TW201843139A - 作為ｈｐｋ１之抑制劑的異喹啉 - Google Patents

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Abstract

描述異喹啉化合物及其作為HPK1(造血激酶1)之抑制劑之用途。該化合物用於治療HPK1依賴性病症且增強免疫反應。亦描述抑制HPK1之方法、治療HPK1依賴性病症之方法、用於增強免疫反應之方法、及用於製備異喹啉化合物之方法。

Description

作為HPK1之抑制劑的異喹啉
本發明係關於調節HPK1之功能且用於治療HPK1介導之疾病及病症(諸如癌症)之化合物。
由腫瘤學家使用以治療癌症之主要治療形式為手術切除、放射療法及經典化療藥物。遺憾的是，手術切除不是許多腫瘤或癌症形式之可行性選擇。此外，放射療法及化療藥物不僅僅靶向患病細胞，因此最終損害健康細胞。更特異性靶向腫瘤細胞之治療劑正在藉由利用腫瘤特異性抗原表現或腫瘤細胞內特異性蛋白質之不適當過表現或活化來開發，但是腫瘤細胞易於發生突變且可能對特異性靶向腫瘤細胞之藥物變得有抗性。
已出現一種新的癌症治療模範，該癌症治療模範利用患者自身免疫系統來克服由許多癌症所利用之免疫策略且增強抗腫瘤免疫性。一種此類策略為抑制通常用於維持周邊耐受性之免疫反應之負調節劑，使得腫瘤抗原被識別為非自身實體。
造血先驅細胞激酶1 (HPK1)為樹突細胞活化之負調節劑之實例，且T細胞及B細胞反應可靶向增強抗腫瘤免疫性。HPK1主要由造血細胞表現，該等造血細胞包括早期先驅細胞。在T細胞中，據信HPK1藉由磷酸化Ser376處之SLP76 (Di Bartolo等人 (2007)JEM 204:681-691)及Thr254處之Gads來減少信號傳導微群集之持久性來負調控T細胞活化，此導致結合至磷酸化SLP76及Gads之14-3-3蛋白之募集，自含LAT之微群集釋放SLP76-Gads-14-3-3複合體(Lasserre等人 (2011)J Cell Biol 195(5):839-853)。HPK1亦可回應於前列腺素E2而變得活化，該前列腺素E2通常由腫瘤分泌，有助於腫瘤細胞自免疫系統中逃脫。
本文提供酶HPK1之拮抗劑。該等化合物具有式I或Ia所陳述之結構，或為其醫藥學上可接受之鹽、代謝物、前藥或衍生物。進一步提供製備式I或Ia化合物之方法。
該化合物可用於抑制HPK1激酶活性，增強免疫反應，且用於治療HPK1依賴性病症。因此，亦提供包含式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物以及醫藥學上可接受之載劑之醫藥組成物。提供抑制HPK1之方法，其包含使HPK1與有效量之式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物接觸。提供治療HPK1依賴性病症之方法，其包含向有需要之受試者投與式I或Ia化合物或其醫藥調配物。亦提供一種用於治療HPK1依賴性病症之套組，該套組包含：包含式I或Ia化合物之醫藥組成物；及使用說明書。
相關申請案之交叉引用
本申請要求2017年3月30日申請之國際專利申請案第PCT/CN2017/078790號及2018年2月15日申請之國際專利申請案第PCT/CN2018/076908號之優先權權益，該等申請案之內容特此以全文引用的方式併入。 序列表
本申請案含有已以ASCII格式電子提交且據此以全文引用的方式併入本文中之序列表。2018年3月13日創建之該ASCII副本名為P34138_WO-2_SL.TXT，且大小為21 KB。
本文揭示作為HPK1 (造血先驅細胞激酶1)之抑制劑或調節劑之式I或Ia化合物及其醫藥組成物。因此，該化合物及組成物可用於治療由HPK1介導之疾病及病症。治療方法之實例係在罹患癌症之受試者之情形中。該化合物不僅可用於抗擊癌症，而且亦可有利地用於增強有需要之受試者中之免疫反應。
現在將在下文中更充分地描述目前揭示之主題。然而，熟習目前揭示之主題所屬技術者將想到本文所陳述之目前揭示之主題之許多修改及其他實施例，其具有在前面的描述中提出之教導之益處。因此，應理解，目前揭示之主題不限於所揭示之具體實施例，且修改及其他實施例意欲包括在所附申請專利範圍之範疇內。換言之，本文所述之主題囊括所有替代方案、修改及等效物。若一或多個所併入之文獻、專利及類似材料與本申請案(包括但不限於定義之術語、術語用法、所述技術或類似物)不同或矛盾，則以本申請案為準。除非另外定義，否則本文中所使用之所有科技術語均具有與一般熟習此項技術者通常所理解之意義相同的意義。本文提及之所有公開案、專利申請案、專利及其他參考文獻皆以全文引用的方式併入本文中。定義
術語「取代基」係指置換分子上之氫原子之原子或一組原子。術語「經取代之」表示指定分子帶有一或多個取代基。術語「式之化合物(a compound of the formula或a compound of formula或compounds of the formula或compounds of formula)」係指選自如由式I或Ia所定義之化合物類之任何化合物。
如本文所使用，術語「烷基」係指含有1至12個碳原子之直鏈或分支鏈烴基。術語「低碳烷基」係指C1 -C6 烷基鏈。烷基之實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、第三丁基及正戊基。烷基可視情況經一或多個取代基取代。
術語「烯基」係指具有二至八個碳原子(C2 -C8 )，較佳(C2-6 )之直鏈或分支鏈單價烴基，其具有至少一個不飽和位點，亦即碳-碳sp2 雙鍵，其中烯基可視情況獨立地經一或多個本文所述之取代基取代，且包括具有「順式」及「反式」取向或可替代地「E」及「Z」取向之基團。實例包括但不限於乙烯基(ethylenyl或vinyl) (—CH═CH2 )、烯丙基(—CH2 CH═CH2 )及類似物。
術語「伸烯基」係指具有二至八個碳原子(C2 -C8 )，較佳(C2-6 )之直鏈或分支鏈二價烴基，其具有至少一個不飽和位點，亦即碳-碳sp2 雙鍵，其中伸烯基可視情況獨立地經一或多個本文所述之取代基取代，且包括具有「順式」及「反式」取向或可替代地「E」及「Z」取向之基團。實例包括但不限於伸乙烯基(ethylenylene或vinylene) (-CH═CH-)、烯丙基(—CH2 CH═CH—)及類似物。
術語「烷氧基」係指-O-烷基。烷氧基可視情況經一或多個取代基取代。
術語「鹵烷基」係指經一或多個鹵基取代基取代之烷基。鹵烷基之實例包括二氟甲基(CHF2 )、三氟甲基(CF3 )及2,2,2-三氟乙基。
如本文所使用，術語「鹵素」、「鹵」或「鹵基」意指-F、-Cl、-Br或-I。
如本文所使用，名稱「(CO)」及「C(O)」用於指示羰基部分。合適羰基部分之實例包括但不限於酮及醛部分。
術語「環烷基」係指具有至少一個飽和環或具有至少一個非芳族環之烴3至8員單環或7至14員雙環系統，其中非芳族環可具有一定不飽和度。環烷基可視情況經一或多個取代基取代。在一個實施例中，環烷基之各環之0、1、2、3或4個原子可經取代基取代。環烷基之代表性實例包括環丙基、環戊基、環己基、環丁基、環庚基、環戊烯基、環戊二烯基、環己烯基、環己二烯基及類似物。
術語「芳基」係指烴單環、雙環或三環芳族環系統。芳基可視情況經一或多個取代基取代。在一個實施例中，芳基之各環之0、1、2、3、4、5或6個原子可經取代基取代。芳基之實例包括苯基、萘基、蒽基、茀基、茚基、薁基及類似物。
術語「雜芳基」係指雜原子選自O、N或S且其餘環原子為碳(具有適當的氫原子，除非另外指示)之芳族5至10員單環或雙環。雜芳基可視情況經一或多個取代基取代。在一個實施例中，雜芳基之各環之0、1、2、3或4個原子可經取代基取代。雜芳基之實例包括吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噁二唑基、咪唑基、噻唑基、異噁唑基、喹啉基、吡唑基、異噻唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、異喹啉基、吲唑基及類似物。
術語「雜環烷基」或「雜環基」係指非芳族3至8員單環、7至12員雙環或10至14員三環系統，其若為單環，則包含1至3個雜原子，若為雙環，則包含1至6個雜原子，或若為三環，則包含1至9個雜原子，該等雜原子選自O、N、S、B、P或Si，其中該非芳族環系統為完全飽和的。雜環烷基可視情況經一或多個取代基取代。在一個實施例中，雜環烷基之各環之0、1、2、3或4個原子可經取代基取代。代表性雜環烷基包括哌啶基、哌嗪基、四氫吡喃基、嗎啉基、硫嗎啉基、1,3-二氧雜戊環烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、噻吩基及類似物。
術語「羥烷基」係指進一步經一或多個羥基取代之烷基取代基。烷基部分可進一步視情況經一或多個取代基取代。
取代基及/或變數之組合僅在此類組合產生正確的化合價時方為允許的。除非由上下文另外指示，否則連字符(-)表示側基之連接點。
術語「互變異構物」或「互變異構形式」係指可經由低能量阻障相互轉化的具有不同能量之結構異構物。例如，質子互變異構物(亦稱為質子轉移互變異構物)包括經由質子遷移發生之相互轉化，諸如酮基-烯醇及亞胺-烯胺異構化。價態互變異構物包括藉由一些鍵結電子之重排發生之相互轉化。
術語「掌性」係指具有鏡像配偶體之不重疊性之性質的分子，而術語「非掌性」係指可重疊在其鏡像配偶體上之分子。
術語「非鏡像異構物」係指具有二或更多個不對稱中心且其分子不為彼此之鏡像之立體異構物。
術語「鏡像異構物」係指化合物之為彼此之不可重疊鏡像之兩個立體異構物。兩種鏡像異構物之等莫耳混合物係稱為「外消旋混合物」或「外消旋物」。
術語「異構物」或「立體異構物」係指具有相同化學組成，但在原子或基團於空間中之排列方面不同之化合物。
關於掌性中心之命名，術語「d」及「1」(或正及負)組態如由IUPAC推薦所定義。
「溶劑合物」係指一或多種溶劑分子及本發明化合物之締合物或複合物。形成溶劑合物的溶劑之實例包括但不限於水、異丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸及乙醇胺。術語「水合物」係指溶劑分子為水之複合物。
「代謝物」為由指定化合物或其鹽在體內代謝產生之產物。化合物之代謝物可使用此項技術中已知之常規技術鑒別，且其活性可使用諸如本文所述者之測試判定。此等產物可例如由投予之化合物之氧化、羥基化、還原、水解、胺化、脫胺、酯化、脫酯、酶促裂解及類似反應產生。因此，本發明包括本發明化合物(包括藉由包含使本發明化合物與哺乳動物接觸一段足以產生其代謝產物之時間之方法而產生的化合物)之代謝物。
片語「醫藥學上可接受之」指示物質或組成物在化學上及/或在毒理學上可與構成調配物之其他成分及/或其所治療之受試者相容。
如本文所使用之片語「醫藥學上可接受之鹽」係指本發明化合物之醫藥學上可接受之有機或無機鹽。示範性鹽包括但不限於硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、柳酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、丹寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽(gentisinate)、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、蔗糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽「甲磺酸鹽」、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、帕莫酸鹽(pamoate) (亦即，1,1′-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘酸鹽))、鹼金屬(例如，鈉及鉀)鹽、鹼土金屬(例如，鎂)鹽及銨鹽。醫藥學上可接受之鹽可涉及包括另一分子，諸如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其他相對離子。該相對離子可為使母體化合物上之電荷穩定的任何有機或無機部分。此外，醫藥學上可接受之鹽之結構中可具有一個以上帶電原子。多個帶電原子為醫藥學上可接受之鹽之一部分的情況可具有多個相對離子。因此，醫藥學上可接受之鹽可具有一或多個帶電原子及/或一或多個相對離子。
如本文所使用，「載劑」包括在所用劑量及濃度下對暴露於其之細胞或哺乳動物無毒的醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑。通常，生理學上可接受之載劑為pH緩衝水溶液。生理學上可接受之載劑之非限制性實例包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖醇，諸如甘露糖醇或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEEN™、聚乙二醇(PEG)及PLURONICS™。在某些實施例中，醫藥學上可接受之載劑為非天然存在之醫藥學上可接受之載劑。
本文中之詞語「抑制劑」之使用意指抑制HPK1活性之分子。本文中之「抑制」意指相較於不存在抑制劑之情況下酶之活性降低該靶酶之活性。在一些實施例中，術語「抑制」意指HPK1活性降低至少約5%、至少約10%、至少約20%、至少約25%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或至少約95%。在其他實施例中，抑制意指HPK1活性降低約5%至約25%、約25%至約50%、約50%至約75%或約75%至100%。在一些實施例中，抑制意指HPK1活性降低約95%至100%，例如活性降低95%、96%、97%，98%、99%或100%。此類降低可使用將由熟習此項技術者識別之多種技術(包括活體外激酶檢定)來量測。
如本文所使用，「HPK1拮抗劑」或「HPK1抑制劑」為降低、抑制或以其他方式減少HPK1之一或多種生物活性(例如，絲胺酸/蘇胺酸激酶活性、在TCR活化時募集至TCR複合體、與蛋白質結合配偶體諸如SLP76相互作用)。使用HPK1拮抗劑之拮抗作用不一定指示HPK1活性之完全消除。相反，活性可降低統計學上顯著量，包括例如相較於適當對照降低至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、95%或100%之HPK1活性。在一些實施例中，HPK1拮抗劑降低、抑制或以其他方式減少HPK1之絲胺酸/蘇胺酸激酶活性。在此等實施例之一些中，HPK1拮抗劑降低、抑制或以其他方式減少HPK1介導之SLP76及/或Gad之磷酸化。目前揭示之化合物直接結合至HPK1且抑制其激酶活性。
「特異性拮抗劑」意指使所定義標靶之活性降低、抑制或以其他方式減少大於不相關標靶之活性的藥劑。例如，HPK1特異性拮抗劑將HPK1之至少一種生物活性降低一定量，該量在統計學上大於拮抗劑對任何其他蛋白質(例如，其他絲胺酸/蘇胺酸激酶)之抑制作用。在一些實施例中，拮抗劑對標靶之IC50 為拮抗劑對非標靶之IC50 之約90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%、5%、1%、0.1%、0.01%、0.001%或更少。目前揭示之化合物可或可不為特異性HPK1拮抗劑。特異性HPK1拮抗劑將HPK1之生物活性降低一定量，該量在統計學上大於拮抗劑對任何其他蛋白質(例如，其他絲胺酸/蘇胺酸激酶)之抑制作用。在某些實施例中，HPK1拮抗劑特異性抑制HPK1之絲胺酸/蘇胺酸激酶活性。在此等實施例之一些中，HPK1拮抗劑對HPK1之IC50 為HPK1拮抗劑對另一種絲胺酸/蘇胺酸激酶或其他類型之激酶(例如，酪胺酸激酶)之IC50 之約90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%、0.1%、0.01%、0.001%或更少。
術語「治療(treat及treatment)」係指治療性治療及防治性或預防性措施，其中目標係防止或減緩(減輕)不需要之生理學改變或病症，諸如癌症之發展或擴散。出於本發明之目的，有益或需要之臨床結果包括但不限減輕解症狀、減少疾病程度、疾病狀態穩定(亦即，未惡化)、延遲或減緩疾病進展、改善或緩和疾病狀態及緩解(無論是部分還是全部)，無論是可偵測的還是不可偵測的。「治療」亦可意指與在不接受治療情況下預期之存活相比使存活延長。需要治療者包括已患有病狀或病症者、以及傾向於患有病狀或病症者或欲預防病狀或病症者。
術語「投與(administration或administering)」包括將化合物引入至受試者以進行其預期功能之途徑。可使用之投與途徑之實例包括注射(皮下、靜脈內、非經腸、腹膜內、鞘內)、局部、口服、吸入、直腸及經皮。
術語「有效量」包括在各種劑量下且持續一段所需要之時間有效達成所要結果之量。有效量之化合物可根據諸如受試者之疾病狀態、年齡及體重之因素以及化合物在受試者中引發所要反應之能力而變化。可調整劑量方案以提供最佳治療反應。有效量亦可為治療有益作用超過抑制劑化合物之任何毒性或有害作用(例如副作用)之量。
如本文所用，片語「全身性投與」、「周邊投與」及「外周地投與」意謂化合物、藥物或其他材料之投與，以致其進入患者之系統且因此經受代謝及其他類似過程。
片語「治療有效量」意謂本發明化合物之以下量：(i)治療或預防特定疾病、病狀或病症，(ii)削弱、改善或消除特定疾病、病狀或病症之一或多種症狀，或(iii)預防或延遲本文所述之特定疾病、病狀或病症之一或多種症狀的發作。在癌症之情形下，治療有效量之藥物可減少癌細胞之數目；降低腫瘤大小；抑制(亦即在某種程度上減緩且較佳地停止)癌細胞浸潤至周邊器官中；抑制(亦即在某種程度上減緩且較佳地停止)腫瘤轉移；在某種程度上抑制腫瘤生長；及/或在某種程度上減輕與癌症相關之一或多種症狀。倘若藥物可預防生長及/或殺傷現有癌細胞，則其可為細胞抑制性的及/或細胞毒性的。對於癌症療法，可例如藉由分析疾病進展時間(TTP)及/或判定反應率(response rate，RR)來量測功效。
術語「受試者」係指動物，諸如哺乳動物，包括但不限於靈長類動物(例如人類)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠及類似動物。在某些實施例中，受試者為人類。
術語「異常細胞生長」、「不受調控之細胞生長」及「過度增生性病症」在本申請案中可互換使用。除非另作指示，否則如本文中所用，「異常細胞生長」係指細胞生長不依賴於正常調控機制(例如喪失接觸抑制)。
術語「癌症」係指受試者中特徵在於不受調控之細胞生長之病狀，其中癌性細胞能夠局部侵入及/或轉移至非鄰接部位。如本文所使用，「癌細胞」、「癌性細胞」或「腫瘤細胞」係指特徵在於此不受調控之細胞生長及侵入性特性之細胞。術語「癌症」涵蓋所有類型之癌症，包括但不限於所有形式之癌、黑色素瘤、胚細胞瘤、肉瘤、淋巴瘤及白血病，包括但不限於膀胱癌、膀胱癌、腦瘤、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、子宮內膜癌、肝細胞癌、喉癌、肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、腎癌及甲狀腺癌、急性淋巴球性白血病、急性骨髓性白血病、室管膜瘤、尤英氏肉瘤、神經膠質母細胞瘤、神經管胚細胞瘤、成神經細胞瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、橫紋肌樣癌及腎胚細胞瘤(威爾姆氏瘤)。
「化療劑」為用於治療癌症之化合物或生物製劑。化療劑之實例包括烷化劑諸如塞替派及環磷醯胺(CYTOXAN®)；磺酸烷基酯諸如白消安、英丙舒凡及哌泊舒凡；氮丙啶類諸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替派(meturedopa)及烏瑞替派(uredopa)；乙烯亞胺及甲基密胺，包括六甲蜜胺、三亞乙基密胺、三亞乙基磷醯胺、三亞乙基硫代磷醯胺及三羥甲基密胺；番荔枝內酯(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氫大麻酚(屈大麻酚，MARINOL®)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙鹼；樺木酸；喜樹鹼(包括合成類似物托泊替康(HYCAMTIN®)、CPT-11(伊立替康，CAMPTOSAR®)；乙醯基喜樹鹼、莨菪素及9-胺基喜樹鹼)；苔蘚抑素；培美曲塞；callystatin；CC-1065(包括其合成類似物阿多來新、卡澤來新及比澤來新)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；念珠藻環肽(尤其是念珠藻環肽1及念珠藻環肽8)；多拉司他汀；多卡米星(包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；艾榴塞洛素；水鬼蕉鹼；TLK-286；CDP323，口服α-4整合素抑制劑；sarcodictyin；海綿抑素；氮芥類諸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、膽磷醯胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀、異環磷醯胺、氮芥、鹽酸氧氮芥、美法侖、新氮芥、苯芥膽甾醇、潑尼莫司汀、曲磷胺、烏拉莫司汀；硝基脲類諸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素類諸如烯二炔抗生素(例如刺孢黴素，尤其是刺孢黴素γ1I及刺孢黴素ΩI1 (參見，例如Nicolaou等人 ,Angew. Chem Intl. Ed. Engl ., 33: 183-186 (1994))；達內黴素，包括達內黴素A；埃斯培拉黴素；以及新制癌菌素生色團及有關色蛋白烯二炔抗生素生色團)、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素、氨茴黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸、博來黴素、放線菌素、carabicin、洋紅黴素、嗜癌黴素、色黴素、更生黴素、柔紅黴素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正白胺酸、多柔比星(包括ADRIAMYCIN®、嗎啉代-多柔比星、氰基嗎啉代-多柔比星、2-吡咯啉代-多柔比星、多柔比星HCl脂質體注射劑(DOXIL®)及脫氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊達比星、麻西羅黴素、絲裂黴素類諸如絲裂黴素C、麥考酚酸、諾拉黴素、橄欖黴素、培洛黴素、泊非黴素、嘌羅黴素、三鐵阿黴素、羅多比星、鏈黑黴素、鏈佐星、殺結核菌素、烏苯美司、淨司他丁、佐柔比星；抗代謝藥諸如甲氨蝶呤、吉西他賓(GEMZAR®)、喃氟啶(UFTORAL®)、卡培他濱(XELODA®)、埃博黴素及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物諸如二甲葉酸、甲胺蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙；嘌呤類似物諸如氟達拉濱、6-巰嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物諸如安西他濱、阿紮胞苷、6-氮雜尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脫氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱及氟尿苷；抗腎上腺類諸如氨魯米特、米托坦、曲洛司坦；葉酸補充劑諸如亞葉酸(frolinic acid)；醋葡醛內酯；醛磷醯胺糖苷；胺基酮戊酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比生群；依達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(defofamine)；秋水仙胺；地吖醌；elfornithine；依利醋銨；依託格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達明；美登素類化合物諸如美坦辛及安絲菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達醇；尼曲吖啶；噴司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基醯肼；丙卡巴肼；PSK®多醣複合物(JHS Natural Products, Eugene, OR)；雷佐生；根黴素；西佐喃(sizofiran)；鍺螺胺；替奴佐酸；三亞胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；單端孢黴烯類(尤其為T-2毒素、疣孢菌素A、桿孢菌素A及蛇形菌素)；烏拉坦；長春地辛(ELDISINE®、FILDESIN®)；達卡巴嗪；甘露氮芥；二溴甘露醇；二溴衛矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷(「Ara-C」)；塞替派；紫杉烷，例如紫杉醇(TAXOL®)、紫杉醇之白蛋白工程化奈米顆粒調配物(ABRAXANETM )，及多西紫杉醇(TAXOTERE®)；苯丁酸氮芥；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺蝶呤；鉑類似物諸如順鉑及卡波鉑；長春花鹼(VELBAN®)；鉑；依託泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌；長春新鹼(ONCOVIN®)；奧克賽鉑；亞葉酸；長春瑞濱(NAVELBINE®)；諾安托；依達曲沙；道諾黴素；胺基蝶呤；伊班膦酸鹽；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視色素，諸如視黃酸；上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物；以及上述二或更多者之組合諸如CHOP，環磷醯胺、多柔比星、長春新鹼與潑尼龍之混合療法之縮寫；及FOLFOX，具有奧克賽鉑(ELOXATINTM )與5-FU及亞葉酸組合之治療方案之縮寫。
化療劑之額外實例包括用於調控、減少、阻斷或抑制可促進癌症生長之激素作用之抗激素劑，且通常呈全身(systemic或whole-body)治療之形式。其自身可為激素。實例包括抗雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包括例如它莫昔芬(包括NOLVADEX®它莫昔芬)、雷洛昔芬(EVISTA®)、屈洛昔芬、4-羥基它莫昔芬、曲沃昔芬、克昔芬、LY117018、奧那司酮及托瑞米芬(FARESTON®)；抗孕酮；雌激素受體下調劑(ERD)；雌激素受體拮抗劑，諸如氟維司群(FASLODEX®)；用於遏制或關閉卵巢之藥劑，例如釋黃體素(LHRH)促效劑，諸如乙酸亮丙瑞林(LUPRON®及ELIGARD®)、乙酸戈舍瑞林、乙酸布舍瑞林及曲普瑞林；抗雄激素，諸如氟他胺、尼魯米特及比卡魯胺；及抑制調控腎上腺中雌激素產生之芳香酶的芳香酶抑制劑，諸如4(5)-咪唑、胺魯米特、乙酸甲地孕酮(MEGASE®)、依西美坦(AROMASIN®)、福美司坦(formestanie)、法倔唑、伏氯唑(RIVISOR®)、來曲唑(FEMARA®)及阿那曲唑(ARIMIDEX®)。此外，化療劑之此類定義包括雙膦酸鹽，諸如氯膦酸鹽(例如，BONEFOS®或OSTAC®)、依替膦酸鹽(DIDROCAL®)、NE-58095、唑來膦酸/唑來膦酸鹽(ZOMETA®)、阿侖膦酸鹽(FOSAMAX®)、帕米膦酸鹽(AREDIA®)、替魯膦酸鹽(SKELID®)或利塞膦酸鹽(ACTONEL®)；以及曲沙他濱(troxacitabine) (1,3-二氧戊環核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，尤其抑制涉及異常細胞增殖之信號傳導途徑中之基因表現者，諸如，例如PKC-α、Raf、H-Ras及表皮生長因子受體(EGF-R)；疫苗，諸如THERATOPE®疫苗及基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN®疫苗、LEUVECTIN®疫苗及VAXID®疫苗；拓撲異構酶1抑制劑(例如LURTOTECAN®)；抗雌激素，諸如氟維司群；EGFR抑制劑，諸如埃羅替尼或西妥昔單抗；抗VEGF抑制劑，諸如貝伐單抗；arinotecan；rmRH (例如，ABARELIX®)；17AAG (格爾德黴素衍生物，其為熱休克蛋白(Hsp) 90毒藥)及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。
「化療劑」之定義中亦包括：(i)用於調控或抑制針對腫瘤之激素作用的抗激素劑，諸如抗雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包括例如它莫昔芬(包括NOLVADEX®；檸檬酸它莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羥基它莫昔芬、曲沃昔芬、克昔芬、LY117018、奧那司酮及FARESTON®(檸檬酸托瑞米芬)；(ii)抑制調控腎上腺中雌激素產生之芳香酶的芳香酶抑制劑，諸如4(5)-咪唑、胺魯米特、MEGASE®(乙酸甲地孕酮)、AROMASIN®(依西美坦；Pfizer)、福美司坦、法倔唑、RIVISOR®(伏氯唑)、FEMARA®(來曲唑；Novartis)及ARIMIDEX®(阿納曲唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，諸如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林及戈舍瑞林；以及曲沙他濱(1,3-二氧雜環戊烷胞嘧啶核苷類似物)；(iv)蛋白激酶抑制劑；(v)脂質激酶抑制劑；(vi)反義寡核苷酸，尤其抑制異常T細胞增殖所涉及之信號傳導路徑中基因表現者，例如PKC-α、Ralf及H-Ras；(vii)核糖酶，諸如VEGF表現抑制劑(例如ANGIOZYME®)及HER2表現抑制劑；(viii)疫苗，諸如基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN®、LEUVECTIN®及VAXID®；PROLEUKIN® rIL-2；拓撲異構酶1抑制劑，諸如LURTOTECAN®；ABARELIX® rmRH；(ix)抗血管生成劑，諸如貝伐單抗(AVASTIN®，Genentech)；及(x)上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸及衍生物。
在一些實施例中，化療劑為免疫治療劑。如本文所使用，「免疫治療劑」為增強免疫系統以特異性或非特異性幫助對抗癌症之化合物。免疫治療劑包括增強免疫系統之單株抗體及非特異性免疫療法，諸如細胞介素、白細胞介素(例如IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21)、干擾素(例如IFN-α、IFN-β、IFN-γ)、GM-CSF、沙利度胺(THALOMID®，Celgene)、來那度胺((REVLIMID®，Celgene)、泊馬度胺(POMALYST®，Celgene)、咪喹莫特(ZYCLARA®，Valeant)。可用作化療劑之單株抗體之非限制性實例包括曲妥珠單抗(HERCEPTIN®，Genentech)、貝伐單抗(AVASTIN®，Genentech)、西妥昔單抗(ERBITUX®，Bristol-Myers Squibb)、帕尼單抗(VECTIBIX®，Amgen)、帕尼單抗(VECTIBIX®，Amgen)、伊匹單抗(YERVOY®，Bristol-Myers Squibb)、利妥昔單抗(RITUXAN®，Genentech)、阿侖珠單抗(CAMPATH®，Genzyme)、奧法木單抗(ARZERRA®，Genmab)、吉妥珠單抗奧佐米星(MYLOTARG®，Wyeth)、本圖希單抗維度汀(brentuximab vedotin) (ADCETRIS®，Seattle Genetics)、經90 Y標記之替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan) (ZEVALIN®，Biogen Idec)、經131 I標記之托西莫單抗(BEXXAR®，GlaxoSmithKline)、ado-曲妥珠單抗emtansine (KADCYLA®，Genentech)、蘭妥莫單抗(BLINCYTO®，Amgen)、培妥珠單抗(PERJETA®，Genentech)、阿托珠單抗(obinutuzumab)(GAZYVA®，Genentech)、納武單抗(OPDIVO®，) Bristol-Myers Squibb)、派姆單抗(KEYTRUDA®，Merck)、皮地利珠單抗(CureTech)、MPDL3280A (描述於WO2010/077634中，其以全文引用的方式併入本文中)、MDX-1105 (描述於WO2007/005874中，其以全文引用的方式併入本文中)及MEDI4736 (描述於WO2011/066389及US2013/034559中，其各者以全文引用的方式併入本文中)。另一種有用的免疫治療劑為AMP-224 (描述於WO2010/027827及WO2011/066342中，其各者以全文併入本文中)。化合物
本文揭示之化合物為式I或Ia化合物或其鹽(例如醫藥學上可接受之鹽)、溶劑合物(例如水合物)、前藥、代謝物或衍生物。此類化合物為HPK1之有用抑制劑。
在一個態樣中，提供一種式I化合物：(I) 或其鹽(例如醫藥學上可接受之鹽)、溶劑合物(例如水合物)、前藥、代謝物或衍生物，其中： R1 為氫、鹵素、氰基、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C1-6 鹵烷基、C1-6 羥烷基、羥基、C1-6 烷氧基、視情況經取代之胺基或視情況經取代之醯胺基； R2 為(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)或(h)： (a) 5至10員雜芳基或5至10員雜環基，其具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且視情況經一、二、三、四或五個取代基取代；或 (b) C6-10 芳基，其視情況經一、二、三、四或五個取代基取代；或 (c) 氫、–NHSO2 Ra 、–SO2 NRa Rb ；或–SO2 NH2 ；其中各Ra 獨立地為C1-6 烷基，且Rb 為氫或C1-6 烷基；或 (d) –ORa1 或–(C1-6 伸烷基)–ORa1 ；其中各Ra1 獨立地為視情況經C6-10 芳基取代之C1-6 烷基；5至10員雜芳基；或5至10員雜環基；其中該5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經取代；或 (e) C1-6 烷基，其視情況經一至五個取代基取代；或 (f) C3-8 環烷基，其視情況經一至五個取代基取代； (g) –C(O)NRa2 Rb2 ，其中各Ra2 獨立地為氫或C1-6 烷基，且Rb2 為氫、C1-6 烷基、5至10員雜芳基或5至10員雜環基，其中該5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經取代；或 (h) 5至10員雜芳基，其與選自由以下所組成之群組之環稠合：5或6員雜芳基、5至10員雜環基、C6 芳基及C3-7 環烷基，其中R2 之該5至10員雜芳基及該稠環視情況經一至四個取代基取代； R3 為氫、氰基、鹵素、視情況經取代之C1-6 烷基、視情況經取代之C2-9 雜環基或視情況經取代之C1-6 烷氧基；且 R4 為A-C(O)-或D； A為C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-9 雜芳基、C2-9 雜環基、–NHRg 或–ORh ；其中A之該C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-9 雜芳基及C2-9 雜環基視情況獨立地經一、二、三、四或五個取代基取代； Rg 及Rh 獨立地為C1-6 烷基、C2-6 烯基、C3-7 環烷基、C6-10 芳基、C2-9 雜芳基或C2-9 雜環基；其中Rg 及Rh 之該C1-6 烷基、C2-6 烯基、C3-7 環烷基、C6-10 芳基、C2-9 雜芳基及C2-9 雜環基視情況經一、二、三、四或五個取代基取代；且 D為氫、或具有1至4個選自O、S及N之雜原子之5至10員雜芳基；或與選自由以下所組成之群組之環稠合之5至10員雜芳基：5或6員雜芳基、5至10員雜環基、C6 芳基及C3-8 環烷基；其中D之該5至10員雜芳基及該稠環視情況經一、二、三、四或五個取代基取代。
在式(I)之一般結構之一個態樣中： R1 為氫、鹵素、甲基、CF3 、CHF2 、CH2 OH或氰基； R2 為： 5至10員雜芳基或5至10員雜環基，其具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且視情況經一、二、三或四個取代基R6 、R7 、R8 及R8’ 取代，該等取代基之各者獨立地選自由以下所組成之群組： i. 分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基或C1-6 伸烯基，其中該烷基、烯基及伸烯基可視情況經一至四個羥基、鹵素、腈、胺基、單(C1-6 )烷基胺基-、二(C1-6 )烷基胺基-、-SO2 Ry 、SONRy 、–(CO)NRy Rz 或–NRy (CO)Rz 取代，其中Ry 及Rz 在各情況下獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代； ii. NRy Rz -C(O)-，其中Ry 及Rz 各自獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代取代； iii. 羥基(C1-6 )烷基； iv. C1-6 烷氧基，其中該烷氧基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代； v. C3-9 環烷基、經取代之或未經取代之C6 芳基、經取代之或未經取代之5員雜芳基或C2-9 雜環基； vi. 鹵素； vii. 胺基； viii. 氰基； ix. –NRy (CO)Rz ，其中Ry 及Rz 各自獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代取代； x. –SO2 R’，其中R’為H或C1-6 烷基； xi. –SO2 NR’R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基；且 xii. 其中該雜環基中嵌入之碳與其所結合之氧一起可形成羰基；或 R2 為C6-10 芳基，其具有一、二、三或四個取代基，該等取代基選自由以下所組成之群組：分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C3-4 環烷基，其中該烷基、烯基、伸烯基及環烷基可經胺基、羥基、腈、鹵素及醯胺；氰基、羥基、鹵素、腈、胺基、單(C1-6 )烷基胺基-、二(C1-6 )烷基胺基-、-SO2 Rc 、SONRd 、–(CO)NRc Rd 或–NRc (CO)Rd 取代， 其中Rc 及Rd 各自獨立地選自由氫及C1-6 烷基所組成之群組，其中該烷基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代；或 R2 為氫或–SO2 NH2 ； R3 為氫、氰基或鹵素；且 R4 為A-C(O)-，其中A為： i. C3-7 環烷基、C2-9 雜芳基或C2-9 雜環基，其中該環烷基、雜芳基或雜環基可視情況經R5 之一、二、三或四者取代，其中R5 係選自由以下所組成之群組：氫、分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基，其中該烷基、烯基及伸烯基可經胺基、C1-6 烷氧基、羥基、腈、鹵素、-SO2 Re 及醯胺；鹵素、羥基(C1-6 )烷基、鹵基(C1-6 )烷基、氰基、氰基(C1-6 )烷基、羥基、C1-6 烷氧基、胺基、C2-9 雜芳基、-SO2 Re 及NRe Rf -C(O)-取代，其中Re 及Rf 獨立地選自由氫及分支鏈或直鏈C1-6 烷基所組成之群組； 或，該環烷基或雜環基與R5 之兩者一起形成雙環或螺環，其中連接至不同碳之R5 之兩者與其各自所連接之碳一起形成雙環，或連接至同一碳之R5 之兩者與其各自所連接之碳一起形成螺環；及 ii. –NHRg ，其中Rg 係選自由以下所組成之群組： a.分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基及C3-7 環烷基，其中該烷基、烯基、伸烯基、雜環基及環烷基可視情況經羥基、鹵素、-CF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 )烷基胺基、單(C1-6 )烷基胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、–SO2 R’、–SO2 NR’R”、–(CO)NR’R”或–NR’(CO)R”取代，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基；及 b. C2-9 雜芳基或C6-10 芳基，其中該雜芳基具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且其中該芳基及雜芳基可視情況經一、二、三或四個取代基取代，該等取代基選自由以下所組成之群組：分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基、C3-7 環烷基、羥基、鹵素、-CF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 )烷基胺基、單(C1-6 )烷基胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、-SO2 R’、–SO2 NR’R”、–(CO)NR’R”及–NR’(CO)R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基； 或R4 為D，其中D為： 5至10員雜芳基，其具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且視情況經一、二、三或四個取代基取代。
在一個態樣中，提供式Ia化合物：(Ia) 或其鹽(例如醫藥學上可接受之鹽)、溶劑合物(例如水合物)、前藥、代謝物或衍生物，其中： R1 為氫、鹵素、甲基、CF3 、CHF2 、CH2 OH或氰基； R2 為(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)或(h)： (a) 5至10員雜芳基或5至10員雜環基，其具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且視情況經一、二、三或四個取代基R6 、R7 、R8 及R8’ 取代，該等取代基之各者獨立地選自由以下所組成之群組： i. 分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基或C1-6 伸烯基，其中該烷基、烯基及伸烯基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、腈、胺基、單(C1-6 烷基)胺基-、二(C1-6 烷基)胺基-、-SO2 Ry 、-S(O)NRy 、–(CO)NRy Rz 及-NRy (CO)Rz ，其中Ry 及Rz 在各情況下獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組； ii. NRy Rz -C(O)-，其中Ry 及Rz 各自獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組； iii. 羥基(C1-6 烷基)； iv. C1-6 烷氧基，其中該烷氧基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組； v. C3-9 環烷基、經取代之或未經取代之C6 芳基、經取代之或未經取代之5員雜芳基或C2-9 雜環基； vi. 鹵素； vii. 胺基； viii. 氰基； ix. –NRy C(O)Rz ，其中Ry 及Rz 各自獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組； x. –SO2 R’，其中R’為H或C1-6 烷基； xi. –SO2 NR’R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基； xii. –NR’C(O)OR” 、–NR’SO2 NR” 或–NR’S(O)R” ，其中R’獨立地為H或C1-6 烷基，且R”獨立地為C1-6 烷基、鹵基(C1-6 烷基)或視情況經C1-6 烷基取代之C6-10 芳基；且 xiii. 其中該雜環基中嵌入之碳與其所結合之氧一起可形成羰基；或 (b) C6-10 芳基，其具有一、二、三或四個取代基，該等取代基選自由以下所組成之群組：分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C3-4 環烷基，其中該烷基、烯基、伸烯基及環烷基可經胺基、羥基、氰基、鹵素、醯胺、單(C1-6 烷基)胺基-、二(C1-6 烷基)胺基-、-SO2 Rc 、-S(O)NRd 、-C(O)NRc Rd 及–NRc C(O)Rd 取代， 其中Rc 及Rd 各自獨立地選自由氫及C1-6 烷基所組成之群組，其中該烷基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代；或 (c) 氫、–NHSO2 Ra 、–SO2 NRa Rb ；或–SO2 NH2 ；其中各Ra 獨立地為C1-6 烷基，且Rb 為氫或C1-6 烷基；或 (d) –ORa1 或–(C1-6 烷基)–ORa1 ；其中各Ra1 獨立地為視情況經C6-10 芳基取代之C1-6 烷基；5至10員雜芳基；或5至10員雜環基；其中該5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基；或 (e) C1-6 烷基，其視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、氰基、胺基、單(C1-6 烷基)胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C3-8 環烷基、C6-10 芳基、5至10員雜芳基及5至10員雜環基；其中該C3-8 環烷基、C6-10 芳基、5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基；或 (f) C3-8 環烷基，其視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：C1-6 烷基、羥基、鹵素、氰基、胺基、單(C1-6 烷基)胺基、二(C1-6 烷基)胺基、5至10員雜芳基及5至10員雜環基；其中該5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基； (g) –C(O)NRa2 Rb2 ，其中各Ra2 獨立地為氫或C1-6 烷基，且Rb2 為氫、C1-6 烷基、5至10員雜芳基或5至10員雜環基，其中該5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：C1-6 烷基、C3-7 環烷基、側氧基、羥基、鹵基及氰基；或 (h) 5至10員雜芳基，其與選自由以下所組成之群組之環稠合：5或6員雜芳基、5至10員雜環基、C6 芳基及C3-7 環烷基，其中R2 之該5至10員雜芳基及該稠環視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基； R3 為C1-6 烷基、氫、氰基或鹵素；且 R4 為A-C(O)-或D，其中A為： i.C3-7 環烷基、C2-9 雜芳基或C2-9 雜環基，其中該環烷基、雜芳基或雜環基可視情況經R5 之一、二、三或四者取代，其中R5 係選自由以下所組成之群組：氫、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-6 烯基、C2-6 伸烯基、鹵素、氰基、羥基、C1-6 烷氧基、視情況經取代之C2-9 雜芳基、-SO2 Re 、-NRe Rf 、-NRe C(O)Rf 及NRe Rf -C(O)-；其中R5 之該C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-6 烯基、C2-6 伸烯基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：C1-6 烷氧基、羥基、鹵素、氰基、-SO2 Re 、-NRe Rf 及-C(O)NRe Rf ，其中Re 及Rf 在每次出現時獨立地選自由以下所組成之群組：氫及分支鏈或直鏈C1-6 烷基； 或，該環烷基或雜環基與R5 之兩者一起形成雙環或螺環，其中連接至不同原子之R5 之兩者與其各自所連接之碳一起形成雙環，或連接至同一碳之R5 之兩者與其各自所連接之碳一起形成螺環； ii. –NHRg 或–ORh ，其中Rg 及Rh 獨立地選自由以下所組成之群組： a. 分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C3-5 環烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基及C3-7 環烷基，其中該烷基、烯基、伸烯基、雜環基及環烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、-CHF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 烷基)胺基、單(C1-6 烷基)胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、–SO2 R’、–SO2 NR’R”、–C(O)NR’R”及-NR’C(O)R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基；及 b. C2-9 雜芳基或C6-10 芳基，其中該雜芳基具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且其中該芳基及雜芳基可視情況經一、二、三或四個取代基取代，該等取代基選自由以下所組成之群組：分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基、C3-7 環烷基、羥基、鹵素、-CHF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 烷基)胺基、單(C1-6 烷基)胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、-SO2 R’、–SO2 NR’R”、–C(O)NR’R”及–NR’C(O)R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基；或 iii. C1-6 烷基，其視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、氰基、C1-6 烷氧基、胺基、單(C1-6 烷基)胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C3-7 環烷基、C6-10 芳基、5至10員雜芳基及5至10員雜環基；其中該C3-7 環烷基、C6-10 芳基、5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基；且 D為氫或具有1至4個選自O、S及N之雜原子之5至10員雜芳基；且視情況經一、二、三或四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基；或5至10員雜芳基，其與選自由以下所組成之群組之環稠合：5或6員雜芳基、5至10員雜環基、C6 芳基及C3-8 環烷基，其中D之該5至10員雜芳基及該稠環視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基。
在一些實施例中，化合物為式I或Ia，其不為選自由以下所組成之群組之一或多種化合物：N-(8-胺基-3-異喹啉基)-N'-乙基-脲、5-[(8-胺基-3-異喹啉基)胺基]-2-吡嗪甲腈及5-[(8-胺基-3-異喹啉基)胺基]-3-[(1R)-2-(二甲基胺基)-1-甲基乙氧基]-2-吡嗪甲腈及其鹽。在式I或Ia化合物之一些實施例中，R2 及R3 之至少一者不為氫。在式I或Ia化合物之一些實施例中，R2 不為氫。
在式I或Ia化合物之一些實施例中，R5 之視情況經取代之C2-9 雜芳基視情況經C1-6 烷基取代，該C1-6 烷基視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、氰基、C1-6 烷氧基、胺基-(C1-6 烷氧基)-及C2-9 雜環基，該C2-9 雜環基視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基。
有用的R1 之值在以上描述。在一實施例中，R1 為氫，且所有其他變數如式I或Ia中所述。在一實施例中，R1 為鹵素，且所有其他變數如式I或Ia中所述。在此實施例之一態樣中，R1 為氟，且所有其他變數如式I或Ia中所述。在一實施例中，R1 為氰基，且所有其他變數如式I或Ia中所述。
有用的R3 之值在以上描述。在一實施例中，R3 為氫，且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所述。在一實施例中，R3 為鹵素，且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所述。在此實施例之某些態樣中，R3 為氟、氯或溴，且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所述。在一特定態樣中，R3 為氟，且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所述。
有用的R4 之值在以上描述。在某些態樣中，R4 為A-C(O)-，其中A為C3-6 環烷基，其可視情況經R5 之一或兩者取代，且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所述。在某些態樣中，A為C3-5 環烷基，其可視情況經R5 之一或兩者取代，且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所述。在一特定態樣中，A為環丙基，其可視情況經R5 之一或兩者取代，且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所述。
在所有其他變數如以上任何實施例中所述之實施例中，R2 為–A-C(O)-。在一些實施例中，A為視情況經取代之C1-6 烷基、視情況經取代之C3-7 環烷基、視情況經取代之C2-9 雜芳基、視情況經取代之C2-9 雜環基、–NHRg 或–ORh 。
在一些實施例中，A為： i. C3-7 環烷基、C2-9 雜芳基或C2-9 雜環基，其中該環烷基、雜芳基或雜環基可視情況經R5 之一、二、三或四者取代，其中R5 係選自由以下所組成之群組：氫、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-6 烯基、C2-6 伸烯基、鹵素、氰基、羥基、C1-6 烷氧基、視情況經取代之C2-9 雜芳基、-SO2 Re 、-NRe Rf 、-NRe C(O)Rf 、-NRe SO2 Rf 及NRe Rf -C(O)-；其中R5 之該C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-6 烯基、C2-6 伸烯基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：C1-6 烷氧基、羥基、鹵素、氰基、-SO2 Re 、-NRe Rf 、-NRe C(O)Rf 及-C(O)NRe Rf ，其中Re 及Rf 在每次出現時獨立地選自由以下所組成之群組：氫、分支鏈或直鏈C1-6 烷基及C3-7 環烷基； 或，該環烷基或雜環基與R5 之兩者一起形成雙環或螺環，其中連接至不同原子之R5 之兩者與其各自所連接之碳一起形成雙環，或連接至同一碳之R5 之兩者與其各自所連接之碳一起形成螺環； ii. –NHRg 或–ORh ，其中Rg 及Rh 獨立地選自由以下所組成之群組： a. 分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基及C3-7 環烷基，其中該烷基、烯基、伸烯基、雜環基及環烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、-CHF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 烷基)胺基、單(C1-6 烷基)胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、–SO2 R’、–SO2 NR’R”、–C(O)NR’R”、-NR’C(O)R”、-NR’C(O)OR”、-NR’C(O)NR”R’”、-NR’SO2 NR”R’”或-NR’S(O)R” ，其中R’及R”’獨立地為H或C1-6 烷基且R”獨立地為C1-6 烷基、鹵基(C1-6 烷基)或視情況經C1-6 烷基取代之C6-10 芳基；或，R”及R’”與其所連接之氮一起形成經取代之或未經取代之雜環基；及 b. C2-9 雜芳基或C6-10 芳基，其中該雜芳基具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且其中該芳基及雜芳基可視情況經一、二、三或四個取代基取代，該等取代基選自由以下所組成之群組：分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基、C3-7 環烷基、羥基、鹵素、-CHF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 烷基)胺基、單(C1-6 烷基)胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、-SO2 R’、–SO2 NR’R”、–C(O)NR’R”及–NR’C(O)R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基；或 iii. C1-6 烷基，其視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、氰基、C1-6 烷氧基、胺基、單(C1-6 烷基)胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C3-7 環烷基、C6-10 芳基、5至10員雜芳基、5至10員雜環基、–SO2 R’、–SO2 NR’R”、–C(O)NR’R”、-NR’C(O)R”、-NR’C(O)OR”、-NR’C(O)NR”R’”、-NR’SO2 NR”R’”及-NR’S(O)R”； 其中R’及R”’獨立地為H或C1-6 烷基，且R”獨立地為C1-6 烷基、鹵基(C1-6 烷基)或視情況經C1-6 烷基取代之C6-10 芳基；或，R”及R’”與其所連接之氮一起形成視情況經取代之C3-7 雜環基。
在一些實施例中，A為C3-7 環烷基、C2-9 雜芳基或C2-9 雜環基，其中該環烷基、雜芳基或雜環基可視情況經R5 之一、二、三或四者取代，其中R5 係選自由以下所組成之群組：氫、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-6 烯基、C2-6 伸烯基、鹵素、氰基、羥基、C1-6 烷氧基、視情況經取代之C2-9 雜芳基、-SO2 Re 、-NRe Rf 、-NRe C(O)Rf 、-NRe SO2 Rf 及NRe Rf -C(O)-；其中R5 之該C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-6 烯基、C2-6 伸烯基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：C1-6 烷氧基、羥基、鹵素、氰基、-SO2 Re 、-NRe Rf 、-NRe C(O)Rf 及-C(O)NRe Rf ，其中Re 及Rf 在每次出現時獨立地選自由以下所組成之群組：氫、分支鏈或直鏈C1-6 烷基及C3-7 環烷基；或，該環烷基或雜環基與R5 之兩者一起形成雙環或螺環，其中連接至不同原子之R5 之兩者與其各自所連接之碳一起形成雙環，或連接至同一碳之R5 之兩者與其各自所連接之碳一起形成螺環。
在一些實施例中，A為視情況經取代之C3-7 環烷基。
在一些實施例中，A為C1-6 烷基，其視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、氰基、C1-6 烷氧基、胺基、單(C1-6 烷基)胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C3-7 環烷基、C6-10 芳基、5至10員雜芳基及5至10員雜環基、–SO2 R’、–SO2 NR’R”、–C(O)NR’R”、-NR’C(O)R”、-NR’C(O)OR”、-NR’C(O)NR”R’”、-NR’SO2 NR”R’”或-NR’S(O)R” ，其中R’及R”’獨立地為H或C1-6 烷基，且R”獨立地為C1-6 烷基、鹵基(C1-6 烷基)或視情況經C1-6 烷基取代之C6-10 芳基；或，R”及R’”與其所連接之氮一起形成經取代之或未經取代之雜環基；其中該C3-7 環烷基、C6-10 芳基、5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經取代(例如，經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基)。
有用的R5 之值在以上描述。在一實施例中，R5 係選自由以下所組成之群組：氫、氟、氰基、NH2 -C(O)-、C2-9 雜芳基、氰基(C1-6 )烷基及羥基(C1-6 )烷基，且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所述。在此實施例之特定態樣中，R5 為氟或氰基，且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所述。
在一實施例中，R5 為C2-9 雜芳基。在此實施例之特定態樣中，C2-9 雜芳基為含有至少一個氮之視情況經取代之雜芳基。在此實施例之特定態樣中，雜芳基為含有1或2個氮原子之視情況經取代之5員雜芳基。在此實施例之特定態樣中，5員雜芳基為視情況經取代之吡唑。
在一實施例中，至少一個R5 為氰基(C1-6 )烷基。在此實施例之特定態樣中，至少一個R5 為氰基-CH2 -。
在一實施例中，R5 為氫。
在一實施例中，R5 為以上所述之不為氫之基團，且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所述。
在R5 不為氫之實施例中，R4 為A-C(O)-，其中A為：、、或，其中v為零、一、二、三或四；X、Y及Z各自獨立地為不存在的或-CH2 -，且其中若存在，則X、Y及Z之各者上之H之零、一或兩者可為R5 ；且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所述。
在一實施例中，A為，其中v為零、一或二，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所述。
在一實施例中，A為，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如以上所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R5 不為氫，且R4 為A-C(O)-，其中A為、、或，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如以上所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，A為，其中v為零、一或二，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如以上所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R5 不為氫，且R4 為A-C(O)-，其中A為、、或，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如以上所述之任何實施例中所定義。
在一些實施例中，R4 為，其中v為0、1、2或3；且R5 係選自由以下所組成之群組：C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-6 烯基、C2-6 伸烯基、鹵素、氰基、羥基、C1-6 烷氧基、視情況經取代之C2-9 雜芳基、-SO2 Re 、-NRe Rf 、-NRe C(O)Rf 、-NRe SO2 Rf 及NRe Rf -C(O)-；其中R5 之該C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-6 烯基、C2-6 伸烯基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：C1-6 烷氧基、羥基、鹵素、氰基、-SO2 Re 、-NRe Rf 、-NRe C(O)Rf 及-C(O)NRe Rf ，其中Re 及Rf 在每次出現時獨立地選自由以下所組成之群組：氫、分支鏈或直鏈C1-6 烷基及C3-7 環烷基。
在所有其他變數如以上任何實施例中所定義之實施例中，R5 係選自由以下所組成之群組：氫、氟、氰基、NH2 -C(O)-、烷基-(C1-6 )烷氧基-、視情況經取代之C2-9 雜芳基及氰基(C1-6 )烷基。在此等實施例中，R5 為氟或氰基。在此等實施例中，R5 為氫。在此等實施例中，R5 為視情況經取代之C2-9 雜芳基或氰基(C1-6 )烷基。在此等實施例中，R5 為氰基-CH2 -。在一些實施例中，至少一個R5 為C1-6 烷基(例如，甲基)。
在所有其他變數如以上任何實施例中所定義之實施例中，至少一個R5 為視情況經取代之C2-9 雜芳基之化合物。
在所有其他變數如以上任何實施例中所定義之實施例中，至少一個R5 為視情況經取代之C2-9 雜芳基之化合物為含有1或2個氮原子之視情況經取代之5員雜芳基。
在所有其他變數如以上任何實施例中所定義之實施例中，視情況經取代之5員雜芳基為視情況經取代之吡唑之化合物。
在所有其他變數如以上任何實施例中所定義之實施例中，視情況經取代之吡唑為之化合物，其中波形線表示與環丙基環之連接點；且其中RB1 為分支鏈或直鏈C1-6 烷基，其中烷基可視情況經一至四個羥基、鹵素、腈、胺基、-O-(C1-6 )烷基、-O-(C1-6 )烷基胺基-、二(C1-6 )烷基胺基-或–NRy (CO)Rz 取代，其中Ry 及Rz 在各情況下獨立地為氫或C1-6 烷基；或-SO2 R’，其中R’為C1-6 烷基。
在所有其他變數如以上任何實施例中所定義之實施例中，RB1 為視情況經取代之直鏈C1-6 烷基之化合物。
在所有其他變數如以上任何實施例中所定義之實施例中，視情況經取代之直鏈C1-6 烷基為甲基之化合物。
在一些實施例中，R4 為，其中v為2，一個R5 為甲基且第二個R5 為1-甲基吡唑-4-基。
在一些實施例中，R4 為、、、、或。在一些實施例中，R4 為。在一些實施例中，R4 為。在一些實施例中，R4 為。在一些實施例中，R4 為、或。
在一些實施例中，式I或Ia化合物係選自化合物號195、196、197、198、279、280、281、282及358或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，R4 為A-C(O)-，其中A為–NHRg 或–ORh ，其中Rg 及Rh 獨立地為C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基、C3-7 環烷基、C2-9 雜芳基或C6-10 芳基；其各者可如本文所詳述視情況述經取代。在一些實施例中，Rg 及Rh 獨立地選自由以下所組成之群組： a. 分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基及C3-7 環烷基，其中該烷基、烯基、伸烯基、雜環基及環烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、-CHF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 烷基)胺基、單(C1-6 烷基)胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、–SO2 R’、–SO2 NR’R”、–C(O)NR’R”、-NR’C(O)R”、-NR’C(O)OR”、-NR’C(O)NR”R’”、-NR’SO2 NR”R’”或-NR’S(O)R” ，其中R’及R”’獨立地為H或C1-6 烷基且R”獨立地為C1-6 烷基、鹵基(C1-6 烷基)或視情況經C1-6 烷基取代之C6-10 芳基；或R”及R’”與其所連接之氮一起形成經取代之或未經取代之雜環基；及 b. C2-9 雜芳基或C6-10 芳基，其中該雜芳基具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且其中該芳基及雜芳基可視情況經一、二、三或四個取代基取代，該等取代基選自由以下所組成之群組：分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基、C3-7 環烷基、羥基、鹵素、-CHF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 烷基)胺基、單(C1-6 烷基)胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、-SO2 R’、–SO2 NR’R”、–C(O)NR’R”及–NR’C(O)R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基。
在實施例中，R4 為A-C(O)-，其中A為：ii.–NHRg ，其中Rg 係選自由以下所組成之群組：a.分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基及C3-7 環烷基，其中該烷基、烯基、伸烯基、雜環基及環烷基可視情況經羥基、鹵素、-CF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 )烷基胺基、單(C1-6 )烷基胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、–SO2 R’、–SO2 NR’R”、–(CO)NR’R”或–NR’(CO)R”取代，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基；及b.C2-9 雜芳基或C6-10 芳基，其中該雜芳基具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且其中該芳基及雜芳基可視情況經一、二、三或四個取代基取代，該等取代基選自由以下所組成之群組：分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基、C3-7 環烷基、羥基、鹵素、-CF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 )烷基胺基、單(C1-6 )烷基胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、–SO2 R’、–SO2 NR’R”、–(CO)NR’R”及–NR’(CO)R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基，且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文任何實施例中所述。
在所有其他變數如以上任何實施例中所定義之實施例中，R2 為D。在一些實施例中，D為5至10員雜芳基，其具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且視情況經一、二、三或四個取代基取代，其中連接至不同原子之取代基之兩者與各自所連接之原子一起形成雙環或三環，其中該雙環或三環視情況經取代；或，該5至10員雜芳基與選自由以下所組成之群組之環稠合：5或6員雜芳基、5至10員雜環基、C6 芳基及C3-8 環烷基，其中D之該5至10員雜芳基及該稠環視情況經取代，其中該稠環形成視情況經取代之雙環或三環系統。
在一些實施例中，D為氫或具有1至4個選自O、S及N之雜原子之5至10員雜芳基；且視情況經取代(例如，經一、二、三或四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基及C1-6 烷氧基)；或5至10員雜芳基，其與選自由以下所組成之群組之環稠合：5或6員雜芳基、5至10員雜環基、C6 芳基及C3-8 環烷基，其中D之該5至10員雜芳基及該稠環視情況經取代(例如經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基及C1-6 烷氧基)。
在一實施例中，R4 為D，其中D為含有至少一個氮之視情況經取代之雜芳基。在實施例中，雜環基為含有1或2個氮原子之視情況經取代之5員雜環基。在實施例中，5員雜環基為視情況經取代之吡唑。
在一實施例中，視情況經取代之吡唑為，其中波形線表示與N之連接點；且其中RA 為分支鏈或直鏈C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個羥基、鹵素、腈、胺基、單(C1-6 )烷基胺基-、二(C1-6 )烷基胺基-或–NRy (CO)Rz 取代，其中Ry 及Rz 在各情況下獨立地為氫或C1-6 烷基。
在一實施例中，RA 為經羥基、鹵素、腈或胺基取代之直鏈C1-6 烷基。
在一實施例中，直鏈C1-6 烷基為經腈取代之乙基。
在一實施例中，RA 為。
在一實施例中，RA 為或。
在一些實施例中，視情況經取代之吡唑與另一環部分稠合形成視情況經取代之雙環或三環，例如，具有稠合至1,5鍵之另一環部分之3-吡唑基。在一些實施例中，D為雙環(或三環，其中存在進一步環稠合)，其為、、或， 其中X’及Y’各自獨立地為C、N、S或O；且其中該雙環視情況經一、二、三或四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：氫、羥基、胺基及C1-6 烷基；且其中該等取代基之兩者與其所連接之原子一起可形成C3 -C5 螺環或C2-9 雜芳基環；其中該C2-9 雜芳基環可稠合至該雙環形成三環。在此等實施例之一些中，X’或Y’之至少一者為N。
在一些實施例中，D為、,、、或。
在一些實施例中，式I或Ia化合物係選自化合物號228、229、230、247、276、315及316或其醫藥學上可接受之鹽。
在所有其他變數如本文所詳述之任何實施例中所定義之實施例中，D為具有式之5員雜芳基或具有式之6員雜芳基之化合物，其中： Q為NR20 、CR20 、O或S； 各T獨立地為N或CR21 ； 各Z獨立地為N或C，其條件為僅一個Z為N； 各R20 及R21 獨立地為氫、烷基、鹵烷基、烷氧基、鹵素、羥基或氰基；且 R22 及R23 與其所連接之原子一起形成雙環；其中該雙環可含有一或多個選自N、S及O之雜原子；且其中該雙環視情況經一、二、三、四或五個R30 取代； 其中各R30 獨立地為C1-6 烷基、C2-6 烯基、C3-7 環烷基、C3-7 雜環基、鹵素、氰基、側氧基、-NR31 R32 、-SO2 NR31 R32 、-C(O)NR31 R32 、-C(O)OR33 、-OR33 、-NR33 C(O)R34 、–NR33 SO2 R35 或–SO2 R35 ；其中R30 之該C1-6 烷基、C2-6 烯基、C3-7 環烷基及C3-7 雜環基視情況經一至四個R40 取代；或，兩個R30 基與其所連接之母部分一起形成視情況經一至四個R40 取代之環； 各R31 及R32 獨立地為氫或C1-6 烷基；或，R31 及R32 與其所連接之氮原子一起形成視情況經一至四個R40 取代之C3-7 雜環基； 各R33 及R34 獨立地為氫或C1-6 烷基； R35 為C1-6 烷基； 各R40 獨立地選自由以下所組成之群組：鹵素、氰基、側氧基、-NR41 R42 、-SO2 NR41 R42 、-C(O)NR41 R42 、-C(O)OR43 、-OR43 、-NR43 C(O)R44 、–NR43 SO2 R45 或-SO2 R45 ；C1-6 烷基、C1-6 鹵烷基[例如，-CHF2 或-CF3 ]、C2-9 雜芳基、C6-10 芳基、側氧基；或，兩個R40 基與其所連接之母部分一起形成視情況經一至三個取代基取代之環，該等取代基選自C1-6 烷基、C1-6 鹵烷基、羥基及側氧基； 各R41 及R42 獨立地為氫或C1-6 烷基；或，R41 及R42 與其所連接之氮原子一起形成視情況經一至三個取代基取代之C3-7 雜環基，該等取代基選自C1-6 烷基、C1-6 鹵烷基、羥基及側氧基； 各R33 及R34 獨立地為氫或C1-6 烷基；且 R35 為C1-6 烷基。
在一些實施例中，D為：、、或， 其中q為0、1、2、3、4、5或6；R36 獨立地為氫或R30 ；且R20 及R30 如本文所詳述。在此等實施例之一些中，R20 為氫、C1-6 烷基(例如甲基)、鹵素(例如氟)、羥基或C1-6 烷氧基(例如甲氧基)。在一些實施例中，R20 為H、Me、F或OH。在此等實施例之一些中，R36 為氫或C1-6 烷基(例如甲基)。在此等實施例之一些中，q為0。
在一些實施例中，D為：、或， 其中q為0、1、2、3、4、5或6；且R20 及R30 如本文所詳述。在此等實施例之一些中，q為0。在此等實施例之一些中，R20 為氫、C1-6 烷基(例如甲基)、鹵素(例如氟)、羥基或C1-6 烷氧基(例如甲氧基)。在一些實施例中，R20 為H、Me、F或OH。
在一些實施例中，D為：或， 其中R36 獨立地為氫或R30 ；且R20 及R30 如本文所詳述。在一些實施例中，R36 為氫或C1-6 烷基(例如甲基)；且R20 為氫。
在一些實施例中，其中D為或， 其中p為0、1、2、3或4；R36 獨立地為氫或R30 ；且R20 及R30 如本文所詳述。在一些實施例中，p為0。在一些實施例中，R36 為氫或C1-6 烷基(例如甲基)；且R20 為氫。
在一些實施例中，其中D為或， 其中X為CH2 、N、O或S；n為1、2、3或4；p為0、1、2、3或4；R36 為氫或R30 ；且R20 及R30 如本文所詳述。在此等實施例之一些中，X為CH2 且n為1。在一些實施例中，R36 為氫或C1-6 烷基(例如甲基)；且R20 為氫。
在一些實施例中，其中D為， 其中q為0、1、2、3、4、5或6；G獨立地為C或N；G’獨立地為N、NR46 、CR47 、S或O；R46 及R47 獨立地為氫或R40 ，且R20 及R40 如本文所詳述。在此等實施例之一些中，G之一者為C，且G之另一者為N。在一些實施例中，各G為C。在一些實施例中，G’之至少一者為N。在一些實施例中，G’之至少一者為CR47 。在一些實施例中，R47 為H。在一些實施例中，R20 為氫。
在一些實施例中，其中D為，其中R20 及R46 如本文所詳述。在一些實施例中，R46 為氫或C1-6 烷基(例如甲基)；且R20 為氫。
在一些實施例中，其中D為。
在一些實施例中，其中D為或， 其中Q為NR20 、O或S；X為CR38a R38b 、NR36 、S或O；X’為CR39a R39b 、NR36 、S、SO2 或O；R36 、R37a 、R37b 、R38a 及R38b 獨立地為氫或R30 ；R39a 及R39b 獨立地為氫或R30 ，或R39a 及R39b 與其所連接之碳原子一起形成C3-7 環烷基或C3-7 雜環基；且R20 及R30 如本文所詳述。在此等實施例之一些中，Q為NR20 。在此等實施例之一些中，Q為S。在一些實施例中，X為CH2 或NR36 。在一些實施例中，X’為CH2 。在一些實施例中，X’為SO2 。在一些實施例中，X’為CR39a R39b ，其中R39a 及R39b 與其所連接之碳原子一起形成環丙基。在一些實施例中，R36 為氫或C1-6 烷基(例如甲基)；且R20 為氫。
在一些實施例中，其中D為、或，其中X、X’、R20 及R36 如本文所詳述。在此等實施例之一些中，X為CH2 或NR36 。在一些實施例中，X’為CH2 。在一些實施例中，X’為SO2 。在一些實施例中，X’為CR39a R39b ，其中R39a 及R39b 與其所連接之碳原子一起形成環丙基。在一些實施例中，R36 為氫或C1-6 烷基(例如甲基)。在一些實施例中，R20 為氫。
在式I或Ia化合物中之一些態樣中，R2 為： (a) C6-10 芳基、5至10員雜芳基或5至10員雜環基，其具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且視情況經一、二、三或四個取代基R6 、R7 、R8 及R8’ 取代，該等取代基之各者獨立地選自由以下所組成之群組： i. 分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基或C1-6 伸烯基，其中該烷基、烯基及伸烯基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、腈、胺基、單(C1-6 烷基)胺基-、二(C1-6 烷基)胺基-、-SO2 Ry 、-S(O)NRy 、–(CO)NRy Rz 、-NRz SO2 Ry 、-NRy (CO)ORz 、-NRy (CO)NRy Rz 及-NRy (CO)Rz ，其中Ry 及Rz 在各情況下獨立地為氫或視情況經取代之C1-6 烷基(例如，視情況經一至四個取代基取代之烷基，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組)； ii. NRy Rz -C(O)-，其中Ry 及Rz 各自獨立地為氫或視情況經取代之C1-6 烷基(例如，視情況經一至四個取代基取代之烷基，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組)； iii. 羥基(C1-6 烷基)； iv. 羥基或視情況經取代之C1-6 烷氧基(例如，視情況經一至四個取代基取代之烷氧基，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組)； v. 經取代之或未經取代之C3-9 環烷基、經取代之或未經取代之C6 芳基、經取代之或未經取代之5員雜芳基或經取代之或未經取代之C2-9 雜環基； vi. 鹵素； vii. 經取代之或未經取代之胺基； viii. 氰基； ix. –NRy C(O)Rz ，其中Ry 及Rz 各自獨立地為氫或視情況經取代之C1-6 烷基(例如，視情況經一至四個取代基取代之烷基，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組)； x. –SO2 R’，其中R’為H或C1-6 烷基； xi. –SO2 NR’R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基；或，R’及R”與其所連接之氮一起形成經取代之或未經取代之雜環基； xii. -NR’C(O)OR”, -NR’C(O)NR”R’”, -NR’SO2 NR”R’”或-NR’S(O)R” ，其中R’及R”’獨立地為H或C1-6 烷基，且R”獨立地為C1-6 烷基、鹵基(C1-6 烷基)或視情況經C1-6 烷基取代之C6-10 芳基；或，R”及R’”與其所連接之氮一起形成經取代之或未經取代之雜環基；及 xiii. 其中該雜環基中嵌入之碳與其所結合之氧一起可形成羰基；或 (b) C6-10 芳基，其具有一、二、三或五個取代基，該等取代基選自由以下所組成之群組：分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C3-4 環烷基，其中該烷基、烯基、伸烯基及環烷基可經胺基、羥基、氰基、鹵素、醯胺、單(C1-6 烷基)胺基-、二(C1-6 烷基)胺基-、-SO2 Rc 、-S(O)NRd 、-C(O)NRc Rd 及–NRc C(O)Rd 取代， 其中Rc 及Rd 各自獨立地選自由氫及C1-6 烷基所組成之群組，其中該烷基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代；或 (c) 氫、–NHSO2 Ra 、–SO2 NRa Rb ；或–SO2 NH2 ；其中各Ra 獨立地為C1-6 烷基，且Rb 為氫或C1-6 烷基；或 (d) –ORa1 或–(C1-6 烷基)–ORa1 ；其中各Ra1 獨立地為視情況經C6-10 芳基取代之C1-6 烷基；5至10員雜芳基；或5至10員雜環基；其中該5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基；或 (e) C1-6 烷基，其視情況經一至五個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、氰基、胺基、單(C1-6 烷基)胺基、二(C1-6 烷基)胺基、醯胺基、磺醯基、磺醯胺、C3-8 環烷基、C6-10 芳基、5至10員雜芳基及5至10員雜環基；其中該C3-8 環烷基、C6-10 芳基、5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經取代(例如，經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基)；或 (f) C3-8 環烷基，其視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：C1-6 烷基、羥基、鹵素、氰基、胺基、單(C1-6 烷基)胺基、二(C1-6 烷基)胺基、醯胺基、磺醯基、磺醯胺、5至10員雜芳基及5至10員雜環基；其中該5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經取代(例如，經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基)； (g) –C(O)NRa2 Rb2 或–SO2 NRa2 Rb2 ，其中各Ra2 獨立地為氫或C1-6 烷基，且Rb2 為氫、C1-6 烷基、5至10員雜芳基或5至10員雜環基，其中該5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經取代(例如，經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：C1-6 烷基、C3-7 環烷基、側氧基、羥基、鹵基及氰基)；或，Ra2 及Rb 2 與其所連接之氮一起形成經取代之或未經取代之雜環基(例如，哌啶、哌嗪、吡咯啶)；或 (h) 5至10員雜芳基，其與選自由以下所組成之群組之環稠合：5或6員雜芳基、5至10員雜環基、C6 芳基及C3-7 環烷基，其中R2 之該5至10員雜芳基及該稠環視情況經取代(例如，經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、側氧基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基)。
在所有其他變數如以上所定義之實施例中，有用值之R2 為視情況經取代之C2-9 雜芳基或視情況經取代之C2-9 雜環基(例如，C3-7 雜環基)。在一實施例中，R2 為視情況經取代之5至10員雜芳基或視情況經取代之5至10員雜環基；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之一態樣中，R2 為5員雜芳基。在此實施例之一態樣中，R2 為5員雜環基。在此實施例之一態樣中，R2 為6員雜芳基。在此實施例之一態樣中，R2 為6員雜環基。在此實施例之一態樣中，R2 為7員雜芳基。在此實施例之一態樣中，R2 為7員雜環基。在此實施例之一態樣中，R2 為8員雜芳基。在此實施例之一態樣中，R2 為8員雜環基。在此實施例之一態樣中，R2 為9員雜芳基。在此實施例之一態樣中，R2 為9員雜環基。在此實施例之一態樣中，R2 為10員雜芳基。在此實施例之一態樣中，R2 為10員雜環基。在各情況下，雜芳基或雜環基可視情況經一、二或三個取代基R6 、R7 及R8 取代。
在一些實施例中，R6 、R7 及R8 各自獨立地選自由以下所組成之群組： i. 分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基或C1-6 伸烯基，其中該烷基、烯基及伸烯基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、腈、胺基、單(C1-6 烷基)胺基-、二(C1-6 烷基)胺基-、-SO2 Ry 、-S(O)NRy 、–(CO)NRy Rz 及-NRy (CO)Rz ，其中Ry 及Rz 在各情況下獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組； ii. NRy Rz -C(O)-，其中Ry 及Rz 各自獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組； iii. 羥基(C1-6 烷基)； iv. C1-6 烷氧基，其中該烷氧基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組； v. C3-9 環烷基、經取代之或未經取代之C6 芳基、經取代之或未經取代之5員雜芳基或C2-9 雜環基； vi. 鹵素； vii. 胺基； viii. 氰基； ix.– NRy C(O)Rz ，其中Ry 及Rz 各自獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組； x. –SO2 R’，其中R’為H或C1-6 烷基； xi. –SO2 NR’R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基； xii. –NR’C(O)OR” 、–NR’SO2 NR” 或–NR’S(O)R” ，其中R’獨立地為H或C1-6 烷基，且R”獨立地為C1-6 烷基、鹵基(C1-6 烷基)或視情況經C1-6 烷基取代之C6-10 芳基；且 xiii. 其中該雜環基中嵌入之碳與其所結合之氧一起可形成羰基。
在一實施例中，R2 係選自由以下所組成之群組：、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、及；其各者視情況經取代。在一些實施例中，以上部分之各者可視情況經一、二或三個取代基R6 、R7 及R8 取代；且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一些實施例中，R2 係選自由以下所組成之群組：、、、、、、、、、、、、、、、、及；其各者視情況經取代。在一些實施例中，以上部分之各者可視情況經一、二或三個取代基R6 、R7 及R8 取代；且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所定義。
在所有其他變數如以上任何實施例中所定義之實施例中，有用值之R2 為、、或。
在所有其他變數如以上任何實施例中所定義之實施例中，R2 為或。
在所有其他變數如以上任何實施例中所定義之實施例中，其中R2 為或。
在所有其他變數如以上任何實施例中所定義之實施例中，其中R2 為或。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一些實施例中，R2 為，其中R6 、R7 及R8 各自獨立地選自由以下所組成之群組：氫、羥基、胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基及單(C1-6 烷基)胺基；或，R6 、R7 及R8 之兩者可形成雙環。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此等實施例之一些中，R6 及R7 係選自由以下所組成之群組：氫、胺基及C1-6 烷基。在一些實施例中，R6 為C1-6 烷基(例如甲基)。在一些實施例中，R7 為氫或胺基。在一些實施例中，R7 為氫。在一些實施例中，R7 為胺基。在一些實施例中，R6 為C1-6 烷基(例如甲基)，且R7 為氫或胺基。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例中，R6 可為氫、視情況經取代之C1-6 烷基或羥基(C1-6 )烷基，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之一態樣中，R6 可為C1-6 烷基，諸如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、戊基及己基，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之特定態樣中，R6 為甲基，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此等實施例之一些中，R6 為C1-6 烷基，其視情況經羥基、-CF2 、-CF3 或鹵素取代。
在一些實施例中，R2 為、、、或。在一些實施例中，R2 為或。在一些實施例中，R2 為。在一些實施例中，R2 為。在一些實施例中，R2 為。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如以上所述之任何實施例中所定義。在此實施例中，R6 可為視情況經取代之分支鏈或直鏈C1-6 烷基，其可經一至四個羥基或鹵素取代；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例中，R6 可為視情況經取代之分支鏈或直鏈C1-6 烷基；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之一態樣中，R6 可為C1-6 烷基，諸如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、戊基及己基，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之特定態樣中，R6 為甲基，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之特定態樣中，R6 可為視情況經取代之分支鏈或直鏈C1-6 烷基；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之一態樣中，R6 可為C1-6 烷基，諸如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、戊基及己基，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之特定態樣中，R6 為甲基，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R2 為；；；；；或， 且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之特定態樣中，R6 可為氫或視情況經取代之分支鏈或直鏈C1-6 烷基，R7 可為氫或視情況經取代之分支鏈或直鏈C1-6 烷基，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之一態樣中，R6 可為C1-6 烷基，諸如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、戊基及己基，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之特定態樣中，R6 為甲基，且所有其他變數如式I或Ia中所述或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之特定態樣中，R6 及R7 各自氫，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之特定態樣中，R8 為氫，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如以上所述之任何實施例中所定義。在此實施例中，R6 可為視情況經取代之分支鏈或直鏈C1-6 烷基，其可經一至四個羥基或鹵素取代；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之一態樣中，R6 可為C1-6 烷基，諸如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、戊基及己基，且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在特定態樣中，R6 為甲基。
在一實施例中，在5至10員雜環基中，R6 、R7 及R8 之一者為O，且與其所連接之碳一起形成羰基；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之特定態樣中，R2 為、或，其中R7 為氫或C1-5 烷基；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在一實施例中，在5至10員雜環基中，R6 、R7 及R8 之一者為O，且與其所連接之碳一起形成羰基；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例之特定態樣中，R2 為；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。在此實施例中，R7 及R8 獨立地選自氫或分支鏈或直鏈C1-6 烷基，其可經一至四個羥基或鹵素取代；且所有其他變數如式I或Ia中所定義或如本文所述之任何實施例中所定義。
在實施例中，本文所述之主題係關於具有以下結構之一的化合物：、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、及。
在一實施例中，其中所有其他變數如以上任何實施例中所定義，提供包括以下化合物號之任一者的化合物：1、2、3、4、5、6、7、8、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、30、31、32、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、54、55、56、57、59、60、61、62、63、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、113、115、116、117、118、119、122、123、124、125、126、127、128、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、143、144、145、146、147、148、149、150、151、153、154、155、156、157、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225及226。
在一些實施例中，本揭露提供一種式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中化合物係選自由以下所組成之群組：表1、表2及/或表3中之一或多種化合物。在一些實施例中，化合物係選自表1中之化合物號9至12、29、33至36、53、58、64、83、84、96、97、111、112、114、120、121、129、137、141、142、152及158、或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，化合物係選自表2中之化合物號231至390或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，化合物係選自表3中之化合物號391至528、或其醫藥學上可接受之鹽。表 1 表 2 表 3
在一些實施例中，化合物係選自由以下所組成之群組：表1中之化合物號1至230或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，化合物係選自由以下所組成之群組：化合物號1、2、3、4、5、6、7、8、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、30、31、32、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、54、55、56、57、59、60、61、62、63、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、113、115、116、117、118、119、122、123、124、125、126、127、128、130、131、132、133、134、135、136、138、139、140、143、144、145、146、147、148、149、150、151、153、154、155、156、157、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229及230、或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，化合物係選自由以下所組成之群組：化合物號9至12、29、33至36、53、58、64、83、84、96、97、111、112、114、120、121、129、137、141、142、152及158、或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，化合物係選自由以下所組成之群組：表2中之化合物號231至390或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，化合物係選自由以下所組成之群組：表3中之化合物號391至528、或其醫藥學上可接受之鹽。
本文所述之式I或Ia化合物或其鹽可以立體異構形式存在(例如，其含有一或多個不對稱碳原子)。個別立體異構物(鏡像異構物及非鏡像異構物)及其混合物係包括在本文揭示之主題之範疇內。同樣地，應理解，式I或Ia化合物或鹽可以不同於式中所示之互變異構形式的互變異構形式存在，且此等互變異構形式亦可包括在本文揭示之主題之範疇內。應理解，本文揭示之主題包括本文所述之特定組之組合及子集。本文揭示之主題之範疇包括立體異構物之混合物以及純化之鏡像異構物或鏡像異構/非鏡像異構富集之混合物。應理解，本文揭示之主題包括本文所定義之特定組之組合及子集。
本文揭示之主題亦包括本文所述之化合物之經同位素標記之形式，但是事實上，一或多個原子經原子質量或質量數不同於通常在自然界中所見之原子質量或質量數的原子置換。可摻入本文所述之化合物及其醫藥學上可接受之鹽之同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘及氯之同位素，諸如2 H、3 H、11 C、13 C、14 C、15 N、17 O、18 O、31 P、32 P、35 S、18 F、36 Cl、123 I及125 I。
本文揭示之主題包括式I或Ia化合物之前藥、代謝物、衍生物及醫藥學上可接受之鹽。式I或Ia化合物之代謝物包括藉由包含使式I或Ia化合物與哺乳動物接觸一段足以產生其代謝產物之時間之方法而產生的化合物。
若式I或Ia化合物為鹼，則所要醫藥學上可接受之鹽可藉由此項技術中可用之任何適合方法製備，例如用諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、甲烷磺酸、磷酸及類似酸之無機酸或用諸如乙酸、馬來酸、琥珀酸、扁桃酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、哌喃糖苷酸(pyranosidyl acid)(諸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α羥基酸(諸如檸檬酸或酒石酸)、胺基酸(諸如天冬胺酸或麩胺酸)、芳族酸(諸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(諸如對甲苯磺酸或乙烷磺酸)或類似酸之有機酸處理遊離鹼。
若式I或Ia化合物為酸，則所要醫藥學上可接受之鹽可藉由任何適合之方法製備，例如用諸如胺(第一、第二或第三胺)、鹼金屬氫氧化物或鹼土金屬氫氧化物或類似鹼之無機或有機鹼處理遊離酸。合適之鹽之說明性實例包括但不限於衍生自胺基酸(諸如甘胺酸及精胺酸)、氨、第一胺、第二胺、及第三胺、及環狀胺(諸如哌啶、嗎啉、及哌嗪)之有機鹽，以及衍生自鈉、鈣、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁、及鋰之無機鹽。
式I或Ia化合物可呈「前藥」之形式，其包括具有可在活體內 代謝之部分的化合物。通常，前藥藉由酯酶或藉由其他機制來在活體內 代謝為活性藥物。前藥及其用途之實例為此項技術中熟知的(參見，例如，Berge等人 (1977) 「Pharmaceutical Salts」, J. Pharm. Sci. 66:1-19)。前藥可在化合物之最終分離及純化過程中原位 製備，或藉由使游離酸形式之純化之化合物或羥基與合適之酯化劑單獨反應來製備。羥基可經由用羧酸處理轉換成酯。前藥部分之實例包括經取代之及未經取代之分支鏈或非分支鏈低碳烷基酯部分(例如，丙酸酯)、低碳鏈烯基酯、二低碳烷基胺基低碳烷基酯(例如，二甲基胺基乙基酯)、醯胺基低碳烷基酯(例如，乙醯氧基甲基酯)、醯氧基低碳烷基酯(例如，特戊醯氧基甲基酯)、芳基酯(苯基酯)、芳基低碳烷基酯(例如，苄基酯)、經取代之(例如，經甲基、鹵素或甲氧基取代基取代之)芳基及芳基低碳烷基酯、醯胺、低碳烷基醯胺、二低碳烷基醯胺及羥基醯胺。亦包括透過活體內 其他機制轉換為活性形式之前藥。在一些態樣中，本發明之化合物為具有本文任何式之前藥。組成物
目前揭示之化合物可連同醫藥學上可接受之載劑一起調配成醫藥組成物。
式I或Ia化合物可根據標準醫藥實踐調配為醫藥組成物。根據此態樣，提供包含與醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑結合之式I或Ia化合物之醫藥組成物。
典型調配物藉由混合式I或Ia化合物及載劑、稀釋劑或賦形劑來製備。合適的載劑、稀釋劑及賦形劑為熟習此項技術者熟知的，且包括諸如碳水化合物、蠟、水溶性及/或可溶脹聚合物、親水性或疏水性材料、明膠、油、溶劑、水及類似者之材料。所使用之特定載劑、稀釋劑或賦形劑將取決於式I或Ia化合物所應用之手段及目的。溶劑通常係基於由熟習此項技術者認為投與至哺乳動物是安全(GRAS)的溶劑來選擇。一般而言，安全溶劑為無毒性水性溶劑，諸如水及可溶於或可混溶於水的其他無毒性溶劑。合適之水性溶劑包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如，PEG 400、PEG 300)等及其混合物。調配物亦可包括一或多種緩衝液、穩定劑、界面活性劑、濕潤劑、潤滑劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑、滑動劑、加工助劑、著色劑、甜味劑、芳香劑、調味劑及其他已知添加劑以提供藥物(亦即式I或Ia化合物或其醫藥組成物)之精緻外觀或有助於製造醫藥產品(亦即藥物)。
調配物可使用習知溶解及混合程序來製備。例如，在上述一或多種賦形劑之存在下將散裝藥物物質(亦即，式I或Ia化合物或穩定化形式之式I或Ia化合物(例如，與環糊精衍生物或其他已知錯合劑之錯合物)溶於合適的溶劑中。式I或Ia化合物通常調配成醫藥劑型以提供易可控劑量之藥物，且實現患者與處方方案之依從性。
應用之醫藥組成物(或調配物)可以多種方式封裝，該等方式取決於用於投與藥物之方法。通常，用於分佈之物品包括其中沈積有適當形式之醫藥調配物的容器。合適容器為熟習此項技術者所熟知且包括諸如瓶子(塑膠及玻璃)、藥囊、安瓿、塑膠袋、金屬圓筒及類似物之材料。該容器亦可包括防開啟總成以防止輕率接近封裝之內含物。此外，容器上亦沈積有描述容器內含物之標籤。該標籤亦可包括適當警示。
醫藥調配物可製備用於各種投與途徑及類型。例如，具有所要純度之式I或Ia化合物可視情況與醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑、賦形劑或穩定劑(Remington’s Pharmaceutical Sciences (1980)第16版，Osol, A.編)以凍乾調配物、研磨粉末或水溶液之形式混合。調配可藉由在環境溫度下，在適當pH下，且以所要純度與生理上可接受之載劑(亦即在所採用之劑量及濃度下對接受者無毒之載劑)混合來進行。調配物之pH主要取決於特定用途及化合物濃度，但範圍可為約3至約8。在pH 5之乙酸鹽緩衝液中調配為合適之實施例。
式I或Ia化合物可為無菌的。具體而言，用於活體內 投與之調配物應為無菌的。此類滅菌可藉由透過無菌過濾膜過濾來輕易完成。
該化合物通常可作為固體組成物、凍乾調配物或作為水溶液儲存。
包含式I或Ia化合物之醫藥組成物可以符合良好醫學實踐之方式(亦即，量、濃度、時程、進程、媒劑及投與路徑)來調配、給藥及投與。在此情形下考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、病症起因、藥劑傳遞位點、投與方法、投與時程及醫學從業者已知之其他因素。欲投與之化合物之「治療有效量」將受此類考慮因素支配，且為預防、改善、治療凝血因子介導之病症所必需的最小量。在一些實施例中，該量低於對宿主有毒或使宿主更易出血之量。
可接受之稀釋劑、載劑、賦形劑及穩定劑在所採用之劑量及濃度下對接受者無毒，且包括：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二甲基苯甲基銨；氯化六羥季銨；氯化苄烷銨；氯化本索寧；苯酚、丁醇、或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠、或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸、或離胺酸；單醣、二醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖、或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEENTM 、PLURONICSTM 或聚乙二醇(PEG)。活性醫藥成分亦可截留於微膠囊中，例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合法所製備之微膠囊，例如分別為羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊；截留於膠態藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)中或巨乳液中。此類技術揭示於Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版, Osol, A.編(1980)中。
可製備式I或Ia化合物之持續釋放製劑。持續釋放製劑之合適實例包括含有式I或Ia化合物之固體疏水性聚合物之半滲透基質，該等基質呈成形物件例如膜、或微膠囊之形式。持續釋放基質之實例包括聚酯；水凝膠(例如聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)或聚(乙烯醇))；聚丙交酯(US 3773919)；L-麩胺酸與L-麩胺酸γ-乙酯之共聚物；非可降解之乙烯-乙酸乙烯酯；可降解之乳酸-乙醇酸共聚物，諸如LUPRON DEPOT™ (由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林構成之可注射微球體)；及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。
調配物包括適於本文中詳述之投與路徑的彼等調配物。調配物宜以單位劑型提供且可藉由製藥技術中熟知之任何方法製備。技術及調配物一般可見於Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA)中。此類方法包括使活性成分與構成一或多種配合成分之載劑締合的步驟。一般而言，藉由使活性成分與液體載劑或精細分開之固體載劑或兩者進行均勻及密切地締合，且必要時隨後使產物成形來製備調配物。
適於口服投與之式I或Ia化合物之調配物可製備成離散單位，諸如各自包含預定量之式I或Ia化合物之藥丸、膠囊、扁囊劑或錠劑。
經壓縮之錠劑可藉由於適合的機器中將視情況與黏合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合的呈諸如粉末或顆粒之自由流動形式之活性成分壓縮來製備。模製錠劑可藉由在合適機器中模製以惰性液體稀釋劑沾濕之粉末狀活性成分的混合物來製成。錠劑可視情況塗佈或刻痕且視情況配製以使得提供活性成分從中之緩慢或受控釋放。
錠劑、片劑、口含錠、水性或油性懸浮液、可分散粉末或顆粒劑、乳液、硬膠囊或軟膠囊(例如，明膠膠囊)、糖漿或酏劑可製備用於口服用途。用於口服用途之式I或Ia化合物之調配物可根據此項技術已知之用於製造醫藥組成物的任何方法來製備，且此類組成物可含有一或多種藥劑，包括甜味劑、調味劑、著色劑及防腐劑，以提供美味製劑。含有適於製造錠劑之與無毒醫藥學上可接受之賦形劑混合之活性成分的錠劑為可接受的。此等賦形劑可為例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣或碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；粒化劑及崩解劑，諸如玉米澱粉或海藻酸；黏合劑，諸如澱粉、明膠或阿拉伯膠；及潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。錠劑可為未塗佈的，或可藉由包括微囊封之已知技術來塗佈以延遲在胃腸道中之崩解及吸收，且從而在較長時期內提供持續的作用。例如，可單獨或與蠟一起採用時間延遲型材料，諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
為了治療眼或其他外部組織(例如，口腔及皮膚)，調配物較佳作為含有量為例如0.075至20% w/w的活性成分之局部軟膏劑或乳膏劑來應用。當調配成軟膏劑時，活性成分可與石蠟或水混溶性軟膏劑基材一起使用。或者，活性成分可用水包油乳膏劑基材調配成乳膏劑。
若需要，乳膏劑基材之水相可包括多元醇，亦即具有二或更多個羥基之醇，諸如丙二醇、1,3-丁二醇、甘露醇、山梨醇、甘油及聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。局部調配物可理想地包括增強活性成分透過皮膚或其他受影響區域吸收或穿透的化合物。此類皮膚穿透增強劑之實例包括二甲基亞碸及相關的類似物。
乳液之油相可由已知成分以已知方式構成。雖然該相可僅包含乳化劑，其亦可包含至少一種乳化劑及脂肪或油或脂肪及油兩者之混合物。親水性乳化劑與可用作穩定劑之親脂性乳化劑包括在一起。總之，具有或沒有穩定劑之乳化劑構成所謂的乳化蠟，且蠟與油脂一起構成所謂的乳化軟膏劑基材，其形成乳膏劑調配物之油性分散相。適用於調配物之利泄劑及乳液穩定劑包括Tween® 60、Span® 80、鯨蠟硬脂醇、苄醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯及月桂基硫酸鈉。
式I或Ia化合物之水性懸浮液含有與適於製備水懸浮液之賦形劑混合的活性材料。此類賦形劑包括：懸浮劑，諸如羧甲基纖維素鈉、交聯羧甲基纖維素、聚維酮、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、黃蓍膠及阿拉伯樹膠；及分散劑或潤濕劑，諸如天然存在的磷脂(例如，卵磷脂)、環氧烷與脂肪酸之縮合產物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、環氧乙烷與長鏈脂肪醇之縮合產物(例如，十七碳乙烯氧基鯨蠟醇)、環氧乙烷與衍生自脂肪酸的偏酯及己糖醇酐之縮合產物(例如，聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯)。水性懸浮液還可含有一或多種防腐劑，諸如對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸正丙酯；一或多種著色劑；一或多種調味劑；及一或多種甜味劑，諸如蔗糖或糖精。
式I或Ia化合物之醫藥組成物可呈無菌可注射製劑形式，諸如作為無菌可注射水性或油性懸浮液。此懸浮液可根據已知技術使用以上提及之彼等合適分散劑或潤濕劑及懸浮劑來調配。無菌可注射製劑亦可為於無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液，諸如1,3-丁二醇。無菌可注射製劑亦可製備作為凍乾粉末。可採用之可接受之媒劑及溶劑尤其為水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等張氯化鈉溶液。此外，無菌、非揮發性油可習慣上用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用任何溫和不揮發性油，包括合成單酸甘油酯或二酸甘油酯。此外，諸如油酸之脂肪酸可同樣用於製備可注射劑。
可與載劑材料組合以產生單一劑型之活性成分之量將視所治療宿主及特定投與模式而變化。例如，意欲用於向人類口服投與之時間釋放調配物可含有與適當及方便量的載劑材料混合之約1至1000 mg活性材料，該載劑材料可由總組成物之約5%變化至約95% (重量:重量)。可製備醫藥組成物以提供容易測量的投與量。例如，意欲用於靜脈內輸注的水溶液可含有每毫升溶液約3至500 μg活性成分，以便可發生在約30 mL/hr之速率下的合適體積之輸注。
適於非經腸投與之調配物包括水性及非水性無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及使調配物與預定接受者之血液等張之溶質；及水性及非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑及增稠劑。
適於局部投與至眼之調配物亦包括滴眼劑，其中活性成分溶解或懸浮於合適載劑中，尤其是用於活性成分之水性溶劑。活性成分較佳以約0.5至20% w/w，例如約0.5至10% w/w，例如約1.5% w/w之濃度存在於此類調配物中。
適於局部投與至口之調配物包括：口含錠，其在調味基材(通常為蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍膠)中包含活性成分；糖錠，其在惰性基材(諸如明膠及甘油)或蔗糖及阿拉伯膠中包含活性成分；及漱口劑，其在合適之液體載劑中包含活性成分。
用於直腸投與之調配物可作為具有包含例如可可脂或水楊酸鹽之合適基材的栓劑來提供。
適於肺內或鼻投與之調配物具有的粒子大小之範圍例如為0.1至500微米(包括以諸如0.5、1、30微米、35微米等之增量微米介於0.1與500微米之間範圍內的粒度)，其係藉由透過鼻通道快速吸入或藉由透過口吸入以便達到肺泡囊來投與。合適之調配物包括活性成分之水性或油性溶液。適於氣溶膠或乾粉投與之調配物可根據習知方法製備，且可與其他治療劑諸如迄今用於治療或預防如下所述之病症的化合物一起遞送。
適於陰道投與之調配物可作為子宮托、棉塞、乳膏劑、凝膠劑、糊劑、泡沫或噴霧調配物來提供，該等調配物除活性成分外亦含有此項技術中已知為適當之此類載劑。
調配物可包裝在單位劑量或多劑量容器，例如密封安瓿和小瓶中，並且可在冷凍乾燥(凍乾)條件下儲存，僅需要在使用之前立即添加無菌液體載劑，例如注射用水。臨時注射溶液及懸浮液由先前描述種類的無菌粉末、顆粒及錠劑來製備。較佳單位劑量調配物為含有如以上所述之日劑量或單位日亞劑量或其適當分數之活性成分的彼等調配物。
本主題進一步提供包含至少一種如上文所定義之活性成分以及用於其之獸醫學載劑的獸醫學組成物。獸醫學載劑為用於投與該組成物之目的的材料且可為固體、液體或氣態材料，該等材料在其他方面為惰性的或為獸醫學領域中可接受的且可與活性成分相容。此等獸醫學組成物可非經腸、經口服或藉由任何其他所要途徑投與。
在特定實施例中，包含目前揭示之化合物之醫藥組成物進一步包含化療劑。在此等實施例之一些中，化療劑為免疫治療劑。方法
目前揭示之化合物可用於抑制酶HPK1之活性。HPK1，亦被稱為促分裂原活化蛋白激酶1 (mitogen activated protein kinase kinase kinase kinase 1)或MAP4K1，為Ste20相關絲胺酸/蘇胺酸激酶之生髮中心激酶次家族之成員。HPK1藉由磷酸化及活化MAP3K蛋白(包括MEKK1、MLK3及TAK1)發揮MAP4K之功能，導致活化MAPK Jnk。
在一實施例中，本文揭示之主題係關於抑制HPK1之方法，該方法包含使HPK1與有效量之本文所述之式I或Ia化合物或醫藥組成物接觸。
在一實施例中，本文揭示之主題係關於一種用於增強有需要之受試者中之免疫反應的方法，其中該方法包含向該受試者投與有效量之本文所述之式I或Ia化合物或醫藥組成物。在此實施例之某些態樣中，相對於投與該化合物或醫藥組成物之前，該受試者中之T細胞具有以下之至少一者：促發增強、活化增強、遷移增強、增殖增強、存活增強及細胞溶解活性增強。在此實施例之某些態樣中，T細胞活化之特徵在於相對於投與該化合物或醫藥組成物之前，γ-IFN+ CD8 T細胞頻率升高或由T細胞產生之IL-2或顆粒酶B水準增加。在此實施例之某些態樣中，相對於投與化合物或醫藥組成物之前，T細胞之數目升高。在此實施例之某些態樣中，T細胞為抗原特異性CD8 T細胞。在此實施例之某些態樣中，相對於投與該化合物或醫藥組成物之前，該受試者中之抗原呈現細胞之成熟及活化增強。在此實施例之某些態樣中，抗原呈現細胞為樹突細胞。在此實施例之某些態樣中，抗原呈現細胞之成熟之特徵在於CD83+樹突細胞之頻率增加。在此實施例之某些態樣中，抗原呈現細胞活化之特徵在於樹突細胞上CD80及CD86之表現升高。
在本文所述之方法中，向患有本文在別處所述之癌症的受試者投與式I或Ia化合物或其醫藥組成物。
在一實施例中，本文揭示之主題係關於一種用於治療HPK1依賴性病症之方法，該方法包含向有需要之受試者投與有效量之本文所述之式I或Ia化合物或醫藥組成物。在此實施例之某些態樣中，HPK1依賴性病症為癌症。在此實施例之某些態樣中，癌症包含至少一種選自由以下所組成之群組之癌症：結腸直腸癌、黑色素瘤、非小細胞肺癌、卵巢癌、乳癌、胰腺癌、血液學惡性腫瘤及腎細胞癌。在此實施例之某些態樣中，癌症之T細胞浸潤水準升高。在此實施例之某些態樣中，相對於投與該化合物或組成物之前，該受試者中之該癌細胞之MHC I類抗原表現選擇性地升高。
在本文所述之方法中，該方法可進一步包含向該受試者投與化療劑。在此實施例之某些態樣中，化療劑與化合物或組成物同時向受試者投與。在此實施例之某些態樣中，化療劑在投與化合物或組成物之前向受試者投與。在此實施例之某些態樣中，化療劑在投與化合物或該組成物之後向受試者投與。
HPK1多核苷酸及多肽為此項技術中已知的(Hu等人 (1996)Genes Dev . 10: 2251-2264，其以全文引用的方式併入本文中)。HPK1多核苷酸及多肽之非限制性實例包含如SEQ ID NO: 1所陳述之人類HPK1多核苷酸(GenBank登錄號NM_007181.5之核苷酸141至2642)及如SEQ ID NO: 2中所陳述之編碼之人類HPK1多肽(登錄號NP_009112.1)。人類中存在較短之821胺基酸HPK1同功型，其編碼序列及胺基酸序列分別在SEQ ID NO: 3及1中陳述(分別為GenBank登錄號NM_001042600.2之核苷酸141至2606及GenBank登錄號NP_001036065.1)。
HPK1多肽包含多種保守結構模體。為了便於參考，將討論此等模體，因為此等模體涉及較長人類HPK1同功型，其在SEQ ID NO:2中陳述，包含833個胺基酸殘基。HPK1多肽包含跨越胺基酸殘基17至293之胺基端Ste20樣激酶域，其包括胺基酸殘基23至46之ATP結合位點。激酶結構域之後為四個脯胺酸富集(PR)模體，其充當含SH3蛋白(諸如CrkL、Grb2、HIP-55、Gads、Nck及Crk)之結合位點。四個PR模體分別跨越胺基酸殘基308至407、394至402、432至443及468至477。HPK1回應於TCR或BCR刺激而變得磷酸化及活化。位於PR1與PR2之間之位置381處之酪胺酸之TCR及BCR誘導之磷酸化介導經由SLP-76或BLNK SH2域結合至T細胞中之SLP-76或B細胞中之BLNK，且為活化激酶所需的。HPK1之C端中所見之香櫞同源性域(citron homology domain)，約跨越殘基495至800，可充當調控域且可參與巨分子相互作用。
目前揭示之化合物直接結合至HPK1且抑制其激酶活性。在一些實施例中，目前揭示之化合物降低、抑制或以其他方式減少HPK1介導之SLP76及/或Gads之磷酸化。
目前揭示之化合物可或可不為特異性HPK1拮抗劑。特異性HPK1拮抗劑將HPK1之生物活性降低一定量，該量在統計學上大於拮抗劑對任何其他蛋白質(例如，其他絲胺酸/蘇胺酸激酶)之抑制作用。在某些實施例中，目前揭示之化合物特異性抑制HPK1之絲胺酸/蘇胺酸激酶活性。在此等實施例之一些中，HPK1拮抗劑對HPK1之IC50 為HPK1拮抗劑對另一種絲胺酸/蘇胺酸激酶或其他類型之激酶(例如，酪胺酸激酶)之IC50 之約90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%、0.1%、0.01%、0.001%或更少。
目前揭示之化合物可用於抑制HPK1之方法中。此類方法包含使HPK1與有效量之目前揭示之化合物接觸。「接觸」意欲使化合物足夠接近經分離HPK1酶或表現HPK1之細胞(例如，T細胞、B細胞、樹突細胞)內部，使得化合物能夠結合且抑制HPK1活性。該化合物可經由向受試者投與該化合物來在活體外 或在活體內 與HPK1接觸。
此項技術中已知量測HPK1之激酶活性的任何方法可用於判定HPK1是否已經抑制，該等方法包括活體外 激酶檢定、具有對HPK1之磷酸化標靶(諸如SLP76及Gads)特異性之抗體的特免疫墨點、或HPK1激酶活性之下游生物效應(諸如將14-3-3蛋白募集至磷酸化SLP7及Gads、自含LAT微群集釋放SLP76-Gads-14-3-3複合體、或T細胞或B細胞活化)之量測。
目前揭示之化合物可用於治療HPK1依賴性病症。如本文所使用，「HPK1依賴性病症」為病理學病狀之發生或維持需要HPK1活性之病理學病狀。在一些實施例中，HPK1依賴性病症為癌症。
目前揭示之化合物亦可用於增強有需要之受試者中之免疫反應。此類方法包含投與有效量之目前揭示之化合物(亦即，式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物)。
如本文所使用，「增強免疫反應」係指對抗原之任何免疫原性反應改善。對抗原之免疫原性反應改善之非限制性實例包括樹突細胞之成熟或遷移增強、T細胞(例如，CD4 T細胞、CD8 T細胞)活化增強、T細胞(例如，CD4 T細胞、CD8 T細胞)增殖增強、B細胞增殖增強、T細胞及/或B細胞存活增加、抗原呈現細胞(例如，樹突細胞)之抗原呈現改善、抗原清除改善、T細胞之細胞介素(例如，白細胞介素-2)產生增加、對前列腺素E2誘導之免疫遏制之抗性增加及CD8 T細胞之促發及/或細胞溶解活性增強。
在一些實施例中，相對於投與式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物之前，受試者中之CD8 T細胞之促發、活化、增殖及/或細胞溶解活性增強。在一些實施例中，CD8 T細胞促發之特徵在於CD8 T細胞中CD44表現升高及/或細胞溶解活性增強。在一些實施例中，CD8 T細胞活化之特徵在於γ-IFN+ CD8 T細胞頻率升高。在一些實施例中，CD8 T細胞為抗原特異性T細胞。
在一些實施例中，相對於投與式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物之前，受試者中之抗原呈現細胞之成熟及活化增強。在一些實施例中，抗原呈現細胞為樹突細胞。在一些實施例中，抗原呈現細胞之成熟之特徵在於CD83+ 樹突細胞之頻率增加。在一些實施例中，抗原呈現細胞活化之特徵在於樹突細胞上CD80及CD86之表現升高。
在一些實施例中，相對於投與式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物之前，受試者中之細胞介素IL-10及/或趨化介素IL-8 (鼠類KC之人類同系物)之血清水準降低。
TCR之參與導致HPK1活化，其發揮TCR誘導之AP-1反應途徑之負調控劑的作用。據信HPK1藉由磷酸化Ser376處之SLP76 (Di Bartolo等人 (2007)JEM 204:681-691)及Thr254處之Gads來減少信號傳導微群集之持久性來負調控T細胞活化，此導致結合至磷酸化SLP76及Gads之14-3-3蛋白之募集，自含LAT之微群集釋放SLP76-Gads-14-3-3複合體，這導致T細胞功能障礙，包括無反應性及耗乏(Lasserre等人 (2011)J Cell Biol 195(5):839-853)。
在免疫功能障礙之情況下，術語「功能障礙」係指對抗原刺激之免疫反應性降低之狀態。該術語包括可能發生抗原識別之耗乏及/或無反應性兩者之共同因素，但是隨後的免疫反應對控制感染或腫瘤生長時間(tumor growthour)無效。
如本文所使用，術語「功能障礙的」亦包括對抗原識別具有難治性或無反應性，具體而言，將抗原識別轉譯成下游T細胞效應子功能(諸如，增殖、細胞介素產生(例如IL-2、γ-IFN)及/或靶細胞殺傷之能力受損。
術語「無反應性」係指由於透過T細胞受體遞送之信號不完全或不足而引起之對抗原刺激之無反應性之狀態(例如，不存在ras活化之情況下之細胞內Ca+2 增加)。T細胞無反應性亦可在不存在共刺激之情況下用抗原刺激時產生，導致細胞對隨後抗原之活化變得具有難治性，即使在共刺激之情況下亦然。無反應狀態通常可由白細胞介素-2之存在來改寫。無反應性T細胞未經歷殖株擴增且/或獲得效應子功能。
術語「耗乏」係指作為由許多慢性感染及癌症期間發生之持續TCR信號傳導引起的T細胞功能障礙狀態之T細胞耗乏。其與無反應性之區別在於，其不是透過不完整或不足信號傳導引起，而是由持續信號傳導引起。其定義為效應子功能差、抑制性受體表現持續及與功能性效應子或記憶T細胞不同之轉錄狀態。耗乏阻止感染及腫瘤之最優控制。耗乏可由外在負調控途徑(例如免疫調控細胞介素)以及細胞內在負調控(共刺激)途徑(PD-1、B7-H3、B7-H4等)產生。
在一些實施例中，向受試者投與式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物導致T細胞功能增強。
「增強T細胞功能」意指誘導、引起或刺激T細胞具有持續或擴增生物功能，或更新或再活化耗乏或失活之T細胞。增強T細胞功能之實例包括：相對於介入之前之此類水準，細胞介素(例如，γ-干擾素、IL-2、IL-12及TNFα)分泌增加、增殖增加、抗原反應性(例如，病毒、病原體或腫瘤清除)增加、及由CD8 T細胞產生之效應子顆粒(諸如，顆粒酶B)增加。在一個實施例中，增強水準為至少50%、或者60%、70%、80%、90%、100%、120%、150%、200%。量測此增強之方式為一般技藝人士已知的。
因此，目前揭示之式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物可用於治療T細胞功能障礙性病症。「T細胞功能障礙性病症」為特徵在於對抗原刺激之反應性降低的T細胞病症或病狀。在一特定實施例中，T細胞功能障礙性病症為與HPK1之激酶活性增加特異性相關之病症。在另一實施例中，T細胞功能障礙性病症為T細胞是無反應性的或分泌細胞介素、增殖或執行細胞溶解活性之能力降低的病症。在一具體態樣中，反應性降低導致對病原體或表現免疫原之腫瘤的無效控制。特徵在於T細胞功能障礙之T細胞功能障礙性病症之實例包括未解決之急性感染、慢性感染及腫瘤免疫性。
因此，目前揭示之化合物可用於治療需要增強之免疫原性(諸如，增加用於治療癌症之腫瘤免疫原性)之病狀。
「免疫原性」係指特定物質激發免疫反應之能力。腫瘤為免疫原性的，且增強腫瘤免疫原性有助於藉由免疫反應清除腫瘤細胞。
「腫瘤免疫性」係指腫瘤逃避免疫識別及清除之過程。因此，作為治療概念，腫瘤免疫性在此類逃避減弱時得以「治療」，且腫瘤由免疫系統識別且攻擊。腫瘤識別之實例包括腫瘤結合、腫瘤縮小及腫瘤清除。
在一個態樣中，本文提供一種用於治療有需要之受試者中之癌症的方法，其包含向受試者投與有效量之式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物。在一些實施例中，受試者患有黑色素瘤。黑色素瘤可處於早期或晚期。在一些實施例中，受試者患有結腸直腸癌。結腸直腸癌可處於早期或晚期。在一些實施例中，受試者患有非小細胞肺癌。非小細胞肺癌可處於早期或晚期。在一些實施例中，受試者患有胰腺癌。胰腺癌可處於早期或晚期狀態。在一些實施例中，受試者患有血液學惡性腫瘤。血液學惡性腫瘤可處於早期或晚期。在一些實施例中，受試者患有卵巢癌。卵巢癌可處於早期或晚期。在一些實施例中，受試者患有乳癌。乳癌可處於早期或晚期。在一些實施例中，受試者患有腎細胞癌。腎細胞癌可處於早期或晚期。在一些實施例中，癌症之T細胞浸潤水準升高。
目前揭示之化合物可以此項技術中已知之任何合適方式來投與。在一些實施例中，式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物係以靜脈內方式、以肌肉內方式、以皮下方式、以局部方式、以口服方式、以經皮方式、以腹膜內方式、以眶內方式、藉由植入、藉由吸入、以鞘內方式、以心室內方式、以瘤內方式或以鼻內方式投與。
在一些實施例中，HPK1拮抗劑係連續投與。在其他實施例中，HPK1拮抗劑係間歇投與。此外，用有效量之HPK1拮抗劑治療受試者可包括單一治療或可包括一系列治療。
應理解，活性化合物之適當劑量取決於普通技術人員或獸醫之知識內的許多因素。活性化合物之劑量將例如根據受試者之年齡、體重、一般健康狀況、性別及飲食、投與時間、投與途徑、排泄速率及任何藥物組合而變化。
亦應理解，用於治療之式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物之有效劑量可在特定治療過程中增加或減少。劑量變化可由診斷檢定之結果產生且從其中變得顯而易見。
在一些實施例中，HPK1拮抗劑以約0.001 µg/kg與約1000 mg/kg之間之劑量向受試者投與，該劑量包括但不限於約0.001 µg/kg、約0.01 µg/kg、約0.05 µg/kg、約0.1 µg/kg、約0.5 µg/kg、約1 µg/kg、約10 µg/kg、約25 µg/kg、約50 µg/kg、約100 µg/kg、約250 µg/kg、約500 µg/kg、約1 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約25 mg/kg、約50 mg/kg、約100 mg/kg及約200 mg/kg。
在一些實施例中，提供一種用於治療有需要之受試者中之癌症的方法，其包含向受試者投與有效量之式I或Ia化合物或其醫藥學上可接受之鹽、前藥、代謝物或衍生物，進一步包含投與額外療法。額外療法可為輻射療法、手術(例如，乳房腫瘤切除術及乳房切除術)、化療、基因療法、DNA療法、病毒療法、RNA療法、免疫療法、骨髓移植術、奈米療法、單株抗體療法或前述之組合。該額外療法可呈輔助或新輔助療法之形式。在一些實施例中，額外療法為投與抗轉移藥劑。在一些實施例中，額外療法為投與副作用限制劑(例如，意欲減輕治療副作用之發生及/或嚴重性之藥劑，諸如抗噁心劑等)。在一些實施例中，額外療法為輻射療法。在一些實施例中，額外療法為手術。在一些實施例中，額外療法為輻射療法與手術之組合。在一些實施例中，額外療法為伽馬輻照。在一些實施例中，額外療法為靶向PI3K/AKT/mTOR途徑、HSP90抑制劑、微管蛋白抑制劑、凋亡抑制劑及/或化學預防劑之療法。
額外療法可為一或多種化療劑。因此，治療癌症之方法可包含將目前揭示之HPK1拮抗劑與至少一種化療劑聯合投與。
如本文所使用，「與...聯合」係指除了另一治療形式之外亦投與一種治療形式。因此，「與...聯合」係指在向受試者投與另一治療形式之前、期間或之後投與一種治療形式。
例如，HPK1拮抗劑及化療劑可依序(在不同時間)或同時(在同一時間)投與。HPK1拮抗劑及化療劑可藉由相同投與途徑或藉由不同投與途徑來投與。
在某些實施例中，HPK1拮抗劑與另一免疫療法聯合投與。例如，HPK1拮抗劑可與靶向PDL1/PD1途徑之化療劑或生物製劑組合。已知的抑制性檢查點途徑涉及透過PD-1受體之信號傳導。程式化死亡1 (PD-1)受體及其配體PD-L1及PD-L2為與CTLA-4相同之共調控分子家族之一部分。-參見更多訊息：http://www.onclive.com/web-exclusives/the-role-of-anti-pd-l1-immunotherapy-in-cancer/2#sthash.cGfYa1T1.dpuf，阻斷PD-L1結合至PD-1及CD80之化療劑或生物製劑可阻止PD-L1介導之T細胞活化之抑制/遏制。程式化細胞死亡配體-1 (PD-L1)在抗原呈現細胞(APC)及其他免疫細胞上廣泛表現。其在來自廣泛人類癌症之腫瘤細胞中上調，且涉及抑制抗腫瘤T細胞免疫性。PD-L1為結合至活化T細胞、B細胞及其他骨髓細胞上之受體PD-1及CD80之細胞表面蛋白。已發現結合至活化T細胞上之PD-1之PD-L1干擾T細胞增殖且抑制免疫反應。癌細胞上PD-L1之過表現可能允許此等細胞避免免疫偵測及消除。腫瘤細胞上高水準之PD-L1表現與腫瘤侵襲性增加及預後不良相關。阻斷PD-L1結合至PD-1之化療劑或生物製劑包括抗PD-L1抗體，諸如德瓦魯單抗(durvalumab)、納武單抗(nivolumab)、pidlizumab、MPDL3280A、MK-3475及BMS-936559及其他抗體。
在另一實例中，HPK1拮抗劑可與靶向OX40及其配體OX40L (其為TNF超家族之成員)之化療劑或生物製劑組合。OX40在活化之CD4(+)及CD8(+) T細胞以及許多其他淋巴球及非淋巴球上表現。OX40至習知T細胞之共刺激信號促進分裂及存活、增大效應子及記憶群體之殖株擴增，因為其產生抗原。OX40額外遏制T調控細胞之分化及活性，進一步擴增此過程。OX40及OX40L亦調控T細胞、抗原呈現細胞、天然殺手細胞及天然殺手T細胞之細胞介素產生，且調節細胞介素受體信號傳導。作為已知控制T細胞之最顯著共刺激分子之一，刺激性OX40已顯示為癌症治療性免疫策略之標靶。某些OX40促效劑包括GBR 830及Linch等人, Frontiers in Oncology,第5卷，第1至10頁(2015)中揭示者，該文獻以全文引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，本發明亦提供本文所述之式I或Ia化合物或本文所述之醫藥組成物，其用於在如本文所述之用於抑制HPK1之方法、如本文所述之用於增強有需要之受試者中之免疫反應之方法及/或如本文所述之用於治療HPK1依賴性病症之方法中使用。
在一些實施例中，本發明亦提供本文所述之式I或Ia化合物或本文所述之醫藥組成物，其用於在如本文所述之用於抑制HPK1之方法中使用。
在一些實施例中，本發明亦提供本文所述之式I或Ia化合物或本文所述之醫藥組成物，其用於在如本文所述之用於增強有需要之受試者中之免疫反應之方法中使用。
在一些實施例中，本發明亦提供本文所述之式I或Ia化合物或本文所述之醫藥組成物，其用於在如本文所述之用於治療HPK1依賴性病症之方法中使用。
在一些實施例中，本發明亦提供本文所述之式I或Ia化合物或本文所述之醫藥組成物用於製造用於抑制HPK1之藥物、用於增強有需要之受試者中之免疫反應之藥物及/或用於治療HPK1依賴性病症之藥物的用途。
在一些實施例中，本發明亦提供本文所述之式I或Ia化合物或本文所述之醫藥組成物用於製造用於抑制HPK1之藥物的用途。
在一些實施例中，本發明亦提供本文所述之式I或Ia化合物或本文所述之醫藥組成物用於製造用於增強有需要之受試者中之免疫反應之藥物的用途。
在一些實施例中，本發明亦提供本文所述之式I或Ia化合物或本文所述之醫藥組成物用於製造治療HPK1依賴性病症之藥物的用途。
在一些實施例中，本發明亦提供本文所述之式I或Ia化合物或本文所述之醫藥組成物在如本文所述之用於抑制HPK1之方法、如本文所述之用於增強有需要之受試者中之免疫反應之方法及/或如本文所述之用於治療HPK1依賴性病症之方法中的用途。
在一些實施例中，本發明亦提供本文所述之式I或Ia化合物或本文所述之醫藥組成物在如本文所述之用於抑制HPK1之方法中的用途。
在一些實施例中，本發明亦提供本文所述之式I或Ia化合物或本文所述之醫藥組成物在如本文所述之用於增強有需要之受試者中之免疫反應之方法中的用途。
在一些實施例中，本發明亦提供本文所述之式I或Ia化合物或本文所述之醫藥組成物在如本文所述之用於治療HPK1依賴性病症之方法中的用途。
在一些實施例中，治療導致停止治療後之受試者中之持續反應。「持續反應」係指停止治療後對減少腫瘤生長之持續作用。例如，相較於投與階段開始時之大小，腫瘤大小可保持相同或更小。在一些實施例中，持續反應之持續時間至少與治療持續時間相同，為治療持續時間長度之至少1.5倍、2.0倍、2.5倍或3.0倍。
本文揭示之治療方法可導致部分反應或完全反應。如本文所使用，「完全反應」或「CR」係指所有靶病灶消失；「部分反應」或「PR」係指將基線SLD作為參考，靶病灶之最長直徑(SLD)之總和減少至少30%；且「穩定疾病」或「SD」係指將自治療開始以來之最小SLD作為參考，靶病灶即沒有足夠的收縮以符合PR之資格，也沒有足夠的增加以符合PD之資格。如本文所使用，「總反應率」(ORR)係指完全反應(CR)率及部分反應(PR)率之總和。
本文揭示之治療方法可導致投與HPK1拮抗劑之受試者之無進展存活及總體存活增加。如本文所使用，「無進展存活」(PFS)係指治療期間及之後的所治療之疾病(例如癌症)未變得惡化之時間長度。無進展存活可包括患者經歷完全反應或部分反應之時間量以及患者經歷穩定疾病之時間量。
如本文所使用，「總體存活」係指可能在特定持續時間之後存活之一組中之受試者之百分比。
在一些實施例中，投與HPK1拮抗劑之受試者為哺乳動物，諸如馴養動物(例如，母牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如，人類及非人類靈長類動物，諸如猴)、兔及齧齒動物(例如，小鼠及大鼠)。在一些實施例中，所治療之受試者為人類。
需要癌症治療之受試者可為表現癌症症狀之人、已經診斷患有癌症之人、處於癌症緩解中之受試者或發展癌症之風險(例如，遺傳傾向、某些飲食或環境暴露)增加之受試者。
以下實例藉助於說明且非藉助於限制來提供。 實例材料及方法
方法 A ：在具有Agilent MSD質譜儀之Agilent 1100 HPLC上，使用ESI作為電離源，使用Agilent SunFire-C18 3.5 μm，4.6x50管柱及2.0 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含0.05% TFA之95%水(溶劑A)及含0.05% TFA之5%乙腈(溶劑B)起始，歷經1.3分鐘快速上升至100%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續1.2分鐘。
方法 B ：在具有Agilent MSD質譜儀之Agilent 1200 HPLC上，使用ESI作為電離源，使用Agilent SunFire-C18 3.5 μm，4.6x50管柱及2.0 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含0.01% TFA之95%水(溶劑A)及含0.01% TFA之5%乙腈(溶劑B)起始，歷經1.4分鐘快速上升至5%溶劑A及95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續1.0分鐘。
方法 C ：在具有Agilent MSD質譜儀之Agilent 1200 HPLC上，使用ESI作為電離源，使用Agilent Xbridge-C18，3.5 μm，4.6x50 mm管柱及1.8 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含10 mM NH4 HCO3 之95%水(溶劑A)及5%乙腈(溶劑B)起始，歷經1.3分鐘快速上升至5%溶劑A及95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續1.2分鐘。
方法 D ：在具有Agilent MSD質譜儀之Agilent 1200 HPLC上，使用ESI作為電離源，使用Agilent Xbridge-C18，3.5 μm，4.6x50 mm管柱及1.8 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含10 mM NH4 HCO3 之95%水(溶劑A)及5%乙腈(溶劑B)起始，歷經1.6分鐘快速上升至5%溶劑A及95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續1.0分鐘。
方法 E ：在具有Agilent MSD質譜儀之Agilent 1200 HPLC上，使用ESI作為電離源，使用Agilent SunFire-C18 3.5 μm，4.6x50管柱及2.0 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含0.01% TFA之95%水(溶劑A)及含0.01% TFA之5%乙腈(溶劑B)起始，歷經1.5分鐘快速上升至5%溶劑A及95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續1.0分鐘。
方法 F ：在具有Agilent MSD質譜儀之Agilent 1200 HPLC上，使用ESI作為電離源，使用Agilent Xbridge-C18，3.5 μm，4.6x50 mm管柱及1.8 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含10 mM NH4 HCO3 之90%水(溶劑A)及10%乙腈(溶劑B)起始，歷經1.5分鐘快速上升至5%溶劑A及95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續1.0分鐘。
方法 G ：在具有Agilent MSD質譜儀之Agilent 1200 HPLC上，使用ESI作為電離源，使用Agilent Xbridge-C18，3.5 μm，4.6x50 mm管柱及1.8 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含10 mM NH4 HCO3 之95%水(溶劑A)及5%乙腈(溶劑B)起始，歷經1.4分鐘快速上升至5%溶劑A及95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續1.0分鐘。
方法 H ：在具有Agilent MSD質譜儀之Agilent 1200 HPLC上，使用ESI作為電離源，使用Gemini-Nx 3u，C18，3 μm，4.6x50 mm管柱及1.8 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含10 mM NH4 HCO3 之90%水(溶劑A)及10%乙腈(溶劑B)起始，歷經1.5分鐘快速上升至5%溶劑A及95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續1.0分鐘。
方法 I ：在具有Agilent MSD質譜儀之Agilent 1200 HPLC上，使用ESI作為電離源，使用XBridge-C18，3.5 μm，4.6x50 mm管柱及1.8 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含10 mM NH4 HCO3 之95%水(溶劑A)及5%乙腈(溶劑B)起始，歷經1.6分鐘快速上升至5%溶劑A及95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續1.0分鐘。
方法 J ：在與Agilent MSD (6140)質譜儀連接之Agilent 1290 UHPLC上，使用ESI作為電離源進行實驗。LC分離使用Phenomenex XB-C18，1.7 μm，50 × 2.1 mm管柱，流速為0.4 ml /分鐘。溶劑A是含0.1% FA之水，且溶劑B為含0.1% FA之乙腈。梯度經歷7 min由2至98%溶劑B組成且在平衡1.5 min後保持98% B達1.5 min。LC管柱溫度為40℃。在220 nm及254 nm處收集UV吸光度，且將質譜全掃描應用於所有實驗。
方法 J *：在具有Shimadzu LCMS2020質譜儀之Shimadzu 20AD HPLC上，使用ESI作為電離源、Shim-Pack XR-ODS C18 2.2 μm，3.0x50管柱及1.2 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含0.05% TFA之95%水(溶劑A)及含0.05% TFA之5%乙腈(溶劑B)起始，歷經2.0分鐘快速上升至95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續0.7分鐘。
方法 K ：在具有LCMS-2020質譜儀之Shimadzu LC-20AD上，使用ESI作為電離源，使用Shim-Pack XR-ODS 2.2 μm，3.0x50管柱及1.2 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含0.05% TFA之95%水(溶劑A)及含0.05% TFA之5%乙腈(溶劑B)起始，歷經2.0分鐘快速上升至5%溶劑A及95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續0.7分鐘。
方法 K *：在具有Shimadzu LCMS-2020質譜儀之Shimadzu 20AD HPLC上，使用ESI作為電離源，使用Shim-Pack XR-ODS 2.2 μm，3.0x50管柱及1.2 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含0.05% TFA之95%水(溶劑A)及含0.05% TFA之5%乙腈(溶劑B)起始，歷經2.0分鐘快速上升至95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續0.7分鐘。
方法 L ：在具有LCMS-2020質譜儀之Shimadzu LC-30AD上，使用ESI作為電離源，使用Ascentis Express C18 2.7 μm，3.0x50 mm管柱及1.0 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含0.05% TFA之95%水(溶劑A)及含0.05% TFA之5%乙腈(溶劑B)起始，歷經2.0分鐘快速上升至5%溶劑A及95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續0.7分鐘。
方法 L *：在具有Shimadzu LCMS-2020質譜儀之Shimadzu 30AD HPLC上，使用ESI作為電離源，使用Ascentis Express C18 2.7 μm，2.1x50管柱及1.0 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含0.05% TFA之95%水(溶劑A)及含0.05% TFA之5%乙腈(溶劑B)起始，歷經2.0分鐘快速上升至95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續0.7分鐘。
方法 M ：在具有LCMS-2020質譜儀之Shimadzu LC-20ADXR上，使用ESI作為電離源，使用poroshell HPH-C18，2.7 μm，3.0x50管柱及1.2ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含5 mM NH4 HCO3 之95%水(溶劑A)及5%乙腈(溶劑B)起始，歷經2.0分鐘快速上升至95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續0.7分鐘。
方法 M *：在具有Shimadzu LCMS2020質譜儀之Shimadzu 20AD XR HPLC上，使用ESI作為電離源，使用poroshell HPH-C18，2.7 μm，3.0x50管柱及1.2ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含5 mM碳酸氫銨之95%水(溶劑A)及5%乙腈(溶劑B)起始，歷經2.0分鐘快速上升至95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續0.7分鐘。
方法 N ：在具有LCMS-2020質譜儀之Shimadzu LC-30AD上，使用ESI作為電離源，使用CAPCELL CORE C18，2.7 μm，2.1x50 mm管柱及1.0 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含0.1% FA之95%水(溶劑A)及含0.1% FA之5%乙腈(溶劑B)起始，歷經2.0分鐘快速上升至5%溶劑A及95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續0.7分鐘。
方法 N *：在與Agilent MSD (6140)質譜儀連接之Agilent 1290 UHPLC上，使用ESI作為電離源進行實驗。LC分離使用Phenomenex XB-C18，1.7 μm，50 × 2.1 mm管柱，流速為0.4 ml/分鐘。溶劑A是含0.1% FA之水，且溶劑B為含0.1% FA之乙腈。梯度經歷7 min由2至98%溶劑B組成且在平衡1.5 min後保持98% B達1.5 min。LC管柱溫度為40℃。在220 nm及254 nm處收集UV吸光度，且將質譜全掃描應用於所有實驗。
方法 O ：在具有LCMS-2020質譜儀之Shimadzu LC-30AD上，使用ESI作為電離源，使用kinetex EVO C18，2.7 μm，2.1x50管柱及1.2ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含6.5 mM NH4 HCO3 之95%水(溶劑A)及5%乙腈(溶劑B)起始，歷經2.0分鐘快速上升至95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續0.7分鐘。
方法 O *：在具有Waters LCT Premier XE質譜儀之Waters Acquity UPLC上，使用ESI電離進行實驗。LC分離使用Acquity UPLC BEH C18，1.7 μm，2.1×50mm管柱及0.6 ml/min流速。MPA (流動相A)為含0.05% TFA之水，且MPB (流動相B)為含0.05% TFA之乙腈。梯度經歷5 min由2至98% MPB組成且在平衡0.5 min後保持98% B達0.5 min。LC管柱溫度為40℃。在220 nm及254 nm處收集UV資料，且將質譜全掃描應用於所有實驗。
方法 P ：在具有LCMS-2010質譜儀之Shimadzu LC-20AD上，使用ESI作為電離源，使用Shim-Pack XR-ODS 2.2 μm，3.0x50管柱及1.2 ml /分鐘流速進行實驗。溶劑系統為以含0.05% TFA之95%水(溶劑A)及含0.05% TFA之5%乙腈(溶劑B)起始，歷經2.0分鐘快速上升至5%溶劑A及95%溶劑B之梯度。最終溶劑系統保持恆定並再持續0.7分鐘。LC管柱溫度為40℃。在220 nm及254 nm處收集UV吸光度，且將質譜全掃描應用於所有實驗。化合物合成 合成中間物 實例I.1 中間物1：6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺 步驟 1 ：2,2-二乙氧基乙亞胺酸甲酯
向經攪拌之二乙氧基乙腈(7.0 g，54.2 mmol)於無水甲醇(50 mL)中之溶液中添加甲醇鈉於甲醇中之溶液(4.2 mL，20%，8.4 mmol)。添加後，將反應混合物在室溫下攪拌48小時。將反應物濃縮至乾燥，且將殘餘物吸收於氯仿中，且將有機層用水洗滌，乾燥且濃縮，得到呈無色油狀之2,2-二乙氧基乙亞胺酸甲酯(8.37 g，95%收率)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.95 (s, 1H), 4.82 (s, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.51 (q,J = 7.2 Hz, 4H), 1.14 (t,J = 7.2 Hz, 6H)。步驟 2 ：4-溴-2-氯-苯基)甲胺
向50 mL圓底燒瓶中添加BH3 -THF (1.0 M於THF中，32.5 mL，32.5 mmol)及THF(10 mL)中之4-溴-2-氯苯甲腈(1.76 g，8.13 mmol)。將混合物加熱回流2小時。藉由添加HCl水溶液來淬滅反應混合物(10 wt%收率)。藉由添加NaOH水溶液來將pH調整至8 (5 wt%收率)且用二氯甲烷萃取。將有機層乾燥，過濾且濃縮，得到(4-溴-2-氯-苯基)甲胺(1.62 g，90%收率)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI) [M+H]+ = 220.0。步驟 3 ：N-[(4-溴-2-氯-苯基)甲基]-2,2-二乙氧基-乙脒
將2,2-二乙氧基乙亞胺酸甲酯(2.7 g，16.8 mmol)滴加至經攪拌之(4-溴-2-氯-苯基)甲胺(2.47 g，11.2 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液中。在室溫下攪拌混合物2小時。將反應濃縮至乾燥，且將殘餘物吸收於二氯甲烷中。將有機層用鹽水洗滌，乾燥(Na2 SO4 )且濃縮為呈白色固體狀之粗品N-[(4-溴-2-氯-苯基)甲基]-2,2-二乙氧基-乙脒(3.76 g，89%收率)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS(ESI)[M + H] + = 349.0步驟 4 ：6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺
向粗品N-[(4-溴-2-氯-苯基)甲基]-2,2-二乙氧基-乙脒(1.9 g，5.05 mmol)中添加濃H2 SO4 (14.9 g，152 mmol)。該反應混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至0℃，且添加1 M NaOH溶液以將pH調整至7。將殘餘物用二氯甲烷萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌且乾燥(Na2 SO4 )，之後濃縮至乾燥。將粗品藉由急驟管柱層析術(乙酸乙酯:石油醚=1:3)純化，得到呈黃色固體狀之6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(410 mg，33%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 256.9 實例I.2 中間物2：N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)環丙烷羧醯胺
向冷卻(0℃) 6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(900 mg，2.1 mmol)及吡啶(166 mg，2.1 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之混合物中添加環丙烷羰基氯(263 mg，2.52 mmol)。將反應物在0℃攪拌1小時。藉由添加飽和NH4 Cl水溶液來將反應混合物淬滅，且用二氯甲烷萃取。將有機物乾燥，過濾且濃縮。將粗品藉由急驟管柱層析術(40%二氯甲烷於石油醚中)純化，得到呈黃色固體狀之(N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)環丙烷羧醯胺(550 mg，74%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 324.9 實例I.3 中間物3：8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-胺 步驟 1 ：4-胺基-2-氯-3-氟苯甲腈
向密封管中添加氰化銅(I) (1.2 g，13.37 mmol)、4-溴-3-氯-2-氟苯胺(1 g，4.46 mmol)及1-甲基-2-吡咯啶酮(8 mL)。在微波反應器中，將混合物在170℃下加熱1小時。藉由添加飽和NH4 Cl溶液(20 mL)淬滅反應混合物且過濾。將濾液用乙酸乙酯(3 x 100 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(3 x 10 mL)洗滌，用Na2 SO4 乾燥，透過矽膠墊過濾且濃縮至乾燥，得到呈黃色固體狀之4-胺基-2-氯-3-氟苯甲腈(700 mg，92%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 171.1。步驟 2 ：2-氯-3-氟-4-碘苯甲腈
在65℃在N2 下向CuI (3341 mg，17.59 mmol)於乙腈(50 mL)中之懸浮液中添加亞硝酸第三丁酯(1811 mg，17.59 mmol)。將混合物在65℃攪拌10分鐘。隨後將4-胺基-2-氯-3-氟苯甲腈(2 g，11.73 mmol)添加至反應混合物中。在65℃下將混合物攪拌12小時。將混合物用飽和水性Na2 S2 O4 (30 mL)及水性NH4 Cl (30 mL)淬滅，且用乙酸乙酯(3 x 300 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(2 x10 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥且過濾。將濾液濃縮，得到粗產物，將其藉由急驟層析術(石油醚/乙酸乙酯=5/1)純化，得到呈黃色固體狀之2-氯-3-氟-4-碘苯甲腈(1 g，30%收率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.80 (dd,J = 5.6, 8.2 Hz, 1H), 7.22 (dd,J = 1.4, 8.2 Hz, 1H)。步驟 3 ：(2-氯-3-氟-4-碘苯基)甲胺
在0℃下，將2-氯-3-氟-4-碘苯甲腈(1 g，3.55 mmol)添加至硼烷-THF (35.53 mL，1 M於THF中，35.53 mmol)於THF(30 mL)中之溶液中。隨後將混合物溫熱至室溫且攪拌隔夜。藉由滴加HCl溶液(6 M，2 mL)來淬滅反應物溶液。將混合物用NaHCO3 水溶液中和至pH=8，且用二氯甲烷(2 x 200 mL)萃取。將合併之有機層用水(2 x 10 mL)及鹽水(1 x 10 mL)洗滌，乾燥(Na2 SO4 )，過濾且濃縮，得到(2-氯-3-氟-4-碘苯基)甲胺(400 mg，粗品)，其不經進一步純化即直接用於下一步驟中。LCMS (ESI) [M+H]+ = 285.9。步驟 4 ：N-(2-氯-3-氟-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙亞胺醯胺
向2,2-二乙氧基乙亞胺酸甲酯(0.3 g，1.88 mmol)於甲醇(5 mL)中之溶液中添加(2-氯-3-氟-4-碘苯基)甲胺(250 mg，0.88 mmol)。將反應混合物在25℃攪拌12小時，隨後濃縮至乾燥。將殘餘物吸收於二氯甲烷(20 mL)中，用水(2 x 10 mL)洗滌，隨後用鹽水洗滌，乾燥(MgSO4 )，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之N-(2-氯-3-氟-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙亞胺醯胺(360 mg，粗品)。其不經純化即直接用於下一步驟中。LCMS (ESI) [M+H]+ = 415.0。步驟 5 ：8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-胺
將N-(2-氯-3-氟-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙亞胺醯胺(0.36 g，0.87 mmol)及濃H2 SO4 (10 mL，26.05 mmol)之溶液在60℃攪拌12小時。將混合物冷卻至0℃且添加NaOH以調整至pH 9。將殘餘物用二氯甲烷(5 x 100 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，乾燥(Na2 SO4 )，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-胺(0.25 g，粗品)，其直接用於下一步驟中。LCMS (ESI) [M+H]+ = 322.9。1 H NMR (400MHz, CD3 OD) δ 9.00 (s, 1H), 8.08 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H)。 實例I.4 中間物4：7-溴-8-氯-6-碘異喹啉-3-胺 步驟 1 ：4-胺基-3-溴-2-氯苯甲腈
向4-胺基-2-氯苯甲腈(1.5 g，9.83 mmol)於乙腈(30 mL)中之溶液中添加1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑啶二酮(1.5 g，5.25 mmol)。將溶液在25℃攪拌2小時。藉由添加飽和NaHSO3 溶液(30 mL)來淬滅反應，且用乙酸乙酯(50 mL x 2)萃取。濃縮有機層。將粗產物藉由急驟層析術(10%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈黃色固體狀之4-胺基-3-溴-2-氯苯甲腈及4-胺基-5-溴-2-氯苯甲腈之混合物(850 mg，5/2比率之區域異構物，26%收率)。混合物將在下一步驟直接使用。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.67 (s, 1H), 7.38 (d,J = 8.4 Hz, 2.6H), 6.80 (s, 1H), 6.65 (d,J = 8.4 Hz, 2.6H), 4.81(bs, 5H), 4.71 (bs, 2H)。步驟 2 ：3-溴-2-氯-4-碘苯甲腈
向CuI (51.63 g，271.74 mmol)於乙腈(300 mL)中之懸浮液中添加亞硝酸第三丁酯(33.59 g，326.09 mmol)。將混合物在65℃攪拌10分鐘。將4-胺基-3-溴-2-氯苯甲腈及4-胺基-5-溴-2-氯苯甲腈之混合物(3/4比率，25 g，108.7 mmol)添加至反應混合物中。在65℃下將混合物攪拌12小時。將混合物用飽和Na2 S2 O4 溶液(30 mL)猝滅，且用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥且過濾。將濾液濃縮且藉由急驟管柱層析術(5%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈黃色固體狀之3-溴-2-氯-4-碘苯甲腈(5 g，31%收率)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) 7.91(d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (d,J = 8.0 Hz, 1H)。步驟 3 ：(3-溴-2-氯-4-碘苯基)甲胺
向3-溴-2-氯-4-碘苯甲腈(3 g，8.76 mmol)於THF(30 mL)中之溶液中添加硼烷-THF (30 mL，1 M於THF中，30 mmol)。將混合物在N2 下在65℃攪拌3 h。藉由添加甲醇(10 mL)及HCl (12 N，10 mL)淬滅混合物。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物吸收於乙酸乙酯(100 mL)中且用水(50 mLx 2)萃取。丟棄有機層，且藉由添加飽和NaHCO3 溶液將水層之pH調整至pH 9。將混合物用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取。將合併之有機層用水(10 mL x 2)，隨後用鹽水(10 mL)洗滌，乾燥(Na2 SO4 )，過濾且濃縮，得到呈黃色油狀之(3-溴-2-氯-4-碘苯基)甲胺(3 g，99%收率)。其直接用於下一步驟。LCMS (ESI) [M+H]+ = 345.9。步驟 4 ：N-(3-溴-2-氯-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙亞胺醯胺
向(3-溴-2-氯-4-碘苯基)甲胺(2.5 g，7.22 mmol)於甲醇(20 mL)中之溶液中添加2,2-二乙氧基乙亞胺酸甲酯(3.75 g，23.26 mmol)。將溶液在25℃攪拌12小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物溶於二氯甲烷(20 mL)中，用水及鹽水洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之N-(3-溴-2-氯-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙亞胺醯胺(3 g，87%收率)。其直接用於下一步驟。LCMS (ESI) [M+H]+ = 474.9。步驟 5 ：7-溴-8-氯-6-碘異喹啉-3-胺
將硫酸(10 mL)及N-(3-溴-2-氯-4-碘苄基)-2,2-二乙氧基乙亞胺醯胺(3 g，6.31 mmol)之混合物在60℃攪拌12小時。將反應混合物冷卻至0℃，隨後添加NaOH溶液以將pH調整至9。將殘餘物用二氯甲烷(100 mL x 3)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之7-溴-8-氯-6-碘異喹啉-3-胺(2.4 g，99%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 382.8。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 8.99 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.49 (s, 2H)。 實例I.5 中間物5：7-溴-8-氯異喹啉-3-胺 步驟 1 ：(3-溴-2-氯苯基)甲胺
將1-溴-2-氯-3-甲基苯(1.0 g，4.87 mmol)、NBS(1.3 g，7.3 mmol)及過氧化苯甲醯(11 mg，0.05 mmol)於四氯化碳(10 mL)中之混合物在80℃下加熱18小時。將混合物濃縮，隨後添加二氯甲烷(10 mL)及水(10 mL)。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物重新溶於乙醇(10 mL)中且添加NH4 OH (10 mL，4.87 mmol)。隨後將混合物在室溫下攪拌2小時。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (正相，矽膠，二氯甲烷\甲醇=20:1)純化，得到呈黃色固體狀之(3-溴-2-氯苯基)甲胺(500 mg，46%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 220.0。步驟 2 ：N-(3-溴-2-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙亞胺醯胺
將2,2-二乙氧基乙亞胺酸甲酯(548 mg，3.4 mmol)滴加至經攪拌之(3-溴-2-氯苯基)甲胺(500 mg，2.27 mmol)於甲醇(100 mL)中之溶液中。將混合物在室溫下攪拌16小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物吸收於二氯甲烷中，且將有機溶液用鹽水洗滌。將有機萃取物乾燥(Na2 SO4 )且濃縮，得到呈黃色油狀之粗產物N-(3-溴-2-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙亞胺醯胺(500 mg，1.43 mmol，63%收率)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI) [M+H]+ = 351.0。步驟 3 ：7-溴-8-氯異喹啉-3-胺
在0℃在惰性氣氛(N2 )下將粗品N-(3-溴-2-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙亞胺醯胺(500 mg，1.43 mmol)放置於圓底燒瓶中，且添加濃H2 SO4 (4207 mg，42.9 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌隔夜。將反應混合物傾入冰水中。添加NH4 OH以將pH調整至8。藉由過濾收集固體，得到呈黃色固體狀之7-溴-8-氯異喹啉-3-胺(300 mg，81%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 257.0。 實例I.6 中間物6：8-溴-7-氯異喹啉-3-基三氟甲烷磺酸酯 步驟 1 ：(2-溴-3-氯苯基)甲胺
將2-溴-1-氯-3-甲基苯(500 mg，2.43 mmol)、NBS(649 mg，3.65 mmol)、過氧化苯甲醯(5 mg，0.02 mmol)及四氯化碳(10 mL)之混合物在80℃下加熱18小時。隨後濃縮混合物。隨後添加二氯甲烷(10 mL)及水(10 mL)。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物溶於乙醇(10 mL)中且添加NH4 OH (5 mL，2.43 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (正相，矽膠，二氯甲烷\甲醇=20:1)純化，得到呈黃色固體狀之(2-溴-3-氯苯基)甲胺(300 mg，1.36 mmol，55%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 220.0。步驟 2 ：N-(2-溴-3-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙醯胺
向(2,2-二乙氧基乙醯)氧基鈉(270 mg，1.59 mmol)、(2-溴-3-氯苯基)甲胺(350 mg，1.59 mmol)、HOBT (321 mg，2.38 mmol)、EDCI (454 mg，2.38 mmol)及DMF (50 mL)之混合物中添加DIPEA (819 mg，6.35 mmol)。將混合物在室溫下攪拌18小時。隨後添加水(50 mL)。將混合物用乙酸乙酯(30 mL x 2)萃取。將合併之有機萃取物用水(50 mL x 3)洗滌，隨後用鹽水(20 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之N-(2-溴-3-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙醯胺(500 mg，89%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 351.0。步驟 3 ：8-溴-7-氯異喹啉-3-醇
將N-(2-溴-3-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙醯胺(500 mg，1.43 mmol)及濃H2 SO4 (10 mL，14.26 mmol)之混合物在室溫下攪拌3小時。將混合物傾入冰水中。添加氫氧化銨以將混合物調整至pH 8。將混合物用乙酸乙酯(30 mL x 2)萃取。將有機層用水(20 mL x 3)、鹽水(20 ml)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之8-溴-7-氯異喹啉-3-醇(270 mg，73%收率)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI) [M+H]+ = 258.0。步驟 4 ：8-溴-7-氯異喹啉-3-基三氟甲烷磺酸酯
將8-溴-7-氯異喹啉-3-醇(270 mg，1.04 mmol)、二氯甲烷(10 mL)及DIPEA (404 mg，3.13 mmol)之混合物冷卻至0℃。緩慢添加三氟甲烷磺酸酐(383.1 mg，1.36 mmol)。隨後將混合物在室溫下攪拌16小時。添加飽和NH4 Cl水溶液(10 mL)。用二氯甲烷(10 mL x 2)萃取混合物。有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC (正相，矽膠，石油醚/乙酸乙酯= 10/1)純化，得到呈黃色固體狀之8-溴-7-氯異喹啉-3-基三氟甲烷磺酸酯(290 mg，71%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 391.0。 實例I.7 中間物7：8-溴-7-氟異喹啉-3-基三氟甲烷磺酸酯 步驟 1 ：(2-溴-3-氟苯基)甲胺
向2-溴-3-氟苯甲腈(1.5 g，7.5 mmol)於THF(10 mL)中之溶液中添加BH3 -THF (2 M於THF中，11.2 mL，22.4 mmol)。將所得溶液在60℃下加熱2小時。將混合物冷卻至0℃。添加1 N HCl溶液以淬滅反應。添加1 N NaOH溶液以將混合物之pH調整至8。用二氯甲烷(20 mL x 2)萃取混合物。將有機萃取物用水(20 mL x 3)、鹽水(20 ml)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到黃色固體狀之(2-溴-3-氟苯基)甲胺(850 mg，56%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 206.0。步驟 2 ：N-(2-溴-3-氟苄基)-2,2-二乙氧基乙醯胺
將(2,2-二乙氧基乙醯基)氧基鈉(667 mg，3.92 mmol)、(2-溴-3-氟苯基)甲胺(800 mg，3.92 mmol)、HOBT (793 mg，5.88 mmol)及DIPEA (2.0 g，15.68 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物在室溫下攪拌18小時。隨後添加水(50 mL)。將混合物用乙酸乙酯(30 mL x 2)萃取。將有機層用水(50 mL x 3)、鹽水(20 ml)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物藉由急驟層析術(石油醚/乙酸乙酯=5/1)純化，得到呈無色油狀之N-(2-溴-3-氟苄基)-2,2-二乙氧基乙醯胺(820 mg，62%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 336.0。步驟 3 ：8-溴-7-氟異喹啉-3-醇
將N-(2-溴-3-氟苄基)-2,2-二乙氧基乙醯胺(953 mg，2.85 mmol)及濃H2 SO4 (10 mL，28 mmol)之混合物在室溫下攪拌3小時。將混合物傾入冰水中。添加氫氧化銨以將pH調整至8。將混合物用乙酸乙酯(30 mL x 2)萃取。將有機層用水(20 mL x 3)、鹽水(20 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之粗品8-溴-7-氟異喹啉-3-醇(500 mg，72%收率)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI) [M+H]+ = 243.9。步驟 4 ：8-溴-7-氟異喹啉-3-基三氟甲烷磺酸酯
將8-溴-7-氟異喹啉-3-醇(500 mg，2.07 mmol)、二氯甲烷(10 mL)及DIPEA (799 mg，6.2 mmol)之混合物冷卻至0℃。緩慢添加三氟甲烷磺酸酐(757 mg，2.69 mmol)。將混合物在室溫下攪拌3小時。添加水性飽和NH4 Cl (10 mL)。用二氯甲烷(10 mL x 2)萃取混合物。將合併之有機萃取物經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC (正相矽膠，石油醚/乙酸乙酯= 10/1)純化，得到呈黃色固體狀之8-溴-7-氟異喹啉-3-基三氟甲烷磺酸酯(600 mg，77%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 373.9。 實例I.8 中間物8：(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺 步驟 1 ：7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺
將7-溴-8-氯-6-碘-異喹啉-3-胺(3.6 g，9.39 mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(2.5 g，11.41 mmol)、Pd(PPh3 )4 (750 mg，0.65 mmol)、K2 CO3 (3.8 g，27.54 mmol)於1,4-二噁烷(160 mL)及水(40 mL)中之混合物在70℃在Ar下攪拌23小時。將反應混合物冷卻至室溫。添加乙酸乙酯且將混合物用鹽水(100 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物用矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:2至乙酸乙酯)純化，得到呈黃色固體狀之7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(2.9 g，89%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 348.0。步驟 2 ：(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
在0℃下，將草醯氯(3.0 g，23.62 mmol)滴加至(±)-反式-2-氰基環丙烷羧酸(1.2 g，10.8 mmol)之懸浮液中。將混合物在0℃攪拌1小時。將混合物在室溫下蒸發以除去二氯甲烷及過量草醯氯。將殘餘物再懸浮於二氯甲烷(5 mL)中，且滴加至7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(2.9 g，8.32 mmol)及吡啶(10 mL，123.64 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之混合物中。隨後將反應混合物在0℃攪拌0.5小時。反應混合物用二氯甲烷(100 mL)稀釋且用H2 O (50 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物用矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:1至1:2)純化，得到呈淡褐色固體狀之(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(2.85 g，78%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 441.0。 實例I.9 中間物9：(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)硼酸
在氮氣下將雙(頻哪醇合)二硼(976 mg，3.84 mmol)、6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(900 mg，3.5 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (127 mg，0.17 mmol)及乙酸鉀(1370 mg，13.98 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在100℃攪拌3小時。添加乙酸乙酯(50 mL)。將混合物過濾且濃縮，得到呈黃色油狀之粗品(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)硼酸(830 mg，78%收率)，其不經進一步純化即直接使用。LCMS (ESI): [M+H]+ = 223.1。 實例I.10 中間物10：(±)-反式-N-(6-溴-8-氯異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將乙烷二醯二氯(1330 mg，10.49 mmol)、(±)-反式-2-氰基環丙烷羧酸(582 mg，5.24 mmol)及一滴DMF於二氯甲烷(5 mL)中之混合物在室溫下攪拌0.5小時。將反應物濃縮至乾燥。在0℃下向6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(450 mg，1.75 mmol)於二氯甲烷(5 mL)及吡啶(1 mL)中之溶液中逐份添加殘餘物。在室溫下攪拌混合物1小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 4:1至石油醚:乙酸乙酯= 2:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(200 mg，32.6%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 352.0。 實例I.11 中間物11：(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺 步驟 1 ：(±)-順式-2-氟環丙烷羰基氯
向(±)-順式-2-氟環丙烷羧酸(2.1 g，20.18 mmol)於二氯甲烷(10 mL)及DMF (0.10 mL)中之溶液中滴加乙烷二醯二氯(3.33 g，26.23 mmol)。將混合物在25℃攪拌2小時。將反應混合物在真空中濃縮，得到黃色殘餘物，其隨後直接用於下一步驟中。步驟 2 ：(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺
向6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(2.0 g，7.77 mmol)於二氯甲烷(10 mL)及吡啶(1.88 mL，23.3 mmol)中之溶液中添加(±)-順式-2-氟環丙烷羰基氯(2.38 g，19.42 mmol)溶於二氯甲烷(2 mL)中之溶液。將混合物在25℃攪拌2小時，隨後濃縮。添加水(10 mL)，隨後添加1 N HCl溶液以將混合物之pH調整至6。用二氯甲烷(10 mL x 3)萃取混合物。將有機層用鹽水(20 ml)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術(石油醚/乙酸乙酯=4:1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(2.3 g，86%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 343.0。 實例I.12 中間物12：(±)-反式-8-氯-3-((反式)-2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基硼酸
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(300 mg，0.86 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(261 mg，1.03 mmol)、乙酸鉀(210 mg，2.14 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (31 mg，0.04 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)中之混合物在密封管中在80℃攪拌3小時。將混合物濃縮，得到黑色固體狀之(±)-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]硼酸(240 mg，59%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 316.0。 實例I.13中間物 13 ：N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯
將8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(3.6 g，11.2 mmol)、N-第三丁氧基羰基-N-[4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-3-吡啶基]胺基甲酸第三丁酯(10 g，23 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (0.82 g，1.1 mmol)、碳酸鉀(3.4 g，25 mmol)於1,4-二噁烷(100 mL)及水(10 mL)中之混合物在90℃攪拌2 h。將反應物過濾。將產物用乙酸乙酯萃取。將合併之有機萃取物合併且在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術(40%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈黃色油狀之標題化合物(3.4 g，61%)。 實例I.14中間物 14 ：8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-2,3-二氫吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸第三丁酯 步驟 1 ：7-溴-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸第三丁酯
在0℃下向7-溴-8-甲基-2,3-二氫-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪(1 g，4.37 mmol)於四氫呋喃(2 mL)中之溶液中滴加LiHMDS (8.73 mL，8.73 mmol，1 mol/L)。將所得溶液在0℃在氮氣下攪拌0.5 h。隨後添加二碳酸二第三丁酯(2.85 g，13.07 mmol)，且將反應物在室溫下攪拌2 h。將反應藉由甲醇(50 mL)淬滅。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠急驟層析術(乙酸乙酯/石油醚，1/4)純化，得到呈黃色油狀之7-溴-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸第三丁酯(800 mg，2.43 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 329.2。步驟 2 ：8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-2,3-二氫吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸第三丁酯
將7-溴-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸第三丁酯(6.2 g，18.83 mmol)、二頻哪醇二硼(23.93 g，94.22 mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (2.76 g，3.77 mmol)及乙酸鉀(5.55 g，56.62 mmol)於1,4-二噁烷(2 mL)中之混合物在90℃在氮氣下攪拌2.5 h。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(30%)溶離來純化，得到呈黃色油狀之8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-2,3-二氫吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪-1-羧酸第三丁酯(5 g，13.29 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 376.3。 實例I.15中間物 15 ：2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸 步驟 1 ：四氟硼酸二苯基(丙基)鋶
在0℃向四氟硼酸銀(2 g，10.31 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加1-碘丙烷(1.75 g，10.31 mmol)及二苯基硫醚(5.76 g，30.93 mmol)。將反應物在35℃攪拌15小時。過濾混合物，且在真空下濃縮濾液。經殘餘物用二氯甲烷-乙醚洗滌，得到呈白色固體狀之四氟硼酸二苯基(丙基)鋶(2 g，6.32 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 229。步驟 2 ：2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸第三 丁酯
在-78℃下向四氟硼酸二苯基(丙基)鋶(1.50 g，4.75 mmol)於1,2-二甲氧基乙烷(30 mL)及二氯甲烷(3 mL)中之溶液中添加二異丙基胺基鋰(5.54 ml，11.09 mmol)。將所得混合物在-78℃攪拌1小時。隨後添加(Z )-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯酸第三 丁酯(330 mg，1.58 mmol)，且在-78℃至25℃攪拌15小時。將反應用水淬滅。所得混合物用二氯甲烷萃取且用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈褐色油狀之2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸第三 丁酯(350 mg，1.40 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 251。步驟 3 ：2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸
將2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸反式-第三 丁酯(350 mg，1.4 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(8 mL)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% HCl於水中)純化，得到呈褐色油狀之2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸(260 mg，1.34 mmol)。產物混合物由吡唑與羧酸成反式 之4種立體異構物及作為污染物之(+/-)-2,2-二甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧酸組成。LCMS (ESI) [M+H]+ = 195。 實例I.16中間物 16 ：2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮 步驟 1 ：2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙腈
將3,5-二溴-1H-吡唑(1.0 g，4.43 mmol)及碳酸鉀(1.22 g，8.85 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(20 mL)中之混合物在25℃攪拌10 min。添加溴乙腈(796.59 mg，6.64 mmol)且將反應物在25℃攪拌2 h。過濾後，將濾液用乙酸乙酯(30 mL)稀釋。將反應物用水洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/二氯甲醇(1/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙腈(950 mg，3.59 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =264。步驟 2 ：2-[3-溴-5-(2-甲基丙-1-烯基)吡唑-1-基]乙腈
將2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙腈(1.0 g，3.77 mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基丙-1-烯-1-基)-1,3,2-二氧雜硼雜戊環(687.29 mg，3.77 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (552.64 mg，0.75 mmol)及碳酸鉀(1.56 g，11.32 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)及水(2 mL)中之混合物在100℃在氮氣下攪拌1 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠急驟層析術用乙酸乙酯/石油醚(1/3)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-[3-溴-5-(2-甲基丙-1-烯基)吡唑-1-基]乙腈(700 mg，2.92 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =240。步驟 3 ：2-溴-5,5-二甲基-6,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將2-[3-溴-5-(2-甲基丙-1-烯基)吡唑-1-基]乙腈(700 mg，2.92 mmol)於甲基磺酸(15 mL)中之混合物在65℃攪拌3 d。將反應用冰水淬滅。將反應混合物用氫氧化鈉水溶液調整至pH 9至10。將所得溶液用二氯甲烷萃取且用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈白色固體狀之2-溴-5,5-二甲基-6,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(300 mg，1.16 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =258。步驟 4 ：2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將2-溴-5,5-二甲基-6,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(100 mg，0.39 mmol)及第三丁醇鉀(52.07 mg，0.46 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液在25℃攪拌10 min。添加碘甲烷(82.52 mg，0.58 mmol)。將反應物在25℃攪拌1 h。將反應物在真空下濃縮，且藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(95/5)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(80 mg，0.29 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =272。實例I.17中間物 17 ：2-溴-4-亞甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮 步驟 1 ：3,5-二溴-1H-吡唑
在N2 下向3 L 3頸圓底燒瓶中添加二甲基四氫呋喃(1000 mL)中之化合物1 (200 g，656 mmol，1.0當量)，隨後將溶液冷卻至-78℃。在-78℃下將n-BuLi (2.5 M，525 mL，2.0當量)滴加至以上溶液中1小時，且將混合物在-78℃攪拌3小時。TLC (石油醚/乙酸乙酯= 3/1，Rf = 0.51)顯示反應完成，且形成一個主要的新斑點。將兩種反應物合併，且將反應混合物在0℃下傾入水(1000 mL)中，且用2 N HCl將溶液之pH值酸化至4至5。將所得溶液用乙酸乙酯(1000 mL，800 mL，400 mL)萃取。將合併之有機相用鹽水(800 mL)洗滌，用無水Na2 SO4 乾燥且在真空下濃縮，得到呈黃色固體狀之標題化合物(284 g，1.26 mol，95.8%收率)。粗產物不經進一步純化即直接用於下一步驟。步驟 2 ：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸第三丁酯
向3,5-二溴-1H-吡唑(137 g，607 mmol，1.0當量)於MeCN (959 mL)中之溶液中添加2-氯乙酸第三丁酯(137 g，910 mmol，131 mL，1.5當量)、K2 CO3 (137 g，989 mmol，1.63當量)及TBAI (11.0 g，29.7 mmol，0.049當量)。將所得溶液在25℃攪拌12小時。TLC (石油醚/乙酸乙酯= 5/1，Rf = 0.74)顯示反應完成，且形成一個主要的新斑點。將反應混合物過濾，將濾餅用EtOAc (500 mL x3，300 mL，200 mL)洗滌。將合併之濾液濃縮，得到殘餘物。將殘餘物溶於EtOAc (2.0 L)中，用水(1.0 L)、鹽水(1.0 L)洗滌。將有機相用無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈褐色油狀之標題化合物(744 g，粗品)。1 H NMR: (400MHz, CDCl3 ): δ 6.35 (s, 1 H), 4.80 (s, 2 H), 1.46 (s, 9 H)。步驟 3 ：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸
向化合物2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸第三丁酯(248 g，729 mmol，1.0當量)於DCM (140 mL)中之溶液中添加TFA (2.08 kg，18.2 mol，1.35 L，25當量)，且將所得溶液加熱至80℃且攪拌2小時。TLC (石油醚/乙酸乙酯= 5/1，Rf = 0.03)顯示反應完成，且形成一個主要的新斑點。將反應重複兩次。將合併之反應混合物在減壓下濃縮，得到粗產物。將粗產物用石油醚/乙酸乙酯(4/1，1.0 L)稀釋，且將所得懸浮液在25℃攪拌1小時，隨後過濾。將濾餅收集且在真空中乾燥，得到呈乳白色固體狀之標題化合物(471 g，1.66 mol，75.8%收率)。 1 H NMR: (400 MHz, DMSO) δ 13.3 (br s, 1 H), 6.70 (s, 1 H), 4.96 (s, 2 H)。步驟 4 ：N-烯丙基-2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙醯胺
向2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸(157 g，553 mmol，1.0當量)於DMF (1.10 L)中之溶液中添加DIPEA (357 g，2.77 mol，482 mL，5.0當量)及EDCI (138 g，719 mmol，1.3當量)，將所得溶液在0℃攪拌30 min。隨後添加HOBt (97.1 g，719 mmol，1.3當量)，且將混合物在0℃下再攪拌30 min。隨後在0℃下添加丙-2-烯-1-胺(47.4 g，830 mmol，62.2 mL，1.5當量)，且將混合物溫熱至25℃且攪拌16小時。TLC (石油醚/乙酸乙酯= 1/1，Rf = 0.60)顯示反應完成，且形成一個主要的新斑點。將反應再重複兩次。將三批反應物合併，且將反應混合物傾入冰水(12.0 L)中，用乙酸乙酯(2.00 L，2.00 L，1.00 L)萃取。將合併之有機相用鹽水(2.0 L)洗滌，隨後在真空中濃縮，得到粗產物。將粗產物藉由管柱層析術在矽膠上(石油醚/乙酸乙酯= 3/1)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物(340 g，1.05 mol，63.5%收率)。1 H NMR: (400MHz, CDCl3) δ 6.41 (s, 1 H), 5.89 (br s, 1 H), 5.79 (m, 1 H), 5.08 - 5.17 (m, 2 H), 4.85 (s, 2 H), 3.86 - 3.93 (m, 2 H)。步驟 5 ：N-烯丙基-2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-(4-甲氧基苄基)乙醯胺
向N-烯丙基-2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙醯胺(103 g，319 mmol，1.0當量)於THF (721 mL)中之溶液中添加KOH (32.2 g，574 mmol，1.8當量)、18-冠-6 (3.37 g，12.8 mmol，0.04當量)及1-(氯甲基)-4-甲氧基-苯(64.9 g，415 mmol，56.5 mL，1.3當量)，隨後將混合物在25℃攪拌64 h。TLC (石油醚/乙酸乙酯= 2/1，Rf = 0.50)顯示，一個主要的新斑點形成。將反應再重複兩次。將三批反應物合併，且向反應混合物中添加水(1.00 L)，用1 M HCl將pH值調整至7至8，隨後用EtOAc (1.00 L，800 mL x 3)萃取。將合併之有機相用鹽水(800 mL)洗滌，用無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到粗產物。將粗產物藉由管柱層析術在矽膠上(石油醚/乙酸乙酯= 2/1)純化，得到呈褐色油狀之標題化合物(320 g，722 mmol，75.5%收率)。步驟 6 ：2-溴-6-(4-甲氧基苄基)-4-亞甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮
在Ar下向N-烯丙基-2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-(4-甲氧基苄基)乙醯胺(50.0 g，113 mmol，1.0當量)於DMF (1.0 L)中之溶液中添加K2 CO3 (31.2 g，226 mmol，2.0當量)、Pd(PPh3 )4 (17.0 g，14.7 mmol，0.13當量)，隨後將混合物在120℃攪拌16小時。將反應再重複六次。將七批反應物合併，且將反應混合物在真空中濃縮以除去溶劑，得到殘餘物。隨後向殘餘物中添加水(2.0 L)，用乙酸乙酯(2.0 L，1.0 L，1.0 L)萃取。將合併之有機相用鹽水(1.0 L)洗滌，隨後濃縮，得到粗產物。將粗產物藉由管柱層析術在矽膠上(石油醚/乙酸乙酯= 2/1)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物(74.1 g，204 mmol，25.9%收率，98.7%純度)。1 H NMR: (400MHz, CDCl3 ) δ 7.21 (d,J = 8.8 Hz, 2 H), 6.86 - 6.92 (m, 2 H), 6.52 (s, 1 H), 5.50 (s, 1 H), 5.20 (s, 2 H), 5.02 (s, 1 H), 4.58 (s, 2 H), 4.13 (s, 2 H), 3.83 (s, 3 H)。步驟 7 ：2-溴-4-亞甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮
將2-溴-6-(4-甲氧基苄基)-4-亞甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(3.90 g，10.8 mmol，1.0當量)、TFA (38.4 g，336 mmol，24.9 mL，31.3當量)及三氟甲烷磺酸(16.2 g，108 mmol，9.5 mL，10當量)於DCM (28 mL)中之溶液在25℃攪拌12小時。將反應混合物濃縮，得到殘餘物。向殘餘物中添加水(100 mL)，隨後用飽和NaHCO3 水溶液將pH值調整至6至7，用EtOAc (100 mL x 3，60 mL x 3)萃取。將合併之有機相用無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到粗產物。將粗產物藉由管柱層析術在矽膠上(石油醚/乙酸乙酯=1/1)純化，得到呈灰色固體狀之標題化合物(1.90 g，7.85 mmol，72.9%收率)。1 H NMR: (400MHz, CDCl3 ) δ 6.88 (s, 1 H), 6.54 (s, 1 H), 5.55 (s, 1 H), 5.21 (s, 1 H), 5.08 (s, 2 H), 4.15 (d,J = 6.0 Hz, 2 H)。 實例I.18中間物 18 ：2-溴-6-甲基-4-亞甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮 步驟 1 ：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙醯胺
將2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸(15 g，52.84 mmol)、甲基(丙-2-烯-1-基)胺(5.7 g，80.15 mmol)、N,N -二異丙基乙胺(27 g，208.9 mmol)及HATU (30 g，78.9 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(500 mL)中之溶液在室溫下攪拌16小時。將所得混合物用乙酸乙酯稀釋，隨後用氯化鈉溶液洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(2/3)溶離來純化，得到呈黃色油狀之2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙醯胺(16.3 g，92%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 338.0。步驟 2 ：2-溴-6-甲基-4-亞甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
在80℃下將2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙醯胺(5 g，14.84 mmol)、乙酸鈀(166 mg，0.74 mmol)、三苯基膦(388 mg，1.48 mmol)、TBAB (4.8 g，14.890 mmol)及乙酸鉀(4.2 g，42.80 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(100 mL)中之溶液攪拌10 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物在矽膠管柱上純化，用乙酸乙酯/石油醚(2/1)溶離，得到呈褐色油狀之2-溴-6-甲基-4-亞甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(3.2 g，84%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 258.1。 實例I.19中間物 19 ：2-溴-6-異丙基-4-亞甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮
在25℃下向N-烯丙基-2-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-異丙基-乙醯胺(6.3 g，17.26 mmol)、二乙酸鈀(386.5 mg，1.73 mmol)、三苯基膦(904.29 mg，3.45 mmol)及溴化四丁銨(5.56 g，17.26 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(150 mL)中之混合物中添加乙酸鉀(4.87 g，51.77 mmol)。將所得混合物在90℃攪拌12小時。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，隨後用水洗滌。將有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(2/3)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-溴-6-異丙基-4-亞甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(2.34 g，8.23 mmol，47.7%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 284。 實例I.20中間物 20 ：2'-溴-6'-甲基-5',6'-二氫螺[環丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-7'(8'H)-酮
將碘化三甲基氧化鋶(1.29 g，5.86 mmol)及第三丁醇鉀(656 mg，5.85 mmol)於二甲基亞碸(30 mL)中之混合物在室溫下攪拌30 min。隨後添加2-溴-6-甲基-4-亞甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(500 mg，1.95 mmol)於二甲基亞碸(3 mL)中之溶液。隨後將混合物在50℃攪拌12 h。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，隨後用水洗滌。將有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)純化，得到呈白色固體狀之2'-溴-6'-甲基-5',6'-二氫螺[環丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-7'(8'H)-酮(120 mg，23%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 270。 實例I.21中間物 21 ：2-溴-6-甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮 步驟 1 ：2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲酯
向3-溴-5-甲基-1H-吡唑(100 g，621.12 mmol)、2-氯乙酸甲酯(101.11 g，931.68 mmol)及K2 CO3 (154.29 g，1118 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(1 L)中之溶液中添加TBAI (11.46 g，31.06 mmol)。將所得溶液在20℃攪拌12 h。用EA (5000 mL)稀釋反應混合物。將溶液用水(300 mLx3)洗滌且合併有機層。將有機層用無水硫酸鈉乾燥，且在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用PE/DCM(60/40)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲酯(120 g，82.9%收率)。步驟 2 ：2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲酯
將2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲酯(50.0 g，214.54 mmol)及AIBN (3.52 g，21.45 mmol)於四氯化碳(1500 mL)中之溶液在室溫下攪拌5 min。添加1-溴-2,5-吡咯啶二酮(40.09 g，225.26 mmol)。將混合物在80℃攪拌1小時。將反應混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用PE/EA(92/8)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲酯(35.5 g，53%收率)。步驟 3 ：2-(3-溴-5-(氰基甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸甲酯
將2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲酯(35.4 g，113.48 mmol)及氰化鈉(8.87 g，181.02 mmol)於二甲亞碸(550 mL)中之溶液在室溫下攪拌1小時。將反應溶液用EA (2.5 L)稀釋。將溶液用水(200 mLx5)洗滌且合併有機層。將有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用DCM/MeOH (99/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-(3-溴-5-(氰基甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸甲酯(17.6 g，60%收率)。步驟 4 ：2-(5-(2-胺基乙基)-3-溴-1H-吡唑-1-基)乙酸甲酯
向2-[3-溴-5-(氰基甲基)吡唑-1-基]乙酸甲酯(3.0 g，11.62 mmol)於甲醇(600 mL)中之溶液中添加PtO2 (600 mg，2.64 mmol)。將混合物在10 atm氫氣下在25℃攪拌15小時。將混合物過濾。濾液將不經純化即直接用於下一步驟中。步驟 5 ：2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
向2-[5-(2-胺基乙基)-3-溴-吡唑-1-基]乙酸甲酯溶液(600 mL)中添加TEA (70 mL)。將混合物在25℃攪拌15小時。將所得溶液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用DCM/MeOH (98/2)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(1.12 g，41.9%收率，在兩個步驟中)。步驟 6 ：2-溴-6-甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮
在20℃下向2-溴-5,6,7,8-四氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯(469.53 mg，2.17 mmol)及第三丁醇鉀(365.74 mg，3.26 mmol)於四氫呋喃(20 mL)中之混合物中添加碘甲烷(616.86 mg，4.35 mmol)。將所得溶液在20℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到2-溴-6-甲基-4,5,7,8-四氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯(400 mg，1.74 mmol，80%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 244 實例I.22中間物 22 ： 2-溴-6-異丙基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮
將2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(3.0 g，13.04 mmol)及NaH (1.56 g，39.12 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(75 mL)中之溶液在0℃攪拌10 min。隨後添加2-碘丙烷(11.08 g，65.2 mmol)。將混合物在25℃攪拌1小時。將反應用水淬滅。將混合物在真空下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈白色固體狀之2-溴-6-異丙基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(2.1 g，7.7166 mmol，59.2%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 272。 實例I.23中間物 23 ：8-溴-5,6-二氫-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯 步驟 1 ：2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-硫酮
將2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(314 mg，1.36 mmol)及勞森試劑(551.4 mg，1.36 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在90℃攪拌1 h。將反應物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(96/4)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-硫酮(265 mg，78.9%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 246.0。步驟 2 ：2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-胺
將2-溴-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-硫酮(265.0 mg，1.07 mmol)、2,2-二乙氧基乙-1-胺(1.42 g，10.7 mmol)及碳酸銀(590 mg，2.14 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之混合物在80℃攪拌1 h。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相管柱用水(0.05%TFA)/CH3 CN (85/15)溶離來純化，得到呈褐色油狀之2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-胺(295 mg，80%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 345.0。步驟 3 ：8-溴-5,6-二氫-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯
將2-溴-N-(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-胺(228 mg，0.66 mmol)及濃鹽酸(0.17 mL，0.66 mmol)於乙酸(5 mL)中之溶液在80℃攪拌1 h。將反應物在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相管柱用水(0.05%TFA)/ACN (85/15)溶離來純化，得到呈褐色油狀之8-溴-5,6-二氫-11H-咪唑并[1,2-a]吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯(150 mg，89.7%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 253.0。示範性化合物 實例1： (±)-反式-N-[8-胺基-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物1) 步驟 1 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(350 mg，1.0 mmol)、2-甲基-4-氰基苯基硼酸(193 mg，1.2 mmol)、Pd(PPh3 )4 (115 mg，0.1mmol)及Na2 CO3 (212 mg，2 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)及水(1 mL)中之混合物在Ar下在90℃攪拌3小時。將混合物濃縮且藉由管柱層析術(乙酸乙酯/己烷= 1:3)純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(380 mg，86%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 387.1。步驟 2 ：(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.26 mmol)、二苯甲酮亞胺(94 mg，0.52 mmol)、Pd(OAc)2 (12 mg，0.05 mmol)、Xantphos (60 mg，0.1 mmol)及Cs2 CO3 (168 mg，0.52 mmol)於DMF (6 mL)及甲苯(6 mL)中之混合物在Ar下在130℃攪拌2.5小時。添加乙酸乙酯(20 mL)。將混合物用鹽水(3 x 50 mL)洗滌，用Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下蒸發。將殘餘物藉由管柱層析術(乙酸乙酯/己烷= 1:3)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(130 mg，74%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 532.1。步驟 3 ：(±)-反式-N-[8-胺基-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(130 mg，0.19 mmol)於二氯甲烷(10 mL)、水(1 mL)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)中之混合物在25℃攪拌1小時。將反應混合物用NH4 OH (37%收率)中和至pH = 7至8。將混合物濃縮且藉由管柱層析術(乙酸乙酯/己烷= 1:2)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(4-氰基-2-甲基-苯基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(65 mg，93%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.842，[M+H]+ = 368.1，方法= C。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.12 (s, 1H), 9.35 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.73 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.54 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 6.39 (s, 2H), 2.78-2.73 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.16-2.11 (m, 1H), 1.62-1.57 (m, 1H), 1.45-1.44 (m, 1H)。 實例2： N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(化合物2) 步驟 1 ：N-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]環丙烷羧醯胺
將N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)環丙烷羧醯胺(270 mg，0.83 mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(500 mg，0.91 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (121 mg，0.17 mmol)及Na2 CO3 (175 mg，1.66 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在手套箱中在90℃下加熱18小時。將反應物濃縮且藉由製備型TLC (石油醚:乙酸乙酯=2:1)純化，得到呈白色固體狀之N-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]環丙烷羧醯胺(240 mg，72%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 338.0步驟 2 ：N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
將N-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]環丙烷羧醯胺(120 mg，0.36 mmol)、二苯甲酮亞胺(77 mg，0.43 mmol)、Cs2 CO3 (347 mg，1.07 mmol)、Pd(OAc)2 (16 mg，0.07 mmol)及XantPhos (41 mg，0.07 mmol)於DMF (3 mL)及甲苯(3 mL)中之混合物在微波中在150℃下加熱3小時。將混合物過濾且濃縮。添加THF (5 mL)及HCl於1,4-二噁烷(4 M，3 mL，12 mmol)中，接著在室溫下攪拌30分鐘。將混合物過濾且濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之N-[8-胺基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]環丙烷-羧醯胺(21 mg，18.6%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.781，[M+H]+ = 319.2，方法= C；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.78 (s, 1H), 9.31(s, 1H), 8.44 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.34 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 6.33 (s, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.07-2.04 (m, 1H), 0.83-0.80 (m, 4H)。 實例3： (±)-順式-N-[8-胺基-6-[4-(羥甲基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(化合物3)步驟1：(±)-順式-N-[8-氯-6-[4-(羥甲基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(170 mg，0.49 mmol)、1-羥基-3H-氧雜硼雜戊環并[3,4-c]吡啶(1 g，7.41 mmol)、PdCl2 dppf (150 mg，0.21 mmol)、K2 CO3 (200 mg，1.45 mmol)於1,4-二噁烷(16 mL)及水(4 mL)中之混合物在Ar在80℃攪拌1小時。將反應混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，且用鹽水(20 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:2)純化，得到呈淡褐色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-[4-(羥甲基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(140 mg，77%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 372.0。步驟 2 ：(±)-順式-N-[6-[4-[[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-3-吡啶基]-8-氯-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-氯-6-[4-(羥甲基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(140 mg，0.38 mmol)、第三丁基二甲基氯矽烷(500 mg，3.32 mmol)、三乙胺(600 mg，5.94 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之混合物回流隔夜。將反應混合物濃縮，且將所得殘餘物用矽膠管柱層析術(石油醚/EA = 2:1至1:1)純化，得到呈淡褐色固體狀之(±)-順式-N-[6-[4-[[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-3-吡啶基]-8-氯-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(110 mg，59%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 486.2。步驟 3 ：(±)-N-[6-[4-[[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-3-吡啶基]-3-[(順式-2-氟環丙烷羰基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯
將(±)-順式-N-[6-[4-[[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-3-吡啶基]-8-氯-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(95 mg，0.20 mmol)、BocNH2 (300 mg，2.56 mmol)、Pd2 dba3 (40 mg，0.04 mmol)、BrettPhos (40 mg，0.07 mmol)、t-BuONa (40 mg，0.42 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar下在90℃攪拌1小時。將反應混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，且用飽和NH4 Cl (20 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:1至1:2)純化，得到呈淡黃色固體狀之(±)-N-[6-[4-[[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-3-吡啶基]-3-[(順式-2-氟環丙烷羰基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(35 mg，31%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 567.3。步驟 4 ：(±)-順式-N-[8-胺基-6-[4-(羥甲基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
將(±)-N-[6-[4-[[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-3-吡啶基]-3-[(順式-2-氟環丙烷羰基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(35 mg，0.062 mmol)於甲醇(2 mL)及4 N HCl-二噁烷(2 mL，8 mmol)中之混合物在30℃攪拌2小時。將反應混合物濃縮。將殘餘物溶於甲醇(1 mL)中，藉由添加7 N NH3 /甲醇來調整pH直至獲得pH=9至10，且濃縮。將粗產物藉由急驟層析術(C18 ，NH4 HCO3 /甲醇/水)純化，得到呈淡褐色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-[4-(羥甲基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(11 mg，50%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.216，[M+H]+ = 353.1，方法= A；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.25 (s, 1H), 8.57 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.74 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.67 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 4.99-4.95 (m, 0.5 H), 4.83-4.79 (m, 0.5 H), 4.67 (s, 2H), 2.18-2.13 (m, 1H), 1.88-1.77 (m, 1H), 1.27-1.18 (m, 1H)。 實例4： N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(化合物4) 步驟 1 ：N-(8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
向8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-胺(0.25 g，0.78 mmol)於二氯甲烷(25 mL)中之溶液中添加吡啶(3 mL)及環丙烷羰基氯(0.3 g，2.84 mmol)。將混合物在25℃攪拌3小時。將溶液濃縮。將殘餘物藉由急驟管柱層析術(30%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈黃色固體狀之N-(8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(35 mg)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 390.9。步驟 2 ：N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
向N-(8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(35 mg，0.09 mmol)及4-甲基吡啶-3-硼酸(13 mg，0.1 mmol)於水(2 mL)及THF (5 mL)中之溶液中添加Na2 CO3 (27 mg，0.25 mmol)及Pd(dppf )Cl2 (7 mg，0.01 mmol)。將溶液在65℃攪拌3小時。冷卻後，將有機層濃縮。隨後將粗品藉由急驟管柱層析術(50%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈黃色固體狀之N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(20 mg，63%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 356.1。步驟 3 ：N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
將N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(20 mg，0.06 mmol)、二苯甲酮亞胺(15 mg，0.08 mmol)、Pd(OAc)2 (3 mg，0.01 mmol)、Xantphos (5 mg，0.01 mmol)、Cs2 CO3 (51 mg，0.16 mmol)、DMF (3 mL)及甲苯(1 mL)之混合物在微波反應器中在145℃下加熱1小時。添加水(10 mL)。將混合物用乙酸乙酯(10 mL x 3)萃取。將有機層用水(30 mL x 3)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物再溶於HCl於1,4-二噁烷(0.73 mL，4 M，2.93 mmol)中之溶液中，且將混合物在室溫下攪拌12小時。將溶液濃縮。將殘餘物用10 mL石油醚及5 mL乙酸乙酯之混合物洗滌。將粗品藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(3 mg，16%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.819，[M+H]+ = 337.0，方法= C；1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.05 (s, 1H), 8.54 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 8.48 (s, 2H), 8.26 (s, 1H), 7.26 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.06 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 4.45 (bs, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.63-1.60 (m,1H), 1.16-1.14 (m, 2H), 0.94-0.92 (m, 2H)。 實例5： N-(8-胺基-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(化合物5) 步驟 1 ：N-(7-溴-8-氯-6-碘異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
向7-溴-8-氯-6-碘異喹啉-3-胺(3 g，7.82 mmol)於二氯甲烷(25 mL)中之溶液中添加吡啶(3 mL)及環丙烷羰基氯(3 g，28.7 mmol)。將溶液在25℃攪拌3小時。將溶液濃縮。將殘餘物藉由急驟管柱層析術(5%甲醇於二氯甲烷中)純化，得到呈黃色固體狀之N-(7-溴-8-氯-6-碘異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(1.2 g，34%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 450.9。步驟 2 ：N-(7-溴-8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
向N-(7-溴-8-氯-6-碘異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(300 mg，0.66 mmol)及4-甲基吡啶-3-硼酸(100 mg，0.73 mmol)於水(2 mL)及THF (5 mL)中之混合物中添加Na2 CO3 (200 mg，1.89 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (50 mg，0.06 mmol)。將混合物在65℃攪拌3小時。冷卻後，將有機層濃縮。隨後將粗材料藉由急驟管柱層析術(50%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈褐色固體狀之N-(7-溴-8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3基)環丙烷羧醯胺(110 mg，40%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 416.0。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 11.21 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.55-8.53 (m, 2H), 8.37 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.42 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 2.10-2.07 (m, 4H), 0.86-0.85 (m, 4H)。步驟 3 ：N-(8-氯-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
將N-(7-溴-8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3基)環丙烷羧醯胺(300 mg，0.72 mmol)及CuCN (300 mg，3.33 mmol)於1-甲基-2-吡咯啶酮(3 mL)中之混合物在微波反應器中在200℃下加熱1小時。將混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，得到褐色沉澱物。將混合物過濾且濃縮。將殘餘物用氫氧化銨(5 mL)稀釋，且在室溫下攪拌1小時。將混合物用二氯甲烷(30 mL x 2)萃取，且用水(20 mL x 2)洗滌。將有機層濃縮且藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之N-(8-氯-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(120 mg，46%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 363.1。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ): δ 9.48 (s, 1H), 8.62-8.61 (m, 2H), 8.47 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.31 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 2.27 (s, 3H), 1.68-1.62 (m, 1H), 1.19-1.15 (m, 2H), 1.01-0.98 (m, 2H)。步驟 4 ：N-(8-胺基-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
在手套箱中將N-(8-氯-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(20 mg，0.06 mmol)、二苯甲酮亞胺(15 mg，0.08 mmol)、Pd(OAc)2 (3 mg，0.01 mmol)、Xantphos (5 mg，0.01 mmol)、Cs2 CO3 (50 mg，0.15 mmol)、DMF (3 mL)及甲苯(1 mL)之混合物添加至反應管中。隨後將反應物密封，且在微波反應器中在145℃下加熱1小時。添加水(10 mL)。將混合物用乙酸乙酯(10 mL x 3)萃取。將有機層用水(30 mL x 3)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物再溶於HCl於1,4-二噁烷(0.72 mL，4 M，2.87 mmol)中之溶液中。將混合物在室溫下攪拌12小時。將溶液濃縮，用10 mL石油醚及5 mL乙酸乙酯之混合物洗滌。將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之N-(8-胺基-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(4 mg，21%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.688，[M+H]+ = 344.1，方法= F；1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.04 (s, 1H), 8.55 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H),8.46 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.27 (d,J =5.2 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 5.43 (bs, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.60-1.57 (m, 1H), 1.17-1.15 (m, 2H), 0.97- 0.96 (m, 2H)。 實例6： N-(8-胺基-7-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(化合物6) 步驟 1 ：N-(7-溴-8-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
向N-(7-溴-8-氯-6-碘異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(250 mg，0.55 mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吡唑(126 mg，0.61 mmol)於水(3 mL)及THF (10 mL)中之溶液中添加Na2 CO3 (166 mg，1.57 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (41 mg，0.05 mmol)。將反應溶液在N2 下在85℃攪拌12小時，之後濃縮至乾燥。將殘餘物吸收於乙酸乙酯(10 mL)中，用水及鹽水洗滌，經MgSO4 乾燥且濃縮。將粗品藉由急驟管柱層析術(50%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈黃色固體狀之N-(7-溴-8-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(150 mg，67%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 405.0。步驟 2 ：N-(8-氯-7-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
將N-(7-溴-8-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(150 mg，0.37 mmol)及CuCN (154 mg，1.71 mmol)於1-甲基-2-吡咯啶酮(3 mL)中之混合物在微波反應器中在200℃下加熱1小時。將反應混合物用氫氧化銨(5 mL)稀釋，且在室溫下攪拌1小時。用二氯甲烷(30 mL x 2)萃取混合物。將合併之有機層用水(20 mL x 2)洗滌，乾燥且濃縮。將殘餘物藉由急驟管柱層析術(50%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈黃色固體狀之N-(8-氯-7-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(50 mg，38%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 352.1。步驟 3 ：N-(8-胺基-7-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
在手套箱中將N-(8-氯-7-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(50 mg，0.14 mmol)、二苯甲酮(39 mg，0.21 mmol)、Pd(OAc)2 (8 mg，0.03 mmol)、Xantphos (13 mg，0.02 mmol)、Cs2 CO3 (129 mg，0.4 mmol)、DMF (3 mL)及甲苯(1 mL)之混合物添加至密封管中。將所得混合物在微波反應器中在145℃下加熱1小時。添加水(10 mL)。將混合物用乙酸乙酯(10 mL x 3)萃取。將合併之有機層用水(30 mL x 3)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物溶於HCl於1,4-二噁烷(1.85 mL，4 M，7.41 mmol)中之溶液中。將混合物在室溫下攪拌13小時。將反應溶液濃縮，用10 mL石油醚及5 mL乙酸乙酯之混合物洗滌。將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之N-(8-胺基-7-氰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(5 mg，11%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.724，[M+H]+ = 333.1，方法= H；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.27 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 1.33 - 1.32 (m,1H), 1.04-1.03 (m, 2H), 0.95- 0.92 (m, 2H)。 實例7： (±)-[8-胺基-3-[(順式-2-氟環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-羧醯胺(化合物13) 步驟 1 ：5-溴-2-氯-4-甲基-嘧啶
將亞硝酸第三丁酯(16 g，155 mmol)中之混合物中滴加至5-溴-4-甲基-2-嘧啶基胺(5 g，26.59 mmol)及氯化苄基三乙銨(27 g，118.54 mmol)於二氯甲烷(200 mL)中之混合物中。將反應混合物在25℃攪拌2小時。將反應混合物用H2 O (50 mL)稀釋，用飽和NaHCO3 中和，且用二氯甲烷(300 mL x 3)萃取。將所有二氯甲烷層合併，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 10:1)純化，得到呈白色固體狀之5-溴-2-氯-4-甲基-嘧啶(2.5 g，45%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 208.9。步驟 2 ：5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲腈
將5-溴-2-氯-4-甲基嘧啶(2.5 g，12.08 mmol)、氰化鈉(600 mg，12.24 mmol)及DABCO (500 mg，4.46 mmol)於二甲亞碸(40 mL)及水(40 mL)中之混合物攪拌隔夜。將反應混合物用H2 O (100 mL)稀釋，且用乙酸乙酯(80 mL x 3)萃取。將乙酸乙酯層合併，用鹽水(50 mL x 2)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物用矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 10:1)純化，得到呈淡黃色固體狀之5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲腈(1.75 g，73%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 199.9。步驟 3 ：5-溴-4-甲基-嘧啶-2-羧酸甲酯
將5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲腈(1.35 g，6.82 mmol)於濃HCl (20 mL)及甲醇(20 mL)中之混合物回流2小時。將反應混合物濃縮。將殘餘物用水(20 mL)稀釋，藉由添加飽和NaHCO3 來調整至pH 7，且用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取。將所有乙酸乙酯層合併，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:1)純化，得到呈白色固體狀之5-溴-4-甲基-嘧啶-2-羧酸甲酯(940 mg，60%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 233.0。步驟 4 ：5-溴-4-甲基-嘧啶-2-羧酸
將5-溴-4-甲基-嘧啶-2-羧酸甲酯(300 mg，1.3 mmol)及LiOH單水合物(160 mg，3.81 mmol)於THF (5 mL)及水(5 mL)中之混合物在25℃攪拌2小時。將反應混合物濃縮以除去THF。將殘餘物水性層用水(20 mL)稀釋，且用乙酸乙酯(20 mL x 2)洗滌。藉由添加濃HCl將水性層酸化至pH 4至5。添加氯化鈉直至飽和，且隨後將產物用乙酸乙酯(40 mL x 5)萃取。將合併之萃取物合併，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。呈白色固體狀之5-溴-4-甲基-嘧啶-2-羧酸(230 mg，81%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 219.0。步驟 5 ：5-溴-N,4-二甲基-嘧啶-2-羧醯胺
在0℃下將草醯氯(200 mg，1.57 mmol)滴加至5-溴-4-甲基-嘧啶-2-羧酸(230 mg，1.06 mmol)於DMF (0.1 mL)及二氯甲烷(5 mL)中之混合物中。將反應混合物在25℃攪拌0.5小時，且濃縮。將殘餘物再溶於二氯甲烷(2 mL)中，且在0℃下滴加至CH3 NH2 (2 M於THF中，2 mL，4 mmol)及吡啶(0.51 mL，6.33 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中。將反應混合物在25℃攪拌1小時，且蒸發。將殘餘物用矽膠管柱層析術(二氯甲烷/乙酸乙酯= 1:4)純化，得到呈白色固體狀之5-溴-N,4-二甲基-嘧啶-2-羧醯胺(240 mg，98%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 230.0。步驟 6 ：[4-甲基-2-(甲基胺甲醯基)嘧啶-5-基]硼酸
將雙(頻哪醇合)二硼(200 mg，0.79 mmol)、5-溴-N,4-二甲基-嘧啶-2-羧醯胺(100 mg，0.43 mmol)、PdCl2 dppf (20 mg，0.03 mmol)、乙酸鉀(120 mg，1.22 mmol)於1,4-二噁烷(8 mL)中之混合物在Ar下在80℃攪拌隔夜。將[4-甲基-2-(甲基胺甲醯基)嘧啶-5-基]硼酸之反應混合物直接用於下一步驟中。LCMS (ESI) [M+H]+ = 196.1。步驟 7 ：(±)-5-[8-氯-3-[(順式-2-氟環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-羧醯胺
將(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.29 mmol)、[4-甲基-2-(甲基胺甲醯基)嘧啶-5-基]硼酸(反應混合物，約8 mL，約0.43 mmol)、PdCl2 dppf (20 mg，0.03 mmol)、K2 CO3 (120 mg，0.87 mmol)及水(2 mL)之混合物在Ar下在80℃攪拌2小時。將反應混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，且用鹽水(30 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物用矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:2)純化，得到呈淡褐色固體狀之(±)-5-[8-氯-3-[(順式-2-氟環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-羧醯胺(20 mg，17%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 414.0。步驟 8 ：(±)-5-[8-(二苯亞甲基胺基)-3-[(順式-2-氟環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-羧醯胺
將(±)-5-[8-氯-3-[(順式-2-氟環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-羧醯胺(20 mg，0.048 mmol)、二苯甲酮亞胺(80 mg，0.44 mmol)、Pd2 dba3 (10 mg，0.01 mmol)、Xantphos (10 mg，0.02 mmol)、Cs2 CO3 (40 mg，0.12 mmol)於DMF (1 mL)及甲苯(1 mL)中之混合物在Ar下在130℃攪拌1.5小時。將反應混合物冷卻至室溫。將殘餘物用乙酸乙酯(80 mL)稀釋，且用水(20 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物用矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:2至二氯甲烷/乙酸乙酯= 1:3)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-5-[8-(二苯亞甲基胺基)-3-[(順式-2-氟環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-羧醯胺(12 mg，44%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 559.2。步驟 9 ：(±)-5-[8-胺基-3-[(順式-2-氟環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-羧醯胺
將(±)-5-[8-(二苯亞甲基胺基)-3-[(順式-2-氟環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-羧醯胺(12 mg，0.021 mmol)於水(0.1 ml)、2,2,2-三氟乙酸(0.5 ml)及二氯甲烷(3 ml)中之混合物在30℃攪拌1小時。將反應混合物蒸發。將殘餘物溶於甲醇(1 mL)中，用甲醇中之7 N NH3 中和直至pH 9至10，且藉由急驟層析術(C18 ，甲醇/水至甲酸/甲醇/水)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-5-[8-胺基-3-[(順式-2-氟環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-N,4-二甲基-嘧啶-2-羧醯胺之甲酸鹽(3.4 mg，37%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.493，[M+H]+ = 395.1，方法= E；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.27 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.52 (brs, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.99-4.79 (m, 1H), 3.04 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.18-2.13 (m, 1H), 1.88-1.78 (m, 1H), 1.27-1.19 (m, 1H)。 實例8： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(6-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物14) 步驟 1 ：(±)-5-(8-氯-3-(順式-2-氟環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-6-甲基-1H-苯并[d]咪唑-1-羧酸第三丁酯
將(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(80 mg，0.23 mmol)、6-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)苯并咪唑-1-羧酸第三丁酯(83 mg，0.23 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (17 mg，0.02 mmol)及K2 CO3 (96 mg，0.70 mmol)於1,4-二噁烷(6 mL)及水(1 mL)中之混合物在90℃攪拌4小時。將反應混合物濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC (正相矽膠，uv 254 nm，二氯甲烷/甲醇=30/1)純化，得到呈黃色油狀之(±)-5-[8-氯-3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-6-甲基-苯并咪唑-1-羧酸第三丁酯(70 mg，60%收率)。步驟 2 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(6-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-5-[8-氯-3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-6-甲基-苯并咪唑-1-羧酸第三丁酯(60 mg，0.12 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(142 mg，1.21 mmol)、Pd2 (dba)3 (23 mg，0.03 mmol)、NaOtBu (34 mg，0.36 mmol)、tBuBrettPhos (13 mg，0.03 mmol)及1-甲基-2-吡咯啶酮(4 mL)。將混合物在110℃攪拌2小時。將反應混合物在真空中濃縮。將殘餘物藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(6-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(5 mg，11%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.335，[M+H]+ = 376.1，方法= C；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.23 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.59-7.47 (m, 2H), 7.03 (s, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.99-4.78 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.20-2.12 (m, 1H), 1.87-1.76 (m, 1H), 1.27-1.17 (m, 1H)。 實例9： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-環丙基噠嗪-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物15) 步驟 1 ：8-氯-6-(環丙基乙炔基)異喹啉-3-胺
將乙炔基環丙烷(500 mg，7.56 mmol)、CuI (50 mg，0.26 mmol)、6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(200 mg，0.78 mmol)、Et3 N (785 mg，7.77 mmol)及Pd(PPh3 )2 Cl2 (62 mg，0.08 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物在110℃下加熱16小時。將反應溶液用乙酸乙酯洗滌，用飽和水性NH4 Cl (20 mL x 3)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC (正相矽膠，二氯甲烷/甲醇=25/1)純化，得到呈黃色固體狀之8-氯-6-(2-環丙基乙炔基)異喹啉-3-胺(170 mg，81%收率)。步驟 2 ：8-氯-6-(5-環丙基噠嗪-4-基)異喹啉-3-胺
將1,2,4,5-四嗪(80 mg，0.97 mmol)及8-氯-6-(2-環丙基乙炔基)異喹啉-3-胺(60 mg，0.25 mmol)於對二甲苯(3 mL)中之溶液在140℃攪拌18小時。將反應溶液濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC (正相矽膠，二氯甲烷/甲醇=30/1)純化，得到呈黃色油狀之8-氯-6-(5-環丙基噠嗪-4-基)異喹啉-3-胺(40 mg，55%收率)。步驟 3 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(5-環丙基噠嗪-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
在0℃下向(±)-8-氯-6-(5-環丙基噠嗪-4-基)異喹啉-3-胺(100 mg，0.34 mmol)於二氯甲烷(10 mL)及吡啶(0.08 mL，1.01 mmol)中之溶液中添加順式-2-氟環丙烷羰基氯(0.13 g，1.08 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液。將混合物在20℃攪拌1小時，之後在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC (正相，矽膠，石油醚/乙酸乙酯= 4:1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-環丙基噠嗪-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(100 mg，77%收率)。步驟 4 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-環丙基噠嗪-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-環丙基噠嗪-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(80 mg，0.21 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(244 mg，2.09 mmol)、Pd2 (dba)3 (19 mg，0.02 mmol)、NaOtBu (59 mg，0.62 mmol)、tBuBrettPhos (10 mg，0.02 mmol)及1-甲基-2-吡咯啶酮(3 mL)。將混合物在110℃攪拌2小時。將反應混合物在真空中濃縮。將殘餘物藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(5-環丙基噠嗪-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(8 mg，10%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.566，[M+H]+ = 364.1，方法= C；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.28 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.99-4.78 (m, 1H), 2.21-2.08 (m, 2 H), 1.88-1.76 (m, 1H), 1.27-1.17 (m, 3H), 1.12-1.06 (m, 2H)。 實例10： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(7-甲基-3H-咪唑并[4, 5-b]吡啶-6-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物16) 步驟 1 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(7-甲基-3H-咪唑并[4, 5-b]吡啶-6-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(300 mg，0.87 mmol)、7-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(280 mg，1.08 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (60 mg，0.08 mmol)、K2 CO3 (350 mg，2.54 mmol)於1,4-二噁烷(6 mL)及水(1 mL)中之混合物在Ar氣氛下在110℃攪拌3小時。將反應物濃縮至乾燥。隨後將粗產物藉由管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚= 1:1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(7-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(280 mg，64%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =396.1。步驟 2 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(7-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-氯-6-(7-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(280 mg，0.71 mmol)、3,4-二氫-2H-吡喃(1.0 mL，10.96 mmol)及三氟乙酸(0.1 mL，1.34 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之溶液在回流下加熱隔夜。隨後將反應物用添加之5 mL飽和NaHCO3 溶液稀釋。隨後將有機層分離，乾燥(Na2 SO4 )且濃縮。隨後將粗品藉由管柱層析術在矽膠上(乙酸乙酯/石油醚= 1:10)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(7-甲基-3-四氫吡喃-2-基-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(160 mg，46%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =480.2。步驟 3 ：(±)-3-(順式-2-氟環丙烷羧醯胺基)-6-(7-甲基-3-(四氫-2H-吡喃-2-基)-3H-咪唑并[4, 5-b]吡啶-6-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將(±)-順式-N-[8-氯-6-(7-甲基-3-四氫吡喃-2-基-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(50 mg，0.10 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(120 mg，1.02 mmol)、Xantphos (25 mg，0.04 mmol)、Pd2 (dba)3 (20 mg，0.02 mmol)、第三丁醇鈉(50 mg，0.52 mmol)於無水DMF (2.0 mL)及無水甲苯(2.0 mL)中之混合物在115℃攪拌隔夜。將反應物濃縮。將殘餘物吸收於乙酸乙酯(15 ml)中。將混合物用20 mL飽和鹽水溶液洗滌。隨後將有機層分離，乾燥(Na2 SO4 )且濃縮。將粗品藉由管柱層析術在矽膠上(乙酸乙酯/石油醚，1/5至1/1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-N-[3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-(7-甲基-3-四氫吡喃-2-基-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(60 mg，60%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =477.1。步驟 4 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(7-甲基-3H-咪唑并[4, 5-b]吡啶-6-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-N-[3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-(7-甲基-3-四氫吡喃-2-基-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(60 mg，0.06 mmol)於甲醇(1mL)及HCl (4 M於二噁烷中，1.0 mL，4 mmol)中之溶液在室溫下攪拌1小時。將反應物藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(7-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(9 mg，38%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =377.2，Rt(min)=1.42，方法= E；1 HNMR (400 MHz,CD3 OD) δ 9.25 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.33 (s, 2H),7.06 (s, 1H), 6.76 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.99-4.79 (m, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.18-2.13 (m,1H), 1.88-1.77 (m, 1H), 1.27-1.18 (m, 1H)。 實例11： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-異丙基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物17) 步驟 1 ：5-異丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吡唑
將4-溴-3-異丙基-1H-吡唑(380 mg，2.01 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (140 mg，0.19 mmol)、乙酸鉀(800 mg，8.16 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(4750 mg，18.71 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在惰性氣氛下在110℃攪拌5小時。將反應物濃縮至乾燥。隨後將粗品藉由管柱層析術在矽膠上(乙酸乙酯/石油醚= 1:1)純化，得到呈紅色液體狀之5-異丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吡唑(400 mg，28%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =237.2。步驟 2 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(5-異丙基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
向含有5-異丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吡唑(400 mg，0.56 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (35 mg，0.05 mmol)、K2 CO3 (200 mg，1.45 mmol)及(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(150 mg，0.44 mmol)於1,4-二噁烷(6 mL)及水(1 mL)中之反應混合物中之密封管中。將反應混合物在130℃在微波中加熱1小時。將反應物濃縮至乾燥。隨後將粗品藉由管柱層析術在矽膠上(乙酸乙酯)純化，得到呈黃色液體狀之粗品(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-異丙基-1H-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(200 mg，50%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =373.1。步驟 3 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(5-異丙基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-異丙基-1H-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.22 mmol)、3,4-二氫-2H-吡喃(1.0 mL，10.96 mmol)及三氟乙酸(0.1 mL，1.34 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之溶液回流隔夜。隨後將反應物濃縮至乾燥。隨後將粗品藉由管柱層析術在矽膠上(石油醚/乙酸乙酯= 10/1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(80 mg，70%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =457.2。步驟 4 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-異丙基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(70 mg，0.15 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(100 mg，0.85 mmol)、Xantphos (35 mg，0.06 mmol)、Pd2 (dba)3 (25 mg，0.03 mmol)及Cs2 CO3 (200 mg，0.62 mmol)於無水DMF (1 mL)及無水甲苯(1 mL)中之混合物在130℃在惰性氣氛下攪拌4小時。隨後將反應物濃縮且藉由逆相層析術(甲醇40至60/0.05%氨於水中)純化，得到呈白色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(5-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(25 mg，37%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =438.2。步驟 5 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-異丙基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-胺基-6-(5-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(25 mg，0.06 mmol)於HCl於1,4-二噁烷(4 M，1.0 mL，4.0 mmol)中之溶液在室溫下攪拌30分鐘。將所得混合物藉由逆相層析術(甲醇60%/0.05%氨於水中)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(5-異丙基-1H-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(9 mg，43%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.57，[M+H]+ = 354.1，方法= E；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.17(s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.69 (s, 1H),7.07 (s, 1H), 6.83 (d,J = 0.9 Hz, 1H), 4.99-4.92 (m, 0.5 H), 4.83-4.79 (m, 0.5 H), 3.45-3.44 (m, 1H) ,2.17-2.13 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.37-1.35 (d,J = 6.8 Hz, 6H), 1.27-1.18 (m, 1H)。 實例12： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(1-乙基-5-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物18) 步驟 1 ：4-碘-5-甲基吡啶-2-醇
將4-碘-2-甲氧基-5-甲基-吡啶(700 mg，2.81 mmol)、碘化物三甲基矽烷(752 mg，3.76 mmol)於乙腈(10 mL)中之混合物加熱回流2小時。隨後將反應物濃縮至乾燥。隨後將粗產物藉由管柱層析術在矽膠上(乙酸乙酯)純化，得到呈白色固體狀之4-碘-5-甲基-吡啶-2-醇(500 mg，71%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =235.9。步驟 2 ：1-乙基-4-碘-5-甲基吡啶-2(1H)-酮
將4-碘-5-甲基-吡啶-2-醇(480 mg，2.04 mmol)及氫化鈉(60%於礦物油中，200 mg，5 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物在室溫下攪拌20分鐘。隨後添加碘乙烷(0.5 mL，6.25 mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物藉由逆相層析術(甲醇60%/0.1%氨於水中)純化，得到呈白色固體狀之1-乙基-4-碘-5-甲基-吡啶-2-酮(250 mg，47%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =264.0。 步驟3：(±)-順式-N-(8-氯-6-(1-乙基-5-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將1-乙基-4-碘-5-甲基-吡啶-2-酮(120 mg，0.46 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (30 mg，0.04 mmol)、磷酸鉀(400 mg，1.89 mmol)及(±)-[8-氯-3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]硼酸(140 mg，0.45 mmol)於1,4-二噁烷(6 mL)及水(1 mL)中之混合物在100℃攪拌1小時。將反應物濃縮至乾燥。隨後將粗品藉由管柱層析術在矽膠上(乙酸乙酯)純化，得到呈白色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(1-乙基-5-甲基-2-側氧基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(70 mg，37%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =400.1。步驟 4 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(1-乙基-5-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-氯-6-(1-乙基-5-甲基-2-側氧基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(50 mg，0.13 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(155 mg，1.32 mmol)、Xantphos (30 mg，0.05 mmol)、Pd2 (dba)3 (25 mg，0.03 mmol)及Cs2 CO3 (200 mg，0.62 mmol)於無水DMF (2 mL)及無水甲苯(2 mL)中之混合物在惰性氣氛下在112℃攪拌隔夜。隨後將反應物濃縮且藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% HCl於水中)純化，得到作為甲酸鹽之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(1-乙基-5-甲基-2-側氧基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(8.1 mg，17%收率) (黃色固體)。LCMS(ESI): RT (min) = 1.44，[M+H]+ =381.1，方法= A；1 H NMR (400 MHz,CD3 OD) δ 9.24 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.63 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 6.49 (s, 1H), 4.97-4.80 (m, 1H), 4.108 (q,J = 7.2 Hz, 2H) , 2.17-2.14(m, 1H), 2.05 (s, 3H), 1.86-1.79 (m, 1H), 1.39 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.25-1.20 (m, 1H)。 實例13： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-甲基-2-側氧基-1, 2-二氫吡啶-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物19) 步驟 1 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(2-甲氧基-5-甲基吡啶-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將4-碘-2-甲氧基-5-甲基-吡啶(255 mg，1.02 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (40 mg，0.05 mmol)、K3 PO4 (350 mg，1.65 mmol)、[8-氯-3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]硼酸(220 mg，0.71 mmol)於1,4-二噁烷(6 mL)及水(1 mL)中之混合物在100℃攪拌1小時。將反應混合物濃縮至乾燥。隨後將粗品藉由管柱層析術在矽膠上(石油醚/乙酸乙酯= 5/1)純化，得到呈白色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(100 mg，35%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =386.1。步驟 2 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(2-甲氧基-5-甲基吡啶-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-氯-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.26 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(200 mg，1.71 mmol)、Xantphos (60 mg，0.10 mmol)、Pd2 (dba)3 (50 mg，0.05 mmol)、Cs2 CO3 (420 mg，1.29 mmol)於無水DMF (2 mL)及無水甲苯(2 mL)中之混合物在115℃在Ar下攪拌4小時。將反應物濃縮至乾燥。隨後將粗品藉由管柱層析術在矽膠上純化，用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離，得到呈黃色固體狀之粗品(±)-順式-N-[8-胺基-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(25 mg)。LCMS (ESI): [M+H]+ =367.2。步驟 3 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-甲基-2-側氧基-1, 2-二氫吡啶-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-胺基-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(35 mg，0.05 mmol)及碘三甲基矽烷(30 mg，0.15 mmol)於乙腈(10 mL)中之混合物加熱回流2小時。隨後添加0.5 mL飽和Na2 S2 O3 溶液，且將反應物濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(甲醇40至50/0.05%氨於水中)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(5-甲基-2-側氧基-1H-吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(9 mg，53%收率)。LCMS(ESI):RT (min) = 1.45，[M+H]+ = 353.1，方法= B；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.53-11.49 (m, 1H), 10.81 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 6.34 (s, 2H), 6.19 (s, 1H), 5.0 -4.83 (m, 1H), 2.28-2.22 (m, 1H), 1.91 (s, 3H), 1.71-1.63 (m, 1H), 1.21-1.14 (m, 1H)。 實例14： 1-(8-胺基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-3-異丙基脲(化合物20) 步驟 1 ：8-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-胺
向密封管中添加6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(300 mg，1.17 mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1h-吡唑(364 mg，1.75 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (105 mg，0.14 mmol)、Na2 CO3 (375 mg，3.54mmol)、1,4-二噁烷(15 mL)及水(1.5 mL)。將混合物用N2 鼓泡透過2 min，且在100℃攪拌2.5小時。將混合物在真空中濃縮，且隨後藉由管柱層析術(矽膠管柱，石油醚/乙酸乙酯，1:1至0:100，uv 254 nm)純化，得到呈黃色固體狀之8-氯-6-(1-甲基吡唑-4-基)異喹啉-3-胺(290 mg，94%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 259.1。步驟 2 ：1-(8-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-3-異丙基脲
向壓力管中添加8-氯-6-(1-甲基吡唑-4-基)異喹啉-3-胺(280 mg，1.08 mmol)、異氰酸異丙酯(1 mL，10.18 mmol)及DBU (494 mg，3.25 mmol)。將混合物在100℃攪拌4小時。將混合物濃縮且藉由管柱層析術(20 g矽膠管柱，用石油醚/乙酸乙酯溶離，1:1至0:100)純化，得到呈黃色固體狀之1-[8-氯-6-(1-甲基吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-3-異丙基-脲(200 mg，52%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 344.1。步驟 3 ：1-(8-胺基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-3-異丙基脲
向密封管中添加1-[8-氯-6-(1-甲基吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-3-異丙基-脲(180 mg，0.52 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(500 mg，4.27mmol)、Pd2 (dba)3 (100 mg，0.11 mmol)、NaOtBu (150 mg，1.56 mmol)、tBuBrettPhos (60 mg，0.12 mmol)及1-甲基-2-吡咯啶酮(15 mL)。將混合物在110℃攪拌2小時。將反應混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由管柱層析術(10 mmol/L水性NH4 HCO3 /乙腈，100:0至1:5)純化，得到呈淺褐色固體狀之1-[8-胺基-6-(1-甲基吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-3-異丙基-脲(31 mg，18%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.167，[M+H]+ = 325.2，方法= B；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ: 8.94 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.76 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 3.92 - 3.85 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 1.15 (d,J = 6.4 Hz, 6H)。 實例15： (±)-反式-N-[8-胺基-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物21) 步驟 1 ：4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶
將4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(500 mg，2.54 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(1289 mg，5.08 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (186 mg，0.25 mmol)及乙酸鉀(497 mg，5.08 mmol)於1,4-二噁烷(18 mL)中之混合物在Ar下在90℃攪拌3小時。將混合物濃縮且藉由管柱層析術(乙酸乙酯/己烷= 1:1)純化，得到呈白色固體狀之4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(480 mg，78%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 245.1。步驟 2 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(180 mg，0.51 mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(150 mg，0.62 mmol)、Pd(PPh3 )4 (59 mg，0.05mmol)及Na2 CO3 (109 mg，1.03 mmol)於1,4-二噁烷(2 mL)及水(0.1 mL)中之混合物在Ar下在90℃攪拌3小時。將混合物濃縮且藉由管柱層析術(乙酸乙酯/己烷= 2:1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(210 mg，65%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 388.1。步驟 3 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
在0℃下向(±)-反式-N-[8-氯-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.16 mmol)於DMF (3 mL)中之溶液中添加NaH (13 mg，0.32 mmol)。將混合物在0℃攪拌0.5小時。隨後添加4-甲基苯磺酸甲酯(30 mg，0.16 mmol)。將反應物在0℃攪拌2小時。將粗混合物藉由製備型逆相HPLC (C-18，乙腈/水+ 0.05% NH4 HCO3 )純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(110 mg，53%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 402.1。步驟 4 ：(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(110 mg，0.09 mmol)、Pd2 (dba)3 (16 mg，0.02 mmol)、Xantphos (20 mg，0.04 mmol)、Cs2 CO3 (57 mg，0.18 mmol)及二苯甲酮亞胺(48 mg，0.26 mmol)於DMF (3 ml)及甲苯(3 mL)中之混合物在Ar下在130℃攪拌2.5小時。添加乙酸乙酯(80 mL)。將混合物用鹽水(3 x 50 mL)洗滌，用Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下蒸發。將殘餘物藉由管柱層析術(乙酸乙酯/己烷，1:1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(31 mg，59%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 547.3。步驟 5 ：(±)-反式-N-[8-胺基-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(31 mg，0.06 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)於二氯甲烷(10 mL)及水(2 mL)中之混合物在25℃攪拌2小時。將反應混合物用NH4 OH中和至pH = 7至8。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC (C18 ，乙腈/水+ 0.05% NH4 HCO3 )純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(16 mg，69%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.479，[M+H]+ = 383.1，方法= A；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.13 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.36 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.62 (d,J = 3.2 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.27 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 7.04 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 6.69 (d,J = 3.2 Hz, 1H), 6.44 (s, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.80-2.75 (m, 1H), 2.18-2.13 (m, 1H), 1.63-1.58 (m, 1H), 1.47-1.42 (m, 1H)。 實例16： (±)-反式-N-[8-胺基-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物22) 步驟 1 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-[1-(對甲苯磺醯基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
在0℃下向(±)-反式-N-[8-氯-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(170 mg，0.27 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中添加NaH (22 mg，0.54 mmol)。將混合物在0℃攪拌0.5小時。添加甲苯磺醯氯(104 mg，0.54 mmol)，且將反應混合物在0℃攪拌2小時。將混合物藉由逆相製備型HPLC (C-18；乙腈/水+ 0.05% NH4 HCO3 )純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-[1-(對甲苯磺醯基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(169 mg，79%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 542.1。步驟 2 ：(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-[1-(對甲苯磺醯基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-[1-(對甲苯磺醯基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(170 mg，0.22 mmol)、Pd2 (dba)3 (40 mg，0.04 mmol)、Xantphos (50 mg，0.09 mmol)、Cs2 CO3 (140 mg，0.43 mmol)及二苯甲酮亞胺(118 mg，0.65 mmol)於DMF (6 mL)及甲苯(6 mL)中之混合物在Ar下在130℃攪拌2.5小時。添加乙酸乙酯(180 mL)。將混合物用鹽水(3 x 50 mL)洗滌，用Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下蒸發。將殘餘物藉由管柱層析術(乙酸乙酯/己烷= 1: 1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-[1-(對甲苯磺醯基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，67%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 687.2。步驟 3 ：(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-[1-(對甲苯磺醯基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.15 mmol)及TBAF (152 mg，0.58 mmol)於THF (15 mL)中之混合物在50℃攪拌24小時。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC (C18 ；乙腈/水+ 0.05% NH4 HCO3 )純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(68 mg，88%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 533.2。步驟 4 ：(±)-反式-N-[8-胺基-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(68 mg，0.13 mmol)於乙腈(10 mL)、2,2,2-三氟乙酸(1 mL)及水(10 mL)中之混合物在25℃攪拌20分鐘。將反應混合物用NH4 OH中和至pH = 7至8。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC (C18 ，乙腈/水+ 0.05% NH4 HCO3 )純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(35 mg，74%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.392，[M+H]+ = 369.1，方法= A。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.80 (s, 1H), 11.11(s, 1H), 9.36 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.30 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.56 (t,J = 2.8 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.23 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 7.04 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 6.67 (q,J = 1.7 Hz, 1H), 6.42 (s, 2H), 2.79-2.75 (m, 1H), 2.17-2.12 (m, 1H), 1.62-1.57 (m, 1H), 1.47-1.42 (m, 1H)。 實例17： (±)-反式-N-[8-胺基-6-(3-乙基-1-甲基-6-側氧基-2-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物23) 步驟 1 ：6-溴-1-甲基-吡啶-2-酮
向6-溴-1H-吡啶-2-酮(5.0 g，28.74 mmol)及K2 CO3 (7.93 g，57.47 mmol)於乙腈(100 mL)中之混合物中添加碘甲烷(8.16 g，57.47 mmol)。將混合物攪拌隔夜。隨後將混合物過濾。將濾液濃縮且藉由急驟管柱層析術(50%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈白色固體狀之6-溴-1-甲基-吡啶-2-酮(4.5 g，83%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 189.9。步驟 2 ：6-溴-5-碘-1-甲基-吡啶-2-酮
將6-溴-1-甲基-吡啶-2-酮(3.7 g，19.68 mmol)及NIS (4.43 g，25.58 mmol)於DMF (15 mL)中之混合物在室溫下攪拌2天。將混合物藉由製備型TLC (石油醚/乙酸乙酯=2/1)純化，得到呈黃色固體狀之6-溴-5-碘-1-甲基-吡啶-2-酮(1.1 g，18%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 313.9；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 7.68(d,J = 9.6 Hz, 1H), 6.27(d,J = 9.6 Hz, 1H), 3.77(s, 3H)。步驟 3 ：6-溴-1-甲基-5-乙烯基-吡啶-2-酮
將6-溴-5-碘-1-甲基-吡啶-2-酮(1000 mg，3.19 mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環(1471 mg，9.56 mmol)、Pd(PPh3 )4 (367 mg，0.32 mmol)及K2 CO3 (879 mg，6.37 mmol)於1,4-二噁烷(50 mL)及水(2 mL)中之混合物在N2 下在60℃攪拌18小時。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (石油醚/乙酸乙酯= 4/1)純化，得到呈白色固體狀之6-溴-1-甲基-5-乙烯基-吡啶-2-酮(600 mg，68%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 216.0。步驟 4 ：6-溴-5-乙基-1-甲基-吡啶-2-酮
向25 mL燒瓶中添加6-溴-1-甲基-5-乙烯基-吡啶-2-酮(500 mg，2.34 mmol)、Pt/C (80 mg，2.34 mmol)及乙酸乙酯(15 mL)，將混合物在室溫下在H2 氣氛下攪拌10分鐘。將混合物過濾，且將濾液濃縮。將粗產物藉由製備型TLC用石油醚/乙酸乙酯(2:1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之6-溴-5-乙基-1-甲基-吡啶-2-酮(470 mg，89%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 218.0。步驟 5 ：6-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-5-乙基-1-甲基-吡啶-2-酮
向密封管中添加(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)硼酸(494 mg，2.22 mmol)、6-溴-5-乙基-1-甲基-吡啶-2-酮(400 mg，1.85 mmol)、Pd(dppf) Cl2 (151mg, 0.21mmol)、K3 PO4 (355 mg，1.68 mmol)、乙酸鈉(414 mg，5.05 mmol)、乙腈(20 mL)及水(2 mL)。將混合物用N2 鼓泡透過2分鐘，且在90℃攪拌3小時。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (石油醚/乙酸乙酯，1/4)純化，得到呈黃色固體狀之6-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-5-乙基-1-甲基-吡啶-2-酮(210 mg，26%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 314.1。步驟 6 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(3-乙基-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-2-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向6-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-5-乙基-1-甲基-吡啶-2-酮(180 mg，0.57 mmol)及吡啶(0.14 mL，1.72 mmol)於二氯甲烷(15mL)中之溶液中添加(±)-反式-2-氰基環丙烷羰基氯(111 mg，0.86 mmol)。將混合物在25℃攪拌30分鐘。將混合物濃縮且藉由製備型TLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(3-乙基-1-甲基-6-側氧基-2-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(120 mg，45%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 407.1。步驟 7 ：(±)-反式-N-[8-胺基-6-(3-乙基-1-甲基-6-側氧基-2-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
在手套箱中向密封管中添加胺基甲酸第三丁酯(345 mg，2.95 mmol)、Pd2 (dba)3 (54 mg，0.06 mmol)、Cs2 CO3 (288 mg，0.88 mmol)、Xantphos (57 mg，0.12 mmol)、(±)-反式-N-[8-氯-6-(3-乙基-1-甲基-6-側氧基-2-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(120 mg，0.29 mmol)、DMF (3 mL)及甲苯(3 mL)。將混合物在110℃攪拌18小時。將混合物吸收於乙酸乙酯(50 ml)中，且用鹽水洗滌。隨後將有機層分離，乾燥(Na2 SO4 )且濃縮至乾燥。隨後將粗品藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(3-乙基-1-甲基-6-側氧基-2-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(25.5 mg，22%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.528，[M+H]+ = 388.1，方法= A；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.30 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.58 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.64 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 3.30 (s, 3H), 2.67-2.62 (m, 1H), 2.22-2.10 (m, 3H), 1.62-1.53 (m, 2H), 1.3 (t,J = 7.6 Hz, 3H)。 實例18： (±)-順式-N-[8-胺基-6-(1,4-二甲基-2-側氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(化合物24) (±)-反式-N-[8-胺基-6-(1,4-二甲基-2-側氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(化合物25) 步驟 1 ：3-溴-1,4-二甲基-吡啶-2-酮
向3-溴-4-甲基-1H-吡啶-2-酮(600 mg，3.19 mmol)及K2 CO3 (880 mg，6.38 mmol)於乙腈(100 mL)中之混合物中添加碘甲烷(905 mg，6.38 mmol)。將混合物在室溫下攪拌隔夜。隨後將混合物過濾，濃縮且藉由急驟管柱層析術(50%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈白色固體狀之3-溴-1,4-二甲基-吡啶-2-酮(570 mg，88%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 202.0。步驟 2 ：3-(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)-1,4-二甲基吡啶-2(1H)-酮
向密封管中添加3-溴-1,4-二甲基-吡啶-2-酮(350 mg，1.73 mmol)、(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)硼酸(462 mg，2.08 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (141 mg，0.19 mmol)、K3 PO4 (332 mg，1.57 mmol)、乙酸鈉(387 mg，4.72 mmol)、乙腈 (20 mL)及水(2 mL)。將混合物用N2 鼓泡透過2分鐘，且在90℃攪拌3小時。將混合物濃縮且藉由急驟管柱層析術(100%乙酸乙酯)純化，得到呈黃色固體狀之3-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-1,4-二甲基-吡啶-2-酮(240 mg，43%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 300.1。步驟 3 ：(±)-順式-N-[8-氯-6-(1,4-二甲基-2-側氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
向冷卻(0℃) (±)-順式-2-氟環丙烷羧酸(83 mg，0.80 mmol)、3-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-1,4-二甲基-吡啶-2-酮(200 mg，0.67 mmol)及吡啶(0.54 mL，6.67 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之混合物中添加POCl3 (102 mg，0.67 mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (石油醚/乙酸乙酯= 1/2)純化，得到呈灰色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(1,4-二甲基-2-側氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(239 mg，92%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 386.1。步驟 4 ：(±)-順式-N-[8-胺基-6-(1,4-二甲基-2-側氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺及反式-N-[8-胺基-6-(1,4-二甲基-2-側氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
在手套箱中向密封管中添加胺基甲酸第三丁酯(668 mg，5.7 mmol)、Pd2 (dba)3 (104 mg，0.11 mmol)、Cs2 CO3 (557 mg，1.71 mmol)、Xantphos (110 mg，0.23 mmol)、(±)-順式-N-[8-氯-6-(1,4-二甲基-2-側氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(220 mg，0.57 mmol)、DMF (3 mL)及甲苯(3 mL)。將混合物在110℃攪拌18小時。將混合物吸收於乙酸乙酯(50 ml)中，且用鹽水洗滌。隨後將有機物分離，乾燥(Na2 SO4 )且濃縮至乾燥。隨後將粗產物藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(1,4-二甲基-2-側氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(29.6 mg，14%收率)及呈黃色固體狀之反式-N-[8-胺基-6-(1,4-二甲基-2-側氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(13 mg，6%收率)。
(±)-順式-N-[8-胺基-6-(1,4-二甲基-2-側氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺： LCMS (ESI): RT (min) = 1.543，[M+H]+ = 367.1，方法= C；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.21 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.58(d,J = 6.8 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 6.40 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 4.98-4.78 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 2.17-2.13 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.87-1.76 (m, 1H), 1.26-1.17 (m, 1H)。
(±)-反式-N-[8-胺基-6-(1,4-二甲基-2-側氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺： LCMS (ESI): RT (min) = 1.524，[M+H]+ = 367.1，方法= B；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.21 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.58 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 6.40 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 4.97-4.78 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 2.49-2.39 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.55-1.47 (m, 1H), 1.41-1.36 (m, 1H)。 實例19： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(6-甲氧基-2-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物26) 步驟 1 ：6-甲氧基-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶
向密封管中添加3-溴-6-甲氧基-2-甲基-吡啶(1.2 g，5.94 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(1.81 g，7.13 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (434 mg，0.59 mmol)、乙酸鉀(1164 mg，11.88 mmol)及1,4-二噁烷(10 mL)。將混合物在95℃攪拌16小時。隨後將混合物濃縮且藉由製備型TLC (矽膠，石油醚/乙酸乙酯= 15/1)純化，得到呈黃色油狀之2-甲氧基-4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(1.4 g，94%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 250.0。步驟 2 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(6-甲氧基-2-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將6-甲氧基-2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(725 mg，2.91 mmol)、(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(500 mg，1.46 mmol)、PdCl2 (dppf) (106 mg，0.15 mmol)及K2 CO3 (602 mg，4.37 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)及水(0.5 mL)中之混合物用N2 吹掃3次。將混合物在90℃攪拌3小時。添加水(10 mL)。將混合物用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。將有機層用水(20 mL x 3)洗滌，隨後用鹽水(20 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC (矽膠，石油醚/乙酸乙酯= 3/1)純化，得到呈白色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(370 mg，66%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 386.0。步驟 3 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(6-甲氧基-2-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
在手套箱中向密封管中添加胺基甲酸第三丁酯(151 mg，1.3mmol)、Pd2 (dba)3 (23 mg，0.03 mmol)、Cs2 CO3 (126 mg，0.39 mmol)、Xantphos (25 mg，0.05 mmol)、(±)-順式-N-[8-氯-6-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(50 mg，0.13 mmol)及甲苯(1 mL)。將混合物在130℃攪拌2小時。添加水(10 mL)。將混合物用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。將有機層用水(20 mL x 3)、鹽水(20 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC (矽膠，二氯甲烷/甲醇= 20/1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(13 mg，27%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.738，[M+H]+ = 367.0。方法= G；1 H NMR(400 MHz, CD3 OD) δ 9.22 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.59 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.71(d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.69(d,J =1.6 Hz, 1H), 4.99-4.80 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.18-2.14 (m, 1H), 1.86-1.79 (m, 1H), 1.25-1.22 (m, 1H)。 實例20： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(2-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物27)
向(±)-順式-N-[8-胺基-6-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.27mmol)於乙腈(4 mL)中之混合物中添加碘三甲基矽烷(0.04 mL，0.27 mmol)。將混合物在90℃攪拌1小時。添加水(10 mL)。將混合物用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。將有機層用水(20 mL x 3)洗滌，隨後用鹽水(20 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將混合物用逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(6-羥基-2-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(50 mg，52%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.348，[M+H]+ = 353.0。方法= G；1 H NMR(400 MHz, CD3 OD) δ 9.20(s,1H), 8.29(s,1H), 7.62(d,J = 9.2 Hz, 1H), 6.97(s,1H), 6.65 (d,J =1.2 Hz,1H), 6.48(d,J = 9.2 Hz,1H), 4.98-4.80 (m,1H), 2.35(s,3H), 2.18-2.13 (m,1H), 1.86-1.79 (m,1H),1.24-1.20 (m,1H)。 實例21： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物28) 步驟 1 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(5-甲基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(350 mg，1.02 mmol)、5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡唑(386 mg，1.32 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (92 mg，0.13 mmol)、K3 PO4 (214 mg，1.02 mmol)及乙酸鈉(253 mg，3.09 mmol)、乙腈(20 mL)及水(2 mL)。將混合物用N2 鼓泡透過2 min，且在90℃攪拌3小時。添加水(10 mL)。將混合物用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。將有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC (矽膠，石油醚/乙酸乙酯= 2/1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(350 mg，80%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 429.7。步驟 2 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-甲基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
在手套箱中向密封管中添加胺基甲酸第三丁酯(956 mg，8.16 mmol)、Pd2 (dba)3 (149 mg，0.16 mmol)、Cs2 CO3 (1.33g, 4.08 mmol)、Xantphos (158 mg，0.33 mmol)、(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(350 mg，0.82 mmol)及甲苯(5 mL)。將混合物在110℃攪拌2小時。添加水(10 mL)。將混合物用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。將有機層用水(20 mL x 3)洗滌，隨後用鹽水(20 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之粗產物(±)-順式-N-[8-胺基-6-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(0.3 g，90%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 410.7。步驟 3 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
向(±)-順式-N-[8-胺基-6-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.49 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中添加HCl於1,4-二噁烷(4 M於1,4-二噁烷中，8 mL，32 mmol)。將混合物在室溫下攪拌16小時。將混合物濃縮。添加甲醇溶液中之7 M NH3 以將混合物之pH調整至8。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(5-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(20 mg，12.6%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.417，[M+H]+ = 326.7。方法= G；1 H NMR(400 MHz, CD3 OD) δ 9.14 (s, 1H), 8.27 (s,1H), 7.81(s,1H), 7.14 (s,1H), 6.90 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 4.99-4.79 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.19-2.12 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.25-1.20 (m,1H)。 實例22： (1S,2S)-N-(8-胺基-6-(5-側氧基吡咯啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物30)
在手套箱中向密封管中添加胺基甲酸第三丁酯(202 mg，1.73 mmol)、Pd2 (dba)3 (31 mg，0.03 mmol)、Cs2 CO3 (168 mg，0.52mmol)、xantphos (33 mg，0.07 mmol)、(1S,2S)-N-[8-氯-6-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(10 mg，0.03 mmol)、DMF (0.5 mL)及甲苯(0.5 mL)。將混合物在110℃攪拌16小時。添加水(10 mL)。將混合物用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。將有機萃取物用水(20 mL x 3)洗滌，隨後用鹽水(20 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將混合物藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(1S,2S)-N-[8-胺基-6-(5-側氧基吡咯啶-3-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(10 mg，17%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.401，[M+H]+ = 329.7。方法= C；1 H NMR(400MHz, CD3 OD) δ 9.14 (s,1H), 8.24 (s,1H), 6.99 (s,1H), 6.69 (s,1H), 4.99-4.78 (m, 1H), 3.86-3.76 (m,2H), 3.51-3.47 (m,1H), 2.81-2.74 (m,1H), 2.59-2.53 (m,1H), 2.14-2.11 (m,1H), 1.79-1.73 (m,1H), 1.22-1.20 (m,1H)。 實例23： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(4-乙基-6-(羥甲基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物31) 步驟 1 ：(±)-5-(8-氯-3-(順式-2-氟環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-4-乙基吡啶甲酸甲酯
將(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(130 mg，0.38 mmol)、4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶-2-羧酸甲酯(227 mg，0.78 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (26 mg，0.04 mmol)、K2 CO3 (156 mg，1.14 mmol)於1,4-二噁烷(1 mL)及水(0.2 mL)中之混合物用N2 吹掃3次。將混合物在90℃攪拌2小時。添加水(10 mL)。將混合物用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。將合併之萃取物用水洗滌，且隨後用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC (矽膠，石油醚/乙酸乙酯= 2/1)純化，得到呈黃色油狀之(±)-5-[8-氯-3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-乙基-吡啶-2-羧酸甲酯(150 mg，92%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 428.7。步驟 2 ：(±)-5-(8-胺基-3-(順式-2-氟環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-4-乙基吡啶甲酸甲酯
在手套箱中向密封管中添加胺基甲酸第三丁酯(410 mg，3.51 mmol)、Pd2 (dba)3 (64 mg，0.07 mmol)、Cs2 CO3 (342 mg，1.05 mmol)、Xantphos (67 mg，0.1400 mmol)、(±)-5-[8-氯-3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-乙基-吡啶-2-羧酸甲酯(150 mg，0.35 mmol) 甲苯(1 mL)及DMF (1 mL)。將混合物在130℃攪拌2小時。添加水(10 mL)。將混合物用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。將有機層用水(20 mL x 3)、鹽水(20 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC (矽膠，二氯甲烷/甲醇，20/1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-5-[8-胺基-3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-乙基-吡啶-2-羧酸甲酯(60 mg，42%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 409.7。步驟 3 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(4-乙基-6-(羥甲基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
在0℃下向(±)-5-[8-胺基-3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-乙基-吡啶-2-羧酸甲酯(60 mg，0.15 mmol)於甲醇(5 mL)中之混合物中添加NaBH4 (111 mg，2.94 mmol)。將混合物在室溫下攪拌5小時。添加水(2 mL)以淬滅反應。將混合物濃縮且再懸浮於二氯甲烷及甲醇之溶液(10:1，10 mL)中。將混合物過濾且用二氯甲烷及甲醇之溶液(10:1)洗滌。將濾液濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-[4-乙基-6-(羥甲基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(12 mg，21%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.565，[M+H]+ = 381.7。方法= C；1 HNMR(400 MHz, CD3 OD) δ 9.25 (s,1H), 8.31(s, 1H), 8.30 (s, 1H) 7.56 (s,1H), 6.99 (s,1H), 6.67(d,J = 1.6 Hz,1H), 4.98-4.75 (m, 1H), 4.75 (s, 2H), 2.74 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 2.18-2.15 (m,1H), 1.88-1.85 (m,1H), 1.23-1.20 (m,1H), 1.18 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。 實例24： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物32)
使用類似於本文所述者之方法來合成化合物。LC/MS及NMR資料示於表A-1中。 實例25： (1S,2S)-N-(8-胺基-6-(4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物37) 步驟 1 ：3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶
將6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(1 g，3.88 mmol)及(1S,2S)-2-氟環丙烷羧酸(0.49 g，4.66 mmol)於二氯甲烷(10 mL)及吡啶(0.5 mL)中之混合物在0℃攪拌0.5小時，之後添加POCl3 (0.4 mL，4.29 mmol)。隨後將反應物在室溫下攪拌1小時。將反應混合物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，且用飽和NaHCO3 將pH調整至7至8。隨後將有機層分離，乾燥(NaSO4 )且濃縮至乾燥。將殘餘物用矽膠管柱層析術(石油醚:乙酸乙酯，1:1)純化，得到標題化合物(1 g，62.5%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 345.0。步驟 2 ：(1S,2S)-N-(8-氯-6-(4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(1S,2S)-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(150 mg，0.44 mmol)、4-甲基噁唑啶-2-酮(53 mg，0.52 mmol)、Xanphos (25 mg，0.04 mmol)、Pd2 (dba)3 (40 mg，0.04 mmol)及K3 PO4 (277 mg，1.31 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物用矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:1至石油醚/乙酸乙酯= 1:2)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(140 mg，61%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 364.1。步驟 3 ：3-((1S,2S)-2-氟環丙烷羧醯胺基)-6-(4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將胺基甲酸第三丁酯(241 mg，2.06 mmol)、(1S,2S)-N-[8-氯-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(150 mg，0.41 mmol)、Pd2 (dba)3 (74 mg，0.08 mmol)、Brettphos (44 mg，0.08 mmol)及tBuONa (118 mg，1.23 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)中之混合物在Ar下在90℃攪拌6小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚:乙酸乙酯= 2:1至石油醚:乙酸乙酯= 1:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(70 mg，14.8%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 445.2。步驟 4 ：(1S,2S)-N-(8-胺基-6-(4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將N-[3-[[(1S,2S)-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(70 mg，0.16 mmol)於HCl於1,4-二噁烷(1 mL，4 M)中之混合物在室溫下攪拌1小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物吸收於甲醇(2 mL)中，且用飽和NaHCO3 將pH調整至7至8。將混合物藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈褐色固體狀之標題化合物。LCMS (ESI): RT (min) = 1.54，[M+H]+ = 345.1，方法= C。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 )δ 10.74 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.00 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.92 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.32 (s, 2H), 5.01-4.83 (m, 1H), 4.71 – 4.68 (m, 1H), 4.58-4.54 (m, 1H), 4.06 – 4.03 (m, 1H), 2.28 – 2.21 (m, 1H), 1.71 – 1.61 (m, 1H), 1.29 (d,J = 6.0 Hz, 3H), 1.19 – 1.12 (m, 1H)。 實例26： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(喹啉-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物38) 步驟 1 ：喹啉-4-基硼酸
將4-溴喹啉(1.0 g，4.81 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(12.0 g，47.26 mmol)、PdCl2 dppf (0.7 g，0.96 mmol)、乙酸鉀(1.4 g，14.29 mmol)於1,4-二噁烷(100 mL)中之混合物在Ar下在80℃攪拌2小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:1至二氯甲烷:甲醇=1:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(2 g，粗品)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 256.1。步驟 2 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(喹啉-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(800 mg，2.28 mmol)、喹啉-4-硼酸(100 mg，0.58 mmol)、Pd(PPh3 )4 (67 mg，0.06 mmol)及K2 CO3 (239 mg，1.73 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)及水(1 mL)中之混合物在Ar下在90℃攪拌3小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 4:1至石油醚/乙酸鹽= 2:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(100 mg，25.3%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 399.1。步驟 3 ：(±)-反式-2-氰基-N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(喹啉-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
將反式-N-[8-氯-6-(4-喹啉基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(90 mg，0.23 mmol)、二苯甲酮亞胺(123 mg，0.68 mmol)、Pd2 (dba)3 (41 mg，0.04 mmol)、Xantphos (13 mg，0.02 mmol)及Cs2 CO3 (220 mg，0.67 mmol)於DMF (3 mL)及甲苯(1 mL)中之混合物在微波反應器中在150℃下加熱1小時。將反應物用乙酸乙酯稀釋，且用鹽水洗滌。隨後將有機萃取物分離，乾燥(Na2 SO4 )且濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 4:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(40 mg，33%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 544.2。步驟 4 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(喹啉-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-喹啉基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(40 mg，0.07 mmol)及TFA (0.5 mL，6.71 mmol)於二氯甲烷(2 mL)及兩滴水中之混合物在室溫下攪拌3小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物吸收於乙酸乙酯(10 mL)中，且用飽和水性NaHCO3 將pH調整至7至8。將混合物濃縮至乾燥，且藉由矽膠管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚= 2:1至乙酸乙酯)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(18.5 mg，64%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.573，[M+H]+ = 380.1，方法= B。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 )δ 11.15 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.96 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.12 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.95 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.82 – 7.78 (m, 1H), 7.62 – 7.58 (m, 1H), 7.51 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.73 (d,J = 1.6Hz, 1H), 6.49 (s, 2H), 2.77-2.72 (m, 1H), 2.15 -2.11 (m, 1H), 1.60 - 1.58 (m, 1H), 1.45 - 1.40 (m, 1H)。 實例27： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-胺基-4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物39) 步驟 1 ：3,5-二溴-4-乙基吡啶
在-78℃下向二異丙基胺(3.5 mL，24.8 mmol)於THF (50 mL)中之溶液中逐份添加n-BuLi (2.5 M於己烷中，10.5 mL，26.25 mmol)。將混合物在室溫下攪拌15分鐘。隨後在-78℃在N2 下向反應混合物中添加3,5-二溴吡啶(5.0 g，21.11 mmol)。在-78℃攪拌1 h後，在-78℃下添加碘乙烷(3.29 g，21.11 mmol)。隨後將混合物在室溫下攪拌16小時。隨後將反應物用飽和NH4 Cl溶液(100 mL)洗滌。隨後將有機物分離，乾燥(Na2 SO4 )且濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯=20:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物。LCMS (ESI) [M+H]+ = 265.9。步驟 2 ：5-溴-4-乙基吡啶-3-基胺基甲酸第三丁酯
將3,5-二溴-4-乙基-吡啶(2.4 g，9.06 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.0 g，8.54 mmol)、K2 CO3 (2.5 g，18.12 mmol)、CuI (0.86 g，4.53 mmol)及N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(0.4 g，4.55 mmol)於1,4-二噁烷(60 mL)中之混合物在Ar下在100℃攪拌4小時。將反應物過濾且濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 10:1至石油醚/乙酸乙酯= 4:1)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物(1.01 g，37%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 301.0。步驟 3 ：4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶-3-基胺基甲酸第三丁酯
將雙(頻哪醇合)二硼(1.26 g，4.98 mmol)、N-(5-溴-4-乙基-3-吡啶基)胺基甲酸第三丁酯(1.0 g，3.32 mmol)、PdCl2 dppf (0.24 g，0.33 mmol)及乙酸鉀(0.98 g，9.96 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在Ar下在90℃攪拌3小時。將反應物濃縮至乾燥，且藉由矽膠管柱層析術(乙酸乙酯)純化，得到呈黑色油狀之標題化合物(490 mg，25%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 349.3。步驟 4 ：(±)-5-(8-氯-3-((順式)-2-氟環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-4-乙基吡啶-3-基胺基甲酸第三丁酯
將(±)-N-[4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-3-吡啶基]胺基甲酸第三丁酯(250 mg，0.72 mmol)、順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(150 mg，0.44 mmol)、PdCl2 dppf (52 mg，0.07 mmol)、K3 PO4 (304 mg，1.43 mmol)及乙酸鈉(117 mg，1.43 mmol)於乙腈(4 mL)及水(1 mL)中之混合物在Ar下在90℃攪拌3小時。將反應物濃縮至乾燥。隨後將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 4:1至石油醚/乙酸乙酯= 1:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(70 mg，20.1%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 485.2。步驟 5 ：(±)-N-[6-[5-(第三丁氧基羰基胺基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯
將N-[5-[8-氯-3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-乙基-3-吡啶基]胺基甲酸第三丁酯(40 mg，0.08 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(96 mg，0.82 mmol)、Pd2 (dba)3 (8 mg，0.01 mmol)、Brettphos (5 mg，0.01 mmol)及tBuONa (23 mg，0.24 mmol)於1,4-二噁烷(2 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱1小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:1至乙酸乙酯/石油醚= 2:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(20 mg，34.7%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 566.3。步驟 6 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-胺基-4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-N-[6-[5-(第三丁氧基羰基胺基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-[[(順式)-2-氟環丙烷羰基]胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(20 mg，0.04 mmol)於HCl於1,4-二噁烷(1 mL，4 M)中之溶液中之混合物在室溫下攪拌1小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物吸收於甲醇(2 ml)中，且用飽和NaHCO3 將pH調整至7至8。將混合物藉由逆相製備型HPLC (5-95%甲醇及1% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(11.6 mg，83.5%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.54，[M+H]+ = 366.2，方法= F。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 )δ 10.80 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 6.31 (s, 2H), 5.21 (s, 2H), 5.02-4.84 (m, 1H), 2.46 - 2.41 (m, 2H), 2.27-2.24 (m, 1H), 1.69 - 1.62 (m, 1H), 1.18 -1.14 (m, 1H), 0.98 (t,J = 7.6 Hz, 3H)。 實例28： 3-胺基-N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)丙醯胺(化合物40) 步驟 1 ：3-(6-溴-8-氯異喹啉-3-基胺基)-3-側氧基丙基胺基甲酸第三丁酯
將6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(150 mg，0.58 mmol)、3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸(165 mg，0.87 mmol)於二氯甲烷(2 mL)及吡啶(0.5 mL)中之混合物在0℃攪拌0.5小時。將POCl3 (89 mg，0.58 mmol)添加至反應混合物中，隨後將混合物在室溫下攪拌1小時。將反應混合物用10 mL水洗滌，且用飽和水性NaHCO3 將pH調整至7至8。隨後將有機層分離，且乾燥(NaSO4 )，之後濃縮至乾燥。將殘餘物用矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 4:1至石油醚/乙酸乙酯= 2:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(200 mg，70%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 430.0。步驟 2 ：3-(8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-3-側氧基丙基胺基甲酸第三丁酯
將N-[3-[(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)胺基]-3-側氧基-丙基]胺基甲酸第三丁酯(195 mg，0.45 mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(120 mg，0.55 mmol)、Pd(PPh3 )4 (53 mg，0.05 mmol)及K2 CO3 (188 mg，1.36 mmol)於1,4-二噁烷(8 mL)及水(2 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物用矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:1至100%乙酸乙酯)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(190 mg，59%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 441.2。步驟 3 ：3-(3-胺基丙醯胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將胺基甲酸第三丁酯(470 mg，4.01 mmol)、N-[3-[[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-3-側氧基-丙基]胺基甲酸第三丁酯(180 mg，0.41 mmol)、Cs2 CO3 (398 mg，1.22 mmol)、Pd2 (dba)3 (37 mg，0.04 mmol)及Brettphos (21 mg，0.04 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物用矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:1至乙酸乙酯/石油醚= 2:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(150 mg，38%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 522.3。步驟 4 ：3-胺基-N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)丙醯胺
將N-[3-[[8-(第三丁氧基羰基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-3-側氧基-丙基]胺基甲酸第三丁酯(150 mg，0.29 mmol)於HCl於1,4-二噁烷(4.0 M，2 mL，8 mmol)中之混合物在室溫下攪拌1小時。將反應物濃縮至乾燥，且將殘餘物吸收於甲醇(2 mL)中，且用飽和NaHCO3 將pH調整至7至8。將混合物直接用逆相製備型HPLC (5-95%甲醇及1% NH4 HCO3 )純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(39.5 mg)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.45，[M+H]+ = 322.2，方法= F。1 H NMR (400 MHz, CD3 OD)δ 9.23 (s, 1H), 8.40 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.39 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.68 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 3.05 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 2.66 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H)。 實例29： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-異丙基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物41) 步驟 1 ：5-異丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吡唑
將4-溴-3-異丙基-1H-吡唑(2.0 g，10.58 mmol )、Pd(dppf)Cl2 (1.0 g，1.37 mmol)、乙酸鉀(4.8 g，48.98 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(25.0 g，98.45 mmol)於1,4-二噁烷(100 mL)中之混合物在Ar下在100℃攪拌隔夜。將反應物濃縮至乾燥，且隨後將粗品藉由矽膠管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚，1/10至1/1)純化，得到呈黃色液體狀之3-異丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吡唑(1.28 g，39%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+ =237.2。步驟 2 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(5-異丙基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將含有3-異丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吡唑(600 mg，1.91 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (100 mg，0.14 mmol)、K2 CO3 (560 mg，4.06 mmol)、(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(520 mg，1.51 mmol)、1,4-二噁烷(10 mL)及水(1.5 mL)之反應混合物之壓力管在微波反應器中在130℃下加熱80分鐘。將反應物濃縮至乾燥，且隨後將粗品藉由矽膠管柱層析術(乙酸乙酯)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(3-異丙基-1H-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(220 mg，37%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+ =373.1。步驟 3 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(5-異丙基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-異丙基-1H-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(220 mg，0.59 mmol)、3,4-二氫-2h-吡喃(2.0 mL，21.92 mmol)、TFA (0.5 mL，6.71 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之溶液在回流下加熱隔夜。將反應物濃縮至乾燥，且隨後將粗品藉由矽膠管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚，1/4至1/1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(230 mg，84%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+ =457.2。步驟 4 ：(±)-順式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(3-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺及(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(3-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-氯-6-[1-四氫吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.2 mmol)、二苯甲酮亞胺(182 mg，1.0 mmol)、Xantphos (58 mg，0.1 mmol)、Pd2 (dba)3 (46 mg，0.05 mmol)及Cs2 CO3 (170 mg，0.52 mmol)於無水DMF (3.0 mL)及無水甲苯(3.0 mL)中之混合物在130℃在Ar氣氛下攪拌4小時。將反應濃縮。將殘餘物吸收於乙酸乙酯(15 ml)中，且用20 mL鹽水洗滌。隨後將有機層分離，乾燥(Na2 SO4 )且濃縮至乾燥。隨後將粗品藉由矽膠管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚，1:3至1:1)純化，得到呈黃色液體狀之(±)-順式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(3-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(77 mg，61%收率) (LCMS(ESI):[M+H]+ =602.3)及呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(3-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(43 mg，32%收率) ( LCMS (ESI): [M+H]+ = 602.3)。步驟 5 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(5-異丙基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(3-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(120.0 mg，0.20 mmol)於HCl於1,4-二噁烷(2.0 mL，4 M，8 mmol)中之溶液在室溫下攪拌1小時。將反應物濃縮，且將所得殘餘物藉由逆相製備型HPLC (甲醇0至40/0.1% HCl於水中)純化，得到呈紅色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(3-異丙基-1H-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(30 mg，43%收率) (HCl鹽)。LCMS(ESI): [M+H]+ = 354.2，RT (min) = 1.53，方法= B；1 HNMR (400 MHz,CD3 OD) δ 9.43 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.03 (s, 1H),5.10-5.06 (m, 1H), 3.62-3.57 (m, 1H), 2.20-2.17(m, 1H), 1.99-1.89(m, 1H), 1.42 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 1.39-1.30(m, 1H)。 實例30： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(5-異丙基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物42)
將(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(3-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(115 mg，0.19 mmol)於HCl於1,4-二噁烷溶液(2.0 mL，4 M，8 mmol)中之溶液在室溫下攪拌1小時。將反應物濃縮，且將所得殘餘物藉由逆相製備型HPLC (甲醇0至50/0.1% HCl於水中)純化，得到呈紅色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(3-異丙基-1H-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(45 mg，65%收率) (HCl鹽)。LCMS(ESI): [M+H]+ =354.2，RT (min) = 1.59，方法= B；1 HNMR (400 MHz,CD3 OD) δ 9.41 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 5.08-5.05 (m, 1H), 3.62-3.58 (m, 1H), 2.46-2.38 (m, 1H), 1.75-1.65 (m, 1H), 1.58-1.50 (m, 1H), 1.42 (d, J = 6.8 Hz, 6H)。 實例31： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-2-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物43) 步驟 1 ：甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吲唑
將6-溴-1-甲基-吡啶-2-酮(500 mg，2.66 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(675 mg，2.66 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (97 mg，0.13 mmol)及乙酸鉀(781 mg, 7.98 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在100℃下加熱12小時。將混合物用乙酸乙酯(50 mL)稀釋，過濾且濃縮，得到呈灰色固體狀之粗產物1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-2-基硼酸(320 mg)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI): [M+H]+ = 154.1。步驟 2 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-2-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(1-甲基-6-側氧基-2-吡啶基)硼酸(106 mg，0.70 mmol)、(±)-順式-N-(6-溴-8-氯異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(160 mg，0.47 mmol)、Pd(dppf)2 Cl2 (42 mg，0.06 mmol)、K3 PO4 (98 mg，0.47 mmol)、乙酸鈉(116 mg，1.41 mmol)、乙腈(20 mL)及水(2 mL)。將混合物用氮鼓泡透過2 min，且隨後在90℃攪拌3小時。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (石油醚/乙酸乙酯，1/2)純化，得到呈白色固體狀之(±)-順式-N-(8-氯-6-(1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-2-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(50 mg，28%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 372.0。步驟 3 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-2-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
在手套箱中向密封管中添加胺基甲酸第三丁酯(157 mg，1.34 mmol)、Pd2 (dba)3 (24 mg，0.03 mmol)、Cs2 CO3 (131 mg，0.40 mmol)、Xantphos (26 mg，0.05 mmol)、(±)-順式-N-(8-氯-6-(1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-2-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(50 mg，0.13 mmol)、DMF (2 mL)及甲苯(2 mL)。將混合物在110℃攪拌18小時。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-(8-胺基-6-(1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-2-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(7 mg，15%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.385，[M+H]+ = 353.1，方法= A；1H NMR (400 MHz ,CD3 OD) δ 9.27 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.59 (dd,J = 6.8, 9.2 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.67 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.62(dd,J = 1.2, 9.2 Hz, 1H), 6.42 (dd,J = 1.2, 6.8 Hz, 1H), 4.99-4.79 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 2.19-2.13 (m, 1H), 1.87-1.78 (m, 1H), 1.27-1.18 (m, 1H)。 實例32： (±)-反式-N-[8-胺基-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物44) 步驟 1 ：甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吲唑
將5-溴-6-甲基-1h-吲唑(400 mg，1.9 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(2.41 g，48 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (277 mg，0.38 mmol)及乙酸鉀(557 mg，5.69 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物在氮下加熱至90℃達3 h。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (石油醚)純化，得到呈黃色油狀之6-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吲唑(370 mg，37%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 259.1。步驟 2 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向密封管中添加反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(160 mg，0.46 mmol)、6-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吲唑(141 mg，0.55 mmol)、Pd(dppf)2 Cl2 (41 mg，0.06 mmol)、乙酸鈉(113 mg，1.39 mmol)、乙腈(2 mL)及水(0.2 mL)。將混合物用氮鼓泡透過2 min，且隨後在100℃攪拌3小時。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (石油醚/乙酸乙酯=2/1)純化，得到呈黃色油狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(160 mg，82%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 402.1。步驟 3 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-(6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
向冷卻(0℃)反式-N-[8-氯-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(190 mg，0.47 mmol)及對甲苯磺酸(8 mg，0.05 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之懸浮液中添加3,4-二氫-2h-吡喃(47 mg，0.57 mmol)。該反應混合物在室溫下攪拌16小時。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (石油醚/乙酸乙酯，4:1)純化，得到呈黃色油狀之反式-N-[8-氯-6-(6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(190 mg，75%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 486.2。步驟 4 ：(±)-反式-2-氰基-N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(6-甲基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
向密封管中添加二苯甲酮亞胺(61 mg，0.34 mmol)、反式-N-[8-氯-6-(6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(150 mg，0.31mmol)、Pd(OAc)2 (7 mg，0.03 mmol)、Cs2 CO3 (201 mg，0.62 mmol)、xantphos (15 mg，0.03 mmol)及甲苯(5 mL)。將混合物在145℃攪拌16小時。將反應混合物濃縮且藉由製備型TLC (石油醚/乙酸乙酯，1/2)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-2-氰基-N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(6-甲基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(90 mg，46%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 631.1。步驟 5 ：(±)-反式-N-[8-胺基-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
向(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(80 mg，0.13 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中添加HCl於1,4-二噁烷溶液(2 mL，4 M，8 mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(6.3 mg，12.9%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.513，[M+H]+ = 383.1，方法= A；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.24 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.76 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 2.65-2.64 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.14-2.09 (m, 1H), 1.62-1.55 (m, 2H)。 實例33： (±)-反式-N1-[8-胺基-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-異喹啉基]環丙烷-1,2-二羧醯胺(化合物45)
向(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(80 mg，0.13 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中添加HCl於1,4-二噁烷溶液(2 mL，4 M，8 mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N1-[8-胺基-6-(6-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-異喹啉基]環丙烷-1,2-二羧醯胺(8.3 mg，16%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.372，[M+H]+ = 401.1，方法= A；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.23 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 2.42-2.38 (m, 4H), 2.25-2.20 (m, 1H), 1.44-1.40 (m, 2H)。 實例34： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物46)(±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物47) 步驟 1 ：(±)-8-氯-3-(順式-2-氟環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基硼酸
將(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(1.0 g，2.91 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(960 mg，3.78 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (424 mg，0.58 mmol)及乙酸鉀(855 mg，8.73 mmol)於DMF (4 mL)中之混合物用N2 吹掃三次。將混合物在100℃攪拌1小時。將混合物用乙酸乙酯萃取。將有機層用水及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物藉由矽膠急驟層析術(石油醚/乙酸乙酯，3:1)純化，得到呈黃色固體狀之8-氯-3-(順式-2-氟環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基硼酸(600 mg，66%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 309.0。步驟 2 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-[8-氯-3-[[順式-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]硼酸(200 mg，0.57 mmol)、3-溴-4-甲氧基-吡啶(128 mg，0.68 mmol)、Pd(dppf)2 Cl2 (51 mg，0.07 mmol)、K3 PO4 (120 mg，0.57 mmol)、乙酸鈉(142 mg，1.73 mmol)、1,4-二噁烷(2 mL)及水(0.2 mL)。將混合物用N2 鼓泡透過2分鐘，且在100℃攪拌3小時。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (石油醚/乙酸乙酯，2/1)純化，得到呈黃色油狀之(±)-順式-N-(8-氯-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(80 mg，36%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 372.1。步驟 3 ：(±)-順式-N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-順式-N-[8-氯-6-(4-甲氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(60 mg，0.16 mmol)、二苯甲酮亞胺(32 mg，0.18 mmol)、Pd(OAc)2 (4 mg，0.02 mmol)、Cs2 CO3 (105 mg，0.32 mmol)、Xantphos (8 mg，0.02 mmol)、DMF (1 mL)及甲苯(3 mL)。將混合物在微波反應器中在145℃下加熱30分鐘。將反應物用乙酸乙酯(50 mL)稀釋，用鹽水洗滌，乾燥(Na2 SO4 )且濃縮。隨後將粗產物藉由急驟矽膠管柱層析術(80%乙酸乙酯於己烷中)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺及(±)-反式-N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(20 mg，24%收率)之混合物。LCMS (ESI): [M+H]+ = 517.2。步驟 4 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
向(±)-順式-N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺及反式-N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(4-甲氧基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(20 mg，0.04 mmol)之混合物於THF (3 mL)中之溶液中添加HCl於1,4-二噁烷中之溶液(2 mL，4 M，8 mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，得到兩種所要異構物：
(±)-順式-N-[8-胺基-6-(4-甲氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(4.9 mg，36%，黃色固體)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.253，[M+H]+ = 353.1，方法= A；1 H NMR (400 MHz,CD3 OD): δ 9.22 (s, 1H), 8.44 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.21 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.88 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 4.98-4.80 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.19-2.14 (m, 1H), 1.88-1.78 (m, 1H), 1.27-1.18 (m, 1H)。
(±)-反式-N-[8-胺基-6-(4-甲氧基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(6 mg，44%，黃色固體)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.295，[M+H]+ = 353.1，方法= A；1 H NMR (400 MHz,CD3 OD): δ 9.22 (s, 1H), 8.44 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.21 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 7.17 (s, 1H), 6.88 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 4.99-4.78 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.50-2.40 (m, 1H), 1.55-1.49 (m, 1H), 1.42-1.37 (m, 1H)。 實例35： (±)-順式-N-[8-胺基-6-(2-羥基-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(化合物48) 步驟 1 ：2-甲氧基-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶
向壓力管中添加3-溴-2-甲氧基-4-甲基吡啶(396 mg，1.96 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(597 mg，2.35 mmol)、Pd(dppf)2 Cl2 (143 mg，0.20 mmol)、乙酸鉀(384 mg，3.92 mmol)及1,4-二噁烷(15 mL)。將混合物在95℃攪拌4小時。將殘餘物藉由矽膠急驟層析術(石油醚/乙酸乙酯，4:1)純化，得到呈無色油狀之2-甲氧基-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(250 mg，51%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 249.3。步驟 2 ：(±)-順式-N-[8-氯-6-(2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
向壓力管中添加(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(260 mg，0.76 mmol)、2-甲氧基-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(226 mg，0.91 mmol)、Pd(dppf)2 Cl2 (68 mg，0.09 mmol)、乙酸鈉(244 mg，2.3 mmol)、K3 PO4 (160 mg，0.76 mmol)、乙腈(10 mL)及水(1 mL)。將混合物用N2 鼓泡透過2分鐘，且在90℃攪拌2小時。將殘餘物藉由矽膠急驟層析術(石油醚/乙酸乙酯，4:1)純化，得到呈白色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(145 mg，50%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 386.1。步驟 3 ：(±)-順式-N-[8-胺基-6-(2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
將Pd2 dba3 (32 mg，0.03 mmol)、Cs2 CO3 (253 mg，0.78 mmol)、(±)-順式-N-[8-氯-6-(2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.26 mmol)及胺基甲酸第三丁酯(304 mg，2.59 mmol)及Xantphos (40 mg，0.07 mmol)於甲苯(1 mL)及DMF (1 mL)中之混合物在110℃下加熱2小時。將混合物用乙酸乙酯稀釋，用水(30 mL)、鹽水(30 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(12 mg，13%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 367.1。步驟 4 ：(±)-順式-N-[8-胺基-6-(2-羥基-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
向(±)-順式-N-[8-胺基-6-(2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(12 mg，0.03 mmol)於乙腈(4 mL)中之混合物中添加碘三甲基矽烷(0.02 mL，0.14 mmol)。將混合物在90℃攪拌1小時。將混合物用乙酸乙酯稀釋，用水(30 mL)、鹽水(30 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(2-羥基-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(9 mg，78%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.625，[M+H]+ = 353.1，方法= I；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.26 (s, 1H), 10.47(s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.23 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.47 (s, 1H), 6.13 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 5.91 (s, 2H), 5.00-4.76 (m, 1H), 2.27-2.23 (m, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.74-1.61 (m, 1H), 1.18-1.12 (m, 1H)。 實例36： (±)-順式-N-[8-胺基-6-(5-氟-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(化合物49) 步驟 1 ：(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-氟-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.58 mmol)、3-氟-4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(179 mg，0.76 mmol)、Pd(dppf)2 Cl2 (52 mg，0.07 mmol)、K3 PO4 (123 mg，0.58 mmol)及乙酸鈉(145 mg，1.77 mmol)、乙腈(20 mL)及水(2 mL)。將混合物用N2 鼓泡透過2 min，且在90℃攪拌3小時。將混合物濃縮且藉由矽膠急驟層析術(石油醚/乙酸乙酯，2:1)純化，得到呈白色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-氟-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(100 mg，46%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 374.1。步驟 2 ：(±)-順式-N-[8-胺基-6-(5-氟-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
將Pd2 dba3 (33 mg，0.04 mmol)、Cs2 CO3 (262 mg，0.80 mmol)、(±)-順式-N-[8-氯-6-(5-氟-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.27 mmol)及胺基甲酸第三丁酯(313 mg，2.68 mmol)及Xantphos (41 mg，0.07 mmol)於甲苯(1 mL)及DMF (1 mL)中之混合物在110℃下加熱2小時。將混合物用乙酸乙酯稀釋，用水(30 mL)、鹽水(30 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(5-氟-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(18 mg，19%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.422，[M+H]+ = 355.1，方法= D；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.25 (s, 1H), 8.39 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.68 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 4.99-4.78 (m, 1H), 2.31 (d,J = 2.0 Hz, 3H), 2.18-2.13 (m, 1H), 1.87-1.77 (m, 1H), 1.26-1.21 (m, 1H)。 實例37： (±)-順式-N-[8-胺基-6-(3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(化合物50) 步驟 1 ：(±)-順式-N-[8-氯-6-(3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
向密封管中添加順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(300 mg，0.87 mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(214 mg，1.05 mmol)、Pd(dppf)2 Cl2 (78 mg，0.11 mmol)、乙酸鈉(281 mg，2.65 mmol)、K3 PO4 (184 mg，0.87 mmol)、乙腈(10 mL)及水(1 mL)。將混合物用N2 鼓泡透過2分鐘，且在90℃攪拌2小時。將混合物濃縮且藉由矽膠急驟層析術(石油醚/乙酸乙酯，1:1)純化，得到呈白色固體狀之順式-N-[8-氯-6-(3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(200 mg，67%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 342.1。步驟 2 ：(±)-順式-N-[8-胺基-6-(3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
將Pd2 dba3 (66 mg，0.07 mmol)、Cs2 CO3 (529 mg，1.62 mmol)、順式-N-[8-氯-6-(3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(185 mg，0.54 mmol)及胺基甲酸第三丁酯(634 mg，5.41 mmol)、Xantphos (83 mg，0.14 mmol)於甲苯(1 mL)及DMF (1 mL)中之混合物在110℃下加熱2小時。將混合物用乙酸乙酯稀釋，用水(30 mL)、鹽水(30 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之順式-N-[8-胺基-6-(3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(20 mg，11%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.273，[M+H]+ = 323.0，方法= A；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.23 (s, 1H), 8.89 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 8.56 (dd,J = 1.6, 4.8 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.21-8.18 (m, 1H), 7.56 (dd,J = 4.8, 8.0 Hz, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.01(d,J = 1.2 Hz, 1H), 4.99-4.79 (m, 1H), 2.20-2.13 (m, 1H), 1.88-1.78 (m, 1H), 1.27-1.19(m, 1H)。 實例38： (±)-反式-N-[8-胺基-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物51) 步驟 1 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(150 mg，0.43 mmol)、3-甲基吡啶-4-硼酸(70 mg，0.51 mmol)、Pd(dppf)2 Cl2 (39 mg，0.05 mmol)及Na2 CO3 (138 mg，1.3 mmol)、1,4-二噁烷(10 mL)及水(1 mL)。將混合物用N2 鼓泡透過2 min，且隨後在微波反應器中在120℃下加熱1小時。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (乙酸乙酯/石油醚，1:1)純化，得到呈黃色固體狀之反式-N-[8-氯-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(70 mg，45%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 363.1。步驟 2 ：(±)-反式-N-[8-胺基-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-反式-N-[8-氯-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(60 mg，0.17 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(157 mg，1.35 mmol)、Pd2 (dba)3 (31 mg，0.03 mmol)、NaOtBu (47 mg，0.49 mmol)、tBuBrettPhos (19 mg，0.04 mmol)及1-甲基-2-吡咯啶酮(5 mL)。將混合物在110℃攪拌2小時。將混合物用乙酸乙酯稀釋，用水(30 mL)、鹽水(30 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物藉由製備型TLC (乙酸乙酯)及逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(3 mg，5%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.338，[M+H]+ = 344.2，方法= D；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.26 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.41(d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.35 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.69 (d,J =1.2 Hz, 1H), 2.64 - 2.63(m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.12-2.10(m, 1H), 1.60-1.53(m, 2H)。 實例39： (±)-反式-N-[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物52) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺
向8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(800 mg，2.48 mmol)於二氯甲烷(10 mL)及吡啶(0.6 mL，7.44 mmol)中之溶液中添加(±)-反式-2-氰基環丙烷羰基氯(830 mg，6.41 mmol)。將混合物在25℃攪拌2小時。將混合物濃縮且再懸浮於水(10 mL)中。將混合物用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取。將有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物懸浮於100 ml石油醚及10 ml乙酸乙酯中，且隨後過濾，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(800 mg，78%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 416.0。步驟 2 ：(±)-反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-反式-N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(400 mg，0.96 mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(253 mg，1.15 mmol)、Pd(dppf)2 Cl2 (84 mg，0.12 mmol)及Na2 CO3 (255 mg，2.41 mmol)、四氫呋喃(20 mL)及水(8 mL)。將混合物用N2 鼓泡透過2分鐘，且在65℃攪拌3小時。隨後添加水(50 mL)。將混合物用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取。將合併之有機萃取物用鹽水(50 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由矽膠急驟層析術(石油醚/乙酸乙酯，1:1)純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(220 mg，60%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 381.1。步驟 3 ：(±)-反式-N-[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將Pd2 dba3 (96 mg，0.11 mmol)、Cs2 CO3 (513 mg，1.58 mmol)、反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.53 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(615 mg，5.25 mmol)及Xantphos (121 mg，0.21 mmol)於甲苯(6 mL)及DMF (6 mL)中之混合物在130℃下加熱隔夜。將混合物用乙酸乙酯稀釋，用水(30 mL)、鹽水(30 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相製備型HPLC純化，得到(±)-反式-N-[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(20 mg，10.5%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.330，[M+H]+ = 362.1，方法= A；1 H NMR (400 MHz,CD3 OD) δ 9.32 (s, 1H), 8.47 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.41(s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.42 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 2.65- 2.61 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.14-2.09 (m, 1H), 1.61-1.52 (m, 2H)。 實例40： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(5-甲基-2-側氧基-2,3-二氫苯并[d]噁唑-6-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物54) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(3-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-2-側氧基-2,3-二氫苯并[d]噁唑-6-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(90 mg，0.26 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (18 mg，0.03 mmol)、K2 CO3 (70 mg，0.51 mmol)、3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1,3-苯并噁唑-2-酮(101 mg，0.26 mmol)、水(0.2 mL)及1,4-二噁烷(10 mL)之混合物在100℃在N2 下攪拌4小時。將混合物濃縮且藉由矽膠管柱層析術(30%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-[3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-2-側氧基-1,3-苯并噁唑-6-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(90 mg，62%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 539.2步驟 2 ：(±)-3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)-6-(3-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-2-側氧基-2,3-二氫苯并[d]噁唑-6-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
向密封管中添加反式-N-[8-氯-6-[3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-2-側氧基-1,3-苯并噁唑-6-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(75 mg，0.14 mmol)、Pd2 (dba)3 (25 mg，0.03 mmol)、t-BuONa (27 mg，0.28 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(326 mg，2.78 mmol)及1,4-二噁烷(4 mL)。將混合物在90℃攪拌1小時。將混合物濃縮，且將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(0至50%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈褐色固體狀之(±)-N-[3-[[反式-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-[3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-2-側氧基-1,3-苯并噁唑-6-基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(60 mg，70%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 620.3。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(5-甲基-2-側氧基-2,3-二氫苯并[d]噁唑-6-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-N-[3-[[反式-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-[3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5-甲基-2-側氧基-1,3-苯并噁唑-6-基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(20 mg)、TFA (0.5 mL)及三氟甲烷磺酸(1 mL)之混合物在25℃攪拌2小時。將混合物濃縮且用甲醇中之NH3 (7 M)鹼化。將所得殘餘物藉由逆相製備型HPLC (乙腈0至50/0.1%甲酸於水中)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(5-甲基-2-側氧基-3H-1,3-苯并噁唑-6-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(4 mg，31%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.669，[M+H]+ = 400.1，方法= B；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.14(s, 1H), 9.36 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.61(s, 1H), 6.35 (s, 2H), 2.83-2.78 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.21-2.16 (m, 1H), 1.66-1.62 (m, 1H), 1.51-1.46 (m, 1H)。 實例41： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(2-乙基-5-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物55)步驟1：(±)-順式-N-(8-氯-6-(2-乙基-5-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(150 mg，0.5 mmol)、5-乙基吡咯啶-2-酮(56 mg，0.5 mmol)、Pd2 (dba)3 (45 mg，0.05 mmol)、Cs2 CO3 (324 mg，1.0 mmol)、Xantphos (58 mg，0.1 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在100℃在N2 下攪拌16小時。將混合物濃縮，且將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(0至100%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈白色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-[2-乙基-5-側氧基-吡咯啶-1-基]-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(120 mg，64%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 376.1。步驟 2 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(2-乙基-5-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-氯-6-(2-乙基-5-側氧基-吡咯啶-1-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.27 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(311 mg，2.66 mmol)、tert-BuBrettphos (51 mg，0.108 mmol)、Pd2 (dba)3 (47 mg，0.054 mmol)及t-BuONa (51 mg，0.53 mmol)於1-甲基-2-吡咯啶酮(1 mL)中之混合物在110℃在N2 下攪拌2小時。將混合物濃縮且藉由矽膠管柱層析術(0至100%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(2-乙基-5-側氧基-吡咯啶-1-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(6 mg，6.3%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.625，[M+H]+ = 356.7，方法= C；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.15 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.07-7.04 (m, 1H), 6.85-6.84 (m,1H), 5.00-4.78 (m, 1H), 4.43-4.35 (m, 1H), 2.67-2.54 (m, 2H), 2.43-2.34 (m ,1H), 2.20-2.10 (m,1H), 1.97-1.69 (m,3H), 1.55-1.47 (m,1H), 1.26-1.17 (m,1H), 0.91 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。 實例42： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(6-乙氧基-4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物56) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-乙基吡啶-3-基)-2,7-口奈啶-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(6-乙氧基-4-乙基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.24 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(555 mg，4.74 mmol)、t-BuBrettphos (46 mg，0.1mmol)、Pd2 (dba)3 (43 mg，0.05 mmol)及t-BuONa (45 mg，0.48 mmol)於1-甲基-2-吡咯啶酮(4 mL)中之混合物在110℃攪拌2小時。將混合物濃縮且藉由矽膠管柱層析術(0至100%乙酸乙酯於石油醚中)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(6-乙氧基-4-乙基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(6 mg，6.3%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.956，[M+H]+ = 402.2，方法= C；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.24 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.94 (s, 1H),6.95 (s, 1H), 6.76 (s,1H), 6.67 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 4.35(q,J = 6.8 Hz, 2H), 2.69-2.63 (m, 3H), 2.14-2.09 (m, 1H) , 1.61-1.53 (m, 2H), 1.42 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.12 (t,J = 7.6 Hz, 3H)。 實例43： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(1,2-二甲基-1H-咪唑-5-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物57)步驟1：1,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-咪唑
在手套箱中，將壓力管用[Ir(OMe)(COD)]2 (105 mg，0.16 mmol)、THF (5 mL)及頻哪醇硼烷(1.1 mL，7.8 mmol)填裝。將反應混合物在室溫下攪拌10分鐘，且向此中添加4,4-二第三丁基二吡啶(42 mg，0.16 mmol)。將反應在室溫下再攪拌10分鐘。添加1,2-二甲基咪唑(500 mg，5.2 mmol)於THF (5 mL)中之溶液。將混合物在室溫下攪拌16小時。隨後將混合物在真空中濃縮。將殘餘物用己烷(10 mL x 4)洗滌且濃縮，得到呈褐色固體狀之1,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)咪唑(1 g，52%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 223.2。步驟 2 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-氯-2,7-口奈啶-3-基)-2-甲基環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(220 mg，0.63 mmol)、1,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)咪唑(385 mg，1.73 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (101 mg，0.14 mmol)及Na2 CO3 (202 mg，1.91mmol)、1,4-二噁烷(10 mL)及水(1 mL)。將混合物用N2 鼓泡透過2分鐘，且在100℃攪拌2.5小時。將混合物濃縮且藉由矽膠急驟層析術(石油醚/乙酸乙酯，1:1至0:100)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(2,3-二甲基咪唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(250 mg，97%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 366.1。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(1,2-二甲基-1H-咪唑-5-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向密封管中添加胺基甲酸第三丁酯(768 mg，6.56 mmol)、(±)-反式-N-[8-氯-6-(2,3-二甲基咪唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(240 mg，0.66mmol)、Pd2 (dba)3 (150 mg，0.16 mmol)、Cs2 CO3 (700 mg，2.15 mmol)、Xantphos (100 mg，17mmol)及1-甲基-2-吡咯啶酮(15 mL)。將混合物在130℃攪拌2小時。將反應混合物在真空中濃縮且藉由管柱層析術(BOSTOM ODS 40 g管柱，用10 mM NH4 HCO3 於乙腈中溶離，100:0至1:5)純化，得到粗產物(100 mg)。將粗產物再次藉由製備型TLC (矽膠，二氯甲烷/甲醇，10:1)純化，得到呈淺黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(2,3-二甲基咪唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(10 mg，4%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.532，[M+H]+ = 346.8，方法= H；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ: 9.19 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 7.76 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 3.66 (s, 3H), 2.67-2.60 (m, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.13-2.04 (m, 1H), 1.63-1.50 (m, 2H)。 實例44： (±)-順式-N-[8-胺基-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(化合物59) 步驟 1 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(3-甲基吡啶-4-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-順式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.58 mmol)、3-甲基吡啶-4-硼酸(95 mg，0.70 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (52 mg，0.07 mmol)、K3 PO4 (122 mg，0.58mmol)、乙酸鈉(185 mg，1.75mmol)、乙腈(20 mL)及水(2 mL)。將混合物在N2 下在90℃攪拌3小時。將混合物濃縮且藉由矽膠急驟層析術(石油醚/乙酸乙酯，2:3)純化，得到呈白色固體狀之(±)-順式-N-[8-氯-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(140 mg，67%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 356.1。步驟 2 ：(±)-順式-N-[8-胺基-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺
將(±)-順式-N-[8-氯-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(130 mg，0.37 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(428 mg，3.65 mmol)、Pd2 dba3 (66 mg，0.07 mmol)、Xantphos (84 mg，0.15 mmol)及Cs2 CO3 (357 mg，1.1 mmol)於甲苯(3 mL)及DMF (3 mL)中之混合物在密封管中在110℃下加熱16小時。將反應混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物用石油醚及乙酸乙酯洗滌，得到粗產物，將其藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N-[8-胺基-6-(3-甲基-4-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(25 mg，20%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.605，[M+H]+ = 337.1，方法= C；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.25 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.43 (d,J = 4.8 Hz , 1H), 8.33 (s, 1H), 7.36 (d,J = 4.8 Hz , 1H), 7.02 (s, 1H), 6.69 (d,J = 1.2 Hz , 1H), 4.99-4.79 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.20-2.12 (m, 1H), 1.87-1.77 (m, 1H), 1.27-1.18 (m, 1H)。 實例45： (±)-((反式)-N-(8-胺基-6-(4-(1,1-二氟乙基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物60) 步驟 1 ：4-(1,1-二氟乙基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶
將3-溴-4-(1,1-二氟乙基)吡啶(500 mg，2.25 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(857 mg，3.37 mmol)、PdCl2 dppf (164 mg，0.22 mmol)及乙酸鉀(662 mg，6.76 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar下在100℃下加熱16小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚:乙酸乙酯= 10:1至石油醚/乙酸乙酯= 2:1)純化，得到呈黃色油狀之標題化合物(105 mg，17%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 270.2。步驟 2 ：(±)-(反式)-N-(8-氯-6-(4-(1,1-二氟乙基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(108 mg，0.31 mmol)、4-(1,1-二氟乙基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(100 mg，0.37 mmol)、Pd(PPh3 )4 (36 mg，0.03 mmol)、乙酸鉀(90 mg，0.92 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)及水(1 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱4小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 4:1至石油醚/乙酸乙酯= 2:1)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物(80 mg，61%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 413.1。步驟 3 ：(±)-反式-2-氰基-N-(6-(4-(1,1-二氟乙基)吡啶-3-基)-8-(二苯基亞甲基胺基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-(1,1-二氟乙基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(70 mg，0.17 mmol)、二苯甲酮亞胺(92 mg，0.51 mmol)、Pd2 (dba)3 (31 mg，0.03 mmol)、Xantphos (10 mg，0.02 mmol)、Cs2 CO3 (165 mg，0.51 mmol)於DMF (0.5 mL)及甲苯(0.5 mL)中之混合物在Ar下在130℃下加熱3小時。反應用乙酸乙酯稀釋且用鹽水洗滌。將有機層分離，乾燥(NaSO4 )且濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 4:1至石油醚/乙酸乙酯= 2:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(25 mg，23.6%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 558.2。步驟 4 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-(1,1-二氟乙基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-(反式)-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-[4-(1,1-二氟乙基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(25 mg，0.04 mmol)及TFA (0.5 mL，6.71 mmol)於二氯甲烷(2 mL)及兩滴水中之混合物在N2 下在室溫下攪拌2小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物吸收於甲醇(0.5 mL)中，且用飽和NaHCO3 將pH調整至7至8。將混合物直接藉由逆相製備型HPLC (溶離劑：5%至95%甲醇及水)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(14.2 mg，81%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.75，[M+H]+ = 394.2，方法= B。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.13 (s, 1H), 9.35 (s, 1H), 8.75 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.64 (d,J = 5.6Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.41 (s, 2H), 2.77 - 2.50 (m, 1H), 2.14 - 2.10 (m, 1H), 1.77 (t, J = 19.2 Hz, 1H), 1.61 - 1.58 (m, 1H), 1.44 - 1.43 (m, 1H)。 實例46： (±)-N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(嗎啉-3-基)乙醯胺(化合物61) 步驟 1 ：8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺
將6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(2000 mg，7.77 mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(2042 mg，9.32 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (284 mg，0.39 mmol)及Na2 CO3 (2058 mg，19.42 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)及水(2 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將反應濃縮。將殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯，2:1至1:4)純化，得到呈黃色固體狀之8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(1.3 g，52%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 270.1。步驟 2 ：(±)-3-(2-(8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-2-側氧基乙基)嗎啉-4-羧酸第三丁酯
向8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(130 mg，0.48 mmol)及2-(4-第三丁氧基羰基嗎啉-3-基)乙酸(142 mg，0.58 mmol)於吡啶(2 mL)中之溶液中添加氧氯化磷(369 mg，2.4 mmol)。將所得混合物在25℃攪拌1小時。將混合物濃縮且藉由矽膠急驟管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯，3:1至1:2)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-3-[2-[[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-2-側氧基-乙基]嗎啉-4-羧酸第三丁酯(130 mg，48%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 497.2。步驟 3 ：(±)-3-(2-(8-(第三丁氧基羰基胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-2-側氧基乙基)嗎啉-4-羧酸第三丁酯
將(±)-胺基甲酸第三丁酯(259 mg，2.21 mmol)、第三丁氧基鈉(234 mg，2.43 mmol)、3-[2-[[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-2-側氧基-乙基]嗎啉-4-羧酸第三丁酯(110 mg，0.22 mmol)、Pd2 (dba)3 (20 mg，0.02 mmol)及Brettphos (24 mg，0.04 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)中之混合物在90℃攪拌1小時。將反應物濃縮且藉由矽膠急驟管柱層析術(石油醚:乙酸乙酯，3:1至1:3)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-3-[2-[[8-(第三丁氧基羰基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-2-側氧基-乙基]嗎啉-4-羧酸第三丁酯(36 mg，23%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 578.3。步驟 4 ：(±)-N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(嗎啉-3-基)乙醯胺
將(±)-3-[2-[[8-(第三丁氧基羰基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-2-側氧基-乙基]嗎啉-4-羧酸第三丁酯(36 mg，0.06 mmol)於0.5 mL 4 M HCl於1,4-二噁烷中之混合物攪拌1小時。將反應物濃縮且藉由逆相HPLC (乙腈10至47/0.05%氨於水中)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-N-[8-胺基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-嗎啉-3-基-乙醯胺(7.1 mg，30.2%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.490，[M+H]+ = 378.2，方法= C；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): 10.62 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.45 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.35 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.33(s, 2H), 3.71-3.63 (m, 2H), 3.22-3.20 (m, 1H), 3.12-3.10 (m, 2H), 2.78-2.75 (m, 2H), 2.41-2.40 (m, 2H), 2.30 (s, 3H)。 實例47： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-甲基異噻唑-5-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物62) 步驟 1 ：(±)-反式- N-(8-氯-6-(4-甲基異噻唑-5-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-8-氯-3-(2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基硼酸(240 mg，0.76 mmol)、5-溴-4-甲基-異噻唑(162 mg，0.91 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (28 mg，0.04 mmol)及Na2 CO3 (161 mg，1.52 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)及水(0.4 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。濃縮混合物。將殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯，5:1至1:5)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-甲基異噻唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(190 mg，48%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 369.0。步驟 2 ：(±)-反式- 2-氰基-N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(4-甲基異噻唑-5-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-甲基異噻唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(90 mg，0.24 mmol)、二苯甲酮亞胺(88 mg，0.49 mmol)、Pd2 (dba)3 (45 mg，0.05mmol)、Xantphos (56 mg，0.10 mmol)及Cs2 CO3 (161 mg，0.49 mmol)於DMF (2 mL)及甲苯(2 mL)中之混合物在130℃攪拌3小時。隨後將反應物冷卻至室溫，且用水(10 mL)稀釋。將混合物用乙酸乙酯(20 mL x 2)萃取。將合併之有機萃取物在真空中濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯，3:1至1:2)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-甲基異噻唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(36 mg，20%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 514.2。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-甲基異噻唑-5-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-甲基異噻唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(36 mg，0.05 mmol)於乙腈(3 mL)中之溶液中添加1滴TFA及1滴水。將所得溶液攪拌20分鐘。將反應溶液濃縮且藉由逆相製備型HPLC (乙腈10至47/0.05%氨於水中)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(4-甲基異噻唑-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(8 mg，47%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.759，[M+H]+ = 350.1，方法= C；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): 9.34 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.74 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.52 (s, 2H), 6.08 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 2.78-2.74 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.17-2.12 (m, 1H), 1.62-1.60 (m,1H), 1.46-1.42 (m, 1H)。 實例48： (±)-反式-N-[8-胺基-6-[6-(二氟甲氧基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物63) 步驟 1 ：5-溴-2-(二氟甲氧基)-4-乙基-吡啶
將5-溴-4-乙基-吡啶-2-醇(1.0 g，4.9 mmol)、碳酸銫(2.4 g，7.4 mmol)及氯二氟乙酸鈉(760 mg，5.0 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物在100℃攪拌3小時。將冷卻之混合物用水(30 mL)稀釋，且用乙醚(25 mL)萃取。將有機相用水洗滌，隨後用鹽水洗滌，乾燥(Na2 SO4 )且濃縮。將主要異構物，O-烷基化產物藉由矽膠急驟層析術(0至10%乙酸乙酯於己烷中)分離，得到呈無色液體狀之標題化合物(130 mg，8.5%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 253.1。步驟 2 ：2-(二氟甲氧基)-4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶
在Ar氣氛下將雙(頻哪醇合)二硼烷(220 mg，0.9 mmol)、乙酸鉀(100.0 mg，1.0 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (40 mg，0.05 mmol)依序添加至5-溴-2-(二氟甲氧基)-4-乙基-吡啶(110 mg，0.4 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之溶液中。將反應混合物在100℃攪拌隔夜。將反應混合物在真空中濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚，0至100%收率)純化，得到呈淡黃色油狀之2-(二氟甲氧基)-4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(150 mg，63%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 300.1。步驟 3 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-[6-(二氟甲氧基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.3 mmol)、Pd(PPh3 )4 (35 mg，0.03 mmol)及K3 PO4 (120 mg，0.6 mmol)依序添加至2-(二氟甲氧基)-4-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(105 mg，0.4 mmol)於1,4-二噁烷(6 mL)及水(0.6 mL)中之溶液中。將反應混合物在100℃攪拌2小時。在真空中濃縮反應混合物。將殘餘物在矽膠管柱層析術(甲醇/二氯甲烷，1:3)上純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-[6-(二氟甲氧基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，53%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 443.1。步驟 4 ：(±)-反式-N-[8-胺基-6-[6-(二氟甲氧基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將胺基甲酸第三丁酯(265.0 mg，2.3 mmol)、(±)-反式-N-[8-氯-6-[6-(二氟甲氧基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.23 mmol)、Pd2 (dba)3 (40 mg，0.04 mmol)、NaOtBu (55.0 mg，0.6 mmol)及tBu-Brettphos (49.0 mg，0.09 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之混合物在N2 下在120℃攪拌1 h。將反應混合物在真空中濃縮，且將殘餘物藉由矽膠急驟層析術(乙酸乙酯/石油醚，0至50%收率)及逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-[6-(二氟甲氧基)-4-乙基-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(3 mg，3.1%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.950，[M+H]+ = 424.2，方法= F；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ: 9.26 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.58 (t,J = 73.2 Hz, 1H), 6.97 (s, 2H), 6.67 (s, 1H), 2.71 (q,J = 7.6 Hz, 2H), 2.68-2.65 (m, 1H), 2.14-2.09 (m, 1H), 1.63 -1.52 (m, 2H), 1.15 (t,J = 7.6 Hz, 3H)。 實例49： (±)-反式-N-[8-胺基-6-[4-(2-羥乙基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物65) 步驟 1 ：2-(3-溴-4-吡啶基)乙酸甲酯
向冰冷3-溴-4-甲基吡啶(1.0 g，5.8 mmol)及碳酸二甲酯(950.0 mg，10.6 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液中添加LiHMDS (1.0 M於THF中，9 mL，9 mmol)。在0℃攪拌5小時後，添加額外LiHMDS (1.0 M於THF中，6 mL，6 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物藉由添加飽和水性NH4 Cl溶液淬滅，且用乙酸乙酯萃取。將有機層乾燥，過濾且濃縮。將粗產物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯= 1:3)純化，得到呈無色油狀之2-(3-溴-4-吡啶基)乙酸甲酯(1.2 g，85%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 231.1。步驟 2 ：2-(3-溴-4-吡啶基)乙醇
向冰冷2-(3-溴-4-吡啶基)乙酸甲酯(800 mg，3.5 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中逐份添加NaBH4 (264.0 mg，6.9 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時。將混合物濃縮且藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯，1:1)純化，得到呈無色油狀之2-(3-溴-4-吡啶基)乙醇(550 mg，78%收率)。LCMS(ESI): [M+H]+ = 203.1。步驟 3 ：2-[3-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-4-吡啶基]乙醇
將2-(3-溴-4-吡啶基)乙醇(300 mg，1.5 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (120 mg，0.16 mmol)、乙酸鈉(300 mg，3.7 mmol)及K3 PO4 (600 mg，2.8 mmol)依序添加至8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)異喹啉-3-胺(800 mg，2.6 mmol)於乙腈(15 mL)及水(2 mL)中之溶液中。將反應混合物在90℃攪拌4小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析術(30%甲醇於二氯甲烷中)純化，得到呈黃色固體狀之2-[3-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-4-吡啶基]乙醇(400 mg，84%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 300.1。步驟 4 ：6-[4-[2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-3-吡啶基]-8-氯-異喹啉-3-胺
將2-[3-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-4-吡啶基]乙醇(400.0 mg，1.3 mmol)、第三丁基二甲基氯矽烷(2.0 g，13.3 mmol)及三乙胺(3.0 g，29.7 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之混合物回流隔夜。將反應混合物濃縮，將殘餘物用矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯，2:1至1:1)純化，得到呈淡褐色固體狀之6-[4-[2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-3-吡啶基]-8-氯-異喹啉-3-胺(350 mg，62%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 415.2。步驟 5 ：(±)-反式-N-[6-[4-[2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-3-吡啶基]-8-氯-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
在0℃下將草醯氯(350 mg，2.8 mmol)滴加至反式-2-氰基環丙烷羧酸(200 mg，1.8 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之懸浮液中，且將混合物在0℃攪拌1小時。將混合物在室溫下濃縮以除去二氯甲烷及過量草醯氯。將殘餘物懸浮於二氯甲烷(1 mL)中，且在0℃下滴加至6-[4-[2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-3-吡啶基]-8-氯-異喹啉-3-胺(360 mg，0.87 mmol)、吡啶(5.1 mL，63.2 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之混合物中。將反應混合物在0℃下再攪拌0.5小時。反應混合物用二氯甲烷(100 mL)稀釋且用H2 O (50 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(石油醚/乙酸乙酯，1:1至1:2)純化，得到呈淡褐色固體狀之(±)-反式-N-[6-[4-[2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-3-吡啶基]-8-氯-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(350 mg，63%收率)。LCMS(ESI): [M+H]+ = 508.1。步驟 6 ：(±)-N-[6-[4-[2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-3-吡啶基]-3-[[反式-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯
將(±)-反式-N-[6-[4-[2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-3-吡啶基]-8-氯-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(330 mg，0.65 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.5 g，12.8 mmol)、Pd2 (dba)3 (120 mg，0.1300 mmol)、Brettphos (130 mg，0.24 mmol)及t-BuONa (170 mg，1.7 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在90℃在N2 下攪拌1小時。在真空中濃縮反應混合物。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚，1:1)純化，得到呈淡黃色油狀之(±)-N-[6-[4-[2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-3-吡啶基]-3-[[反式-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(220 mg，52%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 588.1。步驟 7 ：(±)-反式-N-[8-胺基-6-[4-(2-羥乙基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-N-[6-[4-[2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-3-吡啶基]-3-[[反式-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(200 mg，0.34 mmol)及TFA (10 mL，134.6 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之混合物在室溫下攪拌2小時。將反應物濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-[4-(2-羥乙基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(82 mg，65%收率)。LCMS(ESI): RT (min) = 1.409，[M+H]+ = 374.2，方法= G；1H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.26 (s, 1H), 8.47 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.49 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.70 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 3.70 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.94 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 2.70-2.61 (m, 1H), 2.17-2.06 (m, 1H), 1.66-1.49 (m, 2H)。 實例50： (1S,2S)-N-(8-胺基-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺(化合物66) 步驟 1 ：(1S,2S)-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺
將(1S,2S)-N-(6-溴-8-氯異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺(130 mg，0.381 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(148 mg，0.572 mmol)、乙酸鉀(112 mg，1.14 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (28.2 mg，0.038 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)中之混合物在微波中在130℃下加熱20分鐘，得到(8-氯-3-((1S,2S)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺基)異喹啉-6-基)硼酸。LCMS (ESI): [M+H]+ = 309.0。
將3-溴-4-乙基吡啶(106 mg，0.574 mmol)及水(0.5 ml, 30 mmol)添加至反應混合物中。將反應物在微波中在140℃下加熱2小時。將有機層用矽膠管柱層析術(0至7%甲醇於二氯甲烷中)純化，得到(1S,2S)-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺(120 mg，84.8%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 370.0。步驟 2 ：(6-(4-乙基吡啶-3-基)-3-((1S,2S)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯
將(1S,2S)-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺(120 mg，0.325 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(194 mg，1.622 mmol)、Pd2 (dba)3 (15 mg，0.016 mmol)、Brettphos (9.168 mg，0.016 mmol)及tBuONa (47 mg，0.0.487 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在Ar下在70℃攪拌5小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(0至8%甲醇於二氯甲烷中)純化，得到標題化合物(74 mg，50.6%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 451.0。步驟 3 ：(1S,2S)-N-(8-胺基-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺
將(6-(4-乙基吡啶-3-基)-3-((1S,2S)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(74 mg，0.164 mmol)於二氯甲烷(4 mL)及2,2,2-三氟乙酸(0.5 mL)中之混合物在25℃攪拌2小時。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈固體狀之(1S,2S)-N-(8-胺基-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺(9.3 mg，15.8%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 2.808，[M+H]+ = 351.1，方法= T。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.80 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.49 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.39 – 8.35 (m, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.38 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.53 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 6.34 (s, 2H), 5.04 – 4.81 (m, 1H), 2.62 (q,J = 7.6 Hz, 2H), 2.26 (dq,J = 14.1, 7.1 Hz, 1H), 1.73 – 1.59 (m, 1H), 1.17 (ddt,J = 13.1, 9.8, 6.7 Hz, 1H), 1.13 – 1.06 (m, 3H)。 實例51： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物67) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(150 mg，0.428 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(166 mg，0.642 mmol)、乙酸鉀(126 mg，1.28 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (31.6 mg，0.043 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)中之混合物在微波中在130℃下加熱45分鐘，得到(8-氯-3-((反式-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺基)異喹啉-6-基)硼酸。LCMS (ESI): [M+H]+ = 316.0。
隨後添加3-溴-4-乙基吡啶(143 mg，0.77 mmol)及水(2.14 ml，2.139 mmol)中之碳酸鈉(1 mol/L)。將反應混合物在微波中在80℃下加熱70分鐘。將有機層用矽膠管柱層析術(0至7%甲醇於二氯甲烷中)純化，得到(±)-反式-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(141 mg，87.4%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 377.0。步驟 2 ：(±)-(3-((反式-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺基)-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯
將(±)-反式-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(141 mg，0.374 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(224 mg，1.871 mmol)、Pd2 (dba)3 (34.2 mg，0.037 mmol)、Brettphos (21.14 mg，0.037 mmol)及tBuONa (71.9 mg，0.748 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在Ar下在120℃攪拌2小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(0至8%甲醇於二氯甲烷中)純化，得到標題化合物(150 mg，88%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 458.0。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺
將(±)-(3-((反式-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺基)-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(150 mg，0.327 mmol)於二氯甲烷(3 mL)及2,2,2-三氟乙酸(0.3 mL)中之混合物在25℃攪拌1.5小時。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈固體狀之反式-N-(8-胺基-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(16.8 mg，14.3%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 2.999，[M+H]+ = 358.1，方法= T。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.10 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 8.49 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.40 – 8.34 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.41 – 7.35 (m, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.55 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 6.38 (s, 2H), 2.80 – 2.72 (m, 1H), 2.61 (q,J = 7.5 Hz, 2H), 2.13 (ddd,J = 9.3, 6.1, 4.3 Hz, 1H), 1.59 (ddd,J = 8.6, 6.0, 4.4 Hz, 1H), 1.43 (ddd,J = 9.3, 5.9, 4.4 Hz, 1H), 1.09 (t,J = 7.6 Hz, 3H)。 實例52： (±)-順式-N-(8-胺基-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物68) 步驟 1 ：(±)-順式-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺
將(±)-順式-N-(6-溴-8-氯異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(125 mg，0.357 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(139 mg，0.535 mmol)、乙酸鉀(105 mg，1.07 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (26.4 mg，0.0357 mmol)於1,4-二噁烷(2 mL)中之混合物在微波中在130℃下加熱45分鐘，得到(8-氯-3-((順式-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺基)異喹啉-6-基)硼酸。LCMS (ESI): [M+H]+ = 316.0。
隨後添加3-溴-4-乙基吡啶(127 mg，0.685 mmol)及水(1.71 ml，1.71 mmol)中之碳酸鈉(1 M)。將反應混合物在微波中在80℃下加熱2小時。將有機層用矽膠管柱層析術(0至10%甲醇於二氯甲烷中)純化，得到(±)-(順式-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(81.5 mg，63.2 %收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 377.0。步驟 2 ：(±)-(3-((順式-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺基)-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯
將(±)-(順式-N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(81.5 mg，0.216 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(129 mg，1.08 mmol)、Pd2 (dba)3 (9.90 mg，0.0108 mmol)、Brettphos (6.11 mg，0.0108 mmol)及tBuONa (31.2 mg，0.324 mmol)於1,4-二噁烷(4.5 mL)中之混合物在Ar下在90℃攪拌2.5小時。用二氯甲烷(30 mL x 2)萃取混合物。將有機萃取物用水(20 mL)、鹽水(20 ml)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到標題化合物(96 mg，97.0%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 458.0。步驟 3 ：(±)-順式-N-(8-胺基-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺
將(±)-(3-((順式-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺基)-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(96 mg，0.210 mmol)於二氯甲烷(3 mL)及2,2,2-三氟乙酸(0.3 mL)中之混合物在25℃攪拌50分鐘。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈固體狀之(±)-(順式-N-(8-胺基-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(3.6 mg，4.5%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 2.745，[M+H]+ = 358.2，方法= T。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.06 (d,J = 20.0 Hz, 1H), 9.34 (s, 1H), 8.49 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.37 (d,J = 0.5 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.38 (dt,J = 9.0, 4.5 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.55 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 6.37 (s, 2H), 2.62 (dt,J = 15.0, 7.5 Hz, 3H), 2.30 – 2.22 (m, 1H), 1.51 – 1.40 (m, 2H), 1.09 (t,J = 7.6 Hz, 3H)。 實例53： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物69) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(125 mg，0.571 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(222 mg，0.856 mmol)、乙酸鉀(168 mg，1.711 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (42.2 mg，0.0571 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)中之混合物在微波中在130℃下加熱45分鐘，得到(±)-(8-氯-3-((反式-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺基)異喹啉-6-基)硼酸。LCMS (ESI): [M+H]+ = 316.0。
隨後添加5-溴-4-甲基吡啶甲腈(168 mg，0.856 mmol)及水(2.85 ml，2.852 mmol)中之碳酸鈉(1 mol/L)。將反應混合物在微波中在90℃下加熱55分鐘。將有機層用矽膠管柱層析術(0.5至9%甲醇於二氯甲烷中)純化，得到(±)-(反式-N-(8-氯-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(187 mg，86.5%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 388.0。步驟 2 ：(±)-(6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)-3-((反式-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯
將(±)-(反式-N-(8-氯-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(160 mg，0.413 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(247 mg，2.063 mmol)、Pd2 (dba)3 (37.8 mg，0.041 mmol)、Brettphos (23.3 mg，0.041 mmol)及tBuONa (59.5 mg，0.619 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar下在80℃攪拌1.5小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(0.5至8%甲醇於二氯甲烷中)純化，得到標題化合物(45 mg，23.3%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 469.0。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺
將(±)-(6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)-3-((反式-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(45 mg，0.096 mmol)及TFA (0.3 mL)於二氯甲烷(4 mL)中之混合物在25℃攪拌1.5小時。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈固體狀之(±)-反式-N-(8-胺基-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(16.5 mg，45.2%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 4.401，[M+H]+ = 369.1，方法= T。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.06 (d,J = 20.0 Hz, 1H), 9.34 (s, 1H), 8.49 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.37 (d,J = 0.5 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.38 (dt,J = 9.0, 4.5 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.55 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 6.37 (s, 2H), 2.62 (dt,J = 15.0, 7.5 Hz, 3H), 2.30 – 2.22 (m, 1H), 1.51 – 1.40 (m, 2H), 1.09 (t,J = 7.6 Hz, 3H)。 實例54： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物70) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(98 mg，0.279 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(109 mg，0.419 mmol)、乙酸鉀(82.3 mg，0.839 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (20.7 mg，0.028 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)中之混合物在微波中在130℃下加熱45分鐘，得到(±)-(8-氯-3-(反式-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺基)異喹啉-6-基)硼酸。LCMS (ESI): [M+H]+ = 316.0。
隨後添加7-溴-8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪(93.9 mg，0.419 mmol)及水(1.398 ml，1.398 mmol)中之碳酸鈉(1 M)。將反應混合物在微波中在90℃下加熱55分鐘。將有機層用矽膠管柱層析術(0.5至9%甲醇於二氯甲烷中)純化，得到(±)-反式-N-(8-氯-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(73 mg，55.3%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 415.0。步驟 2 ：(±)-(3-(反式-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺基)-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯
將(±)-反式-N-(8-氯-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(67 mg，0.0.1615 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(96.5 mg，0.807 mmol)、Pd2 (dba)3 (14.8 mg，0.016 mmol)、Brettphos (9.12 mg，0.016 mmol)及tBuONa (23.3 mg，0.242 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)中之混合物在Ar下在80℃攪拌1.5小時。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(0.5至8%甲醇於二氯甲烷中)純化，得到標題化合物(19 mg，23.7%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 496.0。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺
將(±)-(3-(反式-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺基)-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(19 mg，0.038 mmol)於二氯甲烷(4 mL)及TFA (0.3 mL)中之混合物在25℃攪拌1小時。將混合物濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，得到呈固體狀之(±)-反式-N-(8-胺基-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(4.2 mg，28%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 3.847，[M+H]+ = 396.1，方法= T。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.14 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 9.17 (t,J = 1.5 Hz, 1H), 9.14 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.71 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 6.47 (s, 2H), 2.82 – 2.73 (m, 4H), 2.14 (ddd,J = 9.3, 6.1, 4.3 Hz, 1H), 1.59 (ddd,J = 8.6, 6.0, 4.5 Hz, 1H), 1.43 (ddd,J = 9.2, 5.9, 4.4 Hz, 1H)。 實例55： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物109) 步驟 1 ：N-(2,4-二甲氧基苄基)-4-碘-5-甲基吡啶-2-胺
將2-氟-4-碘-5-甲基吡啶(1.0 g，4.2 mmol)、2,4-二甲氧基苄基胺(2.0 g，12.6 mmol)及DIEA (1.6 g，12.6 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在Ar氣下在110℃下加熱16 h。將反應物濃縮至乾燥。將粗產物藉由急驟層析術(Biotage，20 g管柱，PE/EA=5:1)純化，得到呈黃色固體狀之N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-碘-5-甲基-吡啶-2-胺(1.0 g，61%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 250.0。步驟 2 ：4-碘-5-甲基吡啶-2-胺
向N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-碘-5-甲基-吡啶-2-胺(1.0 g，2.6 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之混合物中添加2,2,2-三氟乙酸(5 mL)。隨後將混合物攪拌隔夜。隨後濃縮混合物。添加MeOH中之7N NH3 溶液以將混合物調整至pH 8，且將混合物濃縮。將粗產物藉由急驟層析術(PE/EA=2:1)純化，得到呈黃色固體狀之4-碘-5-甲基-吡啶-2-胺(590 mg，97%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 235.7。步驟 3 ：7-碘-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶
將4-碘-5-甲基-吡啶-2-胺(1.0 g，4.3 mmol)、氯乙醛(0.42 mL，6.41 mmol)及NaHCO3 (430 mg，5.13 mmol)於乙醇(4 mL)及水(1 mL)中之混合物加熱至100℃且攪拌隔夜。濃縮混合物。將殘餘物藉由急驟管柱層析術(DCM/MeOH = 20/1)純化，得到呈黃色固體狀之產物7-碘-6-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶(1.0 g，90%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 259.7。步驟 4 ：8-氯-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)異喹啉-3-胺
將7-碘-6-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶(150 mg，0.58 mmol)、8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)異喹啉-3-胺(442 mg，1.45 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (42 mg，0.06 mmol)、Na2 CO3 (183 mg，1.74 mmol)及水(1 mL)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液在N2 下加熱至65℃達3 h。添加水(10 mL)。將混合物用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。將有機層用水(20 mL x 3)、鹽水(20 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物藉由急驟層析術(DCM/MeOH=15:1)純化，得到呈黃色固體狀之8-氯-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)異喹啉-3-胺(180 mg，77%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 309.7。步驟 5 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
在0℃下向(±)-反式-2-氰基環丙烷羧酸(120 mg，1.08 mmol)於二氯甲烷(5 mL)及N,N-二甲基羧醯胺(0.02 mL)中之溶液中添加乙烷二醯二氯(274 mg，2.16 mmol)。將反應物在25℃攪拌2 h。將混合物濃縮，得到呈黃色油狀之粗產物(±)-反式-2-氰基環丙烷羰基氯(130 mg，1 mmol，93%收率)。向8-氯-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)異喹啉-3-胺(180 mg，0.58 mmol)於二氯甲烷(15mL)及吡啶(0.14 mL，1.75 mmol)中之溶液中添加(±)-反式-2-氰基環丙烷羰基氯(113 mg，0.87 mmol)。將混合物在25℃攪拌30 min。將混合物濃縮，且添加水(10 mL)。隨後添加1 N HCl以將混合物調整至pH 6。將混合物用DCM (10 mL x 3)萃取。將有機層用鹽水(20 mL x 1)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物藉由急驟層析術(PE/EA=2:1)純化，得到呈黃色固體狀之產物反式-N-[8-氯-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，85%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 402.7。步驟 6 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將Pd2 (dba)3 (45 mg，0.05 mmol)、xantphos (57 mg，0.1 mmol)、Cs2 CO3 (243 mg，0.75 mmol)、(±)-反式-N-[8-氯-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.25 mmol)及胺基甲酸第三丁酯(291 mg，2.49 mmol)於甲苯(0.5mL)及N,N-二甲基羧醯胺(0.5 mL)中之混合物在密封管中加熱至130℃達16 h。將反應混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物用PE及乙酸乙酯洗滌，得到粗產物。將粗產物藉由製備型HPLC (管柱Xbridge 21.2*250mm c18，10 μm，流動相A：水(10 mMol/LNH4 HCO3 ) B：ACN)純化，得到呈黃色固體狀之產物(±)-反式-N-[8-胺基-6-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(5 mg，5.3%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.646，[M+H]+ = 383.7。方法= C；1 H NMR(400 MHz, CD3 OD) δ 9.26 (s,1H), 8.37 (s,1H), 8.30 (s,1H), 7.82 (s,1H), 7.59 (s,1H), 7.45 (s,1H), 7.04 (s,1H), 6.74 (s,1H), 2.66-2.64 (m,1H), 2.27 (s,3H), 2.15-2.10 (m,1H), 1.61-1.57 (m,2H)。 實例56： 5-(8-胺基-3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-N,1-二甲基-1H-吡唑-3-羧醯胺(化合物110) 步驟 1 ：5-溴-N,1-二甲基-1H-吡唑-3-羧醯胺
將5-溴-1-甲基-吡唑-3-羧酸乙酯(300 mg，1.29 mmol)及甲胺於MeOH (10 mL，12.87 mmol)中之混合物加熱至80℃且攪拌隔夜。將反應溶液濃縮，得到呈無色油狀之產物5-溴-N,1-二甲基-吡唑-3-羧醯胺(280 mg，99%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 218.2步驟 2 ：5-(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)-N,1-二甲基-1H-吡唑-3-羧醯胺
向密封管中添加5-溴-N,1-二甲基-吡唑-3-羧醯胺(200 mg，0.92 mmol)、8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)異喹啉-3-胺(698 mg，2.29 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (67 mg，0.09 mmol)、K3 PO4 (193 mg，0.92 mmol)及NaOAc (225 mg，2.75 mmol)、乙腈(5 mL)、水(1 mL)。將混合物用N2 鼓泡2 min，且在90℃攪拌3 h。將混合物濃縮。將粗產物藉由急驟層析術(DCM/MeOH=15:1)純化，得到呈黃色固體狀之5-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-N,1-二甲基-吡唑-3-羧醯胺(290 mg，81%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 316.7。步驟 3 ：(±)-5-(8-氯-3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-N,1-二甲基-1H-吡唑-3-羧醯胺
在0℃下向反式-2-氰基環丙烷羧酸(250 mg，2.25 mmol)於二氯甲烷(5mL)及N,N-二甲基羧醯胺(0.02 mL)中之溶液中添加乙烷二醯二氯(571 mg，4.5 mmol)。將反應物在25℃攪拌2 h。將混合物藉由旋轉蒸發濃縮，得到呈黃色油狀之粗品(±)-反式-2-氰基環丙烷羰基氯(290 mg，99%收率)。向5-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-N,1-二甲基-吡唑-3-羧醯胺(230 mg，0.73 mmol)於二氯甲烷(15 mL)及吡啶(0.18 mL，2.19 mmol)中之溶液中添加(±)-反式-2-氰基環丙烷羰基氯(141 mg，1.09 mmol)。將混合物在25℃攪拌30 min。將混合物濃縮且添加水(10 mL)。添加1 N HCl以將混合物調整至pH 6。將混合物用DCM (10 mL x 3)萃取。將有機層用鹽水(20 mL x 1)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物藉由急驟層析術(DCM/MeOH=15:1)純化，得到呈黃色固體狀之產物(±)-5-[8-氯-3-[[反式-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-N,1-二甲基-吡唑-3-羧醯胺(280 mg，94%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 409.7。步驟 4 ：5-(8-胺基-3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-N,1-二甲基-1H-吡唑-3-羧醯胺
將Pd2 dba3 (44 mg，0.05 mmol)、xantphos (56 mg，0.1 mmol)、Cs2 CO3 (239 mg，0.73 mmol)、5-[8-氯-3-[[反式-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-N,1-二甲基-吡唑-3-羧醯胺(100 mg，0.24 mmol)及胺基甲酸第三丁酯(286 mg，2.45mmol)於甲苯(0.5 mL)及N,N-二甲基羧醯胺(0.5 mL)中之混合物在密封管中加熱至130℃達16 h。將反應混合物冷卻至室溫，用EA稀釋，用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物用PE及乙酸乙酯洗滌，得到粗產物，其藉由製備型HPLC (管柱Xbridge 21.2*250mm c18，10 μm，流動相A：水(10 mMol/L NH4 HCO3 ) B：CAN純化，得到呈黃色固體狀之產物(±)-5-[8-胺基-3-[[反式-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-N,1-二甲基-吡唑-3-羧醯胺(17 mg，17.8%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.543，[M+H]+ = 390.7。方法= C；1 H NMR(400MHz, CD3 OD) δ 9.25 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.15 (s,1H), 6.84 (s,1H), 6.80 (d,J =1.2 Hz,1H), 3.99 (s, 3H), 2.93 (s, 3H), 2.65-2.62 (m, 1H), 2.15-2.10 (m, 1H), 1.62-1.48 (m, 2H)。 實例57： (±)-反式-N-[8-胺基-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物113) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(300 mg，0.68 mmol)、Pd(PPh3 )4 (75 mg，0.06 mmol)及Zn(CN)2 (44 mg，0.38 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(14 mL)中之混合物在130℃攪拌3 h。將混合物藉由製備型逆相HPLC (C-18，乙腈/水+ 0.05% NH4 HCO3 )純化,，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(190 mg，24%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 388.1。步驟 2 ：(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(190 mg，0.16 mmol)、Pd2 (dba)3 (28 mg，0.03 mmol)、Xantphos (37 mg，0.06 mmol)、Cs2 CO3 (107 mg，0.33 mmol)及二苯甲酮亞胺(100 mg，0.55 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(7 mL)及甲苯(7 mL)中之混合物在130℃在Ar下攪拌2.5 h。添加EtOAc (200 mL)。將混合物用H2 O (3 x 50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，用Na2 SO4 乾燥，過濾且在減壓下蒸發。將殘餘物藉由製備型逆相HPLC (C-18，乙腈/水+ 0.05% NH4 HCO3 )純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(36 mg，17%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 533.3。步驟 3 ：(±)-反式-N-[8-胺基-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(36 mg，0.04 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)於乙腈(10 mL)及水(10 mL)中之混合物在25℃攪拌2 h。將反應混合物用NH4 OH (水性，37%)中和至pH = 7至8。將混合物濃縮且藉由製備型逆相HPLC (C-18，乙腈/水+ 0.05% NH4 HCO3 )純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(11 mg，72%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.593，[M+H]+ = 369.1，方法= G。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.33 (s, 1H), 9.57 (s, 1H), 8.52 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.44 (s, 2H), 7.40 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 2.78-2.75 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 2.19-2.14 (m, 1H), 1.64-1.60 (m, 1H), 1.46-1.42 (m, 1H)。 實例58： 反式-N-[8-胺基-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物115) 步驟 1 ：7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺
將7-溴-8-氯-6-碘-異喹啉-3-胺(3.6 g，9.39 mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(2.5 g，11.41 mmol)、Pd(PPh3 )4 (750 mg，0.65 mmol)、K2 CO3 (3.8 g，27.54 mmol)於1,4-二噁烷(160 mL)、水(40 mL)中之混合物在70℃在Ar下攪拌23 h。將反應混合物冷卻至室溫，添加乙酸乙酯(500 mL)，且將混合物用鹽水(100 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物用矽膠管柱層析術(PE : EA = 1 : 2至EA，Rf = 0.5，在PE/EA 1/2時)純化，得到呈黃色固體狀之7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(2.9 g，89%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 348.0。 步驟2：(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
在0℃下將(COCl)2 (3.0 g，23.62 mmol)滴加至(±)-反式-2-氰基環丙烷羧酸(1.2 g，10.8 mmol)中，且將混合物在0℃下再攪拌1 h。將混合物在室溫下蒸發以除去未反應之(COCl)2 。將殘餘物懸浮於DCM (5 mL)中，且在0℃下滴加至7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(2.9 g，8.32 mmol)及吡啶(10 mL，123.64 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之混合物中。將反應混合物在0℃下再攪拌0.5 h。向反應混合物中添加DCM (100 mL)，且將其用H2 O (50 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物用矽膠管柱層析術(PE : EA = 1 : 1至1 : 2，Rf = 0.4，在PE/EA 1/1時)純化，得到呈淡褐色固體狀之(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(2.85 g，78%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 441.0。步驟 3 ：(±)-反式-N-[8-氯-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.45 mmol)、三甲基硼氧六環(250 mg，1.99 mmol)、PdCl2 dppf (60 mg，0.08 mmol)及K2 CO3 (200 mg，1.45 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)及水(2.5 mL)中之混合物在密封管中在80℃在Ar下攪拌18 h。將反應混合物冷卻至室溫，添加乙酸乙酯(100 mL)且用鹽水(30 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物用矽膠管柱層析術(PE : EA = 2 : 1至3 : 2至1 : 1)純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(50 mg，29%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 377.1。步驟 4 ：(±)-N-[3-[(反式-2-氰基環丙烷羰基)胺基]-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯
將(±)-反式-N-[8-氯-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(25 mg，0.07 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(75 mg，0.64 mmol)、Pd2 dba3 (20 mg，0.02 mmol)、Brettphos (20 mg，0.04 mmol)及t-BuONa (2 M於THF中，0.08 mL，0.16 mmol)於1,4-二噁烷(2 mL)中之混合物在90℃在Ar下攪拌2 h。將反應混合物冷卻至室溫。向殘餘物中添加乙酸乙酯(30 mL)，且將其用飽和NH4 Cl (10 mL)洗滌。將乙酸乙酯層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物用製備型TLC (EA : PE = 3 : 2)純化，得到呈白色固體狀之(±)-N-[3-[(反式-2-氰基環丙烷羰基)胺基]-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(7 mg，23.1%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 458.2。步驟 5 ：(±)-反式-N-[8-胺基-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-N-[3-[(反式-2-氰基環丙烷羰基)胺基]-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(7 mg，0.02 mmol)於2,2,2-三氟乙酸(0.5 mL)及二氯甲烷(2 mL)中之混合物在25℃攪拌2 h。將反應混合物蒸發。將殘餘物溶於MeOH (1 mL)中，添加7 N NH3 /MeOH直至pH 9至10，且隨後藉由急驟管柱層析術(C18，NH4 HCO3 / MeOH/ H2 O)純化，得到呈淡褐色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-7-甲基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(3 mg，54.9%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.70，[M+H]+ = 358.1，方法= C；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.31 (s, 1H), 8.45 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.42 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 2.66-2.62 (m, 1H), 2.16 (s, 3H), 2.13-2.08 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.61-1.52 (m, 2H)。 實例59： (±)-反式-N-[8-胺基-6-[4-(二甲基胺基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物116) 步驟 1 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-(二甲基胺基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
向[8-氯-3-[(反式-2-氰基環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]硼酸及(±)-反式-N-[8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(5 mL，約0.43 mmol)之反應混合物中添加3-溴-N,N-二甲基-吡啶-4-胺(150 mg，0.75 mmol)、PdCl2 dppf (50 mg，0.07 mmol)、K2 CO3 (150 mg，1.09 mmol)及水(1.5 mL)。隨後將反應物在80℃在Ar下攪拌1 h。將反應混合物冷卻至室溫，添加乙酸乙酯(40 mL)，且用鹽水(15 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物用矽膠管柱層析術(PE : DCM : EA = 1:1:1至1:1:0)純化，得到呈褐色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-(二甲基胺基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(80 mg，48%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 392.1。步驟 2 ：(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-[4-(二甲基胺基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-(二甲基胺基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(80 mg，0.20 mmol)、二苯甲酮亞胺(210 mg，1.16 mmol)、Pd2 dba3 (40 mg，0.04 mmol)、Xantphos (50 mg，0.09 mmol)及Cs2 CO3 (120 mg，0.37 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(2 mL)及甲苯(2 mL)中之混合物在130℃在Ar下攪拌4 h。將反應混合物冷卻至室溫，且添加乙酸乙酯(50 mL)。將混合物用鹽水(15 mL)洗滌。將乙酸乙酯層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物用矽膠層析術(PE : EA = 1:1至1:3)純化，得到呈褐色固體狀之(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-[4-(二甲基胺基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(45 mg，41%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 537.2。步驟 3 ：(±)-反式-N-[8-胺基-6-[4-(二甲基胺基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-[4-(二甲基胺基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(45 mg，0.08 mmol)於2,2,2-三氟乙酸(1 mL)、二氯甲烷(2 mL)及水(0.5 mL)中之混合物在25℃攪拌20 min。將殘餘物溶於MeOH (1 mL)中。向混合物中添加7 N NH3 /MeOH直至pH 9至10。隨後濃縮混合物。將殘餘物用製備型TLC (EA : MeOH = 20:1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-[4-(二甲基胺基)-3-吡啶基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(18.8 mg，60%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.64，[M+H]+ = 373.2，方法= C；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.21 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.17 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.93 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.80 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 2.77 (s, 6H), 2.65-2.62 (m, 1H), 2.14-2.09 (m, 1H), 1.62-1.52 (m, 2H)。 實例60： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(1-甲基-4-側氧基-1,4-二氫吡啶-2-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物117) 步驟 1 ：2-(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)-1-甲基吡啶-4(1H)-酮
向密封管中添加(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)硼酸(371 mg，1.67 mmol)、2-氯-1-甲基-吡啶-4-酮(200 mg，1.39 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (101 mg，0.14mmol)、K3 PO4 (293 mg，1.39 mmol)、NaOAc (342 mg，4.18 mmol)、乙腈(20 mL)及水(2 mL)。將混合物用N2 鼓泡2 min且在90℃攪拌3 h。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (DCM/MeOH=20/1)純化，得到呈黃色固體狀之2-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-1-甲基-吡啶-4-酮(220 mg，55%收率)。LCMS (ESI): [M-56]+ =286.0。步驟 2 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(1-甲基-4-側氧基-1,4-二氫吡啶-2-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向2-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-1-甲基-吡啶-4-酮(210 mg，0.74 mmol)及吡啶(0.18 mL，2.2 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之溶液中添加(±)-反式-2-氰基環丙烷羰基氯(238 mg，1.84 mmol)。將混合物在25℃攪拌30 min。隨後將混合物濃縮且藉由急驟層析術(PE/EA=2:1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-甲基-4-側氧基-2-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(160 mg，40%收率)。LCMS (ESI): [M-56]+ =379.1。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(1-甲基-4-側氧基-1,4-二氫吡啶-2-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-甲基-4-側氧基-2-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(70 mg，0.18 mmol)、xantphos (42 mg，0.07 mmol)、Pd2 dba3 (33 mg，0.04 mmol)及Cs2 CO3 (180 mg，0.55 mmol)於DMF (3 mL)及甲苯(3 mL)中之混合物加熱至130℃達2 h。將混合物濃縮且藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(1-甲基-4-側氧基-2-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(11.4 mg，17%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.310，[M+H]+ = 360.1，方法= G；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.15 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.74 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.54-6.51 (m, 3H), 6.14 (dd,J = 2.8, 7.6 Hz, 1H), 6.02 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 3.41 (s, 3H), 2.77-2.73 (m, 1H), 2.17-2.12(m, 1H), 1.62-1.57 (m, 1H), 1.45-1.41 (m, 1H)。 實例61： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(3-(羥甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物118) 步驟 1 ：4-溴-3-(乙氧基甲基)-5-甲基-1H-吡唑
將5-甲基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(4.0 g，25.95 mmol)及NBS (5.08 g，28.54 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(15 mL)中之混合物在室溫下攪拌16 h。將混合物吸收於EtOAc (200 mL)中，且將有機物用飽和鹽水溶液洗滌。隨後將有機物分離，且乾燥(Na2 SO4 )，之後濃縮至乾燥。隨後將粗品藉由急驟管柱層析術(PE/EA=3/2)純化，得到呈白色固體狀之4-溴-5-甲基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(4.8 g，79%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 234.9。步驟 2 ：4-溴-3-(乙氧基甲基)-5-甲基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑
向經攪拌之TsOH-H2 O (490 mg，2.57 mmol)及4-溴-5-甲基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(3.0 g，12.87 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加3,4-二氫-2h-吡喃(2.17 g，25.74 mmol)。將混合物在室溫下攪拌4 h。將混合物濃縮且藉由急驟管柱層析術(PE/EA=4/1)純化，得到產物呈黃色油狀之4-溴-5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-3-羧酸乙酯(3.4 g，83%收率)。1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 5.52 (dd,J =2.8, 9.6 Hz, 1H), 4.38 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 4.01-3.96 (m, 1H), 3.77-3.71 (m, 1H), 2.42-2.35 (m, 4H), 2.14-2.10 (m, 1H), 1.99-1.94 (m, 1H), 1.82-1.62 (m, 3H), 1.40 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。步驟 3 ：8-氯-6-(3-(乙氧基甲基)-5-甲基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-胺
向密封管中添加(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)硼酸(252 mg，1.14 mmol)、4-溴-5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-3-羧酸乙酯(300 mg，0.95 mmol)、Pd(dppf)2 Cl2 (69 mg，0.09 mmol)、K3 PO4 (199 mg，0.95 mmol)、NaOAc (232 mg，2.84 mmol)、乙腈(5 mL)及水(0.5 mL)。將混合物用N2 鼓泡20 min且在90℃攪拌3 h。將反應物濃縮且藉由製備型TLC (PE/EA=1:1)純化，得到呈黃色固體狀之4-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-3-羧酸乙酯(320 mg，75%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 415.1。步驟 4 ：(4-(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)-5-甲基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)甲醇
在0℃下向4-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-3-羧酸乙酯(310 mg，0.75 mmol)於甲醇(15 mL)中之混合物中添加NaBH4 (282 mg，7.47 mmol)。將混合物在室溫下攪拌5 h，且添加水(2 mL)以淬滅反應。將混合物濃縮，且添加DCM:MeOH之溶液(10:1，10 mL)。將混合物過濾，且將濾液濃縮且藉由製備型TLC (100%EA)純化，得到呈黃色固體狀之[4-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-3-基]甲醇(300 mg，75%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 373.1。步驟 5 ：6-(3-((第三丁基二甲基矽基氧基)甲基)-5-甲基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)-8-氯異喹啉-3-胺
將[4-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-3-基]甲醇(300 mg，0.56 mmol)、第三丁基二甲基氯矽烷(849 mg，5.64 mmol)及TEA (1267 mg，12.55 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之混合物回流隔夜。將混合物濃縮且藉由製備型TLC (PE/EA=2/1)純化，得到呈黃色油狀之6-[3-[[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基]-8-氯-異喹啉-3-胺(210 mg，72%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 488.2。步驟 6 ：反式-N-(6-(3-((第三丁基二甲基矽基氧基)甲基)-5-甲基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)-8-氯異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向6-[3-[[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基]-8-氯-異喹啉-3-胺(200 mg，0.41 mmol)於二氯甲烷(15 mL)及吡啶(0.3 mL)中之溶液中添加(±)-反式-2-氰基環丙烷羰基氯(132 mg，1.03 mmol)。將混合物在25℃攪拌30 min。將混合物濃縮且藉由製備型TLC( PE/EA=3:1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[6-[3-[[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基]-8-氯-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(150 mg，60%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 580.3。步驟 7 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(3-((第三丁基二甲基矽基氧基)甲基)-5-甲基-1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[6-[3-[[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基]-8-氯-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(140 mg，0.24 mmol)、xantphos (55 mg，0.10 mmol)、Pd2 dba3 (44 mg，0.05 mmol)及Cs2 CO3 (235 mg，0.72 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(1.5 mL)/甲苯(1.5 mL)中之混合物在145℃下加熱3 h。將混合物濃縮且不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI): [M+H]+ = 561.3。步驟 8 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(3-(羥甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-反式-N-[8-胺基-6-[3-[[第三丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(60 mg，0.11 mmol)、二氯甲烷(5 mL)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)，且將混合物在室溫下攪拌2 h。將混合物濃縮且藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-[3-(羥甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(9 mg，23%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.268，[M+H]+ = 363.1，方法= A；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.19 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 4.63 (s, 2H), 2.67-2.62 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.14-2.09 (m, 1H), 1.61-1.53 (m, 2H)。 實例62： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(羥甲基)環丙烷羧醯胺(化合物119) 步驟 1 ：(±)-反式-2-(羥甲基)環丙烷羧酸
向小瓶中添加(±)-反式-2-(羥甲基)環丙烷羧酸甲酯(500 mg，3.84 mmol)、水(5 mL)、四氫呋喃(5 mL)、甲醇(5 mL)及NaOH (700 mg，17.5 mmol)，且將混合物在40℃攪拌2小時。將混合物濃縮且用2 N HCl酸化至pH=3至4。將產物用乙酸乙酯(50 mL x 2)萃取，用鹽水(20 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈淺黃色油狀之(±)-反式-2-(羥甲基)環丙烷羧酸(390 mg，87%收率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ: 3.40 (dd,J = 5.2, 11.6 Hz, 1H), 3.22 (dd,J = 5.6, 11.6 Hz, 1H), 1.41-1.35 (m, 2H), 0.91-0.85 (m, 1H), 0.75-0.70 (m, 1H)。步驟 2 ：(±)-反式-2-(乙醯氧基甲基)環丙烷羧酸
向小瓶中添加(±)-反式-2-(羥甲基)環丙烷羧酸(390 mg，3.36 mmol)、二氯甲烷(10 mL)及乙醯氯(1 mL，14.14 mmol)，且將混合物在40℃攪拌2小時。將混合物在真空中濃縮，得到呈淺黃色油狀之(±)-反式-2-(乙醯氧基甲基)環丙烷羧酸(530 mg，90%收率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ: 12.20 (s, 1H), 3.99 (dd,J = 6.0, 11.6 Hz, 1H), 3.83 (dd,J = 7.2, 11.6 Hz, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.59-1.50 (m, 2H), 1.04-0.99 (m, 1H), 0.92-0.87 (m, 1H)。步驟 3 ：(±)-反式-2-(氯羰基)環丙基)甲基乙酸酯
向小瓶中添加(±)-反式-2-(乙醯氧基甲基)環丙烷羧酸(530 mg，3.02 mmol)及DCM (30 mL)，且將其冷卻至0℃。滴加草醯二氯(0.5 mL，6.03 mmol)，且隨後滴加N,N-二甲基羧醯胺(0.01 mL，0.13 mmol)。將混合物在20℃攪拌2小時。將反應混合物在真空中濃縮，得到粗產物，將其直接用於下一步驟中。步驟 4 ：(±)-反式-2-(8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺甲醯基)環丙基)甲基乙酸酯
向小瓶中添加8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(200 mg，0.74 mmol)、TEA (0.8 mL，5.69 mmol)及DCM (5 mL)，且隨後滴加(±)-反式-2-氯羰基環丙基)甲基乙酸酯(650 mg，2.94 mmol)於DCM (5 mL)中之溶液。將混合物在室溫下攪拌2小時。將混合物濃縮且藉由急驟管柱層析術(PE/EA，1:1至0:100)純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-[2-[[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺甲醯基]環丙基]甲基乙酸酯(220 mg，72%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 410.1。步驟 5 ：(±)-反式-N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(羥甲基)環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-[反式-2-[[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺甲醯基]環丙基]甲基乙酸酯(210 mg，0.51 mmol)、Xantphos (150 mg，0.2600mmol)、Pd2 (dba)3 (150 mg，0.16 mmol)、Cs2 CO3 (500 mg，1.54 mmol)、二苯甲酮亞胺(600 mg，3.31 mmol)及N,N-二甲基羧醯胺(10 mL)。將混合物用N2 鼓泡2 min，且隨後在130℃攪拌4小時。將混合物在100℃下濃縮以除去所有有機溶劑。添加甲醇(20 mL)，且將反應物在50℃攪拌1小時。隨後將混合物過濾且在真空中濃縮。將殘餘物藉由管柱層析術(PE/EA，1:1至0:100)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-二苯亞甲基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-(羥甲基)環丙烷羧醯胺(151 mg，50%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 513.3。步驟 6 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(羥甲基)環丙烷羧醯胺
向小瓶中添加(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-(羥甲基)環丙烷羧醯胺(150 mg，0.25 mmol)及2 N HCl (5 mL，10 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2 h。隨後用水性NaHCO3 將混合物之pH調整至pH 7。隨後將產物用DCM/MeOH=10:1 (100 mLx2)萃取。將有機萃取物在真空中濃縮且藉由(DCM/MEOH，30:1至15:1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-(羥甲基)環丙烷羧醯胺(74 mg，82%收率)。將單一鏡像異構物藉由掌性SFC來進一步分離。外消旋物之LCMS (ESI)：RT (min) = 1.302，[M+H]+ = 349.2，方法= B；外消旋物之1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.24 (s, 1H), 8.40 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.39 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.67 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 3.64 (dd,J = 6.0, 11.2 Hz, 1H), 3.48 (dd,J = 6.8, 11.2 Hz, 1H), 2.37 (s, 3H), 1.92-1.85 (m, 1H), 1.77-1.66 (m, 1H), 1.28-1.21 (m, 1H), 0.97-0.90 (m, 1H)。 實例63： (±)-反式-N-[8-胺基-6-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物122) 步驟 1 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(350 mg，1 mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑(300 mg，1.14 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (70 mg，0.1 mmol)、磷酸鉀(3 H2 O) (660 mg，2.48 mmol)於1,4-二噁烷(9 mL)及水(1.5 mL)中之混合物在100℃攪拌3 h。將反應物濃縮至乾燥。隨後將粗殘餘物藉由矽膠管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚1/13-1/1)純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(230 mg，51%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =406.1。步驟 2 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-[1-四氫吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.49 mmol)及3,4-二氫-2h-吡喃(2.0 mL)於三氟乙酸(0.5 mL)及二氯甲烷(15 mL)中之溶液加熱回流隔夜。將反應物濃縮至乾燥，且隨後將粗殘餘物藉由管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚1/5 -1/3)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-[1-四氫吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(230 mg，95%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =490.1。 步驟3：(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-[1-四氫吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-[1-四氫吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.2 mmol)、二苯甲酮亞胺(182 mg，1.0 mmol)、Xantphos (58 mg，0.1 mmol)、Pd2 (dba)3 (46.0 mg，0.05 mmol)及Cs2 CO3 (170.0 mg，0.52 mmol)於無水N,N-二甲基羧醯胺(3.0 mL)及無水甲苯(3.0 mL)中之混合物在130℃在惰性氣氛下攪拌4 h。將反應物濃縮以除去甲苯，且將殘餘物吸收於乙酸乙酯(15 ml)中。將有機混合物用20 mL鹽水洗滌。隨後將有機物分離，乾燥(Na2 SO4 )且濃縮至乾燥。隨後將粗產物藉由管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚，1/3-1/1)純化，得到呈黃色液體狀之(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-[1-四氫吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，57%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =635.2。步驟 4 ：(±)-反式-N-[8-胺基-6-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-[1-四氫吡喃-2-基-3-(三氟甲基)吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.11 mmol)於甲醇(2 mL)及4 M HCl (2 mL，8 mmol)中之溶液在室溫下攪拌1 h。添加過量碳酸氫鈉。隨後將混合物過濾。將濾液濃縮且藉由逆相層析術(甲醇60%/0.1% HCl於水中)純化，得到呈紅色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-[3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(8 mg，18.2%收率) (HCl鹽)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 387.1，RT (min) = 1.69，方法= B；1 H NMR (400 MHz,CD3 OD) δ 9.27 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 8.04 (s, 1H),7.19 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 2.63-2.61 (m, 1H), 2.20-2.15(m, 1H), 1.65-1.59(m, 2H)。 實例64： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物123) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]硼酸(400 mg，1.27 mmol)、7-溴-8-甲基-吡啶并[2,3-b]吡嗪(285 mg，1.27 mmol)、PdCl2 dppf (93 mg，0.13 mmol)及K2 CO3 (525 mg，3.8 mmol)於1,4-二噁烷(8 mL)及水(2 mL)中之混合物在Ar下在100℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(PE:EA=2:1至PE:EA=1:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(300 mg，38%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 415.2。步驟 2 ：(±)-3-((反式)-2-氰基環丙烷羧醯胺基)-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(290 mg，0.7 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(245 mg，2.09 mmol)、Pd3 (dba)2 (64 mg，0.07 mmol)、Brettphos (38 mg，0.07 mmol)及Cs2 CO3 (684 mg，2.1 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar氣下在90℃下加熱2 h。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(PE:EA=1:1至PE:EA=1:2)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(190 mg，49%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 496.3。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-N-[3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-(8-甲基吡啶并[2,3-b]吡嗪-7-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(190 mg，0.38 mmol)及TFA (1 mL，0.38 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之混合物在室溫下在N2 氣下攪拌。將反應物濃縮至乾燥，且將殘餘物吸收於EtOAc (10 mL)中，且用飽和NaHCO3 將pH調整至7至8。隨後將有機物分離，乾燥(NaSO4 )，且濃縮至乾燥。將殘餘物用矽膠管柱層析術(EA:PE=1:1至EA:DCM=2:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(49.5 mg，32%收率)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.65，[M+H]+ = 396.2，方法= B。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 )δ 11.15 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 9.17 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 9.13 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.48 (s, 2H), 2.79-2.75 (m,3H), 2.15 -2.11 (m, 1H), 1.61 -1.59 (m, 1H), 1.44- 1.42 (m, 1H)。 實例65： (反式)-N-(8-胺基-6-((R)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物124) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-((R)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(400 mg，1.14 mmol)、(4R)-4-甲基噁唑啶-2-酮(140 mg，1.38 mmol)、Pd3 (dba)2 (105 mg，0.11 mmol)、Xantphos (66 mg，0.11 mmol)及K3 PO4 (726 mg，3.42 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(PE:EA=2:1至PE:EA=1:1)純化，最終得到呈黃色固體狀之標題化合物(350 mg，83%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 371.1。步驟 2 ：3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)-6-((R)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將反式-N-[8-氯-6-[(4R)-4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(340 mg，0.92 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(500 mg，4.27 mmol)、Pd3 (dba)2 (84 mg，0.09 mmol)、Brettphos (50 mg，0.09 mmol)及Cs2 CO3 (897 mg，2.75 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物用矽膠管柱層析術(PE:EA=2:1至PE:EA=1:1)純化，最終得到呈黃色固體狀之標題化合物(240 mg，58%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 452.2。步驟 3 ：(反式)-N-(8-胺基-6-((R)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將N-[3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-[(4R)-4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(240 mg，0.53 mmol)及TFA (1 mL，0.53 mmol)於二氯甲烷(4 mL)中之混合物在室溫下在Ar氣下攪拌2 h。將反應物濃縮至乾燥，且將殘餘物吸收於EtOAc (10 ml)中，且用飽和NaHCO3 將pH調整至7至8。隨後將有機物分離，乾燥(Na2 SO4 )且濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(EA:PE = 1:1至EA:DCM = 2:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題產物。LCMS (ESI): RT(min) = 1.56，[M+H]+ = 352.2，方法= B。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 )δ 11.04 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.00 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.94 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.35 (s, 2H), 4.70 -4.67 (m, 1H), 4.57-4.53 (m, 1H), 4.06- 4.03 (m, 1H), 2.75-2.73 (m, 1H), 2.14 -2.10 (m, 1H), 1.60 -1.58 (m, 1H), 1.42-1.38 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.0 Hz, 3H)。 實例66： (1S,2S)-N-(8-胺基-6-(2-甲基-5-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物125) 步驟 1 ：(1S,2S)-N-(8-氯-6-(2-甲基-5-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將5-甲基-2-吡咯啶酮(87 mg，0.88 mmol)、(1S,2S)-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(250 mg，0.73 mmol)、Xantphos (43 mg，0.07 mmol)、Pd2 (dba)3 (67 mg，0.07 mmol)及K3 PO4 (462 mg，2.18 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(EA:PE=1:1至EA:DCM=2:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(200 mg，76%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 362.1。步驟 2 ：3-((1S,2S)-2-氟環丙烷羧醯胺基)-6-(2-甲基-5-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將(1S,2S)-N-[8-氯-6-(2-甲基-5-側氧基-吡咯啶-1-基)-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(170 mg，0.47 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(550 mg，4.69 mmol)、Brettphos (53 mg，0.1 mmol)、Pd2 (dba)3 (86 mg，0.09 mmol)及Cs2 CO3 (460 mg，1.41 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物用矽膠管柱層析術(PE:EA=1:1至PE:EA = 1:2)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(140 mg，59%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 443.2步驟 3 ：(1S,2S)-N-(8-胺基-6-(2-甲基-5-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將N-[3-[[(1S,2S)-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-(2-甲基-5-側氧基-吡咯啶-1-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(140 mg，0.32 mmol)及TFA (0.5 mL，0.32 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物吸收於EtOAc (10 mL)中，且用飽和NaHCO3 將pH調整至7至8。將溶液濃縮且藉由矽膠層析術(PE:EA=1:1至EA)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(78.2 mg，72%收率)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.52，[M+H]+ = 343.1，方法= B。1 HNMR (400 MHz, CD3 OD)δ 9.14 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 4.98 (d,J = 3.6Hz, 0.5H), 4.82-4.81 (m, 0.5H), 4.51 (d,J = 6.4Hz, 1H), 2.72- 2.61 (m, 1H), 2.59- 2.53 (m, 1H), 2.48- 2.41 (m, 1H), 2.16-2.14 (m, 1H), 1.88 -1.78 (m, 2H), 1.28-1.21 (m, 4H)。 實例67： (±)-反式-N-(8-胺基-7-氟-6-((R)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物126) 步驟 1 ：反式-N-(8-氯-7-氟-6-((R)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將反式-N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(330 mg，0.79 mmol)、(4R)-4-甲基噁唑啶-2-酮(160 mg，1.58 mmol)、CuI (151 mg，0.79 mmol)及N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(71 mg，0.81 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥，且藉由矽膠管柱層析術(PE:EA=2:1至PE:EA = 2:1)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物(290 mg，77%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 345.0。步驟 2 ：3-((反式)-2-氰基環丙烷羧醯胺基)-7-氟-6-((R)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將胺基甲酸第三丁酯(693 mg，5.92 mmol)、反式-N-[8-氯-7-氟-6-[(4R)-4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(230 mg，0.59 mmol)、Pd2 (dba)3 (270 mg，0.3 mmol)、Brettphos (158 mg，0.29 mmol)及Cs2 CO3 (576 mg，1.77 mmol)於1,4-二噁烷(8 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥，且藉由矽膠管柱層析術(PE:EA=2:1至PE:EA = 1: 2)純化，接著藉由製備型HPLC(溶離劑：5%至95%甲醇及0.8 g/L NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物(55 mg，14%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 470.2。步驟 3 ：(反式)-N-(8-胺基-7-氟-6-((R)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將N-[3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-[(4R)-4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(55 mg，0.12 mmol)及TFA (0.5 mL，0.12 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。將反應混合物用製備型HPLC (5至95%甲醇及0.8 g/L NH4 HCO3 於水中)純化，得到標題化合物(30.6 mg，13.7%收率)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.65，[M+H]+ = 370.2，方法= B。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 )δ 11.14 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.05 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 6.37 (s, 2H), 4.67 (t,J = 8.4Hz, 1H), 4.54-4.52 (m, 1H), 4.06 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 2.77-2.76 (m, 1H), 2.14-2.12 (m, 1H), 1.60-1.56 (m, 1H), 1.44-1.42 (m, 1H), 1.15 (d,J = 6.0 Hz, 3H)。 實例68： (±)-反式-N-(8-胺基-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物127) 步驟 1 ：反式-N-(8-氯-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(250 mg，0.71 mmol)、(4S)-4-甲基噁唑啶-2-酮(86 mg，0.85 mmol)、K3 PO4 (453 mg，2.14 mmol)、Xanphos (42 mg，0.07 mmol)及Pd2 (dba)3 (66 mg，0.07 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥，且藉由矽膠管柱層析術(PE:EA=4:1至PE:EA = 1:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(180 mg，37%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 371.1。步驟 2 ：3-((反式)-2-氰基環丙烷羧醯胺基)-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將(反式)-N-[8-氯-6-[(4S)-4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(330 mg，0.89 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(520 mg，4.44 mmol)、Brettphos (96 mg，0.18 mmol)、Pd2 (dba)3 (162 mg，0.18 mmol)及Cs2 CO3 (870 mg，2.67 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar氣下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物用矽膠管柱層析術(PE:EA=2:1至PE:EA=1:1，Rf = 0.4，在PE/EA 1/1時)純化。產物最終為黃色固體(220 mg，51%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 452.2步驟 3 ：反式-N-(8-胺基-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將N-[3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-[(4S)-4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(220 mg，0.49 mmol)及TFA (0.5 mL，0.49 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。將反應混合物藉由製備型HPLC (5%至95%甲醇及0.08 g/L NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(64.7 mg，37.4%收率)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.52，[M+H]+ = 352.1，方法= B。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 )δ 11.03 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.00 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.94 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.35 (s, 2H), 4.70-4.67 (m, 1H), 4.57-5.54 (m, 1H), 4.06-4.03 (m, 1H), 2.75-2.72 (m, 1H), 2.14-2.10 (m, 1H), 1.60-1.55 (m, 1H), 1.44-1.40 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。 實例69： ((1S,2S)-N-(8-胺基-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物128) 步驟 1 ：(1S,2S)-N-(8-氯-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將(1S,2S)-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氟-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.58 mmol)、(4S)-4-甲基噁唑啶-2-酮(71 mg，0.7 mmol)、Xantphos (34 mg，0.06 mmol)、Pd2 (dba)3 (54 mg，0.06 mmol)及K3 PO4 (369 mg，1.74 mmol)於1,4-二噁烷(8 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥，且用矽膠管柱層析術(PE:EA=4:1至PE:EA= 1:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(140 mg，58%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 364.1。步驟 2 ：3-((1S,2S)-2-氟環丙烷羧醯胺基)-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將(1S,2S)-N-[8-氯-6-[(4S)-4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基]-3-異喹啉基]-2-氟-環丙烷羧醯胺(140 mg，0.38 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(225 mg，1.92 mmol)、Pd2 (dba)3 (70 mg，0.08 mmol)、Brettphos (40 mg，0.07 mmol)及Cs2 CO3 (375 mg，1.15 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥，且藉由矽膠管柱層析術(PE:EA=2:1至PE:EA=1:1)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物(110 mg，58%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 445.2步驟 3 ：(1S,2S)-N-(8-胺基-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺
將N-[3-[[(1S,2S)-2-氟環丙烷羰基]胺基]-6-[(4S)-4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(110 mg，0.25 mmol)及TFA (0.5 mL，0.25 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。用飽和NaHCO3 將反應物之pH調整至7至8。將混合物用製備型HPLC (5%-95%甲醇及0.8 g/L NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈褐色固體狀之標題化合物(56.3 mg，48.2%收率)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.47，[M+H]+ = 345.1，方法= B。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 )δ 10.75 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.00 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.32 (s, 2H), 5.02-5.00(m, 0.5H), 4.84-4.83 (m, 0.5H), 4.72-4.67 (m, 1H), 4.58-4.54 (m, 1H), 4.06-4.03 (m, 1H), 2.26-2.23 (m, 1H), 1.69-1.63 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.4Hz, 3H), 1.17-1.13 (m, 1H)。 實例70： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-甲基異噻唑-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物130) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(4-甲基異噻唑-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.5 mmol)、3-溴-4-甲基-異噻唑(107 mg，0.6 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (73 mg，0.1 mmol)及K2 CO3 (138 mg，1.0 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)及水(1 mL)中之混合物在100℃在N2 下攪拌16 h。將混合物濃縮且藉由急驟管柱層析術純化用0至100%乙酸乙酯於PE中溶離來純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-甲基異噻唑-3-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，54%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 369.2。步驟 2 ：(±)-3-((反式-)-2-氰基環丙烷羧醯胺基)-6-(4-甲基異噻唑-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-甲基異噻唑-3-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(80 mg，0.22 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(508 mg，4.34 mmol)、Pd2 (dba)3 (39 mg，0.04 mmol)及brettphos (46 mg，0.09 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在90℃在N2 下攪拌1小時。將混合物濃縮，且將殘餘物藉由急驟管柱層析術用0至50% EA於PE中溶離來純化，得到呈白色固體狀之(±)-N-[3-[[(反式-)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-(4-甲基異噻唑-3-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(60 mg，62%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 450.1。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-甲基異噻唑-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向(±)-N-[3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-(4-甲基異噻唑-3-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(80 mg，0.18 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液中添加TFA (2 mL)。將混合物在25℃攪拌2小時。將混合物濃縮且用甲醇中之NH3 (7 M)鹼化。將混合物藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.05% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈淡黃色固體狀之(±)-(反式-)-N-[8-胺基-6-(4-甲基異噻唑-3-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(36 mg，58%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.698，[M+H]+ = 350.1，方法= C；1 H NMR (400 MHz,DMSO-d6 ) δ 11.12 (s, 1H), 9.33 (s, 1H), 8.81 (d,J = 0.4Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.97 (d,J =1.2 Hz, 1H), 6.37 (s, 2H), 2.78-2.73 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.16-2.12 (m, 1H), 1.62-1.57 (m,1H), 1.46-1.41 (m, 1H)。 實例71： (±)-反式-N-(8-胺基-6-((R)-3-羥基-2-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物131) 步驟 1 ：反式-N-(8-氯-6-((R)-3-羥基-2-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(3R)-3-羥基吡咯啶-2-酮(129 mg，1.28 mmol)、(反式-)-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(300 mg，0.86 mmol)、Pd2 (dba)3 (83 mg，0.09 mmol)、xantphos (98 mg，0.17 mmol)及Cs2 CO3 (556 mg，1.71 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在100℃攪拌2 h。將混合物濃縮且藉由急驟管柱層析術用0至20% MeOH於DCM中溶離來純化，得到呈褐色固體狀之反式-N-[8-氯-6-[(3R)-3-羥基-2-側氧基-吡咯啶-1-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，47%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 371.1。步驟 2 ：反式-N-(8-胺基-6-((R)-3-羥基-2-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將反式-N-[8-氯-6-[(3R)-3-羥基-2-側氧基-吡咯啶-1-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(110 mg，0.3 mmol)、Pd2 (dba)3 (28 mg，0.03 mmol)、brettphos (31 mg，0.06 mmol)、t-BuONa (192 mg，0.59 mmol)及胺基甲酸第三丁酯(695 mg，5.93 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物90℃攪拌2 h。將混合物濃縮且藉由急驟管柱層析術用0至20% MeOH於DCM中溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N-[3-[[(反式-)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-[(3R)-3-羥基-2-側氧基-吡咯啶-1-基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(62 mg，28%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 452.0。步驟 3 ：反式-N-(8-胺基-6-((R)-3-羥基-2-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向N-[3-[[(反式-)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-[(3R)-3-羥基-2-側氧基-吡咯啶-1-基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(50 mg，0.11 mmol)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液中添加TFA (3 mL)，且將混合物在25℃攪拌2小時。將混合物濃縮且用甲醇中之NH3 (7 M)鹼化，濃縮，且將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至70/0.1% NH4HCO3於水中)純化，得到呈褐色固體狀之反式-N-[8-胺基-6-[(3R)-3-羥基-2-側氧基-吡咯啶-1-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(2 mg，5.1%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.396，[M+H]+ = 352.1，方法= C；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.02 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.28(d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.05 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.315(s, 2H), 5.78-5.77 (m, 1H), 4.34-4.28 (m, 1H), 3.82- 3.71 (m, 1H), 2.77-2.72(m, 1H), 2.44- 2.33 (m, 1H), 2.15-2.10 (m, 1H), 1.87-1.82 (m, 1H), 1.60-1.56 (m, 1H), 1.44-1.40 (m, 1H)。 實例72： (±)-反式-N-(8-胺基-6-((S)-3-羥基-2-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物132) 步驟 1 ：反式-N-(8-氯-6-((S)-3-羥基-2-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(3S)-3-羥基吡咯啶-2-酮(216 mg，2.14 mmol)、反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(500 mg，1.43 mmol)、Pd2 (dba)3 (128 mg，0.14 mmol)、xantphos (163 mg，0.28 mmol)及Cs2 CO3 (929 mg，2.86 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物100℃攪拌2小時。將混合物濃縮，且將殘餘物藉由急驟管柱層析術用0至20% MeOH於DCM中溶離來純化，得到呈褐色固體狀之反式-N-[8-氯-6-[(3S)-3-羥基-2-側氧基-吡咯啶-1-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(90 mg，17%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 371.1步驟 2 ：反式-N-(8-胺基-6-((S)-3-羥基-2-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將Pd2 (dba)3 (23 mg，0.02 mmol)、brettphos (26 mg，0.05 mmol)、t-BuONa (46 mg，0.49 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(284 mg，2.43 mmol)及(反式-)-N-[8-氯-6-[(3S)-3-羥基-2-側氧基-吡咯啶-1-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(90 mg，0.24 mmol)於1,4-二噁烷(8 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將混合物濃縮，且將殘餘物藉由急驟管柱層析術用0至100%乙酸乙酯於PE中溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N-[3-[[(反式-)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-[(3S)-3-羥基-2-側氧基-吡咯啶-1-基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(52 mg，47%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 452.0。步驟 3 ：反式-N-(8-胺基-6-((S)-3-羥基-2-側氧基吡咯啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向N-[3-[[(反式-)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-[(3S)-3-羥基-2-側氧基-吡咯啶-1-基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(60 mg，0.13 mmol)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液中添加TFA (3 mL)，且將混合物在25℃攪拌2小時。將混合物濃縮且用甲醇中之NH3 (7 M)鹼化，濃縮且藉由逆相層析術(乙腈0至70/0.1% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈褐色固體狀之反式-N-[8-胺基-6-[(3S)-3-羥基-2-側氧基-吡咯啶-1-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(3 mg，6.4%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.394，[M+H]+ = 352.1，方法= C；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.04 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.28(d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.05 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.33 (s, 2H), 5.79-5.78 (m, 1H), 4.34-4.28 (m, 1H), 3.79-3.71 (m, 1H), 2.75-2.73 (m, 1H), 2.42-2.39 (m, 1H), 2.13-2.10(m, 1H), 1.87-1.82 (m, 1H), 1.61-1.56 (m, 1H), 1.44-1.41 (m, 1H)。 實例73： (±)-反式-N-[8-胺基-6-(5-異丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物133) 步驟 1 ：4-溴-5-異丙基-1-甲基-吡唑
在0℃下向4-溴-5-異丙基-1H-吡唑(950 mg，5.03 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中添加氫化鈉(300 mg，7.5 mmol)。10 min後，添加碘甲烷(0.5 mL，7.4 mmol)。將反應混合物在0℃攪拌1 h，接著添加40 ml飽和鹽水。將混合物用乙酸乙酯(30 mLx3)萃取。將有機物用飽和鹽水(2 x20 mL)洗滌，隨後分離且乾燥(Na2 SO4 )。將有機物濃縮，得到呈黃色液體狀之粗品4-溴-5-異丙基-1-甲基-吡唑(900 mg)。LCMS (ESI): [M+H]+ =203.1。步驟 2 ：8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)異喹啉-3-胺
將6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(517 mg，2.01 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(600 mg，2.36 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (130 mg，0.18 mmol)及乙酸鉀(500 mg，5.09 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar氣氛下在90℃攪拌2 h。將反應物濃縮至乾燥，且藉由管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚1/4至1/1)純化，得到呈黃色固體狀之8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)異喹啉-3-胺(600 mg，89%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+ =305.2。步驟 3 ：8-氯-6-(5-異丙基-1-甲基-吡唑-4-基)異喹啉-3-胺
將4-溴-5-異丙基-1-甲基-吡唑(500 mg，2.46 mmol)、(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)硼酸(600 mg，2.7 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (140 mg，0.19 mmol)及碳酸鉀(700 mg，5.07 mmol)之混合物在微波反應器中加熱至130℃達1 h。將反應物濃縮至乾燥，且藉由管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚1/3-1/2)純化，接著藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之8-氯-6-(5-異丙基-1-甲基-吡唑-4-基)異喹啉-3-胺(90 mg，12%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =301.1。步驟 4 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-(5-異丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
向(±)-反式-2-氰基環丙烷羧酸(113 mg，1.02 mmol)及一滴DMF於二氯甲烷(10 mL)中之混合物中添加草醯二氯(0.3 mL，3.52 mmol)。將混合物在室溫下攪拌20 min。將混合物濃縮以除去過量草醯二氯，且隨後添加二氯甲烷(5 mL)。隨後將溶液滴加至8-氯-6-(5-異丙基-1-甲基-吡唑-4-基)異喹啉-3-胺(85 mg，0.28 mmol)及吡啶(0.5 mL，6.18 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之混合物中。將混合物在室溫下攪拌1 h。將反應物濃縮且藉由管柱層析術(乙酸乙酯/二氯甲烷 =1/1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(5-異丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(110 mg，97%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+ =394.2。步驟 5 ：(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(5-異丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將含有(±)-反式-N-[8-氯-6-(5-異丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(110 mg，0.28 mmol)、二苯甲酮亞胺(225 mg，1.24 mmol)、Xantphos (70 mg，0.12 mmol)、Pd2 (dba)3 (57 mg，0.06 mmol)及Cs2 CO3 (200 mg，0.62 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(3 mL)及甲苯(4 mL)中之密封管在Ar氣氛下在130℃攪拌3 h。隨後將反應物藉由添加40 ml鹽水淬滅，且將混合物用乙酸乙酯(30 mLx3)萃取。將有機物用鹽水(2x20 mL)洗滌且濃縮。隨後將殘餘物藉由管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚1/3-1/1)純化，得到呈黃色固體狀之反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(5-異丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(64 mg，27%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+ =539.3。步驟 6 ：(±)-反式-N-[8-胺基-6-(5-異丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(5-異丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(64 mg，0.08 mmol)及濃水性HCl (0.1 mL，1.2 mmol)於甲醇(5 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。隨後添加三乙胺(0.2 mL，1.43 mmol)。隨後將反應混合物濃縮且藉由逆相層析術(甲醇0至60/0.1% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(5-異丙基-1-甲基-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(18 mg，63%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =375.2，RT (min)=1.72，方法= F；1 HNMR (400 MHz,CD3 OD) δ 9.19 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.73 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.47-3.40 (m, 1H), 2.67-2.62(m, 1H), 2.15-2.10 (m, 1H), 1.62-1.52 (m, 2H), 1.36 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例74： (±)-反式-N-[8-胺基-6-(2-側氧基-1,3-苯并噁唑-3-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物134) 步驟 1 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-羥基苯胺基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(400 mg，1.14 mmol)、2-胺基苯酚(150 mg，1.37 mmol)、Pd2 (dba)3 (48 mg，0.05 mmol)、Cs2 CO3 (650 mg，2 mmol)及Xantphos (60 mg，0.1mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在惰性氣氛下在100℃攪拌2 h。將反應物在減壓下濃縮。隨後將殘餘物藉由管柱層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚1/5-1/1溶離來純化，得到呈黃色固體狀之反式-N-[8-氯-6-(2-羥基苯胺基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(420 mg，78%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+ =379.1。步驟 2 ：(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-側氧基-1,3-苯并噁唑-3-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-羥基苯胺基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(400 mg，1.06 mmol)、1,1'-羰基二咪唑(400 mg，2.47 mmol)、三乙胺(2.0 mL，14.35 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液在室溫下攪拌2 h。將反應物濃縮至乾燥，且藉由矽膠管柱層析術(乙酸乙酯/石油醚1/3-1/1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-側氧基-1,3-苯并噁唑-3-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(260 mg，52%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+=405.1。步驟 3 ：(±)-N-[3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-(2-側氧基-1,3-苯并噁唑-3-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-側氧基-1,3-苯并噁唑-3-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.49 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(600 mg，5.12 mmol)、Brettphos (120 mg，0.22 mmol)、Pd2 (dba)3 (100 mg，0.11 mmol)及Cs2 CO3 (325 mg，1 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar氣氛下在90℃攪拌2 h。將反應物濃縮至乾燥，且藉由矽膠管柱層析術用乙酸乙酯/石油醚(1/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之(±)-N-[3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-(2-側氧基-1,3-苯并噁唑-3-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(62 mg，21%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+ =486.1。步驟 4 ：(±)-反式-N-[8-胺基-6-(2-側氧基-1,3-苯并噁唑-3-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-N-[3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-(2-側氧基-1,3-苯并噁唑-3-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(62 mg，0.13mmol)於甲醇(2 mL)及HCl(4 M於二噁烷中，2 mL，8 mmol)中之溶液在室溫下攪拌1 h。將反應藉由添加NaHCO3 粉末淬滅且藉由製備型HPLC純化，得到呈紅色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(2-側氧基-1,3-苯并噁唑-3-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(6 mg，11.8%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+=386.1，RT(min)=1.83方法= B；1 H NMR (400 MHz,DMSO-d6 ) δ 11.18 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.25-7.22 (m, 3H), 7.16 (s, 1H), 6.82 (d,J = 1.2 Hz,1H), 6.65-6.64 (m, 2H), 2.78-2.76 (m, 1H), 2.17-2.12 (m, 1H), 1.62-1.58 (m, 1H), 1.46-1.41(m, 1H)。 實例75： 1-[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(化合物135) 步驟 1 ：1-(8-氯-7-氟-6-碘-3-異喹啉基)-3-甲基-脲
將8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(400 mg，1.24 mmol)於四氫呋喃(5 mL)中之混合物添加於三乙胺(4 mL，28.7 mmol)及三光氣(400 mg，1.35 mmol)中。將混合物在室溫下攪拌10 min，之後添加甲胺鹽酸鹽(940 mg，13.92 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1 h。將混合物濃縮至乾燥且藉由管柱層析術用乙酸乙酯/石油醚(1/3-1/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之1-(8-氯-7-氟-6-碘-3-異喹啉基)-3-甲基-脲(190 mg，33%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 379.9。步驟 2 ：1-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲
將1-(8-氯-7-氟-6-碘-3-異喹啉基)-3-甲基-脲(190 mg，0.50 mmol)、4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(120 mg，0.55 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (40 mg，0.05 mmol)及K2 CO3 (180 mg，1.3 mmol)於1,4-二噁烷(6 mL)及水(1 mL)中之混合物在Ar氣氛下在80℃攪拌3 h。將反應混合物濃縮至乾燥，且隨後將粗品藉由管柱層析術用甲醇/二氯甲烷(1:12)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之1-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(145 mg，74%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+ = 345.0。步驟 3 ：N-[7-氟-3-(甲基胺甲醯基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯
將1-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(120 mg，0.35 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(515 mg，4.4 mmol)、Pd2 (dba)3 (70 mg，0.08 mmol)、Brettphos (90 mg，0.17 mmol)及Cs2 CO3 (260 mg，0.80 mmol)於1,4-二噁烷(6 mL)中之混合物在Ar氣氛下在90℃攪拌1 h。將反應物藉由逆相層析術(甲醇0至50/0.1%氨於水中)純化，得到呈黃色固體狀之N-[7-氟-3-(甲基胺甲醯基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(30 mg，18%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+ =426.2。步驟 4 ：1-[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲
將N-[7-氟-3-(甲基胺甲醯基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(30 mg，0.07 mmol)於HCl於二噁烷溶液(4 M，2 mL，8 mmol)中之溶液在室溫下攪拌2 h。將溶液濃縮且藉由逆相層析術(甲醇5-50/0.05%氨於水中)純化，得到呈黃色固體狀之1-[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(15.4 mg，67%收率)。LCMS(ESI):[M+H]+ =326.1，RT (min)=1.40，方法= E；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.25 (s, 1H), 8.47 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.40 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 2.91 (s, 3H), 2.31 (s, 3H)。 實例76： (±)-反式-3-(8-胺基-3-(2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-N,4-二甲基苯羧醯胺(化合物136) 步驟 1 ：3-溴-N,4-二甲基苯羧醯胺
向小瓶中添加4-溴-3-甲基苯甲酸(1 g，4. mmol)、二氯甲烷(10 mL)、DMF (0.1 mL，4. mmol)及草醯氯(1.2 mL，14.18 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2 h。隨後將混合物在真空中濃縮。將混合物再溶於二氯甲烷(10 mL)中，且添加甲胺(30%於EtOH中，10 mL)。將混合物在室溫下攪拌30 min。將混合物在真空中濃縮且藉由管柱層析術(PE/EA，1:1至0:100)純化，得到呈白色固體狀之4-溴-N,3-二甲基-苯羧醯胺(820 mg，77%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 228.1。步驟 2 ：N,4-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)苯羧醯胺
向密封管中添加3-溴-N,4-二甲基-苯羧醯胺(800 mg，3.51 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(1.1 g，4.33 mmol)、乙醯氧基鉀(1.1 g，11.21 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (256 mg，0.35 mmol)及1,4-二噁烷(100 mL)。將混合物用N2 鼓泡2 min，且隨後在100℃攪拌3 h。將混合物直接藉由矽膠管柱層析術(EA : PE = 1 : 3至1 : 2)純化，得到呈白色固體狀之N,4-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)苯羧醯胺(800 mg，41%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 276.1。步驟 3 ：(±)-反式-3-(8-氯-3-(2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-N,4-二甲基苯羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.57 mmol)、N,4-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)苯羧醯胺(500 mg，0.91 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (50 mg，0.07 mmol)及Na2 CO3 (130 mg，1.24 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)及水(3 mL)中之溶液在Ar下在90℃下加熱2 h。將混合物直接藉由矽膠管柱層析術(EA:PE = 1 : 2至1 : 1)純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-3-[8-氯-3-[(2-氰基環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-N,4-二甲基-苯羧醯胺(200 mg，84%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 419.1。步驟 4 ：(±)-反式-3-(8-胺基-3-(2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-N,4-二甲基苯羧醯胺
將(±)-反式-3-[8-氯-3-[(2-氰基環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-N,4-二甲基-苯羧醯胺(100 mg，0.24 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(265 mg，2.26 mmol)、Xantphos (55 mg，0.10 mmol)、Pd2 (dba)3 (44 mg，0.05 mmol)及Cs2 CO3 (350 mg，1.08 mmol)於無水N,N-二甲基羧醯胺(5 mL)及無水甲苯(5 mL)中之混合物在130℃在Ar下攪拌16 h。將反應物濃縮以除去甲苯，且隨後添加20 mL飽和鹽水溶液。將混合物用乙酸乙酯(20 mL×2)萃取。隨後將有機物分離且乾燥(Na2 SO4 )。將所得殘餘物藉由矽膠管柱層析術(EA : PE = 1 : 1至EA至DCM : MeOH = 20 : 1)純化，接著藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.1% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-3-[8-胺基-3-[(2-氰基環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-N,4-二甲基-苯羧醯胺(29 mg，31%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.67，[M+H]+ = 400.1，方法= C；1 H NMR (400 MHz, CD3 OD): δ 9.24 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.75-7.73 (m, 2H), 7.40-7.38 (m, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.67-2.62 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.14-2.09 (m, 1H), 1.62-1.52 (m, 2H)。 實例77： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(3-甲基-2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物138) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(3-甲基-2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.57 mmol)、1-甲基-2-苯并咪唑啉酮(120 mg，0.81 mmol)、Pd3 (dba)2 (100 mg，0.11 mmol)、Xantphos (130 mg，0.22 mmol)及K3 PO4 (360 mg，1.7 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將混合物濃縮且藉由矽膠管柱層析術(EA:PE = 1:3至1:2)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(3-甲基-2-側氧基-苯并咪唑-1-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(120 mg，50%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 418.1。步驟 2 ：(±)-3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)-6-(3-甲基-2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(3-甲基-2-側氧基-苯并咪唑-1-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.24 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(280 mg，2.39 mmol)、Pd3 (dba)2 (40 mg，0.04 mmol)、Brettphos (20 mg，0.04 mmol)、Cs2 CO3 (230 mg，0.71 mmol)於1,4-二噁烷(1 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將混合物直接藉由矽膠管柱層析術(EA: PE = 1:2)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-N-[3-[(反式-2-氰基環丙烷羰基)胺基]-6-(3-甲基-2-側氧基-苯并咪唑-1-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(70 mg，59%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 499.1。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(3-甲基-2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向溶於二氯甲烷(4 mL)中之(±)-N-[3-[(反式-2-氰基環丙烷羰基)胺基]-6-(3-甲基-2-側氧基-苯并咪唑-1-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(60 mg，0.12 mmol)中添加TFA (0.2 mL，0.24 mmol)，且在室溫下攪拌2 h。將混合物藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.1% NH4 HCO3 於水中)直接純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(3-甲基-2-側氧基-苯并咪唑-1-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(13 mg，27%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.77，[M+H]+ = 399.1，方法= C；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 11.15 (s, 1H), 9.35 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.27-7.08 (m, 5H), 6.78 (s, 1H), 6.54 (s, 2H), 3.17 (s, 3H), 2.77-2.74 (m, 1H), 2.17-2.12 (m, 1H), 1.62-1.57 (m, 1H), 1.46-1.41 (m, 1H)。 實例78： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物139) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.57 mmol)、1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1H-吡唑(320 mg，1.15 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (50 mg，0.07 mmol)及Na2 CO3 (130 mg，1.24 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)及水(3 mL)中之溶液在Ar下在90℃下加熱2 h。將混合物藉由矽膠管柱層析術(EA:PE = 1:2)直接純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-四氫吡喃-2-基吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(220 mg，91%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 422.7。步驟 2 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(1-四氫吡喃-2-基吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.47 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(555 mg，4.74 mmol)、Xantphos (110 mg，0.19 mmol)、Pd2 (dba)3 (90 mg，0.10 mmol)及Cs2 CO3 (690 mg，2.12 mmol)於無水N,N-二甲基羧醯胺(5 mL)及甲苯(5 mL)中之混合物在130℃在Ar氣氛下攪拌4 h。將反應物濃縮以除去甲苯，且隨後添加10 mL飽和鹽水溶液。將混合物用乙酸乙酯(10 mL×2)萃取。隨後將有機物分離且乾燥(Na2 SO4 )。將所得殘餘物藉由矽膠管柱層析術(EA : PE = 1:1至2:1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(1-四氫吡喃-2-基吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，52%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 403.7。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-胺基-6-(1-四氫吡喃-2-基吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(80 mg，0.20 mmol)溶於二氯甲烷(10 mL)中，且添加TFA (1.5 mL，0.20 mmol)，在室溫下攪拌2 h。將混合物蒸發且藉由添加NH3 於MeOH中之溶液中和。將所得混合物藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.1% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(1H-吡唑-4-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(26 mg，42%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.47，[M+H]+ = 319.7，方法= C；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 13.01 (s, 1H), 11.02 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.17 (s, 2H), 2.77-2.74 (m, 1H), 2.15-2.11 (m, 1H), 1.61-1.56 (m, 1H), 1.46-1.41 (m, 1H)。 實例79： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物140) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-6-(2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.57 mmol)、2-羥基苯并咪唑(110 mg，0.82 mmol)、Pd2 (dba)3 (100 mg，0.11 mmol)、Xanphos (130 mg，0.22 mmol)、K3 PO4 (360 mg，1.70 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在Ar氣下在90℃下加熱3 h。將混合物藉由矽膠管柱層析術(EA : PE = 1 : 1)直接純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-側氧基-3H-苯并咪唑-1-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(180 mg，78%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 404.1。步驟 2 ：(±)-3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)-6-(2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將(±)-反式-N-[8-氯-6-(2-側氧基-3H-苯并咪唑-1-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(160 mg，0.40 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(696 mg，5.94 mmol)、Pd2 (dba)3 (72 mg，0.08 mmol)、Brettphos (40 mg，0.07 mmol)及Cs2 CO3 (387 mg，1.19 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物用矽膠層析術(PE : EA = 2 : 1至PE : EA = 1 : 1)純化，得到呈白色固體狀之(±)-N-[3-[(反式-2-氰基環丙烷羰基)胺基]-6-(2-側氧基-3H-苯并咪唑-1-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(60 mg，31%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 485.1。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(2-側氧基-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向(±)-N-[3-[(反式-2-氰基環丙烷羰基)胺基]-6-(2-側氧基-3H-苯并咪唑-1-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(55 mg，0.11 mmol)溶於二氯甲烷(2 mL)中之溶液中添加TFA (1.0 mL，0.11 mmol)。將反應物在室溫下攪拌2 h。將混合物藉由矽膠管柱層析術(EA : PE = 1 : 1至EA )直接純化，接著藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.1% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈白色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(2-側氧基-3H-苯并咪唑-1-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(2.6 mg，6%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.64，[M+H]+ = 385.1，方法= C；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 11.13 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.15-7.00 (m, 6H), 6.79 (s, 1H), 6.51 (s, 2H), 2.78-2.74 (m, 1H), 2.17-2.12 (m, 1H), 1.61-1.57 (m, 1H), 1.46-1.41 (m, 1H)。 實例80： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)-7-(三氟甲基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物143) 步驟 1 ：(±)-反式-N-(8-氯-7-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[7-溴-8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(500 mg，1.13 mmol)、碘化鈉(750 mg，5 mmol)、CuI (50 mg，0.26 mmol)及二甲基乙烷-1,2-二胺(1.5 mL，13.69 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之溶液加熱至110℃達2天。將混合物用乙酸乙酯(100 mL)洗滌，用水(30 mLx3)及鹽水(30 mL)洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱(EA:PE=1:1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-氯-7-碘-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(430 mg，78%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 489.0。步驟 2 ：(±)-(反式)-N-(8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)-7-(三氟甲基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
在室溫下向(±)-(反式)-N-[8-氯-7-碘-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(370 mg，0.76 mmol)及三氟甲烷磺酸二苯基(三氟甲基)鋶(620 mg，1.53 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(11 mL)中之溶液中添加Cu (150 mg，2.34 mmol)。將混合物加熱至67℃達16 h。冷卻後，將反應混合物溶於EtOAc (30 mL)中，用飽和水性氯化鈉(10 mL x 3)洗滌。將有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(EA: PE = 2 : 3)純化，接著藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% HCOOH於水中)純化，得到(±)-(反式)-N-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-7-(三氟甲基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(35 mg，11%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 431.1。步驟 3 ：(±)-(反式)-2-氰基-N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)-7-(三氟甲基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
將(±)-(反式)-N-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-7-(三氟甲基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(30 mg，0.07 mmol)、Pd2 (dba)3 (12 mg，0.01 mmol)、Xantphos (15 mg，0.03 mmol)、Cs2 CO3 (48 mg，0.15 mmol)及二苯甲酮亞胺(300 mg，1.66 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在115℃在Ar下攪拌6 h。將反應物藉由矽膠管柱(EA: PE=1:5至1:1)直接純化，得到呈黃色油狀之(±)-(反式)-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-7-(三氟甲基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(20 mg，50%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 576.2。步驟 4 ：(±)-(反式)-N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)-7-(三氟甲基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-(反式)-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-7-(三氟甲基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(20 mg，0.02 mmol)於乙腈(1 mL)、水(1 mL)及2,2,2-三氟乙酸(0.5 mL)中之溶液攪拌2 h。隨後添加0.2 mL濃HCl，且將混合物攪拌16 h。將混合物蒸發，溶於CH3 CN (1 mL)中，且用飽和碳酸氫鈉中和。將所得混合物藉由逆相層析術(乙腈17-47/0.05%氨於水中)純化，得到呈白色固體狀之(±)-(反式)-N-[8-胺基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-7-(三氟甲基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(4 mg，40%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.864，[M+H]+ = 421.1，方法= C；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD): δ 9.41 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.25-8.23 (m, 2H), 7.35 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 2.64-2.26 (m, 1H), 2.16 (s, 3H), 2.09-2.05 (m, 1H), 1.57-1.47 (m, 2H)。 實例81： (±)-(反式)-N-(8-胺基-6-(5-甲基-2-側氧基咪唑啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物144) 步驟 1 ：8-氯-3-((反式)-2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基胺基甲酸第三丁酯
將(反式)-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(600 mg，1.71 mmol)、Pd2 (dba)3 (240 mg，0.26 mmol)、Xantphos (300 mg，0.52 mmol)、K2 CO3 (510 mg，3.7 mmol)及胺基甲酸第三丁酯(400 mg，3.41 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在90℃在Ar下攪拌7 h。將混合物藉由矽膠管柱(EA: PE = 1:5至1:3)直接純化，得到呈黃色固體狀之N-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(500 mg，76%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 387.1。步驟 2 ：(反式)-N-(8-氯-6-(5-甲基-2-側氧基咪唑啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
在0℃下向經攪拌之N-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(450 mg，1.16 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(20 mL)中之溶液中添加NaH (450 mg，11.25 mmol)。將所得混合物在0℃攪拌30 min。隨後添加N-(2-溴丙基)胺基甲酸第三丁酯(500 mg，2.1mmol)。將所得混合物在80℃攪拌隔夜。冷卻至室溫後，將混合物用飽和NH4 Cl淬滅，且用乙酸乙酯稀釋。將有機層用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱(EA:PE=1:1)純化，得到呈淡黃色固體狀之N-[2-[[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]胺基]丙基]胺基甲酸第三丁酯(25 mg，5%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 370.1。步驟 3 ：3-((反式)-2-氰基環丙烷羧醯胺基)-6-(5-甲基-2-側氧基咪唑啶-1-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將(反式)-N-[8-氯-6-(5-甲基-2-側氧基-咪唑啶-1-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(25 mg，0.07 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(80 mg，0.68 mmol)、Pd2 (dba)3 (12 mg，0.01 mmol)、Brettphos (12 mg，0.02 mmol)及Cs2 CO3 (65 mg，0.20 mmol)於1,4-二噁烷(2 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將混合物藉由矽膠管柱(EA:PE = 1 : 1至100% Ea)直接純化，得到呈黃色固體狀之N-[3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-(5-甲基-2-側氧基-咪唑啶-1-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(15 mg，49%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 451.1。步驟 4 ：(反式)-N-(8-胺基-6-(5-甲基-2-側氧基咪唑啶-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將N-[3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-(5-甲基-2-側氧基-咪唑啶-1-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(15 mg，0.03 mmol)於二氯甲烷(4 mL)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。將混合物蒸發且藉由逆相層析術(乙腈17-47/0.05% HCOOH於水中)純化，得到呈黃色固體狀之(反式)-N-[8-胺基-6-(5-甲基-2-側氧基-咪唑啶-1-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(3 mg，26%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.332，[M+H]+ = 351.2，方法= A；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 10.96 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.71(s, 1H), 6.18 (s, 2H), 4.12-3.97 (m, 2H), 3.81-3.75 (m, 1H), 2.76-2.67 (m, 1H), 2.14-2.08 (m, 1H), 1.58-1.50 (m, 1H), 1.42-1.40 (m, 1H), 1.20 (d,J = 6.0 Hz, 3H)。 實例82： (±)-反式-N-(8-胺基-5,7-二氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物145)
向(±)-反式-N-[8-胺基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.29 mmol)於乙腈(5 mL)中之溶液中添加1-氟-4-羥基-1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷雙(四氟硼酸酯) (220 mg，0.69 mmol)。將混合物在微波反應器中在90℃攪拌2 h。將粗品藉由製備型HPLC (管柱Xbridge 21.2 x 250mm c18，10um 流動相A：水(10 mMol/LNH4 HCO3 ) B：ACN)純化，得到(±)-反式-N-[8-胺基-5,7-二氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(5 mg，4.5%收率)。(ESI): RT (min) = 1.625，[M+H]+ = 380.2，方法= G；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.32 (s, 1H), 9.53 (s, 1H), 8.55 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.48 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 6.20 (s, 2H), 2.62-2.75 (m, 1H), 2.11-2.25 (m, 4H), 1.60-1.68 (m, 1H),1.40-1.48 (m, 1H)。 實例83： (±)-反式-N-(8-胺基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物146) 步驟 1 ：反式-2-氰基-N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
向密封管中添加(±)-反式-N-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(450 mg，1.24 mmol)、Xantphos (300 mg，0.52 mmol)、Pd2 (dba)3 (225 mg，0.25 mmol)、Cs2 CO3 (1.0 g，3.08 mmol)、二苯甲酮亞胺(1.2 g，6.62 mmol)及N,N-二甲基羧醯胺(15 mL)。將混合物用N2 鼓泡2 min，在130℃攪拌4小時。將混合物濃縮且藉由矽膠管柱層析術(用PE/EA溶離，10:1至1:1)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(250 mg，31%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 508.3。步驟 2 ：(±)-反式-N-(8-胺基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向小瓶中添加(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(500 mg，0.39 mmol)、四氫呋喃(5mL)及2 N HCl (4.81 mL，9.63 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時。將混合物濃縮且藉由矽膠管柱層析術(用DCM/MeOH，20:1至10:1)純化，接著藉由製備型HPLC (流動相：A：水(10 mmol NH4 HCO3 ) B：乙腈)純化，得到呈淺褐色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-7-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(11 mg，8%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.667，[M+H]+ = 378.1，方法= G；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.49 (s, 1H), 8.48 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.36 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.03 (br, 2H), 2.79-2.71 (m, 1H), 2.17-2.10 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.63-1.55 (m, 1H), 1.46-1.40 (m, 1H)。 實例84： 1-(8-胺基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲(化合物147)及1-(8-胺基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲(化合物148) 步驟 1 ：1-(8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲
向密封管中添加8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(700 mg，2.6 mmol)、甲基胺基甲醯氯(1.2 g，13 mmol)、DBU (1 mL，6.69 mmol)及1,4-二噁烷(10 mL)。將反應物在120℃攪拌16 h。將混合物濃縮且藉由矽膠管柱層析術(用DCM/MeOH溶離，100:1至30:1)純化，得到呈褐色固體狀之1-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(820 mg，84%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 327.1。步驟 2 ：6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-(3-甲基脲基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
向反應小瓶中添加1-[8-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(800 mg，2.45 mmol)、Brettphos (200 mg，0.37 mmol)、Pd2 (dba)3 (300 mg，0.33 mmol)、Cs2 CO3 (2.0g, 6.15mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.6 g，13.7 mmol)及1,4-二噁烷(50 mL)，用N2 鼓泡2 min。將反應物在95℃攪拌3小時。將混合物濃縮且藉由矽膠管柱層析術(用DCM/MeOH溶離，100:1至30:1)，得到呈褐色固體狀之N-[3-(甲基胺甲醯基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(430 mg，41%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 408.1。步驟 3 ：1-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲
向反應小瓶中添加N-[3-(甲基胺甲醯基胺基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(420 mg，0.98 mmol)及HCl (4 N於二噁烷中，5 mL)。將反應物在室溫下攪拌4小時。將混合物濃縮且再溶於NH3 於MeOH中之溶液(7 N，20 mL)中，將混合物濃縮且藉由矽膠管柱層析術(用DCM/MeOH溶離，30:1至10:1)純化，得到呈黃色固體狀之1-[8-胺基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(230 mg，75%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 308.2。步驟 4 ：1-(8-胺基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲及1-(8-胺基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲
向小瓶中添加1-[8-胺基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(100 mg，0.33 mmol)、乙腈(10 mL)及N-氯琥珀醯亞胺(45 mg，0.34 mmol)。將混合物在50℃攪拌16小時。將混合物濃縮且藉由製備型HPLC (乙腈30至70%/0.1% NH4OH於水中)純化，得到以下：
呈黃色固體狀之1-[8-胺基-7-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(化合物147) (38 mg，34%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.533，[M+H]+ = 342.2，方法= G；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.35 (s, 1H), 9.12 (s, 1H), 8.48 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.36 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.04 (q,J = 4.8 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.52 (s, 2H), 2.71 (d,J = 4.8 Hz, 3H), 2.12 (s, 3H)。
呈黃色固體狀之1-[8-胺基-5-氯-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(化合物148) (21 mg，19%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.499，[M+H]+ = 342.1，方法= G；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.28 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.48 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.37 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.06 (q,J = 4.8 Hz, 1H), 6.49 (s, 2H), 6.36 (s, 1H), 2.72 (d,J = 4.8 Hz, 3H), 2.12 (s, 3H)。 實例85： 1-(8-胺基-5-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲(化合物149) 1-(8-胺基-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲(化合物150) 步驟 1 ：1-(8-胺基-5-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲及1-(8-胺基-7-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲
向反應小瓶中添加1-[8-胺基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(100 mg，0.33 mmol)、乙酸(5 mL)及N-碘琥珀醯亞胺(75 mg，0.33 mmol)。將混合物在20℃攪拌3天。將混合物濃縮，且用飽和NaHCO3 將pH調整至7。將產物用乙酸乙酯(50 mLx2)萃取，經Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮，得到1-(8-胺基-5-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲及1-(8-胺基-7-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲之粗混合物。粗混合物不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI): [M+H]+ = 434.1步驟 2 ：1-(8-胺基-5-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲及1-(8-胺基-7-氰基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲
向小瓶中添加1-(8-胺基-5-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲及1-(8-胺基-7-碘-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基脲(100 mg，0.23 mmol)、Pd(t-Bu3 P)2 (15 mg，0.03 mmol)、Zn (5 mg，0.08 mmol)、Zn(CN)2 (50 mg，0.43 mmol)及N,N-二甲基羧醯胺(5 mL)之混合物。將反應混合物用N2 鼓泡2 min，且90℃攪拌4小時。將混合物濃縮且藉由矽膠管柱層析術(用DCM/MeOH溶離，100:1至30:1)純化，得到：
呈白色固體狀之化合物149：1-[8-胺基-7-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(14 mg，18%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.512，[M+H]+ = 333.1，方法= C；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.41 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.39 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.35 (s, 2H), 7.07 (q,J = 4.4 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 2.71 (d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.22 (s, 3H)。
化合物150：分離呈白色固體狀之1-[8-胺基-5-氰基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-3-甲基-脲(23 mg，30%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.428，[M+H]+ = 333.2，方法= G；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.37 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 8.54 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.50 (s, 2H), 7.43 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.00 (q,J = 4.4 Hz, 1H), 6.41 (s, 1H), 2.73 (d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.22 (s, 3H)。 實例86： (±)-反式-N-[8-胺基-6-(2-側氧基噁唑啶-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物151) 步驟 1 ：N-[2-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯
在0℃在N2 下向6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(500 mg，1.94 mmol)於無水四氫呋喃(20 mL)中之溶液中添加iPrMgCl·LiCl錯合物(1.3 M於THF中) (20 mL，26 mmol)。添加完成後，將反應溶液在室溫下攪拌1 h。將混合物冷卻至0℃，且添加(±)-2-(甲氧基(甲基)胺基)-2-側氧基乙基胺基甲酸第三丁酯(1.27 g，5.83 mmol)。將反應溶液在室溫下攪拌1 h。將反應混合物藉由添加飽和水性NaCl淬滅，且用乙酸乙酯(30 mLx3)萃取。將有機萃取物用無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物藉由急驟管柱層析術用40%乙酸乙酯於PE中溶離來純化，得到呈黃色油狀之N-[2-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯(330 mg，48%收率)。LCMS(ESI): [M+H]+ =336.1。步驟 2 ：N-[2-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-2-羥基-乙基]胺基甲酸第三丁酯
在0℃下向N-[2-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯(150 mg，0.45 mmol)於MeOH (3 mL)中之溶液中添加NaBH4 (42 mg，1.12 mmol)。將所得溶液在0℃攪拌1 h。添加水(5 mL)以淬滅反應。將混合物藉由EA (10 mLx2)萃取。將有機層用水(5 mL)洗滌，用無水Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物N-[2-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-2-羥基-乙基]胺基甲酸第三丁酯(140 mg，93%收率)不經純化即用於下一步驟中。LCMS(ESI): [M+H-100]+ =338.1。步驟 3 ：5-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)噁唑啶-2-酮
將N-[2-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-2-羥基-乙基]胺基甲酸第三丁酯(140 mg，0.41mmol)溶於N,N-二甲基羧醯胺(3 mL)中。在0℃下添加NaH (15 mg，0.62 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌3 h。添加水(5 mL)以淬滅反應，且將混合物用乙酸乙酯(10 mLx2)萃取。將有機層用鹽水(10 mLx3)洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物藉由製備型TLC (DCM:MeOH=20:1)純化，獲得呈黃色油狀之標題產物5-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)噁唑啶-2-酮(60 mg，51%收率)。LCMS(ESI): [M+H]+ =264.0。步驟 4 ：反式-N-[8-氯-6-(2-側氧基噁唑啶-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷 羧醯胺
將(±)-反式-2-氰基環丙烷羧酸(250 mg，2.25 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之混合物在0℃攪拌10 min。隨後滴加乙烷二醯二氯(572 mg，4.51 mmol)。將反應混合物在25℃攪拌1 h且濃縮。隨後在0℃下將粗產物添加至5-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)噁唑啶-2-酮(60 mg，0.23 mmol)及吡啶(0.06 mL，0.68 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中。將反應混合物在25℃攪拌1 h。將反應混合物過濾且濃縮。將殘餘物藉由急驟管柱層析術(DCM/MeOH=10/1)純化，得到呈白色固體狀之反式-N-[8-氯-6-(2-側氧基噁唑啶-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(70 mg，86%收率)。LCMS(ESI): [M+H]+ =357.0。步驟 5 ：反式-N-[8-胺基-6-(2-側氧基噁唑啶-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷 羧醯胺
在手套箱中向密封管中添加胺基甲酸第三丁酯(229 mg，1.96 mmol)、Pd2 (dba)3 (36 mg，0.04mmol)、Cs2 CO3 (192 mg，0.59 mmol)、xantphos (38 mg，0.08 mmol)、反式-N-[8-氯-6-(2-側氧基噁唑啶-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(70 mg，0.20 mmol)、N,N-二甲基羧醯胺(1 mL)及甲苯(1 mL)。將混合物在130℃攪拌2 d。將反應物濃縮且用水(20 mL)稀釋。將混合物用乙酸乙酯(30 mLx3)萃取，且將合併之有機層用水(20 mL)、飽和NaCl溶液 (30 mLx3)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (流動相：A水( 0.01% NH3 ) +10mm (NH4 HCO3 )，B乙腈)純化，得到呈黃色固體狀之反式-N-[8-胺基-6-(2-側氧基噁唑啶-5-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(4.8 mg，7.3%收率)。LCMS(ESI): RT (min) =1.398，[M+H]+ =338.0，方法= C；1 H NMR (400MHz, CD3 OD) δ 9.20 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.74 (s,1H), 5.72-5.68 (m, 1H), 4.07-4.02 (m, 1H), 3.53-3.49(m, 1H), 2.65-2.62 (m, 1H), 2.13-2.11 (m, 1H), 1.61-1.53 (m, 1H)。 實例87： (±)-反式-N-[8-胺基-7-(羥甲基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(化合物153) 步驟 1 ：(±)-反式-N-[8-胺基-7-甲醯基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-(二苯亞甲基胺基)-7-(二氟甲基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(140 mg，0.25 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(8 mL)於水(20 mL)及乙腈(20 mL)中之混合物在25℃攪拌3 h。將反應混合物濃縮且用飽和NaHCO3 (水性)中和至pH = 7至8。將混合物濃縮且藉由製備型HPLC逆相(C-18，乙腈/水+ 0.05% NH4 HCO3 )純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-7-甲醯基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(120 mg，68%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 372.7。步驟 2 ：(±)-反式-N-[8-胺基-7-(羥甲基)-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺
在0℃下向(±)-反式-N-[8-胺基-7-甲醯基-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(100 mg，0.16 mmol)於乙腈(20 mL)及甲醇(20 mL)中之溶液中添加NaBH4 (24 mg，0.63 mmol)。將混合物在0℃攪拌10 min。將混合物濃縮且藉由製備型逆相HPLC (C-18，乙腈/水+ 0.05% NH4 HCO3 )純化，得到呈黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-7-(羥甲基)-6-(4- 甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(25 mg，41%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.852，[M+H]+ = 374.1，方法= C。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.12 (s, 1H), 9.46 (s, 1H), 8.46 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 8.32 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.34 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.32 (s, 2H), 4.95 (s, 1H), 4.29 (d,J = 12.4 Hz, 1H), 4.18 (d,J = 12.0 Hz, 1H), 2.78-2.75 (m, 1H), 2.17-2.11 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.61-1.56 (m, 1H), 1.46-1.40 (m, 1H)。 實例88： (±)-1-[8-胺基-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基)-3-異喹啉基]-3-異丙基-脲(化合物154) 步驟 1 ：1-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-3-異丙基-脲
將6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(400 mg，1.55 mmol)、異氰酸異丙酯(1.19 g，13.98 mmol)及DBU (1.18 g，7.76 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在100℃攪拌5 h。將混合物濃縮且藉由管柱層析術用EtOAc/己烷= 1:2溶離來純化，得到呈黃色固體狀之1-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-3-異丙基-脲(570 mg，1.03 mmol，66%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 342.0。步驟 2 ：1-[8-氯-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基)-3-異喹啉基]-3-異丙基-脲
將1-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-3-異丙基-脲(570 mg，1.03 mmol)、4-甲基噁唑啶-2-酮(125 mg，1.24 mmol)、Pd2 (dba)3 (95 mg，0.1 mmol)、Xantphos (119 mg，0.21 mmol)及K3 PO3 (437 mg，2.06 mmol)於1,4-二噁烷(18 mL)中之混合物在Ar下在90℃攪拌2 h。將混合物濃縮且藉由管柱層析術用EtOAc/己烷= 2:1溶離來純化，得到呈白色固體狀之1-[8-氯-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基)-3-異喹啉基]-3-異丙基-脲(306 mg，81%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 363.1。步驟 3 ：(±)-N-[3-(異丙基胺甲醯基胺基)-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯
將1-[8-氯-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基)-3-異喹啉基]-3-異丙基-脲(286 mg，0.79 mmol)、BocNH2 (922 mg，7.88 mmol)、Pd2 (dba)3 (108 mg，0.12 mmol)、Brettphos (127 mg，0.24 mmol)及Cs2 CO3 (512 mg，1.58 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在90℃在Ar下攪拌2 h。將混合物濃縮且藉由管柱層析術用EtOAc/DCM = 3:1溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N-[3-(異丙基胺甲醯基胺基)-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(285 mg，66%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 444.4。步驟 4 ：(±)-1-[8-胺基-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基)-3-異喹啉基]-3-異丙基-脲
將(±)-N-[3-(異丙基胺甲醯基胺基)-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(280 mg，0.52 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)於二氯甲烷(10 mL)中之混合物在25℃攪拌2 h。將反應混合物濃縮且用飽和NaHCO3 (水性)中和至pH = 7至8。將混合物濃縮且藉由製備型逆相HPLC (C-18，乙腈/水+ 0.05% NH4 HCO3 )純化，得到呈黃色固體狀之(±)-1-[8-胺基-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基)-3-異喹啉基]-3-異丙基-脲(140 mg，78%收率)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.399，[M+H]+ = 344.2，方法= A。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.09 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.21 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 6.87 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.25 (s, 2H), 4.71-4.68 (m, 1H), 4.55 (t,J = 8.2 Hz, 1H), 4.04 (q,J = 4.4 Hz, 1H), 3.84-3.78 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.13 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例89： N-(8-胺基-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H-吡唑-5-基)乙醯胺(化合物155) 步驟 1 ：2-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)乙腈
將2-(1H-吡唑-5-基)乙腈(250 mg，2.33 mmol)、對甲苯磺酸(40 mg，0.23 mmol)及3,4-二氫-2h-吡喃(295 mg，3.5 mmol)於乙酸乙酯(5 mL)中之混合物在25℃攪拌18 h。將5 mL飽和水性NaHCO3 添加至反應混合物中且攪拌10 min。將EA經Na2 SO4 乾燥且在真空中濃縮，得到呈無色油狀之2-(2-四氫吡喃-2-基吡唑-3-基)乙腈(430 mg，74.6%收率)。LCMS (ESI): [M+23]+ = 214.2。步驟 2 ：2-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)乙酸
將2-(2-四氫吡喃-2-基吡唑-3-基)乙腈(430 mg，2.25 mmol)及KOH (378. mg，6.75 mmol)於乙醇(5 mL)、水(5 mL)中之混合物在80℃攪拌5 h。將EtOH除去，且將所得混合物用水(10 mL)稀釋，且用乙酸乙酯(10 mL)萃取。將水相用1 N HCl調整至pH=5，且用乙酸乙酯(20 mLx2)萃取。將合併之乙酸乙酯層經Na2 SO4 乾燥且在真空中濃縮，得到呈無色油狀之2-(2-四氫吡喃-2-基吡唑-3-基)乙酸(480 mg，83.7%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 233.1。步驟 3 ：8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺
將6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(300 mg，1.17 mmol)、4-乙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(326 mg，1.4 mmol)、Na2 CO3 (309 mg，2.91 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (43 mg，0.06 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)、H2 O(0.3 mL)中之混合物在90℃攪拌3 hr。將溶劑除去，且將殘餘物藉由急驟管柱層析術(PE:EA=2:1- 1:4)純化，得到呈黃色固體狀之8-氯-6-(4-乙基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(260 mg，78.6%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 284.1。步驟 4 ：N-(8-氯-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)乙醯胺
在0℃下向8-氯-6-(4-乙基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(130 mg，0.46 mmol)及2-(2-四氫吡喃-2-基吡唑-3-基)乙酸(130 mg，0.62 mmol)於吡啶(2 mL)中之混合物中添加氧氯化磷(281 mg，1.83 mmol)。將所得混合物在0℃攪拌1 h。用飽和水性NaHCO3 淬滅，且用乙酸乙酯(20 mLx2)萃取。將合併之乙酸乙酯層在真空中濃縮，且將殘餘物藉由急驟管柱層析術(PE:EA=3:1- 1:3)純化，得到呈黃色固體狀之N-[8-氯-6-(4-乙基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-(2-四氫吡喃-2-基吡唑-3-基)乙醯胺(90 mg，38.5%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 476.2。步驟 5 ：N-(8-(二苯基亞甲基胺基)-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)乙醯胺
將N-[8-氯-6-(4-乙基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-(2-四氫吡喃-2-基吡唑-3-基)乙醯胺(80 mg，0.17 mmol)、二苯甲酮亞胺(61 mg，0.34 mmol)、Pd2(dba)3 (31 mg，0.03 mmol)、Xantphos (39 mg，0.07 mmol)及Cs2 CO3 (110 mg，0.34 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(2 mL)、甲苯(2 mL)中之混合物在130 C下攪拌3 hr。將反應物冷卻至室溫，用水稀釋，且用乙酸乙酯(20 mLx2)萃取。將合併之乙酸乙酯層在真空中濃縮，得到呈褐色固體狀之N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-乙基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-(2-四氫吡喃-2-基吡唑-3-基)乙醯胺(170 mg，50.5%收率，粗品)。此粗品不經純化即用於下一步驟。LCMS (ESI):[M+H]+ = 611.2。步驟 6 ：N-(8-胺基-6-(4-乙基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H-吡唑-5-基)乙醯胺
將N-[8-(二苯亞甲基胺基)-6-(4-乙基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-(2-四氫吡喃-2-基吡唑-3-基)乙醯胺(160 mg，0.26 mmol)於1 mL 4 M HCl/二噁烷中之混合物在25℃攪拌0.5 h。將溶劑除去，且將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈10至45/0.05% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈黃色固體狀之N-[8-胺基-6-(4-乙基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-(1H-吡唑-5-基)乙醯胺(5.3 mg，5.5%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.59，[M+H]+ = 373.1，方法= C。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ): 12.62 (s, 1H), 10.52 (s, 1H), 9.31(s, 1H), 8.49 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.39 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.35 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 6.34 (s, 2H), 6.22 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 3.83 (s, 2H), 2.64 (q,J = 7.6 Hz, 2H), 1.11 (t,J = 7.6 Hz, 3H)。 實例90： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物156) 步驟 1 ：(±)-5-(8-氯-3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基胺基甲酸第三丁酯
將N-(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)胺基甲酸第三丁酯(250 mg，0.87mmol)、[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]硼酸(350 mg，1.11 mmol)、Na2 CO3 (185 mg，1.75 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (35 mg，0.05 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)及H2 O (0.4 mL)中之混合物在90℃攪拌4 h。將反應物濃縮且藉由急驟管柱層析術(PE/EA=20%-60%)純化，得到呈白色固體狀之N-[5-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三丁酯(160 mg，36.2%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 478.1。步驟 2 ：(±)-N-[5-[8-(第三丁氧基羰基胺基)-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三丁酯
將胺基甲酸第三丁酯(178 mg，1.52 mmol)、N-[5-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三丁酯(160 mg，0.33mmol)、Pd3 (dba)2 (30 mg，0.03 mmol)、Brettphos (20 mg，0.04 mmol)及Cs2 CO3 (320 mg，0.98 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)中之混合物在90℃攪拌2 h。隨後將反應物冷卻至室溫且用水(20 mL)稀釋。將產物用乙酸乙酯(50 mLx2)萃取。將合併之乙酸乙酯層經Na2 SO4 乾燥且在真空中濃縮。將殘餘物藉由急驟管柱層析術(PE/EA=40%-70%)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-N-[5-[8-(第三丁氧基羰基胺基)-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三丁酯(80 mg，42.78%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 559.2。步驟 3 ：(±)-反式-N-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-N-[5-[8-(第三丁氧基羰基胺基)-3-[[反式-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三丁酯(90 mg，0.15 mmol)於二氯甲烷(2 mL)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)中之混合物攪拌4 h。將反應物濃縮且藉由製備型HPLC (乙腈5–40%/0.1% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-(反式)-N-[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(31.4 mg，60.1%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.49，[M+H]+ = 359.1，方法= C。1 H NMR (400 MHz, CD3 OD): 9.25 (s, 1H), 8.28 (s, 2H), 7.97 (s , 1H), 7.74 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.68 (s,1H), 2.66-2.64 (m, 1H), 2.14 (s,3H), 2.14-2.11(m, 1H), 1.62-1.54 (m, 2H)。 實例91： (±)-4-(8-胺基-3-((反式)-2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯羧醯胺(化合物157) 步驟 1 ：8-氯-3-((反式)-2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基硼酸
將(±)-反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.57 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(174 mg，0.68 mmol)、乙醯氧基鉀(140 mg，1.43 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (21 mg，0.03 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)中之混合物在密封管中在80℃攪拌3 h。將混合物濃縮，得到呈黑色固體狀之(±)-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]硼酸(150 mg，粗品)。此材料不經純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI): [M+H]+ = 316.1。步驟 2 ：(±)-4-(8-氯-3-((反式)-2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯羧醯胺
將粗(±)-[8-氯-3-[[反式-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]硼酸(150 mg，0.48 mmol)、4-溴-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯羧醯胺(140 mg，0.47 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (35 mg，0.05 mmol)及Na2 CO3 (101 mg，0.95 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)、H2 O (0.4 mL)中之混合物加熱3 h。將反應物濃縮且藉由急驟管柱層析術(PE/EA=40%-70%)純化，得到呈黃色固體狀之4-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯羧醯胺(120 mg，51.8%收率)。LCMS (ESI): [M+H]+ =487.1。步驟 3 ：(±)-4-(3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)-8-(二苯基亞甲基胺基)異喹啉-6-基)-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯羧醯胺
將4-[8-氯-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯羧醯胺(100 mg，0.21 mmol)、二苯甲酮亞胺(75 mg，0.41 mmol)、Cs2 CO3 (134 mg，0.41 mmol)、Pd2 (dba)3 (38 mg，0.04 mmol)及Xantphos (48 mg，0.08mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(3 mL)及甲苯(1 mL)中之混合物在140℃攪拌3 h。將反應物冷卻至室溫，用水(10 mL)稀釋，且用EA (20 mLx2)萃取。將合併之EA萃取物在真空中濃縮，得到呈褐色油狀之粗品4-[8-(二苯亞甲基胺基)-3-[[(1R,2R)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯羧醯胺(240 mgl，65.8%收率)。此粗材料不經純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI): [M+H]+ = 632.2。步驟 4 ：(±)-4-(8-胺基-3-((反式)-2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯羧醯胺
向(±)-4-[8-(二苯亞甲基胺基)-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯羧醯胺(240 mg，0.14 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(2 mL)及H2 O (0.5 mL)中之溶液中添加2滴TFA。將所得混合物攪拌1 h。將反應混合物藉由製備型HPLC (乙腈20–50%/0.1% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-4-[8-胺基-3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-3-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)苯羧醯胺(16.4 mg，26%收率)。 LCMS (ESI): RT (min) = 1.80，[M+H]+ = 468.1，方法= C。1 H NMR (400 MHz, CD3 OD): 9.25 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.76 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.40 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 4.17-4.10 (m, 2H), 2.67-2.62 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.14-2.09 (m, 1H), 1.62-1.52 (m, 2H)。 實例92： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-甲基-2-側氧基噁唑-3(2H)-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物159) 步驟 1 ：6-溴-8-氯-N ,N -雙(4-甲氧基苄基)異喹啉-3-胺
向NaH (1.25 g，31 mmol)於N -二甲基羧醯胺(50 mL)中之溶液中添加6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(2.0 g，7.77 mmol)，且將所得混合物在0℃攪拌30 min。添加4-甲氧基苄基氯(2.2 mL，16 mmol)。將混合物在室溫下攪拌隔夜。將混合物用飽和NH4 Cl淬滅，且用乙酸乙酯(200 mL)稀釋。將所得混合物用水及鹽水洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(EA : PE = 1:10)純化，得到呈黃色固體狀之6-溴-8-氯-N ,N -雙[(4-甲氧基苯基)甲基]異喹啉-3-胺(2.8 g，72%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 497.1。步驟 2 ：3-(雙(4-甲氧基苄基)胺基)-8-氯異喹啉-6-基胺基甲酸第三丁酯
將Pd2 (dba)3 (0.94 g，1.0 3mmol)、Xantphos (1.12 g，1.94 mmol)、K2 CO3 (1.87 g，13.55 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.4 g，11.95 mmol)及6-溴-8-氯-N ,N -雙[(4-甲氧基苯基)甲基]異喹啉-3-胺(2.8 g，5.62 mmol)於1,4-二噁烷(100 mL)中之混合物在90℃在Ar下攪拌隔夜。將混合物藉由矽膠管柱層析術( EA : PE = 1 : 10至1 : 8)直接純化，得到呈黃色固體狀之N -[3-[雙[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-8-氯-6-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(2.4 g，80%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 534.2。步驟 3 ：8-氯-N3,N3-雙(4-甲氧基苄基)異喹啉-3,6-二胺
將N -[3-[雙[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-8-氯-6-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(2.4 g，4.49 mmol)及Cs2 CO3 (4.8 g，14.72 mmol)於1,4-二噁烷(40 mL)及N ,N -二甲基羧醯胺(40 mL)中之溶液在130℃攪拌隔夜。將混合物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，且用水及鹽水洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。將殘餘物藉由矽膠層析術(EA:PE = 1:2)純化，得到呈紅色固體狀之8-氯-N3,N3-雙[(4-甲氧基苯基)甲基]異喹啉-3,6-二胺(900 mg，46%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 434.2。步驟 4 ：3-(雙(4-甲氧基苄基)胺基)-8-氯異喹啉-6-基胺基甲酸2-側氧基丙酯
在0℃下向經攪拌之三光氣(1.2 g，4.04 mmol)於四氫呋喃(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(3 mL，21.52 mmol)及8-氯-N 3,N 3-雙[(4-甲氧基苯基)甲基]異喹啉-3,6-二胺(900 mg，2.07 mmol)於四氫呋喃(20 mL)中之溶液。將混合物在0℃攪拌1 h，接著添加羥丙酮(2.0 g，27 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌隔夜。將混合物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，且用鹽水洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱(EA : PE = 1:2)純化，得到呈褐色固體狀之N -[3-[雙[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-8-氯-6-異喹啉基]胺基甲酸乙醯甲酯(650 mg，59%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 534.2。步驟 5 ：3-(8-氯-3-(4-甲氧基苄基胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基噁唑-2(3H)-酮
將N -[3-[雙[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-8-氯-6-異喹啉基]胺基甲酸乙醯甲酯(640 mg，1.2 mmol)於乙酸(40 mL)中之溶液加熱至120℃達2 h。溶劑蒸發後，將殘餘物溶於二氯甲烷(10 mL)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)中，且在室溫下繼續攪拌1 h。將反應物濃縮，得到呈紅色油狀之粗品3-[8-氯-3-[(4-甲氧基苯基)甲基胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-噁唑-2-酮(430 mg，91%收率)，其直接用於下一反應中。LCMS (ESI) [M+H]+ = 396.1。步驟 6 ：3-(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)-4-甲基噁唑-2(3H)-酮
將3-[8-氯-3-[(4-甲氧基苯基)甲基胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-噁唑-2-酮(430 mg，1.09 mmol)於2,2,2-三氟乙酸(8 mL)中之溶液在45℃下加熱1 h。將反應物濃縮，且將殘餘物再溶於DCM (50 mL)中，且用飽和碳酸氫鈉及鹽水洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析術(EA : PE = 1:2至EA : DCM = 1:1)純化，得到呈紅色固體狀之3-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-4-甲基-噁唑-2-酮(160 mg，53%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 276.0。步驟 7 ：(±)-反式-N -(8-氯-6-(4-甲基-2-側氧基噁唑-3(2H)-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(COCl)2 (0.09 mL，1.06 mmol)滴加至(±)-反式-2-氰基環丙烷羧酸(50 mg，0.45 mmol)及DMF (3 mg，0.04 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之懸浮液中。將混合物在室溫下再攪拌1 h。將混合物在室溫下蒸發以除去大部分DCM及(COCl)2 。將殘餘物懸浮於DCM (5 mL)中，且在0℃下滴加至3-(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)-4-甲基-噁唑-2-酮(80 mg，0.29 mmol)及吡啶(0.5 mL，6.18 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之混合物中。將反應混合物在0℃下再攪拌0.5 h。將反應混合物用DCM (50 mL)稀釋，用H2 O (20 mL)洗滌。將有機層分離，經Na2 SO4 乾燥，過濾且蒸發。將殘餘物藉由矽膠層析術(EA : PE = 1:2)純化，得到呈淡黃色固體狀之(±)-(反式)-N -[8-氯-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑-3-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(40 mg，37%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 369.1。步驟 8 ：3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)-6-(4-甲基-2-側氧基噁唑-3(2H)-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將胺基甲酸第三丁酯(230 mg，1.96 mmol)、Pd2 (dba)3 (35 mg，0.04 mmol)、Brettphos (35 mg，0.07 mmol)、Cs2 CO3 (210 mg，0.64 mmol)及反式-N -[8-氯-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑-3-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(70 mg，0.19 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱2天。將混合物藉由矽膠管柱(EA : PE = 1 : 1至100% EA)直接純化，得到呈黃色固體狀之(±)-N -[3-[[(反式)-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑-3-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(35 mg，41%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 450.1。步驟 9 ：反式-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-側氧基噁唑-3(2H)-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將N -[3-[[反式-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑-3-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(30 mg，0.07 mmol)於二氯甲烷(4 mL)2,2,2-三氟乙酸(1 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。反應物濃縮後，將殘餘物藉由MeOH中之銨中和。將所得混合物藉由逆相層析術(乙腈17-47/0.05%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈白色固體狀之(±)-(反式)-N-[8-胺基-6-(4-甲基-2-側氧基-噁唑-3-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(2.7 mg，12%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.572，[M+H]+ = 350.1，方法= C；1 H-NMR (400 MHz, CD3 OD): δ 9.26 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 4.65 (s,1H), 2.67-2.62 (m, 1H), 2.15-2.09 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.62-1.52 (m, 2H)。 實例93： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(2-甲基-6-側氧基哌嗪-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物160) 步驟 1 ：3-甲基-5-側氧基哌嗪-1-羧酸第三丁酯
將6-甲基哌嗪-2-酮(200 mg，1.75 mmol)、(Boc)2 O (420 mg，1.93 mmol)及Na2 CO3 (370 mg，3.49 mmol)於1,4-二噁烷(8 mL)及水(2 mL)中之混合物在25℃攪拌4 h。將反應物用水(10 ml)及EtOAc (20 ml)稀釋。隨後將有機物分離且乾燥(Na2 SO4 )。將殘餘物濃縮，得到呈白色固體狀之3-甲基-5-側氧基-哌嗪-1-羧酸第三丁酯(350 mg，93.2%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 215.1。步驟 2 ：4-(8-氯-3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-3-甲基-5-側氧基哌嗪-1-羧酸第三丁酯
將反式-N-(6-溴-8-氯-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(200 mg，0.57 mmol)、Pd2 (dba)3 (100 mg，0.11 mmol)、Xantphos (130 mg，0.22 mmol)、K3 PO4 (360 mg，1.7 mmol)及3-甲基-5-側氧基-哌嗪-1-羧酸第三丁酯(170 mg，0.79 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在Ar下在90℃攪拌3 h。將混合物藉由矽膠管柱(EA : PE = 1 : 2至1 : 1)直接純化，得到呈白色固體狀之4-[8-氯-3-[(反式-2-氰基環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-3-甲基-5-側氧基-哌嗪-1-羧酸第三丁酯(100 mg，36.2%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 484.1。步驟 3 ：4-(8-(第三丁氧基羰基胺基)-3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)異喹啉-6-基)-3-甲基-5-側氧基哌嗪-1-羧酸第三丁酯
將胺基甲酸第三丁酯(200 mg，1.71 mmol)、Pd2 (dba)3 (32 mg，0.03 mmol)、Brettphos (20 mg，0.04 mmol)、Cs2 CO3 (160 mg，0.49 mmol)及4-[8-氯-3-[(反式-2-氰基環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-3-甲基-5-側氧基-哌嗪-1-羧酸第三丁酯(80 mg，0.17 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar下在90℃攪拌3 h。將混合物藉由矽膠管柱(EA : PE = 2 : 1至4 : 1)直接純化，得到呈黃色固體狀之4-[8-(第三丁氧基羰基胺基)-3-[(反式-2-氰基環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-3-甲基-5-側氧基-哌嗪-1-羧酸第三丁酯(50 mg，0.09 mmol，53.6%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 565.1。步驟 4 ：反式-N-(8-胺基-6-(2-甲基-6-側氧基哌嗪-1-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
向4-[8-(第三丁氧基羰基胺基)-3-[(反式-2-氰基環丙烷羰基)胺基]-6-異喹啉基]-3-甲基-5-側氧基-哌嗪-1-羧酸第三丁酯(40 mg，0.07 mmol)溶於二氯甲烷(4 mL)中之溶液中添加TFA (2 mL，0.14 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2 h。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.1% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈白色固體狀之反式-N-[8-胺基-6-(2-甲基-6-側氧基-哌嗪-1-基)-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(9.7 mg，37.6%收率)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.35，[M+H]+ = 365.1，方法= C；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ): δ 11.09 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.16(s, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 6.30 (s, 2H), 4.05-3.92 (m, 2H), 3.17-3.12 (m, 2H), 2.78-2.74 (m, 3H), 2.17-2.11 (m, 1H), 1.61-1.56 (m, 1H), 1.45-1.42 (m, 1H), 1.01 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。 實例94： (±)-反式-N-(8-胺基-7-氟-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物161) 步驟 1 ：反式-N-(8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-2-氰基環丙烷羧酸(290 mg，2.61 mmol)、草醯二氯(0.2 mL，2.36 mmol)於DCM (3 mL)及一滴DMF中之混合物攪拌0.5 h。將反應混合物濃縮。在室溫下向8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(700 mg，2.17 mmol)於DCM(7 mL)及吡啶(0.5 mL)中之溶液中逐份添加濃酸性氯化物混合物。將混合物攪拌1 h。將反應物濃縮至乾燥，且將殘餘物吸收於EtOAc (50 mL)中，且用飽和NaHCO3 將pH調整至7至8。將有機層用100 mL飽和鹽水溶液洗滌。隨後將有機物分離且乾燥(NaSO4 )，之後濃縮至乾燥。將殘餘物用矽膠層析術(PE:EA =2:1至PE:EA=1:1)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(730 mg，40.2%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 416.0。步驟 2 ：反式-N-(8-氯-7-氟-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將反式-N-(8-氯-7-氟-6-碘-3-異喹啉基)-2-氰基-環丙烷羧醯胺(730 mg，1.76 mmol)、(4S)-4-甲基噁唑啶-2-酮(270 mg，2.67 mmol)、CuI (667 mg，3.51 mmol)、N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(616 mg，7 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物用矽膠層析術(PE:EA=4:1至PE:EA=1:1)純化，最終得到呈黃色固體狀之標題化合物(460 mg，40.9%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 389.1。步驟 3 ：3-(反式-2-氰基環丙烷羧醯胺基)-7-氟-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
將反式-N-[8-氯-7-氟-6-[(4S)-4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基]-3-異喹啉基]-2-氰基-環丙烷羧醯胺(450 mg，1.16 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.3 g，11.1 mmol)、Brettphos (120 mg，0.22 mmol)、Pd2 (dba)3 (210 mg，0.23 mmol)及Cs2 CO3 (1.1 g，3.37 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在Ar下在90℃下加熱3 h。將反應物濃縮至乾燥。將殘餘物藉由矽膠層析術(PE:EA=4:1至PE:EA=1:1)純化，得到呈白色固體狀之標題化合物(55 mg，6.2%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 470.2步驟 4 ：反式-N-(8-胺基-7-氟-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺
將N-[3-[[反式-2-氰基環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-[(4S)-4-甲基-2-側氧基-噁唑啶-3-基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(55 mg，0.12 mmol)、TFA (0.5 mL，0.12 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。將反應物濃縮至乾燥，且將殘餘物吸收於MeOH (2 mL)中國，且用飽和NaHCO3 將pH調整至7至8。將混合物藉由製備型HPLC (5%-95%甲醇及0.8g/L NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈黃色固體狀之標題化合物(16.7 mg，37.8%收率)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.65，[M+H]+ = 370.1，方法= B。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 11.14 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.06 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 6.39 (s, 2H), 4.67 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 4.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 4.06 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 2.75-2.71 (m, 1H), 2.15-2.12 (m, 1H), 1.61-1.57 (m, 1H), 1.42-1.40 (m, 1H), 1.15 (d,J = 6.0 Hz, 3H)。 實例95： (1S,2S)-N-(8-胺基-6-(5-甲基-2-側氧基-2,3-二氫苯并[d]噁唑-6-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物162)及(1R,2R)-N-(8-胺基-6-(5-甲基-2-側氧基-2,3-二氫苯并[d]噁唑-6-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物163)
使用如對於(±)-反式-N-(8-胺基-6-(5-甲基-2-側氧基-2,3-二氫苯并[d]噁唑-6-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺所述之程序製備標題化合物。將單一鏡像異構物藉由掌性SFC來分離。
化合物162：LCMS (ESI): RT(min) = 3.83，[M+H]+ = 400.1，方法= J。
化合物163：LCMS (ESI): RT(min) = 3.83，[M+H]+ = 400.1，方法= J。 實例96： (1S,2S)-N-(8-胺基-6-((R)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺(化合物164)
使用如對於(1S,2S)-N-(8-胺基-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物128)所述之程序製備標題化合物。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.7 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.0 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.84-5.02 (m, 1H), 4.58-4.72 (m ,1H), 4.56 (t, 1H), 4.04-4.07 (m, 1H), 2.23-2.51 (m, 1H), 1.63-1.70 (m, 1H), 1.14-1.3 (m, 4H) 實例97： (1S,2R)-N-(8-胺基-6-((R)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺(化合物165)
使用如對於(1S,2S)-N-(8-胺基-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物128)所述之程序製備標題化合物。LCMS (ESI): RT(min) = 1.52，[M+H]+ = 345.2，方法= B。 實例98： (1S,2S)-N-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物166)及(1R,2R)-N-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物167)
使用如對於(±)-反式-N-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物156)所述之程序製備標題化合物。將單一異構物藉由掌性SFC來分離。
化合物166：1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.08 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.31 (s, 2H), 5.18 (s, 1H), 2.73-2.77 (m, 1H), 2.12-2.14 (m, 1H), 1.59-1.61 (m, 1H), 1.40-1.57 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 2.48，[M+H]+ = 359.1，方法= J。
化合物167：1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.08 (s, 1H), 9.31 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.31 (s, 2H), 5.18 (s, 1H), 2.73-2.77 (m, 1H), 2.12-2.14 (m, 1H), 1.59-1.61 (m, 1H), 1.40-1.57 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 2.48，[M+H]+ = 359.1，方法= J。 實例99： (1S,2S)-N-(8-胺基-6-(4-甲基異噻唑-5-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物168)及(1R,2R)-N-(8-胺基-6-(4-甲基異噻唑-5-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物169)
使用如對於(±)-反式-N-(8-胺基-6-(4-甲基異噻唑-5-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物62)所述之程序製備標題化合物。將單一異構物藉由掌性SFC來分離。
化合物168：1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.18 (s, 1H), 3.34 (s, 1H), 8.48 (s, H), 8.29 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.55 (s, 2H), 2.74-2.76 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.08-2.17 (m, 1H), 1.62-1.63 (m, 1H), 1.40-1.45 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 4.66，[M+H]+ = 350.1，方法= J。
化合物169：1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.18 (s, 1H), 3.34 (s, 1H), 8.48 (s, H), 8.29 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.55 (s, 2H), 2.74-2.76 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.08-2.17 (m, 1H), 1.62-1.58 (m, 1H), 1.40-1.45 (m, 1H)。)。LCMS (ESI): RT(min) = 4.66，[M+H]+ = 350.1，方法= J。 實例100： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物170)
使用類似於如對於(±)-反式-N-(8-胺基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物123)所述之程序的程序製備標題化合物。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.09 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.29 (d, J = 9.8 Hz, 2H), 7.66 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.00 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.68 (dd, J = 3.0, 0.8 Hz, 1H), 6.37 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 2.80 – 2.73 (m, 1H), 2.17 – 2.11 (m, 1H), 1.63 – 1.55 (m, 1H), 1.48 – 1.40 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 2.76，[M+H]+ = 383.1，方法= J。 實例101： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物171)
使用類似於如對於(±)-反式-N-(8-胺基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物123)所述之程序的程序製備標題化合物。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.11 (s, 1H), 9.36 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.40 – 8.29 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.06 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.44 (s, 2H), 4.24 (s, 3H), 2.77 (dd, J = 10.8, 8.0 Hz, 1H), 2.19 – 2.09 (m, 1H), 1.65 – 1.56 (m, 1H), 1.49 – 1.39 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 3.09，[M+H]+ = 384.1，方法= J。 實例102： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(2-甲基-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物172)
使用類似於如對於(±)-反式-N-(8-胺基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物123)所述之程序的程序製備標題化合物。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.11 (s, 1H), 9.35 (s, 1H), 9.15 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.32 (d, J = 14.3 Hz, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.02 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.39 (s, 2H), 4.30 (s, 3H), 2.75 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 2.19 – 2.09 (m, 1H), 1.64 – 1.55 (m, 1H), 1.49 – 1.39 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 2.70，[M+H]+ = 384.1，方法= J。 實例103： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(5,5-二甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物173)
使用類似於如對於(1S,2S)-N-(8-胺基-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物128)所述之程序的程序製備標題化合物。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.01 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.21 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.34 (s, 2H), 3.89 (s, 2H), 2.74 (dd, J = 11.4, 7.2 Hz, 1H), 2.18 – 2.09 (m, 1H), 1.60 – 1.55 (m, 1H), 1.48 (s, 6H), 1.42 (dt, J = 10.2, 5.1 Hz, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 3.58，[M+H]+ = 366.1，方法= J。 實例104： 反式-N-(8-胺基-6-((S)-4-異丙基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物174)
使用類似於如對於(1S,2S)-N-(8-胺基-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物128)所述之程序的程序製備標題化合物。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.03 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.00 (s, 2H), 6.35 (s, 2H), 4.63 (dd, J = 8.4, 4.1 Hz, 1H), 4.42 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 9.0, 4.0 Hz, 1H), 2.73 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 2.16 – 2.07 (m, 2H), 1.61 – 1.55 (m, 1H), 1.42 (dt, J = 9.3, 4.7 Hz, 1H), 0.88 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.75 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT(min) = 3.89，[M+H]+ = 380.1，方法= J。 實例105： 反式-N-(8-胺基-6-((R)-4-異丙基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物175)
使用類似於如對於(1S,2S)-N-(8-胺基-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物128)所述之程序的程序製備標題化合物。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.03 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.00 (s, 2H), 6.35 (s, 2H), 4.69 – 4.59 (m, 1H), 4.42 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 8.9, 4.0 Hz, 1H), 2.79 – 2.69 (m, 1H), 2.18 – 2.06 (m, 2H), 1.64 – 1.54 (m, 1H), 1.46 – 1.37 (m, 1H), 0.88 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.75 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT(min) = 3.98，[M+H]+ = 380.2，方法= J。 實例106： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物176)
使用類似於如對於(1S,2S)-N-(8-胺基-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物128)所述之程序的程序製備標題化合物。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.01 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.20 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.35 (s, 2H), 4.47 – 4.40 (m, 2H), 4.13 – 4.06 (m, 2H), 2.78 – 2.71 (m, 1H), 2.17 – 2.08 (m, 1H), 1.61 – 1.54 (m, 1H), 1.46 – 1.38 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 3.02，[M+H]+ = 338.1，方法= J。 實例107： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(2-側氧基四氫-2H-環戊[d]噁唑-3(3aH)-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物177)
使用類似於如對於(1S,2S)-N-(8-胺基-6-((S)-4-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷羧醯胺(化合物128)所述之程序的程序製備標題化合物。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.02 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.16 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.35 (s, 2H), 5.14 – 5.04 (m, 1H), 4.89 (s, 1H), 2.73 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 2.16 – 2.08 (m, 1H), 2.01 – 1.93 (m, 1H), 1.86 – 1.76 (m, 3H), 1.68 (s, 1H), 1.63 – 1.52 (m, 2H), 1.42 (d, J = 4.3 Hz, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 3.73，[M+H]+ = 378.1，方法= J。 實例108： (±)-反式-N-(8-胺基-6-(N,N-二甲基磺醯胺基)異喹啉-3-基)環丙烷-1,2-二羧醯胺(化合物178)
LCMS (ESI): RT(min) = 3.32，[M+H]+ = 378.1，方法= N*。 實例109： (±)-反式 - N-(8-胺基-6-(N,N-二甲基磺醯胺基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物179)
LCMS (ESI): RT(min) = 3.39，[M+H]+ = 369.1，方法= N*。 實例110： (1S ,2S )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物180)及(1R ,2R )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物181) 步驟 1 ：4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-胺
將2-氯-4-甲基吡啶-3-胺(5.0 g，35 mmol)、(1-甲基-1H-吡唑-5-基)硼酸(13.25 g，105.2 mmol)、K3 PO4 (22.33 g，105.20 mmol)及Pd(dppf)Cl2 (2.57 g，3.51 mmol)於10:1二噁烷/水(110 mL)中之混合物在100℃下加熱。3 h後，將固體過濾且將濾液在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析術(3:2石油醚/乙酸乙酯)純化所得殘餘物，得到呈褐色固體狀之4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-胺(2.0 g，30%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 189。步驟 2 ：3-碘-4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶
向冰冷4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-胺(0.50 g，2.7 mmol)、t-BuNO2 (1.09 g，10.6 mmol)於CH3 CN (10 mL)中之溶液中添加CuI (2.02 g，10.6 mmol)。將所得混合物溫熱至室溫。16 h後，將反應物依序用氫氧化銨(10 mL)及水(10 mL)稀釋。將所得溶液用二氯甲烷(20 mL)萃取。將有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析術(3:1 乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈黃色固體狀之3-碘-4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶(0.30 g，38%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 300。步驟 3 ：8-氯-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-胺
將(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)硼酸(892 mg，4.01 mmol)、3-碘-4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶(0.60 g，2.0 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (147 mg，0.20 mmol)、AcONa (164 mg，2.01 mmol)及K3 PO4 (1.28 g，6.02 mmol)於10:1 1,4-二噁烷/水(22 mL)中之混合物在100℃下加熱。2 h後，將固體過濾且將濾液在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析術(乙酸乙酯)純化，得到呈暗紅色固體狀之8-氯-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-胺(0.70 g，74%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 350。步驟 4 ：反式-N -[8-氯-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
向冰冷8-氯-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-胺(632 mg，1.81 mmol)、反式-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧酸(0.20 g，1.2 mmol)及吡啶(6.00 mL)於二氯甲烷(40.00 mL)中之溶液中滴加POCl3 (277 mg，1.81 mmol)。將混合物溫熱至室溫。30 min後，將過量POCl3 用水(30 mL)淬滅。將所得溶液用二氯甲烷(100 mL)萃取。將收集之有機物經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈暗紅色固體狀之粗品反式-N-[8-氯-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(0.60 g)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 498。步驟 4 ：反式-N -(3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯
將反式-N-[8-氯-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(0.80 g，1.61 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(3.76 g，32.1 mmol)、Pd2 (dba)3 (294 mg，3.21 mmol)、BrettPhos (302 mg，0.56 mmol)及t-BuONa (386 mg，4.03 mmol)於二噁烷(20 mL)中之懸浮液在90℃下加熱。16 h後，將固體過濾且將濾液在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析術(乙酸乙酯)純化，得到呈黃色固體狀之反式-N-(3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(350 mg，38%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 579。步驟 5 ：(1S ,2S )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺及(1R ,2R )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺
在室溫下向反式-N-(3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]-6-[4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基]異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(0.30 g，0.52 mmoL)於N,N-二甲基羧醯胺(2.0 mL)中之溶液中添加HCl (5 mL，4 M於二噁烷中)。1 h後，將反應物在真空中濃縮。藉由製備型HPLC純化粗材料，得到呈淡黃色固體狀之外消旋產物(60 mg，24%)。將鏡像異構物藉由掌性SFC來分離。
化合物180：1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.17 (s, 1H), 8.56 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.49 (d,J = 5.7 Hz, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.20 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.47(d,J = 1.3 Hz, 1H), 5.99 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 2.38 - 2.33 (m, 1H), 2.29 (s,3H), 2.12 - 2.04 (m,1H), 1.57 - 1.53 (m,1H), 1.30 - 1.18 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.23，[M+H]+ = 479，方法= K。
化合物181：1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.17 (s, 1H), 8.56 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.49 (d,J = 5.7 Hz, 2H), 7.37(s, 1H), 7.20 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.47 (d,J = 1.3 Hz,1H), 5.99(d,J = 2.0 Hz, 1H), 3.86 (s,3H), 3.81 (s,3H), 2.38 - 2.33 (m, 1H), 2.29 (s,3H), 2.12 - 2.04 (m,1H), 1.57 - 1.53 (m, 1H), 1.30 - 1.18 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.22，[M+H]+ = 479，方法= K。 實例111： (1R ,2R )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-苯基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物182)及(1S ,2S )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-苯基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物183)
藉由遵循如對於(1S,2S)-N-(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物180)所述之程序且進行輕微變化製備標題化合物。將鏡像異構物藉由掌性SFC來分離。
化合物182：1 HNMR (300MHz, CD3 OD) δ 9.14 (s,1H), 8.47 (s,1H), 8.13 (s,1H), 7.50 (s,1H), 7.44 - 7.26 (m, 4H), 7.22 - 7.11 (m, 3H), 6.78 (s, 1H), 6.50 (d,J = 1.3 Hz, 1H), 3.85 (d,J = 0.6 Hz, 3H), 2.41 - 2.31 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.13 - 2.04 (m, 1H), 1.56 - 1.53 (m, 1H), 1.32 - 1.17 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.13，[M+H]+ = 474，方法= K。
化合物183；1 HNMR (300MHz, CD3 OD) δ 9.14 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.44 - 7.26 (m, 4H), 7.22 - 7.11 (m, 3H), 6.78 (s, 1H), 6.50 (d,J = 1.3 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.41 - 2.31 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.13 - 2.04 (m, 1H), 1.56 - 1.53 (m, 1H), 1.32 - 1.17 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.13，[M+H]+ = 474，方法= K。 實例112： (±)-反式-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物184)
藉由遵循如對於(1S,2S)-N-(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物180)所述之程序但是取代3-溴-4-甲基-2-(哌啶-1-基)吡啶且進行輕微變化製備標題化合物。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.75 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.06 (d,J =5.0 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.29 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 6.94 - 6.80 (m, 2H), 6.53 (d,J = 1.4 Hz, 1H), 6.20 (s, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.96 (s, 4H), 2.19 (t,J = 7.1 Hz, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.36 (qd,J =7.0, 6.2, 4.3Hz, 3H), 1.25 (d,J = 8.3Hz, 4H), 1.20 - 1.10 (m,1H)。LCMS (ESI): RT (min) = 2.02，[M+H]+ = 482.3，方法= K。 實例113： (±)-反式-N -(8-胺基-6-(2-胺基-3-甲基吡啶-4-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物185)
藉由遵循如對於(±)-反式-N-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物156)所述之程序且進行輕微變化製備標題化合物。1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.75 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.83 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 6.53-6.41 (m, 2H), 6.31 (s, 2H), 5.78 (s, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.20-2.16 (m, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.44-1.32 (m, 1H), 1.17-1.14 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.05，[M+H]+ = 414.1，方法= K。 實例114： (±)-反式-N -(8-胺基-6-[4-甲基-5-[(丙-2-基)胺基]吡啶-3-基]異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷-1-羧醯胺(化合物186)
藉由遵循如對於(±)-反式-N-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物156)所述之程序且進行輕微變化製備標題化合物。1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.26 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.68 (d,J = 1.4 Hz, 1H), 3.83 - 3.80 (m, 1H), 2.71 - 2.60 (m, 1H), 2.18 - 2.03 (m, 4H), 1.58 - 1.54 (m, 2H), 1.33 (d,J = 12 Hz, 6H)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.03，[M+H]+ = 401.1，方法= K。 實例115： (±)-反式-(1S ,2R )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)環丙烷羧醯胺(化合物187)
藉由遵循如對於(1S,2S)-N-(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物180)所述之程序且進行輕微變化製備標題化合物。1 H NMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.28 (s, 1H), 8.41 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.26 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.83 - 2.59 (m, 2H), 2.18 (t,J = 0.7 Hz, 3H), 2.01 (dt,J = 8.7, 4.5 Hz, 1H), 1.85 - 1.58 (m, 1H), 1.33 (dt,J = 9.0, 4.7 Hz, 1H), 1.07 - 1.00( m, 1H)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.207，[M+H]+ = 438.2，方法= K。 實例116：N -(8-胺基-6-(2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(化合物188) 步驟 1 ：4-(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-羧酸第三丁酯
向4-[(三氟甲烷)磺醯基氧基]-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-羧酸第三丁酯(0.50 g，1.36 mmol，(J.Med. Chem. 2014,57 , 2462)、(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)硼酸(602 mg，2.71 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (198 mg，0.27 mmol)於5:1二噁烷/水(12 mL)中之混合物中添加K3 PO4 (288 mg，1.36 mmol)及NaOAc (167 mg，2.04 mmol)。將懸浮液在100℃下加熱1 h。將反應物在真空中濃縮，且將所得殘餘物藉由急驟管柱層析術(10:1二氯甲烷/甲醇)純化，得到呈黃色固體狀之4-(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-羧酸第三丁酯(0.30 g，56%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 397.1。步驟 2 ：4-(8-氯-3-環丙烷醯胺基異喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-羧酸第三丁酯
在25℃下向4-(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-羧酸第三丁酯(0.40 g，1.0 mmol)於四氫呋喃(20 mL)中之溶液中添加環丙烷羰基氯(0.120 g，1.15 mmol)及吡啶(0.20 g，2.5 mmol)。3 h後，將反應物在真空下濃縮，得到呈黃色固體狀之粗品4-(8-氯-3-環丙烷醯胺基異喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-羧酸第三丁酯(0.50 g)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 465.1。步驟 3 ：4-(8-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-3-環丙烷醯胺基異喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-羧酸第三丁酯
將4-(8-氯-3-環丙烷醯胺基異喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-羧酸第三丁酯(0.50 g，1.08 mmol)、N-[(第三丁氧基)羰基]胺基甲酸第三丁酯(2.50 g，11.5 mmol)、Pd2 (dba)3 (0.20 g，0.22 mmol)、BrettPhos (0.20 g，0.37 mmol)及t-BuONa (0.260 g，2.71 mmol)於二噁烷(50 mL)中之懸浮液在90℃下加熱。1 h後，將反應物在真空中濃縮，且將所得殘餘物藉由急驟管柱層析術(10:1二氯甲烷/甲醇)純化，得到呈黃色固體狀之4-(8-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-3-環丙烷醯胺基異喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-羧酸第三丁酯(0.40 g，68%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 546.1。步驟 4 ：N -(8-胺基-6-[1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基]異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺
在25℃下向4-(8-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-3-環丙烷醯胺基異喹啉-6-基)-1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-羧酸第三丁酯(250 mg，0.46 mmol)於二噁烷(10 mL)中之溶液中添加濃鹽酸(10 mL)。30 min後，將反應物在真空中濃縮，且將所得殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之N-(8-胺基-6-[1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基]異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(4.7 mg，3%)。1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.80 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.11-7.02 (m, 1H), 6.73 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 6.36 (s, 2H), 6.18 (s, 1H), 3.55 - 3.50 (m, 2H), 3.20 - 3.15 (m, 2H), 2.06 - 2.01 (m, 1H), 0.84 - 0.80 (m, 4H)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.193，[M+H]+ = 346.1，方法= K。 實例117： (S )-N -(8-胺基-6-(2-甲基-2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(化合物189)及(R )-N -(8-胺基-6-(2-甲基-2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(化合物190)
藉由遵循如對於N-(8-胺基-6-[1H,2H,3H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基]異喹啉-3-基)環丙烷羧醯胺(化合物188)所述之程序且進行輕微變化製備標題化合物。將單一異構物藉由掌性SFC來純化。
化合物189：1 H NMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.21 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 4.18 - 3.91 (m, 1H), 3.34 - 3.31 (m, 1H), 2.81 (dd,J = 16.8 Hz, 7.7 Hz, 1H), 1.98 - 1.90 (m, 1H), 1.29 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 1.05 - 0.99 (m, 2H), 0.98 - 0.85 (m, 2H)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.09，[M+H]+ = 360.3，方法= K。
化合物190：1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.21 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 4.18 - 3.91 (m, 1H), 3.34 - 3.31 (m, 1H), 2.81 (dd,J = 16.8, 7.7 Hz, 1H), 1.98 - 1.90 (m, 1H), 1.29 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 1.05 - 0.99 (m, 2H), 0.98 - 0.85 (m, 2H)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.09，[M+H]+ = 360.3，方法= K。 實例118： (±)-(1S* ,2S* ,3R* )-N -(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷羧醯胺(化合物191)及(±)-(1S* ,2S* ,3S* )-N -(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷羧醯胺(化合物192) 步驟 1 ：2-[(苄氧基)甲基]-N -[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺
向冰冷8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(282 mg，1.05 mmol)於二氯甲烷(30 mL)中之溶液中依序添加吡啶(6.0 mL，74 mmol)、反式-2-[(苄氧基)甲基]-3-甲基環丙烷-1-羧酸(0.30 g，1.4 mmol)及POCl3 (321 mg，2.09 mmol)。將反應混合物溫熱至25℃達30 min，之後添加水(20 mL)。將所得溶液用二氯甲烷(3 × 30 mL)萃取。將合併之有機物經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈黃色固體狀之2-[(苄氧基)甲基]-N-[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(210 mg，43%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 472.0步驟 2 ：N -(3-[[2-[(苄氧基)甲基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯
將反式-2-[(苄氧基)甲基]-N-[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(420 mg，0.89 mmol)、NH2 Boc (2.61 g，22 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (184 mg，0.18 mmol)、Brettphos (191 mg，0.36 mmol)及Cs2 CO3 (1.16 g，3.57 mmol)於二噁烷(10 mL)中之懸浮液在120℃下加熱。1.5 h後，將反應物在真空中濃縮，且將所得殘餘物藉由急驟管柱層析術(4:1乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈黃色固體狀之N-(3-[[2-[(苄氧基)甲基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(450 mg，92%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 472.2。步驟 3 ：3-(2-(羥甲基)-3-甲基環丙烷羧醯胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三丁酯
向N-(3-[[(1S,2S)-2-[(苄氧基)甲基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(350 mg，0.63 mmol)及Pd(OH)2 /碳(2.5 g)於甲醇(30 mL)中之懸浮液在25℃在H2 (1 atm)下攪拌30 min。將固體過濾且將濾液在真空中濃縮，得到呈淡綠色固體狀之N-(3-[[(2-(羥甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(0.20 g，68%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 463.3。步驟 4 ：2-(8-(第三丁氧基羰基胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺甲醯基)-3-甲基環丙基)甲基甲烷磺酸酯
向冰冷N-(3-[[(1S,2S)-2-(羥甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(140 mg，0.30 mmol)及三乙胺(183 mg，1.81 mmol)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液中滴加MsCl (138 mg，1.21 mmol)。將反應混合物溫熱至25℃達30 min，之後添加水(10 mL)。將所得溶液用二氯甲烷(50 mL)萃取。將有機萃取物經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之粗品2-(8-(第三丁氧基羰基胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺甲醯基)-3-甲基環丙基)甲基甲烷磺酸酯(150 mg)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 541.3。步驟 5 ：N -(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯
將N-(3-[[2-(甲烷磺醯基甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(0.10 g)及KCN (99 mg，1.5 mmol)於DMSO (3 mL)中之溶液在50℃下加熱。2 h後，將反應物用水(20 mL)稀釋。將所得溶液用二氯甲烷(50 mL)萃取。將收集之有機物經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析術(10:1二氯甲烷/甲醇)純化，得到呈褐色固體狀之N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(0.070 g，78%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 472.3。步驟 6 ：(±)-(1S* ,2S* ,3R* )-N -(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷羧醯胺及(±)-(1S* ,2S* ,3S* )-N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷羧醯胺
在25℃下向N-(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(0.070 g，0.15 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(1.0 mL，13 mmol)。25 min後，用2 M水性碳酸氫鈉將反應混合物調整至pH = 8。將所得溶液用二氯甲烷(50 mL)萃取。將收集之有機物經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由製備型HPLC純化，得到兩種非鏡像異構物。
化合物191：1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ) 10.80 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.67 - 8.39 (m, 2H), 8.26 (s, 1H), 7.45 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 6.97 - 6.81 (m, 1H), 6.55 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 6.37 (s, 2H), 2.81 (dd,J = 17.6, 7.3 Hz, 1H), 2.69 (dd,J = 17.7, 7.7 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.79 (t,J = 4.5 Hz, 1H), 1.71 – 1.57 (m, 1H), 1.52 – 1.37 (m, 1H), 1.17 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.153，[M+H]+ = 372.2，方法= C。
化合物192：1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ) 10.79 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.48 - 8.36 (m, 2H), 8.28 (s, 1H), 7.35 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 6.99 - 6.86 (m, 1H), 6.55 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 6.34 (s, 2H), 2.83 - 2.61 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.15 - 2.03 (m, 1H), 1.58 - 1.45 (m, 1H), 1.36 (dt,J = 9.1, 6.1 Hz, 1H), 1.17 (d,J = 6.1 Hz, 3H)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.924，[M+H]+ = 372.2 方法= C。 實例119： (2S )-2-(4-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物193)及(2R )-2-(4-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物194) 步驟 1 ：2-(4-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-1H-吡唑-1-基)丙腈
將8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(250 mg，0.86 mmol)、2-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丙腈(1.04 g，5.21 mmol)、第3代t-BuBrettPhos預催化劑(370 mg，0.43 mmol)、t-BuBrettPhos (210 mg，0.43 mmol)及碳酸鉀(720 mg，5.2 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之懸浮液在120℃下加熱。16 h後，將反應物在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析術(100%乙酸乙酯)純化，得到呈黃色油狀之2-(4-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-1H-吡唑-1-基)丙腈(240 mg，68%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 407.1。步驟 2 ：N -(3-[[1-(1-氰基乙基)-1H-吡唑-4-基]胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯
將2-(4-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-1H-吡唑-1-基)丙腈(0.420 g，1.03 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(3.63 g，31.0 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (160 mg，0.15 mmol)、BrettPhos (110 mg，0.20 mmol)及Cs2 CO3 (1.35 g，4.12 mmol)於1,4-二噁烷(50 mL)中之懸浮液在90℃下加熱。3 h後，將反應物在真空中濃縮，且將所得殘餘物藉由急驟管柱層析術(95:5二氯甲烷/甲醇)純化，得到呈褐色油狀之N-(3-[[1-(1-氰基乙基)-1H-吡唑-4-基]胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(0.40 g，79%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 488.3。步驟 3 ：(2S )-2-(4-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈及(2R )-2-(4-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈
在25℃下向N-(3-[[1-(1-氰基乙基)-1H-吡唑-4-基]胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(350 mg，0.71 mmol)於二氯甲烷(10.0 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(10.0 mL，134 mmol)。1 h後，將反應物在真空中濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC純化，接著藉由掌性SFC純化，得到兩種鏡像異構物。
化合物193：1 HNMR (300MHz, CD3 OD) δ 9.29 (s, 1H), 8.76 (s,1H), 8.49 (d,J =5.0 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.09 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 7.62 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 7.39 - 7.34 (m, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.76 (d,J =6.1 Hz, 1H), 6.13 (s, 2H), 5.82 (q,J = 7.1 Hz, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.80 (d,J = 7.1 Hz, 3H)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.08，[M+H]+ = 388.2。方法= K。
化合物194：1 HNMR (300MHz, CD3 OD) δ 9.29 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.49 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.09 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 7.62 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 7.39 – 7.34 (m, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.76 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.13 (s, 2H), 5.82 (q,J = 7.1 Hz, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.80 (d,J = 7.1 Hz, 3H)。LCMS (ESI) RT (min) = 1.08，[M+H]+ = 388.2。方法= K。 實例120： (1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物195)、(1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物196)、(1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物197)及(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物198) 步驟 1 ：四氟硼酸乙基二苯基鋶
在N2 下在室溫下向AgBF4 (37.48 g，192.5 mmol)於二氯甲烷(450 mL)中之溶液中添加碘乙烷(30.0 g，192 mmol)。30 min後，添加二苯硫醚(107 g，574 mmol)，且將反應混合物溫熱至35℃。16 h後，將固體過濾出來，且將濾液在真空下濃縮。將所得殘餘物用二氯甲烷/乙醚(3 × 500 mL)沖洗，得到呈灰白色固體狀之四氟硼酸乙基二苯基鋶(ethyldiphenylsulfanium tetrafluoroboranuide) (25 g，39%)。步驟 2 ：(2E)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯酸第三丁酯
將4-碘-1-甲基-1H-吡唑(5.0 g，24 mmol)、丙-2-烯酸第三丁酯(9.23 g，72.0 mmol)、三乙胺(2.91 g，28.8 mmol)、Pd(OAc)2 (538 mg，2.40 mmol)及P(o-Tol)3 (1.46 g，4.80 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(20 mL)中之溶液在110℃下加熱。16 h後，將反應物在真空下濃縮，且將所得殘餘物藉由急驟管柱層析術(3:1石油醚/乙酸乙酯)純化，得到呈淡黃色油狀之(2E)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯酸第三丁酯(3.9 g，74%)。LCMS (ESI): M+H+ = 209.0。步驟 3 ：2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧酸第三丁酯
在–78℃下向四氟硼酸乙基二苯基鋶(6.53 g，21.6 mmol)於1,2-二甲氧基乙烷(100 mL)及二氯甲烷(15 mL)中之溶液中滴加LDA (12.6 mL，235.24 mmol，2 M於THF中)。30 min後，在–78℃下將1,2-二甲氧基乙烷(10 mL)中之(2E)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯酸第三丁酯(1.50 g，7.20 mmol)滴加至內鎓鹽溶液中。添加後，將反應物溫熱至室溫。16 h後，將反應物用水(100 mL)稀釋，且將所得混合物用氯仿(3 × 150 mL)萃取。將收集之有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮，得到呈淡黃色油狀之粗品2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧酸第三丁酯(1.5 g)。步驟 4 ：2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧酸
在室溫下向2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧酸第三丁酯(0.60 g，2.5 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(10 mL)。5 h後，將反應物在真空下濃縮，且將所得殘餘物用水(45 mL)稀釋。用10 M氫氧化鈉將水溶液鹼化至pH = 9至10。隨後將水溶液用乙醚(30 mL)洗滌，且用1 M水性鹽酸將所得水溶液酸化至pH = 3至4。將酸性水溶液用乙酸乙酯(3 × 70 mL)萃取。將合併之有機萃取物在真空下濃縮，得到呈灰白色固體狀之粗品2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧酸(450 mg，70%純度，含有30% TFA)。LCMS (ESI): M+H+ = 181.0；步驟 5 ：N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
將8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(1.0 g，3.5 mmol)、2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧酸(690 mg，3.8 mmol)、吡啶(7 mL)及炔丙醇(953 mg，6.22 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之混合物在室溫下攪拌30 min。將反應混合物用水稀釋，且將所得溶液用二氯甲烷萃取。將有機層合併且在真空下濃縮。藉由急驟管柱層析術(30:1二氯甲烷/甲醇)純化，得到呈黃色固體狀之N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(750 mg，48%)。LCMS (ESI): M+H+ =450.2步驟 6 ：N -(7-氟-3-[[2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯
向N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(2.0 g，4.45 mmol)於1,4-二噁烷(260 mL)中之溶液中添加胺基甲酸第三丁酯(11.5 g，98.2 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿(691 mg，0.67 mmol)、二環己基[3,6-二甲氧基-2',4',6'-三(1-甲基乙基)[1,1'-聯苯]-2-基]膦(477 mg，0.89 mmol)及碳酸銫(7.3 g，22.41 mmol)。將所得懸浮液在90℃攪拌加熱。2.5 h後，將固體過濾且將濾液在真空下濃縮。將所得殘餘物藉由急驟管柱層析術(15:1二氯甲烷/甲醇)純化，得到呈黃色固體狀之N-(7-氟-3-[[2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(1.2 g，51%)。LCMS (ESI): M+H+ =531.1。步驟 7 ：(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺、(1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺、(1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺及(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺
將N-(7-氟-3-[[2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸酯(1.0 g，1.88 mmol)於二氯甲烷(25 mL)及三氟乙酸(25 mL)中之溶液在室溫下攪拌1.5 h。將反應物在真空下濃縮。藉由製備型HPLC及掌性SFC純化，得到四種異構物。
化合物195：1 HNMR (400MHz, CD3 OD) δ 9.30 (s, 1H), 8.47 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.45 (t,J = 6.2 Hz, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.00 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.34 - 2.32 (m, 4H), 2.17 - 2.14 ( m, 1H), 1.62 - 1.48 (m, 1H), 1.35 (d,J =6.4 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.14，[M+H]+ = 461.3，方法= K。
化合物196：1 HNMR (400MHz, CD3 OD) δ 9.31 (s, 1H), 8.46 (d,J =5.2 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.42 (d,J =5.2 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 6.98 (d,J =6.0 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.52 - 2.49 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 1.99 - 1.97 (m, 1H), 1.79 - 1.72 (m, 1H), 1.17 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.15，[M+H]+ = 461.3，方法= K。
化合物197：1 HNMR (400MHz, CD3 OD) δ 9.31 (s, 1H), 8.46 (d,J =5.2 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.43 (d,J =5.2 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 6.98 (d,J =6.0 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.53 - 2.49 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 1.99 - 1.97 (m, 1H), 1.77 - 1.72 (m, 1H), 1.17 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.15，[M+H]+ = 461.3，方法= K。
化合物198：1 H NMR (400MHz, CD3 OD) δ 9.30 (s, 1H), 8.47 (d,J =5.2 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.45 (t,J = 6.2 Hz, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.00 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.34 - 2.32 (m, 4H), 2.17 - 2.14 (m, 1H), 1.67 - 1.61 (m, 1H), 1.35 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.14，[M+H]+ = 461.3，方法= K。 實例121： (R )-2-(3-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物199及(S )-2-(3-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物200)
使用如對於(2S)-2-(4-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物193)所述之程序製備標題化合物。將單一異構物藉由掌性HPLC來分離。
化合物199：1 H NMR (400 MHz,CD3 OD) δ 9.14 (s, 1H), 8.39 (d,J = 4.4 Hz, 2H), 7.80 (s, 1H), 7.67 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.40 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.25 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 5.59-5.54 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 1.91 (d,J = 6.8 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT (min) = 0.99，[M+H]+ = 461.3，方法= K。
化合物200：1 HNMR (400 MHz,CD3 OD) δ 9.14 (s, 1H), 8.39 (d,J = 4.4 Hz, 2H), 7.80 (s, 1H), 7.67 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.40 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.25 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 5.59 - 5.54 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 1.91 (d,J = 6.8 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT (min) = 0.99，[M+H]+ = 461.3，方法= K。 實例122： (S )-2-(4-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物201)及(R )-2-(4-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物202)
藉由遵循如對於(2S)-2-(4-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物193)所述之程序且進行輕微變化製備標題化合物。將鏡像異構物藉由掌性HPLC來分離。
化合物201：1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.12 (s, 1H), 8.39 - 8.37 (m, 2H), 8.06 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.37(d,J = 5.1 Hz, 1H), 6.82 (d,J = 5.1 Hz, 2H), 6.45 (s, 1H), 5.62 (q,J = 7.2 Hz, 1H), 2.37 (s, 3H), 1.90 (d,J = 7.2 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.585，[M+H]+ = 370.2，方法= K。
化合物202：1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.12 (s, 1H), 8.39 - 8.37 (m, 2H), 8.06 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.37(d,J =5.1 Hz, 1H), 6.82 (d,J =5.1 Hz, 2H), 6.45 (s, 1H), 5.62 (q,J =7.2 Hz, 1H), 2.37 (s, 3H), 1.90 (d,J = 7.2 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT (min) = 0.946，[M+H]+ = 370.2，方法= K。 實例123： 2-(4-(8-胺基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物203)、2-(4-(8-胺基-5,7-二氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物204)、(2S )-2-(4-(8-胺基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物205)及(2R )-2-(4-(8-胺基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-1H-吡唑-1-基)丙腈(化合物206)
將2-(4-[[8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-1H-吡唑-1-基)丙腈(0.20 g，0.54 mmol)及NCS (72 mg，0.54 mmol)於CH3 CN (10 mL)中之溶液在50℃下加熱。2 h後，將反應物在真空中濃縮，且將所得殘餘物依序藉由製備型HPLC及掌性SFC純化，得到四種異構物。
化合物203：1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.17 (s, 1H), 8.42 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.40 (d,J =5.1 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.32 (s, 1H), 5.63 (q,J = 7.2, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.89 (d,J = 7.2, 3H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.12，[M+H]+ = 404.2，方法= K。
化合物204：1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.26 (s, 1H), 8.48 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.14 (1H, s), 7.70 (s, 1H), 7.46 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 5.65 (q,J = 7.2 Hz, 1H), 2.17 (s, 3H), 1.90 (d,J = 7.2 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT(min) = 2.20，[M+H]+ = 438.1，方法= K。
化合物205：1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.17 (s, 1H), 8.42 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.39 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 6.80 (s, 2H), 5.61 (q,J =7.2 Hz, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.89 (d,J = 7.2 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.78，[M+H]+ = 404.2，方法= K。
化合物206：1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.17 (s, 1H), 8.42 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.39 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 6.80 (s, 2H), 5.61 (q,J =7.2 Hz, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.89 (d,J = 7.2 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT (min) = 1.78，[M+H]+ = 404.2，方法= K。 實例124： (1S ,2S )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物207)及(1R ,2R )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物208) 步驟 1 ：3-碘-4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶
將2-氯-3-碘-4-甲基吡啶(600 mg，2.367 mmol)、吡咯啶 (336.71 mg，4.73 mmol)及DIEA (611.88 mg，4.73 mmol)於DMA (10.00 mL)中之溶液在120℃下加熱。2 h後，將反應物用水(50 mL)稀釋。將所得溶液用乙酸乙酯(2 × 50 mL)萃取。將收集之有機物經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈暗紅色油狀之粗品3-碘-4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶(630 mg，92%)。LCMS (ESI): M+H+ = 289.0。步驟 2 ：8-氯-6-[4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-胺
將(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)硼酸(926.4 mg，4.17 mmol)、3-碘-4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶(600 mg，2.08 mmol)、XPhos鈀(II)聯苯-2-胺氯化物(328 mg，0.42 mmol)、X-Phos (397 mg，0.83 mmol)及碳酸鉀(576 mg，4.16 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)及水(2.5 mL)中之懸浮液在100℃下加熱。2 h後，將固體過濾且將濾液在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析術(1:1乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈淡黃色固體狀之8-氯-6-[4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-胺(0.40 g，57%)。LCMS (ESI): M+H+ =339.1步驟 3 ：(±)-反式-N -[8-氯-6-[4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
向冰冷8-氯-6-[4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-胺(440 mg，1.3 mmol)、反式-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧酸(180 mg，1.08 mmol)及吡啶(6.00 mL，74.54 mmol)於二氯甲烷(40 mL)中之溶液中滴加POCl3 (249 mg，1.63 mmol)。將反應混合物溫熱至室溫達30 min，且用水(50 mL)稀釋。將所得溶液用二氯甲烷(100 mL)萃取。將有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈橙色固體狀之粗品(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(0.40 g，76%)。LCMS (ESI): M+H+ =487.0步驟 4 ：(±)-反式-N -(3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]-6-[4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基]異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯
將(±)-反式-N-[8-氯-6-[4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(0.30 g，0.62 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.50 g，12.8 mmol)、Pd2 (dba)3 CHCl3 (148 mg，0.14 mmol)、BrettPhos (120 mg，0.22 mmol)及t-BuONa (152 mg，1.58 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在100℃下加熱。4 h後，將反應物在真空中濃縮，且將所得殘餘物藉由急驟管柱層析術(10%乙酸乙酯於石油醚中至100%乙酸乙酯)純化，得到呈淡黃色固體狀之粗品(±)-反式-N-(3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]-6-[4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基]異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(0.20 g，57%)。LCMS (ESI): M+H+ = 568.0。步驟 5 ：(1S ,2S )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺及(1R ,2R )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺
將(±)-反式-N-(3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]-6-[4-甲基-2-(吡咯啶-1-基)吡啶-3-基]異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(0.050 g，0.088 mmol)於4N HCl/1,4-二噁烷(5 mL)中之溶液在室溫下攪拌24 h。將反應物在真空中濃縮，且將所得殘餘物藉由掌性SFC純化，得到兩種鏡像異構物。
化合物207：1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.22 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.93 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.67 - 6.60 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.15 - 3.07 (m, 4H), 2.42 - 2.32 (m, 1H), 2.15 - 2.04 (m, 4H), 1.75 - 1.67 (m, 4H), 1.57 (dt,J = 9.1, 4.5 Hz, 1H), 1.33-1.20 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.14，[M+H]+ = 467.0，方法= K。
化合物208：1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.22 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.93 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.67 - 6.60 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.15-3.07 (m, 4H), 2.37 (dt,J = 9.7, 4.4 Hz, 1H), 2.14 - 2.04 (m, 4H), 1.75 - 1.67 (m, 4H), 1.57 (dt,J = 9.3, 4.6 Hz, 1H), 1.33 - 1.20 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.38，[M+H]+ = 467.0，方法= K。 實例125： (±)-反式-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氯異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)環丙烷羧醯胺(化合物209) 步驟 1 ：N -[5-(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]-N-[(第三丁氧基)羰基]胺基甲酸第三丁酯
將6-溴-8-氯異喹啉-3-胺(5.8 g，22 mmol)、(5-[雙[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-甲基吡啶-3-基)硼酸(16.0 g，45.4 mmol)、Pd(dppf)Cl2 .CH2 Cl2 (3.3 g，4.0 mmol)及碳酸鈉(4.81 g，45.38 mmol)於二噁烷(100 mL)及水(10 mL)中之懸浮液在85℃下加熱。16 h後，將反應物過濾且將濾液在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析術(1%至50%乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈淡黃色固體狀之N-[5-(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]-N-[(第三丁氧基)羰基]胺基甲酸第三丁酯(4.5 g，41%)。LCMS (ESI): M+H+ = 485, 487。步驟 2 ：N -[3-胺基-6-(5-[雙[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三丁酯
將N-[5-(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]-N-[(第三丁氧基)羰基]胺基甲酸第三丁酯(5.0 g，10.3 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(24 g，205 mmol)、BrettPhos (1.1 g，2.05 mmol)、Pd2 (dba)3 -CHCl3 (2.13 g，2.06 mmol)及Cs2 CO3 (6.7 g，20.6 mmol)於1,4-二噁烷(120 mL)中之懸浮液在85℃下加熱。3 h後，將反應物在真空中濃縮，且將所得殘餘物藉由急驟管柱層析術(1%至10%二氯甲烷/甲醇)純化，得到呈淡黃色固體狀之N-[3-胺基-6-(5-[雙[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三丁酯(1.5 g，26%)。LCMS (ESI): M+H+ = 566.0步驟 3 ：(±)-反式-N -[6-(5-[雙[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-(氰基甲基)環丙烷]醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三丁酯
向冰冷反式-2-(氰基甲基)環丙烷-1-羧酸(0.50 g，3.40 mmol)、N-[3-胺基-6-(5-[雙[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三丁酯(132 mg，0.23 mmol)及吡啶(4 mL，50 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中滴加POCl3 (401 mg，2.62 mmol)。將反應物溫熱至室溫達1 h，且隨後用水(20 mL)稀釋。將所得溶液用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。將合併之有機物經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析術(1%至10%二氯甲烷/甲醇)純化，得到呈淡黃色固體狀之(±)-反式-N-[6-(5-[雙[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-(氰基甲基)環丙烷]醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三丁酯(330 mg，12%)。LCMS (ESI): M+H+ = 673.1步驟 4 ：(±)-反式-N -[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)環丙烷-1-羧醯胺
在室溫下向反式-N-[6-(5-[雙[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-(氰基甲基)環丙烷]醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三丁酯(0.060 g，0.089 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(5 mL)。2 h後，將反應混合物在真空中濃縮，得到呈淡黃色固體狀之粗品反式-N-[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)環丙烷-1-羧醯胺(20.4 mg，31%)。LCMS (ESI): M+H+ = 473.1步驟 5 ：(±)-反式-N -[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氯異喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)環丙烷-1-羧醯胺
將(±)-反式-N-[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)環丙烷-1-羧醯胺(110 mg，0.30 mmol)及NCS (39.5 mg，0.30 mmol)於CH3 CN (10 mL)中之溶液在60℃下加熱，6 h後，將反應混合物在真空中濃縮，且將所得殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈淡黃色固體狀之(±)-反式-N-[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氯異喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)環丙烷-1-羧醯胺(20.4 mg，17%)。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.95 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.54 (s, 2H), 5.22 (s, 2H), 2.77 - 2.70 (m, 2H), 2.11 - 2.07 (m, 1H), 1.82 (s, 3H), 1.58 – 1.55 (m, 1H), 1.15 - 1.08 (m, 1H), 0.99 - 0.92 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.21，[M+H]+ = 407.0，方法= M。 實例126： (1R ,2R )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物210)及(1S ,2S )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物211)
藉由遵循如對於(1S,2S)-N-(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物180)所述之程序且進行輕微變化製備標題化合物。將鏡像異構物藉由掌性SFC來分離。
化合物210：1 HNMR (400MHz, CD3 OD) δ 9.28 (s, 1H), 8.41 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.37 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.27 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.53 (d,J = 1.4 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 2.36 (ddd,J = 9.6, 6.3, 4.0 Hz, 1H), 2.18 (s, 3H), 2.14 - 2.05 (m, 1H), 1.56 (dt,J = 9.1, 4.6 Hz, 1H), 1.27 - 1.20 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) =1.09，[M+H]+ = 479.3，方法= K。
化合物211：1 HNMR (400MHz, CD3 OD) δ 9.28 (s, 1H), 8.41 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.37 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.27 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.53 (d,J = 1.4 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 2.36 (ddd,J = 9.8, 6.4, 4.0 Hz, 1H), 2.18 (s, 3H), 2.14 - 2.07 (m, 1H), 1.56 (dt,J = 9.2, 4.6 Hz, 1H), 1.28 - 1.19 (m, 1H) LCMS (ESI): RT(min) =1.09，[M+H]+ = 479.3，方法= K。 實例127： (1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物212)、(1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物213)、(1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物214)及(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物215)
藉由遵循如對於(1R,2R,3R)-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物195)所述之程序且進行輕微變化製備標題化合物。將異構物藉由掌性SFC來分離。
化合物212：1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.26 (s, 1H), 8.45 - 8.43 (m, 2H), 8.34 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.45 (d,J = 6.0 Hz 1H), 7.35 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.70 (d,J = 3.0 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.34 (dd,J = 6.5, 4.8 Hz, 1H), 2.17 (dd,J = 9.1, 4.9 Hz, 1H), 1.66 (dt,J = 8.9, 6.2 Hz, 1H), 1.37 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT(min) =0.95，[M+H]+ = 413.4，方法= N。
化合物213：1 HNMR (400MHz, CD3 OD) δ 9.26 (s, 1H), 8.46 - 8.37 (m, 2H), 8.32 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.41 (d,J = 4.8Hz, 2H), 7.04 (s, 1H), 6.69 (d,J = 3.0 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 2.52 (dd,J = 9.3, 4.7 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H), 1.99 (t,J = 4.7 Hz, 1H), 1.82 - 1.72 (m, 1H), 1.07 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT(min) =0.75，[M+H]+ = 413.2，方法= K。
化合物214：1 HNMR (300MHz, CD3 OD) δ 9.24 (s, 1H), 8.42 (d,J = 5.4 Hz, 2H), 8.33 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.41 (t,J = 2.6 Hz, 2H), 7.01 (s, 1H), 6.70 (d,J = 3.0 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.53 (dd,J = 9.2, 4.7 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.00 (t,J = 4.7 Hz, 1H), 1.77 (ddd,J = 9.4, 6.1, 4.7 Hz, 1H), 1.07 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT(min) =0.74，[M+H]+ = 413.3，方法= K。
化合物215：1 HNMR (300MHz, CD3 OD) δ 9.31 (s, 1H), 8.49 - 8.39 (m, 2H), 8.34 (s, 1H), 7.55 - 7.41 (m, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.70 (d,J = 3.0 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.34 (dd,J = 6.5, 4.9Hz, 1H), 2.17 (dd,J = 9.1, 4.9 Hz, 1H), 1.66 (dt,J = 9.0, 6.3 Hz, 1H), 1.37 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。LCMS (ESI): RT(min) =0.95，[M+H]+ = 413.3，方法= N。 實例128： (1R ,2R )-N -(8-胺基-6-(2,6-二氯苯基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物216)及(1S ,2S )-N -(8-胺基-6-(2,6-二氯苯基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物217)
藉由遵循如對於(±)-反式-N-(8-胺基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物123)所述之程序且進行輕微變化製備標題化合物。將鏡像異構物藉由掌性SFC來分離。
化合物216：1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.78 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.63 - 7.55 (m, 3H), 7.48 - 7.41 (m, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.40 (s, 1H), 6.35 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.21 - 2.16 (m, 2H), 1.39 - 1.35 (m, 1H), 1.19 - 1.14 (m,1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.30，[M+H]+ = 452.1，方法= K。
化合物217：1 HNMR (400MHz, DMSO-d6 ) δ 10.78 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.65 - 7.51 (m, 3H), 7.46 (dd,J = 8.7, 7.5 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.40 (s, 1H), 6.35 (s, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.23 - 2.13 (m, 2H), 1.42 - 1.33 (m, 1H), 1.21 - 1.12 (m,1H )。LCMS (ESI): RT(min) = 1.31，[M+H]+ = 452.2，方法= K。 實例129： (1S ,2S )-N -(8-胺基-6-(2,6-二氟苯基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物218)及(1R ,2R )-N -(8-胺基-6-(2,6-二氟苯基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物219)
藉由遵循如對於(±)-反式-N-(8-胺基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物123)所述之程序且進行輕微變化製備標題化合物。將單一異構物藉由掌性SFC來分離。
化合物218：1 HNMR (400MHz, CD3 OD) δ 9.24 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (ddd,J = 8.5, 6.3, 2.1 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.10 (t,J = 8.0 Hz, 3H), 6.78 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 2.37 (td,J = 6.1, 3.2 Hz, 1H), 2.11 (dt,J = 8.7, 4.7 Hz, 1H), 1.57 (ddd,J = 9.2, 5.1, 4.1 Hz, 1H), 1.26 (ddd,J =8.2, 6.4, 4.1 Hz, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.49，[M+H]+ = 420.2，方法= K。
化合物219：1 HNMR (400MHz, CD3 OD) δ 9.24 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (ddd,J = 8.5, 6.3, 2.1 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.10 (t,J = 8.0 Hz, 3H), 6.78 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 2.37 (td,J = 6.1, 3.2 Hz, 1H), 2.11 (dt,J = 8.7, 4.7 Hz, 1H), 1.57 (ddd,J = 9.2, 5.1, 4.1 Hz, 1H), 1.26 (ddd,J = 8.2, 6.4, 4.1 Hz, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.49，[M+H]+ = 420.2，方法= K。 實例130： (1S ,2S )-N -(8-胺基-6-(2-氰基-6-甲基苯基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物220)及(1R ,2R )-N -(8-胺基-6-(2-氰基-6-甲基苯基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物221)
藉由遵循如對於(±)-反式-N-(8-胺基-6-(8-甲基吡啶并[3,2-b]吡嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-氰基環丙烷羧醯胺(化合物123)所述之程序且進行輕微變化製備標題化合物。將鏡像異構物藉由掌性SFC來分離。
化合物220：1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.14 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.76 (d,J = 5.5 Hz, 1H), 7.66 (d,J = 5.5 Hz, 1H), 7.50 (t,J = 5.8 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.46 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 2.78 - 2.72 (m, 1H), 2.16 - 2.10 (m, 4H), 1.62 - 1.57 (m, 1H), 1.45 - 1.43 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.55，[M+H]+ = 368.2，方法=M。
化合物221：1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) δ 11.14 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.76 (d,J = 5.5 Hz, 1H), 7.66 (d,J = 5.5 Hz, 1H), 7.50 (t,J = 5.8 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.46 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 2.78 - 2.72 (m, 1H), 2.16 - 2.10 (m, 4H), 1.62 - 1.57 (m, 1H), 1.45 - 1.43 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.55，[M+H]+ = 368.2，方法=M。 實例131： (1S ,2S )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物222)及(1R ,2R )-N -(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物223)
藉由遵循如對於(1S,2S)-N-(8-胺基-6-(4-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(化合物180)所述之程序且進行輕微變化製備標題化合物。將鏡像異構物藉由掌性SFC來分離。
化合物222：1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ) 10.74 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.48 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 3H), 6.71 (s, 1H), 6.33 (s, 1H), 6.20 (s, 2H), 5.77 (s, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 2.18 (t,J = 6.0 Hz, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.35 - 1.34 (m, 1H), 1.17 – 1.15 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.10，[M+H]+ = 479.3，方法=K。
化合物223：1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6 ) 10.74 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.48 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.38-7.29 (m, 3H), 6.71 (s, 1H), 6.33 (s, 1H), 6.20 (s, 2H), 5.77 (s, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 2.18 (t,J = 6.0 Hz, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.35-1.34 (m, 1H), 1.17-1.15 (m, 1H)。LCMS (ESI): RT(min) = 1.10，[M+H]+ = 479.3，方法=K。 實例132： 外-N-(8-胺基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺(化合物224)、外-N-(8-胺基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺(化合物225)及外-N-(8-胺基-5,7-二氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺(化合物226) 步驟 1 ：(外)-3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-N -[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-1-甲基雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺
向冰冷(外)-3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸(289 mg，0.75 mmol) (WO2015091889)、8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(488 mg，1.80 mmol)及吡啶(1 mL)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中滴加POCl3 (491 mg，3.20 mmol)。將反應物溫熱至室溫達30 min，且隨後用水(10 mL)稀釋。將溶液用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。將合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析術(1:1乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈淡黃色油狀之(外)-3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-N-[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-1-甲基雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺(0.30 g，61%)。LCMS (ESI): M+H+ = 632.2步驟 2 ：N -[6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[(外)-3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]雙環[3.1.0]己烷-6-醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三丁酯
將(外)-3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-N-[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺(0.40 g，0.63 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.85 mg，0.02 mmol)、Pd2 (dba)3 (130 mg，0.14 mmol)、Cs2 CO3 (819 mg，2.51 mmol)及BrettPhos (135 mg，0.25 mmol)於二噁烷(10 mL)中之懸浮液在120℃下加熱。2 h後，將反應物過濾且將濾液在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析術(1:1 乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈黃色固體狀之N-[6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[(外)-3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]雙環[3.1.0]己烷-6-醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三丁酯(315 mg，70%)。LCMS (ESI): M+H+ = 713.3步驟 3 ：(外)-N -[8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-[(第三丁基二苯基矽基)甲基]雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺
將N-[6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[(外)-3-[(第三丁基二苯基矽基)甲基]雙環[3.1.0]己烷-6-醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三丁酯(630 mg，0.88 mmol)於三氟乙酸(6 mL)及二氯甲烷(30 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。將反應物在真空中濃縮，且將殘餘物用DCM (20 mL)稀釋。用NH3 於甲醇(7 M)中之溶液將混合物鹼化至pH = 8，且濃縮。藉由急驟管柱層析術純化，得到呈黃色固體狀之(外)-N-[8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-[(第三丁基二苯基矽基)甲基]雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺(480 mg，89%)。LCMS (ESI): M+H+ = 613.3步驟 4 ：(外)-N -(8-胺基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-(第三丁基二苯基矽基氧基)雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺、(外)-N -(8-胺基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-(第三丁基二苯基矽基氧基)雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺及(外)-N -(8-胺基-5,7-二氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-(第三丁基二苯基矽基氧基)雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺
將(外)-N-[8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-[(第三丁基二苯基矽基)甲基]雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺(320 mg，0.52 mmol)及NCS (35 mg，0.52 mmol)於CH3 CN (10 mL)中之溶液在50℃下加熱。1 h後，添加額外NCS (35 mg，0.52 mmol)，且將溶液在50℃下再維持2 h。將反應物在真空下濃縮，且將所得殘餘物藉由急驟管柱層析術(10:1二氯甲烷/甲醇)純化，得到呈固體狀之(外)-N-(8-胺基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-(第三丁基二苯基矽基氧基)雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺、(外)-N-(8-胺基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-(第三丁基二苯基矽基氧基)雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺及(外)-N-(8-胺基-5,7-二氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-(第三丁基二苯基矽基氧基)雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺(0.30 g，89%)之混合物。LCMS (ESI): M+H+ = 647.3, 681.2；步驟 5 ：(外)-N -(8-胺基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺及(外)-N -(8-胺基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺及(外)-N -(8-胺基-5,7-二氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-羥基雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺
在室溫下向(外)-N-(8-胺基-7-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-(第三丁基二苯基矽基氧基)雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺、(外)-N-(8-胺基-5-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-(第三丁基二苯基矽基氧基)雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺及(外)-N-(8-胺基-5,7-二氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-(第三丁基二苯基矽基氧基)雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺(0.30 g)於四氫呋喃(10 mL)中之混合物中添加TBAF (1.03 g，3.93 mmol)。30 min後，將反應物在真空中濃縮，且將粗產物藉由製備型HPLC純化，得到三種產物。
化合物224：1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 10.59 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.49 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.37 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.57 (s, 2H), 4.70 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 3.85 - 3.78 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.09 - 2.04 (m, 2H), 1.89 - 1.87 (m, 1H), 1.73 - 1.71 (m, 2H), 1.69 - 1.61 (m, 2H)。LCMS (ESI): RT(min) =2.236，[M+H]+ = 409.1，方法= K。
化合物225：1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 10.70 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.49 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.38 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.54 (s, 2H), 6.44 (s, 1H), 4.71 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 3.83 - 3.78 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.09 - 2.05 (m, 2H), 1.92 - 1.90 (m, 1H), 1.76 - 1.74 (m, 2H), 1.69 - 1.62 (m, 2H)。LCMS (ESI): RT(min) =1.029，[M+H]+ = 409.2，方法= K。
化合物226：1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 10.79 (s, 1H), 9.53 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.53 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.43 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.77 (s, 2H), 4.71 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 3.85 - 3.79 (m, 1H), 2.12 - 2.08 (m, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.92 - 1.90 (m, 1H), 1.75 - 1.74 (m, 2H), 1.69 - 1.62 (m, 2H)。LCMS (ESI): RT(min) =1.205，[M+H]+ = 443.1，方法= L。實例133： 1-(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-3-(環丙基甲基)脲(化合物29) 步驟 1 ：7-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯
將8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(1.14 g，3.54 mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (518.19 mg，0.71 mmol)、碳酸鉀(1.47 g，10.62 mmol)及8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(2.0 g，5.32 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)/水(4 mL)中之溶液在90℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(3/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之7-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(1.5 g，3.37 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 445.1。步驟 2 ：7-(8-氯-7-氟-3-(((4-硝基苯氧基)羰基)胺基)異喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯
將7-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(200 mg，0.45 mmol)、吡啶(106.68 mg，1.35 mmol)及4-硝基苯基氯甲酸酯(135.92 mg，0.67 mmol)於二氯甲烷(4 mL)中之溶液在室溫下攪拌2小時。所得溶液不經處理即直接用於下一步驟中。LCMS (ESI) [M+H]+ = 610。步驟 3 ：7-[8-氯-3-(環丙基甲基胺甲醯基胺基)-7-氟-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯
向7-[8-氯-7-氟-3-[(4-硝基苯氧基)羰基胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯之溶液中添加環丙烷甲基胺(34.98 mg，0.49 mmol)及吡啶(77.8 mg，0.98 mmol)。將反應物在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟(C18管柱，CH3 CN/H2 O=0至80%，40 min內)純化，得到呈黃色固體狀之7-[8-氯-3-(環丙基甲基胺甲醯基胺基)-7-氟-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(150 mg，0.28 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 542。步驟 4 ：7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-(環丙基甲基胺甲醯基胺基)-7-氟-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯
將1-[8-氯-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)-3-異喹啉基]-3-(環丙基甲基)脲(150 mg，0.28 mmol)及碳酸銫(353.92 mg，1.09 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(74.96 mg，0.07 mmol)、2-(二環己基膦基)3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯(77.74 mg，0.14 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之溶液在90℃攪拌3小時。過濾後，將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-(環丙基甲基胺甲醯基胺基)-7-氟-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(130 mg，0.21 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 623。步驟 5 ：1-[8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)-3-異喹啉基]-3-(環丙基甲基)脲
將7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-(環丙基甲基胺甲醯基胺基)-7-氟-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(130 mg，0.21 mmol)及三氟乙酸(2 mL)於二氯甲烷(4 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD管柱19×150 mm 5 um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉)：CH3 CN= 30% B至50% B，7 min內；25 mL/min)純化，得到呈黃色固體狀之1-[8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)-3-異喹啉基]-3-(環丙基甲基)脲(49.8 mg，0.12 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 423。1 H NMR (300 MHz, 甲醇-d 4 )δ 9.21 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.86 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 4.42-4.35 (m, 2H), 3.48 (t,J = 4.4 Hz, 2H), 3.18 (d,J = 6.9 Hz, 2H), 2.00 (d,J = 1.7 Hz, 3H), 1.11-1.08 (m, 1H), 0.58 -0.50 (m, 2H), 0.29-0.27 (m, 2H)。 實例134： (1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物9)；(1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物10)；(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物11)及(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物12) 步驟 1 ：7-(8-氯-3-((1S ,3S )-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺基)-7-氟異喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三丁酯
將7-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(1.6g， 3.6mmol)及2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸(908.09mg， 4.68mmol)於二氯甲烷(30mL)及吡啶(6mL)中之溶液在0℃攪拌3分鐘。在0℃下添加氧氯化磷(1.1 g， 7.19mmol)，且將混合物在25℃攪拌30分鐘。 將所得溶液用二氯甲烷萃取。將有機層合併且濃縮，得到呈褐色固體狀之7-[8-氯-3-[[(1S ,2S )-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(1.4 g， 2.25mmol)。LCMS(ESI)[M+H]+ =621。步驟 2 ：7-(8-((第三 丁氧基羰基)胺基)-3-(2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺基)-7-氟異喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯
將7-[8-氯-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(1.4 g， 2.25mmol)、胺基甲酸第三丁酯(6.6 g， 56.35mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)氯仿加合物(466.59 mg， 0.45mmol)、2-(二環己基膦基)3,6-二甲氧基-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-聯苯(483.27 mg，0.90mmol)及碳酸銫(3.67 g，11.27mmol)於1,4-二噁烷(80mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(95/5)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(1 g，1.42mmol)。LCMS(ESI)[M+H]+ = 702。步驟 3 ：(1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺；(1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺；(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺及(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
將7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(1.0 g，1.42mmol)及2,2,2-三氟乙酸(10mL)於二氯甲烷(50mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用NH3 .H2 O將反應混合物調整至pH10。將粗產物藉由製備型HPLC用以下條件純化：管柱：XBridge製備型OBDC18管柱30×150mm5um；流動相A：水(10 mmol/L碳酸氫鈉)，流動相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：25%B至47%B，7min內；254/220nm；Rt：6.13min，得到呈黃色固體狀之異構物N -[8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)-3-異喹啉基]-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(400 mg，0.80 mmol)之混合物。LCMS(ESI)[M+H]+ = 502。將混合物藉由掌性SFC (異構物之環丙烷立體化學：吡唑與醯胺成反式 ；任意指定之甲基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)分離成4中異構物：
呈黃色固體狀之化合物9：(28.7 mg，0.057 mmol)。滯留時間：2.401 min(CHIRALPAKIE-3,0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):MeOH=70:30；1.0ml/min)；LCMS(ESI)[M+H]+ =502；1 HNMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 10.68(s,1H),9.38(s,1H),8.30(s,1H),7.52(s,1H),7.33(s,1H),7.25(d,J =0.8Hz,1H),6.85(d,J =6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),4.30(s,2H),3.77(s,3H),3.37(s,2H),2.26-2.17(m,2H),1.93(d,J =1.6Hz,3H),1.86-1.43(m,3H),0.92 (t,J = 7.3 Hz, 1H)。
呈黃色固體狀之化合物10：(22.5 mg，0.045 mmol)。滯留時間：2.090 min (修復掌性IA， 0.46*10 cm；5 μm；MtBE(0.1%DEA):MeOH=70:30；1.0ml/min)；LCMS(ESI)[M+H]+ =502；1 HNMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 10.68(s,1H),9.38(s,1H),8.30(s,1H),7.52(s,1H),7.33(s,1H),7.25(d,J =0.8Hz,1H),6.85(d,J =6.2Hz,1H),6.20(s,2H),5.67(s,1H),4.30(s,2H),3.77(s,3H),3.38(s,2H),2.35-2.12(m,2H),1.93(d,J =1.6Hz,3H),1.84-1.38(m,3H),0.92 (t,J = 7.3 Hz, 1H)。
呈黃色固體狀之化合物12：(89.3 mg，0.18 mmol)。滯留時間：4.15 min (修復掌性IA，0.46*10cm；5 μm；MtBE(0.1%DEA):MeOH=70:30；1.0ml/min)；LCMS(ESI)[M+H]+ =502；1 HNMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ10.72(s,1H),9.40(s,1H),8.28(s,1H),7.53(s,1H),7.33(s, 1H), 7.29(s, 1H),6.84(d,J =6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),4.29(s,2H),3.80(s,3H),3.37(s,2H),2.37-2.29(m,1H), 2.17 (t,J = 4.7 Hz, 1H),1.93(d,J =1.6Hz,3H),1.58-1.44(m,1H),1.30-1.16(m,2H),0.89 (t,J = 7.3 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物11：(113.1 mg，0.23 mmol)。滯留時間：2.66 min(CHIRALPAKIE-3,0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):MeOH=70:30；1.0ml/min)；LCMS(ESI)[M+H]+ =502；1 HNMR(300MHz,DMSO-d 6 )δ 10.72(s,1H),9.40(s,1H),8.29(s,1H),7.53(s,1H),7.33(s, 1H), 7.29(s, 1H)6.84(d,J =6.2Hz,1H),6.21(s,2H),5.67(s,1H),4.29(s,2H),3.80(s,3H),3.37(s,2H),2.38-2.29(m,1H),2.17(t,J = 4.7 Hz,1H),1.93(d,J =1.6Hz,3H),1.58-1.44(m,1H),1.30-1.16(m,2H),0.89(t,J = 7.3 Hz, 3H)。 實例135： (1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(假定) (化合物36)、(1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(假定) (化合物35)、(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(假定) (化合物34)及(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(假定) (化合物33) 步驟 1 ：四氟硼酸乙基二苯基鋶(ethyldiphenylsulfanium tetrafluoroboranuide)
在氮下向AgBF4 (37.48 g，192.53 mmol)於二氯甲烷(450 mL)中之溶液中添加碘乙烷(30 g，192.35 mmol)。將溶液在室溫下攪拌30分鐘。添加苯基磺醯基)苯(106.92 g，573.99 mmol)，且隨後在35℃攪拌16小時。過濾混合物，且在真空下濃縮濾液。將殘餘物用二氯甲烷/乙醚(1/1)洗滌，得到呈灰白色固體狀之四氟硼酸乙基二苯基鋶(25 g，116.28 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 215。步驟 2 ：反式 - 2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸第三 丁酯
在-78℃下向乙基(二苯基)鋶(1.55 g，7.2 mmol)於二氯甲烷(2 mL)及1,2-二甲氧基乙烷(20 mL)中之溶液中添加二異丙基胺基鋰(4.2 mL，8.4 mmol)。將所得溶液在-78℃攪拌1小時。在-78℃下添加(E )-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯酸第三 丁酯(500 mg，2.4 mmol)。將混合物在25℃攪拌6小時。將反應用水淬滅，且隨後用二氯甲烷萃取。將有機層合併，經無水硫酸鈉乾燥且在真空下濃縮，得到呈黃色油狀之反式-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸第三 丁酯(550 mg，粗品)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 237。步驟 3 ：(+/-)-反式-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸第三 丁酯
將反式-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸第三 丁酯(500 mg，粗品)於二氯甲烷(3 mL)及2,2,2-三氟乙酸(4 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 7。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% HCl於水中)純化，得到呈黃色油狀之2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸(其中吡唑與羧酸成反式 ) (180 mg，0.99 mmol)之4種立體異構物之混合物。LCMS (ESI) [M+H]+ = 181。步驟 4 ：7-[8-氯-7-氟-3-[[(1S )-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯
在25℃下向反式-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸(182.27 mg，1.01 mmol)於二氯甲烷(15 mL)及吡啶(3 mL)中之溶液中添加7-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(450 mg，1.01 mmol)。將所得溶液在25℃攪拌20分鐘。添加氧氯化磷(309.51 mg，2.02 mmol)，且在25℃攪拌30分鐘。將反應用水淬滅，且隨後用二氯甲烷萃取。將有機層合併，經無水硫酸鈉乾燥且在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(9:1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之7-[8-氯-7-氟-3-[[(1S )-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(320 mg，0.53 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 607。步驟 5 ：7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[(1S )-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯
在25℃下向7-[8-氯-7-氟-3-[[(1S )-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(420 mg，0.69 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(2.43 g，20.76 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(143.21 mg，0.14 mmol)及Brettphos (148.61 mg，0.28 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之溶液中添加碳酸銫(902.15 mg，2.77 mmol)。將所得溶液在90℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[(1S )-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(450 mg，0.65 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 688。步驟 6 ：(1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺、(1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺、(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺及(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
將7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[(1S )-2-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(800 mg，1.16 mmol)於二氯甲烷(10 mL)及2,2,2-三氟乙酸(10 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水:ACN=20%至50%，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之混合物(260 mg，0.44 mmol)。將混合物藉由掌性HPLC分離，得到四種異構物(各異構物之環丙烷立體化學：吡唑與醯胺成反式 ；任意指定之甲基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物33：(27.3 mg，0.056 mmol)。滯留時間：3.92 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10 cm；3 μm；MtBE(0.3%IPAmine):EtOH=70:30；1.0 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 488.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.68 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.86 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.21 (s, 2H), 5.68 (s, 1H), 4.30-4.29 (m, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.38-3.37(m, 2H), 2.28-2.12 (m, 2H), 1.94 (s, 3H), 1.64-1.50 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.1 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物34：(26.6 mg，0.055 mmol)。滯留時間：5.736 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.3%IPAmine):EtOH=70:30；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 488.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.68 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.86 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.21 (s, 2H), 5.68 (s, 1H), 4.30-4.29 (m, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.38-3.37(m, 2H), 2.28-2.12 (m, 2H), 1.94 (s, 3H), 1.64-1.50 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.1 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物35：(72.6 mg，0.15 mmol)。滯留時間：7.063 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10 cm；3 μm；MtBE(0.3%IPAmine):EtOH=70:30；1.0 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 488.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.72 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.32 (s 1H), 7.29 (s, 1H), 6.84 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.22 (s, 2H), 5.68 (s, 1H), 4.30-4.29 (m, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.38-3.37 (m, 2H), 2.31 (dd,J = 9.1, 4.5 Hz, 1H), 2.12 (t,J = 4.6 Hz, 1H), 1.93 (d,J = 1.6 Hz, 3H), 1.67-1.54 (m, 1H), 0.97 (d,J = 6.3 Hz, 3H)
呈黃色固體狀之化合物36：(80.2 mg，0.16 mmol)。滯留時間：9.167 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10 cm；3 μm；MtBE(0.3%IPAmine):EtOH=70:30；1.0 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 488.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.72 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.32 (s 1H), 7.29 (s, 1H), 6.84 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.22 (s, 2H), 5.68 (s, 1H), 4.30-4.29 (m, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.38-3.37 (m, 2H), 2.31 (dd,J = 9.1, 4.5 Hz, 1H), 2.12 (t,J = 4.6 Hz, 1H), 1.93 (d,J = 1.6 Hz, 3H), 1.67-1.54 (m, 1H), 0.97 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。 實例136： 2-((8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮 (化合物233) 步驟 1 ：7-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯
將8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(1.14 g，3.54 mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (518.19 mg，0.71 mmol)、碳酸鉀(1.47 g，10.62 mmol)及8-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三丁酯(2.0 g，5.32 mmol)於1,4-二噁烷(20 ml)及水(4 mL)中之溶液在90℃攪拌1小時。將反應物冷卻至室溫且隨後過濾。將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(3/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之7-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(1.5 g，3.37 mmol)。步驟 2 ：7-[8-氯-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯
將7-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(200 mg，0.44 mmol)及2-溴-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(147 mg，0.52 mmol)、t -BuBrettphos Pd G3 (77 mg，0.08 mmol)、t -BuBrettphos (104 mg，0.16 mmol)、碳酸銫(439 mg，1.36 mmol)於1,4-二噁烷(40 mL)中之溶液在120℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之7-[8-氯-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(150 mg，0.024 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 517.24。步驟 3 ：7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯
將7-[8-氯-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(150 mg，0.24 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(552.4 mg，4.8 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(48.82 mg，0.048 mmol)、2-(二環己基膦基)3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯(50.63 mg，0.096 mmol)及碳酸銫(230.49 mg，0.71 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之溶液在90℃攪拌2小時。過濾後，將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(100 mg，0.14 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 717.8。步驟 4 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(100 mg，0.07 mmol)及三氟乙酸(2 mL，0.07 mmol)於二氯甲烷(4 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮，且隨後用甲醇中之氨(7 mol/L)調整至pH 9。將殘餘物藉由製備型HPLC (SunFire製備型C18 OBD管柱19×150 mm 5 um 10 nm；水(0.1%FA): CAN= 9% B至30% B，7 min內；25 mL/min)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(10 mg，0.019 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 517.24。1 HNMR (300 MHz, 甲醇-d 4 ) δ 9.11 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.81 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 5.03 (s, 2H), 4.77-4.68 (m, 1H), 4.39 (t,J = 4.4 Hz, 2H), 3.89-3.79 (m, 2H), 3.48 (t,J = 4.4 Hz, 2H), 3.10 (t,J = 6.1 Hz, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.21 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例137： 1-[8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)-3-異喹啉基]-3-[(1R )-1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基]脲(化合物111)及 1-[8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)-3-異喹啉基]-3-[(1S )-1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基]脲(化合物112) 步驟 1 ：7-[8-氯-7-氟-3-[1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基胺甲醯基胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯
以類似於對於實例133 (化合物29)所述之方式的方式使用7-(8-氯-7-氟-3-(((4-硝基苯氧基)羰基)胺基)異喹啉-6-基)-8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯製備標題化合物。LCMS (ESI) [M+H]+ =596.1。步驟 3 ：7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基胺甲醯基胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯
以類似於對於實例133 (化合物29)所述之方式的方式使用7-[8-氯-7-氟-3-[1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基胺甲醯基胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯製備標題化合物，LCMS (ESI) [M+H]+ = 677.3。步驟 4 ：1-[8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)-3-異喹啉基]-3-[(1R )-1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基]脲(化合物111)及1-[8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)-3-異喹啉基]-3-[(1S )-1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基]脲(化合物112)
將7-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[1-(1-甲基吡唑-4-基)乙基胺甲醯基胺基]-6-異喹啉基]-8-甲基-2,3-二氫吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-1-羧酸第三 丁酯(80 mg，0.12 mmol)及三氟乙酸(2 mL，25.96 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將反應溶液在真空下濃縮，且隨後用甲醇中之氨(7 mol/L)調整至pH 8。將殘餘物藉由製備型HPLC (X-Bridge製備型C18 OBD 5 μm，19*150 mm；水(10 mmol/L碳酸氫鈉): ACN= 5% B至45% B，9 min內)及掌性HPLC純化，得到兩種鏡像異構物：
呈黃色固體狀之化合物111：1-[8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)-3-異喹啉基]-3-[(1R )-(1-甲基吡唑-4-基)乙基]脲(假定) (20.6 mg，0.043 mmol)。Rt = 2.634 min (Lux Cellulose-4, 0.46*15 cm；3 μm，MtBE(0.1%DEA): EtOH = 50:50，1.0 ml/min)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 477.2；1 HNMR (300 MHz, 甲醇-d 4 ) δ 9.21 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.89 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 5.08-5.02(m, 1H), 4.42 (t,J = 4.2 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.51 (t,J = 4.2 Hz, 2H), 2.03 (s, 3H), 1.57 (d,J = 6.8 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物112：1-[8-胺基-7-氟-6-(8-甲基-2,3-二氫-1H -吡啶并[2,3-b ][1,4]噁嗪-7-基)-3-異喹啉基]-3-[1(S )-(1-甲基吡唑-4-基)乙基]脲(20.7 mg，0.043 mmol)。Rt = 3.544 (Lux Cellulose-4，0.46*15 cm，3 μm；MtBE(0.1%DEA): EtOH = 50:50，1.0 ml/min)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 477.2；1 HNMR (300 MHz, 甲醇-d 4 ) δ 9.21 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.89 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 5.08-5.02(m, 1H), 4.42 (t,J = 4.2 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.51 (t,J = 4.2 Hz, 2H), 2.03 (s, 3H), 1.57 (d,J = 6.8 Hz, 3H)。 實例138： 2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-5,5,6-三甲基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(化合物234) 步驟 1 ：(第三 丁氧基羰基)(5-(8-((第三 丁氧基羰基)胺基)-3-((5,5-二甲基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)-7-氟異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯
將2-溴-5,5-二甲基-6,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(66.34 mg，0.26 mmol)、N -[5-[3-胺基-8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(100.0 mg，0.17 mmol)、t -BuBrettphosPdG3 (58.53 mg，0.07 mmol)、t -BuBrettphos (41.55 mg，0.09 mmol)及碳酸銫(167.57 mg，0.51 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在120℃在氮下攪拌1小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(98/2)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N- 第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(5,5-二甲基-7-側氧基-6,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.08 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =761。步驟 2 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-5,5,6-三甲基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5,5,6-三甲基-7-側氧基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(80.0 mg，0.10 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)於二氯甲烷(6 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 9。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% FA於水中)純化，得到呈橙色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-5,5,6-三甲基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(30.5 mg，0.06 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 461.2；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.26 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.76-7.65 (m, 3H), 6.73 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 6.04 (s, 1H, 5.41 (s, 2H), 4.83 (s, 2H), 3.05 (s, 2H), 1.96 (d,J = 1.5 Hz, 3H), 1.18 (s, 6H)。 實例139： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-5,5,6-三甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物235) 步驟 1 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5,5,6-三甲基-7-側氧基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-溴-5,5,6-三甲基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(65.28 mg，0.24 mmol)、N -[5-[3-胺基-8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.17 mmol)、t- BuBrettphosPdG3 (58.53 mg，0.07 mmol)、t- BuBrettphos (41.55 mg，0.09 mmol)及碳酸銫(167.57 mg，0.51 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在120℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(100/3)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5,5,6-三甲基-7-側氧基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(80 mg，0.10 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 775。步驟 2 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-5,5,6-三甲基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮；甲酸
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5,5,6-三甲基-7-側氧基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(80 mg，0.10 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)於二氯甲烷(6 mL)中之混合物在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 9。將混合物在真空下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% FA於水中)純化，得到呈橙色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-5,5,6-三甲基-4,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮；甲酸(30.5 mg，0.059 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 475；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.25 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.69-7.67 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 6.70-6.69 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.05 (s, 3H), 5.26 (s, 2H), 4.94 (s, 2H), 3.20 (s, 2H), 2.76 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.28 (s, 6H)。 實例140： (1S ,2S ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物239)、 (1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物237)、 (1R ,2R ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物238)及 (1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物236) 步驟 1 ：反式 - 2-(苄氧基甲基)-3-甲基環丙烷羧酸第三 丁酯
以類似於對於實例135 (化合物36)所述之方式的方式使用(E )-4-(苄氧基)丁-2-烯酸第三 丁酯製備標題化合物。LCMS (ESI) [M+H]+ = 277。步驟 2 ：反式 - 2-(苄氧基甲基)-3-甲基環丙烷羧酸
以類似於對於實例135 (化合物36)所述之方式的方式使用反式-2-(苄氧基甲基)-3-甲基環丙烷羧酸第三 丁酯製備標題化合物。LCMS (ESI) [M+H]+ = 221。步驟 3 ：反式 -N -[5-[3-[[2-(苄氧基甲基)-3-甲基-環丙烷羰基]胺基]-8-氯-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯
以類似於對於實例135 (化合物36)所述之方式的方式使用反式-2-(苄氧基甲基)-3-甲基-環丙烷羧酸製備標題化合物。LCMS (ESI) [M+H]+ = 705。步驟 4 ：N -[5-[3-[[反式 - 2-(苄氧基甲基)-3-甲基-環丙烷羰基]胺基]-8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯
以類似於對於實例135 (化合物36)所述之方式的方式使用反式 -N -[5-[3-[[2-(苄氧基甲基)-3-甲基-環丙烷羰基]胺基]-8-氯-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N-第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯製備標題化合物。LCMS (ESI) [M+H]+ = 786。步驟 5 ：反式 - N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[2-(羥甲基)-3-甲基-環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將反式 -N -[5-[3-[[2-(苄氧基甲基)-3-甲基-環丙烷羰基]胺基]-8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(1.1 g，1.4 mmol)及Pd(OH)2 /C (979.77 mg，1.4 mmol)於甲醇(30 mL)中之溶液在25℃在氫氣氛下攪拌36小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈彩色固體狀之反式-N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[2-(羥甲基)-3-甲基-環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(450 mg，0.65 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 696。步驟 6 ：反式 - [2-[[6-[5-[雙(第三 丁氧基羰基)胺基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-異喹啉基]胺甲醯基]-3-甲基-環丙基]甲基甲烷磺酸酯
在0℃下向反式-N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[2-(羥甲基)-3-甲基-環丙烷羰基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(450 mg，0.65 mmol)及三乙胺(195.97 mg，1.94 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之溶液中添加甲烷磺醯氯(187.56 mg，1.29 mmol)。將所得溶液在25℃攪拌1小時。將反應用水淬滅，用二氯甲烷萃取且經無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色固體狀之反式-[2-[[6-[5-[雙(第三 丁氧基羰基)胺基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-異喹啉基]胺甲醯基]-3-甲基-環丙基]甲基甲烷磺酸酯(450 mg，0.58 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 774。步驟 7 ：反式 -N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基-環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將反式 - [2-[[6-[5-[雙(第三 丁氧基羰基)胺基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-異喹啉基]胺甲醯基]-3-甲基-環丙基]甲基甲烷磺酸酯(450 mg，0.58 mmol)及氰化鉀(113.39 mg，1.74 mmol)於二甲亞碸(10 mL)中之溶液在60℃攪拌12小時。將反應用硫酸亞鐵溶液淬滅，且隨後用乙酸乙酯萃取。將有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮，得到呈褐色固體狀之反式-N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基-環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(400 mg，0.57 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 705。步驟 8 ：(1S ,2S ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺、(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺、(1R ,2R ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺、(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺
以類似於對於實例135 (化合物36)所述之方式的方式使用反式-N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基-環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(400 mg，0.57 mmol)製備標題化合物。將混合物藉由掌性SFC分離來純化，得到四種異構物(各異構物之環丙烷立體化學：氰甲基與醯胺成反式 ；任意指定之甲基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物236：(14.5 mg，0.036 mmol)。滯留時間：8.931 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10 cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):MeOH=95:5；1.0 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 405.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.76 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.85 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.22 (s, 2H), 5.22 (s, 2H), 2.82-2.59 (m, 2H), 2.06 (dd,J = 9.1, 4.7 Hz, 1H), 1.89 (d,J = 1.4 Hz, 3H), 1.54-1.48 (m, 1H), 1.34 (dt,J = 8.9, 6.1 Hz, 1H), 1.14 (d,J = 6.1 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物237：(14.7 mg，0.036 mmol)。滯留時間：10.678 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):MeOH=95:5；1.0 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 405.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.76 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.85 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.22 (s, 2H), 5.22 (s, 2H), 2.82-2.59 (m, 2H), 2.06 (dd,J = 9.1, 4.7 Hz, 1H), 1.89 (d,J = 1.4 Hz, 3H), 1.54-1.48 (m, 1H), 1.34 (dt,J = 8.9, 6.1 Hz, 1H), 1.14 (d,J = 6.1 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物238：(15.3 mg，0.038 mmol)。滯留時間：4.185 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=80:20；1.0 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 405.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.76 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 6.83 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.23 (s, 2H), 5.24 (s, 2H), 2.86-2.58 (m, 2H), 1.89 (d,J = 1.5 Hz, 3H), 1.76 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 1.70-1.53 (m, 1H), 1.52-1.38 (m, 1H), 1.15 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物239：(15.5 mg，0.038 mmol)。滯留時間：6.037 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=80:20；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 405.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.76 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 6.83 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.23 (s, 2H), 5.24 (s, 2H), 2.86-2.58 (m, 2H), 1.89 (d,J = 1.5 H。 實例141： 2-((8-胺基-7-氟-6-((2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物240) 步驟 1 ：2-甲氧基-3-吡啶基)甲醇
將2-甲氧基菸鹼酸溶液(200.0 mg，1.31 mmol)及硼烷四氫呋喃錯合物溶液(1 mol/L) (4 mL，3.92 mmol)在氮下在四氫呋喃(5 mL)中在0℃攪拌。將所得溶液在25℃攪拌1小時。將反應藉由甲醇(2 mL)淬滅。將溶劑在真空下濃縮，得到呈黃色油狀之2-甲氧基-3-吡啶基)甲醇(150 mg，1.08 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 139.2。步驟 2 ：3-(氯甲基)-2-甲氧基吡啶
將(2-甲氧基-3-吡啶基)甲醇(1.0 g，7.19 mmol)及SOCl2 (2.56 g，21.55 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液在25℃攪拌3小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(5 95)溶離來純化，得到呈黃色油狀之3-(氯甲基)-2-甲氧基吡啶(500 mg，3.17 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 157.6。步驟 3 ：(7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)-6-((2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將(8-((第三 丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)硼酸(86.96 mg，0.17 mmol)、3-(氯甲基)-2-甲氧基-吡啶(40.0 mg，0.25 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (24.35 mg，0.03 mmol)及碳酸銫(165.22 mg，0.51 mmol)於四氫呋喃(1 mL)及水(0.10 mL)中之混合物在100℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/5)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之(7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)-6-((2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(76 mg，0.13 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 589.7。步驟 4 ：2-((8-胺基-7-氟-6-((2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將(7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)-6-((2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(60 mg，0.10 mmol)、氯化鋰(54 mg，1.29 mmol)及對甲苯磺酸(240 mg，1.26 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(5 mL)中之混合物在120℃攪拌0.5 h。將殘餘物藉由急驟層析術在C18 (乙腈-0.1%碳酸氫鈉於水中)上純化，得到呈黃色固體狀之2-((8-胺基-7-氟-6-((2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基)甲基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(5.1 mg，0.01 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 476.2；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 11.59 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.27-7.25 (m, 1H), 7.12 (d,J = 6.7 Hz, 1H), 6.69 (d,J = 6.6 Hz, 1H), 6.14-6.09 (m, 1H), 5.95-5.88 (m, 3H), 4.96 (s, 2H),4.61-4.57(m, 1H) 3.78 (s, 4H), 2.99 (s, 2H), 1.13 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例142：N -(8-胺基-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)乙烷磺醯胺(化合物241) 步驟 1 ：(3-胺基-8-氯異喹啉-6-基)胺基甲酸第三 丁酯
將6-溴-8-氯-異喹啉-3-胺(1.0 g，3.88 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(13.65 g，116.5 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(803.85 mg，0.78 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(897.83 mg，1.55 mmol)及碳酸銫(6.33 g，19.42 mmol)於1,4-二噁烷(30mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(1/2)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)胺基甲酸第三 丁酯(500 mg，1.70 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 294。步驟 2 ：(8-氯-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)胺基甲酸第三 丁酯
將N -(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)胺基甲酸第三 丁酯(300 mg，1.02 mmol)、N -(3-胺基-8-氯-6-異喹啉基)胺基甲酸第三 丁酯(300 mg，1.02 mmol)、t -BuBrettphosPdG3 (348.87 mg，0.41 mmol)、t -BuBrettphos (247.15 mg，0.51 mmol)及碳酸銫(1.66 g，5.11 mmol)於1,4-二噁烷(50 mL)中之溶液在120℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(97/3)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N -[8-氯-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(279 mg，0.58 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 485。步驟 3 ：2-((6-胺基-8-氯異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將N -[8-氯-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(270 mg，0.56 mmol)於2,2,2-三氟乙酸(10 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 10。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% NH4 CO3 於水中)純化，得到呈灰色固體狀之2-[(6-胺基-8-氯-3-異喹啉基)胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(200 mg，0.52 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 385。步驟 4 ：N -(8-氯-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)乙烷磺醯胺
在0℃下向2-[(6-胺基-8-氯-3-異喹啉基)胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(200 mg，0.52 mmol)及三乙胺(262.43 mg，2.60 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液中添加乙烷磺醯氯(200.46 mg，1.56 mmol)。將所得溶液在0℃攪拌1小時。將有機層在真空下濃縮。隨後添加水(10 mL)中之氫氧化鈉(500 mg，20.83 mmol)，且在25℃攪拌1小時。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% NH4 CO3 於水中)純化，得到呈褐色固體狀之N -[8-氯-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]乙烷磺醯胺(85 mg，0.18 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 477。步驟 5 ：(6-(乙基磺醯胺基)-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將N -[8-氯-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]乙烷磺醯胺(80 mg，0.17 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(491.22 mg，4.19 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(69.44 mg，0.07 mmol)、Brettphos (71.92 mg，0.13 mmol)及碳酸銫(164.03 mg，0.50 mmol)於1,4-二噁烷(8 mL)中之混合物在120℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(96/4)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[6-(乙基磺醯基胺基)-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(35 mg，0.063 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 558。步驟 6 ：N -(8-胺基-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)乙烷磺醯胺
將N -[6-(乙基磺醯基胺基)-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(30 mg，0.05 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(3 mL)之溶液在25℃攪拌1小時。將反應溶液在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將殘餘物調整至pH 10。將粗產物藉由製備型HPLC用(XSelect CSH製備型C18 OBD管柱，19*250 mm，5 um；水(0.1%FA): ACN (5%至70%)，7 min內；25 mL/min)純化，得到呈黃色固體狀之N -[8-胺基-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]乙烷磺醯胺；甲酸(14 mg，0.028 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 458；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.84 (s, 1H), 9.00 (s, 2H), 7.40 (s, 1H), 6.57 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 6.33 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 6.19 (s, 2H), 6.00 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.61 (m, 1H), 3.90-3.71 (m, 2H), 3.19 (m, 2H), 3.00 (d,J = 6.1 Hz, 2H), 1.22 (m, 3H), 1.14 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例143： 5-(8-胺基-7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-乙基噁唑-2(3H )-酮(化合物242) 步驟 1 ：4-乙基-3H-噁唑-2-酮
向氰酸鉀(6.0 g，74.07 mmol)、1-羥基丁-2-酮(3.0 g，34.05 mmol)於二乙醚(100 mL)中之溶液中添加乙酸(3.0 mL，34.05 mmol)，在20℃攪拌12 h。過濾後，將濾液在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之4-乙基-3H -噁唑-2-酮(1.0 g，8.84 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 114。步驟 2 ：4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮
在0℃下將氫化鈉(579.52 mg，60%純度，25.2 mmol)添加至4-乙基-3H -噁唑-2-酮(1.9 g，16.8 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(30 mL)中之溶液中。將溶液在0℃攪拌10分鐘。添加4-甲氧基苄基氯(3.14 g，20.16 mmol)且在25℃攪拌2小時。將反應溶液用乙酸乙酯稀釋且用水洗滌。將有機萃取物用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟水(10 mmol/l碳酸氫鈉) /ACN(60/40)純化，得到呈淡黃色固體狀之4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮(2.1 g，9.00 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 234。步驟 3 ：5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮
將8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(287 mg，0.89 mmol)、4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮(207.58 mg，0.89 mmol)、三環己基膦(49.83 mg，0.18 mmol)、乙酸鈀(29.01 mg，0.09 mmol)、三甲基乙酸(22.69 mg，0.22 mmol)及碳酸鉀(245.61 mg，1.78 mmol)於N,N -二甲基乙醯胺(4 mL)中之溶液在100℃攪拌3小時，且隨後濃縮，將殘餘物藉由逆管柱用水(碳酸氫鈉10 mmol/L)/ACN (30/70)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮(225 mg，0.53 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 428。步驟 4 ：5-[8-氯-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮
將5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮(225 mg，0.53 mmol)、2-溴-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(171.73 mg，0.63 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(108.86 mg，0.11 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(121.58 mg，0.21 mmol)及碳酸銫(514.3 mg，1.58 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之溶液在100℃攪拌12小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(96/4)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之5-[8-氯-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮(158 mg，0.26 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =619。步驟 5 ：N -[6-[4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2-側氧基-噁唑-5-基]-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將5-[8-氯-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]噁唑-2-酮(155 mg，0.25 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(732.32 mg，6.26 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(51.83 mg，0.05 mmol)、Brettphos (40.26 mg，0.08 mmol)及碳酸銫(244.86 mg，0.75 mmol)於1,4-二噁烷(12 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(96/4)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之N -[6-[4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2-側氧基-噁唑-5-基]-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(80 mg，0.11 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =700。步驟 6 ：5-[8-胺基-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-乙基-3H -噁唑-2-酮
將N -[6-[4-乙基-3-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2-側氧基-噁唑-5-基]-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(140 mg，0.20 mmol)於2,2,2-三氟乙酸(5.0 mL)及三氟甲烷磺酸(1.0 mL)中之溶液在25℃攪拌48小時。將粗產物藉由製備型HPLC [XBridge製備型C18 5 umx30 mmx150 mm；水(碳酸氫鈉10 mmol/L):ACN(15%-50%)，6.03 min內]純化，得到呈褐色固體狀之5-[8-胺基-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-乙基-3H -噁唑-2-酮(33 mg，0.069 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =480；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.04 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.86 (d,J = 6.0 Hz, 1 H), 6.13 (s, 2H), 5.98 (s, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.65-4.56 (m, 1H), 3.78 (t,J = 6.0 Hz, 2H), 2.98 (t,J = 6.0 Hz, 2H), 2.51-2.47 (m, 2H), 1.21-1.12 (m, 9H)。 實例144：2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-氯吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物243) 步驟 1 ：4-氯-5-碘-吡啶-3-胺
在25℃下向4-氯-3-碘-5-硝基-吡啶(1.0 g，3.52 mmol)於二乙醚(10 mL)中之溶液中添加鹽酸(7.4 mL，3.52 mmol)及氯化亞錫(8.0 g，35.4 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時。將反應用甲醇中之氨(7 mol/L)淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色固體狀之4-氯-5-碘-吡啶-3-胺(800 mg，3.14 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 254.5。步驟 2 ：N -[6-(5-胺基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
在氮下，4-氯-5-碘-吡啶-3-胺(74.0 mg，0.29 mmol)、[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]硼酸(50.0 mg，0.10 mmol)、磷酸鉀(20.0 mg，0.09 mmol)、乙酸鈉(23.85 mg，0.29 mmol)及[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (15.0 mg，0.02 mmol)於乙腈(1 mL)及水(0.10 mL)中之溶液。將所得溶液在90℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(5/95)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[6-(5-胺基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.084 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ =595.1。步驟 3 ：2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-氯吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將N -[6-(5-胺基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(50.0 mg，0.08 mmol)及TFA (1 mL，0.08 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 7。將殘餘物藉由急驟層析術在C18 (乙腈-0.1%碳酸氫鈉於水中)上純化，得到呈紅色固體狀之2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-氯吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(12.9 mg，0.026 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 495.2。1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.24 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 6.77 (d,J = 5.9 Hz, 1H), 6.09 (s, 2H), 5.94 (s, 1H), 5.77 (s, 2H), 4.94 (s, 2H), 4.63-4.51 (m, 1H), 3.81-3.70 (m, 2H), 2.99-2.91 (m, 2H), 1.10 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例145： 2-((8-胺基-7-氟-6-((4-甲基-2-側氧基哌嗪-1-基)甲基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物244) 步驟 1 ：(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)甲醇
三丁基錫烷基甲醇(3.98 g，12.4 mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(2.0 g，6.2 mmol)及肆(三苯基膦)鈀(1.43 g，1.24 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之溶液在90℃攪拌60小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)甲醇(550 mg，2.43 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 227。步驟 2 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(羥甲基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
在25℃下向3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)甲醇(200 mg，0.88 mmol)、2-溴-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(264.18 mg，0.97 mmol)、t -BuBrettphos (213.56 mg，0.44 mmol)及t -BuBrettphos PdG3 (301.46 mg，0.35 mmol)於1,4-二噁烷(40 mL)中之溶液中添加碳酸銫(1.44 g，4.41 mmol)。將所得溶液在120℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(羥甲基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(120 mg，0.29 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 418。步驟 3 ：2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將2-[[8-氯-7-氟-6-(羥甲基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(50 mg，0.12 mmol)及亞硫醯氯(70.6 mg，0.60 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮，得到呈彩色固體狀之2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(50 mg，0.11 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 436。步驟 4 ：2-[[8-氯-7-氟-6-[(4-甲基-2-側氧基-哌嗪-1-基)甲基]-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
在0℃下向4-甲基-2-哌嗪酮(26.16 mg，0.23 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(3mL)中之溶液中添加氫化鈉(18.34 mg，60%純度，0.46 mmol)。將反應物在0℃攪拌20分鐘。添加2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(50 mg，0.11 mmol)且在25℃攪拌1小時。將反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-[(4-甲基-2-側氧基-哌嗪-1-基)甲基]-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(9 mg，0.018 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 514。步驟 5 ：N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-[(4-甲基-2-側氧基-哌嗪-1-基)甲基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
在25℃下向2-[[8-氯-7-氟-6-[(4-甲基-2-側氧基-哌嗪-1-基)甲基]-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(46 mg，0.09 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(314.53 mg，2.68 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(18.53 mg，0.02 mmol)及Brettphos (19.22 mg，0.04 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物中添加碳酸銫(116.7 mg，0.36 mmol)。將反應在90℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-[(4-甲基-2-側氧基-哌嗪-1-基)甲基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(45 mg，0.076 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 595。步驟 6 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-[(4-甲基-2-側氧基-哌嗪-1-基)甲基]-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-[(4-甲基-2-側氧基-哌嗪-1-基)甲基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(43 mg，0.07 mmol)於2,2,2-三氟乙酸(2 mL)及二氯甲烷(4 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150 mm 5 um；水(0.1%FA): CH3CN= 7%至15% B，7 min內)純化，得到呈紅色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-[(4-甲基-2-側氧基-哌嗪-1-基)甲基]-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(15.5 mg，0.029 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 495.3；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.16 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.63 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.94 (s, 1H), 4.95 (s, 2H), 4.66-4.50 (m, 3H), 3.76 (t,J = 5.9 Hz, 2H), 3.3-3.2 (m, 2H), 3.19 (s, 2H), 2.96 (t,J = 5.5 Hz, 2H), 2.88-2.64 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.10 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例146： 5-(8-胺基-7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-N,N ,4-三甲基嘧啶-2-羧醯胺(化合物245) 步驟 1 ：5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲腈
將氰化鈉(1062.86 mg，21.69 mmol)及1,4-二氮雜雙環辛烷三乙二胺(323.92 mg，2.89 mmol)於二甲亞碸(2 mL)及水(2 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。添加5-溴-2-氯-4-甲基嘧啶(3.0 g，14.46 mmol)於二甲亞碸中之溶液且攪拌12小時。將反應用水中之硫酸亞鐵淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(5/95)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲腈(700 mg，3.54 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 198.0。步驟 2 ：5-溴-4-甲基-嘧啶-2-羧酸
5-溴-4-甲基-嘧啶-2-甲腈(1.0 g，5.05 mmol)及NaOH (606 mg，15.15 mmol)於水(40 mL)中之溶液在60℃攪拌2小時。用鹽酸(2 mol/L)將反應混合物調整至pH 2。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈淡黃色油狀之5-溴-4-甲基-嘧啶-2-羧酸(800 mg，3.69 mmol)。LC0MS (ESI) [M+H]+ = 217.0。步驟 3 ：5-溴-N,N ,4-三甲基-嘧啶-2-羧醯胺
向5-溴-4-甲基-嘧啶-2-羧酸(1.0 g，4.61 mmol)、N,N- 二甲基胺(311.58 mg，6.91 mmol)及N,N -二異丙基乙基胺(2377.66 mg，18.43 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(30 mL)中之溶液中添加2-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸酯(2628.08 mg，6.91 mmol)。將混合物在25℃攪拌12小時，且隨後藉由水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(5/95)溶離來純化，得到呈黃色油狀之5-溴-N,N ,4-三甲基-嘧啶-2-羧醯胺(600 mg，2.46 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 244.1。步驟 4 ：N -[6-[2-(二甲基胺甲醯基)-4-甲基-嘧啶-5-基]-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]硼酸(50.0 mg，0.10 mmol)、5-溴-N,N ,4-三甲基-嘧啶-2-羧醯胺(47.64 mg，0.20 mmol)、肆(三苯基膦)鈀(22.56 mg，0.02 mmol)及碳酸鉀(40 mg，0.29 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)及水(1 mL)中之混合物在90℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆管柱用碳酸氫鈉(10 mmol/L)/ACN (70/30)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之N -[6-[2-(二甲基胺甲醯基)-4-甲基-嘧啶-5-基]-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(40 mg，0.063 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 631.7。步驟 5 ：N -[6-[2-(二甲基胺甲醯基)-4-甲基-嘧啶-5-基]-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -[6-[2-(二甲基胺甲醯基)-4-甲基-嘧啶-5-基]-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(5.0 mg，0.010 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(0.2 mL)於二氯甲烷(2 mL)中之混合物在25℃攪拌3小時。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 7。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在C18 (乙腈-0.1%碳酸氫鈉於水中)上純化，得到呈橙色固體狀之5-(8-胺基-7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-N,N ,4-三甲基嘧啶-2-羧醯胺(9.1 mg，0.017 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 532.2。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.30 (s, 1H), 9.16 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 6.92 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.23 (s, 2H), 5.96 (s, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.56-4.58 (m, 1H), 3.80-3.77 (m, 2H), 3.05 (s, 3H), 2.98-2.90 (m, 2H), 2.86 (s, 3H), 2.45 (d,J = 1.2 Hz, 3H), 1.12 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例147： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲氧基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物246) 步驟 1 ：3-溴-4-甲氧基-5-硝基-吡啶
將3-溴-4-氯-5-硝基吡啶(3.0 g，12.63 mmol)、甲醇(4.68 mL)及碳酸鉀(3.49 g，25.27 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(3 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(2/98)溶離來純化，得到呈無色油狀之3-溴-4-甲氧基-5-硝基-吡啶(600 mg，2.57 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =233.0。步驟 2 ：[N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(4-甲氧基-5-硝基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基硼酸(102.94 mg，0.20 mmol)、3-溴-4-甲氧基-5-硝基-吡啶(70.0 mg，0.30 mmol)、肆(三苯基膦)鈀(47.35 mg，0.04 mmol)及碳酸鉀(82.35 mg，0.60 mmol)於1,4-二噁烷(1 mL)及水(0.10 mL)中之混合物在90℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在C18上用ACN/水(70%)溶離來純化，得到呈褐色油狀之N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(4-甲氧基-5-硝基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.097 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =620.6。步驟 3 ：[N -[6-(5-胺基-4-甲氧基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(4-甲氧基-5-硝基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，0.11 mmol)及雷氏鎳(10 mg，0.11 mmol)]於甲醇(5 mL)中之混合物在25℃攪拌。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在C18上用ACN/水(60%)溶離來純化，得到呈黃色油狀之[N -[6-(5-胺基-4-甲氧基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(40 mg，0.07 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 590.6。步驟 4 ：2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲氧基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將N -[6-(5-胺基-4-甲氧基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(40.0 mg，0.07 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)於二氯甲烷(5 mL)中之混合物在25℃攪拌3小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 7。將殘餘物藉由急驟層析術在C18 (乙腈-0.1%碳酸氫鈉於水中)上純化，得到呈黃色固體狀之2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲氧基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(6.1 mg，0.012 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 491.3。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.24 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 6.83 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.04 (s, 2H), 5.96 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.62-4.55 (m, 1H), 3.81-3.73 (m, 2H), 3.45 (s, 3H), 3.02-2.94 (m, 2H), 1.12 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例148： 6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-N 3-(5,6-二氫-11H -咪唑并[1,2-a ]吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-8-基)-7-氟異喹啉-3,8-二胺(化合物247) 步驟 1 ：2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-硫酮
將2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(1.0 g，4.35 mmol)及勞森氏試劑(1.8 g，4.45 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)中之溶液在90℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-硫酮(530 mg，2.15 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 246.1。步驟 2 ：2-溴-N -(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-胺
將2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-硫酮(1.2 g，4.88 mmol)、胺基乙醛二乙縮醛(3.25 g，24.38 mmol)及Ag2 CO3 (2.69 g，9.75 mmol)於四氫呋喃(100 mL)中之溶液在85℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0.05% TFA於水中)純化，得到呈黃色固體狀之2-溴-N -(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-胺(900 mg，2.6 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 245.2。步驟 3 ：8-溴-5,6-二氫-11H -咪唑并[1,2-a ]吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯
將2-溴-N -(2,2-二乙氧基乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-胺(425 mg，1.23 mmol)及鹽酸(0.31 mL，1.23 mmol)於乙酸(10 mL)中之溶液在80℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相管柱用水(0.05% 2,2,2-三氟乙酸)/乙腈(85/15)溶離來純化，得到呈褐色油狀之8-溴-5,6-二氫-11H -咪唑并[1,2-a ]吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯(200 mg，0.79 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 253.1。步驟 4 ：N -[5-[3-胺基-8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯
將N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(500 mg，0.99 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(3489.27 mg，29.82 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(205.78 mg，0.20 mmol)、Brettphos (159.85 mg，0.30 mmol)及碳酸銫(972.22 mg，2.98 mmol)於1,4-二噁烷(50 mL)中之混合物在90℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆管柱用碳酸氫鈉(10 mmol/L)於水/乙腈(40/60)中溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之N -[5-[3-胺基-8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.17 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 583.7。步驟 5 ：(第三 丁氧基羰基)(5-(8-((第三 丁氧基羰基)胺基)-3-((5,6-二氫-11H -咪唑并[1,2-a ]吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-8-基)胺基)-7-氟異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯
將N -[5-[3-胺基-8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(130 mg，0.20 mmol)、8-溴-5,6-二氫-11H -咪唑并[1,2-a ]吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯(249.6 mg，1.0 mmol)、t -BuBretphosG3 (145.6 mg，0.20 mmol)、t -BuBretophos (108 mg，0.20 mmol)及碳酸銫(421.2 mg，1.30 mmol)]於1,4-二噁烷(10 mL)中之溶液在120℃下1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(1/1)溶離來純化，得到呈黃色油狀之(第三 丁氧基羰基)(5-(8-((第三 丁氧基羰基)胺基)-3-((5,6-二氫-11H -咪唑并[1,2-a ]吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-8-基)胺基)-7-氟異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，0.10 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 755.8。步驟 6 ：6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-N 3-(5,6-二氫-11H -咪唑并[1,2-a ]吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-8-基)-7-氟異喹啉-3,8-二胺
將(第三 丁氧基羰基)(5-(8-((第三 丁氧基羰基)胺基)-3-((5,6-二氫-11H -咪唑并[1,2-a ]吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-8-基)胺基)-7-氟異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，0.09 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)於二氯甲烷(5 mL)中之混合物在25℃攪拌3小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 7。將殘餘物藉由逆相管柱用水(0.05% TFA)/ACN (85/15)溶離來純化，得到呈橙色固體狀之6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-N 3-(5,6-二氫-11H -咪唑并[1,2-a ]吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-8-基)-7-氟異喹啉-3,8-二胺(19.2 mg，0.038 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 456.2。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.25 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.21 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 6.84 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 6.72 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.05 (s, 3H), 5.40 (s, 2H), 5.22 (s, 2H), 4.39-4.31 (m, 2H), 3.27-3.19 (m, 2H), 1.93 (s, 3H)。 實例149： 2-((6-((1H -吡咯并[2,3-c ]吡啶-1-基)甲基)-8-胺基-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物249) 步驟 1 ：2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將2-[[8-氯-7-氟-6-(羥甲基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(50 mg，0.12 mmol)及亞硫醯氯(70.6 mg，0.60 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮，得到呈褐色固體狀之2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(50 mg，0.11 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 436。步驟 2 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(吡咯并[2,3-c ]吡啶-1-基甲基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(50 mg，0.11 mmol)、1H -吡咯并[2,3-c ]吡啶(40.62 mg，0.34 mmol)及碳酸銫(186.79 mg，0.57 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(6 mL)中之混合物在25℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(吡咯并[2,3-c ]吡啶-1-基甲基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(15 mg，0.029 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 518。步驟 3 ：N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(吡咯并[2,3-c ]吡啶-1-基甲基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
在25℃下向2-[[8-氯-7-氟-6-(吡咯并[2,3-c ]吡啶-1-基甲基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(70 mg，0.14 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(474.33 mg，4.05 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(27.97 mg，0.03 mmol)及Brettphos (29.03 mg，0.05 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物中添加碳酸銫(176.22 mg，0.54 mmol)。將所得溶液在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(吡咯并[2,3-c ]吡啶-1-基甲基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(45 mg，0.075 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 599。步驟 4 ：2-((6-((1H -吡咯并[2,3-c ]吡啶-1-基)甲基)-8-胺基-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(吡咯并[2,3-c ]吡啶-1-基甲基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(80 mg，0.13 mmol)於二氯甲烷(4 mL)及2,2,2-三氟乙酸(4 mL)中之混合物在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150 mm 5 um；水(0.1%FA): CH3 CN= 5%至6% B，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(吡咯并[2,3-c ]吡啶-1-基甲基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(9.4 mg，0.017 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 499.3；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.17 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.12 (d,J = 5.4 Hz, 1H), 7.72 (d,J = 3.0 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.54 (d,J = 1.0 Hz, 1H), 6.74 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.57 (d,J = 3.1 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 5.95 (s, 1H), 5.64 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.60 (t,J = 6.8 Hz, 1H), 3.78 (s, 2H), 2.98 (s, 2H), 1.13 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。實例150： 2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-7-甲基-6,7-二氫-5H -咪唑并[1,2-d ][1,4]二氮呯-8(9H )-酮(化合物250) 步驟 1 ：2-[第三 丁氧基羰基(甲基)胺基]乙基甲烷磺酸酯
向(2-羥乙基)(甲基)胺基甲酸第三 丁酯(1.0 g，5.71 mmol)及三乙胺(1.15 g，11.41 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中滴加甲烷磺醯氯(975.86 mg，8.56 mmol)。將混合物在0℃攪拌1小時。將所得溶液用水洗滌，且將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈無色油狀之2-[第三 丁氧基羰基(甲基)胺基]乙基甲烷磺酸酯(1.29 g，5.08 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 254。步驟 2 ：N -[2-(4-溴-2-甲基-咪唑-1-基)乙基]-N -甲基-胺基甲酸第三 丁酯
將5-溴-2-甲基-1H -咪唑(5.0 g，31.06 mmol)及氫化鈉(1.86 g，60%純度，46.58 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(100 mL)中之溶液在0℃攪拌30分鐘。添加2-[第三 丁氧基羰基(甲基)胺基]乙基甲烷磺酸酯(8.0 g，31.58 mmol)且在室溫下攪拌12小時。將反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取，且用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% NH3 H2 O於水中)純化，得到呈無色油狀之N -[2-(4-溴-2-甲基-咪唑-1-基)乙基]-N -甲基-胺基甲酸第三 丁酯(6 g，18.85 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 318。步驟 3 ：2-[4-溴-1-[2-[第三 丁氧基羰基(甲基)胺基]乙基]咪唑-2-基]乙酸甲酯
在-70℃下向N -[2-(4-溴-2-甲基-咪唑-1-基)乙基]-N -甲基-胺基甲酸第三 丁酯(2.0 g，6.29 mmol)及碳酸二甲酯(2.83 g，31.43 mmol)於四氫呋喃(100 mL)中之溶液中添加二異丙基胺基鋰(7.54 mL，15.08 mmol，2 mol/L)。將所得溶液在-70℃至30℃攪拌2小時。將反應用水淬滅。將所得混合物在真空下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% NH3於水中)純化，得到呈無色固體狀之甲基 2-[4-溴-1-[2-[第三 丁氧基羰基(甲基)胺基]乙基]咪唑-2-基]acetate (400 mg，1.06 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 376。步驟 4 ：2-[4-溴-1-[2-(甲基胺基)乙基]咪唑-2-基]乙酸甲酯
將2-[4-溴-1-[2-[第三 丁氧基羰基(甲基)胺基]乙基]咪唑-2-基]乙酸甲酯(400 mg，1.06 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮，得到呈無色固體狀之2-[4-溴-1-[2-(甲基胺基)乙基]咪唑-2-基]乙酸甲酯(250 mg，0.91 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 276。步驟 5 ：2-溴-7-甲基-6,9-二氫-5H -咪唑并[1,2-d ][1,4]二氮呯-8-酮
2-[4-溴-1-[2-(甲基胺基)乙基]咪唑-2-基]乙酸甲酯(250 mg，0.91 mmol)及三乙胺(914.42 mg，9.05 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液在25℃攪拌12小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% NH3 於水中)純化，得到呈無色油狀之2-溴-7-甲基-6,9-二氫-5H -咪唑并[1,2-d ][1,4]二氮呯-8-酮(160 mg，0.65 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 244。步驟 6 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-7-甲基-6,9-二氫-5H -咪唑并[1,2-d ][1,4]二氮呯-8-酮
將2-溴-7-甲基-6,9-二氫-5H -咪唑并[1,2-d ][1,4]二氮呯-8-酮(50 mg，0.20 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(47.15 mg，0.16 mmol)、t -BuBrettPhosG3 (69.97 mg，0.08 mmol)、t -BuBrettPhos (49.67 mg，0.10 mmol)及碳酸銫(200.34 mg，0.61 mmol)於1,4-二噁烷(6 mL)中之混合物在120℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% NH4 CO3 於水中)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-7-甲基-6,9-二氫-5H -咪唑并[1,2-d ][1,4]二氮呯-8-酮(5.7 mg，0.013 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 451。步驟 7 ：(7-氟-3-((7-甲基-8-側氧基-6,7,8,9-四氫-5H -咪唑并[1,2-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
在25℃下向2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-7-甲基-6,9-二氫-5H -咪唑并[1,2-d ][1,4]二氮呯-8-酮(230 mg，0.51 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.79 g，15.3 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(105.59 mg，0.10 mmol)及Brettphos (109.57 mg，0.20 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物中添加碳酸銫(665.16 mg，2.04 mmol)。將反應物在90℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[7-氟-3-[(7-甲基-8-側氧基-6,9-二氫-5H -咪唑并[1,2-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，0.13 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 532。步驟 8 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-7-甲基-6,9-二氫-5H -咪唑并[1,2-d ][1,4]二氮呯-8-酮
將N -[7-氟-3-[(7-甲基-8-側氧基-6,9-二氫-5H -咪唑并[1,2-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(65 mg，0.12 mmol)於二氯甲烷(5 mL)及2,2,2-三氟乙酸(5 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150 mm 5um；水(0.1%FA): CH3 CN= 7%至10% B，7 min內)純化，得到呈紅色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-7-甲基-6,9-二氫-5H -咪唑并[1,2-d ][1,4]二氮呯-8-酮(2 mg，0.0042 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 432.2；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.26 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.49 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.38 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.07 (d,J = 19.2 Hz, 2H), 6.70 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.10 (s, 2H), 4.11 (d,J = 5.8 Hz, 2H), 3.99 (d,J = 5.4 Hz, 2H), 3.89 (s, 2H), 2.96 (s, 3H), 2.21 (s, 3H)。 實例151： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-4,5-二氫-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(化合物252) 步驟 1 ：2-(氯甲基磺醯基)乙酸乙酯
在0℃下向氫化鈉(5.83 g，60%純度，145.63 mmol)於四氫呋喃(200 mL)中之溶液中添加2-巰基乙酸乙酯(17.5 g，145.63 mmol)。將所得溶液在0℃攪拌30分鐘。添加溴氯甲烷(94.21 g，728.14 mmol)且在0℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將粗產物在真空中蒸餾，得到呈無色油狀之2-(氯甲基磺醯基)乙酸乙酯(14 g，83.02 mmol)。GCMS = 168。步驟 2 ：5-溴-2-[(2-乙氧基-2-側氧基-乙基)磺醯基甲基]吡唑-3-羧酸甲酯
在25℃下向5-溴-1H -吡唑-3-羧酸甲酯(1.5 g，7.32 mmol)、2-(氯甲基磺醯基)乙酸乙酯(1.36 g，8.05 mmol)及碳酸鉀(2.02 g，14.63 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(30 mL)中之混合物中添加碘化四丁銨(134.99 mg，0.37 mmol)。將所得溶液在25℃攪拌4小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(5/1)溶離來純化，得到呈黃色油狀之5-溴-2-[(2-乙氧基-2-側氧基-乙基)磺醯基甲基]吡唑-3-羧酸甲酯(1.8 g，5.34 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 337。步驟 3 ：2-溴-4-側氧基-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-5-羧酸甲酯
將5-溴-2-[(2-乙氧基-2-側氧基-乙基)磺醯基甲基]吡唑-3-羧酸甲酯(500 mg，1.48 mmol)及甲醇鈉(0.55 mL，2.97 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液在25℃攪拌4小時。用乙酸將反應混合物調整至pH 8。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(5/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-溴-4-側氧基-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-5-羧酸甲酯(270 mg，0.93 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 291。步驟 4 ：2-溴-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-4-酮
將2-溴-4-側氧基-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-5-羧酸甲酯(1.1 g，3.78 mmol)及濃硫酸(49.37 g，75.57 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之溶液在100℃攪拌12小時。用氫氧化鈉(10%)將反應混合物調整至pH 6。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色固體狀之2-溴-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-4-酮(900 mg，2.90 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 233。 步驟 5 ：N -[(Z )-(2-溴-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-4-亞基)胺基]-4-甲基-苯磺醯胺
將2-溴-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-4-酮(50 mg，0.21 mmol)及4-甲基苯磺醯肼(39.95 mg，0.21 mmol)於甲醇(3 mL)中之溶液在25℃攪拌12小時。將溶劑在真空下濃縮。將固體用石油醚(10 mL)洗滌，得到呈黃色固體狀之N -[(Z )-(2-溴-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-4-亞基)胺基]-4-甲基-苯磺醯胺(80 mg，0.20 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 401。步驟 6 ：2-溴-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪
在0℃下向N -[(Z )-(2-溴-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-4-亞基)胺基]-4-甲基-苯磺醯胺(80 mg，0.20 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加二異丁基氫化鋁(1 mL，1.0 mmol，1 mol/L)。將所得溶液在0℃攪拌小時。將反應用水淬滅，且隨後用乙酸乙酯萃取。將有機層合併，經無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈白色固體狀之2-溴-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪(20 mg，0.091 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 219。步驟 7 ：2-溴-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪6,6-二氧化物
將2-溴-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪(130 mg，0.59 mmol)及3-氯過氧苯甲酸(612.32 mg，3.56 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液在25℃攪拌3小時。將反應用亞硫酸鈉及碳酸氫鈉溶液淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% HCl於水中)純化，得到呈白色固體狀之2-溴-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(70 mg，0.28 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 251。步驟 8 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
在25℃下向N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(250 mg，0.50 mmol)、2-溴-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(149.77 mg，0.60 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(102.89 mg，0.10 mmol)及4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(115.12 mg，0.20 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物中添加碳酸銫(486.11 mg，1.49 mmol)。將所得溶液在100℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(2/3)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，0.10 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 673。步驟 9 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
在25℃下向N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(65 mg，0.10 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(339.36 mg，2.90 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(19.99 mg，0.020 mmol)及Brettphos (20.74 mg，0.040 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物中添加碳酸銫(125.92 mg，0.39 mmol)。將所得溶液在90℃攪拌4小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.080 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 754。步驟 10 ：6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-N 3-(6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)-7-氟-異喹啉-3,8-二胺
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基甲基胺基)-3-[(6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(53.98 mg，0.070 mmol)於二氯甲烷(2 mL)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150 mm 5um；水(0.1%FA): CH3 CN= 3%至15% B，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-N 3-(6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)-7-氟-異喹啉-3,8-二胺(5.5 mg，0.011 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 454.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.33 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.70 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.18 (s, 2H), 6.08 (s, 1H), 5.82 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 3.58 (t,J = 6.6 Hz, 2H), 3.27 (t,J = 6.6 Hz, 2H), 2.00 (d,J = 1.5 Hz, 3H)。 實例152： 2-((8-胺基-6-環丙基-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物253) 步驟 1 ：6-環丙基-7-氟-3-(6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
在25℃下向8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-(6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)異喹啉-6-基三氟甲烷磺酸酯(150 mg，0.24 mmol)、環丙基硼酸(41.88 mg，0.49 mmol)及肆(三苯基膦)鈀(56.20 mg，0.049 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物中添加碳酸鉀(84.01 mg，0.61 mmol)。將所得溶液在100℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之6-環丙基-7-氟-3-(6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.20 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 509。步驟 2 ：2-[(8-胺基-6-環丙基-7-氟-3-異喹啉基)胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N -[6-環丙基-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，0.14 mmol)於2,2,2-三氟乙酸(4 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150 mm 5 um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉): CH3 CN= 33%至50% B，10 min內)純化，得到呈紅色固體狀之2-[(8-胺基-6-環丙基-7-氟-3-異喹啉基)胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(8.4 mg，0.021 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 409.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.12 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 6.48 (d,J = 6.3 Hz, 1H), 5.97 (s, 1H), 4.95 (s, 2H), 4.64-4.53 (m, 1H), 3.76 (t,J = 6.0 Hz, 2H), 3.00 (t,J = 6.0 Hz, 2H), 2.13-2.09 (m, 1H), 1.14 (d,J = 6.9 Hz, 6H), 1.06-0.96 (m, 2H), 0.84-0.82 (m, 2H)。 實例153及實例154： 2-((8-胺基-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物254)及2-((8-胺基-7-氟-6-(2-異丙氧基-4-甲基嘧啶-5-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物255) 步驟 1 ：5-溴-2-異丙氧基-4-甲基嘧啶
在0℃下將氫化鈉(550 mg，60%純度，13.75 mmol)分批添加至2-丙醇(1.75 g，29.12 mmol)於四氫呋喃(50 mL)中之溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌30分鐘。在0℃下添加5-溴-2-氯-4-甲基嘧啶(1.0 g，4.82 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌16小時。將混合物用鹽水稀釋。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/二氯甲烷(2/1)溶離來純化，得到呈淡黃色油狀之5-溴-2-異丙氧基-4-甲基-嘧啶(350 mg，1.51 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 231。步驟 2 ：2-異丙氧基-4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)嘧啶
將雙(頻哪醇合)二硼(2.043 g，8.05 mmol)、5-溴-2-異丙氧基-4-甲基-嘧啶(310 mg，1.34 mmol)、乙酸鉀(394.39 mg，4.02 mmol)及[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (98.2 mg，0.13 mmol)於1,4-二噁烷(50 mL)中之混合物在80℃攪拌15小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/二氯甲烷(3/7)溶離來純化，得到呈無色油狀之2-異丙氧基-4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)嘧啶(350 mg，1.26 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 279。步驟 3 ：(7-氟-6-(2-異丙氧基-4-甲基嘧啶-5-基)-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯及(7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]三氟甲烷磺酸酯(150 mg，0.24 mmol)、2-異丙氧基-4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)嘧啶(101.5 mg，0.36 mmol)、肆(三苯基膦)鈀(56.2 mg，0.05 mmol)及碳酸鉀(100.72 mg，0.73 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)及水(1 mL)中之溶液在90℃攪拌2小時。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[7-氟-6-(2-異丙氧基-4-甲基-嘧啶-5-基)-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(35 mg，0.057 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 619。及呈黃色固體狀之(7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(20 mg，0.042 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 469。步驟 4 ：2-((8-胺基-7-氟-6-(2-異丙氧基-4-甲基嘧啶-5-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物255)
將N -[7-氟-6-(2-異丙氧基-4-甲基-嘧啶-5-基)-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(30 mg，0.05 mmol)及TFA (5 mL)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應物調整至pH 10。將粗產物藉由製備型HPLC (XBridge Shield RP18 OBD管柱30*150 mm，5 um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉): ACN (32% -60%)，8 min內；60 mL/min)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(2-異丙氧基-4-甲基-嘧啶-5-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(7.7 mg，0.015 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 519.3；1 HNMR (300 Mhz, 甲醇-d 4 ) δ 9.15 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.89 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.49-5.34 (m, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.89-4.71 (m, 1H), 3.97-3.80 (m, 2H), 3.24-3.06 (m, 2H), 2.41 (s, 3H), 1.44 (d,J = 6.2 Hz, 6H), 1.24 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。步驟 5 ：2-((8-胺基-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物254)
將N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(20 mg，0.04 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(4 mL)之溶液在25℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 10。將粗產物藉由製備型HPLC (SunFire製備型C18 OBD管柱19×150 mm 5 um；水(0.1%FA): ACN (25%至52%)，7 min內；25 mL/min)純化，得到呈橙色固體狀之2-[(8-胺基-7-氟-3-異喹啉基)胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(2.5 mg，0.0068 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 369.2；1 HNMR (300 Mhz, 甲醇-d 4 ) δ 9.23 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.51-7.42 (m, 1H), 7.06-7.02 (m, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.14 (s, 2H), 4.83-4.72 (m, 1H), 3.96-3.85 (m, 2H), 3.18-3.05 (m, 2H), 1.25 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例155： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-5-異丙基-4,5-二氫-7H -吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物(化合物256) 步驟 1 ：1-氯-N-異丙基-甲烷磺醯胺
在0℃下向異丙基胺(1.19 g，20.13 mmol)及三乙胺(2.03 g，20.13 mmol)於二氯甲烷(100 mL)中之混合物中添加氯甲烷磺醯氯(1.5 g，10.07 mmol)。將反應物在0℃攪拌2小時。將所得溶液用水洗滌。將有機層經無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈無色油狀之1-氯-N -異丙基-甲烷磺醯胺(1.1 g，6.40 mmol)。GCMS = 171。步驟 2 ：5-溴-2-(異丙基磺醯胺基甲基)吡唑-3-羧酸甲酯
將1-氯-N -異丙基-甲烷磺醯胺(1381.51 mg，8.05 mmol)、3-溴-1H -吡唑-5-羧酸甲酯(1.1 g，5.37 mmol)及碳酸鉀(2.22 g，16.1 mmol)於1-甲基-2-吡咯啶酮(20 mL)中之混合物在60℃攪拌5小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% NH3 H2 O於水中)純化，得到呈白色固體狀之5-溴-2-(異丙基磺醯胺基甲基)吡唑-3-羧酸甲酯(600 mg，1.76 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 340。步驟 3 ：1-[3-溴-5-(羥甲基)吡唑-1-基]-N-異丙基-甲烷磺醯胺
在0℃下向5-溴-2-(異丙基磺醯胺基甲基)吡唑-3-羧酸甲酯(600 mg，1.76 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加二異丁基氫化鋁(3.53 mL，3.53 mmol，1 mol/L)。將所得溶液在0℃攪拌2小時。將反應物用甲醇淬滅。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈無色油狀之1-[3-溴-5-(羥甲基)吡唑-1-基]-N -異丙基-甲烷磺醯胺(400 mg,1.28 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 312。步驟 4 ：2-溴-5-異丙基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物
在0℃在氮下向1-[3-溴-5-(羥甲基)吡唑-1-基]-N -異丙基-甲烷磺醯胺(400 mg，1.28 mmol)及三苯基膦(671 mg，2.56 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液中添加偶氮二羧酸二異丙酯(517 mg，2.56 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。將有機層在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(7/3)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-溴-5-異丙基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物(300 mg，1.02 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =294。步驟 5 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-異丙基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(342 mg，0.68 mmol)、2-溴-5-異丙基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物(200 mg，0.68 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(140 mg，0.14 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(157.19 mg，0.27 mmol)、碳酸銫(665 mg，2.04 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在100℃在氮下攪拌6小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(2/3)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-異丙基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(105 mg，0.15 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 716。步驟 6 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5-異丙基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-異丙基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(90 mg，0.13 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(294.42 mg，2.51 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(26 mg，0.03 mmol)、Brettphos (27 mg，0.05mmol)及碳酸銫(122 mg，0.38 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(2/3)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5-異丙基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.075 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 797。步驟 7 ：6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N 3-(5-異丙基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)異喹啉-3,8-二胺；甲酸
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5-異丙基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.08 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)於二氯甲烷(4 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% FA於水中)純化，得到呈橙色固體狀之6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N 3 -(5-異丙基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)異喹啉-3,8-二胺；甲酸(18.6 mg，0.034 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 497；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.17 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 6.85 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.28 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.34-4.27 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.20 (d,J = 6.4 Hz, 6H)。 實例156： 2-((8-胺基-6-(苄氧基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物257)
將N -[6-苄氧基-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.086 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液在25℃攪拌3小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 7。將殘餘物藉由急驟層析術在C18 (乙腈-0.1%碳酸氫鈉於水中)上純化，得到呈褐色固體狀之2-((8-胺基-6-(苄氧基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(12.2 mg，0.026 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 475.2。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.02 (d,J = 14.0 Hz, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.56-7.46 (m, 2H), 7.50-7.31 (m, 3H), 6.62-6.59 (m, 1H), 5.94 (d,J = 6.4 Hz, 3H),5.25 (s, 2H), 4.98 (s, 2H), 4.63-4.58 (m, 1H), 3.79-3.77 (m, 2H), 3.00-2.98 (m, 2H), 1.13 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例157： 2-((8-胺基-7-氟-6-甲基異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物258) 步驟 1 ：(7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)-6-甲基異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]三氟甲烷磺酸酯(100 mg，0.16 mmol)、三甲基硼氧六環(101.79 mg，0.81 mmol)、肆(三苯基膦)鈀(37.46 mg，0.03 mmol)及碳酸鉀(67.14 mg，0.49 mmol)之溶液在90℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-甲基-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(35 mg，0.073 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 483。步驟 2 ：2-((8-胺基-7-氟-6-甲基異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-甲基-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(25 mg，0.05 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(5 mL)之溶液在25℃攪拌1小時。將反應物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將殘餘物調整至pH 10。將粗產物藉由製備型HPLC (SunFire製備型C18 OBD管柱19×150 mm 5 um 10 nm；水(0.1%FA): ACN (10%至27%)，12 min內: 25 mL/min)純化，得到呈橙色固體狀之2-[(8-胺基-7-氟-6-甲基-3-異喹啉基)胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(5.4 mg，0.014 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 383.2；1 HNMR (300 Mhz, 甲醇-d 4 ) δ 9.03 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 6.85 (d,J = 6.6 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 5.07 (s, 2H), 4.83-4.65 (m, 1H), 3.96-3.81 (m, 2H), 3.24-3.08 (m, 2H), 2.39 (d,J = 2.3 Hz, 3H), 1.25 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例158： 2-((8-胺基-7-氟-6-甲氧基異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物259) 步驟 1 ：(7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)-6-甲氧基異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將N -[7-氟-6-羥基-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.21 mmol)及碳酸鉀(42.72 mg，0.31 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(10 mL)中之溶液在0℃攪拌15分鐘。隨後添加碘甲烷(43.96 mg，0.31 mmol)且隨後在0℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-甲氧基-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(58 mg，0.12 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 499步驟 2 ：2-((8-胺基-7-氟-6-甲氧基異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-甲氧基-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(55 mg，0.11 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(0.5 mL)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 10。將粗產物藉由製備型HPLC (XBridge Shield RP18 OBD管柱30*150 mm，5 um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉): ACN (20%至46%)，9 min內: 60 mL/min)純化，得到呈黃色固體狀之2-[(8-胺基-7-氟-6-甲氧基-3-異喹啉基)胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(17.2 mg，0.043 mmol)。LCMS ( ESI) [M+H]+ = 399.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.02 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 6.48 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 5.95 (s, 2H), 5.89 (s, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.62-4.57 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.80-3.76 (m, 2H), 2.99-2.96 (m, 2H), 1.13 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。實例159： 2-((8-胺基-7-氟-6-((吡啶-2-基氧基)甲基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物260) 步驟 1 ：2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將2-[[8-氯-7-氟-6-(羥甲基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(145 mg，0.35 mmol)及亞硫醯氯(204.73 mg，1.74 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮，得到呈褐色固體狀之2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(150 mg，0.34 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 436。步驟 2 ：2-((8-氯-7-氟-6-((吡啶-2-基氧基)甲基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮及2-[[8-氯-7-氟-6-[(2-側氧基-1-吡啶基)甲基]-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將2-[[8-氯-6-(氯甲基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(150 mg，0.34 mmol)、1H -吡啶-2-酮(98.08 mg，1.03 mmol)及碳酸銫(560.38 mg，1.72 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(5 mL)中之混合物在25℃攪拌4小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1%鹽酸於水中)純化，得到呈黃色固體狀之2-((8-氯-7-氟-6-((吡啶-2-基氧基)甲基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(15 mg，0.03 mmol)及2-[[8-氯-7-氟-6-[(2-側氧基-1-吡啶基)甲基]-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(85 mg，0.17 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 495。步驟 3 ：7-氟-3-(6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)-6-((吡啶-2-基氧基)甲基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
在25℃下向2-(8-氯-7-氟-6-((吡啶-2-基氧基)甲基)異喹啉-3-基胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(14 mg，0.028 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(99.47 mg，0.85 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(5.86 mg，0.0057 mmol)及Brettphos (6.08 mg，0.011 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)中之混合物中添加碳酸銫(36.9 mg，0.11 mmol)。將所得溶液在90℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之7-氟-3-(6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)-6-((吡啶-2-基氧基)甲基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯(15 mg，0.076 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 576。步驟 4 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-(2-吡啶基氧基甲基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(2-吡啶基氧基甲基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(18 mg，0.03 mmol)於二氯甲烷(3 mL)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150 mm 5 um；水(10 mmol/碳酸氫鈉): CH3 CN= 35%至55% B，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(2-吡啶基氧基甲基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(3.4 mg，0.0072 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 476.2；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.20 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.20 (ddd,J = 5.1, 2.0, 0.8 Hz, 1H), 7.76 (ddd,J = 8.4, 7.1, 2.0 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.02 (ddd,J = 7.1, 5.0, 1.0 Hz, 1H), 6.99-6.91 (m, 2H), 6.01 (s, 2H), 5.96 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.59 (q,J = 6.8 Hz, 1H), 3.78 (t,J = 5.9 Hz, 2H), 2.98 (t,J = 5.9 Hz, 2H), 1.12 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例160： 2-((8-胺基-7-氟-6-((2-側氧基吡啶-1(2H )-基)甲基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物261) 步驟 1 ：N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-[(2-側氧基-1-吡啶基)甲基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
在25℃下向2-[[8-氯-7-氟-6-[(2-側氧基-1-吡啶基)甲基]-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(95 mg，0.19 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(673.7 mg，5.76 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(39.73 mg，0.040 mmol)及Brettphos (41.23 mg，0.080 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之溶液中添加碳酸銫(250.29 mg，0.77 mmol)。將所得溶液在90℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-[(2-側氧基-1-吡啶基)甲基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(75 mg，0.13 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 576步驟 2 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-[(2-側氧基-1-吡啶基)甲基]-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-[(2-側氧基-1-吡啶基)甲基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，0.12 mmol)於2,2,2-三氟乙酸(3 mL)及二氯甲烷(5 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150 mm 5 um；水(10 mmol/碳酸氫鈉): CH3 CN= 13%至43% B，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-[(2-側氧基-1-吡啶基)甲基]-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(23.8 mg，0.050 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 476.2；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.18 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 7.72 (dd,J = 6.9, 2.0 Hz, 1H), 7.53-7.43 (m, 2H), 6.49-6.39 (m, 2H), 6.29 (td,J = 6.7, 1.4 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 5.96 (s, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.94 (s, 2H), 4.59 (m,J = 6.8 Hz, 1H), 3.77 (t,J = 5.9 Hz, 2H), 2.97 (t,J = 5.9 Hz, 2H), 1.11 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例161： 6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-N 3-(7,7-二氟-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)-7-氟異喹啉-3,8-二胺(化合物262) 步驟 1 ：1-(3,5-二溴吡唑-1-基)己-5-烯-2-醇
將3,5-二溴-1H -吡唑(5.0 g，22.14 mmol)、1,2-環氧基-5-己烯(4.35 g，44.27 mmol)及碳酸銫(21.78 g，66.41 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(20 mL)中之溶液在85℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(3/1)溶離來純化，得到呈淡黃色油狀之1-(3,5-二溴吡唑-1-基)己-5-烯-2-醇(4.2 g，13.0 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 324.0。步驟 2 ：2-溴-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫吡唑并[1,5-a ]氮呯-7-醇
將[1-(3,5-二溴吡唑-1-基)己-5-烯-2-醇(7.2 g，22.22 mmol)、乙酸鈀(500 mg，2.23 mmol)、三苯基膦(1170.0 mg，4.47 mmol)、乙酸鉀(6570.0 mg，67.04 mmol)基溴化四丁銨(7155.33 mg，22.22 mmol)]於N ,N -二甲基乙醯胺(70 mL)中之混合物在氮下在90℃下12小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(2/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-溴-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫吡唑并[1,5-a ]氮呯-7-醇(3.8 g，15.63 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 243.1。步驟 3 ：2-溴-4-亞甲基-6,8-二氫-5H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-7-酮
將2-溴-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫吡唑并[1,5-a ]氮呯-7-醇(1.5 g，6.17 mmol)及DMP於二氯甲烷(20 mL)中之混合物在25℃攪拌3小時。用水中之碳酸氫鈉將反應混合物調整至pH 7。將所得溶液用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(4/1)溶離來純化，得到呈黃色油狀之2-溴-4-亞甲基-6,8-二氫-5H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-7-酮(600 mg，2.49 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 241.1。步驟 4 ：2-溴-7,7-二氟-4-亞甲基-6,8-二氫-5H -吡唑并[1,5-a ]氮呯
將2-溴-4-亞甲基-6,8-二氫-5H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-7-酮(400 mg，1.66 mmol)及三氟化二乙胺基硫(801.39 mg，4.98 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液在0℃攪拌1小時。將混合物藉由水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(5/1)溶離來純化，得到呈淡黃色油狀之2-溴-7,7-二氟-4-亞甲基-6,8-二氫-5H -吡唑并[1,5-a ]氮呯(120 mg，0.46 mmol)。LC/MS (ESI): [M+H]+ = 263.1。步驟 5 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(7,7-二氟-4-亞甲基-6,8-二氫-5H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-溴-7,7-二氟-4-亞甲基-6,8-二氫-5H -吡唑并[1,5-a ]氮呯(21.24 mg，0.08 mmol)、N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(65.0 mg，0.13 mmol)、t -BuBrettphosPdG3 (44.15 mg，0.05 mmol)、t -BuBrettphos (31.27 mg，0.06 mmol)及碳酸銫(126.39 mg，0.39 mmol)於1,4-二噁烷(6 mL)中之混合物在130℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用PE/EA(1/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(7,7-二氟-4-亞甲基-6,8-二氫-5H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(30 mg，0.044 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 685.1。步驟 6 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(7,7-二氟-4-亞甲基-6,8-二氫-5H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(7,7-二氟-4-亞甲基-6,8-二氫-5H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(40 mg，0.06 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(170.99 mg，1.46 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(12.09 mg，0.01 mmol)、Brettphos (9.39 mg，0.02 mmol)及碳酸銫(57.1 mg，0.18 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(7,7-二氟-4-亞甲基-6,8-二氫-5H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(40 mg，0.06 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 765.8。步驟 7 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(7,7-二氟-4-甲基-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(7,7-二氟-4-亞甲基-6,8-二氫-5H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(105.0 mg，0.14 mmol)及鈀碳(10%) (20 mg，0.14 mmol)於甲醇(5 mL)中之混合物在25℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(7,7-二氟-4-甲基-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，0.09 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 767.8。步驟 8 ：6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-N 3-(7,7-二氟-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)-7-氟異喹啉-3,8-二胺
將[N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(7,7-二氟-4-甲基-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，0.09 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 7。將殘餘物藉由急驟層析術在C18 (乙腈-0.1% FA於水中)上純化，得到呈黃色固體狀之6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-N 3-(7,7-二氟-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)-7-氟異喹啉-3,8-二胺(19.9 mg，0.043 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 486.2。1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.29 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 6.75 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 6.13 (s, 2H), 5.94 (s, 1H), 5.55 (s, 2H), 4.77-4.65 (m, 1H), 4.48-4.35 (m, 1H), 3.04-2.95 (m, 1H),2.40-2.20(m, 2H) 1.99 (s, 3H), 1.82 (d,J = 14.4 Hz, 1H), 1.50-1.40 (m, 1H), 1.32 (d,J = 6.9 Hz, 3H)。 實例162： 5-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-1-甲基-1,3-二氫異噻唑并[4,3-b ]吡啶2,2-二氧化物(化合物263) 步驟 1 ：N -(2,6-二氯-3-吡啶基)甲烷磺醯胺
將2,6-二氯-3-吡啶胺(3.0 g，18.4 mmol)、三乙胺(9.29 g，92.02 mmol)及甲烷磺醯氯(6.29 g，55.21 mmol)於二氯甲烷(120 mL)中之溶液在0℃攪拌2小時。用10%氫氧化鈉溶液將反應混合物調整至pH 10。將所得混合物在20℃攪拌1小時。將所得混合物用二氯甲烷萃取，且將水層合併。用12%鹽酸溶液將反應混合物調整至pH 5。過濾後，將固體收集且乾燥，得到呈無色固體狀之N -(2,6-二氯-3-吡啶基)甲烷磺醯胺(3 g，12.44 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =241.1。步驟 2 ：N -(2,6-二氯-3-吡啶基)-N -甲基-甲烷磺醯胺
將N -(2,6-二氯-3-吡啶基)甲烷磺醯胺(3.5 g，14.52 mmol)、碳酸鉀(5.01 g，36.29 mmol)、溴化四丁銨(0.93 g，2.9 mmol)及碘甲烷(6.18 g，43.55 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(170 mL)中之溶液在20℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水: ACN (5%至70%)，30 min內)，得到呈紅色油狀之N -(2,6-二氯-3-吡啶基)-N -甲基-甲烷磺醯胺(3.5 g，13.72 mmol)。LC/MS (ESI): [M+H]+ = 255.1。步驟 3 ：5-氯-1-甲基-3H -異噻唑并[4,3-b ]吡啶2,2-二氧化物
將N -(2,6-二氯-3-吡啶基)-N -甲基-甲烷磺醯胺(2.2 g，8.62 mmol)及第三 丁醇鉀(2.41 g，21.56 mmol)於二甲亞碸(70 mL)中之溶液在20℃攪拌2小時。過濾後，將反應系統藉由逆相層析術(C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水:甲醇(5%至45%)，30 min內)純化，得到呈褐色固體狀之5-氯-1-甲基-3H -異噻唑并[4,3-b ]吡啶2,2-二氧化物(900 mg，4.12 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 218.7。步驟 4 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基-2,2-二側氧基-3H -異噻唑并[4,3-b ]吡啶-5-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N- 第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(300 mg，0.60 mmol)、5-氯-1-甲基-3H -異噻唑并[4,3-b ]吡啶2,2-二氧化物(300 mg，1.37 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(123.47 mg，0.12 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(103.43 mg，0.18 mmol)及碳酸銫(486.11 mg，1.49 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)中之混合物在95℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水:甲醇(5%至70%)，30 min內)純化，得到呈褐色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基-2,2-二側氧基-3H -異噻唑并[4,3-b ]吡啶-5-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(150 mg，0.22 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 685.2。步驟 5 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(1-甲基-2,2-二側氧基-3H -異噻唑并[4,3-b ]吡啶-5-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將[胺基甲酸第三丁酯(250 mg，2.13 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(15 mg，0.01 mmol)、Brettphos (8.0 mg，0.01 mmol)、N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(1-甲基-2,2-二側氧基-3H -異噻唑并[4,3-b ]吡啶-5-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.07 mmol)及碳酸銫(95.0 mg，0.29 mmol)於1,4-二噁烷(1 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷] (5/95)溶離來純化，得到呈黃色油狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(1-甲基-2,2-二側氧基-3H -異噻唑并[4,3-b ]吡啶-5-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.065 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 765.9。步驟 6 ：[6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N 3-(1-甲基-2,2-二側氧基-3H -異噻唑并[4,3-b ]吡啶-5-基)異喹啉-3,8-二胺
將[N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(1-甲基-2,2-二側氧基-3H -異噻唑并[4,3-b ]吡啶-5-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(300 mg，0.39 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(0.2 mL，0.39 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液在25℃攪拌30分鐘。將反應藉由甲醇中之氨(7 mol/L)淬滅。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在C18 (乙腈-0.1%碳酸氫鈉於水中)上純化，得到呈黃色固體狀之5-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-1-甲基-1,3-二氫異噻唑并[4,3-b ]吡啶2,2-二氧化物(17.1 mg，0.037 mmol)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 466.2。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.69 (s, 1H), 9.35 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.45-7.28 (m, 2H), 6.77 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.16 (s, 2H), 5.26 (s, 2H), 4.79 (s, 2H), 3.05 (s, 3H), 1.94 (d,J = 1.4 Hz, 3H)。 實例163： 6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N 3-((4S ,7S )-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)異喹啉-3,8-二胺(化合物265)、 6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N 3-((4R ,7R )-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a]氮呯-2-基)異喹啉-3,8-二胺(化合物266)、 6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N 3-((4S ,7R )-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)異喹啉-3,8-二胺(化合物267)及 6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N 3-((4R ,7S )-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)異喹啉-3,8-二胺(化合物268) 步驟 1 ：1-(3,5-二溴-1H -吡唑-1-基)己-5-烯-2-醇
向3,5-二溴-1H -吡唑(1.5 g，6.7 mmol)於乙腈(20 mL)及2-(丁-3-烯基)環氧乙烷(2 g，20 mmol)中之溶液中添加碳酸鉀(2.8 g，20 mmol)。將所得混合物在80℃攪拌2小時。將反應用水淬滅，且隨後用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色油狀之1-(3,5-二溴-1H -吡唑-1-基)己-5-烯-2-醇(1.4 g，4.3 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 323。步驟 2 ：2-溴-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-7-醇
將1-(3,5-二溴-1H -吡唑-1-基)己-5-烯-2-醇(5.2 g，16.15 mmol)、乙酸鈀(361 mg，1.62 mmol)、三苯基膦(846 mg，3.23 mmol)、乙酸鉀(4.7 g，48.45 mmol)及溴化四丁銨(5.2 g，16.15 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(50 mL)中之混合物在90℃攪拌隔夜。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(1/1)溶離來純化，得到呈灰白色固體狀之2-溴-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-7-醇(3.6 g，14.8 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 243。步驟 3 ：2-溴-7-甲氧基-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯
將2-溴-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-7-醇(1 g，4.12 mmol)及氧化銀於甲基碘(15 mL)中之混合物回流隔夜。將所得溶液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(2/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-溴-7-甲氧基-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯(1.02 g，3.98 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 257。步驟 4 ：N -第三丁氧基羰基(5-(8-氯-7-氟-3-((7-甲氧基-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯
向2-溴-7-甲氧基-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯(1.02 g，3.97 mmol)、N -第三丁氧基羰基(5-(3-胺基-8-氯-7-氟異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯(2 g，3.97 mmol)、t -BuBrettPhos Pd G3 (683 mg，0.8 mmol)及t -BuBrettphos (774 mg，1.6 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之溶液中添加碳酸銫(3.9 g，12 mmol)。將所得混合物在120℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈深褐色固體狀之N -第三 丁氧基羰基(5-(8-氯-7-氟-3-((7-甲氧基-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯(1.5 g，2.21 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 679。步驟 5 ：N -第三 丁氧基羰基-N -(5-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((7-甲氧基-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯
向N -第三 丁氧基羰基(5-(8-氯-7-氟-3-((7-甲氧基-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯(1.5 g，2.2 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(7.7 g，66 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(455 mg，0.44 mmol)及Brettphos (236 mg，0.44 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物中添加碳酸銫(2.9 g，0.8 mmol)。將所得溶液在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈深褐色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -(5-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((7-甲氧基-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯(1.10 g，1.45 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 760。步驟 6 ：(第三 丁氧基羰基)(5-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯
將N -第三 丁氧基羰基-N -(5-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((7-甲氧基-4-亞甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯(1.1 g，1.45 mmol)、氧化鉑(120 mg)於甲醇(15 mL)中之混合物在室溫下攪拌16小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色固體狀之(第三 丁氧基羰基)(5-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯(800 mg，1.05 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 762。步驟 7 ：6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N3-((4S,7S)-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H-吡唑并[1,5-a]氮呯-2-基)異喹啉-3,8-二胺、6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N3-((4R,7R)-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H-吡唑并[1,5-a]氮呯-2-基)異喹啉-3,8-二胺、6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N3-((4S,7R)-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H-吡唑并[1,5-a]氮呯-2-基)異喹啉-3,8-二胺及6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-N3-((4R,7S)-7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H-吡唑并[1,5-a]氮呯-2-基)異喹啉-3,8-二胺
將(第三 丁氧基羰基)(5-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((7-甲氧基-4-甲基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-a ]氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯(800 mg，1.05 mmol)於二氯甲烷(10 mL)及2,2,2-三氟乙酸(10 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將粗產物藉由逆HPLC (C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水:ACN=20%至50%，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之混合物(168 mg，0.36 mmol)。將混合物藉由掌性HPLC分離，得到四種異構物。
化合物265：(56.3 mg)黃色固體。滯留時間：6.06 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.3%IPAmine):EtOH=70:30；1.0 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 462.3；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 9.25 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.66 (d,J = 4.6 Hz, 2H), 6.64 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.04 (s, 2H), 5.85 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.51 (dd,J = 15.2, 5.3 Hz, 1H), 4.16 (d,J = 14.7 Hz, 1H), 3.53 (s, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.89-2.72 (m, 1H), 2.16-2.03 (m, 1H), 1.93 (s, 3H), 1.87-1.72 (m, 1H), 1.58-1.42 (m, 2H), 1.27 (d,J = 6.9 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物266：(48.7 mg)。滯留時間：4.46 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.3%IPAmine):EtOH=70:30；1.0 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 462.3。
呈黃色固體狀之化合物268：(17.8 mg)。滯留時間：6.53 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.3%IPAmine):EtOH=70:30；1.0 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 462.3；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 9.25 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.68 (d,J = 6.9 Hz, 2H), 6.69 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 5.87 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.34 (d,J = 14.0 Hz, 1H), 4.03 (dd,J = 14.0, 9.5 Hz, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.16 (s, 1H), 2.86 (s, 1H), 2.13 (s, 1H), 1.93 (s, 3H), 1.86-1.56 (m, 2H), 1.41-1.20 (m, 1H), 1.27 (t,J = 6.8 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物267：(17.8 mg)。滯留時間：11.8 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.3%IPAmine):EtOH=70:30；1.0 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 462.3。 實例164： 5-[8-胺基-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-1-乙基-吡唑-3-甲腈(化合物269) 步驟 1 ：5-溴-1-乙基-吡唑-3-羧酸甲酯
將5-溴-1H -吡唑-3-羧酸甲酯(2.0 g，9.76 mmol)、碘乙烷(4.5 g，28.85 mmol)及碳酸鉀(3.0 g，21.74 mmol)於四氫呋喃(50 mL)中之混合物在80℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(3/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之5-溴-1-乙基-吡唑-3-羧酸甲酯(1.2 g，5.15 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 233.1。步驟 2 ：5-溴-1-乙基-吡唑-3-羧醯胺
將5-溴-1-乙基-吡唑-3-羧酸甲酯(1.2 g，5.15 mmol)於氫氧化銨(10 mL，30%)中之混合物在室溫下攪拌1小時。將反應溶液在真空下濃縮，得到呈白色固體狀之5-溴-1-乙基-吡唑-3-羧醯胺(1.1 g，5.05 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 218.1。步驟 3 ：5-溴-1-乙基-1H -吡唑-3-甲腈
在0℃下將三氟乙酸酐(1.27 g，6.05 mmol)滴加至5-溴-1-乙基-吡唑-3-羧醯胺(1.1 g，5.05 mmol)及三乙胺(1.53 g，15.14 mmol)於二氯甲烷(30 mL)中之溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至60/0.05%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈白色固體狀之5-溴-1-乙基-1H -吡唑-3-甲腈(1 g，5.00 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 200。步驟 4 ：N -[6-(5-氰基-2-乙基-吡唑-3-基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]硼酸(80 mg，0.16 mmol)及二氟化鉀(40 mg，0.41 mmol)於2-甲基-2-丙醇(0.80 mL)及水(0.20 mL)中之溶液在室溫下攪拌5小時。添加5-溴-1-乙基-吡唑-3-甲腈(80 mg，0.40 mmol)、磷酸鉀(96 mg，0.45 mmol)及肆(三苯基膦)鈀(40 mg，0.03 mmol)。將所得混合物在微波照射下在100℃攪拌4.5小時。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[6-(5-氰基-2-乙基-吡唑-3-基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(45 mg，0.077 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 588.3。步驟 5 ：5-[8-胺基-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-1-乙基-吡唑-3-甲腈
將N -[6-(5-氰基-2-乙基-吡唑-3-基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(40 mg，0.07 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)於二氯甲烷(4 mL)中之溶液在室溫下攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用三乙胺將反應混合物調整至pH 7。將粗產物藉由製備型HPLC用以下條件純化：管柱，Atlantis HILIC OBD管柱19*150*5 μm；流動相：水(10 mmol/L碳酸氫鈉)及ACN (40至50%，7 min內)；偵測器，UV 254 nm。獲得呈黃色固體狀之5-[8-胺基-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-1-乙基-吡唑-3-甲腈(13.8 mg，0.028 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 488.4；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.30 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.94 (d,J = 5.8 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 5.96 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.61-4.57 (m, 1H), 4.16 (q,J = 7.3 Hz, 2H), 3.79-3.76 (m, 2H), 2.98 (t,J = 5.8 Hz, 2H), 1.33 (t,J = 7.2 Hz, 3H), 1.12 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例165： 2-[[8-胺基-7-氟-6-(5,6,7,8-四氫咪唑并[1,2-a ]吡嗪-3-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(化合物270) 步驟 1 ：3-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-6, 8-二氫-5H -咪唑并[1, 2-a ]吡嗪-7-羧酸第三 丁酯
將6,8-二氫-5H -咪唑并[1,2-a ]吡嗪-7-羧酸第三 丁酯(1.0 g，4.48 mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(1.5 g，4.65 mmol)、碳酸鉀(1.0 g，7.25 mmol)、乙酸鈀(122 mg，0.37 mmol)、三環己基膦(210 mg，0.75 mmol)及三甲基乙酸(115 mg，1.13 mmol)於N ,N -二甲基乙醯胺(20 mL)中之混合物在100℃攪拌6小時。將所得混合物冷卻至室溫且隨後過濾。將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至55/0.05%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈黃色固體狀之3-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-6,8-二氫-5H -咪唑并[1,2-a ]吡嗪-7-羧酸第三 丁酯(500 mg，1.20 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 418.1。步驟 2 ：3-[8-氯-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4] 二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-6,8-二氫-5H -咪唑并[1,2-a ]吡嗪-7-羧酸第三 丁酯
將3-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-6,8-二氫-5H -咪唑并[1,2-a ]吡嗪-7-羧酸第三 丁酯(350 mg，0.84 mmol)、2-溴-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(455 mg，1.67 mmol)、t -BuBrettPhosPdG3 (350 mg，0.41 mmol)、t -BuBrettPhos (420 mg，0.73 mmol)及碳酸銫(805 mg，2.47 mmol)於1,4-二噁烷(35 mL)中之混合物在120℃攪拌1.5小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之3-[8-氯-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-6,8-二氫-5H -咪唑并[1,2-a ]吡嗪-7-羧酸第三 丁酯(300 mg，0.49 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 609.2。步驟 3 ：3-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-6,8-二氫-5H -咪唑并[1,2-a ]吡嗪-7-羧酸第三 丁酯
將3-[8-氯-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-6,8-二氫-5H -咪唑并[1,2-a ]吡嗪-7-羧酸第三 丁酯(260 mg，0.43 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(78 mg，0.08 mmol)、Brettphos (91 mg，0.17 mmol)、胺基甲酸第三 丁酯(1.56 g，13.32 mmol)及碳酸銫(416 mg，1.28 mmol)於1,4-二噁烷(26 mL)中之混合物在90℃攪拌16小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至60/0.05%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈褐色固體狀之3-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-6,8-二氫-5H -咪唑并[1,2-a ]吡嗪-7-羧酸第三 丁酯(150 mg，0.22 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 690.3。步驟 4 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-(5,6,7,8-四氫咪唑并[1,2-a ]吡嗪-3-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
向3-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-6,8-二氫-5H -咪唑并[1,2-a ]吡嗪-7-羧酸第三 丁酯(145 mg，0.21 mmol)於二氯甲烷(6 mL)中之溶液中添加2,2,2-三氟乙酸(1.5 mL)。將所得溶液在25℃攪拌1小時且隨後在真空下濃縮。用三乙胺將殘餘物調整至pH 7。將粗產物藉由製備型HPLC：Atlantis HILIC OBD管柱19*150*5 um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉)及ACN (20至30%，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(5,6,7,8-四氫咪唑并[1,2-a ]吡嗪-3-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(17.2 mg，0.035 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 490.3。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.22 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.07 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 6.85 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 5.96 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.60 (t,J = 6.7 Hz, 1H), 3.97 - 3.85 (m, 4H), 3.79-3.77 (m, 2H), 3.04-2.98 (m, 4H), 2.75 (s, 1H), 1.12 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例166： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-5,6-二氫-4H ,8H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯7,7-二氧化物(化合物271) 步驟 1 ：2-溴-6,8-二氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯7,7-二氧化物
將1-(烯丙基磺醯基甲基)-3,5-二溴-吡唑(2.0 g，5.81 mmol)、三乙胺(4.11 g，40.7 mmol)、乙酸鈀(0.2 g，0.87 mmol)及三(2-甲基苯基)膦(530.2 mg，1.74 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(120 mL)中之混合物在140℃攪拌1小時。將反應物冷卻至室溫且隨後在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(6/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之2-溴-6,8-二氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯7,7-二氧化物(100 mg，0.38 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 263.2。步驟 2 ：2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯7,7-二氧化物
將2-溴-6,8-二氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯7,7-二氧化物(200.0 mg，0.76 mmol)、氧化鉑(17.26 mg，0.08 mmol)及乙酸(9.12 mg，0.15 mmol)於甲醇(30 mL)中之混合物在氫(2 atm)下在20℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟(C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水: MeOH= 95%至60%，20 min內)，得到呈白色固體狀之2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯7,7-二氧化物(130 mg，0.49 mmol)。LCMS45 (ESI) [M+H]+ = 265.3。步驟 3 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(7,7-二側氧基-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(140 mg，0.28 mmol)、2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯7,7-二氧化物(140 mg，0.53 mmol)、t -BuBrettPhos Pd G3 (190.17 mg，0.22 mmol)、t -BuBrettPhos (134.72 mg，0.28 mmol)及碳酸銫(453.7 mg，1.39 mmol)於1,4-二噁烷(28 mL)中之混合物在130℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟(C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水: MeOH= 95%至35%，20 min內)純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(7,7-二側氧基-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(75 mg，0.11 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 687.3。步驟 4 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(7,7-二側氧基-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(7,7-二側氧基-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.15 mmol)、胺基甲酸第三 丁酯(425.65 mg，3.64 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(22.59 mg，0.02 mmol)、BrettPhos (15.6 mg，0.03 mmol)及碳酸銫(237.2 mg，0.73mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮，得到呈褐色油狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(7,7-二側氧基-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.13 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 768.4。步驟 5 ：6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-N 3-(7,7-二側氧基-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯-2-基)-7-氟-異喹啉-3,8-二胺
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(7,7-二側氧基-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.13 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(10.0 mL，1.3 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液在20℃攪拌1小時。將所得混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將溶液之pH值調整至10。將粗產物藉由製備型HPLC (C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水: CH3 CN = 95%至35%，45 min內)純化，得到呈黃色固體狀之6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-N 3-(7,7-二側氧基-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-c ][1,3]噻氮呯-2-基)-7-氟-異喹啉-3,8-二胺(10.3 mg，0.02 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 468.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.28 (s, 1H), 9.26 (s, 2H), 8.00 (s, 1H), 7.80 (s, 2H), 6.74-6.72 (m, 1H), 6.13 (s, 2H), 6.04 (s, 1H), 5.73-5.45 (m, 4H), 3.50-3.40 (m, 2H), 2.97-2.94 (m, 2H), 2.03-1.98 (m, 5H)。 實例167： 2-[[8-胺基-7-氟-6-(5-甲基-2-側氧基-1H -吡啶-4-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮；甲酸(化合物272) 步驟 1 ：4-碘-2-甲氧基-5-甲基-吡啶
將2-氟-4-碘-5-甲基吡啶(5.0 g，21.1 mmol)及甲醇中之甲醇鈉(50 mL，30%)於甲醇(50 mL)中之溶液在80℃攪拌2.5小時。將反應物藉由水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(5/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之4-碘-2-甲氧基-5-甲基-吡啶(3.7 g，14.86 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 250。步驟 2 ：(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)硼酸
將4-碘-2-甲氧基-5-甲基-吡啶(200 mg，0.80 mmol)、正丁基鋰(0.8 mL，2 mmol)於四氫呋喃(5 mL)中之溶液在-78℃攪拌1小時。添加三異丙氧基硼烷(1 mL，4.33 mmol)且隨後在25℃攪拌1小時。將反應用水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈白色固體狀之(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)硼酸(300 mg，0.72 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 168。步驟 3 ：N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)硼酸(54.16 mg，0.32 mmol)、[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]三氟甲烷磺酸酯(100.0 mg，0.16 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (11.87 mg，0.02 mmol)及碳酸鉀(49.24 mg，0.36 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)及水(1 mL)中之混合物在氮下在90℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1:9)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(59 mg，0.10 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 590。步驟 4 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-(5-甲基-2-側氧基-1H -吡啶-4-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮；甲酸
將N -[7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(2-甲氧基-5-甲基-4-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.10 mmol)及碘三甲基矽烷(122.16 mg，0.61 mmol)於乙腈(60 mL)中之混合物在80℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150mm 5um；水(0.1%FA): CH3 CN= 13%至24% B，10 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(5-甲基-2-側氧基-1H -吡啶-4-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮；甲酸(11.4 mg，0.022 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 476.2；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 11.89-11.19 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.73 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.26 (s, 1H), 6.13 (s, 2H), 5.97 (s, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.66-4.55 (m, 1H), 3.84-3.74 (m, 2H), 3.04-2.94 (s, 2H), 1.84 (s, 3H), 1.13 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例168： 2-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-6-(2-羥基-2-甲基丙基)-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物273) 步驟 1 ：2-(3-溴-5-(2-(2-羥基-2-甲基丙基胺基)乙基)-1H -吡唑-1-基)乙酸甲酯
將2-[5-(2-胺基乙基)-3-溴-吡唑-1-基]乙酸甲酯(400 mg，1.53 mmol)及氧化異丁烯(20 mL，1.53 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液在25℃攪拌40小時。將混合物在真空下濃縮。粗產物將不經純化即直接用於下一步驟中。LCMS (ESI) [M+H]+ = 334。步驟 2 ：2-溴-6-(2-羥基-2-甲基丙基)-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )- 酮
將2-[3-溴-5-[2-[(2-羥基-2-甲基-丙基)胺基]乙基]吡唑-1-基]乙酸甲酯(200 mg，0.60 mmol)及三乙胺(604.41 mg，5.98 mmol)於甲醇(50 mL)中之溶液在25℃攪拌12小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(5/95)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-溴-6-(2-羥基-2-甲基-丙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(40 mg，0.13 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 302。步驟 3 ：2-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-6-(2-羥基-2-甲基丙基)-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將2-溴-6-(2-羥基-2-甲基-丙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(252.05 mg，0.83 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(200 mg，0.70 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(143.89 mg，0.14 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(160.99 mg，0.28 mmol)及碳酸銫(679.83 mg，2.09 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在100℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/9)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(4 -甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-(2-羥基-2-甲基-丙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(150 mg，0.29 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 509。步驟 4 ：7-氟-3-(6-(2-羥基-2-甲基丙基)-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
將胺基甲酸第三 丁酯(1173.85 mg，10.02 mmol)、2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-(2-羥基-2-甲基-丙基)-5,8-二氫-4H- 吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(170 mg，0.33 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(69.14 mg，0.07 mmol)、Brettphos (71.74 mg，0.13 mmol)及碳酸銫(435.54 mg，1.34 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/9)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[7-氟- 3-[[6-(2-羥基-2-甲基-丙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.10 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 590。步驟 5 ：2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-6-(2-羥基-2-甲基丙基)-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將N -[7-氟-3-[[6-(2-羥基-2-甲基-丙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.10 mmol)於2,2,2-三氟乙酸(6 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150mm 5um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉): CH3 CN= 20%至45% B，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-(2-羥基-2-甲基-丙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(14.1 mg，0.029 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 490.2；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.27 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.50 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.39 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 6.78 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.12 (s, 2H), 5.96 (s, 1H), 5.01 (s, 2H), 4.59 (s, 1H), 4.00-3.93 (m, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.15-3.07 (s, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.06 (s, 6H)。 實例169： (R )-2-((8-胺基-7-氟-6-(7-羥基-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-4-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物274)及(S )-2-((8-胺基-7-氟-6-(7-羥基-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-4-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物275) 步驟 1 ：4-溴-7-羥基-5H -環戊[c ]吡啶-6-羧酸甲酯
在-78℃下經5分鐘向5-溴菸鹼酸乙酯(5 g，21.7 mmol)於四氫呋喃(22 mL)中之溶液中滴加二異丙基胺基鋰(23.9 mmol，2.5 M於四氫呋喃中)。將所得暗紅色溶液在-78℃攪拌30分鐘。在-78℃下經5分鐘添加四氫呋喃(22 mL)中之丙烯酸甲酯(4.9 mL，54.3 mmol)。將反應物在-78℃下再攪拌1.5小時。隨後添加水性10%乙酸(43.5 mL，76.1 mmol) (得到之pH為4至5)，且將反應物溫熱至室溫。將所得溶液在真空下濃縮，得到呈暗綠色非晶形固體狀之4-溴-7-羥基-5H -環戊[c ]吡啶-6-羧酸甲酯(5.38 g，粗品)。LCMS (ESI) [M+H+ ] = 270、272步驟 2 ：4-溴-5,6-二氫-7H -環戊[c ]吡啶-7-酮
將4-溴-6-(甲氧基羰基)-5H -環戊[c]吡啶-7-醇鹽(5.38 g，粗品)溶於水性6 M鹽酸(54 mL)中且在回流下加熱1.5小時。將反應物在冰/水中冷卻，且隨後用氫氧化鉀(6 mol/L)調整至pH 9。將所得溶液用乙醚萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(100/1)溶離來純化，得到呈粉色固體狀之4-溴-5,6-二氫-7H -環戊[c ]吡啶-7-酮(0.69 g，3.25 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 212、214。步驟 3 ：4-溴-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-7-醇
在0℃下向4-溴-5,6-二氫環戊[c ]吡啶-7-酮(0.69 g，3.3 mmol)於乙醇(10 mL)中之溶液中添加硼氫化鈉(188 mg，5 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌隔夜。將反應用水淬滅，且隨後用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈灰白色固體狀之4-溴-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-7-醇(580 mg，2.72 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 214、216。步驟 4 ：4-溴-7-(第三 丁基二苯基矽基氧基)-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶
向4-溴-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-7-醇(424 mg，2 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(10 mL)中之溶液中添加咪唑(408 mg，6.0 mmol)及第三 丁基氯二苯基矽烷(1.1 g，4.0 mmol)。將反應混合物在25℃攪拌2小時。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，且隨後用鹽水洗滌。將有機層用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈淡黃色油狀之4-溴-7-(第三 丁基二苯基矽基氧基)-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶(820 mg，1.81 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 452、454。步驟 5 ：7-(第三 丁基二苯基矽基氧基)-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-4-基硼酸
向壓力管中添加4-溴-7-(第三 丁基二苯基矽基氧基)-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶(450 mg，1 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(2.54 g，10 mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (73 mg，0.1 mmol)及乙酸鉀(290 mg，0.3 mmol)於1,4-二噁烷中。將反應混合物在90℃攪拌3小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由HPLC純化，得到呈灰白色固體狀之7-(第三 丁基二苯基矽基氧基)-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-4-基硼酸(320 mg，0.77 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 418。步驟 6 ：6-(7-(第三 丁基二苯基矽基氧基)-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-4-基)-7-氟-3-(6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
向壓力管中添加7-(第三 丁基二苯基矽基氧基)-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-4-基硼酸(100 mg，0.24 mmol)、8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-(6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)異喹啉-6-基三氟甲烷磺酸酯(98 mg，0.16 mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (26 mg，0.032 mmol)及碳酸鉀(66 mg，0.48 mmol)於1,4-二噁烷中。將反應混合物在90℃攪拌3小時。將反應物冷卻至室溫且隨後在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆HPLC純化，得到呈褐色固體狀之6-(7-(第三 丁基二苯基矽基氧基)-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-4-基)-7-氟-3-(6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯(108 mg，0.13 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 840。步驟 7 ：2-(8-胺基-6-(7-(第三 丁基二苯基矽基氧基)-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-4-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
在0℃下向6-(7-(第三 丁基二苯基矽基氧基)-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-4-基)-7-氟-3-(6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯(108 mg，0.13 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中添加2,2,2-三氟乙酸(2 mL)。將反應物在室溫下攪拌30分鐘。將所得溶液在真空下濃縮，得到呈褐色油狀之2-(8-胺基-6-(7-(第三 丁基二苯基矽基氧基)-6,7-二氫-5H -環戊[c]吡啶-4-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(45 mg，0.061 mmol)。將殘餘物直接用於下一步驟。LCMS (ESI) [M+H]+ = 740。步驟 8 ：(R )-2-((8-胺基-7-氟-6-(7-羥基-6,7-二氫-5H -環戊[c]吡啶-4-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮及(S )-2-((8-胺基-7-氟-6-(7-羥基-6,7-二氫-5H -環戊[c ]吡啶-4-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將2-(8-胺基-6-(7-(第三 丁基二苯基矽基氧基)-6,7-二氫-5H -環戊[c]吡啶-4-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(45 mg，0.061 mmol)於二氯甲烷(10 mL)及氟化四丁銨(0.1 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水:ACN=20%至50%，30 min內)純化，得到呈白色固體狀之外消旋產物(25 mg，0.049 mmol)。將外消旋產物藉由掌性HPLC分離，得到兩種異構物：
呈白色固體狀之化合物275：(7.1 mg，0.014 mmol)。滯留時間：2.68 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10 cm；3 μm；MtBE(0.3%IPAmine):EtOH=70:30；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 502.2；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.26 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 6.85 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.12 (s, 2H), 5.97 (s, 1H), 5.52 (d,J = 5.8 Hz, 1H), 5.26 (dd,J = 12.6, 6.4 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.64-4.54 (m, 1H), 3.78 (s, 2H), 3.03-2.71 (m, 4H), 2.40-2.31 (m, 1H), 1.88-1.78 (m, 1H), 1.12 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。
呈白色固體狀之化合物274：(7.8 mg，0.015 mmol)。滯留時間：3.73 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.3%IPAmine):EtOH=70:30；1.0ml/min)。 實例170： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-5-甲基-4,5-二氫-7H -吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物(化合物276) 步驟 1 ：5-溴-2-(甲基磺醯胺基甲基)吡唑-3-羧酸甲酯
將3-溴-1H -吡唑-5-羧酸甲酯(100 mg，0.49 mmol)、1-溴-N -甲基-甲烷磺醯胺(91.72 mg，0.49 mmol)及碳酸鉀(134.63 mg，0.98 mmol)於1-甲基-2-吡咯啶酮(10 mL)中之混合物在50℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(3/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之5-溴-2-(甲基磺醯胺基甲基)吡唑-3-羧酸甲酯(100 mg，0.32 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 312。步驟 2 ：1-[3-溴-5-(羥甲基)吡唑-1-基]-N -甲基-甲烷磺醯胺
在0℃下向5-溴-2-(甲基磺醯胺基甲基)吡唑-3-羧酸甲酯(60 mg，0.19 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加二異丁基氫化鋁(0.19 mL，0.38 mmol)。將所得溶液在0℃攪拌1小時。將反應物用甲醇淬滅。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.1%氫氧化銨於水中)純化，得到呈無色油狀之1-[3-溴-5-(羥甲基)吡唑-1-基]-N -甲基-甲烷磺醯胺(35 mg，0.12 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 284。步驟 3 ：2-溴-5-甲基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物
將1-[3-溴-5-(羥甲基)吡唑-1-基]-N-甲基-甲烷磺醯胺(200 mg，0.70 mmol)及三苯基膦(370.25 mg，1.41 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之混合物在25℃攪拌5分鐘。隨後添加偶氮二羧酸二異丙酯(284.38 mg，1.41 mmol)。將反應物在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(5/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-溴-5-甲基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物(170 mg，0.64 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 266。步驟 4 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-甲基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(321.3 mg，0.64 mmol)、2-溴-5-甲基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪6,6-二氧化物(170 mg，0.64 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(132.23 mg，0.13 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(147.69 mg，0.26 mmol)及碳酸銫(624.76 mg，1.92 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在100℃攪拌6小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(3/2)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-甲基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(110 mg，0.16 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 688。步驟 5 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5-甲基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-甲基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.15 mmol)、胺基甲酸第三 丁酯(340.47 mg，2.91 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(30.08 mg，0.03 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(33.6 mg，0.06 mmol)及碳酸銫(142.12 mg，0.44 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在100℃攪拌6小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(2/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5-甲基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(105 mg，0.14 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 769。步驟 6 ：6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N 3-(5-甲基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)異喹啉-3,8-二胺
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5-甲基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d ][1,2,5]噻二嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.13 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)於二氯甲烷(3 mL)中之混合物在25℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 9。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈黃色固體狀之6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N3-(5-甲基-6,6-二側氧基-4,7-二氫吡唑并[5,1-d][1,2,5]噻二嗪-2-基)異喹啉-3,8-二胺(55.3 mg，0.12 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 469；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.33 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.65-6.64 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 6.16 (s, 1H), 6.09 (s, 2H), 5.57 (s, 2H), 5.22 (s, 2H), 4.59 (s, 2H), 2.86 (s, 3H), 1.92 (s, 3H)。 實例171： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-(氧雜環丁-3-基甲基)-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物277) 步驟 1 ：2-溴-6-(氧雜環丁-3-基甲基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
在0℃下向2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(200 mg，0.87 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(5 mL)中之溶液中添加NaH (79.98 mg，3.48 mmol)，且隨後攪拌5分鐘。添加3-(碘甲基)氧雜環丁烷(344.26 mg，1.74 mmol)，且隨後在25℃攪拌1小時。將反應物藉由水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(96/4)溶離來純化，得到呈橙色固體狀之2-溴-6-(氧雜環丁-3-基甲基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(192 mg，0.64 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 300.3。步驟 2 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[[6-(氧雜環丁-3-基甲基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(214.5 mg，0.43 mmol)、2-溴-6-(氧雜環丁-3-基甲基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(192.01 mg，0.64 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(88.28 mg，0.09 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(98.6 mg，0.17 mmol)及碳酸銫(347.57 mg，1.07 mmol)於1,4-二噁烷(19 mL)中之混合物在100℃攪拌4小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(96/4)溶離來純化，得到呈橙色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[[6-(氧雜環丁-3-基甲基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(231.3 mg，0.32 mmol)。LCMS15 (ESI) [M+H]+ = 722.3。步驟 3 ：N -[7-氟-3-([6-甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯
在25℃下向N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[[6-(氧雜環丁-3-基甲基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(231.3 mg，0.32 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(936.78 mg，8.01 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(66.3 mg，0.06 mmol)及Brettphos (68.67 mg，0.13 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物中添加碳酸銫(261.02 mg，0.80 mmol)。將反應溶液在90℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(1/1)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[6-(氧雜環丁-3-基甲基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(105.4 mg，0.1313 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 803.3。步驟 4 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(氧雜環丁-3-基甲基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[6-(氧雜環丁-3-基甲基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(66 mg，0.08 mmol)於二苯醚(2.0 mL)中之溶液在180℃攪拌3小時。將反應物溶於N,N -二甲基羧醯胺中，且隨後藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD管柱19*150 mm*5 um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉)/ ACN= 15%至30%，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(氧雜環丁-3-基甲基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(4.6 mg，0.0092 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 503.3。1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.24 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.69-7.66 (m, 2H), 6.72-6.70 (m, 1H), 6.06 (s, 2H), 5.97 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.97 (s, 2H), 4.63-4.59 (m, 2H), 4.34-4.30 (m, 2H), 3.83 (m, 2H), 3.71-3.69 (m, 2H), 3.25-3.21 (m, 1H), 2.99-2.98 (m, 2H), 1.92 (s, 3H)。 實例172： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-(2,2-二氟乙基)-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物278) 步驟 1 ：2-甲氧基-4-甲基-3-硝基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶
將5-溴-2-甲氧基-4-甲基-3-硝基-吡啶(2.0 g，8.1 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(10.28 g，40.48 mmol)、[1,1 ’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (1.19 g，1.62 mmol)及乙酸鉀(2.38 g，24.29 mmol)於1,4-二噁烷(40 mL)中之混合物100℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(1/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-甲氧基-4-甲基-3-硝基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(2.1 g，7.14 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 295。步驟 2 ：8-氯-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺
將8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(1.0 g，3.1 mmol)、2-甲氧基-4-甲基-3-硝基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(1.37 g，4.65 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (226.97 mg，0.31 mmol)及碳酸鉀(941.37 mg，6.82 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)及水(3 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(1/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之8-氯-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(780 mg，2.15 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 363。步驟 3 ：2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
在0℃下向2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(500 mg，2.17 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(20 mL)中之溶液中添加氫化鈉(156.48 mg，60%純度，6.52 mmol)。將所得混合物在0℃攪拌30分鐘。隨後添加2-碘-1,1-二氟乙烷(2.09 g，10.87 mmol)。將混合物在25℃攪拌3小時。將反應用水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈白色固體狀之2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(480 mg，1.63 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 294。步驟 4 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將8-氯-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(300 mg，0.83 mmol)、2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(291.88 mg，0.99 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(171.2 mg，0.17 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(191.21 mg，0.33 mmol)及碳酸銫(674.04 mg，2.07 mmol)於1,4-二噁烷(45 mL)中之混合物在100℃攪拌7小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(4/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(175 mg，0.30 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 576。步驟 5 ：N -[3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-[[8-氯-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(84 mg，0.15 mmol)、胺基甲酸第三 丁酯(427.16 mg，3.65 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(30.19 mg，0.03 mmol)、Brettphos(31.27 mg，0.06 mmol)及碳酸銫(237.74 mg，0.73 mmol)於1,4-二噁烷(8 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.1%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈黃色固體狀之N -[3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(40 mg，0.061 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 657。步驟 6 ：(6-(5-胺基-6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)-3-((6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)-7-氟異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將N -[3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-(6-甲氧基-4-甲基-5-硝基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(40 mg，0.06 mmol)及雷氏鎳(60 mg，0.06 mmol)於甲醇(7 mL)中之混合物在氫(1 atm)下在25℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色固體狀之(6-(5-胺基-6-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)-3-((6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)-7-氟異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(30 mg，0.048 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 627。步驟 7 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-6-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N -[6-(5-胺基-6-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(20 mg，0.03 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(3 mL)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將反應物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將殘餘物調整至pH 10。將粗產物藉由製備型HPLC (XBridge Shield RP18 OBD管柱30*150 mm，5 um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉): ACN (30%至45%)，7 min內)純化，得到呈暗黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-6-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(1.8 mg，0.0034 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 527.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.24 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.70 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.29-5.89 (m, 4H), 5.05 (s, 2H), 4.80 (s, 2H), 3.93 (m, 6H), 3.80 (s, 1H), 3.06 (m, 2H), 1.95 (d,J = 1.6 Hz, 3H)。 實例173： (1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物279)、 (1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物280)、 (1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物281)、 (1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物282)、 (1S ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2,2-二甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物120)及 (1R ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2,2-二甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物121) 步驟 1 ：四氟硼酸二苯基(丙基)鋶
在0℃向四氟硼酸銀(2 g，10.31 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加1-碘丙烷(1.75 g，10.31 mmol)及二苯基硫醚(5.76 g，30.93 mmol)。將反應物在35℃攪拌15小時。過濾混合物，且在真空下濃縮濾液。經殘餘物用二氯甲烷-乙醚洗滌，得到呈白色固體狀之四氟硼酸二苯基(丙基)鋶(2 g，6.32 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 229。步驟 2 ：反式 - 2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸第三 丁酯
在-78℃下向四氟硼酸二苯基(丙基)鋶(1.50 g，4.75 mmol)於1,2-二甲氧基乙烷(30 mL)及二氯甲烷(3 mL)中之溶液中添加二異丙基胺基鋰(5.54 ml，11.09 mmol)。將所得混合物在-78℃攪拌1小時。隨後添加(Z )-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯酸第三 丁酯(330 mg，1.58 mmol)，且在-78℃至25℃攪拌15小時。將反應用水淬滅。所得混合物用二氯甲烷萃取且用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈褐色油狀之反式-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸第三 丁酯作為4種立體異構物混合物(其中吡唑與酯成反式 ) (350 mg，1.40 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 251。步驟 3 ：反式 - 2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸
將2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸反式-第三 丁酯(350 mg，1.4 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(8 mL)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% HCl於水中)純化，得到呈褐色油狀之反式 -2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸(260 mg，1.34 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 195。步驟 4 ：反式 -N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
在0℃下向N-[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(675 mg，1.34 mmol)、反式-2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧酸(338.86 mg，1.74 mmol)及吡啶(3 mL)於二氯甲烷(15 mL)中之溶液中添加氧氯化磷(410.66 mg，2.68 mmol)。將反應物在25℃攪拌30分鐘且隨後藉由水淬滅。將所得混合物用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈褐色固體狀之反式 -N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(900 mg，1.32 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 679。步驟 5 ：反式 - N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將反式 -N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(1.3 g，1.91 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(5.61 g，47.85 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(396.21 mg，0.38 mmol)、Brettphos (410.38 mg，0.77 mmol)及碳酸銫(3.12 g，9.57 mmol)於1,4-二噁烷(80 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(95/5)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之反式 -N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(1 g，1.32 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 760。步驟 6 ：(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺、(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺、(1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺、(1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-乙基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺、(1S ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2,2-二甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺及(1R ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2,2-二甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
將反式 -N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[2-乙基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羰基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(1.0 g，1.32 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(10 mL)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將反應物在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC用以下條件(XBridge製備型OBD C18管柱30×150 mm 5 um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉): ACN (22%至40%)，7 min內)純化，得到六種異構產物之混合物(230 mg，0.50 mmol)。將混合物藉由掌性HPLC純化，得到六種異構物。
含乙基環丙烷之異構物之環丙烷立體化學(混合物279至282) (吡唑與醯胺成反式 ；任意指定之乙基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物279：(47.7 mg，0.104 mmol)。滯留時間：6.036 min (CHIRALPAK ID-3，0.46*10 cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30；2 ml/min)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 460.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.73 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.86 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.24 (s, 2H), 5.25 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.37-2.27 (m, 1H), 2.18 (m, 1H), 1.92 (d,J = 1.5 Hz, 3H), 1.62-1.45 (m, 1H), 1.22 (m, 2H), 0.89 (m, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物280：(56 mg，0.12 mmol)。滯留時間：7.559 min (CHIRALPAK ID-3，0.46*10 cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30；2 ml/min)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 460.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.73 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.86 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.24 (s, 2H), 5.25 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.38-2.15 (m, 2H), 1.92 (d,J = 1.5 Hz, 3H), 1.62-1.43 (m, 1H), 1.23 (m, 2H), 0.89 (m, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物281：(13.5 mg，0.029 mmol)。滯留時間：4.98 min (CHIRALPAK ID-3，0.46*10 cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30；2 ml/min)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 460.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.69 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.25 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 6.87 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.24 (s, 2H), 5.25 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.29-2.17 (m, 2H), 1.92 (d,J = 1.5 Hz, 3H), 1.83-1.42 (m, 3H), 0.92 (t,J = 7.3 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物282：(10.2 mg，0.022 mmol)。滯留時間：3.847 min (CHIRALPAK ID-3，0.46*10 cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30；2 ml/min)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 460.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.69 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.25 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 6.87 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.24 (s, 2H), 5.25 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.29-2.17 (m, 2H), 1.92 (d,J = 1.5 Hz, 3H), 1.83-1.42 (m, 3H), 0.92 (t,J = 7.3 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物120：N -[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]-2,2-二甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(16.6 mg，0.036 mmol)。滯留時間：6.312 min (CHIRALPAK ID-3，0.46*10 cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30；2 ml/min)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 460.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.63 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.87 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.23 (s, 2H), 5.25 (s, 2H), 3.79 (s, 3H), 2.33-2.19 (m, 2H), 1.92 (d,J = 1.4 Hz, 3H), 1.29 (s, 3H), 0.99 (s, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物121：N -[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]-2,2-二甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(16 mg，0.035 mmol)。滯留時間：5.166 min (CHIRALPAK ID-3，0.46*10 cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30；2 ml/min)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 460.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.63 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.87 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.24 (s, 2H), 5.25 (s, 2H), 3.79 (s, 3H), 2.38-2.15 (m, 2H), 1.92 (d,J = 1.5 Hz, 3H), 1.28 (s, 3H), 0.99 (s, 3H)。 實例174： 2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-環丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(化合物283) 步驟 1 ：[2-溴-6-環丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將環丙基硼酸(448.06 mg，5.22 mmol)、2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(400.0 mg，1.74 mmol)、乙酸銅(II) (567.97 mg，1.74 mmol)、三乙胺(526.82 mg，5.22 mmol)及吡啶(206.03 mg，2.61 mmol)於四氫呋喃(5 mL)中之混合物在60℃在氧下攪拌12 h。將反應混合物用水(50 mL)稀釋。將所得混合物用二氯甲烷萃取，經無水硫酸鈉乾燥且在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(2/98)溶離來純化，得到呈黃色油狀之[2-溴-6-環丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(260 mg，0.96 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 270.1步驟 2 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(6-環丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-溴-6-環丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(150 mg，0.56 mmol)、N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(195 mg，0.39 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(80.25 mg，0.08 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(175.5 mg，0.30 mmol)及碳酸銫(379.88 mg，1.17 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在100℃在氮下攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/10)溶離來純化，得到呈褐色油狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(6-環丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(160 mg，0.23 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 692.2。步驟 3 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(6-環丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將胺基甲酸第三 丁酯(812.8 mg，6.94 mmol)、N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(6-環丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(160.0 mg，0.23 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(48.0 mg，0.05 mmol)、Brettphos (25.6 mg，0.05 mmol)及碳酸銫(304 mg，0.93 mmol)於1,4-二噁烷(2 mL)中之混合物在90℃在氮下攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/10)溶離來純化，得到呈褐色油狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(6-環丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(160.0 mg，0.21 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 772.9步驟 4 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-環丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(6-環丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(160 mg，0.21 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL，0.21 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液在25℃攪拌3小時。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 7。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術藉由急驟層析術在C18上純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-環丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(11.4 mg，0.02 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 472.5；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.26 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.71 (d,J = 3.4 Hz, 2H), 6.73 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 5.97 (s, 1H), 5.30 (s, 2H), 4.95 (s, 2H), 3.87-3.77 (m, 2H), 3.06-2.96 (m, 2H), 2.81-2.70 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 0.75-0.60 (m, 2H), 0.71-0.59 (m, 2H)。 實例175： 2-[[8-胺基-6-(3,4-二氫-2H -吡啶并[4,3-b ][1,4]噁嗪-8-基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(化合物284) 步驟 1 ：8-溴-4H -吡啶并[4,3-b ][1,4]噁嗪-3-酮
將3-胺基-5-溴-4-吡啶醇(5 g，26.45 mmol)、氯乙醯氯(3.25 g，28.78 mmol)、碳酸鉀(11.0 g，79.71 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(30 mL)中之混合物在100℃攪拌12小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上純化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離，得到呈淡黃色固體狀之8-溴-4H -吡啶并[4,3-b ][1,4]噁嗪-3-酮(3.5 g，15.28 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 229。步驟 2 ：8-溴-3,4-二氫-2H -吡啶并(4,3-b )(1,4)噁嗪
在0℃下向8-溴-4H -吡啶并(4,3-b )(1,4)噁嗪-3-酮(1.0 g，4.37 mmol)於四氫呋喃(15 mL)中之混合物中添加硼烷-四氫呋喃錯合物(13.1 mL，13.1 mmol)。將反應物在60℃攪拌12小時。在60℃下將所得混合物滴加至甲醇(5 mL)及鹽酸(5 mL，12 mol/L)之溶液中達5小時。將反應混合物用水(50 mL)稀釋。將所得混合物用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色油狀之8-溴-3,4-二氫-2H -吡啶并(4,3-b )(1,4)噁嗪(1 g，4.7 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 215.0。步驟 3 ：8-溴-2,3-二氫吡啶并(4,3-b )(1,4)噁嗪-4-羧酸第三 丁酯
將二碳酸二第三 丁酯(1.67 g，7.67 mmol)、8-溴-3,4-二氫-2H -吡啶并(4,3-b )(1,4)噁嗪(1.1 g，5.12 mmol)、三乙胺(1.5 g，15.3 mmol)於二氯甲烷(30 mL)中之混合物在25℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上純化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離，得到呈淡黃色固體狀之8-溴-2,3-二氫吡啶并(4,3-b )(1,4)噁嗪-4-羧酸第三 丁酯(770 mg，2.44 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 315.2。步驟 4 ：8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-2,3-二氫吡啶并[4,3-b ][1,4]噁嗪-4-羧酸第三 丁酯
將8-溴-2,3-二氫吡啶并(4,3-b )(1,4)噁嗪-4-羧酸第三 丁酯(350 mg，1.11 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(2.8 g，11.15 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (161.0 mg，0.22 mmol)及乙酸鉀(327.8 mg，3.34 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上純化，用二氯甲烷/甲醇(30/1)溶離，得到呈淡黃色固體狀之8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-2,3-二氫吡啶并[4,3-b ][1,4]噁嗪-4-羧酸第三 丁酯(240 mg，0.66 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 362.2。步驟 5 ：8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-2,3-二氫吡啶并(4,3-b )(1,4)噁嗪-4-羧酸第三 丁酯
將(4-第三 丁氧基羰基-2,3-二氫吡啶并[4,3-b ][1,4]噁嗪-8-基)硼酸(100.0 mg，0.36 mmol)、[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]三氟甲烷磺酸酯(111.1 mg，0.18 mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (13.33 mg，0.02 mmol)及碳酸鉀(75.56 mg，0.55 mmol)於1,4-二噁烷(2 mL)中之混合物在氮下在90℃下2小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/10)溶離來純化，得到呈褐色油狀之[8-[8-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-2,3-二氫吡啶并[4,3-b ][1,4]噁嗪-4-羧酸第三 丁酯(120 mg，0.17 mmol)。步驟 6 ：2-[[8-胺基-6-(3,4-二氫-2H -吡啶并[4,3-b ][1,4]噁嗪-8-基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將8-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-2,3-二氫吡啶并[4,3-b ][1,4]噁嗪-4-羧酸第三 丁酯(140 mg，0.20 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液在25℃攪拌3小時。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 7。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(3,4-二氫-2H -吡啶并[4,3-b ][1,4]噁嗪-8-基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(10.3 mg，0.02 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 502.5。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.25 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.82 (d,J = 5.9 Hz, 1H), 6.30 (s, 1H), 6.03 (s, 1H), 5.97 (s, 1H),4.98 (s, 2H), 4.70-4.55 (m, 1H), 4.28-4.21 (m, 2H), 3.83-3.74 (m, 2H), 3.40 (s, 2H), 3.04-2.95 (m, 2H), 1.13 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例176： 2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-乙基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(化合物286) 步驟 1 ：3-溴-4-碘-5-硝基-吡啶
將3-溴-4-氯-5-硝基吡啶(5.0 g，21.06 mmol)及碘化鉀(70 g，422.02 mmol)於乙腈(300 mL)中之混合物在80℃攪拌16小時。將所得溶液冷卻至室溫且隨後過濾。將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(10/1)溶離來純化，得到呈紅色固體狀之3-溴-4-碘-5-硝基-吡啶(6.5 g，19.76 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =328.7。步驟 2 ：3-溴-5-硝基-4-乙烯基-吡啶
將3-溴-4-碘-5-硝基-吡啶(5.0 g，15.2 mmol)、三氟(乙烯基)硼酸鉀(2.6 g，19.41 mmol)、碳酸鈉(4.8 g，45.28 mmol)及[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (1.1 g，1.5 mmol)於1,4-二噁烷(300 mL)及水(30 mL)中之混合物在50℃攪拌3天。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(10/1)溶離來純化，得到3-溴-5-硝基-4-乙烯基-吡啶(2.8 g，12.22 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 229。步驟 3 ：5-溴-4-乙基-吡啶-3-胺
將3-溴-5-硝基-4-乙烯基-吡啶(500 mg，2.18 mmol)、二氧化鉑(100 mg，0.44 mmol)及乙酸(5滴)於甲醇(20 mL)中之混合物在20℃在氫下攪拌4小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(2/1)溶離來純化，得到呈淡黃色油狀之5-溴-4-乙基-吡啶-3-胺(220 mg，1.09 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 201。步驟 4 ：N -(5-溴-4-乙基-3-吡啶基)-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯
將5-溴-4-乙基-吡啶-3-胺(200 mg，0.99 mmol)及二碳酸二第三 丁酯(650 g，2.98 mmol)於四氫呋喃(2 mL)中之溶液在密封管中在90℃攪拌2小時。將有機層在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(10/1)溶離來純化，得到N -(5-溴-4-乙基-3-吡啶基)-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(180 mg，0.45 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 401。步驟 5 ：[5-[雙(第三 丁氧基羰基)胺基]-4-乙基-3-吡啶基]硼酸
將N -(5-溴-4-乙基-3-吡啶基)-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，0.50 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(600 mg，2.36 mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (70 mg，0.10 mmol)、乙酸鉀(150 mg，1.53 mmol)於N ,N -二甲基乙醯胺(5 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將所得混合物冷卻至室溫且隨後過濾。將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至70/0.05%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈褐色固體狀之[5-[雙(第三 丁氧基羰基)胺基]-4-乙基-3-吡啶基]硼酸(100 mg，0.27 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 367.3。步驟 6 ：(第三 丁氧基羰基)(5-(8-((第三 丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-乙基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯
將[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (13 mg，0.02 mmol)、碳酸鉀(65 mg，0.47 mmol)、[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]三氟甲烷磺酸酯(100 mg，0.16 mmol)、[5-[雙(第三 丁氧基羰基)胺基]-4-乙基-3-吡啶基]硼酸(90 mg，0.25 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)及水(0.05 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。將所得混合物冷卻至室溫且隨後過濾。將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/甲醇(40/1)溶離來純化，得到呈紅色固體狀之(第三 丁氧基羰基)(5-(8-((第三 丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-乙基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯(46 mg，0.058 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 789.4。步驟 7 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-乙基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-乙基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(41 mg，0.05 mmol)於二氯甲烷(5 mL)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)中之溶液在室溫下攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物溶於N ,N -二甲基羧醯胺羧醯胺，且用三乙胺將溶液調整至pH 7。將所得溶液藉由製備型HPLC用(XBridge製備型C18 OBD管柱19*150 mm 5 um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉)/CH3 CN = 25%至45%，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-乙基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(8.1 mg，0.017 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 489.3。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.24 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 6.70 (d,J = 5.9 Hz, 1H), 6.06 (s, 2H), 5.97 (s, 1H), 5.25 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.63-4.55 (m, 1H), 3.77 (s, 2H), 2.98 (s, 2H), 2.35-2.33(m, 2H), 1.12 (d,J = 6.7 Hz, 6H), 0.92 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。 實例177： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-4-乙基-4H ,6H -吡唑并[1,5-c ]噻唑5,5-二氧化物(化合物287) 步驟 1 ：3-(溴甲基磺醯基)丙-1-烯
經5分鐘向聚甲醛(16 g，0.13 mol)於甲苯(110 mL)中之溶液中添加270 mL溴化氫(水性，48%)。將混合物在20℃攪拌20分鐘。隨後將反應物溫熱至40℃，且經由添加漏斗經20分鐘添加烯丙硫醇(45 g，606.96 mmol)。隨後將混合物加熱至50℃，且隨後再攪拌2小時。將反應物藉由水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈淡黃色油狀之3-(溴甲基磺醯基)丙-1-烯(20 g，粗品)。GCMS (ESI) M =168.0。步驟 2 ：1-(烯丙基磺醯基甲基)-3,5-二溴-吡唑
向3,5-二溴-1H -吡唑(10 g，44.27 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(100 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(12.22 g，88.55 mmol)、碘化四丁銨(0.82 g，2.21 mmol)及3-(溴甲基磺醯基)丙-1-烯(22.19 g，132.82 mmol)。將反應物在20℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(8/1)溶離來純化，得到呈無色油狀之1-(烯丙基磺醯基甲基)-3,5-二溴-吡唑(10 g，32.05 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =310.9。步驟 3 ：1-(烯丙基磺醯基甲基)-3,5-二溴-吡唑
在0℃下向1-(烯丙基磺醯基甲基)-3,5-二溴-吡唑(10 g，32.05 mmol)於二氯甲烷(400 mL)中之溶液中添加3-氯過氧苯甲酸(12.13 g，70.51 mmol)。將所得溶液在0℃攪拌3小時。將反應藉由硫代硫酸鈉及碳酸鈉水溶液淬滅。將所得溶液用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(4/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之1-(烯丙基磺醯基甲基)-3,5-二溴-吡唑(1.5 g，4.36 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =345.1。步驟 4 ：2-溴-4-甲基-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪6,6-二氧化物
將三乙胺(1.47 g，14.53 mmol)、三(2-甲基苯基)膦(264.48 mg，0.87 mmol)、乙酸鈀(97.66 mg，0.44 mmol)及1-(烯丙基磺醯基甲基)-3,5-二溴-吡唑(1 g，2.91 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(50 mL)中之混合物在90℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(9/1)溶離來純化，得到呈黃色油狀之2-溴-4-甲基-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(500 mg，1.90 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 263.2。步驟 5 ：2-溴-4-甲基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪6,6-二氧化物
將2-溴-4-甲基-7H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(500 mg，1.9 mmol)及硼氫化鈉(252.75 mg，6.65 mmol)於甲醇(30 mL)中之混合物在20℃攪拌1小時。將反應物藉由水淬滅。將所得混合物用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟(C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水: CH3 CN= 70%至5%，30 min內)純化，得到呈無色固體狀之2-溴-4-甲基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(280 mg，1.06 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =267.3。步驟 6 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(4-甲基-6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(150 mg，0.30 mmol)、2-溴-4-甲基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪6,6-二氧化物(237.21 mg，0.89 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(123.47 mg，0.12 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(103.43 mg，0.18 mmol)及碳酸銫(291.67 mg，0.89 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在120℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟(C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水: CH3 CN= 70%至5%，30 min內)純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(4-甲基-6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.07 mmol)。LCMS45 (ESI) [M+H]+ =687.3。步驟 7 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(4-甲基-6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(4-甲基-6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.07 mmol)、胺基甲酸第三 丁酯(213.1 mg，1.82 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(26.36 mg，0.03 mmol)、BrettPhos (19.5 mg，0.04 mmol)及碳酸銫(118.6 mg，0.36 mmol)於1,4-二噁烷(8 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/10)溶離來純化，得到呈褐色油狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(4-甲基-6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.07 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 768.4。步驟 8 ：6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N 3-(4-甲基-6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)異喹啉-3,8-二胺甲酸鹽
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(4-甲基-6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.07 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(12 mL)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液在20℃攪拌1小時。將所得溶液在真空下濃縮。將粗產物直接藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD管柱19*15mm 5umC-0013；0.1% HCOOH於水: CH3 CN=93%至60%，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-N 3-(4-甲基-6,6-二側氧基-5,7-二氫-4H -吡唑并[1,5-c ][1,3]噻嗪-2-基)異喹啉-3,8-二胺(1.3 mg，0.003 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 468.2；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.45 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.68-7.66 (m, 2H), 6.69-6.67 (m, 1H), 6.25 (s, 1H), 6.11 (s, 2H), 5.46-5.38 (m, 2H), 5.22 (s, 2H), 4.67-4.63 (m, 1H), 2.03-1.99 (m, 2H), 1.92 (s, 3H), 1.14-1.10 (m, 3H)。 實例178： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-(環丙基甲基)-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮甲酸鹽(化合物288) 步驟 1 ：2-溴-6-(環丙基甲基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(200 mg，0.87 mmol)及氫化鈉(79.98 mg，3.48 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(5 mL)中之溶液在20℃攪拌5分鐘。隨後添加(碘甲基)環丙烷(316.44 mg，1.74 mmol)。將混合物在20℃攪拌1小時。將反應用水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(98/2)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-溴-6-(環丙基甲基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(191 mg，0.67 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 284.1。步驟 2 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[[6-(環丙基甲基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
在25℃下向2-溴-6-(環丙基甲基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(180.5 mg，0.64 mmol)、N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(213 mg，0.42 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(87.66 mg，0.08 mmol)及4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(97.91 mg，0.17 mmol)於1,4-二噁烷(18 mL)中之混合物中添加碳酸銫(345.14 mg，1.06 mmol)。將所得溶液在100℃攪拌12小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(96/4)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[[6-(環丙基甲基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(225 mg，0.32 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 706.4步驟 3 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[6-(環丙基甲基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
在室溫下向N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[[6-(環丙基甲基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(225 mg，0.32 mmol)、胺基甲酸第三 丁酯(933.11 mg，7.97 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(65.95 mg，0.06 mmol)及Brettphos (68.31 mg，0.13 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物中添加碳酸銫(259.66 mg，0.80 mmol)。將所得溶液在90℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(95/5)溶離來純化，得到呈橙色油狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[6-(環丙基甲基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(67 mg，0.085 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =787.2。步驟 4 ：2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-(環丙基甲基)-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮；甲酸
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[6-(環丙基甲基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(65 mg，0.08 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1.0 mL，0.08 mmol)於二氯甲烷(3.0 mL)中之溶液在20℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 8。將粗產物藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD管柱19x150 mm 5 um；水(0.1% FA)及ACN (5%至18%)，10 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(環丙基甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮；甲酸(13.5 mg，0.025 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 487.3；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.25 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.72-6.70 (m, 1H), 6.06 (s, 2H), 5.98(s, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.99 (s, 2H), 3.93-3.89 (m, 2H), 3.28-3.26 (m, 2H), 3.09-3.05 (m, 2H), 1.93 (s, 3H), 1.01 (s, 1H), 0.48-0.44 (m, 2H), 0.29 (m, 2H)。 實例179： 2-((8-胺基-7-氟-6-(5-羥基-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮；甲酸(化合物289) 步驟 1 ：3-溴-5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-吡啶
將5-溴-4-甲基-吡啶-3-醇(213 mg，1.13 mmol)及氫化鈉(52.11 mg，2.27 mmol，60%純度)於四氫呋喃(5 mL)中之混合物在0℃攪拌30分鐘。添加溴甲基甲醚(169.87 mg，1.36 mmol)。將混合物在0℃攪拌1小時。將反應物用甲醇淬滅。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(4/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之3-溴-5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-吡啶(190 mg，0.82 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 232步驟 2 ：[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]硼酸
將3-溴-5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-吡啶(714 mg，3.08 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(781 mg，3.08 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (450 mg，0.62 mmol)及乙酸鉀(904 mg，9.23 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(95/5)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]硼酸(300 mg，1.52 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 198。步驟 3 ：8-氯-7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]異喹啉-3-胺
將8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(300 mg，0.93 mmol)、[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]硼酸(275 mg，1.4 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (68 mg，0.09 mmol)及碳酸鉀(385 mg，2.79 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)及水(1 mL)中之混合物在90℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之8-氯-7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]異喹啉-3-胺(145 mg，0.42 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 348。步驟 4 ：2-[[8-氯-7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將8-氯-7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]異喹啉-3-胺(135 mg，0.39 mmol)、2-溴-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(142 mg，0.58 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(80 mg，0.08 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(89 mg，0.16 mmol)及碳酸銫(381 mg，1.16 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在100℃攪拌12小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(50 mg,0.098 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =511。步驟 5 ：N-[7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-[[8-氯-7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(50 mg，0.10 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(286 mg，2.45 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(20 mg，0.020 mmol)、Brettphos (15.74 mg，0.03 mmol)及碳酸銫(95 mg，0.29 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之N-[7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(40 mg，0.067 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =592。步驟 6 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-(5-羥基-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮；甲酸
將N-[7-氟-6-[5-(甲氧基甲氧基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(30 mg，0.05 mmol)及鹽酸(0.17 mL，0.5 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之混合物在20℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 8。將粗產物藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD管柱19x150 nm 5 um；水(0.1% FA): CH3 CN = 5%至19%，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(5-羥基-4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮；甲酸(1.4 mg，0.0028 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 448。1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.16(s, 1H), 8.07(s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 6.86 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.07 (s, 1H), 5.06 (s, 2H), 3.92(t,J = 6.0 Hz, 2H), 3.16(t,J = 6.0 Hz, 2H), 3.10 (s, 3 H), 2.15 (s, 3H)。 實例180： 2-(8-胺基-7-氟-6-(5-(羥甲基)-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物290) 步驟 1 ：3-溴-5-((第三 丁基二甲基矽基氧基)甲基)-4-甲基吡啶
將(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)甲醇(500 mg，2.47 mmol)及咪唑(505.42 mg，7.42 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(15 mL)中之溶液在25℃攪拌10分鐘。添加TBSCl (742.39 mg，4.95 mmol)且在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(16/84)溶離來純化，得到呈白色油狀之(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)甲氧基-第三 丁基-二甲基-矽烷(820 mg，2.07 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 316。步驟 2 ：5-((第三 丁基二甲基矽基氧基)甲基)-4-甲基吡啶-3-基硼酸
將(5-溴-4-甲基-3-吡啶基)甲氧基-第三 丁基-二甲基-矽烷(1.65 g，5.22 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(1.99 g，7.82 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (381.84 mg，0.52 mmol)及乙酸鉀(1.28 g，13.04 mmol)於1,4-二噁烷(18 mL)中之混合物在90℃攪拌12小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈白色固體狀之[5-[[第三 丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]硼酸(480 mg，1.70 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 282。步驟 3 ：6-(5-((第三 丁基二甲基矽基氧基)甲基)-4-甲基吡啶-3-基)-8-氯-7-氟異喹啉-3-胺
將8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(382 mg，1.18 mmol)、[5-[[第三 丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]硼酸(499.66 mg，1.78 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (86.7 mg，0.12 mmol)、碳酸鉀(359.6 mg，2.61 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)及水(1.5 L)中之混合物在90℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(7:3)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之6-[5-[[第三 丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-氯-7-氟-異喹啉-3-胺(320 mg，0.74 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 432。步驟 4 ：2-(6-(5-((第三 丁基二甲基矽基氧基)甲基)-4-甲基吡啶-3-基)-8-氯-7-氟異喹啉-3-基胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將2-溴-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(181.42 mg，0.67 mmol)、6-[5-[[第三 丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-氯-7-氟-異喹啉-3-胺(240.0 mg，0.56 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(115.0 mg，0.11 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(128.66 mg，0.22 mmol)及碳酸銫(543.32 mg，1.67 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在100℃攪拌12小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[6-[5-[[第三 丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-氯-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(56 mg，0.090 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 623。步驟 5 ：6-(5-((第三 丁基二甲基矽基氧基)甲基)-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-3-(6-異丙基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
將2-[[6-[5-[[第三 丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]-8-氯-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(60.0 mg，0.10 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(337.91 mg，2.89 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(19.93 mg，0.020 mmol)、Brettphos (20.68 mg，0.040 mmol)及碳酸銫(125.54 mg，0.39 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在90℃攪拌12小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(12:88)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[6-[5-[[第三 丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.085 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 704。步驟 6 ：2-(8-胺基-7-氟-6-(5-(羥甲基)-4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將N -[6-[5-[[第三 丁基(二甲基)矽基]氧基甲基]-4-甲基-3-吡啶基]-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(50.0 mg，0.070 mmol)於2,2,2-三氟乙酸(5 mL)中之溶液在25℃攪拌12小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150mm 5um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉): CH3 CN= 20%至40% B，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-[5-(羥甲基)-4-甲基-3-吡啶基]-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(5.1 mg，0.010 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 490.2；1 H NMR (300 MHz, 甲醇-d 4 )δ 9.17 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.87 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.07 (s, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.80 (s, 2H), 4.75 (d,J = 6.7 Hz, 1H), 3.88 (t,J = 6.0 Hz, 2H), 3.14 (d,J = 6.1 Hz, 2H), 2.32 (d,J = 1.3 Hz, 3H), 1.25 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例181： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-(2-甲氧基乙基)-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物291) 步驟 1 ：2-溴-6-(環丙基甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
在0℃下向2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(200 mg，0.86 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(6 mL)中之混合物中添加氫化鈉(79.18 mg，3.48 mmol)。將混合物在20℃攪拌20 min。添加1-碘-2-甲氧基-乙烷(485.06 mg，2.6 mmol)。隨後將混合物在20℃攪拌1小時。將反應用水淬滅。將所得混合物用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(95/5)溶離來純化，得到呈橙色油狀之2-溴-6-(2-甲氧基乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(172 mg，0.31 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =288.1。步驟 2 ：N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[6-(2-甲氧基乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N-[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(199 mg，0.82 mmol)、2-溴-6-(2-甲氧基乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(172 mg，1.24 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(82.12 mg，0.08 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(92.32 mg，0.16 mmol)及碳酸銫(389.23 mg，1.22 mmol)於1,4-二噁烷(16 mL)中之混合物在95℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(96/4)溶離來純化，得到呈金絲雀黃固體狀之N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[6-(2-甲氧基乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(222 mg，0.17 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 710.3。步驟 3 ：N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[6-(2-甲氧基乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
在25℃下向N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[6-(2-甲氧基乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(222 mg，0.31 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(915.51 mg，7.81 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(64.71 mg，0.06 mmol)及Brettphos (67.02 mg，0.13 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物中添加碳酸銫(254.76 mg，0.78 mmol)。將所得溶液在90℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(94/6)溶離來純化，得到呈橙色固體狀之N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[6-(2-甲氧基乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(131 mg，0.17 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 791.4。步驟 4 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(2-甲氧基乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[6-(2-甲氧基乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(131 mg，0.17 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1.0 mL)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液在20℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用胺於甲醇中之溶液將反應混合物調整至pH 8。將粗產物藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD管柱19x150mm 5um C-0013；水(0.1% FA)及ACN (5%至15%)，7 min內)純化，得到呈淡黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(2-甲氧基乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(34.2 mg，0.064 mol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =491.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO) δ 9.25 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.72-6.70 (m, 1H), 6.06 (s, 2H), 5.97 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.98 (s, 2H), 3.87-3.85 (m, 2H), 3.57-3.54 (m, 2H), 3.46-3.43 (m, 2H), 3.26 (s, 3H), 3.03-3.01 (m, 2H), 1.93 (s, 3H)。 實例182： 2-((8-胺基-7-氟-6-(4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物292) 步驟 1 ：3-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-羧酸第三 丁酯
將[7-氟-8-(異丙氧基羰基胺基)-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]硼酸(100 mg，0.21 mmol)、3-溴-6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-羧酸第三 丁酯(120 mg，0.40 mmol)、磷酸鉀(40 mg，0.19 mmol)、乙酸鈉(50 mg，0.61 mmol)及[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (40 mg，0.05 mmol)於乙腈(10 mL)及水(1 mL)中之混合物在90℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC用乙酸乙酯/甲醇(50/1)純化，得到呈黃色固體狀之3-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-羧酸第三 丁酯(43 mg，0.065 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 662。步驟 2 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-(4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將3-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-6,7-二氫-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-羧酸第三 丁酯(40 mg，0.06 mmol)、2,2,2-三氟乙酸(1 mL)及二氯甲烷(5 mL)之混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物溶於二氯甲烷中，且隨後用甲醇中之氨(7 mol/L)調整至pH 7。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD，19*150 mm，5um；水(0.05%NH3 H2 O): ACN (7至24%，7 min內) )，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(4 mg，0.0087 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 462。1 HNMR (300MHz, DMSO-d 6 )δ 9.17 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 7.73 (d,J = 2.9 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.74 (d,J = 6.3 Hz, 1H), 5.98 (s, 3H), 4.99 (s, 2H), 4.06-4.05 (m, 4H), 3.83-3.82 (m, 2H), 3.18-3.17 (m, 2H), 3.05-3.03 (m, 2H), 2.96 (s, 3H), 2.69 (s, 1H)。 實例183： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-4,6-二甲基-5,6-二氫-4H,8H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮呯7,7-二氧化物(化合物293) 步驟 1 ：N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-甲基-4-亞甲基-7,7-二側氧基-5,8-二氫吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-溴-6-甲基-4-亞甲基-5,8-二氫吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮呯7,7-二氧化物(200 mg，0.68 mmol)、N-[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(309.89 mg，0.62 mmol)、t-BuBrettphos (165.67 mg，0.34 mmol)、t-BuBrettphos Pd G3 (233.85 mg，0.27 mmol)及碳酸銫(557.93 mg，1.71 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在120℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(4/1)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-甲基-4-亞甲基-7,7-二側氧基-5,8-二氫吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.14 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =714步驟 2 ：N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-4-亞甲基-7,7-二側氧基-5,8-二氫吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將胺基甲酸第三丁酯(262.44 mg，2.24 mmol)、N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-甲基-4-亞甲基-7,7-二側氧基-5,8-二氫吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(80 mg，0.11 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(23.19 mg，0.02 mmol)、Brettphos (18.05 mg，0.03 mmol)及碳酸銫(91.29 mg，0.28 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在100℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(2/98)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-4-亞甲基-7,7-二側氧基-5,8-二氫吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.076 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =795步驟 3 ：N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(4,6-二甲基-7,7-二側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-4-亞甲基-7,7-二側氧基-5,8-二氫吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.06 mmol)及雷氏鎳(10 mg)於甲醇(10 mL)中之混合物在25℃攪拌12小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(4,6-二甲基-7,7-二側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[5,1-e ][1,2,6]噻二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(45 mg，0.05 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =797步驟 4 ：6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-N3-(4,6-二甲基-7,7-二側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮呯-2-基)-7-氟-異喹啉-3,8-二胺；甲酸
將N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(4,6-二甲基-7,7-二側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.06 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1 mL)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將殘餘物調整至pH 10。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1% FA於水中)純化，得到呈褐色固體狀之6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-N3-(4,6-二甲基-7,7-二側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[5,1-e][1,2,6]噻二氮呯-2-基)-7-氟-異喹啉-3,8-二胺；甲酸(2.9 mg，0.0053 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =497。1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.16 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.78-7.77 (d,J = 4.0 Hz, 2H), 6.90-6.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.92-5.88 (d,J = 16 Hz,1H), 5.36-5.32 (d,J = 16 Hz, 1H), 3.79-3.55 (m, 3H), 3.13 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.39-1.38 (d,J = 4.0 Hz, 3H) 實例184： [2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-乙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(化合物298) 步驟 1 ：2-溴-6-乙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
在0℃下向2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(1 g，4.0 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(2 mL)中之溶液中添加氫化鈉(313 mg，13.0 mmol)。將混合物在0℃攪拌30分鐘。在0℃下向此反應溶液中添加碘乙烷(1.3 g，9.0 mmol)且隨後攪拌4小時。將反應物藉由水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈-0.1%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈白色固體狀之2-溴-6-乙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(1 g，3.89 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 258.1。步驟 2 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(6-乙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-溴-6-乙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(140.0 mg，0.54 mmol)、N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(272.8 mg，0.54 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(112.27 mg，0.11 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(125.4 mg，0.22 mmol)及碳酸銫(530.45 mg，1.63 mmol)於1,4-二噁烷(2 mL)中之混合物在100℃攪拌4小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(1/1)溶離來純化，得到呈黃色油狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(6-乙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，0.10 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 680.2。步驟 3 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(6-乙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-3-[(6-乙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(40.0 mg，0.06 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(206.76 mg，1.76 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(12.0 mg，0.01 mmol)、Brettphos (6.32 mg，0.01 mmol)及碳酸銫(76.8 mg，0.24 mmol)於1,4-二噁烷(2 mL)中之混合物在90℃攪拌4小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/4)溶離來純化，得到呈黃色油狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(6-乙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(40 mg，0.053 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 706.9。步驟 4 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-乙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[(6-乙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(40.0 mg，0.05 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)於二氯甲烷(2 mL)中之混合物在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在C18 (乙腈-0.1%碳酸氫鈉於水中)上純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-乙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(2.4 mg，0.01 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 460.5。1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.26 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.69 (d,J = 9.4 Hz, 2H), 6.72 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 5.99 (s, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.97 (s, 2H), 3.90-3.84 (m, 2H), 3.50-3.43 (m, 2H), 3.05-2.90 (m, 2H), 1.94 (s, 3H), 1.09-1.01 (m, 3H)。 實例185： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4,6-二甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物299) 步驟 1 ：2-(5-溴-4-甲基-3-硝基-2-吡啶基)丙二酸二甲酯
在0℃下向丙二酸二甲酯(3.15 g，23.86 mmol)於1-甲基-2-吡咯啶酮(100 mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.95 g，23.86 mmol，60%純度)。將混合物在0℃攪拌10 min。添加5-溴-2-氯-4-甲基-3-硝基吡啶(4.0 g，15.91 mmol)。將混合物在40℃攪拌12小時。將反應用水淬滅。將反應混合物用水稀釋。將所得混合物用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈褐色固體狀之2-(5-溴-4-甲基-3-硝基-2-吡啶基)丙二酸二甲酯(3.5 g，10.08 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =347。步驟 2 ：5-溴-2,4-二甲基-3-硝基-吡啶
將2-(5-溴-4-甲基-3-硝基-2-吡啶基)丙二酸二甲酯(3.5 g，10.08 mmol)於鹽酸(20 mL，12 mol/L)中之溶液在100℃攪拌12小時。將混合物在真空下濃縮。用氫氧化鈉溶液(10%)將反應混合物調整至pH 10。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(1/9)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之5-溴-2,4-二甲基-3-硝基-吡啶(1.5 g，6.49 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =231。步驟 3 ：(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)硼酸
將5-溴-2,4-二甲基-3-硝基-吡啶(1.5 g，6.49 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(3.29 g，12.98 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (950.44 mg，1.30 mmol)及乙酸鉀(1.91 g，19.48 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)中之混合物在90℃攪拌12小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。用氫氧化鈉溶液(10%)將反應混合物調整至pH 10。將水層用二乙醚洗滌。用鹽酸(1 mol/L)將溶液調整至pH 5。將所得混合物用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈褐色固體狀之(4,6-二甲基-5-硝基吡啶-3-基)硼酸(1.1 g，3.95 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =197。步驟 4 ：8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-異喹啉-3-胺
將(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)硼酸(364.58 mg，1.86 mmol)、8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(400 mg，1.24 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (90.79 mg，0.12 mmol)及碳酸鉀(342.31 mg，2.48 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在90℃攪拌12小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-異喹啉-3-胺(220 mg，0.63 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =347。步驟 5 ：2-[[8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-異喹啉-3-胺(220 mg，0.63 mmol)、2-溴-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(154.87 mg，0.63 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(65.67 mg，0.06 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(108.37 mg，0.13 mmol)及碳酸銫(620.52 mg，1.9 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在100℃攪拌12小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之2-[[8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(210 mg，0.41 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =510步驟 6 ：N-[6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-[[8-氯-6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(260 mg，0.51 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1194.66 mg，10.2 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(105.55 mg，0.10 mmol)、Brettphos (82.14 mg，0.15 mmol)及碳酸銫(415.56 mg，1.27 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N-[6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(150 mg，0.25 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =591步驟 7 ：N-[6-(5-胺基-4,6-二甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將N-[6-(4,6-二甲基-5-硝基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(150 mg，0.25 mmol)及雷氏鎳(50 mg)於甲醇(10 mL)中之混合物在25℃在H2 下攪拌5小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮，得到呈褐色固體狀之N-[6-(5-胺基-4,6-二甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.17 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =561步驟 8 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4,6-二甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將N-[6-(5-胺基-4,6-二甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.18 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)於二氯甲烷(2 mL)中之混合物在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 10。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1%氨於水中)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4,6-二甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(22.2 mg，0.04 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 561。1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.23 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 6.69 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.03 (s, 2H), 5.97 (s, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.90 (s, 2H), 3.89-3.80 (m, 2H), 3.03-3.00 (m, 2H), 2.94 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 1.95 (s, 3H)。 實例186： 2-(8-胺基-6-(2-胺基-3-甲基吡啶-4-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-6-(2,2-二氟乙基)-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物300) 步驟 1 ：4-溴-N ,N -雙(4-甲氧基苄基)-3-甲基吡啶-2-胺
將4-溴-3-甲基-吡啶-2-胺(500.0 mg，2.67 mmol)、氫化鈉(427.72 mg，10.69 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(50 mL)中之溶液在0℃攪拌30分鐘。添加4-甲氧基苄基氯(2.09 g，13.37 mmol)且在25℃攪拌2小時。將反應用水淬滅。反應混合物用乙酸乙酯稀釋。將所得混合物用水洗滌，且將有機層合併。將有機層用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(2/8)溶離來純化，得到呈黃色油狀之4-溴-N ,N -雙[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-吡啶-2-胺(1.1 g，2.57 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 427。步驟 2 ：2-(雙(4-甲氧基苄基)胺基)-3-甲基吡啶-4-基硼酸
將4-溴-N ,N -雙[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-吡啶-2-胺(1.1 g，2.57 mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(980.51 mg，3.86 mmol)及[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (188.43 mg，0.26 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈5-85/0.1%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈黃色固體狀之2-[雙[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-3-甲基-4-吡啶基]硼酸(750 mg，1.91 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 393。步驟 3 ：6-(2-(雙(4-甲氧基苄基)胺基)-3-甲基吡啶-4-基)-8-氯-7-氟異喹啉-3- 胺
將8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(400 mg，1.24 mmol)、2-[雙[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-3-甲基-4-吡啶基]硼酸(729.76 mg，1.86 mmol)、碳酸鉀(376.55 mg，2.73 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (90.79 mg，0.12 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)及水(1 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(1/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之6-[2-[雙[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-3-甲基-4-吡啶基]-8-氯-7-氟-異喹啉-3-胺(480 mg，0.88 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 543。步驟 4 ：2-(6-(2-(雙(4-甲氧基苄基)胺基)-3-甲基吡啶-4-基)-8-氯-7-氟異喹啉-3-基胺基)-6-(2,2-二氟乙基)-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(100.19 mg，0.34 mmol)、6-[2-[雙[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-3-甲基-4-吡啶基]-8-氯-7-氟-異喹啉-3-胺(185 mg，0.34 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(70.52 mg，0.07 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(59.18 mg，0.10 mmol)及碳酸銫(222.12 mg，0.68 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在90℃攪拌12小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(7/3)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[6-[2-[雙[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-3-甲基-4-吡啶基]-8-氯-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(90 mg，0.12 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 756。步驟 5 ：6-(2-(雙(4-甲氧基苄基)胺基)-3-甲基吡啶-4-基)-3-(6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)-7-氟異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
將2-[[6-[2-[雙[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-3-甲基-4-吡啶基]-8-氯-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(150 mg，0.20 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(696.23 mg，5.95 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(41.06 mg，0.040 mmol)、Brettphos (21.3 mg，0.040 mmol)及碳酸銫(258.65 mg，0.79 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(9/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[6-[2-[雙[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-3-甲基-4-吡啶基]-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(110 mg，0.13 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 457.2。步驟 6 ：2-(8-胺基-6-(2-胺基-3-甲基吡啶-4-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-6-(2,2-二氟乙基)-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將N -[6-[2-[雙[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-3-甲基-4-吡啶基]-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-8-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(110.0 mg，0.13 mmol)於2,2,2-三氟乙酸(10 mL)中之溶液在25℃攪拌5小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150 mm 5 um；水(10mmol/L碳酸氫鈉): CH3 CN= 27%至42% B，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(2-胺基-3-甲基-4-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(18.3 mg，0.037 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 497.2；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.25 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 7.85 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.69 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.47 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 6.34-6.02 (m, 3H), 5.99 (s, 1H), 5.82 (s, 2H), 5.05 (s, 2H), 3.95 (t,J = 5.7 Hz, 2H), 3.85 (td,J = 15.5, 4.0 Hz, 2H), 3.10-3.02 (m, 2H), 1.90 (d,J = 1.3 Hz, 3H)。 實例187： 2-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-5-甲基-4,5-二氫吡唑并[1,5-a ]吡嗪-6(7H )-酮(化合物302) 步驟 1 ：2-(3-溴-5-甲基-1H -吡唑-1-基)乙酸甲酯
將3-溴-5-甲基-1h-吡唑(500.0 mg，3.11 mmol)、氯乙酸甲酯(505.53 mg，4.66 mmol)、碘化四丁銨(57.3 mg，0.16 mmol)及碳酸鉀(771.43 mg，5.59 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液在20℃攪拌12 h。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(98/2)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲酯(671 mg，2.88 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 233。步驟 2 ：2-(3-溴-5-(溴甲基)-1H -吡唑-1-基)乙酸甲酯
將2-(3-溴-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸甲酯(20 g，85.81 mmol)、2,2'-偶氮雙(2-甲基丙腈)(1.41 g，8.58 mmol)、1-溴-2,5-吡咯啶二酮(16.80 g，94.4 mmol)於四氯化碳(400 mL)中之溶液在80℃攪拌2小時。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(4/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲酯(20 g，64.11 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 311。步驟 3 ：2-溴-5-甲基-4,5-二氫吡唑并[1,5-a ]吡嗪-6(7H )-酮
將2-[3-溴-5-(溴甲基)吡唑-1-基]乙酸甲酯(900 mg，2.88 mmol)及甲胺(896.08 mg，28.85 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(4/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-溴-5-甲基-4,7-二氫吡唑并[1,5-a ]吡嗪-6-酮(460 mg，2.00 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 230。步驟 4 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-甲基-6-側氧基-4,7-二氫吡唑并[1,5-a ]吡嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-溴-5-甲基-4,7-二氫吡唑并[1,5-a ]吡嗪-6-酮(219.55 mg，0.95 mmol)、N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(400.0 mg，0.80 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(164.62 mg，0.16 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(138.14 mg，0.24 mmol)及碳酸銫(518.52 mg，1.59 mmol)於1,4-二噁烷(60 mL)中之混合物在100℃攪拌12小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(10:1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-甲基-6-側氧基-4,7-二氫吡唑并[1,5-a ]吡嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(340 mg，0.52 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 652。步驟 5 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5-甲基-6-側氧基-4,7-二氫吡唑并[1,5-a ]吡嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將胺基甲酸第三丁酯(1.83 g，15.64 mmol)、N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(5-甲基-6-側氧基-4,7-二氫吡唑并[1,5-a ]吡嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(340.0 mg，0.52 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(107.92 mg，0.10 mmol)、Bretthpos (56.0 mg，0.10 mmol)及碳酸銫(679.87 mg，2.09 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(12/88)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5-甲基-6-側氧基-4,7-二氫吡唑并[1,5-a ]吡嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(250 mg，0.34 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 733。步驟 6 ：2-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-5-甲基-4,5-二氫吡唑并[1,5-a ]吡嗪-6(7H )-酮
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(5-甲基-6-側氧基-4,7-二氫吡唑并[1,5-a ]吡嗪-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(240.0 mg，0.33 mmol)於2,2,2-三氟乙酸(20 mL)中之溶液在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150mm 5um；水(10mmol/L): CH3 CN= 15%至35% B，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-5-甲基-4,7-二氫吡唑并[1,5-a ]吡嗪-6-酮(49 mg，0.11 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 433.3；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.27 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.68 (d,J = 2.5 Hz, 2H), 6.67 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 6.05 (s, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.60 (s, 2H), 3.01 (s, 3H), 1.93 (d,J = 1.5 Hz, 3H)。 實例188： (E)-2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-甲基-4-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)亞甲基)-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物303) 步驟 1 ：(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯-1-醇
將(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯酸第三 丁酯(3.0 g，14.41 mmol)及DIBAL-H (43.0 mL，43.22 mmol)於二氯甲烷(100 mL)中之溶液在0℃攪拌1小時。將反應藉由添加甲醇淬滅。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈無色油狀之(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯-1-醇(800 mg，5.79 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 139。步驟 2 ：(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯醛
將(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯-1-醇(897 mg，6.49 mmol)及戴斯-馬丁高碘烷(2.75 g，6.49 mmol)於二氯甲烷(30 mL)中之溶液在20℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(95/5)溶離來純化，得到呈黃色油狀之(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯醛(800 mg，5.87 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 137。步驟 3 ：(E)-N-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯-1-胺
將(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯醛(794.0 mg，5.83 mmol)及甲胺(543.41 mg，17.5 mmol)於四氫呋喃(20 mL)中之溶液在20℃攪拌30 min。添加甲醇(10 mL)及硼氫化鈉(664.83 mg，17.5 mmol)且在20℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由逆相(C18；水(10 mmol/L碳酸氫鈉)及MeOH (5%至25%))純化，得到呈無色油狀之(E)-N-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯-1-胺(412 mg，2.72 mmol) LCMS (ESI) [M+H]+ = 152。步驟 4 ：2-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-甲基-N-[(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)烯丙基]乙醯胺
將2-(3,5-二溴吡唑-1-基)乙酸(770 mg，2.71 mmol)、(E)-N-甲基-3-(1-甲基吡唑-4-基)丙-2-烯-1-胺(410.1 mg，2.71 mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(1.05 g，8.14 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(15 mL)中之溶液在25℃攪拌5 min。添加2-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.55 g，4.07 mmol)且在25℃攪拌12小時。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，隨後用水洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相管柱(C18；水(10 mmol/L碳酸氫鈉)及MeOH (5%至70%)，20 min內)純化，得到呈無色油狀之2-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-甲基-N-[(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)烯丙基]乙醯胺(852 mg，2.04 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =416。步驟 5 ：(4E)-2-溴-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亞甲基]-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將2-(3,5-二溴吡唑-1-基)-N-甲基-N-[(E)-3-(1-甲基吡唑-4-基)烯丙基]乙醯胺(817 mg，1.96 mmol)、乙酸鈀(43.88 mg，0.20 mmol)、三苯基膦(102.64 mg，0.39 mmol)、溴化四丁銨(630.72 mg，1.96 mmol)及乙酸鉀(575.88 mg，5.88 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(10 mL)中之混合物在90℃攪拌12小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之(4E)-2-溴-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亞甲基]-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(540 mg，1.61 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 336。步驟 6 ：(4Z)-2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亞甲基]-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將(4E)-2-溴-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亞甲基]-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(520 mg，1.55 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(445.03 mg，1.55 mmol)、tBuBrettphos Pd G3 (528.37 mg，0.62 mmol)、tBuBrettphos (374.31 mg，0.77 mmol)及碳酸銫(1512.72 mg，4.64 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在130℃攪拌1小時。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之(4Z)-2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亞甲基]-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(305 mg，0.56 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =543。 步驟7：N-[7-氟-3-[[(4Z)-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亞甲基]-7-側氧基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將(4Z)-2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亞甲基]-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(300 mg，0.55 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.62 g，13.81 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(114.37 mg，0.11 mmol)、Brettphos (88.84 mg，0.17 mmol)及碳酸銫(540.34 mg，1.66 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之N-[7-氟-3-[[(4Z)-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亞甲基]-7-側氧基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.16 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 624。 步驟8：(4E)-2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亞甲基]-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將N-[7-氟-3-[[(4E)-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亞甲基]-7-側氧基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(95 mg，0.15 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(3 mL)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液在20℃攪拌1小時。將反應溶液在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC用以下條件(xBridge製備型C18 OBD管柱19x150nm]；水(10mmol/L碳酸氫鈉)及ACN (20%至45%)，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之(4E)-2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-4-[(1-甲基吡唑-4-基)亞甲基]-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(13.5 mg，0.026 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 524；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.31 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.50 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.39 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.80 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.50 (s, 1H), 6.14 (s, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.68(s, 2H), 3.89(s, 3H), 2.90 (s, 3H), 2.23 (s, 3H)。 實例189： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物305) 步驟 1 ：2-溴-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
在0℃下向2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(600 mg，2.61 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(25 mL)中之混合物中添加氫化鈉(187.78 mg，60%純度，4.69 mmol)。將反應物在0℃攪拌30 min，之後在0℃下添加四氫呋喃中之2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯(3.03 g，13.04 mmol)。將反應物在室溫下攪拌3小時，之後在真空下濃縮。將殘餘物直接藉由逆相管柱用0.5%碳酸氫鈉溶液/甲醇(60%)純化，得到呈淡黃色固體狀之2-溴-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(500 mg，1.60 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 312。步驟 2 ：N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[7-側氧基-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-溴-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(250 mg，0.80 mmol)、N-[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(402.9 mg，0.80 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(165.82 mg，0.16 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(185.2 mg，0.32 mmol)及碳酸銫(783.43 mg，2.40 mmol)於1,4-二噁烷(60 mL)中之混合物在100℃攪拌4小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(2/3)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[7-側氧基-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，0.27 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 734。步驟 3 ：N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[7-側氧基-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[[7-側氧基-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(280 mg，0.38 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.12 g，9.53 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(78.95 mg，0.080 mmol)、Brettphos (81.77 mg，0.15 mmol)及碳酸銫(621.68 mg，1.91mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(97/3)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[7-側氧基-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(120 mg，0.15 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 815。步驟 4 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[[7-側氧基-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(110 mg，0.13 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將殘餘物調整至pH 10。將殘餘物藉由製備型HPLC (SunFire製備型C18 OBD管柱19×150mm 5um 10nm；水(0.1%FA): CAN=22% B至36% B，10 min內；25 mL/min)，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(47.4 mg，0.092 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 515.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.26 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 6.73 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 6.01 (s, 1H), 5.23 (s, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.34-4.24 (m, 2H), 4.00-3.98 (m, 2H), 3.07-3.05 (m, 2H), 1.94 (s, 3H)。 實例190： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-氯吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮；甲酸(化合物306) 步驟 1 ：6-苄氧基-8-氯-7-氟-異喹啉-3-胺
將8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(100 mg，0.31 mmol)、CuI (23.69 mg，0.12 mmol)、3,4,7,8-四甲基-1,10-啡啉(58.62 mg，0.25 mmol)、苯基甲醇(334.87 mg，3.1 mmol)、碳酸銫(303.25 mg，0.93 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(2 mL)中之混合物在95℃攪拌2小時。將混合物冷卻至環境溫度。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(1/2)溶離來純化，得到呈彩色固體狀之6-苄氧基-8-氯-7-氟-異喹啉-3-胺(70 mg，0.23 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 301.1。步驟 2 ：2-[(6-苄氧基-8-氯-7-氟-3-異喹啉基)胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將2-溴-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(60 mg，0.25 mmol)、6-苄氧基-8-氯-7-氟-異喹啉-3-胺(74.41 mg，0.25 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(50.88 mg，0.05 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(56.83 mg，0.10 mmol)及碳酸銫(240.4 mg，0.74 mmol)於1,4-二噁烷(9.6 mL)中之混合物在100℃攪拌12小時。將混合物冷卻至環境溫度。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(40/1)溶離來純化，得到呈彩色固體狀之2-[(6-苄氧基-8-氯-7-氟-3-異喹啉基)胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(65 mg，0.14 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 466.1。步驟 3 ：N-[6-苄氧基-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-[(6-苄氧基-8-氯-7-氟-3-異喹啉基)胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(60 mg，0.13 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(376.68 mg，3.22 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(26.66 mg，0.03 mmol)、BrettPhos (20.71 mg，0.04 mmol)及碳酸銫(125.95 mg，0.39 mmol)於1,4-二噁烷(7.5 mL)中之混合物在氮下在85℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N-[6-苄氧基-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.092 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 547.1。步驟 4 ：N-[7-氟-6-羥基-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將N-[6-苄氧基-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(220 mg，0.40 mmol)及鈀碳(40 mg，0.40 mmol)於甲醇(20 mL)中之溶液在氫(1 atm)下在25℃攪拌4小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(5/1)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N-[7-氟-6-羥基-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(97.3 mg，0.21 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 457.1。步驟 5 ：[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]三氟甲烷磺酸酯
在-60℃下向[N-[7-氟-6-羥基-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(550 mg，1.2 mmol)、N-[7-氟-6-羥基-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(550 mg，1.2 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之混合物中添加三乙胺(243.39 mg，2.41 mmol)及三氟甲烷磺酸(509.93 mg，1.81 mmol)。將所得混合物在-60℃攪拌1小時。將反應用水淬滅。將所得混合物用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色油狀之[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]三氟甲烷磺酸酯(670 mg，粗品)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 589.1。步驟 6 ：[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]硼酸
在90℃下向[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]三氟甲烷磺酸酯(670 mg，1.14 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物中添加雙(頻哪醇合)二硼(867.28 mg，3.42 mmol)及[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (83.3 mg，0.11 mmol)。將所得混合物在90℃攪拌1小時。將反應用水淬滅。將所得混合物用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色油狀之[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]硼酸(380 mg，0.78 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =485.1。步驟 7 ：N-[6-(5-胺基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將4-氯-5-碘-吡啶-3-胺(189.15 mg，0.74 mmol)及[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]硼酸(120 mg，0.25 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (36.28 mg，0.05 mmol)、磷酸鉀(157.79 mg，0.74 mmol)、乙酸鈉(20.32 mg，0.25 mmol)於乙腈(2 mL)/水(0.2 ml)中之混合物在90℃攪拌1 h。將反應物在真空下濃縮。將粗品直接用於下一步驟中。LCMS (ESI) [M+H]+ = 567.1步驟 8 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮；甲酸
將N-[6-(5-胺基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(120 mg，0.21 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(3 mL)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液在室溫下攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-氯-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮；甲酸(15.6 mg，0.030 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 467.1；1 HNMR (300 MHz, DMSO) δ 9.26 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 6.80 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.10 (s, 2H), 5.98 (s, 1H), 5.79 (s, 2H), 4.97 (s, 2H), 3.83-3.81 (m, 2H), 3.18-3.16 (m, 2H), 2.95 (s, 3H)。 實例191： 2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-(甲基-d3)-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物231) 步驟 1 ：2-溴-6-(三氘甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
在25℃下向2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(250 mg，1.09 mmol)及第三丁醇鉀(243.41 mg，2.17 mmol)於四氫呋喃(20 mL)中之溶液中添加碘甲烷-D3 (236.29 mg，1.63 mmol)。將反應物在25℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(5/95)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-溴-6-(三氘甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(220 mg，0.89 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 247。步驟 2 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-(三氘甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將2-溴-6-(三氘甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(220 mg，0.89 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(256.15 mg，0.89 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(138.22 mg，0.13 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(152.06 mg，0.18 mmol)及碳酸銫(870.71 mg，2.67 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在100℃攪拌5小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/10)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-(三氘甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(280 mg，0.62 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 454。步驟 3 ：N-[7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-[[7-側氧基-6-(三氘甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-(三氘甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(280 mg，0.62 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.80 g，15.42 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(127.69 mg，0.12 mmol)、BrettPhos (99.38 mg，0.19 mmol)及碳酸銫(804.39 mg，2.47 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/10)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N-[7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-[[7-側氧基-6-(三氘甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(150 mg，0.28 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 535步驟 4 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-(三氘甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將N-[7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-[[7-側氧基-6-(三氘甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(120 mg，0.22 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(2 mL)於二氯甲烷(2 mL)中之混合物在25℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.1%氨於水中)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-(三氘甲基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(40.7 mg，0.09 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 435；1 HNMR (400 MHz, DMSO) δ 9.27 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.50-8.49 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.39-7.38 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 6.79-6.77 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.10 (s, 2H), 5.98 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 3.83-3.81 (m, 2H), 3.18-3.16 (m, 2H), 2.22 (s, 3H)。 實例192及實例193： (±)-2-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物308)、 (4R )-2-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物309)及 (4S )-2-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物310) 步驟 1 ：2-溴-4-羥基-6-甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將2-溴-6-甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-4,7-二酮(300 mg，1.16 mmol)及NaBH4 (44.17 mg，1.16 mmol)於甲醇(5 mL)中之混合物在室溫下攪拌3小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在C18上用ACN/水(17%)溶離來純化，得到呈無色油狀之2-溴-4-羥基-6-甲基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(200 mg，0.77 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 260步驟 2 ：2-溴-4-氟-6-甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將2-溴-4-羥基-6-甲基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(200 mg，0.77 mmol)及三氟化二乙胺基硫(247.9 mg，1.54 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之混合物在0℃攪拌1小時。將反應藉由NaHCO3 溶液淬滅。將所得混合物用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至40/0.5%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈白色固體狀之2-溴-4-氟-6-甲基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(150 mg，0.57 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 262。步驟 3 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(4-氟-6-甲基-7-側氧基-5,8- 二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-溴-4-氟-6-甲基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(300.0 mg，1.14mmol)、N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N -第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(575.74 mg，1.14mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(236.95 mg，0.23 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(264.65 mg，0.46 mmol)及碳酸鉀(473.9 mg，3.43 mmol)於1,4-二噁烷(50 mL)中之混合物在100℃攪拌12小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/10)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(4-氟-6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(400 mg，0.58 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 684。步驟 4 ：N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(4-氟-6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-氯-7-氟-3-[(4-氟-6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(420 mg，0.61 mmol)、Boc-NH2 (2.15 g，18.42 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(127.08 mg，0.12 mmol)、Brettphos (65.93 mg，0.12 mmol)及碳酸銫(800.55 mg，2.46 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/10)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(4-氟-6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(400 mg，0.52 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 765步驟 5 ：(±)-2-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物308)
將N -第三 丁氧基羰基-N -[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(4-氟-6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(400 mg，0.52 mmol)及TFA (10 mL，0.52 mmol)]於二氯甲烷(5 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150 mm 5 um；水(10 mmol/L): CH3 CN= 17%至27% B，10 min內)純化，得到呈黃色固體狀之[2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-4-氟-6-甲基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(150 mg，0.32 mmol)]。LCMS (ESI) [M+H]+ = 465.3；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.28 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 6.74 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.42 (d,J = 2.5 Hz, 1H), 6.08 (s, 2H), 5.99-5.86 (m, 1H), 5.27-5.18 (m, 3H), 4.81 (d,J = 14.9 Hz, 1H), 4.45-4.36 (m, 1H), 4.05-3.93 (m, 1H), 3.00 (s, 3H), 1.93 (d,J = 1.5 Hz, 3H)。步驟 6 ：(4R )-2-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮及(4S )-2-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將2-(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基胺基)-4-氟-6-甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮藉由掌性HPLC分離，得到兩種異構物：
呈黃色固體狀之化合物309：(18.8 mg，0.041 mmol)。滯留時間：4.500 min (CHIRAL Cellulose-SB.0.46*15cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30；1.0 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 465.3；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.27 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.66 (s, 2H), 6.73 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.41 (d,J = 2.5 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 6.00-5.83 (m, 1H), 5.27-5.16 (m, 3H), 4.80 (d,J = 15.0 Hz, 1H), 4.39 (dd,J = 35.2, 16.1 Hz, 1H), 4.00 (dd,J = 14.6, 8.0 Hz, 1H), 2.99 (s, 3H), 1.92 (d,J = 1.5 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物310：(20.9 mg，0.045 mmol) (假定)。滯留時間：5.344 min (CHIRAL Cellulose-SB.0.46*15cm；3μm； MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30；1.0ml/min)；LCMS (53) [M+H]+ = 465.3；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.27 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.66 (s, 2H), 6.73 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.41 (d,J = 2.5 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 5.99-5.83 (m, 1H), 5.27-5.16 (m, 3H), 4.80 (d,J = 14.9 Hz, 1H), 4.45-4.34 (m, 1H), 4.07-3.96 (m, 1H), 2.99 (s, 3H), 1.92 (d,J = 1.5 Hz, 3H)。 實例194： 2-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-4-羥基-4,6-二甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物311) 步驟 1 ：2-溴-6-甲基-5,6-二氫-8H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-4,7-二酮
將2-溴-6-甲基-4-亞甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(1.0 g，3.9 mmol)於四氯化碳(1 mL)、乙腈(1 mL)及水(1 mL)中之溶液在25℃攪拌10分鐘。添加RuCl3 (265.0 mg，1.18 mmol)及過碘酸鈉(2520 mg，11.78 mmol)。將混合物在25℃攪拌2小時。將反應藉由Na2 S2 O3 /NaHCO3 溶液淬滅。將所得混合物用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用EA/PE (20%)溶離來純化，得到呈黃色油狀之2-溴-6-甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-4,7-二酮(300 mg，1.16 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 258步驟 2 ：2-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-6-甲基-5,6-二氫-8H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-4,7-二酮
將2-溴-6-甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-4,7-二酮(160.0 mg，0.62 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(178.38 mg，0.62 mmol)、t -BuBrettphos (150.04 mg，0.31 mmol)、t -BuBrettphos Pd G3 (211.79 mg，0.25 mmol)及碳酸銫(606.35 mg，1.86 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在120℃攪拌4小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/10)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-4,7-二酮(70 mg，0.15 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 465步驟 3 ：2-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-4-羥基-4,6-二甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
在-78℃下向2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-4,7-二酮(100 mg，0.22 mmol)於THF (10 mL)中之混合物中添加四氫呋喃中之碘化甲基鎂(0.43 mL，1.29 mmol)。將所得溶液在-65℃攪拌2小時。將反應用水淬滅。將所得混合物用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/10)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-4-羥基-4,6-二甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(40 mg，0.083 mmol)。LC/MS (ESI): [M+H]+ = 481步驟 4 ：7-氟-3-(4-羥基-4,6-二甲基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-2-基胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
將2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-4-羥基-4,6-二甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(70 mg，0.15 mmol)、Boc-NH2 (510.9 mg，4.37 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(30.13 mg，0.0300 mmol)、Brettphos (15.63 mg，0.030 mmol)、碳酸銫(189.8 mg，0.58 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用甲醇/二氯甲烷(1/10)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[7-氟-3-[(4-羥基-4,6-二甲基-7-側氧基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(40 mg，0.071 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 562。步驟 5 ：2-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-4-羥基-4,6-二甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將N -[7-氟-3-[(4-羥基-4,6-二甲基-7-側氧基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(30 mg，0.050 mmol)於二氯甲烷(2 mL)及2,2,2-三氟乙酸(5 mL)中之混合物在25℃攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150mm 5um；水(10 mmol/L): CH3 CN= 15%至40% B，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基)-4-羥基-4,6-二甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-g ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(4.3 mg，0.0093 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 462.3；1 H NMR (300 Mhz, 甲醇-d 4 )δ 9.16 (s, 1H), 8.50-8.37 (m, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.42 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 6.35 (s, 1H), 5.16 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 4.96-4.89 (m, 2H), 4.11 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.64 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.15 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 1.61 (s, 3H)。 實例195： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-(2,2-二氟乙基)-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物312) 步驟 1 ：2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
在0℃下向2-溴-4,5,6,8-四氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(900 mg，3.91 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(50 mL)中之混合物中添加氫化鈉(281.67 mg，11.74 mmol)。隨後將反應物攪拌0.5小時。添加N,N -二甲基羧醯胺(5 mL)中之2-碘-1,1-二氟乙烷(3.75 g，19.56 mmol)且在20℃攪拌3小時。將殘餘物直接藉由逆相HPLC用MeOH/0.5%碳酸氫鈉於水(5%至65%，30 min內)純化，得到呈白色固體狀之2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(380 mg，33%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 294.1。步驟 2 ：N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N-[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(350 mg，0.70 mmol)、2-溴-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(307 mg，1.04 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(144 mg，0.14 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(160 mg，0.28 mmol)及碳酸銫(680 mg，2.09 mmol)於1,4-二噁烷(35 mL)中之混合物在100℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相HPLC用MeOH/0.5%碳酸氫鈉於水(5%至75%，30 min內)純化，得到呈黃色固體狀之N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(180 mg，36.1%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 716.4。步驟 3 ：N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(180 mg，0.25 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(736 mg，6.28 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(39 mg，0.04 mmol)、BrettPhos (27 mg，0.05 mmol)及碳酸銫(410 mg，1.26 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相HPLC用ACN/0.5%碳酸氫鈉於水(5%至65%，30 min內)純化，得到呈黃色固體狀之N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，49.9%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 797.5。步驟 4 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-3-[[6-(2,2-二氟乙基)-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-7-氟-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(500 mg，0.63 mmol)及TFA (10 mL)於DCM (5 mL)中之溶液在20℃攪拌1.5小時。將混合物在真空下濃縮。用MeOH中之NH3 (7 M)將反應混合物調整至pH 10。在真空下濃縮後，將粗產物藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD管柱19*15mm 5um；10 mmol碳酸氫鈉於水: ACN (20%至41%，7 min內))純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-(2,2-二氟乙基)-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(156 mg，50.3%收率)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 497.3；1 HNMR (300 MHz, DMSO) δ 9.24 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.37-5.98 (m, 4H), 5.22 (s, 2H), 5.04 (s, 2H), 3.96-3.79 (m, 4H), 3.07-3.03 (m, 2H), 1.92 (s, 3H)。實例196： 2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-4-羥基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物313) 步驟 1 ：2'-溴-6'-甲基-5',6'-二氫螺[環氧乙烷-2,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-7'(8'H)-酮
將2-溴-6-甲基-4-亞甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(1.0 g，3.91 mmol)及m-CPBA(2.03 g，11.73 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之混合物在25℃攪拌12小時。將反應用水性Na2 S2 O3 及NaHCO3 淬滅。將所得混合物用二氯甲烷萃取，經無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之2'-溴-6'-甲基-5',6'-二氫螺[環氧乙烷-2,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-7'(8'H)-酮(300 mg，1.10 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 272。步驟 2 ：2-溴-4-羥基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮
將2'-溴-6'-甲基-5',6'-二氫螺[環氧乙烷-2,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-7'(8'H)-酮(300 mg，1.10 mmol)及甲醇鈉(178 mg，3.30 mmol)於甲醇(5 mL)中之溶液在室溫下攪拌12小時。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之2-溴-4-羥基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(170 mg，0.56 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 304。步驟 3 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-4-羥基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)異喹啉-3-胺(75.68 mg，0.26 mmol)、2-溴-4-羥基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(80 mg，0.26 mmol)、t-BuBrettphos Pd G3 (89.85 mg，0.11 mmol)、t-BuBrettphos (63.65 mg，0.13 mmol)及碳酸銫(257.25 mg，0.79 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)中之混合物在130℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-4-羥基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(47 mg，0.092 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 511。步驟 4 ：N -[7-氟-3-[[4-羥基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-4-羥基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(100 mg，0.20 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(573.2 mg，4.89 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(40.51 mg，0.04 mmol)、Brettphos (31.47 mg，0.06 mmol)及碳酸銫(191.41 mg，0.59 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之N-[7-氟-3-[[4-羥基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.085 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =592。步驟 5 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-4-羥基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將[N-[7-氟-3-[[4-羥基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-7-側氧基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]-6-(4-甲基-3-吡啶基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(80 mg，0.14 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(0.5 mL)於二氯甲烷(3 mL)中之混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將殘餘物調整至pH 8。將粗產物藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD管柱19x150mm；水(10 mmol/L碳酸氫鈉): CAN = 30%至45%，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-3-吡啶基)-3-異喹啉基]胺基]-4-羥基-4-(甲氧基甲基)-6-甲基-5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(11.5 mg，0.023 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 492。1 HNMR (400 MHz, DMSO) δ 9.29 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.50 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1 H), 7.72 (s, 1H), 7.39 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.79 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.26 (s, 1H), 6.13 (s, 2H), 5.85 (s, 1H), 5.07-4.84 (m, 2H), 4.07-3.65(m, 2H), 3.55-3.43(m, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.97 (s, 3 H), 2.23 (s, 3H)。 實例197： 2'-((8-胺基-7-氟-6-(1,3,5-三甲基-1H-吡唑-4-基)異喹啉-3-基)胺基)-6'-甲基-5',6'-二氫螺[環丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-7'(8'H)-酮 (化合物314) 步驟 1 ：8-氯-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)異喹啉-3-胺
將8-氯-7-氟-6-碘-異喹啉-3-胺(500 mg，1.55 mmol)、1,3,5-三甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1h-吡唑(500 mg，2.12 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (113 mg，0.15 mmol)及碳酸鉀(536 mg，3.88 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)及水(1.5 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(96/4)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之8-氯-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)異喹啉-3-胺(517 mg，1.69 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 305。步驟 2 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-7-酮
將2-溴-6-甲基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-7-酮(50 mg，0.19 mmol)、8-氯-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)異喹啉-3-胺(56.41 mg，0.19 mmol)、t-BuBrettphos Pd G3 (63.23 mg，0.07 mmol)、t-Bubrettphos (44.79 mg，0.09 mmol)及碳酸銫(181.02 mg，0.56 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在130℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(94/6)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-7-酮(27 mg，0.055 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 494。步驟 3 ：N-[7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-2-基)胺基]-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-[[8-氯-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-7-酮(136.0 mg，0.28 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(806.36 mg，6.88 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(56.99 mg，0.06 mmol)、Brettphos (44.27 mg，0.08 mmol)及碳酸銫(269.27 mg，0.83 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之N-[7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-2-基)胺基]-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(65 mg，0.11 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 575。步驟 4 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-7-酮
將N-[7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-2-基)胺基]-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(87.42 mg，0.15 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1.0 mL)於二氯甲烷(3 mL)中之混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將反應混合物調整至pH 8。將粗產物藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD管柱19x150mm；水(10mmol/L碳酸氫鈉)及ACN (30%至50%)，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(1,3,5-三甲基吡唑-4-基)-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-7-酮(33 mg，0.07 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 475；1 HNMR (400 MHz, DMSO) δ 9.20 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 6.65 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 5.96 (s, 2H), 5.61 (s, 1H), 5.06 (s, 2H), 3.73-3.70 (m, 5H), 2.99 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.18-1.16 (m, 2H), 0.95-0.92 (m, 2H)。 實例198： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物315) 步驟 1 ：N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N-[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(518 mg，1.03 mmol)、2-溴-6-異丙基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(280.27 mg，1.03 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(213.19 mg，0.21 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基(238.11 mg，0.41 mmol)及碳酸銫(1.01 g，3.09 mmol)於1,4-二噁烷(28 mL)中之混合物在100℃攪拌15小時。將反應物冷卻至室溫且隨後在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(280 mg，0.40 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 694。步驟 2 ：N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯
將N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-氯-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(270 mg，0.39 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.14 g，9.72 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(80.51 mg，0.08 mmol)、Brettphos (83.39 mg，0.16 mmol)及碳酸銫(633.97 mg，1.94 mmol)於1,4-二噁烷(40 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。將反應物冷卻至室溫且隨後在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(150 mg，0.19 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 775。步驟 3 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將N-第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(140 mg，0.18 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(5 mL，0.18 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液在20℃攪拌1小時。將粗產物藉由製備型HPLC (XBridge Shield RP18 OBD管柱，5 μm，19*150mm；水(10mmol/L碳酸氫鈉)=25% B至45% B，7 min內；25 mL/min)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(36.5 mg，0.077 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =475.3。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.26 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.69 (d,J = 8.9 Hz, 2H), 6.72 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 5.96 (s, 1H), 5.23 (s, 2H), 4.97 (s, 2H), 4.61-4.57 (m, 1H), 3.79-3.75 (m, 2H), 2.99-2.96 (m, 2H), 1.94 (s, 3H), 1.13 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。 實例199： 2'-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6'-甲基-5',6'-二氫螺[環丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-7'(8'H)-酮 (化合物316) 步驟 1 ：N-[(第三 丁氧基)羰基]-N-[5-[8-氯-7-氟-3-([3'-甲基-4'-側氧基-2',3',4',5'-四氫螺[環丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-8'-基]胺基)異喹啉-6-基]-4-甲基吡啶-3-基]胺基甲酸第三 丁酯
將N-[5-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-4-甲基-3-吡啶基]-N-第三 丁氧基羰基-胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，0.40 mmol)、2-溴-6-甲基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-7-酮(129 mg，0.48 mmol)、t-BuBrettphos Pd G3 (137 mg，0.16 mmol)、t-Bubrettphos (97 mg，0.2 mmol)、碳酸銫(391 mg，1.2 mmol)於1,4-二噁烷中之混合物在130℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(96/4)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N-[(第三 丁氧基)羰基]-N-[5-[8-氯-7-氟-3-([3'-甲基-4'-側氧基-2',3',4',5'-四氫螺[環丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-8'-基]胺基)異喹啉-6-基]-4-甲基吡啶-3-基]胺基甲酸第三 丁酯(69 mg，25%收率)。LCMS(ESI) [M+H]+ = 692。步驟 2 ：(第三丁氧基羰基)(5-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((6'-甲基-7'-側氧基-5',6',7',8'-四氫螺[環丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-2'-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯
將N-[(第三 丁氧基)羰基]-N-[5-[8-氯-7-氟-3-([3'-甲基-4'-側氧基-2',3',4',5'-四氫螺[環丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-8'-基]胺基)異喹啉-6-基]-4-甲基吡啶-3-基]胺基甲酸第三 丁酯(69 mg，0.1 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(293 mg，2.5 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(21 mg，0.02 mmol)、碳酸銫(98 mg，0.3 mmol)、BrettPhos (22 mg，0.04 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在90℃攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之(第三丁氧基羰基)(5-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((6'-甲基-7'-側氧基-5',6',7',8'-四氫螺[環丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-2'-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(39 mg，50%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 773。步驟 3 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-7-酮
將N -第三 丁氧基羰基-N-[5-[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-甲基-7-側氧基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-2-基)胺基]-6-異喹啉基]-4-甲基-3-吡啶基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.06 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1.0 mL)於二氯甲烷中之混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。用NH3 於甲醇中之溶液將混合物調整至pH 8。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD管柱19mm x150um；CH3 CN : H2 O(碳酸氫鈉10 mmol/L) = 28至43%，8 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基-3-吡啶基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-甲基-螺[5,8-二氫吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-4,1'-環丙烷]-7-酮(8.2 mg，0.017 mmol)。LCMS (ESI [M+H]+ = 473；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.24 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 6.72 (d,J = 6 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 5.61 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 5.06 (s, 2H), 3.73 (s, 2H), 2.99(s, 3H), 1.93(s, 3H), 1.24-1.16 (m, 2H), 0.96-0.92 (m, 2H)。 實例200： 2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-甲基-4-亞甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物317)
將N-[7-氟-3-([6-甲基-4-亞甲基-7-側氧基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(20 mg，0.03 mmol)於HCl於二噁烷(2 mL，4 mol/L)中之混合物在室溫下攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD管柱19*150mm*5um；水(0.1%碳酸氫鈉):CH3 CN=25%至41%，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-甲基-4-亞甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(2.8 mg，0.006 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 444；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.29 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.50 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.38 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 6.80 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.11 (s, 2H), 5.63 (s, 1H), 5.33 (s, 1H), 5.08 (s, 2H), 4.41 (s, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.21 (s, 3H)。 實例201： 2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-4,6-二甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物318) 步驟 1 ：3,5-二溴-1H-吡唑
在-65℃下向3,4,5-三溴-1H-吡唑(50 g，164.1 mmol)於THF (750 mL)中之溶液中添加n-BuLi (2.5 M)於己烷(150 mL)中之溶液。將所得溶液在-65℃在乾冰浴中攪拌1 h。隨後將反應藉由水淬滅。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(50/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之3,5-二溴-1H-吡唑(20 g，54%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 226.9。步驟 2 ：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸第三 丁酯
向3,5-二溴-1H-吡唑(20 g，88.55 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(400 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(20 g，144.7 mmol)、TBAI (1.6 g，4.33 mmol)及2-氯乙酸第三 丁酯(20 g，132.8 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌12 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物在矽膠管柱上純化，用二氯甲烷/甲醇(100/1)溶離，得到呈無色油狀之2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸第三 丁酯(18 g，60%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 341.0。步驟 3 ：2-(3,5-二溴-1H -吡唑-1-基)乙酸
2-(3,5-二溴-1H -吡唑-1-基)乙酸第三 丁酯(18 g，52.94 mmol)於二氯甲烷(10 mL)及2,2,2-三氟乙酸(100 mL)中之溶液在80℃攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮，得到呈白色固體狀之2-(3,5-二溴-1H -吡唑-1-基)乙酸(15 g，粗品)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 284.9。步驟 4 ：2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙醯胺
將2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)乙酸(15 g，52.84 mmol)、甲基(丙-2-烯-1-基)胺(5.7 g，80.15 mmol)、N,N -二異丙基乙胺(27 g，208.9 mmol)及HATU (30 g，78.9 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(500 mL)中之溶液在室溫下攪拌16小時。將所得混合物用乙酸乙酯稀釋，隨後用氯化鈉溶液洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(2/3)溶離來純化，得到呈黃色油狀之2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙醯胺(16.3 g，92%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 338.0。步驟 5 ：2-溴-6-甲基-4-亞甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
在80℃下將2-(3,5-二溴-1H-吡唑-1-基)-N-甲基-N-(丙-2-烯-1-基)乙醯胺(5 g，14.84 mmol)、乙酸鈀(166 mg，0.74 mmol)、三苯基膦(388 mg，1.48 mmol)、TBAB (4.8 g，14.890 mmol)及乙酸鉀(4.2 g，42.80 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(100 mL)中之溶液攪拌10 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物在矽膠管柱上純化，用乙酸乙酯/石油醚(2/1)溶離，得到呈褐色油狀之2-溴-6-甲基-4-亞甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(3.2 g，84%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 258.1。步驟 6 ：5-溴-4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)吡啶
將2,5-二溴-4-甲基吡啶(1.2 g，4.78 mmol)、2-(三丁基錫烷基)-1,3-噁唑(2.06 g，5.75 mmol)及肆(三苯基膦)鈀(552 mg，0.48 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)中之混合物在90℃攪拌16小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物在矽膠管柱上純化，用乙酸乙酯/石油醚(1/2)溶離，得到呈淡黃色固體狀之5-溴-4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)吡啶(380 mg，33%)。LCMS (ESI) [M+H+] = 241.1。步驟 7 ：4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶
將5-溴-4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)吡啶(800 mg，3.35 mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1,3,2-二氧雜硼雜戊環(8.4 g，33.08 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (244 mg，0.33 mmol)及乙酸鉀(820 mg，8.36 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)中之混合物在90℃攪拌16小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物在矽膠管柱上純化，用乙酸乙酯/石油醚(1/1)溶離，得到呈淡黃色固體狀之4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(1.2 g，粗品)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 287.1。步驟 8 ：8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-胺
將8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-胺(550 mg，1.71 mmol)、4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(1.2 g，4.19 mmol)、碳酸鉀(825 mg，5.97 mmol)及[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (125 mg，0.17 mmol)於1,4-二噁烷(25 mL)及水(5 mL)中之混合物在90℃攪拌2 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物在矽膠管柱上純化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離，得到呈褐色固體狀之8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-胺(580 mg 95%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 355.1。步驟 9 ：2-([8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]胺基)-6-甲基-4-亞甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-胺(700 mg，1.97 mmol)、2-溴-6-甲基-4-亞甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(1.2 g，4.69 mmol)、第3代t-BuBrettPhos預催化劑(675 mg，0.79 mmol)、t-BuBrettPhos (403 mg，0.83 mmol)及碳酸銫(3.2 g，9.82 mmol)於1,4-二噁烷(80 mL)中之混合物在110℃攪拌1.5 h。隨後將混合物過濾。將濾液濃縮。在真空下濃縮後，將殘餘物在矽膠管柱上純化，用二氯甲烷/甲醇(15:1)溶離，得到呈黃色固體狀之2-([8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]胺基)-6-甲基-4-亞甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(300 mg，29%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 530.3。步驟 10 ：2-([8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]胺基)-4,6-二甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
向2-([8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]胺基)-6-甲基-4-亞甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(300 mg，0.57 mmol)於甲醇(90 mL)及二氯甲烷(10 mL)中之混合物添加鈀/碳(30.12 mg，0.28 mmol)。將反應物在室溫下在氫(2 atm)下攪拌2 h且隨後過濾。將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色固體狀之2-([8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]胺基)-4,6-二甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(130 mg，43%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 532.3。步驟 11 ：N-[3-([4,6-二甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-([8-氯-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]胺基)-4,6-二甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(100 mg，0.19 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(550 mg，4.70 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(30 mg，0.03 mmol)、BrettPhos (20 mg，0.04 mmol)及碳酸銫(300 mg，0.92 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在90℃攪拌2 h，且隨後過濾。在真空下濃縮後，將殘餘物在矽膠管柱上純化，用二氯甲烷/甲醇(10:1)溶離，得到呈褐色油狀之N-[3-([4,6-二甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，87%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 6 13.4。步驟 12 ：2-([8-胺基-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]胺基)-4,6-二甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N-[3-([4,6-二甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.16 mmol)於DCM (5 mL)及TFA (5 mL)中之混合物在室溫下攪拌1.5 h。將所得混合物在真空下濃縮。用甲醇中之NH3 (7 M)將溶液之pH值調整至10。將粗產物直接藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD管柱19*15mm 5um；10 mmol碳酸氫鈉於水: ACN (50%至77%)，8 min內)，得到呈黃色固體狀之2-([8-胺基-7-氟-6-[4-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)吡啶-3-基]異喹啉-3-基]胺基)-4,6-二甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(22.5 mg，27%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 513.3。1 HNMR (400 MHz, DMSO) δ 9.29 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 6.86-6.84 (m, 1H), 6.17 (s, 2H), 6.04 (s, 1H), 5.13-4.81 (m, 2H), 3.84-3.77 (m, 1H), 3.68-3.63 (m, 1H), 3.30-3.26 (m, 1H), 2.97 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 1.26 (d,J = 7.2 Hz, 3H)。 實例202： (1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物322)、 (1S ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物321)、 (1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物320)及 (1R ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物319) 步驟 1 ：(2E)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-5-基]丙-2-烯酸甲酯
將1-(三苯基甲基)-1H -咪唑-5-甲醛(10 g，29.55 mmol)及2-(三苯基-λ5-亞膦基)乙酸甲酯(9.88 g，29.55 mmol)於四氫呋喃(150 mL)中之混合物在70℃攪拌3 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(1/10)溶離來純化，得到呈白色固體狀之(2E )-3-[1-(三苯基甲基)-1H -咪唑-5-基]丙-2-烯酸甲酯(10 g，25.38 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 395步驟 2 ：反式-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯
在-78℃在氮下向乙基二苯基鋶；三氟(λ2-氟)硼酸(trifluoro(lambda2-fluoranidyl)boranuide) (15 g，49.64 mmol)於乙二醇二甲醚(100 mL)及二氯甲烷(10 mL)中之混合物中添加二異丙基胺基鋰(25 mL，466.75 mmol)。將反應物在-78℃攪拌30 min。添加(2E )-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]丙-2-烯酸甲酯(6.8 g，17.23 mmol)。將反應物在-78℃攪拌5 h。將反應用冰水淬滅。將所得混合物用乙酸乙酯萃取，且用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠急驟層析術用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之反式-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(3 g，7.10 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 423步驟 3 ：反式-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H -咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸
將反式-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(3 g，7.10 mmol)及LiOH (853 mg，35.61 mmol)於甲醇(20 mL)及水(20 mL)中之混合物在室溫下攪拌12 h。用氯化氫將反應混合物調整至pH 5。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，且將有機層合併且在真空下濃縮，得到呈白色固體狀之反式-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸(1.26 g，3.08 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =409。步驟 4 ：反式-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H -咪唑-4-基]環丙烷-1-羧醯胺
在0℃下向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(886 mg，3.07 mmol)、反式-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸(1.26 g，3.08 mmol)及吡啶(5 mL，62.118 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之混合物中添加氧氯化磷(1.4 g，9.13 mmol)，且隨後在0℃攪拌30 min。隨後將反應用水淬滅。將所得混合物用水洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)純化，得到呈白色固體狀之反式-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧醯胺(500 mg，0.73 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =678。步驟 5 ：反式-N -(7-氟-3-[[2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將胺基甲酸第三丁酯(5.2 g，44.38 mmol)、反式-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧醯胺(1.5 g，2.21 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(460 mg，0.44 mmol)、BrettPhos (478 mg，0.89 mmol)及碳酸銫(2.89 g，8.87 mmol)於二噁烷(30 mL)中之混合物在90℃在氮下攪拌3 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠急驟層析術用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之N -(7-氟-3-[[(1S ,3S )-2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(1 g，1.32 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =759。步驟 6 ：(1S ,2S ,3S )-N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺、(1R ,2R ,3R )-N-[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺、(1S ,2S ,3R )-N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺及(1R ,2R ,3S )-N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-5-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺
將反式-N -(7-氟-3-[[2-甲基-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(1 g，1.31 mmol)於三氟乙酸(10 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.1%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈黃色固體狀之混合物(500 mg，1.20 mmol)。將混合物藉由製備型SFC純化，得到四種異構物(異構物之環丙烷立體化學：咪唑與醯胺成反式 ；任意指定之甲基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物321：(84.9 mg，0.20 mmol)，滯留時間：1.25 min(CHIRALPAK Ic，3.0*100mm, ，3μm；MeOH(0.1%DEA)；2 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 417；1 HNMR (400 MHz, DMSO) δ 11.76(s,1H), 10.68 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.51 (d,J =4.0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.40-7.38 (m, 1H), 6.95-6.93 (m, 2H), 6.27 (s, 2H), 2.39-2.32 (m, 1H), 2.29-2.27 (m, 1H), 2.19 (s, 3H), 1.75-1.70 (m, 1H), 1.29-1.27 (m,3H)。
呈黃色固體狀之化合物322：(123.9 mg, 0.29 mmol)，滯留時間：1.47 min(CHIRALPAK Ic，3.0*100mm, ，3 μm；MeOH(0.1%DEA)；2 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 417；1 HNMR (400 MHz, DMSO) δ 11.76(s,1H), 10.68 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.51 (d,J =4.0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.40-7.38 (m, 1H), 6.95-6.93 (m, 2H), 6.27 (s, 2H), 2.39-2.32 (m, 1H), 2.29-2.27 (m, 1H), 2.19 (s, 3H), 1.75-1.70 (m, 1H), 1.29-1.27 (m,3H)。
呈黃色固體狀之化合物320：(110.2 mg，0.26 mmol)。滯留時間：1.63 min(CHIRALPAK Ic，3.0*100mm，3 μm；MeOH(0.1%DEA)；2 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 417；1 HNMR (400 MHz, DMSO) δ 11.76(s,1H), 10.68 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.51-8.50 (d,J =4.0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.40-7.38 (m, 1H), 6.95-6.93 (m, 2H), 6.27 (s, 2H), 2.39-2.32 (m, 1H), 2.29-2.27 (m, 1H), 2.19 (s, 3H), 1.75-1.70 (m, 1H), 1.29-1.27 (m,3H)。
呈黃色固體狀之化合物319：(168.9 mg，0.40 mmol)。滯留時間：2.20 min(CHIRALPAK Ic，3.0*100mm，3 μm；MeOH(0.1%DEA)；2 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 417；1 HNMR (400 MHz, DMSO) δ 11.76(s,1H), 10.68 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.51-8.50 (d,J =4.0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.40-7.38 (m, 1H), 6.95-6.93 (m, 2H), 6.27 (s, 2H), 2.39-2.32 (m, 1H), 2.29-2.27 (m, 1H), 2.19 (s, 3H), 1.75-1.70 (m, 1H), 1.29-1.27 (m,3H)。 實例203： (±)-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物328) 步驟 1 ：6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-氧雜雙環[3.1.0]己-2-酮
將(2E)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯-1-基2-重氮乙酸酯(100 mg，0.48 mmol)及第三 丁基[(第三 丁基二甲基矽基)cuprio]二甲基矽烷(tert -butyl[(tert -butyldimethylsilyl)cuprio]dimethylsilane) (7.1 mg，0.024 mmol)於甲苯(3 mL)中之溶液在回流下攪拌2小時。將所得溶液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(2/1)溶離來純化，得到呈黃色油狀之6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-氧雜雙環[3.1.0]己-2-酮(25 mg，0.14 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 179.1。步驟 2 ：N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
在0℃下向6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-氧雜雙環[3.1.0]己-2-酮(200 mg，1.12 mmol)於THF (5 mL)中之溶液中添加LiHMDS (1.35 mL，8.07 mmol)。隨後將混合物在0℃攪拌30 min。隨後添加8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(287 mg，0.99 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2 h。隨後將反應藉由水淬滅。將所得混合物用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(1/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(150 mg，29%)。步驟 3 ：N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[(噁烷-2-基氧基)甲基]環丙烷-1-羧醯胺
將N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(150 mg，0.32 mmol)、3,4-二氫-2H-吡喃(140 mg，1.66 mmol)、TsOH (10 mg，0.058 mmol)於四氫呋喃(5 mL)中之混合物在室溫下攪拌12 h。將所得溶液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[(噁烷-2-基氧基)甲基]環丙烷-1-羧醯胺(95 mg，54%)。步驟 4 ：N -(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[(噁烷-2-基氧基)甲基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[(噁烷-2-基氧基)甲基]環丙烷-1-羧醯胺(95 mg，0.17 mmol)、Pd2 (dba)3 (30 mg，0.033 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(510 mg，4.35 mmol)、BrettPhos (30 mg，0.056 mmol)、碳酸銫(280 mg，0.86 mmol)、1,4-二噁烷(3 mL)之混合物在90℃攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[(噁烷-2-基氧基)甲基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，55%)。步驟 5 ：N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
將N -(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[(噁烷-2-基氧基)甲基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.095 mmol)及三氟乙酸(2 mL)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液在室溫下攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(7.1 mg，17%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 447.3，2.187 min，K；1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ9.303 (s, 1H), 8.47 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (s,J = 5.1 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.00 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 3.99-3.88 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 2.32-2.24 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.28-2.24 (m, 1H), 1.93-1.84 (m, 1H)。 實例204及實例205： (1R ,2S )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(羥甲基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物327)及 (1S ,2R )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(羥甲基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物326) 步驟 1 ：3-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,4-二酮
將3-氧雜雙環[3.1.0]己烷-2,4-二酮(390 mg，3.48 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(500 mg，1.73 mmol)、4-二甲基胺基吡啶(425 mg，3.47 mmol)於二噁烷(10 mL)中之混合物120℃攪拌12 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)純化，得到呈白色固體狀之3-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,4-二酮(450 mg，1.18 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 382。步驟 2 ：N -(3-[2,4-二側氧基-3-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將胺基甲酸第三丁酯(1.22 g，10.41 mmol)、3-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,4-二酮(200 mg，0.52 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(108 mg，0.10 mmol)、BrettPhos (112 mg，0.20 mmol)、碳酸銫(682 mg，2.09 mmol)於二噁烷(20 mL)中之混合物在90℃攪拌2 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N-(3-[2,4-二側氧基-3-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(150 mg，0.32 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 463步驟 3 ：順式-N -(7-氟-3-[[2-(羥甲基)環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
向N -(3-[2,4-二側氧基-3-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(460 mg，0.99 mmol)於甲醇(30 mL)中之混合物中添加硼氫化鈉(190 mg，5.02 mmol)。在室溫下攪拌混合物2 h。將反應用水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)純化，得到呈白色固體狀之順式-N-(7-氟-3-[[2-(羥甲基)環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，0.42 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 467。步驟 4 ：(1R ,2S )-N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(羥甲基)環丙烷-1-羧醯胺及(1S ,2R )-N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(羥甲基)環丙烷-1-羧醯胺
將順式-N -(7-氟-3-[[2-(羥甲基)環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，0.42 mmol)於三氟乙酸(5 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.1%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈白色固體狀之外消旋產物(50 mg，0.13 mmol)。將外消旋物產物藉由掌性HPLC分離，得到兩種反式-異構物：
化合物327：滯留時間：3.04 min(修復掌性IC，0.46*10 cm；5 μm；Hex(0.1%DEA):EtOH=50:50；1 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 367；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.28 (s, 1H), 8.45-8.44 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.42-7.41 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 6.98-6.96 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 3.86-3.82 (m, 1H), 3.75-3.70 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.08-2.02 (m,1H), 1.64-1.59 (m, 1H), 1.15-1.10 (m, 2H)。
化合物326：滯留時間：3.86 min (修復掌性IC，0.46*10cm；5 μm；Hex(0.1%DEA):EtOH=50:50；1 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 367；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.28 (s, 1H), 8.45-8.44 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.42-7.41 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 6.98-6.96 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 3.86-3.82 (m, 1H), 3.75-3.70 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.08-2.02 (m,1H), 1.64-1.59 (m, 1H), 1.15-1.10 (m, 2H)。 實例206： 2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-(2,2,2-三氟乙基)-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物387) 步驟 1 ：2-溴-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
向2-溴-4H,5H,6H,7H,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(1 g，4.35 mmol)於THF/DMF (40 mL/40 mL)中之溶液中添加t-BuOK (1.5 g，13.4 mmol)及2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯(5 g，21.5 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌16小時。將粗產物藉由逆相HPLC (C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水: MeOH (5%至70%，50 min內)純化，得到呈無色油狀之2-溴-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(300 mg，22%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 312.0。步驟 2 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(100 mg，0.35 mmol)、2-溴-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(110 mg，0.35 mmol)、第3代t-BuBrettPhos預催化劑(120 mg，0.14 mmol)、t-BuBrettPhos (75 mg，0.16 mmol)、碳酸銫(570 mg，1.75 mmol)及1,4-二噁烷(12 mL)之混合物在110℃攪拌1 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物在矽膠管柱上純化，用二氯甲烷/甲醇(15/1)溶離，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-(2,2,2-三氟乙基)- 4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(35 mg，19%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 519.2。步驟 3 ：N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[7-側氧基-6-(2,2,2-三氟乙基)- 4H,5H,6H,7H,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三丁酯
將2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-(2,2,2-三氟乙基)- 4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(150 mg，0.29 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(850 mg，7.26 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(45 mg，0.043 mmol)、BrettPhos (30 mg，0.056 mmol)、碳酸銫(472 mg，1.45 mmol)於1,4-二噁烷(12 mL)中之混合物在90℃攪拌2 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物在矽膠管柱上純化，用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離，得到呈黃色固體狀之N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[7-側氧基-6-(2,2,2-三氟乙基)- 4H,5H,6H,7H,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三丁酯(40 mg，23%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 600.4。步驟 4 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H,5H,6H,7H,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[7-側氧基-6-(2,2,2-三氟乙基)- 4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(40 mg，0.067 mmol)於二氯甲烷(2 mL)及三氟乙酸(5 mL)中之溶液在室溫下攪拌2.5 h。將所得混合物在真空下濃縮。用甲醇中之NH3 (7 M)將溶液之pH值調整至10。將粗產物直接藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD管柱19*15mm 5um；10 mmol碳酸氫鈉於水: ACN (50%至77%)，8 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-(2,2,2-三氟乙基)-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(6.0 mg，18%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 500.1；1 HNMR (300 MHz, MeOD) δ 9.14 (s, 1H), 8.44 (d,J = 5.7 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.41 (d,J = 5.7 Hz, 1H), 6.85 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.06 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.25-4.22 (m, 2H), 4.07-4.03 (m, 2H), 3.19-3.17 (m, 2H), 2.30 (s, 3H)。 實例207： (1S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H -咪唑-4-基)-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物369)及 (1R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H -咪唑-4-基)-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物370) 步驟 1 ：4-甲基-N'-[(1E)-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]亞甲基]苯-1-磺醯肼
將1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-甲醛(10 g，29.55 mmol)、4-甲基苯-1-磺醯肼(11 g，59.06 mmol)於甲醇(200 mL)及AcOH (0.5 mL)中之混合物在室溫下攪拌12 h。過濾後，將固體收集且藉由甲醇(50 mL)洗滌，得到呈白色固體狀之4-甲基-N '-[(1E )-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]亞甲基]苯-1-磺醯肼(10 g，19.76 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 507步驟 2 ：2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸酯
將(2E )-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-烯酸甲酯(5 g，30.08 mmol)、4-甲基-N '-[(1E )-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]亞甲基]苯-1-磺醯肼(18.2 g，35.92 mmol)於二甲苯(200 mL)中之混合物在150℃攪拌4 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯溶離來純化，得到呈褐色固體狀之2-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(1.8 g，3.68 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 489步驟 3 ：2-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸
將2-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H -咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(700 mg，1.43 mmol)及LiOH (172 mg，7.18 mmol)於水(15 mL)及甲醇(15 mL)中之混合物在室溫下攪拌12 h。用氯化氫(1N )將反應混合物調整至pH 5。將所得混合物用乙酸乙酯萃取且用無水硫酸鈉乾燥，得到呈白色固體狀之2-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H -咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸(500 mg，1.05 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 475步驟 4 ：N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧醯胺
在0℃下向2-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸(500 mg，1.05 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(302 mg，1.05 mmol)及吡啶(4 mL)於二氯甲烷(20 mL)中之混合物中添加氧氯化磷(480 mg，3.13 mmol)。將所得溶液在0℃攪拌30 min。將反應物在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)純化，得到呈白色固體狀之反式-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧醯胺(350 mg,0.47 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =744。步驟 5 ：N -(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H -咪唑-4-基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H -咪唑-4-基]環丙烷-1-羧醯胺(250 mg，0.33mmol)、胺基甲酸第三丁酯(787 mg，6.71 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(70 mg，0.06mmol)、BrettPhos (72 mg，0.13 mmol)及碳酸銫(438 mg，1.34 mmol)於二噁烷(20 mL)中之混合物在90℃攪拌3 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之N -(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H -咪唑-4-基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(120 mg，0.14 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =825。步驟 6 ：(1R ,3S )-N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-4-基)-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺及(1S ,3R )-N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-4-基)-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
將N -(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.12 mmol)於三氟乙酸(5 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.1% FA於水中)純化，得到呈黃色固體狀之外消旋產物(20 mg，0.04 mmol )。將外消旋產物藉由掌性HPLC分離，得到兩種異構物： (異構物之環丙烷立體化學：吡唑與醯胺成反式 ；未知之咪唑相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)
化合物370：滯留時間：4.99 min(CHIRALPAK ID-3，0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=50:50；1 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 483；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.33(s, 1H), 8.48 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 8.42-8.40 (m, 2H), 7.56 (s,1H), 7.45 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.90-2.86 (m, 1H), 2.79-2.76 (m, 1H), 2.71-2.69 (m, 1H), 2.32 (s, 3H)
化合物369：滯留時間：5.98 min(CHIRALPAK ID-3，0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=50:50；1 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 483；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.33(s, 1H), 8.48 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 8.42-8.40 (m, 2H), 7.56 (s,1H), 7.45 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.90-2.86 (m, 1H), 2.79-2.76 (m, 1H), 2.71-2.69 (m, 1H), 2.32 (s, 3H) 實例208及實例209： (±)-(1R ,2S ,3S )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-((二甲基胺基)甲基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物343)； (1R ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-((二甲基胺基)甲基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物344)及 (1S, 2R ,3R )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-((二甲基胺基)甲基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物345) 步驟 1 ：2-側氧基-3-氧雜雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯
向溴化(2-乙氧基-2-側氧基乙基)二甲基鋶(60 g，261.85 mmol)及碳酸銫(101 g，309.98 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(300 mL)中之溶液在20℃攪拌20 min。添加2,5-二氫呋喃-2-酮(20 g，237.88 mmol)，且將混合物在20℃下再攪拌15小時。將反應物藉由水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(3/7)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-側氧基-3-氧雜雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯(3 g，7%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 171。步驟 2 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺甲醯基]-3-(羥甲基)環丙烷-1-羧酸乙酯
向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(6.1 g，21.20 mmol)於四氫呋喃(150 mL)中之溶液中添加LiHMDS (18 mL，107.57 mmol)，且隨後在-78℃攪拌1小時。添加2-側氧基-3-氧雜雙環[3.1.0]己烷-6-羧酸乙酯(4.5 g，26.45 mmol)，且將混合物在20℃下再攪拌15小時。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(49/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺甲醯基]-3-(羥甲基)環丙烷-1-羧酸乙酯(3.1 g，26%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 458。步驟 3 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺甲醯基]-3-[(甲烷磺醯基氧基)甲基]環丙烷-1-羧酸乙酯
向2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺甲醯基]-3-(羥甲基)環丙烷-1-羧酸乙酯(1.4 g，3.06 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(927 mg，9.161 mmol)及甲烷磺醯氯(703 mg，6.14 mmol)，且隨後在0℃攪拌15 min。將所得溶液在真空下濃縮，得到呈褐色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺甲醯基]-3-[(甲烷磺醯基氧基)甲基]環丙烷-1-羧酸乙酯(2 g，粗品)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 536。步驟 4 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺甲醯基]-3-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷-1-羧酸乙酯
向2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺甲醯基]-3-[(甲烷磺醯基氧基)甲基]環丙烷-1-羧酸乙酯(3.6 g，6.72 mmol)及二甲基胺於甲醇(160 mL)中之溶液在20℃攪拌36 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(24/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺甲醯基]-3-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷-1-羧酸乙酯(1.85 g，57%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 485。步驟 5 ：2-[(8-[[(第三 丁氧基)羰基]胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺甲醯基]-3-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷-1-羧酸乙酯
將2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺甲醯基]-3-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷-1-羧酸乙酯(592 mg，1.22 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(3.57 g，30.475 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(253 mg，0.244 mmol)、BrettPhos (262 mg，0.49 mmol)、碳酸銫(1.99 g，6.11 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在90℃攪拌15 h。隨後將混合物過濾。將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(20/1)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之2-[(8-[[(第三 丁氧基)羰基]胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺甲醯基]-3-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷-1-羧酸乙酯(280 mg，41%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 566。步驟 6 ：N -(3-[[2-[(二甲基胺基)甲基]-3-(羥甲基)環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
向2-[(8-[[(第三 丁氧基)羰基]胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺甲醯基]-3-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷-1-羧酸乙酯(280 mg，0.49 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中添加DIBAl-H (1.98 mL，11.81 mmol)。將混合物在-78℃攪拌1小時。將反應藉由甲醇淬滅。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(7/3)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N -(3-[[2-[(二甲基胺基)甲基]-3-(羥甲基)環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(80 mg，31%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 524。步驟 7 ：N -(3-[[2-[(二甲基胺基)甲基]-3-[(甲烷磺醯基氧基)甲基]環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
向N -(3-[[2-[(二甲基胺基)甲基]-3-(羥甲基)環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，0.13 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中添加三乙胺(42 mg，0.42 mmol)、甲烷磺醯氯(31 mg，0.27 mmol)。將所得溶液在0℃攪拌15 min。將所得溶液在真空下濃縮，得到呈褐色固體狀之N -(3-[[2-[(二甲基胺基)甲基]-3-[(甲烷磺醯基氧基)甲基]環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(90 mg，粗品)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 602。步驟 8 ：N -(3-[[2-(氰基甲基)-3-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
向N -(3-[[2-[(二甲基胺基)甲基]-3-[(甲烷磺醯基氧基)甲基]環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(90 mg，0.150 mmol)及NaCN (15 mg，0.31 mmol)於DMSO (5 mL)中之混合物在50℃攪拌1 h。將反應物藉由水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈褐色固體狀之N -(3-[[2-(氰基甲基)-3-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三丁酯(50 mg，63%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 533。步驟 9 ：(1R ,2S ,3S )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-((二甲基胺基)甲基)環丙烷-1-羧醯胺及(1S,2R,3R)-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-((二甲基胺基)甲基)環丙烷-1-羧醯胺
將N -(3-[[(1R ,2S ,3S )-2-(氰基甲基)-3-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(48 mg，0.090 mmol)及三氟乙酸(5 mL)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液在20℃攪拌1 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC用以下條件(Kinetex EVO C18管柱，30*150,5um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉)及ACN (15%至35%)，10 min內)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-(1R,2S,3S)-N-[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)-3-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷-1-羧醯胺(2.4 mg，6%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 433.2；1 HNMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.84 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.50 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.39 (d,J = 5.1Hz, 1H), 6.94 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.29 (s, 2H), 2.84-2.72 (m, 2H), 2.46 (d,J = 6.7 Hz, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.13 (s, 7H), 1.60 (dd,J = 6.5, 5.0 Hz, 1H), 1.51-1.40 (m, 1H)。
將外消旋產物藉由SFC分離，得到兩種異構物。
呈黃色固體狀之化合物344 (5.1 mg，34%)。滯留時間：3.652 min (CHIRALPAK IF，2*25cm，5 μm；MTBE及20.0%乙醇(8 mmol/L NH3 .H2 O)，23 min內)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 433.2；1 HNMR (300MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.84 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.50 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.39 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 6.94 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.29 (s, 2H), 2.84-2.72 (m, 2H), 2.46 (d,J = 6.7 Hz, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.13 (s, 7H), 1.60 (dd,J = 6.5, 5.0 Hz, 1H), 1.51-1.40 (m, 1H)。
呈黃色固體狀之化合物345：(5.4 mg，36%)。滯留時間：4.805 min(CHIRALPAK IF，2*25cm，5 μm；MTBE及20.0%乙醇(8 mmol/L NH3 .H2 O)，23 min內)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 433.2；1 HNMR (300MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.84 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.50 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.39 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 6.94 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.29 (s, 2H), 2.84-2.72 (m, 2H), 2.46 (d,J = 6.7 Hz, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.13 (s, 7H), 1.60 (dd,J = 6.5, 5.0 Hz, 1H), 1.51-1.40 (m, 1H)。 實例210： (1S,2R,3R)-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-(1H -咪唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物324)及(1R ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-(1H-咪唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物323) 步驟 1 ：3-(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)環丙烷-1,2-二羧酸二甲酯
將(2E )-丁-2-烯二酸1,4-二甲酯(10 g，69.38 mmol)、4-甲基-N'-[(1E)-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]亞甲基]苯-1-磺醯肼(2.85 g，5.63 mmol)及碳酸鉀(4.09 g，29.59 mmol)於二甲苯(150 mL)中之混合物在150℃攪拌1 h。隨後將混合物過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之(±)-(1S ,2S )-3-(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)環丙烷-1,2-二羧酸二甲酯(4 g，24%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 467。步驟 2 ：2-(甲氧基羰基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸
將3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1,2-二羧酸1,2-二甲酯(3.2 g，6.85 mmol)及LiOH.H2 O (288 mg，6.86 mmol)於四氫呋喃(30 mL)及甲醇(10 mL)中之混合物在室溫下攪拌2 h。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物用水稀釋，且用氯化氫(1.0 mol/L)將溶液之pH值調整至4。將所得混合物用3x100 mL二氯甲烷萃取。經有機層合併，且經無水硫酸鈉乾燥且過濾。將所得混合物在真空下濃縮，得到呈白色固體狀之2-(甲氧基羰基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸(1.2 g，39%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 453。步驟 3 ：2-(羥甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯
向2-(甲氧基羰基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸(3.0 g，6.63 mmol)於二氯甲烷(40 mL)中之溶液中添加BH3 -Me2 S (2 mL，21.09 mmol)。將溶液在室溫下攪拌2 h。隨後將反應藉由甲醇淬滅。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之2-(羥甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(1.5 g，52%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 439。步驟 4 ：2-[(甲烷磺醯基氧基)甲基]-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯
在0℃下向2-(羥甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(537 mg，1.23 mmol)及三乙胺(371 mg，3.67 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加甲烷磺醯氯(281 mg，2.45 mmol)。將溶液在0℃攪拌15 min。隨後將反應藉由水淬滅。將所得溶液用二氯甲烷萃取。將有機層經無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈淡黃色油狀之2-[(甲烷磺醯基氧基)甲基]-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(500 mg，79%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 517。步驟 5 ：(2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯
將2-[(甲烷磺醯基氧基)甲基]-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(620 mg，1.20 mmol)及NaCN (118 mg，2.41 mmol)於二甲亞碸(10 mL)中之混合物在50℃攪拌1 h。將反應物用乙酸乙酯稀釋。將所得混合物用水洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(95/5)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(440 mg，82%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 448。步驟 6 ：(1R ,2S ,3S )-2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸
將2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(400 mg，0.89 mmol)及氫氧化鈉(107 mg，2.68 mmol)於乙醇(10 mL)、四氫呋喃(10 mL)及水(10 mL)中之混合物在室溫下攪拌12 h。將混合物在真空下濃縮。將所得溶液用水稀釋。用氯化氫(1.0 mol/L)溶液之pH值調整至4。將溶液用二氯甲烷萃取。將有機層經無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈淡黃色固體狀之2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸(320 mg，83%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 434。步驟7：N -(3-[[(2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
向2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸(377 mg，0.87 mmol)、N -[3-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(320 mg，0.87 mmol)及吡啶(1 mL)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加POCl3 (405 mg，2.64 mmol)。將混合物在0℃攪拌30 min。隨後將反應物藉由水萃取，且隨後乙酸乙酯萃取。將有機層用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色油狀之N -(3-[[2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(500 mg，73%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 784。 步驟8：(1R ,2S ,3S )-N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)-3-(1H-咪唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺及(1S ,2R ,3R )-N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(氰基甲基)-3-(1H-咪唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
將N -(3-[[2-(氰基甲基)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(600 mg，0.77 mmol)於二氯甲烷(5 mL)及2,2,2-三氟乙酸(5 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。將混合物在真空下濃縮且隨後用二氯甲烷稀釋。用甲醇中之氨(7 mol/L)將溶液之pH值調整至8。將粗產物藉由製備型HPLC (Kinetex EVO C18管柱，30*150，5 μm；水(10 mmol/L碳酸氫鈉)及ACN (20% ACN至35%，7 min內)純化，得到外消旋產物。將外消旋產物藉由掌性HPLC純化，得到兩種鏡像異構物。
呈淡黃色固體狀之化合物323：(16.7 mg，5%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 784。1 HNMR (400 MHz, DMSO) δ 11.86 (s, 1H), 10.77 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 8.50 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.39 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.89 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.29 (s, 2H), 2.97-2.82 (m, 2H), 2.47-2.41 (m, 2H), 2.38-2.20 (m, 4H)。
呈黃色固體狀之化合物324：(13.8 mg，4%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 784。1 HNMR (400 MHz, DMSO) δ 11.86 (s, 1H), 10.77 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 8.50 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.39 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.89 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.29 (s, 2H), 2.97-2.82 (m, 2H), 2.47-2.41 (m, 2H), 2.38-2.20 (m, 4H)。 實例211： 2-((8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物229) 步驟 1 ：N -[(第三 丁氧基)羰基]-N -[5-[8-氯-7-氟-3-([6-甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基)異喹啉-6-基]-4-甲基吡啶-3-基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-溴-6-甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(25 mg，0.10 mmol)、N -[5-(3-胺基-8-氯-7-氟異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]-N -[(第三 丁氧基)羰基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.099 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(21 mg，0.020 mmol)、XantPhos (23 mg，0.040 mmol)、碳酸銫(81 mg，0.25 mmol)於1,4-二噁烷(4 mL)中之混合物在100℃攪拌15 h。將反應溶液冷卻至室溫且隨後過濾。將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(1/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N-[(第三 丁氧基)羰基]-N-[5-[8-氯-7-氟-3-([6-甲基-7-側氧基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基)異喹啉-6-基]-4-甲基吡啶-3-基]胺基甲酸第三 丁酯( 20 mg，0.030 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 666。步驟 2 ：(第三 丁氧基羰基)(5-(8-((第三 丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((6-甲基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯
將N-[(第三 丁氧基)羰基]-N-[5-[8-氯-7-氟-3-([6-甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基)異喹啉-6-基]-4-甲基吡啶-3-基]胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.090 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(264 mg，2.25 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(19 mg，0.018 mmol)、BrettPhos (20 mg，0.037 mmol)、碳酸銫(147 mg，0.45 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之混合物在90℃攪拌2 h。將反應溶液冷卻至室溫且隨後過濾。將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(1/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之(第三 丁氧基羰基)(5-(8-((第三 丁氧基羰基)胺基)-7-氟-3-((6-甲基-7-側氧基-5,6,7,8-四氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基)胺基)異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基)胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，0.067 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 747。步驟 3 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基]胺基]-6-甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮
將N-[6-(5-[雙[(第三 丁氧基)羰基]胺基]-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-3-([6-甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(290 mg，0.39 mmol)及三氟乙酸(10 mL)於二氯甲烷(3 mL)中之溶液在20℃攪拌1 h。將所得混合物在真空下濃縮。用甲醇中之氨(7 mol/L)將溶液之pH值調整至11。將粗產物藉由製備型HPLC用以下條件(XBridge Shield RP18 OBD管柱，30*150mm，5um；水(10 mmol/L碳酸氫鈉)及ACN (10% ACN至30%，10 min內)純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基]胺基]-6-甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(34.1 mg，20%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 447.2；1 H NMR (300MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.26 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.72 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.07 (s, 2H), 5.99 (s, 1H), 5.23 (s, 2H), 4.98 (s, 2H), 3.84 (t,J = 5.7 Hz, 2H), 3.05 (t,J = 5.6 Hz, 2H), 2.96 (s, 3H), 1.94 (d,J = 1.5 Hz, 3H)。 實例212： (1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H -吡唑-5-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物332)、 (1S ,2R ,3S )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3基)-2-甲基-3-(1H -吡唑-5-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物331)、 (1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4 甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H -吡唑-5-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物330)及 (1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H -吡唑-5基)環丙烷-1-羧醯胺(假定) (化合物329) 步驟 1 ：3-碘-1-(四氫-2H -吡喃-2-基)-1H -吡唑
將5-碘-1H -吡唑(10 g，51.55 mmol)、3,4-二氫-2H -吡喃(13 g，154.55 mmol)、TsOH (443 mg，2.57 mmol)於乙酸乙酯(200 mL)中之混合物在80℃攪拌3 h。將所得混合物用水洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/石油醚(3/7)溶離來純化，得到呈白色固體狀之3-碘-1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑(7.0 g，25.18 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 279。步驟 2 ：(E )-3-(1-(四氫-2H -吡喃-2-基)-1H -吡唑-3-基)丙烯酸甲酯
將3-碘-1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑(5 g，17.98 mmol)、丙-2-烯酸甲酯(4.64 g，53.90 mmol)、乙酸鈀(604 mg，2.69 mmol)、三鄰甲苯基膦(1.09 g，3.58 mmol)、三乙胺(2.725 g，26.93 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(100 mL)中之混合物在110℃攪拌12 h。將所得溶液用乙酸乙酯洗滌，且隨後用水洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(15/85)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之(2E )-3-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-3-基]丙-2-烯酸甲酯(2.7 g，11.44 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 237。步驟 3 ：2-甲基-3-(1-(四氫-2H -吡喃-2-基)-1H -吡唑-3-基)環丙烷羧酸甲酯
將(2E )-3-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-3-基]丙-2-烯酸甲酯(2.7 g，11.43 mmol)、氟化三氟硼酸乙基二苯基鋶(ethyldiphenylsulfanium trifluoroborane fluoride) (10.37 g，34.31 mmol)、二異丙基胺基鋰(20 mL，373.40 mmol)於二氯甲烷(30 mL)及乙二醇二甲醚(150 mL)中之混合物在室溫下攪拌5小時。隨後將反應藉由水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(4/6)溶離來純化，得到呈黃色油狀之2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-3-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(1.5 g，5.66 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 265步驟 4 ：2-甲基-3-(1-(四氫-2H -吡喃-2-基)-1H -吡唑-3-基)環丙烷羧酸
將2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-3-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(1.45 g，5.49 mmol)、LiOH (659 mg，27.52 mmol)於四氫呋喃(15 mL)及水(15 mL)中之混合物在室溫下攪拌12小時。將所得混合物用乙酸乙酯洗滌。用氯化氫(1 mol/L)將水相調整至pH 3。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色固體狀之2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-3-基]環丙烷-1-羧酸(1.3 g，5.18 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 251步驟 5 ：N -(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(四氫-2H -吡喃-2-基)-1H -吡唑-3-基)環丙烷羧醯胺
將8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(1.5 g，5.21 mmol)、2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-3-基]環丙烷-1-羧酸(1.3 g，5.19 mmol)、POCl3 (1.6 g，10.44 mmol)、吡啶(5 mL，62.12 mmol)於二氯甲烷(30 mL)中之混合物在室溫下攪拌30分鐘。隨後將反應藉由水淬滅。將所得溶液用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(2/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之(1S ,3S )-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-3-基]環丙烷-1-羧醯胺(1.26 g，2.42 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 520。步驟 6 ：7-氟-3-(2-甲基-3-(1-(四氫-2H -吡喃-2-基)-1H -吡唑-3基)環丙烷羧醯胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
將N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-3-基]環丙烷-1-羧醯胺(1.3 g，2.50 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(8.79 g，75.05 mmol)、BrettPhos (269 mg，0.50 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(518 mg，0.50 mmol、碳酸銫(3.27 g，10.02 mmol)於1,4-二噁烷(160 mL)中之混合物在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(9/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -(7-氟-3-[[2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-3-基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(480 mg，0.80 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 601。步驟 7 ：(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H -吡唑-5-基)環丙烷羧醯胺(假定)、(1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H -吡唑-5-基)環丙烷羧醯胺(假定)、(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H -吡唑-5-基)環丙烷羧醯胺(假定)及(1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1H -吡唑-5-基)環丙烷羧醯胺(假定)
將N -(7-氟-3-[[2-甲基-3-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-3-基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(480 mg，0.80 mmol)、甲醇(2 mL，49.40 mmol)於HCl/二噁烷(8 mL)中之混合物在室溫下攪拌10 h。將所得溶液在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水:ACN=30%至40%，7 min內)純化，得到混合物(150 mg，0.36 mmol)。將混合物藉由掌性HPLC分離，得到四種異構物(各異構物之環丙烷立體化學：吡唑與醯胺成反式 ；任意指定之甲基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物332：(16.7 mg，0.040 mmol)。滯留時間：2.289 min (修復掌性IC.0.46*10cm；5 μm；MtBE(0.1%DEA):IPA=70:30；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 417.3；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 12.73-12.49 (m, 1H), 10.82-10.77 (m, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.52 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.61-7.35 (m, 2H), 6.96 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.32 (s, 2H), 6.06-5.97 (m, 1H), 2.42-2.29 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.73 (s, 1H), 1.29 (d,J = 6.1 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物331：(36.7 mg，0.088 mmol)。滯留時間：2.917 min (修復掌性IC.0.46*10cm；5 μm；MtBE(0.1%DEA):IPA=70:30；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 417.2；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 12.77-12.59 (m, 1H), 10.82 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.66-7.40 (m, 2H), 6.94 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.32 (s, 2H), 6.14-6.01 (m, 1H), 2.49-2.24 (m, 3H), 2.22 (s, 2H), 1.70-1.64 (m, 1H), 1.1-0.9 (m, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物330：(17.8 mg，0.043 mmol)。滯留時間：3.720 min (修復掌性IC.0.46*10cm；5 μm；MtBE(0.1%DEA):IPA=70:30；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 417.2；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.73-12.49 (m, 1H), 10.82-10.77 (m, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.52 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.61-7.35 (m, 2H), 7.09-6.82 (m, 1H), 6.32 (s, 2H), 6.15-5.72 (m, 1H), 2.43-2.32 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.77-1.69 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.0 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物329：(37.4 mg，0.090 mmol)。滯留時間：6.054 min (修復掌性IC.0.46*10cm；5 μm；MtBE(0.1%DEA):IPA=70:30；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 417.2；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 12.77-12.58 (m, 1H), 10.82 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.65-7.37 (m, 2H), 6.94 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.32-6.02 (m, 3H), 2.48-2.30 (s, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.66 (s, 1H), 1.02 (d,J = 6.5 Hz, 3H)。 實例213： (1S,2S)-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-5-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物335)及 (1R,2R)-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H-咪唑-5-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物334) 步驟 1 ：(2E)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]丙-2-烯酸乙酯
將4-碘-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑(7.41 g，16.98 mmol)、(2E)-3-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)丙-2-烯酸乙酯(9.60 g，42.46 mmol)、肆(三苯基膦)鈀(1.96 g，1.69 mmol)、磷酸鉀(10.82 g，50.97 mmol)於1,4-二噁烷(100 mL)及水(20 mL)中之混合物在100℃攪拌6 h。將反應物在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用乙酸乙酯/石油醚(20/80)純化，得到呈淡黃色固體狀之(2E)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]丙-2-烯酸乙酯(2 g，4.90 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =409。步驟 2 ：反式-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸乙酯
將S,S -二甲基甲烷亞磺醯碘(3.02 g，13.72 mmol)及t-BuOK (1.54 g，13.72 mmol)於二甲亞碸(20 mL)中之混合物在25℃攪拌30 min。添加(2E)-3-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]丙-2-烯酸乙酯(1.4 g，3.42 mmol)。將所得溶液在25℃下15 h。將所得混合物用水稀釋，且隨後用乙酸乙酯萃取。將有機層合併且用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(20/1)純化，得到呈黃色油狀之反式-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸甲酯(360 mg，0.85 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =423。步驟 3 ：反式-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸
將反式-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸乙酯(600 mg，1.42 mmol)及LiOH (170 mg，7.09 mmol)於四氫呋喃(10 mL)及水(10 mL)中之混合物在室溫下攪拌12 h。用氯化氫將反應混合物調整至pH 4至5。將所得溶液用二氯甲烷萃取且用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈白色固體狀之反式-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸(460 mg，1.17 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =395。步驟 4 ：反式-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧醯胺
在0℃下向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(364 mg，1.26 mmol)、反式-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧酸(500 mg，1.26 mmol)於二氯甲烷(20 mL)及吡啶(3 mL)中之溶液中添加氧氯化磷(290 mg，1.89 mmol)。將混合物在0℃攪拌30 min。將反應物在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)純化，得到呈白色固體狀之反式-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧醯胺(300 mg，0.45 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =664。步驟 5 ：反式-N -[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷]醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯
將反式-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷-1-羧醯胺(600 mg，0.90 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(2.1 g，17.92 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(187 mg，0.18 mmol)、BrettPhos (193 mg，0.36 mmol)及碳酸銫(1.17 g，3.59 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物在90℃攪拌5 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之反式-N -[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷]醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(300 mg，0.40 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =745。步驟 6 ：(1S ,2S )-N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-5-基)環丙烷-1-羧醯胺及(1R ,2R )-N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1H-咪唑-5-基)環丙烷-1-羧醯胺
將反式-N -[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]環丙烷]醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，0.26 mmol)於三氟乙酸(5 mL)中之溶液在室溫下攪拌12 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.1%碳酸氫鈉於水中)純化，得到呈黃色固體狀之外消旋產物(40 mg，0.09 mmol)。將外消旋物藉由掌性HPLC分離，得到兩種異構物： (各異構物之環丙烷立體化學：咪唑與醯胺成反式 ；任意指定之所有絕對立體化學)
化合物335：滯留時間：3.38 min(CHIRALPAK ID-3，0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30；1 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 403；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.27(s, 1H), 8.45 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.42 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 6.98 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 2.51-2.46 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.19-2.18(m, 1H), 1.57-1.52 (m, 1H), 1.41-1.38 (m, 1H)。
化合物334：滯留時間：5.68 min(CHIRALPAK ID-3，0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30；1 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 403；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.27(s, 1H), 8.45 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.42 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 6.98 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 2.51-2.46 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.19-2.18(m, 1H), 1.57-1.52 (m, 1H), 1.41-1.38 (m, 1H) 實例214： (1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物340)、(1S ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物339)、(1R ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物338)及(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物337) 步驟 1 ：1-(2,2-二氟乙基)-4-碘-1H -吡唑
將4-碘-1H -吡唑(3 g，15.47 mmol)、2-溴-1,1-二氟乙烷(2.7 g，18.63 mmol)、碳酸鉀(4.3 g，31.11 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(30 mL)中之混合物在室溫下攪拌12小時。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物施加至具有乙酸乙酯/石油醚(20/80)之矽膠管柱，得到呈無色油狀之1-(2,2-二氟乙基)-4-碘-1H -吡唑(3.3 g，12.74 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 259。步驟 2 ：(E )-3-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)丙烯酸第三 丁酯
將1-(2,2-二氟乙基)-4-碘-1H -吡唑(3.3 g，12.79 mmol)、丙-2-烯酸第三 丁酯(4.9 g，38.23 mmol)、乙酸鈀(430 mg，1.92 mmol)、三鄰甲苯基膦(778 mg，2.56 mmol)、三乙胺(1.94 g，19.172 mmol)於N ,N -二甲基羧醯胺(30 mL)中之混合物在120℃攪拌12小時。將所得溶液用乙酸乙酯洗滌，且隨後用水洗滌。將有機層合併，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(60/40)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之(2E )-3-[1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基]丙-2-烯酸第三 丁酯(2.37 g，9.15 mmol)。LC/MS (ESI) [M+H]+ = 259。步驟 3 ：2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧酸第三 丁酯
將(2E )-3-[1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基]丙-2-烯酸第三 丁酯(2.9 g，11.23 mmol)、乙二醇二甲醚(150 mL，1.55 mol)、二異丙基胺基鋰(19.6 mL，365.93 mmol及氟化三氟硼酸乙基二苯基鋶(10.2 g，33.76 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之混合物在室溫下攪拌5小時。隨後將反應藉由水淬滅。將所得溶液用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(7/3)溶離來純化，得到呈黃色油狀之2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷-1-羧酸第三 丁酯(1.9 g，6.62 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 287步驟 4 ：2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧酸
將2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷-1-羧酸第三 丁酯(1.9 g，6.64 mmol)於三氟乙酸(10 mL)及二氯甲烷(20 mL)中之混合物在室溫下攪拌3小時。將所得混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC用以下條件(C18矽膠；CH3 CN/H2 O=5%/95%增加至CH3 CN/H2 O=40%/60%，30 min內)純化，得到呈紫色油狀之2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷-1-羧酸(1.13 g，4.89 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 231。步驟 5 ：N -(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺
將2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷-1-羧酸(1.1 g，4.78 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(1.4 g，4.87 mmol)、氧氯化磷(1.5 g，9.78 mmol)、吡啶(5 mL，62.118 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之混合物在室溫下攪拌30分鐘。隨後將反應藉由水淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(8/2)溶離來純化，得到呈白色固體狀之N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(1.48 g，2.96 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 500。步驟 6 ：3-(2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
將N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(1.4 g，2.80 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(9.85 g，84.08 mmol)、BrettPhos (302 mg，0.56 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(581 mg，0.56 mmol)、碳酸銫(3.66 g，11.23 mmol)於1,4-二噁烷(120 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(8/2)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -(3-[[2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(1.44 g，2.48 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 581步驟 7 ：(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺、(1S ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺、(1R ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺及(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺
將N -(3-[[2-[1-(2,2-二氟乙基)-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(1.4 g，2.41 mmol)、HCl/二噁烷(30 mL，354.12 mmol)於甲醇(10 mL)中之混合物在25℃攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (C18矽膠；0.5%碳酸氫鈉於水:ACN=37%至45%，7 min內)純化，得到混合物(550 mg，1.15 mmol)。將混合物藉由掌性HPLC分離，得到四種異構物(各異構物之環丙烷立體化學：吡唑與醯胺成反式 ；任意指定之甲基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物340：(46.5 mg，0.097 mmol)。滯留時間：1.65 min (Lux 5u Cellulose-3.4.6*250Mm，5 μm；MeOH(0.1%DEA)；4.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 481.2；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.72 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.52 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.45-7.34 (m, 2H), 6.95 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.50-6.13 (m, 3H), 4.55 (td,J = 15.1, 3.8 Hz, 2H), 2.31-2.22 (m, 5H), 1.66-1.51 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物339：(163.3 mg，0.34 mmol)。滯留時間：1.86 min (Lux 5u Cellulose-3.4.6*250mm，5 μm；MeOH(0.1%DEA)；4.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 481.3；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.77 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.46-7.36 (m, 2H), 6.93 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.52-6.16 (m, 3H), 4.60 (td,J = 15.2, 3.8 Hz, 2H), 2.37-2.30 (m, 1H), 2.22(s,3H), 2.15 (t,J = 4.7 Hz, 1H) 1.70-1.55 (m, 1H), 0.96 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物338：(173.9 mg，0.36 mmol)。滯留時間：2.23 min (Lux 5u Cellulose-3.4.6*250mm，5 μm；MeOH(0.1%DEA)；4.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 481.3；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.77 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.46-7.36 (m, 2H), 6.93 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.52-6.16 (m, 3H), 4.60 (td,J = 15.2, 3.8 Hz, 2H), 2.37-2.30 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.15 (t,J = 4.7 Hz, 1H) 1.69-1.56 (m, 1H), 0.96 (d, J = 6.3 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物337：(66.3 mg，0.14 mmol)。滯留時間：2.91 min (Lux 5u Cellulose-3.4.6*250mm，5 μm；MeOH(0.1%DEA)；4.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 481.3；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.71 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.52 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.45-7.34 (m, 2H), 6.95 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.51-6.13 (m, 3H), 4.55 (td,J = 15.2, 3.8 Hz, 2H), 2.31-2.15 (m, 5H), 1.66-1.52 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。 實例215： (1R,2S)-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-((二甲基胺基)甲基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物342)及 (1S,2R)-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-((二甲基胺基)甲基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物341) 步驟 1 ：3-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,4-二酮
將3-氧雜雙環[3.1.0]己烷-2,4-二酮(390 mg，3.48 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(500 mg，1.73 mmol)、4-二甲基胺基吡啶(425 mg，3.47 mmol)於二噁烷(10 mL)中之混合物120℃攪拌12 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)純化，得到呈白色固體狀之3-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,4-二酮(450 mg，1.18 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 382。步驟 2 ：順式-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(羥甲基)環丙烷-1-羧醯胺
向3-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,4-二酮(450 mg，1.17 mmol)於IPA (20 mL)及水(2 mL)中之溶液中添加NaBH4 (224 mg，5.92 mmol)。在室溫下攪拌混合物1 h。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，且將有機層合併且在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)純化，得到呈白色固體狀之順式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(羥甲基)環丙烷-1-羧醯胺(300 mg，0.78 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 386。步驟 3 ：順式-[2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺甲醯基]環丙基]甲基甲烷磺酸酯
在0℃下向順式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(羥甲基)環丙烷-1-羧醯胺(300 mg，0.77 mmol)、三乙胺(236 mg，2.33 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加甲烷磺醯氯(177 mg，1.54 mmol)。隨後將混合物在室溫下攪拌1 h。將所得混合物用水洗滌。將所得溶液在真空下濃縮，得到呈白色固體狀之順式-[2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺甲醯基]環丙基]甲基甲烷磺酸酯(300 mg，0.64 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 464。步驟 4 ：順式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷-1-羧醯胺
將順式-[2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺甲醯基]環丙基]甲基甲烷磺酸酯(300 mg，0.64 mmol)、二甲基胺(292 mg，6.47mmol)於四氫呋喃(5 mL)中之混合物在室溫下攪拌12 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(3/1)純化，得到呈白色固體狀之順式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷-1-羧醯胺(250 mg，0.60 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 413。步驟 5 ：順式-N-(3-[[2-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
以類似於對於實例135 (化合物36)所述之方式的方式使用順式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷-1-羧醯胺製備標題化合物。LCMS (ESI) [M+H]+ =494。步驟 6 ：(1R,2S)-N-[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷-1-羧醯胺及(1S,2R)-N-[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷-1-羧醯胺
以類似於對於實例135 (化合物36)所述之方式的方式使用順式-N-(3-[[2-[(二甲基胺基)甲基]環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯製備標題化合物(外消旋的)。將外消旋物藉由掌性HPLC分離，得到兩種異構物(各異構物之環丙烷立體化學：二甲基胺基甲基與醯胺成反式 ；任意指定之絕對立體化學)：
化合物342：滯留時間：1.44 min(Lux Cellulose-4，0.46*5cm；3 μm；Hex(8mMNH3):EtOH=50:50；1 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 394；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.31(s, 1H), 8.48 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 8.41(s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.45 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 7.00 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 3.05-3.03 (m, 2H), 2.57 (s, 6H), 2.31 (s, 3H), 2.21-2.15 (m, 1H), 1.62-1.56 (m, 1H), 1.30-1.25 (m, 1H), 1.18-1.10 (m,1H)。
化合物341：滯留時間：2.87 min(Lux Cellulose-4，0.46*5cm；3 μm；Hex(8mMNH3):EtOH=50:50；1 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 394；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.31(s, 1H), 8.48 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 8.41(s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.45 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 7.00 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 3.05-3.03 (m, 2H), 2.57 (s, 6H), 2.31 (s, 3H), 2.21-2.15 (m, 1H), 1.62-1.56 (m, 1H), 1.30-1.25 (m, 1H), 1.18-1.10 (m,1H)。 實例216： (1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羥基氮雜環丁-1-基)乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺(化合物381)、(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羥基氮雜環丁-1-基)乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺(化合物380)、(1S ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羥基氮雜環丁-1-基)乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺(化合物379)及(1R ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羥基氮雜環丁-1-基)乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺(化合物382) 步驟 1 ：2-(4-(2-(8-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺甲醯基)-3-甲基環丙基)-1H-吡唑-1-基)乙基甲烷磺酸酯
將N -(7-氟-3-[[2-[1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(670 mg，1.20 mmol)、三乙胺(604 mg，5.97 mmol)、甲烷磺醯氯(273 mg，2.38 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之混合物在室溫下攪拌1小時。將所得溶液用二氯甲烷稀釋。將所得混合物用水洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色固體狀之2-(4-((2-(8-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺甲醯基)-3-甲基環丙基)-1H-吡唑-1-基)乙基甲烷磺酸酯(800 mg，1.25 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 639。步驟 2 ：7-氟-3-(2-(1-(2-(3-羥基氮雜環丁-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
將2-(4-(2-(8-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺甲醯基)-3-甲基環丙基)-1H-吡唑-1-基)乙基甲烷磺酸酯(700 mg，1.10 mmol)、氮雜環丁-3-醇(320 mg，4.38 mmol)、三乙胺(332 mg，3.28 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(10 mL)中之混合物在60℃攪拌12小時。將所得溶液用乙酸乙酯洗滌，且隨後用水洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(4/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之7-氟-3-(2-(1-(2-(3-羥基氮雜環丁-1-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯(180 mg，0.29 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 616。步驟 3 ：(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羥基氮雜環丁-1-基)乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺、(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羥基氮雜環丁-1-基)乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺、(1S ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羥基氮雜環丁-1-基)乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺及(1R ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-(3-羥基氮雜環丁-1-基)乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺
將N -(7-氟-3-[[2-[1-[2-(3-羥基氮雜環丁-1-基)乙基]-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(180 mg，0.29 mmol)於甲醇(3 mL)及HCl/二噁烷(10 mL，6 mol/L)中之混合物在室溫下攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (C18矽膠；0.5% NH4 HCO3 於水: ACN=2%至50%，8 min內)純化，得到混合物。將混合物藉由掌性HPLC分離，得到四種異構物(各異構物之環丙烷立體化學：吡唑與醯胺成反式 ；任意指定之甲基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物 381 ：(11.1 mg，0.022 mmol)。滯留時間：2.342 min (CHIRALPAK IC-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=80:20；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 516.4；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.71 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.40 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.95 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 5.24 (d,J = 6.6 Hz, 1H), 4.21-4.05 (m, 1H), 4.01-3.83 (m, 2H), 3.51-3.38 (m, 2H), 2.78-2.69 (m, 2H), 2.68-2.60 (m, 2H), 2.28-2.19 (m, 4H), 2.18-2.09 (m, 1H), 1.67-1.51 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 380 ：(11.7 mg，0.023 mmol)。滯留時間：3.412 min (CHIRALPAK IC-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=80:20；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 516.4；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.71 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.40 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.95 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 5.31-5.11 (m, 1H), 4.19-4.01 (m, 1H), 3.95 (t,J = 6.2 Hz, 2H), 3.50-3.39 (m, 2H), 2.76-2.61 (m, 4H), 2.22 (s, 4H), 2.19-2.12 (m, 1H), 1.67-1.51 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 379 ：(22.0 mg，0.043 mmol)。滯留時間：9.180 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=75:25；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 516.4；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.76 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.40 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.93 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.31 (s, 2H), 5.23 (d,J = 6.6 Hz, 1H), 4.19-4.08 (m, 1H), 4.01 (t,J = 6.2 Hz, 2H), 3.49-3.37 (m, 2H), 2.74 (t,J = 6.2 Hz, 2H), 2.69-2.61 (m, 2H), 2.37-2.24 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.12 (t,J = 4.7 Hz, 1H), 1.67-1.53 (m, 1H), 0.96 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 382 ：(18.5 mg，0.036 mmol)。滯留時間：11.776 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=75:25；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 516.3；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.75 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.40 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.93 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.31 (s, 2H), 5.23 (d,J = 6.6 Hz, 1H), 4.19-4.08 (m, 1H), 4.01 (t,J = 6.2 Hz, 2H), 3.46-3.37 (m, 2H), 2.75 (t,J = 6.2 Hz, 2H), 2.69-2.61 (m, 2H), 2.34-2.27 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.12 (t,J = 4.7 Hz, 1H), 1.67-1.53 (m, 1H), 0.96 (d, J = 6.3 Hz, 3H)。 實例217： 2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-6-甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物230) 步驟 1 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(100 mg，0.35 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之溶液中添加2-溴-6-甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(110 mg，0.45 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (72 mg，0.07 mmol)、XantPhos (80 mg，0.14 mmol)及碳酸銫(290 mg，0.89 mmol)。將所得混合物在110℃攪拌2 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(15/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(45 mg，29%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 451.2。步驟 2 ：N-[7-氟-3-([6-甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯
向2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(500 mg，1.11 mmol)於1,4-二噁烷(45 mL)中之混合物中添加胺基甲酸第三丁酯(3.25 g，27.74 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (175 mg，0.17 mmol)、BrettPhos (125 mg，0.23 mmol)及碳酸銫(1.8 g，5.525 mmol)。將所得混合物在90℃攪拌2 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N-[7-氟-3-([6-甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(350 mg，59%)。LCMS45 (ESI) [M+H]+ = 532.3。步驟 3 ：2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N-[7-氟-3-([6-甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(350 mg，0.66 mmol)及二氯甲烷(5 mL)於三氟乙酸(10 mL)中之溶液在室溫下攪拌1.5 h。將所得混合物在真空下濃縮。用甲醇中之NH3 (7 M)將溶液之pH值調整至10。將粗產物直接藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD管柱19*15mm 5um；10 mmol NH4 HCO3 於水: ACN (20%至40%，8 min內))純化，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(90 mg，32%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 432.3；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.27 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.39 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.78(d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.13 (s, 2H), 5.98 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 3.84-3.81 (m, 2H), 3.05-3.03 (m, 2H), 2.95 (s, 3H), 2.22 (s, 3H)。 實例218：N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氮雜雙環[2.1.1]己烷-2-羧醯胺(化合物336) 步驟 1 ：8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺基甲酸4-硝基苯酯
將8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(500 mg，1.74 mmol)、吡啶(1 mL，12.424 mmol)、氯甲酸4-硝基苯酯(1.05 g，5.21 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之混合物在室溫下攪拌2小時。將固體藉由過濾收集，得到呈白色固體狀之N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基甲酸4-硝基苯酯(800 mg，1.77 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 453。步驟 2 ：N -(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氮雜-雙環[2.1.1]己烷-2-羧醯胺
將2-氮雜雙環[2.1.1]己烷(658 mg，7.92 mmol)、吡啶(2 mL)、N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基甲酸4-硝基苯酯(500 mg，1.10 mmol)於1-甲基-2-吡咯啶酮(10 mL)中之混合物在30℃攪拌1小時。將所得溶液用乙酸乙酯洗滌，且隨後用水洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-氮雜雙環[2.1.1]己烷-2-羧醯胺(400 mg，1.01 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 397步驟 3 ：3-(2-氮雜-雙環[2.1.1]己烷-2-羧醯胺基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
將N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-氮雜雙環[2.1.1]己烷-2-羧醯胺(900 mg，2.27 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(7.98 g，68.12 mmol)、BrettPhos (244 mg，0.46 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (470 mg，0.45 mmol)及碳酸銫(2.96 g，9.09 mmol)於1,4-二噁烷(100 mL)中之混合物在90℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈紫色固體狀之N -[3-[([2-氮雜雙環[2.1.1]己-2-基]羰基)胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(110 mg，0.23 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 478。步驟 4 ：N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-氮雜-雙環[2.1.1]己烷-2-羧醯胺
將N -[3-[([2-氮雜雙環[2.1.1]己-2-基]羰基)胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.21 mmol)於甲醇(2 mL)及HCl/二噁烷(10 mL，6 mol/L)中之混合物在室溫下攪拌3小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150 mm 5 um；水(10 mmol/L NH4 HCO3 ): CH3 CN= 0%至45% B，14 min內)純化，得到呈黃色固體狀之N -[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-氮雜雙環[2.1.1]己烷-2-羧醯胺(45.9 mg，0.12 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 378.2；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.39 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.53 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.43 (d,J = 4.7 Hz, 1H), 6.88 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 6.26 (s, 2H), 4.65 (d,J = 7.0 Hz, 1H), 3.46-3.39 (m, 2H), 2.88 (s, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.94 (s, 2H), 1.37-1.28 (m, 2H)。 實例219： (1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-嗎啉基乙基)-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物349)、 (1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-嗎啉基乙基)-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物348)、 (1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-嗎啉基乙基)-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物347)及(1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-嗎啉基乙基)-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物346) 步驟 1 ：2-(4-(2-(8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基胺甲醯基)-3-甲基環丙基)-1H -吡唑-1-基)乙基甲烷磺酸酯
將N -(7-氟-3-[[2-[1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，0.36 mmol)、三乙胺(72 mg，0.71 mmol)、甲烷磺醯氯(61 mg，0.53 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之混合物在室溫下攪拌30分鐘。將所得混合物用二氯甲烷稀釋，且隨後用水洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色固體狀之N -(7-氟-3-[[2-[1-[2-(甲烷磺醯基氧基)乙基]-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(240 mg，0.38 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 639。步驟 2 ：7-氟-3-(2-甲基-3-(1-(2-嗎啉基乙基)-1H -吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
將N -(7-氟-3-[[2-[1-[2-(甲烷磺醯基氧基)乙基]-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(600 mg，0.94 mmol)、嗎啉(409 mg，4.70 mmol)及碳酸鉀(260 mg，1.88 mmol)於N,N- 二甲基羧醯胺(6 mL)中之混合物在70℃攪拌12小時。將所得溶液用水稀釋，且隨後用乙酸乙酯萃取。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(9/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -(7-氟-3-[[2-甲基-3-[1-[2-(嗎啉-4-基)乙基]-1H -吡唑-4-基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(288 mg，0.46 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 630。步驟 3 ：(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-嗎啉基乙基)-1H -吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺、(1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-嗎啉基乙基)-1H -吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺、(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-嗎啉基乙基)-1H -吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺及(1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-(2-嗎啉基乙基)-1H -吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺
將N -(7-氟-3-[[2-甲基-3-[1-[2-(嗎啉-4-基)乙基]-1H -吡唑-4-基]環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(280 mg，0.45 mmol)、甲醇(4 mL)及HCl/1,4-二噁烷(10 mL，6 mol/L)之混合物在室溫下攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (C18矽膠；0.5% NH4 HCO3 於水: ACN=30%至58%，8 min內)純化，得到混合物。將混合物藉由掌性HPLC分離，得到四種異構物(異構物之環丙烷立體化學：吡唑與醯胺成反式 ；任意指定之甲基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物 349 ：(19.1 mg，0.036 mmol)。滯留時間：3.550 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=50:50；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 530.4；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.71 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.40 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.95 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 4.14 (t,J = 6.7 Hz, 2H), 3.56 (t,J = 4.6 Hz, 4H), 2.66 (t,J = 4.0 Hz, 2H), 2.39 (s, 4H), 2.27-2.14 (m, 5H), 1.64-1.48 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.1 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 348 ：(29.2 mg，0.055 mmol)。滯留時間：2.801 min (CHIRALPAK IC-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=80:20；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 530.4；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.76 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.40 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.93 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 4.18 (t,J = 6.6 Hz, 2H), 3.55 (t,J = 4.6 Hz, 4H), 2.68 (t,J = 6.6 Hz, 2H), 2.41-2.36 (m, 4H), 2.35-2.29 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.12 (t,J = 4.7 Hz, 1H), 1.69-2.51 (m, 1H), 0.96 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 347 ：(16.7 mg，0.032 mmol)。滯留時間：3.608 min (CHIRALPAK IC-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=80:20；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 530.4；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.71 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.44-7.37 (m, 1H), 7.26 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 6.95 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 4.14 (t,J = 6.7 Hz, 2H), 3.56 (t,J = 4.6 Hz, 4H), 2.66 (t,J = 6.6 Hz, 2H), 2.43-2.36 (m, 4H), 2.27-2.13 (m, 5H), 1.66-1.48 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.1 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 346 ：(33.1 mg，0.063 mmol)。滯留時間：6.022 min (CHIRALPAK IE-3.0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=50:50；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 530.4；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.76 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.40 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.93 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.31 (s, 2H), 4.19 (t,J = 6.6 Hz, 2H), 3.55 (t,J = 4.5 Hz, 4H), 2.68 (s, 2H), 2.38 (s, 4H), 2.34-2.28 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.12 (t,J = 4.7 Hz, 1H), 1.67-1.53 (m, 1H), 0.96 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。 實例220： (1S ,2R ,3S )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物351)、(1R ,2R ,3R)-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物353)、(1S ,2S ,3S )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物352)及(1R ,2S ,3R )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物350) 步驟 1 ：5-溴-4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)吡啶
向2,5-二溴-4-甲基吡啶(584 mg，2.32 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之溶液中添加2-(三丁基錫烷基)-1,3-噁唑(1.00 g，2.79 mmol)及肆(三苯基膦)鈀(268.95 mg，0.23 mmol)。將反應物在90℃攪拌16小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(1/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之5-溴-4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)吡啶(470 mg，84%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 439.1。步驟 2 ：4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶
向5-溴-4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)吡啶(470 mg，1.96 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之溶液中添加4,4,5,5-四甲基-2-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-1,3,2-二氧雜硼雜戊環(4.99 g，19.65 mmol)、[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (143.85 mg，0.19 mmol)及乙酸鉀(482.36 mg，4.91 mmol)。將反應在90℃攪拌16小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(1/4)溶離來純化，得到呈黃色油狀之4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(330 mg，59%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 287.1。步驟 3 ：N -(8-氯-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
向N -(8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(380 mg，0.78 mmol)於1,4-二噁烷(16 mL)中之溶液中添加4-甲基-2-(1,3-噁唑-2-基)-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶(448.66 mg，1.56 mmol)、碳酸鉀(325.06 mg，2.35 mmol)、X-Phos (37.37 mg，0.07 mmol)、XPhos-PdCl-第2 G(59.57 mg，0.07 mmol)及水(3.2 mL)。將反應物在90℃攪拌2 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(25/1)溶離來純化，得到呈橙色油狀之反式-N -(8-氯-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(210 mg，52%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 517.2。步驟 4 ：(7-氟-3-(2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺基)-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
向N -(8-氯-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(210 mg，0.40 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之溶液中添加胺基甲酸第三丁酯(1.19 g，10.15 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (63.07 mg，0.06 mmol)、BrettPhos (43.61 mg，0.08 mmol)及碳酸銫(661.78 mg，2.03 mmol)。將所得混合物在90℃攪拌2 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(25/1)溶離來純化，得到呈橙色油狀之反式-(7-氟-3-(2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺基)-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(140 mg，58%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 598.3。步驟 5 ：(1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺、(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺、(1S ,2S ,3S )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺及(1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
向反式-(7-氟-3-(2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺基)-6-(4-甲基-6-(噁唑-2-基)吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(310 mg，0.51 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(15 mL)。將所得溶液在室溫下攪拌1 h。用甲醇中之氨(7 mol/L)將溶液之pH值調整至8。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之混合物(120 mg，46%)。將混合物藉由掌性HPLC分離，得到四種異構物(各異構物之環丙烷立體化學：吡唑與醯胺成反式 ；任意指定之甲基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物 351 ：(5.7 mg，5%)。滯留時間：2.261 (XBridge Shield RP18 OBD管柱，5 μm，19*150mm；水(0.05%NH3 H2 O)及ACN (25.0% ACN至50.0%，7 min內)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 498.3；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.73 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.40-8.30 (m, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.55-7.45 (m, 2H), 7.25 (d,J = 0.9 Hz, 1H), 7.02 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.35 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.22 (dd,J = 8.9, 4.8 Hz, 1H), 2.17 - 2.11 (m, 1H), 1.57 (dt,J = 8.9, 6.3 Hz, 1H), 1.28 (d,J = 6.1 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 353 ：(5.1 mg，4%)。滯留時間：2.691 (XBridge Shield RP18 OBD管柱，5 μm，19*150mm；水(0.05%NH3 H2 O)及ACN (25.0% ACN至50.0%，7 min內)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 498.3；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.73 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.40-8.30 (m, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.58-7.47 (m, 2H), 7.25 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 7.02 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.36 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.22 (dd,J = 8.9, 4.8 Hz, 1H), 2.18- 2.09 (m, 1H), 1.57 (dp,J = 8.7, 6.2 Hz, 1H), 1.28 (d,J = 6.1 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 352 ：(26.5 mg，22%)；滯留時間：7.975 (XBridge Shield RP18 OBD管柱，5 μm，19*150mm；水(0.05%NH3 H2 O)及ACN (25.0% ACN至50.0%，7 min內)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 498.3；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.77 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.39-8.30 (m, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.58-7.47 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.00 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.36 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.32-2.28 (m, 1H), 2.12 (t,J = 4.7 Hz, 1H), 1.60 (ddd,J = 9.1, 6.4, 4.8 Hz, 1H), 0.96 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 350 ：(22.9 mg，19%)。滯留時間：9.196 (XBridge Shield RP18 OBD管柱，5 μm，19*150mm；水(0.05%NH3 H2 O)及ACN (25.0% ACN至50.0%，7 min內)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 498.3；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.78 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.39-8.31 (m, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.59- 7.47 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.00 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.36 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.30 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 2.12 (t,J = 4.7 Hz, 1H), 1.66-1.54 (m, 1H), 0.96 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。 實例221： 2'-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-6'-甲基-5',6'-二氫螺[環丙烷-1,4'-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯]-7'(8'H )-酮(化合物228) 步驟 1 ：8'-[[6-(4-胺基吡啶-3-基)-8-氯-7-氟異喹啉-3-基]胺基]-3'-甲基-2',3',4',5'-四氫螺[環丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯]-4'-酮
8'-溴-3'-甲基-2',3',4',5'-四氫螺[環丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯]-4'-酮(200 mg，0.74 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(225 mg，0.78 mmol)、第3代t-BuBrettPhos預催化劑(266 mg，0.31 mmol)、t-BuBrettPhos (151 mg，0.32 mmol)、碳酸銫(1.27 g，3.89 mmol)於1,4-二噁烷(12 mL)中之混合物。將所得混合物在120℃攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之8'-[[6-(4-胺基吡啶-3-基)-8-氯-7-氟異喹啉-3-基]胺基]-3'-甲基-2',3',4',5'-四氫螺[環丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯]-4'-酮(110 mg，31%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 477。步驟 2 ：N -[7-氟-3-([3'-甲基-4'-側氧基-2',3',4',5'-四氫螺[環丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯]-8'-基]胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯
將8'-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-3'-甲基-2',3',4',5'-四氫螺[環丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯]-4'-酮(110 mg，0.23 mmol)、胺基甲酸第三 丁酯(668 mg，5.70 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (48 mg，0.046 mmol)、碳酸銫(375 mg，1.15 mmol)、BrettPhos (37 mg，0.069 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在90℃攪拌12 h。將混合物過濾且將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之N -[7-氟-3-([3'-甲基-4'-側氧基-2',3',4',5'-四氫螺[環丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯]-8'-基]胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(80 mg，62%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 558。步驟 3 ：8'-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-3'-甲基-2',3',4',5'-四氫螺[環丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯]-4'-酮
將N -[7-氟-3-([3'-甲基-4'-側氧基-2',3',4',5'-四氫螺[環丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯]-8'-基]胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(60 mg，0.11 mmol)、氯化氫(2 mL)於二氯甲烷(2 mL)及甲醇(2 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC (Kinetex EVO C18管柱，30*150，5um；水(10 mmol/L NH4 HCO3 )及ACN (10%至70%，4.5 min內))純化，得到呈黃色固體狀之8'-[[8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-3'-甲基-2',3',4',5'-四氫螺[環丙烷-1,1'-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯]-4'-酮(2.9 mg，6%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 458；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.27 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.51 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.39 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.79 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 5.61 (s, 1H), 5.06 (s, 2H), 3.73 (s, 2H), 2.99 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.24-1.18 (m, 2H), 0.96-094 (m, 2H)。 實例222： (1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物357)、 (1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物358)、 (1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物359)及 (1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物360) 步驟 1 ：N -(8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺
將8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-胺(280.6 mg，0.87 mmol)、2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧酸(420 mg，2.33 mmol)、氧氯化磷(298.4 mg，1.95 mmol)、吡啶(5 mL)、二氯甲烷(15 mL)之混合物在0℃攪拌5分鐘。將所得溶液在室溫下攪拌30分鐘。將反應物藉由水淬滅。將所得溶液用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用石油醚/乙酸乙酯(4/6)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之(1S ,3S )-N -(8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺(1.1 g，2.27 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 485。步驟 2 ：N -[(第三 丁氧基)羰基]-N -[5-(8-氯-7-氟-3-[[(1S ,2R ,3S )-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -(8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(400 mg，0.83 mmol)、N -[(第三 丁氧基)羰基]-N -[4-甲基-5-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)吡啶-3-基]胺基甲酸第三 丁酯(720 mg，1.66 mmol)、肆(三苯基膦)鈀(190 mg，0.16 mmol)、磷酸鉀(520 mg，2.45 mmol)及水(1 mL)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在100℃攪拌6小時。將反應物冷卻至室溫，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用石油醚/乙酸乙酯(1/9)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[(第三 丁氧基)羰基]-N -[5-(8-氯-7-氟-3-[[2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]胺基甲酸第三 丁酯(545 mg，0.82 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 665。步驟 3 ：N -[6-(5-[雙[(第三 丁氧基)羰基]胺基]-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-3-[[(1S ,2R ,3S )-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -[(第三 丁氧基)羰基]-N -[5-(8-氯-7-氟-3-[[2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]異喹啉-6-基)-4-甲基吡啶-3-基]胺基甲酸第三 丁酯(1.15 g，1.73 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(5.06 g，43.19 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (356.5 mg，0.34 mmol)、Brettphos (373.8 mg，0.70 mmol)及碳酸銫(2.25 g，6.91 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)中之混合物在110℃攪拌3小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(30/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -[6-(5-[雙[(第三 丁氧基)羰基]胺基]-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟-3-[[2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷]醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(1.0 g，1.34 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 746。步驟 4 ：(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺、(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺、(1S ,2R ,3S )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺及(1R ,2S ,3R )-N -(8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷羧醯胺
將N -[8-胺基-6-(5-胺基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氟異喹啉-3-基]-2-甲基-3-(1-甲基-1H -吡唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(400 mg，0.90 mmol)於4 M HCl於1,4-二噁烷(50 mL)中之混合物在室溫下攪拌2小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (C18矽膠；0.5% NH4 HCO3 於水:ACN=5%至50%，9 min內)純化，得到異構物混合物。將混合物藉由掌性HPLC分離，得到四種異構物(異構物之環丙烷立體化學：吡唑與醯胺成反式 ；任意指定之甲基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物 357 ：(11.4 mg，0.026 mmol)。滯留時間：2.794 min (Lux 3μ Cellulose-3.100*4.6mm；MeOH(20mMNH3 )；4.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 446.3；1 H NMR (300 Mhz, 甲醇-d 4 )δ 9.30 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.99 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 2.34 (t,J = 5.7 Hz, 1H), 2.23-2.1 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.77-1.52 (m, 1H), 1.37 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 358 ：(101.8 mg，0.23 mmol)。滯留時間：3.089 min (Lux 3μ Cellulose-3.100*4.6mm；MeOH(20mMNH3 )；4.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 446.3；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.74 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.85 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.26 (s, 2H), 5.26 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 2.33-2.25 (m, 1H), 2.11 (t,J = 4.7 Hz, 1H), 1.92 (d,J = 1.5 Hz, 3H), 1.66-1.53 (m, 1H), 0.96 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 359 ：(91.3 mg，0.21 mmol)。滯留時間：2.505 min (CHIRALPAK IC-3.100*3Mm，3 μm；MeOH:ACN=1:1(10mMNH3 )；2.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 446.3；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.74 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.85 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.25 (s, 2H), 5.26 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 2.33-2.25 (m, 1H), 2.11 (t,J = 4.7 Hz, 1H), 1.92 (d,J = 1.6 Hz, 3H), 1.66-1.53 (m, 1H), 0.96 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 360 ：(17.2 mg，0.039 mmol)。滯留時間：2.084 min (CHIRALPAK IC-3.100*3mm，3 μm；MeOH:ACN=1:1(10mMNH3 )；2.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 446.3；1 H NMR (300 MHz, Methanol-d 4 )δ 9.30 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.99 (d,J = 6.2 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 2.34 (t,J = 5.6 Hz, 1H), 2.21-2.12 (m, 1H), 2.08 (d,J = 1.5 Hz, 3H), 1.71-1.52 (m, 1H), 1.37 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。 實例223： (S )-2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-4,6-二甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物361)及 (R )-2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-4,6-二甲基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7(8H)-酮(化合物362) 步驟 1 ：2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-甲基-4-亞甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將2-溴-6-甲基-4-亞甲基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(250 mg，0.98 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(282 mg，0.98 mmol)、第3代t-BuBrettPhos預催化劑(335 mg，0.39 mmol)、t-BuBrettPhos (189 mg，0.39 mmol)、碳酸銫(1.6 g，4.91 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之溶液在130℃攪拌2 h。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-甲基-4-亞甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(200 mg，44%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 463。步驟 2 ：N -[7-氟-3-([6-甲基-4-亞甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯
將2-[[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]胺基]-6-甲基-4-亞甲基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-7-酮(180 mg，0.39 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.14 g，9.73 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (81 mg，0.078 mmol)、碳酸銫(636 mg，1.95 mmol)、BrettPhos (63 mg，0.12 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之混合物在90℃攪拌3 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈淡黃色固體狀之N -[7-氟-3-([6-甲基-4-亞甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(160 mg，76%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 544。步驟 3 ：N -[3-([4,6-二甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯
將N -[7-氟-3-([6-甲基-4-亞甲基-7-側氧基-4H,5H,6H,7H,8H-吡唑并[1,5-d][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(140 mg，0.26 mmol)、鈀/碳(200 mg)於甲醇(10 mL)中之混合物在室溫下在氫下攪拌1 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈淡黃色固體狀之N-[3-([4,6-二甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(134 mg，95%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 546。步驟 4 ：(S )-2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-4,6-二甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮及(R )-2-((8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺基)-4,6-二甲基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮
將N -[3-([4,6-二甲基-7-側氧基-4H ,5H ,6H ,7H ,8H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基]胺基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(150 mg，0.28 mmol)、氯化氫(2 mL)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。將所得溶液在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC [Kinetex EVO C18管柱，30*150，5um；水(10MMOL/L NH4 HCO3 )及ACN (25%至42%，7 min內)]純化，得到呈黃色固體狀之外消旋產物(50 mg，41%)。將外消旋產物藉由製備型SFC純化，得到單一鏡像異構物：
呈黃色固體狀之化合物 362 ：(5.7 mg，11%)。滯留時間：0.867 min，CHIRALCEL OJ-3，4.6*50mm，3 μm；CO2 /甲醇= (50%)/(0.1%DEA，50%)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 446；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.28 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 8.50 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.39 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.78 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 6.04 (s, 1H), 5.13-4.81 (m, 2H), 3.99-3.51 (m, 2H), 3.32-3.35(m, 1H) 2.97 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.26 (d,J = 7.0 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物 361 ：(5.8 mg，12%)。滯留時間：1.268 min，CHIRALCEL OJ-3，4.6*50mm，3 μm；CO2 /甲醇= (50%)/(0.1%DEA，50%)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 446。1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.28 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 8.50 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.39 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.78 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 6.04 (s, 1H), 5.13-4.81 (m, 2H), 3.99-3.51 (m, 2H), 3.32-3.35(m, 1H) 2.97 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.26 (d,J = 7.0 Hz, 3H)。 實例224： (1S ,2S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H-吡唑-5-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物363)及 (1R ,2R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H-吡唑-5-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物364) 步驟 1 ：(2Z)-3-(1H-吡唑-5-基)丙-2-烯酸乙酯
將2-[雙(2,2,2-三氟乙氧基)磷醯基]乙酸乙酯(3.04 g，9.15 mmol)、氫化鈉(400 mg，16.66 mmol)、1H-吡唑-5-甲醛(800 mg，8.32 mmol)於四氫呋喃(100 mL)中之混合物在室溫下攪拌2 h。將反應用水淬滅。將所得混合物用乙酸乙酯萃取，且將有機層合併且在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠管柱上純化，用乙酸乙酯/石油醚(1/3)溶離，得到呈白色固體狀之(2Z)-3-(1H-吡唑-5-基)丙-2-烯酸乙酯(500 mg，2.99 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 167。步驟 2 ：(2Z)-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]丙-2-烯酸乙酯
將(2Z)-3-(1H-吡唑-5-基)丙-2-烯酸乙酯(530 mg，3.18 mmol)、3,4-二氫-2H-吡喃(536 mg，6.37 mmol)、TsOH (27 mg，0.15 mmol)於乙酸乙酯(20 mL)中之混合物在80℃攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠管柱上純化，用乙酸乙酯/石油醚(1/10)溶離，得到呈無色油狀之(2Z)-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]丙-2-烯酸乙酯(600 mg，2.39 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 251步驟 3 ：反式 - 2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]環丙烷-1-羧酸乙酯
將三甲基(側氧基)-l^[6]-磺醯碘(3.52 g，15.99 mmol)、t-BuOK (1.792 g，15.97 mmol)、(2Z)-3-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]丙-2-烯酸乙酯(2 g，7.99 mmol)於DMSO (20 mL)中之混合物在室溫下攪拌2 h。將所得溶液用水稀釋。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，且將有機層合併且在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠管柱上純化，用乙酸乙酯/石油醚(1/10)溶離，得到呈無色油狀之反式-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]環丙烷-1-羧酸乙酯(400 mg，1.52 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 265步驟 4 ：反式 - 2-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-5-基]環丙烷-1-羧酸
將反式-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]環丙烷-1-羧酸乙酯(400 mg，1.51 mmol)、氫氧化鋰(180 mg，7.51 mmol)於四氫呋喃(10 mL)及水(10 mL)中之混合物在室溫下攪拌5 h。用氯化氫將反應混合物調整至pH 4。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，且將有機層合併且在真空下濃縮，得到呈白色固體狀之反式-2-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-5-基]環丙烷-1-羧酸(300 mg，1.27 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 237。步驟 5 ：反式 -N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-5-基]環丙烷-1-羧醯胺
向反式-2-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-5-基]環丙烷-1-羧酸(350 mg，1.48 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(426 mg，1.48 mmol)於吡啶(1 mL)及二氯甲烷(10 mL)中之混合物中添加氧氯化磷(450 mg，2.93 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠管柱上純化，用二氯甲烷/甲醇(95/5)溶離，得到呈黃色固體狀之反式-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]環丙烷-1-羧醯胺(300 mg，0.59 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 506步驟 5 ：反式-N -[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[2-[1-(噁烷-2-基)-1H -吡唑-5-基]環丙烷]醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯
將胺基甲酸第三丁酯(1.67 g，14.25 mmol)、反式-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]環丙烷-1-羧醯胺(360 mg，0.71 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (150 mg，0.14 mmol)、BrettPhos (153 mg，0.28 mmol)、碳酸銫(930 mg，2.85 mmol)於二噁烷(10 mL)中之混合物在90℃在氮下攪拌12 h。將固體過濾出來。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物施加至具有二氯甲烷/甲醇(10/1)之矽膠管柱，得到呈白色固體狀之反式-N -[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]環丙烷]醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，0.34 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =587步驟 6 ：(1S ,2S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H-吡唑-5-基)環丙烷-1-羧醯胺及(1R ,2R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1H-吡唑-5-基)環丙烷-1-羧醯胺
將反式-N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[[-2-[1-(噁烷-2-基)-1H-吡唑-5-基]環丙烷]醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，0.34 mmol)於三氟乙酸(5 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相層析術(乙腈0至50/0.1% NH4 HCO3 於水中)純化，得到呈白色固體狀之外消旋產物(70 mg，0.17 mmol)。將外消旋物產物藉由藉由掌性HPLC分離，得到兩種異構物(環丙烷立體化學：吡唑與醯胺成反式 )：
化合物 364 ：滯留時間：1.69 min (Lux Cellulose-4，0.46*5cm；3 μm；Hex(0.1%DEA):EtOH=50:50；1 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 402；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.29 (s, 1H), 8.47 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.58-7.56 (m, 1H), 7.44 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.00(d,J = 6 Hz, 1H), 6.18-6.16 (m, 1H), 2.60-2.59 (m, 1H),2.31 (s, 3H),2.29-2.25 (m, 1H),1.64-1.61 (m, 1H),1.44-1.42 (m, 1H),
化合物 363 ：滯留時間：3.07 min (Lux Cellulose-4，0.46*5cm；3 μm；Hex(0.1%DEA):EtOH=50:50；1 ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 402；1 HNMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.29 (s, 1H), 8.47 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.58-7.56(m, 1H), 7.44 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.00(d,J = 6 Hz, 1H), 6.18-6.16 (m, 1H), 2.60-2.59 (m, 1H),2.31 (s, 3H),2.29-2.25 (m, 1H),1.64-1.61 (m, 1H),1.44-1.42 (m, 1H)。 實例225： (1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物368)、(1S ,2S ,3R )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物367)、(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物366)及(1R ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物365) 步驟 1 ：1-(2-(苄氧基)乙基)-4-碘-1H -吡唑
將4-碘-1H -吡唑(10 g，51.55 mmol)、(2-溴乙氧基)甲基]苯(13.24 g，61.54 mmol)、碳酸鉀(14.23 g，102.94 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(25 mL)中之混合物在室溫下攪拌2小時。將所得溶液用乙酸乙酯稀釋。將所得混合物用水洗滌。將有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用乙酸乙酯/石油醚(1/1)溶離來純化，得到呈黃色油狀之1-[2-(苄氧基)乙基]-4-碘-1H -吡唑(20 g，60.79 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 329。步驟 2 ：(E )-3-(1-(2-(苄氧基)乙基)-1H -吡唑-4-基)丙烯酸第三 丁酯
將1-[2-(苄氧基)乙基]-4-碘-1H -吡唑(22 g，67.04 mmol)、丙-2-烯酸第三 丁酯(25.76 g，200.95 mmol)、乙酸鈀(2.25 g，10.04 mmol)、三鄰甲苯基膦(12.23 g，40.18 mmol)及三乙胺(10.16 g，100.43 mmol)於N,N -二甲基羧醯胺(150 mL)中之混合物在110℃攪拌12小時。將所得溶液用乙酸乙酯洗滌，且隨後用水洗滌且濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用乙酸乙酯/石油醚(4/6)溶離來純化，得到呈黃色油狀之(2E )-3-[1-[2-(苄氧基)乙基]-1H -吡唑-4-基]丙-2-烯酸第三 丁酯(13.8 g，41.95 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 329。步驟 3 ：(1S ,2S )-2-(1-(2-(苄氧基)乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧酸第三 丁酯
在-78℃下將LDA (19 mL，45.67 mmol)添加至(2E )-3-[1-[2-(苄氧基)乙基]-1H -吡唑-4-基]丙-2-烯酸第三 丁酯(5 g，15.23 mmol)及乙二醇二甲醚(100 mL)之混合物。將溶液在此溫度下攪拌1小時。隨後在-78℃下添加氟化三氟硼酸乙基二苯基鋶(13.8 g，45.67 mmol)，且隨後在室溫下攪拌5小時。隨後將反應藉由添加水淬滅。將所得混合物用二氯甲烷萃取。將有機層用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用乙酸乙酯/石油醚(7/3)溶離來純化，得到呈紅色油狀之2-[1-[2-(苄氧基)乙基]-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷-1-羧酸第三 丁酯(4 g，11.20 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 357。步驟 4 ：2-(1-(2-(苄氧基)乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧酸
2-[1-[2-(苄氧基)乙基]-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷-1-羧酸第三 丁酯(3.9 g，10.94 mmol)、三氟乙酸(10 mL)於二氯甲烷(50 mL)中之混合物。將所得溶液在室溫下攪拌3小時。將所得混合物在真空下濃縮，得到呈紫色油狀之2-[1-[2-(苄氧基)乙基]-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷-1-羧酸(5 g，粗品)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 301。步驟 5 ：2-(1-(2-(苄氧基)乙基)-1H -吡唑-4-基)-N -(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺
將2-[1-[2-(苄氧基)乙基]-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷-1-羧酸(5.6 g，18.65 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(5.36 g，18.62 mmol)、吡啶(20 mL)及氧氯化磷(5.71 g，37.25 mmol)於二氯甲烷(100 mL，1.57 mol)中之混合物在室溫下攪拌30分鐘。隨後將反應藉由水淬滅。將所得溶液用二氯甲烷萃取。將有機層用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用乙酸乙酯/石油醚(7/3)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[1-[2-(苄氧基)乙基]-1H -吡唑-4-基]-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(6.1 g，10.70 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 570。步驟 6 ：3-((1S ,2S )-2-(1-(2-(苄氧基)乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺基)-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
將2-[1-[2-(苄氧基)乙基]-1H -吡唑-4-基]-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(6.1 g，10.70 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(37.63 g，321.21 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (2.22 g，2.14 mmol)、BrettPhos (1.15 g，2.14 mmol)及碳酸銫(13.98 g，42.91 mmol)於1,4-二噁烷(100 mL)中之混合物在90℃攪拌5小時。將固體過濾出來。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(4/1)溶離來純化，得到呈紫色固體狀之N -(3-[[2-[1-[2-(苄氧基)乙基]-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(6.8 g，10.45 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 651。步驟 7 ：7-氟-3-(2-(1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯
將N -(3-[[(1S ,2S )-2-[1-[2-(苄氧基)乙基]-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(1.5 g，2.31 mmol)、Pd(OH)2 /C (646 mg，4.60 mmol)及甲醇(50 mL)之混合物用氫氣鼓泡透過20 min。將所得溶液在氫(氣球)下在50℃攪拌12小時。將混合物過濾且濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱用二氯甲烷/甲醇(96/4)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -(7-氟-3-[[2-[1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(250 mg，0.45 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 561。步驟 8 ：(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺、(1S ,2S ,3R )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺、(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺及(1R ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基)-3-甲基環丙烷羧醯胺
將N -(7-氟-3-[[2-[1-(2-羥乙基)-1H -吡唑-4-基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，0.36 mmol)於HCl/1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (C18矽膠；0.5% NH4 HCO3 於水: ACN=20%至50%，7 min內)，得到4種異構物之混合物。將混合物藉由掌性HPLC分離，得到四種異構物(各異構物之環丙烷立體化學：吡唑與醯胺成反式 ；任意指定之甲基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物368：(12.1 mg，0.026 mmol)。滯留時間：4.112 min (掌性IA.0.46*15cm；5 μm；MeOH(0.1%DEA):二氯甲烷=80:20；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 461.3；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.72 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.52 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.41 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.27 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 6.95 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.31 (s, 2H), 4.87 (s, 1H), 4.06 (t,J = 5.7 Hz, 2H), 3.69 (t,J = 5.7 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.28-2.13 (m, 2H), 1.62-1.49 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物367：(20.5 mg，0.045 mmol)。滯留時間：2.172 min (Lux Cellulose-4.0.46*5cm；3 μm；Hex(8mMNH3 ):EtOH=60:40；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 461.3；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.76 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.40 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.93 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 4.89 (t,J = 5.3 Hz, 1H), 4.10 (t,J = 5.7 Hz, 2H), 3.80-3.63 (m, 2H), 2.33-2.27 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.13 (t,J = 4.7 Hz, 1H), 1.67-1.54 (m, 1H), 0.97 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物366：(10.2 mg，0.022 mmol)。滯留時間：3.118 min (Lux Cellulose-4.0.46*5cm；3 μm；Hex(8mMNH3 ):EtOH=60:40；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 461.3；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.71 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 8.51 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.40 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.95 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 4.86 (t,J = 5.3 Hz, 1H), 4.06 (t,J = 5.7 Hz, 2H), 3.80-3.59 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.28-2.13 (m, 2H), 1.62-1.50 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物365：(25.4 mg，0.055 mmol)。滯留時間：7.392 min (掌性IA.0.46*15cm；5 μm；MeOH(0.1%DEA):二氯甲烷=80:20；1.0ml/min)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 461.2；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.76 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.53 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.43 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.93 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.31 (s, 2H), 4.89 (s, 1H), 4.10 (t,J = 5.7 Hz, 2H), 3.71 (t,J = 5.7 Hz, 2H), 2.39-2.30 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.13 (t,J = 4.7 Hz, 1H), 1.67-1.54 (m, 1H), 0.97 (d,J = 6.2 Hz, 3H)。 實例226： (1R ,2R )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H -1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物356)及 (1S ,2S )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H -1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(化合物355) 步驟 1 ：(2E)-3-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-烯酸第三 丁酯
將4-溴-1-甲基-1H-1,2,3-三唑(5 g，30.87 mmol)、丙-2-烯酸第三 丁酯(11.9 g，92.85 mmol)、乙酸鈀(1.1 g，4.90 mmol)、三鄰甲苯基膦(1.9 g，6.24 mmol)及三乙胺(4.7 g，46.45 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(50 mL，646.09 mmol)中之溶液在110℃攪拌12 h。將所得混合物冷卻至室溫且隨後用水稀釋。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽石上純化，用乙酸乙酯/石油醚(3/2)溶離，得到呈黃色固體狀之(2E)-3-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-烯酸第三 丁酯(3.6 g，17.23 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 210。步驟 2 ：反式-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧酸第三 丁酯
將三甲基(側氧基)-[6]-磺醯碘(7.6 g，34.53 mmol)及第三丁醇鉀(3.9 g，34.76 mmol)於二甲亞碸(80 mL)中之溶液中添加(2E)-3-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-烯酸第三 丁酯(3.6 g，17.21 mmol)在室溫下12小時。將所得溶液用水稀釋。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色油狀之反式-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧酸第三 丁酯(1.3 g，粗品)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 224。步驟 3 ：反式-2-(1-甲基-1H -1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧酸
在室溫下向反式-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧酸第三 丁酯(1.3 g，5.82 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(2 mL，26.93 mmol)達2小時。將所得混合物在真空下濃縮，將殘餘物藉由逆相管柱層析術(0.5% NH4 HCO3 於水/CH3 CN=5%至50%，25 min內)純化，得到呈黃色固體狀之反式-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧酸(223 mg，1.34 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 168。步驟 4 ：反式-N -[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
在0℃下向反式-2-(1-甲基-1H -1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧酸(223 mg，1.33 mmol)、8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(320 mg，1.11 mmol)及吡啶(0.5 mL，6.21 mmol)於二氯甲烷(5 mL，78.65 mmol)中之溶液中添加氧氯化磷(258 mg，1.68 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌30 min。將反應藉由水淬滅且隨後用二氯甲烷萃取。將有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮，得到呈黃色固體狀之反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(262 mg，0.60 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 437。步驟 5 ：反式-N-(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將反式-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺(242 mg，0.55 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(1.95 g，16.65 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(115 mg，0.11 mmol)、Brettphos (60 mg，0.11 mmol)及碳酸銫(724 mg，2.22 mmol)於1,4-二噁烷(12 mL)中之混合物在100℃攪拌2 h。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽石上純化，用二氯甲烷/甲醇(92/8)溶離，得到呈紅色固體狀之反式-N-(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(120 mg，0.23 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 518。步驟 6 ：(1R ,2R )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺及(1S ,2S )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(1-甲基-1H -1,2,3-三唑-4-基)環丙烷-1-羧醯胺
將反式-N-(7-氟-3-[[2-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.19 mmol)於1,4-二噁烷(2.5 mL，29.510 mmol)及氯化氫(2.5 mL，82.280 mmol)中之溶液在室溫下攪拌3 h。在真空下濃縮後，將殘餘物藉由製備型HPLC (XBridge製備型C18 OBD 19*150mm*5um；10 mmol NH4 HCO3 於水: CH3 CN = 10%至50%，7 min內)純化，得到外消旋產物。將外消旋產物藉由製備型掌性HPLC純化，得到兩種異構物(環丙烷立體化學兩種異構物：三唑與醯胺成反式 ，任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物355：(8.7 mg，0.021 mmol)。滯留時間；1.977 min ((CHIRALPAK IC2*25cm，5 μm；MeOH(0.1%DEA):二氯甲烷=70:30)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 418；1 HNMR(400 MHz, DMSO-d 6)δ 10.89 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.52 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.44-7.37 (m, 1H), 6.94 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.32 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 2.49-2.40 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.50-1.35 (m, 2H)。
呈黃色固體狀之化合物356：(10.3 mg，0.025 mmol)。滯留時間：2.424 min，((CHIRALPAK IC2*25cm，5 μm；MeOH(0.1%DEA):二氯甲烷=70:30)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 418；1 HNMR(400 MHz, DMSO-d 6)δ 10.89 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.52 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.44-7.37 (m, 1H), 6.94 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 6.32 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 2.49-2.40 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.50-1.35 (m, 2H)。 實例227： (±)-(1S ,2R ,6R ,7S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-羥基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧醯胺(化合物373及化合物374)及 (±)-(1S ,2S ,6R ,7S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-羥基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧醯胺(外消旋的) (化合物371及化合物372) 步驟 1 ：外-2-側氧基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧酸乙酯
在0℃下向環己-2-烯-1-酮(4 g，41.61 mmol)、Ru2 (OAc)4 (0.91 g，2.05 mmol)於二氯甲烷(40 mL)中之混合物滴加2-(λ4,-二氮烯基)乙酸乙酯(7.86 g，68.28 mmol)。將反應物在25℃攪拌2 h。隨後將反應用水淬滅，用二氯甲烷萃取。將有機層用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(1:4)溶離來純化，得到呈黃色油狀之外-2-側氧基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧酸乙酯(2 g，0.011 mol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 183.2。步驟 2 ：外-2-側氧基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧酸
向外-2-側氧基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧酸乙酯(2 g，10.97 mmol)於四氫呋喃(20 mL)中之混合物中添加水(5 mL)中之LiOH (1.05 g，43.84 mmol)，在25℃攪拌3 h。用檸檬酸將溶液之pH值調整至5，且隨後用二氯甲烷萃取。將有機層用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈褐色固體狀之外-2-側氧基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧酸(1.26 g，74%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 155.2。步驟 3 ：外-N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-側氧基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧醯胺
在5℃下向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(2.2 g，7.64 mmol)、外-2-側氧基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧酸(1.18 g，7.654 mmol)、吡啶(12 mL，206.32 mmol)於二氯甲烷(68 mL)中之溶液中滴加氧氯化磷(2.36 g，15.39 mmol)。將反應物在5℃攪拌30 min。隨後將反應用水淬滅，用二氯甲烷萃取。將有機層用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之外-N-(8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-側氧基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧醯胺(2.5 g，77%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 424.2。步驟 4 ：外-(7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-(2-側氧基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧醯胺基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將外-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-2-側氧基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧醯胺(1.1 g，2.59 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(7.6 g，64.87 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (540 mg，0.52 mmol)、Brettphos (560 mg，1.04 mmol)、碳酸銫(3.4 g，10.43 mmol,)於1,4-二噁烷(40 mL)中之混合物在90℃攪拌2 h。將混合物過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-(2-側氧基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧醯胺基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯(800 mg，1.59 mmol )。LCMS (ESI) [M+H]+ = 505.3。步驟 5 ：外-(7-氟-3-(2-羥基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧醯胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將N-[7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)-3-[(7S)-2-側氧基雙環[4.1.0]庚烷-7-醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(800 mg，1.58 mmol)及NaBH4 (362 mg，9.56 mmol)於甲醇(20 mL)中之混合物在0℃攪拌90 min。隨後將反應物藉由水淬滅，用二氯甲烷萃取。將有機層用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之外-7-氟-3-(2-羥基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧醯胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基胺基甲酸第三 丁酯(370 mg，46%)。步驟 6 ：(1S ,2R ,6R ,7S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-羥基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧醯胺(外消旋的)及(1S ,2S ,6R ,7S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-羥基雙環[4.1.0]庚烷-7-羧醯胺(外消旋的)
向外-N -[7-氟-3-(2-羥基雙環[4.1.0]庚烷-7-醯胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基]胺基甲酸第三丁酯(200 mg，0.39 mmol)於N,N-二甲基羧醯胺(1 mL)中之溶液中添加HCl (g)/二噁烷(10 mL，4 M)。將反應物在20℃攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到兩種異構物。
將混合物在掌性HPLC進一步分離，得到4種單一立體異構物。相對立體化學如表1所繪示；但是絕對立體化學已經任意指定)。
化合物371：滯留時間；2.74 min ((CHIRALPAK OJ-3 4.6x50mm；MeOH(0.1%DEA)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 407。
化合物372：滯留時間；1.56 min ((CHIRALPAK OJ-3 4.6x50mm；MeOH(0.1%DEA)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 407。
化合物373：滯留時間；1.25 min ((Cellulose-4, 4.6x50mm；MeOH(0.1%DEA)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 407。
化合物374：滯留時間；3.03 min ((Chiralcel OJ-3, 4.6x50mm；MeOH(0.1%DEA)；LCMS (ESI) [M+H]+ = 407。 實例228： (±)-N -(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物192)及(±)-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物191) 步驟 1 ：N -(3-[[2-[(苄氧基)甲基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將2-[(苄氧基)甲基]-N -[8-氯-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(420 mg，0.89 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(2.61 g 22.2 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (184 mg，0.178 mmol)、Brettphos (191 mg，0.36 mmol)、碳酸銫(1.16 g，3.566 mmol)於二噁烷(10 mL，118.041 mmol)中之混合物在120℃攪拌1.5 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(4/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N-(3-[[2-[(苄氧基)甲基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(450 mg，92%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 472.2。步驟 2 ：N -(3-[[2-(羥甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
向N -(3-[[(1S ,2S )-2-[(苄氧基)甲基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(350 mg，0.63 mmol)於甲醇(30 mL)中之溶液中添加 Pd(OH)2 /C (2.5 g，17.80 mmol)。將所得溶液在25℃在氫下攪拌30 min。過濾後，將所得混合物在真空下濃縮，得到呈淡綠色固體狀之N -(3-[2-(羥甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，68%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 463.3步驟 3 ：(2-((8-((第三 丁氧基羰基)胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺甲醯基)-3-甲基環丙基)甲基甲烷磺酸酯
向N-(3-[[2-(羥甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(140 mg，0.30 mmol)、三乙胺(183 mg，1.81 mmol)於二氯甲烷(3 mL，47.19 mmol)中之溶液中滴加MsCl (138 mg，1.21 mmol)。將所得溶液在25℃攪拌30 min。隨後將反應藉由水淬滅。將所得混合物用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈黃色油狀之((1S,2S)-2-((8-((第三 丁氧基羰基)胺基)-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)胺甲醯基)-3-甲基環丙基)甲基甲烷磺酸酯(100 mg，0.19 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 541.3。步驟 4 ：N -(3-[[(1S ,2S )-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
向N -(3-[[2-(甲烷磺醯基甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.19 mmol)於DMSO (3 mL，42.24 mmol)中之溶液中添加KCN (99.29 mg，1.53 mmol)。將所得溶液在50℃攪拌2 h。將所得溶液用水稀釋。將所得溶液用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈褐色固體狀之N -(3-[[(1S ,2S )-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，78%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 472.3步驟 5 ：(±)-(1S ,2S )-N -(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺及(±)-(1S ,2S )-N-(8-胺基-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺
將N -(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(70 mg，0.15 mmol)於二氯甲烷(1 mL，15.73 mmol)及三氟乙酸(1 mL)中之溶液在25℃攪拌30 min。將所得溶液在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC (XBridge製備型醯胺OBD管柱，19x150mm 5um；水(0.05%NH3 H2 O): ACN (20%至55%，6 min內)，得到兩對鏡像異構物(環丙烷立體化學：氰基甲基與醯胺成反式 ；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物191：(2.8 mg，5%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 372.2；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 10.80 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.67-8.39 (m, 2H), 8.26 (s, 1H), 7.45 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.55 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 6.37 (s, 2H), 2.81 (dd,J = 17.6, 7.3 Hz, 1H), 2.69 (dd,J = 17.7, 7.7 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.79 (t,J = 4.5 Hz, 1H), 1.71-1.57 (m, 1H), 1.52-1.37 (m, 1H), 1.17 (d,J = 6.3 Hz, 3H)。
呈灰白色固體狀之化合物192。LCMS (ESI) [M+H]+ = 372.2；1 HNMR(400 MHz, DMSO)δ 10.79 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.48-8.36 (m, 2H), 8.28 (s, 1H), 7.35 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.55 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 6.34 (s, 2H), 2.83-2.61 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.15-2.03 (m, 1H), 1.58-1.45 (m, 1H), 1.36 (dt,J = 9.1, 6.1 Hz, 1H), 1.17 (d,J = 6.1 Hz, 3H)。 實例229： (±)-順式-N -(8-胺基-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟異喹啉-3-基)-2-氟環丙烷-1-羧醯胺(化合物152) 步驟 1 ：8-氯-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟異喹啉-3-胺
將8-氯-7-氟-6-碘異喹啉-3-胺(800 mg，2.48 mmol)、(2,6-二氯苯基)硼酸(1.42 g，7.42 mmol)、雙(三第三 丁基膦)鈀(0) (127 mg，0.25 mmol)及氟化銫(1.13 g，7.44 mmol)於二噁烷(10 mL)及水(1 mL)中之混合物在100℃攪拌12小時。將所得溶液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上純化，用乙酸乙酯/石油醚(1/3)溶離，得到呈白色固體狀之8-氯-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟異喹啉-3-胺(820 mg，2.412 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 341。步驟 2 ：(±)-順式-N -[8-氯-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟異喹啉-3-基]-2-氟環丙烷-1-羧醯胺
在0℃下向8-氯-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟異喹啉-3-胺(794 mg，2.32 mmol)、順式-2-氟環丙烷-1-羧酸(320 mg，3.075 mmol)及吡啶(1 mL，12.42 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中滴加氧氯化磷(560 mg，3.65 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌30 min。隨後將反應物藉由水淬滅，且隨後用二氯甲烷萃取。將有機相經無水鈉乾燥，過濾且在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽石上純化，用乙酸乙酯/石油醚(1:1)溶離，得到呈黃色固體狀之順式-N -[8-氯-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟異喹啉-3-基]-2-氟環丙烷-1-羧醯胺(763 mg，1.79 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 427。步驟 3 ：(±)-反式-(6-(2,6-二氯苯基)-7-氟-3-(2-氟環丙烷-1-羧醯胺基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將順式-N -[8-氯-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟異喹啉-3-基]-2-氟環丙烷-1-羧醯胺(300 mg，0.70 mmo)、胺基甲酸第三丁酯(2.5 g，21.34 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(150 mg，0.15 mmol)、BrettPhos (75 mg，0.14 mmol)及碳酸銫(930 mg，2.85 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)中之溶液在90℃攪拌2 h。將所得混合物冷卻至室溫且隨後過濾。將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽石上純化，用乙酸乙酯/石油醚(3/2)溶離，得到呈黃色固體狀之順式-(6-(2,6-二氯苯基)-7-氟-3-(2-氟環丙烷-1-羧醯胺基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(190 mg，0.375 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 508。步驟 4 ：(±)-順式-N -[8-胺基-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟異喹啉-3-基]-2-氟環丙烷-1-羧醯胺
向順式-N -[6-(2,6-二氯苯基)-7-氟-3-[[2-氟環丙烷]醯胺基]異喹啉-8-基]胺基甲酸第三 丁酯(170 mg，0.33 mmol)及三氟乙酸(1.6 mL，21.541 mmol)於二氯甲烷(8 mL)中之溶液在25℃攪拌1 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC (Atlantis HILIC OBD，19×150mm 5um；水(0.1%FA): CH3 CN (5%至23%)，7 min內)純化，得到呈黃色固體狀之(±)-順式-N -[8-胺基-6-(2,6-二氯苯基)-7-氟異喹啉-3-基]-2-氟環丙烷-1-羧醯胺(21.6 mg，0.053 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 408；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6)δ 10.86 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.65 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.54-7.49 (m, 1H), 6.93 (d,J = 5.9 Hz, 1H), 6.32 (s, 2H), 5.04-4.83 (m, 1H), 2.31-2.19 (m, 1H), 1.68-1.66 (m, 1H), 1.19-1.17 (m, 1H)。 實例230： 2-((6-(1-乙醯基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)-8-胺基-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H-吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物232) 步驟 1 ：1-[4-(3-胺基-7-氯-6-異喹啉基)-3,6-二氫-2H -吡啶-1-基]乙酮
向6-溴-7-氯-異喹啉-3-胺(200 mg，0.78 mmol)於1,4-二噁烷(2 mL)中之溶液中添加1-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜戊環-2-基)-3,6-二氫-2H -吡啶-1-基]乙酮(234.1 mg，0.93 mmol)、碳酸鉀(321.5 mg，2.33 mmol)及[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (56.85 mg，0.08 mmol)。將所得懸浮液在90℃攪拌2小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之1-[4-(3-胺基-7-氯-6-異喹啉基)-3,6-二氫-2H -吡啶-1-基]乙酮(210 mg，0.69 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 319.0。步驟 2 ：2-[[6-(1-乙醯基-3,6-二氫-2H -吡啶-4-基)-8-氯-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將1-[4-(3-胺基-8-氯-7-氟-6-異喹啉基)-3,6-二氫-2H -吡啶-1-基]乙酮(200 mg，0.66 mmol)、2-溴-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(265 mg，0.99 mmol)、t -BuBrettphos G3 (171 mg，0.20 mmol)、t -BuBrettphos (195 mg，0.40 mmol)、碳酸銫(645 mg，1.98 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物100℃攪拌8小時。將懸浮液透過矽藻土墊過濾。將混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[6-(1-乙醯基-3,6-二氫-2H -吡啶-4-基)-8-氯-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(110 mg，0.019 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 510。步驟 3 ：2-[[6-(1-乙醯基-3,6-二氫-2H -吡啶-4-基)-8-氯-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將2-[[6-(1-乙醯基-3,6-二氫-2H -吡啶-4-基)-8-氯-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(100 mg，0.20 mmol)及胺基甲酸第三丁酯(340 mg，2.93 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀-氯仿加合物(30 mg，0.04 mmol)、Brettphos (40.0 mg，0.07 mmol)、碳酸銫(180 mg，0.55 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物在90℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之2-[[6-(1-乙醯基-3,6-二氫-2H -吡啶-4-基)-8-氯-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(100 mg，0.20 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 591。步驟 4 ：2-[[6-(1-乙醯基-3,6-二氫-2H -吡啶-4-基)-8-胺基-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N -[6-(1-乙醯基-3,6-二氫-2H -吡啶-4-基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(105 mg，0.18 mmol)於TFA (1 mL，0.18 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液在15℃攪拌2小時。將所得溶液在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之2-[[6-(1-乙醯基-3,6-二氫-2H -吡啶-4-基)-8-胺基-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(27.8 mg，0.057 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 492.2；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 )δ 9.16 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 6.79-6.76 (m, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.94 (s, 3H), 4.97 (s, 2H), 4.64-4.55 (m, 1H), 4.17-4.10 (m, 2H), 3.80-3.78 (m, 2H), 3.66-3.61 (m, 2H), 3.00-2.96 (m, 2H), 2.56 (s, 1H), 2.51-2.50 (m, 1H), 2.07 (d,J = 9.2 Hz, 3H), 1.12 (d,J = 9.2 Hz, 6H)。 實例231： 2-((8-胺基-6-(3-胺基-1,4-二甲基-1H -吡唑-5-基)-7-氟異喹啉-3-基)胺基)-6-異丙基-5,6-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7(8H )-酮(化合物251) 步驟 1 ：1,4-二甲基-3-硝基-吡唑
將4-甲基-3-硝基-1H -吡唑(500 mg，3.93 mmol)、碘甲烷(837.9 mg，5.9 mmol)及第三丁醇鉀(484.6 mg，4.33 mmol)於四氫呋喃(20 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(10/1)溶離來純化，得到呈白色固體狀之1,4-二甲基-3-硝基-吡唑(450 mg，3.18 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 142。步驟 2 ：1,4-二甲基吡唑-3-胺
將1,4-二甲基-3-硝基-吡唑(530 mg，3.76 mmol)及鈀碳(10%) (50 mg，3.76 mmol)於甲醇(20 mL)中之溶液在20℃攪拌1小時。過濾後，將濾液在減壓下濃縮，得到呈淡黃色油狀之1,4-二甲基吡唑-3-胺(400 mg，3.59 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 112。步驟 3 ：3-(2,5-二甲基吡咯-1-基)-1,4-二甲基-吡唑
將1,4-二甲基吡唑-3-胺(1.53 g，13.77 mmol)、2,5-己烷二酮(3.14 g，27.53 mmol)及對甲苯磺酸(0.24 g，1.38 mmol)於甲苯(60 mL)中之溶液在110℃攪拌3小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(80/20)溶離來純化，得到呈灰色固體狀之3-(2,5-二甲基吡咯-1-基)-1,4-二甲基-吡唑(1.5 g，7.92 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 190。步驟 4 ：3-(2,5-二甲基吡咯-1-基)-5-碘-1,4-二甲基-吡唑
在-78℃下向3-(2,5-二甲基吡咯-1-基)-1,4-二甲基-吡唑(500 mg，2.64 mmol)於四氫呋喃(20 mL)中之溶液中添加正丁基鋰(1.27 mL，3.17 mmol)。將所得溶液在-78℃攪拌1小時。添加碘(671.03 mg，2.64 mmol)且在-78℃攪拌10分鐘。將混合物在室溫下攪拌1小時。將反應物用飽和水性硫代硫酸鈉淬滅。將所得溶液用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用石油醚/乙酸乙酯(3/1)溶離來純化，得到呈淡黃色油狀之3-(2,5-二甲基吡咯-1-基)-5-碘-1,4-二甲基-吡唑(385 mg，1.22 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =316。步驟 5 ：5-碘-1,4-二甲基-吡唑-3-胺
將3-(2,5-二甲基吡咯-1-基)-5-碘-1,4-二甲基-吡唑(500 mg，1.59 mmol)、氫氧化鉀(444.23 mg，7.93 mmol)、鹽酸羥胺(1.09 g，15.87 mmol)於乙醇(20 mL)及水(20 mL)中之溶液在90℃攪拌12小時。將溶劑在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用二氯甲烷/甲醇(96/4)溶離來純化，得到呈白色固體狀之5-碘-1,4-二甲基-吡唑-3-胺(281 mg，1.18 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ =238。步驟 6 ：N -[6-(5-胺基-2,4-二甲基-吡唑-3-基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯
將5-碘-1,4-二甲基-吡唑-3-胺(31.0 mg，0.13 mmol)、[8-(第三 丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-6-異喹啉基]硼酸(67 mg，0.13 mmol)、肆(三苯基膦)鈀(27.59 mg，0.03 mmol)及碳酸鉀(54.14 mg，0.39 mmol)於1,4-二噁烷(3 mL)及水(0.3 mL)中之溶液在90℃攪拌1小時。將溶劑在真空下濃縮，得到呈褐色固體狀之N -[6-(5-胺基-2,4-二甲基-吡唑-3-基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(50 mg，粗品)。LCMS (ESI) [M+H]+ =578。步驟 7 ：2-[[8-胺基-6-(5-胺基-2,4-二甲基-吡唑-3-基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮
將N -[6-(5-胺基-2,4-二甲基-吡唑-3-基)-7-氟-3-[(6-異丙基-7-側氧基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-2-基)胺基]-8-異喹啉基]胺基甲酸第三 丁酯(50.0 mg，0.09 mmol)及2,2,2-三氟乙酸(1.0 mL)於二氯甲烷(4 mL)中之溶液在25℃攪拌1小時。將所得溶液在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC [Atlantis HILIC OBD管柱19x150nmx50um；水(10mmol/L碳酸氫鈉及ACN (20%至50%)，7 min內]，得到呈黃色固體狀之2-[[8-胺基-6-(5-胺基-2,4-二甲基-吡唑-3-基)-7-氟-3-異喹啉基]胺基]-6-異丙基-5,8-二氫-4H -吡唑并[1,5-d ][1,4]二氮呯-7-酮(9.1 mg，0.019 mmol)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 478；1 HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.26 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 6.75 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 6.13 (s, 2H), 5.98 (s, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.65-4.55 (m, 1H), 4.48 (s, 2H), 3.78 (t,J = 6.0 Hz, 2H), 3.45 (s, 3H), 2.98 (t,J = 6.0 Hz, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.12 (d,J = 6.0 Hz, 6H)。 實例232： (1S ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物383)、(1R ,2R ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物384)、(1S ,2S ,3S )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物385)、(1R ,2R ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(化合物386) 步驟 1 ：2-[(苄氧基)甲基]-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺
在0℃下向8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-胺(1 g，3.48 mmol)、(1S ,2S )-2-[(苄氧基)甲基]-3-甲基環丙烷-1-羧酸(1.15 g，5.22 mmol)、吡啶(2 mL，24.847 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加氧氯化磷(1.06 g，6.90 mmol)。將所得溶液在0℃攪拌30 min且隨後藉由水淬滅。將所得溶液用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之(1S ,2S )-2-[(苄氧基)甲基]-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(0.9 g，53%)。步驟 2 ：N -(3-[[(2-[(苄氧基)甲基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
將2-[(苄氧基)甲基]-N-[8-氯-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基]-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺(900 mg，1.84 mmol)、N-甲基胺基甲酸第三 丁酯(4.3 g，32.78 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (380 mg，0.37 mmol)、BrettPhos (395 mg，0.74 mmol)、碳酸銫(2.4 g，7.37 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)中之溶液在100℃攪拌5 h。將固體過濾出來。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由急驟層析術在矽膠上用乙酸乙酯/石油醚(10/1)溶離來純化，得到呈黃色固體狀之N -(3-[[2-[(苄氧基)甲基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(500 mg，48%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 571。步驟 3 ：N -(7-氟-3-[[2-(羥甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
向N -(3-[[2-[(苄氧基)甲基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(500 mg，0.88 mmol)於甲醇(20 mL)中之溶液中添加Pd(OH)2 /C (100 mg)。將所得溶液在室溫下在H2 (1 atm)下攪拌12 h。將反應物過濾且在真空下濃縮，得到呈白色固體狀之N -(7-氟-3-[[2-(羥甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(220 mg，52%)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 481。步驟 4 ：N -(7-氟-3-[[2-[(甲烷磺醯基氧基)甲基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
在0℃下向N -(7-氟-3-[[(1S ,2S )-2-(羥甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，0.42 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加三乙胺(70 mg，0.69 mmol)及甲烷磺醯氯(60 mg，0.52 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌15 min且隨後在真空下濃縮，得到呈白色固體狀之N -(7-氟-3-[[2-[(甲烷磺醯基氧基)甲基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，粗品)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 559。步驟 5 ：N -(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯
向N -(7-氟-3-[[2-[(甲烷磺醯基氧基)甲基]-3-甲基環丙烷]醯胺基]-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(200 mg，0.36 mmol)於二甲亞碸(10 mL)中之溶液中添加氰化鉀(46 mg，0.71 mmol)。將所得溶液在60℃攪拌3 h。將所得溶液用水稀釋且隨後用乙酸乙酯萃取。將有機層用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮，得到呈白色固體狀之N -(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(210 mg，粗品)。LCMS (ESI) [M+H]+ = 490。步驟 6 ：(1S ,2S ,3R )-N -(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺、(1R ,2R ,3S )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺、(1S ,2S ,3S )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺、(1R ,2R ,3R )-N-(8-胺基-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-3-基)-2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷-1-羧醯胺
將N -(3-[[2-(氰基甲基)-3-甲基環丙烷]醯胺基]-7-氟-6-(4-甲基吡啶-3-基)異喹啉-8-基)胺基甲酸第三 丁酯(100 mg，0.20 mmol)及TFA (3 ml)於1,4-二噁烷(5 mL)中之溶液在室溫下攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC (XBridge Shield RP18 OBD管柱，5 μm，19*150mm；水(0.05%NH3 H2 O)及ACN (15% ACN至40%，15 min內))純化，得到混合物。將混合物藉由SFC分離，得到四種異構物(環丙烷立體化學：氰基甲基與醯胺成反式 ；任意指定之甲基相對立體化學；任意指定之所有絕對立體化學)：
呈黃色固體狀之化合物383：(2.4 mg，3%)。滯留時間：3.83 min. (CHIRALPAK ID-3 0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30；1.0ml/min)；LCMS(ESI) [M+H]+ = 390；1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.31(s, 1H), 8.48-8.41 (m, 2H), 8.31 (s, 1H), 7.45-7.43 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.00-6.98 (d,J = 6 Hz, 1H), 2.79-2.60 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.88-1.85 (m, 1H), 1.83-1.69 (m, 2H), 1.34-1.20 (m, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物384：(2.4 mg，3%)。滯留時間：5.64 min (CHIRALPAK ID-3 0.46*10cm；3 μm；MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30；1.0ml/min)；LCMS(ESI) [M+H]+ = 390；1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.31 (s, 1H), 8.48-8.41 (m, 2H), 8.31 (s, 1H), 7.45-7.43 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.00-6.98 (d,J = 6 Hz, 1H), 2.79-2.60 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.88-1.85 (m, 1H), 1.83-1.69 (m, 2H), 1.34-1.20 (m, 3H)。
呈黃色固體狀之化合物385：(3.4 mg，4%)。滯留時間：4.636 min (CHIRALPAK Ia-30.46*5cm；3 μm；Hex(0.1%DEA):EtOH=50:50；1.0ml/min)；LCMS(ESI) [M+H]+ = 390；1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.31 (s, 1H), 8.48-8.41 (m, 2H), 8.31 (s,1H), 7.45-7.43 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.00-6.98 (d,J = 6 Hz, 1H), 2.79-2.60 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.88-1.85 (m, 1H), 1.83-1.69 (m, 2H), 1.34-1.20 (m,3H)。
呈黃色固體狀之化合物386：(2.7 mg，3%)。滯留時間：6.686 min (CHIRALPAK Ia-30.46*5cm；3 μm；Hex(0.1%DEA):EtOH=50:50；1.0ml/min)；LCMS(ESI) [M+H]+ = 390；1 HNMR (300 MHz, CD3 OD) δ 9.31 (s, 1H), 8.48-8.41 (m, 2H), 8.31 (s,1H), 7.45-7.43 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 7.00-6.98 (d,J = 6 Hz, 1H), 2.79-2.60 (m, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.88-1.85 (m, 1H), 1.83-1.69 (m, 2H), 1.34-1.2 (m, 3H)。化合物表徵：化學品 實例233：
製備且表徵示範性式I或Ia化合物。資料示於表A-1中。 表A-1. 實例234：
製備額外的示範性式I或Ia化合物(表A-2、A-3及A-4)；結合資料示於表B1-1及B1-2中。 表A-2. 表A-3. 表A-4. 生物學評估
測試示範性式I或Ia化合物以評定HPK-1之化合物抑制。判定各示範性化合物之Ki 。實例 B1 ： HPK1 Ki 判定 實例B1A：HPK1-FL HTRF酶促檢定(「HTRF」)檢定原理：
在1 mM ATP及不同濃度之測試化合物之存在下，HPK-FL酶使生物素-SLP-76受質磷酸化。藉由FRET使用Eu-anti-pSLP76抗體及SA-XL665偵測產物。文獻：
對於額外HTRF技術訊息，參見www.cisbio.com/HTRF。儀器配置： Echo555化合物分配器 Agilent Bravo Perkin Elmer Envision最終檢定條件： HPK全長，T165E S171E： 0.125 nM 生物素-SLP76： 100 nM ATP： 1 mM (ATP Km = 20 µM) Eu-anti-pSLP76： 2 nM SA-XL665： 8.3 nM 預培育時間： 30 min 激酶反應時間： 60 min 溫度： 周圍 總體積： 12 µl ATPapp Km: 17.7 µM材料 ： 檢定板：白色ProxiPlate 384 F (PerkinElmer目錄號6008289) 激酶：HPK全長雙突變體 受質：生物素-SLP76 ATP：100 mM ATP BSG：2% BSG DMSO：DMSO (Sigma目錄號34869-100ML) 反應緩衝液：H2 O/50 mM HEPES，pH 7.5/10 mM MgCl2 /2 mM TCEP/0.01% Brij-35/0.01% BSG 偵測混合物：Eu-anti-pSLP76/SA-XL665 (Cisbio, #610SAXAC)檢定程序 Ki 判定 ：
向具有點樣之80 nL化合物或DMSO之384孔Proxiplate中添加4 µl/孔激酶混合物。將混合物預培育30分鐘，且隨後添加4 µl/孔受質混合物。將溶液培育60 min，且隨後添加4 µl/孔偵測混合物。將溶液再培育60 min。隨後將板上樣至Perkin Elmer Envision上，且在615及665 nm處量測TR-FRET信號。使用665/620之比率來計算各化合物濃度下之活性%。 實例B1B：HPK1 Lantha結合檢定(「Lanth」)材料： 程序： I. 化合物稀釋：
藉由使用Bravo液體處理平台製備第2列及第13列中之12.5 uL/孔之5 mM化合物(100X)、及第3列至第12列、第14列至第23列及複合板之孔A1至H1及I24至P24之10 ul/孔之DMSO來稀釋欲測試之化合物。對於參考化合物，最高濃度為1 mM。在孔J1至P1及A24至H24中向板中添加10 ul 2 mM十字孢鹼。使用Bravo液體處理平台進行11點5倍化合物連續稀釋。從板中將2.5 ul溶液從第2列及第13列轉移至第3列及第14列等等中之10 ul DMSO中。將複合板以2500 rpm離心1 min。使用Echo液體處理器系統將80 nl化合物從複合板轉移至檢定板中。一個複合板製成兩個檢定板。將各檢定板密封且儲存在N2 櫃中。II. 檢定條件：
使用以下檢定濃度及時間：2 nM HPK1、2 nM Eu-Anti-GST抗体及15 nM示蹤劑222，60 min培育時間。III. HPK Lantha 結合檢定：
對於結合檢定，使用Multidrop試劑分配器將4 ul 2X HPK1及Eu-anti-GST抗體添加至檢定板之各孔中。將溶液在23C培育箱中培育1 h。使用Multidrop試劑分配器向檢定板之各孔中添加4 ul 2X示蹤劑-222。將溶液再次在23C培育箱中培育1 h。使用具有以下參數之Envision板讀取器讀取檢定結果：TR_FRET，340ex /615及665em；100 usec延遲；及200 usec積分。IV. 分析： 1. 使用XL-擬合中之Morrison ki擬合模型來分析化合物Ki a. 擬合= (1-((((E+x)+(Ki*(1+(S/Kd))))-(((((E+x)+(Ki*(1+(S/Kd))))^2) -((4*E)*x))^0.5))/(2*E))) res = (y-擬合) b. 參數： E =酶濃度 S=示蹤劑222濃度，Kd =示蹤劑222 Kd 所有量測值使用相同單位(uM)報告
在結合檢定中測試示範性式I或Ia化合物。所判定之Ki值列於表B1-1及B1-2中。表 B1-1 表B1-2 實例 B2 ：人類 T 細胞 IL2 誘導檢定 檢定原理：
抗CD3及抗CD28活化原代人類泛T細胞中之TCR信號傳導，從而導致IL-2啟動子誘導。藉由電化學發光，使用抗IL-2之捕獲抗體及用SULFO標籤標記之抗IL-2抗體偵測細胞培養物上清液中分泌的IL-2。文獻：
對於額外電化學發光技術訊息，參見www.mesoscale.com。檢定程序：
在潮濕培育箱中在37℃及5% CO2 下用不同濃度之測試化合物培育原代人類泛T細胞30分鐘。將細胞轉移至用固定濃度之抗人類CD3 (對於各供體批進行單獨判定)預塗佈之板，且添加可溶性抗人類CD28 (最終濃度=1 μg/ml)。在潮濕培育箱中在37℃及5% CO2 下刺激細胞4小時。將25 μl上清液轉移至用抗人類IL-2抗體預塗佈之MSD單斑點板上。在4℃在溫和振盪之情況下培育MSD板隔夜。用洗滌緩衝液洗滌MSD板4次。以1:50稀釋度添加SULFO標記之偵測抗體，且在室溫下振盪培育2小時。用洗滌緩衝液洗滌MSD板4次，且添加150 μl MSD讀取緩衝液2次。在MSD儀器上讀取。將資料相對於經刺激/未經處理之對照正規化以計算各化合物濃度下之活性%。材料： 冷凍之原代人類泛T細胞(StemCell Technologies #70024) 抗人類CD3 (OKT3殖株) (eBioscience #16-0037-81) 抗人類CD28 (CD28.2殖株) (BD #555725) 96孔人類IL-2組織培養套組(MSD #K151AHB-4)儀器配置： 用於液體處理之Biomek FX (Beckman Coulter) MSD SECTOR S 600 (Meso Scale Discovery)
在人類T細胞IL-2誘導檢定中測試示範性式I或Ia化合物。對於某些化合物，在表B2中提供由測試化合物處理之細胞中之IL-2相對於未經處理之細胞中之IL-2所量測之增加%。表 B2
應注意，術語「一(個/種)」實體係指一或多個(種)該實體；例如，「一個多肽」應理解為表示一或多個多肽。因而，術語「一(a)」(或「一(an)」)、「一或多」及「至少一種」在本文中可互換使用。
本文中使用之所有技術及科學術語具有相同含義。已努力確保關於所用數值(例如，量、溫度、等)之準確性，但應慮及一些實驗誤差及偏差。
除非上下文另外要求，否則在整個本說明書及申請專利範圍書中，詞語「包含(comprise/comprises/comprising)」以非排他性意義使用。應理解本文所述之實施例包括「由實施例組成」及/或「基本上由實施例組成」。
如本文所使用，當提及數值時，術語「約」意在涵蓋自指定量之其變化，在一些實施例中為± 50%，在一些實施例中為± 20%，在一些實施例中為± 10%，在一些實施例中為± 5%，在一些實施例中為± 1%，在一些實施例中± 0.5%，且在一些實施例中為± 0.1%，因為此類變化適於進行所揭示之方法或採用所揭示之組成物。
當提供數值範圍時，應理解在該範圍之上限與下限之間的直至下限之十分之一單位之各間插值(除非上下文另外明確規定)以及在該陳述之範圍內之任何其他陳述值或間插值皆涵蓋在本發明內。可獨立地包括在較小範圍中之此等小範圍之上限及下限亦涵蓋在本發明內，屬於陳述之範圍內之任何明確排除之界限。當陳述之範圍包括一個或兩個界限時，排除彼等包括之界限中之任一者或兩者的範圍亦包括在本發明中。
本文陳述之本發明之許多修改及其他實施例將會由熟習此等發明所屬技術者想到，其具有前面的描述及相關附圖中提出之教導之益處。因此，應理解，本發明不限於所揭示之具體實施例，且修改及其他實施例意欲包括在所附申請專利範圍之範疇內。雖然在本文中採用特定術語，但是其僅用於一般性及描述性意義，且不為了限制目的。進一步實施例
實施例1. 一種式I化合物：(I) 其中， R1 為氫、鹵素、甲基、CF3 、CHF2 、CH2 OH或氰基； R2 為： 5至10員雜芳基或5至10員雜環基，其具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且視情況經一、二、三或四個取代基R6 、R7 、R8 及R8’ 取代，該等取代基之各者獨立地選自由以下所組成之群組： i.分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基或C1-6 伸烯基，其中該烷基、烯基及伸烯基可視情況經一至四個羥基、鹵素、腈、胺基、單(C1-6 )烷基胺基-、二(C1-6 )烷基胺基-、-SO2 Ry 、SONRy 、–(CO)NRy Rz 或–NRy (CO)Rz 取代，其中Ry 及Rz 在各情況下獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代； ii.NRy Rz -C(O)-，其中Ry 及Rz 各自獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代取代； iii.羥基(C1-6 )烷基； iv.C1-6 烷氧基，其中該烷氧基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代； v.C3-9 環烷基、經取代之或未經取代之C6 芳基、經取代之或未經取代之5員雜芳基或C2-9 雜環基； vi.鹵素； vii.胺基； viii.氰基； ix.–NRy (CO)Rz ，其中Ry 及Rz 各自獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代取代； x.–SO2 R’，其中R’為H或C1-6 烷基； xi.–SO2 NR’R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基；且 xii.其中該雜環基中嵌入之碳與其所結合之氧一起可形成羰基；或 R2 為C6-10 芳基，其具有一、二、三或四個取代基，該等取代基選自由以下所組成之群組：分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C3-4 環烷基，其中該烷基、烯基、伸烯基及環烷基可經胺基、羥基、氰基、鹵素、醯胺、單(C1-6 )烷基胺基-、二(C1-6 )烷基胺基-、-SO2 Rc 、SONRd 、–(CO)NRc Rd 及–NRc (CO)Rd 取代， 其中Rc 及Rd 各自獨立地選自由氫及C1-6 烷基所組成之群組，其中該烷基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代；或 R2 為氫或–SO2 NH2 ； R3 為C1-6 烷基、氫、氰基或鹵素；且 R4 為A-C(O)-，其中A為： i.C3-7 環烷基、C2-9 雜芳基或C2-9 雜環基，其中該環烷基、雜芳基或雜環基可視情況經R5 之一、二、三或四者取代，其中R5 係選自由以下所組成之群組：氫、分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基，其中該烷基、烯基及伸烯基可經胺基、C1-6 烷氧基、羥基、鹵素、-SO2 Re 及醯胺；鹵素、羥基(C1-6 )烷基、鹵基(C1-6 )烷基、氰基、氰基(C1-6 )烷基、羥基、C1-6 烷氧基、胺基、C2-9 雜芳基、-SO2 Re 及NRe Rf -C(O)-取代，其中Re 及Rf 獨立地選自由氫及分支鏈或直鏈C1-6 烷基所組成之群組； 或，該環烷基或雜環基與R5 之兩者一起形成雙環或螺環，其中連接至不同原子之R5 之兩者與其各自所連接之碳一起形成雙環，或連接至同一碳之R5 之兩者與其各自所連接之碳一起形成螺環；及 ii.–NHRg ，其中Rg 係選自由以下所組成之群組： a.分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C3-5 環烷基C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基及C3-7 環烷基，其中該烷基、烯基、伸烯基、雜環基及環烷基可視情況經羥基、鹵素、-CF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 )烷基胺基、單(C1-6 )烷基胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、–SO2 R’、–SO2 NR’R”、–(CO)NR’R”或–NR’(CO)R”取代，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基；及 b.C2-9 雜芳基或C6-10 芳基，其中該雜芳基具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且其中該芳基及雜芳基可視情況經一、二、三或四個取代基取代，該等取代基選自由以下所組成之群組：分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基、C3-7 環烷基、羥基、鹵素、-CF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 )烷基胺基、單(C1-6 )烷基胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、–SO2 R’、–SO2 NR’R”、–(CO)NR’R”及–NR’(CO)R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基； 或R4 為D，其中D為： 5至10員雜芳基，其具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且視情況經一、二、三或四個取代基取代。
實施例2. 如實施例第1項之化合物，其中R3 為氫。
實施例3. 如實施例第2項之化合物，其中R1 為氫、氟或氰基。
實施例4. 如實施例第3項之化合物，其中R5 不為氫。
實施例5. 如實施例第4項之化合物，其中R4 為A-C(O)-，其中A為：或， 其中v為零、一、二、三或四；X、Y及Z各自獨立地為不存在的或-CH2 -，且其中若存在，則X、Y及Z之各者上之H之零、一或兩者可為R5 。
實施例6. 如實施例第4項之化合物，其中R4 為A-C(O)-，其中A為：或， 其中v為零、一、二、三或四；X、Y及Z各自獨立地為不存在的或-CH2 -，且其中若存在，則X、Y及Z之各者上之H之零、一或兩者可為R5 。
實施例7. 如實施例第2項之化合物，其中R4 為A-C(O)-，其中A為：，其中v為零、一或二。
實施例8. 如實施例第7項之化合物，其中A為：，其中v為零、一或二。
實施例9. 如實施例第8項之化合物，其中R5 不為氫，且A為：、、或。
實施例10. 如實施例第7項之化合物，其中A為：，其中v為零、一或二。
實施例11. 如實施例第10項之化合物，其中R5 不為氫，且A為：、、或。
實施例12. 如實施例第2項之化合物，其中R5 係選自由以下所組成之群組：氫、氟、氰基、NH2 -C(O)-、C2-9 雜芳基、氰基(C1-6 )烷基及羥基(C1-6 )烷基。
實施例13. 如實施例第12項之化合物，其中R5 為氟或氰基。
實施例14. 如實施例第13項之化合物，其具有以下結構之一者：、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、及。
實施例15. 如實施例第12項之化合物，其中R5 為C2-9 雜芳基。
實施例16. 如實施例第15項之化合物，其中該C2-9 雜芳基為含有至少一個氮之視情況經取代之雜芳基。
實施例17. 如實施例第16項之化合物，其中該雜芳基為含有1或2個氮原子之視情況經取代之5員雜芳基。
實施例18. 如實施例第17項之化合物，其中該5員雜芳基為視情況經取代之吡唑。
實施例19. 如實施例第18項之化合物，其具有以下結構之一者：、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、及。
實施例20. 如實施例第12項之化合物，其中至少一個R5 為氰基(C1-6 )烷基。
實施例21. 如實施例第20項之化合物，其中至少一個R5 為氰基-CH2 -。
實施例22. 如實施例第21項之化合物，其具有以下結構之一者：、、及。
實施例23. 如實施例第12項之化合物，其中R5 為氫。
實施例24. 如實施例第23項之化合物，其具有以下結構之一者：、、、、、、、及。
實施例25. 如實施例第1項之化合物，其中R4 為D，且其中D為含有至少一個氮之視情況經取代之雜芳基。
實施例26. 如實施例第25項之化合物，其中該雜芳基為含有1或2個氮原子之視情況經取代之5員雜芳基。
實施例27. 如實施例第26項之化合物，其中該5員雜芳基為視情況經取代之吡唑。
實施例28. 如實施例第27項之化合物，其中該視情況經取代之吡唑為， 其中波形線表示與N之連接點；且其中RA 為分支鏈或直鏈C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個羥基、鹵素、腈、胺基、單(C1-6 )烷基胺基-、二(C1-6 )烷基胺基-或–NRy (CO)Rz 取代，其中Ry 及Rz 在各情況下獨立地為氫或C1-6 烷基。
實施例29. 如實施例第28項之化合物，其中RA 為經羥基、鹵素、腈或胺基取代之直鏈C1-6 烷基。
實施例30. 如實施例第29項之化合物，其中該直鏈C1-6 烷基為經腈取代之乙基。
實施例31. 如實施例第30項之化合物，其中RA 為。
實施例32. 如實施例第31項之化合物，其中RA 為或。
實施例33. 如實施例第31項之化合物，其具有以下結構之一者：、、、、、、、、及。
實施例34. 如實施例第1項之化合物，其中R2 為視情況經取代之5至10員雜芳基或視情況經取代之5至10員雜環基。
實施例35. 如實施例第34項之化合物，其中R2 係選自由以下所組成之群組：、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、 ；及； 其各者可視情況經一、二或三個取代基R6 、R7 及R8 取代。
實施例36. 如實施例第35項之化合物，其中R2 為：。
實施例37. 如實施例第36項之化合物，其中R2 為：。
實施例38. 如實施例第37項之化合物，其中R2 為：。
實施例39. 如實施例第38項之化合物，其中R2 為：。
實施例40. 如實施例第39項之化合物，其中R6 為C1-6 烷基或羥基(C1-6 )烷基。
實施例41. 如實施例第40項之化合物，其中R6 為甲基。
實施例42. 如實施例第41項之化合物，其具有以下結構之一者：、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、及。
實施例43. 如實施例第35項之化合物，其中R2 為：。
實施例44. 如實施例第43項之化合物，其中R2 為：。
實施例45. 如實施例第44項之化合物，其中R2 為：。
實施例46. 如實施例第45項之化合物，其中R6 為分支鏈或直鏈C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個羥基或鹵素取代。
實施例47. 如實施例第46項之化合物，其中R2 為：。
實施例48. 如實施例第47項之化合物，其具有以下結構之一者：、及。
實施例49. 如實施例第35項之化合物，其中R2 為：。
實施例50. 如實施例第49項之化合物，其中R2 為：。
實施例51. 如實施例第50項之化合物，其中R6 為分支鏈或直鏈C1-6 烷基。
實施例52. 如實施例第51項之化合物，其中R6 為甲基、乙基或異丙基。
實施例53. 如實施例第52項之化合物，其具有以下結構之一者：、、、、、、、、、、、、及。
實施例54. 如實施例第35項之化合物，其中R2 為：。
實施例55. 如實施例第54項之化合物，其中R2 為：。
實施例56. 如實施例第55項之化合物，其中R2 為：。
實施例57. 如實施例第56項之化合物，其中R6 為分支鏈或直鏈C1-6 烷基。
實施例58. 如實施例第57項之化合物，其中R6 為甲基。
實施例59. 如實施例第58項之化合物，其具有以下結構之一者：、及。
實施例60. 如實施例第35項之化合物，其中R2 為：；；；；；、或。
實施例61. 如實施例第35項之化合物，其中R6 、R7 及R8 之一者為O，且與其所連接之碳一起形成羰基。
實施例62. 如實施例第61項之化合物，其中R2 為、或， 其中R7 為氫或C1-6 烷基。
實施例63. 如實施例第62項之化合物，其具有以下結構之一者：、、、、、、、、、及。
實施例64. 如實施例第1項之化合物，其具有以下結構之一者：、、及。
實施例65. 一種醫藥組成物，其包含如實施例第1項至第64項中任一項之化合物及醫藥學上可接受之載劑。
實施例66. 如實施例第65項之醫藥組成物，其中該組成物進一步包含化療劑。
實施例67. 如實施例第66之醫藥組成物，其中該化療劑為免疫治療劑。
實施例68. 一種抑制HPK1之方法，該方法包含使HPK1與有效量之如實施例第1項至第64項中任一項之化合物或如實施例第65項至第67項中任一項之醫藥組成物接觸。
實施例69. 一種用於增強有需要之受試者中之免疫反應之方法，其中該方法包含向該受試者投與有效量之如實施例第1項至第64項中任一項之化合物或如實施例第65項至第67項中任一項之醫藥組成物。
實施例70. 如實施例第69項之方法，其中相對於投與該化合物或醫藥組成物之前，該受試者中之T細胞具有以下之至少一者：促發增強、活化增強、遷移增強、增殖增強、存活增強及細胞溶解活性增強。
實施例71. 如實施例第70項之方法，其中該T細胞活化之特徵在於相對於投與該化合物或醫藥組成物之前，γ-IFN+ CD8 T細胞頻率升高或由T細胞產生之IL-2或顆粒酶B水準增加。
實施例72. 如實施例第71項之方法，其中相對於投與化合物或醫藥組成物之前，T細胞之數目升高。
實施例73. 如實施例第70項至第72項中任一項之方法，其中該T細胞為抗原特異性CD8 T細胞。
實施例74. 如實施例第73項之方法，其中相對於投與該化合物或醫藥組成物之前，該受試者中之抗原呈現細胞之成熟及活化增強。
實施例75. 如實施例第74項之方法，其中該抗原呈現細胞為樹突細胞。
實施例76. 如實施例第74項之方法，其中該抗原呈現細胞之成熟之特徵在於CD83+ 樹突細胞之頻率增加。
實施例77. 如實施例第74項之方法，其中該抗原呈現細胞之活化之特徵在於樹突細胞上CD80及CD86之表現升高。
實施例78. 如實施例第68項至第77項中任一項之方法，其中該受試者患有癌症。
實施例79. 一種治療HPK1依賴性病症之方法，該方法包含向有需要之受試者投與有效量之如實施例第1項至第64項中任一項之化合物或如實施例第65項至第67項中任一項之醫藥組成物。
實施例80. 如實施例第79項之方法，其中該HPK1依賴性病症為癌症。
實施例81. 如實施例第78項或第80項之方法，其中該癌症包含至少一種選自由以下所組成之群組之癌症：結腸直腸癌、黑色素瘤、非小細胞肺癌、卵巢癌、乳癌、胰腺癌、血液學惡性腫瘤及腎細胞癌。
實施例82. 如實施例第78項、第80項或第81項中任一項之方法，其中該癌症之T細胞浸潤水準升高。
實施例83. 如實施例第78項、第80項、第81項或第82項中任一項之方法，其中相對於投與該化合物或組成物之前，該受試者中之該癌細胞之MHC I類抗原表現選擇性地升高。
實施例84. 如實施例第78項、第80項、第81項、第82項或第83項中任一項之方法，其中該方法進一步包含向該受試者投與化療劑。
實施例85. 如實施例第84項之方法，其中該化療劑與該化合物或該組成物同時向該受試者投與。
實施例86. 如實施例第84項之方法，其中該化療劑在投與該化合物或該組成物之前向該受試者投與。
實施例87. 如實施例第84項之方法，其中該化療劑在投與該化合物或該組成物之後向該受試者投與。

Claims (60)

  1. 一種式I化合物：(I) 或其醫藥學上可接受之鹽，其中， R1 為氫、鹵素、氰基、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C1-6 鹵烷基、C1-6 羥烷基、羥基、C1-6 烷氧基、視情況經取代之胺基或視情況經取代之醯胺基； R2 為(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)或(h)： (a) 5至10員員雜芳基或5至10員雜環基，其具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且視情況經一、二、三、四或五個取代基取代；或 (b) C6-10 芳基，其視情況經一、二、三、四或五個取代基取代；或 (c) 氫、–NHSO2 Ra 、–SO2 NRa Rb ；或–SO2 NH2 ；其中各Ra 獨立地為C1-6 烷基，且Rb 為氫或C1-6 烷基；或 (d) –ORa1 或–(C1-6 伸烷基)–ORa1 ；其中各Ra1 獨立地為視情況經C6-10 芳基取代之C1-6 烷基；5至10員雜芳基；或5至10員雜環基；其中該5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經取代；或 (e) C1-6 烷基，其視情況經一至五個取代基取代；或 (f) C3-8 環烷基，其視情況經一至五個取代基取代； (g) –C(O)NRa2 Rb2 ，其中各Ra2 獨立地為氫或C1-6 烷基，且Rb2 為氫、C1-6 烷基、5至10員雜芳基或5至10員雜環基，其中該5至10員雜芳基及5至10員雜環基視情況經取代；或 (h) 5至10員雜芳基，其與選自由以下所組成之群組之環稠合：5或6員雜芳基、5至10員雜環基、C6 芳基及C3-7 環烷基，其中R2 之該5至10員雜芳基及該稠環視情況經一至四個取代基取代； R3 為氫、氰基、鹵素、視情況經取代之C1-6 烷基、視情況經取代之C2-9 雜環基或視情況經取代之C1-6 烷氧基；且 R4 為A-C(O)-或D； A為C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-9 雜芳基、C2-9 雜環基、–NHRg 或–ORh ；其中A之該C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-9 雜芳基及C2-9 雜環基視情況獨立地經一、二、三、四或五個取代基取代； Rg 及Rh 獨立地為C1-6 烷基、C2-6 烯基、C3-7 環烷基、C6-10 芳基、C2-9 雜芳基或C2-9 雜環基；其中Rg 及Rh 之該C1-6 烷基、C2-6 烯基、C3-7 環烷基、C6-10 芳基、C2-9 雜芳基及C2-9 雜環基視情況經一、二、三、四或五個取代基取代；且 D為氫、或具有1至4個選自O、S及N之雜原子之5至10員雜芳基；或與選自由以下所組成之群組之環稠合之5至10員雜芳基：5或6員雜芳基、5至10員雜環基、C6 芳基及C3-8 環烷基；其中D之該5至10員雜芳基及該稠環視情況經一、二、三、四或五個取代基取代； 其條件為該化合物不為選自由以下所組成之群組之化合物：N-(8-胺基-3-異喹啉基)-N'-乙基-脲、5-[(8-胺基-3-異喹啉基)胺基]-2-吡嗪甲腈及5-[(8-胺基-3-異喹啉基)胺基]-3-[(1R)-2-(二甲基胺基)-1-甲基乙氧基]-2-吡嗪甲腈及其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中R2 為5至10員雜芳基或5至10員雜環基，其具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且視情況經一、二、三、四或五個取代基取代。
  3. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中R2 係選自由以下所組成之群組：、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、及；其各者可視情況經取代。
  4. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中R2 係選自由以下所組成之群組：、、、、、、、、、、、、、、、、及；其各者視情況經取代。
  5. 如申請專利範圍第4項之化合物，其中R2 為：、、或其中R6 、R7 及R8 各自獨立地選自由以下所組成之群組： i. 分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基或C1-6 伸烯基，其中該烷基、烯基及伸烯基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、腈、胺基、單(C1-6 烷基)胺基-、二(C1-6 烷基)胺基-、-SO2 Ry 、-S(O)NRy 、–(CO)NRy Rz 及-NRy (CO)Rz ，其中Ry 及Rz 在各情況下獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組； ii. NRy Rz -C(O)-，其中Ry 及Rz 各自獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組； iii. 羥基(C1-6 烷基)； iv. C1-6 烷氧基，其中該烷氧基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組； v. C3-9 環烷基、經取代之或未經取代之C6 芳基、經取代之或未經取代之5員雜芳基或C2-9 雜環基； vi. 鹵素； vii. 胺基； viii. 氰基； ix. –NRy C(O)Rz ，其中Ry 及Rz 各自獨立地為氫或C1-6 烷基，其中該烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由羥基及鹵素所組成之群組； x. –SO2 R’，其中R’為H或C1-6 烷基； xi. –SO2 NR’R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基； xii. –NR’C(O)OR” 、–NR’SO2 NR” 或–NR’S(O)R” ，其中R’獨立地為H或C1-6 烷基，且R”獨立地為C1-6 烷基、鹵基(C1-6 烷基)或視情況經C1-6 烷基取代之C6-10 芳基；且 xiii. 其中該雜環基中嵌入之碳與其所結合之氧一起可形成羰基。
  6. 如申請專利範圍第5項之化合物，其中R2 為：或。
  7. 如申請專利範圍第6項之化合物，其中R2 為：或。
  8. 如申請專利範圍第7項之化合物，其中R2 為：， 其中R6 、R7 及R8 各自獨立地選自由以下所組成之群組：氫、羥基、胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基及單(C1-6 烷基)胺基。
  9. 如申請專利範圍第8項之化合物，其中R6 為C1-6 烷基；R7 為氫、胺基或單(C1-6 烷基)胺基；且R8 為氫、羥基或C1-6 烷氧基。
  10. 如申請專利範圍第9項之化合物，其中R6 為甲基。
  11. 如申請專利範圍第10項之化合物，其中R7 為胺基。
  12. 如申請專利範圍第10項之化合物，其中R2 為、、、或。
  13. 如申請專利範圍第1項至第12項中任一項之化合物，其中R4 為–A-C(O)-。
  14. 如申請專利範圍第13項之化合物，其中A為： i. C3-7 環烷基、C2-9 雜芳基或C2-9 雜環基，其中該環烷基、雜芳基或雜環基可視情況經R5 之一、二、三或四者取代，其中R5 係選自由以下所組成之群組：氫、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-6 烯基、C2-6 伸烯基、鹵素、氰基、羥基、C1-6 烷氧基、視情況經取代之C2-9 雜芳基、-SO2 Re 、-NRe Rf 、-NRe C(O)Rf 、-NRe SO2 Rf 及NRe Rf -C(O)-；其中 R5 之該C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-6 烯基、C2-6 伸烯基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：C1-6 烷氧基、羥基、鹵素、氰基、-SO2 Re 、-NRe Rf 、-NRe C(O)Rf 及-C(O)NRe Rf ，其中Re 及Rf 在每次出現時獨立地選自由以下所組成之群組：氫、分支鏈或直鏈C1-6 烷基及C3-7 環烷基； 或，該環烷基或雜環基與R5 之兩者一起形成雙環或螺環，其中連接至不同原子之R5 之兩者與其各自所連接之碳一起形成雙環，或連接至同一碳之R5 之兩者與其各自所連接之碳一起形成螺環； ii. –NHRg 或–ORh ，其中Rg 及Rh 獨立地選自由以下所組成之群組： a. 分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基及C3-7 環烷基，其中該烷基、烯基、伸烯基、雜環基及環烷基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、-CHF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 烷基)胺基、單(C1-6 烷基)胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、–SO2 R’、–SO2 NR’R”、–C(O)NR’R”、-NR’C(O)R”、-NR’C(O)OR”、-NR’C(O)NR”R’”、-NR’SO2 NR”R’”或-NR’S(O)R” ，其中R’及R”’獨立地為H或C1-6 烷基且R”獨立地為C1-6 烷基、鹵基(C1-6 烷基)或視情況經C1-6 烷基取代之C6-10 芳基；或，R”及R’”與其所連接之氮一起形成經取代之或未經取代之雜環基；及 b. C2-9 雜芳基或C6-10 芳基，其中該雜芳基具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且其中該芳基及雜芳基可視情況經一、二、三或四個取代基取代，該等取代基選自由以下所組成之群組：分支鏈或直鏈C1-6 烷基、C1-6 烯基、C1-6 伸烯基、C2-9 雜環基、C3-7 環烷基、羥基、鹵素、-CHF2 、-CF3 、胺基、二(C1-6 烷基)胺基、單(C1-6 烷基)胺基、氰基、C3-7 環烷基、C1-6 烷氧基、-SO2 R’、–SO2 NR’R”、–C(O)NR’R”及–NR’C(O)R”，其中R’及R”獨立地為H或C1-6 烷基；或 iii. C1-6 烷基，其視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：羥基、鹵素、氰基、C1-6 烷氧基、胺基、單(C1-6 烷基)胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C3-7 環烷基、C6-10 芳基、5至10員雜芳基、5至10員雜環基、–SO2 R’、–SO2 NR’R”、–C(O)NR’R”、-NR’C(O)R”、-NR’C(O)OR”、-NR’C(O)NR”R’”、-NR’SO2 NR”R’”及-NR’S(O)R”； 其中R’及R”’獨立地為H或C1-6 烷基，且R”獨立地為C1-6 烷基、鹵基(C1-6 烷基)或視情況經C1-6 烷基取代之C6-10 芳基；或，R”及R’”與其所連接之氮一起形成視情況經取代之C3-7 雜環基。
  15. 如申請專利範圍第14項之化合物，其中A為視情況經取代之C3-7 環烷基。
  16. 如申請專利範圍第15項之化合物，其中R4 為：， 其中v為0、1、2或3；且 R5 係選自由以下所組成之群組：C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-6 烯基、C2-6 伸烯基、鹵素、氰基、羥基、C1-6 烷氧基、視情況經取代之C2-9 雜芳基、-SO2 Re 、-NRe Rf 、-NRe C(O)Rf 、-NRe SO2 Rf 及NRe Rf -C(O)-；其中R5 之該C1-6 烷基、C3-7 環烷基、C2-6 烯基、C2-6 伸烯基可視情況經一至四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：C1-6 烷氧基、羥基、鹵素、氰基、-SO2 Re 、-NRe Rf 、-NRe C(O)Rf 及-C(O)NRe Rf ，其中Re 及Rf 在每次出現時獨立地選自由以下所組成之群組：氫、分支鏈或直鏈C1-6 烷基及C3-7 環烷基。
  17. 如申請專利範圍第16項之化合物，其中各R5 獨立地選自由以下所組成之群組：氫、C1-6 烷基、C3-7 環烷基、鹵素、氰基、羥基、C1-6 烷氧基及C2-9 雜芳基，其中該烷基、環烷基及雜芳基視情況經取代。
  18. 如申請專利範圍第17項之化合物，其中至少一個R5 為C1-6 烷基。
  19. 如申請專利範圍第18項之化合物，其中該C1-6 烷基為甲基或乙基。
  20. 如申請專利範圍第17項之化合物，其中R5 之一者為視情況經取代之C2-9 雜芳基。
  21. 如申請專利範圍第20項之化合物，其中該視情況經取代之C2-9 雜芳基為視情況經取代之C3 雜芳基。
  22. 如申請專利範圍第21項之化合物，其中該視情況經取代之C3 雜芳基為視情況經取代之吡唑。
  23. 如申請專利範圍第22項之化合物，其中該視情況經取代之吡唑為， 其中波形線表示與環丙基環之連接點；且其中RB1 為C1-6 烷基。
  24. 如申請專利範圍第17項之化合物，其中R4 為：、、、、或。
  25. 如申請專利範圍第1項至第12項中任一項之化合物，其中R4 為D。
  26. 如申請專利範圍第25項之化合物，其中D為5至10員雜芳基，其具有1至4個選自O、S及N之雜原子；且視情況經一、二、三或四個取代基取代，其中連接至不同原子之取代基之兩者與各自所連接之原子一起形成雙環或三環，其中該雙環或三環視情況經取代；或，該5至10員雜芳基與選自由以下所組成之群組之環稠合：5或6員雜芳基、5至10員雜環基、C6 芳基及C3-8 環烷基，其中D之該5至10員雜芳基及該稠環視情況經取代，其中該稠環形成視情況經取代之雙環或三環系統。
  27. 如申請專利範圍第26項之化合物，其中D為含有至少一個氮之視情況經取代之雜芳基。
  28. 如申請專利範圍第27項之化合物，其中該視情況經取代之5員雜芳基為視情況經取代之吡唑。
  29. 如申請專利範圍第28項之化合物，其中該視情況經取代之吡唑與另一環部分稠合形成視情況經取代之雙環或三環。
  30. 如申請專利範圍第29項之化合物，其中該雙環或三環為、、或， 其中X’及Y’各自獨立地為C、N、S或O；且 其中該雙環視情況經一、二、三或四個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下所組成之群組：氫、羥基、胺基及C1-6 烷基；且其中該等取代基之兩者與其所連接之原子一起可形成C3 -C5 螺環或C2-9 雜芳基環；其中該C2-9 雜芳基環可稠合至該雙環形成三環。
  31. 如申請專利範圍第30項之化合物，其中X’或Y’之至少一者為N。
  32. 如申請專利範圍第30項之化合物，其中該雙環或三環為：、、、或。
  33. 如申請專利範圍第25項之化合物，其中D為具有式之5員雜芳基或具有式之6員雜芳基，其中： Q為NR20 、CR20 、O或S； 各T獨立地為N或CR21 ； 各Z獨立地為N或C，其條件為僅一個Z為N； 各R20 及R21 獨立地為氫、烷基、鹵烷基、烷氧基、鹵素、羥基或氰基；且 R22 及R23 與其所連接之原子一起形成雙環；其中該雙環可含有一或多個選自N、S及O之雜原子；且其中該雙環視情況經一、二、三、四或五個R30 取代； 其中各R30 獨立地為C1-6 烷基、C2-6 烯基、C3-7 環烷基、C3-7 雜環基、鹵素、氰基、側氧基、-NR31 R32 、-SO2 NR31 R32 、-C(O)NR31 R32 、-C(O)OR33 、-OR33 、-NR33 C(O)R34 、–NR33 SO2 R35 或–SO2 R35 ；其中R30 之該C1-6 烷基、C2-6 烯基、C3-7 環烷基及C3-7 雜環基視情況經一至四個R40 取代；或，兩個R30 基與其所連接之母部分一起形成視情況經一至四個R40 取代之環； 各R31 及R32 獨立地為氫或C1-6 烷基；或，R31 及R32 與其所連接之氮原子一起形成視情況經一至四個R40 取代之C3-7 雜環基； 各R33 及R34 獨立地為氫或C1-6 烷基； R35 為C1-6 烷基； 各R40 獨立地選自由以下所組成之群組：鹵素、氰基、側氧基、-NR41 R42 、-SO2 NR41 R42 、-C(O)NR41 R42 、-C(O)OR43 、-OR43 、-NR43 C(O)R44 、–NR43 SO2 R45 或-SO2 R45 ；C1-6 烷基、C1-6 鹵烷基[例如，-CHF2 或-CF3 ]、C2-9 雜芳基、C6-10 芳基、側氧基；或，兩個R40 基與其所連接之母部分一起形成視情況經一至三個取代基取代之環，該等取代基選自C1-6 烷基、C1-6 鹵烷基、羥基及側氧基； 各R41 及R42 獨立地為氫或C1-6 烷基；或，R41 及R42 與其所連接之氮原子一起形成視情況經一至三個取代基取代之C3-7 雜環基，該等取代基選自C1-6 烷基、C1-6 鹵烷基、羥基及側氧基； 各R33 及R34 獨立地為氫或C1-6 烷基；且 R35 為C1-6 烷基。
  34. 如申請專利範圍第33項之化合物，其中D為、、或， 其中q為0、1、2、3、4、5或6； R36 獨立地為氫或R30 ；且 R20 及R30 如在申請專利範圍第33項中所定義。
  35. 如申請專利範圍第34項之化合物，其中D為或， 其中R36 獨立地為氫或C1-6 烷基；且R20 為氫。
  36. 如申請專利範圍第33項之化合物，其中D為或， 其中p為0、1、2、3或4； R36 獨立地為氫或R30 ；且 R20 及R30 如在申請專利範圍第33項中所定義。
  37. 如申請專利範圍第33項之化合物，其中D為或， 其中X為CH2 、N、O或S； n為1、2、3或4； p為0、1、2、3或4； R36 為氫或R30 ；且 R20 及R30 如在申請專利範圍第33項中所定義。
  38. 如申請專利範圍第33項之化合物，其中D為、或， 其中q為0、1、2、3、4、5或6；且R20 及R30 如在申請專利範圍第33項中所定義。
  39. 如申請專利範圍第33項之化合物，其中D為或， 其中Q為NR20 、O或S； X為CR38a R38b 、NR36 、O或S， X’為CR39a R39b 、NR36 、O、S或SO2 ， R36 、R37a 、R37b 、R38a 及R38b 獨立地為氫或R30 ； R39a 及R39b 獨立地為氫或R30 ，或，R39a 及R39b 與其所連接之碳原子一起形成C3-7 環烷基或C3-7 雜環基；且 R20 及R30 如在申請專利範圍第33項中所定義。
  40. 如申請專利範圍第39項之化合物，其中D為、或。
  41. 如申請專利範圍第33項之化合物，其中D為， 其中q為0、1、2、3、4、5或6； G獨立地為C或N； G’獨立地為N、NR46 、CR47 、S或O； R46 及R47 獨立地為氫或R40 ，且 R20 及R40 如在申請專利範圍第33項中所定義。
  42. 如申請專利範圍第41項之化合物，其中D為或。
  43. 如申請專利範圍第1項至第42項中任一項之化合物，其中R1 為氫、鹵基或甲基。
  44. 如申請專利範圍第43項之化合物，其中R1 為氟。
  45. 如申請專利範圍第1項至第44項中任一項之化合物，其中R3 為氫。
  46. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物係選自由以下所組成之群組：表1中之化合物號1、2、3、4、5、6、7、8、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、30、31、32、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、54、55、56、57、59、60、61、62、63、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、78、79、80、81、82、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、113、115、116、117、118、119、122、123、124、125、126、127、128、130、131、132、133、134、135、136、138、139、140、143、144、145、146、147、148、149、150、151、153、154、155、156、157、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229及230、或其醫藥學上可接受之鹽。
  47. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物係選自由以下所組成之群組：表1中之化合物號9至12、29、33至36、53、58、64、83、84、96、97、111、112、114、120、121、129、137、141、142、152及158、以及表2中之化合物號231至390、或其醫藥學上可接受之鹽。
  48. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物係選自表3中之化合物號391至528或其醫藥學上可接受之鹽。
  49. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第1項至第48項中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；及醫藥學上可接受之載劑。
  50. 如申請專利範圍第49項之醫藥組成物，其中該組成物進一步包含化療劑。
  51. 一種抑制HPK1之方法，該方法包含使受試者中之HPK1與有效量之如申請專利範圍第1項至第48項中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；或如申請專利範圍第49項或第50項之醫藥組成物接觸。
  52. 一種用於增強有需要之受試者中之免疫反應之方法，其中該方法包含向該受試者投與有效量之如申請專利範圍第1項至第48項中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；或如申請專利範圍第49項或第50項之醫藥組成物。
  53. 如申請專利範圍第51項或第52項之方法，其中該受試者患有癌症。
  54. 一種治療HPK1依賴性病症之方法，該方法包含向有需要之受試者投與有效量之如申請專利範圍第1項至第48項中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；或如申請專利範圍第49項或第50項之醫藥組成物。
  55. 如申請專利範圍第54項之方法，其中該HPK1依賴性病症為癌症。
  56. 如申請專利範圍第53項或第55項之方法，其中該癌症包含至少一種選自由以下所組成之群組之癌症：結腸直腸癌、黑色素瘤、非小細胞肺癌、卵巢癌、乳癌、胰腺癌、血液學惡性腫瘤及腎細胞癌。
  57. 如申請專利範圍第51項至第56項中任一項之方法，其中該方法進一步包含向該受試者投與化療劑。
  58. 如申請專利範圍第1項至第48項中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；或如申請專利範圍第49項或第50項之醫藥組成物；其用於如申請專利範圍第51項至第57項中任一項之方法中。
  59. 如申請專利範圍第1項至第48項中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；或如申請專利範圍第49項或第50項之醫藥組成物用於製造用於如申請專利範圍第51項至第57項中任一項之方法中的藥物之用途。
  60. 如申請專利範圍第1項至第48項中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；或如申請專利範圍第49項或第50項之醫藥組成物在如申請專利範圍第51項至第57項中任一項之方法中之用途。
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