CN103344715A - 一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法 - Google Patents

一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103344715A
CN103344715A CN2013102469372A CN201310246937A CN103344715A CN 103344715 A CN103344715 A CN 103344715A CN 2013102469372 A CN2013102469372 A CN 2013102469372A CN 201310246937 A CN201310246937 A CN 201310246937A CN 103344715 A CN103344715 A CN 103344715A
Authority
CN
China
Prior art keywords
water sample
water
detection method
phase extraction
extraction column
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2013102469372A
Other languages
English (en)
Inventor
高如泰
邵一如
张媛
张慧
许其功
曹金玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chinese Research Academy of Environmental Sciences
Original Assignee
Chinese Research Academy of Environmental Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chinese Research Academy of Environmental Sciences filed Critical Chinese Research Academy of Environmental Sciences
Priority to CN2013102469372A priority Critical patent/CN103344715A/zh
Publication of CN103344715A publication Critical patent/CN103344715A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

一种分离富集水中青霉素类抗生素舒巴坦和氯唑西林的方法，包括如下步骤：用酸将水样pH调至2-4，过滤，得到预处理后的水样；依次用丙酮、甲醇，含乙酸铵的甲酸水溶液活化HLB固相萃取柱，加超纯水保持HLB固相萃取柱中树脂处于活化状态，水样过柱；富集完成后，将HLB固相萃取柱在氮气保护下干燥，用洗脱液洗脱，收集洗脱液并在氮气流下吹干，加入乙腈溶解残留物待测；定量检测青霉素类抗生素的浓度。本发明水样预处理环境友好、易于操作、富集倍数高，且检测限低、重现性好，能够快速准确地分析水环境中两种痕量青霉素类抗生素的含量。

Description

一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法
技术领域
本发明涉及一种水环境中痕量青霉素类抗生素的检测前处理方法，具体地说是一种同时分离富集地表水和城市污水中两种痕量的青霉素类抗生素-舒巴坦和氯唑西林的方法。 
背景技术
青霉素类抗生素是指分子中含有青霉烷，能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素。对细菌的选择作用强，而对人几乎没有毒性，所以是一类高效、低毒、在临床广泛应用的重要抗生素。 
青霉素类抗生素由于其具有杀菌作用强、疗效优、毒性低、价格低等优势，在我国抗生素类药物用量上名列前茅。青霉素的滥用产生了严重的副作用-耐药菌的产生。耐药菌的产生，使难治性感染越来越多。如过去对青霉素非常敏感的肺炎链球菌，已经对青霉素、红霉素、氯霉素类抗生素都产生免疫作用。 
地表水和城市污水中的抗生素类药物残留主要来自于医院、养殖场和制药企业等废水的排放。研究结果表明，环境水样中的青霉素类抗生素含量甚微，仅为ng/L或μg/L级，且部分青霉素类抗生素在水环境中不稳定，容易发生水解作用。因此，检测水环境中痕量青霉素类抗生素要求水样的预处理方法在保证抗生素不分解的条件下，具有较高的富集倍数和较好的重复性；同时，预处理方法应该满足操作简单，耗时较少，使用药品环境友好，使用量少等要求。环境水样中提取抗生素的方法较多，包括液液萃取、冻干法、固相萃取、固相微萃取和分子印迹技术等。其中固相萃取技术由于其操作简便，处理样品量大，富集效率高，外来污染少，可重复性强，且可应用于自动装置而成为富集抗生素等微污染物首选方式。 
发明内容
本发明的目的在于提供一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法，该方法采用高效液相色谱-串联质谱法实现对水环境样品中痕量青霉素类抗生素进行测定，检测一个样品仅需5min左右，青霉素类抗生素的定量下限能够达到10μg/L，实际样品浓度的定量下限能够低至4ng/L，回收率在69.9％～86.9％之间，相对标准偏差低于5％，满足环境样品检测的要求。 
为实现上述目的，本发明提供的分离富集水中青霉素类抗生素的方法，包括如下步骤： 
(1)水样的预处理 
用酸将水样pH调至2-4，过滤，得到预处理后的水样； 
(2)分离富集 
依次用丙酮、甲醇，含乙酸铵的甲酸水溶液活化HLB固相萃取柱，加超纯水保持HLB固相萃取柱中树脂处于活化状态，水样过柱； 
富集完成后，将HLB固相萃取柱在氮气保护下干燥，用洗脱液洗脱，收集洗脱液并在氮气流下吹干，加入乙腈溶解残留物待测； 
(3)定量检测青霉素类抗生素(舒巴坦和氯唑西林)的浓度； 
所述的检测方法，其中，步骤1中水样过滤是用0.47μm的GF/F滤膜。 
所述的检测方法，其中，步骤1中是加入盐酸或硫酸调节水样pH。 
所述的检测方法，其中，步骤2中甲酸水溶液含有体积比0.1％的乙酸铵。 
所述的检测方法，其中，步骤2中的水样过柱控制流速为3.0-5.0mL/min。 
所述的检测方法，其中，步骤2中洗脱HLB固相萃取柱的洗脱液流速小于1.0mL/min。 
所述的检测方法，其中，步骤2中的洗脱液为含有体积比1％甲酸的甲醇溶液。 
所述的检测方法，其中，步骤3是采用液相色谱-串联质谱法检测舒巴坦和氯唑西林的浓度。 
本发明的有益效果是： 
1)该方法处理水样过程所用的试剂低毒，使用量少，环境友好。 
2)该方法对水样的富集倍数高达2500倍，同时富集效率较高，回收率在69.9％～86.9％之间。 
3)该方法操作较为简单，可重复性强，同一批样品的相对标准偏差低于5％，满足预处理方法要求。 
4)该方法能够同时富集同一类抗生素的多种药物及其它物理化学性质与青霉素类抗生素相似的药物，适用范围较广，使用现代分析仪器检测用时较少，检测限低，线性范围宽，准确度较高，样品检测效率高。 
附图说明
图1为本发明100μg/L的两种青霉素类抗生素混合标准品溶液的离子流图，出峰顺序为舒巴坦：1.85min；氯唑西林：4.81min。 
图2为舒巴坦定量子离子标准曲线。 
图3为氯唑西林定量子离子标准曲线。 
具体实施方式
本发明提供水环境中两种痕量青霉素类抗生素的检测方法，具体包括如下步骤： 
(1)水样的预处理 
用酸将水样pH调至3.0左右，利用GF/F(Whatman，0.7μm)玻璃纤维滤膜过滤，得到预处理后的水样； 
(2)分离富集 
依次利用6mL色谱纯丙酮、6mL色谱纯甲醇，6mL5mM乙酸铵0.1％甲酸水溶液活化HLB(Waters，500mg，6cc)固相萃取柱，最后加5mL超纯水保持小柱中树脂处于活化状态，取1000mL水样过柱，控制流速3.0～5.0mL/min； 
富集完成后，将小柱在氮气保护下干燥20min，再利用10mL洗脱液洗脱HLB柱，控制流速小于1.0mL/min，洗脱液收集于10mL尖底玻璃离心管中，洗脱液在氮气流下缓慢吹直至近干，加入400uL乙腈溶解残留物，漩涡混合，待测； 
(3)根据实际水样目标抗生素的浓度选择适当方法对两种青霉素类抗生素进行定量检测。 
为了满足水环境中抗生素残留的浓度范围，本实验利用高效液相色谱-电喷雾串联三重四极杆质谱仪联用对两种青霉素类抗生素进行定量，标线的范围为10ug/L-1000ug/L。 
外标法标准曲线的绘制：用分析天平精确称量适量舒巴坦、氯唑西林标准品(Dr.Ehrenstorfer GmbH)用乙腈∶水＝1∶1(v∶v)溶解标准品，配制成浓度为1g/L的单标贮备液。然后用纯乙腈将储备液稀释成系列浓度的混合标准溶液，转移至进样瓶中，按上述条件用高效液相-串联质谱进行测定。以浓度为横坐标，响应值为纵坐标进行回归，得到标准曲线，用于测定样品中分析物的量。 
(4)样品测定结果和回收率计算 
采集待测水样，按步骤1和2对水样进行预处理和浓缩富集，再按步骤(3)进行液相色谱-串联质谱检测，并带入标准曲线方程中，通过计算最终得到待测水样中两种青霉素类抗生素的浓度。利用下式计算回收率： 
R = C 2 × V 2 + C 1 × V 1 C s × V s × 100 %
R-回收率，％； 
C2-添加标准溶液水样的青霉素类抗生素的浓度，μg/L； 
C1-未添加标准溶液水样青霉素类抗生素的浓度，μg/L； 
Cs-加入标准溶液的浓度，μg/L； 
V2-添加标准溶液水样的体积，L； 
V1-未添加标准溶液水样，L； 
Vs-添加标准溶液的体积，L。 
下面结合附图和最佳实施例对本发明所述的水环境中两种青霉素类抗生素浓度的检测方法予以说明。 
实施例1：回收率实验结果 
取1000ml超纯水于棕色玻璃瓶中，每瓶水样加入1ml 100μg/L两种青霉素类抗生素混合标准储备液，混匀后按步骤1-2处理水样，最后用高效 液相色谱-串联质谱联用测定两种青霉素类抗生素浓度。图1为100μg/L的两种青霉素类抗生素混合标准品溶液的离子流图，出峰顺序为舒巴坦：1.85min；氯唑西林：4.81min。 
外标法标准曲线的绘制：用纯乙腈将储备液稀释成10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L、1000μg/L系列浓度的两种青霉素类抗生素混合标准溶液，转移至进样瓶中，用高效液相-串联质谱进行测定。以浓度为横坐标，响应值为纵坐标进行回归，得到标准曲线。图2为舒巴坦定量子离子标准曲线，图3为氯唑西林定量子离子标准曲线。 
将加标超纯水结果带入标准曲线方程中，通过计算最终得到待测水样中两种青霉素类抗生素的浓度。计算回收率，结果如表1。 
实施例2北京奥运公园水样加标回收结果。 
取1000ml北京奥运公园河水水样于棕色玻璃瓶中，按照实施例1中的方法进行加标实验，同时取1000ml河水水样不加标，作为空白对照。 
将加标后水样的结果带入标准曲线方程中，通过计算最终得到待测水样中3种青霉素类抗生素的浓度。计算回收率，结果如表2。 
实施例3河北石家庄汪洋沟水样测定结果。 
用棕色玻璃瓶采集1000ml河北石家庄汪洋沟水样，加入大约3mL4M的盐酸调节pH到3.0左右，保存在4℃以下运回实验室。用GF/F(Whatman，0.7μm)玻璃纤维滤膜过滤，按步骤(2)～(3)对水样进行浓缩富集，再按步骤(4)进行液相色谱-串联质谱检测，并带入标准曲线方程中，通过计算最终得到实际水样中两种青霉素类抗生素的浓度。表3检测结果表明，舒巴坦和氯唑西林在汪洋沟中几乎没有残留。 
表1 
表2 
表3 
Nd＝not detect。 

Claims (8)

1.一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法，包括如下步骤：
(1)水样的预处理
用酸将水样pH调至2-4，过滤，得到预处理后的水样；
(2)分离富集
依次用丙酮、甲醇，含乙酸铵的甲酸水溶液活化HLB固相萃取柱，加超纯水保持HLB固相萃取柱中树脂处于活化状态，水样过柱；
富集完成后，将HLB固相萃取柱在氮气保护下干燥，用洗脱液洗脱，收集洗脱液并在氮气流下吹干，加入乙腈溶解残留物待测；
(3)定量检测青霉素类抗生素的浓度；
所述青霉素类抗生素为舒巴坦和氯唑西林。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其中，步骤1中水样过滤是用0.47μm的GF/F滤膜。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其中，步骤1中是加入盐酸或硫酸调节水样pH。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其中，步骤2中甲酸水溶液含有体积比0.1％的乙酸铵。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其中，步骤2中的水样过柱控制流速为3.0-5.0mL/min。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其中，步骤2中洗脱HLB固相萃取柱的洗脱液流速小于1.0mL/min。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其中，步骤2中的洗脱液为含有体积比1％甲酸的甲醇溶液。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其中，步骤3是采用液相色谱-串联质谱法检测舒巴坦和氯唑西林的浓度。
CN2013102469372A 2013-06-20 2013-06-20 一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法 Pending CN103344715A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2013102469372A CN103344715A (zh) 2013-06-20 2013-06-20 一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2013102469372A CN103344715A (zh) 2013-06-20 2013-06-20 一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103344715A true CN103344715A (zh) 2013-10-09

Family

ID=49279529

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2013102469372A Pending CN103344715A (zh) 2013-06-20 2013-06-20 一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103344715A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109574309A (zh) * 2018-12-18 2019-04-05 重庆工商大学 一种通过膜材料降低抗生素废水生物毒性的方法
CN109650625A (zh) * 2018-12-14 2019-04-19 重庆工商大学 一种通过酸碱处理降低抗生素废水生物毒性的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101358953A (zh) * 2008-09-18 2009-02-04 中华人民共和国江苏出入境检验检疫局 蜂产品中多类农兽药残留同时检测的方法
CN102426209A (zh) * 2011-11-15 2012-04-25 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 一种养殖或屠宰环境中多种兽药残留量的测定方法
CN102692469A (zh) * 2011-03-21 2012-09-26 上海市食品药品检验所 液相色谱－串连质谱法测定人参中真菌毒素含量的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101358953A (zh) * 2008-09-18 2009-02-04 中华人民共和国江苏出入境检验检疫局 蜂产品中多类农兽药残留同时检测的方法
CN102692469A (zh) * 2011-03-21 2012-09-26 上海市食品药品检验所 液相色谱－串连质谱法测定人参中真菌毒素含量的方法
CN102426209A (zh) * 2011-11-15 2012-04-25 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 一种养殖或屠宰环境中多种兽药残留量的测定方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DRAGANA MUTAVDZˇ IC´ PAVLOVIC, ET.AL: "Development and optimization of the SPE procedure for determination of pharmaceuticals in water samples by HPLC-diode array detection", 《J. SEP. SCI》 *
吴维，赵新华，刘旭: "液相色谱串联质谱法测定饮用水体中抗生素残留", 《中国给水排水》 *
李晓娟: "固相萃取—超高效液相色谱串联质谱法对杭州市不同水环境中13种痕量药物残留状况的检测及分析", 《中国优秀硕士论文全文数据库》 *
苏仲毅: "环境水样中24种抗生素残留的同时分析方法及其应用研究", 《中国优秀硕士学位全文数据库》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109650625A (zh) * 2018-12-14 2019-04-19 重庆工商大学 一种通过酸碱处理降低抗生素废水生物毒性的方法
CN109650625B (zh) * 2018-12-14 2021-09-14 重庆工商大学 一种通过酸碱处理降低抗生素废水生物毒性的方法
CN109574309A (zh) * 2018-12-18 2019-04-05 重庆工商大学 一种通过膜材料降低抗生素废水生物毒性的方法
CN109574309B (zh) * 2018-12-18 2021-10-08 重庆工商大学 一种通过膜材料降低抗生素废水生物毒性的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103293248A (zh) 一种分离富集水中磺胺类抗生素的方法
CN104614479B (zh) 一种食品中维生素的检测方法
CN103048401B (zh) 化妆品中15种禁用硝基咪唑类抗生素的测定方法
CN103323550A (zh) 一种同时检测水中五种药物的方法
CN108318613A (zh) 一种环境样品中抗生素的检测方法
CN108663471A (zh) 一种测定河口沉积物中多种内分泌干扰物含量的方法
CN102435681B (zh) 一种适用于分析复杂基质固体样品中雌激素及双酚a的前处理方法
CN102183606A (zh) 一种水体沉积物中雌激素及壬基酚、辛基酚、双酚a的共检测方法
CN104198600A (zh) 一种黄芪药材的检测方法
CN102706991A (zh) 一种同时检测鸡蛋中阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨苄西林残留的方法
CN109828058A (zh) 基于液相色谱-串联质谱法测定多种脂溶性维生素的方法
CN103675064A (zh) 一种edta功能化石墨烯修饰电极的制备及其重金属测方法
CN103344732A (zh) 一种同时检测水体中氧氟沙星和沙拉沙星的方法
CN103336080A (zh) 一种同时检测水中四环素类抗生素的方法
CN106645518A (zh) 一种蜂胶原胶中氯霉素残留量的测定方法
CN103278587A (zh) 一种分离富集水环境中三种头孢类抗生素的方法
CN103344715A (zh) 一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法
CN108760952A (zh) 用于检测水中非甾体抗炎药的方法
CN102944635B (zh) 一种测定水中磷酸三(2,3-二溴丙基)酯含量的方法
CN113466356A (zh) 牛乳中农药残留含量测定的样品前处理及检测方法
CN113533548B (zh) 一种化工产品中1-乙烯基咪唑的检测方法
CN110702828A (zh) 一种采用hplc-hg-afs法测定全血或红细胞中四种砷形态浓度的方法
CN111366659A (zh) 粉末状含氟聚合物产品中痕量pfoa的检测方法
CN104267025A (zh) 环境水中非挥发性有机物雌激素活性检测方法
CN105628826A (zh) 一种用于检测海水及海洋沉积物中金刚烷胺残留量的高效液相色谱-串联质谱方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20131009