CN111337611A - 水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法 - Google Patents

水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111337611A
CN111337611A CN202010300095.4A CN202010300095A CN111337611A CN 111337611 A CN111337611 A CN 111337611A CN 202010300095 A CN202010300095 A CN 202010300095A CN 111337611 A CN111337611 A CN 111337611A
Authority
CN
China
Prior art keywords
crystal violet
green
malachite green
sample
ion
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN202010300095.4A
Other languages
English (en)
Inventor
穆小婷
韩文节
欧志鹏
华四妹
陈智标
谢卫兵
谢泽纯
廖侦成
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Qingyuan Agricultural Product Quality Inspection And Testing Center
Original Assignee
Qingyuan Agricultural Product Quality Inspection And Testing Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Qingyuan Agricultural Product Quality Inspection And Testing Center filed Critical Qingyuan Agricultural Product Quality Inspection And Testing Center
Priority to CN202010300095.4A priority Critical patent/CN111337611A/zh
Publication of CN111337611A publication Critical patent/CN111337611A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G01N2030/146—Preparation by elimination of some components using membranes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明专利属于水产品质量安全检测技术领域，涉及一种高效检测水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫残留量的方法。所述检测方法为高效液相色谱‑质谱联用的检测方法。该检测方法以目标化合物相应的同位素为内标，待检产品经提取液乙腈提取，中性氧化铝固相萃取柱净化，0.22μm微孔滤膜过滤后用高效液相色谱‑质谱联用仪检测。本发明检测技术通过对不同水产品进行试验，回收率均可达到85％‑120％，四种检测指标检出限均可达到0.5μg/kg，标准曲线r值均在0.99以上。与现有检测方法相比，该方法使用试剂少，前处理成本低，步骤简单、易上手，检测参数齐全，非常适用于水产品的大批量检测。

Description

水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检 测方法
技术领域
本发明专利属于水产品质量安全检测技术领域，涉及一种高效检测水产品中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫残留量的方法。
背景技术
孔雀石绿和结晶紫属于人工合成的三苯甲烷类碱性工业染料，因其可以消毒杀菌且价格低廉而广泛地用于水产品的养殖过程，主要用来预防和治疗各类水产动物的水霉病、锶霉病、寄生虫病、小瓜虫病、指环虫病、斜管虫病、三代虫病及其他一些细菌性疾病等，也可用于水产品的输入和水产品暂养等过程，以延长水产品特别是鱼类产品的存活时间。孔雀石绿和结晶紫在被鱼类吸收后，会代谢还原为脂溶性的隐色孔雀石绿和隐色结晶紫，在鱼类的脂肪组织中稳定残留，其化学官能团“三苯甲烷＂被证明具有高毒、高残留、致癌、致畸、致突变等毒副作用，危害食用者身体健康，同时含有孔雀石绿和结晶紫的废水排放会污染水环境。鉴于此，很多国家都禁止其作为渔场杀菌剂，并规定在食用水产品中禁止检出孔雀石绿和结晶紫，我国也于2002年5月将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》中，要求在动物性食品中不得检出。
目前针对孔雀石绿和结晶紫残留量检测方法主要有高效液相色谱法、液质联用法及速测技术，国内常用标准主要有GB/T 19857-2005、GB/T 20361-2006、SC/T 3021-2004。GB/T 20361-2006高效液相色谱检测法主要原理是用硼氢化钾将孔雀石绿和结晶紫还原为其相应的代谢产物隐色孔雀石绿和隐色结晶紫，乙腈乙酸铵缓冲混合液提取，二氯甲烷液液萃取，固相萃取柱净化后上机检测，该方法前处理复杂繁琐，容易造成损失，所用试剂种类繁多，在应对大批量样品检测时效率低下。GB/T 19857-2005液相色谱串联质谱法及高效液相色谱法主要原理是利用乙腈乙酸铵缓冲混合液提取后，乙腈再次提取，溶液分配到二氯甲烷层经中性氧化铝柱和阳离子固相柱净化后上机检测，本法检测灵敏度高，但同样存在前处理复杂繁琐的问题，且所用试剂及前处理仪器众多，前处理成本高，处理过程对专业检测人员的专业技术要求较高，检测结果质量很难控制，SC/T 3021-2004只能针对性检测水产品中的孔雀石绿和隐色孔雀石绿，对结晶紫和隐色结晶紫未做试验。另外，针对孔雀石绿和结晶紫的检测方法，还有一类是以酶标法和富集法为主的快速检测技术，如浊点萃取技术和协同萃取技术等，此类方法不需要大型仪器辅助检测，且速度快，一般半小时之内即可出结果，但缺点是定量不准确，检出限较高，只能进行初筛，很难达到国家标准要求指标。
发明内容
本发明的目的在于提供一种使用试剂少、步骤简单、前处理成本低，重现性好、灵敏度高、可大批量且同时检测水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫四种检测参数残留量的方法。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
一种水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，所述检测方法为高效液相色谱-质谱联用的检测方法。
所述水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，包括如下步骤：
(1)样品前处理；
(2)基质加标标准工作曲线的制备；
(3)空白试验：
(4)采用高效液相色谱-质谱联用仪测定，计算孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫含量。
所述样品前处理包括如下步骤：
(1)称取5.00g待检水产品于50mL离心管中，加1.0μg/mL的孔雀石绿-D5和隐色孔雀石绿-D6混合内标工作液50uL作为内标，旋涡混合30s，加10mL乙腈提取，旋涡振荡1min，超声(频率：40KHz)提取10min，4000rpm离心5min，将上清液移入15mL离心管备用；将中性氧化铝小柱安装在固相萃取柱上，用5mL乙腈活化，取离心后的上清液5mL到已活化好的中性氧化铝柱，收集流出液，过0.22μm滤膜到10mL的干净离心管中，在离心管中取0.5mL 滤液到上机瓶，再加入0.5mL实验室超纯水到上机瓶，摇匀，供高效液相色谱-质谱联用仪测定。
所述基质加标标准工作曲线的制备包括如下步骤：
(2)将10.0μg/mL的混合标准工作液(含孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫)用乙腈逐级稀释成浓度为10.0μg/mL、4.0μg/mL、2.0μg/mL、1.0μg/mL、0.5μg/mL、0.2μg/mL、 0.1μg/mL、0.05μg/mL的混合标准中间液；称取不含孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的空白水产样品5.00g，根据所需标准曲线浓度梯度(0.5μg/kg～100.0μg/kg)加入对应混合标准中间液50uL，按照样品前处理步骤的方法与待检水产品同时进行提取和净化，供高效液相色谱-质谱联用仪测定，根据测定结果绘制标准曲线。
上述的水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法中，所述标准曲线浓度梯度为0.5μg/kg，1.0μg/kg，2.0μg/kg，5.0μg/kg,，10.0μg/kg，20.0μg/kg，40.0μg/kg，100.0μg/kg，每个梯度对应溶液混合内标浓度为10.0μg/kg。
所空白试验包括如下步骤：
(3)除不加试样(即不加水产品样品5.00g)外，其余均按照样品前处理步骤进行，制得空白试验溶液。
所述高效液相色谱-质谱联用仪的分析检测条件为：
①色谱条件：
色谱柱：ACQUITY
Figure BDA0002453664140000031
CSHTMC18 1.7μm 2.1x100mm Column；流动相：A:0.1％的甲酸水溶液(内含乙酸铵浓度为5mmol/L)、B:甲醇；流速：0.2mL/min；进样量为3uL；柱温：40℃；溶剂梯度(时间min/A/B)：0.01/90/10；1.00/10/90；5.00/10/90；5.10/90/10； 6.00/90/10。
②质谱条件：
离子源：电喷雾离子源(正离子扫描模式)；扫描方式：多反应监测模式；雾化气：氮气；碰撞气：氩气；毛细管电压：0.35kv；源温度：150℃；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流：1000L/Hr；锥孔气流：30L/Hr；驻留时间：0.028s。
③四种目标物及两种内标物的监测离子对参数：
孔雀石绿：母离子329.1，定量离子313.1，碰撞能量36，锥孔电压65，定性离子208.0，碰撞能量36，锥孔电压65；隐色孔雀石绿母离子331.2，定量离子239.1，碰撞能量30，锥孔电压36，定性离子316.2，碰撞能量22，锥孔电压36；结晶紫母离子372.2，定量离子356.2，碰撞能量40，锥孔电压56，定性离子235.1，碰撞能量58，锥孔电压56；隐色结晶紫母离子374.2，定量离子358.2，碰撞能量30，锥孔电压55，定性离子238.3，碰撞能量32，锥孔电压55；孔雀石绿-D5母离子334.1，定量离子318.1，碰撞能量40，锥孔电压65；隐色孔雀石绿-D6母离子337.2，定量离子322.1，碰撞能量22，锥孔电压50。
所述孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫含量计算方法为：
根据样品前处理步骤测得的样品制备的峰面积值，从基质加标标准工作曲线的制备步骤绘制的系列标准溶液的标准曲线上找到峰面积值对应的孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫的含量，按以下公式计算待测水产品中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫的含量X：
Xi＝(Ci-C0)*V1*V/(m*V2)
式中，Xi为试样中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位μg/kg； Ci表示样品前处理步骤(1)测得的样品制备液的峰面积所对应的孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位ng/mL；C0表示试样空白液中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位ng/mL；V1表示提取液总体积，单位mL；V2表示分取体积，单位mL；V表示定容体积，单位mL；m表示试样质量，单位g。
一种水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，其所述检测方法为高效液相色谱-质谱联用的检测方法，所述检测方法如下：
高效液相色谱-质谱联用的色谱条件及检测参数如下
①色谱条件：
色谱柱：ACQUITY
Figure BDA0002453664140000041
CSHTMC18 1.7μm 2.1x100mm Column；流动相：A:0.1％的甲酸水溶液(内含乙酸铵浓度为5mmol/L)、B:甲醇；流速：0.2mL/min；进样量为3uL；柱温：40℃；溶剂梯度(时间min/A/B)：0.01/90/10；1.00/10/90；5.00/10/90；5.10/90/10； 6.00/90/10。
②质谱条件：
离子源：电喷雾离子源(正离子扫描模式)；扫描方式：多反应监测模式；雾化气：氮气；碰撞气：氩气；毛细管电压：0.35kv；源温度：150℃；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流：1000L/Hr；锥孔气流：30L/Hr；驻留时间：0.028s。
③四种目标物及两种内标物的监测离子对参数：
孔雀石绿：母离子329.1，定量离子313.1，碰撞能量36，锥孔电压65，定性离子208.0，碰撞能量36，锥孔电压65；隐色孔雀石绿母离子331.2，定量离子239.1，碰撞能量30，锥孔电压36，定性离子316.2，碰撞能量22，锥孔电压36；结晶紫母离子372.2，定量离子356.2，碰撞能量40，锥孔电压56，定性离子235.1，碰撞能量58，锥孔电压56；隐色结晶紫母离子374.2，定量离子358.2，碰撞能量30，锥孔电压55，定性离子238.3，碰撞能量32，锥孔电压55；孔雀石绿-D5母离子334.1，定量离子318.1，碰撞能量40，锥孔电压65；隐色孔雀石绿-D6母离子337.2，定量离子322.1，碰撞能量22，锥孔电压50。
(1)样品溶液的制备即样品前处理：称取5.00g待检水产品于50mL离心管中，加1.0μg/mL的孔雀石绿-D5和隐色孔雀石绿-D6混合内标工作液50uL作为内标，旋涡混合30s，加10mL乙腈提取，旋涡振荡1min，超声(频率：40KHz)提取10min，4000rpm离心5min，将上清液移入15mL离心管备用；将中性氧化铝小柱安装在固相萃取柱上，用5mL乙腈活化，取离心后的上清液5mL到已活化好的中性氧化铝柱，收集流出液，过0.22μm滤膜到10mL 的干净离心管中，在离心管中取0.5mL滤液到上机瓶，再加入0.5mL实验室超纯水到上机瓶，摇匀，供高效液相色谱-质谱联用仪测定。
(2)基质加标标准工作曲线的制备：将10.0μg/mL混合标准工作液(含孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫)标准工作液用乙腈逐级稀释成浓度为为10.0μg/mL、4.0μg/mL、 2.0μg/mL、1.0μg/mL、0.5μg/mL、0.2μg/mL、0.1μg/mL、0.05μg/mL的混合标准中间液；称取不含孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的空白水产样品5.00g，根据所需标准曲线浓度梯度(0.5μg/kg～100.0μg/kg)加入对应混合标准中间液50uL，按照样品前处理步骤的方法与待检水产品同时进行提取和净化，供高效液相色谱-质谱联用仪测定，根据测定结果绘制标准曲线。
(3)空白试验：除不加试样(即不加水产品样品5.00g)外，其余均按照样品前处理步骤进行，制得空白试验溶液。
(4)根据样品前处理步骤测得的样品制备的峰面积值，从基质加标标准工作曲线的制备步骤绘制的系列标准溶液的标准曲线上找到峰面积值对应的孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫的含量，按以下公式计算待测水产品中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫的含量X：
Xi＝(Ci-C0)*V1*V/(m*V2)
式中，Xi为试样中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位μg/kg； Ci表示样品前处理步骤(1)测得的样品制备液的峰面积所对应的孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位ng/mL；C0表示试样空白液中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位ng/mL；V1表示提取液总体积，单位mL；V2表示分取体积，单位mL；V表示定容体积，单位mL；m表示试样质量，单位g。
待检水产品包含鱼类、虾类等所有常见水产品。孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫四种检测指标可一同进行分析检测，检测指标全面。
本发明的水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法中:
混合标准工作液：量取100μg/mL的孔雀石绿草酸盐、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫各1.00mL，用乙腈定容至10.0mL，各组分浓度为10.0μg/mL，-18℃避光保存
混合内标工作液：量取50μg/mL的孔雀石绿-D5、隐色孔雀石绿-D6各0.20mL，用乙腈定容至10.0mL，各组分浓度为1.0μg/mL，-18℃避光保存
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)目前针对孔雀石绿和结晶紫残留量检测方法主要有高效液相色谱法、液质联用法及酶标法和富集速测法等。高效液相色谱法虽定量准确，但因通过保留时间定性，存在定性不准的弊端，且现有的高效液相色谱法、液质联用检测技术均前处理复杂繁琐，容易造成损失，所用试剂种类繁多，在应对大批量样品检测时效率低下，或只针对四种检测参数的一种或两种进行检测，即不能同时检测孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫四种参数；而以酶标法和富集法为代表的快速检测技术，如浊点萃取技术和协同萃取技术等，此类方法不需要大型仪器辅助检测，定性较为准确，速度快，但缺点是定量不准确，只能进行初筛，很难达到国家标准要求指标。
本发明采用高效液相色谱-质谱联用仪对孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫进行检测，既保留了液相定量准确和质谱定性准确的优势，也兼顾到了检测过程快速、可大批量检测的市场需求。
(2)本发明方法前处理只用一种提取剂，省去了配制溶液的步骤，提取步骤相对现有方法有了大幅度缩减，不仅可减少溶液因多次转移造成的损失，并且极大地提高了实验效率，尤其针对实验室大批量样品检测，20个样品前处理时间不超过2个小时，快于现有相关标准至少4倍及以上。
(3)本发明方法前处理只需过柱后再过0.22μm微孔滤膜即可上机检测，方法检出限和回收率等相关参数均可达到国家相关标准要求，因此，完全不需再进行下一步的浓缩净化，可以说既简化了步骤也省去了试剂和氮吹等复杂仪器的使用，一举两得。
(4)本发明方法中的前处理步骤相对现有检测方法，试剂的使用量及使用种类均非常少，也无复杂仪器使用，大大减少了对环境的污染，符合现代绿色可持续发展的趋势。
(5)本发明方法的检测对象包含鱼类、虾类等所有常见水产品，且孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫四种检测指标可一同进行分析检测，适用范围非常广泛，实用性极强。
(6)本发明方法采用曲线和样品一同进行前处理的内标法进行校正，保证曲线和样品始终在同一条件下进行处理，有效降低了前处理操作过程中的操作误差和其他条件导致的不统一性及基质效应对结果的影响，重现性好，灵敏度高，定量准确可靠。
(7)本发明采用液相色谱串联质谱法上机检测，前处理只用一种提取剂，提取步骤相对现有方法有了大幅度缩减，极大地提高了实验效率，尤其针对实验室大批量样品检测，20个样品前处理时间不超过2个小时，快于国家标准4倍及以上，方法检测限优于0.5μg/kg，达到国家标准GB/T 19857-2005最低0.5μg/kg检出限要求，且相对标准方法试剂使用种类和数量均减少，大大减少了对环境的污染。
(8)本发明的水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，以目标化合物相应的同位素为内标，待检产品经提取液乙腈提取，中性氧化铝固相萃取柱净化， 0.22μm微孔滤膜过滤后用高效液相色谱-质谱联用仪检测。本发明检测技术通过对不同水产品进行试验，回收率均可达到85％-120％，四种检测指标检出限均可达到0.5μg/kg，标准曲线r值均在0.99以上，满足国家标准《GB/T 27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测》中附录F(检测方法确认的技术要求)要求指标。与现有检测方法相比，该方法使用试剂少，前处理成本低，步骤简单、易上手，检测参数齐全，非常适用于水产品的大批量检测，且本方法采用曲线和样品一同进行前处理的内标法进行校正，保证曲线和样品始终在同一条件下进行处理，有效降低了前处理操作过程中的操作误差和其他条件导致的不统一性及基质效应对结果的影响，重现性好，灵敏度高，定量准确可靠，且可大大减少试剂及仪器对环境的污染。
附图说明
图1为鲩鱼孔雀石绿(MG)标准曲线
图2为鲩鱼隐色孔雀石绿(LMG)标准曲线
图3为鲩鱼结晶紫(CV)标准曲线
图4为鲩鱼隐色结晶紫(LCV)标准曲线
图5为鲩鱼中孔雀石绿添加回收5.0μg/kg时的定性定量离子色谱图
图6为鲩鱼中隐色孔雀石绿添加回收5.0μg/kg时的定性定量离子色谱图
图7为鲩鱼中结晶紫添加回收5.0μg/kg时的定性定量离子色谱图
图8为鲩鱼中隐色结晶紫添加回收5.0μg/kg时的定性定量离子色谱图
图9为鲩鱼中孔雀石绿-D5添加回收10.0μg/kg时的离子色谱图
图10鲩鱼中隐色孔雀石绿-D6添加回收10.0μg/kg时的离子色谱图
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式来对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不以此限制本发明。
实施例1
样品前处理步骤
(1)称取5.00g待检水产品于50mL离心管中，加1.0μg/mL的孔雀石绿-D5和隐色孔雀石绿-D6混合标准溶液50uL作为内标，旋涡混合30s，加10mL乙腈提取，旋涡振荡1min，超声(频率：40KHz)提取10min，4000rpm离心5min，将上清液移入15mL离心管备用；将中性氧化铝小柱安装在固相萃取柱上，用5mL乙腈活化，取离心后的上清液5mL到已活化好的中性氧化铝柱，收集流出液，过0.22μm滤膜到10mL的干净离心管中，在离心管中取0.5mL 滤液到上机瓶，再加入0.5mL实验室超纯水到上机瓶，摇匀，供高效液相色谱-质谱联用仪测定。
(2)基质加标标准工作曲线的制备：将混合标准工作液(含孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫)用提取液逐级稀释成一定浓度的的混合标准中间液。称取不含孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的空白水产样品5.00g，根据所需标准曲线浓度梯度 (0.5μg/kg～100.0μg/kg)加入对应混合标准中间液50uL，按照步骤(1)的方法与待检水产品同时进行提取和净化，供高效液相色谱-质谱联用仪测定，根据测定结果绘制标准曲线。
(3)空白试验：除不加试样(即不加水产品样品5.00g)外，其余均按照步骤(1)进行。
实验前处理用主要试剂、标准样品及仪器
乙腈：液相色谱纯，德国默克公司
甲酸：优级纯，美国ACS恩科化学
乙酸铵：分析纯，西陇科学股份有限公司
甲醇：液相色谱纯，德国默克公司
孔雀石绿草酸盐溶液：100μg/mL，农业部环境保护科研监测所
隐色孔雀石绿溶液：100μg/mL，农业部环境保护科研监测所
结晶紫溶液：100μg/mL，农业部环境保护科研监测所
隐色结晶紫溶液：100μg/mL，农业部环境保护科研监测所
孔雀石绿-D5：50μg/mL，农业部环境保护科研监测所
隐色孔雀石绿-D6：50μg/mL，农业部环境保护科研监测所
混合标准工作液：量取100μg/mL的孔雀石绿草酸盐、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫各1.00mL，用乙腈定容至10.0mL，各组分浓度为10.0μg/mL，-18℃避光保存
混合内标工作液：量取50μg/mL的孔雀石绿-D5、隐色孔雀石绿-D6各0.20mL，用乙腈定容至10.0mL，各组分浓度为1.0μg/mL，-18℃避光保存
微孔滤膜：0.22μm，安捷伦公司
中性氧化铝小柱：1g/6mL，Waters公司
电子天平：120g/0.1mg，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司
漩涡混合器：上海精科实业有限公司
高速离心机：北京医用离心机厂
超纯水机：德国默克(Merck-Millipore)公司
超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司(KQ-600E)
固相萃取装置：上海熙扬仪器有限公司
实验室所用仪器条件
色谱条件：
色谱柱：ACQUITY
Figure BDA0002453664140000092
CSHTMC18 1.7μm 2.1x100mm Column；流动相： A:0.1％的甲酸水溶液(内含乙酸铵浓度为5mmol/L)、B:甲醇；流速：0.2mL/min；进样量为3uL；柱温：40℃；溶剂梯度(时间min/A/B)：0.01/90/10；1.00/10/90；5.00/10/90；5.10/90/10； 6.00/90/10。
质谱条件：
离子源：电喷雾离子源(正离子扫描模式)；扫描方式：多反应监测模式；雾化气：氮气；碰撞气：氩气；毛细管电压：0.35kv；源温度：150℃；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流：1000L/Hr；锥孔气流：30L/Hr，驻留时间：0.028s。
四种目标物及两种内标物的监测离子对参数见下表：
Figure BDA0002453664140000091
注：表中*表示此为定量离子
样品检测与结果计算
(1)定性测定
在相同测定条件下，待检样品制备液中目标化合物的保留时间与标准样品制备液中目标化合物保留时间的相对标准偏差应在±5％以内，所检测到的定性离子的相对丰度，其偏差应符合下表要求：
次强碎片离子相对丰度/(％) 允许偏差/(％)
>50 ±10
20～50,不含20 ±15
10～20，不含10 ±20
≤10 ±50
(2)定量测定
取待检样品制备液和标准样品制备液作多点校准，按内标法以峰面积定量；待检样品制备液和标准样品制备液中目标化合物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。孔雀石绿和结晶紫以孔雀石绿-D5为内标进行定量，隐色孔雀石绿和隐色结晶紫以隐色孔雀石绿-D6为内标进行定量。
(3)结果计算和公式表述
采用MassLynx软件对数据进行处理，以浓度为横坐标，以外表和相应内标峰面积的比值为纵坐标，绘制标准曲线，然后对杨品峰进行分析处理，即可得到待检样品制备液中目标化合物的浓度，按公式(a)计算待检水产品中目标化合物的残留量。
Xi＝(Ci-C0)*V1*V/(m*V2) (a)
式中，Xi为试样中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位μg/kg； Ci表示步骤(1)测得的样品制备液的峰面积所对应的孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位ng/mL；C0表示试样空白液中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位ng/mL；V1表示提取液总体积，单位mL；V2表示分取体积，单位mL；V表示定容体积，单位mL；m表示试样质量，单位g。
以下为本发明试验验证结果分析及数据呈现
本实验以国家标准GB/T 19857-2005中方法测定低限为基础，国家标准GB/T27404-2008 附录F中检测方法确认的技术要求为试验依据，选取有代表性的鲩鱼、草鱼、罗氏虾和对虾为测定样品，在方法测定低限(0.5μg/kg)、2倍方法测定低限(1.0μg/kg)、10倍方法测定低限(5.0μg/kg)进行三水平试验，从而验证回收率、标准曲线、精密度是否可达到标准要求。通过试验，该方法各检测技术要求均可达到国家标准要求。
加标回收率及精密度试验。试验选择有代表性的4种水产品鲩鱼、草鱼、罗氏虾、对虾方进行回收率及精密度试验，每个样品做6个平行，检测结果显示孔雀石绿(MG)、隐色孔雀石绿(LMG)、结晶紫(CV)、隐色结晶紫(LCV)回收率均在85％-120％之间，满足国家标准《GB/T 27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测》中附录F(检测方法确认的技术要求)要求指标(60％-120％)，具体结果见表1、表2、表3、表4：
表1鲩鱼回收率及精密度
Figure BDA0002453664140000101
Figure BDA0002453664140000111
表2草鱼回收率及精密度
Figure BDA0002453664140000112
表3罗氏虾回收率及精密度
Figure BDA0002453664140000113
表4对虾回收率及精密度
Figure BDA0002453664140000114
Figure BDA0002453664140000121
校准曲线试验验证。试验以鲩鱼为测定样品，选取0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，40.0， 100.0μg/kg八个点做标准曲线，检测结果显示，孔雀石绿(MG)、隐色孔雀石绿(LMG)、结晶紫(CV)、隐色结晶紫(LCV)标准曲线分别为y＝1.037x-0.827、y＝1.043x-0.978、y ＝1.002x-0.051、y＝1.041x-0.931，相关系数r分别为0.9990、0.9990、0.9995、0.9990，相关系数r均在0.99及以上，满足国家标准《GB/T 27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测》中附录F(检测方法确认的技术要求)要求指标(r不低于0.98)，具体结果见表5、图1、表6、图2、表7、图3、表8、图4。
表5鲩鱼孔雀石绿(MG)添加浓度及实际测定值
Figure BDA0002453664140000122
表6鲩鱼隐色孔雀石绿(MG)添加浓度及实际测定值
Figure BDA0002453664140000123
表7鲩鱼结晶紫(CV)添加浓度及实际测定值
Figure BDA0002453664140000124
表8鲩鱼隐色结晶紫(LCV)添加浓度及实际测定值
Figure BDA0002453664140000125
为了验证方法的广谱性，试验也做了以罗氏虾为代表样品的标准曲线，结果显示，孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的标准曲线分别为y＝1.039x-0.871、y＝1.002x- 0.051、y＝1.015x-0.343、y＝0.981x+0.410，相关系数r分别为0.9985、0.9995、0.9995、 0.9995。均满足国家标准《GB/T 27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测》中附录F(检测方法确认的技术要求)要求指标(r不低于0.98)。
本发明试验检出限
根据公式(按3倍信噪比计)及试验结果可知，本方法检出限均可达到相关检测标准中最低0.5μg/kg要求，具体见表9。(4种检测指标在GB/T 19857-2005液相色谱串联质谱法中检出限均为0.5μg/kg，在GB/T 19857-2005高效液相色谱法中检出限均为2.0μg/kg，在GB/T 20361-2006高效液相色谱荧光检测法中均为0.50μg/kg)
表9孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫各参数
Figure BDA0002453664140000131
(注：检出限＝标样浓度*3*提取体积*定容体积*1000/(信噪比*称样量*分取体积)。

Claims (9)

1.一种水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，其特征在于，所述检测方法为高效液相色谱-质谱联用的检测方法。
2.如权利要求1所述的一种水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)样品前处理；
(2)基质加标标准工作曲线的制备；
(3)空白试验：
(4)采用高效液相色谱-质谱联用仪测定，计算孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫含量。
3.如权利要求2所述的一种水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，其特征在于，所述样品前处理包括如下步骤：
(1)称取5.00g待检水产品于50mL离心管中，加1.0μg/mL的孔雀石绿-D5和隐色孔雀石绿-D6混合内标工作液50uL作为内标，旋涡混合30s，加10mL乙腈提取，旋涡振荡1min，超声(频率：40KHz)提取10min，4000rpm离心5min，将上清液移入15mL离心管备用；将中性氧化铝小柱安装在固相萃取柱上，用5mL乙腈活化，取离心后的上清液5mL到已活化好的中性氧化铝柱，收集流出液，过0.22μm滤膜到10mL的干净离心管中，在离心管中取0.5mL滤液到上机瓶，再加入0.5mL实验室超纯水到上机瓶，摇匀，供高效液相色谱-质谱联用仪测定。
4.如权利要求2所述的一种水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，其特征在于，所述基质加标标准工作曲线的制备包括如下步骤：
(2)将混合标准工作液(含孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫)用乙腈逐级稀释成浓度为10.0μg/mL、4.0μg/mL、2.0μg/mL、1.0μg/mL、0.5μg/mL、0.2μg/mL、0.1μg/mL、0.05μg/mL的混合标准中间液；称取不含孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的空白水产样品5.00g，根据所需标准曲线浓度梯度(0.5μg/kg～100.0μg/kg)加入对应混合标准中间液50uL，按照样品前处理步骤的方法与待检水产品同时进行提取和净化，供高效液相色谱-质谱联用仪测定，根据测定结果绘制标准曲线。
5.如权利要求4所述的一种水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，其特征在于，所述标准曲线浓度梯度为0.5μg/kg，1.0μg/kg，2.0μg/kg，5.0μg/kg,，10.0μg/kg，20.0μg/kg，40.0μg/kg，100.0μg/kg，每个梯度对应溶液混合内标浓度为10.0μg/kg。
6.如权利要求2所述的一种水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，其特征在于，所空白试验包括如下步骤：
(3)除不加试样(即不加水产品样品5.00g)外，其余均按照样品前处理步骤进行，制得空白试验溶液。
7.如权利要求2所述的一种水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱-质谱联用仪的分析检测条件为：
①色谱条件：
色谱柱：ACQUITY
Figure FDA0002453664130000021
CSHTMC18 1.7μm 2.1x100mm Column；流动相：A:0.1％的甲酸水溶液(内含乙酸铵浓度为5mmol/L)、B:甲醇；流速：0.2mL/min；进样量为3uL；柱温：40℃；溶剂梯度(时间min/A/B)：0.01/90/10；1.00/10/90；5.00/10/90；5.10/90/10；6.00/90/10。
②质谱条件：
离子源：电喷雾离子源(正离子扫描模式)；扫描方式：多反应监测模式；雾化气：氮气；碰撞气：氩气；毛细管电压：0.35kv；源温度：150℃；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流：1000L/Hr；锥孔气流：30L/Hr；驻留时间：0.028s。
③四种目标物及两种内标物的监测离子对参数：
孔雀石绿：母离子329.1，定量离子313.1，碰撞能量36，锥孔电压65，定性离子208.0，碰撞能量36，锥孔电压65；隐色孔雀石绿母离子331.2，定量离子239.1，碰撞能量30，锥孔电压36，定性离子316.2，碰撞能量22，锥孔电压36；结晶紫母离子372.2，定量离子356.2，碰撞能量40，锥孔电压56，定性离子235.1，碰撞能量58，锥孔电压56；隐色结晶紫母离子374.2，定量离子358.2，碰撞能量30，锥孔电压55，定性离子238.3，碰撞能量32，锥孔电压55；孔雀石绿-D5母离子334.1，定量离子318.1，碰撞能量40，锥孔电压65；隐色孔雀石绿-D6母离子337.2，定量离子322.1，碰撞能量22，锥孔电压50。
8.如权利要求2所述的一种水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，其特征在于，所述孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫含量计算方法为：
根据样品前处理步骤测得的样品制备的峰面积值，从基质加标标准工作曲线的制备步骤绘制的系列标准溶液的标准曲线上找到峰面积值对应的孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫的含量，按以下公式计算待测水产品中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫的含量X：
Xi＝(Ci-C0)*V1*V/(m*V2)
式中，Xi为试样中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位μg/kg；Ci表示样品前处理步骤(1)测得的样品制备液的峰面积所对应的孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位ng/mL；C0表示试样空白液中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位ng/mL；V1表示提取液总体积，单位mL；V2表示分取体积，单位mL；V表示定容体积，单位mL；m表示试样质量，单位g。
9.如权利要求1所述的一种水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法，其特征在于，所述检测方法为高效液相色谱-质谱联用的检测方法，所述检测方法如下：
高效液相色谱-质谱联用的色谱条件及检测参数如下
①色谱条件：
色谱柱：ACQUITY
Figure FDA0002453664130000031
CSHTMC18 1.7μm 2.1x100mm Column；流动相：A:0.1％的甲酸水溶液(内含乙酸铵浓度为5mmol/L)、B:甲醇；流速：0.2mL/min；进样量为3uL；柱温：40℃；溶剂梯度(时间min/A/B)：0.01/90/10；1.00/10/90；5.00/10/90；5.10/90/10；6.00/90/10。
②质谱条件：
离子源：电喷雾离子源(正离子扫描模式)；扫描方式：多反应监测模式；雾化气：氮气；碰撞气：氩气；毛细管电压：0.35kv；源温度：150℃；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流：1000L/Hr；锥孔气流：30L/Hr；驻留时间：0.028s。
③四种目标物及两种内标物的监测离子对参数：
孔雀石绿：母离子329.1，定量离子313.1，碰撞能量36，锥孔电压65，定性离子208.0，碰撞能量36，锥孔电压65；隐色孔雀石绿母离子331.2，定量离子239.1，碰撞能量30，锥孔电压36，定性离子316.2，碰撞能量22，锥孔电压36；结晶紫母离子372.2，定量离子356.2，碰撞能量40，锥孔电压56，定性离子235.1，碰撞能量58，锥孔电压56；隐色结晶紫母离子374.2，定量离子358.2，碰撞能量30，锥孔电压55，定性离子238.3，碰撞能量32，锥孔电压55；孔雀石绿-D5母离子334.1，定量离子318.1，碰撞能量40，锥孔电压65；隐色孔雀石绿-D6母离子337.2，定量离子322.1，碰撞能量22，锥孔电压50。
(1)样品溶液的制备即样品前处理：称取5.00g待检水产品于50mL离心管中，加1.0μg/mL的孔雀石绿-D5和隐色孔雀石绿-D6混合内标工作液50uL作为内标，旋涡混合30s，加10mL乙腈提取，旋涡振荡1min，超声(频率：40KHz)提取10min，4000rpm离心5min，将上清液移入15mL离心管备用；将中性氧化铝小柱安装在固相萃取柱上，用5mL乙腈活化，取离心后的上清液5mL到已活化好的中性氧化铝柱，收集流出液，过0.22μm滤膜到10mL的干净离心管中，在离心管中取0.5mL滤液到上机瓶，再加入0.5mL实验室超纯水到上机瓶，摇匀，供高效液相色谱-质谱联用仪测定。
(2)基质加标标准工作曲线的制备：将混合标准工作液(含孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫)用乙腈逐级稀释成浓度为10.0μg/mL、4.0μg/mL、2.0μg/mL、1.0μg/mL、0.5μg/mL、0.2μg/mL、0.1μg/mL、0.05μg/mL的混合标准中间液；称取不含孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的空白水产样品5.00g，根据所需标准曲线浓度梯度(0.5μg/kg～100.0μg/kg)加入对应混合标准中间液50uL，按照样品前处理步骤的方法与待检水产品同时进行提取和净化，供高效液相色谱-质谱联用仪测定，根据测定结果绘制标准曲线。
(3)空白试验：除不加试样(即不加水产品样品5.00g)外，其余均按照样品前处理步骤进行，制得空白试验溶液。
(4)根据样品前处理步骤测得的样品制备的峰面积值，从基质加标标准工作曲线的制备步骤绘制的系列标准溶液的标准曲线上找到峰面积值对应的孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫的含量，按以下公式计算待测水产品中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫的含量X：
Xi＝(Ci-C0)*V1*V/(m*V2)
式中，Xi为试样中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位μg/kg；Ci表示样品前处理步骤(1)测得的样品制备液的峰面积所对应的孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位ng/mL；C0表示试样空白液中孔雀石绿、含隐色孔雀石绿、结晶紫、含隐色结晶紫含量，单位ng/mL；V1表示提取液总体积，单位mL；V2表示分取体积，单位mL；V表示定容体积，单位mL；m表示试样质量，单位g。
CN202010300095.4A 2020-04-16 2020-04-16 水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法 Withdrawn CN111337611A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010300095.4A CN111337611A (zh) 2020-04-16 2020-04-16 水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010300095.4A CN111337611A (zh) 2020-04-16 2020-04-16 水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111337611A true CN111337611A (zh) 2020-06-26

Family

ID=71184853

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010300095.4A Withdrawn CN111337611A (zh) 2020-04-16 2020-04-16 水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111337611A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117169360A (zh) * 2023-07-31 2023-12-05 广州南沙明曦检测服务有限公司 一种水产品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿残留量的测定方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117169360A (zh) * 2023-07-31 2023-12-05 广州南沙明曦检测服务有限公司 一种水产品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿残留量的测定方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105548412A (zh) 一种同时测定食品中5种氨基糖苷类药物残留量的方法
CN107290470B (zh) 一种快速测定鸡蛋中磺胺类和喹诺酮类药物残留的方法
CN101865886A (zh) 高效液相色谱串联质谱测定蜂胶中氯霉素残留量的方法
CN103323550A (zh) 一种同时检测水中五种药物的方法
CN112684030A (zh) 一种富集净化-液相色谱串联质谱法检测水产品中全氟烷酸化合物的方法与应用
CN103308641A (zh) 烟草及烟草制品中三种酰胺类除草剂的高效液相色谱-串联质谱测定方法
CN110455961B (zh) 一种保健酒中多成分的高通量检测方法
CN106645518B (zh) 一种蜂胶原胶中氯霉素残留量的测定方法
CN106841457B (zh) 一种动物源性食品中安眠酮和地西泮残留量的测定方法
CN111337611A (zh) 水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法
CN113466356A (zh) 牛乳中农药残留含量测定的样品前处理及检测方法
CN101865887A (zh) 高效液相色谱串联质谱测蜂王浆中硝基咪唑类残留的方法
CN108107119B (zh) 一种检测水产品中氯霉素残留的方法
CN111024870B (zh) 硫酸新霉素组分及有关物质的检测方法
CN108918694B (zh) 一种msx残留的hplc柱前衍生化检测方法
CN106324169A (zh) 葡萄酒中酰胺类杀菌剂的固相萃取‑气相色谱‑串联质谱检测方法
CN112903836A (zh) 体外培育熊胆粉中异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷的测定方法
CN112946136A (zh) 奥泽沙星中甲磺酸酯含量的测定方法
CN113433227A (zh) 一种蔬果中6-氯吡啶甲酸的检测方法
CN112051343A (zh) 一种测定抗生素残留的方法
CN111474279A (zh) 检测大环内酯抗生素化合物的方法和试剂盒
CN109324139A (zh) 一种烟叶中玉米素核苷液液萃取-液相色谱-串联质谱的测定方法
CN103344715A (zh) 一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法
CN103823010B (zh) 尿液中3-甲基腺嘌呤(3-MeA)的测定方法
CN113640401B (zh) 一种土壤中马兜铃酸的检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20200626