CN112946136A - 奥泽沙星中甲磺酸酯含量的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种奥泽沙星中甲磺酸酯含量的测定方法。其中包括供试品溶液的制备方法：将奥泽沙星样品溶解于强酸溶液，加入乙酸乙酯萃取样品中的甲磺酸酯。该方法检测准确度和灵敏度高、操作简单方便；杂质回收率在80％‑120％之间，相对标准偏差小于10％，方法回收率良好，为奥泽沙星产品的质量控制提供了依据，从而保证药品的质量。

Description

奥泽沙星中甲磺酸酯含量的测定方法

技术领域

本发明属于药物检测分析技术领域，具体涉及一种奥泽沙星中甲磺酸酯含量的测定方法。

背景技术

奥泽沙星(Ozenoxacin)是Ferrer公司研发的非氟化喹诺酮抗菌素，用于治疗脓疱性皮炎和其他皮肤感染，包括革兰氏阳性的皮肤和软组织感染。奥泽沙星的作用机制为抑制细菌DNA复制酶，DNA促旋酶A和拓扑异构酶IV。目前该化合物已经成功完成了治疗成人及儿童脓疱性皮炎的III期临床试验，显示出更强的抗菌活性，安全性和耐受性较好。2015年9年获日本厚生劳动省批准，成为全球首次批准的新分子实体，于2017年12月11日获得美国FDA批准上市。

奥泽沙星的合成工艺包含如下步骤：

其中对氨基和羧酸脱保护使用到甲磺酸，产生的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯属于基因毒性杂质，所以对产品的质量控制十分重要。根据《遗传毒性杂质限度指导原则》相关规定，遗传毒性杂质摄入量不得超过1.5μg/d，奥泽沙星制剂规格为0.2g(奥泽沙星)/支，按照奥泽沙星每日最大用量200mg计算，奥泽沙星中甲磺酸酯的总量应不得超过7.5μg/g。根据药品申报评审要求，需要对奥泽沙星中残留的甲磺酸酯进行含量测定研究。

欧洲药典(2.5.38.Determination of methyl,ethyl and isopropylmethanesulfonate)采用衍生化气相-质谱法对甲磺酸酯通过与碘化钠和硫代硫酸钠反应生成碘甲烷、碘乙烷、碘异丙烷进行测定。该方法采用顶空反应及内标法，操作较为复杂，样品难于溶解，涉及到化学反应效率影响结果准确性，另外，奥泽沙星属于难溶性化合物，其溶解性差直接影响到甲磺酸酯检测的灵敏度。故寻找一个操作简单、准确度和灵敏度高、适合工业生产的甲磺酸酯含量的测定方法，对保证终产品奥泽沙星的质量有着重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简单，检测准确度和灵敏度高，适合工业生产的奥泽沙星中甲磺酸酯含量的测定方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

奥泽沙星中甲磺酸酯含量的测定方法，其中包括供试品溶液的制备，所述供试品溶液的制备方法为：将奥泽沙星样品溶解于强酸溶液，加入乙酸乙酯萃取样品中的甲磺酸酯。

奥泽沙星中甲磺酸酯含量的测定方法，包括如下步骤：

(a)供试品溶液制备：称取奥泽沙星样品溶解于强酸溶液，加入乙酸乙酯，静置分层，吸取上层清液，作为供试品溶液；

(b)对照品溶液制备：称取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯混合并溶解于乙酸乙酯；

(c)气相-质谱法检测：取供试品溶液和对照品溶液，分别注入气相-质谱仪，按外标法以峰面积计算甲磺酸酯的含量。

作为优选，所述的甲磺酸酯选自甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯中的一种或多种。

作为优选，所述的强酸选自硫酸或磷酸，更优选为磷酸。

作为优选，所述的奥泽沙星样品与强酸溶液的质量体积比为1：5～100，更优选为1：20～50。

作为优选，所述的强酸溶液的浓度为7％～30％，更优选为10％～20％。

作为优选，所述的乙酸乙酯与强酸溶液的体积比为1：0.4～5，更优选为1：1.5～2。

作为优选，所述的对照品溶液的浓度为0.15μg/mL。

作为优选，所述的硫酸和磷酸各为分析纯或色谱纯。

计算公式：溶剂残留量(％)＝(Ai×V/W)/(As/Cs)×100％；

其中Ai：供试品溶液中待测甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯峰面积；

As：甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯对照品溶液主峰面积；

Cs：甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯对照品溶液浓度(mg/mL)；

W：供试品溶液配制时样品的取样量(mg)；

V：供试品溶液制备乙酸乙酯体积(mL)；

本发明选择强酸溶液制备供试品溶液，解决了奥泽沙星在众多溶剂中难溶的问题，提供了检测灵敏度。采用乙酸乙酯对甲磺酸酯进行萃取，去除了样品及磷酸等对含量测定的干扰，优化的萃取比例提高了回收率，满足甲磺酸酯的回收率在80％～120％之间的要求，故能准确定量检出奥泽沙星中可能残留的甲磺酯。采用气相-质谱法，即乙酸乙酯溶液层直接进样，从而避免了强酸进入色谱系统损坏系统。本发明无需衍生化学反应，也无需顶空进样，方法操作简单，适合工业生产应用。

本发明提供的奥泽沙星中甲磺酸酯含量的测定方法，检测准确度和灵敏度高、专属性强，操作简单方便；精密度试验验证良好、线性关系良好、回收率在80％-120％之间，相对标准偏差小于10％，方法回收率良好。

附图说明

图1为实施例1中奥泽沙星样品检测质谱图

图2为实施例1中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯对照品溶液质谱图

图3为实施例4中空白溶剂质谱图

图4为实施例4中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯检测限质谱图

图5为实施例4中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯定量限质图谱

图6为实施例4中甲磺酸甲酯线性图

图7为实施例4中甲磺酸乙酯线性图

图8为实施例4中甲磺酸异丙酯线性图

具体实施方式

1、仪器：

分析天平，型号：METTLER TOLEDO XS105；

气相色谱仪型号为Agilent 7890A；色谱柱：交联键合的100％二甲基聚硅氧烷作固定相的石英毛细管柱(型号为RESTEK

1301，该石英毛细管柱的柱长30m、内径0.32mm、液膜厚度1.5μm)。

2、试剂：

乙酸乙酯：分析纯；

磷酸：分析纯；

甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯：分析纯。

3、样品：

奥泽沙星：杭州华东医药集团新药研究院有限公司自制，批号：180201-KF203-S、180202-KF203-S、180203-KF203-S。

4、气相-质谱条件为：

柱温：程序升温；

进样口温度：180～220℃；

载气：氦气；

载气流速：0.5～2ml/min；

分流比：1:1～30:1；

注入气相-质谱仪的直接进样体积为1～3μl。

离子源：EI；

离子源温度：220～240℃；

四级杆温度：140～160℃；

监测离子m/z 80.0(甲磺酸甲酯)，m/z 109.0(甲磺酸乙酯)，m/z 123.0(甲磺酸异丙酯)。

下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但这些实施例不对本发明构成任何限制。

实施例1

A、供试品溶液制备：取奥泽沙星样品100.0mg，精密称定，置具塞试管中，加入15％磷酸溶液3.0mL使溶解，再精密加入5.0mL乙酸乙酯，充分震荡萃取，静置分层后，取上层乙酸乙酯相，备用；

B、对照品溶液制备：取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯适量，精密称定，混合并加乙酸乙酯定量稀释制成浓度为0.15μg/mL的溶液，备用；

C、气相-质谱法检测：取供试品溶液和对照品溶液各1μL，参照《中国药典》(2020年版)四部通则0521气相色谱法和通则0431质谱法测定，采用直接进样法分别注入气相-质谱仪，依次获得奥泽沙星样品质谱图如图1所示。甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯对照品质谱图如图2所示。

D、含量计算：按外标法以峰面积计算残留溶剂的含量。

按照上述测定方法对三批供试品进行检测，结果见表1。

表1：

实施例2

取奥泽沙星样品80mg，精密称定，置具塞试管中，加入15％磷酸溶液3.0mL使溶解，再精密加入4.0mL乙酸乙酯，充分震荡萃取，静置分层后，取上层乙酸乙酯相，备用；

其他步骤参照实施例1

按照上述条件，检测三批供试品溶液，结果见表2。

表2：

实施例3

取奥泽沙星样品100mg，精密称定，置具塞试管中，加入20％磷酸溶液2.0mL使溶解，再精密加入5.0mL乙酸乙酯，充分震荡萃取，静置分层后，取上层乙酸乙酯相，备用；

其他步骤参照实施例1

按照上述条件，检测三批供试品溶液，结果见表3。

表3：

实施例4：方法验证

1专属性

1.1空白试验

取乙酸乙酯置进样瓶中，按上述气相-质谱条件下量取1μL进样，对甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯测定各无干扰。空白溶液质谱图如图3所示。

1.2系统适用性试验

取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯适量，精密称定，加乙酸乙酯定量稀释制成浓度为0.15μg/mL的溶液，按上述气相-质谱条件进样，记录质谱图，甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸异丙酯峰能有效分离，互不干扰，分离度各大于2。结果见表4。

表4

成分	保留时间(min)	理论板数	分离度
				甲磺酸甲酯	4.38	46624	2.4
甲磺酸乙酯	5.60	59925	14.1
				甲磺酸异丙酯	6.14	90994	6.3

2精密度试验

2.1对照品溶液精密度

取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯适量，精密称定，加乙酸乙酯定量稀释制成每1mL中约各含0.15μg的溶液，按上述气相-质谱条件量取1μL进样，记录质谱图，连续进样测定6次，RSD各小于5％，精密度良好，结果见表5。

表5

2.2样品溶液精密度

配制含甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的浓度各为0.15μg/mL的乙酸乙酯溶液作为对照品溶液；精密称取0.1g奥泽沙星于具塞试管中，用3mL15％的磷酸溶液溶解后，加对照品溶液5mL，振摇充分混合，静置分层，按上述气相-质谱条件量取上层清液1μL进样，记录质谱图，连续进样测定6次，RSD各小于5％，精密度良好，结果见表6。

表6

3检出限与定量限

精密称取对照品甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯各100mg用乙酸乙酯稀释成6个不同浓度的溶液，见表7。

表7

通过逐级降低浓度法测定，按照S/N>3计算，甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的检出限结果见表8，检测限质谱图如图4所示。

通过逐级降低浓度法测定，按照S/N>10计算，甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的定量限结果见表8，定量限质谱图如图5所示。

表8

4线性试验

精密称取对照品甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯各100mg置于100mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释成1000μg/mL的溶液，混匀；精密移取该上述1000μg/mL的溶液1mL置于100mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释成10μg/mL的溶液，混匀。分别移取0.075、0.5、0.75、1.2、1.5、1.8、2.25、3.0mL于100mL量瓶中，用乙酸乙酯稀释定容，摇匀，制成含甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯各为0.0075μg/mL、0.05μg/mL、0.075μg/mL、0.12μg/mL、0.15μg/mL、0.18μg/mL、0.225μg/mL、0.3μg/mL的溶液，作为不同浓度标准溶液。按上述气相-质谱条件分别精密量取各标准溶液1μL进样，记录质谱图，以浓度为x轴，峰面积为y轴，作线性回归，结果见表9。

表9

5回收试验

分别配制含甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的浓度各为0.15μg/mL的乙酸乙酯溶液以及其相应33％、80％和120％浓度溶液为对照品溶液。精密称取0.1g纯化后的奥泽沙星样品于具塞试管中，用3mL 15％的磷酸溶液溶解后，加对照品溶液5mL，振摇充分混合，静置分层，按上述气相-质谱条件量取上层清液1μL进样，记录质谱图。另取未加入样品的对照品溶液，同法测定，记录质谱图，按外标法计算回收率。甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯回收率分别达81.37％、86.14％、95.92％，在80％～120％之间，RSD小于10％，方法回收率良好。结果见表10～12。

表10甲磺酸甲酯回收试验

表11甲磺酸乙酯回收试验

表12甲磺酸异丙酯回收试验

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (8)

1.奥泽沙星中甲磺酸酯含量的测定方法，其中包括供试品溶液的制备，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法为：将奥泽沙星样品溶解于强酸溶液，加入乙酸乙酯萃取样品中的甲磺酸酯。

2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)供试品溶液制备：称取奥泽沙星样品溶解于强酸溶液，加入乙酸乙酯，静置分层，吸取上层清液，作为供试品溶液；

(b)对照品溶液制备：称取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯混合并溶解于乙酸乙酯；

(c)气相-质谱法检测：取供试品溶液和对照品溶液，分别注入气相-质谱仪，按外标法以峰面积计算甲磺酸酯的含量。

3.如权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于，所述的甲磺酸酯选自甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯中的一种或多种。

4.如权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于，所述的强酸选自硫酸或磷酸，更优选为磷酸。

5.如权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于，所述的奥泽沙星样品与强酸溶液的质量体积比为1：5～100，更优选为1：20～50。

6.如权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于，所述的强酸溶液的浓度为7％～30％，更优选为10％～20％。

7.如权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于，所述的乙酸乙酯与强酸溶液的体积比为1：0.4～5，更优选为1：1.5～2。

8.如权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述的对照品溶液的浓度为0.15μg/m。

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