CN114295745A - 一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本申请涉及医药检测技术领域，具体公开了一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法。一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法包括如下的步骤：S1、将水痘减毒活疫苗原液和乙腈按体积比1：（10‑20）混合，经离心后取上清液即为待测液；S2、取待测液采用气相色谱外标法进行检测。本申请的检测方法能够减少蛋白类杂质对检测产生的不良影响，减少色谱图上的干扰物质峰，从而有利于更准确的检测出水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量。

Description

一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法

技术领域

本申请涉及医药检测技术领域，更具体地说，它涉及一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法。

背景技术

水痘减毒活疫苗系用水痘-带状疱疹病毒接种人二倍体细胞，经培养，收获病毒，加入适宜稳定剂冻干制成。临床上用于预防水痘。水痘病毒为胞内病毒，病毒收获之后需要保存在细胞里。细胞保存于液氮中，为保持细胞活性，需要加入一定量的二甲基亚砜作为冻存保护液。在ICH：Q3C（R7）中及《中国药典》残留溶剂测定法中均将二甲基亚砜划分为第三类溶剂，限度要求为小于0.5%。水痘疫苗主要应用人群为12月龄以上的健康儿童，因此其安全性尤为重要。为控制水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留，以保证用药安全，本发明建立了水痘减毒活疫苗原液中二甲基亚砜残留量的气相色谱法。

目前，二甲基亚砜含量的检测方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法、紫外可见分光光度法，应用于化学药品、原料药、工业废水检测等领域。冯光玲等（CN105717230B）发明了一种检测法匹拉韦中有机溶剂残留的方法；段和祥等在《顶空毛细管气相色谱法测定门冬氨酸洛美沙星原料中6种有机溶剂残留量》中建立了一种测定化学原料药中二甲基亚砜残留量的方法；吴万秀等在《高效液相色谱法测定水和废水中的DMF、DMAC、DMSO研究》中，建立了高效液相色谱法测定工业废水中二甲基亚砜残留量的方法。因化学药品和工业废水的成分相对简单，样品不需经前处理可直接进行色谱法测定，因此上述方法并不适用于基质成分复杂并含有大量蛋白类杂质的疫苗产品。目前关于疫苗产品中尤其是水痘疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法未见报道。

因水痘疫苗生产过程中起始原材料使用了人二倍体细胞和水痘-带状疱疹病毒减毒株，其基质成分较为复杂，干扰性杂质较多，在进行色谱法检测时干扰性杂质会在色谱图上表现出较多的干扰物质峰，因此采用目前已知的方法无法准确测定水痘减毒活疫苗中残留的二甲基亚砜。

发明内容

为了能够准确的检测出水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量，本申请提供一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法。

本申请提供的一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法采用如下的技术方案：

一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法，包括如下的步骤：

S1：将水痘减毒活疫苗原液和乙腈按体积比1：（10-20）混合，经离心后取上清液即为待测液；

S2：取待测液采用气相色谱外标法进行检测。

通过采用上述技术方案，乙腈有优良的溶剂性能且极易挥发，将水痘减毒活疫苗原液与乙腈混合后，水痘减毒活疫苗原液中残留的二甲基亚砜能够溶解于乙腈中，而杂质蛋白发生沉淀，对混合物进行离心处理后，能够达到将蛋白类杂质与二甲基亚砜分离的目的，接着取上清液进行检测，能够减少蛋白类杂质对检测产生的不良影响，减少色谱图上的干扰物质峰，从而有利于更准确的检测出水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量。

可选的，所述S1中离心操作的转速为12000-14000r/min；离心时间为8-12min。

通过采用上述技术方案，将离心操作的转速和时间控制在上述的范围内，能够充分使水痘减毒活疫苗原液中的杂质蛋白发生沉淀，从而尽量减少上清液中的干扰性杂质的含量，从而有利于更准确的检测出水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量。

可选的，所述S1步骤之前还包括如下的前处理步骤：

（1）将水痘减毒活疫苗原液和乙醇按体积比1：（5-7）混合后，搅拌均匀，升温后保温反应20-30min，得到混合液；

（2）在混合液中加入预处理液，进行超声震荡20-30min，然后静置1-2h后，得到悬浊液；

（3）对悬浊液进行减压过滤后，取其滤液进行旋蒸，旋蒸后的滤液用于与乙腈混合。

通过采用上述技术方案，将水痘减毒活疫苗原液加入乙醇后，乙醇能够降低水痘减毒活疫苗原液的电解常数，从而增加蛋白类杂质及其他杂质小分子上不同电荷的引力，进而降低蛋白类杂质及其他杂质小分子的溶解度；此外，乙醇能够破坏蛋白类杂质及其他杂质小分子表面的水化膜，使得蛋白质和杂质小分子从水痘减毒活疫苗原液溶出，然后加入预处理液，预处理液能够破坏蛋白质的胶体稳定性，并促进溶出的蛋白质和杂质小分子絮凝并聚集成团，然后通过超声震荡使得成团的絮状物与预处理液形成沉淀，接着对悬浊液进行减压过滤，从而达到将杂质蛋白和其他杂质小分子从水痘减毒活疫苗原液中分离的目的，过滤后的滤液中干扰性杂质大大减少，然后对滤液进行旋蒸处理，旋蒸处理一方面为了去除滤液中多余的乙醇，另一方面蒸发掉前处理步骤中增加的水，以保证旋蒸后的滤液浓度保持适宜。上述操作后在后续与乙腈混合的操作中，能够避免其他杂质小分子溶入乙腈内，从而减少待测水痘减毒活疫苗原液中的杂质含量，有利于降低色谱柱和进样口内杂质残留的积累速度，因此能够更好的保护色谱柱和进样口，杂质含量较少的待测水痘减毒活疫苗原液能够使色谱柱保持较长的使用寿命和较高的柱效，从而使检测器的灵敏度保持在较高水平，同时有利于降低进样口的清洗频率和色谱柱的更换频率，从而提高检测的工作效率。

可选的，所述（1）中所述乙醇的浓度为80-95%；升温至30-45℃。

通过采用上述技术方案，将乙醇的浓度选在在上述范围内，能够加快水痘减毒活疫苗原液中蛋白类杂质和其他杂质小分子的溶出速率，同时辅以升温操作，能够进一步加快水痘减毒活疫苗原液中蛋白类杂质和其他杂质小分子的溶出速率，升温至上述的温度范围不至于使乙醇迅速挥发，能够提高溶出效率的同时保证蛋白类杂质和其他杂质小分子能够尽可能多的完全溶出，通过上述的手段能够缩短前处理步骤所需要的时间，从而提高检测水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测效率。

可选的，所述（2）中所述预处理液为硫酸铜溶液。

通过采用上述技术方案，采用硫酸铜溶液作为预处理液能够与蛋白质和其他小分子形成不溶于水的沉淀，从而达到将杂质蛋白和其他杂质小分子从水痘减毒活疫苗原液中快速分离的目的。

可选的，所述（2）中所述预处理液与（1）中所述水痘减毒活疫苗原液的体积比为（1-1.2）：10，所述预处理液的质量浓度为1-1.5%。

通过采用上述技术方案，加入上述比例和浓度的预处理液能够使溶出的蛋白类杂质和其他杂质小分子充分絮凝并聚集成团并形成沉淀，同时上述比例和浓度的预处理液引入溶液体系的盐离子数量适宜，因为过多的盐离子会使得沉淀解胶溶解，从而达不到良好的沉淀效果，因此选择上述比例和浓度的预处理液能够进一步减少待测液中的干扰性杂质，从而使色谱柱保持较长的使用寿命和较高的柱效，进而使检测器的灵敏度保持在较高水平，同时有利于降低进样口的清洗频率和色谱柱的更换频率，从而提高检测的工作效率。

可选的，所述（2）中超声震荡的超声频率为10MHz-30MHz。

通过采用上述技术方案，选择上述范围的超声频率能够加快预处理液与溶出的蛋白类杂质和其他杂质小分子的吸附凝结速率，从而达到快速将蛋白类杂质和其他杂质小分子沉淀的目的，能够缩短前处理步骤所需要的时间，从而提高检测水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测效率。

可选的，所述S2中的色谱条件为：

色谱柱：Agilent DB-624毛细管柱，规格为30m×0.53mm×3μm；

柱温：118-122℃；

进样口温度：248-252℃；

FID检测器温度：268-272℃；

载气：氮气；

流速：4.5-5.0ml/min；

分流比：（4-6）:1；

进样量：0.5μl。

通过采用上述技术方案，采用上述的色谱条件检测得到的色谱图上干扰物质峰较少，并且二甲基亚砜色谱峰与干扰物质峰分离良好，不会影响对二甲基亚砜的定性定量判断，在50~1000μg/ml范围内线性关系良好，r为0.9999，检测限为20μg/ml，回收率和精密度良好，因此能够更准确的检测出水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量。

综上所述，本申请具有以下有益效果：

1、由于本申请的方法采用乙腈与水痘减毒活疫苗原液混合，混合后水痘减毒活疫苗原液中残留的二甲基亚砜能够溶解于乙腈中，对混合物进行离心处理后，水痘减毒活疫苗原液中的杂质蛋白发生沉淀，从而达到将蛋白类杂质与二甲基亚砜分离的目的，接着取上清液进行检测，能够减少蛋白类杂质对检测产生的不良影响，减少色谱图上的干扰物质峰，从而有利于更准确的检测出水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量。

2、本申请中的方法在检测之前对水痘减毒活疫苗原液进行前处理，前处理中通过乙醇将蛋白类杂质和其他杂质小分子从水痘减毒活疫苗原液溶出，通过预处理液促进溶出的蛋白质和杂质小分子絮凝并聚集成团，然后通过超声震荡使得成团的絮状物与预处理液形成沉淀，从而达到将杂质蛋白和其他杂质小分子从水痘减毒活疫苗原液中分离的目的，过滤后的滤液中干扰性杂质大大减少，在后续与乙腈混合的操作中，能够避免其他杂质小分子溶入乙腈内，从而进一步减少干扰性杂质对检测产生的不良影响，并且减少待测水痘减毒活疫苗原液中的杂质含量，有利于降低色谱柱和进样口内杂质残留的积累速度，因此能够更好的保护色谱柱和进样口，杂质含量较少的待测水痘减毒活疫苗原液能够使色谱柱保持较长的使用寿命和较高的柱效，同时有利于降低进样口的清洗频率和色谱柱的更换频率，从而提高检测的工作效率。

3、本申请的方法，在对水痘减毒活疫苗原液进行前处理的过程中通过控制乙醇的浓度，并进行升温、超声震荡等操作，能够加快水痘减毒活疫苗原液中蛋白类杂质和其他杂质小分子的溶出速率，同时保证蛋白类杂质和其他杂质小分子能够尽可能多的完全溶出，因此能够缩短前处理步骤所需要的时间，从而提高检测水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测效率。

附图说明

图1是本申请在实施例1的色谱条件下二甲基亚砜系统适用性试验气相色谱图，其中1号峰为二甲基亚砜色谱峰，其余峰为杂质峰，其中横坐标为保留时间，纵坐标为信号强度；

图2是本申请在实施例1的色谱条件下专属性试验（空白溶液）气相色谱图，其中横坐标为保留时间，纵坐标为信号强度；

图3是本申请实施例1的检测色谱图，其中横坐标为保留时间，纵坐标为信号强度；

图4是本申请对比例1的检测色谱图，其中1号峰为干扰物质峰，2号峰为二甲基亚砜色谱峰，其中横坐标为保留时间，纵坐标为信号强度；

图5是本申请对比例2的检测色谱图，其中1号峰为二甲基亚砜色谱峰，其余峰为杂质峰，其中横坐标为保留时间，纵坐标为信号强度；

图6是本申请对比例3的检测色谱图，其中1号峰为干扰物质峰，2号峰为二甲基亚砜色谱峰，其中横坐标为保留时间，纵坐标为信号强度；

图7是本申请对比例4的检测色谱图，其中1号峰为干扰物质峰，2号峰为二甲基亚砜色谱峰，其中横坐标为保留时间，纵坐标为信号强度。

具体实施方式

以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。

仪器与试药

仪器：Agilent 7890A气相色谱仪配7693自动进样器（美国Agilent公司）；HA-500型氢空一体机（北京中惠普分析技术研究院）；XSE205DU型电子分析天平（MettlerToledo）。

试药：二甲基亚砜（Sigma-Aldrich，色谱纯，批号：MKCH9236）；水痘减毒活疫苗原液。

实施例

实施例1

S1：将水痘减毒活疫苗原液和乙腈按体积1:20混合，涡旋混合30s，以14000r/min的转速离心10min，取上清液即为待测液，本实施例中水痘减毒活疫苗原液的初始用量为0.5ml；

S2：取待测液采用气相色谱外标法进行检测。

色谱条件：

色谱柱：Agilent DB-624毛细管柱，规格为30m×0.53mm×3μm；

柱温：120℃；

进样口温度：250℃；

FID检测器温度：270℃；

载气：氮气；

流速：4.7ml/min；

分流比：5:1；

进样量：0.5μl。

实施例2

S1：将水痘减毒活疫苗原液和乙腈按体积1:15混合，涡旋混合30s，以12000r/min的转速离心12min，取上清液即为待测液，本实施例中水痘减毒活疫苗原液的初始用量为0.5ml；

S2：取待测液采用气相色谱外标法进行检测。

色谱条件：

色谱柱：Agilent DB-624毛细管柱，规格为30m×0.53mm×3μm；

柱温：118℃；

进样口温度：248℃；

FID检测器温度：268℃；

载气：氮气；

流速：4.5ml/min；

分流比：4:1；

进样量：0.5μl。

实施例3

S1：将水痘减毒活疫苗原液和乙腈按体积1:10混合，涡旋混合30s，以13000r/min的转速离心8min，取上清液即为待测液，本实施例中水痘减毒活疫苗原液的初始用量为0.5ml；

S2：取待测液采用气相色谱外标法进行检测。

色谱条件：

色谱柱：Agilent DB-624毛细管柱，规格为30m×0.53mm×3μm；

柱温：122℃；

进样口温度：252℃；

FID检测器温度：272℃；

载气：氮气；

流速：5.0ml/min；

分流比：6:1；

进样量：0.5μl。

实施例4

S1前处理：

（1）将水痘减毒活疫苗原液和质量浓度为95%的乙醇溶液按体积比1：7混合后，搅拌均匀，升温至45℃后，保温反应30min，得到混合液，本实施例中水痘减毒活疫苗原液的初始用量为0.5ml；

（2）在混合液中加入质量浓度为1.5%硫酸铜溶液，硫酸铜溶液的质量与（1）中水痘减毒活疫苗原液的体积比为1.2：10，加入硫酸铜溶液后在30MHz的条件下超声震荡30min，然后静置2h后，得到悬浊液；

（3）对悬浊液进行减压过滤后，取其滤液在100℃的条件下进行旋蒸处理，旋蒸至滤液剩余0.5ml后存放备用；

S2：将（3）中滤液和乙腈按体积1:20混合，涡旋混合30s，以14000r/min的转速离心10min，取上清液即为待测液；

S3：取待测液采用气相色谱外标法进行检测。

色谱条件：

色谱柱：Agilent DB-624毛细管柱，规格为30m×0.53mm×3μm；

柱温：120℃；

进样口温度：250℃；

FID检测器温度：270℃；

载气：氮气；

流速：4.7ml/min；

分流比：5:1；

进样量：0.5μl。

对比例

对比例1

采用《顶空毛细管气相色谱法测定门冬氨酸洛美沙星原料中6种有机溶剂残留量》中提供的方法对水痘减毒活疫苗原液中的二甲基亚砜残留量进行检测；供试品采用未经任何处理的水痘减毒活疫苗原液作为待测液进行检测。

对比例2

与实施例1的区别在于：S1中采用等量的丙酮代替乙腈。

对比例3

与实施例1的区别在于：S1中采用等量的甲醇代替乙腈。

对比例4

与实施例1的区别在于：S1中采用等量的乙醇代替乙腈。

数据检测

1. 溶液配制

精密称取二甲基亚砜（DMSO）100 mg，置100 ml容量瓶中，用乙腈溶解并定容，摇匀，得到浓度为1000 μg/ml的对照品储备液。精密量取对照品储备液10 ml，置100 ml容量瓶中，用乙腈溶解并定容，摇匀，得到浓度为100 μg/ml的对照品溶液。

2. 供试品测定结果

（1）系统适用性和专属性试验

取对照品溶液0.05 ml，加入0.95ml乙腈，涡旋混合30 s，按照实施例1的色谱条件进样6次，记录色谱图，测定理论塔板数和分离度。二甲基亚砜的理论塔板数不低于10000，分离度大于1.5，杂质对测定无干扰。系统适用性和专属性图谱见附图1和附图2。

（2）线性和范围

配制标准曲线系列浓度：50、100、200、400、800、1000µg/ml。分别量取系列对照溶液0.05 ml，加入0.95 ml乙腈，涡旋混合30 s，按色谱条件进样分析。以各样品测得的峰面积为纵坐标，加入对照品溶液浓度为横坐标，进行线性回归，回归方程为Y=0.1160X-0.8395（r=0.9999）。二甲基亚砜在50~1000 μg/ml浓度范围内，线性关系良好。

（3）回收率试验

精密量取供试品9份，供试品为实施例1中的待测液，每份0.05 ml，分别精密加入低、中、高三个浓度（100、400、800 μg/ml）的对照品溶液0.05 ml，每个浓度各三份，再加入乙腈0.9 ml，涡旋混合30 s，离心10 min ( 14000 r/min)，取上清进样分析。同时取对照品溶液与这9份供试品进行测定。依法进行加样回收率计算：回收率%=（测得量-样品量）/加入量×100%。可接受的回收率结果应在80%~120%之间，计算结果见表1。供试品中二甲基亚砜的残留量均为未检出。

表1 回收率试验结果

（4）精密度试验

精密量取供试品6份，供试品为实施例1中的待测液，每份0.05 ml，精密加入100μg/ml的对照品溶液0.05 ml，再加入乙腈0.9 ml，涡流混合30 s，离心10 min ( 14000 r/min)，取上清进样分析。计算二甲基亚砜峰面积的RSD为1.9 %。表明方法重复性良好。

另一名试验员在第二天同法操作，计算二甲基亚砜峰面积的RSD为2.0 %。表明方法中间精密度良好。精密度试验结果见表2。

表2 精密度试验结果

（5）定量限及检测限

逐步稀释对照品溶液，在实施例1的色谱条件下进样，测得二甲基亚砜的定量限为50 μg/ml（S/N=10），检测限为20μg/ml（S/N=3）。该定量限与检测限远低于二甲基亚砜残留量的限度标准（小于0.5 %），可满足检测要求。

（6）耐用性试验

分别在柱温（120 ± 2）℃，供试品沉淀蛋白离心时间（10 ± 2）min范围内考察系统参数微小变化对二甲基亚砜残留量测定结果的影响。结果表明，在柱温（120 ± 2）℃，供试品沉淀蛋白离心时间（10 ± 2）min变化范围内，测定结果的RSD<10%，方法的耐用性良好。耐用性试验结果见表3。

表3 耐用性试验结果

（7）供试品检测结果

实施例1的检测色谱图见附图3。根据图谱记录峰面积，计算二甲基亚砜溶剂残留量。实施例1的水痘减毒活疫苗原液中二甲基亚砜的残留量为未检出，符合《中国药典》残留溶剂限度要求（小于0.5%）。

由表1可知，采用实施例1的待测液作为供试品得到的平均回收率为98.1%，说明采用本申请提供的方法检测二甲基亚砜的回收率能够保持在较高的水平；RSD%为2.3%，说明采用本申请提供的方法检测二甲基亚砜的回收率的精密度较高、重复性较好。实施例1中通过将水痘减毒活疫苗原液与乙腈混合后，水痘减毒活疫苗原液中残留的二甲基亚砜能够溶解于乙腈中，而杂质蛋白发生沉淀，对混合物进行离心处理后，能够达到将蛋白类杂质与二甲基亚砜分离的目的，因此能够减少蛋白类杂质对检测产生的不良影响，减少色谱图上的干扰物质峰，从而有利于更准确的检测出水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量。

对比例1的检测图谱见附图4，其中1号峰为干扰物质峰，2号峰为二甲基亚砜色谱峰。由图可见，杂质峰与待测物色谱峰分离度不符合要求，无法准确检测其残留量，说明已有方法不适用于水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的测定。

对比例2的检测图谱见附图5，其中1号峰为二甲基亚砜色谱峰，其余均为杂质峰，由图可见，待测物色谱峰与杂质峰无法有效分离，分离度小于1.5，专属性不合格，无法准确测定水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜的残留量。

对比例3的检测图谱见附图6，其中1号峰为干扰物质峰，2号峰为二甲基亚砜色谱峰，由图可见，待测物色谱峰与杂质无法有效分离，分离度小于1.5，专属性不合格，无法准确测定水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜的残留量。

对比例4的检测图谱见附图7，其中1号峰为干扰物质峰，2号峰为二甲基亚砜色谱峰，由图可见，待测物与杂质无法有效分离，分离度小于1.5，专属性不合格，无法准确测定水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜的残留量。

（8）色谱柱更换频率试验

在检测过程中分别采用实施例1-4和对比例1的检测方法，然后对更换色谱柱的频率和清洗进样口的频率进行记录，更换频率以每更换一次色谱柱的平均进样针数进行表示；清洗频率以每清洗一次进样口的平均进样针数进行表示，此处的“更换”后的处理有两种方式，一是直接更换新的色谱柱，二是对色谱柱清洗再生后再使用，具体结果见表4。

表4 色谱柱更换频率试验结果

由表4可知，采用实施例1-3的检测方法，色谱柱的更换频率和进样口的清洗频率保持在300-400针/次；而采用对比例1的检测方法，色谱柱的更换频率和进样口的清洗频率为200-250针/次，说明本申请提供的检测方法用一个色谱柱可以进样更多次，因此色谱柱的清洗、更换频率更低，待测样品对进样口的污染也较小，因此进样口的清洗频率也较低；采用实施例4的检测方法，色谱柱的更换频率和进样口的清洗频率基本保持在500针/次以上，进一步降低了进样口的清洗频率和色谱柱的清洗、更换频率；可能是因为经过前处理后水痘减毒活疫苗原液中的杂质蛋白和其他小分子杂质进一步减少，杂质含量较少的待测水痘减毒活疫苗原液有利于降低色谱柱和进样口内干扰杂质残留的积累速度，因此能够更好的保护色谱柱和进样口，因此进一步降低了进样口的清洗频率和色谱柱的清洗、更换频率。

本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (8)

1.一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法，其特征在于：包括如下的步骤：

S1：将水痘减毒活疫苗原液和乙腈按体积比1：（10-20）混合，经离心后取上清液即为待测液；

S2：取待测液采用气相色谱外标法进行检测。

2.根据权利要求1所述的一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法，其特征在于：所述S1中离心操作的转速为12000-14000r/min；离心时间为8-12min。

3.根据权利要求1所述的一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法，其特征在于：所述S1步骤之前还包括如下的前处理步骤：

（1）将水痘减毒活疫苗原液和乙醇按体积比1：（5-7）混合后，搅拌均匀，升温后保温反应20-30min，得到混合液；

（2）在混合液中加入预处理液，进行超声震荡20-30min，然后静置1-2h后，得到悬浊液；

（3）对悬浊液进行减压过滤后，取其滤液进行旋蒸，旋蒸后的滤液用于与乙腈混合。

4.根据权利要求3所述的一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法，其特征在于：所述（1）中所述乙醇的浓度为80-95%；升温至30-45℃。

5.根据权利要求3所述的一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法，其特征在于：所述（2）中所述预处理液为硫酸铜溶液。

6.根据权利要求3所述的一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法，其特征在于：所述（2）中所述预处理液与（1）中所述水痘减毒活疫苗原液的体积比为（1-1.2）：10，所述预处理液的质量浓度为1-1.5%。

7.根据权利要求3所述的一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法，其特征在于：所述（2）中超声震荡的超声频率为10MHz-30MHz。

8.根据权利要求1所述的一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法，其特征在于：所述S2中的色谱条件为：

色谱柱：Agilent DB-624毛细管柱，规格为30m×0.53mm×3μm；

柱温：118-122℃；

进样口温度：248-252℃；

FID检测器温度：268-272℃；

载气：氮气；

流速：4.5-5.0ml/min；

分流比：（4-6）:1；

进样量：0.5μl。

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