mg，1.41mmol)、乙腈(20mL)和水(2mL)。混合物用氮气鼓泡2分钟并随后在90℃搅拌3小时。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(石油醚/乙酸乙酯，1/2)，得到(±)-顺式-N-(8-氯-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(50mg，28％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝372.0。
步骤3：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在手套箱中，向密封管中添加氨基甲酸叔丁基酯(157mg，1.34mmol)、Pd2(dba)3(24mg，0.03mmol)、Cs2CO3(131mg，0.40mmol)、Xantphos(26mg，0.05mmol)、(±)-顺式-N-(8-氯-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(50mg，0.13mmol)、DMF(2mL)和甲苯(2mL)。将该混合物在110℃搅拌18小时。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(7mg，15％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.385,[M+H]+＝353.1，方法＝A；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.27(s,1H),8.36(s,1H),7.59(dd,J＝6.8,9.2Hz,1H),7.09(s,1H),6.67(d,J＝1.6Hz,1H),6.62(dd,J＝1.2,9.2Hz,1H),6.42(dd,J＝1.2,6.8Hz,1H),4.99-4.79(m,1H),3.46(s,3H),2.19-2.13(m,1H),1.87-1.78(m,1H),1.27-1.18(m,1H)。
实施例32：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物44)
步骤1：甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑
在氮气下，将5-溴-6-甲基-1h-吲唑(400mg，1.9mmol)、双(频哪醇合)二硼(2.41g,9.48mmol)、Pd(dppf)Cl2(277mg，0.38mmol)和乙酸钾(557mg，5.69mmol)在DMF(10mL)中的混合物加热至90℃3小时。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(石油醚)，得到6-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑(370mg，37％产率)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝259.1。
步骤2：(±)-反式-N-(8-氯-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向密封管中添加反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(160mg，0.46mmol)、6-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑(141mg，0.55mmol)、Pd(dppf)2Cl2(41mg，0.06mmol)、乙酸钠(113mg，1.39mmol)、乙腈(2mL)和水(0.2mL)。用氮气鼓泡混合物2分钟并随后在100℃搅拌3小时。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(160mg，82％产率)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝402.1。
步骤3：(±)-反式-N-[8-氯-6-(6-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
向冷却中(0℃)的反式-N-[8-氯-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(190mg，0.47mmol)和对甲苯磺酸(8mg，0.05mmol)在二氯甲烷(5mL)中的悬浮液中添加3,4-二氢-2h-吡喃(47mg，0.57mmol)。在室温搅拌反应混合物16小时。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(石油醚/乙酸乙酯，4:1)，得到反式-N-[8-氯-6-(6-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(190mg,75％产率)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝486.2。
步骤4：(±)-反式-2-氰基-N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
向密封管中添加二苯甲酮亚胺(61mg，0.34mmol)、反式-N-[8-氯-6-(6-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(150mg，0.31mmol)、Pd(OAc)2(7mg，0.03mmol)、Cs2CO3(201mg，0.62mmol)、Xantphos(15mg，0.03mmol)和甲苯(5mL)。将该混合物在145℃搅拌16小时。反应混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(石油醚/乙酸乙酯，1/2)，得到(±)-反式-2-氰基-N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(90mg，46％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝631.1。
步骤5：(±)-反式-N-[8-氨基-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
向(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(6-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(80mg，0.13mmol)在THF(3mL)中的混合物添加HCl的1,4-二噁烷溶液(2mL,4M,8mmol)。在室温搅拌混合物1小时。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(6.3mg，12.9％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.513，[M+H]+＝383.1，方法＝A；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.24(s,1H),8.27(s,1H),8.03(s,1H),7.65(s,1H),7.45(s,1H),7.00(s,1H),6.76(d,J＝1.2Hz,1H),2.65-2.64(m,1H),2.39(s,3H),2.14-2.09(m,1H),1.62-1.55(m,2H)。
实施例33：
(±)-反式-N1-[8-氨基-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-异喹啉基]环丙烷-1,2-二甲酰胺(化合物45)
向(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(6-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(80mg，0.13mmol)在THF(3mL)中的混合物添加HCl的1,4-二噁烷溶液(2mL,4M,8mmol)。在室温搅拌混合物1小时。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N1-[8-氨基-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-异喹啉基]环丙烷-1,2-二甲酰胺(8.3mg，16％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.372,[M+H]+＝401.1，方法＝A；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.23(s,1H),8.25(s,1H),8.03(s,1H),7.65(s,1H),7.45(s,1H),7.00(s,1H),6.75(s,1H),2.42-2.38(m,4H),2.25-2.20(m,1H),1.44-1.40(m,2H)。
实施例34：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
(化合物47)
步骤1：(±)-8-氯-3-(顺式-2-氟环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基硼酸
将(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(1.0g，2.91mmol)、双(频哪醇合)二硼(960mg，3.78mmol)、Pd(dppf)Cl2(424mg，0.58mmol)和乙酸钾(855mg，8.73mmol)在DMF(4mL)中的混合物用N2吹洗3遍。在100℃搅拌混合物1小时。该混合物经乙酸乙酯萃取。有机层用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。该粗产物经硅胶快速色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，3:1)，得到8-氯-3-(顺式-2-氟环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基硼酸(600mg，66％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝309.0。
步骤2：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-[8-氯-3-[[顺式-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]硼酸(200mg，0.57mmol)、3-溴-4-甲氧基-吡啶(128mg，0.68mmol)、Pd(dppf)2Cl2(51mg,0.07mmol)、K3PO4(120mg，0.57mmol)、乙酸钠(142mg,1.73mmol)、1,4-二噁烷(2mL)和水(0.2mL)。用N2鼓泡混合物2分钟并在100℃搅拌3小时。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(石油醚/乙酸乙酯，2/1)，得到(±)-顺式-N-(8-氯-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(80mg，36％产率)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝372.1。
步骤3：(±)-顺式-N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-顺式-N-[8-氯-6-(4-甲氧基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(60mg，0.16mmol)、二苯甲酮亚胺(32mg，0.18mmol)、Pd(OAc)2(4mg，0.02mmol)、Cs2CO3(105mg，0.32mmol)、Xantphos(8mg，0.02mmol)、DMF(1mL)和甲苯(3mL)。在微波反应器中，将该混合物在145℃加热30分钟。将反应用乙酸乙酯稀释(50mL)，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。然后，该粗产物经快速硅胶柱色谱提纯(80％乙酸乙酯，在己烷中)，得到(±)-顺式-N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺和(±)-反式-N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(20mg，24％产率)的混合物，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝517.2。
步骤4：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
向(±)-顺式-N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺和反式-N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(20mg，0.04mmol)的混合物在THF(3mL)中的溶液中添加HCl的1,4-二噁烷溶液(2mL，4M,8mmol)。在室温搅拌混合物1小时。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯，得到两种所需异构体：(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(4-甲氧基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(4.9mg，36％，黄色固体)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.253,[M+H]+＝353.1，方法＝A；1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ9.22(s,1H),8.44(d,J＝6.0Hz,1H),8.41(s,1H),8.31(s,1H),7.21(d,J＝6.0Hz,1H),7.19(s,1H),6.88(d,J＝1.6Hz,1H),4.98-4.80(m,1H),3.96(s,3H),2.19-2.14(m,1H),1.88-1.78(m,1H),1.27-1.18(m,1H)。
(±)-反式-N-[8-氨基-6-(4-甲氧基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(6mg，44％，黄色固体)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.295,[M+H]+＝353.1，方法＝A；1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ9.22(s,1H),8.44(d,J＝6.0Hz,1H),8.40(s,1H),8.25(s,1H),7.21(d,J＝6.0Hz,1H),7.17(s,1H),6.88(d,J＝0.8Hz,1H),4.99-4.78(m,1H),3.96(s,3H),2.50-2.40(m,1H),1.55-1.49(m,1H),1.42-1.37(m,1H)。
实施例35：
(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(2-羟基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(化合物48)
步骤1：2-甲氧基-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶
向压力管中添加3-溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶(396mg，1.96mmol)、双(频哪醇合)二硼(597mg，2.35mmol)、Pd(dppf)2Cl2(143mg，0.20mmol)、乙酸钾(384mg，3.92mmol)和1,4-二噁烷(15mL)。将该混合物在95℃搅拌4小时。残余物经硅胶快速色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，4:1)，得到2-甲氧基-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(250mg，51％产率)，其为无色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝249.3。
步骤2：(±)-顺式-N-[8-氯-6-(2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
向压力管中添加(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(260mg，0.76mmol)、2-甲氧基-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(226mg，0.91mmol)、Pd(dppf)2Cl2(68mg，0.09mmol)、乙酸钠(244mg，2.3mmol)、K3PO4(160mg，0.76mmol)、乙腈(10mL)和水(1mL)。用N2鼓泡混合物2分钟，并在90℃搅拌2小时。残余物经硅胶快速色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，4:1)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(145mg，50％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝386.1。
步骤3：(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
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将Pd2dba3(32mg，0.03mmol)、Cs2CO3(253mg，0.78mmol)、(±)-顺式-N-[8-氯-6-(2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(100mg，0.26mmol)和氨基甲酸叔丁基酯(304mg，2.59mmol)以及XantPhos(40mg，0.07mmol)在甲苯(1mL)和DMF(1mL)中的混合物在110℃加热2小时。混合物用乙酸乙酯稀释，用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(12mg，13％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝367.1。
步骤4：(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(2-羟基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
向(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(12mg，0.03mmol)在乙腈(4mL)中的混合物添加碘三甲基硅烷(0.02mL,0.14mmol)。将混合物在90℃搅拌1小时。该混合物经乙酸乙酯稀释，用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(2-羟基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(9mg，78％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.625,[M+H]+＝353.1，方法＝I；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.26(s,1H),10.47(s,1H),9.25(s,1H),8.17(s,1H),7.23(d,J＝8.8Hz,1H),6.74(s,1H),6.47(s,1H),6.13(d,J＝8.8Hz,1H),5.91(s,2H),5.00-4.76(m,1H),2.27-2.23(m,1H),2.00(s,3H),1.74-1.61(m,1H),1.18-1.12(m,1H)。
实施例36：
(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(5-氟-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(化合物49)
步骤1：(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-氟-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(200mg，0.58mmol)、3-氟-4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(179mg，0.76mmol)、Pd(dppf)2Cl2(52mg，0.07mmol)、K3PO4(123mg，0.58mmol)和乙酸钠(145mg，1.77mmol)、乙腈(20mL)和水(2mL)。混合物用N2鼓泡2分钟，并在90℃搅拌3小时。该混合物经浓缩，并经硅胶快速色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，2:1)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-氟-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(100mg，46％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝374.1。
步骤2：(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(5-氟-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
将Pd2dba3(33mg，0.04mmol)、Cs2CO3(262mg，0.80mmol)、(±)-顺式-N-[8-氯-6-(5-氟-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(100mg，0.27mmol)和氨基甲酸叔丁基酯(313mg，2.68mmol)以及XantPhos(41mg，0.07mmol)在甲苯(1mL)和DMF(1mL)中的混合物在110℃加热2小时。该混合物经乙酸乙酯稀释，用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(5-氟-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(18mg，19％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.422,[M+H]+＝355.1，方法＝D；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.25(s,1H),8.39(d,J＝1.2Hz,1H),8.34(s,1H),8.30(s,1H),7.01(s,1H),6.68(d,J＝1.6Hz,1H),4.99-4.78(m,1H),2.31(d,J＝2.0Hz,3H),2.18-2.13(m,1H),1.87-1.77(m,1H),1.26-1.21(m,1H)。
实施例37：
(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(化合物50)
步骤1：(±)-顺式-N-[8-氯-6-(3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
向密封管中添加顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(300mg，0.87mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(214mg，1.05mmol)、Pd(dppf)2Cl2(78mg，0.11mmol)、乙酸钠(281mg，2.65mmol)、K3PO4(184mg，0.87mmol)、乙腈(10mL)和水(1mL)。用N2鼓泡混合物2分钟，并在90℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并经硅胶快速色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，1:1)，得到顺式-N-[8-氯-6-(3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(200mg，67％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝342.1。
步骤2：(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
将Pd2dba3(66mg，0.07mmol)、Cs2CO3(529mg，1.62mmol)、顺式-N-[8-氯-6-(3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(185mg，0.54mmol)和氨基甲酸叔丁基酯(634mg，5.41mmol)、Xantphos(83mg，0.14mmol)在甲苯(1mL)和DMF(1mL)中的混合物在110℃加热2小时。该混合物经乙酸乙酯稀释，用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经反相制备型HPLC提纯，得到顺式-N-[8-氨基-6-(3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(20mg，11％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.273,[M+H]+＝323.0，方法＝A；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.23(s,1H),8.89(d,J＝1.6Hz,1H),8.56(dd,J＝1.6,4.8Hz,1H),8.37(s,1H),8.21-8.18(m,1H),7.56(dd,J＝4.8,8.0Hz,1H),7.34(s,1H),7.01(d,J＝1.2Hz,1H),4.99-4.79(m,1H),2.20-2.13(m,1H),1.88-1.78(m,1H),1.27-1.19(m,1H)。
实施例38：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物51)
步骤1：(±)-反式-N-[8-氯-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(150mg，0.43mmol)、3-甲基吡啶-4-硼酸(70mg，0.51mmol)、Pd(dppf)2Cl2(39mg，0.05mmol)和Na2CO3(138mg，1.3mmol)、1,4-二噁烷(10mL)和水(1mL)。用N2鼓泡混合物2分钟，并随后在微波反应器中，在120℃加热1小时。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(乙酸乙酯/石油醚，1:1)，得到反式-N-[8-氯-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(70mg，45％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝363.1。
步骤2：(±)-反式-N-[8-氨基-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-反式-N-[8-氯-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(60mg，0.17mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(157mg，1.35mmol)、Pd2(dba)3(31mg，0.03mmol)、NaOtBu(47mg，0.49mmol)、tBuBrettPhos(19mg，0.04mmol)和1-甲基-2-吡咯烷酮(5mL)。将该混合物在110℃搅拌2小时。该混合物经乙酸乙酯稀释，用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。该粗产物经制备型TLC(乙酸乙酯)和反相制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(3mg，5％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.338,[M+H]+＝344.2，方法＝D；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.26(s,1H),8.47(s,1H),8.41(d,J＝5.2Hz,1H),8.30(s,1H),7.35(d,J＝5.2Hz,1H),7.00(s,1H),6.69(d,J＝1.2Hz,1H),2.64-2.63(m,1H),2.34(s,3H),2.12-2.10(m,1H),1.60-1.53(m,2H)。
实施例39：
(±)-反式-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物52)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺
向8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(800mg，2.48mmol)在二氯甲烷(10mL)和吡啶(0.6mL,7.44mmol)中的溶液中添加(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酰氯(830mg，6.41mmol)。将该混合物在25℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并重新悬浮于水(10mL)中。该混合物经乙酸乙酯萃取(50mLx3)。有机层经盐水洗涤(50mL)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。该粗产物悬浮于100ml的石油醚和10ml的乙酸乙酯中，并随后过滤，得到(±)-反式-N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(800mg，78％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝416.0。
步骤2：(±)-反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-反式-N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(400mg，0.96mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(253mg，1.15mmol)、Pd(dppf)2Cl2(84mg，0.12mmol)和Na2CO3(255mg，2.41mmol)、四氢呋喃(20mL)和水(8mL)。用N2鼓泡混合物2分钟，并在65℃搅拌3小时。随后添加水(50mL)。混合物经乙酸乙酯萃取(50mLx3)。合并的有机萃取物用盐水洗涤(50mL)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经硅胶快速色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，1:1)，得到(±)-反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(220mg，60％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝381.1。
步骤3：(±)-反式-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将Pd2dba3(96mg，0.11mmol)、Cs2CO3(513mg，1.58mmol)、反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，0.53mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(615mg，5.25mmol)和XantPhos(121mg，0.21mmol)在甲苯(6mL)和DMF(6mL)中的混合物在130℃加热过夜。该混合物经乙酸乙酯稀释，用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(20mg，10.5％产率)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.330,[M+H]+＝362.1，方法＝A；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.32(s,1H),8.47(d,J＝5.2Hz,1H),8.41(s,1H),8.33(s,1H),7.42(d,J＝5.2Hz,1H),6.99(d,J＝6.4Hz,1H),2.65-2.61(m,1H),2.30(s,3H),2.14-2.09(m,1H),1.61-1.52(m,2H)。
实施例40：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(5-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噁唑-6-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物54)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-6-(3-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噁唑-6-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在N2下，将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(90mg，0.26mmol)、Pd(dppf)Cl2(18mg，0.03mmol)、K2CO3(70mg，0.51mmol)、3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3-苯并噁唑-2-酮(101mg，0.26mmol)、水(0.2mL)和1,4-二噁烷(10mL)的混合物在100℃搅拌4小时。该混合物经浓缩并经硅胶柱色谱提纯(30％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-[3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-2-氧代-1,3-苯并噁唑-6-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(90mg，62％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝539.2。
步骤2：(±)-3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)-6-(3-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噁唑-6-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
向密封管中添加反式-N-[8-氯-6-[3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-2-氧代-1,3-苯并噁唑-6-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(75mg，0.14mmol)、Pd2(dba)3(25mg，0.03mmol)、t-BuONa(27mg，0.28mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(326mg，2.78mmol)和1,4-二噁烷(4mL)。将混合物在90℃搅拌1小时。该混合物经浓缩，且残余物经硅胶柱色谱提纯(0-50％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到(±)-N-[3-[[反式-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-[3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-2-氧代-1,3-苯并噁唑-6-基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，70％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝620.3。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(5-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噁唑-6-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(±)-N-[3-[[反式-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-[3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-2-氧代-1,3-苯并噁唑-6-基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(20mg)、TFA(0.5mL)和三氟甲磺酸(1mL)的混合物在25℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并用甲醇中的NH3(7M)碱化。所得残余物经反相制备型HPLC提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％甲酸)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(5-甲基-2-氧代-3H-1,3-苯并噁唑-6-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(4mg，31％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.669,[M+H]+＝400.1，方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.14(s,1H),9.36(s,1H),8.26(s,1H),7.18(s,1H),7.06(s,1H),6.89(s,1H),6.61(s,1H),6.35(s,2H),2.83-2.78(m,1H),2.30(s,3H),2.21-2.16(m,1H),1.66-1.62(m,1H),1.51-1.46(m,1H)。
实施例41：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(2-乙基-5-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物55)
步骤1：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(2-乙基-5-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在N2下，将(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(150mg，0.5mmol),5-乙基吡咯烷-2-酮(56mg，0.5mmol)、Pd2(dba)3(45mg，0.05mmol)、Cs2CO3(324mg，1.0mmol)、Xantphos(58mg，0.1mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在100℃搅拌16小时。该混合物经浓缩并残余物经硅胶柱色谱提纯(0-100％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-[2-乙基-5-氧代-吡咯烷-1-基]-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(120mg，64％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝376.1。
步骤2：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(2-乙基-5-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在N2下，将(±)-顺式-N-[8-氯-6-(2-乙基-5-氧代-吡咯烷-1-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(100mg，0.27mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(311mg，2.66mmol)、tert-BuBrettphos(51mg，0.108mmol)、Pd2(dba)3(47mg，0.054mmol)和t-BuONa(51mg，0.53mmol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(1mL)中的混合物在110℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并经硅胶柱色谱提纯(0-100％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(2-乙基-5-氧代-吡咯烷-1-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(6mg,6.3％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.625,[M+H]+＝356.7，方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.15(s,1H),8.26(s,1H),7.07-7.04(m,1H),6.85-6.84(m,1H),5.00-4.78(m,1H),4.43-4.35(m,1H),2.67-2.54(m,2H),2.43-2.34(m,1H),2.20-2.10(m,1H),1.97-1.69(m,3H),1.55-1.47(m,1H),1.26-1.17(m,1H),0.91(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例42：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(6-乙氧基-4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物56)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-乙基吡啶-3-基)-2,7-萘啶-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
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将(±)-反式-N-[8-氯-6-(6-乙氧基-4-乙基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.24mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(555mg，4.74mmol)、t-BuBrettphos(46mg，0.1mmol)、Pd2(dba)3(43mg，0.05mmol)和t-BuONa(45mg，0.48mmol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(4mL)中的混合物在110℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并经硅胶柱色谱提纯(0-100％在石油醚中的乙酸乙酯)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(6-乙氧基-4-乙基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(6mg，6.3％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.956,[M+H]+＝402.2，方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.24(s,1H),8.26(s,1H),7.94(s,1H),6.95(s,1H),6.76(s,1H),6.67(d,J＝1.6Hz,1H),4.35(q,J＝6.8Hz,2H),2.69-2.63(m,3H),2.14-2.09(m,1H),1.61-1.53(m,2H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H),1.12(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例43：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(1,2-二甲基-1H-咪唑-5-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物57)
步骤1：1,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-咪唑
在手套箱中，压力管中装有[Ir(OMe)(COD)]2(105mg，0.16mmol)、THF(5mL)和频哪醇硼烷(1.1mL,7.8mmol)。在室温搅拌反应混合物10分钟，并向其添加4,4-二-叔丁基联吡啶(42mg，0.16mmol)。将反应在室温继续搅拌10分钟。添加1,2-二甲基咪唑(500mg，5.2mmol)的THF(5mL)溶液。在室温搅拌混合物16小时。随后在真空中浓缩该混合物。残余物经己烷洗涤(10mLx4)并浓缩，得到1,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)咪唑(1g,52％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝223.2。
步骤2：(±)-反式-N-(8-氨基-6-氯-2,7-萘啶-3-基)-2-甲基环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(220mg，0.63mmol)、1,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)咪唑(385mg，1.73mmol)、Pd(dppf)Cl2(101mg，0.14mmol)和Na2CO3(202mg，1.91mmol)、1,4-二噁烷(10mL)和水(1mL)。用N2鼓泡混合物2分钟并在100℃搅拌2.5小时。该混合物经浓缩并经硅胶快速色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，1:1至0:100)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(2,3-二甲基咪唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(250mg，97％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝366.1。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(1,2-二甲基-1H-咪唑-5-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向密封管中添加氨基甲酸叔丁基酯(768mg，6.56mmol)、(±)-反式-N-[8-氯-6-(2,3-二甲基咪唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(240mg，0.66mmol)、Pd2(dba)3(150mg，0.16mmol)、Cs2CO3(700mg，2.15mmol)、Xantphos(100mg，17mmol)和1-甲基-2-吡咯烷酮(15mL)。将该混合物在130℃搅拌2小时。在真空中浓缩反应混合物，并经柱色谱提纯(BOSTOM ODS 40g柱，用在乙腈中的10mM NH4HCO3由100:0至1:5洗脱)，得到该粗产物(100mg)。该粗产物再次经制备型TLC提纯(硅胶，二氯甲烷/甲醇，10:1)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(2,3-二甲基咪唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(10mg，4％产率)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.532,[M+H]+＝346.8，方法＝H；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ：9.19(s,1H),8.27(s,1H),7.06(s,1H),6.98(s,1H),7.76(d,J＝1.6Hz,1H),3.66(s,3H),2.67-2.60(m,1H),2.45(s,3H),2.13-2.04(m,1H),1.63-1.50(m,2H)。
实施例44：
(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(化合物59)
步骤1：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(3-甲基吡啶-4-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(200mg，0.58mmol)、3-甲基吡啶-4-硼酸(95mg，0.70mmol)、Pd(dppf)Cl2(52mg，0.07mmol)、K3PO4(122mg，0.58mmol)、乙酸钠(185mg，1.75mmol)、乙腈(20mL)和水(2mL)。在N2下，将混合物在90℃搅拌3小时。该混合物经浓缩并经硅胶快速色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，2:3)，得到(±)-顺式-N-[8-氯-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(140mg，67％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝356.1。
步骤2：(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺
在密封管中，将(±)-顺式-N-[8-氯-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(130mg，0.37mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(428mg，3.65mmol)、Pd2dba3(66mg，0.07mmol)、Xantphos(84mg，0.15mmol)和Cs2CO3(357mg，1.1mmol)在甲苯(3mL)和DMF(3mL)中的混合物在110℃加热16小时。反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物用石油醚和乙酸乙酯洗涤，得到粗产物，其经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(25mg，20％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.605,[M+H]+＝337.1，方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.25(s,1H),8.48(s,1H),8.43(d,J＝4.8Hz,1H),8.33(s,1H),7.36(d,J＝4.8Hz,1H),7.02(s,1H),6.69(d,J＝1.2Hz,1H),4.99-4.79(m,1H),2.35(s,3H),2.20-2.12(m,1H),1.87-1.77(m,1H),1.27-1.18(m,1H)。
实施例45：
(±)-((反式)-N-(8-氨基-6-(4-(1,1-二氟乙基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物60)
步骤1：4-(1,1-二氟乙基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶
在氩气下，将3-溴-4-(1,1-二氟乙基)吡啶(500mg，2.25mmol)、双(频哪醇合)二硼(857mg，3.37mmol)、PdCl2dppf(164mg，0.22mmol)和乙酸钾(662mg，6.76mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在100℃加热16小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得到标题化合物，其为黄色油状物(105mg，17％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝270.2。
步骤2：(±)-(反式)-N-(8-氯-6-(4-(1,1-二氟乙基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在氩气下，将反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(108mg，0.31mmol)、4-(1,1-二氟乙基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(100mg，0.37mmol)、Pd(PPh3)4(36mg，0.03mmol)、乙酸钾(90mg，0.92mmol)在1,4-二噁烷(4mL)和水(1mL)中的混合物在90℃加热4小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝4:1至石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得到标题化合物，其为白色固体(80mg，61％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝413.1。
步骤3：(±)-反式-2-氰基-N-(6-(4-(1,1-二氟乙基)吡啶-3-基)-8-(二苯基亚甲基氨基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
在氩气下，将(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-(1,1-二氟乙基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(70mg，0.17mmol)、二苯甲酮亚胺(92mg，0.51mmol)、Pd2(dba)3(31mg，0.03mmol)、Xantphos(10mg，0.02mmol)、Cs2CO3(165mg，0.51mmol)在DMF(0.5mL)和甲苯(0.5mL)中的混合物在130℃加热3小时。将反应经乙酸乙酯稀释，并用盐水洗涤。分离有机层，干燥(NaSO4)并浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝4:1至石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(25mg，23.6％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝558.2。
步骤4：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-(1,1-二氟乙基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在N2下，将(±)-(反式)-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-[4-(1,1-二氟乙基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(25mg，0.04mmol)和TFA(0.5mL,6.71mmol)在二氯甲烷(2mL)和两滴水中的混合物在室温搅拌2小时。将反应浓缩至干燥。残余物溶于甲醇(0.5mL)并用饱和NaHCO3调节pH至7-8。该混合物直接经反相制备型HPLC提纯(洗脱液：5％-95％甲醇和水)，得到标题化合物，其为黄色固体(14.2mg，81％产率)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.75,[M+H]+＝394.2，方法＝B。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.13(s,1H),9.35(s,1H),8.75(d,J＝5.2Hz,1H),8.51(s,1H),8.21(s,1H),7.64(d,J＝5.6Hz,1H),6.87(s,1H),6.53(s,1H),6.41(s,2H),2.77-2.50(m,1H),2.14-2.10(m,1H),1.77(t,J＝19.2Hz,1H),1.61-1.58(m,1H),1.44-1.43(m,1H)。
实施例46：
(±)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(吗啉-3-基)乙酰胺(化合物61)
步骤1：8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺
将6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(2000mg，7.77mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(2042mg，9.32mmol)、Pd(dppf)Cl2(284mg，0.39mmol)和Na2CO3(2058mg，19.42mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(2mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。将反应浓缩。残余物经硅胶快速柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，2:1至1:4)，得到8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(1.3g，52％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝270.1。
步骤2：(±)-3-(2-(8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-2-氧代乙基)吗啉-4-甲酸叔丁基酯
向8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(130mg，0.48mmol)和2-(4-叔丁氧基羰基吗啉-3-基)乙酸(142mg，0.58mmol)在吡啶(2mL)中的溶液中添加氯氧化磷(369mg，2.4mmol)。将所得混合物在25℃搅拌1小时。该混合物经浓缩经硅胶快速柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，3:1至1:2)，得到(±)-3-[2-[[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-2-氧代-乙基]吗啉-4-甲酸叔丁基酯(130mg，48％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝497.2。
步骤3：(±)-3-(2-(8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-2-氧代乙基)吗啉-4-甲酸叔丁基酯
将(±)-氨基甲酸叔丁基酯(259mg，2.21mmol)、叔丁氧基钠(234mg，2.43mmol)、3-[2-[[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-2-氧代-乙基]吗啉-4-甲酸叔丁基酯(110mg，0.22mmol)、Pd2(dba)3(20mg，0.02mmol)和Brettphos(24mg，0.04mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。反应经浓缩并经硅胶快速柱色谱提纯(石油醚:乙酸乙酯，3:1至1:3)，得到(±)-3-[2-[[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-2-氧代-乙基]吗啉-4-甲酸叔丁基酯(36mg，23％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝578.3。
步骤4：(±)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(吗啉-3-基)乙酰胺
将(±)-3-[2-[[8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-2-氧代-乙基]吗啉-4-甲酸叔丁基酯(36mg，0.06mmol)在0.5mL的4M在1,4-二噁烷中的HCl中的混合物搅拌1小时。反应经浓缩并经反相HPLC提纯(在水中的乙腈10-47/0.05％氨)，得到(±)-N-[8-氨基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-吗啉-3-基-乙酰胺(7.1mg，30.2％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.490,[M+H]+＝378.2，方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.62(s,1H),9.30(s,1H),8.45(d,J＝4.8Hz,1H),8.41(s,1H),8.29(s,1H),7.35(d,J＝4.8Hz,1H),6.92(s,1H),6.56(s,1H),6.33(s,2H),3.71-3.63(m,2H),3.22-3.20(m,1H),3.12-3.10(m,2H),2.78-2.75(m,2H),2.41-2.40(m,2H),2.30(s,3H)。
实施例47：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-甲基异噻唑-5-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物62)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-6-(4-甲基异噻唑-5-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-8-氯-3-(2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基硼酸(240mg，0.76mmol)、5-溴-4-甲基-异噻唑(162mg，0.91mmol)、Pd(dppf)Cl2(28mg，0.04mmol)和Na2CO3(161mg，1.52mmol)在1,4-二噁烷(4mL)和水(0.4mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。浓缩该混合物。残余物经硅胶快速柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，5:1至1:5)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-甲基异噻唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(190mg，48％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝369.0。
步骤2：(±)-反式-2-氰基-N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4-甲基异噻唑-5-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-甲基异噻唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(90mg，0.24mmol)、二苯甲酮亚胺(88mg，0.49mmol)、Pd2(dba)3(45mg，0.05mmol)、Xantphos(56mg，0.10mmol)和Cs2CO3(161mg，0.49mmol)在DMF(2mL)和甲苯(2mL)中的混合物在130℃搅拌3小时。然后将反应冷却至室温并用水稀释(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(20mLx2)。合并的有机萃取物在真空中浓缩。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，3:1至1:2)，得到(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-甲基异噻唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(36mg，20％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝514.2。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-甲基异噻唑-5-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-甲基异噻唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(36mg，0.05mmol)在乙腈(3mL)中的溶液中添加1滴TFA和1滴水。搅拌所得溶液20分钟。反应溶液经浓缩并经反相制备型HPLC提纯(在水中的乙腈10-47/0.05％氨)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(4-甲基异噻唑-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(8mg，47％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.759,[M+H]+＝350.1，方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.34(s,1H),8.47(s,1H),8.28(s,1H),7.09(s,1H),6.74(d,J＝1.6Hz,1H),6.52(s,2H),6.08(d,J＝1.6Hz,1H),2.78-2.74(m,1H),2.40(s,3H),2.17-2.12(m,1H),1.62-1.60(m,1H),1.46-1.42(m,1H)。
实施例48：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-[6-(二氟甲氧基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物63)
步骤1：5-溴-2-(二氟甲氧基)-4-乙基-吡啶
将5-溴-4-乙基-吡啶-2-醇(1.0g，4.9mmol)、碳酸铯(2.4g，7.4mmol)和氯二氟乙酸钠(760mg，5.0mmol)在DMF(20mL)中的混合物在100℃搅拌3小时。用水稀释(30mL)冷却后的混合物，并用乙醚萃取(25mL)。有机相用水洗涤然后用盐水洗涤，干燥(Na2SO4),并浓缩。主要的异构体O-烷基化的产物经硅胶快速色谱分离(0-10％在己烷中的乙酸乙酯)，得到标题化合物，(130mg，8.5％产率)，其为无色液体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝253.1。
步骤2：2-(二氟甲氧基)-4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶
在氩气气氛下，双(频哪醇合)二硼烷(220mg，0.9mmol)、乙酸钾(100.0mg，1.0mmol)和Pd(dppf)Cl2(40mg，0.05mmol)依次添加至5-溴-2-(二氟甲氧基)-4-乙基-吡啶(110mg，0.4mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中。将反应混合物在100℃搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物。残余物经硅胶柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚，0-100％产率)，得到2-(二氟甲氧基)-4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(150mg，63％产率)，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝300.1。
步骤3：(±)-反式-N-[8-氯-6-[6-(二氟甲氧基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.3mmol)、Pd(PPh3)4(35mg，0.03mmol)和K3PO4(120mg，0.6mmol)的混合物依次添加至2-(二氟甲氧基)-4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(105mg，0.4mmol)在1,4-二噁烷(6mL)和水(0.6mL)中的溶液中。将反应混合物在100℃搅拌2小时。在真空中浓缩反应混合物。残余物在硅胶柱色谱上提纯(甲醇/二氯甲烷，1:3)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-[6-(二氟甲氧基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，53％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝443.1。
步骤4：(±)-反式-N-[8-氨基-6-[6-(二氟甲氧基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在N2下，将氨基甲酸叔丁基酯(265.0mg，2.3mmol)、(±)-反式-N-[8-氯-6-[6-(二氟甲氧基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.23mmol)、Pd2(dba)3(40mg，0.04mmol)、NaOtBu(55.0mg，0.6mmol)和tBu-Brettphos(49.0mg，0.09mmol)在二氯甲烷(5mL)中的混合物在120℃搅拌1小时。在真空中浓缩反应混合物，且残余物经硅胶快速色谱(乙酸乙酯/石油醚，0至50％产率)和反相制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-[6-(二氟甲氧基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(3mg，3.1％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.950,[M+H]+＝424.2，方法＝F；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ：9.26(s,1H),8.28(s,1H),8.06(s,1H),7.58(t,J＝73.2Hz,1H),6.97(s,2H),6.67(s,1H),2.71(q,J＝7.6Hz,2H),2.68-2.65(m,1H),2.14-2.09(m,1H),1.63-1.52(m,2H),1.15(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例49：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-[4-(2-羟基乙基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷
步骤1：2-(3-溴-4-吡啶基)乙酸甲基酯
向冰冷却中的3-溴-4-甲基吡啶(1.0g，5.8mmol)和碳酸二甲基酯(950.0mg，10.6mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中添加LiHMDS(1.0M，在THF中，9mL，9mmol)。在0℃搅拌5小时后，另外添加LiHMDS(1.0M，在THF中，6mL，6mmol)。在室温搅拌混合物2小时。反应混合物通过添加饱和NH4Cl水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取。干燥有机层，过滤并浓缩。该粗产物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯＝1:3)，得到2-(3-溴-4-吡啶基)乙酸甲基酯(1.2g，85％产率)，其为无色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝231.1。
步骤2：2-(3-溴-4-吡啶基)乙醇
向冰冷却中的2-(3-溴-4-吡啶基)乙酸甲基酯(800mg，3.5mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中分批添加NaBH4(264.0mg，6.9mmol)。在室温搅拌混合物2小时。该混合物经浓缩并经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，1:1)，得到2-(3-溴-4-吡啶基)乙醇(550mg，78％产率)，其为无色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝203.1。
步骤3：2-[3-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-4-吡啶基]乙醇
将2-(3-溴-4-吡啶基)乙醇(300mg，1.5mmol)、Pd(dppf)Cl2(120mg，0.16mmol)、乙酸钠(300mg，3.7mmol)和K3PO4(600mg，2.8mmol)依次添加至8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉-3-胺(800mg，2.6mmol)在乙腈(15mL)和水(2mL)中的溶液中。将反应混合物在90℃搅拌4小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶快速柱色谱提纯(30％在二氯甲烷中的甲醇)，得到2-[3-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-4-吡啶基]乙醇(400mg，84％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝300.1。
步骤4：6-[4-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基]-3-吡啶基]-8-氯-异喹啉-3-胺
将2-[3-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-4-吡啶基]乙醇(400.0mg，1.3mmol)、叔丁基二甲基氯硅烷(2.0g，13.3mmol)和三乙胺(3.0g，29.7mmol)在二氯甲烷(50mL)中的混合物回流过夜。浓缩反应混合物。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，2:1至1:1)，得到6-[4-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基]-3-吡啶基]-8-氯-异喹啉-3-胺(350mg，62％产率)，其为浅棕色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝415.2。
步骤5：(±)-反式-N-[6-[4-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基]-3-吡啶基]-8-氯-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在0℃，将草酰氯(350mg，2.8mmol)逐滴添加至反式-2-氰基环丙烷甲酸(200mg，1.8mmol)在二氯甲烷(1mL)中的悬浮液中，并将该混合物在0℃搅拌1小时。在室温浓缩该混合物，以除去二氯甲烷和过量的草酰氯。残余物悬浮于二氯甲烷(1mL)中，并在0℃将其逐滴添加至6-[4-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基]-3-吡啶基]-8-氯-异喹啉-3-胺(360mg，0.87mmol)、吡啶(5.1mL,63.2mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物中。将反应混合物在0℃继续搅拌0.5小时。反应混合物经二氯甲烷稀释(100mL)并用H2O洗涤(50mL)。分离有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶柱色谱提纯(石油醚/乙酸乙酯，1:1至1:2)，得到(±)-反式-N-[6-[4-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基]-3-吡啶基]-8-氯-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(350mg，63％产率)，其为浅棕色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝508.1。
步骤6：(±)-N-[6-[4-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基]-3-吡啶基]-3-[[反式-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
在N2下，将(±)-反式-N-[6-[4-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基]-3-吡啶基]-8-氯-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(330mg，0.65mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.5g，12.8mmol)、Pd2(dba)3(120mg，0.1300mmol)、Brettphos(130mg，0.24mmol)和t-BuONa(170mg，1.7mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。在真空中浓缩反应混合物。残余物经硅胶柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚，1:1)，得到(±)-N-[6-[4-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基]-3-吡啶基]-3-[[反式-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(220mg，52％产率)，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝588.1。
步骤7：(±)-反式-N-[8-氨基-6-[4-(2-羟基乙基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-N-[6-[4-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基]-3-吡啶基]-3-[[反式-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.34mmol)和TFA(10mL,134.6mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物在室温搅拌2小时。将反应经浓缩并经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-[4-(2-羟基乙基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(82mg，65％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.409，[M+H]+＝374.2，方法＝G；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.26(s,1H),8.47(d,J＝5.2Hz,1H),8.40(s,1H),8.30(s,1H),7.49(d,J＝5.2Hz,1H),7.01(s,1H),6.70(d,J＝1.2Hz,1H),3.70(t,J＝6.8Hz,2H),2.94(t,J＝6.8Hz,2H),2.70-2.61(m,1H),2.17-2.06(m,1H),1.66-1.49(m,2H)。
实施例50：
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷-1-甲酰胺(化合物66)
步骤1：(1S,2S)-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷-1-甲酰胺
将(1S,2S)-N-(6-溴-8-氯异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷-1-甲酰胺(130mg，0.381mmol)、双(频哪醇合)二硼(148mg，0.572mmol)、乙酸钾(112mg，1.14mmol)和Pd(dppf)Cl2(28.2mg，0.038mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物在微波中、在130℃加热20分钟，得到(8-氯-3-((1S,2S)-2-氟环丙烷-1-甲酰氨基)异喹啉-6-基)硼酸。LCMS(ESI)：[M+H]+＝309.0。
向反应混合物添加3-溴-4-乙基吡啶(106mg，0.574mmol)和水(0.5ml,30mmol)。将反应在微波中、在140℃加热2小时。有机层经硅胶柱色谱提纯(0至7％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(1S,2S)-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷-1-甲酰胺(120mg，84.8％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝370.0。
步骤2：(6-(4-乙基吡啶-3-基)-3-((1S,2S)-2-氟环丙烷-1-甲酰氨基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将(1S,2S)-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷-1-甲酰胺(120mg，0.325mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(194mg，1.622mmol)、Pd2(dba)3(15mg，0.016mmol)、Brettphos(9.168mg，0.016mmol)和tBuONa(47mg，0.0.487mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在氩气下在70℃搅拌5小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(0至8％在二氯甲烷中的甲醇)，得到标题化合物(74mg，50.6％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝451.0。
步骤3：(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷-1-甲酰胺
将(6-(4-乙基吡啶-3-基)-3-((1S,2S)-2-氟环丙烷-1-甲酰氨基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(74mg，0.164mmol)在二氯甲烷(4mL)和2,2,2-三氟乙酸(0.5mL)中的混合物在25℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯，得到(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷-1-甲酰胺(9.3mg，15.8％产率)，其为固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝2.808,[M+H]+＝351.1，方法＝T。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.80(s,1H),9.32(s,1H),8.49(d,J＝5.1Hz,1H),8.39–8.35(m,1H),8.27(s,1H),7.38(d,J＝5.2Hz,1H),6.88(s,1H),6.53(d,J＝1.5Hz,1H),6.34(s,2H),5.04–4.81(m,1H),2.62(q,J＝7.6Hz,2H),2.26(dq,J＝14.1,7.1Hz,1H),1.73–1.59(m,1H),1.17(ddt,J＝13.1,9.8,6.7Hz,1H),1.13–1.06(m,3H)。
实施例51：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物67)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺
将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(150mg，0.428mmol)、双(频哪醇合)二硼(166mg，0.642mmol)、乙酸钾(126mg，1.28mmol)和Pd(dppf)Cl2(31.6mg，0.043mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物在微波中、在130℃加热45分钟，得到(8-氯-3-((反式-2-氰基环丙烷-1-甲酰氨基)异喹啉-6-基)硼酸。LCMS(ESI)：[M+H]+＝316.0。
随后添加3-溴-4-乙基吡啶(143mg，0.77mmol)和在水中的碳酸钠(1mol/L，2.14ml,2.139mmol)。反应混合物在微波中、在80℃加热70分钟。有机层经硅胶柱色谱提纯(0至7％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(±)-反式-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(141mg，87.4％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝377.0。
步骤2：(±)-(3-((反式-2-氰基环丙烷-1-甲酰氨基)-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将(±)-反式-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(141mg，0.374mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(224mg，1.871mmol)、Pd2(dba)3(34.2mg，0.037mmol)、Brettphos(21.14mg，0.037mmol)和tBuONa(71.9mg，0.748mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在120℃搅拌2小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(0至8％在二氯甲烷中的甲醇)，得到标题化合物(150mg，88％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝458.0。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺
将(±)-(3-((反式-2-氰基环丙烷-1-甲酰氨基)-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(150mg，0.327mmol)在二氯甲烷(3mL)和2,2,2-三氟乙酸(0.3mL)中的混合物在25℃搅拌1.5小时。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯，得到反式-N-(8-氨基-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(16.8mg，14.3％产率)，其为固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝2.999,[M+H]+＝358.1，方法＝T。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.10(s,1H),9.34(s,1H),8.49(d,J＝5.1Hz,1H),8.40–8.34(m,1H),8.23(s,1H),7.41–7.35(m,1H),6.88(s,1H),6.55(d,J＝1.5Hz,1H),6.38(s,2H),2.80–2.72(m,1H),2.61(q,J＝7.5Hz,2H),2.13(ddd,J＝9.3,6.1,4.3Hz,1H),1.59(ddd,J＝8.6,6.0,4.4Hz,1H),1.43(ddd,J＝9.3,5.9,4.4Hz,1H),1.09(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例52：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物68)
步骤1：(±)-顺式-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺
将(±)-顺式-N-(6-溴-8-氯异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(125mg，0.357mmol)、双(频哪醇合)二硼(139mg，0.535mmol)、乙酸钾(105mg，1.07mmol)和Pd(dppf)Cl2(26.4mg，0.0357mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在微波中、在130℃加热45分钟，得到(8-氯-3-((顺式-2-氰基环丙烷-1-甲酰氨基)异喹啉-6-基)硼酸。LCMS(ESI)：[M+H]+＝316.0。
然后添加3-溴-4-乙基吡啶(127mg，0.685mmol)和在水(1.71ml,1.71mmol)中的碳酸钠(1M)。反应混合物在微波中、在80℃加热2小时。有机层经硅胶柱色谱提纯(0至10％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(±)-(顺式-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(81.5mg，63.2％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝377.0。
步骤2：(±)-(3-((顺式-2-氰基环丙烷-1-甲酰氨基)-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将(±)-(顺式-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(81.5mg，0.216mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(129mg，1.08mmol)、Pd2(dba)3(9.90mg，0.0108mmol)、Brettphos(6.11mg，0.0108mmol)和tBuONa(31.2mg，0.324mmol)在1,4-二噁烷(4.5mL)中的混合物在90℃搅拌2.5小时。该混合物经二氯甲烷萃取(30mLx2)。有机萃取物用水(20mL)和盐水(20ml)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物(96mg，97.0％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝458.0。
步骤3：(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺
将(±)-(3-((顺式-2-氰基环丙烷-1-甲酰氨基)-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(96mg，0.210mmol)在二氯甲烷(3mL)和2,2,2-三氟乙酸(0.3mL)中的混合物在25℃搅拌50分钟。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-(顺式-N-(8-氨基-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(3.6mg，4.5％产率)，其为固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝2.745,[M+H]+＝358.2，方法＝T。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.06(d,J＝20.0Hz,1H),9.34(s,1H),8.49(d,J＝5.1Hz,1H),8.37(d,J＝0.5Hz,1H),8.30(s,1H),7.38(dt,J＝9.0,4.5Hz,1H),6.92(s,1H),6.55(d,J＝1.5Hz,1H),6.37(s,2H),2.62(dt,J＝15.0,7.5Hz,3H),2.30–2.22(m,1H),1.51–1.40(m,2H),1.09(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例53：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物69)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺
将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(125mg，0.571mmol)、双(频哪醇合)二硼(222mg，0.856mmol)、乙酸钾(168mg，1.711mmol)和Pd(dppf)Cl2(42.2mg，0.0571mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物在微波中、在130℃加热45分钟，得到(±)-(8-氯-3-((反式-2-氰基环丙烷-1-甲酰氨基)异喹啉-6-基)硼酸。LCMS(ESI)：[M+H]+＝316.0。
随后添加5-溴-4-甲基吡啶甲腈(168mg，0.856mmol)和在水(2.85ml,2.852mmol)中的碳酸钠(1mol/L)。反应混合物在微波中、在90℃加热55分钟。有机层经硅胶柱色谱提纯(0.5至9％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(±)-(反式-N-(8-氯-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(187mg，86.5％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝388.0。
步骤2：(±)-(6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)-3-((反式-2-氰基环丙烷-1-甲酰氨基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将(±)-(反式-N-(8-氯-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(160mg，0.413mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(247mg，2.063mmol)、Pd2(dba)3(37.8mg，0.041mmol)、Brettphos(23.3mg，0.041mmol)和tBuONa(59.5mg，0.619mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在80℃搅拌1.5小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(0.5至8％在二氯甲烷中的甲醇)，得到标题化合物(45mg，23.3％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝469.0。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺
将(±)-(6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)-3-((反式-2-氰基环丙烷-1-甲酰氨基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(45mg，0.096mmol)和TFA(0.3mL)在二氯甲烷(4mL)中的混合物在25℃搅拌1.5小时。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N-(8-氨基-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(16.5mg，45.2％产率)，其为固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝4.401,[M+H]+＝369.1，方法＝T。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.06(d,J＝20.0Hz,1H),9.34(s,1H),8.49(d,J＝5.1Hz,1H),8.37(d,J＝0.5Hz,1H),8.30(s,1H),7.38(dt,J＝9.0,4.5Hz,1H),6.92(s,1H),6.55(d,J＝1.5Hz,1H),6.37(s,2H),2.62(dt,J＝15.0,7.5Hz,3H),2.30–2.22(m,1H),1.51–1.40(m,2H),1.09(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例54：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物70)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺
将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(98mg，0.279mmol)、双(频哪醇合)二硼(109mg，0.419mmol)、乙酸钾(82.3mg，0.839mmol)和Pd(dppf)Cl2(20.7mg，0.028mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物在微波中、在130℃加热45分钟，得到(±)-(8-氯-3-(反式-2-氰基环丙烷-1-甲酰氨基)异喹啉-6-基)硼酸。LCMS(ESI)：[M+H]+＝316.0。
随后添加7-溴-8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪(93.9mg，0.419mmol)和在水(1.398ml,1.398mmol)中的碳酸钠(1M)。反应混合物在微波中、在90℃加热55分钟。有机层经硅胶柱色谱提纯(0.5至9％在二氯甲烷中的甲醇)，得到(±)-反式-N-(8-氯-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(73mg，55.3％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝415.0。
步骤2：(±)-(3-(反式-2-氰基环丙烷-1-甲酰氨基)-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将(±)-反式-N-(8-氯-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(67mg，0.0.1615mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(96.5mg，0.807mmol)、Pd2(dba)3(14.8mg，0.016mmol)、Brettphos(9.12mg，0.016mmol)和tBuONa(23.3mg，0.242mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物在80℃搅拌1.5小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(0.5至8％在二氯甲烷中的甲醇)，得到标题化合物(19mg，23.7％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝496.0。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺
将(±)-(3-(反式-2-氰基环丙烷-1-甲酰氨基)-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(19mg，0.038mmol)在二氯甲烷(4mL)和TFA(0.3mL)中的混合物在25℃搅拌1小时。该混合物经浓缩并经反相制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N-(8-氨基-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(4.2mg，28％产率)，其为固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝3.847,[M+H]+＝396.1，方法＝T。1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.14(s,1H),9.40(s,1H),9.17(t,J＝1.5Hz,1H),9.14(d,J＝1.8Hz,1H),9.07(s,1H),8.29(s,1H),7.08(s,1H),6.71(d,J＝1.5Hz,1H),6.47(s,2H),2.82–2.73(m,4H),2.14(ddd,J＝9.3,6.1,4.3Hz,1H),1.59(ddd,J＝8.6,6.0,4.5Hz,1H),1.43(ddd,J＝9.2,5.9,4.4Hz,1H)。
实施例55：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物109)
步骤1：N-(2,4-二甲氧基苄基)-4-碘-5-甲基吡啶-2-胺
在氩气气体下，将2-氟-4-碘-5-甲基吡啶(1.0g，4.2mmol)、2,4-二甲氧基苄基胺(2.0g，12.6mmol)和DIEA(1.6g，12.6mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在110℃加热16小时。将反应浓缩至干燥。该粗产物经快速色谱提纯(Biotage,20g柱，PE/EA＝5:1)，得到N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-碘-5-甲基-吡啶-2-胺(1.0g，61％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝250.0。
步骤2：4-碘-5-甲基吡啶-2-胺
向N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-碘-5-甲基-吡啶-2-胺(1.0g，2.6mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物添加2,2,2-三氟乙酸(5mL)。然后将混合物搅拌过夜。随后浓缩该混合物。添加7N NH3的MeOH溶液，以调节混合物至pH为8，并浓缩该混合物。该粗产物经快速色谱提纯(PE/EA＝2:1)，得到4-碘-5-甲基-吡啶-2-胺(590mg，97％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝235.7。
步骤3：7-碘-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶
将4-碘-5-甲基-吡啶-2-胺(1.0g，4.3mmol)、氯乙醛(0.42mL,6.41mmol)和NaHCO3(430mg，5.13mmol)在乙醇(4mL)和水(1mL)中的混合物加热至100℃并搅拌过夜。浓缩该混合物。残余物经快速柱色谱提纯(DCM/MeOH＝20/1)，得到产物7-碘-6-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶(1.0g，90％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝259.7。
步骤4：8-氯-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)异喹啉-3-胺
在N2下，将7-碘-6-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶(150mg，0.58mmol)、8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉-3-胺(442mg，1.45mmol)、Pd(dppf)Cl2(42mg，0.06mmol)、Na2CO3(183mg，1.74mmol),和水(1mL)在四氢呋喃(10mL)中的溶液加热至65℃持续3小时。添加水(10mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mLx2)。有机层用水(20mLx3)和盐水(20mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。该粗产物经快速色谱提纯(DCM/MeOH＝15:1)，得到8-氯-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)异喹啉-3-胺(180mg，77％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝309.7。
步骤5：(±)-反式-N-(8-氯-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在0℃，向(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酸(120mg，1.08mmol)在二氯甲烷(5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.02mL)中的溶液中添加乙二酰氯(274mg，2.16mmol)。将反应在25℃搅拌2小时。浓缩该混合物，得到粗产物(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酰氯(130mg，1mmol，93％产率)，其为黄色油状物。向8-氯-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)异喹啉-3-胺(180mg，0.58mmol)在二氯甲烷(15mL)和吡啶(0.14mL,1.75mmol)中的溶液中添加(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酰氯(113mg，0.87mmol)。将该混合物在25℃搅拌30分钟。浓缩该混合物并添加水(10mL)。随后添加1N HCl，以调节该混合物至pH为6。该混合物经DCM萃取(10mLx3)。有机层经盐水洗涤(20mLx1)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。该粗产物经快速色谱提纯(PE/EA＝2:1)，得到产物反式-N-[8-氯-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，85％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝402.7。
步骤6：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在密封管中，将Pd2(dba)3(45mg，0.05mmol)、Xantphos(57mg，0.1mmol)、Cs2CO3(243mg，0.75mmol)、(±)-反式-N-[8-氯-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.25mmol)和氨基甲酸叔丁基酯(291mg，2.49mmol)在甲苯(0.5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的混合物加热至130℃持续16小时。反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经PE和乙酸乙酯洗涤，得到粗产物。该粗产物经制备型HPLC提纯(柱Xbridge21.2*250mm c18，10μm，流动相A：水(10mMol/LNH4HCO3)B：ACN)，得到产物(±)-反式-N-[8-氨基-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(5mg，5.3％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.646，[M+H]+＝383.7。方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.26(s,1H),8.37(s,1H),8.30(s,1H),7.82(s,1H),7.59(s,1H),7.45(s,1H),7.04(s,1H),6.74(s,1H),2.66-2.64(m,1H),2.27(s,3H),2.15-2.10(m,1H),1.61-1.57(m,2H)。
实施例56：
5-(8-氨基-3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-N,1-二甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(化合物110)
步骤1：5-溴-N,1-二甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺
将5-溴-1-甲基-吡唑-3-甲酸乙基酯(300mg，1.29mmol)和在MeOH中的甲胺(10mL,12.87mmol)的混合物加热至80℃并搅拌过夜。将反应溶液浓缩，得到产物5-溴-N,1-二甲基-吡唑-3-甲酰胺(280mg，99％产率)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝218.2。
步骤2：5-(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)-N,1-二甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺
向密封管中添加5-溴-N,1-二甲基-吡唑-3-甲酰胺(200mg，0.92mmol)、8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉-3-胺(698mg，2.29mmol)、Pd(dppf)Cl2(67mg，0.09mmol)、K3PO4(193mg，0.92mmol)和NaOAc(225mg，2.75mmol)、乙腈(5mL)、水(1mL)。用N2鼓泡混合物2分钟，并在90℃搅拌3小时。浓缩该混合物。该粗产物经快速色谱提纯(DCM/MeOH＝15:1)，得到5-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-N,1-二甲基-吡唑-3-甲酰胺(290mg，81％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝316.7。
步骤3：(±)-5-(8-氯-3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-N,1-二甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺
在0℃，向反式-2-氰基环丙烷甲酸(250mg，2.25mmol)在二氯甲烷(5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.02mL)中的溶液中添加乙二酰氯(571mg，4.5mmol)。将反应在25℃搅拌2小时。通过旋蒸浓缩该混合物，得到粗品(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酰氯(290mg，99％产率)，其为黄色油状物。向5-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-N,1-二甲基-吡唑-3-甲酰胺(230mg，0.73mmol)在二氯甲烷(15mL)和吡啶(0.18mL,2.19mmol)中的溶液中添加(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酰氯(141mg，1.09mmol)。将该混合物在25℃搅拌30分钟。浓缩该混合物，并添加水(10mL)。添加1N HCl以调节混合物至pH为6。该混合物经DCM萃取(10mLx3)。有机层经盐水洗涤(20mLx1)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。该粗产物经快速色谱提纯(DCM/MeOH＝15:1)，得到产物(±)-5-[8-氯-3-[[反式-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-N,1-二甲基-吡唑-3-甲酰胺(280mg，94％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝409.7。
步骤4：5-(8-氨基-3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-N,1-二甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺
在密封管中，将Pd2dba3(44mg，0.05mmol)、Xantphos(56mg，0.1mmol)、Cs2CO3(239mg，0.73mmol)、5-[8-氯-3-[[反式-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-N,1-二甲基-吡唑-3-甲酰胺(100mg，0.24mmol)和氨基甲酸叔丁基酯(286mg，2.45mmol)在甲苯(0.5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的混合物加热至130℃持续16小时。反应混合物冷却至室温，用EA稀释，用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物经PE和乙酸乙酯洗涤，得到粗产物，其经制备型HPLC提纯(柱Xbridge 21.2*250mm c18,10μm,流动相A：水(10mMol/L NH4HCO3)B：CAN，得到产物(±)-5-[8-氨基-3-[[反式-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-N,1-二甲基-吡唑-3-甲酰胺(17mg，17.8％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.543,[M+H]+＝390.7。方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.25(s,1H),8.32(s,1H),7.15(s,1H),6.84(s,1H),6.80(d,J＝1.2Hz,1H),3.99(s,3H),2.93(s,3H),2.65-2.62(m,1H),2.15-2.10(m,1H),1.62-1.48(m,2H)。
实施例57：
(±)-反式-N-[8-氨基-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物113)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(300mg，0.68mmol)、Pd(PPh3)4(75mg，0.06mmol)和Zn(CN)2(44mg，0.38mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(14mL)中的混合物在130℃搅拌3小时。混合物经制备型反相HPLC提纯(C-18，乙腈/水+0.05％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-氯-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(190mg，24％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝388.1。
步骤2：(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在氩气下，将(±)-反式-N-[8-氯-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(190mg，0.16mmol)、Pd2(dba)3(28mg，0.03mmol)、Xantphos(37mg，0.06mmol)、Cs2CO3(107mg，0.33mmol)和二苯甲酮亚胺(100mg，0.55mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(7mL)和甲苯(7mL)中的混合物在130℃搅拌2.5小时。添加EtOAc(200mL)。混合物用H2O(3x50mL)和盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发。残余物经制备型反相HPLC提纯(C-18,乙腈/水+0.05％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(36mg，17％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝533.3。
步骤3：(±)-反式-N-[8-氨基-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(36mg，0.04mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)在乙腈(10mL)和水(10mL)中的混合物在25℃搅拌2小时。反应混合物经NH4OH(水溶液，37％)中和至pH＝7-8。该混合物经浓缩并经制备型反相HPLC提纯(C-18，乙腈/水+0.05％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(11mg，72％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.593，[M+H]+＝369.1，方法＝G。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.33(s,1H),9.57(s,1H),8.52(d,J＝5.2Hz,1H),8.40(s,1H),8.27(s,1H),7.44(s,2H),7.40(d,J＝5.2Hz,1H),6.93(s,1H),2.78-2.75(m,1H),2.21(s,3H),2.19-2.14(m,1H),1.64-1.60(m,1H),1.46-1.42(m,1H)。
实施例58：
反式-N-[8-氨基-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物115)
步骤1：7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺
在氩气下将7-溴-8-氯-6-碘-异喹啉-3-胺(3.6g，9.39mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(2.5g，11.41mmol)、Pd(PPh3)4(750mg，0.65mmol)、K2CO3(3.8g，27.54mmol)在1,4-二噁烷(160mL)、水(40mL)中的混合物在70℃搅拌23小时。反应混合物冷却至室温，添加乙酸乙酯(500mL)，且混合物用盐水洗涤(100mL)。分离有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶柱色谱提纯(PE:EA＝1:2至EA，当PE/EA 1/2时Rf＝0.5)，得到7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(2.9g，89％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝348.0。
步骤2：(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基- 环丙烷甲酰胺
在0℃，将(COCl)2(3.0g，23.62mmol)逐滴添加至(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酸(1.2g，10.8mmol)的悬浮液中，并将该混合物在0℃继续搅拌1小时。在室温蒸发混合物，以除去未反应的(COCl)2。残余物悬浮于DCM(5mL)中，并在0℃将其逐滴添加至7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(2.9g，8.32mmol)和吡啶(10mL,123.64mmol)在二氯甲烷(50mL)中的混合物中。将反应混合物在0℃继续搅拌0.5小时。向反应混合物添加DCM(100mL)，将其用H2O洗涤(50mL)。分离有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶柱色谱提纯(PE:EA＝1:1至1:2，当PE/EA 1/1时Rf＝0.4)，得到(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(2.85g，78％产率)，其为浅棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝441.0。
步骤3：(±)-反式-N-[8-氯-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰 基-环丙烷甲酰胺
在密封管中，在氩气下将(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，0.45mmol)、三甲基环三硼氧烷(250mg，1.99mmol)、PdCl2dppf(60mg，0.08mmol)和K2CO3(200mg，1.45mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(2.5mL)中的混合物在80℃搅拌18小时。反应混合物冷却至室温，添加乙酸乙酯(100mL)并用盐水洗涤(30mL)。分离有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶柱色谱提纯(PE：EA＝2:1至3:2至1:1)，得到(±)-反式-N-[8-氯-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(50mg，29％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝377.1。
步骤4：(±)-N-[3-[(反式-2-氰基环丙烷羰基)氨基]-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将(±)-反式-N-[8-氯-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(25mg，0.07mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(75mg，0.64mmol)、Pd2dba3(20mg，0.02mmol)、Brettphos(20mg，0.04mmol)和t-BuONa(2M，在THF中，0.08mL,0.16mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。反应混合物冷却至室温。向残余物添加乙酸乙酯(30mL)，并用饱和NH4Cl(10mL)洗涤。分离乙酸乙酯层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经制备型TLC提纯(EA:PE＝3:2)，得到(±)-N-[3-[(反式-2-氰基环丙烷羰基)氨基]-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(7mg，23.1％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝458.2。
步骤5：(±)-反式-N-[8-氨基-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-N-[3-[(反式-2-氰基环丙烷羰基)氨基]-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(7mg，0.02mmol)在2,2,2-三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(2mL)中的混合物在25℃搅拌2小时。蒸发反应混合物。残余物溶于MeOH(1mL)。添加7N NH3/MeOH直至pH为9-10，并随后经快速柱色谱提纯(C18，NH4HCO3/MeOH/H2O)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(3mg，54.9％产率)，其为浅棕色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.70，[M+H]+＝358.1，方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.31(s,1H),8.45(d,J＝5.2Hz,1H),8.28(s,1H),8.22(s,1H),7.42(d,J＝5.2Hz,1H),6.90(s,1H),2.66-2.62(m,1H),2.16(s,3H),2.13-2.08(m,1H),1.98(s,3H),1.61-1.52(m,2H)。
实施例59：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-[4-(二甲基氨基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物116)
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步骤1：(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
向[8-氯-3-[(反式-2-氰基环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]硼酸和(±)-反式-N-[8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(5mL,约0.43mmol)反应混合物添加3-溴-N,N-二甲基-吡啶-4-胺(150mg，0.75mmol)、PdCl2dppf(50mg，0.07mmol)、K2CO3(150mg，1.09mmol)和水(1.5mL)。随后将反应在80℃、在氩气下搅拌1小时。反应混合物冷却至室温，添加乙酸乙酯(40mL)并用盐水洗涤(15mL)。分离有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶柱色谱提纯(PE:DCM:EA＝1:1:1至1:1:0)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(80mg，48％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝392.1。
步骤2：(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-[4-(二甲基氨基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在氩气下，将(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(80mg，0.20mmol)、二苯甲酮亚胺(210mg，1.16mmol)、Pd2dba3(40mg，0.04mmol)、Xantphos(50mg，0.09mmol)和Cs2CO3(120mg，0.37mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)和甲苯(2mL)中的混合物在130℃搅拌4小时。反应混合物冷却至室温，并添加乙酸乙酯(50mL)。混合物用盐水洗涤(15mL)。分离乙酸乙酯层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经二氧化硅色谱提纯(PE:EA＝1:1至1:3)，得到(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-[4-(二甲基氨基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(45mg，41％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝537.2。
步骤3：(±)-反式-N-[8-氨基-6-[4-(二甲基氨基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2- 氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-[4-(二甲基氨基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(45mg，0.08mmol)在2,2,2-三氟乙酸(1mL)、二氯甲烷(2mL)和水(0.5mL)中的混合物在25℃搅拌20分钟。将残余物溶于MeOH(1mL)。向混合物中添加7NNH3/MeOH直至pH为9-10。随后浓缩该混合物。残余物经制备型TLC提纯(EA:MeOH＝20:1)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-[4-(二甲基氨基)-3-吡啶基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(18.8mg，60％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.64,[M+H]+＝373.2，方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.21(s,1H),8.26(s,1H),8.17(d,J＝6.0Hz,1H),8.11(s,1H),7.07(s,1H),6.93(d,J＝6.0Hz,1H),6.80(d,J＝1.2Hz,1H),2.77(s,6H),2.65-2.62(m,1H),2.14-2.09(m,1H),1.62-1.52(m,2H)。
实施例60：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物117)
步骤1：2-(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)-1-甲基吡啶-4(1H)-酮
向密封管中添加(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)硼酸(371mg，1.67mmol)、2-氯-1-甲基-吡啶-4-酮(200mg，1.39mmol)、Pd(dppf)Cl2(101mg，0.14mmol)、K3PO4(293mg，1.39mmol)、NaOAc(342mg，4.18mmol)、乙腈(20mL)和水(2mL)。用N2鼓泡混合物2分钟，并在90℃搅拌3小时。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(DCM/MeOH＝20/1)，得到2-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-1-甲基-吡啶-4-酮(220mg，55％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M-56]+＝286.0。
步骤2：(±)-反式-N-(8-氯-6-(1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)异喹啉-3- 基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向2-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-1-甲基-吡啶-4-酮(210mg，0.74mmol)和吡啶(0.18mL,2.2mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中添加(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酰氯(238mg，1.84mmol)。将该混合物在25℃搅拌30分钟。随后浓缩该混合物并经快速色谱提纯(PE/EA＝2:1)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-甲基-4-氧代-2-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(160mg，40％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M-56]+＝379.1。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-2-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-甲基-4-氧代-2-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(70mg，0.18mmol)、Xantphos(42mg，0.07mmol)、Pd2dba3(33mg，0.04mmol)和Cs2CO3(180mg，0.55mmol)在DMF(3mL)和甲苯(3mL)中的混合物加热至130℃持续2小时。该混合物经浓缩并经制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(1-甲基-4-氧代-2-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(11.4mg，17％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.310,[M+H]+＝360.1，方法＝G；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),9.37(s,1H),8.27(s,1H),7.74(d,J＝7.6Hz,1H),6.99(s,1H),6.54-6.51(m,3H),6.14(dd,J＝2.8,7.6Hz,1H),6.02(d,J＝2.8Hz,1H),3.41(s,3H),2.77-2.73(m,1H),2.17-2.12(m,1H),1.62-1.57(m,1H),1.45-1.41(m,1H)。
实施例61：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(3-(羟基甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物118)
步骤1：4-溴-3-(乙氧基甲基)-5-甲基-1H-吡唑
将5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙基酯(4.0g，25.95mmol)和NBS(5.08g，28.54mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的混合物在室温搅拌16小时。将混合物溶于EtOAc(200mL)，将有机物用饱和盐水溶液洗涤。然后分离有机物并干燥(Na2SO4)，随后浓缩至干燥。粗品随后经快速柱色谱提纯(PE/EA＝3/2)，得到4-溴-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙基酯(4.8g，79％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝234.9。
步骤2：4-溴-3-(乙氧基甲基)-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑
向搅拌中的TsOH-H2O(490mg，2.57mmol)和4-溴-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙基酯(3.0g，12.87mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中添加3,4-二氢-2h-吡喃(2.17g，25.74mmol)。在室温搅拌混合物4小时。该混合物经浓缩并经快速柱色谱提纯(PE/EA＝4/1)，得到产物4-溴-5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-3-甲酸乙基酯(3.4g，83％产率)，其为黄色油状物。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ5.52(dd,J＝2.8,9.6Hz,1H),4.38(q,J＝7.2Hz,2H),4.01-3.96(m,1H),3.77-3.71(m,1H),2.42-2.35(m,4H),2.14-2.10(m,1H),1.99-1.94(m,1H),1.82-1.62(m,3H),1.40(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤3：8-氯-6-(3-(乙氧基甲基)-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-胺
向密封管中添加(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)硼酸(252mg，1.14mmol)、4-溴-5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-3-甲酸乙基酯(300mg，0.95mmol)、Pd(dppf)2Cl2(69mg，0.09mmol)、K3PO4(199mg，0.95mmol)、NaOAc(232mg，2.84mmol)、乙腈(5mL)和水(0.5mL)。用N2鼓泡混合物20分钟，并在90℃搅拌3小时。将反应经浓缩并经制备型TLC提纯(PE/EA＝1:1)，得到4-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-3-甲酸乙基酯(320mg，75％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝415.1。
步骤4：(4-(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)甲醇
在0℃，向4-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-3-甲酸乙基酯(310mg，0.75mmol)在甲醇(15mL)中的混合物添加NaBH4(282mg，7.47mmol)。将该混合物在室温搅拌5小时，添加水(2mL)以淬灭反应。该混合物经浓缩并添加DCM:MeOH的溶液(10:1,10mL)。将混合物过滤，且滤液经浓缩，并经制备型TLC提纯(100％EA)，得到[4-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-3-基]甲醇(300mg，75％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝373.1。
步骤5：6-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)-8-氯异喹啉-3-胺
将[4-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-3-基]甲醇(300mg，0.56mmol)、叔丁基二甲基氯硅烷(849mg，5.64mmol)和TEA(1267mg，12.55mmol)在二氯甲烷(50mL)中的混合物回流过夜。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(PE/EA＝2/1)，得到6-[3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基]-8-氯-异喹啉-3-胺(210mg，72％产率)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝488.2。
步骤6：反式-N-(6-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-5-甲基-1-(四氢- 2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)-8-氯异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向6-[3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基]-8-氯-异喹啉-3-胺(200mg，0.41mmol)在二氯甲烷(15mL)和吡啶(0.3mL)中的溶液中添加(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酰氯(132mg，1.03mmol)。将该混合物在25℃搅拌30分钟。该混合物经浓缩并经制备型TLC提纯(PE/EA＝3:1)，得到(±)-反式-N-[6-[3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基]-8-氯-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(150mg，60％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝580.3。
步骤7：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[6-[3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基]-8-氯-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(140mg，0.24mmol)、Xantphos(55mg，0.10mmol)、Pd2dba3(44mg，0.05mmol)和Cs2CO3(235mg，0.72mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)/甲苯(1.5mL)中的混合物在145℃加热3小时。该混合物经浓缩并无需进一步提纯用于下一步骤中。LCMS(ESI)：[M+H]+＝561.3。
步骤8：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(3-(羟基甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-反式-N-[8-氨基-6-[3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-5-甲基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(60mg，0.11mmol)、二氯甲烷(5mL)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)并将该混合物在室温搅拌2小时。该混合物经浓缩并经制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-[3-(羟基甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(9mg，23％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.268,[M+H]+＝363.1，方法＝A；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.19(s,1H),8.26(s,1H),7.12(s,1H),6.85(s,1H),4.63(s,2H),2.67-2.62(m,1H),2.38(s,3H),2.14-2.09(m,1H),1.61-1.53(m,2H)。
实施例62：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(羟基甲基)环丙烷甲酰胺(化合物119)
步骤1：(±)-反式-2-(羟基甲基)环丙烷甲酸
向小瓶中添加(±)-反式-2-(羟基甲基)环丙烷甲酸甲基酯(500mg，3.84mmol)、水(5mL)、四氢呋喃(5mL)、甲醇(5mL)和NaOH(700mg，17.5mmol)，并将混合物在40℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并用2N HCl酸化至pH＝3～4。产物经乙酸乙酯萃取(50mLx2)，用盐水洗涤(20mL)，在Na2SO4上干燥，过滤并在真空中浓缩，得到(±)-反式-2-(羟基甲基)环丙烷甲酸(390mg，87％产率)，其为淡黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：3.40(dd,J＝5.2,11.6Hz,1H),3.22(dd,J＝5.6,11.6Hz,1H),1.41-1.35(m,2H),0.91-0.85(m,1H),0.75-0.70(m,1H)。
步骤2：(±)-反式-2-(乙酰氧基甲基)环丙烷甲酸
向小瓶中添加(±)-反式-2-(羟基甲基)环丙烷甲酸(390mg，3.36mmol)、二氯甲烷(10mL)和乙酰氯(1mL,14.14mmol)，并将混合物在40℃搅拌2小时。将混合物在真空中浓缩，得到(±)-反式-2-(乙酰氧基甲基)环丙烷甲酸(530mg，90％产率)，其为淡黄色油状物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.20(s,1H),3.99(dd,J＝6.0,11.6Hz,1H),3.83(dd,J＝7.2,11.6Hz,1H),2.02(s,3H),1.59-1.50(m,2H),1.04-0.99(m,1H),0.92-0.87(m,1H)。
步骤3：(±)-反式-2-(氯羰基)环丙基)乙酸甲酯
向小瓶中添加(±)-反式-2-(乙酰氧基甲基)环丙烷甲酸(530mg，3.02mmol)和DCM(30mL)，并冷却至0℃。逐滴添加乙二酰氯(0.5mL,6.03mmol)并随后添加N,N-二甲基甲酰胺(0.01mL,0.13mmol)。将该混合物在20℃搅拌2小时。在真空中浓缩反应混合物，得到粗产物，其直接用于下一步骤中。
步骤4：(±)-反式-2-(8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基甲酰基)环丙基)甲基乙酸酯
向小瓶中添加8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(200mg，0.74mmol)、TEA(0.8mL,5.69mmol)和DCM(5mL)并随后逐滴添加(±)-反式-2-氯羰基环丙基)甲基乙酸酯(650mg，2.94mmol)在DCM(5mL)中的溶液。将该混合物在室温搅拌2小时。该混合物经浓缩并经快速柱色谱提纯(PE/EA，由1:1至0:100)，得到(±)-反式-[2-[[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基甲酰基]环丙基]甲基乙酸酯(220mg，72％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝410.1。
步骤5：(±)-反式-N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(羟基甲基)环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-[反式-2-[[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基甲酰基]环丙基]甲基乙酸酯(210mg，0.51mmol)、Xantphos(150mg，0.2600mmol)、Pd2(dba)3(150mg，0.16mmol)、Cs2CO3(500mg，1.54mmol)、二苯甲酮亚胺(600mg，3.31mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)。用N2鼓泡混合物2分钟并随后在130℃搅拌4小时。在100℃浓缩该混合物以除去所有有机溶剂。添加甲醇(20mL)并在50℃将反应搅拌1小时。随后过滤该混合物并在真空中浓缩。残余物经柱色谱提纯(PE/EA，由1:1至0:100)，得到(±)-反式-N-[8-二苯亚甲基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-(羟基甲基)环丙烷甲酰胺(151mg，50％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝513.3。
步骤6：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(羟基甲基)环丙烷甲酰胺
/>
向小瓶中添加(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-(羟基甲基)环丙烷甲酰胺(150mg，0.25mmol)和2N HCl(5mL,10mmol)。将该混合物在室温搅拌2小时。随后用NaHCO3水溶液将混合物的pH调节至pH为7。产物随后经DCM/MeOH＝10:1萃取(100mLx2)。有机萃取物在真空中浓缩，并经combiflash提纯(DCM/MEOH，由30:1至15:1)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-(羟基甲基)环丙烷甲酰胺(74mg，82％产率)，其为黄色固体。单一对映异构体进一步经手性SFC提纯。外消旋物的LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.302,[M+H]+＝349.2，方法＝B；外消旋物的1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.24(s,1H),8.40(d,J＝5.6Hz,1H),8.39(s,1H),8.28(s,1H),7.39(d,J＝5.2Hz,1H),6.98(s,1H),6.67(d,J＝1.6Hz,1H),3.64(dd,J＝6.0,11.2Hz,1H),3.48(dd,J＝6.8,11.2Hz,1H),2.37(s,3H),1.92-1.85(m,1H),1.77-1.66(m,1H),1.28-1.21(m,1H),0.97-0.90(m,1H)。
实施例63：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物122)
步骤1：(±)-反式-N-[8-氯-6-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(350mg，1mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑(300mg，1.14mmol)、Pd(dppf)Cl2(70mg，0.1mmol)、磷酸钾(3H2O)(660mg，2.48mmol)在1,4-二噁烷(9mL)和水(1.5mL)中的混合物在100℃搅拌3小时。将反应浓缩至干燥。粗残余物随后经硅胶柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚1/13-1/1)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(230mg，51％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝406.1。
步骤2：(±)-反式-N-[8-氯-6-[1-四氢吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-氯-6-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，0.49mmol)和3,4-二氢-2h-吡喃(2.0mL)在三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(15mL)中的溶液加热至回流过夜。将反应浓缩至干燥，且粗残余物随后经柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚1/5-1/3)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-[1-四氢吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(230mg，95％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝490.1。
步骤3：(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-[1-四氢吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在130℃、在惰性气氛下，将(±)-反式-N-[8-氯-6-[1-四氢吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.2mmol)、二苯甲酮亚胺(182mg，1.0mmol)、Xantphos(58mg，0.1mmol)、Pd2(dba)3(46.0mg，0.05mmol)和Cs2CO3(170.0mg，0.52mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)和干燥甲苯(3.0mL)中的混合物搅拌4小时。将反应浓缩以除去甲苯，并将残余物溶于乙酸乙酯(15ml)。用20mL盐水洗涤该有机混合物。然后分离有机物，干燥(Na2SO4)并浓缩至干燥。该粗产物随后经柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚，1/3-1/1)，得到(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-[1-四氢吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，57％产率)，其为黄色液体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝635.2。
步骤4：(±)-反式-N-[8-氨基-6-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-[1-四氢吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.11mmol)在甲醇(2mL)和4M HCl(2mL,8mmol)中的溶液在室温搅拌1小时。添加过量的碳酸氢钠。然后过滤该混合物。滤液经浓缩并经反相色谱提纯(在水中的甲醇60％/0.1％ HCl)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(8mg，18.2％产率)，其为红色固体(HCl盐)。LCMS(ESI)：[M+H]+＝387.1,RT(分钟)＝1.69，方法＝B；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.27(s,1H),8.07(s,1H),8.04(s,1H),7.19(s,1H),6.92(s,1H),2.63-2.61(m,1H),2.20-2.15(m,1H),1.65-1.59(m,2H)。
实施例64：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物123)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在氩气下在100℃，将(±)-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]硼酸(400mg，1.27mmol)、7-溴-8-甲基-吡啶并[2,3-b]吡嗪(285mg，1.27mmol)、PdCl2dppf(93mg，0.13mmol)和K2CO3(525mg，3.8mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的混合物加热3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(PE:EA＝2:1至PE:EA＝1:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(300mg，38％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝415.2。
步骤2：(±)-3-((反式)-2-氰基环丙烷甲酰氨基)-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡 嗪-7-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将(±)-反式-N-[8-氯-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(290mg，0.7mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(245mg，2.09mmol)、Pd3(dba)2(64mg，0.07mmol)、Brettphos(38mg，0.07mmol)和Cs2CO3(684mg，2.1mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃加热2小时。将反应浓缩至干燥。残余物经二氧化硅柱色谱提纯(PE:EA＝1:1至PE:EA＝1:2)，得到标题化合物，其为黄色固体(190mg，49％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝496.3。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3- 基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在N2下，将(±)-N-[3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(190mg，0.38mmol)和TFA(1mL,0.38mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物在室温搅拌。将反应浓缩至干燥并将残余物溶于EtOAc(10mL)，并用饱和NaHCO3将pH调节至7-8。然后分离有机物，干燥(NaSO4)并浓缩至干燥。残余物经二氧化硅柱色谱提纯(EA:PE＝1:1至EA:DCM＝2:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(49.5mg，32％产率)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.65,[M+H]+＝396.2，方法＝B。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(s,1H),9.40(s,1H),9.17(d,J＝1.6Hz,1H),9.13(d,J＝1.6Hz,1H),9.06(s,1H),8.29(s,1H),7.08(s,1H),6.71(s,1H),6.48(s,2H),2.79-2.75(m,3H),2.15 -2.11(m,1H),1.61 -1.59(m,1H),1.44-1.42(m,1H)。
实施例65：
(反式)-N-(8-氨基-6-((R)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物124)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-6-((R)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在氩气下，将反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(400mg，1.14mmol)、(4R)-4-甲基噁唑烷-2-酮(140mg，1.38mmol)、Pd3(dba)2(105mg，0.11mmol)、Xantphos(66mg，0.11mmol)和K3PO4(726mg，3.42mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(PE:EA＝2:1至PE:EA＝1:1)，最终得到标题化合物，其为黄色固体(350mg，83％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝371.1。
步骤2：3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)-6-((R)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基) 异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将反式-N-[8-氯-6-[(4R)-4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(340mg，0.92mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(500mg，4.27mmol)、Pd3(dba)2(84mg，0.09mmol)、Brettphos(50mg，0.09mmol)和Cs2CO3(897mg，2.75mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(PE:EA＝2:1至PE:EA＝1:1)，最终得到标题化合物，其为黄色固体(240mg，58％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝452.2。
步骤3：(反式)-N-(8-氨基-6-((R)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)- 2-氰基环丙烷甲酰胺
在氩气下，在室温将N-[3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-[(4R)-4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(240mg，0.53mmol)和TFA(1mL,0.53mmol)在二氯甲烷(4mL)中的混合物搅拌2小时。将反应浓缩至干燥并将残余物溶于EtOAc(10ml)并用饱和NaHCO3调节pH至7-8。然后分离有机物，干燥(Na2SO4)并浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:1至EA:DCM＝2:1)，得到标题产物，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.56,[M+H]+＝352.2，方法＝B。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.04(s,1H),9.21(s,1H),8.15(s,1H),7.00(d,J＝1.6Hz,1H),6.94(d,J＝1.6Hz,1H),6.35(s,2H),4.70 -4.67(m,1H),4.57-4.53(m,1H),4.06-4.03(m,1H),2.75-2.73(m,1H),2.14 -2.10(m,1H),1.60 -1.58(m,1H),1.42-1.38(m,1H),1.28(d,J＝6.0Hz,3H)。
实施例66：
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物125)
步骤1：(1S,2S)-N-(8-氯-6-(2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在氩气下，将5-甲基-2-吡咯烷酮(87mg，0.88mmol)、(1S,2S)-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(250mg，0.73mmol)、Xantphos(43mg，0.07mmol)、Pd2(dba)3(67mg，0.07mmol)和K3PO4(462mg，2.18mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:1至EA:DCM＝2:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(200mg，76％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝362.1。
步骤2：3-((1S,2S)-2-氟环丙烷甲酰氨基)-6-(2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将(1S,2S)-N-[8-氯-6-(2-甲基-5-氧代-吡咯烷-1-基)-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(170mg，0.47mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(550mg，4.69mmol)、Brettphos(53mg，0.1mmol)、Pd2(dba)3(86mg，0.09mmol)和Cs2CO3(460mg，1.41mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶柱色谱提纯(PE:EA＝1:1至PE:EA＝1:2)，得到标题化合物，其为黄色固体(140mg，59％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝443.2。
步骤3：(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氟 环丙烷甲酰胺
将N-[3-[[(1S,2S)-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-(2-甲基-5-氧代-吡咯烷-1-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(140mg，0.32mmol)和TFA(0.5mL,0.32mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物在室温搅拌1小时。将反应浓缩至干燥。残余物溶于EtOAc(10mL)，并用饱和NaHCO3调节pH至7-8。该溶液经浓缩并经硅胶色谱提纯(PE:EA＝1:1至EA)，得到标题化合物，其为黄色固体(78.2mg，72％产率)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.52，[M+H]+＝343.1，方法＝B。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.14(s,1H),8.11(s,1H),7.09(s,1H),6.92(s,1H),4.98(d,J＝3.6Hz,0.5H),4.82-4.81(m,0.5H),4.51(d,J＝6.4Hz,1H),2.72-2.61(m,1H),2.59-2.53(m,1H),2.48-2.41(m,1H),2.16-2.14(m,1H),1.88 -1.78(m,2H),1.28-1.21(m,4H)。
实施例67：
(±)-反式-N-(8-氨基-7-氟-6-((R)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物126)
步骤1：反式-N-(8-氯-7-氟-6-((R)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在氩气下，将反式-N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(330mg，0.79mmol)、(4R)-4-甲基噁唑烷-2-酮(160mg，1.58mmol)、CuI(151mg，0.79mmol)和N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(71mg，0.81mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥，并经硅胶柱色谱提纯(PE:EA＝2:1至PE:EA＝2:1)，得到标题化合物，其为白色固体(290mg，77％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝345.0。
步骤2：3-((反式)-2-氰基环丙烷甲酰氨基)-7-氟-6-((R)-4-甲基-2-氧代噁唑 烷-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将氨基甲酸叔丁基酯(693mg，5.92mmol)、反式-N-[8-氯-7-氟-6-[(4R)-4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(230mg，0.59mmol)、Pd2(dba)3(270mg，0.3mmol)、Brettphos(158mg，0.29mmol)和Cs2CO3(576mg，1.77mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥，并经硅胶柱色谱(PE:EA＝2:1至PE:EA＝1:2)以及制备型HPLC提纯(洗脱液：在水中的5％-95％甲醇和0.8g/L NH4HCO3)，得到标题化合物，其为白色固体(55mg，14％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝470.2。
步骤3：(反式)-N-(8-氨基-7-氟-6-((R)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将N-[3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-[(4R)-4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(55mg，0.12mmol)和TFA(0.5mL,0.12mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物在室温搅拌1小时。反应混合物经制备型HPLC提纯(在水中的5-95％甲醇和0.8g/L NH4HCO3)，得到标题化合物(30.6mg，13.7％产率)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.65,[M+H]+＝370.2，方法＝B。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.14(s,1H),9.39(s,1H),8.22(s,1H),7.05(d,J＝6.4Hz,1H),6.37(s,2H),4.67(t,J＝8.4Hz,1H),4.54-4.52(m,1H),4.06(t,J＝8.0Hz,1H),2.77-2.76(m,1H),2.14-2.12(m,1H),1.60-1.56(m,1H),1.44-1.42(m,1H),1.15(d,J＝6.0Hz,3H)。
实施例68：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物127)
步骤1：反式-N-(8-氯-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在氩气下，将反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(250mg，0.71mmol)、(4S)-4-甲基噁唑烷-2-酮(86mg，0.85mmol)、K3PO4(453mg，2.14mmol)、Xanphos(42mg，0.07mmol)和Pd2(dba)3(66mg，0.07mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥，并经硅胶柱色谱提纯(PE:EA＝4:1至PE:EA＝1:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(180mg，37％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝371.1。
步骤2：3-((反式)-2-氰基环丙烷甲酰氨基)-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气气体下，将(反式)-N-[8-氯-6-[(4S)-4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(330mg，0.89mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(520mg，4.44mmol)、Brettphos(96mg，0.18mmol)、Pd2(dba)3(162mg，0.18mmol)和Cs2CO3(870mg，2.67mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经二氧化硅柱色谱提纯(PE:EA＝2:1至PE:EA＝1:1，在PE/EA 1/1时Rf＝0.4)。最终产物为黄色固体(220mg，51％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝452.2。
步骤3：反式-N-(8-氨基-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2- 氰基环丙烷甲酰胺
将N-[3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-[(4S)-4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(220mg，0.49mmol)和TFA(0.5mL,0.49mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物在室温搅拌1小时。反应混合物经制备型HPLC提纯(在水中的5％-95％甲醇和0.08g/L NH4HCO3)，得到标题化合物，其为黄色固体(64.7mg，37.4％产率)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.52,[M+H]+＝352.1，方法＝B。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),9.20(s,1H),8.15(s,1H),7.00(d,J＝1.6Hz,1H),6.94(d,J＝1.6Hz,1H),6.35(s,2H),4.70-4.67(m,1H),4.57-5.54(m,1H),4.06-4.03(m,1H),2.75-2.72(m,1H),2.14-2.10(m,1H),1.60-1.55(m,1H),1.44-1.40(m,1H),1.28(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例69：
((1S,2S)-N-(8-氨基-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物128)
步骤1：(1S,2S)-N-(8-氯-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺
在氩气下，将(1S,2S)-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氟-环丙烷甲酰胺(200mg，0.58mmol)、(4S)-4-甲基噁唑烷-2-酮(71mg，0.7mmol)、Xantphos(34mg，0.06mmol)、Pd2(dba)3(54mg，0.06mmol)和K3PO4(369mg，1.74mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥，并经硅胶柱色谱提纯(PE:EA＝4:1至PE:EA＝1:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(140mg，58％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝364.1。
步骤2：3-((1S,2S)-2-氟环丙烷甲酰氨基)-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将(1S,2S)-N-[8-氯-6-[(4S)-4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基]-3-异喹啉基]-2-氟-环丙烷甲酰胺(140mg，0.38mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(225mg，1.92mmol)、Pd2(dba)3(70mg，0.08mmol)、Brettphos(40mg，0.07mmol)和Cs2CO3(375mg，1.15mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥，并经二氧化硅柱色谱提纯(PE:EA＝2:1至PE:EA＝1:1)，得到标题化合物，其为白色固体(110mg，58％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝445.2。
步骤3：(1S,2S)-N-(8-氨基-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)- 2-氟环丙烷甲酰胺
将N-[3-[[(1S,2S)-2-氟环丙烷羰基]氨基]-6-[(4S)-4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(110mg，0.25mmol)和TFA(0.5mL,0.25mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物在室温搅拌1小时。用饱和NaHCO3将反应调节pH至7-8。该混合物经制备型HPLC提纯(在水中的5％-95％甲醇和0.8g/L NH4HCO3)，得到标题化合物，其为棕色固体(56.3mg，48.2％产率)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.47,[M+H]+＝345.1，方法＝B。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),9.19(s,1H),8.19(s,1H),7.00(d,J＝2.0Hz,1H),6.93(s,1H),6.32(s,2H),5.02-5.00(m,0.5H),4.84-4.83(m,0.5H),4.72-4.67(m,1H),4.58-4.54(m,1H),4.06-4.03(m,1H),2.26-2.23(m,1H),1.69-1.63(m,1H),1.28(d,J＝6.4Hz,3H),1.17-1.13(m,1H)。
实施例70：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-甲基异噻唑-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
(化合物130)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-6-(4-甲基异噻唑-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在N2下，将(±)-反式-N-[8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，0.5mmol)、3-溴-4-甲基-异噻唑(107mg，0.6mmol)、Pd(dppf)Cl2(73mg，0.1mmol)和K2CO3(138mg，1.0mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(1mL)中的混合物在100℃搅拌16小时。该混合物经浓缩并经快速柱色谱提纯，用0-100％在PE中的乙酸乙酯洗脱，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-甲基异噻唑-3-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，54％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝369.2。
步骤2：(±)-3-((反式-)-2-氰基环丙烷甲酰氨基)-6-(4-甲基异噻唑-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在N2下，将(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-甲基异噻唑-3-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(80mg，0.22mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(508mg，4.34mmol)、Pd2(dba)3(39mg，0.04mmol)和Brettphos(46mg，0.09mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。该混合物经浓缩并残余物经快速柱色谱提纯，用0-50％在PE中的EA洗脱，得到(±)-N-[3-[[(反式-)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-(4-甲基异噻唑-3-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，62％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝450.1。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-甲基异噻唑-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向(±)-N-[3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-(4-甲基异噻唑-3-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(80mg，0.18mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加TFA(2mL)。将该混合物在25℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并用甲醇中的NH3(7M)碱化。该混合物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.05％NH4HCO3)，得到(±)-(反式-)-N-[8-氨基-6-(4-甲基异噻唑-3-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(36mg，58％产率)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.698,[M+H]+＝350.1，方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),9.33(s,1H),8.81(d,J＝0.4Hz,1H),8.29(s,1H),7.20(s,1H),6.97(d,J＝1.2Hz,1H),6.37(s,2H),2.78-2.73(m,1H),2.42(s,3H),2.16-2.12(m,1H),1.62-1.57(m,1H),1.46-1.41(m,1H)。
实施例71：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-((R)-3-羟基-2-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物131)
步骤1：反式-N-(8-氯-6-((R)-3-羟基-2-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(3R)-3-羟基吡咯烷-2-酮(129mg，1.28mmol)、(反式-)-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(300mg，0.86mmol)、Pd2(dba)3(83mg，0.09mmol)、Xantphos(98mg，0.17mmol)和Cs2CO3(556mg，1.71mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在100℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并经快速柱色谱提纯，用0-20％在DCM中的MeOH洗脱，得到反式-N-[8-氯-6-[(3R)-3-羟基-2-氧代-吡咯烷-1-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，47％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝371.1。
步骤2：反式-N-(8-氨基-6-((R)-3-羟基-2-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2- 氰基环丙烷甲酰胺
将反式-N-[8-氯-6-[(3R)-3-羟基-2-氧代-吡咯烷-1-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(110mg，0.3mmol)、Pd2(dba)3(28mg，0.03mmol)、Brettphos(31mg，0.06mmol)、t-BuONa(192mg，0.59mmol)和氨基甲酸叔丁基酯(695mg，5.93mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并经快速柱色谱提纯，用0-20％在DCM中的MeOH洗脱，得到N-[3-[[(反式-)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-[(3R)-3-羟基-2-氧代-吡咯烷-1-基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(62mg，28％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝452.0。
步骤3：反式-N-(8-氨基-6-((R)-3-羟基-2-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向N-[3-[[(反式-)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-[(3R)-3-羟基-2-氧代-吡咯烷-1-基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.11mmol)在二氯甲烷中(3mL)中的溶液中添加TFA(3mL)并将该混合物在25℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并用甲醇中的NH3(7M)碱化，浓缩，并且所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-70/0.1％ NH4HCO3)，得到反式-N-[8-氨基-6-[(3R)-3-羟基-2-氧代-吡咯烷-1-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(2mg，5.1％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.396,[M+H]+＝352.1，方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),9.20(s,1H),8.14(s,1H),7.28(d,J＝1.6Hz,1H),7.05(d,J＝1.6Hz,1H),6.315(s,2H),5.78-5.77(m,1H),4.34-4.28(m,1H),3.82-3.71(m,1H),2.77-2.72(m,1H),2.44-2.33(m,1H),2.15-2.10(m,1H),1.87-1.82(m,1H),1.60-1.56(m,1H),1.44-1.40(m,1H)。
实施例72：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-((S)-3-羟基-2-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物132)
步骤1：反式-N-(8-氯-6-((S)-3-羟基-2-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(3S)-3-羟基吡咯烷-2-酮(216mg，2.14mmol)、反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(500mg，1.43mmol)、Pd2(dba)3(128mg，0.14mmol)、Xantphos(163mg，0.28mmol)和Cs2CO3(929mg，2.86mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在100℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并且残余物经快速柱色谱提纯，用0-20％在DCM中的MeOH洗脱，得到反式-N-[8-氯-6-[(3S)-3-羟基-2-氧代-吡咯烷-1-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(90mg，17％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝371.1。
步骤2：反式-N-(8-氨基-6-((S)-3-羟基-2-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将Pd2(dba)3(23mg，0.02mmol)、Brettphos(26mg，0.05mmol)、t-BuONa(46mg，0.49mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(284mg，2.43mmol)和(反式-)-N-[8-氯-6-[(3S)-3-羟基-2-氧代-吡咯烷-1-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(90mg，0.24mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并残余物经快速柱色谱提纯，用0-100％在PE中的乙酸乙酯洗脱，得到N-[3-[[(反式-)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-[(3S)-3-羟基-2-氧代-吡咯烷-1-基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(52mg，47％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝452.0。
步骤3：反式-N-(8-氨基-6-((S)-3-羟基-2-氧代吡咯烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向N-[3-[[(反式-)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-[(3S)-3-羟基-2-氧代-吡咯烷-1-基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.13mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中添加TFA(3mL)并将该混合物在25℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并用甲醇中的NH3(7M)碱化，浓缩并经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-70/0.1％ NH4HCO3)，得到反式-N-[8-氨基-6-[(3S)-3-羟基-2-氧代-吡咯烷-1-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(3mg，6.4％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.394,[M+H]+＝352.1，方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.04(s,1H),9.20(s,1H),8.14(s,1H),7.28(d,J＝1.6Hz,1H),7.05(d,J＝1.6Hz,1H),6.33(s,2H),5.79-5.78(m,1H),4.34-4.28(m,1H),3.79-3.71(m,1H),2.75-2.73(m,1H),2.42-2.39(m,1H),2.13-2.10(m,1H),1.87-1.82(m,1H),1.61-1.56(m,1H),1.44-1.41(m,1H)。
实施例73：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-(5-异丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物133)
步骤1：4-溴-5-异丙基-1-甲基-吡唑
在0℃，向4-溴-5-异丙基-1H-吡唑(950mg，5.03mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加氢化钠(300mg，7.5mmol)。10分钟后，添加碘甲烷(0.5mL,7.4mmol)。在0℃，将反应混合物搅拌1小时，然后添加40ml饱和盐水。该混合物经乙酸乙酯萃取(30mLx3)。有机物经饱和盐水(2x20mL)洗涤，然后分离并干燥(Na2SO4)。浓缩有机物，得到粗品4-溴-5-异丙基-1-甲基-吡唑(900mg)，其为黄色液体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝203.1。
步骤2：8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉-3-胺
在氩气气氛下，将6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(517mg，2.01mmol)、双(频哪醇合)二硼(600mg，2.36mmol)、Pd(dppf)Cl2(130mg，0.18mmol)和乙酸钾(500mg，5.09mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。将反应浓缩至干燥，并经柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚1/4至1/1)，得到8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉-3-胺(600mg，89％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝305.2。
步骤3：8-氯-6-(5-异丙基-1-甲基-吡唑-4-基)异喹啉-3-胺
在微波反应器中，将4-溴-5-异丙基-1-甲基-吡唑(500mg，2.46mmol)、(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)硼酸(600mg，2.7mmol)、Pd(dppf)Cl2(140mg，0.19mmol)和碳酸钾(700mg，5.07mmol)中的混合物加热至130℃持续1小时。将反应浓缩至干燥，并经柱色谱(乙酸乙酯/石油醚1/3-1/2)、随后制备型HPLC提纯，得到8-氯-6-(5-异丙基-1-甲基-吡唑-4-基)异喹啉-3-胺(90mg，12％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝301.1。
步骤4：(±)-反式-N-[8-氯-6-(5-异丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
向(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酸(113mg，1.02mmol)和1滴DMF在二氯甲烷(10mL)中的混合物添加草酰氯(0.3mL,3.52mmol)。在室温搅拌混合物20分钟。浓缩该混合物以除去过量的草酰氯，且随后添加二氯甲烷(5mL)。随后将该溶液逐滴添加至8-氯-6-(5-异丙基-1-甲基-吡唑-4-基)异喹啉-3-胺(85mg，0.28mmol)和吡啶(0.5mL,6.18mmol)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中。将该混合物在室温搅拌1小时。将反应经浓缩并经柱色谱提纯(乙酸乙酯/二氯甲烷＝1/1)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(5-异丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(110mg,97％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝394.2。
步骤5：(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(5-异丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在氩气气氛下，将含有(±)-反式-N-[8-氯-6-(5-异丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(110mg，0.28mmol)、二苯甲酮亚胺(225mg，1.24mmol)、Xantphos(70mg，0.12mmol)、Pd2(dba)3(57mg，0.06mmol)和Cs2CO3(200mg，0.62mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)和甲苯(4mL)的密封管在130℃搅拌3小时。通过添加40ml盐水将反应淬灭，并用乙酸乙酯萃取该混合物(30mLx3)。有机物用盐水洗涤(2x20mL)并浓缩。残余物随后经柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚1/3-1/1)，得到反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(5-异丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(64mg，27％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝539.3。
步骤6：(±)-反式-N-[8-氨基-6-(5-异丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(5-异丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(64mg,0.08mmol)和浓HCl水溶液(0.1mL,1.2mmol)在甲醇(5mL)中的溶液在室温搅拌30分钟。随后添加三乙胺(0.2mL,1.43mmol)。反应混合物随后经浓缩并经反相色谱提纯(在水中的甲醇0-60/0.1％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(5-异丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(18mg，63％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝375.2,RT(分钟)＝1.72，方法＝F；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.19(s,1H),8.23(s,1H),7.45(s,1H),6.96(s,1H),6.73(d,J＝1.6Hz,1H),3.95(s,3H),3.47-3.40(m,1H),2.67-2.62(m,1H),2.15-2.10(m,1H),1.62-1.52(m,2H),1.36(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例74：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-(2-氧代-1,3-苯并噁唑-3-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物134)
步骤1：(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-羟基苯氨基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在惰性气氛下，将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(400mg，1.14mmol)、2-氨基苯酚(150mg，1.37mmol)、Pd2(dba)3(48mg，0.05mmol)、Cs2CO3(650mg，2mmol)和XantPhos(60mg，0.1mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在100℃搅拌2小时。将反应减压浓缩。残余物随后在硅胶上经柱色谱提纯，经乙酸乙酯/石油醚1/5-1/1洗脱，得到反式-N-[8-氯-6-(2-羟基苯氨基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(420mg，78％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝379.1。
步骤2：(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-氧代-1,3-苯并噁唑-3-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-羟基苯氨基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(400mg，1.06mmol)、1,1'-羰基二咪唑(400mg，2.47mmol)、三乙胺(2.0mL,14.35mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液在室温搅拌2小时。将反应浓缩至干燥，并经硅胶柱色谱提纯(乙酸乙酯/石油醚1/3-1/1)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-氧代-1,3-苯并噁唑-3-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(260mg，52％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝405.1。
步骤3：(±)-N-[3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-(2-氧代-1,3-苯并噁唑-3-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
在氩气气氛下，将(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-氧代-1,3-苯并噁唑-3-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，0.49mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(600mg，5.12mmol)、Brettphos(120mg，0.22mmol)、Pd2(dba)3(100mg，0.11mmol)和Cs2CO3(325mg，1mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。将反应浓缩至干燥，并经硅胶柱色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到(±)-N-[3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-(2-氧代-1,3-苯并噁唑-3-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(62mg，21％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝486.1。
步骤4：(±)-反式-N-[8-氨基-6-(2-氧代-1,3-苯并噁唑-3-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-N-[3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-(2-氧代-1,3-苯并噁唑-3-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(62mg，0.13mmol)在甲醇(2mL)和HCl(4M，在二噁烷中，2mL，8mmol)中的溶液在室温搅拌1小时。反应经添加NaHCO3粉末淬灭，并经制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(2-氧代-1,3-苯并噁唑-3-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(6mg，11.8％产率)，其为红色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝386.1,RT(分钟)＝1.83，方法＝B；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.18(s,1H),9.38(s,1H),8.28(s,1H),7.46(s,1H),7.25-7.22(m,3H),7.16(s,1H),6.82(d,J＝1.2Hz,1H),6.65-6.64(m,2H),2.78-2.76(m,1H),2.17-2.12(m,1H),1.62-1.58(m,1H),1.46-1.41(m,1H)。
实施例75：
1-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(化合物135)
步骤1：1-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)-3-甲基-脲
将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(400mg，1.24mmol)在四氢呋喃(5mL)中的混合物添加至三乙胺(4mL,28.7mmol)和三光气(400mg，1.35mmol)中。在室温搅拌混合物10分钟，然后添加甲胺盐酸盐(940mg，13.92mmol)。在室温搅拌反应混合物1小时。将混合物浓缩至干燥，并经柱色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(1/3-1/1)洗脱，得到1-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)-3-甲基-脲(190mg，33％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝379.9。
步骤2：1-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲
在氩气气氛下，将1-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)-3-甲基-脲(190mg，0.50mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(120mg，0.55mmol)、Pd(dppf)Cl2(40mg，0.05mmol)和K2CO3(180mg，1.3mmol)在1,4-二噁烷(6mL)和水(1mL)中的混合物在80℃搅拌3小时。浓缩反应混合物至干燥，且该粗品随后经柱色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1:12)洗脱，得到1-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(145mg，74％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝345.0。
步骤3：N-[7-氟-3-(甲基氨基甲酰基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
在氩气气氛下，将1-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(120mg，0.35mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(515mg，4.4mmol)、Pd2(dba)3(70mg，0.08mmol)、Brettphos(90mg，0.17mmol)和Cs2CO3(260mg，0.80mmol)在1,4-二噁烷(6mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。将反应经反相色谱提纯(在水中的甲醇0-50/0.1％氨)，得到N-[7-氟-3-(甲基氨基甲酰基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(30mg，18％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝426.2。
步骤4：1-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲
在室温，将N-[7-氟-3-(甲基氨基甲酰基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(30mg，0.07mmol)在HCl的二噁烷溶液(4M,2mL,8mmol)中搅拌2小时。该溶液经浓缩并经反相色谱提纯(在水中的甲醇5-50/0.05％氨)，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(15.4mg，67％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI):[M+H]+＝326.1,RT(分钟)＝1.40，方法＝E；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.25(s,1H),8.47(d,J＝5.6Hz,1H),8.41(s,1H),7.53(s,1H),7.40(d,J＝5.2Hz,1H),6.91(d,J＝6.0Hz,1H),2.91(s,3H),2.31(s,3H)。
实施例76：
(±)-反式-3-(8-氨基-3-(2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-N,4-二甲基苯甲酰胺(化合物136)
步骤1：3-溴-N,4-二甲基苯甲酰胺
向小瓶中添加4-溴-3-甲基苯甲酸(1g，4.mmol)、二氯甲烷(10mL)、DMF(0.1mL,4.mmol)和草酰氯(1.2mL,14.18mmol)。将该混合物在室温搅拌2小时。随后在真空中浓缩该混合物。将混合物重新溶于二氯甲烷(10mL)，并添加甲胺(30％，在EtOH中，10mL)。将该混合物在室温搅拌30分钟。将混合物在真空中浓缩，并经柱色谱提纯(PE/EA，从1:1至0:100)，得到4-溴-N,3-二甲基-苯甲酰胺(820mg，77％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝228.1。
步骤2：N,4-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺
向密封管中添加3-溴-N,4-二甲基-苯甲酰胺(800mg，3.51mmol)、双(频哪醇合)二硼(1.1g，4.33mmol)、乙酰氧基钾(1.1g，11.21mmol)和Pd(dppf)Cl2(256mg，0.35mmol)和1,4-二噁烷(100mL)。用N2鼓泡混合物2分钟，并随后在100℃搅拌3小时。该混合物直接经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:3至1:2)，得到N,4-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(800mg，41％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝276.1。
步骤3：(±)-反式-3-(8-氯-3-(2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-N,4-二甲基苯甲酰胺
在氩气下，将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，0.57mmol)、N,4-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(500mg，0.91mmol)、Pd(dppf)Cl2(50mg，0.07mmol)和Na2CO3(130mg，1.24mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和水(3mL)中的溶液在90℃加热2小时。该混合物直接经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:2至1:1)，得到(±)-反式-3-[8-氯-3-[(2-氰基环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-N,4-二甲基-苯甲酰胺(200mg，84％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝419.1。
步骤4：(±)-反式-3-(8-氨基-3-(2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-N,4-二甲基苯甲酰胺
在氩气下，将(±)-反式-3-[8-氯-3-[(2-氰基环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-N,4-二甲基-苯甲酰胺(100mg，0.24mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(265mg，2.26mmol)、Xantphos(55mg，0.10mmol)、Pd2(dba)3(44mg，0.05mmol)和Cs2CO3(350mg，1.08mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)和干燥甲苯(5mL)中的混合物在130℃搅拌16小时。将反应浓缩以除去甲苯并随后添加20mL饱和盐水溶液。该混合物经乙酸乙酯萃取(20mL×2)。然后分离有机物并干燥(Na2SO4)。所得残余物经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:1至EA至DCM:MeOH＝20:1)然后用反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-3-[8-氨基-3-[(2-氰基环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-N,4-二甲基-苯甲酰胺(29mg，31％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.67,[M+H]+＝400.1，方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ9.24(s,1H),8.27(s,1H),7.75-7.73(m,2H),7.40-7.38(m,1H),6.97(s,1H),6.71(s,1H),2.92(s,3H),2.67-2.62(m,1H),2.34(s,3H),2.14-2.09(m,1H),1.62-1.52(m,2H)。
实施例77：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物138)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-6-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在氩气下，将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，0.57mmol)、1-甲基-2-苯并咪唑啉酮(120mg，0.81mmol)、Pd3(dba)2(100mg，0.11mmol)、Xantphos(130mg，0.22mmol)和K3PO4(360mg，1.7mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在90℃加热3小时。该混合物经浓缩并经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:3至1:2)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(3-甲基-2-氧代-苯并咪唑-1-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(120mg，50％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝418.1。
步骤2：(±)-3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)-6-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将(±)-反式-N-[8-氯-6-(3-甲基-2-氧代-苯并咪唑-1-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.24mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(280mg，2.39mmol)、Pd3(dba)2(40mg，0.04mmol)、Brettphos(20mg，0.04mmol)、Cs2CO3(230mg，0.71mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的混合物在90℃加热3小时。混合物直接经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:2)，得到(±)-N-[3-[(反式-2-氰基环丙烷羰基)氨基]-6-(3-甲基-2-氧代-苯并咪唑-1-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(70mg，59％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝499.1。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向溶解于二氯甲烷(4mL)的(±)-N-[3-[(反式-2-氰基环丙烷羰基)氨基]-6-(3-甲基-2-氧代-苯并咪唑-1-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.12mmol)中添加TFA(0.2mL,0.24mmol)，并在室温搅拌2小时。该混合物直接经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(3-甲基-2-氧代-苯并咪唑-1-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(13mg，27％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.77,[M+H]+＝399.1，方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ11.15(s,1H),9.35(s,1H),8.26(s,1H),7.27-7.08(m,5H),6.78(s,1H),6.54(s,2H),3.17(s,3H),2.77-2.74(m,1H),2.17-2.12(m,1H),1.62-1.57(m,1H),1.46-1.41(m,1H)。
实施例78：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物139)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-6-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在氩气下，将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，0.57mmol)、1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(320mg，1.15mmol)、Pd(dppf)Cl2(50mg，0.07mmol)和Na2CO3(130mg，1.24mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和水(3mL)中的溶液在90℃加热2小时。该混合物直接经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:2)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-四氢吡喃-2-基吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(220mg，91％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝422.7。
步骤2：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在氩气气氛下，将(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-四氢吡喃-2-基吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，0.47mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(555mg，4.74mmol)、Xantphos(110mg，0.19mmol)、Pd2(dba)3(90mg，0.10mmol)和Cs2CO3(690mg，2.12mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)和甲苯(5mL)中的混合物在130℃搅拌4小时。将反应浓缩以除去甲苯，并随后添加10mL饱和盐水溶液。该混合物经乙酸乙酯萃取(10mL×2)。然后分离有机物并干燥(Na2SO4)。所得残余物经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:1至2:1)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(1-四氢吡喃-2-基吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，52％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝403.7。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-氨基-6-(1-四氢吡喃-2-基吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(80mg，0.20mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，并加入TFA(1.5mL,0.20mmol)，在室温搅拌2小时。将混合物蒸发，通过加入NH3的MeOH溶液中和。所得混合物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(1H-吡唑-4-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(26mg，42％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.47,[M+H]+＝319.7，方法＝C；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ13.01(s,1H),11.02(s,1H),9.21(s,1H),8.21(s,1H),8.17(s,1H),7.94(s,1H),7.19(s,1H),6.86(s,1H),6.17(s,2H),2.77-2.74(m,1H),2.15-2.11(m,1H),1.61-1.56(m,1H),1.46-1.41(m,1H)。
实施例79：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物140)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-6-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在氩气下，将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，0.57mmol)、2-羟基苯并咪唑(110mg，0.82mmol)、Pd2(dba)3(100mg，0.11mmol)、Xanphos(130mg，0.22mmol)、K3PO4(360mg，1.70mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在90℃加热3小时。该混合物直接经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:1)，得到(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-氧代-3H-苯并咪唑-1-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(180mg，78％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝404.1。
步骤2：(±)-3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)-6-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-氧代-3H-苯并咪唑-1-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(160mg，0.40mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(696mg，5.94mmol)、Pd2(dba)3(72mg，0.08mmol)、Brettphos(40mg，0.07mmol)和Cs2CO3(387mg，1.19mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经二氧化硅色谱提纯(PE:EA＝2:1至PE:EA＝1:1)，得到(±)-N-[3-[(反式-2-氰基环丙烷羰基)氨基]-6-(2-氧代-3H-苯并咪唑-1-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，31％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝485.1。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向(±)-N-[3-[(反式-2-氰基环丙烷羰基)氨基]-6-(2-氧代-3H-苯并咪唑-1-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(55mg，0.11mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加TFA(1.0mL,0.11mmol)。将反应在室温搅拌2小时。该混合物直接经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:1至EA)，然后用反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％ NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(2-氧代-3H-苯并咪唑-1-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(2.6mg，6％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.64,[M+H]+＝385.1，方法＝C；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ11.13(s,1H),9.34(s,1H),8.25(s,1H),7.15-7.00(m,6H),6.79(s,1H),6.51(s,2H),2.78-2.74(m,1H),2.17-2.12(m,1H),1.61-1.57(m,1H),1.46-1.41(m,1H)。
实施例80：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)-7-(三氟甲基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物143)
步骤1：(±)-反式-N-(8-氯-7-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(500mg，1.13mmol)、碘化钠(750mg，5mmol)、CuI(50mg，0.26mmol)和二甲基乙烷-1,2-二胺(1.5mL,13.69mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的溶液加热至110℃持续2天。该混合物经乙酸乙酯稀释(100mL)，用水(30mLx3)和盐水(30mL)洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。残余物经硅胶柱提纯(EA:PE＝1:1)，得到(±)-反式-N-[8-氯-7-碘-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(430mg，78％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝489.0。
步骤2：(±)-(反式)-N-(8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)-7-(三氟甲基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在室温，向(±)-(反式)-N-[8-氯-7-碘-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(370mg，0.76mmol)和二苯基(三氟甲基)锍三氟甲磺酸盐(620mg，1.53mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(11mL)中的溶液中添加Cu(150mg，2.34mmol)。将混合物加热至67℃持续16小时。冷却后，反应混合物溶于EtOAc(30mL)，用饱和氯化钠水溶液洗涤(10mLx3)。有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在真空中浓缩。残余物经硅胶柱色谱(EA:PE＝2:3)、随后反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ HCOOH)，得到(±)-(反式)-N-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-7-(三氟甲基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(35mg，11％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝431.1。
步骤3：(±)-(反式)-2-氰基-N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)-7-(三氟甲基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
在氩气下，将(±)-(反式)-N-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-7-(三氟甲基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(30mg，0.07mmol)、Pd2(dba)3(12mg，0.01mmol)、Xantphos(15mg，0.03mmol)、Cs2CO3(48mg，0.15mmol)和二苯甲酮亚胺(300mg，1.66mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在115℃搅拌6小时。将反应直接经硅胶柱提纯(EA:PE＝1:5至1:1)，得到(±)-(反式)-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-7-(三氟甲基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(20mg，50％产率)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝576.2。
步骤4：(±)-(反式)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)-7-(三氟甲基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(±)-(反式)-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-7-(三氟甲基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(20mg，0.02mmol)在乙腈(1mL)、水(1mL)和2,2,2-三氟乙酸(0.5mL)中的溶液搅拌2小时。随后添加0.2mL浓HCl并将混合物搅拌16小时。将混合物蒸发,溶解于CH3CN(1mL)，并用饱和碳酸氢钠中和。所得混合物经反相色谱提纯(在水中的乙腈17-47/0.05％氨)，得到(±)-(反式)-N-[8-氨基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-7-(三氟甲基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(4mg，40％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.864,[M+H]+＝421.1，方法＝C；1HNMR(400MHz,CD3OD)：δ9.41(s,1H),8.39(s,1H),8.25-8.23(m,2H),7.35(s,1H),6.74(s,1H),2.64-2.26(m,1H),2.16(s,3H),2.09-2.05(m,1H),1.57-1.47(m,2H)。
实施例81：
(±)-(反式)-N-(8-氨基-6-(5-甲基-2-氧代咪唑烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物144)
步骤1：8-氯-3-((反式)-2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基氨基甲酸叔丁基酯
在Ar下，将(反式)-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(600mg，1.71mmol)、Pd2(dba)3(240mg，0.26mmol)、Xantphos(300mg，0.52mmol)、K2CO3(510mg，3.7mmol)和氨基甲酸叔丁基酯(400mg，3.41mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在90℃搅拌7小时。混合物直接经硅胶柱提纯(EA:PE＝1:5至1:3)，得到N-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(500mg，76％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝387.1。
步骤2：(反式)-N-(8-氯-6-(5-甲基-2-氧代咪唑烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在0℃，向搅拌中的N-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(450mg，1.16mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中添加NaH(450mg，11.25mmol)。在0℃，搅拌所得混合物30分钟。然后添加N-(2-溴丙基)氨基甲酸叔丁基酯(500mg，2.1mmol)。将所得混合物在80℃搅拌过夜。冷却至室温后，将混合物用饱和NH4Cl淬灭，用乙酸乙酯稀释。有机层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。残余物经硅胶柱提纯(EA:PE＝1:1)，得到N-[2-[[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]氨基]丙基]氨基甲酸叔丁基酯(25mg，5％产率)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝370.1。
步骤3：3-((反式)-2-氰基环丙烷甲酰氨基)-6-(5-甲基-2-氧代咪唑烷-1-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将(反式)-N-[8-氯-6-(5-甲基-2-氧代-咪唑烷-1-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(25mg，0.07mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(80mg，0.68mmol)、Pd2(dba)3(12mg，0.01mmol)、Brettphos(12mg，0.02mmol)和Cs2CO3(65mg，0.20mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在90℃加热3小时。该混合物直接经硅胶柱提纯(EA:PE＝1:1至100％EA)，得到N-[3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-(5-甲基-2-氧代-咪唑烷-1-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(15mg，49％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝451.1。
步骤4：(反式)-N-(8-氨基-6-(5-甲基-2-氧代咪唑烷-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在室温，将N-[3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-(5-甲基-2-氧代-咪唑烷-1-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(15mg，0.03mmol)在二氯甲烷中(4mL)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)中的溶液搅拌30分钟。将混合物蒸发，并经反相色谱提纯(在水中的乙腈17-47/0.05％ HCOOH)，得到(反式)-N-[8-氨基-6-(5-甲基-2-氧代-咪唑烷-1-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(3mg，26％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.332,[M+H]+＝351.2，方法＝A；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.96(s,1H),9.11(s,1H),8.08(s,1H),7.36(s,1H),7.25(s,1H),6.71(s,1H),6.18(s,2H),4.12-3.97(m,2H),3.81-3.75(m,1H),2.76-2.67(m,1H),2.14-2.08(m,1H),1.58-1.50(m,1H),1.42-1.40(m,1H),1.20(d,J＝6.0Hz,3H)。
实施例82：
(±)-反式-N-(8-氨基-5,7-二氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物145)
向(±)-反式-N-[8-氨基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.29mmol)在乙腈(5mL)中的溶液中添加1-氟-4-羟基-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸酯)(220mg，0.69mmol)。在微波反应器中将混合物在90℃搅拌2小时。粗品经制备型HPLC提纯(柱Xbridge 21.2x250mm c18，10um流动相A：水(10mMol/LNH4HCO3)B：ACN)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-5,7-二氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(5mg，4.5％产率)。(ESI)：RT(分钟)＝1.625,[M+H]+＝380.2，方法＝G；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),9.53(s,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),8.48(s,1H),8.42(s,1H),7.48(d,J＝5.2Hz,1H),6.20(s,2H),2.62-2.75(m,1H),2.11-2.25(m,4H),1.60-1.68(m,1H),1.40-1.48(m,1H)。
实施例83：
(±)-反式-N-(8-氨基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物146)
步骤1：反式-2-氰基-N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
向密封管中添加(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(450mg，1.24mmol)、Xantphos(300mg，0.52mmol)、Pd2(dba)3(225mg，0.25mmol)、Cs2CO3(1.0g，3.08mmol)、二苯甲酮亚胺(1.2g，6.62mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(15mL)。用N2鼓泡混合物2分钟，在130℃搅拌4小时。该混合物经浓缩并经硅胶柱色谱提纯(用PE/EA从10:1至1:1洗脱)，得到(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(250mg，31％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝508.3。
步骤2：(±)-反式-N-(8-氨基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向小瓶中添加(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(500mg，0.39mmol)、四氢呋喃(5mL)和2N HCl(4.81mL,9.63mmol)。将该混合物在室温搅拌2小时。该混合物经浓缩并经硅胶柱色谱提纯(用DCM/MeOH从20:1至10:1)、随后经制备型HPLC提纯(流动相：A：水(10mmol NH4HCO3)B：乙腈)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-7-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(11mg，8％产率)，其为浅棕色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.667,[M+H]+＝378.1，方法＝G；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),8.48(d,J＝5.2Hz,1H),8.32(s,1H),8.24(s,1H),7.36(d,J＝5.2Hz,1H),6.96(s,1H),6.61(s,1H),6.03(br,2H),2.79-2.71(m,1H),2.17-2.10(m,1H),2.11(s,3H),1.63-1.55(m,1H),1.46-1.40(m,1H)。
实施例84：
1-(8-氨基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲(化合物147)和1-(8-氨基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲(化合物148)
步骤1：1-(8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲
向密封管中添加8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(700mg，2.6mmol)、甲基氨基甲酰氯(1.2g，13mmol),DBU(1mL,6.69mmol)和1,4-二噁烷(10mL)。将反应在120℃搅拌16小时。该混合物经浓缩并经硅胶柱色谱提纯(用DCM/MeOH从100:1至30:1洗脱)，得到1-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(820mg，84％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝327.1。
步骤2：6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-(3-甲基脲基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
向反应小瓶中添加1-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(800mg，2.45mmol)、Brettphos(200mg，0.37mmol)、Pd2(dba)3(300mg，0.33mmol)、Cs2CO3(2.0g,6.15mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.6g，13.7mmol)和1,4-二噁烷(50mL)，用N2鼓泡2分钟。在95℃将反应搅拌3小时。该混合物经浓缩并经硅胶柱色谱提纯(用DCM/MeOH洗脱，从100:1至30:1)，得到N-[3-(甲基氨基甲酰基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(430mg，41％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝408.1。
步骤3：1-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲
向反应小瓶中添加N-[3-(甲基氨基甲酰基氨基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(420mg，0.98mmol)和HCl(4N，在二噁烷中，5mL)。将反应在室温搅拌4小时。该混合物经浓缩并重新溶解于NH3的MeOH溶液中(7N，20mL)该混合物经浓缩并经硅胶柱色谱提纯(用DCM/MeOH洗脱，从30:1至10:1)，得到1-[8-氨基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(230mg，75％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝308.2。
步骤4：1-(8-氨基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲和1-(8-氨基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲
向小瓶中添加1-[8-氨基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(100mg，0.33mmol)、乙腈(10mL)和N-氯琥珀酰亚胺(45mg，0.34mmol)。在50℃将该混合物搅拌16小时。该混合物经浓缩并经制备型HPLC提纯(在水中的乙腈30-70％/0.1％ NH4OH)，得到以下：1-[8-氨基-7-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(化合物147)，其为黄色固体(38mg，34％产率)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.533,[M+H]+＝342.2，方法＝G；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,1H),9.12(s,1H),8.48(d,J＝5.2Hz,1H),8.31(s,1H),7.82(s,1H),7.36(d,J＝5.2Hz,1H),7.04(q,J＝4.8Hz,1H),6.85(s,1H),6.52(s,2H),2.71(d,J＝4.8Hz,3H),2.12(s,3H)。1-[8-氨基-5-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(化合物148)，其为黄色固体(21mg，19％产率)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.499,[M+H]+＝342.1，方法＝G；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),9.23(s,1H),8.48(d,J＝5.2Hz,1H),8.32(s,1H),8.22(s,1H),7.37(d,J＝5.2Hz,1H),7.06(q,J＝4.8Hz,1H),6.49(s,2H),6.36(s,1H),2.72(d,J＝4.8Hz,3H),2.12(s,3H)。
实施例85：
1-(8-氨基-5-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲(化合物149)1-(8-氨基-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲(化合物150)
步骤1：1-(8-氨基-5-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲和1-(8-氨基-7-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲
向反应小瓶中添加1-[8-氨基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(100mg，0.33mmol)、乙酸(5mL)和N-碘琥珀酰亚胺(75mg，0.33mmol)。将该混合物在20℃搅拌3天。该混合物经浓缩并用饱和NaHCO3调节pH至7。产物用乙酸乙酯萃取(50mLx2)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩，得到1-(8-氨基-5-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲和1-(8-氨基-7-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲的粗品混合物。该粗品混合物无需进一步提纯用于下一步骤中。LCMS(ESI)：[M+H]+＝434.1。
步骤2：1-(8-氨基-5-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲&1-(8-氨基-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲
向小瓶中添加1-(8-氨基-5-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲&1-(8-氨基-7-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基脲(100mg，0.23mmol)、Pd(t-Bu3P)2(15mg，0.03mmol)、Zn(5mg，0.08mmol)、Zn(CN)2(50mg，0.43mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)的混合物。反应混合物用N2鼓泡2分钟，并在90℃搅拌4小时。该混合物经浓缩并经硅胶柱色谱提纯(用DCM/MeOH洗脱，从100:1至30:1)，得到：化合物149：1-[8-氨基-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(14mg，18％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.512,[M+H]+＝333.1，方法＝C；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.41(s,1H),9.32(s,1H),8.51(d,J＝5.2Hz,1H),8.39(s,1H),7.86(s,1H),7.39(d,J＝5.2Hz,1H),7.35(s,2H),7.07(q,J＝4.4Hz,1H),6.80(s,1H),2.71(d,J＝4.4Hz,3H),2.22(s,3H)。化合物150：分离1-[8-氨基-5-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-3-甲基-脲(23mg，30％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.428，[M+H]+＝333.2，方法＝G；H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.37(s,1H),9.34(s,1H),8.54(d,J＝5.2Hz,1H),8.43(s,1H),8.18(s,1H),7.50(s,2H),7.43(d,J＝5.2Hz,1H),7.00(q,J＝4.4Hz,1H),6.41(s,1H),2.73(d,J＝4.4Hz,3H),2.22(s,3H)。
实施例86：
(±)-反式-N-[8-氨基-6-(2-氧代噁唑烷-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物151)
步骤1：N-[2-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁基酯
在N2下、在0℃，向6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(500mg，1.94mmol)在干燥四氢呋喃(20mL)中的溶液中添加iPrMgCl·LiCl配合物(1.3M，在THF中(20mL,26mmol)。完成添加后，将反应溶液在室温搅拌1小时。将混合物冷却至0℃，并添加(±)-2-(甲氧基(甲基)氨基)-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁基酯(1.27g，5.83mmol)。将反应溶液在室温搅拌1小时。反应混合物通过添加饱和NaCl水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取(30mLx3)。有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。该粗产物经快速柱色谱提纯，用40％在PE中的乙酸乙酯洗脱，得到N-[2-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁基酯(330mg，48％产率)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝336.1。
步骤2：N-[2-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-2-羟基-乙基]氨基甲酸叔丁基酯
在0℃，向N-[2-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁基酯(150mg，0.45mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加NaBH4(42mg，1.12mmol)。所得溶液在0℃搅拌1小时。添加水(5mL)淬灭反应。混合物用EA萃取(10mLx2)。有机层用水洗涤(5mL)，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。该粗产物N-[2-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-2-羟基-乙基]氨基甲酸叔丁基酯(140mg，93％产率)无需提纯用于下一步骤中。LCMS(ESI)：[M+H-100]+＝338.1。
步骤3：5-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)噁唑烷-2-酮
将N-[2-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-2-羟基-乙基]氨基甲酸叔丁基酯(140mg，0.41mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)。在0℃，添加NaH(15mg,0.62mmol)。所得溶液在室温搅拌3小时。添加水(5mL)将反应淬灭，且该混合物经乙酸乙酯萃取(10mLx2)。有机层用盐水洗涤(10mLx3)，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。该粗产物经制备型TLC提纯(DCM:MeOH＝20:1)，得到标题产物5-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)噁唑烷-2-酮(60mg，51％产率)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝264.0。
步骤4：反式-N-[8-氯-6-(2-氧代噁唑烷-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酸(250mg，2.25mmol)在二氯甲烷(5mL)中的混合物在0℃搅拌10分钟。然后逐滴添加乙二酰氯(572mg，4.51mmol)。将反应混合物在25℃搅拌1小时，并浓缩。在0℃，将该粗产物添加至5-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)噁唑烷-2-酮(60mg，0.23mmol)和吡啶(0.06mL,0.68mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中。将反应混合物在25℃搅拌1小时。反应混合物过滤并浓缩。残余物经快速柱色谱提纯(DCM/MeOH＝10/1)，得到反式-N-[8-氯-6-(2-氧代噁唑烷-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(70mg，86％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝357.0。
步骤5：反式-N-[8-氨基-6-(2-氧代噁唑烷-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在手套箱中，向密封管中添加氨基甲酸叔丁基酯(229mg，1.96mmol)、Pd2(dba)3(36mg，0.04mmol)、Cs2CO3(192mg，0.59mmol)、Xantphos(38mg，0.08mmol)、反式-N-[8-氯-6-(2-氧代噁唑烷-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(70mg，0.20mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和甲苯(1mL)。将该混合物在130℃搅拌2天。将反应经浓缩并用水稀释(20mL)。该混合物经乙酸乙酯萃取(30mLx3)，并将合并的有机层用水(20mL)和饱和NaCl溶液(30mLx3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。该粗产物经制备型HPLC提纯(流动相：A水(0.01％ NH3)+10mm(NH4HCO3)，B乙腈)，得到反式-N-[8-氨基-6-(2-氧代噁唑烷-5-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(4.8mg，7.3％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.398,[M+H]+＝338.0，方法＝C；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.20(s,1H),8.27(s,1H),7.06(s,1H),6.74(s,1H),5.72-5.68(m,1H),4.07-4.02(m,1H),3.53-3.49(m,1H),2.65-2.62(m,1H),2.13-2.11(m,1H),1.61-1.53(m,1H)。
实施例87：
(±)-反式-N-[8-氨基-7-(羟基甲基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(化合物153)
步骤1：(±)-反式-N-[8-氨基-7-甲酰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-(二苯亚甲基氨基)-7-(二氟甲基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(140mg，0.25mmol)和2,2,2-三氟乙酸(8mL)在水(20mL)和乙腈(20mL)中的混合物在25℃搅拌3小时。反应混合物经浓缩，并用饱和NaHCO3水溶液中和至pH＝7-8。该混合物经浓缩，并经制备型HPLC R反相提纯(C-18，乙腈/水+0.05％NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-7-甲酰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(120mg，68％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝372.7。
步骤2：(±)-反式-N-[8-氨基-7-(羟基甲基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺
在0℃，向(±)-反式-N-[8-氨基-7-甲酰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(100mg，0.16mmol)在乙腈(20mL)和甲醇(20mL)中的溶液中添加NaBH4(24mg，0.63mmol)。在0℃将该混合物搅拌10分钟。该混合物经浓缩并经制备型反相HPLC提纯(C-18,乙腈/水+0.05％NH4HCO3)，得到(±)-反式-N-[8-氨基-7-(羟基甲基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(25mg，41％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.852,[M+H]+＝374.1，方法＝C。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),9.46(s,1H),8.46(d,J＝4.8Hz,1H),8.32(d,J＝1.2Hz,1H),8.19(s,1H),7.34(d,J＝4.8Hz,1H),6.75(s,1H),6.32(s,2H),4.95(s,1H),4.29(d,J＝12.4Hz,1H),4.18(d,J＝12.0Hz,1H),2.78-2.75(m,1H),2.17-2.11(m,1H),2.08(s,3H),1.61-1.56(m,1H),1.46-1.40(m,1H)。
实施例88：
(±)-1-[8-氨基-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基)-3-异喹啉基]-3-异丙基-脲(化合物154)
/>
步骤1：1-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-3-异丙基-脲
将6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(400mg，1.55mmol)、异氰酸异丙基酯(1.19g，13.98mmol)和DBU(1.18g，7.76mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在100℃搅拌5小时。该混合物经浓缩并经柱色谱提纯，用EtOAc/己烷＝1:2洗脱，得到1-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-3-异丙基-脲(570mg，1.03mmol，66％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝342.0。
步骤2：1-[8-氯-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基)-3-异喹啉基]-3-异丙基-脲
在氩气下，将1-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-3-异丙基-脲(570mg，1.03mmol)、4-甲基噁唑烷-2-酮(125mg，1.24mmol)、Pd2(dba)3(95mg，0.1mmol)、Xantphos(119mg，0.21mmol)和K3PO3(437mg，2.06mmol)在1,4-二噁烷(18mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并经柱色谱提纯，用EtOAc/己烷＝2:1洗脱，得到1-[8-氯-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基)-3-异喹啉基]-3-异丙基-脲(306mg，81％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝363.1。
步骤3：(±)-N-[3-(异丙基氨基甲酰基氨基)-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将1-[8-氯-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基)-3-异喹啉基]-3-异丙基-脲(286mg，0.79mmol)、BocNH2(922mg，7.88mmol)、Pd2(dba)3(108mg，0.12mmol)、Brettphos(127mg，0.24mmol)和Cs2CO3(512mg，1.58mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。该混合物经浓缩并经柱色谱提纯，用EtOAc/DCM＝3:1洗脱，得到N-[3-(异丙基氨基甲酰基氨基)-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(285mg，66％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝444.4。
步骤4：(±)-1-[8-氨基-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基)-3-异喹啉基]-3-异丙基-脲
/>
将(±)-N-[3-(异丙基氨基甲酰基氨基)-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(280mg，0.52mmol)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)在二氯甲烷(10mL)中的混合物在25℃搅拌2小时。反应混合物经浓缩，并用饱和NaHCO3水溶液中和至pH＝7-8。该混合物经浓缩，并经制备型反相HPLC提纯(C-18，乙腈/水+0.05％ NH4HCO3)，得到(±)-1-[8-氨基-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基)-3-异喹啉基]-3-异丙基-脲(140mg，78％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.399,[M+H]+＝344.2，方法＝A。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.09(s,1H),8.80(s,1H),7.67(s,1H),7.21(d,J＝6.8Hz,1H),6.87(d,J＝1.2Hz,1H),6.84(s,1H),6.25(s,2H),4.71-4.68(m,1H),4.55(t,J＝8.2Hz,1H),4.04(q,J＝4.4Hz,1H),3.84-3.78(m,1H),1.28(d,J＝6.4Hz,3H),1.13(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例89：
N-(8-氨基-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-吡唑-5-基)乙酰胺(化合物155)
步骤1：2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)乙腈
将2-(1H-吡唑-5-基)乙腈(250mg，2.33mmol)、对甲苯磺酸(40mg，0.23mmol)和3,4-二氢-2h-吡喃(295mg，3.5mmol)在乙酸乙酯(5mL)中的混合物在25℃搅拌18小时。将5mL饱和NaHCO3水溶液添加至反应混合物钟内，并搅拌10分钟。EA在Na2SO4上干燥，并在真空中浓缩，得到2-(2-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)乙腈(430mg，74.6％产率)，其为无色油状物。LCMS(ESI)：[M+23]+＝214.2。
步骤2：2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)乙酸
在80℃将2-(2-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)乙腈(430mg，2.25mmol)和KOH(378.mg，6.75mmol)在乙醇(5mL)、水(5mL)中的混合物搅拌5小时。除去EtOH，且所得混合物用水稀释(10mL)并用乙酸乙酯萃取10mL)。水相用1N HCl调节至pH＝5，并用乙酸乙酯萃取(20mLx2)。合并的乙酸乙酯层在Na2SO4上干燥，并在真空中浓缩，得到2-(2-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)乙酸(480mg，83.7％产率)，其为无色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝233.1。
步骤3：8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺
将6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(300mg，1.17mmol)、4-乙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(326mg，1.4mmol)、Na2CO3(309mg，2.91mmol)和Pd(dppf)Cl2(43mg，0.06mmol)在1,4-二噁烷(3mL)、H2O(0.3mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。除去溶剂，且残余物经快速柱色谱提纯(PE:EA＝2:1-1:4)，得到8-氯-6-(4-乙基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(260mg,78.6％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝284.1。
步骤4：N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)乙酰胺
在0℃，向8-氯-6-(4-乙基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(130mg，0.46mmol)和2-(2-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)乙酸(130mg，0.62mmol)在吡啶(2mL)中的混合物添加三氯氧化磷(281mg，1.83mmol)。在0℃，将所得混合物搅拌1小时。用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取(20mLx2)。合并的乙酸乙酯层在真空中浓缩，且残余物经快速柱色谱提纯(PE:EA＝3:1-1:3)，得到N-[8-氯-6-(4-乙基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-(2-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)乙酰胺(90mg，38.5％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝476.2。
步骤5：N-(8-(二苯基亚甲基氨基)-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)乙酰胺
将N-[8-氯-6-(4-乙基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-(2-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)乙酰胺(80mg，0.17mmol)、二苯甲酮亚胺(61mg，0.34mmol)、Pd2(dba)3(31mg，0.03mmol)、Xantphos(39mg，0.07mmol)和Cs2CO3(110mg，0.34mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)、甲苯(2mL)中的混合物在130℃搅拌3小时。将反应冷却至室温，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取(20mLx2)。合并的乙酸乙酯层在真空中浓缩，得到N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-乙基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-(2-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)乙酰胺(170mg,50.5％产率，粗品)，其为棕色固体。此粗品无需提纯用于下一步骤中。LCMS(ESI):[M+H]+＝611.2。
步骤6：N-(8-氨基-6-(4-乙基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-吡唑-5-基)乙酰胺
将N-[8-(二苯亚甲基氨基)-6-(4-乙基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-(2-四氢吡喃-2-基吡唑-3-基)乙酰胺(160mg，0.26mmol)在1mL 4M HCl/二噁烷中的混合物在25℃搅拌0.5小时。除去溶剂，且残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈10-45/0.05％ NH4HCO3)，得到N-[8-氨基-6-(4-乙基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-(1H-吡唑-5-基)乙酰胺(5.3mg,5.5％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.59,[M+H]+＝373.1，方法＝C。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：12.62(s,1H),10.52(s,1H),9.31(s,1H),8.49(d,J＝5.2Hz,1H),8.37(s,1H),8.25(s,1H),7.65(s,1H),7.39(d,J＝5.2Hz,1H),6.88(s,1H),6.35(d,J＝6.8Hz,1H),6.34(s,2H),6.22(d,J＝6.8Hz,1H),3.83(s,2H),2.64(q,J＝7.6Hz,2H),1.11(t,J＝7.6Hz,3H)。
实施例90：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物156)
步骤1：(±)-5-(8-氯-3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基氨基甲酸叔丁基酯
将N-(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)氨基甲酸叔丁基酯(250mg，0.87mmol)、[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]硼酸(350mg，1.11mmol)、Na2CO3(185mg，1.75mmol)和Pd(dppf)Cl2(35mg，0.05mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和H2O(0.4mL)中的混合物在90℃搅拌4小时。将反应经浓缩并经快速柱色谱提纯(PE/EA＝20％-60％)，得到N-[5-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(160mg，36.2％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝478.1。
步骤2：(±)-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将氨基甲酸叔丁基酯(178mg，1.52mmol)、N-[5-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(160mg，0.33mmol)、Pd3(dba)2(30mg，0.03mmol)、Brettphos(20mg，0.04mmol)和Cs2CO3(320mg，0.98mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。然后，将反应降至室温，并用水稀释(20mL)。产物经乙酸乙酯萃取(50mLx2)。合并的乙酸乙酯层在Na2SO4上干燥，并在真空中浓缩。残余物经快速柱色谱提纯(PE/EA＝40％-70％)，得到(±)-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(80mg，42.78％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝559.2。
步骤3：(±)-反式-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(±)-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[反式-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(90mg，0.15mmol)在二氯甲烷(2mL)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)中的混合物搅拌4小时。将反应经浓缩并经制备型HPLC提纯(在水中的乙腈5–40％/0.1％ NH4HCO3)，得到(±)-(反式)-N-[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(31.4mg，60.1％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.49,[M+H]+＝359.1，方法＝C。1H NMR(400MHz,CD3OD)：9.25(s,1H),8.28(s,2H),7.97(s,1H),7.74(s,1H),6.96(s,1H),6.68(s,1H),2.66-2.64(m,1H),2.14(s,3H),2.14-2.11(m,1H),1.62-1.54(m,2H)。
实施例91：
(±)-4-(8-氨基-3-((反式)-2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯甲酰胺(化合物157)
步骤1：8-氯-3-((反式)-2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基硼酸
在密封管中，将(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，0.57mmol)、双(频哪醇合)二硼(174mg，0.68mmol)、乙酰氧基钾(140mg，1.43mmol)和Pd(dppf)Cl2(21mg，0.03mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物在80℃搅拌3小时。浓缩该混合物，得到(±)-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]硼酸(150mg，粗品)，其为黑色固体。此材料无需提纯用于下一步骤中。LCMS(ESI)：[M+H]+＝316.1。
步骤2：(±)-4-(8-氯-3-((反式)-2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯甲酰胺
将粗品(±)-[8-氯-3-[[反式-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]硼酸(150mg，0.48mmol)、4-溴-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯甲酰胺(140mg，0.47mmol)、Pd(dppf)Cl2(35mg，0.05mmol)和Na2CO3(101mg，0.95mmol)在1,4-二噁烷(4mL)、H2O(0.4mL)中的混合物加热3小时。将反应经浓缩并经快速柱色谱提纯(PE/EA＝40％-70％)，得到4-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯甲酰胺(120mg，51.8％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝487.1。
步骤3：(±)-4-(3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)-8-(二苯基亚甲基氨基)异喹啉-6-基)-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯甲酰胺
将4-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯甲酰胺(100mg，0.21mmol)、二苯甲酮亚胺(75mg，0.41mmol)、Cs2CO3(134mg，0.41mmol)、Pd2(dba)3(38mg，0.04mmol)和XantPhos(48mg，0.08mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)和甲苯(1mL)中的混合物在140℃搅拌3小时。将反应冷却至室温，用水稀释(10mL)，用EA萃取(20mLx2)。在真空中浓缩合并的EA萃取物，得到粗品4-[8-(二苯亚甲基氨基)-3-[[(1R,2R)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯甲酰胺(240mg，65.8％产率)，其为棕色油状物。该粗材料无需提纯用于下一步骤中。LCMS(ESI)：[M+H]+＝632.2。
步骤4：(±)-4-(8-氨基-3-((反式)-2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯甲酰胺
向(±)-4-[8-(二苯亚甲基氨基)-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯甲酰胺(240mg，0.14mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中添加2滴TFA。搅拌所得混合物1小时。此反应混合物经制备型HPLC提纯(在水中的乙腈20–50％/0.1％NH4HCO3)，得到(±)-4-[8-氨基-3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯甲酰胺(16.4mg，26％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.80,[M+H]+＝468.1，方法＝C。1H NMR(400MHz,CD3OD)：9.25(s,1H),8.28(s,1H),7.82(s,1H),7.76(d,J＝7.6Hz,1H),7.40(d,J＝7.6Hz,1H),6.97(s,1H),4.17-4.10(m,2H),2.67-2.62(m,1H),2.36(s,3H),2.14-2.09(m,1H),1.62-1.52(m,2H)。
实施例92：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-氧代噁唑-3(2H)-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物159)
步骤1：6-溴-8-氯-N,N-双(4-甲氧基苄基)异喹啉-3-胺
向NaH(1.25g，31mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中添加6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(2.0g，7.77mmol)，且在0℃将所得混合物搅拌30分钟。添加4-甲氧基苄基氯(2.2mL,16mmol)。将该混合物在室温搅拌过夜。将混合物用饱和NH4Cl淬灭，并用乙酸乙酯稀释(200mL)。所得混合物用水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。残余物经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:10)，得到6-溴-8-氯-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]异喹啉-3-胺(2.8g，72％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝497.1。
步骤2：3-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-8-氯异喹啉-6-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将Pd2(dba)3(0.94g，1.0 3mmol)、Xantphos(1.12g，1.94mmol)、K2CO3(1.87g，13.55mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.4g，11.95mmol)和6-溴-8-氯-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]异喹啉-3-胺(2.8g，5.62mmol)在1,4-二噁烷(100mL)中的混合物在90℃搅拌过夜。该混合物直接经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:10至1:8)，得到N-[3-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-8-氯-6-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(2.4g，80％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝534.2。
步骤3：8-氯-N3,N3-双(4-甲氧基苄基)异喹啉-3,6-二胺
将N-[3-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-8-氯-6-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(2.4g，4.49mmol)和Cs2CO3(4.8g，14.72mmol)在1,4-二噁烷(40mL)和N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中的溶液在130℃搅拌过夜。该混合物经乙酸乙酯稀释(100mL)并用水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。残余物经硅胶色谱提纯(EA:PE＝1:2)，得到8-氯-N3,N3-双[(4-甲氧基苯基)甲基]异喹啉-3,6-二胺(900mg，46％产率)，其为红色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝434.2。
步骤4：3-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-8-氯异喹啉-6-基氨基甲酸2-氧代丙基酯
在0℃，向搅拌中的三光气(1.2g，4.04mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加三乙胺(3mL,21.52mmol)和8-氯-N3,N3-双[(4-甲氧基苯基)甲基]异喹啉-3,6-二胺(900mg，2.07mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液。将该混合物在0℃搅拌1小时，然后添加羟基丙酮(2.0g，27mmol)。在室温搅拌反应混合物过夜。该混合物经乙酸乙酯稀释(100mL)并用盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。残余物经硅胶柱提纯(EA:PE＝1:2)，得到N-[3-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-8-氯-6-异喹啉基]氨基甲酸丙酮基酯(650mg，59％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝534.2。
步骤5：3-(8-氯-3-(4-甲氧基苄基氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基噁唑-2(3H)-酮
将N-[3-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-8-氯-6-异喹啉基]氨基甲酸丙酮基酯(640mg，1.2mmol)在乙酸(40mL)中的溶液加热至120℃持续2小时。蒸发溶剂后，将残余物溶于二氯甲烷(10mL)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)，并在室温继续搅拌1小时。将反应浓缩，得到粗品3-[8-氯-3-[(4-甲氧基苯基)甲基氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-噁唑-2-酮(430mg，91％产率)，其为红色油状物，直接用于下一反应中。LCMS(ESI)[M+H]+＝396.1。
步骤6：3-(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)-4-甲基噁唑-2(3H)-酮
将3-[8-氯-3-[(4-甲氧基苯基)甲基氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-噁唑-2-酮(430mg，1.09mmol)在2,2,2-三氟乙酸(8mL)中的溶液在45℃加热1小时。将反应经浓缩并将残余物重新溶于DCM(50mL)，并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。残余物经硅胶柱色谱提纯(EA:PE＝1:2至EA:DCM＝1:1)，得到3-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-4-甲基-噁唑-2-酮(160mg，53％产率)，其为红色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝276.0。
步骤7：(±)-反式-N-(8-氯-6-(4-甲基-2-氧代噁唑-3(2H)-基)异喹啉-3-基)-2- 氰基环丙烷甲酰胺
在0℃，将(COCl)2(0.09mL,1.06mmol)逐滴添加至(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酸(50mg，0.45mmol)和DMF(3mg，0.04mmol)在二氯甲烷(5mL)中的悬浮液中。在室温继续搅拌混合物1小时。在室温蒸发混合物，以除去大部分的DCM和(COCl)2。将残余物悬浮于DCM(5mL)，并在0℃将其逐滴添加至3-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)-4-甲基-噁唑-2-酮(80mg，0.29mmol)和吡啶(0.5mL,6.18mmol)在二氯甲烷(5mL)中的混合物。在0℃，将反应混合物继续搅拌0.5小时。反应混合物用DCM(50mL)稀释，用H2O洗涤(20mL)。分离有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶色谱提纯(EA:PE＝1:2)，得到(±)-(反式)-N-[8-氯-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑-3-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(40mg，37％产率)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝369.1。
步骤8：3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)-6-(4-甲基-2-氧代噁唑-3(2H)-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将氨基甲酸叔丁基酯(230mg，1.96mmol)、Pd2(dba)3(35mg，0.04mmol)、Brettphos(35mg，0.07mmol)、Cs2CO3(210mg，0.64mmol)和反式-N-[8-氯-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑-3-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(70mg，0.19mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃加热2天。该混合物直接经硅胶柱提纯(EA:PE＝1:1至100％ EA)，得到(±)-N-[3-[[(反式)-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑-3-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(35mg，41％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝450.1。
步骤9：反式-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-氧代噁唑-3(2H)-基)异喹啉-3-基)-2-氰 基环丙烷甲酰胺
在室温，将N-[3-[[反式-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑-3-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(30mg，0.07mmol)在二氯甲烷(4mL)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)中的溶液搅拌1小时。将反应浓缩后，残余物用在MeOH中的氨中和。所得混合物经反相色谱提纯(在水中的乙腈17-47/0.05％碳酸氢钠)，得到(±)-(反式)-N-[8-氨基-6-(4-甲基-2-氧代-噁唑-3-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(2.7mg，12％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.572,[M+H]+＝350.1，方法＝C；1H-NMR(400MHz,CD3OD)：δ9.26(s,1H),8.33(s,1H),7.02(s,1H),6.65(s,1H),4.65(s,1H),2.67-2.62(m,1H),2.15-2.09(m,1H),2.01(s,3H),1.62-1.52(m,2H)。
实施例93：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(2-甲基-6-氧代哌嗪-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物160)
步骤1：3-甲基-5-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁基酯
将6-甲基哌嗪-2-酮(200mg，1.75mmol)、(Boc)2O(420mg，1.93mmol)和Na2CO3(370mg，3.49mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的混合物在25℃搅拌4小时。将反应用水(10ml)和EtOAc(20ml)稀释。然后分离有机物并干燥(Na2SO4)。残余物浓缩，得到3-甲基-5-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(350mg，93.2％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝215.1。
步骤2：4-(8-氯-3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6-基)-3-甲基-5-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁基酯
在氩气下，将反式-N-(6-溴-8-氯-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(200mg，0.57mmol)、Pd2(dba)3(100mg，0.11mmol)、Xantphos(130mg，0.22mmol)、K3PO4(360mg，1.7mmol)和3-甲基-5-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(170mg，0.79mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。该混合物直接经硅胶柱提纯(EA:PE＝1:2至1:1)，得到4-[8-氯-3-[(反式-2-氰基环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-3-甲基-5-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(100mg，36.2％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝484.1。
步骤3：4-(8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)异喹啉-6- 基)-3-甲基-5-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁基酯
在氩气下，将氨基甲酸叔丁基酯(200mg，1.71mmol)、Pd2(dba)3(32mg，0.03mmol)、Brettphos(20mg，0.04mmol)、Cs2CO3(160mg，0.49mmol)和4-[8-氯-3-[(反式-2-氰基环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-3-甲基-5-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(80mg，0.17mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。该混合物直接经硅胶柱提纯(EA:PE＝2:1至4:1)，得到4-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(反式-2-氰基环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-3-甲基-5-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(50mg，0.09mmol，53.6％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝565.1。
步骤4：反式-N-(8-氨基-6-(2-甲基-6-氧代哌嗪-1-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
向4-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(反式-2-氰基环丙烷羰基)氨基]-6-异喹啉基]-3-甲基-5-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(40mg，0.07mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)中的溶液中添加TFA(2mL,0.14mmol)。在室温搅拌混合物2小时。将反应浓缩至干燥。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％NH4HCO3)，得到反式-N-[8-氨基-6-(2-甲基-6-氧代-哌嗪-1-基)-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(9.7mg，37.6％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.35,[M+H]+＝365.1，方法＝C；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ11.09(s,1H),9.27(s,1H),8.16(s,1H),6.79(s,1H),6.44(s,1H),6.30(s,2H),4.05-3.92(m,2H),3.17-3.12(m,2H),2.78-2.74(m,3H),2.17-2.11(m,1H),1.61-1.56(m,1H),1.45-1.42(m,1H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例94：
(±)-反式-N-(8-氨基-7-氟-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物161)
步骤1：反式-N-(8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将(±)-反式-2-氰基环丙烷甲酸(290mg，2.61mmol)、乙二酰氯(0.2mL,2.36mmol)在DCM(3mL)和1滴DMF的混合物搅拌0.5小时。浓缩反应混合物。在室温，向8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(700mg，2.17mmol)在DCM(7mL)和吡啶(0.5mL)中的溶液中分批添加浓盐酸混合物。将该混合物搅拌1小时。将反应浓缩至干燥并将残余物溶于EtOAc(50mL)并用饱和NaHCO3调节pH至7-8。有机层用100mL饱和盐水溶液洗涤。然后分离有机物并干燥(NaSO4)，随后浓缩至干燥。残余物经二氧化硅色谱提纯(PE:EA＝2:1至PE:EA＝1:1)，得到标题化合物，其为黄色固体(730mg，40.2％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝416.0。
步骤2：反式-N-(8-氯-7-氟-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
在氩气下，将反式-N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-异喹啉基)-2-氰基-环丙烷甲酰胺(730mg，1.76mmol)、(4S)-4-甲基噁唑烷-2-酮(270mg，2.67mmol)、CuI(667mg，3.51mmol)、N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(616mg，7mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶色谱提纯(PE:EA＝4:1至PE:EA＝1:1)，最终得到标题化合物，其为黄色固体(460mg，40.9％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝389.1。
步骤3：3-(反式-2-氰基环丙烷甲酰氨基)-7-氟-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在氩气下，将反式-N-[8-氯-7-氟-6-[(4S)-4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基]-3-异喹啉基]-2-氰基-环丙烷甲酰胺(450mg，1.16mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.3g，11.1mmol)、Brettphos(120mg，0.22mmol)、Pd2(dba)3(210mg，0.23mmol)和Cs2CO3(1.1g，3.37mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃加热3小时。将反应浓缩至干燥。残余物经硅胶色谱提纯(PE:EA＝4:1至PE:EA＝1:1)，得到标题化合物，其为白色固体(55mg，6.2％产率)。LCMS(ESI)[M+H]+＝470.2。
步骤4：反式-N-(8-氨基-7-氟-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺
将N-[3-[[反式-2-氰基环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-[(4S)-4-甲基-2-氧代-噁唑烷-3-基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(55mg，0.12mmol)、TFA(0.5mL,0.12mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物在室温搅拌1小时。将反应浓缩至干燥并将残余物溶于MeOH(2mL)，并用饱和NaHCO3调节pH至7-8。该混合物经制备型HPLC提纯(在水中的5％-95％甲醇和0.8g/LNH4HCO3)，得到标题化合物，其为黄色固体(16.7mg，37.8％产率)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.65,[M+H]+＝370.1，方法＝B。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.14(s,1H),9.39(s,1H),8.22(s,1H),7.06(d,J＝6.4Hz,1H),6.39(s,2H),4.67(t,J＝8.0Hz,1H),4.53(d,J＝7.2Hz,1H),4.06(t,J＝8.0Hz,1H),2.75-2.71(m,1H),2.15-2.12(m,1H),1.61-1.57(m,1H),1.42-1.40(m,1H),1.15(d,J＝6.0Hz,3H)。
实施例95：
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(5-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噁唑-6-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物162)和(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(5-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噁唑-6-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物163)
使用为(±)-反式-N-(8-氨基-6-(5-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噁唑-6-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺描述的程序制备标题化合物。单一对映异构体通过手性SFC分离。化合物162：LCMS(ESI)：RT(分钟)＝3.83,[M+H]+＝400.1，方法＝J。化合物163：LCMS(ESI)：RT(分钟)＝3.83,[M+H]+＝400.1，方法＝J。
实施例96：
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-((R)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷-1-甲酰胺(化合物164)
使用为(1S,2S)-N-(8-氨基-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物128)描述的程序制备标题化合物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.7(s,1H),9.19(s,1H),8.19(s,1H),7.0(s,1H),6.93(s,1H),4.84-5.02(m,1H),4.58-4.72(m,1H),4.56(t,1H),4.04-4.07(m,1H),2.23-2.51(m,1H),1.63-1.70(m,1H),1.14-1.3(m,4H)。
实施例97：
(1S,2R)-N-(8-氨基-6-((R)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷-1-甲酰胺(化合物165)
使用为(1S,2S)-N-(8-氨基-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物128)描述的程序制备标题化合物。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.52,[M+H]+＝345.2，方法＝B。
实施例98:
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物166)和(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物167)
使用为(±)-反式-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物156)描述的程序制备标题化合物。通过手性SFC分离单一异构体。化合物166：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.08(s,1H),9.32(s,1H),8.21(s,1H),7.94(s,1H),7.64(s,1H),6.82(s,1H),6.53(s,1H),6.31(s,2H),5.18(s,1H),2.73-2.77(m,1H),2.12-2.14(m,1H),1.59-1.61(m,1H),1.40-1.57(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝2.48,[M+H]+＝359.1，方法＝J。化合物167：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.08(s,1H),9.31(s,1H),8.21(s,1H),7.93(s,1H),7.64(s,1H),6.82(s,1H),6.53(s,1H),6.31(s,2H),5.18(s,1H),2.73-2.77(m,1H),2.12-2.14(m,1H),1.59-1.61(m,1H),1.40-1.57(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝2.48,[M+H]+＝359.1，方法＝J。
实施例99：
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基异噻唑-5-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物168)和(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(4-甲基异噻唑-5-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物169)
使用为(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-甲基异噻唑-5-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物62)描述的程序制备标题化合物。经手性SFC分离单一异构体。化合物168：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.18(s,1H),3.34(s,1H),8.48(s,H),8.29(s,1H),7.09(s,1H),6.73(s,1H),6.55(s,2H),2.74-2.76(m,1H),2.40(s,3H),2.08-2.17(m,1H),1.62-1.63(m,1H),1.40-1.45(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝4.66,[M+H]+＝350.1，方法＝J。化合物169：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.18(s,1H),3.34(s,1H),8.48(s,H),8.29(s,1H),7.09(s,1H),6.73(s,1H),6.55(s,2H),2.74-2.76(m,1H),2.40(s,3H),2.08-2.17(m,1H),1.62-1.58(m,1H),1.40-1.45(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝4.66,[M+H]+＝350.1，方法＝J。
实施例100：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物170)
使用类似于为(±)-反式-N-(8-氨基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物123)描述的程序制备标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.09(s,1H),9.34(s,1H),8.86(s,1H),8.29(d,J＝9.8Hz,2H),7.66(d,J＝3.1Hz,1H),7.22(s,1H),7.00(d,J＝1.5Hz,1H),6.68(dd,J＝3.0,0.8Hz,1H),6.37(s,2H),3.97(s,3H),2.80–2.73(m,1H),2.17–2.11(m,1H),1.63–1.55(m,1H),1.48–1.40(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝2.76,[M+H]+＝383.1，方法＝J。
实施例101：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物171)
使用类似于为(±)-反式-N-(8-氨基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物123)描述的程序制备标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.11(s,1H),9.36(s,1H),9.20(s,1H),8.47(s,1H),8.40–8.29(m,2H),7.34(s,1H),7.06(d,J＝1.5Hz,1H),6.44(s,2H),4.24(s,3H),2.77(dd,J＝10.8,8.0Hz,1H),2.19–2.09(m,1H),1.65–1.56(m,1H),1.49–1.39(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝3.09,[M+H]+＝384.1，方法＝J。
实施例102：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(2-甲基-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物172)
使用类似于为(±)-反式-N-(8-氨基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物123)描述的程序制备标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.11(s,1H),9.35(s,1H),9.15(s,1H),8.76(s,1H),8.32(d,J＝14.3Hz,2H),7.33(s,1H),7.02(d,J＝1.5Hz,1H),6.39(s,2H),4.30(s,3H),2.75(d,J＝5.9Hz,1H),2.19–2.09(m,1H),1.64–1.55(m,1H),1.49–1.39(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝2.70,[M+H]+＝384.1，方法＝J。
实施例103：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(5,5-二甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物173)
使用类似于为(1S,2S)-N-(8-氨基-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物128)描述的程序制备标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.01(s,1H),9.19(s,1H),8.12(s,1H),7.21(d,J＝2.1Hz,1H),6.81(d,J＝1.8Hz,1H),6.34(s,2H),3.89(s,2H),2.74(dd,J＝11.4,7.2Hz,1H),2.18–2.09(m,1H),1.60–1.55(m,1H),1.48(s,6H),1.42(dt,J＝10.2,5.1Hz,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝3.58,[M+H]+＝366.1，方法＝J。
实施例104：
反式-N-(8-氨基-6-((S)-4-异丙基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物174)
使用类似于为(1S,2S)-N-(8-氨基-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物128)描述的程序制备标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.03(s,1H),9.21(s,1H),8.15(s,1H),7.00(s,2H),6.35(s,2H),4.63(dd,J＝8.4,4.1Hz,1H),4.42(t,J＝8.9Hz,1H),4.29(dd,J＝9.0,4.0Hz,1H),2.73(d,J＝12.9Hz,1H),2.16–2.07(m,2H),1.61-1.55(m,1H),1.42(dt,J＝9.3,4.7Hz,1H),0.88(d,J＝7.0Hz,3H),0.75(d,J＝6.8Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝3.89,[M+H]+＝380.1，方法＝J。
实施例105：
反式-N-(8-氨基-6-((R)-4-异丙基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物175)
使用类似于为(1S,2S)-N-(8-氨基-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物128)描述的程序制备标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.03(s,1H),9.21(s,1H),8.15(s,1H),7.00(s,2H),6.35(s,2H),4.69–4.59(m,1H),4.42(t,J＝8.9Hz,1H),4.30(dd,J＝8.9,4.0Hz,1H),2.79–2.69(m,1H),2.18–2.06(m,2H),1.64–1.54(m,1H),1.46–1.37(m,1H),0.88(d,J＝7.0Hz,3H),0.75(d,J＝6.8Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝3.98,[M+H]+＝380.2，方法＝J。
实施例106：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物176)
使用类似于为(1S,2S)-N-(8-氨基-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物128)描述的程序制备标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.01(s,1H),9.19(s,1H),8.14(s,1H),7.20(d,J＝2.0Hz,1H),6.86(d,J＝1.8Hz,1H),6.35(s,2H),4.47–4.40(m,2H),4.13–4.06(m,2H),2.78–2.71(m,1H),2.17–2.08(m,1H),1.61–1.54(m,1H),1.46–1.38(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝3.02,[M+H]+＝338.1，方法＝J。
实施例107：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(2-氧代四氢-2H-环戊[d]噁唑-3(3aH)-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物177)
使用类似于为(1S,2S)-N-(8-氨基-6-((S)-4-甲基-2-氧代噁唑烷-3-基)异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷甲酰胺(化合物128)描述的程序制备标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.02(s,1H),9.19(s,1H),8.14(s,1H),7.16(d,J＝2.0Hz,1H),6.93(d,J＝1.8Hz,1H),6.35(s,2H),5.14–5.04(m,1H),4.89(s,1H),2.73(d,J＝5.3Hz,1H),2.16–2.08(m,1H),2.01–1.93(m,1H),1.86–1.76(m,3H),1.68(s,1H),1.63–1.52(m,2H),1.42(d,J＝4.3Hz,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝3.73,[M+H]+＝378.1，方法＝J。
实施例108：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(N,N-二甲基氨磺酰)异喹啉-3-基)环丙烷-1,2-二甲酰胺
(化合物178)
LCMS(ESI)：RT(分钟)＝3.32,[M+H]+＝378.1，方法＝N*。
实施例109:
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(N,N-二甲基氨磺酰)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物179)
LCMS(ESI)：RT(分钟)＝3.39,[M+H]+＝369.1，方法＝N*。
实施例110：
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物180)和(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物181)
步骤1：4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-胺
将2-氯-4-甲基吡啶-3-胺(5.0g，35mmol)、(1-甲基-1H-吡唑-5-基)硼酸(13.25g，105.2mmol)、K3PO4(22.33g，105.20mmol)和Pd(dppf)Cl2(2.57g，3.51mmol)在10:1二噁烷/水(110mL)中的混合物在100℃加热。3小时后，过滤固体，并在真空中浓缩滤液。所得残余物经快速柱色谱提纯(3:2石油醚/乙酸乙酯)，得到4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-胺(2.0g，30％产率)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝189。
步骤2：3-碘-4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶
向冰冷却中的4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-胺(0.50g，2.7mmol)、t-BuNO2(1.09g，10.6mmol)在CH3CN(10mL)中的溶液中添加CuI(2.02g，10.6mmol)。所得混合物温热至室温。16小时后，依次用氢氧化铵(10mL)和水(10mL)稀释反应。所得溶液经二氯甲烷萃取(20mL)。有机层在Na2SO4上干燥，过滤，并在真空中浓缩。经快速柱色谱提纯(3:1乙酸乙酯/石油醚)，得到3-碘-4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶(0.30g，38％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝300。
步骤3：8-氯-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-胺
将(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)硼酸(892mg，4.01mmol)、3-碘-4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶(0.60g，2.0mmol)、Pd(dppf)Cl2(147mg，0.20mmol)、AcONa(164mg，2.01mmol)和K3PO4(1.28g，6.02mmol)在10:1的1,4-二噁烷/水(22mL)中的混合物在100℃加热，2小时后，过滤固体，且在真空中浓缩滤液。经快速柱色谱提纯(乙酸乙酯)，得到8-氯-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-胺(0.70g，74％产率)，其为深红色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝350。
步骤4：反式-N-[8-氯-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
向冰冷却中的8-氯-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-胺(632mg，1.81mmol)、反式-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酸(0.20g，1.2mmol)和吡啶(6.00mL)在二氯甲烷(40.00mL)中的溶液中逐滴添加POCl3(277mg，1.81mmol)。将混合物温热至室温。30分钟后，用水(30mL)淬灭过量的POCl3。所得溶液经二氯甲烷萃取(100mL)。收集的有机物在无水硫酸钠上干燥，过滤，并在真空中浓缩，得到粗品反式-N-[8-氯-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(0.60g)，其为深红色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝498。
步骤4：反式-N-(3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
在90℃，将反式-N-[8-氯-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(0.80g，1.61mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(3.76g，32.1mmol)、Pd2(dba)3(294mg，3.21mmol)、BrettPhos(302mg，0.56mmol)和t-BuONa(386mg，4.03mmol)在二噁烷(20mL)中的悬浮液加热。16小时后，过滤固体，且在真空中浓缩滤液。经快速柱色谱提纯(乙酸乙酯)，得到反式-N-(3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(350mg，38％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝579。
步骤5：(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺和(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺
在室温，向反式-N-(3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.30g，0.52mmoL)在N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中的溶液中添加HCl(5mL，4M，在二噁烷中)。1小时后，将反应在真空中浓缩。粗材料经制备型HPLC提纯得到外消旋产物(60mg，24％)，其为浅黄色固体。经手性SFC分离对映异构体。化合物180：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.17(s,1H),8.56(d,J＝5.1Hz,1H),8.20(s,1H),7.49(d,J＝5.7Hz,2H),7.37(s,1H),7.20(d,J＝2.0Hz,1H),6.82(s,1H),6.47(d,J＝1.3Hz,1H),5.99(d,J＝2.0Hz,1H),3.86(s,3H),3.81(s,3H),2.38-2.33(m,1H),2.29(s,3H),2.12-2.04(m,1H),1.57-1.53(m,1H),1.30-1.18(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.23,[M+H]+＝479，方法＝K。化合物181：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.17(s,1H),8.56(d,J＝5.1Hz,1H),8.20(s,1H),7.49(d,J＝5.7Hz,2H),7.37(s,1H),7.20(d,J＝2.0Hz,1H),6.82(s,1H),6.47(d,J＝1.3Hz,1H),5.99(d,J＝2.0Hz,1H),3.86(s,3H),3.81(s,3H),2.38-2.33(m,1H),2.29(s,3H),2.12-2.04(m,1H),1.57-1.53(m,1H),1.30-1.18(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.22,[M+H]+＝479，方法＝K。
实施例111：
(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-苯基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物182)和(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-苯基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物183)
按照(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物180)所述的程序并作出轻微的变化来制备标题化合物。对映异构体通过手性SFC分离。化合物182：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.14(s,1H),8.47(s,1H),8.13(s,1H),7.50(s,1H),7.44-7.26(m,4H),7.22-7.11(m,3H),6.78(s,1H),6.50(d,J＝1.3Hz,1H),3.85(d,J＝0.6Hz,3H),2.41-2.31(m,1H),2.27(s,3H),2.13-2.04(m,1H),1.56-1.53(m,1H),1.32-1.17(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.13,[M+H]+＝474，方法＝K。化合物183；1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.14(s,1H),8.47(s,1H),8.13(s,1H),7.50(s,1H),7.44-7.26(m,4H),7.22-7.11(m,3H),6.78(s,1H),6.50(d,J＝1.3Hz,1H),3.85(s,3H),2.41-2.31(m,1H),2.27(s,3H),2.13-2.04(m,1H),1.56-1.53(m,1H),1.32-1.17(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.13,[M+H]+＝474，方法＝K。
实施例112：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物184)
按照(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物180)所述的程序但替代3-溴-4-甲基-2-(哌啶-1-基)吡啶并作出轻微的变化，制备标题化合物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),9.27(s,1H),8.24(s,1H),8.06(d,J＝5.0Hz,1H),7.56(s,1H),7.29(d,J＝0.8Hz,1H),6.94-6.80(m,2H),6.53(d,J＝1.4Hz,1H),6.20(s,2H),3.78(s,3H),2.96(s,4H),2.19(t,J＝7.1Hz,2H),2.07(s,3H),1.36(qd,J＝7.0,6.2,4.3Hz,3H),1.25(d,J＝8.3Hz,4H),1.20-1.10(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝2.02,[M+H]+＝482.3，方法＝K。
实施例113：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(2-氨基-3-甲基吡啶-4-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物185)
按照(±)-反式-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物156)所述的程序并作出轻微的变化来制备标题化合物。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),9.30(s,1H),8.27(s,1H),7.83(d,J＝5.1Hz,1H),7.57(d,J＝0.9Hz,1H),7.30(d,J＝0.8Hz,1H),6.81(d,J＝1.3Hz,1H),6.53-6.41(m,2H),6.31(s,2H),5.78(s,2H),3.78(s,3H),2.20-2.16(m,2H),1.98(s,3H),1.44-1.32(m,1H),1.17-1.14(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.05,[M+H]+＝414.1，方法＝K。
实施例114：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-[4-甲基-5-[(丙-2-基)氨基]吡啶-3-基]异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷-1-甲酰胺(化合物186)
按照(±)-反式-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物156)所述的程序并作出轻微的变化来制备标题化合物。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.26(s,1H),8.29(s,1H),7.91(s,1H),7.76(s,1H),6.97(s,1H),6.68(d,J＝1.4Hz,1H),3.83-3.80(m,1H),2.71-2.60(m,1H),2.18-2.03(m,4H),1.58-1.54(m,2H),1.33(d,J＝12Hz,6H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.03,[M+H]+＝401.1，方法＝K。
实施例115：
(±)-反式-(1S,2R)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)环丙烷甲酰胺(化合物187)
按照(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物180)所述的程序并作出轻微的变化来制备标题化合物。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ9.28(s,1H),8.41(d,J＝5.1Hz,1H),8.23(s,1H),7.35(s,1H),7.26(d,J＝5.1Hz,1H),7.15(s,1H),6.88(s,1H),6.53(s,1H),3.71(s,3H),2.83-2.59(m,2H),2.18(t,J＝0.7Hz,3H),2.01(dt,J＝8.7,4.5Hz,1H),1.85-1.58(m,1H),1.33(dt,J＝9.0,4.7Hz,1H),1.07-1.00(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.207,[M+H]+＝438.2，方法＝K。
实施例116：
N-(8-氨基-6-(2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(化合物188)
步骤1：4-(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁基酯
向4-[(三氟甲烷)磺酰基氧基]-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁基酯(0.50g，1.36mmol，J.Med.Chem.2014,57,2462)、(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)硼酸(602mg，2.71mmol)、Pd(dppf)Cl2(198mg，0.27mmol)在5:1的二噁烷/水(12mL)中的混合物添加K3PO4(288mg，1.36mmol)和NaOAc(167mg，2.04mmol)。将悬浮液在100℃加热1小时。将反应在真空中浓缩，且所得残余物经快速柱色谱提纯(10:1二氯甲烷/甲醇)，得到4-(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁基酯(0.30g，56％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝397.1。
步骤2：4-(8-氯-3-环丙烷酰氨基异喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁基酯
在25℃，向4-(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁基酯(0.40g，1.0mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中添加环丙烷甲酰氯(0.120g，1.15mmol)和吡啶(0.20g，2.5mmol)。3小时后，将反应在真空下浓缩，得到粗品4-(8-氯-3-环丙烷酰氨基异喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁基酯(0.50g)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝465.1。
步骤3：4-(8-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-3-环丙烷酰氨基异喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁基酯
将4-(8-氯-3-环丙烷酰氨基异喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁基酯(0.50g，1.08mmol)、N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁基酯(2.50g，11.5mmol)、Pd2(dba)3(0.20g，0.22mmol)、BrettPhos(0.20g，0.37mmol)和t-BuONa(0.260g，2.71mmol)在二噁烷(50mL)在90℃加热。1小时后，将反应在真空中浓缩，且所得残余物经快速柱色谱提纯(10:1二氯甲烷/甲醇)，得到4-(8-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-3-环丙烷酰氨基异喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁基酯(0.40g，68％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝546.1。
步骤4：N-(8-氨基-6-[1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基]异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺
在25℃，向4-(8-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-3-环丙烷酰氨基异喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-甲酸叔丁基酯(250mg，0.46mmol)在二噁烷(10mL)中的溶液中添加浓硫酸(10mL)。30分钟后，将反应在真空中浓缩，且所得残余物经制备型HPLC提纯，得到N-(8-氨基-6-[1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基]异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(4.7mg，3％)，其为黄色固体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),9.32(s,1H),8.31(s,1H),7.99(s,1H),7.83(s,1H),7.11-7.02(m,1H),6.73(d,J＝1.5Hz,1H),6.36(s,2H),6.18(s,1H),3.55-3.50(m,2H),3.20-3.15(m,2H),2.06-2.01(m,1H),0.84-0.80(m,4H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.193,[M+H]+＝346.1，方法＝K。
实施例117：
(S)-N-(8-氨基-6-(2-甲基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(化合物189)和(R)-N-(8-氨基-6-(2-甲基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(化合物190)
按照N-(8-氨基-6-[1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基]异喹啉-3-基)环丙烷甲酰胺(化合物188)所述的程序并作出轻微的变化来制备标题化合物。经手性SFC提纯单一异构体。化合物189：1H NMR(300MHz,CD3OD)δ9.21(s,1H),8.28(s,1H),7.94(s,1H),7.78(s,1H),7.11(s,1H),6.83(s,1H),4.18-3.91(m,1H),3.34-3.31(m,1H),2.81(dd,J＝16.8Hz,7.7Hz,1H),1.98-1.90(m,1H),1.29(d,J＝6.2Hz,3H),1.05-0.99(m,2H),0.98-0.85(m,2H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.09,[M+H]+＝360.3，方法＝K。化合物190：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.21(s,1H),8.28(s,1H),7.94(s,1H),7.78(s,1H),7.11(s,1H),6.83(s,1H),4.18-3.91(m,1H),3.34-3.31(m,1H),2.81(dd,J＝16.8,7.7Hz,1H),1.98-1.90(m,1H),1.29(d,J＝6.2Hz,3H),1.05-0.99(m,2H),0.98-0.85(m,2H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.09,[M+H]+＝360.3，方法＝K。
实施例118：
(±)-(1S*,2S*,3R*)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷甲酰胺(化合物191)和(±)-(1S*,2S*,3S*)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷甲酰胺(化合物192)
步骤1：2-[(苄基氧基)甲基]-N-[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺
向冰冷却中的8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(282mg，1.05mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中依次添加吡啶(6.0mL,74mmol)、反式-2-[(苄基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷-1-甲酸(0.30g，1.4mmol)和POCl3(321mg，2.09mmol)。反应混合物温热至25℃持续30分钟，然后添加水(20mL)。所得溶液经二氯甲烷萃取(3×30mL)。合并的有机物在无水硫酸钠上干燥，过滤，并在真空中浓缩，得到2-[(苄基氧基)甲基]-N-[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(210mg，43％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝472.0。
步骤2：N-(3-[[2-[(苄基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将反式-2-[(苄基氧基)甲基]-N-[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(420mg，0.89mmol)、NH2Boc(2.61g，22mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(184mg，0.18mmol)、Brettphos(191mg，0.36mmol)和Cs2CO3(1.16g，3.57mmol)在二噁烷(10mL)中的悬浮液在120℃加热。1.5小时后，将反应在真空中浓缩，且所得残余物经快速柱色谱提纯(4:1乙酸乙酯/石油醚)，得到N-(3-[[2-[(苄基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(450mg，92％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝472.2。
步骤3：3-(2-(羟基甲基)-3-甲基环丙烷甲酰氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
/>
在25℃、在H2(1atm)下，将N-(3-[[(1S,2S)-2-[(苄基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(350mg，0.63mmol)和碳上的Pd(OH)2(2.5g)在甲醇(30mL)中的悬浮液搅拌30分钟。过滤固体，且在真空中浓缩滤液，得到粗品N-(3-[[(2-(羟基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.20g，68％)，其为浅绿色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝463.3。
步骤4：甲磺酸2-(8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基甲酰基)-3-甲基环丙基)甲基酯
向冰冷却中的N-(3-[[(1S,2S)-2-(羟基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(140mg，0.30mmol)和三乙胺(183mg，1.81mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中逐滴添加MsCl(138mg，1.21mmol)。反应混合物温热至25℃持续30分钟，然后添加水(10mL)。所得溶液经二氯甲烷(50mL)萃取。有机萃取物在无水硫酸钠上干燥，过滤，并在真空中浓缩，得到粗品甲磺酸2-(8-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基甲酰基)-3-甲基环丙基)甲基酯(150mg)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝541.3。
步骤5：N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将N-(3-[[2-(甲磺酰基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.10g)和KCN(99mg，1.5mmol)在DMSO(3mL)中的溶液在50℃加热。2小时后，将反应用水稀释(20mL)。所得溶液经二氯甲烷萃取(50mL)。所收集的有机物在无水硫酸钠上干燥，过滤，并在真空中浓缩。经快速柱色谱提纯(10:1二氯甲烷/甲醇)，得到N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.070g，78％)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝472.3。
步骤6：(±)-(1S*,2S*,3R*)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷甲酰胺和(±)-(1S*,2S*,3S*)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷甲酰胺
/>
在25℃，向N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.070g，0.15mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中添加三氟乙酸(1.0mL,13mmol)。在25分钟后，反应混合物用2M碳酸氢钠水溶液调节至pH＝8。所得溶液经二氯甲烷萃取(50mL)。所收集的有机物在无水硫酸钠上干燥，过滤，并在真空中浓缩。经制备型HPLC提纯，得到两种非对映异构体。化合物191：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)10.80(s,1H),9.32(s,1H),8.67-8.39(m,2H),8.26(s,1H),7.45(d,J＝5.1Hz,1H),6.97-6.81(m,1H),6.55(d,J＝1.5Hz,1H),6.37(s,2H),2.81(dd,J＝17.6,7.3Hz,1H),2.69(dd,J＝17.7,7.7Hz,1H),2.33(s,3H),1.79(t,J＝4.5Hz,1H),1.71–1.57(m,1H),1.52–1.37(m,1H),1.17(d,J＝6.3Hz,3H)。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.153,[M+H]+＝372.2，方法＝C。化合物192：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)10.79(s,1H),9.32(s,1H),8.48-8.36(m,2H),8.28(s,1H),7.35(d,J＝5.0Hz,1H),6.99-6.86(m,1H),6.55(d,J＝1.5Hz,1H),6.34(s,2H),2.83-2.61(m,2H),2.30(s,3H),2.15-2.03(m,1H),1.58-1.45(m,1H),1.36(dt,J＝9.1,6.1Hz,1H),1.17(d,J＝6.1Hz,3H)。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.924,[M+H]+＝372.2方法＝C。
实施例119：
(2S)-2-(4-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物193)和(2R)-2-(4-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物194)
步骤1：2-(4-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-1H-吡唑-1-基)丙腈
将8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(250mg，0.86mmol)、2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丙腈(1.04g，5.21mmol)、第三代t-BuBrettPhos预催化剂(370mg，0.43mmol)、t-BuBrettPhos(210mg，0.43mmol)和碳酸钾(720mg，5.2mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的悬浮液在120℃加热。16小时后，将反应在真空中浓缩。经快速柱色谱提纯(100％乙酸乙酯)，得到2-(4-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-1H-吡唑-1-基)丙腈(240mg，68％)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝407.1。
步骤2：N-(3-[[1-(1-氰基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将2-(4-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-1H-吡唑-1-基)丙腈(0.420g，1.03mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(3.63g，31.0mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(160mg，0.15mmol)、BrettPhos(110mg，0.20mmol)和Cs2CO3(1.35g，4.12mmol)在1,4-二噁烷(50mL)中的悬浮液在90℃加热。3小时后，将反应在真空中浓缩，且所得残余物经快速柱色谱提纯(95:5二氯甲烷/甲醇)，得到N-(3-[[1-(1-氰基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.40g，79％)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝488.3。
步骤3：(2S)-2-(4-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈和(2R)-2-(4-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈
在25℃，向N-(3-[[1-(1-氰基乙基)-1H-吡唑-4-基]氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(350mg，0.71mmol)在二氯甲烷(10.0mL)中的溶液中添加三氟乙酸(10.0mL,134mmol)。1小时后，将反应在真空中浓缩。残余物经制备型HPLC提纯，然后经手性SFC提纯，得到两种对映异构体。化合物193：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.29(s,1H),8.76(s,1H),8.49(d,J＝5.0Hz,1H),8.41(s,1H),8.09(d,J＝0.8Hz,1H),7.62(d,J＝0.8Hz,1H),7.39-7.34(m,1H),6.83(s,1H),6.76(d,J＝6.1Hz,1H),6.13(s,2H),5.82(q,J＝7.1Hz,1H),2.22(s,3H),1.80(d,J＝7.1Hz,3H)。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.08，[M+H]+＝388.2。方法＝K。化合物194：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.29(s,1H),8.76(s,1H),8.49(d,J＝5.0Hz,1H),8.41(s,1H),8.09(d,J＝0.8Hz,1H),7.62(d,J＝0.8Hz,1H),7.39–7.34(m,1H),6.83(s,1H),6.76(d,J＝6.1Hz,1H),6.13(s,2H),5.82(q,J＝7.1Hz,1H),2.22(s,3H),1.80(d,J＝7.1Hz,3H)。LCMS(ESI)RT(分钟)＝1.08,[M+H]+＝388.2。方法＝K。
实施例120:
(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物195)、(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物196)、(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物197)和(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物198)
步骤1：乙基二苯基锍四氟硼酸盐
在室温、在N2下，向AgBF4(37.48g，192.5mmol)在二氯甲烷(450mL)中的溶液中添加碘乙烷(30.0g，192mmol)。30分钟后，添加二苯基硫醚(107g，574mmol)，并将反应混合物温热至35℃。16小时后，滤出固体，并在真空中浓缩滤液。所得残余物用二氯甲烷/乙醚冲洗(3×500mL)，得到乙基二苯基锍四氟硼酸盐(25g，39％)，其为灰白色固体。
步骤2：(2E)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯酸叔丁基酯
将4-碘-1-甲基-1H-吡唑(5.0g，24mmol)、丙-2-烯酸叔丁基酯(9.23g，72.0mmol)、三乙胺(2.91g，28.8mmol)、Pd(OAc)2(538mg，2.40mmol)和P(o-Tol)3(1.46g，4.80mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液在110℃加热。16小时后，将反应在真空下浓缩，且所得残余物经快速柱色谱提纯(3:1石油醚/乙酸乙酯)，得到(2E)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯酸叔丁基酯，其为淡黄色油状物(3.9g，74％)。LCMS(ESI)：M+H+＝209.0。
步骤3：2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酸叔丁基酯
/>
在-78℃，向乙基二苯基锍四氟硼酸盐(6.53g，21.6mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(100mL)和二氯甲烷(15mL)中的溶液中逐滴添加LDA溶液(12.6mL,235.24mmol，2M，在THF中)。30分钟后，在-78℃，将在1,2-二甲氧基乙烷(10mL)中的(2E)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯酸叔丁基酯(1.50g，7.20mmol)逐滴添加至叶立德溶液中。在添加后，将反应温热至室温。16小时后，将反应用水稀释(100mL)，且所得混合物用氯仿萃取(3×150mL)。所收集的有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤，并在真空下浓缩，得到粗品2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酸叔丁基酯(1.5g)，其为浅黄色油状物。
步骤4：2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酸
在室温，向2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酸叔丁基酯(0.60g，2.5mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三氟乙酸(10mL)。5小时后，将反应在真空下浓缩，且所得残余物用水稀释(45mL)。用10M氢氧化钠将水溶液碱化至pH＝9-10。该水溶液随后用乙醚洗涤(30mL)，并用1M盐酸水溶液将所得水溶液酸化至pH＝3-4。该酸性水溶液经乙酸乙酯萃取(3×70mL)。合并的有机萃取物在真空中浓缩，得到粗品2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酸，其为灰白色固体(450mg，70％纯度，含有30％ TFA)。LCMS(ESI)：M+H+＝181.0；
步骤5：N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
在室温，将8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(1.0g，3.5mmol)、2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酸(690mg，3.8mmol)、吡啶(7mL)和丙炔醇(953mg，6.22mmol)在二氯甲烷(50mL)中的混合物搅拌30分钟。反应混合物用水稀释，且所得溶液经二氯甲烷萃取。合并有机层并在真空下浓缩。经快速柱色谱提纯(30:1二氯甲烷/甲醇)，得到N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(750mg，48％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：M+H+＝450.2。
步骤6：N-(7-氟-3-[[2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
/>
向N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(2.0g，4.45mmol)在1,4-二噁烷(260mL)中的溶液中添加氨基甲酸叔丁基酯(11.5g，98.2mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿(691mg，0.67mmol)、二环己基[3,6-二甲氧基-2',4',6'-三(1-甲基乙基)[1,1'-联苯基]-2-基]膦(477mg，0.89mmol)和碳酸铯(7.3g，22.41mmol)。所得悬浮液在90℃加热搅拌。2.5小时后，过滤固体，并在真空中浓缩滤液。所得残余物经快速柱色谱提纯(15:1二氯甲烷/甲醇)，得到N-(7-氟-3-[[2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(1.2g，51％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：M+H+＝531.1。
步骤7：(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺、(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺、(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺和(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺
在室温，将N-(7-氟-3-[[2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(1.0g，1.88mmol)在二氯甲烷(25mL)和三氟乙酸(25mL)中的溶液搅拌1.5小时。将反应在真空下浓缩。经制备型HPLC和手性SFC提纯，得到4种异构体。化合物195：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.30(s,1H),8.47(d,J＝5.2Hz,1H),8.42(s,1H),8.36(s,1H),7.45(t,J＝6.2Hz,2H),7.34(s,1H),7.00(d,J＝8.0Hz,1H),3.85(s,3H),2.34-2.32(m,4H),2.17-2.14(m,1H),1.62-1.48(m,1H),1.35(d,J＝6.4Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.14,[M+H]+＝461.3，方法＝K。化合物196：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.31(s,1H),8.46(d,J＝5.2Hz,1H),8.41(s,1H),8.34(s,1H),7.51(s,1H),7.42(d,J＝5.2Hz,1H),7.39(s,1H),6.98(d,J＝6.0Hz,1H),3.88(s,3H),2.52-2.49(m,1H),2.30(s,3H),1.99-1.97(m,1H),1.79-1.72(m,1H),1.17(d,J＝6.4Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.15,[M+H]+＝461.3，方法＝K。化合物197：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.31(s,1H),8.46(d,J＝5.2Hz,1H),8.41(s,1H),8.34(s,1H),7.51(s,1H),7.43(d,J＝5.2Hz,1H),7.39(s,1H),6.98(d,J＝6.0Hz,1H),3.88(s,3H),2.53-2.49(m,1H),2.31(s,3H),1.99-1.97(m,1H),1.77-1.72(m,1H),1.17(d,J＝6.4Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.15,[M+H]+＝461.3，方法＝K。化合物98：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.30(s,1H),8.47(d,J＝5.2Hz,1H),8.42(s,1H),8.36(s,1H),7.45(t,J＝6.2Hz,2H),7.34(s,1H),7.00(d,J＝8.0Hz,1H),3.85(s,3H),2.34-2.32(m,4H),2.17-2.14(m,1H),1.67-1.61(m,1H),1.35(d,J＝6.4Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.14,[M+H]+＝461.3，方法＝K。
实施例121：
(R)-2-(3-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物199)和(S)-2-(3-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物200)
使用为(2S)-2-(4-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物193)描述的程序制备标题化合物。单一异构体经HPLC分离。化合物199：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.14(s,1H),8.39(d,J＝4.4Hz,2H),7.80(s,1H),7.67(d,J＝2.4Hz,1H),7.40(d,J＝5.2Hz,1H),6.89(s,1H),6.52(s,1H),6.25(d,J＝2.4Hz,1H),5.59-5.54(m,1H),2.39(s,3H),1.91(d,J＝6.8Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝0.99,[M+H]+＝461.3，方法＝K。化合物200：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.14(s,1H),8.39(d,J＝4.4Hz,2H),7.80(s,1H),7.67(d,J＝2.4Hz,1H),7.40(d,J＝5.2Hz,1H),6.89(s,1H),6.52(s,1H),6.25(d,J＝2.4Hz,1H),5.59-5.54(m,1H),2.39(s,3H),1.91(d,J＝6.8Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝0.99,[M+H]+＝461.3，方法＝K。
实施例122：
(S)-2-(4-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物201)和(R)-2-(4-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物202)
按照(2S)-2-(4-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物193)所述的程序并作出轻微的变化来制备标题化合物。对映异构体经手性HPLC分离。化合物201：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.12(s,1H),8.39-8.37(m,2H),8.06(s,1H),7.67(s,1H),7.37(d,J＝5.1Hz,1H),6.82(d,J＝5.1Hz,2H),6.45(s,1H),5.62(q,J＝7.2Hz,1H),2.37(s,3H),1.90(d,J＝7.2Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.585,[M+H]+＝370.2，方法＝K。化合物202：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.12(s,1H),8.39-8.37(m,2H),8.06(s,1H),7.67(s,1H),7.37(d,J＝5.1Hz,1H),6.82(d,J＝5.1Hz,2H),6.45(s,1H),5.62(q,J＝7.2Hz,1H),2.37(s,3H),1.90(d,J＝7.2Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝0.946,[M+H]+＝370.2，方法＝K。
实施例123：
2-(4-(8-氨基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物203)、2-(4-(8-氨基-5,7-二氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物204)、(2S)-2-(4-(8-氨基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物205)和(2R)-2-(4-(8-氨基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物206)
将2-(4-[[8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-1H-吡唑-1-基)丙腈(0.20g，0.54mmol)和NCS(72mg，0.54mmol)在CH3CN(10mL)中的溶液在50℃加热。2小时后，将反应在真空中浓缩，且所得残余物依次经制备型HPLC和手性SFC提纯，得到4种异构体。化合物203：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.17(s,1H),8.42(d,J＝5.1Hz,1H),8.27(s,1H),8.10(s,1H),7.69(s,1H),7.40(d,J＝5.1Hz,1H),7.15(s,1H),6.32(s,1H),5.63(q,J＝7.2,1H),2.22(s,3H),1.89(d,J＝7.2,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.12,[M+H]+＝404.2，方法＝K。化合物204：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.26(s,1H),8.48(d,J＝5.1Hz,1H),8.29(s,1H),8.14(1H,s),7.70(s,1H),7.46(d,J＝5.1Hz,1H),7.16(s,1H),5.65(q,J＝7.2Hz,1H),2.17(s,3H),1.90(d,J＝7.2Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝2.20,[M+H]+＝438.1，方法＝K。化合物205：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.17(s,1H),8.42(d,J＝5.1Hz,1H),8.27(s,1H),8.07(s,1H),7.66(s,1H),7.39(d,J＝5.1Hz,1H),6.80(s,2H),5.61(q,J＝7.2Hz,1H),2.22(s,3H),1.89(d,J＝7.2Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.78,[M+H]+＝404.2，方法＝K。化合物206：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.17(s,1H),8.42(d,J＝5.1Hz,1H),8.27(s,1H),8.07(s,1H),7.66(s,1H),7.39(d,J＝5.1Hz,1H),6.80(s,2H),5.61(q,J＝7.2Hz,1H),2.22(s,3H),1.89(d,J＝7.2Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.78,[M+H]+＝404.2，方法＝K。
实施例124：
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物207)和(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物208)
步骤1：3-碘-4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶
在120℃将2-氯-3-碘-4-甲基吡啶(600mg，2.367mmol)、吡咯烷(336.71mg，4.73mmol)和DIEA(611.88mg，4.73mmol)在DMA(10.00mL)中的溶液加热。2小时后，将反应用水稀释(50mL)。所得溶液经乙酸乙酯萃取(2×50mL)。所收集的有机物在无水硫酸钠上干燥，过滤，并在真空中浓缩，得到粗品3-碘-4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶(630mg，92％)，其为深红色油状物。LCMS(ESI)：M+H+＝289.0。
步骤2：8-氯-6-[4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-胺
将(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)硼酸(926.4mg，4.17mmol)、3-碘-4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶(600mg，2.08mmol)、XPhos钯(II)联苯基-2-胺氯化物(328mg，0.42mmol)、X-Phos(397mg，0.83mmol)和碳酸钾(576mg，4.16mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(2.5mL)中的悬浮液在100℃加热。2小时后，过滤固体，并在真空中浓缩滤液。经快速柱色谱提纯(1:1乙酸乙酯/石油醚)，得到8-氯-6-[4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-胺(0.40g，57％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)：M+H+＝339.1。
步骤3：(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
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向冰冷却中的8-氯-6-[4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-胺(440mg，1.3mmol)、反式-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酸(180mg，1.08mmol)和吡啶(6.00mL,74.54mmol)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中逐滴添加POCl3(249mg，1.63mmol)。反应混合物温热至室温30分钟，并用水稀释(50mL)。所得溶液经二氯甲烷萃取(100mL)。有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤，并在真空中浓缩，得到粗品(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(0.40g，76％)，其为橙色固体。LCMS(ESI)：M+H+＝487.0。
步骤4：(±)-反式-N-(3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]-6-[4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基]异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(0.30g，0.62mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.50g，12.8mmol)、Pd2(dba)3CHCl3(148mg，0.14mmol)、BrettPhos(120mg，0.22mmol)和t-BuONa(152mg，1.58mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在100℃加热。4小时后，将反应在真空中浓缩，且所得残余物经快速柱色谱提纯(10％在石油醚中的乙酸乙酯→100％乙酸乙酯)，得到粗品(±)-反式-N-(3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]-6-[4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基]异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.20g，57％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)：M+H+＝568.0。
步骤5：(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺和(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺
在室温，将(±)-反式-N-(3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]-6-[4-甲基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基]异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.050g，0.088mmol)在4N HCl/1,4-二噁烷(5mL)中的溶液搅拌24小时。将反应在真空中浓缩，且所得残余物经手性SFC提纯，得到两种对映异构体。化合物207：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.22(s,1H),8.24(s,1H),7.93(d,J＝5.2Hz,1H),7.51(s,1H),7.38(s,1H),6.91(s,1H),6.67-6.60(m,2H),3.86(s,3H),3.15-3.07(m,4H),2.42-2.32(m,1H),2.15-2.04(m,4H),1.75-1.67(m,4H),1.57(dt,J＝9.1,4.5Hz,1H),1.33-1.20(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.14,[M+H]+＝467.0，方法＝K。化合物208：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.22(s,1H),8.24(s,1H),7.93(d,J＝5.3Hz,1H),7.51(s,1H),7.38(s,1H),6.91(s,1H),6.67-6.60(m,2H),3.86(s,3H),3.15-3.07(m,4H),2.37(dt,J＝9.7,4.4Hz,1H),2.14-2.04(m,4H),1.75-1.67(m,4H),1.57(dt,J＝9.3,4.6Hz,1H),1.33-1.20(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.38，[M+H]+＝467.0，方法＝K。
实施例125：
(±)-反式-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氯异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)环丙烷甲酰胺(化合物209)
步骤1：N-[5-(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁基酯
将6-溴-8-氯异喹啉-3-胺(5.8g，22mmol)、(5-[双[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-甲基吡啶-3-基)硼酸(16.0g，45.4mmol)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(3.3g，4.0mmol)和碳酸钠(4.81g，45.38mmol)在二噁烷(100mL)和水(10mL)中的悬浮液在85℃加热。16小时后，将反应过滤，并在真空中浓缩滤液。经快速柱色谱提纯(1％→50％乙酸乙酯/石油醚)，得到N-[5-(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁基酯(4.5g，41％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)：M+H+＝485,487。
步骤2：N-[3-氨基-6-(5-[双[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-[5-(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁基酯(5.0g，10.3mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(24g，205mmol)、BrettPhos(1.1g，2.05mmol)、Pd2(dba)3-CHCl3(2.13g，2.06mmol)和Cs2CO3(6.7g，20.6mmol)在1,4-二噁烷(120mL)中的悬浮液在85℃加热。3小时后，将反应在真空中浓缩，且所得残余物经快速柱色谱提纯(1％→10％二氯甲烷/甲醇)，得到N-[3-氨基-6-(5-[双[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(1.5g，26％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)：M+H+＝566.0。
步骤3：(±)-反式-N-[6-(5-[双[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-(氰基甲基)环丙烷]酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯
向冰冷却中的反式-2-(氰基甲基)环丙烷-1-甲酸(0.50g，3.40mmol)、N-[3-氨基-6-(5-[双[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(132mg，0.23mmol)和吡啶(4mL,50mmol)在二氯甲烷(20mL)的溶液中逐滴添加POCl3(401mg，2.62mmol)。将反应温热至室温1小时并随后用水稀释(20mL)。所得溶液经乙酸乙酯萃取(3×50mL)。合并的有机物在无水硫酸钠上干燥，过滤，并在真空中浓缩。经快速柱色谱提纯(1％→10％二氯甲烷/甲醇)，得到(±)-反式-N-[6-(5-[双[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-(氰基甲基)环丙烷]酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(330mg，12％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)：M+H+＝673.1。
步骤4：(±)-反式-N-[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)环丙烷-1-甲酰胺
在室温，向反式-N-[6-(5-[双[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-(氰基甲基)环丙烷]酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(0.060g，0.089mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加三氟乙酸(5mL)。2小时后，在真空中浓缩反应混合物，得到粗品反式-N-[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)环丙烷-1-甲酰胺(20.4mg，31％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)：M+H+＝473.1。
步骤5：(±)-反式-N-[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氯异喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)环丙烷-1-甲酰胺
将(±)-反式-N-[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)环丙烷-1-甲酰胺(110mg，0.30mmol)和NCS(39.5mg，0.30mmol)在CH3CN(10mL)中的溶液在60℃加热。6小时后，在真空中浓缩反应混合物，且所得残余物经制备型HPLC提纯，得到(±)-反式-N-[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氯异喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)环丙烷-1-甲酰胺(20.4mg，17％)，其为浅黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.95(s,1H),9.45(s,1H),8.24(s,1H),7.97(s,1H),7.56(s,1H),6.88(s,1H),6.54(s,2H),5.22(s,2H),2.77-2.70(m,2H),2.11-2.07(m,1H),1.82(s,3H),1.58–1.55(m,1H),1.15-1.08(m,1H),0.99-0.92(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.21,[M+H]+＝407.0，方法＝M。
实施例126：
(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物210)和(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物211)
按照(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物180)所述的程序并作出轻微的变化来制备标题化合物。对映异构体通过手性SFC分离。化合物210：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.28(s,1H),8.41(d,J＝5.1Hz,1H),8.26(s,1H),7.51(s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,2H),7.27(d,J＝5.1Hz,1H),7.16(s,1H),6.89(s,1H),6.53(d,J＝1.4Hz,1H),3.86(s,3H),3.71(s,3H),2.36(ddd,J＝9.6,6.3,4.0Hz,1H),2.18(s,3H),2.14-2.05(m,1H),1.56(dt,J＝9.1,4.6Hz,1H),1.27-1.20(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.09,[M+H]+＝479.3，方法＝K。化合物211：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.28(s,1H),8.41(d,J＝5.1Hz,1H),8.26(s,1H),7.51(s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,2H),7.27(d,J＝5.1Hz,1H),7.16(s,1H),6.89(s,1H),6.53(d,J＝1.4Hz,1H),3.86(s,3H),3.71(s,3H),2.36(ddd,J＝9.8,6.4,4.0Hz,1H),2.18(s,3H),2.14-2.07(m,1H),1.56(dt,J＝9.2,4.6Hz,1H),1.28-1.19(m,1H)LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.09,[M+H]+＝479.3，方法＝K。
实施例127：
(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物212)、(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物213)、(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物214)和(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物215)
按照(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物195)所述的程序并作出轻微的变化来制备标题化合物。通过手性SFC分离异构体。化合物212：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.26(s,1H),8.45-8.43(m,2H),8.34(s,1H),7.48(s,1H),7.45(d,J＝6.0Hz 1H),7.35(s,1H),7.03(s,1H),6.70(d,J＝3.0Hz,1H),3.86(s,3H),2.41(s,3H),2.34(dd,J＝6.5,4.8Hz,1H),2.17(dd,J＝9.1,4.9Hz,1H),1.66(dt,J＝8.9,6.2Hz,1H),1.37(d,J＝6.2Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝0.95,[M+H]+＝413.4，方法＝N。化合物213：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.26(s,1H),8.46-8.37(m,2H),8.32(s,1H),7.52(s,1H),7.41(d,J＝4.8Hz,2H),7.04(s,1H),6.69(d,J＝3.0Hz,1H),3.89(s,3H),2.52(dd,J＝9.3,4.7Hz,1H),2.39(s,3H),1.99(t,J＝4.7Hz,1H),1.82-1.72(m,1H),1.07(d,J＝6.3Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝0.75,[M+H]+＝413.2，方法＝K。化合物214：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.24(s,1H),8.42(d,J＝5.4Hz,2H),8.33(s,1H),7.53(s,1H),7.41(t,J＝2.6Hz,2H),7.01(s,1H),6.70(d,J＝3.0Hz,1H),3.90(s,3H),2.53(dd,J＝9.2,4.7Hz,1H),2.39(s,3H),2.00(t,J＝4.7Hz,1H),1.77(ddd,J＝9.4,6.1,4.7Hz,1H),1.07(d,J＝6.2Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝0.74,[M+H]+＝413.3，方法＝K。化合物215：1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.31(s,1H),8.49-8.39(m,2H),8.34(s,1H),7.55-7.41(m,2H),7.35(s,1H),7.03(s,1H),6.70(d,J＝3.0Hz,1H),3.86(s,3H),2.41(s,3H),2.34(dd,J＝6.5,4.9Hz,1H),2.17(dd,J＝9.1,4.9Hz,1H),1.66(dt,J＝9.0,6.3Hz,1H),1.37(d,J＝6.2Hz,3H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝0.95,[M+H]+＝413.3，方法＝N。
实施例128：
(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(2,6-二氯苯基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物216)和(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(2,6-二氯苯基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物217)
按照(±)-反式-N-(8-氨基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物123)所述的程序并作出轻微的变化来制备标题化合物。对映异构体通过手性SFC分离。化合物216：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H),9.32(s,1H),8.26(s,1H),7.63-7.55(m,3H),7.48-7.41(m,1H),7.29(s,1H),6.79(s,1H),6.40(s,1H),6.35(s,2H),3.77(s,3H),2.21-2.16(m,2H),1.39-1.35(m,1H),1.19-1.14(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.30,[M+H]+＝452.1，方法＝K。化合物217：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H),9.32(s,1H),8.26(s,1H),7.65-7.51(m,3H),7.46(dd,J＝8.7,7.5Hz,1H),7.30(s,1H),6.79(s,1H),6.40(s,1H),6.35(s,2H),3.78(s,3H),2.23-2.13(m,2H),1.42-1.33(m,1H),1.21-1.12(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.31,[M+H]+＝452.2，方法＝K。
实施例129：
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(2,6-二氟苯基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物218)和(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(2,6-二氟苯基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物219)
按照(±)-反式-N-(8-氨基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物123)所述的程序并作出轻微的变化来制备标题化合物。通过手性SFC分离单一异构体。化合物218：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.24(s,1H),8.30(s,1H),7.51(s,1H),7.44(ddd,J＝8.5,6.3,2.1Hz,1H),7.38(s,1H),7.10(t,J＝8.0Hz,3H),6.78(s,1H),3.86(s,3H),2.37(td,J＝6.1,3.2Hz,1H),2.11(dt,J＝8.7,4.7Hz,1H),1.57(ddd,J＝9.2,5.1,4.1Hz,1H),1.26(ddd,J＝8.2,6.4,4.1Hz,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.49,[M+H]+＝420.2，方法＝K。化合物219：1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.24(s,1H),8.30(s,1H),7.51(s,1H),7.44(ddd,J＝8.5,6.3,2.1Hz,1H),7.38(s,1H),7.10(t,J＝8.0Hz,3H),6.78(s,1H),3.86(s,3H),2.37(td,J＝6.1,3.2Hz,1H),2.11(dt,J＝8.7,4.7Hz,1H),1.57(ddd,J＝9.2,5.1,4.1Hz,1H),1.26(ddd,J＝8.2,6.4,4.1Hz,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.49,[M+H]+＝420.2，方法＝K。
实施例130：
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(2-氰基-6-甲基苯基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物220)和(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(2-氰基-6-甲基苯基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物221)
按照(±)-反式-N-(8-氨基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-氰基环丙烷甲酰胺(化合物123)所述的程序并作出轻微的变化来制备标题化合物。通过手性SFC分离对映异构体。化合物220：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.14(s,1H),9.37(s,1H),8.24(s,1H),7.76(d,J＝5.5Hz,1H),7.66(d,J＝5.5Hz,1H),7.50(t,J＝5.8Hz,1H),6.86(s,1H),6.46(d,J＝7.2Hz,3H),2.78-2.72(m,1H),2.16-2.10(m,4H),1.62-1.57(m,1H),1.45-1.43(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.55,[M+H]+＝368.2，方法＝M。化合物221：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.14(s,1H),9.37(s,1H),8.24(s,1H),7.76(d,J＝5.5Hz,1H),7.66(d,J＝5.5Hz,1H),7.50(t,J＝5.8Hz,1H),6.86(s,1H),6.46(d,J＝7.2Hz,3H),2.78-2.72(m,1H),2.16-2.10(m,4H),1.62-1.57(m,1H),1.45-1.43(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.55,[M+H]+＝368.2，方法＝M。
实施例131：
(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物222)和(1R,2R)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物223)
按照(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(化合物180)所述的程序并作出轻微的变化来制备标题化合物。通过手性SFC分离对映异构体。化合物222：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)10.74(s,1H),9.27(s,1H),8.48(d,J＝6.0Hz,1H),8.19(s,1H),7.56(s,1H),7.38-7.29(m,3H),6.71(s,1H),6.33(s,1H),6.20(s,2H),5.77(s,1H),3.77(s,3H),3.68(s,3H),2.18(t,J＝6.0Hz,2H),2.09(s,3H),1.35-1.34(m,1H),1.17–1.15(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.10,[M+H]+＝479.3，方法＝K。化合物223：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)10.74(s,1H),9.27(s,1H),8.48(d,J＝6.0Hz,1H),8.19(s,1H),7.56(s,1H),7.38-7.29(m,3H),6.71(s,1H),6.33(s,1H),6.20(s,2H),5.77(s,1H),3.77(s,3H),3.68(s,3H),2.18(t,J＝6.0Hz,2H),2.09(s,3H),1.35-1.34(m,1H),1.17-1.15(m,1H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.10,[M+H]+＝479.3，方法＝K。
实施例132：
外型-N-(8-氨基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺(化合物224)、外型-N-(8-氨基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺(化合物225)和外型-N-(8-氨基-5,7-二氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺(化合物226)
步骤1：(外型)-3-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]-N-[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-1-甲基双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺
向冰冷却中的(外型)-3-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]双环[3.1.0]己烷-6-甲酸(289mg，0.75mmol)(WO2015091889)、8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(488mg，1.80mmol)和吡啶(1mL)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中逐滴添加POCl3(491mg，3.20mmol)。将反应温热至室温30分钟，并随后用水稀释(10mL)。该溶液经乙酸乙酯萃取(3×50mL)。合并的有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤，并在真空中浓缩。经快速柱色谱提纯(1:1乙酸乙酯/石油醚)，得到(外型)-3-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]-N-[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-1-甲基双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺(0.30g，61％)，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI)：M+H+＝632.2。
步骤2：N-[6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[(外型)-3-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]双环[3.1.0]己烷-6-酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯
将(外型)-3-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]-N-[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺(0.40g，0.63mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.85mg，0.02mmol)、Pd2(dba)3(130mg，0.14mmol)、Cs2CO3(819mg，2.51mmol)和BrettPhos(135mg，0.25mmol)在二噁烷(10mL)中的悬浮液在120℃加热。2小时后，将反应过滤，并在真空中浓缩滤液。经快速柱色谱提纯(1:1乙酸乙酯/石油醚)，得到N-[6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[(外型)-3-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]双环[3.1.0]己烷-6-酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(315mg，70％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：M+H+＝713.3。
步骤3：(外型)-N-[8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)甲基]双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺
/>
在室温，将N-[6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[(外型)-3-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)甲基]双环[3.1.0]己烷-6-酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(630mg，0.88mmol)在三氟乙酸(6mL)和二氯甲烷(30mL)中的溶液搅拌1小时。将反应在真空中浓缩，且残余物用DCM(20mL)稀释。该混合物用NH3的甲醇溶液(7M)碱化至pH＝8，并浓缩。经快速柱色谱提纯，得到(外型)-N-[8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)甲基]双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺(480mg，89％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：M+H+＝613.3。
步骤4：(外型)-N-(8-氨基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺、(外型)-N-(8-氨基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺和(外型)-N-(8-氨基-5,7-二氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺
将(外型)-N-[8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)甲基]双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺(320mg，0.52mmol)和NCS(35mg，0.52mmol)在CH3CN(10mL)中的溶液在50℃加热。1小时后，添加额外的NCS(35mg，0.52mmol)，并将该溶液保持在50℃另外2小时。将反应在真空下浓缩，且所得残余物经快速柱色谱提纯(10:1二氯甲烷/甲醇)，得到(外型)-N-(8-氨基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺、(外型)-N-(8-氨基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺和(外型)-N-(8-氨基-5,7-二氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺(0.30g，89％)的混合物，其为固体。LCMS(ESI)：M+H+＝647.3,681.2；
步骤5：(外型)-N-(8-氨基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺和(外型)-N-(8-氨基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺和(外型)-N-(8-氨基-5,7-二氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-羟基双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺
在室温，向(外型)-N-(8-氨基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺、(外型)-N-(8-氨基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺和(外型)-N-(8-氨基-5,7-二氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)双环[3.1.0]己烷-6-甲酰胺(0.30g)在四氢呋喃(10mL)中的混合物添加TBAF(1.03g，3.93mmol)。30分钟后，将反应在真空中浓缩，且该粗产物经制备型HPLC提纯，得到3种产物。化合物224：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)10.59(s,1H),9.44(s,1H),8.49(d,J＝6.0Hz,1H),8.32(s,1H),8.23(s,1H),7.37(d,J＝6.0Hz,1H),6.91(s,1H),6.57(s,2H),4.70(d,J＝6.0Hz,1H),3.85-3.78(m,1H),2.11(s,3H),2.09-2.04(m,2H),1.89-1.87(m,1H),1.73-1.71(m,2H),1.69-1.61(m,2H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝2.236,[M+H]+＝409.1，方法＝K。化合物225：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)10.70(s,1H),9.37(s,1H),8.62(s,1H),8.49(d,J＝6.0Hz,1H),8.32(s,1H),7.38(d,J＝6.0Hz,1H),6.54(s,2H),6.44(s,1H),4.71(d,J＝6.0Hz,1H),3.83-3.78(m,1H),2.12(s,3H),2.09-2.05(m,2H),1.92-1.90(m,1H),1.76-1.74(m,2H),1.69-1.62(m,2H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.029,[M+H]+＝409.2，方法＝K。化合物226：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)10.79(s,1H),9.53(s,1H),8.64(s,1H),8.53(d,J＝6.0Hz,1H),8.29(s,1H),7.43(d,J＝6.0Hz,1H),6.77(s,2H),4.71(d,J＝6.0Hz,1H),3.85-3.79(m,1H),2.12-2.08(m,2H),2.05(s,3H),1.92-1.90(m,1H),1.75-1.74(m,2H),1.69-1.62(m,2H)。LCMS(ESI)：RT(分钟)＝1.205,[M+H]+＝443.1，方法＝L。
实施例133：
1-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-
基)-3-(环丙基甲基)脲(化合物29)
步骤1：7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(1.14g，3.54mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(518.19mg，0.71mmol)、碳酸钾(1.47g，10.62mmol)和8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(2.0g，5.32mmol)在1,4-二噁烷(20mL)/水(4mL)中的溶液在90℃搅拌1小时。过滤后，在真空中浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(3/1)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(1.5g，3.37mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝445.1。
步骤2：7-(8-氯-7-氟-3-(((4-硝基苯氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(200mg，0.45mmol)、吡啶(106.68mg，1.35mmol)和氯甲酸4-硝基苯基酯(135.92mg，0.67mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液在室温搅拌2小时。所得溶液无需加工直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝610。
步骤3：7-[8-氯-3-(环丙基甲基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
向7-[8-氯-7-氟-3-[(4-硝基苯氧基)羰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯的溶液中添加环丙烷甲胺(34.98mg，0.49mmol)和吡啶(77.8mg，0.98mmol)。将反应在25℃搅拌2小时。在真空中浓缩溶剂。残余物经反相快速提纯(C18柱，CH3CN/H2O＝0-80％，在40分钟内)，得到7-[8-氯-3-(环丙基甲基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(150mg，0.28mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝542。
步骤4：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(环丙基甲基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
将1-[8-氯-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-(环丙基甲基)脲(150mg，0.28mmol)和碳酸铯(353.92mg，1.09mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(74.96mg，0.07mmol)、2-(二环己基膦基)3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯(77.74mg，0.14mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液在90℃搅拌3小时。过滤后，在真空中浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(环丙基甲基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(130mg，0.21mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝623。
步骤5：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-(环丙基甲基)脲
将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(环丙基甲基氨基甲酰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(130mg，0.21mmol)和三氟乙酸(2mL)在二氯甲烷(4mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空中浓缩溶剂。残余物经制备型HPLC提纯(XBridge Prep C18OBD柱19×150mm 5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)：CH3CN＝30％ B至50％ B，在7分钟内；25mL/分钟)，得到1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-(环丙基甲基)脲(49.8mg，0.12mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝423。1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.21(s,1H),7.53(s,1H),7.35(s,1H),6.86(d,J＝6.2Hz,1H),4.42-4.35(m,2H),3.48(t,J＝4.4Hz,2H),3.18(d,J＝6.9Hz,2H),2.00(d,J＝1.7Hz,3H),1.11-1.08(m,1H),0.58-0.50(m,2H),0.29-0.27(m,2H)。
实施例134：
(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物9)；(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物10)；(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物11)和(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物12)
步骤1：7-(8-氯-3-((1S,3S)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基)-7-氟异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(1.6g，3.6mmol)和2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸(908.09mg，4.68mmol)在二氯甲烷(30mL)和吡啶(6mL)中的溶液在0℃搅拌3分钟。在0℃添加三氯氧化磷(1.1g，7.19mmol)并将该混合物在25℃搅拌30分钟。所得溶液经二氯甲烷萃取。合并有机层并浓缩，得到7-[8-氯-3-[[(1S,2S)-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(1.4g，2.25mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝621。
步骤2：7-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基)-7-氟异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
将7-[8-氯-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(1.4g，2.25mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(6.6g，56.35mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)氯仿加合物(466.59mg，0.45mmol)、2-(二环己基膦基)3,6-二甲氧基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯基(483.27mg，0.90mmol)和碳酸铯(3.67g，11.27mmol)在1,4-二噁烷(80mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。在真空中浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(1g，1.42mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝702。
步骤3：(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺；(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺；(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺和(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(1.0g，1.42mmol)和2,2,2-三氟乙酸(10mL)在二氯甲烷(50mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空中浓缩该混合物。用NH3.H2O将反应混合物调节至pH为10。该粗产物经制备型HPLC使用以下条件提纯：柱：XBridge Prep OBD C18柱30×150mm 5um；流动相A：水(10mmol/L碳酸氢钠)，流动相B：CAN；流速：60mL/分钟；梯度：25％ B至47％ B，在7分钟内；254/220nm；Rt：6.13分钟，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(400mg，0.80mmol)的异构体混合物，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝502。经手性SFC将混合物分离成4种异构体(对于异构体的环丙烷立体化学：吡唑相对于酰胺是反式的；任意指定甲基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物9：(28.7mg，0.057mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.401分钟(CHIRALPAK IE-3,0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):MeOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝502；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.68(s,1H),9.38(s,1H),8.30(s,1H),7.52(s,1H),7.33(s,1H),7.25(d,J＝0.8Hz,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),4.30(s,2H),3.77(s,3H),3.37(s,2H),2.26-2.17(m,2H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H),1.86-1.43(m,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,1H)。化合物10：(22.5mg，0.045mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.090分钟(修复的手性IA，0.46*10cm；5μm；MtBE(0.1％DEA):MeOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝502；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.68(s,1H),9.38(s,1H),8.30(s,1H),7.52(s,1H),7.33(s,1H),7.25(d,J＝0.8Hz,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),4.30(s,2H),3.77(s,3H),3.38(s,2H),2.35-2.12(m,2H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H),1.84-1.38(m,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,1H)。化合物12：(89.3mg，0.18mmol)，其为黄色固体。保留时间：4.15分钟(修复的手性IA,0.46*10cm；5μm；MtBE(0.1％DEA):MeOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝502；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),9.40(s,1H),8.28(s,1H),7.53(s,1H),7.33(s,1H),7.29(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),4.29(s,2H),3.80(s,3H),3.37(s,2H),2.37-2.29(m,1H),2.17(t,J＝4.7Hz,1H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H),1.58-1.44(m,1H),1.30-1.16(m,2H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H)。化合物11：(113.1mg，0.23mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.66分钟(CHIRALPAK IE-3,0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):MeOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝502；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),9.40(s,1H),8.29(s,1H),7.53(s,1H),7.33(s,1H),7.29(s,1H)6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),4.29(s,2H),3.80(s,3H),3.37(s,2H),2.38-2.29(m,1H),2.17(t,J＝4.7Hz,1H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H),1.58-1.44(m,1H),1.30-1.16(m,2H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例135：
(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(假定的)(化合物36)、(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(假定的)(化合物35)、(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(假定的)(化合物34)和(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(假定的)(化合物33)
步骤1：乙基二苯基锍四氟硼酸盐
在氮气下，向AgBF4(37.48g，192.53mmol)在二氯甲烷(450mL)中的溶液中添加碘乙烷(30g，192.35mmol)。在室温，搅拌溶液30分钟。添加(苯基硫烷基)苯(106.92g，573.99mmol)，并随后在35℃搅拌16小时。将混合物过滤并且在真空中浓缩滤液。残余物用二氯甲烷/乙醚(1/1)洗涤，得到乙基二苯基锍四氟硼酸盐(25g，116.28mmol)，其为灰白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝215。
步骤2：反式-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸叔丁基酯
在-78℃，向乙基(二苯基)锍(1.55g，7.2mmol)在二氯甲烷(2mL)和1,2-二甲氧基乙烷(20mL)中的溶液中添加二异丙基酰胺锂(4.2mL,8.4mmol)。在-78℃搅拌所得溶液1小时。在-78℃添加(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯酸叔丁基酯(500mg，2.4mmol)。将该混合物在25℃搅拌6小时。用水淬灭反应并随后用二氯甲烷萃取。合并有机层，在无水硫酸钠上干燥，并在真空下浓缩，得到反式-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸叔丁基酯(550mg，粗品)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝237。
步骤3：(+/-)-反式-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸叔丁基酯
将反式-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸叔丁基酯(500mg，粗品)在二氯甲烷(3mL)和2,2,2-三氟乙酸(4mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。用甲醇中的氨(7mol/L)将反应混合物调节至pH为7。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％HCl)，得到2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸的4种立体异构体混合物，其中吡唑相对于甲酸是反式的(180mg，0.99mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝181。
步骤4：7-[8-氯-7-氟-3-[[(1S)-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
在25℃，向反式-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸(182.27mg，1.01mmol)在二氯甲烷(15mL)和吡啶(3mL)中的溶液中添加7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(450mg，1.01mmol)。在25℃搅拌所得溶液20分钟。添加三氯氧化磷(309.51mg，2.02mmol)，并在25℃搅拌30分钟。将反应用水淬灭并随后用二氯甲烷萃取。合并有机层，在无水硫酸钠上干燥，并在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(9:1)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-[[(1S)-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(320mg，0.53mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝607。
步骤5：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S)-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
在25℃，向7-[8-氯-7-氟-3-[[(1S)-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(420mg，0.69mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(2.43g，20.76mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(143.21mg，0.14mmol)和Brettphos(148.61mg，0.28mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的溶液中添加碳酸铯(902.15mg，2.77mmol)。所得溶液在90℃搅拌3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S)-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(450mg，0.65mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝688。
步骤6：(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺、(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺、(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺和(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[(1S)-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(800mg，1.16mmol)在二氯甲烷(10mL)和2,2,2-三氟乙酸(10mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。该粗产物经制备型HPLC提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠：ACN＝20％-50％，在7分钟内)，得到混合物(260mg，0.44mmol)，其为黄色固体。经手性-HPLC分离混合物，得到4种异构体(对于每种异构体的环丙烷立体化学：吡唑相对于酰胺是反式的；任意指定甲基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物33：(27.3mg，0.056mmol)，其为黄色固体。保留时间：3.92分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.3％IPAmine):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝488.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.68(s,1H),9.39(s,1H),8.32(s,1H),7.53(s,1H),7.34(s,1H),7.26(s,1H),6.86(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.68(s,1H),4.30-4.29(m,2H),3.77(s,3H),3.38-3.37(m,2H),2.28-2.12(m,2H),1.94(s,3H),1.64-1.50(m,1H),1.28(d,J＝6.1Hz,3H)。化合物34：(26.6mg，0.055mmol)，其为黄色固体。保留时间：5.736分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.3％IPAmine):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝488.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.68(s,1H),9.39(s,1H),8.32(s,1H),7.53(s,1H),7.34(s,1H),7.26(s,1H),6.86(d,J＝6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.68(s,1H),4.30-4.29(m,2H),3.77(s,3H),3.38-3.37(m,2H),2.28-2.12(m,2H),1.94(s,3H),1.64-1.50(m,1H),1.28(d,J＝6.1Hz,3H)。化合物35：(72.6mg，0.15mmol)，其为黄色固体。保留时间：7.063分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.3％IPAmine):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝488.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),9.41(s,1H),8.29(s,1H),7.55(s,1H),7.32(s 1H),7.29(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.68(s,1H),4.30-4.29(m,2H),3.81(s,3H),3.38-3.37(m,2H),2.31(dd,J＝9.1,4.5Hz,1H),2.12(t,J＝4.6Hz,1H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H),1.67-1.54(m,1H),0.97(d,J＝6.3Hz,3H)。化合物36：(80.2mg，0.16mmol)，其为黄色固体。保留时间：9.167分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.3％IPAmine):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝488.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),9.41(s,1H),8.29(s,1H),7.55(s,1H),7.32(s 1H),7.29(s,1H),6.84(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.68(s,1H),4.30-4.29(m,2H),3.81(s,3H),3.38-3.37(m,2H),2.31(dd,J＝9.1,4.5Hz,1H),2.12(t,J＝4.6Hz,1H),1.93(d,J＝1.6Hz,3H),1.67-1.54(m,1H),0.97(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例136：
2-((8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
(化合物233)
步骤1：7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(1.14g，3.54mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(518.19mg，0.71mmol)、碳酸钾(1.47g，10.62mmol)和8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(2.0g，5.32mmol)在1,4-二噁烷(20ml)和水(4mL)中的溶液在90℃搅拌1小时。将反应冷却至室温，并随后过滤。在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(3/1)洗脱，得到7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(1.5g，3.37mmol)，其为黄色固体。
步骤2：7-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
将7-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(200mg，0.44mmol)和2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(147mg，0.52mmol)、t-BuBrettphos Pd G3(77mg，0.08mmol)、t-BuBrettphos(104mg，0.16mmol)、碳酸铯(439mg，1.36mmol)在1,4-二噁烷(40mL)中的溶液在120℃搅拌1小时。过滤后，在真空中浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到7-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(150mg，0.024mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝517.24。
步骤3：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
将7-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(150mg，0.24mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(552.4mg，4.8mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(48.82mg，0.048mmol)、2-(二环己基膦基)3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯(50.63mg，0.096mmol)和碳酸铯(230.49mg，0.71mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液在90℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(100mg，0.14mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝717.8。
步骤4：2-[[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(100mg，0.07mmol)和三氟乙酸(2mL,0.07mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂并随后用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为9。残余物经制备型HPLC提纯(SunFire Prep C18OBD柱19×150mm 5μm 10nm；水(0.1％FA)：CAN＝9％B至30％ B，在7分钟内；25mL/分钟)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(10mg，0.019mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝517.24。1HNMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.11(s,1H),7.59(s,1H),7.36(s,1H),6.81(d,J＝6.2Hz,1H),6.03(s,1H),5.03(s,2H),4.77-4.68(m,1H),4.39(t,J＝4.4Hz,2H),3.89-3.79(m,2H),3.48(t,J＝4.4Hz,2H),3.10(t,J＝6.1Hz,2H),2.02(s,3H),1.21(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例137：
1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1R)-1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基]脲(化合物111)和
1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1S)-1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基]脲(化合物112)
步骤1：7-[8-氯-7-氟-3-[1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
使用7-(8-氯-7-氟-3-(((4-硝基苯氧基)羰基)氨基)异喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯，以类似于对实施例133(化合物29)所述的方式制备标题化合物。LCMS(ESI)[M+H]+＝596.1。
步骤3：7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯
使用7-[8-氯-7-氟-3-[1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯，以类似于实施例133(化合物29)所述的方式制备标题化合物。LCMS(ESI)[M+H]+＝677.3。
步骤4：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1R)-1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基]脲(化合物111)和1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1S)-1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基]脲(化合物112)
将7-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基氨基甲酰基氨基]-6-异喹啉基]-8-甲基-2,3-二氢吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-甲酸叔丁基酯(80mg，0.12mmol)和三氟乙酸(2mL,25.96mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。将反应溶液在真空下浓缩并随后用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为8。残余物经制备型HPLC(X-Bridge Prep C18OBD 5μm,19*150mm；水(10mmol/L碳酸氢钠)：ACN＝5％ B至45％ B，在9分钟内)和手性-HPLC提纯，得到两种对映异构体：化合物111：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[(1R)-(1-甲基吡唑-4-基)乙基]脲(假定的)(20.6mg，0.043mmol)，其为黄色固体。Rt＝2.634分钟(Lux Cellulose-4,0.46*15cm；3μm,MtBE(0.1％DEA)：EtOH＝50:50,1.0ml/分钟)。LCMS(ESI)[M+H]+＝477.2；1HNMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.21(s,1H),7.61(s,1H),7.58(s,1H),7.51(s,1H),7.38(s,1H),6.89(d,J＝6.2Hz,1H),5.08-5.02(m,1H),4.42(t,J＝4.2Hz,2H),3.89(s,3H),3.51(t,J＝4.2Hz,2H),2.03(s,3H),1.57(d,J＝6.8Hz,3H)。化合物112：1-[8-氨基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-7-基)-3-异喹啉基]-3-[1(S)-(1-甲基吡唑-4-基)乙基]脲(20.7mg，0.043mmol)，其为黄色固体。Rt＝3.544(Lux Cellulose-4,0.46*15cm,3μm；MtBE(0.1％DEA)：EtOH＝50:50,1.0ml/分钟)。LCMS(ESI)[M+H]+＝477.2；1HNMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.21(s,1H),7.61(s,1H),7.58(s,1H),7.51(s,1H),7.38(s,1H),6.89(d,J＝6.2Hz,1H),5.08-5.02(m,1H),4.42(t,J＝4.2Hz,2H),3.89(s,3H),3.51(t,J＝4.2Hz,2H),2.03(s,3H),1.57(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例138：
2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(化合物234)
步骤1：(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((5,5-二甲基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-7-氟异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
/>
在氮气下，将2-溴-5,5-二甲基-6,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(66.34mg，0.26mmol)、N-[5-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(100.0mg，0.17mmol)、t-BuBrettphosPdG3(58.53mg，0.07mmol)、t-BuBrettphos(41.55mg，0.09mmol)和碳酸铯(167.57mg，0.51mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在120℃搅拌1小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(98/2)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(5,5-二甲基-7-氧代-6,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.08mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝761。
步骤2：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5,5,6-三甲基-7-氧代-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(80.0mg，0.10mmol)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)在二氯甲烷(6mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为9。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ FA)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(30.5mg，0.06mmol)，其为橙色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝461.2；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),9.10(s,1H),7.99(s,1H),7.76-7.65(m,3H),6.73(d,J＝6.0Hz,1H),6.07(s,2H),6.04(s,1H,5.41(s,2H),4.83(s,2H),3.05(s,2H),1.96(d,J＝1.5Hz,3H),1.18(s,6H)。
实施例139：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-5,5,6-三甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物235)/>
步骤1：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5,5,6-三甲基-7-氧代-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(65.28mg，0.24mmol)、N-[5-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.17mmol)、t-BuBrettphosPdG3(58.53mg，0.07mmol)、t-BuBrettphos(41.55mg，0.09mmol)和碳酸铯(167.57mg，0.51mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在120℃搅拌1小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(100/3)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5,5,6-三甲基-7-氧代-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(80mg，0.10mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝775。
步骤2：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮；甲酸
/>
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5,5,6-三甲基-7-氧代-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(80mg，0.10mmol)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)在二氯甲烷(6mL)中的混合物在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为9。在真空下浓缩该混合物。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ FA)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-5,5,6-三甲基-4,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮；甲酸(30.5mg，0.059mmol)，其为橙色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝475；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),9.11(s,1H),7.98(s,1H),7.69-7.67(d,J＝7.2Hz,2H),6.70-6.69(d,J＝7.2Hz,1H),6.05(s,3H),5.26(s,2H),4.94(s,2H),3.20(s,2H),2.76(s,3H),1.93(s,3H),1.28(s,6H)。
实施例140：
(1S,2S,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物239)、
(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物237)、
(1R,2R,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物238)和
(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物236)
步骤1：反式-2-(苄基氧基甲基)-3-甲基环丙烷甲酸叔丁基酯
使用(E)-4-(苄基氧基)叔-2-烯酸叔丁基酯，以类似于对实施例135(化合物36)所述的方式制备标题化合物。LCMS(ESI)[M+H]+＝277。
步骤2：反式-2-(苄基氧基甲基)-3-甲基环丙烷甲酸
使用反式-2-(苄基氧基甲基)-3-甲基环丙烷甲酸叔丁基酯，以类似于对实施例135(化合物36)所述的方式制备标题化合物。LCMS(ESI)[M+H]+＝221。
步骤3：反式-N-[5-[3-[[2-(苄基氧基甲基)-3-甲基-环丙烷羰基]氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯
使用反式-2-(苄基氧基甲基)-3-甲基-环丙烷甲酸，以类似于对实施例135(化合物36)所述的方式制备标题化合物。LCMS(ESI)[M+H]+＝705。
步骤4：N-[5-[3-[[反式-2-(苄基氧基甲基)-3-甲基-环丙烷羰基]氨基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯
使用反式-N-[5-[3-[[2-(苄基氧基甲基)-3-甲基-环丙烷羰基]氨基]-8-氯-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯，以类似于对实施例135(化合物36)所述的方式制备标题化合物。
LCMS(ESI)[M+H]+＝786。
步骤5：反式-N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[2-(羟基甲基)-3-甲基-环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
在氢气气氛下，将反式-N-[5-[3-[[2-(苄基氧基甲基)-3-甲基-环丙烷羰基]氨基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(1.1g，1.4mmol)和Pd(OH)2/C(979.77mg，1.4mmol)在甲醇(30mL)中的溶液在25℃搅拌36小时。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到反式-N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[2-(羟基甲基)-3-甲基-环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(450mg，0.65mmol)，其为有色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝696。
步骤6：甲磺酸反式-[2-[[6-[5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酰基]-3-甲基-环丙基]甲基酯
在0℃，向反式-N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[2-(羟基甲基)-3-甲基-环丙烷羰基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(450mg，0.65mmol)和三乙胺(195.97mg，1.94mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中添加甲磺酰氯(187.56mg，1.29mmol)。在25℃搅拌所得溶液1小时。将反应用水淬灭，用二氯甲烷萃取，并在无水硫酸钠上干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到甲磺酸反式-[2-[[6-[5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酰基]-3-甲基-环丙基]甲基酯(450mg，0.58mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝774。
步骤7：反式-N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基-环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将甲磺酸反式-[2-[[6-[5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基甲酰基]-3-甲基-环丙基]甲基酯(450mg，0.58mmol)和氰化钾(113.39mg，1.74mmol)在二甲基亚砜(10mL)中的溶液在60℃搅拌12小时。将反应用硫酸亚铁溶液淬灭，并随后用乙酸乙酯萃取。有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤并在真空下浓缩，得到反式-N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基-环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(400mg，0.57mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝705。
步骤8：(1S,2S,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺、(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺、(1R,2R,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺、(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺
使用反式-N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基-环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(400mg，0.57mmol)，以类似于对实施例135(化合物36)所述的方式制备标题化合物。经手性SFC分离提纯该混合物，得到4种异构体(对于每种异构体的环丙烷立体化学：氰基甲基相对于酰胺是反式的；任意指定甲基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物236：(14.5mg，0.036mmol)，其为黄色固体。保留时间：8.931分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):MeOH＝95:5；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝405.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),9.38(s,1H),8.27(s,1H),7.97(s,1H),7.63(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.22(s,2H),2.82-2.59(m,2H),2.06(dd,J＝9.1,4.7Hz,1H),1.89(d,J＝1.4Hz,3H),1.54-1.48(m,1H),1.34(dt,J＝8.9,6.1Hz,1H),1.14(d,J＝6.1Hz,3H)。化合物237：(14.7mg，0.036mmol)，其为黄色固体。保留时间：10.678分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):MeOH＝95:5；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝405.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),9.38(s,1H),8.27(s,1H),7.97(s,1H),7.63(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.22(s,2H),5.22(s,2H),2.82-2.59(m,2H),2.06(dd,J＝9.1,4.7Hz,1H),1.89(d,J＝1.4Hz,3H),1.54-1.48(m,1H),1.34(dt,J＝8.9,6.1Hz,1H),1.14(d,J＝6.1Hz,3H)。化合物238：(15.3mg，0.038mmol)，其为黄色固体。保留时间：4.185分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝80:20；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝405.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),9.38(s,1H),8.23(s,1H),7.97(s,1H),7.64(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.23(s,2H),5.24(s,2H),2.86-2.58(m,2H),1.89(d,J＝1.5Hz,3H),1.76(t,J＝4.5Hz,1H),1.70-1.53(m,1H),1.52-1.38(m,1H),1.15(d,J＝6.4Hz,3H)。化合物239：(15.5mg,0.038mmol)，其为黄色固体。保留时间：6.037分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝80:20；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝405.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),9.38(s,1H),8.23(s,1H),7.97(s,1H),7.64(s,1H),6.83(d,J＝6.2Hz,1H),6.23(s,2H),5.24(s,2H),2.86-2.58(m,2H),1.89(d,J＝1.5H)。
实施例141：
2-((8-氨基-7-氟-6-((2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物240)/>
步骤1：2-甲氧基-3-吡啶基)甲醇
在氮气下、在0℃，将2-甲氧基烟酸(200.0mg，1.31mmol)和硼烷四氢呋喃配合物溶液(1mol/L)(4mL,3.92mmol)的溶液在四氢呋喃(5mL)中搅拌。在25℃搅拌所得溶液1小时。将反应用甲醇淬灭(2mL)。在真空下浓缩溶剂，得到2-甲氧基-3-吡啶基)甲醇(150mg，1.08mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝139.2。
步骤2：3-(溴甲基)-2-甲氧基吡啶
将(2-甲氧基-3-吡啶基)甲醇(1.0g，7.19mmol)和SOCl2(2.56g，21.55mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在25℃搅拌3小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(5/95)洗脱，得到3-(氯甲基)-2-甲氧基吡啶(500mg，3.17mmol)，其为黄色油状物。LC/MS(ESI)[M+H]+＝157.6。
步骤3：(7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-6-((2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)硼酸(86.96mg，0.17mmol)、3-(溴甲基)-2-甲氧基-吡啶(40.0mg，0.25mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(24.35mg，0.03mmol)和碳酸铯(165.22mg，0.51mmol)在四氢呋喃(1mL)和水(0.10mL)中的混合物在100℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/5)洗脱，得到(7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基)-6-((2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(76mg，0.13mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝589.7。
步骤4：2-((8-氨基-7-氟-6-((2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将(7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-6-((2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.10mmol)、氯化锂(54mg，1.29mmol)和对甲苯磺酸(240mg，1.26mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物在120℃搅拌0.5小时。残余物在C18上经快速色谱提纯(在水中的乙腈-0.1％碳酸氢钠)，得到2-((8-氨基-7-氟-6-((2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮(5.1mg，0.01mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝476.2；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.59(s,1H),9.17(s,1H),9.00(s,1H),7.57(s,1H),7.27-7.25(m,1H),7.12(d,J＝6.7Hz,1H),6.69(d,J＝6.6Hz,1H),6.14-6.09(m,1H),5.95-5.88(m,3H),4.96(s,2H),4.61-4.57(m,1H)3.78(s,4H),2.99(s,2H),1.13(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例142：
N-(8-氨基-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)乙磺酰胺(化合物241)
步骤1：(3-氨基-8-氯异喹啉-6-基)氨基甲酸叔丁基酯
将6-溴-8-氯-异喹啉-3-胺(1.0g，3.88mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(13.65g，116.5mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(803.85mg，0.78mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(897.83mg，1.55mmol)和碳酸铯(6.33g，19.42mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(1/2)洗脱，得到N-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)氨基甲酸叔丁基酯(500mg，1.70mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝294。
步骤2：(8-氯-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)氨基甲酸叔丁基酯
将N-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)氨基甲酸叔丁基酯(300mg，1.02mmol)、N-(3-氨基-8-氯-6-异喹啉基)氨基甲酸叔丁基酯(300mg，1.02mmol)、t-BuBrettphosPdG3(348.87mg，0.41mmol)、t-BuBrettphos(247.15mg，0.51mmol)和碳酸铯(1.66g，5.11mmol)在1,4-二噁烷(50mL)中的溶液在120℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(97/3)洗脱，得到N-[8-氯-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(279mg，0.58mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝485。
步骤3：2-((6-氨基-8-氯异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
/>
将N-[8-氯-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(270mg，0.56mmol)在2,2,2-三氟乙酸(10mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为10。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ NH4CO3)，得到2-[(6-氨基-8-氯-3-异喹啉基)氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(200mg，0.52mmol)，其为灰色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝385。
步骤4：N-(8-氯-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)乙磺酰胺
在0℃，向2-[(6-氨基-8-氯-3-异喹啉基)氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(200mg，0.52mmol)和三乙胺(262.43mg，2.60mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加乙磺酰氯(200.46mg，1.56mmol)。在0℃，搅拌所得溶液1小时。有机层在真空下浓缩。然后添加在水(10mL)中的氢氧化钠(500mg，20.83mmol)，并在25℃搅拌1小时。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ NH4CO3)，得到N-[8-氯-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]乙氨磺酰(85mg，0.18mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝477。
步骤5：(6-(乙基亚磺酰氨基)-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将N-[8-氯-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]乙氨磺酰(80mg，0.17mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(491.22mg，4.19mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(69.44mg，0.07mmol)、Brettphos(71.92mg，0.13mmol)和碳酸铯(164.03mg，0.50mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物在120℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到N-[6-(乙基磺酰基氨基)-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(35mg，0.063mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝558。
步骤6：N-(8-氨基-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)乙磺酰胺
将N-[6-(乙基磺酰基氨基)-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(30mg，0.05mmol)和2,2,2-三氟乙酸(3mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。将反应溶液在真空下浓缩。残余物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为10。该粗产物经制备型HPLC提纯(XSelect CSH Prep C18OBD柱,19*250mm,5um；水(0.1％FA)：ACN(5％-70％)，在7分钟内；25mL/分钟)，得到N-[8-氨基-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]乙氨磺酰；甲酸(14mg,0.028mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝458；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.84(s,1H),9.00(s,2H),7.40(s,1H),6.57(d,J＝1.8Hz,1H),6.33(d,J＝1.9Hz,1H),6.19(s,2H),6.00(s,1H),4.97(s,2H),4.61(m,1H),3.90-3.71(m,2H),3.19(m,2H),3.00(d,J＝6.1Hz,2H),1.22(m,3H),1.14(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例143：
5-(8-氨基-7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-乙基噁唑-2(3H)-酮(化合物242)
/>
步骤1：4-乙基-3H-噁唑-2-酮
将氰酸钾(6.0g，74.07mmol)、1-羟基丁-2-酮(3.0g，34.05mmol)在乙醚(100mL)中的溶液添加乙酸(3.0mL,34.05mmol)，在20℃搅拌12小时。过滤后，减压浓缩该滤液，得到4-乙基-3H-噁唑-2-酮(1.0g，8.84mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝114。
步骤2：4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮
在0℃，将氢化钠(579.52mg，60％纯度，25.2mmol)添加至4-乙基-3H-噁唑-2-酮(1.9g，16.8mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中。在0℃搅拌溶液10分钟。添加4-甲氧基苄基氯(3.14g，20.16mmol)，并在25℃搅拌2小时。将反应溶液经乙酸乙酯稀释，并用水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机萃取物。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经反相闪蒸水(10mmol/l碳酸氢钠)/ACN(60/40)提纯，得到4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮(2.1g，9.00mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝234。
步骤3：5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮
将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(287mg，0.89mmol)、4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮(207.58mg，0.89mmol)、三环己基膦(49.83mg，0.18mmol)、乙酸钯(29.01mg，0.09mmol)、新戊酸(22.69mg，0.22mmol)和碳酸钾(245.61mg，1.78mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(4mL)中的溶液在100℃搅拌3小时，随后浓缩。残余物经反向柱提纯，用水(碳酸氢钠10mmol/L)/ACN(30/70)洗脱，得到5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮(225mg，0.53mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝428。
步骤4：5-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮/>
将5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮(225mg，0.53mmol)、2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(171.73mg，0.63mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(108.86mg，0.11mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(121.58mg，0.21mmol)和碳酸铯(514.3mg，1.58mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的溶液在100℃搅拌12小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到5-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮(158mg，0.26mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝619。
步骤5：N-[6-[4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2-氧代-噁唑-5-基]-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
将5-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮(155mg，0.25mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(732.32mg，6.26mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(51.83mg，0.05mmol)、Brettphos(40.26mg，0.08mmol)和碳酸铯(244.86mg，0.75mmol)在1,4-二噁烷(12mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，共二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到N-[6-[4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2-氧代-噁唑-5-基]-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(80mg,0.11mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝700。/>
步骤6：5-[8-氨基-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-乙基-3H-噁唑-2-酮
将N-[6-[4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2-氧代-噁唑-5-基]-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(140mg，0.20mmol)在2,2,2-三氟乙酸(5.0mL)和三氟甲磺酸(1.0mL)中的溶液在25℃搅拌48小时。该粗产物经制备型HPLC提纯[XBridge Prep C18 5umx30mmx150mm；水(碳酸氢钠10mmol/L)：ACN(15％-50％)，在6.03分钟内]，得到5-[8-氨基-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-乙基-3H-噁唑-2-酮(33mg,0.069mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝480；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.04(s,1H),9.21(s,1H),9.09(s,1H),7.66(s,1H),6.86(d,J＝6.0Hz,1H),6.13(s,2H),5.98(s,1H),4.98(s,2H),4.65-4.56(m,1H),3.78(t,J＝6.0Hz,2H),2.98(t,J＝6.0Hz,2H),2.51-2.47(m,2H),1.21-1.12(m,9H)。
实施例144：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-氯吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物243)
步骤1：4-氯-5-碘-吡啶-3-胺
在25℃向4-氯-3-碘-5-硝基-吡啶(1.0g，3.52mmol)在乙醚(10mL)中的溶液中添加盐酸(7.4mL,3.52mmol)和氯化亚锡(8.0g，35.4mmol)。将该混合物在室温搅拌2小时。将反应用甲醇中的氨(7mol/L)淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到4-氯-5-碘-吡啶-3-胺(800mg，3.14mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝254.5。
步骤2：N-[6-(5-氨基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
在氮气下，制备4-氯-5-碘-吡啶-3-胺(74.0mg，0.29mmol)、[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]硼酸(50.0mg，0.10mmol)、磷酸钾(20.0mg，0.09mmol)、乙酸钠(23.85mg，0.29mmol)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(15.0mg，0.02mmol)在乙腈(1mL)和水(0.10mL)中的溶液。所得溶液在90℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(5/95)洗脱，得到N-[6-(5-氨基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.084mmol)，其为黄色固体。LC/MS(ESI)[M+H]+＝595.1。
步骤3：2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-氯吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将N-[6-(5-氨基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(50.0mg，0.08mmol)和TFA(1mL,0.08mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为7。残余物在C18上经快速色谱提纯(在水中的乙腈-0.1％碳酸氢钠)，得到2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-氯吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮(12.9mg，0.026mmol)，其为红色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝495.2。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.24(s,1H),9.08(s,1H),8.13(s,1H),7.73(s,1H),7.70(s,1H),6.77(d,J＝5.9Hz,1H),6.09(s,2H),5.94(s,1H),5.77(s,2H),4.94(s,2H),4.63-4.51(m,1H),3.81-3.70(m,2H),2.99-2.91(m,2H),1.10(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例145：
2-((8-氨基-7-氟-6-((4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)甲基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物244)
步骤1：(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)甲醇
将三丁基锡烷基甲醇(3.98g，12.4mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(2.0g，6.2mmol)和四(三苯基膦)钯(1.43g，1.24mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的溶液在90℃搅拌60小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)甲醇(550mg，2.43mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝227。
步骤2：2-[[8-氯-7-氟-6-(羟基甲基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在25℃，向3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)甲醇(200mg，0.88mmol)、2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(264.18mg，0.97mmol)、t-BuBrettphos(213.56mg，0.44mmol)和t-BuBrettphos PdG3(301.46mg，0.35mmol)在1,4-二噁烷(40mL)中的溶液中添加碳酸铯(1.44g，4.41mmol)。将所得溶液在120℃搅拌1小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(羟基甲基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(120mg,0.29mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝418。
步骤3：2-[[8-氯-6-(溴甲基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将2-[[8-氯-7-氟-6-(羟基甲基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(50mg，0.12mmol)和亚硫酰氯(70.6mg,0.60mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂，得到2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(50mg，0.11mmol)，其为有色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝436。
步骤4：2-[[8-氯-7-氟-6-[(4-甲基-2-氧代-哌嗪-1-基)甲基]-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在0℃，向4-甲基-2-哌嗪酮(26.16mg，0.23mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中添加氢化钠(18.34mg，60％纯度,0.46mmol)。在0℃，将反应搅拌20分钟。添加2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(50mg，0.11mmol)并在25℃搅拌1小时。用水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％碳酸氢钠)，得到2-[[8-氯-7-氟-6-[(4-甲基-2-氧代-哌嗪-1-基)甲基]-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(9mg，0.018mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝514。
步骤5：N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-[(4-甲基-2-氧代-哌嗪-1-基)甲基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
在25℃，向2-[[8-氯-7-氟-6-[(4-甲基-2-氧代-哌嗪-1-基)甲基]-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(46mg，0.09mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(314.53mg，2.68mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(18.53mg，0.02mmol)和Brettphos(19.22mg，0.04mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物添加碳酸铯(116.7mg，0.36mmol)。在90℃将反应搅拌3小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-[(4-甲基-2-氧代-哌嗪-1-基)甲基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(45mg，0.076mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝595。
步骤6：2-[[8-氨基-7-氟-6-[(4-甲基-2-氧代-哌嗪-1-基)甲基]-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-[(4-甲基-2-氧代-哌嗪-1-基)甲基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(43mg，0.07mmol)在2,2,2-三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(4mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD，19×150mm 5um；水(0.1％FA)：CH3CN＝7％-15％B，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-[(4-甲基-2-氧代-哌嗪-1-基)甲基]-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(15.5mg，0.029mmol)，其为红色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝495.3；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,1H),9.04(s,1H),8.12(s,1H),7.57(s,1H),6.63(d,J＝6.0Hz,1H),5.99(s,1H),5.94(s,1H),4.95(s,2H),4.66-4.50(m,3H),3.76(t,J＝5.9Hz,2H),3.3-3.2(m,2H),3.19(s,2H),2.96(t,J＝5.5Hz,2H),2.88-2.64(m,2H),2.32(s,3H),1.10(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例146：
5-(8-氨基-7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-N,N,4-三甲基嘧啶-2-甲酰胺(化合物245)
步骤1：5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲腈
在25℃，将氰化钠(1062.86mg，21.69mmol)和1,4-二氮杂双环辛烷三亚乙基二胺(323.92mg，2.89mmol)在二甲基亚砜(2mL)和水(2mL)中的溶液搅拌1小时。添加5-溴-2-氯-4-甲基嘧啶(3.0g，14.46mmol)在二甲基亚砜中的溶液，并搅拌12小时。将反应用水中的硫酸亚铁淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(5/95)洗脱，得到5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲腈(700mg，3.54mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝198.0。
步骤2：5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲酸
将5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲腈(1.0g，5.05mmol)和NaOH(606mg，15.15mmol)在水(40mL)中的溶液在60℃搅拌2小时。用盐酸(2mol/L)将反应混合物调节至pH为2。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲酸(800mg，3.69mmol)，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝217.0。
步骤3：5-溴-N,N,4-三甲基-嘧啶-2-甲酰胺
向5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲酸(1.0g，4.61mmol)、N,N-二甲胺(311.58mg，6.91mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2377.66mg，18.43mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中添加2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(2628.08mg，6.91mmol)。将该混合物在25℃搅拌12小时，然后用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(5/95)洗脱，得到5-溴-N,N,4-三甲基-嘧啶-2-甲酰胺(600mg，2.46mmol)，其为黄色油状物。LC/MS(ESI)[M+H]+＝244.1。
步骤4：N-[6-[2-(二甲基氨基甲酰基)-4-甲基-嘧啶-5-基]-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
将[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]硼酸(50.0mg，0.10mmol)、5-溴-N,N,4-三甲基-嘧啶-2-甲酰胺(47.64mg，0.20mmol)、四(三苯基膦)钯(22.56mg，0.02mmol)和碳酸钾(40mg，0.29mmol)在1,4-二噁烷(5mL)和水(1mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。残余物经反向柱提纯，用碳酸氢钠(10mmol/L)/ACN(70/30)洗脱，得到N-[6-[2-(二甲基氨基甲酰基)-4-甲基-嘧啶-5-基]-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.063mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝631.7。
步骤5：N-[6-[2-(二甲基氨基甲酰基)-4-甲基-嘧啶-5-基]-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯/>
在25℃，将N-[6-[2-(二甲基氨基甲酰基)-4-甲基-嘧啶-5-基]-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(5.0mg，0.010mmol)和2,2,2-三氟乙酸(0.2mL)在二氯甲烷(2mL)中的混合物搅拌3小时。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为7。在真空下浓缩该混合物。残余物在C18上经快速色谱提纯(在水中的乙腈-0.1％碳酸氢钠)，得到5-(8-氨基-7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-N,N,4-三甲基嘧啶-2-甲酰胺(9.1mg，0.017mmol)，其为橙色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝532.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.30(s,1H),9.16(s,1H),8.77(s,1H),7.78(s,1H),6.92(d,J＝6.1Hz,1H),6.23(s,2H),5.96(s,1H),4.96(s,2H),4.56-4.58(m,1H),3.80-3.77(m,2H),3.05(s,3H),2.98-2.90(m,2H),2.86(s,3H),2.45(d,J＝1.2Hz,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例147：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲氧基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物246)
步骤1：3-溴-4-甲氧基-5-硝基-吡啶
将3-溴-4-氯-5-硝基吡啶(3.0g，12.63mmol)、甲醇(4.68mL)和碳酸钾(3.49g，25.27mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(2/98)洗脱，得到3-溴-4-甲氧基-5-硝基-吡啶(600mg，2.57mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝233.0。
步骤2：[N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-(4-甲氧基-5-硝基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
将[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基硼酸(102.94mg，0.20mmol)、3-溴-4-甲氧基-5-硝基-吡啶(70.0mg，0.30mmol)、四(三苯基膦)钯(47.35mg，0.04mmol)和碳酸钾(82.35mg，0.60mmol)在1,4-二噁烷(1mL)和水(0.10mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在C18上经快速色谱提纯，用ACN/水(70％)洗脱，得到N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-(4-甲氧基-5-硝基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.097mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝620.6。
步骤3：[N-[6-(5-氨基-4-甲氧基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-(4-甲氧基-5-硝基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.11mmol)和雷尼镍(10mg，0.11mmol)]在甲醇(5mL)中的混合物在25℃搅拌。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在C18上经快速色谱提纯，用ACN/水(60％)洗脱，得到[N-[6-(5-氨基-4-甲氧基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.07mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝590.6。/>
步骤4：2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲氧基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将N-[6-(5-氨基-4-甲氧基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(40.0mg，0.07mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)在二氯甲烷(5mL)中的混合物在25℃搅拌3小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为7。残余物在C18上经快速色谱提纯(在水中的乙腈-0.1％碳酸氢钠)，得到2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲氧基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮(6.1mg，0.012mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝491.3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.24(s,1H),9.06(s,1H),8.05(s,1H),7.72(s,1H),7.68(s,1H),6.83(d,J＝6.0Hz,1H),6.04(s,2H),5.96(s,1H),5.22(s,2H),4.96(s,2H),4.62-4.55(m,1H),3.81-3.73(m,2H),3.45(s,3H),3.02-2.94(m,2H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例148：
6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-N3-(5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-8-基)-7-氟异喹啉-3,8-二胺(化合物247)
步骤1：2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-硫酮
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将2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(1.0g，4.35mmol)和Lawesson试剂(1.8g，4.45mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的溶液在90℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-硫酮(530mg，2.15mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝246.1。
步骤2：2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-胺
将2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-硫酮(1.2g，4.88mmol)、氨基乙醛二乙基乙缩醛(3.25g，24.38mmol)和Ag2CO3(2.69g，9.75mmol)在四氢呋喃(100mL)中的溶液在85℃搅拌1小时。过滤后，减压浓缩该滤液。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0.05％ TFA)，得到2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-胺(900mg，2.6mmol)，其为黄色固体。LC/MS(ESI)[M+H]+＝245.2。
步骤3：8-溴-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂
将2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-胺(425mg，1.23mmol)和盐酸(0.31mL,1.23mmol)在乙酸(10mL)中的溶液在80℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。残余物经反相柱提纯，用水(0.05％2,2,2-三氟乙酸)/乙腈(85/15)洗脱，得到8-溴-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>(200mg，0.79mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝253.1。
步骤4：N-[5-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯
将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(500mg，0.99mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(3489.27mg，29.82mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(205.78mg，0.20mmol)、Brettphos(159.85mg，0.30mmol)和碳酸铯(972.22mg，2.98mmol)在1,4-二噁烷(50mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。残余物经反向柱提纯，用水/乙腈中的碳酸氢钠(10mmol/L，40/60)洗脱，得到N-[5-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.17mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝583.7。
步骤5：(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-8-基)氨基)-7-氟异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
N-[5-[3-氨基-8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(130mg，0.20mmol)、8-溴-5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂(249.6mg，1.0mmol)、t-BuBretphosG3(145.6mg，0.20mmol)、t-BuBretophos(108mg，0.20mmol)和碳酸铯(421.2mg，1.30mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液在120℃持续1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-8-基)氨基)-7-氟异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.10mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝755.8。
步骤6：6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-N3-(5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-8-基)-7-氟异喹啉-3,8-二胺/>
将(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-8-基)氨基)-7-氟异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.09mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)在二氯甲烷(5mL)中的混合物在25℃搅拌3小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为7。残余物经反相柱提纯，用水(0.05％TFA)/ACN(85/15)洗脱，得到6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-N3-(5,6-二氢-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-8-基)-7-氟异喹啉-3,8-二胺(19.2mg，0.038mmol)，其为橙色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝456.2。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),9.10(s,1H),7.99(s,1H),7.70(s,1H),7.67(s,1H),7.21(d,J＝1.2Hz,1H),6.84(d,J＝1.2Hz,1H),6.72(d,J＝6.1Hz,1H),6.05(s,3H),5.40(s,2H),5.22(s,2H),4.39-4.31(m,2H),3.27-3.19(m,2H),1.93(s,3H)。
实施例149：
2-((6-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基)甲基)-8-氨基-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物249)
步骤1：2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮/>
将2-[[8-氯-7-氟-6-(羟基甲基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(50mg，0.12mmol)和亚硫酰氯(70.6mg，0.60mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物，得到2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(50mg，0.11mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝436。
步骤2：2-[[8-氯-7-氟-6-(吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基甲基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(50mg，0.11mmol)、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(40.62mg，0.34mmol)和碳酸铯(186.79mg，0.57mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物在25℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基甲基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(15mg，0.029mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝518。
步骤3：N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-(吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基甲基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯/>
在25℃，向2-[[8-氯-7-氟-6-(吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基甲基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(70mg，0.14mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(474.33mg，4.05mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(27.97mg，0.03mmol)和Brettphos(29.03mg，0.05mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物添加碳酸铯(176.22mg，0.54mmol)。在90℃搅拌所得溶液2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-(吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基甲基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(45mg，0.075mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝599。
步骤4：2-((6-((1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基)甲基)-8-氨基-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
在25℃，将N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-(吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基甲基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(80mg，0.13mmol)在二氯甲烷(4mL)和2,2,2-三氟乙酸(4mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD，19×150mm 5um；水(0.1％FA)：CH3CN＝5％-6％ B，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基甲基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(9.4mg，0.017mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝499.3；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.17(s,1H),9.08(s,1H),8.96(s,1H),8.12(d,J＝5.4Hz,1H),7.72(d,J＝3.0Hz,1H),7.56(s,1H),7.54(d,J＝1.0Hz,1H),6.74(d,J＝6.1Hz,1H),6.57(d,J＝3.1Hz,1H),6.06(s,2H),5.95(s,1H),5.64(s,2H),4.96(s,2H),4.60(t,J＝6.8Hz,1H),3.78(s,2H),2.98(s,2H),1.13(d,J＝6.8Hz,6H)。/>
实施例150：
2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-7-甲基-6,7-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂-8(9H)-酮(化合物250)
步骤1：甲磺酸2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基酯
向(2-羟基乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(1.0g，5.71mmol)和三乙胺(1.15g，11.41mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中逐滴添加甲磺酰氯(975.86mg，8.56mmol)。在0℃将该混合物搅拌1小时。所得溶液用水洗涤，且有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到甲磺酸2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基酯(1.29g，5.08mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝254。
步骤2：N-[2-(4-溴-2-甲基-咪唑-1-基)乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁基酯
在0℃，将5-溴-2-甲基-1H-咪唑(5.0g，31.06mmol)和氢化钠(1.86g，60％纯度，46.58mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液搅拌30分钟。添加甲磺酸2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基酯(8.0g，31.58mmol)，并在室温搅拌12小时。将反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％NH3H2O)，得到N-[2-(4-溴-2-甲基-咪唑-1-基)乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁基酯(6g，18.85mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝318。
步骤3：2-[4-溴-1-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基]咪唑-2-基]乙酸甲基酯
在-70℃，向N-[2-(4-溴-2-甲基-咪唑-1-基)乙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁基酯(2.0g，6.29mmol)和碳酸二甲基酯(2.83g，31.43mmol)在四氢呋喃(100mL)中的溶液中添加二异丙基氨基锂(7.54mL,15.08mmol，2mol/L)。在-70℃至-30℃，搅拌所得溶液2小时。将反应用水淬灭。在真空下浓缩所得混合物。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％NH3)，得到2-[4-溴-1-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基]咪唑-2-基]乙酸甲基酯(400mg，1.06mmol)，其为无色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝376。
步骤4：2-[4-溴-1-[2-(甲基氨基)乙基]咪唑-2-基]乙酸甲基酯
将2-[4-溴-1-[2-[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]乙基]咪唑-2-基]乙酸甲基酯(400mg，1.06mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)在二氯甲烷(3mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂，得到2-[4-溴-1-[2-(甲基氨基)乙基]咪唑-2-基]乙酸甲基酯(250mg，0.91mmol)，其为无色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝276。
步骤5：2-溴-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂-8-酮
在25℃，将2-[4-溴-1-[2-(甲基氨基)乙基]咪唑-2-基]乙酸甲基酯(250mg，0.91mmol)和三乙胺(914.42mg，9.05mmol)在甲醇(10mL)中的溶液搅拌12小时。在真空下浓缩溶剂。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ NH3)，得到2-溴-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂-8-酮(160mg，0.65mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝244。
步骤6：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂-8-酮
将2-溴-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂-8-酮(50mg，0.20mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(47.15mg，0.16mmol)、t-BuBrettPhosG3(69.97mg，0.08mmol)、t-BuBrettPhos(49.67mg，0.10mmol)和碳酸铯(200.34mg，0.61mmol)在1,4-二噁烷(6mL)中的混合物在120℃搅拌3小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ NH4CO3)，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂/>-8-酮(5.7mg，0.013mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝451。
步骤7：(7-氟-3-((7-甲基-8-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
在25℃，向2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂-8-酮(230mg，0.51mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.79g，15.3mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(105.59mg，0.10mmol)和Brettphos(109.57mg，0.20mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物添加碳酸铯(665.16mg，2.04mmol)。将反应在90℃搅拌1小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到N-[7-氟-3-[(7-甲基-8-氧代-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.13mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝532。
步骤8：2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂-8-酮
在25℃，将N-[7-氟-3-[(7-甲基-8-氧代-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(65mg，0.12mmol)在二氯甲烷(5mL)和2,2,2-三氟乙酸(5mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。残余物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD,19×150mm 5um；水(0.1％FA)：CH3CN＝7％-10％ B，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-7-甲基-6,9-二氢-5H-咪唑并[1,2-d][1,4]二氮杂/>-8-酮(2mg，0.0042mmol,)，其为红色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝432.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),8.87(s,1H),8.49(d,J＝5.0Hz,1H),8.41(s,1H),7.38(d,J＝5.1Hz,1H),7.07(d,J＝19.2Hz,2H),6.70(d,J＝6.1Hz,1H),6.10(s,2H),4.11(d,J＝5.8Hz,2H),3.99(d,J＝5.4Hz,2H),3.89(s,2H),2.96(s,3H),2.21(s,3H)。
实施例151：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-4,5-二氢-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(化合物252)
步骤1：2-(氯甲基硫烷基)乙酸乙酯
在0℃，向氢化钠(5.83g，60％纯度，145.63mmol)在四氢呋喃(200mL)中的溶液中添加2-巯基乙酸乙酯(17.5g,145.63mmol)。在0℃，搅拌所得溶液30分钟。在0℃，添加溴氯甲烷(94.21g，728.14mmol)并搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。该粗产物在真空中蒸馏，得到2-(氯甲基硫烷基)乙酸乙酯(14g，83.02mmol)，其为无色油状物。GCMS＝168。
步骤2：5-溴-2-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)硫烷基甲基]吡唑-3-甲酸甲基酯
在25℃，向5-溴-1H-吡唑-3-甲酸甲基酯(1.5g，7.32mmol)、2-(氯甲基硫烷基)乙酸乙酯(1.36g，8.05mmol)和碳酸钾(2.02g，14.63mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的混合物添加四丁基碘化铵物(134.99mg，0.37mmol)。将所得溶液在25℃搅拌4小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到5-溴-2-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)硫烷基甲基]吡唑-3-甲酸甲基酯(1.8g，5.34mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝337。
步骤3：2-溴-4-氧代-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-5-甲酸甲基酯
将5-溴-2-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)硫烷基甲基]吡唑-3-甲酸甲基酯(500mg，1.48mmol)和甲醇钠(0.55mL,2.97mmol)在甲醇(10mL)中的溶液在25℃搅拌4小时。反应混合物用乙酸调节至pH为8。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到2-溴-4-氧代-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-5-甲酸甲基酯(270mg，0.93mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝291。
步骤4：2-溴-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-4-酮
将2-溴-4-氧代-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-5-甲酸甲基酯(1.1g，3.78mmol)和浓硫酸(49.37g，75.57mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的溶液在100℃搅拌12小时。用氢氧化钠(10％)将反应混合物调节至pH为6。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到2-溴-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-4-酮(900mg，2.90mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝233。
步骤5：N-[(Z)-(2-溴-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-4-基亚甲基)氨基]-4-甲基-苯氨磺酰
将2-溴-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-4-酮(50mg，0.21mmol)和4-甲基苯磺酰肼(39.95mg，0.21mmol)在甲醇(3mL)中的溶液在25℃搅拌12小时。在真空下浓缩溶剂。固体经石油醚(10mL)洗涤，得到N-[(Z)-(2-溴-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-4-基亚甲基)氨基]-4-甲基-苯氨磺酰(80mg，0.20mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝401。
步骤6：2-溴-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪
在0℃，向N-[(Z)-(2-溴-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-4-基亚甲基)氨基]-4-甲基-苯氨磺酰(80mg，0.20mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加氢化二异丁基铝(1mL，1.0mmol，1mol/L)。在0℃，搅拌所得溶液1小时。将反应用水淬灭，并随后用乙酸乙酯萃取。合并有机层，在无水硫酸钠上干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％碳酸氢钠)，得到2-溴-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪(20mg，0.091mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝219。
步骤7：2-溴-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪6,6-二氧化物
将2-溴-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪(130mg，0.59mmol)和3-氯过氧化苯甲酸(612.32mg，3.56mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液在25℃搅拌3小时。将反应用亚硫酸钠和碳酸氢钠溶液淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％HCl)，得到2-溴-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(70mg，0.28mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝251。
步骤8：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
在25℃，向N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(250mg，0.50mmol)、2-溴-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(149.77mg，0.60mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(102.89mg，0.10mmol)和4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(115.12mg，0.20mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物添加碳酸铯(486.11mg，1.49mmol)。在100℃搅拌所得溶液2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(2/3)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.10mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝673。
步骤9：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
在25℃，向N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(65mg，0.10mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(339.36mg，2.90mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(19.99mg，0.020mmol)和Brettphos(20.74mg，0.040mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物添加碳酸铯(125.92mg，0.39mmol)。将所得溶液在90℃搅拌4小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.080mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝754。
步骤10：6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-N3-(6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)-7-氟-异喹啉-3,8-二胺
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基甲基氨基)-3-[(6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(53.98mg，0.070mmol)的二氯甲烷(2mL)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。该粗产物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD，19×150mm 5um；水(0.1％FA)：CH3CN＝3％-15％ B，在7分钟内)，得到6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-N3-(6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)-7-氟-异喹啉-3,8-二胺(5.5mg，0.011mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝454.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.33(s,1H),9.30(s,1H),8.00(s,1H),7.87(s,1H),7.71(s,1H),6.70(d,J＝6.0Hz,1H),6.18(s,2H),6.08(s,1H),5.82(s,2H),5.43(s,2H),3.58(t,J＝6.6Hz,2H),3.27(t,J＝6.6Hz,2H),2.00(d,J＝1.5Hz,3H)。
实施例152：
2-((8-氨基-6-环丙基-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物253)
步骤1：6-环丙基-7-氟-3-(6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-2-基氨基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在25℃，向三氟甲磺酸8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-2-基氨基)异喹啉-6-基酯(150mg，0.24mmol)、环丙基硼酸(41.88mg，0.49mmol)和四(三苯基膦)钯(56.20mg，0.049mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物添加碳酸钾(84.01mg，0.61mmol)。在100℃搅拌所得溶液3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到6-环丙基-7-氟-3-(6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-2-基氨基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.20mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝509。
步骤2：2-[(8-氨基-6-环丙基-7-氟-3-异喹啉基)氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
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将N-[6-环丙基-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.14mmol)在2,2,2-三氟乙酸(4mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。该粗产物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD，19×150mm 5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)：CH3CN＝33％-50％ B，在10分钟内)，得到2-[(8-氨基-6-环丙基-7-氟-3-异喹啉基)氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(8.4mg，0.021mmol)，其为红色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝409.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.12(s,1H),7.47(s,1H),6.48(d,J＝6.3Hz,1H),5.97(s,1H),4.95(s,2H),4.64-4.53(m,1H),3.76(t,J＝6.0Hz,2H),3.00(t,J＝6.0Hz,2H),2.13-2.09(m,1H),1.14(d,J＝6.9Hz,6H),1.06-0.96(m,2H),0.84-0.82(m,2H)。
实施例153和实施例154：
2-((8-氨基-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物254)和2-((8-氨基-7-氟-6-(2-异丙氧基-4-甲基嘧啶-5-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮(化合物255)
步骤1：5-溴-2-异丙氧基-4-甲基嘧啶
在0℃，将氢化钠(550mg，60％纯度，13.75mmol)分批向2-丙醇(1.75g，29.12mmol)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中添加。在室温，搅拌所得溶液30分钟。在0℃，添加5-溴-2-氯-4-甲基嘧啶(1.0g，4.82mmol)。在室温，将所得溶液搅拌16小时。该混合物用盐水稀释。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/二氯甲烷(2/1)洗脱，得到5-溴-2-异丙氧基-4-甲基-嘧啶(350mg，1.51mmol)，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝231。
步骤2：2-异丙氧基-4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)嘧啶
将双(频哪醇合)二硼(2.043g，8.05mmol)、5-溴-2-异丙氧基-4-甲基-嘧啶(310mg，1.34mmol)、乙酸钾(394.39mg，4.02mmol)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(98.2mg，0.13mmol)在1,4-二噁烷(50mL)中的混合物在80℃搅拌15小时。将混合物在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/二氯甲烷(3/7)洗脱，得到2-异丙氧基-4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)嘧啶(350mg，1.26mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝279。
步骤3：(7-氟-6-(2-异丙氧基-4-甲基嘧啶-5-基)-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯和(7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将三氟甲磺酸[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]酯(150mg，0.24mmol)、2-异丙氧基-4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)嘧啶(101.5mg，0.36mmol)、四(三苯基膦)钯(56.2mg，0.05mmol)和碳酸钾(100.72mg，0.73mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(1mL)中的溶液在90℃搅拌2小时。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到N-[7-氟-6-(2-异丙氧基-4-甲基-嘧啶-5-基)-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(35mg，0.057mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝619。以及(7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(20mg，0.042mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝469。
步骤4：2-((8-氨基-7-氟-6-(2-异丙氧基-4-甲基嘧啶-5-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物255)/>
将N-[7-氟-6-(2-异丙氧基-4-甲基-嘧啶-5-基)-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(30mg，0.05mmol)和TFA(5mL)在二氯甲烷(1mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。用甲醇中的氨(7mol/L)将反应调节至pH为10。该粗产物经制备型HPLC提纯(XBridgeShield RP18OBD柱，30*150mm，5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)：ACN(32％-60％)在8分钟内；60mL/分钟)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(2-异丙氧基-4-甲基-嘧啶-5-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(7.7mg，0.015mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝519.3；1HNMR(300MHz,，甲醇-d4)δ9.15(s,1H),8.41(s,1H),7.66(s,1H),6.89(d,J＝6.0Hz,1H),6.05(s,1H),5.49-5.34(m,1H),5.06(s,2H),4.89-4.71(m,1H),3.97-3.80(m,2H),3.24-3.06(m,2H),2.41(s,3H),1.44(d,J＝6.2Hz,6H),1.24(d,J＝6.8Hz,6H)。
步骤5：2-((8-氨基-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物254)
将N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(20mg，0.04mmol)和2,2,2-三氟乙酸(4mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为10。该粗产物经制备型HPLC提纯(SunFire Prep C18OBD柱，19×150mm 5um；水(0.1％FA)：ACN(25％-52％)，在7分钟内；25mL/分钟)，得到2-[(8-氨基-7-氟-3-异喹啉基)氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(2.5mg，0.0068mmol)，其为橙色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝369.2；1HNMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.23(s,1H),7.55(s,1H),7.51-7.42(m,1H),7.06-7.02(m,1H),5.99(s,1H),5.14(s,2H),4.83-4.72(m,1H),3.96-3.85(m,2H),3.18-3.05(m,2H),1.25(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例155：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-5-异丙基-4,5-二氢-7H-吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物(化合物256)
步骤1：1-氯-N-异丙基-甲磺酰胺
在0℃，向异丙胺(1.19g，20.13mmol)和三乙胺(2.03g，20.13mmol)在二氯甲烷(100mL)中的混合物添加氯甲烷磺酰氯(1.5g，10.07mmol)。在0℃，将反应搅拌2小时。所得溶液用水洗涤。有机层在无水硫酸钠上干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到1-氯-N-异丙基-甲磺酰胺(1.1g，6.40mmol)，其为无色油状物。GCMS＝171。
步骤2：5-溴-2-(异丙基氨磺酰甲基)吡唑-3-甲酸甲基酯
将1-氯-N-异丙基-甲磺酰胺(1381.51mg，8.05mmol)、3-溴-1H-吡唑-5-甲酸甲基酯(1.1g,5.37mmol)和碳酸钾(2.22g，16.1mmol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(20mL)中的混合物在60℃搅拌5小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ NH3H2O)，得到5-溴-2-(异丙基氨磺酰甲基)吡唑-3-甲酸甲基酯(600mg，1.76mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝340。
步骤3：1-[3-溴-5-(羟基甲基)吡唑-1-基]-N-异丙基-甲磺酰胺
在0℃，向5-溴-2-(异丙基氨磺酰甲基)吡唑-3-甲酸甲基酯(600mg，1.76mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加氢化二异丁基铝(3.53mL,3.53mmol，1mol/L)。在0℃，搅拌所得溶液2小时。将反应用甲醇淬灭。过滤后，减压浓缩该滤液。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％碳酸氢钠)，得到1-[3-溴-5-(羟基甲基)吡唑-1-基]-N-异丙基-甲磺酰胺(400mg,1.28mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝312。
步骤4：2-溴-5-异丙基-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物
在0℃、在氮气下，向1-[3-溴-5-(羟基甲基)吡唑-1-基]-N-异丙基-甲磺酰胺(400mg，1.28mmol)和三苯基膦(671mg，2.56mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液添加偶氮二甲酸二异丙基酯(517mg，2.56mmol)。在室温，搅拌所得溶液2小时。有机层在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(7/3)洗脱，得到2-溴-5-异丙基-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物(300mg,1.02mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝294。
步骤5：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-异丙基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
在氮气下，将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(342mg，0.68mmol)、2-溴-5-异丙基-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物(200mg，0.68mmol)三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(140mg，0.14mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(157.19mg，0.27mmol)、碳酸铯(665mg，2.04mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在100℃搅拌6小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(2/3)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-异丙基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(105mg，0.15mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝716。
步骤6：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5-异丙基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-异丙基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(90mg，0.13mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(294.42mg，2.51mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(26mg，0.03mmol)、Brettphos(27mg，0.05mmol)和碳酸铯(122mg，0.38mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(2/3)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5-异丙基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.075mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝797。
步骤7：6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N3-(5-异丙基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)异喹啉-3,8-二胺；甲酸
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5-异丙基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.08mmol)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)在二氯甲烷(4mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ FA)，得到6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N 3-(5-异丙基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)异喹啉-3,8-二胺；甲酸(18.6mg，0.034mmol)，其为橙色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝497；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.17(s,1H),8.01(s,1H),7.78(s,1H),7.77(s,1H),6.85(d,J＝6.4Hz,1H),6.13(s,1H),5.28(s,2H),4.63(s,2H),4.34-4.27(m,1H),2.08(s,3H),1.20(d,J＝6.4Hz,6H)。
实施例156：
2-((8-氨基-6-(苄基氧基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物257)
将N-[6-苄基氧基-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.086mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在25℃搅拌3小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为7。残余物在C18上经快速色谱提纯(在水中的乙腈-0.1％碳酸氢钠)，得到2-((8-氨基-6-(苄基氧基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮(12.2mg，0.026mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝475.2。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.02(d,J＝14.0Hz,2H),7.60(s,1H),7.56-7.46(m,2H),7.50-7.31(m,3H),6.62-6.59(m,1H),5.94(d,J＝6.4Hz,3H),5.25(s,2H),4.98(s,2H),4.63-4.58(m,1H),3.79-3.77(m,2H),3.00-2.98(m,2H),1.13(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例157：
2-((8-氨基-7-氟-6-甲基异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物258)
步骤1：(7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-6-甲基异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯/>
将三氟甲磺酸[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]酯(100mg，0.16mmol)、三甲基环硼氧烷(101.79mg，0.81mmol)、四(三苯基膦)钯(37.46mg，0.03mmol)和碳酸钾(67.14mg，0.49mmol)的溶液在90℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-甲基-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(35mg，0.073mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝483。
步骤2：2-((8-氨基-7-氟-6-甲基异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-甲基-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(25mg，0.05mmol)和2,2,2-三氟乙酸(5mL)的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩反应。残余物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为10。该粗产物经制备型HPLC提纯(SunFire Prep C18OBD柱，19×150mm 5um 10nm；水(0.1％FA)：ACN(10％-27％)，在12分钟内：25mL/分钟)，得到2-[(8-氨基-7-氟-6-甲基-3-异喹啉基)氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(5.4mg，0.014mmol)，其为橙色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝383.2；1HNMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.03(s,1H),7.53(s,1H),6.85(d,J＝6.6Hz,1H),6.03(s,1H),5.07(s,2H),4.83-4.65(m,1H),3.96-3.81(m,2H),3.24-3.08(m,2H),2.39(d,J＝2.3Hz,3H),1.25(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例158：
2-((8-氨基-7-氟-6-甲氧基异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物259)
步骤1：(7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-6-甲氧基异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将N-[7-氟-6-羟基-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.21mmol)和碳酸钾(42.72mg，0.31mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液在0℃搅拌15分钟。然后在0℃添加碘甲烷(43.96mg，0.31mmol)并随后搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-甲氧基-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(58mg，0.12mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝499。
步骤2：2-((8-氨基-7-氟-6-甲氧基异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
/>
将N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-甲氧基-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(55mg，0.11mmol)和2,2,2-三氟乙酸(0.5mL)在二氯甲烷(2mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为10。该粗产物经制备型HPLC提纯(XBridge ShieldRP18OBD柱，30*150mm,5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)：ACN(20％-46％)，在9分钟内：60mL/分钟)，得到2-[(8-氨基-7-氟-6-甲氧基-3-异喹啉基)氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(17.2mg，0.043mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝399.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.02(s,1H),8.97(s,1H),7.62(s,1H),6.48(d,J＝7.2Hz,1H),5.95(s,2H),5.89(s,1H),4.98(s,2H),4.62-4.57(m,1H),3.90(s,3H),3.80-3.76(m,2H),2.99-2.96(m,2H),1.13(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例159：
2-((8-氨基-7-氟-6-((吡啶-2-基氧基)甲基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物260)
步骤1：2-[[8-氯-6-(溴甲基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将2-[[8-氯-7-氟-6-(羟基甲基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(145mg，0.35mmol)和亚硫酰氯(204.73mg，1.74mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂，得到2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(150mg，0.34mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝436。
步骤2：2-((8-氯-7-氟-6-((吡啶-2-基氧基)甲基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮和2-[[8-氯-7-氟-6-[(2-氧代-1-吡啶基)甲基]-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(150mg，0.34mmol)、1H-吡啶-2-酮(98.08mg，1.03mmol)和碳酸铯(560.38mg，1.72mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物在25℃搅拌4小时。过滤后，减压浓缩该滤液。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％盐酸)，得到2-((8-氯-7-氟-6-((吡啶-2-基氧基)甲基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮(15mg，0.03mmol)和2-[[8-氯-7-氟-6-[(2-氧代-1-吡啶基)甲基]-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(85mg，0.17mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝495。
步骤3：7-氟-3-(6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-2-基氨基)-6-((吡啶-2-基氧基)甲基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在25℃，向2-(8-氯-7-氟-6-((吡啶-2-基氧基)甲基)异喹啉-3-基氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(14mg，0.028mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(99.47mg，0.85mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(5.86mg，0.0057mmol)和Brettphos(6.08mg，0.011mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物添加碳酸铯(36.9mg，0.11mmol)。在90℃搅拌所得溶液3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到7-氟-3-(6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂/>-2-基氨基)-6-((吡啶-2-基氧基)甲基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯(15mg，0.076mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝576.
步骤4：2-[[8-氨基-7-氟-6-(2-吡啶基氧基甲基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-(2-吡啶基氧基甲基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(18mg，0.03mmol)在二氯甲烷(3mL)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。该粗产物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD,19×150mm 5um；水(10mmol/碳酸氢钠)：CH3CN＝35％-55％ B，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(2-吡啶基氧基甲基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(3.4mg，0.0072mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝476.2；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.20(s,1H),9.06(s,1H),8.20(ddd,J＝5.1,2.0,0.8Hz,1H),7.76(ddd,J＝8.4,7.1,2.0Hz,1H),7.64(s,1H),7.02(ddd,J＝7.1,5.0,1.0Hz,1H),6.99-6.91(m,2H),6.01(s,2H),5.96(s,1H),5.45(s,2H),4.96(s,2H),4.59(q,J＝6.8Hz,1H),3.78(t,J＝5.9Hz,2H),2.98(t,J＝5.9Hz,2H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例160：
2-((8-氨基-7-氟-6-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物261)
步骤1：N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-[(2-氧代-1-吡啶基)甲基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯/>
在25℃，向2-[[8-氯-7-氟-6-[(2-氧代-1-吡啶基)甲基]-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(95mg，0.19mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(673.7mg，5.76mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(39.73mg，0.040mmol)和Brettphos(41.23mg，0.080mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液添加碳酸铯(250.29mg，0.77mmol)。在90℃搅拌所得溶液3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-[(2-氧代-1-吡啶基)甲基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(75mg，0.13mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝576。
步骤2：2-[[8-氨基-7-氟-6-[(2-氧代-1-吡啶基)甲基]-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-[(2-氧代-1-吡啶基)甲基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.12mmol)在2,2,2-三氟乙酸(3mL)和二氯甲烷(5mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。该粗产物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD,19×150mm 5um；水(10mmol/碳酸氢钠)：CH3CN＝13％-43％ B，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-[(2-氧代-1-吡啶基)甲基]-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(23.8mg，0.050mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝476.2；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.18(s,1H),9.06(s,1H),7.72(dd,J＝6.9,2.0Hz,1H),7.53-7.43(m,2H),6.49-6.39(m,2H),6.29(td,J＝6.7,1.4Hz,1H),6.05(s,2H),5.96(s,1H),5.20(s,2H),4.94(s,2H),4.59(m,J＝6.8Hz,1H),3.77(t,J＝5.9Hz,2H),2.97(t,J＝5.9Hz,2H),1.11(d,J＝6.8Hz,6H)。/>
实施例161：
6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-N3-(7,7-二氟-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)-7-氟异喹啉-3,8-二胺(化合物262)
步骤1：1-(3,5-二溴吡唑-1-基)己-5-烯-2-醇
将3,5-二溴-1H-吡唑(5.0g，22.14mmol)、1,2-环氧基-5-己烯(4.35g，44.27mmol)和碳酸铯(21.78g，66.41mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液在85℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(3/1)洗脱，得到1-(3,5-二溴吡唑-1-基)己-5-烯-2-醇(4.2g，13.0mmol)，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝324.0。
步骤2：2-溴-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢吡唑并[1,5-a]氮杂-7-醇
在氮气下，将[1-(3,5-二溴吡唑-1-基)己-5-烯-2-醇(7.2g，22.22mmol)、乙酸钯(500mg，2.23mmol)、三苯基膦(1170.0mg，4.47mmol)、乙酸钾(6570.0mg，67.04mmol)和溴化四丁基铵(7155.33mg，22.22mmol)]在N,N-二甲基乙酰胺(70mL)中的混合物在90℃持续12小时。过滤后，滤液在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(2/1)洗脱，得到2-溴-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢吡唑并[1,5-a]氮杂-7-醇(3.8g，15.63mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝243.1。
步骤3：2-溴-4-亚甲基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-a]氮杂-7-酮/>
将2-溴-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢吡唑并[1,5-a]氮杂-7-醇(1.5g，6.17mmol)和在二氯甲烷(20mL)中的DMP的混合物在25℃搅拌3小时。反应混合物用水中的碳酸氢钠调节至pH为7。所得溶液经二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(4/1)洗脱，得到2-溴-4-亚甲基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-a]氮杂/>-7-酮(600mg，2.49mmol)，其为黄色油状物。LC/MS(ESI)[M+H]+＝241.1。
步骤4：2-溴-7,7-二氟-4-亚甲基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-a]氮杂
将2-溴-4-亚甲基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-a]氮杂-7-酮(400mg，1.66mmol)和三氟化二乙基氨基硫(801.39mg，4.98mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液在0℃搅拌1小时。混合物用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到2-溴-7,7-二氟-4-亚甲基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-a]氮杂/>(120mg，0.46mmol)，其为浅黄色油状物。LC/MS(ESI)：[M+H]+＝263.1。
步骤5：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(7,7-二氟-4-亚甲基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将2-溴-7,7-二氟-4-亚甲基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-a]氮杂(21.24mg，0.08mmol)、N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(65.0mg，0.13mmol)、t-BuBrettphosPdG3(44.15mg，0.05mmol)、t-BuBrettphos(31.27mg，0.06mmol)和碳酸铯(126.39mg，0.39mmol)在1,4-二噁烷(6mL)中的混合物在130℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用PE/EA(1/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(7,7-二氟-4-亚甲基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-a]氮杂/>-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(30mg，0.044mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝685.1。
步骤6：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(7,7-二氟-4-亚甲基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(7,7-二氟-4-亚甲基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.06mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(170.99mg，1.46mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(12.09mg，0.01mmol)、Brettphos(9.39mg，0.02mmol)和碳酸铯(57.1mg，0.18mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(7,7-二氟-4-亚甲基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-a]氮杂/>-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.06mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝765.8。
步骤7：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7,7-二氟-4-甲基-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7,7-二氟-4-亚甲基-6,8-二氢-5H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(105.0mg，0.14mmol)和钯碳(10％)(20mg，0.14mmol)在甲醇(5mL)中的混合物在25℃搅拌1小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7,7-二氟-4-甲基-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-a]氮杂/>-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.09mmol)，其为浅黄色固体。LC/MS(ESI)[M+H]+＝767.8。
步骤8：6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-N3-(7,7-二氟-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)-7-氟异喹啉-3,8-二胺
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7,7-二氟-4-甲基-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.09mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为7。残余物在C18上经快速色谱提纯(在水中的乙腈-0.1％ FA)，得到6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-N3-(7,7-二氟-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂/>-2-基)-7-氟异喹啉-3,8-二胺(19.9mg，0.043mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝486.2。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),9.14(s,1H),8.01(s,1H),7.77(s,1H),7.73(s,1H),6.75(d,J＝6.1Hz,1H),6.13(s,2H),5.94(s,1H),5.55(s,2H),4.77-4.65(m,1H),4.48-4.35(m,1H),3.04-2.95(m,1H),2.40-2.20(m,2H)1.99(s,3H),1.82(d,J＝14.4Hz,1H),1.50-1.40(m,1H),1.32(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例162：
5-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-1-甲基-1,3-二氢异噻唑并[4,3-b]吡啶2,2-二氧化物(化合物263)
步骤1：N-(2,6-二氯-3-吡啶基)甲磺酰胺
将2,6-二氯-3-吡啶基胺(3.0g，18.4mmol)、三乙胺(9.29g，92.02mmol)和甲磺酰氯(6.29g，55.21mmol)在二氯甲烷(120mL)中的溶液在0℃搅拌2小时。反应混合物用10％氢氧化钠溶液调节至pH为10。将所得混合物在20℃搅拌1小时。所得混合物经二氯甲烷萃取，并合并水层。反应混合物用12％盐酸溶液调节至pH为5。过滤后，收集并干燥固体，得到N-(2,6-二氯-3-吡啶基)甲磺酰胺(3g，12.44mmol)，其为无色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝241.1。
步骤2：N-(2,6-二氯-3-吡啶基)-N-甲基-甲磺酰胺
将N-(2,6-二氯-3-吡啶基)甲磺酰胺(3.5g，14.52mmol)、碳酸钾(5.01g，36.29mmol)、溴化四丁基铵(0.93g，2.9mmol)和碘甲烷(6.18g，43.55mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(170mL)中的溶液在20℃搅拌3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物经反相色谱提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠：ACN(5％～70％)，在30分钟内)，得到N-(2,6-二氯-3-吡啶基)-N-甲基-甲磺酰胺(3.5g，13.72mmol)，其为红色油状物。LC/MS(ESI)：[M+H]+＝255.1。
步骤3：5-氯-1-甲基-3H-异噻唑并[4,3-b]吡啶2,2-二氧化物
将N-(2,6-二氯-3-吡啶基)-N-甲基-甲磺酰胺(2.2g，8.62mmol)和叔丁醇钾(2.41g，21.56mmol)在二甲基亚砜(70mL)中的溶液在20℃搅拌2小时。过滤后，反应体系经反相色谱提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠：甲醇(5％～45％)，在30分钟内)，得到5-氯-1-甲基-3H-异噻唑并[4,3-b]吡啶2,2-二氧化物(900mg，4.12mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝218.7。
步骤4：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基-2,2-二氧代-3H-异噻唑并[4,3-b]吡啶-5-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(300mg，0.60mmol)、5-氯-1-甲基-3H-异噻唑并[4,3-b]吡啶2,2-二氧化物(300mg，1.37mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(123.47mg，0.12mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(103.43mg，0.18mmol)和碳酸铯(486.11mg，1.49mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的混合物在95℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物经反相色谱提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠：甲醇(5％～70％)，在30分钟内)，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基-2,2-二氧代-3H-异噻唑并[4,3-b]吡啶-5-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(150mg，0.22mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝685.2。
步骤5：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-2,2-二氧代-3H-异噻唑并[4,3-b]吡啶-5-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
在90℃，将[氨基甲酸叔丁基酯(250mg，2.13mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(15mg，0.01mmol)、Brettphos(8.0mg，0.01mmol),N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基-2,2-二氧代-3H-异噻唑并[4,3-b]吡啶-5-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.07mmol)和碳酸铯(95.0mg，0.29mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(5/95)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-2,2-二氧代-3H-异噻唑并[4,3-b]吡啶-5-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.065mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝765.9。
步骤6：[6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N3-(1-甲基-2,2-二氧代-3H-异噻唑并[4,3-b]吡啶-5-基)异喹啉-3,8-二胺
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(1-甲基-2,2-二氧代-3H-异噻唑并[4,3-b]吡啶-5-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(300mg，0.39mmol)和2,2,2-三氟乙酸(0.2mL,0.39mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液在25℃搅拌30分钟。将反应经在甲醇中的氨(7mol/L)淬灭。在真空下浓缩溶剂。残余物在C18上经快速色谱提纯(乙腈-0.1％碳酸氢钠，在水中)，得到5-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-1-甲基-1,3-二氢异噻唑并[4,3-b]吡啶2,2-二氧化物(17.1mg，0.037mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)：[M+H]+＝466.2。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.69(s,1H),9.35(s,1H),8.23(s,1H),8.00(s,1H),7.68(s,1H),7.45-7.28(m,2H),6.77(d,J＝6.2Hz,1H),6.16(s,2H),5.26(s,2H),4.79(s,2H),3.05(s,3H),1.94(d,J＝1.4Hz,3H)。
实施例163：
6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N3-((4S,7S)-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)异喹啉-3,8-二胺(化合物265)、
6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N3-((4R,7R)-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)异喹啉-3,8-二胺(化合物266)、
6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N3-((4S,7R)-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)异喹啉-3,8-二胺(化合物267)和
6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N3-((4R,7S)-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)异喹啉-3,8-二胺(化合物268)
步骤1：1-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)己-5-烯-2-醇
向3,5-二溴-1H-吡唑(1.5g，6.7mmol)在乙腈(20mL)和2-(丁-3-烯基)氧杂环丙烷(2g，20mmol)中的溶液中添加碳酸钾(2.8g，20mmol)。将所得混合物在80℃搅拌2小时。将反应用水淬灭并随后用乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到1-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)己-5-烯-2-醇(1.4g，4.3mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝323。
步骤2：2-溴-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-7-醇/>
将1-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)己-5-烯-2-醇(5.2g，16.15mmol)、乙酸钯(361mg，1.62mmol)、三苯基膦(846mg，3.23mmol)、乙酸钾(4.7g，48.45mmol)和溴化四丁基铵(5.2g，16.15mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的混合物在90℃搅拌过夜。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到2-溴-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-7-醇(3.6g，14.8mmol)，其为灰白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝243。
步骤3：2-溴-7-甲氧基-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂
将2-溴-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-7-醇(1g，4.12mmol)和氧化银在碘甲烷(15mL)中的混合物回流过夜。在真空下浓缩所得溶液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(2/1)洗脱，得到2-溴-7-甲氧基-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂/>(1.02g，3.98mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝257。
步骤4：N-叔丁氧基羰基(5-(8-氯-7-氟-3-((7-甲氧基-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
向2-溴-7-甲氧基-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂(1.02g，3.97mmol)、N-叔丁氧基羰基(5-(3-氨基-8-氯-7-氟异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(2g，3.97mmol)、t-BuBrettPhos Pd G3(683mg，0.8mmol)和t-BuBrettphos(774mg，1.6mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的溶液中添加碳酸铯(3.9g，12mmol)。将所得混合物在120℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基(5-(8-氯-7-氟-3-((7-甲氧基-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂/>-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(1.5g，2.21mmol)，其为深棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝679。
步骤5：N-叔丁氧基羰基-N-(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((7-甲氧基-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
向N-叔丁氧基羰基(5-(8-氯-7-氟-3-((7-甲氧基-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(1.5g，2.2mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(7.7g，66mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(455mg，0.44mmol)和Brettphos(236mg，0.44mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物添加碳酸铯(2.9g，0.8mmol)。在90℃搅拌所得溶液2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((7-甲氧基-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂/>-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(1.10g，1.45mmol)，其为深棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝760。
步骤6：(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
/>
在室温，将N-叔丁氧基羰基-N-(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((7-甲氧基-4-亚甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(1.1g，1.45mmol)、氧化铂(120mg)在甲醇(15mL)中的混合物搅拌16小时。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂/>-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(800mg，1.05mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝762。
步骤7：6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N3-((4S,7S)-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)异喹啉-3,8-二胺，6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N3-((4R,7R)-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂/>-2-基)异喹啉-3,8-二胺，6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N3-((4S,7R)-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂/>-2-基)异喹啉-3,8-二胺以及6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N3-((4R,7S)-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂/>-2-基)异喹啉-3,8-二胺
将(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-a]氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(800mg，1.05mmol)在二氯甲烷(10mL)和2,2,2-三氟乙酸(10mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。该粗产物经反向-HPLC提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠：ACN＝20％-50％。在7分钟内)，得到所述混合物(168mg，0.36mmol)，其为黄色固体。经手性-HPLC分离混合物，得到4种异构体。化合物265：(56.3mg)黄色固体。保留时间：6.06分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.3％IPAmine):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝462.3；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),8.91(s,1H),7.98(s,1H),7.66(d,J＝4.6Hz,2H),6.64(d,J＝6.1Hz,1H),6.04(s,2H),5.85(s,1H),5.22(s,2H),4.51(dd,J＝15.2,5.3Hz,1H),4.16(d,J＝14.7Hz,1H),3.53(s,1H),3.27(s,3H),2.89-2.72(m,1H),2.16-2.03(m,1H),1.93(s,3H),1.87-1.72(m,1H),1.58-1.42(m,2H),1.27(d,J＝6.9Hz,3H)。化合物266：(48.7mg)，其为黄色固体。保留时间：4.46分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.3％IPAmine):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝462.3。化合物268：(17.8mg)，其为黄色固体。保留时间：6.53分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.3％IPAmine):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝462.3；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),8.98(s,1H),7.98(s,1H),7.68(d,J＝6.9Hz,2H),6.69(d,J＝6.1Hz,1H),6.05(s,2H),5.87(s,1H),5.22(s,2H),4.34(d,J＝14.0Hz,1H),4.03(dd,J＝14.0,9.5Hz,1H),3.33(s,3H),3.16(s,1H),2.86(s,1H),2.13(s,1H),1.93(s,3H),1.86-1.56(m,2H),1.41-1.20(m,1H),1.27(t,J＝6.8Hz,3H)。化合物267：(17.8mg)，其为黄色固体。保留时间：11.8分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.3％IPAmine):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝462.3。
实施例164：
5-[8-氨基-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-1-乙基-吡唑-3-甲腈(化合物269)
步骤1：5-溴-1-乙基-吡唑-3-甲酸甲基酯
将5-溴-1H-吡唑-3-甲酸甲基酯(2.0g，9.76mmol)、碘乙烷(4.5g,28.85mmol)和碳酸钾(3.0g，21.74mmol)在四氢呋喃(50mL)中的混合物在80℃搅拌1小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(3/1)洗脱，得到5-溴-1-乙基-吡唑-3-甲酸甲基酯(1.2g，5.15mmol)，其为淡黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝233.1。
步骤2：5-溴-1-乙基-吡唑-3-甲酰胺
在室温，将5-溴-1-乙基-吡唑-3-甲酸甲基酯(1.2g，5.15mmol)在氢氧化铵(10mL,30％)中的混合物搅拌1小时。将反应溶液在真空下浓缩，得到5-溴-1-乙基-吡唑-3-甲酰胺(1.1g，5.05mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝218.1。
步骤3：5-溴-1-乙基-1H-吡唑-3-甲腈
在0℃，将三氟乙酸酐(1.27g，6.05mmol)逐滴添加至5-溴-1-乙基-吡唑-3-甲酰胺(1.1g，5.05mmol)和三乙胺(1.53g，15.14mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中。在室温，搅拌所得溶液1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-60/0.05％碳酸氢钠)，得到5-溴-1-乙基-1H-吡唑-3-甲腈(1g，5.00mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝200。
步骤4：N-[6-(5-氰基-2-乙基-吡唑-3-基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
将[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]硼酸(80mg，0.16mmol)和氟化氢钾(40mg，0.41mmol)在2-甲基-2-丙醇(0.80mL)和水(0.20mL)中的溶液在室温搅拌5小时。添加5-溴-1-乙基-吡唑-3-甲腈(80mg，0.40mmol)、磷酸钾(96mg，0.45mmol)和四(三苯基膦)钯(40mg，0.03mmol)。在微波辐射下，所得混合物在100℃搅拌4.5小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到N-[6-(5-氰基-2-乙基-吡唑-3-基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(45mg，0.077mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝588.3。
步骤5：5-[8-氨基-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-1-乙基-吡唑-3-甲腈
在室温，将N-[6-(5-氰基-2-乙基-吡唑-3-基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.07mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)在二氯甲烷(4mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用三乙胺调节至pH为7。该粗产物经制备型HPL使用以下条件C提纯：柱，Atlantis HILIC OBD柱19*150*5μm；流动相：水(10mmol/L碳酸氢钠)和ACN(40-50％，在7分钟内)；检测器，UV 254nm。得到5-[8-氨基-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-1-乙基-吡唑-3-甲腈(13.8mg，0.028mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝488.4；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.30(s,1H),9.19(s,1H),7.76(s,1H),7.19(s,1H),6.94(d,J＝5.8Hz,1H),6.30(s,2H),5.96(s,1H),4.97(s,2H),4.61-4.57(m,1H),4.16(q,J＝7.3Hz,2H),3.79-3.76(m,2H),2.98(t,J＝5.8Hz,2H),1.33(t,J＝7.2Hz,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例165：
2-[[8-氨基-7-氟-6-(5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(化合物270)
步骤1：3-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-6,8-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯
在100℃将6,8-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯(1.0g，4.48mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(1.5g，4.65mmol)、碳酸钾(1.0g，7.25mmol)、乙酸钯(122mg，0.37mmol)、三环己基膦(210mg，0.75mmol)和三甲基乙酸(115mg，1.13mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(20mL)中的混合物搅拌6小时。所得混合物冷却至室温并随后过滤。在真空下浓缩滤液。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-55/0.05％碳酸氢钠)，得到3-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-6,8-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯(500mg，1.20mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝418.1。
步骤2：3-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-6,8-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯/>
将3-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-6,8-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯(350mg，0.84mmol)、2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(455mg，1.67mmol)、t-BuBrettPhosPdG3(350mg，0.41mmol)、t-BuBrettPhos(420mg，0.73mmol)和碳酸铯(805mg，2.47mmol)在1,4-二噁烷(35mL)中的混合物在120℃搅拌1.5小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到3-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-6,8-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯(300mg，0.49mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝609.2。
步骤3：3-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-6,8-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯
将3-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-6,8-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯(260mg，0.43mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(78mg，0.08mmol)、Brettphos(91mg，0.17mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.56g，13.32mmol)和碳酸铯(416mg，1.28mmol)在1,4-二噁烷(26mL)中的混合物在90℃搅拌16小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-60/0.05％碳酸氢钠)，得到3-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-6,8-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯(150mg，0.22mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝690.3。
步骤4：2-[[8-氨基-7-氟-6-(5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
向3-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-6,8-二氢-5H-咪唑并[1,2-a]吡嗪-7-甲酸叔丁基酯(145mg，0.21mmol)在二氯甲烷(6mL)中的溶液添加2,2,2-三氟乙酸(1.5mL)。在25℃搅拌所得溶液1小时，并随后在真空下浓缩。残余物用三乙胺调节至pH为7。该粗产物经制备型HPLC提纯：Atlantis HILIC OBD柱19*150*5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)和ACN(20-30％，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(17.2mg，0.035mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝490.3。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.22(s,1H),9.06(s,1H),7.67(s,1H),7.07(d,J＝1.5Hz,1H),6.85(d,J＝6.1Hz,1H),6.07(s,2H),5.96(s,1H),4.97(s,2H),4.60(t,J＝6.7Hz,1H),3.97-3.85(m,4H),3.79-3.77(m,2H),3.04-2.98(m,4H),2.75(s,1H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例166：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-5,6-二氢-4H,8H-吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂7,7-二氧化物(化合物271)
步骤1：2-溴-6,8-二氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂7,7-二氧化物
/>
将1-(烯丙基磺酰基甲基)-3,5-二溴-吡唑(2.0g，5.81mmol)、三乙胺(4.11g，40.7mmol)、乙酸钯(0.2g，0.87mmol)和三(2-甲基苯基)膦(530.2mg，1.74mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(120mL)中的混合物在140℃搅拌1小时。将反应冷却至室温，并随后在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(6/1)洗脱，得到2-溴-6,8-二氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂7,7-二氧化物(100mg，0.38mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝263.2。
步骤2：2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂7,7-二氧化物
在氢气下(2atm)，将2-溴-6,8-二氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂7,7-二氧化物(200.0mg，0.76mmol)、氧化铂(17.26mg，0.08mmol)和乙酸(9.12mg，0.15mmol)在甲醇(30mL)中的混合物在20℃搅拌1小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物经反相快速色谱提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠:MeOH＝95％～60％，在20分钟内)，得到2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂/>7,7-二氧化物(130mg，0.49mmol)，其为白色固体。LCMS45(ESI)[M+H]+＝265.3。
步骤3：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(7,7-二氧代-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(140mg，0.28mmol)、2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂7,7-二氧化物(140mg，0.53mmol)、t-BuBrettPhos Pd G3(190.17mg，0.22mmol)、t-BuBrettPhos(134.72mg，0.28mmol)和碳酸铯(453.7mg，1.39mmol)在1,4-二噁烷(28mL)中的混合物在130℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物经反相快速色谱提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠：MeOH＝95％～35％，在20分钟内)，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(7,7-二氧代-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂/>-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(75mg，0.11mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝687.3。
步骤4：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7,7-二氧代-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(7,7-二氧代-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.15mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(425.65mg，3.64mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(22.59mg，0.02mmol)、BrettPhos(15.6mg，0.03mmol)和碳酸铯(237.2mg，0.73mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7,7-二氧代-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂/>-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.13mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝768.4。
步骤5：6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-N3-(7,7-二氧代-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂-2-基)-7-氟-异喹啉-3,8-二胺
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(7,7-二氧代-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.13mmol)和2,2,2-三氟乙酸(10.0mL,1.3mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液在20℃搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物。用甲醇(7mol/L)中的氨将溶液的pH值调节至10。该粗产物经制备型HPLC提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠：CH3CN＝95％～35％，在45分钟内)，得到6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-N3-(7,7-二氧代-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-c][1,3]硫杂氮杂/>-2-基)-7-氟-异喹啉-3,8-二胺(10.3mg，0.02mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),9.26(s,2H),8.00(s,1H),7.80(s,2H),6.74-6.72(m,1H),6.13(s,2H),6.04(s,1H),5.73-5.45(m,4H),3.50-3.40(m,2H),2.97-2.94(m,2H),2.03-1.98(m,5H)。
实施例167：
2-[[8-氨基-7-氟-6-(5-甲基-2-氧代-1H-吡啶-4-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮；甲酸(化合物272)
步骤1：4-碘-2-甲氧基-5-甲基-吡啶
将2-氟-4-碘-5-甲基吡啶(5.0g，21.1mmol)和在甲醇中的甲醇钠(50mL,30％)在甲醇(50mL)中的溶液在80℃搅拌2.5小时。将反应用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到4-碘-2-甲氧基-5-甲基-吡啶(3.7g，14.86mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝250。
步骤2：(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)硼酸
在-78℃，将4-碘-2-甲氧基-5-甲基-吡啶(200mg，0.80mmol)、正丁基锂(0.8mL,2mmol)在四氢呋喃(5mL)中的溶液搅拌1小时。添加三异丙氧基硼烷(1mL，4.33mmol)并随后在25℃搅拌1小时。将反应用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)硼酸(300mg，0.72mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝168。
步骤3：N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯/>
在氮气下，将(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)硼酸(54.16mg，0.32mmol)、三氟甲磺酸[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]酯(100.0mg，0.16mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(11.87mg，0.02mmol)和碳酸钾(49.24mg，0.36mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(1mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1:9)洗脱，得到N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(59mg，0.10mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝590。
步骤4：2-[[8-氨基-7-氟-6-(5-甲基-2-氧代-1H-吡啶-4-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮；甲酸
将N-[7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.10mmol)和碘三甲基硅烷(122.16mg，0.61mmol)在乙腈(60mL)中的混合物在80℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。该粗产物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD,19×150mm5um；水(0.1％FA)：CH3CN＝13％-24％B，在10分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(5-甲基-2-氧代-1H-吡啶-4-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮；甲酸(11.4mg，0.022mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝476.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.89-11.19(s,1H),9.26(s,1H),9.10(s,1H),8.38(s,1H),7.73(s,1H),7.31(s,1H),6.73(d,J＝6.0Hz,1H),6.26(s,1H),6.13(s,2H),5.97(s,1H),4.98(s,2H),4.66-4.55(m,1H),3.84-3.74(m,2H),3.04-2.94(s,2H),1.84(s,3H),1.13(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例168：
2-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-6-(2-羟基-2-甲基丙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物273)
步骤1：2-(3-溴-5-(2-(2-羟基-2-甲基丙基氨基)乙基)-1H-吡唑-1-基)乙酸甲基酯
将2-[5-(2-氨基乙基)-3-溴-吡唑-1-基]乙酸甲基酯(400mg，1.53mmol)和1,1-二甲基环氧乙烷(20mL,1.53mmol)在甲醇(10mL)中的溶液在25℃搅拌40小时。在真空中浓缩该混合物。该粗产物无需提纯直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝334。
步骤2：2-溴-6-(2-羟基-2-甲基丙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将2-[3-溴-5-[2-[(2-羟基-2-甲基-丙基)氨基]乙基]吡唑-1-基]乙酸甲基酯(200mg，0.60mmol)和三乙胺(604.41mg，5.98mmol)在甲醇(50mL)中的溶液在25℃搅拌12小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(5/95)洗脱，得到2-溴-6-(2-羟基-2-甲基-丙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(40mg，0.13mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝302。
步骤3：2-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-6-(2-羟基-2-甲基丙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将2-溴-6-(2-羟基-2-甲基-丙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(252.05mg，0.83mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(200mg，0.70mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(143.89mg，0.14mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(160.99mg，0.28mmol)和碳酸铯(679.83mg，2.09mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在100℃搅拌3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/9)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(2-羟基-2-甲基-丙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(150mg，0.29mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝509。
步骤4：7-氟-3-(6-(2-羟基-2-甲基丙基)-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-2-基氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
将氨基甲酸叔丁基酯(1173.85mg，10.02mmol)、2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(2-羟基-2-甲基-丙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(170mg，0.33mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(69.14mg，0.07mmol)、Brettphos(71.74mg，0.13mmol)和碳酸铯(435.54mg，1.34mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/9)洗脱，得到N-[7-氟-3-[[6-(2-羟基-2-甲基-丙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.10mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝590。步骤5：2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-6-(2-羟基-2-甲基丙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮
将N-[7-氟-3-[[6-(2-羟基-2-甲基-丙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.10mmol)在2,2,2-三氟乙酸(6mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD,19×150mm 5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)：CH3CN＝20％-45％ B，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(2-羟基-2-甲基-丙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(14.1mg，0.029mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝490.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),9.10(s,1H),8.50(d,J＝5.0Hz,1H),8.43(s,1H),7.75(s,1H),7.39(d,J＝5.1Hz,1H),6.78(d,J＝6.1Hz,1H),6.12(s,2H),5.96(s,1H),5.01(s,2H),4.59(s,1H),4.00-3.93(m,2H),3.82(s,2H),3.15-3.07(s,2H),2.22(s,3H),1.06(s,6H)。
实施例169：
(R)-2-((8-氨基-7-氟-6-(7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物274)和(S)-2-((8-氨基-7-氟-6-(7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮(化合物275)
/>
步骤1：4-溴-7-羟基-5H-环戊[c]吡啶-6-甲酸甲基酯
在5分钟内，在-78℃向5-溴烟酸乙酯(5-bromonicotimate)(5g，21.7mmol)在四氢呋喃(22mL)中的溶液中逐滴添加二异丙基氨基锂(23.9mmol，2.5M，在四氢呋喃中)。将所得深红色溶液在-78℃搅拌30分钟。在5分钟内，在-78℃添加在四氢呋喃(22mL)中丙烯酸甲酯(4.9mL,54.3mmol)。将反应在-78℃继续搅拌1.5小时。然后添加10％乙酸水溶液(43.5mL,76.1mmol)(得到pH为4-5)并将反应温热至室温。所得溶液在真空下浓缩，得到4-溴-7-羟基-5H-环戊[c]吡啶-6-甲酸甲基酯(5.38g，粗品)，其为深绿色无定形固体。LCMS(ESI)[M+H+]＝270,272。
步骤2：4-溴-5,6-二氢-7H-环戊[c]吡啶-7-酮
4-溴-6-(甲氧基羰基)-5H-环戊[c]吡啶-7-醇化物(5.38g，粗品)溶于6M盐酸水溶液(54mL)，并加热回流1.5小时。将反应在冰/水中冷却，并随后用氢氧化钾(6mol/L)调节至pH为9。所得溶液经乙醚萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(100/1)洗脱，得到4-溴-5,6-二氢-7H-环戊[c]吡啶-7-酮(0.69g，3.25mmol)，其为粉色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝212,214。
步骤3：4-溴-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-7-醇
在0℃，向4-溴-5,6-二氢环戊[c]吡啶-7-酮(0.69g，3.3mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中添加硼氢化钠(188mg，5mmol)。所得溶液在室温搅拌过夜。将反应用水淬灭，并随后用二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到4-溴-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-7-醇(580mg，2.72mmol)，其为灰白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝214,216。
步骤4：4-溴-7-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶
向4-溴-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-7-醇(424mg，2mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中添加咪唑(408mg，6.0mmol)和叔丁基氯二苯基硅烷(1.1g，4.0mmol)。将反应混合物在25℃搅拌2小时。反应混合物经乙酸乙酯稀释并随后用盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到4-溴-7-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶(820mg，1.81mmol)，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝452,454。
步骤5：7-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基硼酸
在1,4-二噁烷中，向压力管中添加4-溴-7-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶(450mg，1mmol)、双(频哪醇合)二硼(2.54g，10mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(73mg，0.1mmol)和乙酸钾(290mg，0.3mmol)。将反应混合物在90℃搅拌3小时。将混合物在真空下浓缩。残余物经反向-HPLC提纯，得到7-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基硼酸(320mg，0.77mmol)，其为灰白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝418。
步骤6：6-(7-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基)-7-氟-3-(6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-2-基氨基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
在1,4-二噁烷中，向压力管中添加7-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基硼酸(100mg，0.24mmol)、三氟甲磺酸8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-(6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-2-基氨基)异喹啉-6-基酯(98mg，0.16mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(26mg，0.032mmol)和碳酸钾(66mg，0.48mmol)。将反应混合物在90℃搅拌3小时。将反应冷却至室温，并随后在真空下浓缩。残余物经反向-HPLC提纯，得到6-(7-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基)-7-氟-3-(6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂/>-2-基氨基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯(108mg，0.13mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝840。
步骤7：2-(8-氨基-6-(7-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮/>
在0℃，向6-(7-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基)-7-氟-3-(6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-2-基氨基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯(108mg，0.13mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加2,2,2-三氟乙酸(2mL)。在室温，将反应搅拌30分钟。所得溶液在真空下浓缩，得到2-(8-氨基-6-(7-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮(45mg，0.061mmol)，其为棕色油状物。将残余物直接用于下一步骤。LCMS(ESI)[M+H]+＝740。
步骤8：(R)-2-((8-氨基-7-氟-6-(7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮和(S)-2-((8-氨基-7-氟-6-(7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮
将2-(8-氨基-6-(7-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(45mg，0.061mmol)在二氯甲烷(10mL)和氟化四丁基铵(0.1mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠:ACN＝20％-50％，在30分钟内)，得到外消旋产物(25mg，0.049mmol)，其为白色固体。通过手性-HPLC分离外消旋产物，得到两种异构体：化合物275：(7.1mg，0.014mmol)，其为白色固体。保留时间：2.68分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.3％IPAmine):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝502.2；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),9.09(s,1H),8.58(s,1H),8.45(s,1H),7.72(s,1H),6.85(d,J＝6.2Hz,1H),6.12(s,2H),5.97(s,1H),5.52(d,J＝5.8Hz,1H),5.26(dd,J＝12.6,6.4Hz,1H),4.97(s,2H),4.64-4.54(m,1H),3.78(s,2H),3.03-2.71(m,4H),2.40-2.31(m,1H),1.88-1.78(m,1H),1.12(d,J＝6.8Hz,6H)。化合物274：(7.8mg，0.015mmol)，其为白色固体。保留时间：3.73分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.3％IPAmine):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)。
实施例170：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-5-甲基-4,5-二氢-7H-吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物(化合物276)
步骤1：5-溴-2-(甲基氨磺酰甲基)吡唑-3-甲酸甲基酯
将3-溴-1H-吡唑-5-甲酸甲基酯(100mg，0.49mmol)、1-溴-N-甲基-甲磺酰胺(91.72mg，0.49mmol)和碳酸钾(134.63mg，0.98mmol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(10mL)中的混合物在50℃搅拌1小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(3/1)洗脱，得到5-溴-2-(甲基氨磺酰甲基)吡唑-3-甲酸甲基酯(100mg，0.32mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝312。
步骤2：1-[3-溴-5-(羟基甲基)吡唑-1-基]-N-甲基-甲磺酰胺
在0℃，向5-溴-2-(甲基氨磺酰甲基)吡唑-3-甲酸甲基酯(60mg，0.19mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加氢化二异丁基铝(0.19mL,0.38mmol)。在0℃，搅拌所得溶液1小时。将反应用甲醇淬灭。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％氢氧化铵)，得到1-[3-溴-5-(羟基甲基)吡唑-1-基]-N-甲基-甲磺酰胺(35mg，0.12mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝284。
步骤3：2-溴-5-甲基-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物
将1-[3-溴-5-(羟基甲基)吡唑-1-基]-N-甲基-甲磺酰胺(200mg，0.70mmol)和三苯基膦(370.25mg，1.41mmol)在四氢呋喃(10mL)中的混合物在25℃搅拌5分钟。然后添加偶氮二甲酸二异丙基酯(284.38mg，1.41mmol)。将反应在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)洗脱，得到2-溴-5-甲基-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物(170mg，0.64mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝266。
步骤4：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-甲基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(321.3mg，0.64mmol)、2-溴-5-甲基-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物(170mg，0.64mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(132.23mg，0.13mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(147.69mg，0.26mmol)和碳酸铯(624.76mg，1.92mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在100℃搅拌6小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(3/2)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-甲基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(110mg，0.16mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝688。
步骤5：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5-甲基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-甲基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.15mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(340.47mg，2.91mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(30.08mg，0.03mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(33.6mg，0.06mmol)和碳酸铯(142.12mg，0.44mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在100℃搅拌6小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(2/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5-甲基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(105mg，0.14mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝769。
步骤6：6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N 3-(5-甲基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)异喹啉-3,8-二胺
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5-甲基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.13mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)在二氯甲烷(3mL)中的混合物在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为9。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％碳酸氢钠)，得到6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N3-(5-甲基-6,6-二氧代-4,7-二氢吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)异喹啉-3,8-二胺(55.3mg，0.12mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝469；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.33(s,1H),9.28(s,1H),7.98(s,1H),7.70(s,1H),7.66(s,1H),6.65-6.64(d,J＝4.0Hz,1H),6.16(s,1H),6.09(s,2H),5.57(s,2H),5.22(s,2H),4.59(s,2H),2.86(s,3H),1.92(s,3H)。
实施例171：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物277)
步骤1：2-溴-6-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在0℃，向2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(200mg，0.87mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中添加NaH(79.98mg，3.48mmol)并随后搅拌5分钟。添加3-(碘甲基)氧杂环丁烷(344.26mg，1.74mmol)并随后在25℃搅拌1小时。用水淬灭反应。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到2-溴-6-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(192mg，0.64mmol)，其为橙色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝300.3。
步骤2：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[6-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
/>
将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(214.5mg，0.43mmol)、2-溴-6-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(192.01mg，0.64mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(88.28mg，0.09mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(98.6mg，0.17mmol)和碳酸铯(347.57mg，1.07mmol)在1,4-二噁烷(19mL)中的混合物在100℃搅拌4小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[6-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(231.3mg，0.32mmol)，其为橙色固体。LCMS15(ESI)[M+H]+＝722.3。
步骤3：N-[7-氟-3-([6-甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯
在25℃，向N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[6-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(231.3mg，0.32mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(936.78mg，8.01mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(66.3mg，0.06mmol)和Brettphos(68.67mg，0.13mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物中添加碳酸铯(261.02mg，0.80mmol)。将反应溶液在90℃搅拌1小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[6-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(105.4mg，0.1313mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝803.3。
步骤4：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮/>
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[6-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(66mg，0.08mmol)在二苯醚(2.0mL)中的溶液在180℃搅拌3小时。将反应溶于N,N-二甲基甲酰胺并随后经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD柱，19*150mm*5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)/ACN＝15％-30％，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(4.6mg，0.0092mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝503.3。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.24(s,1H),9.06(s,1H),7.98(s,1H),7.69-7.66(m,2H),6.72-6.70(m,1H),6.06(s,2H),5.97(s,1H),5.22(s,2H),4.97(s,2H),4.63-4.59(m,2H),4.34-4.30(m,2H),3.83(m,2H),3.71-3.69(m,2H),3.25-3.21(m,1H),2.99-2.98(m,2H),1.92(s,3H)。
实施例172：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(2,2-二氟乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物
278)
步骤1：2-甲氧基-4-甲基-3-硝基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶
将5-溴-2-甲氧基-4-甲基-3-硝基-吡啶(2.0g，8.1mmol)、双(频哪醇合)二硼(10.28g，40.48mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(1.19g，1.62mmol)和乙酸钾(2.38g，24.29mmol)在1,4-二噁烷(40mL)中的混合物在100℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到2-甲氧基-4-甲基-3-硝基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(2.1g，7.14mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝295。
步骤2：8-氯-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺
将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(1.0g，3.1mmol)、2-甲氧基-4-甲基-3-硝基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(1.37g，4.65mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(226.97mg，0.31mmol)和碳酸钾(941.37mg，6.82mmol)在1,4-二噁烷(30mL)和水(3mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到8-氯-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(780mg，2.15mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝363。
步骤3：2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在0℃，向2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(500mg，2.17mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液中添加氢化钠(156.48mg，60％纯度，6.52mmol)。将所得混合物在0℃搅拌30分钟。然后添加2-碘-1,1-二氟乙烷(2.09g，10.87mmol)。将该混合物在25℃搅拌3小时。反应用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％碳酸氢钠)，得到2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(480mg，1.63mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝294。
步骤4：2-[[8-氯-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将8-氯-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(300mg，0.83mmol)、2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(291.88mg，0.99mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(171.2mg，0.17mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(191.21mg，0.33mmol)和碳酸铯(674.04mg，2.07mmol)在1,4-二噁烷(45mL)中的混合物在100℃搅拌7小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(4/1)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(175mg,0.30mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝576。
步骤5：N-[3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
将2-[[8-氯-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(84mg，0.15mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(427.16mg，3.65mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(30.19mg，0.03mmol)、Brettphos(31.27mg，0.06mmol)和碳酸铯(237.74mg，0.73mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。将混合物在真空下浓缩。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％碳酸氢钠)，得到N-[3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.061mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝657。
步骤6：(6-(5-氨基-6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)-3-((6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-7-氟异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
在氢气下(1atm)，将N-[3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.06mmol)和雷尼镍(60mg，0.06mmol)在甲醇(7mL)中的混合物在25℃搅拌1小时。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到(6-(5-氨基-6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)-3-((6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-7-氟异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(30mg，0.048mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝627。
步骤7：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-6-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-[6-(5-氨基-6-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-7-氟-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(20mg，0.03mmol)和2,2,2-三氟乙酸(3mL)在二氯甲烷(3mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩反应。残余物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为10。该粗产物经制备型HPLC提纯(XBridge Shield RP18OBD柱，30*150mm，5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)：ACN(30％至45％)，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-6-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(1.8mg，0.0034mmol)，其为深黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝527.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.24(s,1H),9.06(s,1H),7.70(s,1H),7.34(s,1H),6.70(d,J＝6.1Hz,1H),6.29-5.89(m,4H),5.05(s,2H),4.80(s,2H),3.93(m,6H),3.80(s,1H),3.06(m,2H),1.95(d,J＝1.6Hz,3H)。
实施例173：
(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物279)、
(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物280)、
(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物281)、
(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物282)、
(1S,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2,2-二甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物120)和
(1R,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2,2-二甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物121)
步骤1：二苯基(丙基)锍四氟硼酸盐
在0℃，向四氟硼酸银(2g，10.31mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加1-碘丙烷(1.75g，10.31mmol)和二苯硫醚(5.76g，30.93mmol)。将反应在35℃搅拌15小时。将混合物过滤并且在真空下浓缩滤液。残余物经二氯甲烷-乙醚洗涤，得到二苯基(丙基)锍四氟硼酸盐(2g，6.32mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝229。
步骤2：反式-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸叔丁基酯
在-78℃，向二苯基(丙基)锍四氟硼酸盐(1.50g，4.75mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(30mL)和二氯甲烷(3mL)中的溶液中添加二异丙基氨基锂(5.54ml,11.09mmol)。将所得混合物在-78℃搅拌1小时。然后添加(Z)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯酸叔丁基酯(330mg，1.58mmol)，并在-78℃至25℃搅拌15小时。用水淬灭反应。所得混合物经二氯甲烷萃取，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到反式-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸叔丁基酯，其为4种立体异构体的混合物，其中吡唑相对于酯为反式(350mg，1.40mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝251。
步骤3：反式-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸
将反式-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸叔丁基酯(350mg，1.4mmol)和2,2,2-三氟乙酸(8mL)在二氯甲烷(3mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ HCl)，得到反式-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸(260mg，1.34mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝195。
步骤4：反式-N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
在0℃，将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(675mg，1.34mmol)、反式-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酸(338.86mg，1.74mmol)和吡啶(3mL)在二氯甲烷(15mL)中的溶液添加三氯氧化磷(410.66mg，2.68mmol)。反应在25℃搅拌30分钟，然后用水淬灭。所得混合物经二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到反式-N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(900mg，1.32mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝679。
步骤5：反式-N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将反式-N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(1.3g，1.91mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(5.61g，47.85mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(396.21mg，0.38mmol)、Brettphos(410.38mg，0.77mmol)和碳酸铯(3.12g，9.57mmol)在1,4-二噁烷(80mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到反式-N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(1g，1.32mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝760。
步骤6：(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺、(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺、(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺、(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺、(1S,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2,2-二甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺和(1R,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2,2-二甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
将反式-N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷羰基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(1.0g，1.32mmol)和2,2,2-三氟乙酸(10mL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩反应。残余物经制备型HPLC提纯，使用以下条件(XBridge Prep OBD C18柱，30×150mm 5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)：ACN(22％至40％)，在7分钟内)，得到6种异构产物的混合物(230mg，0.50mmol)。该混合物经手性-HPLC提纯，得到6种异构体。对含有乙基环丙烷的异构体的环丙烷立体化学(化合物279-282)(吡唑相对于酰胺是反式的；任意指定乙基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物279：(47.7mg，0.104mmol)，其为黄色固体。保留时间：6.036分钟(CHIRALPAK ID-3,0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；2ml/分钟)。LCMS(ESI)[M+H]+＝460.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),9.41(s,1H),8.29(s,1H),7.99(s,1H),7.66(s,1H),7.53(s,1H),7.29(s,1H),6.86(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.25(s,2H),3.80(s,3H),2.37-2.27(m,1H),2.18(m,1H),1.92(d,J＝1.5Hz,3H),1.62-1.45(m,1H),1.22(m,2H),0.89(m,3H)。化合物280：(56mg，0.12mmol)，其为黄色固体。保留时间：7.559分钟(CHIRALPAK ID-3,0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；2ml/分钟)。LCMS(ESI)[M+H]+＝460.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),9.41(s,1H),8.29(s,1H),7.99(s,1H),7.66(s,1H),7.53(s,1H),7.29(s,1H),6.86(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.25(s,2H),3.80(s,3H),2.38-2.15(m,2H),1.92(d,J＝1.5Hz,3H),1.62-1.43(m,1H),1.23(m,2H),0.89(m,3H)。化合物281：(13.5mg，0.029mmol)，其为黄色固体。保留时间：4.98分钟(CHIRALPAK ID-3,0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；2ml/分钟)。LCMS(ESI)[M+H]+＝460.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.69(s,1H),9.40(s,1H),8.31(s,1H),7.99(s,1H),7.67(s,1H),7.52(s,1H),7.25(d,J＝0.8Hz,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.25(s,2H),3.77(s,3H),2.29-2.17(m,2H),1.92(d,J＝1.5Hz,3H),1.83-1.42(m,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H)。化合物282：(10.2mg，0.022mmol)，其为黄色固体。保留时间：3.847分钟(CHIRALPAK ID-3,0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；2ml/分钟)。LCMS(ESI)[M+H]+＝460.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.69(s,1H),9.40(s,1H),8.31(s,1H),7.99(s,1H),7.67(s,1H),7.52(s,1H),7.25(d,J＝0.8Hz,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.25(s,2H),3.77(s,3H),2.29-2.17(m,2H),1.92(d,J＝1.5Hz,3H),1.83-1.42(m,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H)。化合物120：N-[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]-2,2-二甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(16.6mg，0.036mmol)，其为黄色固体。保留时间：6.312分钟(CHIRALPAK ID-3,0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；2ml/分钟)。LCMS(ESI)[M+H]+＝460.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.63(s,1H),9.41(s,1H),8.32(s,1H),7.99(s,1H),7.66(s,1H),7.51(s,1H),7.25(s,1H),6.87(d,J＝6.2Hz,1H),6.23(s,2H),5.25(s,2H),3.79(s,3H),2.33-2.19(m,2H),1.92(d,J＝1.4Hz,3H),1.29(s,3H),0.99(s,3H)。化合物121：N-[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]-2,2-二甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(16mg，0.035mmol)，其为黄色固体。保留时间：5.166分钟(CHIRALPAK ID-3,0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；2ml/分钟)。LCMS(ESI)[M+H]+＝460.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.63(s,1H),9.41(s,1H),8.32(s,1H),7.99(s,1H),7.66(s,1H),7.51(s,1H),7.26(s,1H),6.87(d,J＝6.1Hz,1H),6.24(s,2H),5.25(s,2H),3.79(s,3H),2.38-2.15(m,2H),1.92(d,J＝1.5Hz,3H),1.28(s,3H),0.99(s,3H)。
实施例174：
2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-环丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(化合物283)/>
步骤1：[2-溴-6-环丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在氧气下，将环丙基硼酸(448.06mg，5.22mmol)、2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(400.0mg，1.74mmol)、乙酸铜(II)(567.97mg，1.74mmol)、三乙胺(526.82mg，5.22mmol)和吡啶(206.03mg，2.61mmol)在四氢呋喃(5mL)中的混合物在60℃搅拌12小时。反应混合物用水稀释(50mL)。所得混合物经二氯甲烷萃取，在无水硫酸钠上干燥，并在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(2/98)洗脱，得到[2-溴-6-环丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(260mg,0.96mmol)，其为黄色油状物。LC/MS(ESI)[M+H]+＝270.1。
步骤2：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(6-环丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
在100℃、在氮气下，将2-溴-6-环丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(150mg，0.56mmol)、N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(195mg，0.39mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(80.25mg，0.08mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(175.5mg，0.30mmol)和碳酸铯(379.88mg，1.17mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物搅拌3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(6-环丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(160mg，0.23mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝692.2。
步骤3：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(6-环丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
在90℃、在氮气下，将氨基甲酸叔丁基酯(812.8mg，6.94mmol)、N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(6-环丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(160.0mg，0.23mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(48.0mg，0.05mmol)、Brettphos(25.6mg，0.05mmol)和碳酸铯(304mg，0.93mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物搅拌3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(6-环丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(160.0mg，0.21mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝772.9。
步骤4：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-环丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮/>
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(6-环丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(160mg，0.21mmol)和2,2,2-三氟乙酸(2mL,0.21mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液在25℃搅拌3小时。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为7。在真空下浓缩该混合物。残余物在C18上经快速色谱提纯，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-环丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(11.4mg，0.02mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝472.5；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),9.08(s,1H),8.00(s,1H),7.71(d,J＝3.4Hz,2H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.08(s,2H),5.97(s,1H),5.30(s,2H),4.95(s,2H),3.87-3.77(m,2H),3.06-2.96(m,2H),2.81-2.70(m,1H),1.95(s,3H),0.75-0.60(m,2H),0.71-0.59(m,2H)。
实施例175：
2-[[8-氨基-6-(3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-8-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(化合物284)
步骤1：8-溴-4H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-酮
将3-氨基-5-溴-4-吡啶酚(5g，26.45mmol)、氯乙酰氯(3.25g，28.78mmol)、碳酸钾(11.0g，79.71mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的混合物在100℃搅拌12小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到8-溴-4H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-3-酮(3.5g，15.28mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝229。
步骤2：8-溴-3,4-二氢-2H-吡啶并(4,3-b)(1,4)噁嗪
在0℃，向8-溴-4H-吡啶并(4,3-b)(1,4)噁嗪-3-酮(1.0g，4.37mmol)在四氢呋喃(15mL)中的混合物添加硼烷-四氢呋喃配合物(13.1mL,13.1mmol)。将反应在60℃搅拌12小时。在60℃，5小时内将所得混合物逐滴添加至甲醇(5mL)和盐酸(5mL,12mol/L)的溶液中。反应混合物用水稀释(50mL)。所得混合物经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到8-溴-3,4-二氢-2H-吡啶并(4,3-b)(1,4)噁嗪(1g，4.7mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝215.0。
步骤3：8-溴-2,3-二氢吡啶并(4,3-b)(1,4)噁嗪-4-甲酸叔丁基酯
将二碳酸二叔丁基酯(1.67g，7.67mmol)、8-溴-3,4-二氢-2H-吡啶并(4,3-b)(1,4)噁嗪(1.1g，5.12mmol)、三乙胺(1.5g，15.3mmol)在二氯甲烷中(30mL)中的混合物在25℃搅拌3小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到8-溴-2,3-二氢吡啶并(4,3-b)(1,4)噁嗪-4-甲酸叔丁基酯(770mg，2.44mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝315.2。
步骤4：8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-4-甲酸叔丁基酯
将8-溴-2,3-二氢吡啶并(4,3-b)(1,4)噁嗪-4-甲酸叔丁基酯(350mg，1.11mmol)、双(频哪醇合)二硼(2.8g，11.15mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(161.0mg，0.22mmol)和乙酸钾(327.8mg，3.34mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(30/1)洗脱，得到8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-4-甲酸叔丁基酯(240mg，0.66mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝362.2。
步骤5：8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢吡啶并(4,3-b)(1,4)噁嗪-4-甲酸叔丁基酯
在氮气下、在90℃，将(4-叔丁氧基羰基-2,3-二氢吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-8-基)硼酸(100.0mg，0.36mmol)、三氟甲磺酸[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]酯(111.1mg，0.18mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(13.33mg，0.02mmol)和碳酸钾(75.56mg，0.55mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到8-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-2,3-二氢吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-4-甲酸叔丁基酯(120mg，0.17mmol)，其为棕色油状物。
步骤6：2-[[8-氨基-6-(3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-8-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将8-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-2,3-二氢吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-4-甲酸叔丁基酯(140mg，0.20mmol)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)在二氯甲烷(2mL)中的溶液在25℃搅拌3小时。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为7。在真空下浓缩该混合物。残余物经制备型HPLC提纯，得到2-[[8-氨基-6-(3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-8-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(10.3mg，0.02mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝502.5。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),9.08(s,1H),7.93(s,1H),7.78(s,1H),7.71(s,1H),6.82(d,J＝5.9Hz,1H),6.30(s,1H),6.03(s,1H),5.97(s,1H),4.98(s,2H),4.70-4.55(m,1H),4.28-4.21(m,2H),3.83-3.74(m,2H),3.40(s,2H),3.04-2.95(m,2H),1.13(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例176：
2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-乙基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(化合物286)
步骤1：3-溴-4-碘-5-硝基-吡啶
将3-溴-4-氯-5-硝基吡啶(5.0g，21.06mmol)和碘化钾(70g，422.02mmol)在乙腈(300mL)中的混合物在80℃搅拌16小时。所得溶液冷却至室温并随后过滤。在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗脱，得到3-溴-4-碘-5-硝基-吡啶(6.5g，19.76mmol)，其为红色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝328.7。
步骤2：3-溴-5-硝基-4-乙烯基-吡啶
将3-溴-4-碘-5-硝基-吡啶(5.0g，15.2mmol)、三氟(乙烯基)硼酸钾(2.6g，19.41mmol)、碳酸钠(4.8g，45.28mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(1.1g，1.5mmol)在1,4-二噁烷(300mL)和水(30mL)中的混合物在50℃搅拌3天。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗脱，得到3-溴-5-硝基-4-乙烯基-吡啶(2.8g，12.22mmol)。LCMS(ESI)[M+H]+＝229。
步骤3：5-溴-4-乙基-吡啶-3-胺
在20℃、在氢气下，将3-溴-5-硝基-4-乙烯基-吡啶(500mg，2.18mmol)、二氧化铂(100mg，0.44mmol)和乙酸(5滴)在甲醇(20mL)中的混合物搅拌4小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(2/1)洗脱，得到5-溴-4-乙基-吡啶-3-胺(220mg，1.09mmol)，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝201。
步骤4：N-(5-溴-4-乙基-3-吡啶基)-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯
在密封管中，将5-溴-4-乙基-吡啶-3-胺(200mg，0.99mmol)和二碳酸二叔丁基酯(650g，2.98mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液在90℃搅拌2小时。有机层在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗脱，得到N-(5-溴-4-乙基-3-吡啶基)-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(180mg，0.45mmol)。LCMS(ESI)[M+H]+＝401。
步骤5：[5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-4-乙基-3-吡啶基]硼酸
将N-(5-溴-4-乙基-3-吡啶基)-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.50mmol)、双(频哪醇合)二硼(600mg，2.36mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(70mg，0.10mmol)、乙酸钾(150mg，1.53mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。所得混合物冷却至室温，并随后过滤。在真下浓缩滤液。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-70/0.05％碳酸氢钠)，得到[5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-4-乙基-3-吡啶基]硼酸(100mg，0.27mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝367.3。
步骤6：(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-乙基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
将[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(13mg，0.02mmol)、碳酸钾(65mg，0.47mmol)、三氟甲磺酸[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]酯(100mg，0.16mmol)、[5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-4-乙基-3-吡啶基]硼酸(90mg，0.25mmol)在1,4-二噁烷(5mL)和水(0.05mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。所得混合物冷却至室温，并随后过滤。在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/甲醇(40/1)洗脱，得到(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-乙基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(46mg，0.058mmol)，其为红色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝789.4。
步骤7：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-乙基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在室温，将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-乙基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(41mg，0.05mmol)在二氯甲烷(5mL)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。将残余物溶于N,N-二甲基甲酰胺，并用三乙胺将该溶液调节至pH为7。所得溶液经制备型HPLC提纯(XBridge prep C18OBD柱，19*150mm5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)/CH3CN＝25％-45％，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-乙基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(8.1mg，0.017mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝489.3。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.24(s,1H),9.06(s,1H),7.98(s,1H),7.70(s,1H),7.59(s,1H),6.70(d,J＝5.9Hz,1H),6.06(s,2H),5.97(s,1H),5.25(s,2H),4.96(s,2H),4.63-4.55(m,1H),3.77(s,2H),2.98(s,2H),2.35-2.33(m,2H),1.12(d,J＝6.7Hz,6H),0.92(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例177：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-4-乙基-4H,6H-吡唑并[1,5-c]噻唑5,5-二氧化物(化合物287)
步骤1：3-(溴甲基硫烷基)丙-1-烯
在5分钟内，向聚甲醛(16g，0.13mol)在甲苯(110mL)中的溶液中添加270mL的溴化氢(水溶液，48％)。将该混合物在20℃搅拌20分钟。然后，将反应温热至40℃，并在20分钟内通过滴液漏斗添加烯丙基硫醇(45g，606.96mmol)。随后将混合物加热至50℃，并继续搅拌2小时。将反应用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到3-(溴甲基硫烷基)丙-1-烯(20g，粗品)，其为浅黄色油状物。GCMS(ESI)M＝168.0。
步骤2：1-(烯丙基硫烷基甲基)-3,5-二溴-吡唑
向3,5-二溴-1H-吡唑(10g，44.27mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液中添加碳酸钾(12.22g，88.55mmol)、四丁基碘化铵(0.82g，2.21mmol)和3-(溴甲基硫烷基)丙-1-烯(22.19g，132.82mmol)。将反应在20℃搅拌3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(8/1)洗脱，得到1-(烯丙基硫烷基甲基)-3,5-二溴-吡唑(10g，32.05mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝310.9。
步骤3：1-(烯丙基磺酰基甲基)-3,5-二溴-吡唑
在0℃，向1-(烯丙基硫烷基甲基)-3,5-二溴-吡唑(10g，32.05mmol)在二氯甲烷(400mL)中的溶液中添加3-氯过氧化苯甲酸(12.13g，70.51mmol)。所得溶液在0℃搅拌3小时。将反应经硫代硫酸钠和碳酸钠水溶液淬灭。所得溶液经二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(4/1)洗脱，得到1-(烯丙基磺酰基甲基)-3,5-二溴-吡唑(1.5g，4.36mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝345.1。
步骤4：2-溴-4-甲基-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪6,6-二氧化物
将三乙胺(1.47g，14.53mmol)、三(2-甲基苯基)膦(264.48mg，0.87mmol)、乙酸钯(97.66mg，0.44mmol)和1-(烯丙基磺酰基甲基)-3,5-二溴-吡唑(1g，2.91mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(9/1)洗脱，得到2-溴-4-甲基-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(500mg，1.90mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝263.2。
步骤5：2-溴-4-甲基-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪6,6-二氧化物
将2-溴-4-甲基-7H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(500mg，1.9mmol)和硼氢化钠(252.75mg，6.65mmol)在甲醇(30mL)中的混合物在20℃搅拌1小时。用水淬灭反应。所得混合物经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经反相快速色谱提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠：CH3CN＝70％～5％，在30分钟内)，得到2-溴-4-甲基-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(280mg，1.06mmol)，其为无色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝267.3。
步骤6：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(4-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(150mg，0.30mmol)、2-溴-4-甲基-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(237.21mg，0.89mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(123.47mg，0.12mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(103.43mg，0.18mmol)和碳酸铯(291.67mg，0.89mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在120℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物经反相快速色谱提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠：CH3CN＝70％～5％，在30分钟内)，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(4-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.07mmol)，其为黄色固体。LCMS45(ESI)[M+H]+＝687.3。
步骤7：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(4-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(4-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.07mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(213.1mg，1.82mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(26.36mg，0.03mmol)、BrettPhos(19.5mg，0.04mmol)和碳酸铯(118.6mg，0.36mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(4-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.07mmol)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝768.4。
步骤8：6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N3-(4-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)异喹啉-3,8-二胺甲酸盐
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(4-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.07mmol)和2,2,2-三氟乙酸(12mL)在二氯甲烷(3mL)中的溶液在20℃搅拌1小时。在真空下浓缩所得溶液。该粗产物直接经制备型HPLC提纯(XBridgePrep C18OBD柱，19*15mm 5umC-0013；0.1％在水中的HCOOH：CH3CN＝93％～60％，在7分钟内)，得到6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N3-(4-甲基-6,6-二氧代-5,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-c][1,3]噻嗪-2-基)异喹啉-3,8-二胺(1.3mg，0.003mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝468.2；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),9.30(s,1H),8.39(s,1H),7.98(s,1H),7.68-7.66(m,2H),6.69-6.67(m,1H),6.25(s,1H),6.11(s,2H),5.46-5.38(m,2H),5.22(s,2H),4.67-4.63(m,1H),2.03-1.99(m,2H),1.92(s,3H),1.14-1.10(m,3H)。
实施例178：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(环丙基甲基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮甲酸盐(化合物288)
步骤1：2-溴-6-(环丙基甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(200mg，0.87mmol)和氢化钠(79.98mg，3.48mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液在20℃搅拌5分钟。然后添加(碘甲基)环丙烷(316.44mg，1.74mmol)。将该混合物在20℃搅拌1小时。将反应用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(98/2)洗脱，得到2-溴-6-(环丙基甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(191mg，0.67mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝284.1。
步骤2：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[[6-(环丙基甲基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
/>
在25℃，向2-溴-6-(环丙基甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(180.5mg，0.64mmol)、N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(213mg，0.42mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(87.66mg，0.08mmol)和4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(97.91mg，0.17mmol)在1,4-二噁烷(18mL)中的混合物添加碳酸铯(345.14mg，1.06mmol)。所得溶液在100℃搅拌12小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[[6-(环丙基甲基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(225mg，0.32mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝706.4。
步骤3：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[6-(环丙基甲基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
在室温，向N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[[6-(环丙基甲基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(225mg，0.32mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(933.11mg，7.97mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(65.95mg，0.06mmol)和Brettphos(68.31mg，0.13mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物添加碳酸铯(259.66mg，0.80mmol)。所得溶液在90℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[6-(环丙基甲基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(67mg，0.085mmol)，其为橙色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝787.2。
步骤4：2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(环丙基甲基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮；甲酸/>
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[6-(环丙基甲基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(65mg，0.08mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1.0mL,0.08mmol)在二氯甲烷(3.0mL)中的溶液在20℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为8。该粗产物经制备型HPLC提纯(XBridge Prep C18OBD柱，19x150mm 5um；水(0.1％ FA)和ACN(5％-18％)，在10分钟内)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(环丙基甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮；甲酸(13.5mg，0.025mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝487.3；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),9.07(s,1H),8.24(s,1H),7.98(s,1H),7.70(s,1H),7.66(s,1H),6.72-6.70(m,1H),6.06(s,2H),5.98(s,1H),5.22(s,2H),4.99(s,2H),3.93-3.89(m,2H),3.28-3.26(m,2H),3.09-3.05(m,2H),1.93(s,3H),1.01(s,1H),0.48-0.44(m,2H),0.29(m,2H)。
实施例179：
2-((8-氨基-7-氟-6-(5-羟基-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮；甲酸(化合物289)
步骤1：3-溴-5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-吡啶
将5-溴-4-甲基-吡啶-3-醇(213mg，1.13mmol)和氢化钠(52.11mg，2.27mmol，60％纯度)在四氢呋喃(5mL)中的混合物在0℃搅拌30分钟。添加溴甲基甲基醚(169.87mg，1.36mmol)。将该混合物在0℃搅拌1小时。反应经甲醇淬灭。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(4/1)洗脱，得到3-溴-5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-吡啶(190mg，0.82mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝232。
步骤2：[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]硼酸
将3-溴-5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-吡啶(714mg，3.08mmol)、双(频哪醇合)二硼(781mg，3.08mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(450mg，0.62mmol)和乙酸钾(904mg，9.23mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]硼酸(300mg，1.52mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝198。
步骤3：8-氯-7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]异喹啉-3-胺
将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(300mg，0.93mmol)、[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]硼酸(275mg，1.4mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(68mg，0.09mmol)和碳酸钾(385mg，2.79mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(1mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到8-氯-7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]异喹啉-3-胺(145mg，0.42mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝348。
步骤4：2-[[8-氯-7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将8-氯-7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]异喹啉-3-胺(135mg，0.39mmol)、2-溴-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(142mg，0.58mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(80mg，0.08mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(89mg，0.16mmol)和碳酸铯(381mg，1.16mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在100℃搅拌12小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(50mg,0.098mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝511。
步骤5：N-[7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
将2-[[8-氯-7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(50mg，0.10mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(286mg，2.45mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(20mg，0.020mmol)、Brettphos(15.74mg，0.03mmol)和碳酸铯(95mg，0.29mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-[7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.067mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝592。
步骤6：2-[[8-氨基-7-氟-6-(5-羟基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮；甲酸
将N-[7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(30mg，0.05mmol)和盐酸(0.17mL,0.5mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物在20℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为8。该粗产物经制备型HPLC提纯(XBridge Prep C18OBD柱，19x150nm 5um；水(0.1％ FA)：CH3CN＝5％-19％，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(5-羟基-4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮；甲酸(1.4mg，0.0028mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝448。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.16(s,1H),8.07(s,1H),7.94(s,1H),7.64(s,1H),6.86(d,J＝6.0Hz,1H),6.07(s,1H),5.06(s,2H),3.92(t,J＝6.0Hz,2H),3.16(t,J＝6.0Hz,2H),3.10(s,3H),2.15(s,3H)。
实施例180：
2-(8-氨基-7-氟-6-(5-(羟基甲基)-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物290)
步骤1：3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-4-甲基吡啶
将(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)甲醇(500mg，2.47mmol)和咪唑(505.42mg，7.42mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的溶液在25℃搅拌10分钟。添加TBSCl(742.39mg，4.95mmol)，并在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(16/84)洗脱，得到(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)甲氧基-叔丁基-二甲基-硅烷(820mg，2.07mmol)，其为白色油状物。LC/MS(ESI)[M+H]+＝316。
步骤2：5-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-4-甲基吡啶-3-基硼酸
将(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)甲氧基-叔丁基-二甲基-硅烷(1.65g，5.22mmol)、双(频哪醇合)二硼(1.99g，7.82mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(381.84mg，0.52mmol)和乙酸钾(1.28g，13.04mmol)在1,4-二噁烷(18mL)中的混合物在90℃搅拌12小时。过滤后，减压浓缩该滤液。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％碳酸氢钠)，得到[5-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]硼酸(480mg，1.70mmol)，其为白色固体。LC/MS(ESI)[M+H]+＝282。
步骤3：6-(5-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-4-甲基吡啶-3-基)-8-氯-7-氟异喹啉-3-胺
将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(382mg，1.18mmol)、[5-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]硼酸(499.66mg，1.78mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(86.7mg，0.12mmol)、碳酸钾(359.6mg，2.61mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和水(1.5mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(7:3)洗脱，得到6-[5-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-氯-7-氟-异喹啉-3-胺(320mg，0.74mmol)，其为黄色固体。LC/MS(ESI)[M+H]+＝432。
步骤4：2-(6-(5-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-4-甲基吡啶-3-基)-8-氯-7-氟异喹啉-3-基氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(181.42mg，0.67mmol)、6-[5-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-氯-7-氟-异喹啉-3-胺(240.0mg，0.56mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(115.0mg，0.11mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(128.66mg，0.22mmol)和碳酸铯(543.32mg，1.67mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在100℃搅拌12小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(10/1)洗脱，得到2-[[6-[5-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(56mg，0.090mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝623。
步骤5：6-(5-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-3-(6-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-2-基氨基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯/>
将2-[[6-[5-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(60.0mg，0.10mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(337.91mg，2.89mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(19.93mg，0.020mmol)、Brettphos(20.68mg，0.040mmol)和碳酸铯(125.54mg，0.39mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在90℃搅拌12小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(12:88)洗脱，得到N-[6-[5-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.085mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝704。
步骤6：2-(8-氨基-7-氟-6-(5-(羟基甲基)-4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将N-[6-[5-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(50.0mg，0.070mmol)在2,2,2-三氟乙酸(5mL)中的溶液在25℃搅拌12小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD,19×150mm 5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)：CH3CN＝20％-40％ B，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-[5-(羟基甲基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(5.1mg，0.010mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝490.2；1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.17(s,1H),8.56(s,1H),8.37(s,1H),7.66(s,1H),6.87(d,J＝6.2Hz,1H),6.07(s,1H),5.06(s,2H),4.80(s,2H),4.75(d,J＝6.7Hz,1H),3.88(t,J＝6.0Hz,2H),3.14(d,J＝6.1Hz,2H),2.32(d,J＝1.3Hz,3H),1.25(d,J＝6.8Hz,6H)。/>
实施例181：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(2-甲氧基乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物291)
步骤1：2-溴-6-(环丙基甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在0℃，向2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(200mg，0.86mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物添加氢化钠(79.18mg，3.48mmol)。将该混合物在20℃搅拌20分钟。添加1-碘-2-甲氧基-乙烷(485.06mg，2.6mmol)。随后在20℃搅拌该混合物1小时。将反应用水淬灭。所得混合物经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到2-溴-6-(2-甲氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(172mg，0.31mmol)，其为橙色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝288.1。
步骤2：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[6-(2-甲氧基乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯/>
将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(199mg，0.82mmol)、2-溴-6-(2-甲氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(172mg，1.24mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(82.12mg，0.08mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(92.32mg，0.16mmol)和碳酸铯(389.23mg，1.22mmol)在1,4-二噁烷(16mL)中的混合物在95℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[6-(2-甲氧基乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(222mg，0.17mmol)，其为淡黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝710.3。
步骤3：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[6-(2-甲氧基乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
在25℃，向N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[6-(2-甲氧基乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(222mg，0.31mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(915.51mg，7.81mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(64.71mg，0.06mmol)和Brettphos(67.02mg，0.13mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物添加碳酸铯(254.76mg，0.78mmol)。所得溶液在90℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(94/6)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[6-(2-甲氧基乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(131mg，0.17mmol)，其为橙色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝791.4。
步骤4：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(2-甲氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[6-(2-甲氧基乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(131mg，0.17mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1.0mL)在二氯甲烷(2mL)中的溶液在20℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用胺的甲醇溶液调节至pH为8。该粗产物经制备型HPLC提纯(XBridge Prep C18OBD柱，19x150mm 5um C-0013；水(0.1％ FA)和ACN(5％-15％)，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(2-甲氧基乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(34.2mg，0.064mol)，其为淡黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝491.2；1HNMR(300MHz,DMSO)δ9.25(s,1H),9.06(s,1H),7.98(s,1H),7.70(s,1H),7.66(s,1H),6.72-6.70(m,1H),6.06(s,2H),5.97(s,1H),5.22(s,2H),4.98(s,2H),3.87-3.85(m,2H),3.57-3.54(m,2H),3.46-3.43(m,2H),3.26(s,3H),3.03-3.01(m,2H),1.93(s,3H)。
实施例182：
2-((8-氨基-7-氟-6-(4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物292)
步骤1：3-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁基酯
将[7-氟-8-(异丙氧基羰基氨基)-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]硼酸(100mg，0.21mmol)、3-溴-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁基酯(120mg，0.40mmol)、磷酸钾(40mg，0.19mmol)、乙酸钠(50mg，0.61mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(40mg，0.05mmol)在乙腈(10mL)和水(1mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物用乙酸乙酯/甲醇(50/1)经制备型TLC提纯，得到3-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁基酯(43mg，0.065mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝662。
步骤2：2-[[8-氨基-7-氟-6-(4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在室温，将3-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁基酯(40mg，0.06mmol)、2,2,2-三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(5mL)的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物溶于二氯甲烷并随后用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为7。在真空下浓缩该混合物。残余物经制备型HPLC提纯(XBridge prep C18OBD,19*150mm,5um；水(0.05％NH3H2O)：ACN(7-24％，在7分钟内))，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(4mg，0.0087mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝462。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.17(s,1H),9.01(s,1H),7.73(d,J＝2.9Hz,1H),7.63(s,1H),6.74(d,J＝6.3Hz,1H),5.98(s,3H),4.99(s,2H),4.06-4.05(m,4H),3.83-3.82(m,2H),3.18-3.17(m,2H),3.05-3.03(m,2H),2.96(s,3H),2.69(s,1H)。
实施例183：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H,8H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮杂7,7-二氧化物(化合物293)
步骤1：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-甲基-4-亚甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]硫二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
在120℃，将2-溴-6-甲基-4-亚甲基-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]硫二氮杂7,7-二氧化物(200mg，0.68mmol)、N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(309.89mg，0.62mmol)、t-BuBrettphos(165.67mg，0.34mmol)、t-BuBrettphos Pd G3(233.85mg，0.27mmol)和碳酸铯(557.93mg，1.71mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物搅拌1小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(4/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-甲基-4-亚甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]硫二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.14mmol)其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝714。
步骤2：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-4-亚甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]硫二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯/>
将氨基甲酸叔丁基酯(262.44mg，2.24mmol)、N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-甲基-4-亚甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]硫二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(80mg，0.11mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(23.19mg，0.02mmol)、Brettphos(18.05mg，0.03mmol)和碳酸铯(91.29mg，0.28mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在100℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(2/98)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-4-亚甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]硫二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg,0.076mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝795。
步骤3：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(4,6-二甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]硫二氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-4-亚甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢吡唑并[5,1-e][1,2,6]硫二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.06mmol)和雷尼镍(10mg)在甲醇(10mL)中的混合物在25℃搅拌12小时。过滤后，减压浓缩该滤液，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(4,6-二甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]硫二氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(45mg，0.05mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝797。
步骤4：6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-N3-(4,6-二甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]硫二氮杂-2-基)-7-氟-异喹啉-3,8-二胺；甲酸
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(4,6-二甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]硫二氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.06mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1mL)在二氯甲烷(2mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为10。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％ FA)，得到6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-N3-(4,6-二甲基-7,7-二氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]硫二氮杂/>-2-基)-7-氟-异喹啉-3,8-二胺；甲酸(2.9mg,0.0053mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝497。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.16(s,1H),8.39(s,1H),7.78-7.77(d,J＝4.0Hz,2H),6.90-6.88(d,J＝8.0Hz,1H),6.11(s,1H),5.92-5.88(d,J＝16Hz,1H),5.36-5.32(d,J＝16Hz,1H),3.79-3.55(m,3H),3.13(s,3H),2.09(s,3H),1.39-1.38(d,J＝4.0Hz,3H)。
实施例184：
[2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-乙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(化合物298)
步骤1：2-溴-6-乙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮/>
在0℃，向2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(1g，4.0mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中添加氢化钠(313mg，13.0mmol)。在0℃，将混合物搅拌30分钟。在0℃，将碘乙烷(1.3g，9.0mmol)添加至该反应溶液中，并随后搅拌4小时。将反应用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经反相色谱提纯(乙腈-0.1％碳酸氢钠，在水中)，得到2-溴-6-乙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(1g，3.89mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝258.1。
步骤2：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(6-乙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将2-溴-6-乙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(140.0mg，0.54mmol)、N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(272.8mg，0.54mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(112.27mg，0.11mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(125.4mg，0.22mmol)和碳酸铯(530.45mg，1.63mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在100℃搅拌4小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，经乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(6-乙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.10mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝680.2。
步骤3：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(6-乙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯/>
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[(6-乙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(40.0mg，0.06mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(206.76mg，1.76mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(12.0mg，0.01mmol)、Brettphos(6.32mg，0.01mmol)和碳酸铯(76.8mg，0.24mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在90℃搅拌4小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/4)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(6-乙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.053mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝706.9。
步骤4：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-乙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[(6-乙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(40.0mg，0.05mmol)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)在二氯甲烷(2mL)中的混合物在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在C18上经快速色谱提纯(乙腈-0.1％碳酸氢钠，在水中)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-乙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(2.4mg，0.01mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝460.5。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),9.07(s,1H),7.99(s,1H),7.69(d,J＝9.4Hz,2H),6.72(d,J＝6.1Hz,1H),6.07(s,2H),5.99(s,1H),5.24(s,2H),4.97(s,2H),3.90-3.84(m,2H),3.50-3.43(m,2H),3.05-2.90(m,2H),1.94(s,3H),1.09-1.01(m,3H)。
实施例185：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4,6-二甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物299)
步骤1：2-(5-溴-4-甲基-3-硝基-2-吡啶基)丙二酸二甲基酯
在0℃，向丙二酸二甲基酯(3.15g，23.86mmol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(100mL)中的溶液中添加氢化钠(0.95g，23.86mmol，60％纯度)。将该混合物在0℃搅拌10分钟。添加5-溴-2-氯-4-甲基-3-硝基吡啶(4.0g，15.91mmol)。在40℃搅拌该混合物12小时。将反应用水淬灭。反应混合物用水稀释。所得混合物经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到2-(5-溴-4-甲基-3-硝基-2-吡啶基)丙二酸二甲基酯(3.5g，10.08mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝347。
步骤2：5-溴-2,4-二甲基-3-硝基-吡啶
将2-(5-溴-4-甲基-3-硝基-2-吡啶基)丙二酸二甲基酯(3.5g，10.08mmol)在盐酸(20mL,12mol/L)中的溶液在100℃搅拌12小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用氢氧化钠溶液(10％)调节至pH为10。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(1/9)洗脱，得到5-溴-2,4-二甲基-3-硝基-吡啶(1.5g，6.49mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝231。
步骤3：(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)硼酸
将5-溴-2,4-二甲基-3-硝基-吡啶(1.5g，6.49mmol)、双(频哪醇合)二硼(3.29g，12.98mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(950.44mg，1.30mmol)和乙酸钾(1.91g，19.48mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的混合物在90℃搅拌12小时。过滤后，减压浓缩该滤液。反应混合物用氢氧化钠溶液(10％)调节至pH为10。用乙醚洗涤水层。将溶液用盐酸(1mol/L)调节至pH为5。所得混合物经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)硼酸(1.1g，3.95mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝197。
步骤4：8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-异喹啉-3-胺
将(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)硼酸(364.58mg，1.86mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(400mg，1.24mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(90.79mg，0.12mmol)和碳酸钾(342.31mg，2.48mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在90℃搅拌12小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-异喹啉-3-胺(220mg,0.63mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝347。
步骤5：2-[[8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-异喹啉-3-胺(220mg，0.63mmol)、2-溴-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(154.87mg，0.63mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(65.67mg，0.06mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(108.37mg，0.13mmol)和碳酸铯(620.52mg，1.9mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在100℃搅拌12小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到2-[[8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(210mg，0.41mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝510。
步骤6：N-[6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
将2-[[8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(260mg，0.51mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1194.66mg，10.2mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(105.55mg，0.10mmol)、Brettphos(82.14mg，0.15mmol)和碳酸铯(415.56mg，1.27mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-[6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(150mg，0.25mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝591。
步骤7：N-[6-(5-氨基-4,6-二甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
在H2下，将N-[6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(150mg，0.25mmol)和雷尼镍(50mg)在甲醇(10mL)中的混合物在25℃搅拌5小时。过滤后，减压浓缩该滤液，得到N-[6-(5-氨基-4,6-二甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg,0.17mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝561。
步骤8：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4,6-二甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-[6-(5-氨基-4,6-二甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.18mmol)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)在二氯甲烷(2mL)中的混合物在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为10。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％氨)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4,6-二甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(22.2mg，0.04mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝561。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.23(s,1H),9.04(s,1H),7.67(s,1H),7.59(s,1H),6.69(d,J＝6.0Hz,1H),6.03(s,2H),5.97(s,1H),4.96(s,2H),4.90(s,2H),3.89-3.80(m,2H),3.03-3.00(m,2H),2.94(s,3H),2.35(s,3H),1.95(s,3H)。
实施例186：
2-(8-氨基-6-(2-氨基-3-甲基吡啶-4-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-6-(2,2-二氟乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物300)
步骤1：4-溴-N,N-双(4-甲氧基苄基)-3-甲基吡啶-2-胺
在0℃，将4-溴-3-甲基-吡啶-2-胺(500.0mg，2.67mmol)、氢化钠(427.72mg，10.69mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液搅拌30分钟。添加4-甲氧基苄基氯(2.09g，13.37mmol)并在25℃搅拌2小时。将反应用水淬灭。反应混合物经乙酸乙酯稀释。所得混合物用水洗涤，并合并有机层。有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(2/8)洗脱，得到4-溴-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-吡啶-2-胺(1.1g，2.57mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝427。
步骤2：2-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-3-甲基吡啶-4-基硼酸
将4-溴-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-吡啶-2-胺(1.1g，2.57mmol)、双(频哪醇合)二硼(980.51mg，3.86mmol)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(188.43mg，0.26mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈5-85/0.1％碳酸氢钠)，得到2-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-3-甲基-4-吡啶基]硼酸(750mg，1.91mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝393。
步骤3：6-(2-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-3-甲基吡啶-4-基)-8-氯-7-氟异喹啉-3-胺
将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(400mg，1.24mmol)、2-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-3-甲基-4-吡啶基]硼酸(729.76mg，1.86mmol)、碳酸钾(376.55mg，2.73mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(90.79mg，0.12mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(1mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到6-[2-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-3-甲基-4-吡啶基]-8-氯-7-氟-异喹啉-3-胺(480mg，0.88mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝543。
步骤4：2-(6-(2-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-3-甲基吡啶-4-基)-8-氯-7-氟异喹啉-3-基氨基)-6-(2,2-二氟乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮/>
将2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(100.19mg，0.34mmol)、6-[2-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-3-甲基-4-吡啶基]-8-氯-7-氟-异喹啉-3-胺(185mg，0.34mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(70.52mg，0.07mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(59.18mg，0.10mmol)和碳酸铯(222.12mg，0.68mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌12小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(7/3)洗脱，得到2-[[6-[2-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-3-甲基-4-吡啶基]-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(90mg，0.12mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝756。
步骤5：6-(2-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-3-甲基吡啶-4-基)-3-(6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-2-基氨基)-7-氟异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
将2-[[6-[2-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-3-甲基-4-吡啶基]-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(150mg，0.20mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(696.23mg，5.95mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(41.06mg，0.040mmol)、Brettphos(21.3mg，0.040mmol)和碳酸铯(258.65mg，0.79mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(9/1)洗脱，得到N-[6-[2-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-3-甲基-4-吡啶基]-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-7-氟-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(110mg，0.13mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝457.2。
步骤6：2-(8-氨基-6-(2-氨基-3-甲基吡啶-4-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-6-(2,2-二氟乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将N-[6-[2-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-3-甲基-4-吡啶基]-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-7-氟-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(110.0mg，0.13mmol)在2,2,2-三氟乙酸(10mL)中的溶液在25℃搅拌5小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD,19×150mm 5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)：CH3CN＝27％-42％ B，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-6-(2-氨基-3-甲基-4-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(18.3mg，0.037mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝497.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),9.09(s,1H),7.85(d,J＝5.1Hz,1H),7.71(s,1H),6.69(d,J＝6.0Hz,1H),6.47(d,J＝5.1Hz,1H),6.34-6.02(m,3H),5.99(s,1H),5.82(s,2H),5.05(s,2H),3.95(t,J＝5.7Hz,2H),3.85(td,J＝15.5,4.0Hz,2H),3.10-3.02(m,2H),1.90(d,J＝1.3Hz,3H)。
实施例187：
2-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-5-甲基-4,5-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-6(7H)-酮(化合物302)
步骤1：2-(3-溴-5-甲基-1H-吡唑-1-基)乙酸甲基酯
将3-溴-5-甲基-1h-吡唑(500.0mg，3.11mmol)、氯乙酸甲酯(505.53mg，4.66mmol)、四丁基碘化铵(57.3mg，0.16mmol)和碳酸钾(771.43mg，5.59mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液在20℃搅拌12小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(98/2)洗脱，得到2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲基酯(671mg，2.88mmol)，其为白色固体。LC/MS(ESI)[M+H]+＝233。
步骤2：2-(3-溴-5-(溴甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸甲基酯
将2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲基酯(20g，85.81mmol)、2,2'-偶氮双(2-甲基丙腈)(1.41g，8.58mmol)、1-溴-2,5-吡咯烷二酮(16.80g，94.4mmol)在四氯化碳(400mL)中的溶液在80℃搅拌2小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(4/1)洗脱，得到2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲基酯(20g，64.11mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝311。
步骤3：2-溴-5-甲基-4,5-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-6(7H)-酮
将2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲基酯(900mg，2.88mmol)和甲胺(896.08mg，28.85mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(4/1)洗脱，得到2-溴-5-甲基-4,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-6-酮(460mg，2.00mmol)，其为白色固体。LC/MS(ESI)[M+H]+＝230。
步骤4：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-甲基-6-氧代-4,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将2-溴-5-甲基-4,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-6-酮(219.55mg，0.95mmol)、N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(400.0mg，0.80mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(164.62mg，0.16mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(138.14mg，0.24mmol)和碳酸铯(518.52mg，1.59mmol)在1,4-二噁烷(60mL)中的混合物在100℃搅拌12小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(10:1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-甲基-6-氧代-4,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(340mg，0.52mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝652。
步骤5：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5-甲基-6-氧代-4,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将氨基甲酸叔丁基酯(1.83g，15.64mmol)、N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-甲基-6-氧代-4,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(340.0mg，0.52mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(107.92mg，0.10mmol)、Bretthpos(56.0mg，0.10mmol)和碳酸铯(679.87mg，2.09mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(12/88)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5-甲基-6-氧代-4,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(250mg，0.34mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝733。
步骤6：2-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-5-甲基-4,5-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-6(7H)-酮
在25℃，将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(5-甲基-6-氧代-4,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(240.0mg，0.33mmol)在2,2,2-三氟乙酸(20mL)中的溶液搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD,19×150mm 5um；水(10mmol/L)：CH3CN＝15％-35％ B，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-5-甲基-4,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-6-酮(49mg，0.11mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝433.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),9.20(s,1H),7.99(s,1H),7.68(d,J＝2.5Hz,2H),6.67(d,J＝6.0Hz,1H),6.08(s,2H),6.05(s,1H),5.24(s,2H),4.67(s,2H),4.60(s,2H),3.01(s,3H),1.93(d,J＝1.5Hz,3H)。
实施例188：
(E)-2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-4-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)亚甲基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物303)
步骤1：(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯-1-醇
将(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯酸叔丁基酯(3.0g，14.41mmol)和DIBAL-H(43.0mL,43.22mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液在0℃搅拌1小时。反应通过加入甲醇淬灭。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯-1-醇(800mg，5.79mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝139。
步骤2：(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯醛
将(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯-1-醇(897mg，6.49mmol)和戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(2.75g，6.49mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液在20℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯醛(800mg,5.87mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝137。
步骤3：(E)-N-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯-1-胺
将(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯醛(794.0mg，5.83mmol)和甲胺(543.41mg，17.5mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液在20℃搅拌30分钟。添加甲醇(10mL)和硼氢化钠(664.83mg，17.5mmol)并在20℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经反相提纯(C18；水(10mmol/L碳酸氢钠)和MeOH(5％-25％))，得到(E)-N-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯-1-胺(412mg，2.72mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝152。
步骤4：2-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-甲基-N-[(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)烯丙基]乙酰胺
将2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙酸(770mg，2.71mmol)、(E)-N-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯-1-胺(410.1mg，2.71mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.05g，8.14mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的溶液在25℃搅拌5分钟。添加2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(1.55g，4.07mmol)并在25℃搅拌12小时。反应混合物经乙酸乙酯稀释，并随后用水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经反相柱提纯(C18；水(10mmol/L碳酸氢钠)和MeOH(5％-70％)，在20分钟内)，得到2-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-甲基-N-[(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)烯丙基]乙酰胺(852mg，2.04mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝416。
步骤5：(4E)-2-溴-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亚甲基]-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将2-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-甲基-N-[(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)烯丙基]乙酰胺(817mg，1.96mmol)、乙酸钯(43.88mg，0.20mmol)、三苯基膦(102.64mg，0.39mmol)、溴化四丁基铵(630.72mg，1.96mmol)和乙酸钾(575.88mg，5.88mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物在90℃搅拌12小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(4E)-2-溴-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亚甲基]-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(540mg，1.61mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝336。
步骤6：(4Z)-2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亚甲基]-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将(4E)-2-溴-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亚甲基]-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(520mg，1.55mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(445.03mg，1.55mmol)、tBuBrettphos Pd G3(528.37mg，0.62mmol)、tBuBrettphos(374.31mg，0.77mmol)和碳酸铯(1512.72mg，4.64mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在130℃搅拌1小时。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(4Z)-2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亚甲基]-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(305mg，0.56mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝543。
步骤7：N-[7-氟-3-[[(4Z)-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亚甲基]-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯/>
将(4Z)-2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亚甲基]-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(300mg，0.55mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.62g，13.81mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(114.37mg，0.11mmol)、Brettphos(88.84mg，0.17mmol)和碳酸铯(540.34mg，1.66mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-[7-氟-3-[[(4Z)-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亚甲基]-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.16mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝624。
步骤8：(4E)-2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亚甲基]-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-[7-氟-3-[[(4E)-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亚甲基]-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(95mg，0.15mmol)和2,2,2-三氟乙酸(3mL)在二氯甲烷(3mL)中的溶液在20℃搅拌1小时。将反应溶液在真空下浓缩。该粗产物经制备型HPLC使用以下条件提纯(xBridgePrep C18OBD柱，19x150nm]；水(10mmol/L碳酸氢钠)和ACN(20％-45％)，在7分钟内)，得到(4E)-2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亚甲基]-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(13.5mg，0.026mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝524；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.31(s,1H),9.20(s,1H),8.50(d,J＝6.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.09(s,1H),7.77(s,1H),7.68(s,1H),7.39(d,J＝6.0Hz,1H),7.00(s,1H),6.80(d,J＝6.0Hz,1H),6.50(s,1H),6.14(s,2H),5.10(s,2H),4.68(s,2H),3.89(s,3H),2.90(s,3H),2.23(s,3H)。
实施例189：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物305)
步骤1：2-溴-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在0℃，向2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(600mg，2.61mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中的混合物添加氢化钠(187.78mg，60％纯度，4.69mmol)。将反应在0℃搅拌30分钟，然后在0℃添加四氢呋喃中的三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙基酯(3.03g，13.04mmol)。将反应在室温搅拌3小时，然后在真空下浓缩。残余物直接经反相柱提纯，使用0.5％碳酸氢钠溶液/甲醇(60％)，得到2-溴-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(500mg,1.60mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝312。
步骤2：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[7-氧代-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯/>
将2-溴-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(250mg，0.80mmol)、N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(402.9mg，0.80mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(165.82mg，0.16mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(185.2mg，0.32mmol)和碳酸铯(783.43mg，2.40mmol)在1,4-二噁烷(60mL)中的混合物在100℃搅拌4小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(2/3)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[7-氧代-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.27mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝734。
步骤3：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[7-氧代-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[7-氧代-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(280mg，0.38mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.12g，9.53mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(78.95mg，0.080mmol)、Brettphos(81.77mg，0.15mmol)和碳酸铯(621.68mg，1.91mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(97/3)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[7-氧代-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(120mg，0.15mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝815。
步骤4：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[[7-氧代-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(110mg，0.13mmol)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)在二氯甲烷(2mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为10。残余物经制备型HPLC提纯(SunFire Prep C18OBD柱，19×150mm 5um 10nm；水(0.1％FA)：CAN＝22％ B至36％ B，在10分钟内；25mL/分钟)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(47.4mg，0.092mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝515.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),9.11(s,1H),7.99(s,1H),7.73(s,1H),7.68(s,1H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.07(s,2H),6.01(s,1H),5.23(s,2H),5.10(s,2H),4.34-4.24(m,2H),4.00-3.98(m,2H),3.07-3.05(m,2H),1.94(s,3H)。
实施例190：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-氯吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮；甲酸(化合物306)
步骤1：6-苄基氧基-8-氯-7-氟-异喹啉-3-胺
将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(100mg，0.31mmol)、CuI(23.69mg，0.12mmol)、3,4,7,8-四甲基-1,10-菲咯啉(58.62mg，0.25mmol)、苯基甲醇(334.87mg，3.1mmol)、碳酸铯(303.25mg，0.93mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物在95℃搅拌2小时。混合物冷却至环境温度。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(1/2)洗脱，得到6-苄基氧基-8-氯-7-氟-异喹啉-3-胺(70mg，0.23mmol)，其为有色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝301.1。
步骤2：2-[(6-苄基氧基-8-氯-7-氟-3-异喹啉基)氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将2-溴-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(60mg，0.25mmol)、6-苄基氧基-8-氯-7-氟-异喹啉-3-胺(74.41mg，0.25mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(50.88mg，0.05mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(56.83mg，0.10mmol)和碳酸铯(240.4mg，0.74mmol)在1,4-二噁烷(9.6mL)中的混合物在100℃搅拌12小时。将混合物冷却至环境温度。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(40/1)洗脱，得到2-[(6-苄基氧基-8-氯-7-氟-3-异喹啉基)氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(65mg，0.14mmol)，其为有色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝466.1。
步骤3：N-[6-苄基氧基-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
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在氮气下，将2-[(6-苄基氧基-8-氯-7-氟-3-异喹啉基)氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(60mg，0.13mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(376.68mg，3.22mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(26.66mg，0.03mmol)、BrettPhos(20.71mg，0.04mmol)和碳酸铯(125.95mg，0.39mmol)在1,4-二噁烷(7.5mL)中的混合物在85℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到N-[6-苄基氧基-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.092mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝547.1。
步骤4：N-[7-氟-6-羟基-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
在氢气下(1atm)，将N-[6-苄基氧基-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(220mg，0.40mmol)和钯碳(40mg，0.40mmol)在甲醇(20mL)中的溶液在25℃搅拌4小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(5/1)洗脱，得到N-[7-氟-6-羟基-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(97.3mg，0.21mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝457.1。
步骤5：三氟甲磺酸[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]酯
在-60℃，向N-[7-氟-6-羟基-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(550mg，1.2mmol)、N-[7-氟-6-羟基-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(550mg，1.2mmol)在二氯甲烷(20mL)中的混合物添加三乙胺(243.39mg，2.41mmol)和三氟甲烷磺酸(509.93mg，1.81mmol)。将所得混合物在-60℃搅拌1小时。将反应用水淬灭。所得混合物经二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到三氟甲磺酸[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]酯(670mg，粗品)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝589.1。
步骤6：[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]硼酸
在90℃，向三氟甲磺酸[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]酯(670mg，1.14mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物添加双(频哪醇合)二硼(867.28mg，3.42mmol)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(83.3mg，0.11mmol)。将所得混合物在90℃搅拌1小时。将反应用水淬灭。所得混合物经二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]硼酸(380mg，0.78mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝485.1。
步骤7：N-[6-(5-氨基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
/>
将4-氯-5-碘-吡啶-3-胺(189.15mg，0.74mmol)和[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]硼酸(120mg，0.25mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(36.28mg，0.05mmol)、磷酸钾(157.79mg，0.74mmol)、乙酸钠(20.32mg，0.25mmol)在乙腈(2mL)/水(0.2ml)中的混合物在90℃搅拌1小时。将反应在真空下浓缩。粗品直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)[M+H]+＝567.1。
步骤8：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮；甲酸
将N-[6-(5-氨基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(120mg，0.21mmol)和2,2,2-三氟乙酸(3mL)在二氯甲烷(3mL)中的溶液在室温搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物经制备型HPLC提纯，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮；甲酸(15.6mg，0.030mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝467.1；1HNMR(300MHz,DMSO)δ9.26(s,1H),9.07(s,1H),8.15(s,1H),7.75(s,1H),7.72(s,1H),6.80(d,J＝6.0Hz,1H),6.10(s,2H),5.98(s,1H),5.79(s,2H),4.97(s,2H),3.83-3.81(m,2H),3.18-3.16(m,2H),2.95(s,3H)。
实施例191：
2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-(甲基-d3)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物231)
步骤1：2-溴-6-(三氘代甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮/>
在25℃，向2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(250mg，1.09mmol)和叔丁醇钾(243.41mg，2.17mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中添加碘甲烷-D3(236.29mg，1.63mmol)。将反应在25℃搅拌1小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(5/95)洗脱，得到2-溴-6-(三氘代甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(220mg，0.89mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝247。
步骤2：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(三氘代甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将2-溴-6-(三氘代甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(220mg，0.89mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(256.15mg，0.89mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(138.22mg，0.13mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(152.06mg，0.18mmol)和碳酸铯(870.71mg，2.67mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在100℃搅拌5小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(三氘代甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(280mg，0.62mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝454。
步骤3：N-[7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-[[7-氧代-6-(三氘代甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯/>
将2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(三氘代甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(280mg，0.62mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.80g，15.42mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(127.69mg，0.12mmol)、BrettPhos(99.38mg，0.19mmol)和碳酸铯(804.39mg，2.47mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到N-[7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-[[7-氧代-6-(三氘代甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(150mg,0.28mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝535。
步骤4：2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(三氘代甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-[7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-[[7-氧代-6-(三氘代甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(120mg，0.22mmol)和2,2,2-三氟乙酸(2mL)在二氯甲烷(2mL)中的混合物在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。所得残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.1％氨)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-(三氘代甲基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(40.7mg，0.09mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝435；1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.27(s,1H),9.08(s,1H),8.50-8.49(d,J＝4.0Hz,1H),8.43(s,1H),7.72(s,1H),7.39-7.38(d,J＝4.0Hz,1H),6.79-6.77(d,J＝8.0Hz,1H),6.10(s,2H),5.98(s,1H),4.97(s,2H),3.83-3.81(m,2H),3.18-3.16(m,2H),2.22(s,3H)。/>
实施例192和实施例193：
(±)-2-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物308)、
(4R)-2-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物309)和
(4S)-2-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物310)
步骤1：2-溴-4-羟基-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将2-溴-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-4,7-二酮(300mg，1.16mmol)和NaBH4(44.17mg，1.16mmol)在甲醇(5mL)中的混合物在室温搅拌3小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在C18上经快速色谱提纯，用ACN/水(17％)洗脱，得到2-溴-4-羟基-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(200mg，0.77mmol)，其为无色油状物。LC/MS(ESI)[M+H]+＝260。步骤2：2-溴-4-氟-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮
将2-溴-4-羟基-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(200mg，0.77mmol)和三氟化二乙基氨基硫(247.9mg，1.54mmol)在二氯甲烷(20mL)中的混合物在0℃搅拌1小时。将反应经NaHCO3溶液淬灭。所得混合物经二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-40/0.5％碳酸氢钠)，得到2-溴-4-氟-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(150mg，0.57mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝262。
步骤3：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(4-氟-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将2-溴-4-氟-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(300.0mg，1.14mmol)、N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(575.74mg，1.14mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(236.95mg，0.23mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(264.65mg，0.46mmol)和碳酸钾(473.9mg，3.43mmol)在1,4-二噁烷(50mL)中的混合物在100℃搅拌12小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(4-氟-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(400mg，0.58mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝684。
步骤4：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(4-氟-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(4-氟-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(420mg，0.61mmol)、Boc-NH2(2.15g，18.42mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(127.08mg，0.12mmol)、Brettphos(65.93mg，0.12mmol)和碳酸铯(800.55mg，2.46mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(4-氟-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(400mg，0.52mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝765。
步骤5：(±)-2-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物308)
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(4-氟-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(400mg，0.52mmol)和TFA(10mL,0.52mmol)]在二氯甲烷(5mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(AtlantisHILIC OBD，19×150mm 5um；水(10mmol/L)：CH3CN＝17％-27％ B，在10分钟内)，得到[2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-4-氟-6-甲基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(150mg，0.32mmol)]，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝465.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),9.25(s,1H),7.99(s,1H),7.67(s,1H),6.74(d,J＝6.1Hz,1H),6.42(d,J＝2.5Hz,1H),6.08(s,2H),5.99-5.86(m,1H),5.27-5.18(m,3H),4.81(d,J＝14.9Hz,1H),4.45-4.36(m,1H),4.05-3.93(m,1H),3.00(s,3H),1.93(d,J＝1.5Hz,3H)。
步骤6：(4R)-2-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮和(4S)-2-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮/>
2-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基氨基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮经手性-HPLC分离，得到两种异构体：化合物309：(18.8mg，0.041mmol)，其为黄色固体。保留时间：4.500分钟(手性Cellulose-SB.0.46*15cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝465.3；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),9.24(s,1H),7.98(s,1H),7.66(s,2H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.41(d,J＝2.5Hz,1H),6.07(s,2H),6.00-5.83(m,1H),5.27-5.16(m,3H),4.80(d,J＝15.0Hz,1H),4.39(dd,J＝35.2,16.1Hz,1H),4.00(dd,J＝14.6,8.0Hz,1H),2.99(s,3H),1.92(d,J＝1.5Hz,3H)。化合物310：(20.9mg，0.045mmol)(假定的)，其为黄色固体。保留时间：5.344分钟(手性Cellulose-SB.0.46*15cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(53)[M+H]+＝465.3；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),9.24(s,1H),7.98(s,1H),7.66(s,2H),6.73(d,J＝6.1Hz,1H),6.41(d,J＝2.5Hz,1H),6.07(s,2H),5.99-5.83(m,1H),5.27-5.16(m,3H),4.80(d,J＝14.9Hz,1H),4.45-4.34(m,1H),4.07-3.96(m,1H),2.99(s,3H),1.92(d,J＝1.5Hz,3H)。
实施例194：
2-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-4-羟基-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物311)
步骤1：2-溴-6-甲基-5,6-二氢-8H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-4,7-二酮
/>
将2-溴-6-甲基-4-亚甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(1.0g，3.9mmol)在四氯化碳(1mL)、乙腈(1mL)和水(1mL)中的溶液在25℃搅拌10分钟。添加RuCl3(265.0mg，1.18mmol)和高碘酸钠(2520mg，11.78mmol)。将该混合物在25℃搅拌2小时。将反应经Na2S2O3/NaHCO3溶液淬灭。所得混合物经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用EA/PE(20％)洗脱，得到2-溴-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-4,7-二酮(300mg，1.16mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝258。
步骤2：2-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-6-甲基-5,6-二氢-8H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-4,7-二酮
将2-溴-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-4,7-二酮(160.0mg，0.62mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(178.38mg，0.62mmol)、t-BuBrettphos(150.04mg，0.31mmol)、t-BuBrettphos Pd G3(211.79mg，0.25mmol)和碳酸铯(606.35mg，1.86mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在120℃搅拌4小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-4,7-二酮(70mg，0.15mmol)，其为黄色固体。LC/MS(ESI)[M+H]+＝465。
步骤3：2-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-4-羟基-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
在-78℃，向2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-4,7-二酮(100mg，0.22mmol)在THF(10mL)中的混合物添加四氢呋喃中的碘化甲基镁(0.43mL,1.29mmol)。在-65℃，搅拌所得溶液2小时。将反应用水淬灭。所得混合物经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-4-羟基-4,6-二甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(40mg,0.083mmol)，其为黄色固体。LC/MS(ESI)：[M+H]+＝481。
步骤4：7-氟-3-(4-羟基-4,6-二甲基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-2-基氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
将2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-4-羟基-4,6-二甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(70mg，0.15mmol)、Boc-NH2(510.9mg，4.37mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(30.13mg，0.0300mmol)、Brettphos(15.63mg，0.030mmol)、碳酸铯(189.8mg，0.58mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用甲醇/二氯甲烷(1/10)洗脱，得到N-[7-氟-3-[(4-羟基-4,6-二甲基-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.071mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝562。
步骤5：2-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-4-羟基-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
将N-[7-氟-3-[(4-羟基-4,6-二甲基-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(30mg，0.050mmol)在二氯甲烷(2mL)和2,2,2-三氟乙酸(5mL)中的混合物在25℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD,19×150mm 5um；水(10mmol/L)：CH3CN＝15％-40％B，在7分钟内)，得到2-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基)-4-羟基-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-g][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮(4.3mg，0.0093mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝462.3；1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.16(s,1H),8.50-8.37(m,2H),7.67(s,1H),7.42(d,J＝5.2Hz,1H),6.86(d,J＝6.2Hz,1H),6.35(s,1H),5.16(d,J＝15.2Hz,1H),4.96-4.89(m,2H),4.11(d,J＝15.6Hz,1H),3.64(d,J＝15.5Hz,1H),3.15(s,3H),2.32(s,3H),1.61(s,3H)。
实施例195：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-(2,2-二氟乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物312)
步骤1：2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在0℃，向2-溴-4,5,6,8-四氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(900mg，3.91mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的混合物添加氢化钠(281.67mg，11.74mmol)。随后将反应搅拌0.5小时。添加在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的2-碘-1,1-二氟乙烷(3.75g，19.56mmol)，并在20℃搅拌3小时。残余物直接经反相HPLC提纯，使用MeOH/0.5％在水中的碳酸氢钠(5％至65％，在30分钟内)，得到2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(380mg，33％产率)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝294.1。
步骤2：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯/>
将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(350mg，0.70mmol)、2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(307mg，1.04mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(144mg，0.14mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(160mg，0.28mmol)和碳酸铯(680mg，2.09mmol)在1,4-二噁烷(35mL)中的混合物在100℃搅拌3小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物经反相HPLC提纯，使用MeOH/0.5％在水中的碳酸氢钠(5％至75％，在30分钟内)，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(180mg，36.1％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝716.4。步骤3：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(180mg，0.25mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(736mg，6.28mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(39mg，0.04mmol)、BrettPhos(27mg，0.05mmol)和碳酸铯(410mg，1.26mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，减压浓缩该滤液。残余物经反相HPLC提纯，使用ACN/0.5％在水中的碳酸氢钠(5％至65％，在30分钟内)，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，49.9％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝797.5。
步骤4：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-7-氟-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(500mg，0.63mmol)和TFA(10mL)在DCM(5mL)中的溶液在20℃搅拌1.5小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用MeOH中的NH3(7M)调节至pH为10。在真空下浓缩后，该粗产物经制备型HPLC提纯(XBridge Prep C18OBD柱，19*15mm 5um；10mmol在水中的碳酸氢钠：can(20％～41％，在7分钟内))，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(156mg，50.3％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝497.3；1HNMR(300MHz,DMSO)δ9.24(s,1H),9.08(s,1H),7.98(s,1H),7.71(s,1H),7.66(s,1H),6.71(s,1H),6.37-5.98(m,4H),5.22(s,2H),5.04(s,2H),3.96-3.79(m,4H),3.07-3.03(m,2H),1.92(s,3H)。
实施例196：
2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-4-羟基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物313)
步骤1：2'-溴-6'-甲基-5',6'-二氢螺[氧杂环丙烷-2,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-7'(8'H)-酮
将2-溴-6-甲基-4-亚甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(1.0g，3.91mmol)和m-CPBA(2.03g，11.73mmol)在二氯甲烷(20mL)中的混合物在25℃搅拌12小时。将反应用Na2S2O3和NaHCO3水溶液淬灭。所得混合物经二氯甲烷萃取，在无水硫酸钠上干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到2'-溴-6'-甲基-5',6'-二氢螺[氧杂环丙烷-2,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>]-7'(8'H)-酮(300mg，1.10mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝272。
步骤2：2-溴-4-羟基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮
在室温，将2'-溴-6'-甲基-5',6'-二氢螺[氧杂环丙烷-2,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-7'(8'H)-酮(300mg，1.10mmol)和甲醇钠(178mg，3.30mmol)在甲醇(5mL)中的溶液搅拌12小时。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到2-溴-4-羟基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮(170mg，0.56mmol)，其为淡黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝304。
步骤3：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-4-羟基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)异喹啉-3-胺(75.68mg，0.26mmol)、2-溴-4-羟基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(80mg，0.26mmol)、t-BuBrettphos Pd G3(89.85mg，0.11mmol)、t-BuBrettphos(63.65mg，0.13mmol)和碳酸铯(257.25mg，0.79mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物在130℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-4-羟基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(47mg，0.092mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝511。
步骤4：N-[7-氟-3-[[4-羟基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
将2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-4-羟基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(100mg，0.20mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(573.2mg，4.89mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(40.51mg，0.04mmol)、Brettphos(31.47mg，0.06mmol)和碳酸铯(191.41mg，0.59mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-[7-氟-3-[[4-羟基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.085mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝592。
步骤5：2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-4-羟基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在室温，将N-[7-氟-3-[[4-羟基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-7-氧代-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(80mg，0.14mmol)和2,2,2-三氟乙酸(0.5mL)在二氯甲烷(3mL)中的混合物搅拌1小时。将混合物在真空下浓缩。残余物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为8。该粗产物经制备型HPLC提纯(XBridge Prep C18OBD柱，19x150mm；水(10mmol/L碳酸氢钠)：CAN＝30％-45％，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-异喹啉基]氨基]-4-羟基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(11.5mg,0.023mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝492。1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.29(s,1H),9.19(s,1H),8.50(d,J＝6.0Hz,1H),8.43(s,1H),7.72(s,1H),7.39(d,J＝6.0Hz,1H),6.79(d,J＝6.0Hz,1H),6.26(s,1H),6.13(s,2H),5.85(s,1H),5.07-4.84(m,2H),4.07-3.65(m,2H),3.55-3.43(m,2H),3.32(s,3H),2.97(s,3H),2.23(s,3H)。
实施例197：
2'-((8-氨基-7-氟-6-(1,3,5-三甲基-1H-吡唑-4-基)异喹啉-3-基)氨基)-6'-甲基-5',6'-二氢螺[环丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-7'(8'H)-酮
(化合物314)
步骤1：8-氯-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)异喹啉-3-胺
将8-氯-7-氟-6-碘-异喹啉-3-胺(500mg，1.55mmol)、1,3,5-三甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡唑(500mg，2.12mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(113mg，0.15mmol)和碳酸钾(536mg，3.88mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和水(1.5mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。将混合物在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到8-氯-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)异喹啉-3-胺(517mg,1.69mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝305。
步骤2：2-[[8-氯-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-4,1'-环丙烷]-7-酮/>
将2-溴-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-4,1'-环丙烷]-7-酮(50mg，0.19mmol)、8-氯-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)异喹啉-3-胺(56.41mg，0.19mmol)、t-BuBrettphos Pd G3(63.23mg，0.07mmol)、t-BuBrettphos(44.79mg，0.09mmol)和碳酸铯(181.02mg，0.56mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在130℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(94/6)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-4,1'-环丙烷]-7-酮(27mg,0.055mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝494。
步骤3：N-[7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-4,1'-环丙烷]-2-基)氨基]-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
将2-[[8-氯-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-4,1'-环丙烷]-7-酮(136.0mg，0.28mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(806.36mg，6.88mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(56.99mg，0.06mmol)、Brettphos(44.27mg，0.08mmol)和碳酸铯(269.27mg，0.83mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。将混合物在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-[7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-4,1'-环丙烷]-2-基)氨基]-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(65mg，0.11mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝575。步骤4：2-[[8-氨基-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-4,1'-环丙烷]-7-酮/>
将N-[7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-4,1'-环丙烷]-2-基)氨基]-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(87.42mg，0.15mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1.0mL)在二氯甲烷(3mL)中的混合物在室温搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。反应混合物用甲醇中的氨(7mol/L)调节至pH为8。该粗产物经制备型HPLC提纯(XBridge Prep C18OBD柱，19x150mm；水(10mmol/L碳酸氢钠)和ACN(30％-50％)，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-4,1'-环丙烷]-7-酮(33mg，0.07mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝475；1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.20(s,1H),8.95(s,1H),7.58(s,1H),6.65(d,J＝6.0Hz,1H),5.96(s,2H),5.61(s,1H),5.06(s,2H),3.73-3.70(m,5H),2.99(s,3H),2.18(s,3H),2.08(s,3H),1.18-1.16(m,2H),0.95-0.92(m,2H)。
实施例198：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物315)
步骤1：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯/>
将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(518mg，1.03mmol)、2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(280.27mg，1.03mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(213.19mg，0.21mmol)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(238.11mg，0.41mmol)和碳酸铯(1.01g，3.09mmol)在1,4-二噁烷(28mL)中的混合物在100℃搅拌15小时。将反应冷却至室温，并随后在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(280mg,0.40mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝694。
步骤2：N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(270mg，0.39mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.14g，9.72mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(80.51mg，0.08mmol)、Brettphos(83.39mg，0.16mmol)和碳酸铯(633.97mg，1.94mmol)在1,4-二噁烷(40mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。将反应冷却至室温并随后在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(150mg,0.19mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝775。
步骤3：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(140mg，0.18mmol)和2,2,2-三氟乙酸(5mL,0.18mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在20℃搅拌1小时。该粗产物经制备型HPLC提纯(XBridge Shield RP18OBD柱，5μm,19*150mm；水(10mmol/L碳酸氢钠)＝25％ B至45％ B，在7分钟内；25mL/分钟)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(36.5mg，0.077mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝475.3。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),9.07(s,1H),7.99(s,1H),7.69(d,J＝8.9Hz,2H),6.72(d,J＝6.1Hz,1H),6.05(s,2H),5.96(s,1H),5.23(s,2H),4.97(s,2H),4.61-4.57(m,1H),3.79-3.75(m,2H),2.99-2.96(m,2H),1.94(s,3H),1.13(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例199：
2'-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6'-甲基-5',6'-二氢螺[环丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-7'(8'H)-酮
(化合物316)
步骤1：N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[5-[8-氯-7-氟-3-([3'-甲基-4'-氧代-2',3',4',5'-四氢螺[环丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-8'-基]氨基)异喹啉-6-基]-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁基酯/>
将N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.40mmol)、2-溴-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-4,1'-环丙烷]-7-酮(129mg，0.48mmol)、t-BuBrettphos Pd G3(137mg，0.16mmol)、t-BuBrettphos(97mg，0.2mmol)、碳酸铯(391mg，1.2mmol)在1,4-二噁烷中的混合物在130℃搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[5-[8-氯-7-氟-3-([3'-甲基-4'-氧代-2',3',4',5'-四氢螺[环丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>]-8'-基]氨基)异喹啉-6-基]-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁基酯(69mg，25％产率)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝692。
步骤2：(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((6'-甲基-7'-氧代-5',6',7',8'-四氢螺[环丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-2'-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
将N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[5-[8-氯-7-氟-3-([3'-甲基-4'-氧代-2',3',4',5'-四氢螺[环丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-8'-基]氨基)异喹啉-6-基]-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁基酯(69mg，0.1mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(293mg，2.5mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(21mg，0.02mmol)、碳酸铯(98mg，0.3mmol)、BrettPhos(22mg，0.04mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((6'-甲基-7'-氧代-5',6',7',8'-四氢螺[环丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>]-2'-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(39mg，50％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝773。
步骤3：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-4,1'-环丙烷]-7-酮
将N-叔丁氧基羰基-N-[5-[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-氧代-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-4,1'-环丙烷]-2-基)氨基]-6-异喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.06mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1.0mL)在二氯甲烷中的混合物在室温搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。用甲醇中的NH3溶液将混合物调节至pH为8。过滤后，减压浓缩该滤液。该粗产物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD柱，19mmx150um；CH3CN：H2O(碳酸氢钠10mmol/L)＝28-43％，在8分钟内)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-甲基-螺[5,8-二氢吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-4,1'-环丙烷]-7-酮(8.2mg,0.017mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI[M+H]+＝473；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.24(s,1H),8.99(s,1H),7.98(s,1H),7.67(s,1H),7.64(s,1H),6.72(d,J＝6Hz,1H),6.05(s,2H),5.61(s,1H),5.22(s,2H),5.06(s,2H),3.73(s,2H),2.99(s,3H),1.93(s,3H),1.24-1.16(m,2H),0.96-0.92(m,2H)。
实施例200：
2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-4-亚甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物317)
将N-[7-氟-3-([6-甲基-4-亚甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(20mg，0.03mmol)在二噁烷中的HCl(2mL,4mol/L)中的混合物在室温搅拌2小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD柱，19*150mm*5um；水(0.1％碳酸氢钠)：CH3CN＝25％-41％，在7分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(2.8mg，0.006mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝444；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),9.17(s,1H),8.50(d,J＝4.0Hz,1H),8.42(s,1H),7.65(s,1H),7.38(d,J＝4.0Hz,1H),6.80(d,J＝8.0Hz,1H),6.51(s,1H),6.11(s,2H),5.63(s,1H),5.33(s,1H),5.08(s,2H),4.41(s,2H),2.91(s,3H),2.21(s,3H)。
实施例201：
2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物318)
步骤1：3,5-二溴-1H-吡唑
在-65℃，向3,4,5-三溴-1H-吡唑(50g，164.1mmol)在THF(750mL)中的溶液中添加n-BuLi(2.5M)在己烷(150mL)中的溶液。在干燥冰浴中，在-65℃搅拌所得溶液1小时。随后将反应用水淬灭。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(50/1)洗脱，得到3,5-二溴-1H-吡唑(20g，54％)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝226.9。
步骤2：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁基酯
向3,5-二溴-1H-吡唑(20g，88.55mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(400mL)中的溶液中添加碳酸钾(20g，144.7mmol)、TBAI(1.6g，4.33mmol)和2-氯乙酸叔丁基酯(20g，132.8mmol)。在室温，搅拌所得溶液12小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶柱上提纯，用二氯甲烷/甲醇(100/1)洗脱，得到2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁基酯(18g，60％)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝341.0。
步骤3：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸
将2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁基酯(18g，52.94mmol)在二氯甲烷(10mL)和2,2,2-三氟乙酸(100mL)中的溶液在80℃搅拌2小时。将所得混合物在真空下浓缩，得到2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸(15g，粗品)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝284.9。
步骤4：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙酰胺
在室温，将2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸(15g，52.84mmol)、甲基(丙-2-烯-1-基)胺(5.7g，80.15mmol)、N,N-二异丙基乙胺(27g，208.9mmol)和HATU(30g，78.9mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(500mL)中的溶液搅拌16小时。所得混合物经乙酸乙酯稀释，并随后用氯化钠溶液洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(2/3)洗脱，得到2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙酰胺(16.3g，92％)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝338.0。
步骤5：2-溴-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在80℃，将2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙酰胺(5g，14.84mmol)、乙酸钯(166mg，0.74mmol)、三苯基膦(388mg，1.48mmol)、TBAB(4.8g，14.890mmol)和乙酸钾(4.2g，42.80mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的混合物搅拌10小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶柱上提纯，经乙酸乙酯/石油醚(2/1)洗脱，得到2-溴-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(3.2g，84％)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝258.1。
步骤6：5-溴-4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)吡啶
将2,5-二溴-4-甲基吡啶(1.2g，4.78mmol)、2-(三丁基锡烷基)-1,3-噁唑(2.06g，5.75mmol)和四(三苯基膦)钯(552mg，0.48mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的混合物在90℃搅拌16小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶柱上提纯，经乙酸乙酯/石油醚(1/2)洗脱，得到5-溴-4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)吡啶(380mg，33％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H+]＝241.1。
步骤7：4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶
将5-溴-4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)吡啶(800mg，3.35mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(8.4g，33.08mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(244mg，0.33mmol)和乙酸钾(820mg，8.36mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的混合物在90℃搅拌16小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶柱上提纯，经乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(1.2g，粗品)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝287.1。
步骤8：8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-胺
将8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-胺(550mg，1.71mmol)、4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(1.2g，4.19mmol)、碳酸钾(825mg，5.97mmol)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(125mg，0.17mmol)在1,4-二噁烷(25mL)和水(5mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶柱上提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-胺(580mg 95％)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝355.1。
步骤9：2-([8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]氨基)-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮/>
将8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-胺(700mg，1.97mmol)、2-溴-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(1.2g，4.69mmol)、第三代t-BuBrettPhos预催化剂(675mg，0.79mmol)、t-BuBrettPhos(403mg，0.83mmol)和碳酸铯(3.2g，9.82mmol)在1,4-二噁烷(80mL)中的混合物在110℃搅拌1.5小时。然后过滤该混合物。浓缩滤液。在真空下浓缩后，残余物在硅胶柱上提纯，用二氯甲烷/甲醇(15:1)洗脱，得到2-([8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]氨基)-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(300mg，29％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝530.3。
步骤10：2-([8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]氨基)-4,6-二甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
向2-([8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]氨基)-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(300mg，0.57mmol)在甲醇(90mL)和二氯甲烷(10mL)中的混合物中添加钯碳(30.12mg，0.28mmol)。在氢气下(2atm)，将反应在室温搅拌2小时并随后过滤。在真空下浓缩滤液，得到2-([8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]氨基)-4,6-二甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(130mg，43％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝532.3。
步骤11：N-[3-([4,6-二甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯/>
将2-([8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]氨基)-4,6-二甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(100mg，0.19mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(550mg，4.70mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(30mg，0.03mmol)、BrettPhos(20mg，0.04mmol)和碳酸铯(300mg，0.92mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌2小时，并随后过滤。在真空下浓缩后，残余物在硅胶柱上提纯，用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱，得到N-[3-([4,6-二甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基)-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，87％)，其为棕色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝613.4。
步骤12：2-([8-氨基-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]氨基)-4,6-二甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在室温，将N-[3-([4,6-二甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.16mmol)在DCM(5mL)和TFA(5mL)中的混合物搅拌1.5小时。在真空下浓缩所得混合物。用甲醇中的NH3(7M)将溶液的pH值调节至10。该粗产物直接经制备型HPLC提纯(XBridge Prep C18OBD柱，19*15mm 5um；10mmol在水中的碳酸氢钠:ACN(50％～77％)，在8分钟内)，得到2-([8-氨基-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]异喹啉-3-基]氨基)-4,6-二甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(22.5mg，27％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝513.3。1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.29(s,1H),9.13(s,1H),8.57(s,1H),8.35(s,1H),8.12(s,1H),7.74(s,1H),7.50(s,1H),6.86-6.84(m,1H),6.17(s,2H),6.04(s,1H),5.13-4.81(m,2H),3.84-3.77(m,1H),3.68-3.63(m,1H),3.30-3.26(m,1H),2.97(s,3H),2.33(s,3H),1.26(d,J＝7.2Hz,3H)。/>
实施例202：
(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物322)、
(1S,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物321)、
(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物320)和
(1R,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物319)
步骤1：(2E)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-5-基]丙-2-烯酸甲基酯
在70℃，将1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-5-甲醛(10g，29.55mmol)和2-(三苯基-λ5-膦亚基)乙酸甲基酯(9.88g，29.55mmol)在四氢呋喃(150mL)中的混合物搅拌3小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(1/10)洗脱，得到(2E)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-5-基]丙-2-烯酸甲基酯(10g，25.38mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝395。
步骤2：反式-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯
在-78℃、在氮气下，向乙基二苯基锍；三氟(λ2-荧烷基)硼酸盐(trifluoro(lambda2-fluoranidyl)boranuide)(15g，49.64mmol)在乙二醇二甲醚(100mL)和二氯甲烷(10mL)中的混合物添加二异丙基氨基锂(25mL,466.75mmol)。将反应在-78℃搅拌30分钟。添加(2E)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]丙-2-烯酸甲基酯(6.8g，17.23mmol)。将反应在-78℃搅拌5小时。将反应用冰水淬灭。所得混合物经乙酸乙酯萃取并用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到反式-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯(3g，7.10mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝423。
步骤3：反式-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸
在室温，将反式-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯(3g，7.10mmol)和LiOH(853mg，35.61mmol)在甲醇(20mL)和水(20mL)中的混合物搅拌12小时。反应混合物用氯化氢调节至pH为5。所得溶液经乙酸乙酯萃取且合并有机层，并在真空下浓缩，得到反式-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸(1.26g，3.08mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝409。
步骤4：反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酰胺
在0℃，向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(886mg，3.07mmol)、反式-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸(1.26g，3.08mmol)和吡啶(5mL,62.118mmol)在二氯甲烷(50mL)中的混合物添加三氯氧化磷(1.4g，9.13mmol)，并随后在0℃搅拌30分钟。然后将反应用水淬灭。所得混合物用水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)提纯，得到反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酰胺(500mg，0.73mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝678。
步骤5：反式-N-(7-氟-3-[[2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
在90℃、在氮气下，将氨基甲酸叔丁基酯(5.2g，44.38mmol)、反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酰胺(1.5g，2.21mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(460mg，0.44mmol)、BrettPhos(478mg，0.89mmol)和碳酸铯(2.89g，8.87mmol)在二噁烷(30mL)中的混合物搅拌3小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到N-(7-氟-3-[[(1S,3S)-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(1g，1.32mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝759。
步骤6：(1S,2S,3S)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺、(1R,2R,3R)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺、(1S,2S,3R)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺和(1R,2R,3S)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺
在室温，将反式-N-(7-氟-3-[[2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(1g，1.31mmol)在三氟乙酸(10mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％碳酸氢钠)，得到混合物(500mg，1.20mmol)，其为黄色固体。混合物经制备型SFC分离，得到4种异构体(对于异构体的环丙烷立体化学：咪唑相对于酰胺是的反式；任意指定甲基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物321：(84.9mg，0.20mmol)，其为黄色固体,保留时间：1.25分钟(CHIRALPAK IC,3.0*100mm,3μm；MeOH(0.1％DEA)；2ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝417；1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.76(s,1H),10.68(s,1H),9.40(s,1H),8.51(d,J＝4.0Hz,1H),8.42(s,1H),8.34(s,1H),7.48(s,1H),7.40-7.38(m,1H),6.95-6.93(m,2H),6.27(s,2H),2.39-2.32(m,1H),2.29-2.27(m,1H),2.19(s,3H),1.75-1.70(m,1H),1.29-1.27(m,3H)。化合物322：(123.9mg，0.29mmol)，其为黄色固体,保留时间：1.47分钟(CHIRALPAK IC,3.0*100mm,3μm；MeOH(0.1％DEA)；2ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝417；1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.76(s,1H),10.68(s,1H),9.40(s,1H),8.51(d,J＝4.0Hz,1H),8.42(s,1H),8.34(s,1H),7.48(s,1H),7.40-7.38(m,1H),6.95-6.93(m,2H),6.27(s,2H),2.39-2.32(m,1H),2.29-2.27(m,1H),2.19(s,3H),1.75-1.70(m,1H),1.29-1.27(m,3H)。化合物320：(110.2mg，0.26mmol)，其为黄色固体。保留时间：1.63分钟(CHIRALPAK IC,3.0*100mm,3μm；MeOH(0.1％DEA)；2ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝417；1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.76(s,1H),10.68(s,1H),9.40(s,1H),8.51-8.50(d,J＝4.0Hz,1H),8.42(s,1H),8.34(s,1H),7.48(s,1H),7.40-7.38(m,1H),6.95-6.93(m,2H),6.27(s,2H),2.39-2.32(m,1H),2.29-2.27(m,1H),2.19(s,3H),1.75-1.70(m,1H),1.29-1.27(m,3H)。化合物319：(168.9mg，0.40mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.20分钟(CHIRALPAK IC,3.0*100mm,3μm；MeOH(0.1％DEA)；2ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝417；1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.76(s,1H),10.68(s,1H),9.40(s,1H),8.51-8.50(d,J＝4.0Hz,1H),8.42(s,1H),8.34(s,1H),7.48(s,1H),7.40-7.38(m,1H),6.95-6.93(m,2H),6.27(s,2H),2.39-2.32(m,1H),2.29-2.27(m,1H),2.19(s,3H),1.75-1.70(m,1H),1.29-1.27(m,3H)。
实施例203：
(±)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物328)
步骤1：6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-氧杂双环[3.1.0]己-2-酮
将2-重氮基乙酸(2E)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯-1-基酯(100mg，0.48mmol)和叔丁基[(叔丁基二甲基甲硅烷基)铜基]二甲基硅烷(tert-butyl[(tert-butyldimethylsilyl)cuprio]dimethylsilane)(7.1mg，0.024mmol)在甲苯(3mL)中的溶液回流搅拌2小时。所得溶液在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(2/1)洗脱，得到6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-氧杂双环[3.1.0]己-2-酮(25mg，0.14mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝179.1。
步骤2：N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
在0℃，向6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-氧杂双环[3.1.0]己-2-酮(200mg，1.12mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加LiHMDS(1.35mL,8.07mmol)。随后在0℃搅拌混合物30分钟。然后添加8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(287mg，0.99mmol)。将该混合物在室温搅拌2小时。随后将反应用水淬灭。所得混合物经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(150mg，29％)，其为黄色固体。
步骤3：N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[(噁烷-2-基氧基)甲基]环丙烷-1-甲酰胺
在室温，将N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(150mg，0.32mmol)、3,4-二氢-2H-吡喃(140mg，1.66mmol)、TsOH(10mg，0.058mmol)在四氢呋喃(5mL)中的混合物搅拌12小时。在真空下浓缩所得溶液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[(噁烷-2-基氧基)甲基]环丙烷-1-甲酰胺(95mg，54％)，其为黄色固体。
步骤4：N-(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[(噁烷-2-基氧基)甲基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[(噁烷-2-基氧基)甲基]环丙烷-1-甲酰胺(95mg，0.17mmol)、Pd2(dba)3(30mg，0.033mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(510mg，4.35mmol)、BrettPhos(30mg，0.056mmol)、碳酸铯(280mg，0.86mmol)、1,4-二噁烷(3mL)的混合物在90℃搅拌2小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到N-(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[(噁烷-2-基氧基)甲基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(60mg，55％)，其为黄色固体。
步骤5：N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
对于N-(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[(噁烷-2-基氧基)甲基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.095mmol)和三氟乙酸(2mL)在二氯甲烷(2mL)中的溶液在室温搅拌2小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经制备型HPLC提纯，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(7.1mg，17％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝447.3，2.187分钟，K；1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.303(s,1H),8.47(d,J＝5.1Hz,1H),8.42(s,1H),8.36(s,1H),7.51(s,1H),7.44(s,J＝5.1Hz,1H),7.38(s,1H),7.00(d,J＝6.0Hz,1H),3.99-3.88(m,2H),3.86(s,3H),2.32-2.24(m,1H),2.32(s,3H),2.28-2.24(m,1H),1.93-1.84(m,1H)。
实施例204和实施例205：
(1R,2S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(羟基甲基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物327)和
(1S,2R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(羟基甲基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物326)
步骤1：3-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮
将3-氧杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(390mg，3.48mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(500mg，1.73mmol)、4-二甲基氨基吡啶(425mg，3.47mmol)在二噁烷(10mL)中的混合物在120℃搅拌12小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经硅胶柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)提纯，得到3-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(450mg，1.18mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝382。
步骤2：N-(3-[2,4-二氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将氨基甲酸叔丁基酯(1.22g，10.41mmol)、3-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(200mg，0.52mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(108mg，0.10mmol)、BrettPhos(112mg，0.20mmol)、碳酸铯(682mg，2.09mmol)在二噁烷(20mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-(3-[2,4-二氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(150mg，0.32mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝463。
步骤3：顺式-N-(7-氟-3-[[2-(羟基甲基)环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
向N-(3-[2,4-二氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(460mg，0.99mmol)在甲醇(30mL)中的混合物添加硼氢化钠(190mg，5.02mmol)。将该混合物在室温搅拌2小时。将反应用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)提纯，得到顺式-N-(7-氟-3-[[2-(羟基甲基)环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.42mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝467。
步骤4：(1R,2S)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(羟基甲基)环丙烷-1-甲酰胺和(1S,2R)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(羟基甲基)环丙烷-1-甲酰胺
在室温，将顺式-N-(7-氟-3-[[2-(羟基甲基)环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.42mmol)在三氟乙酸(5mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％碳酸氢钠)，得到外消旋产物(50mg，0.13mmol)，其为白色固体。该外消旋产物经手性-HPLC分离，得到两种反式-异构体：化合物327：保留时间：3.04分钟(修复的手性IC，0.46*10cm；5μm；Hex(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝367；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.28(s,1H),8.45-8.44(d,J＝4.0Hz,1H),8.39(s,1H),8.31(s,1H),7.42-7.41(d,J＝4.0Hz,1H),6.98-6.96(d,J＝8.0Hz,1H),3.86-3.82(m,1H),3.75-3.70(m,1H),2.29(s,3H),2.08-2.02(m,1H),1.64-1.59(m,1H),1.15-1.10(m,2H)。化合物326：保留时间：3.86分钟(修复的手性IC,0.46*10cm；5μm；Hex(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝367；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.28(s,1H),8.45-8.44(d,J＝4.0Hz,1H),8.39(s,1H),8.31(s,1H),7.42-7.41(d,J＝4.0Hz,1H),6.98-6.96(d,J＝8.0Hz,1H),3.86-3.82(m,1H),3.75-3.70(m,1H),2.29(s,3H),2.08-2.02(m,1H),1.64-1.59(m,1H),1.15-1.10(m,2H)。
实施例206：
2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物387)
步骤1：2-溴-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在室温，向2-溴-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(1g，4.35mmol)在THF/DMF(40mL/40mL)中的溶液中添加t-BuOK(1.5g，13.4mmol)和三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙基酯(5g，21.5mmol)。搅拌所得溶液16小时。该粗产物经反相HPLC提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠：MeOH(5％～70％，在50分钟内)，得到2-溴-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(300mg，22％)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝312.0。
步骤2：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(100mg，0.35mmol)、2-溴-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(110mg，0.35mmol)、第三代t-BuBrettPhos预催化剂(120mg，0.14mmol)、t-BuBrettPhos(75mg，0.16mmol)、碳酸铯(570mg，1.75mmol)和1,4-二噁烷(12mL)中的混合物在110℃搅拌1小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶柱上提纯，用二氯甲烷/甲醇(15/1)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(35mg，19％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝519.2。
步骤3：N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[7-氧代-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯
将2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(150mg，0.29mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(850mg，7.26mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(45mg，0.043mmol)、BrettPhos(30mg，0.056mmol)、碳酸铯(472mg，1.45mmol)在1,4-二噁烷(12mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶柱上提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[7-氧代-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，23％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝600.4。/>
步骤4：2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在室温，将N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[7-氧代-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.067mmol)在二氯甲烷(2mL)和三氟乙酸(5mL)中的溶液搅拌2.5小时。在真空下浓缩所得混合物。用甲醇中的NH3(7M)将溶液的pH值调节至10。该粗产物直接经制备型HPLC提纯(XBridge Prep C18OBD柱，19*15mm 5um；10mmol在水中的碳酸氢钠：ACN(50％～77％)，在8分钟内)，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(6.0mg，18％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝500.1；1HNMR(300MHz,MeOD)δ9.14(s,1H),8.44(d,J＝5.7Hz,1H),8.39(s,1H),7.64(s,1H),7.41(d,J＝5.7Hz,1H),6.85(d,J＝6.0Hz,1H),6.06(s,1H),5.11(s,2H),4.25-4.22(m,2H),4.07-4.03(m,2H),3.19-3.17(m,2H),2.30(s,3H)。
实施例207：
(1S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-4-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物369)和
(1R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-4-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物370)
步骤1：4-甲基-N'-[(1E)-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]亚甲基]苯-1-磺酰肼
/>
在室温，将1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-甲醛(10g，29.55mmol)、4-甲基苯-1-磺酰肼(11g，59.06mmol)在甲醇(200mL)和AcOH(0.5mL)中的混合物搅拌12小时。过滤后，收集固体并用甲醇(50mL)洗涤，得到4-甲基-N'-[(1E)-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]亚甲基]苯-1-磺酰肼(10g，19.76mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝507。
步骤2：2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯
将(2E)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯酸甲基酯(5g，30.08mmol)、4-甲基-N'-[(1E)-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]亚甲基]苯-1-磺酰肼(18.2g，35.92mmol)在二甲苯(200mL)中的混合物在150℃搅拌4小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯洗脱，得到2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯(1.8g，3.68mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝489。
步骤3：2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸
在室温，将2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯(700mg，1.43mmol)和LiOH(172mg，7.18mmol)在水(15mL)和甲醇(15mL)中的混合物搅拌12小时。用氯化氢(1N)将反应混合物调节至pH为5。所得混合物经乙酸乙酯萃取，并用无水硫酸钠干燥，得到2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸(500mg，1.05mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝475。
步骤4：N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酰胺
在0℃，将2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸(500mg，1.05mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(302mg，1.05mmol)和吡啶(4mL)在二氯甲烷(20mL)中的混合物添加三氯氧化磷(480mg，3.13mmol)。在0℃，搅拌所得溶液30分钟。将反应在真空下浓缩。残余物经硅胶柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)提纯，得到反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酰胺(350mg,0.47mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝744。
步骤5：N-(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酰胺(250mg，0.33mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(787mg，6.71mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(70mg，0.06mmol)、BrettPhos(72mg，0.13mmol)和碳酸铯(438mg，1.34mmol)在二噁烷(20mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(120mg，0.14mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝825。
步骤6：(1R,3S)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-4-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺和(1S,3R)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-4-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
在室温，将N-(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.12mmol)在三氟乙酸(5mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％ FA)，得到外消旋产物(20mg，0.04mmol)，其为黄色固体。通过手性-HPLC分离外消旋产物，得到两种异构体：(对于异构体的环丙烷立体化学：吡唑相对于酰胺是反式的；咪唑相对立体化学未知；任意指定所有绝对立体化学)化合物370：保留时间：4.99分钟(CHIRALPAK ID-3,0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝483；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.33(s,1H),8.48(d,J＝4.0Hz,1H),8.42-8.40(m,2H),7.56(s,1H),7.45(d,J＝4.0Hz,1H),7.27(s,1H),7.12(s,1H),7.03(s,1H),6.77(s,1H),3.73(s,3H),2.90-2.86(m,1H),2.79-2.76(m,1H),2.71-2.69(m,1H),2.32(s,3H)；化合物369：保留时间：5.98分钟(CHIRALPAK ID-3,0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝483；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.33(s,1H),8.48(d,J＝4.0Hz,1H),8.42-8.40(m,2H),7.56(s,1H),7.45(d,J＝4.0Hz,1H),7.27(s,1H),7.12(s,1H),7.03(s,1H),6.77(s,1H),3.73(s,3H),2.90-2.86(m,1H),2.79-2.76(m,1H),2.71-2.69(m,1H),2.32(s,3H)
实施例208和实施例209：
(±)-(1R,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-((二甲基氨基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物343)；
(1R,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-((二甲基氨基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物344)和
(1S,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-((二甲基氨基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物345)
步骤1：2-氧代-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙基酯
将(2-乙氧基-2-氧代乙基)二甲基溴化锍(60g，261.85mmol)和碳酸铯(101g，309.98mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(300mL)中的溶液在20℃搅拌20分钟。添加2,5-二氢呋喃-2-酮(20g，237.88mmol)，并将混合物在20℃继续搅拌15小时。将反应用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(3/7)洗脱，得到2-氧代-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙基酯(3g，7％)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝171。
步骤2：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酰基]-3-(羟基甲基)环丙烷-1-甲酸乙基酯
在-78℃，向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(6.1g，21.20mmol)在四氢呋喃(150mL)中的溶液中添加LiHMDS(18mL,107.57mmol)并随后搅拌1小时。添加2-氧代-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-6-甲酸乙基酯(4.5g，26.45mmol)并将混合物在20℃继续搅拌15小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(49/1)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酰基]-3-(羟基甲基)环丙烷-1-甲酸乙基酯(3.1g，26％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝458。
步骤3：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酰基]-3-[(甲磺酰基氧基)甲基]环丙烷-1-甲酸乙基酯
在0℃，向2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酰基]-3-(羟基甲基)环丙烷-1-甲酸乙基酯(1.4g，3.06mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加三乙胺(927mg，9.161mmol)和甲磺酰氯(703mg，6.14mmol)并随后搅拌15分钟。所得溶液在真空下浓缩，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酰基]-3-[(甲磺酰基氧基)甲基]环丙烷-1-甲酸乙基酯(2g，粗品)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝536。
步骤4：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酰基]-3-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷-1-甲酸乙基酯
将2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酰基]-3-[(甲磺酰基氧基)甲基]环丙烷-1-甲酸乙基酯(3.6g，6.72mmol)和二甲胺在甲醇(160mL)中的溶液在20℃搅拌36小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(24/1)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酰基]-3-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷-1-甲酸乙基酯(1.85g，57％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝485。
步骤5：2-[(8-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酰基]-3-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷-1-甲酸乙基酯
将2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酰基]-3-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷-1-甲酸乙基酯(592mg，1.22mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(3.57g，30.475mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(253mg，0.244mmol)、BrettPhos(262mg，0.49mmol)、碳酸铯(1.99g，6.11mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在90℃搅拌15小时。然后过滤该混合物。在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到2-[(8-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酰基]-3-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷-1-甲酸乙基酯(280mg，41％)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝566。
步骤6：N-(3-[[2-[(二甲基氨基)甲基]-3-(羟基甲基)环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
向2-[(8-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酰基]-3-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷-1-甲酸乙基酯(280mg，0.49mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加DIBAl-H(1.98mL,11.81mmol)。将该混合物在-78℃搅拌1小时。将反应经甲醇淬灭。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(7/3)洗脱，得到N-(3-[[2-[(二甲基氨基)甲基]-3-(羟基甲基)环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(80mg，31％)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝524。
步骤7：N-(3-[[2-[(二甲基氨基)甲基]-3-[(甲磺酰基氧基)甲基]环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
向N-(3-[[2-[(二甲基氨基)甲基]-3-(羟基甲基)环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.13mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加三乙胺(42mg，0.42mmol)、甲磺酰氯(31mg，0.27mmol)。在0℃，搅拌所得溶液15分钟。所得溶液在真空下浓缩，得到N-(3-[[2-[(二甲基氨基)甲基]-3-[(甲磺酰基氧基)甲基]环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(90mg，粗品)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝602。
步骤8：N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
在50℃，向N-(3-[[2-[(二甲基氨基)甲基]-3-[(甲磺酰基氧基)甲基]环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(90mg，0.150mmol)和NaCN(15mg，0.31mmol)在DMSO(5mL)中的混合物搅拌1小时。将反应用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(50mg，63％)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝533。
步骤9：(1R,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-((二甲基氨基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺和(1S,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-((二甲基氨基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺
将N-(3-[[(1R,2S,3S)-2-(氰基甲基)-3-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(48mg，0.090mmol)和三氟乙酸(5mL)在二氯甲烷(5mL)的溶液在20℃搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经制备型HPLC使用以下条件提纯(Kinetex EVO C18柱，30*150,5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)和ACN(15％至35％)，在10分钟内)，得到(±)-(1R,2S,3S)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)-3-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷-1-甲酰胺(2.4mg，6％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝433.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.84(s,1H),9.41(s,1H),8.50(d,J＝5.0Hz,1H),8.42(s,1H),8.29(s,1H),7.39(d,J＝5.1Hz,1H),6.94(d,J＝6.2Hz,1H),6.29(s,2H),2.84-2.72(m,2H),2.46(d,J＝6.7Hz,2H),2.21(s,3H),2.13(s,7H),1.60(dd,J＝6.5,5.0Hz,1H),1.51-1.40(m,1H)。外消旋产物经SFC分离，得到两种异构体。化合物344(5.1mg，34％)，其为黄色固体。保留时间：3.652分钟(CHIRALPAKIF,2*25cm,5μm；MTBE和20.0％乙醇(8mmol/L NH3.H2O)，在23分钟内)；LCMS(ESI)[M+H]+＝433.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.84(s,1H),9.41(s,1H),8.50(d,J＝5.0Hz,1H),8.42(s,1H),8.29(s,1H),7.39(d,J＝5.1Hz,1H),6.94(d,J＝6.2Hz,1H),6.29(s,2H),2.84-2.72(m,2H),2.46(d,J＝6.7Hz,2H),2.21(s,3H),2.13(s,7H),1.60(dd,J＝6.5,5.0Hz,1H),1.51-1.40(m,1H)。化合物345：(5.4mg，36％)，其为黄色固体。保留时间：4.805分钟(CHIRALPAK IF,2*25cm,5μm；MTBE和20.0％乙醇(8mmol/L NH3.H2O)，在23分钟内)；LCMS(ESI)[M+H]+＝433.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.84(s,1H),9.41(s,1H),8.50(d,J＝5.0Hz,1H),8.42(s,1H),8.29(s,1H),7.39(d,J＝5.1Hz,1H),6.94(d,J＝6.2Hz,1H),6.29(s,2H),2.84-2.72(m,2H),2.46(d,J＝6.7Hz,2H),2.21(s,3H),2.13(s,7H),1.60(dd,J＝6.5,5.0Hz,1H),1.51-1.40(m,1H)。
实施例210：
(1S,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-(1H-咪唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物324)和(1R,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-(1H-咪唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物323)
步骤1：3-(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)环丙烷-1,2-二甲酸二甲基酯
将(2E)-丁-2-烯二酸1,4-二甲基酯(10g，69.38mmol)、4-甲基-N'-[(1E)-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]亚甲基]苯-1-磺酰肼(2.85g，5.63mmol)和碳酸钾(4.09g，29.59mmol)在二甲苯(150mL)中的混合物在150℃搅拌1小时。然后过滤该混合物，并在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到(±)-(1S,2S)-3-(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)环丙烷-1,2-二甲酸二甲基酯(4g，24％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝467。
步骤2：2-(甲氧基羰基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸
将3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1,2-二甲酸1,2-二甲基酯(3.2g，6.85mmol)和LiOH.H2O(288mg，6.86mmol)在四氢呋喃(30mL)和甲醇(10mL)中的混合物在室温搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物用水稀释，并用氯化氢(1.0mol/L)将溶液的pH值调节至4。所得混合物用3x100mL的二氯甲烷萃取。合并有机层，并在无水硫酸钠上干燥并过滤。将所得混合物在真空下浓缩，得到2-(甲氧基羰基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸(1.2g，39％)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝453。
步骤3：2-(羟基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯
向2-(甲氧基羰基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸(3.0g，6.63mmol)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中添加BH3-Me2S(2mL,21.09mmol)。将溶液在室温搅拌2小时。然后，将反应用甲醇淬灭。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到2-(羟基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯(1.5g，52％)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝439。
步骤4：2-[(甲磺酰基氧基)甲基]-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯
在0℃，向2-(羟基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯(537mg，1.23mmol)和三乙胺(371mg，3.67mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加甲磺酰氯(281mg，2.45mmol)。在0℃搅拌溶液15分钟。随后将反应用水淬灭。所得溶液经二氯甲烷萃取。有机层在无水硫酸钠上干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到2-[(甲磺酰基氧基)甲基]-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯(500mg，79％)，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝517。
步骤5：(2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯
在50℃，将2-[(甲磺酰基氧基)甲基]-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯(620mg，1.20mmol)和NaCN(118mg，2.41mmol)在二甲基亚砜(10mL)中的混合物搅拌1小时。反应经乙酸乙酯稀释。所得混合物用水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯(440mg，82％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝448。
步骤6：(1R,2S,3S)-2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸
在室温，将2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯(400mg，0.89mmol)和氢氧化钠(107mg，2.68mmol)在乙醇(10mL)、四氢呋喃(10mL)和水(10mL)中的混合物搅拌12小时。在真空下浓缩该混合物。所得溶液用水稀释。用氯化氢(1.0mol/L)将溶液的pH值调节至4。该溶液经二氯甲烷萃取。有机层在无水硫酸钠上干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸(320mg，83％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝434。
步骤7：N-(3-[[(2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
向2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸(377mg，0.87mmol)、N-[3-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(320mg，0.87mmol)和吡啶(1mL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加POCl3(405mg，2.64mmol)。在0℃将该混合物搅拌30分钟。随后将反应用水淬灭，并随后用乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(500mg，73％)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝784。
步骤8：(1R,2S,3S)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)-3-(1H-咪唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺和(1S,2R,3R)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)-3-(1H-咪唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
在室温，将N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(600mg，0.77mmol)在二氯甲烷(5mL)和2,2,2-三氟乙酸(5mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物，并随后用二氯甲烷稀释。用甲醇中的氨(7mol/L)将溶液的pH值调节至8。该粗产物经制备型HPLC提纯(Kinetex EVO C18柱，30*150,5μm；水(10mmol/L碳酸氢钠)和can(20％ ACN达至35％，在7分钟内)，得到外消旋产物。外消旋产物经手性-HPLC纯化，得到两种对映异构体。化合物323：(16.7mg，5％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝784。1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.86(s,1H),10.77(s,1H),9.39(s,1H),8.50(d,J＝6.0Hz,1H),8.41(s,1H),8.17(s,1H),7.47(s,1H),7.39(d,J＝6.0Hz,1H),6.89(d,J＝6.0Hz,1H),6.80(s,1H),6.29(s,2H),2.97-2.82(m,2H),2.47-2.41(m,2H),2.38-2.20(m,4H)。化合物324：(13.8mg，4％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝784。1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.86(s,1H),10.77(s,1H),9.39(s,1H),8.50(d,J＝6.0Hz,1H),8.41(s,1H),8.17(s,1H),7.47(s,1H),7.39(d,J＝6.0Hz,1H),6.89(d,J＝6.0Hz,1H),6.80(s,1H),6.29(s,2H),2.97-2.82(m,2H),2.47-2.41(m,2H),2.38-2.20(m,4H)。
实施例211：
2-((8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物229)
步骤1：N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[5-[8-氯-7-氟-3-([6-甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)异喹啉-6-基]-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁基酯/>
将2-溴-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(25mg，0.10mmol)、N-[5-(3-氨基-8-氯-7-氟异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.099mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(21mg，0.020mmol)、Xantphos(23mg，0.040mmol)、碳酸铯(81mg，0.25mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物在100℃搅拌15小时。将反应溶液冷却至室温并随后过滤。在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[5-[8-氯-7-氟-3-([6-甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基)异喹啉-6-基]-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁基酯(20mg，0.030mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝666。
步骤2：(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((6-甲基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
将N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[5-[8-氯-7-氟-3-([6-甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)异喹啉-6-基]-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.090mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(264mg，2.25mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(19mg，0.018mmol)、BrettPhos(20mg，0.037mmol)、碳酸铯(147mg，0.45mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。将反应溶液冷却至室温并随后过滤。在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到(叔丁氧基羰基)(5-(8-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氟-3-((6-甲基-7-氧代-5,6,7,8-四氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基)异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(50mg，0.067mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝747。/>
步骤3：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-[6-(5-[双[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-3-([6-甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(290mg，0.39mmol)和三氟乙酸(10mL)在二氯甲烷(3mL)中的溶液在20℃搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物。用甲醇中的氨(7mol/L)将溶液的pH值调节至11。该粗产物经制备型HPLC使用以下条件提纯(XBridge Shield RP18OBD柱，30*150mm,5um；水(10mmol/L碳酸氢钠)和ACN(10％ ACN达至30％，在10分钟内)，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(34.1mg，20％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝447.2；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),9.07(s,1H),7.99(s,1H),7.69(s,1H),7.66(s,1H),6.72(d,J＝6.1Hz,1H),6.07(s,2H),5.99(s,1H),5.23(s,2H),4.98(s,2H),3.84(t,J＝5.7Hz,2H),3.05(t,J＝5.6Hz,2H),2.96(s,3H),1.94(d,J＝1.5Hz,3H)。
实施例212：
(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H-吡唑-5-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物332)、
(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H-吡唑-5-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物331)、
(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H-吡唑-5-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物330)和
(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H-吡唑-5-基)环丙烷-1-甲酰胺(假定的)(化合物329)
步骤1：3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑
将5-碘-1H-吡唑(10g，51.55mmol)、3,4-二氢-2H-吡喃(13g，154.55mmol)、TsOH(443mg，2.57mmol)在乙酸乙酯(200mL)中的混合物在80℃搅拌3小时。所得混合物用水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/石油醚(3/7)洗脱，得到3-碘-1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑(7.0g，25.18mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝279。
步骤2：(E)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)丙烯酸甲基酯
将3-碘-1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑(5g，17.98mmol)、丙-2-烯酸甲基酯(4.64g，53.90mmol)、乙酸钯(604mg，2.69mmol)、三-邻甲苯基膦(1.09g，3.58mmol)、三乙胺(2.725g，26.93mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的混合物在110℃搅拌12小时。所得溶液经乙酸乙酯稀释，并随后用水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(15/85)洗脱，得到(2E)-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-3-基]丙-2-烯酸甲基酯(2.7g，11.44mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝237。
步骤3：2-甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)环丙烷甲酸甲基酯
在室温，将(2E)-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-3-基]丙-2-烯酸甲基酯(2.7g，11.43mmol)、乙基二苯基锍三氟硼烷氟化物(10.37g，34.31mmol)、二异丙基氨基锂(20mL,373.40mmol)在二氯甲烷(30mL)和乙二醇二甲醚(150mL)中的混合物搅拌5小时。随后将反应用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(4/6)洗脱，得到2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-3-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯(1.5g，5.66mmol)，其为黄色油状物。LC/MS(ESI)[M+H]+＝265。
步骤4：2-甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)环丙烷甲酸
在室温，将2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-3-基]环丙烷-1-甲酸甲基酯(1.45g，5.49mmol)、LiOH(659mg，27.52mmol)在四氢呋喃(15mL)和水(15mL)中的混合物搅拌12小时。所得混合物用乙酸乙酯洗涤。水层用氯化氢(1mol/L)调节至pH为3。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-3-基]环丙烷-1-甲酸(1.3g，5.18mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝251。
步骤5：N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)环丙烷甲酰胺
在室温，将8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(1.5g，5.21mmol)、2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-3-基]环丙烷-1-甲酸(1.3g，5.19mmol)、POCl3(1.6g，10.44mmol)、吡啶(5mL,62.12mmol)在二氯甲烷(30mL)中的混合物搅拌30分钟。随后将反应用水淬灭。所得溶液经二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(2/1)洗脱，得到(1S,3S)-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-3-基]环丙烷-1-甲酰胺(1.26g，2.42mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝520。
步骤6：7-氟-3-(2-甲基-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)环丙烷甲酰氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
将N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-3-基]环丙烷-1-甲酰胺(1.3g，2.50mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(8.79g，75.05mmol)、BrettPhos(269mg，0.50mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(518mg，0.50mmol)、碳酸铯(3.27g，10.02mmol)在1,4-二噁烷(160mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(9/1)洗脱，得到N-(7-氟-3-[[2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-3-基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(480mg，0.80mmol)，其为黄色固体。LC/MS(ESI)[M+H]+＝601。
步骤7：(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H-吡唑-5-基)环丙烷甲酰胺(假定的)、(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H-吡唑-5-基)环丙烷甲酰胺(假定的)、(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H-吡唑-5-基)环丙烷甲酰胺(假定的)和(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H-吡唑-5-基)环丙烷甲酰胺(假定的)
在室温，将N-(7-氟-3-[[2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-3-基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(480mg，0.80mmol)、甲醇(2mL,49.40mmol)在HCl/二噁烷(8mL)中的混合物搅拌10小时。所得溶液在真空下浓缩。该粗产物经制备型HPLC提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠:ACN＝30％-40％，在7分钟内)，得到混合物(150mg，0.36mmol)。经手性-HPLC分离混合物，得到4种异构体(对于每种异构体的环丙烷立体化学：吡唑相对于酰胺是反式的；任意指定甲基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物332：(16.7mg，0.040mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.289分钟(修复的手性IC.0.46*10cm；5μm；MtBE(0.1％DEA):IPA＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝417.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.73-12.49(m,1H),10.82-10.77(m,1H),9.42(s,1H),8.52(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.35(s,1H),7.61-7.35(m,2H),6.96(d,J＝6.1Hz,1H),6.32(s,2H),6.06-5.97(m,1H),2.42-2.29(m,2H),2.22(s,3H),1.73(s,1H),1.29(d,J＝6.1Hz,3H)。化合物331：(36.7mg，0.088mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.917分钟(修复的手性IC.0.46*10cm；5μm；MtBE(0.1％DEA):IPA＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝417.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.77-12.59(m,1H),10.82(s,1H),9.43(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.33(s,1H),7.66-7.40(m,2H),6.94(d,J＝6.0Hz,1H),6.32(s,2H),6.14-6.01(m,1H),2.49-2.24(m,3H),2.22(s,2H),1.70-1.64(m,1H),1.1-0.9(m,3H)。化合物330：(17.8mg，0.043mmol)，其为黄色固体。保留时间：3.720分钟(修复的手性IC.0.46*10cm；5μm；MtBE(0.1％DEA):IPA＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝417.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.73-12.49(m,1H),10.82-10.77(m,1H),9.42(s,1H),8.52(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.36(s,1H),7.61-7.35(m,2H),7.09-6.82(m,1H),6.32(s,2H),6.15-5.72(m,1H),2.43-2.32(m,2H),2.22(s,3H),1.77-1.69(m,1H),1.28(d,J＝6.0Hz,3H)。化合物329：(37.4mg，0.090mmol)，其为黄色固体。保留时间：6.054分钟(修复的手性IC.0.46*10cm；5μm；MtBE(0.1％DEA):IPA＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝417.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.77-12.58(m,1H),10.82(s,1H),9.43(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.33(s,1H),7.65-7.37(m,2H),6.94(d,J＝6.1Hz,1H),6.32-6.02(m,3H),2.48-2.30(s,2H),2.22(s,3H),1.66(s,1H),1.02(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例213：
(1S,2S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-5-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物335)和
(1R,2R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-5-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物334)
步骤1：(2E)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]丙-2-烯酸乙基酯
将4-碘-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑(7.41g，16.98mmol)、(2E)-3-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)丙-2-烯酸乙基酯(9.60g，42.46mmol)、四(三苯基膦)钯(1.96g，1.69mmol,)、磷酸钾(10.82g，50.97mmol)在1,4-二噁烷(100mL)和水(20mL)中的混合物在100℃搅拌6小时。将反应在真空下浓缩。残余物经硅胶柱使用乙酸乙酯/石油醚(20/80)提纯，得到(2E)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]丙-2-烯酸乙基酯(2g，4.90mmol)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝409。
步骤2：反式-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸乙基酯
在25℃将S,S-二甲基甲烷亚磺酰碘(3.02g，13.72mmol)和t-BuOK(1.54g，13.72mmol)在二甲基亚砜(20mL)中的混合物搅拌30分钟。添加(2E)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]丙-2-烯酸乙基酯(1.4g，3.42mmol)。将所得溶液在25℃搅拌15小时。所得混合物用水稀释并随后用乙酸乙酯萃取。合并有机层，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶柱用二氯甲烷/甲醇(20/1)提纯，得到反式-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸乙基酯(360mg，0.85mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝423。
步骤3：反式-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸
在室温，将反式-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸乙基酯(600mg，1.42mmol)和LiOH(170mg，7.09mmol)在四氢呋喃(10mL)和水(10mL)中的混合物搅拌12小时。反应混合物用氯化氢调节至pH为4-5。所得溶液经二氯甲烷萃取，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到反式-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸(460mg，1.17mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝395。
步骤4：反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酰胺
在0℃，向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(364mg，1.26mmol)、反式-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酸(500mg，1.26mmol)在二氯甲烷(20mL)和吡啶(3mL)中的溶液中添加三氯氧化磷(290mg，1.89mmol)。在0℃，将该混合物搅拌30分钟。将反应在真空下浓缩。残余物经硅胶柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)提纯，得到反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酰胺(300mg，0.45mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝664。
步骤5：反式-N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷]酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯
将反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷-1-甲酰胺(600mg，0.90mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(2.1g，17.92mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(187mg，0.18mmol)、BrettPhos(193mg，0.36mmol)和碳酸铯(1.17g，3.59mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在90℃搅拌5小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到反式-N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷]酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(300mg，0.40mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝745。
步骤6：(1S,2S)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-5-基)环丙烷-1-甲酰胺和(1R,2R)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-5-基)环丙烷-1-甲酰胺
在室温，将反式-N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]环丙烷]酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.26mmol)在三氟乙酸(5mL)中的溶液搅拌12小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％碳酸氢钠)，得到外消旋产物(40mg,0.09mmol)，其为黄色固体。该外消旋物经手性-HPLC分离，得到两种异构体：
(对于每种异构体的环丙烷立体化学：咪唑相对于酰胺是反式的；任意指定所有绝对立体化学)化合物335：保留时间：3.38分钟(CHIRALPAK ID-3,0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；1ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝403；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.27(s,1H),8.45(d,J＝4.0Hz,1H),8.39(s,1H),8.32(s,1H),7.57(s,1H),7.42(d,J＝4.0Hz,1H),6.98(d,J＝4.0Hz,1H),6.92(s,1H),2.51-2.46(m,1H),2.29(s,3H),2.19-2.18(m,1H),1.57-1.52(m,1H),1.41-1.38(m,1H)。化合物334：保留时间：5.68分钟(CHIRALPAK ID-3,0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；1ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝403；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.27(s,1H),8.45(d,J＝4.0Hz,1H),8.39(s,1H),8.32(s,1H),7.57(s,1H),7.42(d,J＝4.0Hz,1H),6.98(d,J＝4.0Hz,1H),6.92(s,1H),2.51-2.46(m,1H),2.29(s,3H),2.19-2.18(m,1H),1.57-1.52(m,1H),1.41-1.38(m,1H)。
实施例214：
(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物340)、(1S,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物339)、(1R,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物338)和(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物337)
步骤1：1-(2,2-二氟乙基)-4-碘-1H-吡唑
在室温，将4-碘-1H-吡唑(3g，15.47mmol)、2-溴-1,1-二氟乙烷(2.7g，18.63mmol)、碳酸钾(4.3g，31.11mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的混合物搅拌12小时。在真空下浓缩所得混合物。将残余物施用在硅胶柱上，使用乙酸乙酯/石油醚(20/80)，得到1-(2,2-二氟乙基)-4-碘-1H-吡唑(3.3g，12.74mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝259。
步骤2：(E)-3-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)丙烯酸叔丁基酯
将1-(2,2-二氟乙基)-4-碘-1H-吡唑(3.3g，12.79mmol)、丙-2-烯酸叔丁基酯(4.9g，38.23mmol)、乙酸钯(430mg，1.92mmol),三-邻甲苯基膦(778mg，2.56mmol)、三乙胺(1.94g，19.172mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的混合物在120℃搅拌12小时。所得溶液经乙酸乙酯稀释，并随后用水洗涤。合并有机层，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(60/40)洗脱，得到(2E)-3-[1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基]丙-2-烯酸叔丁基酯(2.37g，9.15mmol)，其为浅黄色固体。LC/MS(ESI)[M+H]+＝259。
步骤3：2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酸叔丁基酯
在室温，将(2E)-3-[1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基]丙-2-烯酸叔丁基酯(2.9g，11.23mmol)、乙二醇二甲基醚(150mL,1.55mol)、二异丙基氨基锂(19.6mL,365.93mmol)和乙基二苯基锍三氟硼烷氟化物(10.2g，33.76mmol)在二氯甲烷(20mL)中的混合物搅拌5小时。随后将反应用水淬灭。所得溶液经二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(7/3)洗脱，得到2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酸叔丁基酯(1.9g，6.62mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝287。
步骤4：2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酸
在室温，将2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酸叔丁基酯(1.9g，6.64mmol)在三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(20mL)中的混合物搅拌3小时。在真空下浓缩所得混合物。该粗产物经制备型HPLC使用以下条件提纯(C18硅胶；CH3CN/H2O＝5％/95％增至CH3CN/H2O＝40％/60％，在30分钟内)，得到2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酸(1.13g，4.89mmol)，其为紫色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝231。
步骤5：N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺
在室温，将2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酸(1.1g，4.78mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(1.4g，4.87mmol)、三氯氧化磷(1.5g，9.78mmol)、吡啶(5mL,62.118mmol)在二氯甲烷(50mL)中的混合物搅拌30分钟。随后将反应用水淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(8/2)洗脱，得到N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(1.48g，2.96mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝500。
步骤6：3-(2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰氨基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
将N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(1.4g，2.80mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(9.85g，84.08mmol)、BrettPhos(302mg，0.56mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(581mg，0.56mmol)、碳酸铯(3.66g，11.23mmol)在1,4-二噁烷(120mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(8/2)洗脱，得到N-(3-[[2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(1.44g，2.48mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝581。
步骤7：(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺、(1S,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺、(1R,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺和(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺
在25℃，将N-(3-[[2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(1.4g，2.41mmol)、HCl/二噁烷(30mL,354.12mmol)在甲醇(10mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(C18硅胶；0.5％在水中的碳酸氢钠:ACN＝37％-45％，在7分钟内)，得到混合物(550mg，1.15mmol)。经手性-HPLC分离混合物，得到4种异构体(对于每种异构体的环丙烷立体化学：吡唑相对于酰胺是反式的；任意指定甲基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物340：(46.5mg，0.097mmol)，其为黄色固体。保留时间：1.65分钟(Lux 5u Cellulose-3.4.6*250mm,5μm；MeOH(0.1％DEA)；4.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝481.2；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),9.42(s,1H),8.52(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.35(s,1H),7.63(s,1H),7.45-7.34(m,2H),6.95(d,J＝6.1Hz,1H),6.50-6.13(m,3H),4.55(td,J＝15.1,3.8Hz,2H),2.31-2.22(m,5H),1.66-1.51(m,1H),1.28(d,J＝6.2Hz,3H)。化合物339：(163.3mg，0.34mmol)，其为黄色固体。保留时间：1.86分钟(Lux 5uCellulose-3.4.6*250mm,5μm；MeOH(0.1％DEA)；4.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝481.3；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.77(s,1H),9.43(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.32(s,1H),7.64(s,1H),7.46-7.36(m,2H),6.93(d,J＝6.1Hz,1H),6.52-6.16(m,3H),4.60(td,J＝15.2,3.8Hz,2H),2.37-2.30(m,1H),2.22(s,3H),2.15(t,J＝4.7Hz,1H)1.70-1.55(m,1H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H)。化合物338：(173.9mg，0.36mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.23分钟(Lux 5u Cellulose-3.4.6*250mm,5μm；MeOH(0.1％DEA)；4.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝481.3；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.77(s,1H),9.43(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.32(s,1H),7.64(s,1H),7.46-7.36(m,2H),6.93(d,J＝6.1Hz,1H),6.52-6.16(m,3H),4.60(td,J＝15.2,3.8Hz,2H),2.37-2.30(m,1H),2.22(s,3H),2.15(t,J＝4.7Hz,1H)1.69-1.56(m,1H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H)。化合物337：(66.3mg，0.14mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.91分钟(Lux 5u Cellulose-3.4.6*250mm,5μm；MeOH(0.1％DEA)；4.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝481.3；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),9.42(s,1H),8.52(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.35(s,1H),7.63(s,1H),7.45-7.34(m,2H),6.95(d,J＝6.1Hz,1H),6.51-6.13(m,3H),4.55(td,J＝15.2,3.8Hz,2H),2.31-2.15(m,5H),1.66-1.52(m,1H),1.28(d,J＝6.2Hz,3H)。
实施例215：
(1R,2S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-((二甲基氨基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物342)和
(1S,2R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-((二甲基氨基)甲基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物341)
步骤1：3-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮
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将3-氧杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(390mg，3.48mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(500mg，1.73mmol)、4-二甲基氨基吡啶(425mg，3.47mmol)在二噁烷(10mL)中的混合物在120℃搅拌12小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经硅胶柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)提纯，得到3-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(450mg，1.18mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝382。
步骤2：顺式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(羟基甲基)环丙烷-1-甲酰胺
向3-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(450mg，1.17mmol)在IPA(20mL)和水(2mL)中的溶液中添加NaBH4(224mg，5.92mmol)。在室温，将该混合物搅拌1小时。所得溶液经乙酸乙酯萃取，并合并有机层，并在真空下浓缩。残余物经硅胶柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)提纯，得到顺式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(羟基甲基)环丙烷-1-甲酰胺(300mg，0.78mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝386。
步骤3：顺式-甲磺酸[2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酰基]环丙基]甲基酯
在0℃，向顺式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(羟基甲基)环丙烷-1-甲酰胺(300mg，0.77mmol)、三乙胺(236mg，2.33mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加甲磺酰氯(177mg，1.54mmol)。随后在室温搅拌混合物1小时。所得混合物用水洗涤。所得溶液在真空下浓缩，得到顺式-甲磺酸[2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酰基]环丙基]甲基酯(300mg,0.64mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝464。
步骤4：顺式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷-1-甲酰胺
在室温，将顺式-甲磺酸[2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酰基]环丙基]甲基酯(300mg，0.64mmol)、二甲胺(292mg，6.47mmol)在四氢呋喃(5mL)中的混合物搅拌12小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经硅胶柱用二氯甲烷/甲醇(3/1)提纯，得到顺式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷-1-甲酰胺(250mg，0.60mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝413。
步骤5：顺式-N-(3-[[2-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
使用顺式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷-1-甲酰胺，以类似于对实施例135(化合物36)所述的方式制备标题化合物。LCMS(ESI)[M+H]+＝494。
步骤6：(1R,2S)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷-1-甲酰胺和(1S,2R)-N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷-1-甲酰胺
使用顺式-N-(3-[[2-[(二甲基氨基)甲基]环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯，以类似于对实施例135(化合物36)所述的方式制备标题化合物(外消旋)。该外消旋物经手性-HPLC分离，得到两种异构体(对于每种异构体的环丙烷立体化学：二甲基氨基甲基相对于酰胺是反式的；任意指定绝对立体化学)：化合物342：保留时间：1.44分钟(Lux Cellulose-4,0.46*5cm；3μm；Hex(8mMNH3):EtOH＝50:50；1ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝394；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.31(s,1H),8.48(d,J＝4.0Hz,1H),8.41(s,1H),8.34(s,1H),7.45(d,J＝4.0Hz,1H),7.00(d,J＝8.0Hz,1H),3.05-3.03(m,2H),2.57(s,6H),2.31(s,3H),2.21-2.15(m,1H),1.62-1.56(m,1H),1.30-1.25(m,1H),1.18-1.10(m,1H)。化合物341：保留时间：2.87分钟(Lux Cellulose-4,0.46*5cm；3μm；Hex(8mMNH3):EtOH＝50:50；1ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝394；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.31(s,1H),8.48(d,J＝4.0Hz,1H),8.41(s,1H),8.34(s,1H),7.45(d,J＝4.0Hz,1H),7.00(d,J＝8.0Hz,1H),3.05-3.03(m,2H),2.57(s,6H),2.31(s,3H),2.21-2.15(m,1H),1.62-1.56(m,1H),1.30-1.25(m,1H),1.18-1.10(m,1H)。
实施例216：
(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺(化合物381)、
(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺(化合物380)、
(1S,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺(化合物379)和
(1R,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺(化合物382)
步骤1：甲磺酸2-(4-(2-(8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基甲酰基)-3-甲基环丙基)-1H-吡唑-1-基)乙基酯
在室温，将N-(7-氟-3-[[2-[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(670mg，1.20mmol)、三乙胺(604mg，5.97mmol)、甲磺酰氯(273mg，2.38mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物搅拌1小时。所得溶液经二氯甲烷稀释。所得混合物用水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到甲磺酸2-(4-((2-(8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基甲酰基)-3-甲基环丙基)-1H-吡唑-1-基)乙基酯(800mg，1.25mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝639。
步骤2：7-氟-3-(2-(1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
将甲磺酸2-(4-(2-(8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基甲酰基)-3-甲基环丙基)-1H-吡唑-1-基)乙基酯(700mg，1.10mmol)、氮杂环丁-3-醇(320mg，4.38mmol)、三乙胺(332mg，3.28mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物在60℃搅拌12小时。所得溶液经乙酸乙酯稀释并随后用水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(4/1)洗脱，得到7-氟-3-(2-(1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯(180mg，0.29mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝616。
步骤3：(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺、(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺、(1S,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺和(1R,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺
在室温，将N-(7-氟-3-[[2-[1-[2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(180mg，0.29mmol)在甲醇(3mL)和HCl/二噁烷(10mL,6mol/L)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(C18硅胶；0.5％在水中的NH4HCO3：ACN＝2％-50％，在8分钟内)，得到混合物。经手性-HPLC分离混合物，得到4种异构体(对于每种异构体的环丙烷立体化学：吡唑相对于酰胺是反式的；任意指定甲基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物381：(11.1mg，0.022mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.342分钟(CHIRALPAK IC-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝80:20；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝516.4；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),9.42(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.35(s,1H),7.54(s,1H),7.40(d,J＝5.1Hz,1H),7.24(s,1H),6.95(d,J＝6.1Hz,1H),6.30(s,2H),5.24(d,J＝6.6Hz,1H),4.21-4.05(m,1H),4.01-3.83(m,2H),3.51-3.38(m,2H),2.78-2.69(m,2H),2.68-2.60(m,2H),2.28-2.19(m,4H),2.18-2.09(m,1H),1.67-1.51(m,1H),1.28(d,J＝6.2Hz,3H)。化合物380：(11.7mg，0.023mmol)，其为黄色固体。保留时间：3.412分钟(CHIRALPAK IC-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝80:20；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝516.4；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),9.42(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.35(s,1H),7.54(s,1H),7.40(d,J＝5.0Hz,1H),7.24(s,1H),6.95(d,J＝6.2Hz,1H),6.30(s,2H),5.31-5.11(m,1H),4.19-4.01(m,1H),3.95(t,J＝6.2Hz,2H),3.50-3.39(m,2H),2.76-2.61(m,4H),2.22(s,4H),2.19-2.12(m,1H),1.67-1.51(m,1H),1.28(d,J＝6.2Hz,3H)。化合物379：(22.0mg，0.043mmol)，其为黄色固体。保留时间：9.180分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝75:25；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝516.4；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),9.44(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.32(s,1H),7.55(s,1H),7.40(d,J＝5.0Hz,1H),7.30(s,1H),6.93(d,J＝6.1Hz,1H),6.31(s,2H),5.23(d,J＝6.6Hz,1H),4.19-4.08(m,1H),4.01(t,J＝6.2Hz,2H),3.49-3.37(m,2H),2.74(t,J＝6.2Hz,2H),2.69-2.61(m,2H),2.37-2.24(m,1H),2.22(s,3H),2.12(t,J＝4.7Hz,1H),1.67-1.53(m,1H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H)。化合物382：(18.5mg，0.036mmol)，其为黄色固体。保留时间：11.776分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝75:25；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝516.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),9.43(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.32(s,1H),7.55(s,1H),7.40(d,J＝5.1Hz,1H),7.30(s,1H),6.93(d,J＝6.1Hz,1H),6.31(s,2H),5.23(d,J＝6.6Hz,1H),4.19-4.08(m,1H),4.01(t,J＝6.2Hz,2H),3.46-3.37(m,2H),2.75(t,J＝6.2Hz,2H),2.69-2.61(m,2H),2.34-2.27(m,1H),2.22(s,3H),2.12(t,J＝4.7Hz,1H),1.67-1.53(m,1H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例217：
2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-6-甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物230)
步骤1：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(100mg，0.35mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中添加2-溴-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(110mg，0.45mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(72mg，0.07mmol)、Xantphos(80mg，0.14mmol)和碳酸铯(290mg，0.89mmol)。将所得混合物在110℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(15/1)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(45mg，29％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝451.2。
步骤2：N-[7-氟-3-([6-甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯/>
向2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(500mg，1.11mmol)在1,4-二噁烷(45mL)中的混合物添加氨基甲酸叔丁基酯(3.25g，27.74mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(175mg，0.17mmol)、BrettPhos(125mg，0.23mmol)和碳酸铯(1.8g，5.525mmol)。将所得混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-[7-氟-3-([6-甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(350mg，59％)，其为黄色固体。LCMS45(ESI)[M+H]+＝532.3。
步骤3：2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
在室温，将N-[7-氟-3-([6-甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(350mg，0.66mmol)和二氯甲烷(5mL)在三氟乙酸(10mL)中的溶液搅拌1.5小时。在真空下浓缩所得混合物。用甲醇中的NH3(7M)将溶液的pH值调节至10。该粗产物直接经制备型HPLC提纯(XBridge Prep C18OBD柱，19*15mm 5um；10mmol在水中的NH4HCO3：ACN(20％～40％，在8分钟内))，得到2-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(90mg，32％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝432.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),9.11(s,1H),8.51(s,1H),8.43(s,1H),7.74(s,1H),7.39(d,J＝7.2Hz,1H),6.78(d,J＝7.2Hz,1H),6.13(s,2H),5.98(s,1H),4.97(s,2H),3.84-3.81(m,2H),3.05-3.03(m,2H),2.95(s,3H),2.22(s,3H)。
实施例218：
N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氮杂双环[2.1.1]己烷-2-甲酰胺(化合物336)
步骤1：8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基甲酸4-硝基苯基酯
在室温，将8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(500mg，1.74mmol)、吡啶(1mL,12.424mmol)、氯甲酸4-硝基苯基酯(1.05g，5.21mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物搅拌2小时。通过过滤收集固体，得到N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酸4-硝基苯基酯(800mg，1.77mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝453。
步骤2：N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氮杂-双环[2.1.1]己烷-2-甲酰胺
将2-氮杂双环[2.1.1]己烷(658mg，7.92mmol)、吡啶(2mL)、N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基甲酸4-硝基苯基酯(500mg，1.10mmol)在1-甲基-2-吡咯烷酮(10mL)中的混合物在30℃搅拌1小时。所得溶液经乙酸乙酯稀释，并随后用水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶柱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-氮杂双环[2.1.1]己烷-2-甲酰胺(400mg，1.01mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝397。
步骤3：3-(2-氮杂-双环[2.1.1]己烷-2-甲酰氨基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
将N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-氮杂双环[2.1.1]己烷-2-甲酰胺(900mg，2.27mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(7.98g，68.12mmol)、BrettPhos(244mg，0.46mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(470mg，0.45mmol)和碳酸铯(2.96g，9.09mmol)在1,4-二噁烷(100mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶柱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到N-[3-[([2-氮杂双环[2.1.1]己-2-基]羰基)氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(110mg，0.23mmol)，其为紫色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝478。
步骤4：N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氮杂-双环[2.1.1]己烷-2-甲酰胺
在室温，将N-[3-[([2-氮杂双环[2.1.1]己-2-基]羰基)氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.21mmol)在甲醇(2mL)和HCl/二噁烷(10mL,6mol/L)中的混合物搅拌3小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD,19×150mm 5um；水(10mmol/L NH4HCO3)：CH3CN＝0％-45％ B，在14分钟内)，得到N-[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-氮杂双环[2.1.1]己烷-2-甲酰胺(45.9mg，0.12mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝378.2；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.39(s,1H),9.01(s,1H),8.53(d,J＝5.3Hz,1H),8.46(s,1H),8.13(s,1H),7.43(d,J＝4.7Hz,1H),6.88(d,J＝6.4Hz,1H),6.26(s,2H),4.65(d,J＝7.0Hz,1H),3.46-3.39(m,2H),2.88(s,1H),2.24(s,3H),1.94(s,2H),1.37-1.28(m,2H)。
实施例219：
(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物349)、
(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物348)、
(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物347)和(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物346)
步骤1：甲磺酸2-(4-(2-(8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基氨基甲酰基)-3-甲基环丙基)-1H-吡唑-1-基)乙基酯
在室温，将N-(7-氟-3-[[2-[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.36mmol)、三乙胺(72mg，0.71mmol)、甲磺酰氯(61mg，0.53mmol)在二氯甲烷(5mL)中的混合物搅拌30分钟。所得混合物经二氯甲烷稀释，然后用水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到N-(7-氟-3-[[2-[1-[2-(甲磺酰基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(240mg，0.38mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝639。
步骤2：7-氟-3-(2-甲基-3-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
将N-(7-氟-3-[[2-[1-[2-(甲磺酰基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(600mg，0.94mmol)、吗啉(409mg，4.70mmol)和碳酸钾(260mg，1.88mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物在70℃搅拌12小时。所得溶液用水稀释并随后用乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶柱提纯，用二氯甲烷/甲醇(9/1)洗脱，得到N-(7-氟-3-[[2-甲基-3-[1-[2-(吗啉-4-基)乙基]-1H-吡唑-4-基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(288mg，0.46mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝630。
步骤3：(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺、(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺、(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺和(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺
在室温，将N-(7-氟-3-[[2-甲基-3-[1-[2-(吗啉-4-基)乙基]-1H-吡唑-4-基]环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(280mg，0.45mmol)、甲醇(4mL)和HCl/1,4-二噁烷(10mL,6mol/L)中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(C18硅胶；0.5％在水中的NH4HCO3：ACN＝30％-58％，在8分钟内)，得到混合物。经手性-HPLC分离混合物，得到4种异构体(对于异构体的环丙烷立体化学：吡唑相对于酰胺是反式的；任意指定甲基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物349：(19.1mg，0.036mmol)，其为黄色固体。保留时间：3.550分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝530.4；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),9.42(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.35(s,1H),7.59(s,1H),7.40(d,J＝5.0Hz,1H),7.26(s,1H),6.95(d,J＝6.2Hz,1H),6.30(s,2H),4.14(t,J＝6.7Hz,2H),3.56(t,J＝4.6Hz,4H),2.66(t,J＝4.0Hz,2H),2.39(s,4H),2.27-2.14(m,5H),1.64-1.48(m,1H),1.28(d,J＝6.1Hz,3H)。化合物348：(29.2mg，0.055mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.801分钟(CHIRALPAK IC-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝80:20；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝530.4；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),9.44(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.32(s,1H),7.59(s,1H),7.40(d,J＝5.1Hz,1H),7.31(s,1H),6.93(d,J＝6.1Hz,1H),6.30(s,2H),4.18(t,J＝6.6Hz,2H),3.55(t,J＝4.6Hz,4H),2.68(t,J＝6.6Hz,2H),2.41-2.36(m,4H),2.35-2.29(m,1H),2.22(s,3H),2.12(t,J＝4.7Hz,1H),1.69-2.51(m,1H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H)。化合物347：(16.7mg，0.032mmol)，其为黄色固体。保留时间：3.608分钟(CHIRALPAK IC-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝80:20；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝530.4；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),9.42(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.35(s,1H),7.59(s,1H),7.44-7.37(m,1H),7.26(d,J＝0.8Hz,1H),6.95(d,J＝6.1Hz,1H),6.30(s,2H),4.14(t,J＝6.7Hz,2H),3.56(t,J＝4.6Hz,4H),2.66(t,J＝6.6Hz,2H),2.43-2.36(m,4H),2.27-2.13(m,5H),1.66-1.48(m,1H),1.28(d,J＝6.1Hz,3H)。化合物346：(33.1mg，0.063mmol)，其为黄色固体。保留时间：6.022分钟(CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝530.4；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),9.43(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.32(s,1H),7.59(s,1H),7.40(d,J＝5.1Hz,1H),7.31(s,1H),6.93(d,J＝6.1Hz,1H),6.31(s,2H),4.19(t,J＝6.6Hz,2H),3.55(t,J＝4.5Hz,4H),2.68(s,2H),2.38(s,4H),2.34-2.28(m,1H),2.22(s,3H),2.12(t,J＝4.7Hz,1H),1.67-1.53(m,1H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例220：
(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物351)、(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物353)、(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物352)和(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物350)
步骤1：5-溴-4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)吡啶
向2,5-二溴-4-甲基吡啶(584mg，2.32mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的溶液中添加2-(三丁基锡烷基)-1,3-噁唑(1.00g，2.79mmol)和四(三苯基膦)钯(268.95mg，0.23mmol)。将反应在90℃搅拌16小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到5-溴-4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)吡啶(470mg，84％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝439.1。
步骤2：4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶
向5-溴-4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)吡啶(470mg，1.96mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的溶液中添加4,4,5,5-四甲基-2-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(4.99g，19.65mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(143.85mg，0.19mmol)和乙酸钾(482.36mg，4.91mmol)。将反应在90℃搅拌16小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(1/4)洗脱，得到4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(330mg，59％)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝287.1。
步骤3：N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
向N-(8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(380mg，0.78mmol)在1,4-二噁烷(16mL)中的溶液中添加4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(448.66mg，1.56mmol)、碳酸钾(325.06mg，2.35mmol)、X-Phos(37.37mg，0.07mmol)、XPhos-PdCl-2nd G(59.57mg，0.07mmol)和水(3.2mL)。将反应在90℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(25/1)洗脱，得到反式-N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(210mg，52％)，其为橙色油状物。LCMS(ESI)：[M+H]+＝517.2。
步骤4：(7-氟-3-(2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基)-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
向N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(210mg，0.40mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中添加氨基甲酸叔丁基酯(1.19g，10.15mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(63.07mg，0.06mmol)、BrettPhos(43.61mg，0.08mmol)和碳酸铯(661.78mg，2.03mmol)。将所得混合物在90℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(25/1)洗脱，得到反式-(7-氟-3-(2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基)-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(140mg，58％)，其为橙色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝598.3。
步骤5：(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺、(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺、(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺和(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
向反式-(7-氟-3-(2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基)-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(310mg，0.51mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中添加三氟乙酸(15mL)。在室温，搅拌所得溶液1小时。用甲醇中的氨(7mol/L)将溶液的pH值调节至为8。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经制备型HPLC提纯，得到混合物(120mg，46％)，其为黄色固体。混合物经手性-HPLC分离，得到4种异构体(对于每种异构体的环丙烷立体化学：吡唑相对于酰胺是反式的；任意指定甲基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物351：(5.7mg，5％)，其为黄色固体。保留时间：2.261(XBridge Shield RP18OBD柱，5μm,19*150mm；水(0.05％NH3H2O)和ACN(25.0％ ACN达至50.0％，在7分钟内)；LCMS(ESI)[M+H]+＝498.3；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),9.44(s,1H),8.58(s,1H),8.40-8.30(m,2H),8.14(s,1H),7.55-7.45(m,2H),7.25(d,J＝0.9Hz,1H),7.02(d,J＝6.0Hz,1H),6.35(s,2H),3.77(s,3H),2.33(s,3H),2.22(dd,J＝8.9,4.8Hz,1H),2.17-2.11(m,1H),1.57(dt,J＝8.9,6.3Hz,1H),1.28(d,J＝6.1Hz,3H)。化合物353：(5.1mg，4％)，其为黄色固体。保留时间：2.691(XBridge Shield RP18OBD柱，5μm,19*150mm；水(0.05％NH3H2O)和ACN(25.0％ ACN达至50.0％，在7分钟内)；LCMS(ESI)[M+H]+＝498.3；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),9.44(s,1H),8.58(s,1H),8.40-8.30(m,2H),8.14(s,1H),7.58-7.47(m,2H),7.25(d,J＝0.8Hz,1H),7.02(d,J＝6.1Hz,1H),6.36(s,2H),3.77(s,3H),2.33(s,3H),2.22(dd,J＝8.9,4.8Hz,1H),2.18-2.09(m,1H),1.57(dp,J＝8.7,6.2Hz,1H),1.28(d,J＝6.1Hz,3H)。化合物352：(26.5mg，22％)，其为黄色固体；保留时间：7.975(XBridge Shield RP18OBD柱，5μm,19*150mm；水(0.05％NH3H2O)和ACN(25.0％ ACN达至50.0％，在7分钟内)；LCMS(ESI)[M+H]+＝498.3；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.77(s,1H),9.45(s,1H),8.58(s,1H),8.39-8.30(m,2H),8.14(s,1H),7.58-7.47(m,2H),7.30(s,1H),7.00(d,J＝6.1Hz,1H),6.36(s,2H),3.81(s,3H),2.32(s,3H),2.32-2.28(m,1H),2.12(t,J＝4.7Hz,1H),1.60(ddd,J＝9.1,6.4,4.8Hz,1H),0.96(d,J＝6.2Hz,3H)。化合物350：(22.9mg，19％)，其为黄色固体。保留时间：9.196(XBridge Shield RP18OBD柱，5μm,19*150mm；水(0.05％NH3H2O)和ACN(25.0％ ACN达至50.0％，在7分钟内)；LCMS(ESI)[M+H]+＝498.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H),9.45(s,1H),8.58(s,1H),8.39-8.31(m,2H),8.14(s,1H),7.59-7.47(m,2H),7.30(s,1H),7.00(d,J＝6.1Hz,1H),6.36(s,2H),3.81(s,3H),2.32(s,3H),2.30(d,J＝4.6Hz,1H),2.12(t,J＝4.7Hz,1H),1.66-1.54(m,1H),0.96(d,J＝6.2Hz,3H)。
实施例221：
2'-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-6'-甲基-5',6'-二氢螺[环丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-7'(8'H)-酮(化合物228)
步骤1：8'-[[6-(4-氨基吡啶-3-基)-8-氯-7-氟异喹啉-3-基]氨基]-3'-甲基-2',3',4',5'-四氢螺[环丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-4'-酮/>
8'-溴-3'-甲基-2',3',4',5'-四氢螺[环丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-4'-酮(200mg，0.74mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(225mg，0.78mmol)、第三代t-BuBrettPhos预催化剂(266mg，0.31mmol)、t-BuBrettPhos(151mg，0.32mmol)、碳酸铯(1.27g，3.89mmol)在1,4-二噁烷(12mL)中的混合物。所得混合物在120℃搅拌2小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到8'-[[6-(4-氨基吡啶-3-基)-8-氯-7-氟异喹啉-3-基]氨基]-3'-甲基-2',3',4',5'-四氢螺[环丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>]-4'-酮(110mg，31％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝477。
步骤2：N-[7-氟-3-([3'-甲基-4'-氧代-2',3',4',5'-四氢螺[环丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-8'-基]氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯
将8'-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-3'-甲基-2',3',4',5'-四氢螺[环丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-4'-酮(110mg，0.23mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(668mg，5.70mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(48mg，0.046mmol)、碳酸铯(375mg，1.15mmol)、BrettPhos(37mg，0.069mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在90℃搅拌12小时。将混合物过滤并且在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-[7-氟-3-([3'-甲基-4'-氧代-2',3',4',5'-四氢螺[环丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>]-8'-基]氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(80mg，62％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝558。
步骤3：8'-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-3'-甲基-2',3',4',5'-四氢螺[环丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-4'-酮/>
在室温，将N-[7-氟-3-([3'-甲基-4'-氧代-2',3',4',5'-四氢螺[环丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂]-8'-基]氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(60mg，0.11mmol)、氯化氢(2mL)在二氯甲烷(2mL)和甲醇(2mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经制备型HPLC提纯(Kinetex EVO C18柱，30*150,5um；水(10mmol/L NH4HCO3)和ACN(10％至70％，在4.5分钟内))，得到8'-[[8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-3'-甲基-2',3',4',5'-四氢螺[环丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>]-4'-酮(2.9mg，6％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝458；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.27(s,1H),9.02(s,1H),8.51(d,J＝6.0Hz,1H),8.43(s,1H),7.68(s,1H),7.39(d,J＝6.0Hz,1H),6.79(d,J＝6.0Hz,1H),6.11(s,2H),5.61(s,1H),5.06(s,2H),3.73(s,2H),2.99(s,3H),2.22(s,3H),1.24-1.18(m,2H),0.96-094(m,2H)。
实施例222：
(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物357)、
(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物358)、
(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物359)和
(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物360)
/>
步骤1：N-(8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺
在0℃，将8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-胺(280.6mg，0.87mmol)、2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酸(420mg，2.33mmol)、三氯氧化磷(298.4mg，1.95mmol)、吡啶(5mL)、二氯甲烷(15mL)的混合物搅拌5分钟。在室温，搅拌所得溶液30分钟。将反应用水淬灭。所得溶液经二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶柱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(4/6)洗脱，得到(1S,3S)-N-(8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺(1.1g，2.27mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝485。
步骤2：N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[5-(8-氯-7-氟-3-[[(1S,2R,3S)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁基酯
将N-(8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(400mg，0.83mmol)、N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[4-甲基-5-(四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁基酯(720mg，1.66mmol)、四(三苯基膦)钯(190mg，0.16mmol,)、磷酸钾(520mg，2.45mmol)和水(1mL)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在100℃搅拌6小时。将反应冷却至室温，过滤并在真空下浓缩。残余物经硅胶柱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(1/9)洗脱，得到N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[5-(8-氯-7-氟-3-[[2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁基酯(545mg，0.82mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝665。
步骤3：N-[6-(5-[双[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-3-[[(1S,2R,3S)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯
/>
将N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[5-(8-氯-7-氟-3-[[2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]异喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁基酯(1.15g，1.73mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(5.06g，43.19mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(356.5mg，0.34mmol)、Brettphos(373.8mg，0.70mmol)和碳酸铯(2.25g，6.91mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的混合物在110℃搅拌3小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶柱提纯，用二氯甲烷/甲醇(30/1)洗脱，得到N-[6-(5-[双[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-3-[[2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷]酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(1.0g，1.34mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝746。
步骤4：(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺、(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺、(1S,2R,3S)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺和(1R,2S,3R)-N-(8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷甲酰胺
在室温，将N-[8-氨基-6-(5-氨基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟异喹啉-3-基]-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(400mg，0.90mmol)在4M在1,4-二噁烷(50mL)中的HCl中的混合物搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(C18硅胶；0.5％在水中的NH4HCO3：ACN＝5％-50％，在9分钟内)，得到异构体的混合物。经手性-HPLC分离混合物，得到4种异构体(对于异构体的环丙烷立体化学：吡唑相对于酰胺是反式的；任意指定甲基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物357：(11.4mg，0.026mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.794分钟(Lux 3μCellulose-3.100*4.6mm；MeOH(20mMNH3)；4.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝446.3；1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.30(s,1H),8.35(s,1H),8.03(s,1H),7.78(s,1H),7.48(s,1H),7.35(s,1H),6.99(d,J＝6.1Hz,1H),3.86(s,3H),2.34(t,J＝5.7Hz,1H),2.23-2.1(m,1H),2.08(s,3H),1.77-1.52(m,1H),1.37(d,J＝6.2Hz,3H)。化合物358：(101.8mg，0.23mmol)，其为黄色固体。保留时间：3.089分钟(Lux 3μCellulose-3.100*4.6mm；MeOH(20mMNH3)；4.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝446.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),9.41(s,1H),8.29(s,1H),7.99(s,1H),7.66(s,1H),7.54(s,1H),7.29(s,1H),6.85(d,J＝6.1Hz,1H),6.26(s,2H),5.26(s,2H),3.81(s,3H),2.33-2.25(m,1H),2.11(t,J＝4.7Hz,1H),1.92(d,J＝1.5Hz,3H),1.66-1.53(m,1H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H)。化合物359：(91.3mg，0.21mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.505分钟(CHIRALPAK IC-3.100*3mm,3μm；MeOH:ACN＝1:1(10mMNH3)；2.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝446.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),9.41(s,1H),8.29(s,1H),7.99(s,1H),7.66(s,1H),7.54(s,1H),7.29(s,1H),6.85(d,J＝6.1Hz,1H),6.25(s,2H),5.26(s,2H),3.81(s,3H),2.33-2.25(m,1H),2.11(t,J＝4.7Hz,1H),1.92(d,J＝1.6Hz,3H),1.66-1.53(m,1H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H)。化合物360：(17.2mg，0.039mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.084分钟(CHIRALPAK IC-3.100*3mm,3μm；MeOH:ACN＝1:1(10mMNH3)；2.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝446.3；1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ9.30(s,1H),8.35(s,1H),8.03(s,1H),7.77(s,1H),7.48(s,1H),7.35(s,1H),6.99(d,J＝6.2Hz,1H),3.86(s,3H),2.34(t,J＝5.6Hz,1H),2.21-2.12(m,1H),2.08(d,J＝1.5Hz,3H),1.71-1.52(m,1H),1.37(d,J＝6.2Hz,3H)。
实施例223：
(S)-2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物361)和
(R)-2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物362)
步骤1：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将2-溴-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(250mg，0.98mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(282mg，0.98mmol)、第三代t-BuBrettPhos预催化剂(335mg，0.39mmol)、t-BuBrettPhos(189mg，0.39mmol)、碳酸铯(1.6g，4.91mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的溶液在130℃搅拌2小时。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(200mg，44％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝463。
步骤2：N-[7-氟-3-([6-甲基-4-亚甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯
将2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]氨基]-6-甲基-4-亚甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(180mg，0.39mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.14g，9.73mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(81mg，0.078mmol)、碳酸铯(636mg，1.95mmol)、BrettPhos(63mg，0.12mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在90℃搅拌3小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-[7-氟-3-([6-甲基-4-亚甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(160mg，76％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝544。
步骤3：N-[3-([4,6-二甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯
在室温，将N-[7-氟-3-([6-甲基-4-亚甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(140mg，0.26mmol)、钯碳(200mg)在甲醇(10mL)中的混合物在氢气下搅拌1小时。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到N-[3-([4,6-二甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基]氨基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(134mg，95％)，其为浅黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝546。
步骤4：(S)-2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮和(R)-2-((8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基)-4,6-二甲基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7(8H)-酮
在室温，将N-[3-([4,6-二甲基-7-氧代-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基]氨基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(150mg，0.28mmol)、氯化氢(2mL)在二氯甲烷(2mL)中的溶液搅拌1小时。在真空下浓缩所得溶液。该粗产物经制备型HPLC提纯[Kinetex EVO C18柱，30*150,5um；水(10MMOL/L NH4HCO3)和ACN(25％至42％，在7分钟内)]，得到外消旋产物(50mg，41％)，其为黄色固体。外消旋产物经制备型SFC提纯，得到单一对映异构体：化合物362：(5.7mg，11％)，其为黄色固体。保留时间：0.867分钟，手性CEL OJ-3,4.6*50mm,3μm；CO2/甲醇＝(50％)/(0.1％DEA,50％)；LCMS(ESI)[M+H]+＝446；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),9.09(s,1H),8.50(d,J＝6.0Hz,1H),8.43(s,1H),7.72(s,1H),7.39(d,J＝6.0Hz,1H),6.78(d,J＝6.0Hz,1H),6.11(s,2H),6.04(s,1H),5.13-4.81(m,2H),3.99-3.51(m,2H),3.32-3.35(m,1H)2.97(s,3H),2.22(s,3H),1.26(d,J＝7.0Hz,3H)。化合物361：(5.8mg，12％)，其为黄色固体。保留时间：1.268分钟，手性CEL OJ-3,4.6*50mm，3μm；CO2/甲醇＝(50％)/(0.1％DEA,50％)；LCMS(ESI)[M+H]+＝446。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),9.09(s,1H),8.50(d,J＝6.0Hz,1H),8.43(s,1H),7.72(s,1H),7.39(d,J＝6.0Hz,1H),6.78(d,J＝6.0Hz,1H),6.11(s,2H),6.04(s,1H),5.13-4.81(m,2H),3.99-3.51(m,2H),3.32-3.35(m,1H)2.97(s,3H),2.22(s,3H),1.26(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例224：
(1S,2S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-吡唑-5-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物363)和
(1R,2R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-吡唑-5-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物364)
步骤1：(2Z)-3-(1H-吡唑-5-基)丙-2-烯酸乙基酯
将2-[双(2,2,2-三氟乙氧基)磷酰基]乙酸乙酯(3.04g，9.15mmol)、氢化钠(400mg，16.66mmol)、1H-吡唑-5-甲醛(800mg，8.32mmol)在四氢呋喃(100mL)中的混合物在室温搅拌2小时。将反应用水淬灭。所得混合物经乙酸乙酯萃取，合并有机层并在真空下浓缩。残余物在硅胶柱上经快速色谱提纯，经乙酸乙酯/石油醚(1/3)洗脱，得到(2Z)-3-(1H-吡唑-5-基)丙-2-烯酸乙基酯(500mg，2.99mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝167。
步骤2：(2Z)-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]丙-2-烯酸乙基酯
将(2Z)-3-(1H-吡唑-5-基)丙-2-烯酸乙基酯(530mg，3.18mmol)、3,4-二氢-2H-吡喃(536mg，6.37mmol)、TsOH(27mg，0.15mmol)在乙酸乙酯(20mL)中的混合物在80℃搅拌2小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶柱上经快速色谱提纯，经乙酸乙酯/石油醚(1/10)洗脱，得到(2Z)-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]丙-2-烯酸乙基酯(600mg，2.39mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝251。
步骤3：反式-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]环丙烷-1-甲酸乙基酯
将三甲基(氧代)-l^[6]-硫烷基碘化物(trimethyl(oxo)-l^[6]-sulfanyliumiodide)(3.52g，15.99mmol)、t-BuOK(1.792g，15.97mmol)、(2Z)-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]丙-2-烯酸乙基酯(2g，7.99mmol)在DMSO(20mL)中的混合物在室温搅拌2小时。所得溶液用水稀释。所得溶液经乙酸乙酯萃取，并合并有机层，在真空下浓缩。残余物在硅胶柱上经快速色谱提纯，经乙酸乙酯/石油醚(1/10)洗脱，得到反式-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]环丙烷-1-甲酸乙基酯(400mg，1.52mmol)，其为无色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝265。
步骤4：反式-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]环丙烷-1-甲酸
在室温，将反式-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]环丙烷-1-甲酸乙基酯(400mg，1.51mmol)、氢氧化锂(180mg，7.51mmol)在四氢呋喃(10mL)和水(10mL)中的混合物搅拌5小时。反应混合物用氯化氢调节至pH为4。所得溶液经乙酸乙酯萃取，合并有机层并在真空下浓缩，得到反式-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]环丙烷-1-甲酸(300mg，1.27mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝237。
步骤5：反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]环丙烷-1-甲酰胺
将反式-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]环丙烷-1-甲酸(350mg，1.48mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(426mg，1.48mmol)在吡啶(1mL)和二氯甲烷(10mL)中的混合物添加三氯氧化磷(450mg，2.93mmol)。所得溶液在室温搅拌2小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶柱上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(95/5)洗脱，得到反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]环丙烷-1-甲酰胺(300mg，0.59mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝506。
步骤5：反式-N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]环丙烷]酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯
在氮气下，将氨基甲酸叔丁基酯(1.67g，14.25mmol)、反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]环丙烷-1-甲酰胺(360mg，0.71mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(150mg，0.14mmol)、BrettPhos(153mg，0.28mmol)、碳酸铯(930mg，2.85mmol)在二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌12小时。滤出固体。在真空下浓缩所得混合物。用二氯甲烷/甲醇(10/1)将残余物施用于硅胶柱上，得到反式-N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]环丙烷]酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.34mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝587。
步骤6：(1S,2S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-吡唑-5-基)环丙烷-1-甲酰胺和(1R,2R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1H-吡唑-5-基)环丙烷-1-甲酰胺
在室温，将反式-N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]环丙烷]酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.34mmol)在三氟乙酸(5mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经反相色谱提纯(在水中的乙腈0-50/0.1％ NH4HCO3)，得到外消旋产物(70mg，0.17mmol)，其为白色固体。该外消旋产物经手性-HPLC分离，得到两种异构体(环丙烷立体化学：吡唑相对于酰胺是反式的)：化合物364：保留时间：1.69分钟(Lux Cellulose-4,0.46*5cm；3μm；Hex(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝402；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.29(s,1H),8.47(d,J＝5.2Hz,1H),8.42(s,1H),8.35(s,1H),7.58-7.56(m,1H),7.44(d,J＝5.2Hz,1H),7.00(d,J＝6Hz,1H),6.18-6.16(m,1H),2.60-2.59(m,1H),2.31(s,3H),2.29-2.25(m,1H),1.64-1.61(m,1H),1.44-1.42(m,1H)；化合物363：保留时间：3.07分钟(Lux Cellulose-4,0.46*5cm；3μm；Hex(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝402；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ9.29(s,1H),8.47(d,J＝5.2Hz,1H),8.42(s,1H),8.35(s,1H),7.58-7.56(m,1H),7.44(d,J＝5.2Hz,1H),7.00(d,J＝6Hz,1H),6.18-6.16(m,1H),2.60-2.59(m,1H),2.31(s,3H),2.29-2.25(m,1H),1.64-1.61(m,1H),1.44-1.42(m,1H)。
实施例225：
(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物368)、(1S,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物367)、(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物366)和(1R,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物365)
步骤1：1-(2-(苄基氧基)乙基)-4-碘-1H-吡唑
在室温，将4-碘-1H-吡唑(10g，51.55mmol)、(2-溴乙氧基)甲基]苯(13.24g，61.54mmol)、碳酸钾(14.23g，102.94mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中的混合物搅拌2小时。所得溶液经乙酸乙酯稀释。所得混合物用水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶柱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱，得到1-[2-(苄基氧基)乙基]-4-碘-1H-吡唑(20g，60.79mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝329。
步骤2：(E)-3-(1-(2-(苄基氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)丙烯酸叔丁基酯
将1-[2-(苄基氧基)乙基]-4-碘-1H-吡唑(22g，67.04mmol)、丙-2-烯酸叔丁基酯(25.76g，200.95mmol)、乙酸钯(2.25g，10.04mmol)、三-邻甲苯基膦(12.23g，40.18mmol)和三乙胺(10.16g，100.43mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(150mL)中的混合物在110℃搅拌12小时。所得溶液经乙酸乙酯稀释并随后用水洗涤并浓缩。残余物经硅胶柱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(4/6)洗脱，得到(2E)-3-[1-[2-(苄基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基]丙-2-烯酸叔丁基酯(13.8g，41.95mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝329。
步骤3：(1S,2S)-2-(1-(2-(苄基氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酸叔丁基酯
在-78℃，将LDA(19mL,45.67mmol)添加至(2E)-3-[1-[2-(苄基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基]丙-2-烯酸叔丁基酯(5g，15.23mmol)和乙二醇二甲醚(100mL)的混合物。在此温度搅拌溶液1小时。随后在-78℃添加乙基二苯基锍三氟硼烷氟化物(13.8g，45.67mmol)，并在室温搅拌5小时。将反应通过添加水淬灭。所得混合物经二氯甲烷萃取。有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶柱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(7/3)洗脱，得到2-[1-[2-(苄基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酸叔丁基酯(4g，11.20mmol)，其为红色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝357。
步骤4：2-(1-(2-(苄基氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酸
2-[1-[2-(苄基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酸叔丁基酯(3.9g，10.94mmol)、三氟乙酸(10mL)在二氯甲烷(50mL)中的混合物。在室温，搅拌所得溶液3小时。将所得混合物在真空下浓缩，得到2-[1-[2-(苄基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酸(5g，粗品)，其为紫色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝301。
步骤5：2-(1-(2-(苄基氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺
在室温，将2-[1-[2-(苄基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酸(5.6g，18.65mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(5.36g，18.62mmol)、吡啶(20mL)和三氯氧化磷(5.71g，37.25mmol)在二氯甲烷(100mL,1.57mol)中的混合物搅拌30分钟。随后将反应用水淬灭。所得溶液经二氯甲烷萃取。有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物经硅胶柱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(7/3)洗脱，得到2-[1-[2-(苄基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(6.1g，10.70mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝570。
步骤6：3-((1S,2S)-2-(1-(2-(苄基氧基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰氨基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
将2-[1-[2-(苄基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(6.1g，10.70mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(37.63g，321.21mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(2.22g，2.14mmol)、BrettPhos(1.15g，2.14mmol)和碳酸铯(13.98g，42.91mmol)在1,4-二噁烷(100mL)中的混合物在90℃搅拌5小时。滤出固体。残余物经硅胶柱提纯，用二氯甲烷/甲醇(4/1)洗脱，得到N-(3-[[2-[1-[2-(苄基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(6.8g，10.45mmol)，其为紫色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝651。
步骤7：7-氟-3-(2-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯
将N-(3-[[(1S,2S)-2-[1-[2-(苄基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(1.5g，2.31mmol)、Pd(OH)2/C(646mg，4.60mmol)和甲醇(50mL)的混合物用氢气鼓泡20分钟。在50℃、在氢气下(气球)，搅拌所得溶液12小时。将混合物过滤并浓缩。残余物经硅胶柱提纯，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到N-(7-氟-3-[[2-[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(250mg，0.45mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝561。
步骤8：(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺、(1S,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺、(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺和(1R,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基环丙烷甲酰胺
在室温，将N-(7-氟-3-[[2-[1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.36mmol)在HCl/1,4-二噁烷(10mL)中的混合物搅拌1小时。在真空下浓缩该混合物。该粗产物经制备型HPLC提纯(C18硅胶；0.5％在水中的NH4HCO3：ACN＝20％-50％，在7分钟内)，得到4种异构体的混合物。经手性-HPLC分离混合物，得到4种异构体(对于每种异构体的环丙烷立体化学：吡唑相对于酰胺是反式的；任意指定甲基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物368：(12.1mg，0.026mmol)，其为黄色固体。保留时间：4.112分钟(手性IA.0.46*15cm；5μm；MeOH(0.1％DEA)：二氯甲烷＝80:20；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝461.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),9.42(s,1H),8.52(d,J＝5.0Hz,1H),8.45(s,1H),8.35(s,1H),7.55(s,1H),7.41(d,J＝5.1Hz,1H),7.27(d,J＝0.8Hz,1H),6.95(d,J＝6.1Hz,1H),6.31(s,2H),4.87(s,1H),4.06(t,J＝5.7Hz,2H),3.69(t,J＝5.7Hz,2H),2.22(s,3H),2.28-2.13(m,2H),1.62-1.49(m,1H),1.28(d,J＝6.2Hz,3H)。化合物367：(20.5mg，0.045mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.172分钟(Lux Cellulose-4.0.46*5cm；3μm；Hex(8mMNH3):EtOH＝60:40；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝461.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),9.43(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.43(s,1H),8.32(s,1H),7.57(s,1H),7.40(d,J＝5.1Hz,1H),7.32(s,1H),6.93(d,J＝6.1Hz,1H),6.30(s,2H),4.89(t,J＝5.3Hz,1H),4.10(t,J＝5.7Hz,2H),3.80-3.63(m,2H),2.33-2.27(m,1H),2.22(s,3H),2.13(t,J＝4.7Hz,1H),1.67-1.54(m,1H),0.97(d,J＝6.3Hz,3H)。化合物366：(10.2mg，0.022mmol)，其为黄色固体。保留时间：3.118分钟(Lux Cellulose-4.0.46*5cm；3μm；Hex(8mMNH3):EtOH＝60:40；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝461.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),9.42(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.35(s,1H),7.55(s,1H),7.40(d,J＝5.0Hz,1H),7.27(s,1H),6.95(d,J＝6.1Hz,1H),6.30(s,2H),4.86(t,J＝5.3Hz,1H),4.06(t,J＝5.7Hz,2H),3.80-3.59(m,2H),2.22(s,3H),2.28-2.13(m,2H),1.62-1.50(m,1H),1.28(d,J＝6.2Hz,3H)。化合物365：(25.4mg，0.055mmol)，其为黄色固体。保留时间：7.392分钟(手性IA.0.46*15cm；5μm；MeOH(0.1％DEA):二氯甲烷＝80:20；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝461.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),9.43(s,1H),8.53(d,J＝5.0Hz,1H),8.45(s,1H),8.32(s,1H),7.57(s,1H),7.43(d,J＝5.1Hz,1H),7.32(s,1H),6.93(d,J＝6.1Hz,1H),6.31(s,2H),4.89(s,1H),4.10(t,J＝5.7Hz,2H),3.71(t,J＝5.7Hz,2H),2.39-2.30(m,1H),2.23(s,3H),2.13(t,J＝4.7Hz,1H),1.67-1.54(m,1H),0.97(d,J＝6.2Hz,3H)。
实施例226：
(1R,2R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物356)和
(1S,2S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物355)
步骤1：(2E)-3-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-烯酸叔丁基酯
将4-溴-1-甲基-1H-1,2,3-三唑(5g，30.87mmol)、丙-2-烯酸叔丁基酯(11.9g，92.85mmol)、乙酸钯(1.1g，4.90mmol)、三-邻甲苯基膦(1.9g，6.24mmol)和三乙胺(4.7g，46.45mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL,646.09mmol)中的溶液在110℃搅拌12小时。所得混合物冷却至室温，并随后用水稀释。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在二氧化硅上经快速色谱提纯，经乙酸乙酯/石油醚(3/2)洗脱，得到(2E)-3-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-烯酸叔丁基酯(3.6g,17.23mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝210。
步骤2：反式-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酸叔丁基酯
在室温，向三甲基(氧代)-[6]-硫烷基碘化物(7.6g，34.53mmol)和叔丁醇钾(3.9g，34.76mmol)在二甲基亚砜(80mL)中的溶液中添加(2E)-3-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-烯酸叔丁基酯(3.6g，17.21mmol)12小时。所得溶液用水稀释。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到反式-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酸叔丁基酯(1.3g，粗品)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝224。
步骤3：反式-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酸
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在室温，向反式-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酸叔丁基酯(1.3g，5.82mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三氟乙酸(2mL,26.93mmol)2小时。将所得混合物在真空下浓缩，残余物经反相柱色谱提纯(0.5％在水中的NH4HCO3/CH3CN＝5％-50％，在25分钟内)，得到反式-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酸(223mg,1.34mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝168。
步骤4：反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
在0℃，向反式-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酸(223mg，1.33mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(320mg，1.11mmol)和吡啶(0.5mL,6.21mmol)在二氯甲烷(5mL,78.65mmol)中的溶液中添加三氯氧化磷(258mg，1.68mmol)。所得溶液在室温搅拌30分钟。将反应用水淬灭并随后用二氯甲烷萃取。有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤并在真空下浓缩，得到反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(262mg，0.60mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝437。
步骤5：反式-N-(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(242mg，0.55mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(1.95g，16.65mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(115mg，0.11mmol)、Brettphos(60mg，0.11mmol)和碳酸铯(724mg，2.22mmol)在1,4-二噁烷(12mL)中的混合物在100℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在二氧化硅上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(92/8)洗脱，得到反式-N-(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(120mg，0.23mmol)，其为红色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝518。
步骤6：(1R,2R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺和(1S,2S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
将反式-N-(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.19mmol)在1,4-二噁烷(2.5mL,29.510mmol)和氯化氢(2.5mL,82.280mmol)中的溶液在室温搅拌3小时。在真空下浓缩后，残余物经制备型HPLC提纯(XBridge Prep C18OBD 19*150mm*5um；10mmol在水中的NH4HCO3：CH3CN＝10％-50％，在7分钟内)，得到外消旋产物。外消旋产物经制备型手性-HPLC分离，得到两种异构体(两种异构体的环丙烷立体化学：三唑相对于酰胺是反式的，任意指定所有绝对立体化学)：化合物355：(8.7mg,0.021mmol)，其为黄色固体。保留时间；1.977分钟((CHIRALPAK IC2*25cm,5μm；MeOH(0.1％DEA):二氯甲烷＝70:30)；LCMS(ESI)[M+H]+＝418；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.89(s,1H),9.43(s,1H),8.52(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.33(s,1H),7.93(s,1H),7.44-7.37(m,1H),6.94(d,J＝6.1Hz,1H),6.32(s,2H),4.00(s,3H),2.49-2.40(m,2H),2.22(s,3H),1.50-1.35(m,2H)。化合物356：(10.3mg,0.025mmol)，其为黄色固体。保留时间：2.424分钟，((CHIRALPAK IC2*25cm,5μm；MeOH(0.1％DEA):二氯甲烷＝70:30)；LCMS(ESI)[M+H]+＝418；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.89(s,1H),9.43(s,1H),8.52(d,J＝5.0Hz,1H),8.44(s,1H),8.33(s,1H),7.93(s,1H),7.44-7.37(m,1H),6.94(d,J＝6.1Hz,1H),6.32(s,2H),4.00(s,3H),2.49-2.40(m,2H),2.22(s,3H),1.50-1.35(m,2H)。
实施例227：
(±)-(1S,2R,6R,7S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-羟基双环[4.1.0]庚烷-7-甲酰胺(化合物373和化合物374)和(±)-(1S,2S,6R,7S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-羟基双环[4.1.0]庚烷-7-甲酰胺(外消旋)(化合物371和化合物372)
步骤1：外型-2-氧代双环[4.1.0]庚烷-7-甲酸乙基酯
在0℃，向环己-2-烯-1-酮(4g，41.61mmol)、Ru2(OAc)4(0.91g，2.05mmol)在二氯甲烷(40mL)中的混合物逐滴添加2-(λ4,-二氮炔基)乙酸乙酯(ethyl 2-(lambda4,-diazynyl)acetate)(7.86g，68.28mmol)。将反应在25℃搅拌2小时。然后用水将反应淬灭，用二氯甲烷萃取。有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(1:4)洗脱，得到外型-2-氧代双环[4.1.0]庚烷-7-甲酸乙基酯(2g，0.011mol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝183.2。
步骤2：外型-2-氧代双环[4.1.0]庚烷-7-甲酸
向外型-2-氧代双环[4.1.0]庚烷-7-甲酸乙基酯(2g，10.97mmol)在四氢呋喃(20mL)中的混合物添加在水(5mL)中的LiOH(1.05g，43.84mmol)，在25℃搅拌3小时。用柠檬酸将溶液的pH值调节至5，并随后用二氯甲烷萃取。有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液得到外型-2-氧代双环[4.1.0]庚烷-7-甲酸(1.26g，74％)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝155.2。
步骤3：外型-N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氧代双环[4.1.0]庚烷-7-甲酰胺
在5℃，向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(2.2g，7.64mmol)、外型-2-氧代双环[4.1.0]庚烷-7-甲酸(1.18g，7.654mmol)、吡啶(12mL,206.32mmol)在二氯甲烷(68mL)中的溶液中逐滴添加三氯氧化磷(2.36g，15.39mmol)。将反应在5℃搅拌30分钟。然后用水将反应淬灭，用二氯甲烷萃取。有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到外型-N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-氧代双环[4.1.0]庚烷-7-甲酰胺(2.5g，77％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝424.2。
步骤4：外型-(7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-(2-氧代双环[4.1.0]庚烷-7-甲酰氨基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将外型-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-2-氧代双环[4.1.0]庚烷-7-甲酰胺(1.1g，2.59mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(7.6g，64.87mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(540mg，0.52mmol)、Brettphos(560mg，1.04mmol)、碳酸铯(3.4g，10.43mmol)在1,4-二噁烷(40mL)中的混合物在90℃搅拌2小时。过滤混合物并在真空下浓缩。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-(2-氧代双环[4.1.0]庚烷-7-甲酰氨基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯(800mg，1.59mmol)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝505.3。
步骤5：外型-(7-氟-3-(2-羟基双环[4.1.0]庚烷-7-甲酰氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
在0℃，将N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[(7S)-2-氧代双环[4.1.0]庚烷-7-酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(800mg，1.58mmol)和NaBH4(362mg，9.56mmol)在甲醇(20mL)中的混合物搅拌90分钟。随后将反应用水淬灭，用二氯甲烷萃取。有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到外型-7-氟-3-(2-羟基双环[4.1.0]庚烷-7-甲酰氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基氨基甲酸叔丁基酯(370mg，46％)，其为黄色固体。
步骤6：(1S,2R,6R,7S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-羟基双环[4.1.0]庚烷-7-甲酰胺(外消旋)和(1S,2S,6R,7S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-羟基双环[4.1.0]庚烷-7-甲酰胺(外消旋)
向外型-N-[7-氟-3-(2-羟基双环[4.1.0]庚烷-7-酰氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.39mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液添加HCl(g)/二噁烷(10mL,4M)。将反应在20℃搅拌2小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到两种异构体。混合物在手性HPLC上进一步分离，得到4种单一的立体异构体。所述相对立体化学如表1所绘制；但该立体化学经任意指定)。化合物371：保留时间；2.74分钟((CHIRALPAK OJ-3 4.6x50mm；MeOH(0.1％DEA)；LCMS(ESI)[M+H]+＝407。化合物372：保留时间；1.56分钟((CHIRALPAK OJ-34.6x50mm；MeOH(0.1％DEA)；LCMS(ESI)[M+H]+＝407。化合物373：保留时间；1.25分钟((Cellulose-4,4.6x50mm；MeOH(0.1％DEA)；LCMS(ESI)[M+H]+＝407。化合物374：保留时间；3.03分钟((Chiralcel OJ-3,4.6x50mm；MeOH(0.1％DEA)；LCMS(ESI)[M+H]+＝407。
实施例228：
(±)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物192)和(±)-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物191)
步骤1：N-(3-[[2-[(苄基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将2-[(苄基氧基)甲基]-N-[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(420mg，0.89mmol)、氨基甲酸叔丁基酯(2.61g 22.2mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(184mg，0.178mmol)、Brettphos(191mg，0.36mmol)、碳酸铯(1.16g，3.566mmol)在二噁烷(10mL,118.041mmol)中的混合物在120℃搅拌1.5小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(4/1)洗脱，得到N-(3-[[2-[(苄基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(450mg，92％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝472.2。
步骤2：N-(3-[[2-(羟基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
向N-(3-[[(1S,2S)-2-[(苄基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(350mg，0.63mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中添加Pd(OH)2/C(2.5g，17.80mmol)。在氢气下、在25℃，搅拌所得溶液30分钟。过滤后，所得混合物在真空下浓缩，得到N-(3-[2-(羟基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(200mg，68％)，其为浅绿色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝463.3。
步骤3：甲磺酸(2-((8-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酰基)-3-甲基环丙基)甲基酯
向N-(3-[[2-(羟基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(140mg，0.30mmol)、三乙胺(183mg，1.81mmol)在二氯甲烷(3mL,47.19mmol)中的溶液中滴加MsCl(138mg，1.21mmol)。在25℃搅拌所得溶液30分钟。随后将反应用水淬灭。所得混合物经二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到((1S,2S)-甲磺酸2-((8-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)氨基甲酰基)-3-甲基环丙基)甲基酯(100mg，0.19mmol)，其为黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝541.3。
步骤4：N-(3-[[(1S,2S)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
向N-(3-[[2-(甲磺酰基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.19mmol)在DMSO(3mL,42.24mmol)中的溶液中添加KCN(99.29mg，1.53mmol)。在50℃搅拌所得溶液2小时。用水稀释所得溶液。所得溶液经二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到N-(3-[[(1S,2S)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(70mg，78％)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝472.3。
步骤5：(±)-(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺和(±)-(1S,2S)-N-(8-氨基-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺
将N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(70mg，0.15mmol)在二氯甲烷(1mL,15.73mmol)和三氟乙酸(1mL)中的溶液中在25℃搅拌30分钟。在真空中浓缩所得溶液。该粗产物经制备型HPLC提纯(XBridge Prep Amide OBD柱，19x150mm 5um；水(0.05％NH3H2O)：ACN(20％-55％，在6分钟内)，得到两对对映异构体(环丙烷立体化学：氰基甲基相对于酰胺是反式的；任意指定所有绝对立体化学)：化合物191：其为黄色固体(2.8mg，5％)。LCMS(ESI)[M+H]+＝372.2；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),9.32(s,1H),8.67-8.39(m,2H),8.26(s,1H),7.45(d,J＝5.1Hz,1H),6.81(s,1H),6.55(d,J＝1.5Hz,1H),6.37(s,2H),2.81(dd,J＝17.6,7.3Hz,1H),2.69(dd,J＝17.7,7.7Hz,1H),2.33(s,3H),1.79(t,J＝4.5Hz,1H),1.71-1.57(m,1H),1.52-1.37(m,1H),1.17(d,J＝6.3Hz,3H)。化合物192：其为灰白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝372.2；1HNMR(400MHz,DMSO)δ10.79(s,1H),9.32(s,1H),8.48-8.36(m,2H),8.28(s,1H),7.35(d,J＝5.0Hz,1H),6.92(s,1H),6.55(d,J＝1.5Hz,1H),6.34(s,2H),2.83-2.61(m,2H),2.30(s,3H),2.15-2.03(m,1H),1.58-1.45(m,1H),1.36(dt,J＝9.1,6.1Hz,1H),1.17(d,J＝6.1Hz,3H)。
实施例229：
(±)-顺式-N-(8-氨基-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟异喹啉-3-基)-2-氟环丙烷-1-甲酰胺(化合物152)
步骤1：8-氯-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟异喹啉-3-胺
将8-氯-7-氟-6-碘异喹啉-3-胺(800mg，2.48mmol)、(2,6-二氯苯基)硼酸(1.42g，7.42mmol)、双(三-叔丁基膦)钯(0)(127mg，0.25mmol)和氟化铯(1.13g，7.44mmol)在二噁烷(10mL)和水(1mL)中的混合物在100℃搅拌12小时。在真空下浓缩所得溶液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，经乙酸乙酯/石油醚(1/3)洗脱，得到8-氯-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟异喹啉-3-胺(820mg，2.412mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝341。
步骤2：(±)-顺式-N-[8-氯-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟异喹啉-3-基]-2-氟环丙烷-1-甲酰胺
在0℃，向8-氯-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟异喹啉-3-胺(794mg，2.32mmol)、顺式-2-氟环丙烷-1-甲酸(320mg，3.075mmol)和吡啶(1mL,12.42mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中逐滴添加三氯氧化磷(560mg，3.65mmol)。在室温，将反应混合物搅拌30分钟。随后将反应用水淬灭并随后用二氯甲烷萃取。有机相在无水硫酸钠上干燥，过滤并在真空下浓缩。残余物在二氧化硅上经快速色谱提纯，经乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱，得到顺式-N-[8-氯-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟异喹啉-3-基]-2-氟环丙烷-1-甲酰胺(763mg，1.79mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝427。
步骤3：(±)-反式-(6-(2,6-二氯苯基)-7-氟-3-(2-氟环丙烷-1-甲酰氨基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
将顺式-N-[8-氯-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟异喹啉-3-基]-2-氟环丙烷-1-甲酰胺(300mg，0.70mmo)、氨基甲酸叔丁基酯(2.5g，21.34mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(150mg，0.15mmol)、BrettPhos(75mg，0.14mmol)和碳酸铯(930mg，2.85mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的溶液在90℃搅拌2小时。所得混合物冷却至室温并随后过滤。在真空下浓缩滤液。残余物在二氧化硅上经快速色谱提纯，经乙酸乙酯/石油醚(3/2)洗脱，得到顺式-(6-(2,6-二氯苯基)-7-氟-3-(2-氟环丙烷-1-甲酰氨基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(190mg,0.375mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝508。
步骤4：(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟异喹啉-3-基]-2-氟环丙烷-1-甲酰胺
在25℃，向顺式-N-[6-(2,6-二氯苯基)-7-氟-3-[[2-氟环丙烷]酰氨基]异喹啉-8-基]氨基甲酸叔丁基酯(170mg，0.33mmol)和三氟乙酸(1.6mL,21.541mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中搅拌1小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经制备型HPLC提纯(Atlantis HILIC OBD，19×150mm 5um；水(0.1％FA)：CH3CN(5％-23％)，在7分钟内)，得到(±)-顺式-N-[8-氨基-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟异喹啉-3-基]-2-氟环丙烷-1-甲酰胺(21.6mg，0.053mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝408；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.86(s,1H),9.44(s,1H),8.30(s,1H),7.65(d,J＝8.1Hz,2H),7.54-7.49(m,1H),6.93(d,J＝5.9Hz,1H),6.32(s,2H),5.04-4.83(m,1H),2.31-2.19(m,1H),1.68-1.66(m,1H),1.19-1.17(m,1H)。
实施例230：
2-((6-(1-乙酰基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-8-氨基-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物232)/>
步骤1：1-[4-(3-氨基-7-氯-6-异喹啉基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙酮
向6-溴-7-氯-异喹啉-3-胺(200mg，0.78mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中添加1-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙酮(234.1mg，0.93mmol)、碳酸钾(321.5mg，2.33mmol)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(56.85mg，0.08mmol)。所得悬浮液在90℃搅拌2小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到1-[4-(3-氨基-7-氯-6-异喹啉基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙酮(210mg，0.69mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝319.0。
步骤2：2-[[6-(1-乙酰基-3,6-二氢-2H-吡啶-4-基)-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将1-[4-(3-氨基-8-氯-7-氟-6-异喹啉基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-基]乙酮(200mg，0.66mmol)、2-溴-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(265mg，0.99mmol)、t-BuBrettphos G3(171mg，0.20mmol)、t-BuBrettphos(195mg，0.40mmol)、碳酸铯(645mg，1.98mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物在100℃搅拌8小时。将悬浮液通过硅藻土垫过滤。在真空下浓缩该混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到2-[[6-(1-乙酰基-3,6-二氢-2H-吡啶-4-基)-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(110mg，0.019mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝510。
步骤3：2-[[6-(1-乙酰基-3,6-二氢-2H-吡啶-4-基)-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将2-[[6-(1-乙酰基-3,6-二氢-2H-吡啶-4-基)-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮(100mg，0.20mmol)和氨基甲酸叔丁基酯(340mg，2.93mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯-氯仿加合物(30mg，0.04mmol)、Brettphos(40.0mg，0.07mmol)、碳酸铯(180mg，0.55mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在90℃搅拌1小时。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到2-[[6-(1-乙酰基-3,6-二氢-2H-吡啶-4-基)-8-氯-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(100mg，0.20mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝591。
步骤4：2-[[6-(1-乙酰基-3,6-二氢-2H-吡啶-4-基)-8-氨基-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-[6-(1-乙酰基-3,6-二氢-2H-吡啶-4-基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(105mg，0.18mmol)在二氯甲烷(5mL)中的TFA(1mL,0.18mmol)在的溶液在15℃搅拌2小时。在真空下浓缩所得溶液。残余物经制备型HPLC提纯，得到2-[[6-(1-乙酰基-3,6-二氢-2H-吡啶-4-基)-8-氨基-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(27.8mg，0.057mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝492.2；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,1H),9.02(s,1H),7.68(s,1H),6.79-6.76(m,1H),6.09(s,1H),5.94(s,3H),4.97(s,2H),4.64-4.55(m,1H),4.17-4.10(m,2H),3.80-3.78(m,2H),3.66-3.61(m,2H),3.00-2.96(m,2H),2.56(s,1H),2.51-2.50(m,1H),2.07(d,J＝9.2Hz,3H),1.12(d,J＝9.2Hz,6H)。
实施例231：
2-((8-氨基-6-(3-氨基-1,4-二甲基-1H-吡唑-5-基)-7-氟异喹啉-3-基)氨基)-6-异丙基-5,6-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7(8H)-酮(化合物251)
步骤1：1,4-二甲基-3-硝基-吡唑
将4-甲基-3-硝基-1H-吡唑(500mg，3.93mmol)、碘甲烷(837.9mg，5.9mmol)和叔丁醇钾(484.6mg，4.33mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱，得到1,4-二甲基-3-硝基-吡唑(450mg，3.18mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝142。
步骤2：1,4-二甲基吡唑-3-胺
将1,4-二甲基-3-硝基-吡唑(530mg，3.76mmol)和钯碳(10％)(50mg，3.76mmol)在甲醇(20mL)中的溶液在20℃搅拌1小时。过滤后，减压浓缩该滤液，得到1,4-二甲基吡唑-3-胺(400mg，3.59mmol)，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝112。
步骤3：3-(2,5-二甲基吡咯-1-基)-1,4-二甲基-吡唑
在110℃，将1,4-二甲基吡唑-3-胺(1.53g，13.77mmol)、2,5-己烷二酮(3.14g，27.53mmol)和对甲苯磺酸(0.24g，1.38mmol)在甲苯(60mL)中的溶液搅拌3小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(80/20)洗脱，得到3-(2,5-二甲基吡咯-1-基)-1,4-二甲基-吡唑(1.5g，7.92mmol)，其为灰色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝190。
步骤4：3-(2,5-二甲基吡咯-1-基)-5-碘-1,4-二甲基-吡唑
在-78℃，将3-(2,5-二甲基吡咯-1-基)-1,4-二甲基-吡唑(500mg，2.64mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液添加正丁基锂(1.27mL,3.17mmol)。在-78℃搅拌所得溶液1小时。然后添加碘(671.03mg，2.64mmol)并在-78℃搅拌10分钟。在室温搅拌混合物1小时。反应用饱和硫代硫酸钠水溶液淬灭。所得溶液经乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用石油醚/乙酸乙酯(3/1)洗脱，得到3-(2,5-二甲基吡咯-1-基)-5-碘-1,4-二甲基-吡唑(385mg，1.22mmol)，其为浅黄色油状物。LCMS(ESI)[M+H]+＝316。
步骤5：5-碘-1,4-二甲基-吡唑-3-胺
将3-(2,5-二甲基吡咯-1-基)-5-碘-1,4-二甲基-吡唑(500mg，1.59mmol)、氢氧化钾(444.23mg，7.93mmol)、羟基胺盐酸盐(1.09g，15.87mmol)在乙醇(20mL)和水(20mL)中的溶液在90℃搅拌12小时。在真空下浓缩溶剂。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用二氯甲烷/甲醇(96/4)洗脱，得到5-碘-1,4-二甲基-吡唑-3-胺(281mg,1.18mmol)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝238。
步骤6：N-[6-(5-氨基-2,4-二甲基-吡唑-3-基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯
将5-碘-1,4-二甲基-吡唑-3-胺(31.0mg，0.13mmol)、[8-(叔丁氧基羰基氨基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-6-异喹啉基]硼酸(67mg，0.13mmol)、四(三苯基膦)钯(27.59mg，0.03mmol)和碳酸钾(54.14mg，0.39mmol)在1,4-二噁烷(3mL)和水(0.3mL)中的溶液在90℃搅拌1小时。在真空下浓缩溶剂，得到N-[6-(5-氨基-2,4-二甲基-吡唑-3-基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(50mg，粗品)，其为棕色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝578。
步骤7：2-[[8-氨基-6-(5-氨基-2,4-二甲基-吡唑-3-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-7-酮
将N-[6-(5-氨基-2,4-二甲基-吡唑-3-基)-7-氟-3-[(6-异丙基-7-氧代-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-8-异喹啉基]氨基甲酸叔丁基酯(50.0mg，0.09mmol)和2,2,2-三氟乙酸(1.0mL)在二氯甲烷(4mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。在真空下浓缩所得溶液。该粗产物经制备型HPLC提纯[Atlantis HILIC OBD柱，19x150nmx50um；水(10mmol/L碳酸氢钠和ACN(20％-50％)，在7分钟内]，得到2-[[8-氨基-6-(5-氨基-2,4-二甲基-吡唑-3-基)-7-氟-3-异喹啉基]氨基]-6-异丙基-5,8-二氢-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮杂/>-7-酮(9.1mg，0.019mmol)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝478；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),9.09(s,1H),7.69(s,1H),6.75(d,J＝6.0Hz,1H),6.13(s,2H),5.98(s,1H),4.98(s,2H),4.65-4.55(m,1H),4.48(s,2H),3.78(t,J＝6.0Hz,2H),3.45(s,3H),2.98(t,J＝6.0Hz,2H),1.77(s,3H),1.12(d,J＝6.0Hz,6H)。
实施例232：
(1S,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物383)、(1R,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物384)、(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物385)、(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(化合物386)
步骤1：2-[(苄基氧基)甲基]-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺
在0℃，向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-胺(1g，3.48mmol)、(1S,2S)-2-[(苄基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷-1-甲酸(1.15g，5.22mmol)、吡啶(2mL,24.847mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液添加三氯氧化磷(1.06g，6.90mmol)。在0℃，搅拌所得溶液30分钟，然后用水淬灭。所得溶液经二氯甲烷萃取，用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(10/1)洗脱，得到(1S,2S)-2-[(苄基氧基)甲基]-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(0.9g，53％)，其为黄色固体。
步骤2：N-(3-[[(2-[(苄基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
在100℃，将2-[(苄基氧基)甲基]-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基]-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺(900mg，1.84mmol)、N-甲基氨基甲酸叔丁基酯(4.3g，32.78mmol)、Pd2(dba)3.CHCl3(380mg，0.37mmol)、BrettPhos(395mg，0.74mmol)、碳酸铯(2.4g，7.37mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的溶液中搅拌5小时。滤出固体。在真空下浓缩所得混合物。残余物在硅胶上经快速色谱提纯，用乙酸乙酯/石油醚(10/1)洗脱，得到N-(3-[[2-[(苄基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(500mg，48％)，其为黄色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝571。
步骤3：N-(7-氟-3-[[2-(羟基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
向N-(3-[[2-[(苄基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(500mg，0.88mmol)在甲醇(20mL)中的溶液中添加Pd(OH)2/C(100mg)。在室温，在H2(1atm)下搅拌所得溶液12小时。将反应过滤并在真空下浓缩，得到N-(7-氟-3-[[2-(羟基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(220mg，52％)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝481。
步骤4：N-(7-氟-3-[[2-[(甲磺酰基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
在0℃，向N-(7-氟-3-[[(1S,2S)-2-(羟基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.42mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三乙胺(70mg，0.69mmol)和甲磺酰氯(60mg，0.52mmol)。在室温搅拌所得溶液15分钟，并随后在真空下浓缩，得到N-(7-氟-3-[[2-[(甲磺酰基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(200mg，粗品)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝559。
步骤5：N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯
向N-(7-氟-3-[[2-[(甲磺酰基氧基)甲基]-3-甲基环丙烷]酰氨基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(200mg，0.36mmol)在二甲基亚砜(10mL)溶液中添加氰化钾(46mg，0.71mmol)。在60℃搅拌所得溶液3小时。所得溶液用水稀释，并随后用乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，在真空下浓缩滤液，得到N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(210mg，粗品)，其为白色固体。LCMS(ESI)[M+H]+＝490。
步骤6：(1S,2S,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺、(1R,2R,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺、(1S,2S,3S)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺、(1R,2R,3R)-N-(8-氨基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷-1-甲酰胺
对于N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基环丙烷]酰氨基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)异喹啉-8-基)氨基甲酸叔丁基酯(100mg，0.20mmol)和TFA(3ml)的1,4-二噁烷(5mL)溶液在室温搅拌2小时。在真空下浓缩所得混合物。残余物经制备型HPLC提纯(XBridge ShieldRP18OBD柱，5μm,19*150mm；水(0.05％NH3H2O)和ACN(15％ ACN达至40％，在15分钟内))，得到混合物。混合物经SFC分离，得到4种异构体(环丙烷立体化学：氰基甲基相对于酰胺是反式的；任意指定甲基相对立体化学；任意指定所有绝对立体化学)：化合物383：(2.4mg，3％)，其为黄色固体。保留时间：3.83分钟。(CHIRALPAK ID-3 0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝390；1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.31(s,1H),8.48-8.41(m,2H),8.31(s,1H),7.45-7.43(d,J＝5.1Hz,1H),7.00-6.98(d,J＝6Hz,1H),2.79-2.60(m,2H),2.31(s,3H),1.88-1.85(m,1H),1.83-1.69(m,2H),1.34-1.20(m,3H)。化合物384：(2.4mg，3％)，其为黄色固体。保留时间：5.64分钟(CHIRALPAK ID-3 0.46*10cm；3μm；MtBE(0.1％DEA):EtOH＝70:30；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝390；1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.31(s,1H),8.48-8.41(m,2H),8.31(s,1H),7.45-7.43(d,J＝5.1Hz,1H),7.00-6.98(d,J＝6Hz,1H),2.79-2.60(m,2H),2.31(s,3H),1.88-1.85(m,1H),1.83-1.69(m,2H),1.34-1.20(m,3H)。化合物385：(3.4mg，4％)，其为黄色固体。保留时间：4.636分钟(CHIRALPAK IA-30.46*5cm；3μm；Hex(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝390；1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.31(s,1H),8.48-8.41(m,2H),8.31(s,1H),7.45-7.43(d,J＝5.1Hz,1H),7.00-6.98(d,J＝6Hz,1H),2.79-2.60(m,2H),2.31(s,3H),1.88-1.85(m,1H),1.83-1.69(m,2H),1.34-1.20(m,3H)。化合物386：(2.7mg，3％)，其为黄色固体。保留时间：6.686分钟(CHIRALPAK IA-30.46*5cm；3μm；Hex(0.1％DEA):EtOH＝50:50；1.0ml/分钟)；LCMS(ESI)[M+H]+＝390；1HNMR(300MHz,CD3OD)δ9.31(s,1H),8.48-8.41(m,2H),8.31(s,1H),7.45-7.43(d,J＝5.1Hz,1H),7.00-6.98(d,J＝6Hz,1H),2.79-2.60(m,2H),2.31(s,3H),1.88-1.85(m,1H),1.83-1.69(m,2H),1.34-1.2(m,3H)。
化合物表征：化学
实施例233：
制备和表征了示例性的式I或Ia化合物。其数据示于表A-1中。
表A-1.
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实施例234：
制备另外的示例性的式I或Ia化合物(表A-2、A-3和A-4)；并且其结合数据示于表B1-1和B1-2中。
表A-2.
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表A-3.
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表A-4.
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生物评价
测试示例性的式I或Ia的化合物以评价化合物对HPK-1的抑制。测定各个示例性化合物的Ki。
实施例B1：测定HPK1的Ki
实施例B1A：HPK1-FL HTRF酶促分析(“HTRF”)
测定原则：
HPK-FL酶磷酸化生物素-SLP-76底物，在1mM ATP存在的条件下，且变化测试化合物的浓度。通过使用Eu-抗-pSLP76Ab和SA-XL665，在FRET上检测产物。更多HTRF技术的信息亦参见www.cisbio.com/HTRF。
仪器：
Echo555化合物分配器
Agilent Bravo
Perkin Elmer Envision
最终测定条件：
HPK全长,T165E S171E： 0.125nM
生物素-SLP76： 100nM
ATP： 1mM(ATP Km＝20μM)
Eu-抗-pSLP76： 2nM
SA-XL665： 8.3nM
预温育时间： 30分钟
激酶反应试剂： 60分钟
温度： 环境温度
总体积： 12μl
ATPapp Km： 17.7μM
材料：
测定板：White ProxiPlate 384F(PerkinElmer编号6008289)
激酶：HPK全长双突变体
底物：生物素-SLP76
ATP：100mM ATP
BSG：2％ BSG
DMSO：DMSO(Sigma编号34869-100ML)
反应缓冲液：H2O/50mM HEPES、pH 7.5/10mM MgCl2/2mM
TCEP/0.01％ Brij-35/0.01％ BSG
检测混合物：Eu-抗-pSLP76/SA-XL665(Cisbio,#610SAXAC)
测定Ki的分析程序：
向具有80nL化合物或DMSO点样的384孔Proxiplate中添加4μl/孔的激酶混合物。将该混合物预温育30分钟，然后添加4μl/孔的底物混合物。将该溶液温育60分钟，然后添加4μl/孔的检测混合物。将该溶液继续温育60分钟。然后将该板负载于Perkin ElmerEnvision，且在615和665nm测量TR-FRET信号。使用665/620的比例来计算每种化合物浓度的％活性。
实施例B1B：HPK1 Lantha结合测定(“Lanth”)
材料：
程序：
I.化合物稀释：
通过用Bravo液体处理平台制备化合物板中在第2和13列的12.5uL/孔的5mM化合物(100X)以及在第3-12、14-23列和孔A1-H1、I24-P24的10ul/孔DMSO，来稀释待测化合物。对于参考化合物，最高浓度为1mM。向该板的孔J1-P1和A24-H24中添加10ul的2mM星孢菌素；用Bravo液体处理平台进行11点5倍化合物连续稀释；从该板将来自第2和13列的2.5ul化合物转移到第3和14列中的10ul DMSO中，等等；以2500rpm离心该化合物板1分钟。从该化合物板使用Echo液体处理平台转移将80nl化合物至测定板中。一个化合物板制作两个测定板。密封每个测定板并储存在N2柜中。
II.测定条件：
使用以下测定浓度和时间：2nM HPK1，2nM Eu-抗-GST Ab和15nM示踪物222，60分钟温育时间。
III.HPK Lantha结合测定：
对于该结合测定，使用Multidrop试剂分配器将4ul 2X HPK1和Eu-抗-GST抗体添加至该测定板的每个孔中。该溶液在23C培养箱中温育1小时。使用Multidrop试剂分配器向该测定板中的每个孔添加4ul 2X示踪物-222。该溶液在23C培养箱中再次温育1小时。使用具有以下参数的Envision读板仪读取测定结果：TR_FRET，340ex/615和665em；100usec延迟；以及200usec积分。
IV。分析：
通过使用XL-fit中的Morrison ki拟合模型分析化合物Ki
a.fit＝(1-((((E+x)+(Ki*(1+(S/Kd))))-(((((E+x)+(Ki*(1+(S/Kd))))^2)-((4*E)*x))^0.5))/(2*E)))
res＝(y-fit)
b.参数：
E＝酶浓度
S＝示踪物222浓度，Kd＝示踪物222Kd
使用相同单位(uM)报告所有测量值
在结合测定中测试示例性的式I或Ia的化合物。所测的Ki值列于表B1-1和B1-2中。
表B1-1
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表B1-2
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实施例B2：人类T-细胞IL2诱导测定
测定原则：
抗CD3和抗CD28激活原代人Pan T细胞中的TCR信号传导，导致IL-2启动子诱导。使用针对IL-2的捕获抗体和标有SULFO标记的抗IL-2抗体，通过电化学荧光检测细胞培养上清液中分泌的IL-2。
文献：
更多额外的电化学荧光技术信息参见www.mesoscale.com。
测定程序：
在37℃和5％CO2的加湿培养箱中，使用不同浓度的测试化合物，温育原代人Pan T细胞30分钟。将细胞转移到预先涂有固定浓度的抗-人类CD3的平板上(对每个供体批次分别测定)并加入可溶性抗-人类CD28(终浓度＝1μg/ml)。在37℃和5％CO2的加湿培养箱中刺激细胞4小时。将25μl上清液转移至预先涂有抗人类IL-2抗体的MSD单点板。将MSD板在4℃温育过夜，并轻轻振荡。用洗涤缓冲液洗涤MSD板4X。以1:50稀释度添加SULFO标记的检测抗体，并在室温振荡温育2小时。用洗涤缓冲液洗涤MSD板4X并加入150μl 2X MSD读数缓冲液。在MSD仪器上读数。将数据归一化为经刺激的/未处理的对照，以计算每种化合物浓度的％活性。
材料：
冷冻原代人Pan-T细胞(StemCell Technologies#70024)
抗人CD3(OKT3克隆)(eBioscience#16-0037-81)
抗人CD28(CD28.2克隆)(BD#555725)
96-孔人IL-2组织培养试剂盒(MSD#K151AHB-4)
仪器：
用于液体处理的Biomek FX(Beckman Coulter)
MSD SECTOR S 600(Meso Scale Discovery)
在人类T-细胞IL-2诱导测定中测试示例性的式I或Ia的化合物。对于某些化合物，表B2中提供测试化合物处理的细胞中IL-2相对于未处理细胞的％增加。
表B2
应注意的是，术语“一个”或“一种”实体是指该实体中的一个/种或多个/种；例如，“一个/种多肽”应理解为代表一个/种或多个/种多肽。因此，术语“一个/种”、“一个/种或多个/种”和“至少一个/种”在本文中可互换使用。
本文使用的所有技术术语和科学术语具有相同的含义。已经努力确保关于所使用的数字(例如量、温度等)的准确性，但应该考虑到一些实验误差和偏差。
在整个本说明书和权利要求书中，除非上下文另有要求，否则措辞“含有”、“包含”和“包括”以非排他性的含义使用。应理解的是，本文描述的实施方案包括“由......组成”和/或“基本上由......组成”的实施方案。
如本文所用，当提及一个值时，术语“约”意在涵盖所述具体量的变量，在一些实施方案中具体量±50％、在一些实施方案中具体量±20％、在一些实施方案中具体量±10％、在一些实施方案中具体量±5％、在一些实施方案中具体量±1％、在一些实施方案中具体量±0.5％以及在一些实施方案中具体量±0.1％，因为这样的变量适于实施所公开的方法或使用所公开的组合物。
在提供数值范围的情况下，应理解的是，除非该上下文另有明确规定，否则本发明涵盖在所述范围的上限和下限之间的每个居中值(到下限单位的十分之一)，以及该规定范围内的任何其它规定的或居中值。本发明亦涵盖这些小范围的上限和下限(可独立地包括在较小的范围内)，其受所述范围内的任何特别排除的限值的约束。在所述范围包括一个或两个所述限值的情况下，本发明也涵盖排除一个或两个那些包括的限值的范围。
受益于前述说明书中呈现的教导，本发明所属领域的技术人员将想到本文所阐述的本发明的许多变型和其它方案。因此，应理解的是，本发明不限于所公开的特定实施方案，且那些变型和其它实施方案旨在涵盖在所附权利要求的范围内。尽管本文采用特定术语，但它们仅以一般性和描述性意义使用，而非出于限制的目的。
其它实施方案
实施方案1.式I的化合物：
其中，
R1为氢、卤素、甲基、CF3、CHF2、CH2OH或氰基；
R2为：
5-10元杂芳基或5-10元杂环基，其具有1-4个选自O、S和N的杂原子；且任选地经1个、2个、3个或4个取代基R6、R7、R8和R8’取代，它们各自独立地选自：
i.支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基或C1-6亚烯基，其中所述烷基、烯基和亚烯基可任选地经1至4个羟基、卤素、腈、氨基、单(C1-6)烷基氨基-、二(C1-6)烷基氨基-、-SO2Ry、SONRy、–(CO)NRyRz或-NRy(CO)Rz取代，其中，在各种情况下，Ry和Rz独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基或卤素取代；
ii.NRyRz-C(O)-，其中Ry和Rz各自独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基或卤素取代；
iii.羟基(C1-6)烷基；
iv.C1-6烷氧基，其中所述烷氧基可任选地经1至4个羟基或卤素取代；
v.C3-9环烷基。经取代或未经取代的C6芳基，经取代或未经取代的5元杂芳基或C2-9杂环基；
vi.卤素；
vii.氨基；
viii.氰基；
ix.–NRy(CO)Rz，其中Ry和Rz各自独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基或卤素取代；
x.–SO2R’，其中R’为H或C1-6烷基；
xi.–SO2NR’R”，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；和xii.其中嵌入所述杂环基的碳与它所连的氧一起可形成羰基；或
R2为C6-10芳基，其具有1个、2个、3个或4个选自支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C3-4环烷基的取代基，其中所述烷基、烯基、亚烯基和环烷基可经氨基、羟基、氰基、卤素、酰胺、单(C1-6)烷基氨基-、二(C1-6)烷基氨基-、-SO2Rc、SONRd、–(CO)NRcRd和-NRc(CO)Rd取代，
其中Rc和Rd各自独立地选自氢和C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基或卤素取代；或
R2为氢或–SO2NH2；
R3为C1-6烷基、氢、氰基或卤素；和
R4为A-C(O)-，其中A为：
i.C3-7环烷基、C2-9杂芳基或C2-9杂环基，其中所述环烷基、杂芳基或杂环基可任选地经1个、2个、3个或4个R5取代，其中R5选自氢、支链的或直链的C1-6烷基、C3-7环烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基，其中所述烷基、烯基和亚烯基可经氨基、C1-6烷氧基、羟基、卤素、-SO2Re和酰胺；卤素、羟基(C1-6)烷基、卤代(C1-6)烷基、氰基、氰基(C1-6)烷基、羟基、C1-6烷氧基、氨基、C2-9杂芳基、-SO2Re和NReRf-C(O)-取代，其中Re和Rf独立地选自氢和支链的或直链的C1-6烷基；
或者，所述环烷基或杂环基与2个R5一起形成双环或螺环，其中2个连至不同原子的R5与各自所连至的原子一起形成双环，或2个连至相同原子的R5与各自所连至的原子一起形成螺环；和
ii.–NHRg，其中Rg选自：
a.支链的或直链的C1-6烷基、C3-5环烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基和C3-7环烷基，其中所述烷基、烯基、亚烯基、杂环基和环烷基可任选地经羟基、卤素、-CF2、-CF3、氨基、二(C1-6)烷基氨基、单(C1-6)烷基氨基、氰基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、–SO2R’、–SO2NR’R”、–(CO)NR’R”或-NR’(CO)R”取代，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；和
b.C2-9杂芳基或C6-10芳基，其中所述杂芳基具有1-4个选自O、S和N的杂原子；以及其中所述芳基和杂芳基可任选地经1个、2个、3个或4个选自支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基、C1-6亚烯基、C2-9杂环基、C3-7环烷基、羟基、卤素、-CF2、-CF3、氨基、二(C1-6)烷基氨基、单(C1-6)烷基氨基、氰基、C3-7环烷基、C1-6烷氧基、–SO2R’、–SO2NR’R”、–(CO)NR’R”和-NR’(CO)R”的取代基取代，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；
或R4为D，其中D为：
5-10元杂芳基，其具有1-4个选自O、S和N的杂原子；
且任选地经1个、2个、3个或4个取代基取代。
实施方案2.实施方案1所述的化合物，其中R3为氢。
实施方案3.实施方案2所述的化合物，其中R1为氢、氟或氰基。
实施方案4.实施方案3所述的化合物，其中R5不为氢。
实施方案5.实施方案4所述的化合物，其中R4为A-C(O)-，其中，A为：
其中，v为0、1、2、3或4；X、Y和Z各自独立地不存在或为-CH2-，且其中，若存在，则各个X、Y和Z上的0个、1个或2个H可为R5。
实施方案6.实施方案4所述的化合物，其中R4为A-C(O)-，其中，A为：
其中，v为0、1、2、3或4；X、Y和Z各自独立地不存在或为-CH2-，且其中，若存在，则各个X、Y和Z上的0个、1个或2个H可为R5。
实施方案7.实施方案2所述的化合物，其中R4为A-C(O)-，其中，A为：
其中，v为0、1或2。
实施方案8.实施方案7所述的化合物，其中A为：
其中，v为0、1或2。
实施方案9.实施方案8所述的化合物，其中R5不为氢和A为：
实施方案10.实施方案7所述的化合物，其中A为：
其中，v为0、1或2。
实施方案11.实施方案10所述的化合物，其中R5不为氢和A为：
实施方案12.实施方案2所述的化合物，其中R5选自氢、氟、氰基、NH2-C(O)-、C2-9杂芳基、氰基(C1-6)烷基和羟基(C1-6)烷基。
实施方案13.实施方案12所述的化合物，其中R5为氟或氰基。
实施方案14.实施方案13所述的化合物，其具有以下结构的一种：
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
实施方案15.实施方案12所述的化合物，其中R5为C2-9杂芳基。
实施方案16.实施方案15所述的化合物，其中所述C2-9杂芳基为经任选取代的杂芳基，其含有至少一个氮。
实施方案17.实施方案16所述的化合物，其中所述杂芳基为经任选取代的、含有1个或2个氮原子的5元杂芳基。
实施方案18.实施方案17所述的化合物，其中所述5元杂芳基为经任选取代的吡唑。
实施方案19.实施方案18所述的化合物，其具有以下结构的一种：
/>
实施方案20.实施方案12所述的化合物，其中至少一个R5为氰基(C1-6)烷基。
实施方案21.实施方案20所述的化合物，其中至少一个R5为氰基-CH2-。
实施方案22.实施方案21所述的化合物，其具有以下结构的一种：
实施方案23.实施方案12所述的化合物，其中R5为氢。
实施方案24.实施方案23所述的化合物，其具有以下结构的一种：
实施方案25.实施方案1所述的化合物，其中R4为D，且其中D为经任选取代的杂芳基，其含有至少一个氮。
实施方案26.实施方案25所述的化合物，其中所述杂芳基为经任选取代的、含有1个或2个氮原子的5元杂芳基。
实施方案27.实施方案26所述的化合物，其中所述5元杂芳基为经任选取代的吡唑。
实施方案28.实施方案27所述的化合物，其中所述经任选取代的吡唑为
其中该波浪线表示连至所述N的连接点；且其中RA为支链的或直链的C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基、卤素、腈、氨基、单(C1-6)烷基氨基-、二(C1-6)烷基氨基-或-NRy(CO)Rz取代，其中，在各种情况下，Ry和Rz独立地为氢或C1-6烷基。
实施方案29.实施方案28所述的化合物，其中RA为直链的C1-6烷基，其经羟基、卤素、腈或氨基取代。
实施方案30.实施方案29所述的化合物，其中所述直链的C1-6烷基为经腈取代的乙基。
实施方案31.实施方案30所述的化合物，其中RA为
实施方案32.实施方案31所述的化合物，其中RA为
实施方案33.实施方案31所述的化合物，其具有以下结构的一种：
实施方案34.实施方案1所述的化合物，其中R2为经任选取代的5-10元杂芳基或经任选取代的5-10元杂环基。
实施方案35.实施方案34所述的化合物，其中R2选自：
/>
它们各自可任选地经1个、2个或3个取代基R6、R7和R8取代。
实施方案36.实施方案35所述的化合物，其中R2为：
/>
实施方案37.实施方案36所述的化合物，其中R2为：
实施方案38.实施方案37所述的化合物，其中R2为：
实施方案39.实施方案38所述的化合物，其中R2为：
实施方案40.实施方案39所述的化合物，其中R6为C1-6烷基或羟基(C1-6)烷基。
实施方案41.实施方案40所述的化合物，其中R6为甲基。
实施方案42.实施方案41所述的化合物，其具有以下结构的一种：
/>
/>
实施方案43.实施方案35所述的化合物，其中R2为：
/>
实施方案44.实施方案43所述的化合物，其中R2为：
实施方案45.实施方案44所述的化合物，其中R2为：
实施方案46.实施方案45所述的化合物，其中R6为支链的或直链的C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个羟基或卤素取代。
实施方案47.实施方案46所述的化合物，其中R2为：
实施方案48.实施方案47所述的化合物，其具有以下结构的一种：
实施方案49.实施方案35所述的化合物，其中R2为：
实施方案50.实施方案49所述的化合物，其中R2为：
实施方案51.实施方案50所述的化合物，其中R6为支链的或直链的C1-6烷基。
实施方案52.实施方案51所述的化合物，其中R6为甲基、乙基或异丙基。
实施方案53.实施方案52所述的化合物，其具有以下结构的一种：
实施方案54.实施方案35所述的化合物，其中R2为：
实施方案55.实施方案54所述的化合物，其中R2为：
实施方案56.实施方案55所述的化合物，其中R2为：
实施方案57.实施方案56所述的化合物，其中R6为支链的或直链的C1-6烷基。
实施方案58.实施方案57所述的化合物，其中R6为甲基。
实施方案59.实施方案58所述的化合物，其具有以下结构的一种：
实施方案60.实施方案35所述的化合物，其中R2为：
实施方案61.实施方案35所述的化合物，其中R6、R7和R8中的一个为O且与其所连至的碳一起形成羰基。
实施方案62.实施方案61所述的化合物，其中R2为
其中R7为氢或C1-6烷基。
实施方案63.实施方案62所述的化合物，其具有以下结构的一种：
实施方案64.实施方案1所述的化合物，其具有以下结构的一种：
实施方案65.药物组合物，其包含实施方案1-64中任一项的化合物和药学上可接受的载体。
实施方案66.实施方案65所述的药物组合物，其中所述组合物进一步包含化疗剂。
实施方案67.实施方案66所述的药物组合物，其中所述化疗剂为免疫治疗剂。
实施方案68.一种抑制HPK1的方法，所述方法包括将HPK1与有效量的实施方案1-64中任一项的化合物或实施方案65-67中任一项的药物组合物接触。
实施方案69.一种增强在有此需要的受试者中的免疫应答的方法，其中所述方法包括向所述受试者给药有效量的实施方案1-64中任一项的化合物或实施方案65-67中任一项的药物组合物。
实施方案70.实施方案69所述的方法，其中相对于给药所述化合物或药物组合物之前，受试者中的T细胞具有增强的引发、增强的活化、增强的迁移、增强的增殖、增强的存活和增强的细胞溶解活性中的至少一种。
实施方案71.实施方案70所述的方法，其中所述T细胞活化的特征在于相对于给药所述化合物或药物组合物之前，γ-IFN+CD8T细胞频率升高或T细胞产生的IL-2水平或颗粒酶B水平升高。
实施方案72.实施方案71所述的方法，其中相对于给药所述化合物或药物组合物之前，T细胞的数量增加。
实施方案73.实施方案70-72中任一项所述的方法，其中所述T细胞为抗原特异性CD8T细胞。
实施方案74.实施方案73所述的方法，其中相对于给药所述化合物或药物组合物之前，所述受试者中的抗原呈递细胞具有增强的成熟和活化。
实施方案75.实施方案74所述的方法，其中所述抗原呈递细胞为树突细胞。
实施方案76.实施方案74所述的方法，其中所述抗原呈递细胞的成熟的特征在于CD83+树突细胞的频率增加。
实施方案77.实施方案74所述的方法，其中所述抗原呈递细胞的活化的特征在于树突细胞上CD80和CD86的表达增加。
实施方案78.实施方案68-77中任一项所述的方法，其中所述受试者患有癌症。
实施方案79.一种治疗HPK1依赖性病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者给药有效量的实施方案1-64任一项的化合物或实施方案65-67中任一项的药物组合物。
实施方案80.实施方案79所述的方法，其中所述HPK1依赖性病症为癌症。
实施方案81.实施方案78或80所述的方法，其中所述癌症包含结肠直肠癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、血液系统恶性肿瘤和肾细胞癌中的至少一种癌症。
实施方案82.实施方案78、80或81中任一项所述的方法，其中所述癌症具有升高的T细胞浸润水平。
实施方案83.实施方案78、80、81或82中任一项所述的方法，其中相对于给药所述化合物或组合物之前，受试者中的癌细胞选择性地具有MHC I类抗原表达的增加表达。
实施方案84.实施方案78、80、81、82或83中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括将化疗剂给药至所述受试者。
实施方案85.实施方案84所述的方法，其中所述化疗剂与所述化合物或所述组合物同时给药至所述受试者。
实施方案86.实施方案84所述的方法，其中在给药所述化合物或所述组合物之前，将所述化疗剂给药至所述受试者。
实施方案87.实施方案84所述的方法，其中在给药所述化合物或所述组合物之后，将所述化疗剂给药至所述受试者。

Claims (10)

1.式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中，
R1为氢、卤素、氰基、C1-6烷基、C3-7环烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟基烷基、羟基、C1-6烷氧基、经任选取代的氨基或经任选取代的酰氨基；
R2为(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)或(h)：
(a)5-10元杂芳基或5-10元杂环基，其具有1-4个选自O、S和N的杂原子；以及任选地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代；或
(b)任选地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代的C6-10芳基；或
(c)氢、卤素、氰基、–NRbC(O)Ra、–NRbSO2Ra、–SO2NRaRb；或–SO2Ra；其中Ra各自独立地为C1-6烷基，且Rb独立地为氢或C1-6烷基；或Ra和Rb与它们所连结的原子一起形成经任选取代的5-10元杂环基；或
(d)–ORa1或–(C1-6亚烷基)–ORa1；其中Ra1各自独立地为任选地经C6-10芳基取代的C1-6烷基；5-10元杂芳基；或5-10元杂环基；其中所述C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基经任选取代；或
(e)C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基，它们各自任选地经1至5个取代基取代；或
(f)C3-8环烷基，其任选地经1至5个取代基取代；
(g)–C(O)NRa2Rb2或–NRa2(CO)Rb2，其中Ra2各自独立地为氢或C1-6烷基，且Rb2为氢、C1-6烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基或5-10元杂环基；或Ra2和Rb2与它们所连结的原子一起形成经任选取代的5-10元杂环基；其中所述C1-6烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基和5-10元杂环基经任选取代；或
(h)5-10元杂芳基，其与选自5元或6元杂芳基、5-10元杂环基、C6-10芳基和C3-7环烷基的环稠合，其中R2的所述5-10元杂芳基和所述稠合环任选地经1至4个取代基取代；
R3为氢、氰基、卤素、经任选取代的C1-6烷基、经任选取代的C2-9杂环基、或经任选取代的C1-6烷氧基；和
R4为A-C(O)-或D；
A为C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-9杂芳基、C2-9杂环基、–NHRg或–ORh；其中A的所述C1-6烷基、C3-7环烷基、7C2-9杂芳基和C2-9杂环基任选地独立地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代；
Rg和Rh独立地为C1-6烷基、C2-6烯基、C3-7环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基或C2-9杂环基；其中Rg和Rh的所述C1-6烷基、C2-6烯基、C3-7环烷基、C6-10芳基、C2-9杂芳基和C2-9杂环基任选地独立地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代；和
D为氢、C6-10芳基或具有1-4个选自O、S和N的杂原子的5-10元杂芳基；或5-10元杂芳基，其与选自5元或6元杂芳基、5-10元杂环基、C6芳基和C3-8环烷基的环稠合；其中D的所述5-10元杂芳基和所述稠合环任选地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代；
其条件为所述化合物不为选自N-(8-氨基-3-异喹啉基)-N'-乙基-脲、5-[(8-氨基-3-异喹啉基)氨基]-2-吡嗪甲腈和5-[(8-氨基-3-异喹啉基)氨基]-3-[(1R)-2-(二甲基氨基)-1-甲基乙氧基]-2-吡嗪甲腈的化合物及其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R2为5-10元杂芳基或5-10元杂环基，其具有1-4个选自O、S和N的杂原子；以及任选地经1个、2个、3个、4个或5个取代基取代。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中R2选自：
它们各自可经任选取代。
4.根据权利要求2所述的化合物，其中R2选自：
它们各自经任选取代。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中R2为：
其中R6、R7和R8各自独立地选自：
i.支链的或直链的C1-6烷基、C1-6烯基或C1-6亚烯基，其中所述烷基、烯基和亚烯基可任选地经1至4个独立地选自羟基、卤素、腈、氨基、单(C1-6烷基)氨基-、二(C1-6烷基)氨基-、-SO2Ry、-S(O)NRy、–(CO)NRyRz和-NRy(CO)Rz的取代基取代，其中在各种情况下，Ry和Rz独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代；
ii.NRyRz-C(O)-，其中Ry和Rz各自独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代；
iii.羟基(C1-6烷基)；
iv.C1-6烷氧基，其中所述烷氧基可任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代；
v.C3-9环烷基、经取代或未经取代的C6芳基、经取代或未经取代的5元杂芳基或C2-9杂环基；
vi.卤素；
vii.氨基；
viii.氰基；
ix.–NRyC(O)Rz，其中Ry和Rz各自独立地为氢或C1-6烷基，其中所述烷基可任选地经1至4个独立地选自羟基和卤素的取代基取代；
x.–SO2R’，其中R’为H或C1-6烷基；
xi.–SO2NR’R”，其中R’和R”独立地为H或C1-6烷基；
xii.–NR’C(O)OR”、–NR’SO2NR”或–NR’S(O)R”，其中R’独立地为H或C1-6烷基，且R”独立地为C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)或C6-10芳基，其任选地经C1-6烷基取代；和
xiii.其中嵌入所述杂环基的碳与它所连接的氧一起可形成羰基。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中R2为：
7.根据权利要求6所述的化合物，其中R2为：
8.根据权利要求7所述的化合物，其中R2为：
其中R6、R7和R8各自独立地选自氢、羟基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和单(C1-6烷基)氨基。
9.根据权利要求8所述的化合物，其中R6为C1-6烷基；R7为氢、氨基或单(C1-6烷基)氨基；且R8为氢、羟基或C1-6烷氧基。
10.根据权利要求9所述的化合物，其中R6为甲基。
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