CN110412185B - 在线渗析-双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法 - Google Patents

在线渗析-双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110412185B
CN110412185B CN201910614414.6A CN201910614414A CN110412185B CN 110412185 B CN110412185 B CN 110412185B CN 201910614414 A CN201910614414 A CN 201910614414A CN 110412185 B CN110412185 B CN 110412185B
Authority
CN
China
Prior art keywords
urine
ion
ions
concentration
detection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910614414.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110412185A (zh
Inventor
沈梅
龚若眉
王颖
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Southern Medical University
Original Assignee
Southern Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Southern Medical University filed Critical Southern Medical University
Priority to CN201910614414.6A priority Critical patent/CN110412185B/zh
Publication of CN110412185A publication Critical patent/CN110412185A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110412185B publication Critical patent/CN110412185B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N2030/042—Standards
    • G01N2030/047—Standards external
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G01N2030/146—Preparation by elimination of some components using membranes

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种在线渗析‑双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法，其包括以下步骤：(1)向尿液加入与其体积比为1:(3.5‑4.5)的乙腈，离心处理使尿液中的蛋白沉淀；吸取上清液再分别用有机相及无机相的针式过滤器过滤；(2)将步骤1处理好的样品上机进行检测，选用Metrosep A Supp 7色谱柱，碳酸钠和异丙醇混合溶液作为淋洗液；采用0.4‑0.8mL/min的流速进行分离。采用本发明方法能够对尿液中六种阴离子同时进行检测，操作简单，检测所需时间短约半小时即可完成；各离子分离度分离度＞1.5；各离子线性关系良好；6种离子的检出限和方法检测限分别在1.50‑12.0μg/L和15.0‑120μg/L之间。

Description

在线渗析-双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法
技术领域
本发明涉及分析化学领域，特别是一种离子色谱法测定尿液中六种离子的方法。
背景技术
生物样品是医学诊断检查中重要的样本来源，1506年，Ullrich出版的Epiphanie
Medicorum一书中，详细地说明了尿液颜色、气味与味道与各种疾病的联系。在中国最早的医学典籍《黄帝内经》中，便提出了尿的颜色与疾病的关系。发展到现代，人们已可以利用各项检测技术观察微观世界中各项代谢产物水平的变化，识别多种病变的特异性生物标志物，为研究饮食、药物和疾病的影响提供了新的视角。正常尿液一般由水、尿素、尿酸、无机盐组成。尿素的检测在临床诊断、水质监控和食品科学等方面具有重要的意义, 尤其是在奶制品、游泳水中。当尿酸发生异常时，可以反映出嘌呤代谢相关疾病，如痛风和Lesch-Nyhan综合症。无机盐的种类非常多，如亚氯酸盐(Chlorite)和氯酸盐(Chlorate)是二氧化氯处理饮用水的副产物，亚氯酸盐具有神经毒性，氯酸盐可造成一定的DNA损伤，对血液和甲状腺系统也有负面作用。亚硝酸盐(Nitrite)和硝酸盐(Nitrate)作为食品添加剂可抑制食物中微生物的繁殖，尤其是肉毒杆菌，还可以改善肉制品的颜色和味道。但亚硝酸盐中毒会导致严重的高铁血红蛋白症。硝酸盐毒性虽不强，但它在体内易被还原为亚硝酸盐。另外，由于食品工业原料的易获得性，投毒案中亚硝酸盐是常见的毒物，有效的定性定量检测有助于刑事案件的侦破。在多种动植物中，溴化物(Bromide)作为镇静剂、抗焦虑和抗癫痫的治疗和预防药物，有着悠久的药用历史。但溴化物会影响碘离子的吸收，甚至造成甲状腺功能减退。硫酸盐(Sulfate)在医学领域应用广泛，如硫酸镁用于治疗子痫，硫酸钡用于钡餐造影等。但某些硫酸盐，如雌激素硫酸盐化合物，对正常生理机能具有强烈的危害作用，主要表现为降低人类的生殖机能、造成发育异常及引发某些癌症等。人体硫代谢的主要产物是硫酸盐，经尿排出，因此尿液中硫酸盐的检测有助于判断人体内硫酸盐残留量。
离子色谱仪(ion chromatography,IC)是高效液相色谱的一种形式，是分析阴阳离子和小分子极性有机化合物的一种液相色谱方法。采用低交换容量的离子交换树脂来分离离子，待测物质通过疏水和库伦相互作用与固定相结合，经淋洗液洗脱，随后通过电导率或紫外线等方法检测。传统测定阴离子的方法以比色法为基础，受多种离子的干扰，且操作复杂，需要对样品进行蒸馏、还原等特殊处理。现代检测技术除了离子色谱法，还有毛细管电泳法、离子选择电极法等。毛细管电泳法具有费时少、样品用量少、运行成本低等优点，但其重现性较差。与离子选择电极法相比，离子色谱法具有检测离子种类多、可靠性等优点。
关于离子色谱同时检测尿液中的氯酸根离子、亚硝酸根离子、溴离子、氯酸根离子、硝酸根离子和硫酸根离子6种离子的方法还未见相关报道。
发明内容
为解决上述问题，本发明的目的是提供一种在线渗析-双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法，可同时测定尿液中6种无机阴离子，为医学诊断、临床试验提供辅助检测，以及无机盐投毒案件的侦破提供有力证据。
本发明的目的是这样实现的：一种在线渗析-双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)样品前处理：收集正常人中段尿液，向尿液中加入与其体积比为1:3.5-4.5的乙腈，置于离心机离心，使尿液中的蛋白沉淀；吸取上清液，再分别用有机相及无机相的针式过滤器过滤，得到处理好的样品；
(2)将步骤1处理好的样品上机进行检测，工作条件为：选用Metrosep A Supp 7色谱柱进行检测，选用碳酸钠和异丙醇混合溶液作为淋洗液；采用0.4-0.8mL/min的流速进行分离。
所述步骤(1)中，尿液处理前或处理后，存放于冰箱中，且在一周内用完。
所述步骤(1)中，按体积比尿液：乙腈：去离子水＝1:(3.5-4.5):(4.5-5.5)的比例混合，摇匀。
所述的步骤(1)中的置于离心机离心，用12000-14000r，15-25℃的条件离心8-15min，使尿液中的蛋白沉淀。
所述的步骤(1)中所述针式过滤器采用0.22μm孔径的针式过滤器。
所述步骤(1)不使用C18小柱纯化上清液。
所述步骤(2)中，淋洗液采用3.2-4mmol/L碳酸钠和体积比为12-15％异丙醇的混合溶液。
所述步骤(2)中，采用Metrosep A Supp 7色谱柱和MetrosepRP 2/3.5保护柱，柱箱温度为45℃。
采用本发明所述方法能够对尿液中六种阴离子同时进行检测，操作简单，检测所需时间短，约半小时即可完成；各离子分离度＞1.5；各离子线性关系良好，SO4 2-的线性范围在0.2-40mg/L之间，ClO2 -、NO2 -、Br-、ClO3 -、NO3 -的线性范围在0.2-20mg/L之间；6种离子的检出限和方法检测限分别在1.50-12.0μg/L和15.0-120μg/L之间；所有的样品加标回收率均在90％-110％之间，回收率的相对标准偏差小于5％；6种阴离子每日平行测量的浓度 RSD小于5％，各离子在第6天时呈现下降趋势。
附图说明
图1是采用不同淋洗液考察的色谱图，ClO2 -、NO2 -、Br-、ClO3 -、NO3 -、SO4 2-分别对应Chlorite 、Nitrite、Bromide、Chlorate、Nitrate、Sulfate(纵坐标导电值，单位为μs/cm；横坐标为时间，单位为分钟)；
图2是选择不同流速的色谱图(纵坐标导电值，单位为μs/cm；横坐标为时间，单位为分钟)；
图3是不同比例乙醇和乙腈处理尿液后6种阴离子的结果图(n＝3)(纵坐标浓度，单位为mg/L；横坐标为体积比(尿液：有机溶剂))；
图4是探究C18小柱对尿液处理的效果(纵坐标导电值，单位为μs/cm；横坐标为时间，单位为分钟)；
图5是尿样中6种阴离子的日间精密度趋势图(纵坐标浓度，单位为mg/L；横坐标为时间，单位为天)。
图6是本发明实施例1所得的工作曲线。
具体实施方式
本发明的在线渗析-双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法，包括以下步骤：
(1)样品前处理：收集正常人中段尿液，向尿液加入与其体积比为1:(3.5-4.5)的乙腈，置于离心机离心，使尿液中的蛋白沉淀；吸取上清液于干净的EP管，再分别用有机相及无机相的针式过滤器过滤，得到处理好的样品。优选了体积比尿液：乙腈：去离子水＝1:(3.5-4.5):(4.5-5.5)的比例混合；最优选的是按体积比尿液：乙腈：去离子水＝1:4:5 的比例混合，摇匀。优选了置于离心机离心，用12000-14000r，15-25℃的条件离心8-15min，使尿液中的蛋白沉淀；最优选的方法是置于离心机离心，用13000r，20℃的条件离心10min，使尿液中的蛋白沉淀。优选的，针式过滤器采用0.22μm孔径的针式过滤器。本步骤选择不使用C18小柱纯化上清液，在能保证尿液样品最大程度的纯化下，使实验尽可能简化。优选的，尿液处理前或处理后，存放于冰箱中，且在一周内用完。
(2)将步骤1处理好的样品上机进行检测，工作条件为：选用Metrosep A Supp 7色谱柱进行检测，选用碳酸钠和异丙醇混合溶液作为淋洗液；采用0.4-0.8mL/min的流速进行分离。优选的，采用0.6mL/min的流速进行分离。优选的，淋洗液采用3.2-4mmol/L碳酸钠和体积比为12-15％异丙醇的混合溶液；最优选的，淋洗液采用3.6mmol/L碳酸钠和体积比为12％异丙醇的混合溶液。优选的，采用Metrosep A Supp 7色谱柱和MetrosepRP 2/3.5 保护柱，柱箱温度为45℃。
在与步骤(2)相同的工作条件下，进行亚氯酸根离子、亚硝酸根离子、溴离子、氯酸根离子、硝酸根离子和硫酸根离子混合标准曲线的绘制。优选的，所述混合标准曲线的绘制步骤为：分别移取亚氯酸根离子、亚硝酸根离子、溴离子、氯酸根离子、硝酸根离子和硫酸根离子标准溶液于50mL容量瓶内，定容，配制混合标准工作溶液，配置后浓度分别为SO4 2-为0.2，0.5，1，5，10，20，40mg/L，ClO2 -、NO2 -、Br-、ClO3 -、NO3 -为0.2，0.4， 1，2，5，10，20mg/L。在设定的仪器工作条件下从低浓度到高浓度依次进样，以离子浓度 mg/L为横坐标，以对应的色谱峰面积μS/min为纵坐标，绘制标准工作曲线；
最后对步骤(2)检测所得工作曲线根据保留时间定性，根据色谱峰面积用外标法计算被测目标物的含量。优选的，所述的计算被测目标物的含量方法为：以质量分数表示
Wi＝(ci-co)V (1)
式中：
Wi—被测目标物质量分数，单位为微克每毫升mg/L；
ci—从工作曲线查得的试样溶液中被测目标物的浓度，单位为微克每毫升mg/L；
co—从工作曲线查得的空白溶液中被测目标物的浓度，单位为微克每毫升mg/L；
V—试样溶液的稀释倍数；
结果取两次测定结果的算术平均值。当结果大于等于1.0mg/L时，保留三位有效数字；
当结果小于1.0mg/L时，保留两位有效数字。
以下通过具体例子对本发明做进一步的阐述，但本发明并不限于此特定例子。
1.仪器
861连续双抑制型离子色谱仪(瑞士万通公司)，配备电导检测器，IC Net 2.3色谱工作站，853CO2抑制器，MSM II化学抑制器，813自动样品处理系统，Metrosep A Supp 7分离柱(250×4.0mm)，MetrosepRP 2/3.5保护柱；色谱柱恒温箱AT-330，FB-10T溶剂过滤瓶(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；CT15RT型高速冷冻离心机(上海天美科学仪器有限公司)；SHZ-IIIA全不锈钢双表双抽循环水真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司) ；CP225D型电子天平(d＝0.01mg，Sartorius，德国)；KQ-500DB型数控超声波清洗器( 昆山市超声仪器有限公司)；DHG-9145A型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司 )；涡旋混合器(海门市麒麟医用仪器厂)。
2.化学试剂
标准品溶液：ClO2 -、NO2 -、Br-、ClO3 -、NO3 -、SO4 2-(各为1000mg/L，NSI，美国)，乙腈、异丙醇(均为色谱纯，Merck，德国)；乙醇；甲醇；丙酮；硫酸(均为分析纯，广州化学试剂厂)；无水碳酸钠(分析纯，广东省化学试剂工程技术研究开发中心)。
3.溶液的配制
3.1混合标准溶液的配制
用各离子标准溶液配置系列混合标准溶液，配置后浓度分别为SO4 2-为0.2，0.5，1，5， 10，20，40mg/L，ClO2 -、NO2 -、Br-、ClO3 -、NO3 -为0.2，0.4，1，2，5，10，20mg/L。
3.2淋洗液的配制
称取0.3816g无水碳酸钠，倒入1000mL容量瓶中，加入适量去离子水溶解，再加入异丙醇120mL，最后用去离子水定容至1000mL，摇匀。接着用真空泵抽滤脱气，使淋洗液滤过0.45μm孔径过滤膜。
3.3硫酸再生液的配制
取1000mL容量瓶，先加入500mL去离子水，再加入3mL硫酸，用去离子水定容至1000mL，摇匀。
3.4样品的前处理
样本：收集正常人中段尿液200mL，存放在-4℃冰箱中，一周内用完。
样品处理方法：取10mLEP管，加入0.9mL尿液样品、3.6mL乙腈和4.5mL去离子水(尿液：乙腈：水＝1:4:5)配成9mL体系，摇匀，置于离心机，用13000r，20℃的条件离心10min，使尿液中的蛋白沉淀；使用一次性无菌注射器吸取上清液于干净的EP管，再分别用有机相及无机相的0.22μm孔径针式过滤器过滤，处理好的样品上机进行检测。
4.检测实验
4.1色谱柱的选择：
采用标准混合溶液上机进行测试，分别采用Metrosep A Supp 4、Metrosep ASupp 5 以及Metrosep A Supp 7进行预实验，发现Metrosep A Supp 4和Metrosep A Supp5不能实现6个离子的完全分离，而Metrosep A Supp 7可以实现6个离子的完全分离。因此，本发明实施例采用Metrosep A Supp 7色谱柱和MetrosepRP 2/3.5保护柱，柱箱温度为 45℃进行实验。
4.2淋洗液的选择：
采用标准混合溶液上机进行测试。如图1所示，采用Metrosep A Supp 7色谱柱，以0.8mL/min的流速对淋洗液的选择进行色谱优化，结果表明，当使用1.8mmol/L碳酸钠和10mmol/L碳酸氢钠混合淋洗液时，虽然出峰很快，SO4 2-在27分钟内分析完成，但Br-、ClO3 -无法分开；当使用10mmol/L碳酸氢钠溶液洗脱时，在32分钟内只能出现要求的前5种无机阴离子；用3.6mmol/L浓度的碳酸钠溶液洗脱，可以在32分钟内同时分离6种无机阴离子。最后，本发明实施例选择3.6mmol/L浓度的碳酸钠溶液作为淋洗液。
进一步考虑分离度的情况。分离度(R)是色谱法中的一个重要参数，用于评价色谱柱的分离效能。R≥1.5时，认为两色谱峰达到基线分离。在3.6mmol/L碳酸钠淋洗液条件下，Br-和ClO3 -分离度达不到1.5，没有实现完全分离。因此，尝试在淋洗液中加入有机溶剂，以改善分离度。分别选择甲醇(methanol)、乙腈(acetonitrile)、丙酮(acetone )、异丙醇(isopropanol)四种有机溶剂，选择体积比为5％、10％、12％、15％四个浓度点。如表1所示结果发现，只有当异丙醇浓度达到12％及以上时，分离度＞1.5。因此本发明实施例选择3.6mmol/L碳酸钠和12％异丙醇混合溶液作为淋洗液，在48分钟内同时完成6 种阴离子的分离。
表1.Br-和ClO3 -分离度试验结果
Figure BDA0002123453090000061
Figure BDA0002123453090000071
--：未分离；*：分离度＞1.5。
4.3淋洗液流速的选择：
采用标准混合溶液上机进行测试。选择3.6mmol/L碳酸钠和12％异丙醇混合溶液作为淋洗液，分别以0.4mL/min、0.6mL/min、0.8mL/min和1.0mL/min的流速分离6个离子，在1.0mL/min流速下，柱压超过15MPa，系统自动关闭IC泵，无法继续运行。其他3种流速下，6种离子峰面积均清晰显示。随着流速的增加，分离时间缩短。0.4mL/min的流速需 1h完成6个离子的分离，而0.6和0.8mL/min的流速仅需48分钟即可完成(如图2所示 )。另外，流速增大时，柱压也随之增大。因此，综合考虑分离时间、保护色谱柱等因素，本发明实施例采用0.6mL/min的流速进行分离。
4.4尿蛋白沉淀的考察：
4.4.1尿液中含有的蛋白质，会影响样品中无机阴离子的检测，而有机溶剂可以将其沉淀，对38种沉淀尿蛋白的方案进行系统评估，结果显示，90％乙醇沉淀的蛋白回收率最高，而75％乙腈沉淀的蛋白质种类最多。因此，本发明探讨了乙腈和乙醇两种尿液沉淀蛋白剂，每种沉淀剂分别进行8个浓度梯度试验。在每份尿液样品中加入ClO2 -、NO2 -、Br-、 ClO3 -、NO3 -各3mg/L标准溶液，然后对尿液离心，离心后上清液均较澄清，乙醇组(ethanol )从1:5比例开始有沉淀，乙腈组(acetonitrile)则从1:4比例起有蛋白沉淀。对有沉淀的组上机进行检测。从图3、表2所示结果可以看出，尿液与乙腈1:4体积比的实验组中各组分阴离子测得的浓度最高，因此，本发明实施例选择尿液与乙腈体积比为1:4作为沉淀蛋白方法。
表2.各蛋白沉淀剂比例
Figure BDA0002123453090000081
4.4.2考察C18小柱的探讨。尝试使用C18小柱进一步纯化上清液，按照说明书活化、静置、冲洗、洗脱后，上样，对比使用与不使用C18小柱的浓度结果，结果无明显差别( 图4、表3)。在保证尿液样品最大程度的纯化下，使实验尽可能简化，因此，本发明实施例选择不使用C18小柱。
表3.探究C18SPE小柱对尿液进行前处理后浓度的影响(`x±s，n＝3，mg/L)
Figure BDA0002123453090000082
4.4.3考察离心的转速。因为不同的离心转速对于样品的前处理会有不同的效果，因此采用5000r、10000r、13000r进行离心转速的考察，分别离心10min。结果显示，经13000r离心后，沉淀效果好，5000r和10000r的沉淀效果较差。因此，本发明实施例选取13000r 为离心转速。
4.5六种离子的标准曲线、检出限、方法检出限的考察：
对仪器进行调节，再采用配置好的混合标准溶液上机进行检测，仪器自动绘制标准曲线，各离子线性关系良好，SO4 2-的线性范围在0.2-40mg/L之间，ClO2 -、NO2 -、Br-、ClO3 -、NO3 -的线性范围在0.2-20mg/L之间；所有检测离子在线性范围内均显示良好的线性关系(r2＝0.9973-0.9999)(表4)。根据JJG823-93《离子色谱仪》国家计量检定规程，选择 ClO2 -、NO2 -、Br-、ClO3 -、NO3 -、SO4 2-各0.005mg/L进样，测定各峰高，再根据公式计算各离子的最小检出浓度，即检出限；检出限乘以稀释倍数，即得方法检出限。6种离子的检出限和方法检测限分别在1.50-12.0mg/L和15.0-120mg/L之间。
Cmin＝CS(2HN/H)
式中：Cmin：最小检出浓度，mg/L；CS：检测离子浓度，mg/L；
HN：基线噪声，mm；H：检测离子峰高，mm。
表4.六种离子的校正曲线及相关系数
Figure BDA0002123453090000091
4.6考察本方法的加标回收试验：
为了考察检测方法的准确度，计算样品加标回收率。分别加入低标(SO4 2-0.5mg/L，ClO2 -、NO2 -、Br-、ClO3 -、NO3 -0.4mg/L)，中标(SO4 2-2.0mg/L，其余阴离子1.0mg/L)，高标( SO4 2-10.0mg/L，其余阴离子5.0mg/L)，每份加标分别有5个平行样品。由于尿液中SO4 2-浓度过高，超过线性范围，需另稀释10倍重新进样检测。结果显示，所有的样品加标回收率均在90％-110％之间，回收率的相对标准偏差小于5％(表5)。因此，证明本方法具有良好的准确度并有实际应用性。
表5样品加标回收率和精密度(n＝5)
Figure BDA0002123453090000092
Figure BDA0002123453090000101
4.7考察本方法的精密度：
为了证明方法具有良好的重复性和精密度，进行日内精密度和日间精密度考察。日内精密度：在一天24h内平行进样10次，每次间隔2小时40分钟，即一天的0、2.7、5.3 、8.0、10.7、13.4、16.0、18.7、21.4、24.0时。日间精密度：将尿液样品前处理后放入4℃冰箱保存，分别在第1、3、5、6、7、8天取出，每天进行3管平行样检测。其中，SO4 2-需另稀释10倍重新进样检测。如图5结果显示，6种阴离子每日平行样测量的浓度RSD小于5％，各离子在第6天时呈现下降趋势。因此，该本方法在取样后6天内，4℃保存条件下，有较好的稳定性及重现性。
5.实施例1
步骤1：混合标准曲线的绘制
分别移取亚氯酸根离子、亚硝酸根离子、溴离子、氯酸根离子、硝酸根离子和硫酸根离子标准溶液于50mL容量瓶内，定容，配制混合标准工作溶液，配置后浓度分别为SO4 2-为0.2， 0.5，1，5，10，20，40mg/L，ClO2 -、NO2 -、Br-、ClO3 -、NO3 -为0.2，0.4，1，2，5，10，20mg/L。在设定的仪器工作条件下从低浓度到高浓度依次进样，以离子浓度mg/L为横坐标，以对应的色谱峰面积μS/min为纵坐标，绘制标准工作曲线。
步骤2：测定
收集正常人中段尿200mL，取0.9mL尿液样品，加入3.6mL乙腈和4.5mL去离子水(尿液 :乙腈:水＝1:4:5)配成9mL体系，混匀，采用13000r，20℃的条件离心10min，使尿液中的蛋白沉淀，使用一次性无菌注射器吸取上清液于干净的EP管，配置三份平行样，再分别用有机相及无机相的0.22μm孔径针式过滤器过滤，移取试样溶液在设定仪器工作条件下注入离子色谱仪测定，根据保留时间定性，根据色谱峰面积用外标法进行定量。其中一份样品所得工作曲线如图6所示，其中NO3 -、SO4 2-分别对应Nitrate、Sulfate峰，而ClO2 -、NO2 -、Br-、ClO3 -未检出。
步骤1、2中的仪器工作条件如下：
B.1色谱柱：Metrosep A Supp 7分离柱(250×4.0mm)，MetrosepRP 2/3.5保护柱；
B.2柱温箱温度：45℃；
B.3抑制器：阴离子抑制器或相当者；
B.4淋洗液：3.6mmol/L碳酸钠+12％异丙醇溶液，等度淋洗，或相当条件；
B.5淋洗液流速：0.6mL/min；
B.6进样量：20μL。
步骤3：计算被测目标物的含量，以质量分数表示
Wi＝(ci-co)V (1)
式中：
Wi—被测目标物质量分数，单位为微克每毫升mg/L；
ci—从工作曲线查得的试样溶液中被测目标物的浓度，单位为微克每毫升mg/L；
co—从工作曲线查得的空白溶液中被测目标物的浓度，单位为微克每毫升mg/L；
V—试样溶液的稀释倍数；
结果取两次测定结果的算术平均值。当结果大于等于1.0mg/L时，保留三位有效数字；
当结果小于1.0mg/L时，保留两位有效数字。
所得结果如下：
硝酸根离子：32.5±0.78
硫酸根离子：780±18.3
单位：mg/L。

Claims (8)

1.一种在线渗析-双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)样品前处理：收集正常人中段尿液，向尿液加入与其体积比为1:(3.5-4.5)的乙腈，置于离心机离心，使尿液中的蛋白沉淀；吸取上清液，再分别用有机相及无机相的针式过滤器过滤，得到处理好的样品；
(2)将步骤(1)处理好的样品上机进行检测，采用瑞士万通公司的861连续双抑制型离子色谱仪，工作条件为：选用Metrosep A Supp 7色谱柱进行检测，淋洗液采用3.2-4mmol/L碳酸钠和体积比为12-15％异丙醇的混合溶液；采用0.4-0.8mL/min的流速进行分离；
在与步骤(2)相同的工作条件下，进行亚氯酸根离子、亚硝酸根离子、溴离子、氯酸根离子、硝酸根离子和硫酸根离子混合标准曲线的绘制；最后对步骤(2)检测所得工作曲线根据保留时间定性，根据色谱峰面积用外标法计算被测目标物的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，尿液处理前或处理后，存放于在冰箱，且在一周内用完。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，按体积比尿液：乙腈：去离子水＝1:(3.5-4.5):(4.5-5.5)的比例混合，摇匀。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的步骤(1)中的置于离心机离心，用12000-14000r，15-25℃的条件离心8-15min，使尿液中的蛋白沉淀。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的步骤(1)中所述针式过滤器采用0.22μm孔径的针式过滤器。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)不使用C18小柱纯化上清液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用Metrosep A Supp 7色谱柱和MetrosepRP 2/3.5保护柱，柱箱温度为45℃。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述混合标准曲线的绘制步骤为：
分别移取亚氯酸根离子、亚硝酸根离子、溴离子、氯酸根离子、硝酸根离子和硫酸根离子标准溶液于50mL容量瓶内，定容，配制成混合标准工作溶液，配置后浓度分别为SO4 2-为0.2，0.5，1，5，10，20，40mg/L，ClO2 -、NO2 -、Br-、ClO3 -、NO3 -为0.2，0.4，1，2，5，10，20mg/L；在设定的仪器工作条件下从低浓度到高浓度依次进样，以离子浓度mg/L为横坐标，以对应的色谱峰面积μS/min为纵坐标，绘制标准工作曲线；
所述的计算被测目标物的含量方法为：以质量分数表示
Wi＝(ci-co)V (1)
式中：
Wi—被测目标物质量分数，单位为微克每毫升mg/L；
ci—从工作曲线查得的试样溶液中被测目标物的浓度，单位为微克每毫升mg/L；
co—从工作曲线查得的空白溶液中被测目标物的浓度，单位为微克每毫升mg/L；
V—试样溶液的稀释倍数；
结果取两次测定结果的算术平均值，当结果大于等于1.0mg/L时，保留三位有效数字；
当结果小于1.0mg/L时，保留两位有效数字。
CN201910614414.6A 2019-07-09 2019-07-09 在线渗析-双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法 Active CN110412185B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910614414.6A CN110412185B (zh) 2019-07-09 2019-07-09 在线渗析-双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910614414.6A CN110412185B (zh) 2019-07-09 2019-07-09 在线渗析-双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110412185A CN110412185A (zh) 2019-11-05
CN110412185B true CN110412185B (zh) 2020-10-30

Family

ID=68360706

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910614414.6A Active CN110412185B (zh) 2019-07-09 2019-07-09 在线渗析-双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110412185B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115494179A (zh) * 2022-09-30 2022-12-20 中国科学院大连化学物理研究所 一种甘油中多种阴离子同时检测的分析方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101011466B (zh) * 2007-02-06 2010-11-17 南方医科大学 钩吻总生物碱的提取方法
EP2240409B1 (en) * 2007-12-28 2019-11-20 Cytec Technology Corp. Method for the removal of impurities and water from the bayer process
CN102046693B (zh) * 2008-05-21 2013-08-21 东丽纤维研究所（中国）有限公司 脂肪族聚酯树脂的制备方法及脂肪族聚酯树脂组合物
CN104880525B (zh) * 2015-05-05 2016-08-24 公安部物证鉴定中心 用于刑侦目的的液质联用检测尿中唑吡坦中毒标记物苯基-4-羧酸唑吡坦的方法
CN107064364B (zh) * 2017-04-19 2019-07-05 国家烟草质量监督检验中心 烟草中烟碱旋光异构体的测定方法
CN107475369B (zh) * 2017-07-07 2021-05-04 南方医科大学 Hoxa9基因在制备治疗皮肤鳞状细胞癌药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN110412185A (zh) 2019-11-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108717083A (zh) 人体血清中地西泮与氯氮平检测的在线固相萃取分析方法及系统
He et al. Determination of inorganic anions in the whole blood by ion chromatography
CN111007034A (zh) 一种用于遗传代谢病中氨基酸含量检测方法
CN110412185B (zh) 在线渗析-双抑制离子色谱法测定尿液中六种离子的方法
CN114895043A (zh) 原发性醛固酮增多症筛查试剂盒以及确诊和分型诊断系统
CN109633028B (zh) 一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法
CN109908879B (zh) 一种检测四环素类抗生素的方法
CN108593811B (zh) 一种测定生物体液中百草枯和敌草快含量的方法
CN108802236B (zh) 一种测定乳制品中三聚氰胺含量的方法
CN115372497B (zh) 一种小活络丸中6种生物碱成分的含量测定方法
CN111579684B (zh) 一种胶囊剂的囊材中辣椒总碱的含量测定方法
WO2003076925A1 (fr) Procede de purification de nucleocide guanine blesse par oxydation, procede de mesure d'un tel nucleocide et dispositif d'analyse destine a ce mode de realisation
Rui et al. Simultaneous determination of kynurenine and tryptophan in serum by high performance liquid chromatography
CN1275038C (zh) 药品、保健品和食品中枸橼酸西地那非掺杂的测定方法
CN116858978B (zh) 一种同时检测门冬胰岛素和德谷胰岛素的方法及其血浆样品处理方法
CN110618209B (zh) 离子液体萃取-高效液相色谱法测定地表水中四环素类抗生素的方法
US5552323A (en) Method of blending an anticoagulant
CN113804790B (zh) 一种同时检测添加剂、l-肉碱和d-肉碱的方法
CN116026971B (zh) 一种用于人血清和血浆中全谱脂溶性维生素及其代谢物检测的试剂盒及检测方法
CN114441681B (zh) 一种测定特殊医学配方食品中20种游离氨基酸和l-羟脯氨酸的方法
CN114814005B (zh) 一种检测血液中齐拉西酮的液相色谱分析方法
CN116804659A (zh) 一种人体血清中硫酸吲哚酚含量的检测方法
Gong et al. Simultaneous analysis of six inorganic anions in urine by double‐suppress ion‐exchange chromatography
CN115144505A (zh) Uplc-ms/ms法同时测定人尿液中缬沙坦、沙库巴曲及其代谢物浓度的方法
CN116879470A (zh) 一种基于超高效液相色谱法的人体血浆中替考拉宁浓度的快速测定方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant