CN115463184B - 一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及益生菌技术领域，具体涉及一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物及其制备方法和应用。组合物包括组分A和组分B：组分A包括蜂蜡，组分B包括复合益生菌。制备方法包括如下步骤：（1）将组分B中组分混合均匀，得混合物料一；（2）将组分A中组分混合加热熔化，倒入步骤（1）制得的混合物料一，搅匀，得混合物料二；（3）将混合物料二迅速喂入造粒机，在风冷作用下造粒，得成品。本发明制得的组合物耐胃酸、胆盐能力强，活菌成活率高，可有效延长失眠患者的睡眠时间，缓解失眠。

Description

一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物及其制备方法和 应用
技术领域
本发明涉及益生菌技术领域，具体涉及一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物及其制备方法和应用。
背景技术
失眠是由于入睡或睡眠持续困难导致的睡眠质量和时间下降，不能满足正常生理和体能恢复的需要，影响正常社会功能的一种主观体验，长期失眠将严重影响大脑和身体的功能，通过药物可治疗失眠，然而药物治疗副作用较大，危害人体健康。
现有研究表明，益生菌作为一种有益的微生物能够调节肠道菌群，有助于改善睡眠质量，缓解失眠，然而其存在的技术缺陷为，益生菌在消化道内耐酸性等不佳，导致其成活率较低，缓解治疗失眠效果不甚理想。
发明内容
针对益生菌治疗失眠效果不佳技术问题，本发明提供一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物及其制备方法和应用，制得的组合物耐胃酸耐胆盐能力强，活菌成活率高，可有效延长失眠患者的睡眠时间，缓解失眠。
第一方面，本发明提供一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物，包括组分A和组分B：组分A包括蜂蜡，组分B包括复合益生菌。
进一步的，组分A包括大豆卵磷脂、蜂胶、蜂蜡；组分B包括植物乳杆菌、乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、凝结芽孢杆菌。
进一步的，组分A包括如下重量分数的组分，大豆卵磷脂3~6份、蜂胶2~8份、蜂蜡35~40份；组分B包括如下重量分数的组分，麦芽糊精45~50份、低聚果糖3~7份、植物乳杆菌1~3份、乳双歧杆菌1~3份、鼠李糖乳杆菌1~4份、罗伊氏乳杆菌0.5~2份、凝结芽孢杆菌1~3份。
进一步的，植物乳杆菌活菌数为6×1010cfu/g~3×1011cfu/g，乳双歧杆菌活菌数为4×1010cfu/g~2×1011cfu/g，鼠李糖乳杆菌活菌数为6×1010cfu/g~3×1011cfu/g，罗伊氏乳杆菌活菌数为5×1010cfu/g~3×1011cfu/g，凝结芽孢杆菌活菌数为8×109cfu/g~3×1010cfu/g。
进一步的，组分A包括如下重量份数的组分，大豆卵磷脂3~6份、蜂胶2~8份、蜂蜡35~40份；组分B包括如下重量份数的组分，虾青素3~7份、香蕉皮提取物15~25份、榆皮粉15~25份、低聚果糖3~7份、植物乳杆菌1~3份、乳双歧杆菌1~3份、鼠李糖乳杆菌1~4份、罗伊氏乳杆菌0.5~2份、凝结芽孢杆菌1~3份。
进一步的，植物乳杆菌活菌数为6×1010cfu/g~3×1011cfu/g，乳双歧杆菌活菌数为4×1010cfu/g~2×1011cfu/g，鼠李糖乳杆菌活菌数为6×1010cfu/g~3×1011cfu/g，罗伊氏乳杆菌活菌数为5×1010cfu/g~3×1011cfu/g，凝结芽孢杆菌活菌数为8×109cfu/g~3×1010cfu/g。
本申请组分中：
大豆卵磷脂：为良好的心理调和剂，可消除疲劳，激活脑细胞，改善因神经紧张而引起的焦躁、易怒、失眠等症。
蜂胶：蜂胶对改善睡眠有良好的作用，而且用量很小，便能起到很好的效果，安全无毒性，亦不会出现不良反应。蜂胶通过调节血压、血脂、血糖来降低血液粘稠度，增加血流量，改善血液循环，为脑组织及中枢神经系统功能调节，提供足够的能量。并可通过改善细胞膜的通透性，影响脑组织网状结构上行激活系统及多巴胺系统，达到抑制条件反射，条件反射、减少自发及被动活动，从而改善睡眠。蜂胶改善睡眠的新发现，也是蜂胶养生保健的新方法。
蜂蜡：受热融化，融化后可对复合益生菌进行包埋形成颗粒，为包埋颗粒形成的主要原料。
虾青素：虾青素就可以帮助褪黑素抗氧化，对失眠有一定改善作用。
香蕉皮提取物：香蕉皮中富含丰富的钾和镁，这两种微量元素是人体不可或缺的物质，能够镇定神经，起到安眠的作用。香蕉皮中的血清素与人体睡眠质量有着密切的联系，生活中可以将香蕉不剥皮来榨汁喝，可以起到一定的改善睡眠的作用，对于失眠患者们来说有着很大的帮助。香蕉皮中含有大量的血清素和色氨酸，人食用含有色胺素的物质，可以在体内合成血清素，能令人镇静。
榆皮粉：《药性论》：主利五淋，治不眠。《纲目》："榆皮、榆叶，性皆滑利下降，故人小便不通，五淋肿满，喘嗽不眠，经脉胎产诸证宜之。皮、叶：安神，利小便。用于神经衰弱，失眠，体虚浮肿，失眠，体虚浮肿、产生愉悦感。
第二方面，本发明提供一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）将组分B中组分混合均匀，得混合物料一；
（2）将组分A中组分混合加热熔化，倒入步骤（1）制得的混合物料一，搅匀，得混合物料二；
（3）将混合物料二迅速喂入造粒机，在风冷作用下造粒，得成品。
第三方面，本发明提供一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物的应用，所述应用为在制备缓解失眠产品中的应用。
进一步的，缓解失眠产品包含所述含益生菌的组合物，以及在食品上可接受的辅料。
本发明的有益效果在于：
（1）本发明提供的含益生菌的组合物具有较强的耐胃酸、耐胆盐作用，保证了食用时在消化道环境中的存活率；
（2）本发明制备的含益生菌的组合物具有缓解失眠、延长睡眠时间、改善睡眠质量的作用；
（3）本发明通过组分A与组分B加热复混、造粒的方式，蜂蜡将益生菌包埋，造粒前后益生菌存活率高，提高了组合物在食用时益生菌在胃酸环境中的存活率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明具体实施方式实施例1造粒后制得含益生菌组合物的切面电镜扫面图。
图2是本发明具体实施方式测试例5的PSQI调查问卷统计结果图。
实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
实施例
一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物，包括组分A和组分B：
组分A包括：大豆卵磷脂5g、蜂胶5g、蜂蜡35g；
组分B包括：麦芽糊精45g、低聚果糖5g、植物乳杆菌1g、乳双歧杆菌1g、鼠李糖乳杆菌1g、罗伊氏乳杆菌0.5g、凝结芽孢杆菌1g；植物乳杆菌活菌数为3×1011cfu/g，乳双歧杆菌活菌数为2×1011cfu/g，鼠李糖乳杆菌活菌数为3×1011cfu/g，罗伊氏乳杆菌活菌数为3×1011cfu/g，凝结芽孢杆菌活菌数为3×1010cfu/g。
实施例1中一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）将组分B中各组分混合均匀，得混合物料一；
（2）将组分A中各组分混合加热至50~60℃熔化，降温至50℃，倒入步骤（1）制得的混合物料一，迅速搅匀，得混合物料二；
（3）将混合物料二迅速喂入造粒机，在风冷作用下进行20目造粒，得成品。
取制得样品，采用扫描电子显微镜记录其切面图片，如图1，由图1可以看出菌体被包埋于载体中，菌体经过蜂蜡包埋后，菌体未出现破损，细胞壁完整，经活菌检测，存活率下降率低。
实施例
一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物，包括组分A和组分B：
组分A包括：大豆卵磷脂5g、蜂胶5g、蜂蜡35g；
组分B包括：虾青素5g、香蕉皮提取物20g、榆皮粉20g、低聚果糖5g、植物乳杆菌1g、乳双歧杆菌1.5g、鼠李糖乳杆菌1g、罗伊氏乳杆菌0.5g、凝结芽孢杆菌1g；植物乳杆菌活菌数为1×1011cfu/g，乳双歧杆菌活菌数为1×1011cfu/g，鼠李糖乳杆菌活菌数为1×1011cfu/g，罗伊氏乳杆菌活菌数为1×1011cfu/g，凝结芽孢杆菌活菌数为1×1010cfu/g。
实施例2中一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物的制备方法同实施例1。
实施例
一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物，包括组分A和组分B：
组分A包括：大豆卵磷脂3g、蜂胶2g、蜂蜡38g；
组分B包括：麦芽糊精48g、低聚果糖3g、植物乳杆菌2g、乳双歧杆菌2g、鼠李糖乳杆菌3g、罗伊氏乳杆菌1g、凝结芽孢杆菌2g；植物乳杆菌活菌数为6×1010cfu/g，乳双歧杆菌活菌数为4×1010cfu/g，鼠李糖乳杆菌活菌数为6×1010cfu/g，罗伊氏乳杆菌活菌数为5×1010cfu/g，凝结芽孢杆菌活菌数为8×109cfu/g。
实施例3中一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物的制备方法同实施例1。
实施例
一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物，包括组分A和组分B：
组分A包括：大豆卵磷脂6g、蜂胶8g、蜂蜡40g；
组分B包括：麦芽糊精50g、低聚果糖7g、植物乳杆菌3g、乳双歧杆菌3g、鼠李糖乳杆菌4g、罗伊氏乳杆菌2g、凝结芽孢杆菌3g；植物乳杆菌活菌数为8×1010cfu/g，乳双歧杆菌活菌数为1×1011cfu/g，鼠李糖乳杆菌活菌数为2×1011cfu/g，罗伊氏乳杆菌活菌数为1×1011cfu/g，凝结芽孢杆菌活菌数为2×1010cfu/g。
实施例4中一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物的制备方法同实施例1。
实施例
一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物，包括组分A和组分B：
组分A包括：大豆卵磷脂3g、蜂胶2g、蜂蜡38g；
组分B包括：虾青素3g、香蕉皮提取物15g、榆皮粉15g、低聚果糖3g、植物乳杆菌3g、乳双歧杆菌1g、鼠李糖乳杆菌4g、罗伊氏乳杆菌2g、凝结芽孢杆菌3g；植物乳杆菌活菌数为6×1010cfu/g，乳双歧杆菌活菌数为4×1010cfu/g，鼠李糖乳杆菌活菌数为6×1010cfu/g，罗伊氏乳杆菌活菌数为5×1010cfu/g，凝结芽孢杆菌活菌数为8×109cfu/g。
实施例5中一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物的制备方法同实施例1。
实施例
一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物，包括组分A和组分B：
组分A包括：大豆卵磷脂6g、蜂胶8g、蜂蜡40g；
组分B包括：虾青素7g、香蕉皮提取物25g、榆皮粉25g、低聚果糖7g、植物乳杆菌2g、乳双歧杆菌3g、鼠李糖乳杆菌3g、罗伊氏乳杆菌1g、凝结芽孢杆菌2g；植物乳杆菌活菌数为3×1011cfu/g，乳双歧杆菌活菌数为2×1011cfu/g，鼠李糖乳杆菌活菌数为3×1011cfu/g，罗伊氏乳杆菌活菌数为3×1011cfu/g，凝结芽孢杆菌活菌数为3×1010cfu/g。
实施例6中一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物的制备方法同实施例1。
对比例
一种组合物，包括组分A和组分B：
组分A包括：大豆卵磷脂5g、蜂胶5g、蜂蜡35g；
组分B包括：虾青素5g、香蕉皮提取物20g、榆皮粉20g、麦芽糊精10g。
对比例中组合物的制备方法同实施例1。
测试例1 活菌数检测
称取25克实施例1和实施例2造粒前后样品分别倒入225克灭菌的橄榄油中，不断搅拌促使样品充分溶解。分别称取1克上述样品放入9ml 0.9%生理盐水中进行梯度稀释，活菌计数，计算实施例1和实施例2造粒前后益生菌活菌数及存活率。结果如表1所示。
表1 实施例样品造粒前后益生菌活菌数及存活率数据
由表1可知：实施例1和实施例2制备中经过蜂蜡、蜂胶和大豆卵磷脂造粒后益生菌存活率均超过90%，在可接受范围内，本发明可进行益生菌活菌数包埋造粒。
测试例2 耐胃酸检测
（1）人工胃液制备：取10%的盐酸加去离子水稀释，分别调节pH为2.0、3.0、4.0。再加入一定量的胃蛋白酶，使其终浓度为1%，再用盐酸调整溶液的pH为2.0、3.0、4.0。在无菌操作台中，用0.22μm的微孔滤膜过滤后备用。
（2）耐酸性研究：取0.5g实施例1和实施例2样品，分别与4.5mL的不同pH值的人工胃液混合（菌悬液终浓度为3×107CFU/mL），于37℃培养箱中静置培养，分别于2h、4h后取样，稀释涂布平板后37℃培养24h，测定菌落数。以未经人工胃液处理的作为对照组。
（3）存活率计算：采用如下公式：
（1）
式（1）中：N-未经人工胃液处理的乳杆菌活菌数（CFU/mL）；Na-经过人工胃液处理的乳杆菌活菌数（CFU/mL）。
实施例1对照组未经人工胃液处理的乳杆菌活菌数为1.12×1010CFU/mL。
实施例2对照组未经人工胃液处理的乳杆菌活菌数为1.14×1010CFU/mL。
实施例1、实施例2经胃酸处理后活菌数及存活率计算具体数据见表2。
表2 实施例1、实施例2经胃酸处理后活菌数及存活率数据
由表2可知：通过组分A中蜂蜡包埋造粒，益生菌被包裹在蜂蜡内形成保护，能在胃酸中很好存活。经对比，pH为2胃酸环境中，实施例1和实施例2活菌存活率超过60%，大大提高了益生菌在胃酸环境下的存活率；在pH为3和pH为4胃酸环境中，实施例1和实施例2活菌存活率均达到90%以上；以上表明，在胃酸环境中，蜂蜡包埋能有效保护益生菌的存活。
测试例3 耐胆盐实验
（1）胆盐配制：配制含胆盐浓度分别为0.1%，0.2%，0.3%的MRS培养基。
（2）胆盐耐受性研究：取0.5g实施例1和实施例2样品，分别与4.5mL不同胆盐浓度的MRS培养基混合，37℃培养2h、4h。之后取样，梯度稀释，涂布MRS平板，37℃培养24h，测定菌落数；以未经胆盐处理的作为对照。
实施例1对照组未经胆盐处理的乳杆菌活菌数为1.12×1010CFU/mL。
实施例2对照组未经胆盐处理的乳杆菌活菌数为1.14×1010CFU/mL。
（4）存活率计算：计算公式如下：
（2）
式（2）中：N'-未经过胆盐处理的乳杆菌活菌数（CFU/mL）；Na'-经过处理后的乳杆菌活菌数（CFU/mL）。
具体结果见表3。
表3实施例1、实施例2经胆盐处理后活菌数及存活率数据
由表3可知：实施例1和实施例2样品在0.1%胆盐浓度的MRS培养基中没有损失，在0.2%胆盐浓度的MRS培养基中，两者存活率均超过95%，经过4小时培养存活率略有增加；在0.3%胆盐浓度的MRS培养基中，存活率超过80%，经过4小时培养存活率略有增加。表明，本发明提供的包埋方法对益生菌有很好的保护作用，益生菌能在0.3%胆盐浓度的MRS培养基中大量存在。
测试例4 小鼠睡眠治疗实验
（1）取18～22g雌性昆明白小鼠50只，经适应饲养7天后随机分为5个处理组，分别为空白组、模型组、对比例组、实施例1组、实施例2组，每组10只。
（2）对比例组、实施例1组、实施例2组连续灌胃相应样品15d，给食剂量为人体等效剂量（人体用量为10g/d，依据体表面积折算小鼠每日给食剂量；给食体积为0.5mL/只)；空白组和模型组给予等量的蒸馏水。
（3）模型组和对比例组、实施例1组、实施例2组按照400mg/kg的剂量腹腔注射PCPA(对氯苯丙氨酸)混悬液连续2天，空白组腹腔注射同体积的生理盐水溶液。
（4）在给末次样品20min后，按照45mg/kg的剂量腹腔注射戊巴比妥钠（PCPA）溶液。注射后立刻计时并观察和记录小鼠睡眠持续时间(从翻正反射消失到翻正反射恢复的时间段)。观测结果如下表4所示。
表4 PCPA致小鼠失眠治疗效果
由表4可知：与空白组相比，模型组小鼠睡眠持续时间极显著缩短(P<0.01)，表明造模成功；与模型组相比，对比例组、实施例1组、实施例2组均显著延长了睡眠持续时间(P<0.05)，表明对比例组、实施例1组、实施例2组均能够改善PCPA致小鼠睡眠症状，延长睡眠。其中实施例2组睡眠持续时间最长，表明优选的药食同源组合与益生菌搭配具有协同延长睡眠持续时间的作用。
测试例5 人群睡眠治疗实验
睡眠障碍试验者150例，随机分组。入选标准：年龄20-75岁，有睡眠障碍的身体健康的人员。试验者随机分为试验组1、试验组2、试验组3，其中试验组1食用对比例样品，试验组2食用实施例1样品，试验组3食用实施例2样品。食用剂量3g/天，睡前半小时～1个小时前服用，服用2周后对试验者进行回访，其结果如表5、表6所示。
表5 各试验组有效率数据
由表5可知，各试验组有效率均达到80%以上，试验组1和试验组2效果差异性不明显，试验组3效果最好，有效率达到94%，说明益生菌和植物提取物组合对失眠能起到更好的作用。
表6 各试验组睡眠治疗效果数据
由表6可知，各试验组通过三种样品的试吃，睡眠时间从原来的5小时左右增加到7小时以上，睡眠质量都有所改善，入睡时间缩短，起夜多梦现象减少；其中实施例2样品效果最好，平均睡眠时间达到8小时，入睡时间块，很少有起夜多梦现象。
本次试服试验进行一个月后，再次对各试验组试验者进行回访采用匹斯堡睡眠质量指数(PSQI)调查问卷统计结果如图2所示。
匹斯堡睡眠质量指数(PSQI)反应了最近一个月的睡眠质量，入睡时间，睡眠时间，睡眠效率，睡眠障碍，催眠药物，日间功能障碍等指标的情况。
评分等级：0-5分：睡眠质量很好；5-10分：睡眠质量还行；11-15分：睡眠质量一般；16-21分：睡眠质量很差。
由图2可知：各组试验者在食用样品前PSQI指数均偏高，在15以上；在食用样品一个月以后试验者PSQI指数均下降，其中试验组1的PSQI指数下降了25%，试验组2的PSQI指数下降了41.18%，试验组3的PSQI指数下降了47.06%。由此可知试验组3的食用效果较试验组1和试验组2效果都好，对失眠人群能起到很好的作用。
尽管通过参考附图并结合优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物，其特征在于，由组分A和组分B制成：
组分A由如下重量分数的组分组成，大豆卵磷脂3~6份、蜂胶2~8份、蜂蜡35~40份；
组分B由如下重量分数的组分组成，虾青素3~7份、香蕉皮提取物15~25份、榆皮粉15~25份、低聚果糖3~7份、植物乳杆菌1~3份、乳双歧杆菌1~3份、鼠李糖乳杆菌1~4份、罗伊氏乳杆菌0.5~2份、凝结芽孢杆菌1~3份；
所述植物乳杆菌活菌数为6×1010cfu/g~3×1011cfu/g，乳双歧杆菌活菌数为4×1010cfu/g~2×1011cfu/g，鼠李糖乳杆菌活菌数为6×1010cfu/g~3×1011cfu/g，罗伊氏乳杆菌活菌数为5×1010cfu/g~3×1011cfu/g，凝结芽孢杆菌活菌数为8×109cfu/g~3×1010cfu/g；
所述组合物的制备方法包括如下步骤：
（1）将组分B中组分混合均匀，得混合物料一；
（2）将组分A中组分混合加热至50~60℃熔化，降温至50℃，倒入步骤（1）制得的混合物料一，搅匀，得混合物料二；
（3）将混合物料二造粒，得成品。
2.如权利要求1所述的一种具有促进睡眠功能的含益生菌组合物在制备缓解失眠产品中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述缓解失眠产品由权利要求1所述的组合物以及在食品上可接受的辅料制成。
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