CN116136515A - 一种吲哚布芬片中基因毒性杂质的检测方法 - Google Patents

一种吲哚布芬片中基因毒性杂质的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN116136515A
CN116136515A CN202111352857.6A CN202111352857A CN116136515A CN 116136515 A CN116136515 A CN 116136515A CN 202111352857 A CN202111352857 A CN 202111352857A CN 116136515 A CN116136515 A CN 116136515A
Authority
CN
China
Prior art keywords
solvent
solution
indobufen
butyric acid
mobile phase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111352857.6A
Other languages
English (en)
Inventor
张霞
张璇
王新月
杨园园
倪郑华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Zhongmei Huadong Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Hangzhou Zhongmei Huadong Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Zhongmei Huadong Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Hangzhou Zhongmei Huadong Pharmaceutical Co Ltd
Priority to CN202111352857.6A priority Critical patent/CN116136515A/zh
Publication of CN116136515A publication Critical patent/CN116136515A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G01N30/7233—Mass spectrometers interfaced to liquid or supercritical fluid chromatograph
    • G01N30/724—Nebulising, aerosol formation or ionisation
    • G01N30/7266—Nebulising, aerosol formation or ionisation by electric field, e.g. electrospray
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种吲哚布芬片中基因毒性杂质的检测方法。所述方法以十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶为固定相，以溶剂A和溶剂B的混合液为流动相，所述的溶剂A选自甲酸铵或乙酸铵中的一种或两种混合的水溶液，所述溶剂B选自含有甲醇、乙腈或两者混合的任意一种。通过高效液相色谱‑质谱联用法对基因毒性杂质进行分离测定，能够实现吲哚布芬片样品中基因毒性杂质的有效分离及限度测定。所述方法专属性强、灵敏度高，对于实现吲哚布芬片的质量控制、安全性保证具有极其重要的意义。

Description

一种吲哚布芬片中基因毒性杂质的检测方法
技术领域
本发明属于药物分析化学领域，具体涉及吲哚布芬片中两种基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸和2-(4-硝基苯基)丁酸测定的检测方法，用于吲哚布芬片中基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸和/或 2-(4-硝基苯基)丁酸的分析与限度测定。
背景技术
吲哚布芬片于1984年在意大利首批上市，为一种血小板聚集的抑制剂。其活性成分吲哚布芬(Indobufen)是一种异吲哚啉基苯基丁酸衍生物，化学名为(±)2-[4-(1-氧代-2-异二氢吲哚基)苯基]丁酸，分子式C18H17NO3，精确分子量295.12，结构式如下所示：
Figure BDA0003356505140000011
吲哚布芬主要是通过以下机制发挥抗血小板聚集作用：(1)可逆性抑制血小板环氧化酶，使血栓素B2(血小板聚集的强效激活剂) 生成减少；(2)抑制二磷酸腺苷(ADP)、肾上腺素和血小板活化因子(PAF)、胶原和花生四烯酸诱导的血小板聚集；(3)降低血小板三磷酸腺苷、血清素、血小板因子3、血小板因子4和β-凝血球蛋白的水平，降低血小板粘附性。吲哚布芬片是一种可逆的多靶点抗血栓药物。对于激活剂诱发的血小板聚集，单次口服吲哚布芬200mg 后2小时可达最大抑制作用，12小时后仍有显著抑制作用(90％)，24小时内恢复。
对于报道的吲哚布芬的合成工艺中多数工艺路线涉及2-(4-氨基)苯基丁酸和2-(4-硝基)苯基丁酸，专利CN106631974B公开了如下的合成工艺路线：
(1)氢化反应
Figure BDA0003356505140000021
(2)环化反应：
Figure BDA0003356505140000022
(3)锌粉还原反应
Figure BDA0003356505140000023
该工艺路线以2-(4-硝基)苯基丁酸为起始物料，得到关键中间体，而2-(4-氨基苯基)丁酸和2-(4-硝基苯基)丁酸含有基因毒性的警示官能团，属于基因毒性杂质，并有在吲哚布芬原料药中残留的风险。依据ICHM7指导原则的相关规定并结合吲哚布芬片的每日最大服用剂量(其中吲哚布芬400mg)，2-(4-氨基)苯基丁酸和2-(4- 硝基)苯基丁酸的每日最大摄入量不得大于1.5μg，故吲哚布芬原料药中2-(4-氨基)苯基丁酸和2-(4-硝基)苯基丁酸的控制限度不得超过3.75ppm，此限度较低，需要检测方法具有较高的灵敏度和专属性，目前尚未有文献报告这两种杂质的检测方法。
因此，找到一种灵敏度高、专属性好且适合含十二烷基硫酸钠和 /或十二烷基硫酸镁和/或吐温-80和/或其它表面活性剂的样品中这两杂质的检测方法，实现对吲哚布芬片中这两杂质的控制，对提高产品的质量和用药的安全性具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供吲哚布芬片中基因毒性杂质2-(4-氨基)苯基丁酸和/或2-(4-硝基)苯基丁酸的测定方法，能够有效实现吲哚布芬片中基因毒性杂质2-(4-氨基)苯基丁酸和/或2-(4-硝基)苯基丁酸的测定和限度控制。所述的检测方法灵敏度高、专属性强且操作简便、快速。
为达到上述目的，本发明的技术方案为：
一种吲哚布芬片中基因毒性杂质的检测方法，以十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶为固定相，以溶剂A和溶剂B的混合液为流动相，通过高效液相色谱-质谱联用法对基因毒性杂质进行分离测定，所述的溶剂A选自甲酸铵或乙酸铵中的一种或两种混合的水溶液，所述溶剂B选自含有甲醇、乙腈或两者混合的任意一种。
进一步，所述的基因毒性杂质为2-(4-氨基)苯基丁酸和/或2- (4-硝基)苯基丁酸。
进一步，所述的吲哚布芬片的辅料中含有表面活性剂；进一步，所述的表面活性剂优选为吐温80、十二烷基硫酸钠或十二烷基硫酸镁中的一种或任意几种。
进一步，所述溶剂A的浓度优选为5～50mmol/L；再进一步，所述溶剂A优选为5～50mmol/L的乙酸铵水溶液。
进一步，所述流动相洗脱采用梯度洗脱，洗脱条件为： 0.01～2-3min，溶剂A与溶剂B的体积比为90:10；8min，溶剂A与溶剂B的体积比为42-30:58-70；10～12min，溶剂A与溶剂B的体积比为90:10。
进一步，所述流动相的流速为0.3～1.2ml/min。
进一步，所述色谱柱的规格为4.6×150mm,5μm或4.6×150mm, 2.7μm或4.6×150mm,2.5μm或4.6×150mm,3.5μm或4.6×150mm, 3.0μm或4.6×250mm,5μm。
进一步，本发明所述的方法中，所述色谱柱柱温箱温度为 20℃-50℃。
进一步，所述的方法具体包括：取吲哚布芬片的细粉适量，精密称定，加有机溶剂溶解并用稀释剂定量稀释制成吲哚布芬浓度约为 5～10mg/ml的溶液，作为供试品溶液；取基因毒性杂质溶解并稀释制成浓度约为18.75～37.5ng/ml的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液和对照品溶液5～20μl进样，分别记录定量、定性离子对下的离子流图，照外标法以定量离子对峰面积计算杂质含量；所述稀释剂为初始流动相。
进一步，本发明所述方法每次进样2～5min的流动相切入废液，避免供试品溶液中辅料对质谱系统的污染。
本发明所述方法的检测器为质谱检测器，采用电喷雾离子源(ESI)、MRM检测模式。检测基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸采用正离子扫描模式，检测基因毒性杂质2-(4-硝基苯基)丁酸采用负离子扫描模式，根据基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸和2-(4- 硝基苯基)丁酸的化学结构和子离子的检出实际，采用各自的专属离子对进行定性和定量分析，各具体的定量离子对、定性离子对如下所示：
基因毒性杂质 定量离子对 定性离子对
2-(4-氨基苯基)丁酸 180→106 180→134；180→93
2-(4-硝基苯基)丁酸 164→149 164→119；164→93；
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明提供了一种分析方法，用于含十二烷基硫酸钠和/或十二烷基硫酸镁和/或吐温-80和/或其它表面活性剂的吲哚布芬片中基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸和/或2-(4-硝基)苯基丁酸的限度测定。所述方法不仅能够实现吲哚布芬片中这两杂质的检测和限度测定，并且方法的专属性强、灵敏度高(定量限不大于限度的1/3，检测限不大于限度的1/10)，同时实验操作简便、快速，对吲哚布芬片的质量控制及用药安全保证具有重要的意义。
附图说明
图1为实施例1中基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸检测限测试的HPLC-MS图谱(其中A为MRM总离子流图谱，B为MRM 180->106提取离子流图谱)；
图2为实施例1中基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸定量限测试的HPLC-MS图谱(其中A为MRM总离子流图谱，B为MRM 180->106提取离子流图谱)；
图3为实施例1中基因毒性杂质2-(4-硝基苯基)丁酸检测限测试的HPLC-MS图谱(其中A为MRM总离子流图谱，B为MRM 164->149提取离子流图谱)；
图4为实施例1中基因毒性杂质2-(4-硝基苯基)丁酸定量限测试的HPLC-MS图谱(其中A为MRM总离子流图谱，B为MRM 164->149提取离子流图谱)；
图5为实施例1中基因毒性杂质2-(4-硝基苯基)丁酸、2-(4-硝基苯基)丁酸混合对照品溶液的HPLC-MS图谱(其中A为MRM总离子流图谱，B为MRM 180->106提取离子流图谱，C为MRM 164->149提取离子流图谱)；
图6为实施例1中200701批样品溶液的HPLC-MS图谱(其中A 为MRM总离子流图谱，B为MRM 180->106提取离子流图谱，C为 MRM 164->149提取离子流图谱)。
图7为实施例1中200803批样品溶液的HPLC-MS图谱(其中A 为MRM总离子流图谱，B为MRM 180->106提取离子流图谱，C为 MRM 164->149提取离子流图谱)。
具体实施方式
以下将参考附图，结合具体实施例对本发明做进一步阐述。所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例中所涉及的对照品来源：
基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸，深圳鼎利生物科技有限公司，纯度：98.17％，批号：DIF18211-01；
基因毒性杂质2-(4-硝基苯基)丁酸，深圳鼎利生物科技有限公司，纯度：99.72％，批号：DIF18210-0。
供试品吲哚布芬片分别选自以下三类：
批次200803和200901，生产商为杭州中美华东制药有限公司；
批次200401和200701，按照专利2020116221090方法自制的；
批次为W84778，生产商为辉瑞。
实施例1液质联用法分离测定吲哚布芬片(处方1、处方2)中基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸和2-(4-硝基苯基)丁酸的含量
(1)色谱条件
仪器：安捷伦6470型高效液相色谱三重四级杆质谱联用仪
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18 4.6×150mm,5μm
流动相：溶剂A：20mmol/L乙酸铵溶液；溶剂B：甲醇，按以下梯度进行洗脱：
时间(min) 0.01 2 8 10 12
溶剂A(％) 90 90 30 90 90
溶剂B(％) 10 10 70 10 10
稀释剂：20mmol/L乙酸铵-甲醇(90:10)溶液
流速：1.0ml/min
柱温：35℃
进样体积：20μl
质谱条件：采用电喷雾离子源，4.5分钟切进质谱并采用正离子扫描模式，检测杂质2-(4-氨基苯基)丁酸；7分钟采用负离子扫描模式，检测杂质2-(4-硝基苯基)丁酸；
干燥气、雾化气、鞘气均为氮气；碰撞气为高纯氮；
干燥气温度为：300℃
干燥气流速为：6l/min
雾化气压力：35psi
鞘气温度：350℃
鞘气流速：12L/min
毛细管电压：+4000V；-3500V
喷嘴电压：+500V；-1000V
MRM检测模式：
基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸定量离子对180→106，裂解电压(Frag)118V，碰撞电压(CE)29V，驻留时间(Dwell)180ms，加速电压(Cell Acc)3V；
基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸定性离子对180→134，裂解电压(Frag)114V，碰撞电压(CE)19V，驻留时间(Dwell)180ms，加速电压(Cell Acc)3V；
基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸定性离子对180→93，裂解电压(Frag)116V，碰撞电压(CE)30；驻留时间(Dwell)180ms，加速电压(Cell Acc)3V；
基因毒性杂质2-(4-硝基苯基)丁酸定量离子对164→149，裂解电压(Frag)90V，碰撞电压(CE)11V，驻留时间(Dwell)200ms，加速电压(Cell Acc)3V；
基因毒性杂质2-(4-硝基苯基)丁酸定性离子对164→119，裂解电压(Frag)90V，碰撞电压(CE)11V，驻留时间(Dwell)200ms，加速电压(Cell Acc)3V；
基因毒性杂质2-(4-硝基苯基)丁酸定性离子对164→93，裂解电压(Frag)90V，碰撞电压(CE)17，驻留时间(Dwell)200ms，加速电压(Cell Acc)3V；
(2)方法学考察
参照中国药典2020年版9101分析方法验证指导原则-杂质限度检查，对本法的专属性、检测限、定量限进行考察；
(3)溶液配制
2-(4-氨基苯基)丁酸对照品贮备溶液：精密称取2-(4-氨基苯基)丁酸对照品10.02mg，置100ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，即得，浓度为98.37μg/ml；
2-(4-硝基苯基)丁酸对照品贮备溶液：精密称取2-(4-硝基苯基)丁酸对照品10.08mg，置100ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，即得，浓度为100.52μg/ml；
混合对照品溶液：取2-(4-硝基苯基)丁酸和2-(4-氨基苯基) 丁酸的贮备液各适量，置同一容量瓶中，用稀释剂稀释使2-(4-硝基苯基)丁酸和2-(4-氨基苯基)丁酸的浓度均为限度浓度(37.5ng/ml)，摇匀，即得。
定量限、检测限测试溶液：取混合对照品溶液适量，分别置100ml 容量瓶中，用稀释剂稀释到刻度，摇匀，浓度分别为限度浓度的50％、 10％、3％、1％、0.3％；
供试品溶液：精密称取处方1、处方2、原研的吲哚布芬片的细粉适量(其中吲哚布芬的含量均约100mg)，分别置10ml容量瓶中，各加5ml DMSO溶解，用稀释剂稀释到刻度，0.45μm过滤，取续滤液，即得供试品溶液，其中吲哚布芬的浓度约10mg/ml；
加标供试品溶液：精密称取处方1、处方2的吲哚布芬片的细粉各适量(吲哚布芬的含量均约100mg)，分别置10ml容量瓶中，加 DMSO 5ml溶解，加入2-(4-氨基苯基)丁酸、2-(4-硝基苯基)丁酸各适量，用稀释剂稀释到刻度，0.45μm过滤，取续滤液，即得加标供试品溶液，其中2-(4-氨基苯基)丁酸和2-(4-硝基苯基)丁酸的浓度均为限度浓度(37.5ng/mL)；
空白辅料溶液：按处方比例分别称取处方1、处方2的各辅料的细粉适量，混匀，各取约半片的量，精密称定，置10ml容量瓶中，加5ml DMSO溶解，用稀释剂稀释到刻度，0.45μm过滤，取续滤液，即得处方1、处方2的空白辅料溶液；
(4)测定方法
专属性测定方法：分别进样稀释剂空白、空白辅料溶液、对照品溶液、供试品溶液、加标供试品溶液，空白溶液及空白辅料溶液应无干扰，供试品溶液、加标供试品溶液的API及其它存在的杂质应无干扰；
定量限、检测限测定方法：分别取稀释剂空白、辅料空白及测试溶液进样，记录色谱图，计算MRM 180→106、MRM 164→149提取色谱图中主峰信噪比，当信噪比约为3时对应浓度为检测限，当信噪比约为10时对应浓度为定量限；
样品中2-(4-氨基苯基)丁酸、2-(4-硝基苯基)丁酸残留量测定方法：分别进样稀释剂空白、辅料空白溶液与对照品溶液6份，记录色谱图；对照品图谱中，MRM 180→106、MRM164→149提取色谱图中主峰峰面积变化的RSD均不得过20.0％，按外标法以峰面积计算样品中两杂质的残留量。
(5)测定结果
专属性：2-(4-氨基苯基)丁酸、2-(4-硝基苯基)丁酸峰在此条件下均能达到基线分离，空白及空白辅料溶液无干扰，供试品溶液、加标供试品溶液的API及其它可能存在的杂质无干扰。
定量限、检测限测试数据见下表1
表1 定量限、检测限测试数据
Figure BDA0003356505140000111
Figure BDA0003356505140000121
2批样品测试数据见下表2
表2 5批样品测试数据
Figure BDA0003356505140000122
方法学考察及样品测定结果表明，本法专属性好、灵敏度高，可用于样品中两杂质的同时检测。其中定量限、检测限测试图谱分别见附图1～4、典型对照品溶液图谱见附图5、样品溶液图谱见附图6 (200701批)、附图7(200803批)。
实施例2
(1)除色谱柱和洗脱梯度外，其它色谱条件均同实施例1，色谱柱为ZORBAXEclipse XDB-C8 4.6×150mm,5μm，洗脱梯度为：
时间(min) 0.01 3 8 10 12
溶剂A(％) 90 90 30 90 90
溶剂B(％) 10 10 70 10 10
(2)溶液配制及测定方法均同实施例1
(3)进样及结果分析
分别取稀释剂空白、辅料空白溶液、对照品溶液、供试品溶液、加标供试品溶液进样，记录色谱图。结果空白、辅料空白溶液不干扰测定，加标供试品溶液所记录图谱中，2-(4-氨基苯基)丁酸峰、2- (4-硝基苯基)丁酸峰均能达到基线分离，API及样品中可能存在的杂质无干扰；测得供试品溶液中两杂质的含量(见下表3)同实施例 1测定结果无显著性差异，表明该色谱柱及方法可行。
表3 5批样品测试数据
Figure BDA0003356505140000131
对比例1
考察不同流动相体系(流动相3)或相同体系不同PH流动相(流动相1、流动相2)对液质联用法分离测定吲哚布芬片中基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸和2-(4-硝基苯基)丁酸灵敏度的影响
(1)除流动相组成改变外，其它色谱条件均同实施例1
(2)设置以下三种流动相，考察对方法灵敏度的影响
流动相1：溶剂A：20mmol/L乙酸铵(用乙酸调节pH至 2.5±0.1)，溶剂B：甲醇；
流动相2：溶剂A：20mmol/L乙酸铵(用氨水调节pH至 7.5±0.1)，溶剂B：甲醇；
流动相3：溶剂A：水，溶剂B：甲醇；
稀释剂：初始流动相；
(3)溶液配制、洗脱梯度
均同实施例1；
(4)测定结果
分别取稀释剂空白及50％限度浓度混合对照品溶液进样，用这三种流动相按实施例1所述梯度洗脱，记录色谱图，计算MRM 180→106、MRM 164→149提取色谱图中主峰信噪比。结果显示，用流动相1按此梯度洗脱，对照品溶液图谱中(浓度为限度浓度的 50％)，2-(4-硝基苯基)丁酸S/N为4.2，小于10，灵敏度不能满足样品检测及质量控制的要求；用流动相2按此梯度洗脱，对照品溶液图谱中(浓度为限度浓度的50％)，2-(4-氨基苯基)丁酸S/N为 6.7，小于10，灵敏度不能满足样品检测及质量控制的要求；而用流动相3按此梯度洗脱，2-(4-硝基苯基)丁酸、2-(4-氨基苯基)丁酸两主峰的峰形均很差，不适合这两种杂质的检测。
表4 各流动相S/N测试数据
Figure BDA0003356505140000141
对比例2
考察不同的质谱检测模式(SIM)对液质联用法分离测定吲哚布芬片中基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸和2-(4-硝基苯基)丁酸专属性的影响
(1)色谱条件
仪器：安捷伦6470型高效液相色谱三重四级杆质谱联用仪
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18 4.6×150mm,5μm
流动相：溶剂A：20mmol/L乙酸铵溶液；溶剂B：甲醇，按以下梯度进行洗脱：
时间(min) 0.01 2 8 10 12
溶剂A(％) 90 90 30 90 90
溶剂B(％) 10 10 70 10 10
稀释剂：20mmol/L乙酸铵-甲醇(90:10)溶液
流速：1.0mL/min
柱温：35℃
进样体积：20μl
质谱条件：采用电喷雾离子源，基因毒性杂质2-(4-氨基苯基) 丁酸采用正离子扫描模式，基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸采用负离子扫描模式；
干燥气、雾化气、鞘气均为氮气；碰撞气为高纯氮；
干燥气温度为：300℃
干燥气流速为：6L/min
雾化气压力:35psi
鞘气温度：350℃
鞘气流速：12L/min
毛细管电压：+4000V；-3500V
喷嘴电压：+500V；-1000V
SIM检测模式：
基因毒性杂质2-(4-氨基苯基)丁酸选取质荷比(m/z)180，裂解电压(Frag)118V，驻留时间(Dwell)180ms，加速电压(Cell Acc) 3V；
基因毒性杂质2-(4-硝基苯基)丁酸选取质荷比(m/z)164，裂解电压(Frag)90V，驻留时间(Dwell)200ms，加速电压(Cell Acc) 3V；
(2)溶液配制
同实施例1；
(3)进样及结果分析
分别取稀释剂空白及混合对照品溶液(50％限度浓度)进样，记录色谱图，计算提取色谱图中两主峰信噪比。结果2-(4-氨基苯基) 丁酸、2-(4-硝基苯基)丁酸两主峰峰形均较差，S/N分别为6.2、7.8，均小于10。用该模式测定，方法的灵敏度不能满足样品中这两种杂质测定及限度制订的要求。
最后说明的是，以上实施例仅用以详细说明本发明的技术方案而非限制，本领域的专业技术人员可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种吲哚布芬片中基因毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述方法以十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶为固定相，以溶剂A和溶剂B的混合液为流动相，通过高效液相色谱-质谱联用法对基因毒性杂质进行分离测定，所述的溶剂A选自甲酸铵或乙酸铵中的一种或两种混合的水溶液，所述溶剂B选自含有甲醇、乙腈或两者混合的任意一种。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的基因毒性杂质为2-(4-氨基)苯基丁酸和/或2-(4-硝基)苯基丁酸。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的吲哚布芬片的辅料中含有表面活性剂；进一步，所述的表面活性剂优选为吐温80、十二烷基硫酸钠或十二烷基硫酸镁中的一种或任意几种。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述溶剂A的浓度优选为5～50mmol/L；进一步，所述溶剂A优选为5～50mmol/L的乙酸铵水溶液。
5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述溶剂A的pH控制在3～7之间，优选为6～7之间。
6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的流动相的流速为0.3～1.2mL/min。
7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的流动相采用梯度洗脱，所述的洗脱梯度为：0.01～2-3min，溶剂A与溶剂B的体积比为90:10；8min，溶剂A与溶剂B的体积比为42-30:58-70；10～12min，溶剂A与溶剂B的体积比为90:10。
8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱柱柱温箱温度为20℃-50℃。
9.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱柱的规格为4.6×150mm,5μm或4.6×150mm,2.7μm或4.6×150mm,2.5μm或4.6×150mm,3.5μm或4.6×150mm,3.0μm或4.6×250mm,5μm。
10.如权利要求1至9任意一项所述的检测方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
1)样品制备
取吲哚布芬片的细粉适量，精密称定，加有机溶剂适量使吲哚布芬充分溶解并用稀释剂定量稀释制成每1ml中约含吲哚布芬5～10mg的溶液，作为供试品溶液；取基因毒性杂质适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成浓度约为18.75～37.5ng/ml的溶液，作为对照品溶液；所述稀释剂为初始流动相；
2)洗脱条件
以溶剂A和溶剂B的混合液为流动相，流速为0.3～1.2mL/min；洗脱梯度为：0.01～2-3min，溶剂A与溶剂B的体积比为90:10；8min，溶剂A与溶剂B的体积比为42-30:58-70；10～12min，溶剂A与溶剂B的体积比为90:10；
3)分离测定
分别取供试品溶液和对照品溶液各5～20μl进样，分别记录定量、定性离子对下的离子流图，照外标法以定量离子对峰面积计算杂质含量。
CN202111352857.6A 2021-11-16 2021-11-16 一种吲哚布芬片中基因毒性杂质的检测方法 Pending CN116136515A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111352857.6A CN116136515A (zh) 2021-11-16 2021-11-16 一种吲哚布芬片中基因毒性杂质的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111352857.6A CN116136515A (zh) 2021-11-16 2021-11-16 一种吲哚布芬片中基因毒性杂质的检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116136515A true CN116136515A (zh) 2023-05-19

Family

ID=86332512

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111352857.6A Pending CN116136515A (zh) 2021-11-16 2021-11-16 一种吲哚布芬片中基因毒性杂质的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116136515A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112611827B (zh) 测3种雌激素的化学衍生-超高效液相色谱-串联质谱法
CN111398475A (zh) 一种用高效液相色谱法分析硫酸羟氯喹制剂组成的方法
CN108072712B (zh) 一种sd大鼠血浆中新化合物wsj-557的血药浓度定量分析方法
CN109900830B (zh) 采用hplc分离测定塞来昔布中磺酰胺类杂质的方法及应用
CN107271592B (zh) 一种盐酸替吡拉西与其相关杂质完全分离的液相色谱纯度检测方法
CN116136515A (zh) 一种吲哚布芬片中基因毒性杂质的检测方法
CN114487141A (zh) 一种吲哚布芬原料药中基因毒性杂质的检测方法
CN112946136B (zh) 奥泽沙星中甲磺酸酯含量的测定方法
CN114280191A (zh) 一种双半胱氨酸及其制剂中有关物质的检测方法
CN104991027B (zh) 降低lc‑ms测试物中不挥发性缓冲盐含量的方法
CN110618219B (zh) 一种三氟甲磺酸残留溶剂的检测方法
CN114354801A (zh) （R）-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法
CN110231416B (zh) 一种利用hplc测定2-碘酰基苯甲酸有关物质的方法
CN115128177A (zh) 利用hplc法分析测定更昔洛韦缩合物中基因毒性杂质的方法
CN114594168A (zh) 一种吲哚布芬杂质的检测方法
CN114264765A (zh) 一种利用hplc测定格列美脲中间体中有关物质的分析方法
CN111812253A (zh) 一种检测含有苯并咪唑结构化合物中潜在基因毒性杂质的方法
CN107656005B (zh) 盐酸厄洛替尼与潜在杂质的分离与测定方法
CN112505196B (zh) 一种人血浆中硝酸异山梨酯、2-单硝酸异山梨酯和5-单硝酸异山梨酯的定量分析方法
CN114609272B (zh) 甲磺司特杂质jh-zzd的检测方法
CN114354788B (zh) 一种Molnupiravir原料及其制剂中有关物质的测定方法
CN114235972B (zh) 一种测定利格列汀杂质rbp-1含量的方法
CN117741022A (zh) 一种硼替佐米中间体中残留杂质的检测方法
CN115290792A (zh) 一种原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱联用检测方法
CN115840008A (zh) 一种盐酸乌拉地尔原料药中基因毒性杂质的测定方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination