CN114585718A - 储存稳定的包含水解酶的液体 - Google Patents

Abstract

一种均质的储存稳定的液体酶制剂，包含成分(a):至少一种选自水解酶(EC3)的酶；和成分(b):酶稳定系统，其包含(bi)至少一种通式(A)的化合物其中式(A)中的变量如下：R¹选自H和C₁‑C₁₀烷基羰基，其中烷基可以为直链或支链的，且可以带有一个或多个羟基，R²、R³、R⁴彼此独立地选自H、直链C₁‑C₅烷基、支链C₃‑C₁₀烷基、未被取代或被一个或多个羧酸酯或羟基取代的C₆‑C₁₀‑芳基、和C₆‑C₁₀‑芳基‑烷基，其中后者的烷基选自直链C₁‑C₈烷基或支链C₃‑C₈烷基，其中R²、R³和R⁴的至少一个不为H；和(bii)至少一种选自含硼化合物和肽稳定剂的化合物，和成分(c):至少一种二醇，和任选的成分(d):至少一种选自(di)溶剂和(dii)稳定酶制剂本身的化合物的化合物。

Description

储存稳定的包含水解酶的液体

酶通常作为液体浓缩物在商业上生产，通常衍生自发酵液。如果储存在水性环境中，则酶倾向于失去酶活性。因此，常规做法是将其转化为无水形式：水性浓缩物可以例如在载体材料存在下冻干或喷雾干燥以形成聚集体。然而，固体酶产品通常需要在使用前“溶解”。

通常用酶抑制剂来稳定液体产品中的酶。为了暂时抑制酶活性，可以使用可逆的酶抑制剂，其在酶的最终应用中释放，但在储存条件下保持与酶结合。

由于存在对液体含酶产品的持续需求，因此需要提供允许储存这类液体而不损失某些酶的大部分活性的组合物或制剂。具体地，需要提供包含至少一种水解酶，优选在洗涤和/或清洁过程中有效的水解酶，以及改善所包含的一种或多种酶的稳定性的成分的液体酶制剂和液体产品本身。液体产品本身可能需要防止微生物污染或其物理外观的变化。

酶制剂通常包含相对高含量的水解酶，其需要通过相对大量的酶稳定剂来稳定。成分的不同溶解特性可能导致不均匀的液体。不均匀的液体通常不能提供最佳的产品性能，因此优选避免使用。

本发明的目的是提供一种均质的、储存稳定的酶制剂，其包含至少一种水解酶和酶稳定剂系统，其可以灵活地配制成最终产品，例如洗涤剂制品。

本发明提供了均质的、储存稳定的液体酶制剂，其包含

成分(a)：至少一种选自水解酶(EC 3)的酶；和

成分(b)：酶稳定系统，其包含

(bi)至少一种式(A)的化合物

其中式(A)中的变量如下：

R¹选自H和C₁-C₁₀烷基羰基，其中烷基可以是直链或支链的并且可以带有一个或多个羟基，

R²、R³、R⁴彼此独立地选自H、直链C₁-C₅烷基和支链C₃-C₁₀烷基、未取代或被一个或多个羧酸酯或羟基取代的C₆-C₁₀-芳基，和C₆-C₁₀-芳基-烷基，其中后者的烷基选自直链C₁-C₈烷基或支链C₃-C₈烷基，其中R²、R³和R⁴中的至少一个不是H；

以及

(bii)至少一种选自含硼化合物和肽稳定剂的化合物，

和

成分(c)：至少一种二醇，

和任选的成分(d)：至少一种选自(i)溶剂，和(ii)稳定液体酶制剂本身的化合物的化合物。

酶名称是本领域技术人员基于国际生物化学和分子生物学联合会(International Union of Biochemistry and Molecular Biology)(IUBMB)的建议已知的。酶名称包括：EC(酶学委员会(Enzyme Commission))编号、推荐名称、替代名称(如果有的话)、催化活性和其他因素；参见最后更新于2019年10月4日的版本的http:// www.sbcs.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC3/。

本发明的酶制剂在20℃和101.3kPa下是液体。液体包括溶液、乳液和分散体、凝胶等，只要该液体是流体且可倾倒的。在本发明的一个实施方案中，在25℃下根据Brookfield测定时，例如转子3在20rpm下用Brookfield粘度计L VT-II测定时，本发明的液体洗涤剂制品具有约500至约20,000mPa*s范围内的动态粘度。

本发明的酶制剂在约8℃、约20℃或约37℃的温度和约101.3kPa的常压下是均质的。均质意味着酶制剂不显示可见的沉淀形成或浊度。本文的可见的沉淀物优选是指任何种类的可见颗粒。

本发明的酶制剂在约8℃、约20℃或约37℃的温度下可稳定储存长达6周。在本文上下文中，储存稳定是指液体酶制剂在储存液体酶制剂后，优选在8℃或37℃下储存长达6或8周后，不显示可见的沉淀形成或浊度。优选地，该液体酶制剂在8℃至37℃下储存长达6个月是储存稳定的。优选将本发明的酶制剂配制成洗涤剂制品，以提供储存稳定的含酶洗涤剂制品。在此上下文中，储存稳定意指当与对照洗涤剂制品相比时，包含在含酶洗涤剂制品中的至少一种酶在37℃下储存长达42天后显示出减少的酶活性损失。该对照洗涤剂制品包含至少一种酶、至少一种肽稳定剂，但不含(i)作为本文成分(b)公开的酶稳定系统的组成部分公开的式(A)的化合物和(ii)成分(c)。

“配制成”优选意指酶制剂与一种或多种洗涤剂成分在一个或多个步骤中以任何顺序组合。

成分(a)

包含在成分(a)中的至少一种酶选自水解酶(EC 3)，在下文中也称作酶(成分(a))。优选的酶选自作用于酯键的酶(E.C.3.1)、糖基化酶(E.C.3.2)和肽酶(E.C.3.4)。作用于酯键(E.C.3.1)的酶在下文中也称作脂肪酶和DNA酶。糖基化酶(E.C.3.2)在下文中也称作淀粉酶、纤维素酶或甘露聚糖酶。肽酶(E.C.3.4)在下文中也称作蛋白酶。

成分(a)中包含的水解酶通过多肽序列(在本文中也称作氨基酸序列)鉴定。多肽序列具体说明了包括酶的“活性位点”在内的三维结构，该“活性位点”又决定了所述酶的催化活性。多肽序列可通过SEQ ID NO鉴定。根据世界知识产权局(WIPO)标准ST.25(1998)(World Intellectual Property Office(WIPO)Standard ST.25(1998))，本文中的氨基酸使用其中第一个字母为大写的三字母代码或相应的一个字母来表示。

包含在本发明的成分(a)中的任何酶涉及均具有酶活性的亲本酶和/或变体酶。具有酶活性的酶有酶促活性或能发挥酶转化，这意味着酶作用于底物并将这些底物转化为产物。本文中的术语“酶”不包括酶的无活性变体。

“亲本”序列(亲本蛋白质或酶(也称作“亲本酶”)的序列)是用于向该序列导入变化(例如通过导入一个或多个氨基酸取代、插入、缺失或其组合)，产生亲本序列的“变体”的起始序列。术语亲本酶(或亲本序列)包括野生型酶(序列)和合成产生的序列(酶)，其被用作导入(进一步的)变化的起始序列。

术语“酶变体”或“序列变体”或“变体酶”是指在其氨基酸序列上在一定程度上与其亲本酶不同的酶。如果没有另外指示，则“具有酶活性”的变体酶意指该变体酶具有与相应亲本酶相同类型的酶活性。

在描述本发明的变体时，使用如下所述的命名法：

通过提供亲本酶的原始氨基酸，然后是氨基酸序列内的位置编号，然后是取代的氨基酸来描述氨基酸取代。

通过提供亲本酶的原始氨基酸，然后是氨基酸序列内的位置编号，然后是*来描述氨基酸缺失。

通过提供亲本酶的原始氨基酸，然后是氨基酸序列内的位置编号，然后是原始氨基酸和另外的氨基酸来描述氨基酸插入。例如，在与甘氨酸相邻的赖氨酸的180位的插入被命名为“Gly180GlyLys”或“G180GK”。在取代和插入发生在相同位置的情况下，其可以表示为S99SD+S99A或简称作S99AD。在插入与现有氨基酸残基相同的氨基酸残基的情况下，显然出现命名法中的简并性。例如，如果在上述实例中甘氨酸之后插入甘氨酸，则这可以由G180GG表示。当可以在一个位置处导入不同的改变时，不同的改变由逗号分开，例如“Arg170Tyr,Glu”表示在170位处的精氨酸被酪氨酸或谷氨酸取代。可替代地，不同的改变或任选的取代可以在括号中表明：例如Arg170[Tyr、Gly]或Arg170{Tyr、Gly}；或表示为短的形式R170[Y、G]或R170{Y、G}；或长的形式R170Y、R170G。

当与亲本酶相比时，酶变体可以通过它们的序列同一性来定义。序列同一性通常以“％序列同一性”或“％同一性”形式呈现。为了计算序列同一性，在第一步中必须产生序列比对。根据本发明，必须产生成对全局比对，这意味着两个序列必须在其整个长度上比对，这通常通过使用数学方法产生，称作比对算法。

根据本发明，通过使用Needleman和Wunsch的算法(J.Mol.Biol.(1979)48,p.443-453)产生比对。优选地，程序“NEEDLE”(欧洲分子生物学开放软件套件(The EuropeanMolecular Biology Open Software Suite)(EMBOSS))被用于本发明的目的，使用程序默认参数(空位开放＝10.0，空位延伸＝0.5和矩阵＝EBLOSUM62)。

根据本发明，应用下面的％-同一性计算：％-同一性＝(相同残基/在其完整长度上显示本发明的相应序列的比对区域的长度)*100。

在本发明的一个实施方案中，酶变体被描述为与相应亲本酶的氨基酸序列至少n％相同的氨基酸序列，其中“n”为10至100的整数。在一个实施方案中，当与亲本酶的全长氨基酸序列比较时，变体酶是至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同，其中该酶变体具有酶活性。

当与亲本酶比较时，酶变体可以用其序列相似性来进行定义。序列相似性通常以“％序列相似性”或“％相似性”的形式提供。％序列相似性考虑到限定的氨基酸组共享相似的性质，例如通过它们的大小、通过它们的疏水性、通过它们的电荷或通过其他特征。在本文中，一个氨基酸与相似氨基酸的交换可称作“保守突变”。

对于本发明的相似性％的测定，以下适用：氨基酸A与氨基酸S相似；氨基酸D类似于氨基酸E和N；氨基酸E与氨基酸D和K和Q类似；氨基酸F类似于氨基酸W和Y；氨基酸H类似于氨基酸N和Y；氨基酸I类似于氨基酸L和M和V；氨基酸K类似于氨基酸E和Q和R；氨基酸L类似于氨基酸I和M和V；氨基酸M类似于氨基酸I和L和V；氨基酸N类似于氨基酸D和H和S；氨基酸Q类似于氨基酸E和K和R；氨基酸R类似于氨基酸K和Q；氨基酸S类似于氨基酸A和N和T；氨基酸T类似于氨基酸S；氨基酸V类似于氨基酸I和L和M；氨基酸W类似于氨基酸F和Y；氨基酸Y类似于氨基酸F和H和W。

保守氨基酸取代可以发生在功能性蛋白质如酶的多肽序列的全长序列上。在一个实施方案中，这类突变不涉及酶的功能结构域。在一个实施方案中，保守突变不涉及酶的催化中心。

为了考虑保守突变，可以从相同比对计算两个氨基酸序列的序列相似性的值，其用于计算％同一性。

根据本发明，应用下面的％相似性计算：％相似性＝[(相同残基+相似残基)/在其完整长度上显示本发明的相应序列的比对区域的长度]*100。

根据本发明，酶变体可以被描述为与相应的亲本序列至少m％相似的氨基酸序列，其中“m”是10和100之间的整数。在一个实施方案中，当与亲本酶的全长多肽序列相比时，变体酶是至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相似的，其中该变体酶具有酶活性。

“酶活性”是指酶发挥的催化作用，其通常表示为每毫克酶的单位(比活性)，其涉及每分子酶每分钟转化的底物的分子(分子活性)。

当所述酶变体表现出相应亲本酶的酶活性的至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％,、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％时，变体酶具有本发明的酶活性。

在本发明的一个方面，成分(a)中包含的至少一种酶是液体酶浓缩物的组成部分。此处的“液体酶浓缩物”是指包含含有至少一种酶的产品的任何液体酶。在酶浓缩物的上下文中，“液体”涉及在20℃和101.3kPa下的物理外观。

液体酶浓缩物可以由固体酶在溶剂中的溶解产生。溶剂可以选自水和有机溶剂。由固体酶溶解在溶剂中产生的液体酶浓缩物可以包含高达饱和浓度的酶量。此处的溶解是指固体化合物通过与至少一种溶剂接触而液化。溶解是指固体化合物完全溶解，直到在指定溶剂中达到饱和浓度，其中不发生相分离。

在本发明的一个方面，所得酶浓缩物的成分(a)不含水，这意味着不存在显著量的水。此处不显著量的水是指酶浓缩物包含小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于7％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％重量的水，全部相对于酶浓缩物的总重而言，或不含水。在一个实施方案中，不含水的酶浓缩物意指酶浓缩物不包含显著量的水，但包含相对于酶浓缩物的总重量30-80％重量的有机溶剂。

在一个实施方案中，相对于酶浓缩物的总重，液体酶浓缩物包含至少25重量％的水，其可以称作“水性酶浓缩物”。水性酶浓缩物可以是含酶溶液，其中固体酶产物已经溶解在水中。在一个实施方案中，“水性酶浓缩物”是指通过发酵由酶的生产而得到的含酶产物。

发酵意指在允许重组宿主细胞生长并表达期望的蛋白质的适合营养培养基中培养表达期望的酶的重组细胞的过程。在发酵结束时，通常收集发酵液并进一步加工，其中发酵液包含液体级分和固体级分。根据酶是否已经分泌到液体级分中，可以从发酵液的液体级分或从细胞裂解物中回收期望的蛋白质或酶。期望酶的回收使用本领域技术人员已知的方法。用于从发酵液中回收蛋白质或酶的适合方法包括但不限于收集、离心、过滤、提取和沉淀。

液体酶浓缩物通常包含0.1重量％至40重量％、或0.5重量％至30重量％、或1重量％至25重量％、或3重量％至25重量％、或5重量％至25重量％范围内的酶量，均相对于酶浓缩物的总重。在一个优选的实施方案中，液体酶浓缩物由发酵产生并且是含水的。

由发酵产生的水性酶浓缩物通常包含大于约50重量％、大于约60重量％、大于约70重量％的量或大于约80重量％的水，全部相对于酶浓缩物的总重。由发酵产生的水性酶浓缩物可以包含残留成分，例如源自发酵培养基的盐、源自生产宿主细胞的细胞碎片、在发酵期间由生产宿主细胞产生的代谢物。在一个实施方案中，残留成分可以以相对于水性酶浓缩物的总重小于30重量％、小于20重量％、小于10重量％或小于5重量％的量包含在液体酶浓缩物中。

在一个实施方案中，本发明的酶制剂以相对于酶制剂的总重约为0.1-10重量％的数量包含至少一种酶。更优选地，所述酶制剂包含相对于酶制剂的总重按重量计约2-8％、或约5％重量的至少一种酶，其中至少一种酶选自水解酶，优选地选自蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶和甘露聚糖酶。

蛋白酶

在一个实施方案中，所述酶制剂包含至少一种蛋白酶，其量相对于酶制剂的总重约为4重量％至6.5重量％，或约5重量％，其中至少一种蛋白酶优选选自丝氨酸内肽酶(EC3.4.21)，最优选选自枯草杆菌蛋白酶型蛋白酶(EC 3.4.21.62)。

丝氨酸蛋白酶或丝氨酸肽酶的特征在于在催化活性位点具有丝氨酸，其在催化反应期间与底物形成共价加合物。本发明上下文中的丝氨酸蛋白酶可以选自胰凝乳蛋白酶(例如，EC 3.4.21.1)、弹性蛋白酶(例如，EC 3.4.21.36)、弹性蛋白酶(例如，EC 3.4.21.37或EC 3.4.21.71)、粒酶(例如，EC 3.4.21.78或EC 3.4.21.79)、激肽释放酶(例如，EC3.4.21.34、EC 3.4.21.35、EC 3.4.21.118或EC 3.4.21.119)、纤溶酶(例如，EC3.4.21.7)、胰蛋白酶(例如，EC 3.4.21.4)、凝血酶(例如，EC 3.4.21.5)和枯草杆菌蛋白酶。枯草杆菌蛋白酶也称作枯草杆菌肽酶，例如EC 3.4.21.62，后者在下文中也称作“枯草杆菌蛋白酶”。

Siezen等人(1991),Protein Eng.4:719-737和Siezen等人(1997),ProteinScience 6:501-523已经提出了暂时命名为枯草杆菌酶的丝氨酸蛋白酶的一个亚组。枯草杆菌酶包括枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫细菌素(lantibiotic)肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。

枯草杆菌酶的亚组是枯草杆菌蛋白酶，其是来自MEROPS数据库(http://merops.sanger.ac.uk)定义的S8家族的丝氨酸蛋白酶。肽酶家族S8包括丝氨酸内肽酶枯草杆菌蛋白酶及其同系物。

枯草杆菌蛋白酶相关类别的丝氨酸蛋白酶共享限定催化三联体的共同氨基酸序列，这将它们与胰凝乳蛋白酶相关类别的丝氨酸蛋白酶区分开。枯草杆菌蛋白酶和胰凝乳蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶均具有包含天冬氨酸、组氨酸和丝氨酸的催化三联体。

实例包括如WO 89/06276和EP 0283075、WO 89/06279、WO 89/09830、WO 89/09819、WO 91/06637和WO 91/02792中所述的枯草杆菌蛋白酶。

蛋白酶是发挥“蛋白酶活性”或“蛋白水解活性”的活性蛋白质。蛋白水解活性与在限定的时间过程中蛋白酶或蛋白水解酶对蛋白质的降解速率有关。

用于分析蛋白水解活性的方法是文献中众所周知的(参见例如Gupta等人(2002),Appl.Microbiol.Biotechnol.60:381-395)。蛋白水解活性可以通过使用琥珀酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基苯胺(Suc-AAPF-pNA，简称AAPF；参见例如DelMar等人(1979),Analytical Biochem 99,316-320)作为底物来测定。通过蛋白水解裂解从底物分子裂解pNA，导致释放黄色的游离pNA，其可以通过测量OD₄₀₅来定量。

蛋白水解活性可以以每克酶的单位的形式提供。例如，1U蛋白酶可以相当于在pH8.0和37℃下每分钟释放1μmol福林(folin)-阳性氨基酸和肽(如酪氨酸)的蛋白酶的量(酪蛋白作为底物)。

枯草杆菌蛋白酶类型(EC 3.4.21.62)的蛋白酶可以是源自选自芽孢杆菌属(Bacillus)、梭菌属(Clostridium)、肠球菌属(Enterococcus)、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、海洋杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)或链霉菌属(Streptomyces)蛋白酶的微生物的细菌蛋白酶，或是革兰氏阴性菌多肽，例如弯曲杆菌属(Campylobacter)、大肠杆菌(E.coli)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(llyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)和脲原体属(Ureaplasma)。

在本发明的一个方面，至少一种蛋白酶选自嗜碱芽孢杆菌(Bacillusalcalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillusbrevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、吉氏芽孢杆菌(Bacillus gibsonii)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacilluslentus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)蛋白酶。

在本发明的一个实施方案中，成分(a)包含至少一种选自以下的蛋白酶：来自解淀粉芽孢杆菌BPN'的枯草杆菌蛋白酶(由Vasantha等人(1984)J.Bacteriol.，第159卷，第811-819页和Ja Wells等人(1983)Nucle Acids Research，第11卷，第7911-7925页中描述)；来自地衣芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶(枯草杆菌蛋白酶Carlsberg；公开于El Smith等人(1968)J.Biol Chem，第243卷，第2184-2191页，和Jacobs等人(1985)Nucl.Acids Res，第13卷，第8913-8926页)；枯草杆菌蛋白酶PB92(碱性蛋白酶PB 92的原始序列描述于EP283075 A2)；如WO 89/06279中所公开的枯草杆菌蛋白酶147和/或309(分别为

)；如WO 91/02792中所公开的来自迟缓芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶，如来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483或如WO 95/23221中所描述的迟缓芽孢杆菌DSM 5483的变体；DE 10064983中公开的来自嗜碱芽孢杆菌(DSM 11233)的枯草杆菌蛋白酶；如WO2003/054184中公开的来自吉氏芽孢杆菌(DSM 14391)的枯草杆菌蛋白酶；WO 2003/056017中公开的来自芽孢杆菌属(DSM 14390)的枯草杆菌蛋白酶；WO 2003/055974中公开的来自芽孢杆菌属(DSM 14392)的枯草杆菌蛋白酶；WO 2003/054184中公开的来自吉氏芽孢杆菌(DSM 14393)的枯草杆菌蛋白酶；如WO 2005/063974中所述的具有SEQ ID NO:4的枯草杆菌蛋白酶；如WO 2005/103244中所述的具有SEQ ID NO:4的枯草杆菌蛋白酶；如WO 2005/103244中所述的具有SEQ ID NO:7的枯草杆菌蛋白酶；以及如申请DE 102005028295.4中所述的具有SEQ ID NO:2的枯草杆菌蛋白酶。

在一个实施方案中，成分(a)至少包含如WO 89/06279的表I中的序列a)所公开的枯草杆菌蛋白酶309(其在本文中可称作Savinase)或与其至少80％相似和/或相同并具有蛋白水解活性的其变体。

本发明的有用蛋白酶的实例包括以下文献中描述的变体：WO 92/19729、WO 95/23221、WO 96/34946、WO 98/20115、WO 98/20116、WO 99/11768、WO 01/44452、WO 02/088340、WO 03/006602、WO 2004/03186、WO 2004/041979、WO 2007/006305、WO 2011/036263、WO 2011/036264和WO 2011/072099。适合的实例尤其包括如EP 1921147中所述的衍生自SEQ ID NO:22的枯草杆菌蛋白酶的变体(其是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的成熟碱性蛋白酶的序列)，其在以下位置中的一个或多个处具有氨基酸取代：3、4、9、15、24、27、33、36、57、68、76、77、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、131、154、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252和274(根据BPN'编号)，其具有蛋白水解活性。在一个实施方案中，这样的蛋白酶在Asp32、His64和Ser221(根据BPN'编号)位处不突变。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种具有蛋白水解活性的蛋白酶变体，当与如以上披露的亲本酶的全长多肽序列相比时，该蛋白酶变体是至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相似和/或相同的。

在一个实施方案中，成分(a)中包含的至少一种蛋白酶具有如EP 1921147中所述的SEQ ID NO:22，或与其至少80％相似和/或相同并具有蛋白水解活性的蛋白酶。如EP1921147中所述的具有SEQ ID NO:22的蛋白酶意指具有根据EP 1921147中公开的SEQ IDNO:22的氨基酸序列的蛋白酶。在一个实施方案中，所述蛋白酶的特征在于在101位(根据BPN'编号)处具有氨基酸谷氨酸(E)、或天冬氨酸(D)、或天冬酰胺(N)、或谷氨酰胺(Q)、或丙氨酸(A)、或甘氨酸(G)、或丝氨酸(S)并且具有蛋白水解活性。在一个实施方案中，所述蛋白酶包含一个或多个另外的取代：(a)3位的苏氨酸(3T)，(b)4位的异亮氨酸(4I)，(c)63位的丙氨酸、苏氨酸或精氨酸(63A、63T或63R)，(d)156位的天冬氨酸或谷氨酸(156D或156E)，(e)194位的脯氨酸(194P)，(f)199位的甲硫氨酸(199M)，(g)205位的异亮氨酸(205I)，(h)217位的天冬氨酸、谷氨酸或甘氨酸(217D、217E或217G)，(i)根据(a)至(h)的两种或多种氨基酸的组合。至少一种蛋白酶可以与EP 1921147中所述的SEQ ID NO:22至少80％相似和/或相同，并且其特征在于包含一种氨基酸(根据(a)-(h))或(i)的组合以及氨基酸101E、101D、101N、101Q、101A、101G或101S(根据BPN'编号)并具有蛋白水解活性。在一个实施方案中，所述蛋白酶的特征在于包含突变(根据BPN'编号)R101E、或S3T+V4I+V205I、或R101E和S3T、V4I和V205I、或S3T+V4I+V199M+V205I+L217D，并且具有蛋白水解活性。

在一个实施方案中，具有如EP 1921147中所述的根据SEQ ID NO:22的氨基酸序列的蛋白酶的特征在于包含突变(根据BPN'编号)S3T+V4I+S9R+A15T+V68A+D99S+R101S+A103S+I104V+N218D，并且具有蛋白水解活性。

在本发明的一个实施方案中，成分(a)包含至少两种蛋白酶的组合，所述蛋白酶优选选自丝氨酸内肽酶(EC 3.4.21)，更优选选自枯草杆菌蛋白酶型蛋白酶(EC 3.4.21.62)的组—全部如上所公开。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种蛋白酶，其选自如EP 1921147中所述的根据SEQ ID NO:22的蛋白酶或其具有蛋白水解活性的变体，如上所述。其至少一种蛋白酶变体优选是与具有R101E的如EP 1921147中所述的SEQ ID NO:22 80％相似和/或相同的蛋白酶。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种选自WO 89/06279的表Ia)中公开的枯草杆菌蛋白酶309或其具有蛋白水解活性的变体的蛋白酶，如上述所公开的。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种如上所公开的蛋白酶，优选选自

EP 1921147中描述的SEQ ID NO:22的蛋白酶或其具有蛋白水解活性的变体，优选具有R101E的与EP 1921147中描述的SEQ ID NO:22 80％相似和/或相同的蛋白酶，和

如WO 89/06279的表Ia)中公开的枯草杆菌蛋白酶309或其具有蛋白水解活性的变体

和至少一种另外的酶，其优选选自淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、甘露聚糖酶和DNA酶—全部如本文所公开。

淀粉酶

在一个实施方案中，成分(a)中包含的至少一种酶选自淀粉酶。本发明的“淀粉酶”(α和/或β)包括细菌或真菌来源(分别为EC 3.2.1.1和3.2.1.2)的那些。优选地，成分(a)包含至少一种α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)。包括化学修饰的或蛋白质改造的突变体。

包含在根据本发明的成分(a)中的淀粉酶具有涉及多糖中糖苷键的(内)水解的“淀粉分解活性”或“淀粉酶活性”。α-淀粉酶活性可以通过本领域技术人员已知的测定α-淀粉酶活性的试验来确定。测量α-淀粉酶活性的测定的实例是：

·α-淀粉酶活性可以通过采用Phadebas片剂作为底物的方法(Phadebas淀粉酶测试，由Magle Life Science提供)来确定。淀粉被α-淀粉酶水解，产生可溶性蓝色片段。在620nm处通过分光光度法测量的所得蓝色溶液的吸光度是α-淀粉酶活性的函数。在给定的条件组下，测量的吸光度与所讨论的α-淀粉酶的比活性(活性/mg纯α-淀粉酶蛋白)成正比。

·α-淀粉酶活性也可以通过使用亚乙基-4-硝基-苯基-α-D-麦芽七糖苷(EPS)的方法测定。D-麦芽七糖苷是可以被内切淀粉酶裂解的封闭寡糖。裂解后，试剂盒中包括的α-葡糖苷酶消化底物从而释放游离的PNP分子，其具有黄色，因此可以通过可见分光光度法在405nm下测量。包含EPS底物和α-葡糖苷酶的试剂盒由Roche Costum Biotech制造(目录号10880078103)。在给定的条件组下，时间依赖性吸收-曲线的斜率与所述的α-淀粉酶的比活性(活性/mg酶)成正比。

淀粉分解活性可以以每克酶的单位提供。例如，1单位α-淀粉酶可以在20℃下在pH6.9下在3分钟内从淀粉中释放1.0mg麦芽糖。

包含在成分(a)中的至少一种淀粉酶可以选自以下：

·具有如WO 95/10603中所述的SEQ ID NO:2的来自地衣芽孢杆菌的淀粉酶。适合的变体描述于WO 95/10603中，其在以下位置中包含一个或多个取代：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444，它们具有淀粉分解活性。变体描述于WO 94/02597、WO 94/018314、WO97/043424和WO 99/019467的SEQ ID NO:4；

·具有如WO 02/10355中所公开的SEQ ID NO:6的来自嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)的淀粉酶，或任选地在野生型序列上具有C-末端截短的淀粉酶。SEQ ID NO:6的适合变体包括在181和/或182位中包含缺失和/或在193位中包含取代的那些；

·具有如WO 99/19467中公开的SEQ ID NO:6的来自芽孢杆菌属707的淀粉酶。SEQNO:6的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216以及K269；

·具有如WO 96/23872中所述的SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的来自盐敏芽孢杆菌的淀粉酶，在本文中也描述为SP-722。优选的变体描述于WO 97/3296、WO 99/194671和WO2013/001078中；

·来自芽孢杆菌属DSM 12649的淀粉酶，其具有如WO 00/22103中公开的SEQ IDNO:4；

·来自芽孢杆菌属菌株TS-23的淀粉酶，其具有如WO 2009/061380中所公开的SEQID NO:2；

·来自噬细胞菌属的淀粉酶，其具有如WO 2013/184577中公开的SEQ ID NO:1；

·来自具有如WO 2010/104675中所公开的SEQ ID NO:1的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)DSM 90的淀粉酶；

·来自芽孢杆菌属的淀粉酶，其包含如WO 00/60060中所述的SEQ ID NO：2的氨基酸1-485；

·来自解淀粉芽孢杆菌的淀粉酶或其变体，其优选选自如WO 2016/092009中所述的SEQ ID NO:3的淀粉酶；

·具有如WO 2006/002643中所述的SEQ ID NO:12的淀粉酶或在所述SEQ ID NO:12内包含取代Y295F和M202LITV的淀粉酶变体；

·具有如WO 2011/098531中所述的SEQ ID NO:6的淀粉酶或在选自如下的一个或多个位置处包含取代的淀粉酶变体：所述SEQ ID NO:6内的193[G、A、S、T或M]、195[F、W、Y、L、I或V]、197[F、W、Y、L、I或V]、198[Q或N]、200[F、W、Y、L、I或V]、203[F、W、Y、L、I或V]、206[F、W、Y、N、L、I、V、H、Q、D或E]、210[F、W、Y、L、I或V]、212[F、W、Y、L、I或V]、213[G、A、S、T或M]和243[F、W、Y、L、I或V]；

·具有如WO 2013/001078中所述的SEQ ID NO:1的淀粉酶或在相当于以下位置的两个或多个(几个)位置处包含改变的淀粉酶变体：所述SEQ ID NO:1内的G304、W140、W189、D134、E260、F262、W284、W347、W439、W469、G476和G477；

·具有如WO 2013/001087中所述的SEQ ID NO:2的淀粉酶或在所述SEQ ID NO:2内包含位置181+182、或182+183、或183+184的缺失，任选地在所述SEQ ID NO:2内相当于W140、W159、W167、Q169、W189、E194、N260、F262、W284、F289、G304、G305、R320、W347、W439、W469、G476和G477的任何位置中包含一个或两个或更多个修饰的淀粉酶变体；

·淀粉酶，其为来自上述淀粉酶的杂合α-淀粉酶，例如如WO 2006/066594中所述；

·根据WO 2014/183920的杂合淀粉酶，其具有与WO 2014/183920的SEQ ID NO:2具有至少90％相似性和/或同一性的A和B结构域以及与WO 2014/183920的SEQ ID NO:6具有至少90％相似性和/或同一性的C结构域，其中所述杂合淀粉酶具有淀粉分解活性；优选地，该杂合α-淀粉酶与WO 2014/183920的SEQ ID NO:23至少95％相似和/或相同并且具有淀粉分解活性；

·根据WO 2014/183921的杂合淀粉酶，其具有与WO 2014/183921中公开的SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:26、SEQ IDNO:32和SEQ ID NO:39具有至少75％相似性和/或同一性的A和B结构域，以及与WO 2014/183921的SEQ ID NO:6具有至少90％相似性和/或同一性的C结构域，其中所述杂合淀粉酶具有淀粉分解活性；优选地，杂合α-淀粉酶与WO 2014/183921中公开的SEQ ID NO:30至少95％相似和/或相同并且具有淀粉分解活性。

包含在成分(a)中的适合的淀粉酶包括具有淀粉酶活性的本文公开的淀粉酶的淀粉酶变体，当与如上文公开的亲本酶的全长多肽序列相比时，所述淀粉酶变体是至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相似和/或相同的。

在本发明的一个实施方案中，成分(a)可以包含至少两种如上公开的淀粉酶的组合。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种淀粉酶和至少一种另外的酶的组合，所述淀粉酶优选选自

·来自芽孢杆菌707的淀粉酶或其具有淀粉分解活性的变体，优选选自如WO 99/19467中公开的具有SEQ ID NO:6的淀粉酶及其具有淀粉分解活性的变体；

·淀粉酶，其选自包含如WO 00/60060中所述的SEQ ID NO:2的氨基酸1至485的那些，具有如WO 2006/002643中所述的SEQ ID NO:12的那些，及其具有淀粉分解活性的变体；

·来自盐敏芽孢杆菌(Bacillus halmapalus)的淀粉酶或其具有淀粉分解活性的变体，优选选自具有如WO 2013/001078中公开的SEQ ID NO:1和2的淀粉酶；具有如WO2011/098531中所述的SEQ ID NO:6的淀粉酶；及其具有解淀粉活性的变体；

·来自解淀粉芽孢杆菌的淀粉酶或其具有淀粉分解活性的变体，优选选自WO2016/092009的SEQ ID NO:3的淀粉酶；

·根据WO 2014/183920的杂合淀粉酶，其具有与WO 2014/183920的SEQ ID NO:2具有至少90％相似性和/或同一性的A和B结构域以及与WO 2014/183920的SEQ ID NO:6具有至少90％相似性和/或同一性的C结构域，其中所述杂合淀粉酶具有淀粉分解活性；优选地，该杂合α-淀粉酶与WO 2014/183920的SEQ ID NO:23至少95％相似和/或相同并且具有淀粉分解活性；

·根据WO 2014/183921的杂合淀粉酶，其具有与WO 2014/183921中公开的SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:26、SEQ IDNO:32和SEQ ID NO:39具有至少75％相似性和/或同一性的A和B结构域，以及与WO 2014/183921的SEQ ID NO:6具有至少90％相似性和/或同一性的C结构域，其中所述杂合淀粉酶具有淀粉分解活性；优选地，杂合α-淀粉酶与WO 2014/183921中公开的SEQ ID NO:30至少95％相似和/或相同，并且具有淀粉分解活性；

所述至少一种另外的酶优选选自蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、甘露聚糖酶和DNA酶–全部如本文所公开。优选地，一种另外的酶选自枯草杆菌蛋白酶(EC 3.4.21.62)。更优选地，所述枯草杆菌蛋白酶选自

·如EP 1921147中所述的SEQ ID NO:22的蛋白酶或其具有蛋白水解活性的变体，优选具有R101E的与如EP 1921147中所述的SEQ ID NO:22 80％相同的蛋白酶，和

·如WO 89/06279的表I a)中公开的枯草杆菌蛋白酶309或其具有蛋白水解活性的变体。

脂肪酶

在一个实施方案中，成分(a)中包含的至少一种酶选自脂肪酶。“脂肪酶”、“脂肪分解酶”、“脂质酯酶”都是指EC 3.1.1类的酶(“羧酸酯水解酶”)。脂肪酶是指具有脂肪酶活性(或脂解活性；三酰基甘油脂肪酶，EC 3.1.1.3)、角质酶活性(EC 3.1.1.74；具有角质酶活性的酶在本文中可以称作角质酶)、甾醇酯酶活性(EC 3.1.1.13)和/或蜡-酯水解酶活性(EC 3.1.1.50)的活性蛋白。

用于确定脂肪分解活性的方法在文献中是众所周知的(参见例如Gupta等人(2003)，Biotechnol.Appl.Biochem.37，第63-71页)。例如，脂肪酶活性可以通过底物对硝基苯基棕榈酸酯(pNP-棕榈酸酯，C:16)中的酯键水解并释放黄色且可在405nm处检测到的pNP来测量。

“脂肪分解活性”是指由脂肪酶发挥的催化作用，其可以以脂肪分解单位(LU)的形式被提供。例如，1LU可以相当于在以下条件下在pH状态下每分钟产生1μmol可滴定脂肪酸的脂肪酶的量：温度30℃；pH＝9.0；底物可以是在13mmol/l Ca²⁺和20mmol/l NaCl存在下3.3wt.％的橄榄油和3.3％阿拉伯树胶在5mmol/L Tris缓冲液中的乳液。

优选包含在成分(a)中的脂肪酶包括细菌或真菌来源的那些。在本发明的一个方面，适合的脂肪酶(成分(a))选自如下：来自腐质霉属(Humicola)(同义词Thermomyces)的脂肪酶，例如，如EP 258068、EP 305216、WO 92/05249和WO 2009/109500中所述来自H.lanuginosa(T.lanuginosus)的脂肪酶，或如WO 96/13580中所述来自H.insolens的脂肪酶；如WO 92/05249中所述的衍生自米赫根毛霉(Rhizomucor miehei)的脂肪酶；来自假单胞菌属菌株(这些菌株中的一些现在重命名为伯霍尔德杆菌属(Burkholderia))，例如来自产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 218272、WO94/25578、WO 95/30744、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 96/00292)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP 331376)，施氏假单胞菌(P.stutzeri)(GB 1372034)、荧光假单胞菌(P.fluorescens)、假单胞菌属菌株SD 705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康辛假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)、门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)(WO95/14783)、葡假单胞菌(P.glumae)(WO 95/35381，WO 96/00292)的脂肪酶；来自灰色链霉菌()(WO 2011/150157)和原始螺旋链霉菌(S.pristinaespiralis)(WO 2012/137147)的脂肪酶，GDSL型链霉菌属脂肪酶(WO 2010/065455)；如WO 2011/084412中公开的来自Thermobifida fusca的脂肪酶；如WO 2011/084417中所公开的来自嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)的脂肪酶；芽孢杆菌属脂肪酶，例如WO 00/60063中所公开的，来自如Dartois等人(1992)，Biochemica et Biophysica Acta，1131，253-360或WO2011/084599中所公开的枯草芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌(JP S64-074992)或短小芽孢杆菌(WO 91/16422)的脂肪酶；来自WO 94/01541中公开的南极假丝酵母(Candidaantarctica)的脂肪酶；来自门多萨假单胞菌的角质酶(US 5389536，WO 88/09367)；来自稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)的角质酶(WO 2010/107560)；WO如90/09446、WO 00/34450和WO 01/92502中公开的来自豌豆茄镰孢(Fusarum solani pisi)的角质酶；和如WO 00/34450和WO 01/92502中公开的来自Humicola lanuginosa的角质酶。

适合的脂肪酶还包括称作酰基转移酶或双氧水解酶的那些，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 2010/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 2005/056782)、来自CE7家族的双氧水解酶(WO 2009/67279)、以及耻垢分枝杆菌双氧水解酶的变体，特别是S54V变体(WO2010/100028)。

在一个实施方案中，成分(a)包含具有脂肪分解活性的上述脂肪酶的至少一种脂肪酶变体。这类适合的脂肪酶变体是例如通过WO 95/22615、WO 97/04079、WO 97/07202、WO00/60063、WO 2007/087508、EP 407225和EP 260105中公开的方法开发的那些。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种具有脂肪分解活性的脂肪酶变体，当与如上述公开的亲本酶的全长多肽序列相比时，这些脂肪酶变体是至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相似和/或相同的。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种选自真菌三酰基-甘油脂肪酶(EC3.1.1.3类)的脂肪酶。真菌三酰基甘油脂肪酶可以选自疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)脂肪酶。在一个实施方案中，疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶选自根据US 5869438的SEQ ID NO:2的1-269个氨基酸的三酰基甘油脂肪酶及其具有脂肪分解活性的变体。根据US 5869438的SEQ ID NO:2的1-269个氨基酸的三酰基甘油脂肪酶意指具有根据US5869438中公开的SEQ ID NO:2的1-269个氨基酸的氨基酸序列的脂肪酶，并且在本文中可以称作Lipolase。

在一个实施方案中，疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶选自具有脂解活性的变体，当与US5869438的SEQ ID NO:2的1-269个氨基酸的全长多肽序列相比时，这些变体是至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相似和/或相同的。

疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶可以选自仅包含保守突变的具有脂解活性的变体，然而其不涉及US 5869438的SEQ ID NO:2的1-269个氨基酸的功能结构域。疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶变体优选与US 5869438的SEQ ID NO：2至少80％相似和/或相同，其特征在于具有氨基酸T231R和N233R。所述疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶还可以包含以下氨基酸交换中的一种或多种：Q4V、V60S、A150G、L227G、P256K。

根据本发明，在一个实施方案中，成分(a)包含至少两种脂肪酶的组合，优选选自US 5869438的SEQ ID NO:2的1-269个氨基酸的三酰基甘油脂肪酶及如上述公开的其具有脂肪分解活性的变体。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种如上述公开的脂肪酶，优选选自根据US5869438的SEQ ID NO:2的1-269个氨基酸的三酰基甘油脂肪酶及其具有脂肪分解活性的变体，和至少一种另外的酶，其优选选自蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、甘露聚糖酶和DNA酶-全部如本文所公开。

纤维素酶

在一个实施方案中，成分(a)中包含的至少一种酶选自纤维素酶。至少一种纤维素酶选自纤维二糖水解酶(1,4-β-D-葡聚糖纤维二糖水解酶，EC 3.2.1.91)、内切-ss-1,4-葡聚糖酶(内切-1,4-β-D-葡聚糖4-葡聚糖水解酶，EC 3.2.1.4)和ss-葡糖苷酶(EC3.2.1.21)。优选地，成分(a)包含糖基水解酶家族7(GH7，PFAM00840)的至少一种纤维素酶，优选选自内切葡聚糖酶(EC 3.2.1.4)。

“纤维素酶”、“纤维素酶”或“纤维素分解酶”(成分(a))是涉及纤维素水解的酶。用于测量“纤维素酶活性”或“纤维素分解活性”的测定法是本领域技术人员已知的。例如，纤维素分解活性可以通过纤维素酶将羧甲基纤维素水解为还原性碳水化合物的事实来测定，其还原能力根据Hoffman，W.S.，J.Biol.Chem.120，51(1937)，通过铁氰化物反应经比色法测定。

纤维素分解活性可以以每克酶的单位的形式被提供。例如，1个单位可以在37℃下在pH 5.0下在1小时内(2小时孵育时间)从纤维素中释放1.0μmole的葡萄糖。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种选自糖基水解酶家族7(GH7，PFAM00840)的纤维素酶，优选选自内切葡聚糖酶(EC 3.2.1.4)。

本发明的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。在一个实施方案中，至少一种纤维素酶选自包含纤维素结合结构域的纤维素酶。在一个实施方案中，至少一种纤维素酶选自仅包含催化结构域的纤维素酶，这意味着该纤维素酶不含纤维素结合结构域。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种源自特异腐质霉(Humicola insolens)DSM 1800、芽孢杆菌属、土生梭孢壳菌(Thielavia terrestris)、尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)和里氏木霉(Trichoderma reesei)的纤维素酶。

适合的纤维素酶还包括作为具有纤维素分解活性的上述纤维素酶的变体的那些。在一个实施例中，纤维素酶变体包括当与如上述公开的亲本酶的全长多肽序列相比时具有至少40％至100％同一性的变体。在一个实施方案中，具有纤维素分解活性的纤维素酶变体与如上述公开的亲本酶的全长多肽序列至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相似和/或相同。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种特异腐质霉DSM 1800内切葡聚糖酶(EC3.2.1.4)，其具有WO 91/17244的图14A-E中公开的氨基酸序列，优选所述序列的20-434位氨基酸，更优选在选自182、223和231，最优选选自P182S、A223V和A231V的位置处具有一个或多个取代。在一个实施方案中，内切葡聚糖酶与WO 95/02675SEQ ID NO:2的多肽至少80％相似和/或相同。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种芽孢杆菌属纤维素酶(EC 3.2.1.4)，所述芽孢杆菌属纤维素酶选自与WO 2004/053039SEQ ID NO：2的1-773位氨基酸序列至少80％相似和/或相同的多肽或其催化活性片段。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种土生梭孢壳菌纤维素酶(EC 3.2.1.4)，其具有与WO 2004/053039 SEQ ID NO:4的1位至299位的氨基酸序列至少80％相似和/或相同的多肽或其催化活性片段。

根据本发明，在一个实施方案中，成分(a)包含至少两种纤维素酶的组合，所述纤维素酶优选选自如上述公开的内切葡聚糖酶(EC 3.2.1.4)。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种GH7家族的纤维素酶，其优选选自内切葡聚糖酶(EC 3.2.1.4)和至少一种另外的酶，其优选选自蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、甘露聚糖酶和DNA酶–全部如本文所公开。

甘露聚糖酶

在一个实施方案中，成分(a)中包含的至少一种酶选自甘露聚糖降解酶。至少一种甘露聚糖降解酶选自β-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.25)、内切-1,4-β-甘露糖苷酶(EC3.2.1.78)和1,4-β-甘露二糖苷酶(EC 3.2.1.100)。优选地，至少一种甘露聚糖降解酶选自内切-1,4-β-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.78)，在本文中可称作内切-β-1,4-D-甘露聚糖酶、β-甘露聚糖酶或甘露聚糖酶的一组酶。

可以根据本领域已知的标准测试方法测试具有甘露聚糖酶活性的多肽的甘露聚糖酶活性，例如通过将待测试的溶液施加到在包含0.2％AZCL半乳甘露聚糖(角豆树)的琼脂平板上冲出的4mm直径的孔中，即用于测定内切-1,4-β-D-甘露聚糖酶的底物，其可以以Catno.I-AzGMA形式得自Megazyme公司(Megazyme的互联网地址：http://www.megazyme.com/purchase/index.html)。

甘露聚糖降解活性可以在液体测定中如McCleary,B.V.(1978).CarbohydrateResearch,67(1),213-22所述那样使用用Remazol Brilliant BUE染色的角豆半乳甘露聚糖来测试。用于测试甘露聚糖降解活性的另一种方法为当与底物(例如瓜尔胶或刺槐豆胶(locust bean gut))一起温育时使用还原糖的检测-有关参考文献参见Miller,G.L.Useof Dinitrosalicylic Acid Reagent for Determination of ReducingSugars.Analytical Chemistry 1959；31:426–428。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种选自家族5或26的碱性甘露聚糖酶的甘露聚糖酶。术语“碱性甘露聚糖酶”意指涵盖在7至12、优选7.5至10.5范围的给定pH下具有其最大活性的至少40％的酶活性的甘露聚糖酶。

在一个实施方案中，成分(a)中包含的至少一种甘露聚糖酶选自源自芽孢杆菌属生物体的甘露聚糖酶，例如描述于JP-0304706[来自芽孢杆菌属的β-甘露聚糖酶]、JP-63056289[碱性的、热稳定的β-甘露聚糖酶]、JP-63036774[在碱性pH下产生β-甘露聚糖酶和β-甘露糖苷酶的芽孢杆菌属微生物FERM P-8856]、JP-08051975[来自嗜碱芽孢杆菌属AM-001的碱性β-甘露聚糖酶]、WO 97/11164[来自解淀粉芽孢杆菌的甘露聚糖酶]、WO 91/18974[在极端pH和温度下有活性的甘露聚糖酶]、WO 97/11164[来自解淀粉芽孢杆菌的甘露聚糖酶]、WO 2014/100018[内切-(3-甘露聚糖酶1，克隆自环状芽孢杆菌或迟缓芽孢杆菌菌株CMG1240(Bleman1；参见US 5,476,775)]。适合的甘露聚糖酶描述于WO 99/064619中。

在一个实施方案中，成分(a)中包含的至少一种甘露聚糖酶选自源自木霉属(Trichoderma)生物体的甘露聚糖酶，例如公开在WO 93/24622和WO 2008/009673中。

在一个实施方案中，成分(a)包含具有甘露聚糖酶活性的甘露聚糖酶变体，当与如上述公开的相应亲本酶的全长多肽序列相比时，这些变体是至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相似和/或相同的。

成分(a)可以包含可商购的甘露聚糖酶，例如

(Novozymes AIS)。

在一个实施方案中，成分(a)中包含的至少一种甘露聚糖酶选自具有WO 2005/003319的SEQ ID NO:388的31-490位序列的甘露聚糖酶和优选与其至少90％相同的变体。

根据本发明，在一个实施方案中，成分(a)包含至少两种甘露聚糖酶的组合，优选它们中的一种是碱性甘露聚糖酶；至少一种甘露聚糖酶选自如上述公开的内切-1,4-β-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.78)。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种碱性甘露聚糖酶，优选选自如上文所公开的内切-1,4-β-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.78)，和至少一种另外的酶，其优选选自蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶和DNA酶-全部如本文所公开。

DNA酶

在一个实施方案中，成分(a)中包含的至少一种酶选自DNA降解酶。所述酶通常催化DNA中磷酸二酯键的水解裂解。DNA酶被分类于例如E.C.3.1.11、E.C.3.1.12、E.C.3.1.15、E.C.3.1.16、E.C.3.1.21、E.C 3.1.22、E.C 3.1.23、E.C 3.1.24和E.C.3.1.25以及EC 3.1.21.X中，其中X＝1、2、3、4、5、6、7、8或9。

DNA酶活性可以在具有甲基绿的DNA酶测试琼脂(BD，Franklin Lakes，NJ，USA)上测定，所述琼脂应当根据来自供应商的手册制备。简言之，将21g琼脂溶解在500ml水中，然后在121℃下高压灭菌15min。将高压灭菌的琼脂在水浴中加温至10至48℃，将20ml琼脂倾入培养皿中，并通过在室温下孵育过夜(o/n)使其固化。在固化的琼脂平板上，加入5μl的酶溶液，并且DNA酶活性以点样酶溶液周围无色区的形式被观察到。

DNA酶活性可以用DNaseAlert^TM试剂盒(11-02-01-04，IDT Integrated DNATechnologies)根据供应商的手册来测定。简言之，将95μl DNA酶样品与5μl底物在微量滴定板中混合，并使用例如来自BMG Labtech的Clariostar微量滴定读数器(536nm激发，556nm发射)即刻测量荧光。

包含在成分(a)中的至少一种DNA酶可以选自源自芽孢杆菌属的DNA酶，例如源自食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)、霍氏芽孢杆菌(Bacillus horikoshii)、霍纳克芽孢杆菌(Bacillus horneckiae)、艾德里芽孢杆菌(Bacillus idriensis)、阿尔吉生芽孢杆菌(Bacillus algicola)、越南芽孢杆菌(Bacillus vietnamensis)、夏金波芽孢杆菌(Bacillus hwajinpoensis)、粘质类芽孢杆菌(Paenibacillus mucilanginosus)、印度芽孢杆菌(Bacillus indicus)、荧光芽孢杆菌(Bacillus luciferensis)、海黄芽孢杆菌(Bacillus marisflavi)；及其变体。在一个实施方案中，成分(a)中的至少一种DNA酶选自与WO 2019/081724的SEQ ID NO:1 80％相同的多肽。所述多肽可以在选自以下的位置处包含一个或多个取代:T1、G4、S7、K8、S9、S13、N16、T22、S25、S27、D32、L33、S39、G41、S42、D45、Q48、S57、S59、N61、T65、S66、V76、F78、P91、S101、S106、Q109、A112、S116、T127、S130、T138、Q140、S144、A147、C148、W154、T157、Y159、G162、S167、Q174、G175、L177、S179和C180–全部如WO2019/081724和WO 2019/081721中所公开。

在一个实施方案中，成分(a)包含具有DNA降解活性的DNA酶变体，当与如上文公开的相应亲本酶的全长多肽序列相比时，所述DNA酶变体是至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相似和/或相同的。

根据本发明，在一个实施方案中，成分(a)包含至少两种DNA酶的组合。

成分(b)

本发明的酶制剂包含酶稳定系统(成分(b))。所述酶稳定系统(成分(b))包含(bi)式(A)的化合物-(成分bi)；以及

(bii)至少一种选自含硼化合物和肽稳定剂的化合物–(成分bii)。

成分(bi)

本发明的酶稳定系统包含成分(bi)。

成分(bi)包含至少一种式(A)的化合物：

其中将式(A)中的变量定义如下：

R¹选自H和C₁-C₁₀烷基羰基，其中烷基可以是直链或支链的并且可以带有一个或多个羟基，

R²、R³、R⁴彼此独立地选自H、直链C₁-C₈烷基和支链C₃-C₈烷基、未被取代或被一个或多个羧酸酯或羟基取代的C₆-C₁₀-芳基、和C₆-C₁₀-芳基-烷基，其中后者的烷基选自直链C₁-C₈烷基或支链C₃-C₈烷基，其中R²、R³和R⁴的至少一个不是H。C₁-C₈烷基的实例为甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基等。支链C₃-C₈烷基的实例为2-丙基、2-丁基、仲丁基、叔丁基、2-戊基、3-戊基、异戊基等。未被取代或被一个或多个羧酸酯或羟基取代的C₆-C₁₀-芳基的实例为苯基、1-萘基、2-萘基、邻苯基羧酸基团、间苯基羧酸基团、对苯基羧酸基团、邻羟基苯基、对羟基苯基等。

在一个实施方案中，式(A)的化合物中的R¹选自H、乙酰基和丙酰基。在一个实施方案中，式(A)的化合物中的R¹为H。在一个实施方案中，式(A)的化合物中的R¹为乙酰基。在一个实施方案中，式(A)的化合物中的R¹为丙酰基。

在一个实施方案中，式(A)的化合物中的R²为H，且R³、R⁴彼此独立地选自直链C₁-C₈烷基和支链C₃-C₈烷基、未被取代或被一个或多个羧酸酯或羟基取代的C₆-C₁₀-芳基、和C₆-C₁₀-芳基-烷基，其中后者的烷基选自直链C₁-C₈烷基或支链C₃-C₈烷基。

在一个实施方案中，式(A)的化合物中的R²、R³、R⁴相同，其中R²、R³、R⁴选自直链C₁-C₈烷基和支链C₃-C₈烷基、未被取代或被一个或多个羧酸酯或羟基取代的C₆-C₁₀-芳基、和C₆-C₁₀-芳基-烷基，其中后者的烷基选自直链C₁-C₈烷基或支链C₃-C₈烷基。优选地，R²、R³、R⁴选自直链C₂-C₄烷基，优选C₂和C₄烷基。

在一个实施方案中，式(A)的化合物中的R¹为H，且R²、R³、R⁴选自直链C₂-C₄烷基、苯基甲基和邻苯基羧酸基团(水杨基)。

在一个实施方案中，式(A)的化合物中的R¹、R²和R³为H，且R⁴选自直链C₂-C₄烷基，优选C₂烷基。在一个实施方案中，式(A)的化合物中的R¹和R²为H，且R³和R⁴选自直链C₂-C₄烷基，优选C₂烷基。

在一个实施方案中，式(A)的化合物中的R¹为H，且R²、R³、R⁴选自直链C₂-C₄烷基，优选C₂和C₄烷基。

在一个实施方案中，式(A)的化合物中的R¹为乙酰基，且R²、R³、R⁴选自直链C₂-C₄烷基，优选C₂和C₄烷基。

成分(bi)包括式(A)的化合物的盐。盐包括碱金属盐和铵盐，例如单乙醇胺和三乙醇胺的那些。优选钾盐和钠盐。

在本发明的一个实施方案中，酶制剂、优选液体酶制剂包含相对于该酶制剂的总重1重量％至50重量％的成分(bi)。相对于酶制剂的总重，该酶制剂优选包含5重量％至45重量％、8重量％至30重量％、10重量％至35重量％、12重量％至30重量％或15重量％至25重量％的成分(bi)。

在本发明的一个实施方案中，成分(bi)包含化合物(bi)的至少一种至少部分水解的衍生物作为杂质。在本发明的一个实施方案中，成分(bi)包含如下的完全水解的化合物(bi’)作为杂质：

R3-OH

其中变量R¹、R²、R³和R⁴与上文针对成分(bi)所述的相同。

这种杂质可占成分(bi)的至多50mol-％，优选0.1-20mol-％，甚至更优选1-10mol-％。尽管杂质可能源自成分(bi)的合成并且可以通过纯化方法除去，但并不优选将其除去。

成分(bii)

本发明的酶稳定系统包含成分(bii)，其中成分(bii)包含至少一种选自含硼化合物和肽稳定剂的化合物。在一个实施方案中，成分(bii)包含至少一种选自4-FPBA和三肽稳定剂的化合物，其中三肽稳定剂优选为式(Da)的化合物。

在一个实施方案中，成分(bii)包含至少一种含硼化合物：

含硼化合物选自硼酸或其衍生物和硼酸(boric acid)或其衍生物和硼酸(boronic acid)或其衍生物如芳基硼酸或其衍生物、其盐及其混合物。硼酸(boric acid)在本文中可称作原硼酸。

在一个实施方案中，含硼化合物选自芳基硼酸及其衍生物。在一个实施方案中，含硼化合物选自苯硼酸(BBA)，其也称作苯基硼酸(PBA)，其衍生物及其混合物。在一个实施方案中，苯基硼酸衍生物选自式(Ca)和(Cb)的衍生物：

其中

R1选自氢、羟基、未取代或取代的C₁-C₆烷基和未取代或取代的C₁-C₆烯基；在一个优选的实施方案中，R选自羟基和未取代的C₁烷基；

R2选自氢、羟基、未取代或取代的C₁-C₆烷基和未取代或取代的C₁-C₆烯基；在一个优选的实施方案中，R选自H、羟基和取代的C₁烷基。

在一个实施方案中，苯基-硼酸衍生物选自4-甲酰基苯基硼酸(4-FPBA)、4-羧基苯基硼酸(4-CPBA)、4-(羟基-甲基)苯基硼酸(4-HMPBA)和对甲苯基硼酸(p-TBA)。

其他适合的衍生物包括：2-噻吩基硼酸、3-噻吩基硼酸、(2-乙酰氨基苯基)硼酸、2-苯并呋喃基硼酸、1-萘基硼酸、2-萘基硼酸、2-FPBA、3-FBPA、1-噻蒽基硼酸、4-二苯并呋喃硼酸、5-甲基-2-噻吩基硼酸、1-苯并噻吩-2硼酸、2-呋喃基硼酸、3-呋喃基硼酸、4,4联苯基-二硼酸、6-羟基-2-萘硼酸、4-(甲硫基)苯基硼酸、4-(三甲基甲硅烷基)苯基硼酸、3-溴噻吩硼酸、4-甲基-噻吩硼酸、2-萘基硼酸、5-溴噻吩硼酸、5-氯噻吩硼酸、二甲基噻吩硼酸、2-溴苯基硼酸、3-氯-苯基硼酸、3-甲氧基-2-噻吩硼酸、对甲基-苯基乙基硼酸、2-噻蒽基硼酸、二苯并噻吩硼酸、9-蒽硼酸、3,5-二氯苯基硼酸、二苯基硼酸酐、邻氯苯基硼酸、对氯苯基硼酸、间溴苯基硼酸、对溴苯基硼酸、对氟苯基硼酸、辛基硼酸、1,3,5-三甲基苯基硼酸、3-氯-4-氟苯基硼酸、3-氨基苯基硼酸、3,5-双-(三氟甲基)苯基硼酸、2,4-二氯苯基硼酸、4-甲氧基苯基硼酸及其混合物。

在一个实施方案中，相对于酶制剂的总重，所述酶制剂包含约0.1-2重量％的至少一种含硼化合物。优选地，相对于酶制剂的总重，酶制剂包含约0.15-1％，或0.2-0.5％，或约0.3％重量的至少一种含硼化合物。更优选地，相对于酶制剂的总重，酶制剂包含约0.3重量％的4-FPBA。

成分(bii)优选包含至少一种肽稳定剂。肽稳定剂选自二肽、三肽或四肽醛和醛类似物(B1-BO-R形式的任一种，其中R为H、CH₃、CX₃、CHX₂或CH₂X(X＝卤素)，BO为单氨基酸残基(在一个实施方案中具有任选取代的脂族或芳族侧链)；并且B1由一个或多个氨基酸残基(在一个实施方案中为一个、两个或三个)组成，任选地包含N-末端保护基，或如WO 09/118375和WO 98/13459中所述，或蛋白质类型的蛋白酶抑制剂，例如RASI、BASI、WASI(稻、大麦和小麦的双功能α-淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂)或CI₂或SSI。

在一个实施方案中，至少一种肽稳定剂选自式(Da)的化合物或其盐或选自式(Db)的化合物：

其中式(Da)和(Db)中的R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和Z如下所定义：

R¹、R²和R³各自独立地选自氢、任选取代的C_1-8烷基、任选取代的C_2-6烯基、任选取代的C_1-8烷氧基、任选取代的3-至12-元环烷基和任选取代的6-至10-元芳基；或其中R¹、R²和R³各自独立地选为–(CH₂)₃-，其也连接至-NH-C(H)-的氮原子，使得–N-C(H)R^1、2或3-形成5-元杂环；

R⁴和R⁵各自独立地选自氢、任选取代的C_1-8烷基、任选取代的C_2-6烯基、任选取代的C_1-8烷氧基、任选取代的C_1-4酰基、任选取代的C_1-8烷基苯基(例如苄基)和任选取代的6-至10-元芳基；或其中R⁴和R⁵相连接从而形成任选取代的5-或6-元环；

Z选自氢、N-末端保护基和一种或多种任选地包含N-末端保护基的氨基酸残基。

优选地，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Met、Pro、Phe、Trp、Ser、Thr、Asp、Gln、Tyr、Cys、Lys、Arg、His、Asn、Glu、间-酪氨酸、3,4-二羟基苯丙氨酸、Nva或Nle的L或D-氨基酸残基。更优选地，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Ala、Val、Gly、Arg、Leu、Phe、Ile、His或Thr的L或D-氨基酸残基。甚至更优选地，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Ala、Val、Gly、Arg、Leu、Ile或His的L或D-氨基酸残基。

优选地，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Met、Pro、Phe、Trp、Ser、Thr、Asp、Gln、Tyr、Cys、Lys、Arg、His、Asn、Glu、间-酪氨酸、3,4-二羟基苯丙氨酸、Nva或Nle的L或D-氨基酸残基。更优选地，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala、Cys、Gly、Pro、Ser、Thr、Val、Nva或Nle的L或D-氨基酸残基。甚至更优选地，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala、Gly、Pro或Val的L或D-氨基酸残基。

在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Ala、Val、Gly、Arg、Leu、Ile或His的L或D-氨基酸残基，且R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala的L或D-氨基酸残基。在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Ala、Val、Gly、Arg、Leu、Ile或His的L或D-氨基酸残基，且R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Gly的L或D-氨基酸残基。在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Ala、Val、Gly、Arg、Leu、Ile或His的L或D-氨基酸残基，且R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Pro的L或D-氨基酸残基。在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Ala、Val、Gly、Arg、Leu、Ile或His的L或D-氨基酸残基，且R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Val的L或D-氨基酸残基。

在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Ala的L或D-氨基酸残基，且R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala、Gly、Pro或Val的L或D-氨基酸残基。在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Val的L或D-氨基酸残基，且R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala、Gly、Pro或Val的L或D-氨基酸残基。在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Gly的L或D-氨基酸残基，且R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala、Gly、Pro或Val的L或D-氨基酸残基。在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Arg的L或D-氨基酸残基，且R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala、Gly、Pro或Val的L或D-氨基酸残基。在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Leu的L或D-氨基酸残基，且R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala、Gly、Pro或Val的L或D-氨基酸残基。在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Ile的L或D-氨基酸残基，且R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala、Gly、Pro或Val的L或D-氨基酸残基。在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为His的L或D-氨基酸残基，且R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala、Gly、Pro或Val的L或D-氨基酸残基。

在一个实施方案中，R³为这样的基团，其选自任选取代的C_1-8烷基，例如CH₂Si(CH₃)₃、C_1-8烷基磷酸酯如(CH₂)_nPO(OR)₂、C_1-8烷基腈如CH₂CN、C_1-8烷基砜如CH₂SO₂R、C_1-8烷基醚如(CH₂)_nOR、C_1-8烷基酯如CH₂CO₂R、和C_1-8烷基酰胺；任选取代的C_1-8烷氧基、任选取代的3-至12-元环烷基，如环己基甲基；和任选取代的6-至10-元芳基，其中R独立地选自氢、任选取代的C_1-8烷基、任选取代的C_1-8烷氧基、任选取代的3-至12-元环烷基、任选取代的6-至10-元芳基和任选取代的6-至10-元杂芳基，且n为1-8的整数，即1、2、3、4、5、6、7或8。

优选地，R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为Tyr、间-酪氨酸、3,4-二羟基苯丙氨酸、Phe、Val、Ala、Met、Nva、Leu、Ile或Nle或其他携带烷基的非天然氨基酸的L或D-氨基酸残基。更优选地，R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为Tyr、Phe、Val、Ala或Leu的L或D-氨基酸残基。

在一个实施方案中，R¹、R²和R³为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO、NH-CHR²-CO和NH-CHR³-CO各自为Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Met、Pro、Phe、Trp、Ser、Thr、Asp、Gln、Tyr、Cys、Lys、Arg、His、Asn、Glu、间-酪氨酸、3,4-二羟基苯丙氨酸、Nva或Nle的L或D-氨基酸残基。

在一个实施方案中，R¹和R²为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO和NH-CHR²-CO各自为Ala、Cys、Gly、Pro、Ser、Thr、Val、Nva或Nle的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为Tyr、间-酪氨酸、3,4-二羟基苯丙氨酸、Phe、Val、Ala、Met、Nva、Leu、Ile或Nle的L或D-氨基酸残基。

在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Gly或Val的L或D-氨基酸残基，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为Tyr、Ala或Leu的L或D-氨基酸残基。

在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Val的L或D-氨基酸残基，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为Leu的L或D-氨基酸残基。

在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Gly的L或D-氨基酸残基，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为Tyr的L或D-氨基酸残基。

在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Val的L或D-氨基酸残基，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为Ala的L或D-氨基酸残基。

在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Val的L或D-氨基酸残基，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为的AlaL或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为正亮氨酸的L或D-氨基酸残基。

在一个实施方案中，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Val的L或D-氨基酸残基，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为正亮氨酸的L或D-氨基酸残基。

在一个实施方案中，R⁴和R⁵各自独立地选自氢、甲基、乙基、异丙基、正丙基、异丁基、仲丁基、正丁基、异戊基、2-戊基、3-戊基、新戊基、环戊基、环己基和苄基。

R⁴和R⁵可以各自独立地选自甲基、乙基、异丙基、2-丁基或3-戊基。更优选地，R⁴和R⁵均为甲基、乙基、异丙基、2-丁基或3-戊基。

Z选自氢、N-末端保护基和一种或多种任选地包含N-末端保护基的氨基酸残基。优选地，Z为N-末端保护基。

N-末端保护基可以选自甲酰基、乙酰基(Ac)、苯甲酰基(Bz)、三氟乙酰基、芴基甲氧基羰基(Fmoc)、甲氧基琥珀酰基、芳族和脂族尿烷保护基、苄氧基羰基(Cbz)、叔丁氧基羰基(Boc)、金刚烷氧基羰基、对甲氧基苄基羰基(Moz)、苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)或对甲氧基苯基(PMP)、甲氧基羰基(Moc)；甲氧基乙酰基(Mac)；氨基甲酸甲酯、甲氨基羰基/甲基脲基团、三苯甲基(tityl)(Trt)、3,5-二甲氧基苯基异丙氧基羰基(Ddz)、2-(4-联苯基)异丙氧基羰基(Bpoc)、2-硝基苯基亚磺酰基(Nps)、2-(4-硝基苯基磺酰基)-乙氧基羰基(Nsc)、1,1-二氧代苯并[b]噻吩-2-基甲氧基羰基(Bsmoc)、(1,1-二氧杂萘并[1,2-b]噻吩-2-基)甲氧基羰基(α-Nsmoc)、1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代-环己-1-亚基)-3-甲基丁基(ivDde)、2,7-二叔丁基-Fmoc(Fmoc*)、2-氟-Fmoc(Fmoc(2F))、2-单异辛基-Fmoc(mio-Fmoc)和2,7-二异辛基-Fmoc(dio-Fmoc)、四氯邻苯二甲酰基(TCP)、四氟硼酸2-苯基(甲基)磺脲基(sulfonio))乙氧基羰基酯(Pms)、乙磺酰基乙氧基羰基(Esc)、2-(4-磺苯基磺酰基)乙氧基羰基(Sps)、烯丙氧基羰基(Alloc)、邻硝基苯磺酰基(oNBS)、2,4-二硝基苯磺酰基(dNBS)、苯并噻唑-2-磺酰基(Bts)、2,2,2-三氯乙氧基羰基(Troc)、二硫杂琥珀酰基(Dts)、对硝基苄氧基羰基(pNZ)、α-叠氮酸、炔丙氧基羰基(Poc)、邻硝基苄氧基羰基(oNZ)、4-硝基-藜芦基氧基羰基(NVOC)、2-(2-硝基苯基)丙氧基羰基(NPPOC)、2-(3,4-亚甲基-二氧基-6-硝基苯基)丙氧基羰基(MNPPOC)、9-(4-溴苯基)-9-芴基(BrPhF)、叠氮基甲氧基羰基(Azoc)、六氟丙酮(HFA)、2-氯苄氧基羰基(Cl-Z)、三氟乙酰基(tfa)、2-(甲基磺酰基)乙氧基羰基(Msc)、四氯邻苯二甲酰基(TCP)、苯基二硫烷基乙氧基羰基(Phdec)、2-吡啶基二硫烷基乙氧基羰基(Pydec)或4-甲基三苯甲基(Mtt)。

如果Z为包含N-末端保护基的一个或多个氨基酸残基，则N-末端保护基优选为小的脂族基团，例如甲酰基、乙酰基、芴基甲氧基羰基(Fmoc)、叔丁氧基羰基(Boc)、甲氧基羰基(Moc)；甲氧基乙酰基(Mac)；氨基甲酸甲酯或甲基氨基羰基/甲基脲基团。在三肽的情况下，N-末端保护基优选为庞大的芳族基团，例如苯甲酰基(Bz)、苄氧基羰基(Cbz)、对甲氧基苄基羰基(MOZ)、苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)或对甲氧基苯基(PMP)。

其他适合的N-末端保护基描述于Greene’s Protective Groups in OrganicSynthesis，第5版，Peter G.M.Wuts编辑，John Wiley&Sons于2014年出版，和Isidro-Llobet等人,Amino Acid-Protecting Groups,Chem.Rev.2009 109(6),2455-2504中。

优选地，N-末端保护基选自苄氧基羰基(Cbz)、对甲氧基苄基羰基(MOZ)、苄基(Bn)、苯甲酰基(Bz)、对甲氧基苄基(PMB)、对甲氧基苯基(PMP)、甲酰基、乙酰基(Ac)、甲氧基、烷氧基羰基、甲氧基羰基、芴基甲氧基羰基(Fmoc)或叔丁氧基羰基(Boc)。最优选地，N-末端保护基为苄氧基羰基(Cbz)。

在一个优选的实施例中，所述肽稳定剂选自式(Db)的化合物，其中R¹和R²为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO和NH-CHR²-CO各自为选自Ala、Cys、Gly、Pro、Ser、Thr、Val、Nva或Nle的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为选自Tyr、间-酪氨酸、3,4-二羟基苯丙氨酸、Phe、Val、Ala、Met、Nva、Leu、Ile或Nle的L或D-氨基酸残基；

且

N-末端保护基Z选自苄氧基羰基(Cbz)、对甲氧基苄基羰基(MOZ)、苄基(Bn)、苯甲酰基(Bz)、对甲氧基苄基(PMB)、对甲氧基苯基(PMP)、甲酰基、乙酰基(Ac)、甲氧基、烷氧基羰基、甲氧基羰基、芴基甲氧基羰基(Fmoc)或叔丁氧基羰基(Boc)。

在一个更优选的实施例中，式(Db)的肽稳定剂的特征在于

R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Val的L或D-氨基酸残基，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为Leu的L或D-氨基酸残基；

且

N-末端保护基Z选自苄氧基羰基(Cbz)、对甲氧基苄基羰基(MOZ)、苄基(Bn)、苯甲酰基(Bz)、对甲氧基苄基(PMB)、对甲氧基苯基(PMP)、甲酰基、乙酰基(Ac)、甲氧基、烷氧基羰基、甲氧基羰基、芴基甲氧基羰基(Fmoc)或叔丁氧基羰基(Boc)；优选地，N-末端保护基Z为苄氧基羰基(Cbz)。

在一个实施方案中，相对于酶制剂的总重，所述酶制剂包含约0.1-2重量％的至少一种肽稳定剂。优选地，相对于酶制剂的总重，所述酶制剂包含按重量计约0.15-1％、或0.2-0.5％、或约0.3％的至少一种肽稳定剂。更优选地，所述酶制剂包含相对于该酶制剂总重约0.3重量％的式(Db)的肽稳定剂，其特征在于

R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Val的L或D-氨基酸残基，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为Leu的L或D-氨基酸残基；

且

N-末端保护基Z为苄氧基羰基(Cbz)。

成分(b)任选地包含稳定酶的其他化合物，例如

·至少一种选自山梨醇、甘露糖醇、赤藓三醇、葡萄糖、果糖和乳糖的多元醇；

·至少一种选自NaCl、KCl以及乳酸和甲酸的碱金属盐的盐；

·至少一种水溶性的锌(II)、钙(II)和/或镁(II)离子源，其向酶提供这类离子，以及其他金属离子(例如钡(II)、钪(II)、铁(II)、锰(II)、铝(III)、锡(II)、钴(II)、铜(II)、镍(II)和氧钒(IV))的水溶性源。

在一个实施方案中，本发明的酶制剂包含总量相对于该酶制剂的总重为约0.05重量％至2重量％、约0.08重量％至1重量％或0.1重量％至0.5重量％的肽稳定剂。优选地，相对于酶制剂的总重，该酶制剂包含约0.3重量％的如上公开的肽稳定剂。

成分(c)

本发明的液体酶制剂包含至少一种二醇(成分(c))。在一个实施方案中，相对于酶制剂的总重，成分(c)的总量约为10重量％至35重量％，优选12重量％至31重量％。

至少一种二醇(成分(c))选自包含4至10个C-原子的二醇。在本发明的一个方面，二醇中的-OH基团是邻位的，例如在1,2-戊二醇中。在本发明的另一方面，-OH基团位于末端，例如1,6-己二醇。

在一个实施方案中，具有邻位-OH基团的二醇包含4至10个C-原子，优选4至8个C-原子，更优选4至6个C-原子，最优选4至5个C-原子。二醇可以选自1,2-丁二醇和1,2-戊二醇。具有邻位-OH基团的二醇可以以相对于酶制剂的总重1重量％至5重量％的量或约4重量％的量包含在酶制剂中。

在一个实施方案中，具有末端-OH基团的二醇包含3至10个C-原子，优选4至8个C-原子。二醇优选选自1,4-丁二醇、1,6-己二醇和1,8-辛二醇。具有末端-OH基团的二醇优选以相对于酶制剂的总重10％至30％重量或12％至27％重量的量包含在酶制剂中。在一个实施方案中，至少一种具有末端-OH基团的二醇优选以相对于酶制剂的总重25重量％至30重量％、约27重量％的量包含在酶制剂中。

在一个实施方案中，成分(c)包含至少两种二醇的组合，其中二醇的至少一种选自具有包含3至10个C-原子，优选4至8个C-原子的末端-OH基团的二醇。更优选地，具有末端-OH基团的二醇选自1,4-丁二醇、1,6-己二醇和1,8-辛二醇。

在一个实施方案中，成分(c)包含至少两种二醇，其中

·第一种二醇选自具有邻位-OH基团的二醇，所述邻位-OH基团包含4至10个C-原子，优选4至8个C-原子，更优选4至6个C-原子，最优选4至5个C-原子；所述二醇可以选自1,2-丁二醇和1,2-戊二醇；以及

·第二种二醇选自具有包含3至10个C-原子，优选4至8个C-原子的末端-OH基团的二醇；所述二醇可以选自1,4-丁二醇、1,6-己二醇和1,8-辛二醇。

在一个实施方案中，成分(c)包含混合比为1:10、1:9、1:8、1:7或1:6的具有包含4至10个C-原子的邻位-OH基团的二醇和选自具有包含3至10个C-原子的末端-OH基团的二醇的二醇的混合物。在一个实施方案中，混合比在1:6至1:8的范围内，更优选在1:7至1:6的范围内。混合比优选为1:6.75。混合比优选是指重量比。

相对于酶制剂的总重，成分(c)可以以约1-40重量％的量包含在酶制剂中。相对于酶制剂的总重，成分(c)可以以按重量计约2-35％、4-30％或10-27％的量包含在酶制剂中。

在一个实施方案中，所述酶制剂包含约2-5重量％的1,2-丁二醇与约10-30重量％的选自1,4-丁二醇、1,6-己二醇和1,8-辛二醇的至少一种二醇的组合；重量％为相对于该酶制剂的总重。

在一个实施方案中，所述酶制剂包含约2-5重量％的1,2-戊二醇与约10-30重量％的选自1,4-丁二醇、1,6-己二醇和1,8-辛二醇的至少一种二醇的组合；重量％为相对于该酶制剂的总重。

在一个实施方案中，包含在本发明的酶制剂中的成分(bi)和成分(c)的重量比在约2.5:1至约0.8:1的范围内。在一个优选的实施方案中，成分(bi)与至少一种具有位于末端的包含4-8个C-原子的-OH的二醇的重量比为2.1:1-0.9:1，优选该重量比为0.9:1。

成分(d)

本发明的液体酶制剂任选地包含成分(d)，其包含至少一种化合物，该化合物选自

(di)溶剂、(成分(di))和

(dii)稳定液体酶制剂本身的化合物(成分(dii))。

本发明的酶制剂包含相对于酶制剂的总重在5重量％至50重量％范围内、在5重量％至30重量％范围内、在5重量％至25重量％范围内或在10重量％至40重量％范围内的量的水。

成分(di):有机溶剂

在一个实施方案中，本发明的酶制剂包含至少一种有机溶剂，其选自乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇、乙二醇、丙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、1,2-丁二醇、甘油(1,2,3-丙三醇)、二甘醇、丙二甘醇、丁二甘醇、己二醇、(聚)乙二醇甲醚(甲氧基聚乙二醇；mPEG)、乙二醇乙醚、乙二醇丙醚和苯氧乙醇，优选乙醇、异丙醇或丙二醇。此外，本发明的酶制剂可以包含至少一种选自例如2-丁氧基乙醇、异丙醇和d-柠檬烯这样的化合物的有机溶剂。

在一个实施方案中，所述酶制剂包含约1-40重量％，优选约5-35重量％，更优选约10-30重量％，甚至更优选≤20％重量％，下限约为5-10重量％的有机溶剂，优选选自乙二醇、丙二醇、1,2-丙二醇(丙二醇；MPG)、1,3-丙二醇、1,2-丁二醇、甘油、二甘醇、丙二甘醇、丁二甘醇、己二醇、(聚)乙二醇甲醚、乙二醇乙醚、乙二醇丙醚和苯氧乙醇，优选乙醇、异丙醇、MPEG或丙二醇(1,2-丙二醇)。在一个实施方案中，所述酶制剂包含约10-30重量％的1,2-丙二醇。在一个实施方案中，所述酶制剂包含约10-30重量％的聚乙二醇甲醚。所有重量％均相对于所述酶制剂的总重。

在一个实施方案中，所述酶制剂包含至少一种有机溶剂和成分(c)，二者重量比为约1:2至约1:3.3，所述有机溶剂优选选自1,2-丙二醇和聚乙二醇甲醚。在一个优选的实施方案中，成分(c)包含至少一种二醇，其选自包含3至10个C-原子，优选4至8个C-原子的具有末端-OH基团的二醇；所述二醇可以选自1,4-丁二醇、1,6-己二醇和1,8-辛二醇。

在一个优选的实施方案中，所述酶制剂包含至少一种有机溶剂和成分(c)，二者重量比为约1:2至约1:3.3，其中所述有机溶剂优选选自1,2-丙二醇和聚乙二醇甲醚，并且其中成分(c)至少包含1,6-己二醇。

在一个实施方案中，所述酶制剂包含重量比为约1:2至约1:3.3的至少一种有机溶剂(优选选自1,2-丙二醇和聚乙二醇甲醚)和成分(c)，其中成分(c)包含1,6-己二醇和至少一种如上述所公开的具有邻位-OH的二醇(优选选自1,2-丁二醇和1,2-戊二醇)的混合物，其中1,6-己二醇与具有邻位-OH的二醇的重量比为10:1、9:1、8:1、7:1或6:1，优选在6:1至8:1的范围内，更优选在7:1至6:1的范围内，最优选6.75:1。

成分(dii):使液体酶制剂本身稳定的化合物

本发明的酶制剂优选包含至少一种稳定液体酶制剂本身的化合物。稳定液体酶制剂本身的化合物是指除建立液体制剂的储存稳定性所需的酶稳定剂之外的任何化合物，其量为可有效确保储存稳定性的量。

对于本领域技术人员而言，在液体制剂背景下的储存稳定性通常包括产品外观和剂量均匀性的方面。

产品的外观受产品的pH和存在的化合物如防腐剂、抗氧化剂、粘度调节剂、乳化剂等的影响。

剂量的均匀性通常与产品的均匀性有关。

本发明的酶制剂可以是碱性的或表现出中性或微酸性pH值，例如5至14、5.3至13、5.5至9或5.5至8.5。在一个实施方案中，所述酶制剂的pH为5-8。

本发明的液体酶制剂可以包含至少一种防腐剂。以有效防止微生物在液体酶制剂中，优选在含水酶制剂中生长的量加入防腐剂。在一个实施方案中，至少一种防腐剂选自：

苄基半缩甲醛，同义词：(苄氧基)甲醇(CAS编号14548-60-8)；

(亚乙二氧基)二甲醇，同义词：Dascocide 9；(亚乙二氧基)二甲醇(乙二醇与多聚甲醛的反应产物(EGForm))(CAS编号3586-55-8)；

.α.,.α.′,.α.″-三甲基-1,3,5-三嗪-1,3,5(2H,4H,6H)-三乙醇,同义词:三(N-羟丙基)六氢三嗪，六氢-1,3,5-三(2-羟丙基)-s-三嗪(HPT,CAS编号25254-50-6)；

2,2-二溴-2-氰基乙酰胺(DBNPA,CAS编号10222-01-2)；

2,2′-二硫代双[N-甲基苯甲酰胺](DTBMA,CAS编号2527-58-4)；

2--2-(溴甲基)戊二腈(DBDCB,CAS编号35691-65-7)；

2-丁酮，过氧化物，同义词：2-丁酮-过氧化物(CAS编号1338-23-4)；

2-丁基-苯并[d]异噻唑-3-酮(BBIT,CAS编号4299-07-4)；

2-甲基-2H-异噻唑-3-酮(MIT,CAS编号2682-20-4)；

2-辛基-2H-异噻唑-3-酮(OIT,CAS编号26530-20-1)；

5-氯-2-甲基-2H-异噻唑-3-酮(CIT,CMIT,CAS编号26172-55-4)；

5-氯-2-甲基-2H-异噻唑-3-酮(CMIT，EINECS 247-500-7)和2-甲基-2H-异噻唑-3-酮(MIT，EINECS 220-239-6)的混合物(CMIT/MIT的混合物,CAS编号55965-84-9)；

1,2-苯并异噻唑-3(2H)-酮(BIT,CAS编号2634-33-5)；

3,3′-亚甲基双[5-甲基噁唑烷](噁唑烷/MBO,CAS编号66204-44-2)；

4,4-二甲基噁唑烷(CAS编号51200-87-4)；

7a-乙基二氢-1H,3H,5H-噁唑并[3，4-c]噁唑(EDHO,CAS编号7747-35-5)；

苄醇(CAS编号100-51-6)；

联苯-2-醇(CAS编号90-43-7)；

联苯-2-醇及其盐、邻苯基苯酚、MEA-o-苯基苯酚盐、苯基苯酚钾、苯基苯酚钠；

2-联苯酸钠(CAS编号132-27-4)；

顺式-1-(3-氯烯丙基)-3,5,7-三氮杂-1-氮鎓金刚烷氯化物(顺式CTAC,CAS编号51229-78-8)；

二癸基二甲基氯化铵(DDAC,CAS编号68424-95-3和CAS编号7173-51-5)；

十二烷基胍单盐酸盐(CAS编号13590-97-1)；

乙醇(CAS编号64-17-5)；

正丙醇(1-丙醇，CAS编号71-23-8)

己-2,4-二烯酸(山梨酸，CAS编号110-44-1)及其盐，例如山梨酸钙、山梨酸钠(E,E)-己-2，4-二烯酸钾(山梨酸钾,CAS编号24634-61-5)；

过氧化氢(CAS编号7722-84-1)；

乳酸及其盐；

L-(+)-乳酸(CAS编号79-33-4)；

2-甲基-1,2-苯并噻唑-3(2H)-酮(MBIT,CAS编号2527-66-4)；

乌洛托品3-氯烯丙基氯(CTAC,CAS编号4080-31-3)；

由氨基甲酸铵和氯源N,N'-亚甲基双吗啉(MBM，CAS编号5625-90-1)产生的一氯胺；

N-(3-氨基丙基)-N-十二烷基丙烷-1,3-二胺(二胺,CAS编号2372-82-9)；

N-(三氯甲硫基)邻苯二甲酰亚胺(Folpet,CAS编号133-07-3)；

对-[(二碘甲基)磺酰基]甲苯(CAS编号20018-09-1)；

过乙酸(CAS编号79-21-0)；

聚六亚甲基双胍盐酸盐(PHMB,CAS编号1802181-67-4),

聚六亚甲基双胍盐酸盐(PHMB，CAS编号27083-27-8)，例如聚(亚氨基亚胺基羰基)-亚氨基六亚甲基盐酸盐，

聚(亚氨基碳亚胺基亚氨基碳亚胺基亚氨基-1,6-己二基)，聚氨基丙基双胍；

吡啶-2-硫醇1-氧化物，钠盐(吡啶硫酮钠,CAS编号3811-73-2)；

吡啶硫酮锌(吡啶硫酮锌,CAS编号13463-41-7)；

二氧化钛和氯化银的反应物料，氯化银(CAS编号7783-90-6)；

叠氮化钠(CAS编号26628-22-8)；

四氢-1,3,4,6-四(羟甲基)咪唑并[4,5-d]咪唑-2,5(1H,3H)-二酮(TMAD,CAS编号5395-50-6)；

四(羟甲基)硫酸鏻(2:1)(THPS,CAS编号55566-30-8)；

苯甲酸盐，例如苯甲酸铵、苯甲酸钙、苯甲酸镁、MEA-苯甲酸盐、苯甲酸钾；

苯甲酸酯，例如苯甲酸丁酯、苯甲酸乙酯、苯甲酸异丁酯、苯甲酸异丙酯、苯甲酸甲酯、苯甲酸苯酯、苯甲酸丙酯；

苯甲酸及其钠盐(CAS编号65-85-0,CAS编号532-32-1)；

丙酸及其盐，例如丙酸铵、丙酸钙、丙酸镁、丙酸钾、丙酸钠；

水杨酸及其盐，例如水杨酸钙、水杨酸镁、MEA水杨酸盐、水杨酸钠、水杨酸钾、TEA水杨酸盐；

无机亚硫酸盐和亚硫酸氢盐，例如亚硫酸钠、亚硫酸铵、亚硫酸氢铵、亚硫酸钾、亚硫酸氢钾、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、焦亚硫酸钾、焦亚硫酸氢钾(potassiummetabisulfite)；

氯丁醇(CAS编号57-15-8)；

4-羟基苯甲酸丁酯及其盐，例如对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸丁酯钠、对羟基苯甲酸丁酯钾；

4-羟基苯甲酸丙酯及其盐，例如对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丙酯钠、对羟基苯甲酸丙酯钾；

异丙基-4-羟基苯甲酸及其盐和酯；

异丁基-4-羟基苯甲酸及其盐和酯；

苄基-4-羟基苯甲酸及其盐和酯；

戊基-4-羟基苯甲酸及其盐和酯；

4-羟基苯甲酸及其盐和酯，例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸乙酯钾、对羟基苯甲酸钾、对羟基苯甲酸甲酯钾、对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸乙酯钠、对羟基苯甲酸钠、对羟基苯甲酸钙、对羟基苯甲酸甲酯钙、对羟基苯甲酸乙酯钙；

3-乙酰基-6-甲基吡喃-2,4(3H)-二酮及其盐，例如脱氢乙酸、脱氢乙酸钠(Cas编号520-45-6、4418-26-2、16807-48-0)；

3,3'-二溴-4,4'-六亚甲基二氧基二苄脒及其盐(包括羟乙基磺酸盐)，例如二溴六脒羟乙基磺酸盐(CAS编号93856-83-8)；

硫柳汞(CAS编号54-64-8)；

苯基汞盐(包括硼酸盐)，例如乙酸苯基汞、苯甲酸苯基汞(CAS编号62-38-4和94-43-9)；

十一碳-10-烯酸及其盐，例如十一碳烯酸、十一碳烯酸钾、十一碳烯酸钠、十一碳烯酸钙、MEA-十一碳烯酸、TEA-十一碳烯酸；

5-嘧啶胺，1,3-双(2-乙基己基)六氢-5-甲基-，例如海克替啶(CAS编号141-94-6)；

1-(4-氯苯基)-3-(3,4-二氯苯基)脲，例如三氯卡班(CAS No 101-20-2)；

氯甲酚，例如对氯间甲酚(CAS编号59-50-7)；

氯二甲苯酚(CAS Nos 88-04-0,1321-23-9)；

N,N”-亚甲基双[N′-[3-(羟甲基)-2,5-二氧代咪唑烷-4-基]脲]，同义词：咪唑烷基脲(CAS编号39236-46-9)；

乌洛托品(CAS编号100-97-0)；

乌洛托品3-氯烯丙基氯，同义词：夸特宁15(CAS编号4080-31-3)，

1-(4-氯苯氧基)-1-(咪唑-1-基)-3,3-二甲基丁-2-酮，同义词：氯米巴唑(CAS编号4080-31-3)；

1,3-双(羟甲基)-5,5-二甲基咪唑烷-2,4-二酮，同义词：DMDM乙内酰脲(CAS编号6440-58-0)；

1-羟基-4-甲基-6-(2,4,4-三甲基戊基)-2-吡啶酮及其单乙醇胺盐，例如1-羟基-4-甲基-6-(2,4,4-三甲基戊烯基)-2-吡啶酮、吡罗克酮乙醇胺(CAS编号50650-76-5、68890-66-4)；

2,2'-亚甲基双(6-溴-4-氯苯酚)，同义词：溴氯酚(CAS编号15435-29-7)；

4-异丙基-间甲酚，同义词：邻伞花烃-5-醇(CAS编号3228-02-2)；

2-苄基-4-氯苯酚，同义词：氯苄酚(CAS编号120-32-1)；

2-氯乙酰胺(CAS编号79-07-2)；

N,N'-双(4-氯苯基)-3,12-二亚氨基-2,4,11,13-四氮杂十四烷二脒及其二葡糖酸盐、二乙酸盐和二盐酸盐，例如氯己定、氯己定二葡糖酸盐、氯己定二乙酸盐、氯己定二盐酸盐(CAS编号55-56-1、56-95-1、18472-51-0、3697-42-5)；

烷基(C₁₂-C₂₂)三甲基溴化铵和烷基(C₁₂-C₂₂)三甲基氯化铵，例如山嵛基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基氯化铵、月桂基三甲基溴化铵、月桂基三甲基氯化铵、硬脂基三甲基溴化铵、硬脂基三甲基氯化铵(CAS编号17301-53-0、57-09-0、112-02-7、1119-94-4、112-00-5、1120-02-1、112-03-8)；4,4-二甲基-1,3-噁唑烷(CAS编号51200-87-4)；

N-(羟甲基)-N-(二羟甲基-1,3-二氧代-2,5-咪唑烷基-4)-N'-(羟甲基)脲，同义词：重氮烷基脲(CAS编号78491-02-8)；

苯甲脒(Benzenecarboximidamide)、4,4'-(1,6-己二基双(氧基))双-苯甲脒及其盐(包括羟乙基磺酸盐和对羟基苯甲酸盐)，例如去氧苯比妥、去氧苯比妥二羟乙基磺酸盐、对羟基苯甲酸去氧苯比妥(CAS编号3811-75-4、659-40-5、93841-83-9)；

5-乙基-3,7-二氧杂-1-氮杂二环[3.3.0]辛烷，同义词：7-乙基二环噁唑烷(CAS编号7747-35-5)；

3-(对-氯苯氧基)-丙烷-1,2-二醇，同义词：氯苯甘油醚(CAS编号104-29-0)；羟甲基氨基乙酸钠，同义词：N-(羟甲基)甘氨酸钠，羟甲基甘氨酸钠(CAS编号70161-44-3)；

苯甲铵，N,N-二甲基-N-[2-[2-[4-(1,1,3,3,-四甲基丁基)苯氧基]乙氧基]-乙基]-，氯化物，同义词：苄索氯铵CAS编号121-54-0)；

苯扎氯铵、苯扎溴铵和苯扎糖精盐，例如苯扎氯铵、苯扎溴铵、苯扎糖精盐(CAS编号8001-54-5、63449-41-2、91080-29-4、68989-01-5、68424-85-1、68391-01-5、61789-71-7、85409-22-9)；

甲醇，(苯基甲氧基)，同义词：苄基半缩甲醛(CAS编号14548-60-8)；

3-碘-2-丙炔基丁基氨基甲酸酯(IPBC,CAS编号55406-53-6)

月桂酰精氨酸乙酯HCl(CAS编号60372-77-2)；

1,2,3-丙烷三羧酸，2-羟基-,一水合物和1,2,3-丙烷三羧酸，2-羟基-银(1+)盐,一水合物，INCI:柠檬酸(和)柠檬酸银；

四氢-3,5-二甲基-1,3,5-噻二嗪-2-硫酮(又名：3,5-二甲基-1,3,5-噻二嗪烷-2-硫酮，

DZ，

DZ P，Dazomet，CAS编号533-74-4)；

2,4-二氯苄醇(CAS-编号1777-82-8，又名：二氯苄醇、2,4-二氯-苯甲醇、(2,4-二氯-苯基)-甲醇、DCBA、

DA)；

1-丙醇(CAS编号71-23-8，又名：正丙醇、丙-1-醇、正丙醇、

NP S)；

5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷(CAS-编号30007-47-7，又名：5-溴-5-硝基-间-二噁烷,

)；

2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇(CAS-编号52-51-7，又名：2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇、

BN、Myacide AS)；

戊二醛(CAS-编号111-30-8，又名:1-5-戊二醛、戊-1,5-二醛、戊二醛、戊二醛、

GA、

GA 50、

GA)；

乙二醛(CAS编号107-22-2；又名：乙二醛(ethandial)、乙醛(oxylaldehyde)、1,2-乙二醛(ethandialdehyde)、

GL)；

2,4,4'-三氯-2'-羟基二苯醚(CAS编号3380-34-5，又名：三氯生、

DP300、

MP,TCS)；

4,4’-二氯2-羟基二苯醚(CAS-编号.3380-30-1)，又名：5-氯-2-(4-氯苯氧基)苯酚、二氯生、DCPP，其可以商品名

HP 100以30wt％的4,4'-二氯2-羟基二苯醚在1,2-丙二醇中的溶液的形式商购获得；

2-苯氧乙醇(CAS编号122-99-6，又名：苯氧乙醇、甲基苯基乙二醇、苯氧基乙醇、乙二醇苯基醚、乙二醇单苯基醚、

PE)；

苯氧基丙醇(CAS-编号770-35-4，CAS编号4169-04-4，丙二醇苯基醚，苯氧基异丙醇，1-苯氧基-2-丙醇，2-苯氧基-1-丙醇)；

葡糖鱼精蛋白(CAS-编号164907-72-6，化学描述：谷氨酸和烷基丙二胺的反应产物，又名：葡糖鱼精蛋白50)；

环己基羟基重氮烯鎓-1-氧化物，钾盐(CAS编号66603-10-9，又名：N-环己基-重氮烯鎓二氧化物，钾HDO，二甲苯，

KD)；

甲酸(CAS-编号64-18-6，又名：甲酸，

FM，

FM 75，

FM 85，

FM 99，

FM)及其盐，例如甲酸钠(CAS编号141-53-7)；

过甲酸及其盐；

无机银配合物，例如银沸石和银玻璃化合物(例如

B5000、

B6000、

B7000)和WO-A-99/18790、EP1041879B1中所述的其他物质；1,3,5-三-(2-羟乙基)-六氢-1,3,5-三嗪(CAS-编号4719-04-4，又名：六氢三嗪、三(羟乙基)-己基氢三嗪、己基氢-1,3,5-三(2-羟乙基)-s-三嗪、2,2',2”-(六氢-1,3,5-三嗪-1,3,5-三基)三乙醇、

HT)；

在一个实施方案中，本发明的酶制剂包含至少一种防腐剂，其选自2-苯氧乙醇、戊二醛、2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇和酸或其盐形式的甲酸，以及4,4'-二氯2-羟基二苯醚。

在一个实施方案中，本发明的酶制剂包含至少一种防腐剂，其量相对于该酶制剂的总重为2ppm至5重量％。

本发明的酶制剂可以包含苯氧乙醇，其量相对于该酶制剂的总重为0.1重量％至2重量％。本发明的酶制剂可以包含用量为20ppm-1000ppm的2-溴-2-硝基丙-1,3-二醇。本发明的酶制剂可以包含10ppm-2000ppm的量的戊二醛。本发明的酶制剂可以包含相对于该酶制剂的总重范围为0.05％-0.5重量％的甲酸和/或甲酸盐。本发明的酶制剂可以包含4,4'-二氯2-羟基二苯醚，其用量为0.001％-3重量％,0.002％-1重量％或0.01％-0.6重量，均相对于酶制剂的总重计。

在一个优选的实施方案中，本发明的酶制剂包含

成分(a):至少一种酶，其选自枯草杆菌蛋白酶型蛋白酶(EC 3.4.21.62)，优选具有R101E的与EP 1921147中所述的SEQ ID NO:22 80％相同的蛋白酶，任选地与至少一种另外的酶组合，所述另外的酶优选选自α-淀粉酶；和

成分(b):酶稳定系统，其包含至少一种式(A)的化合物

其中式(A)中的变量如下：

R¹选自H和C₁-C₁₀烷基羰基，其中烷基可以为直链或支链的并且可以带有一个或多个羟基，

R²、R³、R⁴彼此独立地选自H、直链C₁-C₅烷基和支链C₃-C₁₀烷基、未被取代或被一个或多个羧酸酯或羟基取代的C₆-C₁₀-芳基、和C₆-C₁₀-芳基-烷基，其中后者的烷基选自直链C₁-C₈烷基或支链C₃-C₈烷基，其中R²、R³和R⁴的至少一个不为H；

和

至少一种选自肽稳定剂的化合物，所述肽稳定剂选自式(Db)的化合物，其中

R¹和R²为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO和NH-CHR²-CO各自为选自Ala、Cys、Gly、Pro、Ser、Thr、Val、Nva或Nle的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为选自Tyr、间-酪氨酸、3,4-二羟基苯基丙氨酸、Phe、Val、Ala、Met、Nva、Leu、Ile或Nle的L或D-氨基酸残基；且N-末端保护基Z选自苄氧基羰基(Cbz)、对甲氧基苄基羰基(MOZ)、苄基(Bn)、苯甲酰基(Bz)、对甲氧基苄基(PMB)、对甲氧基苯基(PMP)、甲酰基、乙酰基(Ac)、甲氧基、烷氧基羰基、甲氧基羰基、芴基甲氧基羰基(Fmoc)或叔丁氧基羰基(Boc)。

和

成分(c):一种或多种二醇，优选选自

具有邻位-OH基团的包含4-5个C-原子的二醇，和

具有末端-OH基团的包含4-8个C-原子的二醇；

和

成分(d):至少一种化合物，其选自(i)溶剂和(ii)稳定所述液体酶制剂本身的化合物。

优选地，成分(d)包含至少一种如上述所公开的溶剂。

在一个实施方案中，成分(d)不含防腐剂。

制备酶制剂的方法：

本发明涉及制备酶制剂的方法，所述方法包括在一个或多个步骤中混合至少如上述所公开的成分(a)、如上述所公开的成分(b)和如上述所公开的成分(c)以及任选地如上述所公开的成分(d)的步骤。优选地，在一个或多个步骤中以任何顺序进行混合。

在一个实施方案中，本发明涉及制备酶制剂的方法，所述方法包括混合如上述公开的成分(a)、(b)和(c)的步骤，其中成分(a)优选包含至少一种蛋白酶；和任选地至少一种选自淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶和甘露聚糖酶的酶–全部如上文所公开。

至少一种蛋白酶优选选自上文公开的枯草杆菌蛋白酶，更优选选自

·如EP 1921147中所述的SEQ ID NO:22的蛋白酶或其具有蛋白水解活性的变体，优选与具有R101E的EP 1921147中所述的SEQ ID NO:22 80％相似和/或相同的蛋白酶，和

·如WO 89/06279的表Ia)中公开的枯草杆菌蛋白酶309或其具有蛋白水解活性的变体。

至少一种淀粉酶优选选自如上述公开的α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)，更优选至少一种淀粉酶选自

·来自芽孢杆菌属707的淀粉酶或其具有淀粉分解活性的变体，优选选自如WO99/19467中公开的具有SEQ ID NO:6的淀粉酶及其具有淀粉分解活性的变体；

·淀粉酶，其选自包含如WO 00/60060中所述的SEQ ID NO:2的1至485位氨基酸的那些，具有如WO 2006/002643中所述的SEQ ID NO:12的那些，及其具有淀粉分解活性的变体；

·来自盐敏芽孢杆菌的淀粉酶或其具有淀粉分解活性的变体，优选选自如WO2013/001078中披露的具有SEQ ID NO:1和2的淀粉酶；具有如WO 2011/098531中所述的SEQID NO:6；及其具有解淀粉活性的变体；

·来自解淀粉芽孢杆菌的淀粉酶或其具有淀粉分解活性的变体，优选选自根据WO2016/092009的SEQ ID NO:3的淀粉酶；

·根据WO 2014/183920的杂合淀粉酶，其具有与WO 2014/183920的SEQ ID NO:2具有至少90％同一性的A和B结构域以及具有与WO 2014/183920的SEQ ID NO:6具有至少90％同一性的C结构域，其中该杂合淀粉酶具有淀粉分解活性；优选地，杂合α-淀粉酶与WO2014/183920的SEQ ID NO:23至少95％相同并且具有淀粉分解活性；

·根据WO 2014/183921的杂合淀粉酶，其具有与WO 2014/183921中公开的SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:26、SEQ IDNO:32和SEQ ID NO:39具有至少75％同一性的A和B结构域以及与WO 2014/183921的SEQ IDNO:6具有至少90％同一性的C结构域，其中该杂合淀粉酶具有淀粉分解活性；优选地，杂合α-淀粉酶与WO 2014/183921中公开的SEQ ID NO:30至少95％相同并且具有淀粉分解活性。

在一个实施方案中，成分(a)包含至少一种蛋白酶和至少一种淀粉酶，两者均如上述所公开。

成分(b)包含如上述所公开的成分(bi)和(bii)。

在一个实施方案中，将成分(bi)和(bii)一起或彼此单独地加入到成分(a)中。

在一个实施方案中，成分(a)为液体，其中至少一种酶可以被包含在如上述公开的液体酶浓缩物中。液体成分(a)可以在其补充成分(bi)之前或之后补充成分(bii)。

液体成分(a)可以补充有成分(bi)，其中成分(bi)至少部分地溶解在液体成分(a)中。在一个实施方案中，液体成分(a)优选由发酵产生。优选地，在添加成分(c)之后，在添加成分(a)之前或之后，将成分(bi)全部溶解。

在一个实施方案中，制备本发明酶制剂的方法至少包含下列步骤：

(1)将成分(bi)和/或成分(bii)与成分(c)混合，和

(2)加入成分(a)。

在一个实施方案中，制备本发明酶制剂的方法至少包含下列步骤：

(1)将成分(bi)和/或成分(bii)与成分(d)混合，

(2)加入成分(c)，和

(3)加入成分(a)。

成分(bi)和/或(bii)可以为固体。固体成分(bi)和/或(bii)可以在与成分(c)接触之前加入到固体成分(a)中。与成分(c)接触优选导致至少一种分子成分(bi)和/或至少一种分子成分(bii)和/或至少一种成分(a)的溶解，导致至少一种成分(a)稳定化。

在一个实施方案中，得到的酶制剂是均质的和储存稳定的，满足本文公开的标准。

在一个方面，本发明涉及至少一种选自具有末端-OH基团的包含3至10个C-原子的二醇的二醇在通式(A)的化合物存在下用于改善至少一种水解酶的酶稳定性和/或酶制剂稳定性的用途：

其中式(A)中的变量如下：

R¹选自H和C₁-C₁₀烷基羰基，其中烷基可以为直链或支链的，且可以带有一个或多个羟基，

R²、R³、R⁴彼此独立地选自H、直链C₁-C₅烷基和支链C₃-C₁₀烷基、未被取代或被一个或多个羧酸酯或羟基取代的C₆-C₁₀-芳基和C₆-C₁₀-芳基-烷基，其中后者的烷基选自直链C₁-C₈烷基或支链C₃-C₈烷基，其中R²、R³和R⁴的至少一个不为H。

优选地，水解酶稳定性在式(A)的化合物和选自含硼化合物和肽稳定剂的酶稳定剂的存在下得到改善。优选在液体酶制剂和/或液体洗涤剂制品中改善水解酶稳定性。“改善的水解酶稳定性”优选涉及当与不存在成分(c)的水解酶相比时的改善。

“酶制剂稳定性”优选涉及满足本文公开的标准的均质的、储存稳定的酶制剂。

“改进的酶制剂稳定性”优选涉及当与不含成分(c)的酶制剂相比时的改进。.

在一个方面，本发明涉及成分(c)用于提供至少包含成分(a)和(b)的均质且储存稳定的酶制剂的用途。

本发明的酶制剂在约8℃、约20℃或约37℃的温度和约101.3kPa的常压下是均质的。均质意味着酶制剂不显示可见的沉淀形成或浊度。

本发明的酶制剂在约8℃、约20℃或约37℃的温度下可稳定储存长达6周。在本文中，储存稳定是指在储存液体酶制剂后，优选在8℃或37℃下储存长达6或8周后，液体酶制剂不显示可见的沉淀形成或浊度。优选地，该液体酶制剂在8℃至37℃下储存长达6个月是储存稳定的。

洗涤剂制品

本发明在一个方面涉及本发明的液体酶制剂被配制成洗涤剂制品，例如用于洗衣店和硬表面清洁的L&L和家庭护理制品的用途，其中至少成分(a)和(b)在一个或多个步骤中在没有指定顺序的情况下与一种或多种洗涤剂成分混合。在一个实施方案中，至少如上述公开的成分(a)、(b)和(c)在一个或多个步骤中在没有指定顺序的情况下与一种或多种洗涤剂成分混合。

本发明的一个方面涉及包含本发明的液体酶制剂和一种或多种洗涤剂成分的洗涤剂制品。本发明的酶制剂向洗涤剂制品、优选液体洗涤剂制品中的加入通常以酶制剂：洗涤剂制品的重量比约为1:1000、1:500、1:100、1:50、1:30、1:25、1:20或1:10进行。

因此，本发明的液体洗涤剂制品包含不同量的液体组合物的成分(a)、(b)和(c)，例如下表中列出的那些(重量是指相对于液体洗涤剂的总重量)：

上表中的成分(a)优选包含至少一种如本文所公开的枯草杆菌蛋白酶。在一个实施方案中，成分(c)包含如上所述的至少一种具有末端定位的-OH的二醇和至少一种具有邻位定位的-OH的二醇的混合物，后者优选选自1,2-丁二醇和1,2-戊二醇，其中一种具有末端定位的-OH的二醇与具有邻位定位的-OH的二醇的重量比为10:1、9:1、8:1、7:1或6:1，优选在6:1至8:1的范围内，更优选在7:1至6:1的范围内，最优选6.75:1。

在一个方面，本发明涉及洗涤剂制品，其包含如上述公开的成分(a)和(b)和(c)和任选的(d)以及一种或多种洗涤剂成分。在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含至少一种酶(成分(a))，其选自丝氨酸蛋白酶(EC 3.4.21)、三酰基甘油脂肪酶(EC 3.1.1.3)、α淀粉酶(EC 3.2.1.1)、内切葡聚糖酶(EC 3.2.1.4)、内切-1,4-β-甘露糖苷酶(EC3.2.1.78)和DNA降解酶。

本发明涉及一种用于制备本发明的洗涤剂制品的方法，其中如上述所公开的成分(a)和(b)和(c)以及任选地(d)与至少一种洗涤剂成分以任何顺序在一个或多个步骤中混合。

本文中的“洗涤剂制品”或“清洁制品”是指指定用于清洁染污材料的制剂。清洁可意指洗涤或硬表面清洁。本发明的受污材料包括纺织品和/或硬表面。

术语“洗涤”涉及家用洗涤和工业洗涤两者，并且意指用包含本发明的洗涤剂制品的溶液处理纺织品的过程。洗涤过程可以通过使用技术装置如家用或工业洗衣机来进行。或者，洗涤过程可以手动进行。

术语“纺织品”是指任何纺织品材料，包括纱线(由用于针织或编织的天然或合成纤维制成的线)、纱线中间体、纤维、非织造材料、天然材料、合成材料，以及由这些材料制成的织物(通过编织、针织或毡合纤维制成的纺织品)，例如服装(由纺织品制成的任何服装制品)、布和其他制品。

术语“纤维”包括天然纤维、合成纤维及其混合物。天然纤维的实例有植物(例如亚麻、黄麻和棉花)或动物来源的纤维，包含蛋白质如胶原蛋白、角蛋白和丝心蛋白(例如丝、羊毛绒、安哥拉呢、马海毛、羊绒)。合成来源的纤维的实例为聚氨酯纤维如

或

聚酯纤维、聚烯烃如弹性纤维，或聚酰胺纤维如尼龙。纤维可以是单纤维或纺织品如针织品、织造物或非织造物的一些部分。

将术语“硬表面清洁”在本文中定义为清洁硬表面，其中硬表面可以包括家庭中的任何硬表面，例如地板、家具、墙壁、卫生陶瓷、玻璃、金属表面，包括刀叉或碗碟餐具。因此，术语“硬表面清洁”可以意指“餐具洗涤”，其是指所有形式的洗涤餐具，例如手动或自动餐具洗涤(ADW)。餐具洗涤包括但不限于清洁所有形式的陶器例如盘子、杯子、玻璃杯、碗，所有形式的刀叉例如勺子、刀、叉和上菜用具，以及陶瓷、塑料例如蜜胺、金属、瓷器、玻璃和丙烯酸树脂类。

本发明的洗涤和/或清洁方法在10-90℃的温度下进行。在其中本发明的清洁方法作为洗衣方法进行的实施方案中，其优选在10-60℃，更优选20-40℃的温度下进行。在其中本发明的清洁方法作为自动餐具洗涤方法进行的实施方案中，其优选在45至65℃，更优选50至60℃的温度下进行。所述温度是指本发明方法中使用的水的温度。

洗涤剂成分在洗涤剂制品中的类型和/或量根据所期望的应用(例如洗涤白色纺织品、有色纺织品和羊毛)的不同而变化。所选择的一种或多种成分进一步取决于洗涤剂制品的物理形式(液体、固体、凝胶、以袋提供或以片剂形式呈现等)。所选择例如用于洗衣制品的一种或多种成分进一步取决于地区惯例，这些地区惯例本身与如所使用的洗涤温度、洗衣机的机械结构(竖直vs.水平轴机器)、每个洗涤循环的耗水量等方面以及地理特征如水的平均硬度有关。

单独的洗涤剂成分和在洗涤剂制品中的用法是本领域技术人员已知的。适合的洗涤剂成分尤其包含表面活性剂、助洗剂、聚合物、碱、漂白系统、荧光增白剂、抑泡剂和稳定剂、助水溶物和缓蚀剂。另外的实例描述于例如：“complete Technology Book onDetergents with Formulations(Detergent Cake,Dishwashing Detergents,Liquid&Paste Detergents,Enzyme Detergents,Cleaning Powder&Spray Dried WashingPowder)”,Engineers India Research Institute(EIRI),第6版(2015)。本领域技术人员的另一参考书可以为“Detergent Formulations Encyclopedia”,SolverchemPublications,2016。

应当理解，洗涤剂成分是除包含在本发明的酶制剂中的成分之外的成分。如果包含在本发明的酶制剂中的成分也是洗涤剂成分，则可能需要调节其浓度以使该组分对于洗涤剂制品所需目的有效。

相对于该洗涤剂制品的总重，包含在上述公开的成分(d)中的至少一种有机溶剂的总重量可以被加至高至35重量％的总重量，所述成分优选选自液体洗涤剂制品中的1,2-丙二醇和mPEG，优选包含在由水溶性聚合物膜制成的容器中的那些。在本文上下文中，“加至高至”是指除了通过添加本发明的酶制剂而被添加到洗涤剂制品中的有机溶剂之外，所述有机溶剂被添加至多30重量％、至多25重量％、至多20重量％、至多15重量％、至多10重量％、至多8重量％、至多7重量％或至多6重量％。液体洗涤剂制品中所述有机溶剂的总量优选约为约0.05％-30重量％、约0.5％-20重量％、约1％-10重量％、约2％-8重量％、约3％-7重量％或约4％-6重量％，均相对于液体洗涤剂制品的总重计。

洗涤剂成分在洗涤剂制品的最终应用中可以具有多于一种功能，因此在本文特定功能的上下文中提及的任何洗涤剂成分在洗涤剂制品的最终应用中也可以具有另一种功能。特定洗涤剂成分在洗涤剂制品的最终应用中的功能通常取决于其在洗涤剂制品中的量，即洗涤剂成分的有效量。

术语“有效量”包括提供有效污渍去除和/或有效清洁条件(例如pH、发泡量)的单个成分的量、有效提供光学有益效果(例如光学增亮、染料转移抑制)的某些成分的量、和/或有效辅助加工的某些成分(在加工、储存和使用期间维持物理特性，例如粘度调节剂、助水溶物、干燥剂)的量。

在一个实施方案中，洗涤剂制品为多于两种洗涤剂成分的制品，其中至少一种成分在去污方面是有效的，至少一种成分在提供最佳清洁条件方面是有效的，并且至少一种成分在维持洗涤剂的物理特性方面是有效的。

本发明的洗涤剂制品包含成分(a)和成分(b)和成分(c)和任选的成分(d)，其中在一个实施方案中，成分(a)和成分(b)和成分(c)和任选的成分(d)是与洗涤剂成分物理分离的液体制品的组成部分。

在一个实施方案中，通过使用多隔室容器，优选多隔室小袋来进行物理隔离。这类小袋可由水溶性聚合物膜形成。袋可以是适合于容纳制品的任何形式、形状和材料，例如，在水接触之前不允许所述制品从袋中释放。所述袋可在不同隔室中包含固体制品和/或液体制品。用于液体成分的隔室在配方上可以与容纳固体的隔室不同(参见例如EP2014756)。

在另一个实施方案中，物理分离通过微囊化发生。微胶囊化的目的在于是，一方面，将液体核心制剂与其周围隔离，而另一方面，在使用时释放核心制剂(液体核心制剂必须及时释放)。胶囊内容物可以通过熔化壁或在特定条件下使其溶解来释放。在其他系统中，壁通过溶剂作用、酶攻击、化学反应、水解或缓慢崩解而破裂。最突出的是，洗涤剂制品中适用性的限制因素是当洗涤剂制品在水中稀释时核心制剂的快速释放，但确保在洗涤剂制品中储存期间芯制剂不释放。微胶囊可以分散在液体制剂中，任选地通过添加增稠剂通过例如流变改性的方式稳定这种分散体。分散体的稳定化可以通过补充分散剂来实现。制剂可意指通过添加防腐剂来稳定这类分散体对抗微生物生长。微囊化的液体制剂可以作为微胶囊干燥后的固体洗涤剂制品的组成部分。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品在20℃和101.3kPa下是液体。液体洗涤剂制品可以包含水或可基本上不含水，后者意指不存在显著量的水。本文中不显著量的水是指液体洗涤剂制品包含小于15％、小于10％、小于7％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2重量％的水，全部相对于液体洗涤剂制品的总重计，或不含水。在一个实施方案中，不含水的液体洗涤剂制品意指液体洗涤剂制品不包含显著量的水，但包含有机溶剂，其用量相对于洗涤剂制品的总重为30-80重量％。在本文上下文中，溶剂是指作为根据成分(d)的溶剂公开的任何化合物。

含水液体洗涤剂制品可以基本上用水作为溶剂。“基本上用水作为溶剂”是指有机溶剂仅通过单独的成分例如本发明的酶制剂被导入洗涤剂制品中。

在实施方案中，用水与一种或多种与水易混溶性溶剂的混合物作为水性介质。术语与水易混溶性溶剂是指在环境温度下与水易混溶而无相分离的有机溶剂。实例为乙二醇、1,2-丙二醇、异丙醇和二甘醇。优选地，相对于溶剂，至少50体积％的相应水性介质为水。在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含相对于该洗涤剂制品的总重约1-10重量％或约5重量％的选自甘油(1,2,3-丙三醇)和1,2-丙二醇的有机溶剂。

本发明的洗涤剂制品包含至少一种选自表面活性剂、助洗剂、聚合物、香料和染料的化合物。

本发明的洗涤剂制品包含至少一种选自非离子表面活性剂、两性表面活性剂、阴离子表面活性剂和阳离子表面活性剂的表面活性剂。

在一个实施方案中，洗涤剂制品包含相对于洗涤剂制品的总重0.1-60重量％的表面活性剂。该洗涤剂制品优选包含至少一种选自阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、两性表面活性剂和氧化胺表面活性剂以及上述至少两种的组合的化合物。在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含5-30重量％的阴离子表面活性剂和至少一种非离子表面活性剂，例如3-20重量％，全部相对于洗涤剂制品的总重计，其中该洗涤剂制品优选为液体。

非离子表面活性剂是指既不含带正电荷也不含带负电荷(即离子)官能团的表面活性剂。与阴离子和阳离子表面活性剂相反，非离子表面活性剂在溶液中不电离。在一个实施方案中，至少一种非离子表面活性剂选自烷氧基化醇、氧化乙烯和氧化丙烯的二嵌段和多嵌段共聚物以及山梨坦与氧化乙烯或氧化丙烯的反应产物、烷基多糖苷(APG)、羟烷基混合醚和氧化胺。

非离子表面活性剂可以为通式(Ia)和(Ib)的化合物：

R¹选自C₁-C₂₃烷基和C₂-C₂₃烯基，其中烷基和/或烯基为直链(直链；n-)或支链的；实例为n-C₇H₁₅、n-C₉H₁₉、n-C₁₁H₂₃、n-C₁₃H₂₇、n-C₁₅H₃₁、n-C₁₇H₃₅、i-C₉H₁₉、i-C₁₂H₂₅。

R²选自H、C₁-C₂₀烷基和C₂-C₂₀烯基，其中烷基和/或烯基为直链(直链；n-)或支链的。

R³和R⁴各自独立地选自C₁-C₁₆烷基，其中烷基为直链(直链；n-)或支链的；实例为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、仲戊基、新戊基、1,2-二甲基丙基、异戊基、正己基、异己基、仲己基、正庚基、正辛基、2-乙基己基、正壬基、正癸基、异癸基。

R⁵选自H和C₁-C₁₈烷基，其中烷基为直链(直链；n-)或支链的。

通式(Ia)和(Ib)的整数如下所定义：

m为0-200，优选1-80，更优选3-20；n和o各自独立地在0至100的范围内；n优选地在1至10、更优选地1至6的范围内；o优选在1至50、更优选4至25的范围内。m、n和o的总和至少为1，优选m、n和o的总和在5至100的范围内，更优选在9至50的范围内。

式(Ia)的化合物在本文中可以称作烷基聚乙二醇醚(AEO)。式(Ib)的化合物在本文中可以称作烷基酚聚乙二醇醚(APEO)。

在一个实施方案中，所述洗涤剂制品包含至少一种选自式(Ia)的化合物的非离子表面活性剂，其中所述非离子表面活性剂的特征在于R¹为n-C₁₃H₂₇，R²和R⁵为H，m为3-20，n和o＝0。

在一个实施方案中，所述洗涤剂制品包含至少一种选自式(Ia)的化合物的非离子表面活性剂，其中所述非离子表面活性剂的特征在于R1为直链或支链C₁₀烷基，R²和R⁵为H，m为3-14，n和o＝0。

在一个实施方案中，所述洗涤剂制品包含至少两种选自式(Ia)的化合物的非离子表面活性剂，其中所述非离子表面活性剂之一的特征在于R¹为n-C₁₅H₃₁，R²和R⁵为H，m为11-80，n和o＝0，并且另一种表面活性剂的特征在于R¹为n-C₁₇ H₃₅，R²和R⁵为H，m为11-80，n和o＝0。

在一个实施方案中，所述洗涤剂制品包含至少一种选自式(Ia)的非离子表面活性剂，其中m在3至11的范围内，优选不超过10，更优选不超过7；n和o为0，R¹为直链C₉-C₁₇烷基，R²和R⁵为H。

在一个实施方案中，所述洗涤剂制品包含至少两种选自式(Ia)的化合物的非离子表面活性剂，其中所述非离子表面活性剂之一的特征在于R¹为n-C₁₂H₂₅，R²和R⁵为H，m为3-30，优选7，n和o＝0，并且另一种表面活性剂的特征在于R¹为n-C₁₄H₂₉，R²和R⁵为H，m为3-30，优选7，n和o＝0。

在一个实施方案中，所述洗涤剂制品包含至少两种选自式(Ia)的化合物的非离子表面活性剂，其中所述非离子表面活性剂之一的特征在于R¹为n-C₁₁H₂₃，R²和R⁵为H，m为4-10，n和o＝0，且另一种表面活性剂的特征在于R¹选自n-C₁₁H₂₃和n-C₁₇H₃₅，R²和R⁵为H，m为4-10，n和o＝0。

在一个实施方案中，所述洗涤剂制品包含至少两种选自式(Ia)的化合物的非离子表面活性剂，其中所述非离子表面活性剂之一的特征在于R¹为n-C₉H₁₉，R²和R⁵为H，m为5-7，n和o＝0，且另一种表面活性剂的特征在于R¹为n-C₁₇H₃₅，R²和R⁵为H，m为5-7，n和o＝0。在一个实施方案中，所述洗涤剂制品包含至少两种选自式(Ia)的化合物的非离子表面活性剂，其中所述非离子表面活性剂之一的特征在于R¹为n-C₁₁H₂₃,R⁵为H，m为7，n和o＝0，且另一种表面活性剂的特征在于R¹为C₁₃H₂₇，R⁵为H，m为7，n和o＝0。

式(Ia)和(Ib)的非离子表面活性剂可以具有任何结构，为嵌段或无规结构，并且不限于式(Ia)和(Ib)所示的顺序。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含至少一种式(Ia)或(Ib)的化合物，其范围为相对于洗涤剂制品总重计约0.3％-30重量％、约0.4％-20重量％或约0.5％-10％。至少一种非离子表面活性剂优选选自式(Ia)的表面活性剂，且其中m为7；n和o为0，R¹为C₁₂-C₁₄；R²和R⁵为H。在一个实施方案中，该洗涤剂制品包含两种选自式(Ia)的化合物的非离子表面活性剂，其中所述非离子表面活性剂之一的特征在于R¹为C₁₂，R²和R⁵为H，m为7，n和o＝0，且另一种表面活性剂的特征在于R¹为C₁₄，R²和R⁵为H，m为7，n和o＝0，其中优选非离子表面活性剂的总量约为0.3％-30重量％、约0.4％-20重量％或约0.5％-10％，全部相对于洗涤剂制品的总重计。

非离子表面活性剂还可以为通式(II)的化合物，其可以称作烷基多糖苷(APG)：

式(II)的变量如下所定义：

R¹选自C₁-C₁₇烷基和C₂-C₁₇烯基，其中烷基和/或烯基为直链(直链；n-)或支链的；实例为n-C₇H₁₅、n-C₉H₁₉、n-C₁₁H₂₃、n-C₁₃H₂₇、n-C₁₅H₃₁、n-C₁₇H₃₅、i-C₉H₁₉、i-C₁₂H₂₅。

R²选自H、C₁-C₁₇烷基和C₂-C₁₇烯基，其中烷基和/或烯基为直链(直链；n-)或支链的。

G¹选自具有4-6个碳原子的单糖，例如葡萄糖和木糖。

式(II)的整数w为1.1-4，w为平均数。

在一个实施方案中，非离子表面活性剂为通式(IV)的化合物：

式(IV)的变量如下所定义：

AO为相同或不同的氧化烯，其选自CH₂-CH₂-O、(CH₂)₃-O、(CH₂)₄-O、CH₂CH(CH₃)-O、CH(CH₃)-CH₂-O-和CH₂CH(n-C₃H₇)-O。

R¹选自直链(直链；n-)或支链C₄-C₃₀-烷基和具有至少一个C-C双键的直链或支链C₄-C₃₀-烯烃基。R¹可以为直链或支链C₄-C₃₀-烷基、n-C₄-C₃₀-烷基、n-C₇-C₁₅烷基或n-C₁₀-C₁₂-烷基。

R²选自直链(直链；n-)或支链C₁-C₃₀-烷基和具有至少一个C-C双键的直链或支链C₂-C₃₀-烯烃基。R²可以为直链或支链C₆-C₂₀-烷基，优选直链或支链C₈-C₁₂-烷基，更优选直链或支链C₁₀-C₁₂-烷基。

式(IV)的整数x可以为5-70、10-60、15-50或20-40的数值。

在本发明的一个实施方案中，(AO)_x选自(CH₂CH₂O)_x1，x1选自1-50。

在本发明的一个实施方案中，(AO)_x选自

–(CH₂CH₂O)_x2-(CH₂CH(CH₃)-O)_x3和–(CH₂CH₂O)_x2-(CH(CH₃)CH₂-O)_x3，x2和x3相同或不同且选自1-30。

在本发明的一个实施方案中，(AO)_x选自–(CH₂CH₂O)_x4，x4＝为10-50，AO为EO，且R¹和R²各自独立地选自C₈-C₁₄-烷基。

在本发明的上下文中，x或x1或x2和x3或x4应理解为平均值，优选数均。因此，每个x或x1或x2或x3或x4–(如果适用的话)–可以指分数，不过，一个特定分子只能携带整数个氧化烯单元。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含至少一种式(IV)的非离子表面活性剂，其中R¹为n-C₃-C₁₇烷基，R²为直链或支链C₈-C₁₄烷基。优选AO选自–(CH₂CH₂O)_x2-(CH₂CH(CH₃)-O)_x3、–(CH₂CH₂O)_x2-(CH(CH₃)CH₂-O)_x3和–(CH₂CH₂O)_x4，其中x2和x4为15-50的数值，且x3为1-15的数值。在一个实施方案中，至少一种非离子表面活性剂为式(IV)的化合物，其中R¹为n-C₈烷基，R²为支链C₁₁烷基，AO为CH₂-CH₂-O，且x为22。在一个实施方案中，至少一种非离子表面活性剂为式(IV)的化合物，其中R¹为n-C₈烷基，R²为n-C₈-C₁₀烷基，AO为CH₂-CH₂-O，且x为40。在一个实施方案中，至少一种非离子表面活性剂为式(IV)的化合物，其中R¹为n-C₈烷基，R²为n-C₁₀烷基，AO选自–(CH₂CH₂O)_x2-(CH₂CH(CH₃)-O)_x3、–(CH₂CH₂O)_x2-(CH(CH₃)CH₂-O)_x3，其中x2＝22，且x3＝1。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品、优选液体洗涤剂制品包含至少一种式(IV)的非离子表面活性剂，其约为0.3％-10重量％、约0.5％-5重量％或约1％-3％，全部相对于洗涤剂制品的总重计。至少一种非离子表面活性剂优选为式(IV)的化合物，其中R¹为n-C₈烷基，R²为支链C₁₁烷基，AO为CH₂-CH₂-O，且x为22。

在一个实施方案中，非离子表面活性剂选自山梨坦酯和/或乙氧基化或丙氧基化山梨坦酯。非限制性实例是以商品名司盘(SPAN)和吐温(TWEEN)销售的产品。

在一个实施方案中，非离子表面活性剂选自烷氧基化单烷基胺或二烷基胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAMA)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺，GA或脂肪酸葡糖酰胺，FAGA)及其组合。

在一个实施方案中，表面活性剂为包含通式(V)的两性结构的化合物，其可以称作修饰的氨基酸(蛋白原的以及非蛋白原的)：

式(V)中的变量如下所定义：

R⁸选自H、C₁-C₄烷基、C₂-C₄烯基，其中烷基和/或为直链(直链；n-)或支链的。R⁹选自C₁-C₂₂-烷基、C₂-C₂₂-烯基、C₁₀-C₂₂烷基羰基和C₁₀-C₂₂烯基羰基。

R¹⁰选自H、甲基、-(CH₂)₃NHC(NH)NH₂、-CH₂C(O)NH₂、-CH₂C(O)OH、-(CH₂)₂C(O)NH₂、-(CH₂)₂C(O)OH、(咪唑-4-基)-甲基、-CH(CH₃)C₂H₅、-CH₂CH(CH₃)₂、-(CH₂)₄NH₂、苄基、羟基甲基、-CH(OH)CH₃、(吲哚-3-基)-甲基、(4-羟基-苯基)-甲基、异丙基、-(CH₂)₂SCH₃和-CH₂SH。

R^x选自H和C₁-C₄-烷基。

在一个实施方案中，表面活性剂为包含通式(VIa)、(VIb)或(VIc)的两性结构的化合物，其可以称作甜菜碱和/或磺基甜菜碱：

式(VIa)、(VIb)或(VIc)中的变量如下所定义：

R¹¹选自直链(直链；n-)或支链C₇-C₂₂烷基和直链(直链；n-)或支链C₇-C₂₂烯基。

R¹²各自独立地选自直链(直链；n-)C₁-C₄烷基。

R¹³选自C₁-C₅烷基和羟基C₁-C₅烷基；例如2-羟基丙基。

A^-选自羧酸根和磺酸根。

式(VIa)、(VIb)或(VIc)中的整数r为2-6。

在一个实施方案中，表面活性剂为包含式通(VII)的两性结构的化合物，其可以称作烷基-两性羧酸盐：

式(VII)中的变量如下所定义：

R¹¹选自C₇-C₂₂烷基和C₇-C₂₂烯基，其中烷基和/或烯基为直链(直链；n-)或支链的，优选直链的。

R¹⁴选自-CH₂C(O)O^-M⁺、-CH₂CH₂C(O)O^-M⁺和-CH₂CH(OH)CH₂SO₃ ^-M⁺。

R¹⁵选自H和-CH₂C(O)O^-。

式(VII)中的整数r为2-6。

其他适合的烷基-两性羧酸盐的非限制性实例包括椰油酰两性乙酸钠、月桂酰两性乙酸钠、辛酰两性乙酸钠、椰油酰两性二乙酸二钠、月桂酰两性基二乙酸二钠、辛酰两性二乙酸二钠、辛酰两性二乙酸二钠、椰油酰两性二丙酸二钠、月桂酰两性二丙酸二钠、辛酰两性二丙酸二钠和辛酰两性二丙酸二钠。

在一个实施方案中，表面活性剂为包含通式(VIII)的两性结构的化合物，其可以称作氧化胺(AO)：

式(VIII)中的变量如下所定义：

R¹⁶选自C₈-C₁₈烷基、羟基C₈-C₁₈烷基、酰基酰氨基丙基和C₈-C₁₈烷基苯基；其中烷基和/或烯基为直链(直链；n-)或支链的。

R¹⁷选自C₂-C₃亚烷基、羟基C₂-C₃亚烷基及其混合物。

R¹⁸:每个残基可以独立地选自C₁-C₃烷基和羟基C₁-C₃；R¹⁵基团可以彼此连接，例如通过氧或氮原子进行连接，形成环结构。

式(VIII)中的整数x为0-5，优选0-3，最优选0。

其他适合的氧化胺的非限制性实例包括C₁₀-C₁₈烷基二甲基氧化胺和C₈-C₁₈烷氧基乙基二羟乙基氧化胺。这类材料的实例包括二甲基辛基氧化胺、二乙基癸基氧化胺、双-(2-羟乙基)十二烷基氧化胺、二甲基十二烷基氧化胺、二丙基十四烷基氧化胺、甲基乙基十六烷基氧化胺、十二烷基酰氨基丙基二甲基氧化胺、十六烷基二甲基氧化胺、硬脂基二甲基氧化胺、牛脂二甲基氧化胺和二甲基-2-羟基十八烷基氧化胺。

适合的氧化胺的另一个实例为椰油酰胺基丙基二甲基氧化胺，有时也称作椰油酰氨基丙基氧化胺。

两种或多种不同两性表面活性剂的混合物可以存在于本发明的洗涤剂制品中。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含至少一种两性表面活性剂，其中两性表面活性剂的总量可以为0.01％-10％、0.1-5％或0.5-1重量％，全部相对于洗涤剂制品的总重计。

至少一种阴离子表面活性剂选自C₈-C₁₈-烷基硫酸酯、C₈-C₁₈-脂肪醇聚醚硫酸酯、乙氧基化C₄-C₁₂-烷基酚(乙氧基化：1-50mol氧化乙烯/mol)的硫酸半酯、C₁₂-C₁₈磺基脂肪酸烷基酯，例如C₁₂-C₁₈-磺基脂肪酸甲酯、以及C₁₂-C₁₈-烷基磺酸酯和C₁₀-C₁₈-烷基芳基磺酸的碱金属盐和铵盐。优选上述化合物的碱金属盐，特别优选钠盐。

阴离子表面活性剂是指具有带负电荷的离子基团的表面活性剂。阴离子表面活性剂包括但不限于包含疏水基团和至少一个水溶性阴离子基团以形成水溶性化合物的表面活性化合物，所述水溶性阴离子基团通常选自硫酸根、磺酸根和羧酸根。

在一个实施方案中，阴离子表面活性剂为通式(IXa)或(IXb)的化合物：

式(IXa和IXb)中的变量如下所定义：

R¹选自C₁-C₂₃-烷基(例如1-、2-、3-、4-C₁-C₂₃-烷基)和C₂-C₂₃-烯基，其中烷基和/或烯基为直链(直链；n-)或支链的，且其中2-、3-或4-烷基；实例为n-C₇H₁₅、n-C₉H₁₉、n-C₁₁H₂₃、n-C₁₃H₂₇、n-C₁₅H₃₁、n-C₁₇H₃₅、i-C₉H₁₉、i-C₁₂H₂₅。

R²选自H、C₁-C₂₀-烷基和C₂-C₂₀-烯基，其中烷基和/或烯基为直链(直链；n-)或支链的。

R³和R⁴各自独立地选自C₁-C₁₆-烷基，其中烷基为直链(直链；n-)或支链的；实例为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、仲戊基、新戊基、1,2-二甲基丙基、异戊基、正己基、异己基、仲己基、正庚基、正辛基、2-乙基己基、正壬基、正癸基、异癸基。

A^-选自–RCOO^-、-SO₃ ^-和RSO₃ ^-，其中R选自直链(直链；n-)或支链C₁-C₈-烷基和C₁-C₄羟基烷基，其中烷基为。当A^-为SO₃ ^-时，化合物可以称作(脂肪)醇/烷基(乙氧基/醚)硫酸盐[(F)A(E)S]，当A^-为–RCOO^-时，化合物可以称作(脂肪)醇/烷基(乙氧基/醚)羧酸盐[(F)A(E)C]。

M⁺选自H和成盐阳离子。成盐阳离子可以为一价或多价的；因此，M⁺等于1/vM^v+。实例包括但不限于钠、钾、镁、钙、铵和单乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺的铵盐。

式(IXa)和(IXb)的整数如下所定义：

m为0-200，优选1-80，更优选3-20；n和o各自独立地在0至100的范围内；n优选地在1至10、更优选地1至6的范围内；o优选在1至50、更优选4至25的范围内。m、n和o的总和为至少1，优选m、n和o的总和在5至100的范围内，更优选在9至50的范围内。

式(IXa)和(IXb)的阴离子表面活性剂可以具有任何结构、嵌段共聚物或无规共聚物。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含至少一种式(IXa)的阴离子表面活性剂，其中R¹为n-C₁₁H₂₃，R²为H，A^-为SO₃ ^-，m、n和o为0。M⁺优选为NH₄ ⁺。这类化合物在本文中可以称作月桂基硫酸铵(ALS)。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含至少一种式(IXa)的阴离子表面活性剂，其中R¹为n-C₁₁H₂₃，R²选自H，A^-为SO₃ ^-，m为2-5，优选3，且n和o为0。M⁺优选为Na⁺。这类化合物在本文中可以称作月桂基醚硫酸盐(LES)，优选月桂基醚硫酸钠(SLES)。

其它适合的阴离子表面活性剂包括盐C₁₂-C₁₈磺基脂肪酸烷基酯(例如C₁₂-C₁₈磺基脂肪酸甲酯)、C₁₀-C₁₈-烷基芳基磺酸(例如n-C₁₀-C₁₈-烷基苯磺酸)和C₁₀-C₁₈烷基烷氧基羧酸酯的盐(M⁺)。

在所有情况下，M⁺选自成盐阳离子。成盐阳离子可以为一价或多价的；因此，M⁺等于1/v M^v+。实例包括但不限于钠、钾、镁、钙、铵和单乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺的铵盐。

在一个实施方案中，所述洗涤剂制品包含至少两种选自式(IXa)的化合物的阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂之一的特征在于R¹为C₁₁，R²为H，m为2，n和o＝0，A^-为SO₃ ^-，M⁺为Na⁺，且另一种表面活性剂的特征在于R¹为C₁₃，R²为H，m为2，n和o＝0，A^-为SO₃ ^-，M⁺为Na⁺。

其他适合的阴离子表面活性剂的非限制性实例包括支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、烯烃烷磺酸盐、烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基烷磺酸盐和二磺酸盐、仲烷磺酸盐(SAS)、烷烃磺酸盐(PS)、磺化脂肪酸甘油酯、烷基-或烯基琥珀酸、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基-琥珀酸的二酯和单酯。

在一个实施方案中，洗涤剂制品包含至少一种选自通式(X)的化合物的阴离子表面活性剂：

其中式(X)中的R¹为C₁₀-C₁₃烷基。本发明的洗涤剂制品可以包含式(X)的化合物的盐，优选钠盐。该洗涤剂制品可以包含至少两种选自式(X)的化合物的阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂之一的特征在于R¹为C₁₀，并且另一种表面活性剂的特征在于R¹为C₁₃。该洗涤剂制品可以包含至少两种阴离子表面活性剂，其选自式(X)的化合物的钠盐，其中所述阴离子表面活性剂之一的特征在于R¹为C₁₀，并且另一种表面活性剂的特征在于R¹为C₁₃。这样的化合物在本文中可以称作LAS(直链烷基苯磺酸盐)。

在一个实施方案中，阴离子表面活性剂为通式(XI)的化合物，其可以称作N-酰基氨基酸表面活性剂：

式(XI)中的变量如下所定义：

R¹⁹选自直链(直链n；n-)或支链C₆-C₂₂-烷基和直链(直链；n-)或支链C₆-C₂₂-烯基，例如油烯基。

R²⁰选自H和C₁-C₄-烷基。

R²¹选自H、甲基、-(CH₂)₃NHC(NH)NH₂、-CH₂C(O)NH₂、-CH₂C(O)OH、-(CH₂)₂C(O)NH₂、-(CH₂)₂C(O)OH、(咪唑-4-基)-甲基、-CH(CH₃)C₂H₅、-CH₂CH(CH₃)₂、-(CH₂)₄NH₂、苄基、羟基甲基、-CH(OH)CH₃、(吲哚-3-基)-甲基、(4-羟基-苯基)-甲基、异丙基、-(CH₂)₂SCH₃和-CH₂SH。

R²²选自–COOX和–CH₂SO₃X，其中X选自Li⁺、Na⁺和K⁺。

适合的N-酰基氨基酸表面活性剂的非限制性实例为N-酰化谷氨酸的单羧酸盐和二羧酸盐(例如，单乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺的钠盐、钾盐、铵盐和铵盐)，例如椰油酰基谷氨酸钠、月桂酰基谷氨酸钠、肉豆蔻酰基谷氨酸钠、棕榈酰基谷氨酸钠、硬脂酰基谷氨酸钠、椰油酰基谷氨酸二钠、硬脂酰基谷氨酸二钠、椰油酰基谷氨酸钾、月桂酰基谷氨酸钾和肉豆蔻酰基谷氨酸钾；N-酰化丙氨酸的羧酸盐(例如单、二和三乙醇胺的钠、钾、铵和铵盐)，例如椰油酰基丙氨酸钠和月桂酰基丙氨酸三乙醇胺；N-酰化甘氨酸的羧酸盐(例如，单乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺的钠盐、钾盐、铵盐和铵盐)，例如椰油酰基甘氨酸钠和椰油酰基甘氨酸钾；N-酰化肌氨酸的羧酸盐(例如，单乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺的钠盐、钾盐、铵盐和铵盐)，例如月桂酰肌氨酸钠、椰油酰肌氨酸钠、肉豆蔻酰肌氨酸钠、油酰肌氨酸钠和月桂酰肌氨酸铵。

在一个实施方案中，阴离子表面活性剂选自皂。适合的为饱和和不饱和C₁₂-C₁₈脂肪酸，如月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、山萮酸、油酸、(水合)芥酸的盐(M⁺)。M⁺选自成盐阳离子。成盐阳离子可以为一价或多价的；因此，M⁺等于1/v M^v+。实例包括但不限于钠、钾、镁、钙、铵和单乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺的铵盐。

适合的皂的其它非限制性实例包括衍生自天然脂肪酸如牛脂、椰子油、棕榈仁油、月桂油、橄榄油或介花油的皂混合物。这种皂混合物包含不同量的月桂酸和/或肉豆蔻酸和/或棕榈酸和/或硬脂酸和/或油酸和/或亚油酸的皂，这取决于衍生皂的天然脂肪酸。

适合的阴离子表面活性剂的其它非限制性实例包括衍生自天然脂肪酸如牛脂、椰子油、棕榈仁油、月桂油、橄榄油或介花油的硫酸盐、磺酸盐或羧酸盐的盐(M⁺)。这类阴离子表面活性剂包括不同量的月桂酸和/或肉豆蔻酸和/或棕榈酸和/或硬脂酸和/或油酸和/或亚油酸的硫酸盐、磺酸盐或羧酸盐，这取决于衍生皂的天然脂肪酸。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含至少一种阴离子表面活性剂，其中阴离子表面活性剂的总量可以为0.5至80重量％，优选1至70重量％，全部相对于洗涤剂制品的总重计。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含总量约为0.5-25重量％，约1-20重量％，或约1.5-15重量％的阴离子表面活性剂，全部相对于洗涤剂制品的总重计。

在一个实施方案中，洗涤剂制品包含两种选自式(IXa)的化合物的阴离子表面活性剂，且其中所述阴离子表面活性剂之一的特征在于R¹为C₁₁，R²为H，m为2，n和o＝0，A^-为SO₃ ^-，M⁺为Na⁺，且另一种表面活性剂的特征在于R¹为C₁₃，R²为H，m为2，n和o＝0，A^-为SO₃ ^-，M⁺为Na⁺。在一个实施方案中，所述洗涤剂制品包含两种选自式(X)的化合物的阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂之一的特征在于R¹为C₁₀，且另一种表面活性剂的特征在于R¹为C₁₃。在一个实施方案中，该洗涤剂制品包含选自式(X)的化合物的钠盐的两种阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂之一的特征在于R¹为C₁₀，且另一种表面活性剂的特征在于R¹为C₁₃。

两种或多种不同阴离子表面活性剂的混合物也可以存在于本发明的洗涤剂制品中。

在一个实施方案中，非离子和/或两性和/或阴离子表面活性剂的混合物存在于本发明的洗涤剂制品中。

本发明的洗涤剂制品包含一种或多种选自配合剂(螯合剂(chelating agent)、螯合剂(sequestrating agent))、沉淀剂和离子交换化合物的化合物，这些化合物可以与钙和镁形成水溶性配合物。这类化合物在本文中可一称作“助洗剂”或“增量剂”，但不意味着将这类化合物限于洗涤剂制品的最终应用中的这种功能。

本发明的非磷酸盐助洗剂包括葡萄糖酸钠、柠檬酸盐、硅酸盐、碳酸盐、膦酸盐、氨基羧酸盐、聚羧酸盐、聚磺酸盐和聚膦酸盐。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含一种或多种柠檬酸盐。术语“柠檬酸盐”包括柠檬酸的单碱金属盐和二碱金属盐，特别是柠檬酸的单钠盐且优选三钠盐、柠檬酸的铵盐或取代铵盐以及柠檬酸本身。柠檬酸盐可以以无水化合物或水合物形式使用，例如以柠檬酸钠二水合物形式使用。在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含柠檬酸，其量为0.5％-30.0重量％、1.0％-25.0重量％或5.0％-20.0重量％，全部相对于该洗涤剂制品的总重计。柠檬酸可以以与甲酸盐的混合物的形式被提供，例如柠檬酸钠:甲酸钠＝9:1。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含一种或多种硅酸盐。在本发明的上下文中，“硅酸盐”特别包括二硅酸钠和偏硅酸钠、铝硅酸盐例如铝硅酸钠如Zeolith A(即Na₁₂(AlO₂)₁₂(SiO₂)₁₂*27H₂O)和片状硅酸盐，特别是式α-Na₂Si₂O₅、β-Na₂Si₂O₅和δ-Na₂Si₂O₅的那些。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含一种或多种碳酸盐。术语“碳酸盐”包括碱金属碳酸盐和碱金属碳酸氢盐，优选钠盐。特别适合的是碳酸钠(Na₂CO₃)。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含一种或多种膦酸盐。“膦酸酯”包括但不限于2-膦基丁-1,2,4-三羧酸(PBTC)；乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)；1-羟基乙-1,1-二膦酸(HEDP)，CH₂C(OH)[PO(OH)₂]₂；氨基三(亚甲基膦酸)，钠盐(ATMP)，N[CH₂PO(ONa)₂]₃；2-羟基乙基亚氨基双(亚甲基膦酸)，HOCH₂CH₂N[CH₂PO(OH)₂]₂；二乙烯三胺戊二烯(亚甲基膦酸)(DTPMP)，(HO)₂POCH₂N[CH₂CH₂N[CH₂PO(OH)₂]₂]₂；二乙烯三胺戊二烯(亚甲基膦酸盐)，钠盐，C₉H_(28-x)N₃Na_xO₁₅P₅(x＝7)；六亚甲基二胺(四亚甲基膦酸盐)，钾盐，C₁₀H_(28-x)N₂K_xO₁₂P₄(x＝6)；和双(六亚甲基)三胺(五亚甲基膦酸)，(HO₂)POCH₂N[(CH₂)₂N[CH₂PO(OH)₂]₂]₂。其盐也可能是适合的。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含至少一种磷酸盐，优选选自聚膦酸的衍生物(如二膦酸的衍生物，如HEDP的钠盐)、氨基聚膦酸的衍生物(例如氨基亚烷基膦酸，例如DTPMP)，其量为0.1％-5.0重量％、0.5％-3.0重量％或1.0％-2.0重量％，全部相对于所述洗涤剂制品的总重计。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含一种或多种氨基羧酸盐。适合的“氨基羧酸盐”的非限制性实例包括但不限于：二乙醇甘氨酸(DEG)、二甲基甘氨酸(DMG)、次氮基三乙酸(NTA)、N-羟乙基氨基二乙酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(HEIDA)、羟基乙二胺三乙酸、N-羟乙基-乙二胺三乙酸(HEDTA)、羟基乙二胺四乙酸、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)和甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-二乙酸(GLDA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、羟基亚氨基二琥珀酸、乙二胺二琥珀酸(EDDS)、天冬氨酸-二乙酸及其碱金属盐或铵盐。进一步适合的是天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、N-(2-磺基甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺基乙基)天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺基甲基)谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺基乙基)谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基-二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-AlDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(IS-DA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、对氨基苯磺酸N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)和磺就甲基-N,N-二乙酸(SMDA)及其碱金属盐或铵盐。在本文上下文中使用的术语“铵盐”是指具有至少一个带有永久或暂时季铵化的氮原子的阳离子的盐。带有至少一个永久季铵化的氮原子的阳离子的实例包括四甲基铵、四乙基铵、二甲基二乙基铵和n-C₁₀-C₂₀-烷基三甲基铵。带有至少一个暂时季铵化的氮原子的阳离子的实例包括质子化胺和氨，例如单甲基铵、二甲基铵、三甲基铵、单乙基铵、二乙基铵、三乙基铵、n-C₁₀-C₂₀-烷基二甲基铵、2-羟乙基铵、双(2-羟乙基)铵、三(2-羟乙基)铵、N-甲基2-羟乙基铵、N,N-二甲基-2-羟乙基铵，且尤其是NH₄ ⁺。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含一种以上助洗剂分。优选地，发明洗涤剂制品包含相对于该洗涤剂制品的总重按重量计小于0.2重量％的次氮基三乙酸(NTA)，或按重量计0.01-0.1％NTA。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含至少一种选自乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、甲基甘氨酸二乙酸盐(MGDA)和谷氨酸二乙酸盐(GLDA)的氨基羧酸盐，其都可以被碱(部分)中和，其量为0％-30.0重量％、0.1％-25.0重量％、1.0％-20.0重量％、2.5％-25.0重量％、5.0-20重量％或2.5-10重量％，全部相对于该洗涤剂制品的总重计。优选地，本发明的洗涤剂制品包含1％-20重量％、2.5-15重量％或2.5-12.5重量％的量的MGDA和/或GLDA，全部相对于该洗涤剂制品的总重计。

术语碱是指相同或不同的碱金属阳离子，例如锂、钠、钾、铷、铯的阳离子以及前述至少两种的组合。碱金属阳离子的优选实例为钠和钾以及钠和钾的组合。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品至少包含：

一种甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)的碱金属盐，其中平均多于两个且少于三个的羧基被碱中和，和/或

一种谷氨酸二乙酸(GLDA)或对映异构体纯的L-GLDA的L-和D-对映异构体的碱金属盐，其中平均多于三个的羧基被碱中和，优选平均多于三个且少于四个的羧基被碱中和。

在本发明的一个实施方案中，MGDA的碱金属盐选自通式(XII)的化合物：

[CH₃-CH(COO)-N(CH₂-COO)₂]M_3-x1-y1(NH₄)_z1H_x1 (XII)

式(XII)的变量如下所定义：

M选自相同或不同的碱金属阳离子，例如锂、钠、钾、铷、铯的阳离子和前述至少两种的组合。碱金属阳离子的优选实例为钠和钾以及钠和钾的组合。

x1选自0.0-1.0，优选0.1-0.5，更优选至多0.1-0.3；

z1选自0.0-1.0，优选0.0005-0.5；

然而，式(XII)中x1+z1的总和大于0，例如为0.05-0.6。

M_3-x1-z1(NH₄)_z1H_x1的实例为Na_3-x1H_x1、[Na_0.7(NH₄)_0.3]_3-x1H_x1、[(NH₄)_0.7Na_0.3]_3-x1H_x1、[(NH₄)_0.7Na_0.3]_3-x1H_x1。

在本发明的一个实施方案中，MGDA选自外消旋MGDA的至少一种碱金属盐和式(XII)的L-和D-对映异构体的混合物的碱金属盐，所述混合物主要包含对映异构体过量(ee)的相应L-异构体，所述量为5-99％，优选5-95％，更优选10-75％，且甚至更优选10-66％。优选地，MGDA及其相应的碱金属盐选自外消旋混合物和包含55-85mole-％的L-异构体、余量为D-异构体的混合物。特别优选包含60-80mole-％的L-异构体、余量为D-异构体的混合物。其它特别优选的实施方案为外消旋混合物。

在本发明的一个实施方案中，MGDA的总碱中和度为0.80-0.98mol-％，优选0.90-0.97％。总碱中和度不考虑用铵的任何中和。

在本发明的一个实施方案中，GLDA的碱金属盐选自通式(XIII)的化合物

[OOC-(CH₂)₂-CH(COO)-N(CH₂-COO)₂]M_4-x2-z2(NH₄)_z2H_x2 (XIII)

式(XIII)的变量如下所定义：

M选自碱金属阳离子，其相同或不同，如上述对式(XIII)的化合物所定义，

x2选自0.0-2.0，优选0.02-0.5，更优选至多0.1-0.3；

z2选自0.0-1.0，优选0.0005-0.5；

然而，式(XIII)中的x2+z2的总和大于零，例如为0.05-0.6。

M_3-x2-z2(NH₄)_z2H_x1的实例为Na_3-x2H_x2、[Na_0.7(NH₄)_0.3]_3-x2H_x2、[(NH₄)_0.7Na_0.3]_3-x2H_x2。

在本发明的一个实施方案中，GLDA的碱金属盐可以选自式(XIII)的L-和D-对映异构体的碱金属盐，所述混合物包含外消旋混合物或优选主要包含相应的L-异构体，例如对映异构体过量(ee)为5-99％，优选5-95％。优选地，GLDA及其相应的碱金属盐选自外消旋混合物和包含55-99mole-％的L-异构体、余量为D-异构体的混合物。特别优选包含60-98.5mole-％的L-异构体、余量为D-异构体的混合物。其它特别优选的实施方案为外消旋混合物。

对映体过量可以例如通过测量极化(旋光测定法)或优选通过色谱法，例如通过使用手性柱，例如具有一种或多种环糊精作为固定相或使用配体交换(Pirkle-Brush)理念的手性固定相的HPLC来确定。优选通过使用固定的旋光铵盐如D-青霉胺的HPLC来测定对映体过量。

通常，在本发明的上下文中，少量MGDA和/或GLDA也可以带有碱金属以外的阳离子。因此，可能的情况是，少量助洗剂，例如总助洗剂的0.01％至5mol-％可以带有碱土金属阳离子，例如Mg²⁺或Ca²⁺，或过渡金属阳离子，例如Fe²⁺或Fe³⁺阳离子。本文中“少量”的MGDA和/或GLDA是指相对于相应的助洗剂而言共计0.1％至1w/w％。

在本发明的一个实施方案中，包含在用于洗涤剂制品中的MGDA和/或GLDA可以包含相对于相应助洗剂0.1重量％至10重量％的一种或多种非旋光性杂质，所述杂质中的至少一种为选自亚氨基二乙酸、甲酸、乙醇酸、丙酸、乙酸及其相应的碱金属或单-、二-或三铵盐的杂质中的至少一种。

在本发明的一个实施方案中，洗涤剂制品包含至少一种聚羧酸盐，例如(甲基)丙烯酸均聚物或(甲基)丙烯酸共聚物的碱金属盐。

适合的共聚单体的实例为单烯属不饱和二羧酸，例如马来酸、富马酸、马来酸酐、衣康酸和柠康酸。适合的聚合物特别是聚丙烯酸，其优选具有2000至40 000g/mol，优选2000至10 000g/mol，特别是3000至8000g/mol的平均分子量Mw。同样适合的是共聚聚羧酸盐，特别是丙烯酸与甲基丙烯酸的那些以及丙烯酸或甲基丙烯酸与马来酸和/或富马酸的那些，并且具有相同的分子量范围。

还能够使用至少一种选自单烯属不饱和C3-C10-单-或C4-C10-二羧酸或其酸酐(例如马来酸、马来酸酐、丙烯酸、甲基丙烯酸、富马酸、衣康酸和柠康酸)的单体与至少一种如下所列的亲水或疏水单体的共聚物。

适合的疏水性单体为，例如异丁烯、二异丁烯、丁烯、戊烯、己烯和苯乙烯、具有10个或更多个碳原子的烯烃或其混合物，例如1-癸烯、1-十二碳烯、1-十四碳烯、1-十六碳烯、1-十八碳烯、1-二十碳烯、1-二十二碳烯、1-二十四碳烯和1-二十六碳烯、C22-α-烯烃、C20-C24-α-烯烃的混合物和每分子平均具有12至100个碳原子的聚异丁烯。

适合的亲水性单体为具有磺酸酯或膦酸酯基团的单体，以及具有羟基官能团或环氧烷基团的非离子单体。作为实例，可以提及：烯丙醇、异戊二烯醇、甲氧基聚乙二醇(甲基)丙烯酸酯、甲氧基聚丙二醇(甲基)丙烯酸酯、甲氧基聚丁二醇(甲基)丙烯酸酯、甲氧基-聚(环氧丙烷-共-环氧乙烷)(甲基)丙烯酸酯、乙氧基聚乙二醇(甲基)丙烯酸酯、乙氧基聚丙二醇(甲基)丙烯酸酯、乙氧基聚丁二醇(甲基)丙烯酸酯和乙氧基聚(环氧丙烷-共-环氧乙烷)(甲基)丙烯酸酯。本文的聚亚烷基二醇每分子可以包含3-50个，特别是5-40个，特别是10-30个氧化烯单元。

本文特别优选的含磺酸基团的单体为1-丙烯酰氨基-1-丙磺酸、2-丙烯酰氨基-2-丙磺酸、2-丙烯酰氨基-2-甲基丙-1-磺酸(AMPS)、2-甲基丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸、3-甲基丙烯酰氨基-2-羟基丙磺酸、烯丙基磺酸、甲代烯丙基磺酸、烯丙氧基苯磺酸、甲代烯丙氧基苯磺酸、2-羟基-3-(2-丙烯氧基)丙磺酸、2-甲基-2-丙烯-1-磺酸、苯乙烯磺酸、乙烯基磺酸、丙烯酸3-磺基丙酯、甲基丙烯酸2-磺基乙酯、甲基丙烯酸3-磺基丙酯、磺基甲基丙烯酰胺、磺基甲基甲基丙烯酰胺，以及所述酸的盐，如其钠盐、钾盐或铵盐。

特别优选的含膦酸酯基团的单体为乙烯基膦酸及其盐。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含具有分子量在4000-6000g/mol范围内，优选具有分子量为5000g/mol的聚丙烯酸，其量为1-10重量％，量为2-8重量％，或在2-2.5重量％范围内，全部相对于洗涤剂制品的总重计。

在一个实施方案中，所述洗涤剂制品包含羧甲基菊粉。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含至少一种具有配合基团的聚合物，例如聚乙烯亚胺，其中20至90mole-％的N-原子带有至少一个CH₂COO^-基团，以及上述螯合剂的相应碱金属盐，尤其是它们的钠盐。

适合的聚合物的其他实例为聚亚烷基亚胺，例如聚乙烯亚胺和聚丙烯亚胺。聚烯亚胺可以就这样使用或作为聚烷氧基化衍生物使用，例如乙氧基化或丙氧基化衍生物。聚亚烷基亚胺每分子包含至少三个亚烷基亚胺单元。

在本发明的一个实施方案中，所述亚烷基亚胺单元为C₂-C₁₀-亚烷基二胺单元，例如1,2-丙二胺，优选α,ω-C₂-C₁₀-亚烷基二胺，例如1,2-乙二胺、1,3-丙二胺、1,4-丁二胺、1,5-戊二胺、1,6-己二胺(也称作1,6-己二胺)、1,8-二胺或1,10-癸二胺，甚至更优选1,2-乙二胺、1,3-丙二胺、1,4-丁二胺和1,6-己二胺。

在本发明的另一个实施方案中，所述聚亚烷基亚胺选自聚亚烷基亚胺单元，优选聚乙烯亚胺或聚丙烯亚胺单元。

在本发明的上下文中，术语“聚乙烯亚胺”不仅是指聚乙烯亚胺均聚物，而且也是指包含NH-CH₂-CH₂-NH结构单元以及其它亚烷基二胺结构单元的聚亚烷基亚胺，所述其它亚烷基二胺结构单元例如NH-CH₂-CH₂-CH₂-NH结构单元、NH-CH₂-CH(CH₃)-NH结构单元、NH-(CH₂)₄-NH结构单元、NH-(CH₂)₆-NH结构单元或(NH-(CH₂)₈-NH结构单元，但NH-CH₂-CH₂-NH结构单元在摩尔份数方面占大部分。优选的聚乙烯亚胺包含在摩尔份数方面占大部分的NH-CH₂-CH₂-NH结构单元，例如总计占所有亚烷基亚胺结构单元的60mol-％或更多，更优选总计至少70mol-％。在一个具体的实施方案中，术语聚乙烯亚胺是指每个聚乙烯亚胺单元仅带有一个或零个不同于NH-CH₂-CH₂-NH的亚烷基亚胺结构单元的那些聚亚烷基亚胺。

在本发明的上下文中，术语“聚丙烯亚胺”不仅是指聚丙烯亚胺均聚物，而且也是指包含NH-CH₂-CH(CH₃)-NH结构单元以及其它亚烷基二胺结构单元的聚亚烷基亚胺，所述其它亚烷基二胺结构单元例如NH-CH₂-CH₂-CH₂-NH结构单元、NH-CH₂-CH₂-NH结构单元、NH-(CH₂)₄-NH结构单元、NH-(CH₂)₆-NH结构单元或(NH-(CH₂)₈-NH结构单元，但NH-CH₂-CH(CH₃)-NH结构单元在摩尔份数方面占大部分。优选的聚丙烯亚胺包含NH-CH₂-CH(CH₃)-NH结构单元，其相对于摩尔份数占大部分，例如相对于所有亚烷基亚胺结构单元，总计为60mol-％或更多，更优选总计为至少70mol-％。在一个具体实施方案中，术语聚丙烯亚胺是指每个聚丙烯亚胺单元仅带有一个或零个不同于NH-CH₂-CH(CH₃)-NH的亚烷基亚胺结构单元的那些聚亚烷基亚胺。

支链可以为亚烷基氨基，例如但不限于-CH₂-CH₂-NH₂基团或(CH₂)₃-NH₂-基团。较长的支链可以为，例如-(CH₂)₃-N(CH₂CH₂CH₂NH₂)₂或-(CH₂)₂-N(CH₂CH₂NH₂)₂基团。高度支化的聚乙烯亚胺为，例如聚乙烯亚胺树枝状聚合物或相关分子，其支化度为0.25-0.95，优选0.30-0.80，且特别优选至少0.5。支化度可以例如通过¹³C-NMR或¹⁵N-NMR光谱法测定，优选在D₂O中测定，并且定义如下：DB＝D+T/D+T+L，其中D(树枝状)对应于叔氨基的分数，L(直链)对应于仲氨基的分数，并且T(末端)对应于伯氨基的分数。

在本发明的上下文中，支链聚乙烯亚胺单元为具有0.25-0.95，特别优选0.30-0.90％，非常特别优选至少0.5的DB的聚乙烯亚胺单元。优选的聚乙烯亚胺单元为几乎不表现出分支或无支链的那些，因此主要是线性或直链聚乙烯亚胺单元。

在本发明的上下文中，CH₃-基团不被视为支链。

在本发明的一个实施方案中，聚亚烷基亚胺可以具有1-1000mg KOH/g，优选10-500mg KOH/g，最优选50-300mg KOH/g的伯胺值。伯胺值可以根据ASTM D2074-07测定。

在本发明的一个实施方案中，聚亚烷基亚胺可以具有10-1000mg KOH/g，优选50-500mg KOH/g，最优选50-500mg KOH/g的仲胺值。仲胺值可以根据ASTM D2074-07测定。

在本发明的一个实施方案中，聚亚烷基亚胺可具有1-300mg KOH/g，优选5-200mgKOH/g，最优选10-100mg KOH/g的叔胺值。叔胺值可以根据ASTM D2074-07测定。

在本发明的一个实施方案中，叔N原子的摩尔份数通过¹⁵N-NMR光谱法测定。在叔胺值和根据¹³C-NMR光谱法的结果不一致的情况下，优选通过¹³C-NMR光谱法获得的结果。

在本发明的一个实施方案中，所述聚亚烷基亚胺的平均分子量M_w为250-100,000g/mol，优选至多50,000g/mol，更优选800至25,000g/mol。聚亚烷基亚胺的平均分子量M_w可以通过中间体相应聚亚烷基亚胺的凝胶渗透色谱法(GPC)测定，该色谱法用1.5重量％的含水甲酸作为洗脱剂并用交联的聚甲基丙烯酸羟乙酯作为固定相。

所述聚亚烷基亚胺可以是游离的或烷氧基化的，所述烷氧基化选自乙氧基化、丙氧基化、丁氧基化和前述至少两种的组合。优选氧化乙烯、1,2-氧化丙烯以及氧化乙烯和1,2-氧化丙烯的混合物。如果应用至少两种氧化烯的混合物，则它们可以逐步或同时反应。

在本发明的一个实施方案中，烷氧基化聚亚烷基亚胺每个单元带有至少6个氮原子。

在本发明的一个实施方案中，聚亚烷基亚胺被每个NH基团2至50摩尔的氧化烯，优选每个NH基团5至30摩尔的氧化烯，甚至更优选每个NH基团5至25摩尔的氧化烯或1,2-氧化丙烯或其组合烷氧基化。在本发明的上下文中，NH₂单元被计为两个NH基团。优选地，所有-或几乎所有-NH基团被烷氧基化，并且没有可检测量的NH基团保留。

取决于这种烷氧基化聚亚烷基亚胺的制备，分子量分布可以是窄的或宽的。例如，多分散性Q＝M_w/M_n在1至3的范围内，优选至少2，或者其可以大于3且至多为20，例如3.5至15，甚至更优选在4至5.5的范围内。

在本发明的一个实施方案中，烷氧基化聚亚烷基亚胺的多分散性Q为2-10。

在本发明的一个实施方案中，烷氧基化聚亚烷基亚胺选自聚乙氧基化聚乙烯亚胺、乙氧基化聚丙烯亚胺、乙氧基化α,ω-己二胺、乙氧基化和丙氧基化聚乙烯亚胺、乙氧基化和丙氧基化聚丙烯亚胺和乙氧基化和聚丙氧基化α,ω-己二胺。

在本发明的一个实施方案中，烷氧基化聚乙烯亚胺的平均分子量M_n(数均)为2,500-1,500,000g/mol，通过GPC测定，优选至多为500,000g/mol。

在本发明的一个实施方案中，平均烷氧基化聚亚烷基亚胺选自乙氧基化α,ω-己二胺和乙氧基化和聚丙氧基化α,ω-己二胺，它们各自具有800-500,000g/mol，优选1,000-30,000g/mol的平均分子量M_n(数均)。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含除EDTA、DTPA、MGDA和GLDA之外的一种或多种配合剂，例如柠檬酸盐、膦酸衍生物，例如羟基乙-1,1-二膦酸(“HEDP”)的二钠盐，例如柠檬酸三钠，和磷酸盐，例如STPP(三聚磷酸钠)。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含助洗剂系统，其包含：

·乙二胺四乙酸(EDTA)和/或二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)和/或甲基甘氨酸二乙酸酯(MGDA)和/或谷氨酸二乙酸酯(GLDA)，如上文所公开的，其量在0.1重量％至25.0重量％的范围内、在1.0重量％至15.0重量％的范围内、在3.0重量％至10.0重量％的范围内或在2.5重量％至10重量％的范围内，全部相对于洗涤剂制品的总重计；

·任选地，柠檬酸，其量在0.1重量％至10.0重量％的范围内、在0.5重量％至8.0重量％的范围内、在1.0重量％至5.0重量％的范围内、或在2.0重量％至4重量％的范围内，均相对于洗涤剂制品的总重计；柠檬酸可以以与甲酸盐的混合物的形式被提供，例如柠檬酸钠:甲酸钠＝9:1；

·任选的至少一种膦酸盐，优选地选自聚膦酸的衍生物，如二膦酸的衍生物，例如HEDP的钠盐，以及氨基多膦酸的衍生物，例如氨基亚烷基膦酸，例如DTPMP，其量在0.1重量％至5.0重量％的范围内，在0.5重量％至3.0重量％的范围内，或在1.0重量％至2.0重量％的范围内，全部相对于洗涤剂制品的总重计；

·任选的至少一种聚羧酸盐，其选自具有为相同的不饱和羧酸的重复单体的均聚物，例如聚丙烯酸(PAA)，和具有为至少两种不同的不饱和羧酸的重复单体的共聚物，例如丙烯酸与甲基丙烯酸的共聚物、丙烯酸或甲基丙烯酸与马来酸和/或富马酸的共聚物，其量为0重量％至10重量％，0.5重量％至7重量％，1.0重量％至5重量％，或2.5重量％至5.0重量％，全部相对于洗涤剂制品的总重计；

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含

·如上述所公开的甲基甘氨酸二乙酸酯(MGDA)和/或谷氨酸二乙酸酯(GLDA)，其量在1重量％至20重量％的范围内，在2.5重量％至15重量％的范围内，或在2.5重量％至12.5重量％的范围内，均相对于洗涤剂制品的总重计；

·优选另外的柠檬酸和/或至少一种膦酸盐和/或至少一种聚羧酸盐；

在本发明的一个实施方案中，本发明的制剂不含磷酸盐和多磷酸盐，包括磷酸氢盐，例如不含磷酸三钠、三聚磷酸五钠和偏磷酸六钠。关于磷酸盐和多磷酸盐，在本发明的上下文中，“不含”应理解为意指磷酸盐和多磷酸盐的含量总计在10ppm至0.2重量％的范围内，通过重量分析法测定并且相对于洗涤剂配制品的总重计。

本发明的液体洗涤剂制品可以包含一种或多种缓蚀剂。在本申请中，这应理解为包括抑制金属腐蚀的那些化合物。适合的缓蚀剂的非限制性实例包括硅酸钠、三唑如苯并三唑、双苯并三唑、氨基三唑、烷基氨基三唑、酚衍生物如氢醌、焦儿茶酚、羟基氢醌、没食子酸、间苯三酚和焦没食子酚、另外的聚乙烯亚胺和铋或锌的盐。可以将缓蚀剂以相对于液体洗涤剂制品的总重0.05至1.5％w/w的量配制到本发明的液体洗涤剂制品中。

在一个实施方案中，包含本发明液体组合物的成分的洗涤剂制品为液体自动餐具洗涤剂。本发明的液体组合物优选以约1:1000、1:500、1:100、1:50、1:30、1.25、1:20或1:10的液体组合物:洗涤剂的重量比包含在液体自动餐具洗涤剂中。

通常，自动餐具洗涤剂不包含阴离子表面活性剂。优选地，本发明的液体自动餐具洗涤剂包含至少一种式(IV)的非离子表面活性剂，更优选其中R¹为n-C₈烷基，R²为支链C₁₁烷基，AO为CH₂-CH₂-O，并且x为22。自动餐具洗涤剂优选包含相对于液体自动餐具洗涤剂的总重在约0.3重量％至10重量％范围内、在约0.5重量％至5重量％范围内、或在约1重量％至3重量％范围内的量的这类化合物。

优选地，自动餐具洗涤剂包含助洗剂系统，所述助洗剂系统包含

·如上述所公开的甲基甘氨酸二乙酸酯(MGDA)和/或谷氨酸二乙酸酯(GLDA)，其量在1重量％至20重量％的范围内，在2.5重量％至15重量％的范围内，或在2.5重量％至12.5重量％的范围内，均相对于洗涤剂制品的总重计；

·优选另外地，柠檬酸，其量在0.1重量％至10.0重量％的范围内、在0.5重量％至8.0重量％的范围内、在1.0重量％至5.0重量％的范围内、或在2.0重量％至4重量％的范围内，均相对于洗涤剂制品的总重计；柠檬酸可以以与甲酸盐的混合物的形式提供，例如柠檬酸钠:甲酸钠＝9:1；

·优选另外地，至少一种膦酸盐，优选选自聚膦酸的衍生物，例如二膦酸的衍生物，如HEDP的钠盐，和氨基聚膦酸的衍生物，例如氨基亚烷基膦酸，例如DTPMP，其量在0.1重量％至5.0重量％的范围内，在0.5重量％至3.0重量％的范围内，或在1.0重量％至2.0重量％的范围内，全部相对于洗涤剂配制品的总重计；

·优选另外地，至少一种聚羧酸盐，其选自具有为相同的不饱和羧酸的重复单体的均聚物，例如聚丙烯酸(PAA)，和具有为至少两种不同的不饱和羧酸的重复单体的共聚物，例如丙烯酸与甲基丙烯酸的共聚物，丙烯酸或甲基丙烯酸与马来酸和/或富马酸的共聚物，其量为0重量％至10重量％、0.5重量％至7重量％、1.0重量％至5重量％或2.5重量％至5.0重量％，全部相对于洗涤剂制品的总重计；

在一个实施方案中，本发明的液体自动餐具洗涤剂包含至少一种如本文所公开的水解酶，优选选自至少一种枯草杆菌蛋白酶和至少一种α-淀粉酶，两者均如本文所公开。优选地，至少一种蛋白酶的含量约为0.10重量％至0.25重量％，相对于洗涤剂制品的总重计。优选包含约0.002重量％至0.015重量％的量的至少一种α-淀粉酶，相对于洗涤剂制品的总重计。

在本发明的一个实施方案中，洗涤剂制品，特别是当用作自动餐具洗涤剂时，可以包含至少一种锌盐。锌盐可选自水溶性和水不溶性锌盐。在这方面，在本发明的上下文中，水不溶性用于指在25℃的蒸馏水中具有0.1g/l或更小的溶解度的那些锌盐。因此，在本发明的上下文中，在水中具有较高溶解度的锌盐称作水溶性锌盐。

锌盐可以选自苯甲酸锌、葡萄糖酸锌、乳酸锌、甲酸锌、ZnCl2、ZnSO4、乙酸锌、柠檬酸锌、Zn(NO3)2、Zn(CH3SO3)2和没食子酸锌，优选ZnCl2、ZnSO4、乙酸锌、柠檬酸锌、Zn(NO3)2、Zn(CH3SO3)2和没食子酸锌。

在本发明的另一个实施方案中，锌盐选自ZnO、水合ZnO(ZnO·aq)、Zn(OH)2和ZnCO3。优选水合ZnO。

在本发明的一个实施方案中，锌盐选自平均粒径(重均)为10nm至100μm的氧化锌。

锌盐中的阳离子可以以配合形式存在，例如与氨配体或水配体配合，特别是以水合形式存在。为了简化符号，在本发明的上下文中，如果配体是水配体，则通常省略配体。

取决于如何调节根据本发明混合物的pH，锌盐可以改变。因此，例如，能够使用乙酸锌或ZnCl2来制备根据本发明的制剂，但是其在8或9的pH下在水性环境中转化为ZnO、Zn(OH)2或水合ZnO，其可以以非配合或配合形式存在。

锌盐可以存在于在室温下为固体的那些本发明自动餐具洗涤制品中，优选以颗粒形式存在，所述颗粒具有例如10nm至100μm，优选100nm至5μm的平均直径(数均)，粒径通过X-射线散射测定。

锌盐可以以溶解或固体或胶体形式存在于在室温下为液体的那些用于家庭护理应用的洗涤剂制品中。

在本发明的一个实施方案中，发明的自动餐具洗涤制剂总计包含0.05-0.4重量％的锌盐，在每种情况下均基于所述制剂的固体含量。在本文中，锌盐的分数以锌或锌离子形式给出。由此，可以计算反离子分数。

本发明的液体洗涤剂制品可以包含至少一种接枝共聚物，该接枝共聚物由至少一种选自非离子单糖、二糖、寡糖和多糖的接枝基底物(base)和通过接枝至少一种烯属不饱和单或二羧酸和至少一种通式(XIV)的化合物获得的侧链组成，

其中变量如下所定义：

R¹选自甲基和氢，

A¹选自C₂-C₄-亚烷基，

R²相同或不同且选自C₁-C₄-烷基，

X^-选自卤化物、单-C₁-C₄-烷基硫酸盐和硫酸盐。

本发明的液体洗涤剂制品可以包含一种或多种缓冲剂，例如单乙醇胺和N,N,N-三乙醇胺。

可以对本发明液体洗涤剂制品的起泡特性方面进行调整以满足各种目的。手洗餐具洗涤剂通常需要稳定的泡沫。自动洗碗机洗涤剂通常要求是低起泡的。洗衣店洗涤剂的范围可以是从高泡沫到中等或中间范围到低泡沫。对于前装式滚筒式洗衣机和洗涤-烘干机组合，通常推荐使用低泡沫洗衣店洗涤剂。本领域技术人员熟悉在适合于特定应用的洗涤剂制品中使用泡沫稳定剂或泡沫抑制剂作为洗涤剂成分。泡沫稳定剂的实例包括但不限于烷醇酰胺和烷基胺氧化物。抑泡剂的实例包括但不限于磷酸烷基酯、硅酮、石蜡油和皂。自动餐具洗涤剂可以包含相对于洗涤剂的总重在0.05重量％至0.5重量％范围内的量的抑泡剂。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品、优选本发明的液体洗涤剂制品包含至少一种选自通过烷氧基化程度或通过修饰的烷基链改性的非离子表面活性剂的低泡沫表面活性剂。特别地，低发泡和泡沫抑制表面活性剂在器皿洗涤或自动餐具洗涤制品(ADW)和其他L&L应用(如瓶子清洁和乳制品清洁)中用作另外的添加剂。在一个实施方案中，本发明的低泡表面活性剂选自式(IV)的非离子表面活性剂，其中R¹为n-C₃-C₁₇烷基，R²为直链或支链C₈-C₁₄烷基。优选地，AO选自–(CH₂CH₂O)_x2-(CH₂CH(CH₃)-O)_x3、–(CH₂CH₂O)_x2-(CH(CH₃)CH₂-O)_x3和–(CH₂CH₂O)_x4，其中x2和x4为15-50的数值，且x3为1-15的数值。

液体洗涤剂制品可以包含至少一种选自有机溶剂、防腐剂、粘度调节剂、助水溶物、香料、染料、缓冲剂、用于片剂的崩解剂、和/或酸(例如甲磺酸)的化合物。

本发明的液体洗涤剂制品可以包含一种或多种香料，例如水杨酸苄酯、2-(4-叔丁基苯基)2-甲基丙醛(可作为

商购获得)和己基肉桂醛。

本发明的液体洗涤剂制品可以包含一种或多种染料，例如酸性蓝9、酸性黄3、酸性黄23、酸性黄73、颜料黄101、酸性绿1、溶剂绿7和酸性绿25。

在本发明的一个实施方案中，液体洗涤剂制品包含的有机溶剂的量为0.5至25重量％，相对于液体洗涤剂制品的总重计。特别是当本发明的液体洗涤剂制品以袋等的形式提供时，相对于液体洗涤剂制品的总重，可以包含8至25重量％的有机溶剂。有机溶剂为上文在成分(d)的上下文中公开的那些。

在本发明的一个实施方案中，液体洗涤剂制品包含一种或多种水溶助长剂，其可以为有机溶剂，例如乙醇、异丙醇、乙二醇、1,2-丙二醇，以及在正常条件下可与水混溶的其他有机溶剂，但不限于此。适合的水溶助长剂的其它实例为甲苯磺酸、二甲苯磺酸和枯烯磺酸的钠盐。水溶助长剂的含量可以促进或能够溶解在水中表现出有限溶解度的化合物。

发明的液体洗涤剂制品可以包含有效避免液体洗涤剂制品的微生物污染的量的选自上文公开的那些的一种或多种防腐剂(参见成分(d))。

在一个实施方案中，本发明的液体洗涤剂制品包含至少一种选自2-苯氧乙醇、戊二醛、2-溴-2-硝基丙-1,3-二醇、酸形式的甲酸或其盐、以及4,4'-二氯2-羟基-二苯醚的防腐剂。液体洗涤剂制品可以包含至少一种防腐剂，其量相对于洗涤剂制品的总重为2ppm至5重量％。本发明的液体洗涤剂制品可以包含相对于洗涤剂制品的总重在0.1重量％至2重量％范围内的量的苯氧乙醇。本发明的液体洗涤剂制品可以包含用量在20ppm至1000ppm范围内的2-溴-2-硝基丙-1,3-二醇。本发明的液体洗涤剂制品可以包含用量为10ppm至2000ppm的戊二醛。本发明的液体洗涤剂制品可以包含相对于用于洗涤剂制品总重的0.05重量％至0.5重量％的量的甲酸和/或甲酸盐。本发明的液体洗涤剂制品可以包含4,4'-二氯2-羟基二苯醚，其用量为0.001重量％至3重量％、0.002重量％至1重量％或0.01重量％至0.6重量％，均相对于洗涤剂制品的总重计。

在本发明的一个实施方案中，液体洗涤剂制包含一种或多种粘度调节剂。根据物理形式的不同，本发明的洗涤剂制品可以包含一种或多种流变改性剂，其在本文中可以称作增稠剂。

本发明的“增稠剂”选自如下：

聚合物结构化剂：

天然衍生的聚合物结构剂的非限制性示例包括羟乙基纤维素、疏水改性的羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、多糖衍生物及其混合物。适合的多糖衍生物包括但不限于果胶、藻酸盐、阿拉伯半乳聚糖(阿拉伯树胶)、角叉菜胶、胶凝糖、黄原胶、瓜尔胶及其混合物。

合成聚合物结构剂的非限制性示例包括：聚羧酸酯、聚丙烯酸酯、疏水性改性的乙氧基化尿烷、疏水改性的非离子多元醇以及它们的混合物。聚羧酸酯聚合物可以例如为聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯或其混合物。聚丙烯酸酯可以为例如不饱和的单或二碳酸和(甲基)丙烯酸的C₁-C₃₀烷基酯的共聚物。

二-亚苄基多元醇乙缩醛衍生物

本发明的制剂可以包含一种或多种二亚苄基多元醇缩醛衍生物(DBPA)。DBPA衍生物可以包含二亚苄基山梨醇缩醛衍生物(DBS)。所述DBS衍生物可以选自：1,3:2,4-二亚苄基山梨醇；1,3:2,4-二(对-甲基亚苄基)山梨醇；1,3:2,4-二(对-率亚苄基)山梨醇；1,3:2,4-二(2,4-二甲基呀亚苄基)山梨醇；1,3:2,4-二(对-乙基-亚苄基)山梨醇；1,3:2,4-二(3,4-二甲基二亚苄基)山梨醇；及其混合物。

二-酰氨基胶凝剂

在一个方面，外部结构化系统可以包含具有分子量为约150g/mol-约1,500g/mol乃至约500g/mol-约900g/mol的二酰氨基胶凝剂。这类二酰氨基胶凝剂可以包含至少两个氮原子，其中所述氮原子中的至少两个形成酰氨基官能取代基。在一个方面，酰氨基是不同的。在另一个方面，酰氨基官能团是相同的。二酰氨基胶凝剂具有下式(XV)：

其中式(XV)中二-酰氨基胶凝剂的变量如下所定义：

R³和R⁴为氨基官能端基，乃至酰氨基官能端基，在一个方面，R³和R⁴可以包含pH可调节的基团，其中pH可调节的酰氨基胶凝剂可以具有约1至约30乃至约2至约10的pKa。在一个方面，pH可调节的基团可以包含吡啶。在一个方面，R³和R⁴可以不同。在另一个方面，R³和R⁴可以相同。

L为分子量为14至500g/mol的连接部分。在一个方面，L可以包含含有2至20个碳原子的碳链。在另一个方面，L可以包含pH可调基团。在一个方面，pH可调基团为仲胺。在一个方面，R³、R⁴或L中的至少一个可以包含pH可调基团。

细菌纤维素

术语“细菌纤维素”涵盖经由醋杆菌属(Acetobacter)的细菌例如CPKelco U.S.的

发酵产生的任何类型的纤维素，并且包括通常称作微原纤化纤维素、网状细菌纤维素等的材料。在一个方面，所述纤维可以具有1.6nm至3.2nm×5.8nm至133nm的横截面尺寸。另外，细菌纤维素纤维可以具有至少约100nm或约100-约1,500nm的平均微纤维长度。在一个方面，所述细菌纤维素微纤维可以具有约100:1-约400:1乃至约200:1-约300:1的纵横比，其是指平均微纤维长度除以最宽的横截面微纤维宽度。

在本发明的一个方面，细菌纤维素至少部分地涂覆有聚合物结构化剂(参见上文)。在一个方面，相对于洗涤剂制品的总重，至少部分被涂覆的细菌纤维素包含约0.1％-约5％w/w乃至约0.5％-约3％w/w的细菌纤维素。适合的细菌纤维素可以包括上述细菌纤维素，并且适合的聚合物结构化剂包括羧甲基纤维素、阳离子羟甲基纤维素及其混合物。

非细菌纤维素衍生的纤维素纤维

纤维素纤维可以从蔬菜、水果或木材中提取。可商购获得的实例为来自FMC的

来自Fiberstar的Citri-FI或来自Cosun的Betafib。

非聚合的结晶羟基官能材料

在本发明的一个方面，所述制剂可以包含非聚合的结晶羟基官能结构剂。所述非聚合的结晶羟基官能结构剂可以包含可结晶甘油酯，其可被预乳化以有助于分散到最终液体洗涤剂制品中。在一个方面，可结晶甘油酯可以包括氢化蓖麻油或“HCO”或其衍生物，条件是其能够在液体洗涤剂制品中结晶。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂制品包含至少一种天然衍生的聚合物结构剂，优选选自多糖衍生物，例如黄原胶，其用量相对于洗涤剂制品的总重为0.1重量％至约1重量％，乃至约0.2重量％至约0.5重量％。

在本发明的一个实施方案中，本发明的制剂不含除锌化合物之外的那些重金属化合物。在本发明的上下文中，这可以理解为意指本发明组合物不含不充当漂白催化剂的那些重金属化合物，特别是不含铁化合物。关于重金属化合物，在本发明的上下文中，“不含”应理解为意指不充当漂白催化剂的重金属化合物的含量总计在0至100pm，优选1至30ppm的范围内，通过浸出法(Leach method)测定。优选地，除锌之外，本发明的洗涤剂制品具有基于所述制剂的固体含量低于0.05ppm的重金属含量。在本发明的上下文中，“重金属”是具有至少6g/cm³的比重的所有金属，锌和铋除外。特别地，重金属为金属，例如铋、铁、铜、铅、锡、镍、镉和铬。优选地，本发明的自动餐具洗涤制剂不包含可测量的铋化合物部分，即例如小于1ppm。

当发明的液体洗涤剂制品以隔室袋等形式提供时，包含本发明的液体酶制剂的隔室与包含漂白剂如无机过氧化物化合物或氯漂白剂例如次氯酸钠的隔室分开提供。在一个实施方案中，包含液体酶制剂的隔室还包含至少一种配合剂，例如EDTA和/或DTPA和/或MGDA和/或GLDA，其中MGDA和GLDA如上述所公开。

在一个实施方案中，本发明的液体洗涤剂制品不含漂白剂，例如不含无机过氧化物化合物或氯漂白剂，例如次氯酸钠，这意味着本发明的液体洗涤剂制品包含总计0.8％、0.5％、0.1％或0.01重量％或更少的无机过氧化物化合物和氯漂白剂，在每种情况下均相对于液体洗涤剂制品的总重计。

酶稳定化

本发明涉及通过添加酶稳定系统[成分(b)]和任选的至少一种二醇(成分(c))的步骤来稳定成分(a)中包含的至少一种水解酶的方法，其中成分(a)和(b)和(c)是上文公开的那些。在一个实施方案中，成分(a)为液体。在一个实施方案中，本发明涉及稳定成分(a)的方法，通过添加成分(b)和任选的成分(c)的步骤来进行，其中成分(a)包含至少一种蛋白酶和/或至少一种淀粉酶和/或至少一种脂肪酶和/或至少一种纤维素酶和/或至少一种甘露聚糖酶。在一个实施方案中，当与不存在成分(c)时的酶稳定化相比时，通过将成分(c)添加到成分(a)和(b)中来改善酶稳定化。当与不含成分(c)的混合物相比时，酶稳定性得到改善。

在一个实施方案中，当与不存在成分(c)时的酶稳定化相比时，通过将成分(c)和成分(d)的混合物添加到成分(a)和(b)中来改善酶稳定化。当与不含成分(c)和(d)的混合物相比时，酶稳定性得到改善。

在一个实施方案中，成分(c)包含至少一种二醇，其选自具有末端-OH基团的包含3至10个C-原子、优选4至8个C-原子的二醇；所述二醇可以选自1,4-丁二醇、1,6-己二醇和1,8-辛二醇。在一个实施方案中，成分(c)包含1,6-己二醇和至少一种如上述所公开具有邻位-OH的二醇的混合物，具有邻位-OH的二醇优选选自1,2-丁二醇和1,2-戊二醇，其中1,6-己二醇与具有邻位-OH的二醇的重量比为10:1、9:1、8:1、7:1或6:1，优选在6:1-8:1范围内，更优选在7:1-6:1范围内，最优选6.75:1。

在一个实施方案中，成分(d)包含至少一种有机溶剂，优选选自1,2-丙二醇和聚乙二醇甲醚。

在一个优选的实施方案中，成分(d)和成分(c)以约1:2-约1:3.3的重量比存在，其中成分(c)包含至少1,6-己二醇。

在一个实施方案中，成分(a)中包含的至少一种蛋白酶是稳定的，其中所述蛋白酶选自枯草杆菌蛋白酶(EC 3.4.21.62)，优选选自

·如EP 1921147中所述的SEQ ID NO:22的蛋白酶或其具有蛋白水解活性的变体，优选与如EP 1921147中所述的具有R101E的与SEQ ID NO:22 80％相似和/或相同的蛋白酶，和

·选自WO 89/06279的表I a)中公开的枯草杆菌蛋白酶309或其具有蛋白水解活性的变体的蛋白酶。

在一个实施方案中，成分(a)中包含的至少一种淀粉酶是稳定的，其中至少一种淀粉酶选自如上述所公开的α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)，更优选至少一种淀粉酶选自

·来自芽孢杆菌属707的淀粉酶或其具有淀粉分解活性的变体，优选选自如WO99/19467中公开的具有SEQ ID NO:6的淀粉酶及其具有淀粉分解活性的变体；

·淀粉酶，其选自包含如WO 00/60060中所述的具有SEQ ID NO:2的氨基酸1至485的那些，如WO 2006/002643中所述的具有SEQ ID NO:12的那些，及其具有淀粉分解活性的变体；

·来自盐敏芽孢杆菌的淀粉酶或其具有淀粉分解活性的变体，优选选自如WO2013/001078中公开的具有SEQ ID NO:1和2的淀粉酶；具有如WO 2011/098531中所述的SEQID NO:6；及其具有解淀粉活性的变体；

·来自解淀粉芽胞杆菌的淀粉酶或其具有淀粉分解活性的变体，优选选自WO2016/092009的SEQ ID NO:3的淀粉酶；

·根据WO 2014/183920的杂合淀粉酶，其具有与WO 2014/183920的SEQ ID NO:2具有至少90％相似性和/或同一性的A和B结构域以及与WO 2014/183920的SEQ ID NO:6具有至少90％相似性和/或同一性的C结构域，其中所述杂合淀粉酶具有淀粉分解活性；优选地，该杂合α-淀粉酶为至少95％与WO 2014/183920的SEQ ID NO:23相似和/或相同并具有淀粉分解活性；

·根据WO 2014/183921的杂合淀粉酶，其具有与WO 2014/183921中公开的SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:26、SEQ IDNO:32和SEQ ID NO:39具有至少75％相似性和/或同一性的A和B结构域，以及与WO 2014/183921的SEQ ID NO:6具有至少90％相似性和/或同一性的C结构域，其中所述杂合淀粉酶具有淀粉分解活性；优选地，该杂合α-淀粉酶与WO 2014/183921中公开的SEQ ID NO:30至少95％相似和/或相同，并且具有淀粉分解活性。

在一个实施方案中，成分(a)中包含的至少一种脂肪酶是稳定的，其中至少一种脂肪酶可以为选自具有脂肪分解活性的变体的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶，当与US 5869438的SEQ ID NO:2的氨基酸1-269的全长多肽序列相比时，所述变体是至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相似和/或相同的。优选地，所述疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶仅包含保守突变，然而其不涉及US 5869438的SEQ ID NO:2的氨基酸1-269的功能结构域。所述疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的特征可以在于在US 5869438的SEQ ID NO:2内具有至少氨基酸取代T231R和N233R。

在一个实施方案中，在至少一种表面活性剂的存在下，通过加入本发明的酶制剂来稳定成分(a)中包含的至少一种酶，或将至少成分(b)，优选另外的成分(c)，优选另外的成分(d)加入到至少一种表面活性剂中，其中至少一种表面活性剂选自非离子表面活性剂、两性表面活性剂、阴离子表面活性剂和阳离子表面活性剂，全部如本文所述。在一个实施方案中，表面活性剂为液体制剂、优选液体洗涤剂制品的组成部分。在一个实施方案中，将本发明的酶制剂的成分分别加入到表面活性剂或洗涤剂制品中。

酶的稳定化优选涉及随时间的稳定性(例如储存稳定性)、热稳定性、pH稳定性和化学稳定性。本文中的术语“酶稳定性”优选涉及例如在储存或操作期间作为时间的函数的酶活性的保留。术语“储存”在本文中意指产品或组合物或制剂从制造时到用于最终应用的时间点被储存的事实。在储存期间作为时间函数的酶活性的保留称作“储存稳定性”。在一个实施方案中，储存意指在37℃下储存至少20天。储存可以意指在37℃下储存21、28或42天。

为了确定酶活性随时间的变化，酶的“初始酶活性”可以在确定的条件下在零时间(即储存前)测量，并且“储存后的酶活性”可以在稍后的某个时间点(即储存后)测量。

储存后的酶活性除以初始酶活性乘以100得到“残留酶活性”(a％)。

当与储存前的初始酶活性相比，残留酶活性为至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或100％时，本发明的酶是稳定的。

当与储存前的初始酶活性相比时，从100％中减去a％得到“储存期间酶活性的损失”。在一个实施方案中，当在储存期间基本上不发生酶活性损失时，本发明的酶是稳定的，即与储存前的初始酶活性相比，酶活性损失等于0％。在本发明中基本上没有酶活性的损失可以意指当与储存前的初始酶活性相比时，酶活性的损失小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于9％、小于8％、小于7％、小于6％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％。

在本发明的一个方面，当与仅成分(b)存在下的相同酶相比时，包含在成分(a)中的至少一种酶在成分(b)和(c)以及任选的(d)存在下在储存期间显示出减少的酶活性损失。在一个实施方案中，当与仅成分(bi)存在下的相同酶相比时，包含在成分(a)中的至少一种酶在成分(b)和(c)以及任选的(d)存在下的储存期间显示出减少的酶活性损失。在一个实施方案中，当与不存在成分(c)和任选的(d)的相同酶相比时，包含在成分(a)中的至少一种酶在成分(b)和(c)和任选的(d)的存在下在储存期间显示减少的酶活性损失。

在一个实施方案中，成分(c)包含至少一种二醇，其选自具有末端-OH基团的包含3至10个C-原子、优选4至8个C-原子的二醇；所述二醇可以选自1,4-丁二醇、1,6-己二醇和1,8-辛二醇。在一个实施方案中，成分(c)包含1,6-己二醇和至少一种如上述所公开具有邻位-OH的二醇的混合物，所述具有邻位-OH的二醇优选选自1,2-丁二醇和1,2-戊二醇，其中1,6-己二醇与具有邻位-OH的二醇的重量比为10:1、9:1、8:1、7:1或6:1，优选在6:1-8:1范围内，更优选在7:1-6:1范围内，最优选6.75:1。

在一个实施方案中，成分(d)包含至少一种有机溶剂，优选选自1,2-丙二醇和聚乙二醇甲醚。

在一个优选的实施方案中，成分(d)和成分(c)以约1:2-约1:3.3的重量比存在，其中成分(c)包含至少1,6-己二醇。

酶活性损失减少％的计算如下进行：(稳定酶的酶活性损失％)-(非稳定酶的酶活性损失％)。

本发明中酶活性损失的减少可以意指当与不存在成分(a)的酶活性损失相比时，在成分(a)存在下酶活性损失减少至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少99.5％。

在一个方面，酶稳定化发生在包含至少一种表面活性剂的液体制剂内，优选发生在液体洗涤剂制品内。在该上下文中的稳定化可以意指在37℃下储存21、28和/或42天期间的稳定化。

在本发明的一个方面，当与仅成分(b)存在下的蛋白酶相比时，至少一种枯草杆菌蛋白酶在成分(b)和(c)存在下是稳定的。在一个实施方案中，当与仅成分(bii)存在下的蛋白酶相比时，至少一种枯草杆菌蛋白酶在成分(b)和(c)下存在是稳定的。优选地，与在37℃下储存长达42天之前的初始蛋白水解活性相比，枯草杆菌蛋白酶在储存后显示≥72％、≥75％或≥80％的残留蛋白水解活性。在一个实施方案中，枯草杆菌蛋白酶选自WO 89/06279中公开的枯草杆菌蛋白酶147和/或309或其具有蛋白水解活性的变体、WO 91/02792中公开的来自迟缓芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶或其具有蛋白水解活性的变体、和EP 1921147中所述的根据SEQ ID NO:22的枯草杆菌蛋白酶或其具有蛋白水解活性的变体。

在本发明的一个方面，当与仅成分(b)存在下的蛋白酶相比时，至少一种α淀粉酶在成分(b)和(c)存在下是稳定的。在一个实施方案中，当与仅成分(bii)存在下的蛋白酶相比时，至少一种枯草杆菌蛋白酶在成分(b)和(c)存在下是稳定的。优选地，当与在37℃下储存长达42天之前的初始蛋白水解活性相比时，α淀粉酶在储存后显示≥60％、≥70％或≥80％的残余淀粉分解活性。在一个实施方案中，所述α淀粉酶选自

·来自芽孢杆菌属707的淀粉酶或其具有淀粉分解活性的变体，优选选自如WO99/19467中公开的具有SEQ ID NO:6的淀粉酶及其具有淀粉分解活性的变体；

·淀粉酶，其选自包含如WO 00/60060中所述的具有SEQ ID NO:2的氨基酸1至485的那些，如WO 2006/002643中所述的具有SEQ ID NO:12的那些，及其具有淀粉分解活性的变体；

·来自盐敏芽孢杆菌的淀粉酶或其具有淀粉分解活性的变体，优选选自如WO2013/001078中公开的具有SEQ ID NO:1和2的淀粉酶；具有如WO 2011/098531中所述的SEQID NO:6；及其具有解淀粉活性的变体；

·来自解淀粉芽胞杆菌的淀粉酶或其变体，其具有淀粉分解活性，优选选自WO2016/092009的SEQ ID NO:3的淀粉酶；

·根据WO 2014/183920的杂合淀粉酶，其具有与WO 2014/183920的SEQ ID NO:2具有至少90％相似性和/或同一性的A和B结构域以及与WO 2014/183920的SEQ ID NO:6具有至少90％相似性和/或同一性的C结构域，其中所述杂合淀粉酶具有淀粉分解活性；优选地，该杂合α-淀粉酶为至少95％与WO 2014/183920的SEQ ID NO:23相似和/或相同并具有淀粉分解活性；

·根据WO 2014/183921的杂合淀粉酶，其具有与WO 2014/183921中公开的SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:26、SEQ IDNO:32和SEQ ID NO:39具有至少75％相似性和/或同一性的A和B结构域，以及与WO 2014/183921的SEQ ID NO:6具有至少90％相似性和/或同一性的C结构域，其中所述杂合淀粉酶具有淀粉分解活性；优选地，该杂合α-淀粉酶与WO 2014/183921中公开的SEQ ID NO:30至少95％相似和/或相同，并且具有淀粉分解活性。

如上述所公开的至少一种酶的稳定优选在成分(b)和(c)的存在下进行，其中成分(bi)选自柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯和柠檬酸乙酰氧基三乙酯；优选柠檬酸三乙酯；

成分(bii)选自4-FPBA和式(Db)的肽稳定剂，其特征在于R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Val的L或D-氨基酸残基，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为Leu的L或D-氨基酸残基；且N-末端保护基Z为苄氧基羰基(Cbz)；

成分(c)包含至少一种二醇，其选自

具有末端-OH基团的包含3至10个C-原子、优选4至8个C-原子的二醇；优选选自1,4-丁二醇、1,6-己二醇和1,8-辛二醇；和

至少两种二醇的组合，其中第一种二醇选自具有末端-OH基团的包含3至10个C-原子、优选4至8个C-原子的二醇，更优选1,4丁二醇、1,6己二醇和1,8辛二醇；且第二种二醇选自具有邻位-OH基团的包含4-10个C-原子、优选4-8个C-原子、更优选4-6个C-原子、最优选4-5个C-原子的二醇；尤其优选选自1,2丁二醇和1,2戊二醇。

在一个实施方案中，成分(c)包含至少一种二醇，其选自具有末端-OH基团的包含3至10个C-原子、优选4至8个C-原子的二醇；所述二醇可以选自1,4-丁二醇、1,6-己二醇和1,8-辛二醇。在一个实施方案中，成分(c)包含1,6-己二醇和至少一种如上述所公开具有邻位-OH的二醇的混合物，所述具有邻位-OH的二醇优选选自1,2-丁二醇和1,2-戊二醇，其中1,6-己二醇与具有邻位-OH的二醇的重量比为10:1、9:1、8:1、7:1或6:1，优选在6:1-8:1范围内，更优选在7:1-6:1范围内，最优选6.75:1。

在一个实施方案中，如上述公开的至少一种酶的稳定化优选在成分(b)和(c)和(d)的存在下进行。优选地，成分(d)包含至少一种有机溶剂，优选选自1,2-丙二醇和聚乙二醇甲醚。在一个优选的实施方案中，成分(d)和成分(c)以约1:2-约1:3.3的重量比存在，其中成分(c)包含至少1,6-己二醇。

实施例

通过工作实施例进一步示例本发明。

一般注释：百分比为重量百分比，另有特别注释的除外。

测试化合物

式(A)的化合物-(如上述所公开的成分(b))：

a.1柠檬酸三乙酯-购自Sigma Aldrich

a.2柠檬酸三丁酯-购自Sigma Aldrich

a.3柠檬酸乙酰氧基三乙酯-购自Sigma Aldrich

酶制剂的储存稳定性

通过混合下表1的成分来生产酶制剂。

表1:液体酶制剂(EP)

所用的蛋白酶：具有突变R101E(根据BPN’编号)的如EP 1921147中所述的SEQ IDNO:22。

所用的肽醛：Cbz-Val-Ala-Leu-H(式(Db):Z＝Cbz，R¹为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO为Val的L或D-氨基酸残基，R²为这样的基团，其使得NH-CHR²-CO为Ala的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为Leu的L或D-氨基酸残基)。

将表1的制剂EP-…储存在8℃、20℃和37℃下6周，并且定性评价浊度和相分离(参见表2)。

*如上述所公开的式(A)的化合物

表2:酶制剂的光学评价

EP-I.

EP-II.

EP-III.

EP-IV

EP-V

EP-VI.

光学评价

--

-

0

+

+

+

EP-VII.

EP-VIII.

EP-IX.

EP-X.

EP-XI.

EP-XII.

光学评价

++

++

0

++

++

++

EP-XIII.

EP-XIV.

EP-XV.

EP-XVI.

EP-XVII.

EP-XVIII.

光学评价

++

++

0

-

++

++

--立即浑浊；12h内相分离；

–浑浊和72h内微弱相分离；

0轻微浑浊，8℃至37℃无相分离

+乳浊光或轻微浑浊

++保持澄清，8℃至37℃储存6个月以上无相分离

在液体洗涤剂制品中的酶稳定性

将II.的酶制剂配制成表3的制品(DF)。

表3:液体洗涤剂制品

(比较例1):MGDA 50％溶液(Trilon M Max Liquid)

(比较例2):柠檬酸

(比较例3):GLDA 50％溶液

(比较例4):PAA,聚丙烯酸Mw 5.000g/mol(均-聚丙烯酸)

(比较例5):甘油(G)或丙二醇(P)

(比较例6):式(IV)的非离子表面活性剂，其中R¹为n-C₈烷基，R²为支链C₁₁烷基，AO为CH₂-CH₂-O，且x为22。

(比较例7):Na₄HEDP

(比较例8):增稠剂黄原胶

Amy1＝Stainzyme,Amy2＝Amplify,Amy3＝Stainzyme Plus L(12L)

将液体洗涤剂制品在37℃的温度下储存8周(42天)。这相当于在室温下储存约9个月或在8℃下储存>15个月。

通过从底物(亚乙基-封闭的-pNPG7，Roche Applied Science 10880078103)释放发色团对硝基苯酚(pNP)定量测量储存后的淀粉酶活性。α-淀粉酶将底物降解成较小的分子和α-葡糖苷酶(Roche Applied Science 11626329103)，其与α-淀粉酶相比过量存在，加工这些较小的产物直至释放pNP；通过在405nm处吸收的增加测量的pNP的释放与样品的α-淀粉酶活性成正比。淀粉酶标准品：Termamyl 120L(Sigma 3403)。

通过测量对肽底物Suc-AAPF-pNA的反应性来分析储存后的蛋白酶活性。这里使用100mM Tris缓冲液在30℃、pH 8.6下从底物分子裂解pNA。与蛋白酶活性成正比的裂解速率可以通过测量OD₄₀₅(在405nm处的光密度)，根据溶液中游离pNA的黄色的增加来确定。

表4展示了在37℃下储存42天之前和之后在液体制剂中测量的淀粉酶和蛋白酶活性。所提供的淀粉分解和蛋白水解活性值是相对于0时参比制剂中测得的值来进行计算的，参比制剂中不含式(A)的化合物(成分(b)的组成部分)和二醇(成分(c))。

表4：在37℃下储存42天之前和之后的蛋白酶和淀粉酶活性；ENZ：在水溶液中包含用0.3％肽醛稳定的4.8％蛋白酶的酶溶液。

Claims (15)

1.一种均质的储存稳定的液体酶制剂，包含：

成分(a):至少一种选自水解酶(EC 3)的酶；

和

成分(b):酶稳定系统，其包含

(bi)至少一种通式(A)的化合物

其中式(A)中的变量如下：

R¹选自H和C₁-C₁₀烷基羰基，其中烷基可以为直链或支链的，且可以带有一个或多个羟基，

R²、R³、R⁴彼此独立地选自H、直链C₁-C₅烷基、支链C₃-C₁₀烷基、未被取代或被一个或多个羧酸酯或羟基取代的C₆-C₁₀-芳基、和C₆-C₁₀-芳基-烷基，其中后者的烷基选自直链C₁-C₈烷基或支链C₃-C₈烷基，其中R²、R³和R⁴的至少一个不为H；

和

(bii)至少一种选自含硼的化合物和肽稳定剂的化合物，

和

成分(c):至少一种具有末端-OH基团的包含4-8个C-原子的二醇。

2.权利要求1的酶制剂，其中R²、R³、R⁴彼此独立地选自直链C₂-C₄烷基。

3.权利要求1和2的酶制剂，还包含

成分(d):10-30重量％的至少一种选自有机溶剂的化合物，其中重量％以相对于该酶制剂的总重为基准。

4.权利要求1-3的酶制剂，其中成分(c)中包含的至少一种二醇的量相对于该酶制剂的总重为10％-30重量％。

5.权利要求1-4的酶制剂，其中成分(c)包含至少一种第二种二醇，其选自具有邻位-OH基团的包含4-10个C-原子的二醇，优选其用量相对于该酶制剂的总重为2重量％-5重量％。

6.权利要求1-5的酶制剂，其中成分(c)包含具有邻位-OH基团的包含4-10个C-原子的二醇和选自具有末端-OH基团的包含3-10个C-原子的二醇的二醇的混合物，两者的混合比为1:10。

7.权利要求1-6的酶制剂，其中成分(bii)包含至少一种肽稳定剂，其选自式(Db)的化合物，

其中

R¹和R²为这样的基团，其使得NH-CHR¹-CO和NH-CHR²-CO各自为选自Ala、Cys、Gly、Pro、Ser、Thr、Val、Nva或Nle的L或D-氨基酸残基，且R³为这样的基团，其使得NH-CHR³-CO为选自Tyr、间-酪氨酸、3,4-二羟基苯丙氨酸、Phe、Val、Ala、Met、Nva、Leu、Ile或Nle的L或D-氨基酸残基，

且

N-末端保护基Z选自苄氧基羰基(Cbz)、对甲氧基苄基羰基(MOZ)、苄基(Bn)、苯甲酰基(Bz)、对甲氧基苄基(PMB)、对甲氧基苯基(PMP)、甲酰基、乙酰基(Ac)、甲氧基、烷氧基羰基、甲氧基羰基、芴基甲氧基羰基(Fmoc)或叔丁氧基羰基(Boc)。

8.一种液体洗涤剂制品，其至少包含

成分(a):至少一种选自水解酶(EC 3)的酶；

和

成分(b):酶稳定系统，其包含

(bi)至少一种通式(A)的化合物

其中式(A)中的变量如下：

R¹选自H和C₁-C₁₀烷基羰基，其中烷基可以为直链或支链的，且可以带有一个或多个羟基，

R²、R³、R⁴彼此独立地选自H、直链C₁-C₅烷基、支链C₃-C₁₀烷基、未被取代或被一个或多个羧酸酯或羟基取代的C₆-C₁₀-芳基、和C₆-C₁₀-芳基-烷基，其中后者的烷基选自直链C₁-C₈烷基或支链C₃-C₈烷基，其中R²、R³和R⁴的至少一个不为H；

和

(bii)至少一种选自含硼化合物和肽稳定剂的化合物，

成分(c):至少一种具有末端-OH基团的包含4-8个C-原子的二醇

和至少一种洗涤剂成分。

9.权利要求8的洗涤剂制品，其中该洗涤剂制品包含至少一种配合剂，其选自柠檬酸盐、硅酸盐、碳酸盐、膦酸盐和氨基羧酸盐。

10.权利要求8-9的洗涤剂制品，其中该洗涤剂制品包含一种或多种配合剂，其总量相对于该洗涤剂制品的总重约为15％-30重量％。

11.权利要求8-10的洗涤剂制品，其中该洗涤剂制品包含至少一种表面活性剂，优选选自非离子表面活性剂，更优选选自低泡表面活性剂。

12.权利要求8-11的洗涤剂制品，其中该洗涤剂制品不含漂白剂。

13.至少一种具有末端-OH基团的包含4-8个C-原子的二醇在提供均质和储存稳定的酶制剂中的用途，所述酶制剂至少包含

成分(a):至少一种选自水解酶(EC 3)的化合物；

和

成分(b):酶稳定系统，其包含

(bi)至少一种通式(A)的化合物

其中式(A)中的变量如下：

R¹选自H和C₁-C₁₀烷基羰基，其中烷基可以为直链或支链的，且可以带有一个或多个羟基，

R²、R³、R⁴彼此独立地选自H、直链C₁-C₅烷基、支链C₃-C₁₀烷基、未被取代或被一个或多个羧酸酯或羟基取代的C₆-C₁₀-芳基、和C₆-C₁₀-芳基-烷基，其中后者的烷基选自直链C₁-C₈烷基或支链C₃-C₈烷基，其中R²、R³和R⁴的至少一个不为H；

和

(bii)至少一种选自含硼化合物和肽稳定剂的化合物。

14.至少一种选自具有末端-OH基团的包含3-10个C-原子的二醇在通式(A)化合物的存在下用于改善至少一种水解酶的酶稳定性和/或酶制剂的稳定性的用途，

其中式(A)中的变量如下：

R¹选自H和C₁-C₁₀烷基羰基，其中烷基可以为直链或支链的，且可以带有一个或多个羟基，

R²、R³、R⁴彼此独立地选自H、直链C₁-C₅烷基、支链C₃-C₁₀烷基、未被取代或被一个或多个羧酸酯或羟基取代的C₆-C₁₀-芳基、和C₆-C₁₀-芳基-烷基，其中后者的烷基选自直链C₁-C₈烷基或支链C₃-C₈烷基，其中R²、R³和R⁴的至少一个不为H。

15.权利要求14的用途，其中水解酶稳定性在式(A)化合物和酶稳定剂的存在下得到改善，所述酶稳定剂选自含硼化合物和肽稳定剂。