CN113122447A - 用于修复受损胃黏膜的海参肽及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本申请公开用于修复受损胃黏膜的海参肽及其制备方法和应用，制备方法包括：将新鲜海参预处理后粉碎制得料液，在蒸煮罐内加热维持料液的温度在38～39℃；将料液从蒸煮罐泵入自溶反应器，反应后返回蒸煮罐；重复该步骤进行循环自溶反应，当料液滴速达到设定值终止反应；收集料液，经过初虑、灭酶、脱色、膜过滤，得到相对分子量为5500‑6500Da的滤液；所述自溶反应器包括密封的箱体，所述箱体相对的两个侧壁分别设置有进料口和出料口，所述箱体内部设置有衔接进料口和出料口倾斜设置的反应坡槽以及用于向反应坡槽投射紫外光的紫光光源紫外光源。本申请制备得到的海参肽用于制备修复受损胃黏膜的药品、食品或保健品。具有高效、快速修复动物受损胃黏膜的功能。

Description

用于修复受损胃黏膜的海参肽及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及海洋生物制品技术领域，具体涉及一种修复受损胃黏膜的海参肽及其制备方法。
背景技术
东海海参(Acaudina molpadioides Semper)属芋参目(Molpadida)尻参科(Caudinidae)，俗称香参、乌参、海地瓜。盛产于亚热带沙质海区的潮间带，尤以我国东海区资源最为丰富，目前的蕴藏量约100万吨，每年捕获量约3000-5000吨。长期以来，东海海参资源未被充分利用，究其原因，主要是野生东海海参的体表覆有一层与体壁紧密结合、富含多种有害重金属的污垢层，限制了东海海参的开发利用。
据史书记载和现代科学研究，东海海参是一种优良的药食同源、高蛋白低脂肪食品，具有丰富的营养，如富含精氨酸、海参皂甙、海参多糖等。人们最早食用海参的文献始于明人姚可成汇集的《食物本草》，其中对海参有详细描述：‘海参，坐东南海中，其形如虫，色黑，身多傀儡。一种长五六寸者，功擅补益。肴品中之最珍贵者也。味甘咸平，无毒，主补元气。滋益五脏六腑，去三焦火热。清代赵学敏《本草纲目拾遗》称:海参性温补，足敌人参，故名海参。中医认为:海参性味温、咸。入心、肾、脾、肺经。具有补肾益精养血润燥，镇惊宁心止血消炎制酸止痛补脑益智等功效。主要用于虚劳体弱肺结核咯血.贫血、高血压、糖尿病、胃及十二指肠溃疡、大便干结、癫痈、眩晕耳鸣、小便频数、腰酸乏力、阳痪、产后便秘、梦遗滑精等症。
廖玉麟(廖玉麟编著.中国动物志棘皮动物门海参纲[M].北京：科学出版社，1997,247)等研究指出，东海海参具有丰富的营养成分和药用价值，其中氨基酸总量、海参皂甙和海参多糖的含量都高于黄玉海参。赵元晖(赵元晖，李八方，曾名湧等.一种低值海参蛋白酶解物降血压活性的研究[J].渔业现代化，2009，36(1):56－59.)等从东海海参的酶解产物中提取到了具有很强抑制ACE(血管紧张素转换酶)活性的海参肽，在动物试验中显示其具有显著的抗高血压降血压效果。励建荣(陈卉卉，于平，励建荣.东海海参胶原蛋白多肽的制备及清除自由基功能研究[J].中国食品学报2010，V01.10(1):19－25)等从东海海参的酶解产物中提取到了具有清除羟自由基抗氧化功能的海参肽。
我国人口众多，由于饮食习俗等原因，胃病的发病率居高不下，据2018年世界卫生组织统计，全球共有5亿胃病患者，中国占1.2亿。同时我国胃癌的发病率在目前所有恶性肿瘤占第二位，死亡率高居第三位。尤其是近年来，胃病发病年轻化，越来越多人年纪轻轻就患上胃病。而据最新调查数据显示，年轻人中胃病发病率仍在上升，19岁至35岁青年人胃癌发病率比30年前翻了一番。
胃黏膜是胃腔内面的黏膜，是胃壁的最内层，也是胃的主要屏障。新鲜胃黏膜呈淡粉色。胃在空虚时或半充盈时，胃黏膜形成许多皱壁。胃小弯处约有4～5条纵行皱壁，胃大弯处多为横行或斜行皱壁，其他部分的皱壁形状不规则。胃黏膜由上皮、固有层及粘膜肌层3层组成。临床所见的各型胃炎(及溃疡)主要为胃黏膜的病变。胃黏膜病变较多见于胃的炎症、溃疡、黏膜脱垂等，有部分人群会进一步恶化成为胃癌。
据调研，目前进入医保用于治疗胃病的近百种中、西胃药未见专门修复受损胃黏膜的，按功能来分，大部分都是消炎、杀菌和在胃内壁形成一层化学粘膜层，对病灶部位只起到暂时隔离作用。
发明内容
本申请提供一种用于修复受损胃黏膜的海参肽及其制备方法，本申请得到的海参肽有别于采用酶水解方法制得的海参肽，是通过东海海参自溶液制得的，并且具有高效、快速修复动物受损胃黏膜的功能，本申请得到的海参肽的相对分子质量分布在5500-6500Da范围内。
一种海参肽的制备方法，包括以下步骤：
将新鲜海参预处理后粉碎制得料液，在蒸煮罐内加热维持料液的温度在38～39℃；
将料液从蒸煮罐泵入自溶反应器，反应后返回蒸煮罐；重复该步骤进行循环自溶反应，当料液滴速达到设定值终止反应；
收集料液，经过初滤、灭酶、脱色、膜过滤，得到相对分子量为5500-6500Da的滤液；
所述自溶反应器包括密封的箱体，所述箱体相对的两个侧壁分别设置有进料口和出料口，所述箱体内部设置有衔接进料口和出料口倾斜设置的反应坡槽以及用于向反应坡槽投射紫外线的紫外线光源。
可选的，所述的新鲜海参预处理包括将新鲜海参去除内脏、石灰嘴并洗净后用氢氧化钙溶液浸泡；所述氢氧化钙溶液的质量浓度为0.3～0.8％；氢氧化钙溶液浸泡时间为5-10min。
可选的，所述氢氧化钙溶液的质量浓度为0.5％。
可选的，料液再被粉碎至20目。
可选的，所述的料液滴速是对料液自溶反应效果的中间检测，具体操作是用玻璃漏斗加一层快速滤纸，然后将料液加到滤纸上面，用秒表计时，测定每分钟的滴数即为滴速。可选的，所述料液滴速的设定值为30滴/分～35滴/分。
可选的，自溶完成的判断方法为：添加二价钙离子后继续反应2-4小时，从开始反应计时，反应2.5小时后开始中间测试自溶液的滴速(滴/分)；当海参自溶液的滴速达到30-35滴/分时，自溶反应完成。
紫外线光源的光强度以每㎡反应坡槽上方安装3-5支功率为40W的紫外线灯管且紫外线灯管距离料液表面的垂直距离为10～30cm计。
可选的，所述料液流经反应坡槽的厚度为3～8cm；所述料液流经反应坡槽的流速为0.3-1.0m3/h。循环自溶反应过程中，料液每次在自溶反应器中的停留时间为2.5小时～4小时。
料液流经反应槽时的厚度以及流速均通过调整料泵变频电机的转速进行控制。
可选的，所述的循环自溶反应过程中，向料液中加二价钙离子；按w/w占总液体量的0.01-0.03％添加。以促进海参胞内酶的活性，加速自溶反应。反应过程中补充的二价钙离子以二价钙离子溶液的形式添加，溶液中二价钙离子浓度为1-10％。可选的，加二价钙离子的时机为循环反应进行一小时时或一小时后。
可选的，所述灭酶的过程为：将自溶反应器内的物料全部打到蒸煮罐附属贮料罐内，并将物料通过40目振动筛过滤，滤液打回蒸煮罐，升温到90-92℃，保温灭酶30-60分钟。
可选的，所述脱色的过程为：待蒸煮罐内物料温度降至78-80℃，加入物料液体总量1-3％(w/w)的糖用活性炭，保温脱色0.5h；再加入物料液体总量1-3％(w/w)糖用活性炭，保温脱色0.5h；脱色完成后将物料用板框压滤机过滤。
可选的，所述的膜过滤的过程为：将通过板框过滤的料液再通过膜过滤器精细过滤后，打入多级膜过滤器贮料罐，打开膜过滤器压力泵，分段收集滤液，对收集的滤液编号。
可选的，所述的收集滤液的过程为：按编号取样测定滤液的相对分子质量，将相对分子质量5500-6500Da的滤液合并。
可选的，还包括对相对分子质量5500-6500Da的滤液的浓缩、干燥过程。
可选的，所述的浓缩的过程为：将合并的滤液打入高真空旋转薄膜浓缩机贮料罐，打开浓缩机，控制浓缩温度45-47℃，将滤液浓缩到含固量25-45％止。
可选的，所述的干燥的过程为：将浓缩液打入喷雾干燥机贮料罐，打开离心式喷雾干燥机(带粉体冷却系统)，输入试喷参数，将设置调节到自动，控制成品海参肽粉的水分为2-2.5％，喷雾干燥。
可选的，喷雾干燥机出来的海参肽经粉体冷却系统急冷后进入成品贮料罐，经过取样检测合格、包装后即为成品海参肽。
可选的，可将相对分子质量1000Da以下和5500-6500Da的二种海参肽分别收集、浓缩和喷雾干燥，可以得到二种不同用途的海参肽，前者用于化妆品原料，后者用于修复受损胃黏膜。
酶解罐可采用CN209081864U公开的蒸煮酶解罐，也可以用不锈钢反应釜或其它相应设备替代。如采用前者粉碎过程可在蒸煮酶解罐中进行，如采用后者，先粉碎后再投入不锈钢反应釜或其他相应替代设备中。
可选的，所述箱体的内部靠近进料口的位置设有用于将来自进料口的料液导流至反应坡槽的导流板。
可选的，所述导流板为平行于进料口所在侧侧壁的竖向挡板，所述竖向挡板的底端与反应坡槽之间预留间隙。
可选的，所述竖向挡板的底端带有一段顺料液流向的折弯尾部，所述折弯尾部与反应坡槽之间预留间隙。
可选的，所述紫外线光源为紫外线灯管。可选的，所述紫外线灯管为若干根，在所述箱盖内侧并行安装。
可选的，每㎡反应坡槽上方安装功率为40W的紫外线灯管3-5支；紫外线灯管距离料液表面的垂直距离为10-30cm。紫外线灯管均匀分布，以15支为例，适用于反应坡槽面积5㎡的箱体。
可选的，所述海参肽紫外线自溶反应器的出料口的高度高于所述酶解罐的进料口。所述蒸煮罐的出料口与所述海参肽紫外线自溶反应器的进料口之间通过料泵连接。
可选的，所述反应坡槽自进料口向出料口方向逐渐向下，用于接纳从进料口进入箱体的料液以及将反应后的料液从出料口输出。
首先将鲜活的东海海参去除内脏、石灰嘴，并洗净，再用0.5％的氢氧化钙溶液浸泡5-10分钟，转入蒸煮罐，打开剪切机，粉碎至20目，再搅拌、加热至38-39℃。将物料用料泵打到自溶反应器内，经导流板约束成平铺的薄层进入自溶反应坡槽，打开紫外线灯，进行自溶反应，蒸煮罐和自溶反应器通过料泵连接成一个封闭、保温的自溶循环反应系统，反应后的物料由自溶反应坡槽靠液位差经出料口自流进入蒸煮罐，加热后，再由料泵经进料口打入自溶反应器，进行循环自溶反应。
本申请还提供一种由所述制备方法制备得到的海参肽，所述海参肽的相对分子质量为5500-6500Da。
本申请在研究东海海参自溶发生机理过程中发现海参的自溶液里有一种对动物受损胃黏膜具有很好修复功能的海参肽，其相对分子质量在5500-6500Da范围内。并且，此种海参肽虽然也可以通过外加蛋白酶对海参进行酶水解制得，但是收得率和活性都要比由东海海参自溶液制得的低得多。
本申请还提供一种如所述的海参肽在用于制备修复受损胃黏膜的药品、食品或保健品中的应用。
与现有技术相比，本申请至少具有如下有益效果：
(1)本申请发现东海海参的自溶液里有一种对动物受损胃黏膜具有很好修复功能的海参肽，其相对分子质量在5500-6500Da范围内。并且，此种海参肽虽然也可以通过添加蛋白酶对海参进行酶水解制得，但是收得率和活性都要比由东海海参自溶液制得的低得多。
(2)本申请通过动物试验，验证了本申请的海参肽对受损动物胃黏膜具有很好的修复效果，此种海参肽对动物的胃黏膜具有很好的亲和性，可以被胃黏膜组织吸收，促进受损胃黏膜组织的快速修复。
(3)为了到达本申请的目的，本申请设计了一种利用紫外线进行海参肽自溶的自溶反应器，以避免普通自溶反应存在的海参易发生腐败、产品微生物很难控制活性偏低等问题。并且将其通过料泵与蒸煮罐组成一个封闭的保温循环自溶反应系统，使得海参的自溶反应在一个密闭、充分接受紫外线照射、薄层循环流动的环境下进行，与采用普通的海参自溶法(海参容易发生腐败，微生物很难控制)和添加蛋白酶酶水解法相比，可缩短自溶时间1/3-1/2，物料受微生物污染的机会大大减少，海参肽(相对分子质量在5500-6500Da)的活性和收得率分别高30-50％和10-20％。
(4)此种海参肽可以通过保健品或复方中成药的方式，用于辅助胃病病人的治疗，既可使低值的东海海参通过精深加工大幅提高经济效益，亦能给胃病病人的治疗提供一种促进治疗的辅助方法。
附图说明
图1是本申请的海参肽自溶循环反应装置。
图2是本申请的海参肽紫外自溶反应器。
图3是海参肽修复大鼠受损胃黏膜效果比较图。
图中所示附图标记如下：
10-自溶反应器 11-箱体 12-进料口 13-箱盖
14-紫外线光源 15-反应坡槽 16-出料口 17-导流板
20-蒸煮罐 30-料液泵
具体实施方式
下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
为了更好地描述和说明本申请的实施例，可参考一幅或多幅附图，但用于描述附图的附加细节或示例不应当被认为是对本申请的发明创造、目前所描述的实施例或优选方式中任何一者的范围的限制。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请。
如图1所示，一种海参肽自溶循环反应系统，包括自溶反应器10、酶解罐20和料泵30，蒸煮罐可采用ZL201821359590.7(CN209081864U)中公开的蒸煮酶解罐，在另外的实施方式中，酶解罐也可采用不锈钢反应釜或其它相应设备替代。
自溶反应器的结构如图1所示，包括箱体11和箱盖13，箱体11的其中一侧侧壁上设置进料口12，与之相对的另一侧侧壁上设置出料口16，进料口的高度高于出料口的高度。箱体11内设置反应坡槽15，反应坡槽的进料端位于进料口下方、出料端与出料口衔接，反应坡槽呈自进料口向出料口侧逐渐向下倾斜的斜坡状。箱盖13可拆卸安装于箱体11上，箱盖内侧安装紫外线光源14。
海参料液自进料口送入箱体内，在料液自身重力作用下沿反应坡槽滑动至出料口，滑动过程中被箱盖内侧的紫外线光源14照射，进行自溶反应。
进料口的高度高于出料口的高度，料液沿反应坡槽直接流向出料口，一种实施方式中，进料口设置在靠近箱盖处，出料口设置在靠近箱体底板处。
为了使进料口送入的料液能更好的落入反应坡槽的进料端，一种实施方式中，在箱体内且靠近进料口处设置导流板17，导流板的作用为将来自进料口的料液更好的导向反应斜坡的进口端，作为导流板的一种实施方式，导流板为平行于进料口所在箱体侧壁的竖向挡板，竖向挡板的底部与反应坡槽之间预留间隙用于过料。在另一种实施方式中，竖向挡板的底部还带有一段向出料口侧弯折的弯折拖尾，折弯拖尾部与反应坡槽之间预留间隙，用于料液流通。
由进料口送入的料液在导流板作用下均被送入反应坡槽的进料端，不会存在直接冲入反应坡槽中心的情况，保证进入料液的反应时间均衡同时也起到延长反应时间作用。
箱盖与箱体之间可拆卸安装，可以是与箱体之间铰接安装，也可以是独立于箱体，在使用时直接扣盖上去，紫外线光源14安装于箱盖的内侧，打开光源，照射箱体内的料液。紫外线光源可以有多种实施方式，一种实施方式中，紫外光线源采用紫外线灯管，根据箱体大小，采用不同数量的紫外线灯管并联安装于箱体内侧，紫外线灯管的一种安装方式中，相邻紫外线灯管平行安装于箱盖内侧，所有灯管由同一开关控制，紫外灯管的电源可直接连接室内的电源控制柜。
一种实施方式中，紫外线灯管采用40w/支规格，超市采购。相邻紫外线灯管之间均匀分布，以每㎡反应坡槽上方安装功率为40W的紫外线灯管3-5支、紫外线灯管距离料液表面的垂直距离为10-30cm为宜。箱体可采用常规的立方体箱体。箱体、箱盖可全部用304食品级不锈钢制造。进料口、出料口均采用口径50mm、304食品级不锈钢制造的标准件。
一种实施方式中，自溶反应器10高于酶解罐20，来自紫外自溶反应器的料液可自流进入酶解罐内，酶解罐的出料口与紫外线自溶反应器的进料口之间由料泵30连接。
通过上述循环系统进行自溶反应的总体流程如下：
处理干净的海参原料经过蒸煮罐中的剪切机，粉碎到20目，在蒸煮罐中加热至38-39℃，用料泵将加热后的海参物料经自溶反应器的进料口打入自溶反应器内，经过导流板约束成平铺的薄层进入自溶反应坡槽，打开紫外线灯，进行自溶反应，蒸煮罐和自溶反应器通过料泵连接成一个封闭、保温的自溶循环反应系统，反应后的物料由自溶反应坡槽靠液位差经出料口自流进入蒸煮罐，加热后，再由料泵经进料口打入自溶反应器，进行循环自溶反应。生产完成后可以打开紫外线灯箱上盖，对自溶反应器的内部进行清洗。
自溶完成后通过自溶反应器的出料口放出物料到蒸煮罐中，进行高温灭活，完成后进行板框过滤、精细膜过滤和多级膜过滤，分段收集滤液，对收集的滤液编号，测定滤液的相对分子质量，将相对分子质量5500-6500Da的滤液合并，真空旋转薄膜浓缩，打开离心式喷雾干燥机(带粉体冷却系统)，输入试喷参数，将设置调节到自动，控制成品海参肽粉的水分为2-2.5％，喷雾干燥，喷雾干燥机出来的海参肽经粉体冷却系统急冷后进入成品贮料罐，经过取样检测合格、包装后即为成品海参肽。
一种实施方式中，海参肽的制备工艺如下：
(1)首先将鲜活的东海海参去除内脏、石灰嘴，并洗净，再用0.5％的氢氧化钙溶液浸泡5-10分钟，转入蒸煮罐，打开剪切机，粉碎至20目，再搅拌、加热至38-39℃。
(2)将物料用料泵打到自溶反应器内，经导流板约束成平铺的薄层进入自溶反应坡槽，打开紫外线灯，进行自溶反应，蒸煮罐和自溶反应器通过料泵连接成一个封闭、保温的自溶循环反应系统，反应后的物料由自溶反应坡槽靠液位差经出料口自流进入蒸煮罐，加热后，再由料泵经进料口打入自溶反应器，进行循环自溶反应。
(3)反应一小时后加入二价钙离子(按总液体量的0.01-0.03％，w/w添加)以促进海参胞内酶的活性，加速自溶反应，添加二价钙离子后继续反应2-4小时，从开始反应计时，反应2.5小时后开始中间测试自溶液的滴速(滴/分)。当海参自溶液的滴速达到30-35滴/分时，自溶反应完成.
(4)将自溶反应器内的物料全部打到蒸煮罐附属贮料罐内，并将物料通过40目振动筛过滤，滤液打回蒸煮罐，升温到90-92℃，保温灭酶30-60分钟。
(5)待蒸煮罐内物料温度降至78-80℃，加入物料液体总量1-3％(w/w)的糖用活性炭，保温脱色0.5h；再加入物料液体总量1-3％(w/w)的糖用活性炭，保温脱色0.5h；脱色完成后将物料用板框压滤机过滤。
(6)将通过板框过滤的料液再通过膜过滤器精细过滤后，打入多级膜过滤器贮料罐，打开膜过滤器压力泵，分段收集滤液，对收集的滤液编号。
(7)按编号取样测定滤液的相对分子质量，将相对分子质量5500-6500Da的滤液合并。
(8)将合并的滤液打入高真空旋转薄膜浓缩机贮料罐，打开浓缩机，控制浓缩温度45-47℃，将滤液浓缩到含固量25-45％止。
(9)将浓缩液打入喷雾干燥机贮料罐，打开离心式喷雾干燥机(带粉体冷却系统)，输入试喷参数，将设置调节到自动，控制成品海参肽粉的水分为2-2.5％，喷雾干燥。
(10)喷雾干燥机出来的海参肽经粉体冷却系统急冷后进入成品贮料罐，经过取样检测合格、包装后即为成品海参肽。
采用上述方法，利用海参自溶的特性，通过海参自溶反应器对海参自溶的强化，可以获得具有高效、快速修复动物受损胃黏膜功能的海参肽，此种海参肽的相对分子质量分布在5500-6500Da范围内，本申请获得的海参肽与采用普通的海参自溶法(海参容易发生腐败，微生物很难控制)和添加蛋白酶酶水解法相比，海参肽(相对分子质量分布在5500-6500Da)的活性和收得率分别高30-50％和10-20％。
另一种实施方式中，步骤(1)、(2)、(3)、(4)中，可将相对分子质量1000Da以下和5500-6500Da的二种海参肽分别收集、浓缩和喷雾干燥，可以得到二种不同用途的海参肽，前者用于化妆品原料，后者用于制备修复受损胃黏膜的药物或保健食品。
实施例中涉及的材料均为市面上可购得产品。
以下实施例中溶液的浓度如无特殊说明均指质量百分数。
实施例1
本实施例海参肽的加工方法采用蒸煮酶解罐，步骤如下：
(1)首先将鲜活的东海海参去除内脏、石灰嘴，并洗净，再用0.5％的氢氧化钙溶液浸泡10分钟，转入蒸煮酶解罐，打开剪切机，粉碎至20目，再搅拌、加热至38-39℃。此处0.5％的氢氧化钙溶液是指100g溶液中溶解0.5g氢氧化钙。
(2)将物料用料泵打到自溶反应器内，经导流板约束成平铺的薄层进入自溶反应坡槽，打开紫外线灯，进行自溶反应，蒸煮酶解罐和自溶反应器通过料泵连接成一个封闭、保温的自溶循环反应系统，反应后的物料由反应坡槽靠液位差经出料口自流进入蒸煮罐，加热后，再由料泵经进料口打入自溶反应器，进行循环自溶反应。该实施例的循环反应过程中，通过调整料泵变频电机的转速，控制料液流经反应坡槽的厚度为5cm左右、流速为0.5m3/h，按此流速，料液每次循环在紫外线自溶反应器内停留时间为4小时左右。紫外灯以每㎡反应坡槽上方安装功率为40W的紫外线灯管4支、紫外线灯管距离料液表面的垂直距离为20cm。
(3)反应一小时后加入二价钙离子(按总液体量的0.02％，w/w添加)以促进海参胞内酶的活性，加速自溶反应，添加二价钙离子后继续反应3小时，从开始反应计时，反应2.5小时后开始中间测试自溶液的滴速(滴/分)。当海参自溶液的滴速达到30-35滴/分时，自溶反应完成.
(4)将自溶反应器内的物料全部打到蒸煮酶解罐附属贮料罐内，并将物料通过40目振动筛过滤，滤液打回蒸煮酶解罐，升温到90-92℃，保温灭酶45分钟。
(5)待蒸煮酶解罐内物料温度降至78-80℃，加入物料液体总量2％(w/w)的糖用活性炭，保温脱色0.5h；再加入物料液体总量2％(w/w)的糖用活性炭，保温脱色0.5h；脱色完成后将物料用板框压滤机过滤。(6)将通过板框过滤的料液再通过膜过滤器精细过滤后，打入多级膜过滤器贮料罐，打开膜过滤器压力泵，分段收集滤液，对收集的滤液编号。
(7)按编号取样测定滤液的相对分子质量，将相对分子质量5500-6500Da的滤液合并。
(8)将合并的滤液打入高真空旋转薄膜浓缩机贮料罐，打开浓缩机，控制浓缩温度45-47℃，将滤液浓缩到含固量30％止。
(9)将浓缩液打入喷雾干燥机贮料罐，打开离心式喷雾干燥机(带粉体冷却系统)，输入试喷参数，将设置调节到自动，控制成品海参肽粉的水分为2-2.5％，喷雾干燥。
(10)喷雾干燥机出来的海参肽经粉体冷却系统急冷后进入成品贮料罐，经过取样检测合格、包装后即为成品海参肽。
本实施例的海参肽粉用于制备修复受损胃黏膜的药品或保健食品和特殊医学用途食品。
实施例2
本实施例的海参肽的加工方法采用不锈钢反应釜，步骤如下：
(1)首先将鲜活的东海海参去除内脏、石灰嘴，并洗净，再用0.5％的氢氧化钙溶液浸泡10分钟，用剪切机粉碎至20目，然后转入不锈钢反应釜，搅拌、加热至38-39℃。
(2)将物料用料泵打到自溶反应器内，经导流板约束成平铺的薄层进入自溶反应坡槽，打开紫外线灯和不锈钢反应釜搅拌机、加热和料泵，进行自溶反应，不锈钢反应釜和紫外线自溶循环反应器通过料泵连接成一个封闭、保温的自溶循环反应系统，反应后的物料由反应坡槽出料口靠液位差流入不锈钢反应釜加热后经料泵打入紫外线自溶循环反应器内，进行循环自溶反应。该实施例的循环反应过程中，通过调整料泵变频电机的转速，控制料液流经反应坡槽的厚度为8cm左右、流速为1.0m3/h，按此流速，料液每次循环在紫外自溶器内停留时间为2小时左右。紫外灯以每㎡反应坡槽上方安装功率为40W的紫外线灯管4支、紫外线灯管距离料液表面的垂直距离为20cm。
(3)反应一小时后加入二价钙离子(按总液体量的0.02％，w/w添加)以促进海参胞内酶的活性，加速自溶反应，继续反应4小时，从开始反应计时，反应2.5小时后开始中间测试自溶液的滴速(滴/分)。当自溶液的滴速达到30-35滴/分时，自溶反应完成.
(4)将自溶反应器内的物料全部打到不锈钢反应釜附属贮料罐内，将物料通过40目振动筛过滤，滤液打回不锈钢反应釜，升温到90-92℃，保温灭酶40分钟。(5)待不锈钢反应釜内物料温度降至78-80℃，加入物料液体总量1％(w/w)的糖用活性炭，保温脱色0.5h；再加入物料液体总量1％(w/w)的糖用活性炭，保温脱色0.5h；脱色完成后将物料用板框压滤机过滤。
(6)将通过板框过滤的料液再通过膜过滤器精细过滤后，打入多级膜过滤器贮料罐，打开膜过滤器压力泵，分段收集滤液，对收集的滤液编号。
(7)按编号取样测定滤液的相对分子质量，将相对分子质量5500-6500Da的滤液合并。
(8)按编号取样测定滤液的相对分子质量，将相对分子质量1000Da以下的滤液合并。
(9)将上述二种合并的滤液分别打入二台高真空旋转薄膜浓缩机贮料罐，打开浓缩机，控制浓缩温度45-47℃，将滤液浓缩到含固量40％止。
(10)将二种浓缩液分别打入二台喷雾干燥机的贮料罐，打开离心式喷雾干燥机(带粉体冷却系统)，输入试喷参数，将设置调节到自动，控制成品海参肽粉的水分为2-2.5％，分别喷雾干燥。
(11)喷雾干燥机出来的海参肽经粉体冷却系统急冷后进入成品贮料罐，经过各自的取样检测，合格后包装后即为成品海参肽，其中相对分子质量以下1000Da的海参肽供给化妆品企业作原料用，相对分子质量5500-6500Da的海参肽用于制备修复受损胃黏膜的药品或者保健食品。
实施例3
本申请通过动物试验进一步验证了上述实施例1和实施例2制备得到的海参肽对动物受损胃黏膜具有很好的修复功能。海参肽对对受损胃黏膜修复功能试验如下：
1.实验动物
选用Wistar健康雄性大鼠84只，体重180-220克。自由进食标准颗粒饲料及饮水，保持环境温度25±2℃，光照周期12h:12h条件下适应性饲养一周后使用。
2.实验分组
将小鼠随机分为7组，每组12只，每3只一笼，7个实验组分别为：
海参肽设50mg/100g,bw/d(低剂量)、300mg/100g,bw/d(高剂量)两个剂量组，以蒸馏水代替海参肽作为空白对照组，鱼皮胶原蛋白和X胃泰作为阳性对照组。用蒸馏水配制海参肽，低、高剂量配制浓度分别为50mg/mL、300mg/mL。每日根据体重状况给予小鼠相应剂量的受试物，大鼠灌胃体积为1mL/100g*bw，样品使用前配制。每日一次，连续灌胃14d，于固定日期测小鼠体重并记录。实验分组如表1：
表1
序号 组别 是否造模 灌胃物 灌胃剂量(mg/100g.bw/d)
1 空白对照 否 蒸馏水 同等剂量
2 模型对照 是 蒸馏水 同等剂量
3 XX胃泰组 是 XX胃泰 175
4 鱼皮胶原蛋白组 是 鱼皮胶原蛋白 175
5 海参肽低剂量组 是 海参肽 50
6 海参肽高剂量组 是 海参肽 300
7 XX胃泰+海参肽组 是 XX胃泰+海参肽 175
3.胃粘膜损伤模型(慢性胃溃疡模型)
实验方法(醋酸注射法)：将动物禁食不禁水24小时，乙醚或1％巴比妥钠麻醉后实施剖腹手术，消毒腹部，于剑突下切开腹腔，将胃轻拉出腹腔外，用微量注射器于胃幽门处浆膜下注射20-30μl的30％冰醋酸，缝合切口，用碘酒、酒精消毒，术后正常喂食和水。第二天将手术后状态良好的动物按体重随机分为模型组和受试样品三个剂量组。各剂量组按相应剂量灌胃，连续14天。模型组灌胃蒸馏水或溶剂。末次给药后禁食(不禁水)24小时后处死。
每组取一只大鼠，将胃粘膜损伤最严重的部位切下，固定于10％甲醛溶液，常规制片，HE染色，制备胃部组织切片，剩余的大鼠按照以下步骤进行样本的采集：
(1)取血；
(2)取出胃部，沿胃大弯将其剪开，收集胃内容物于离心管中；
(3)用预冷的生理盐水冲洗胃内残留物，展开胃粘膜，滤纸吸干，肉眼观察整个胃部并拍照记录；
(4)胃溃疡指数检测(溃疡面积、溃疡体积、溃疡指数和溃疡抑制率)：
溃疡面积和体积测量方法为在带标尺的解剖显微镜下计数溃疡所占的方格数，换算成面积。然后用微量注射器将有生理盐水注入溃疡内，将溃疡填满与周边平齐，读取微量注射器上刻度即为溃疡的体积。
将胃溃疡程度划分为6个等级作为溃疡指数：完整粘膜为0级；点状出血直径1mm，1-5点为1级；6-10点为2级；10点以上为3级；条状出血1-5条为4级；6-10条为5级；10条以上为6级(直径≤1mm计1条，直径≤2mm，计2条，2＜直径≤3mm，计3条。依次类推)。
......
4.实验设计及剂量说明
受试物设三个剂量组，其中一个应为人体推荐量的5倍剂量组，且最高剂量不高于人体推荐量的30倍。海参肽的人体推荐量为6g/60kg.人/d，按5倍剂量换算为50mg/100g.bw/d(低剂量)和300mg/100g.bw/d(高剂量)，大鼠的灌胃体积为1ml/100g，所以海参肽的浓度应配置为50mg/mL(低剂量)和300mg/mL(高剂量)，阳性对照组为人体推荐量的17.5倍(高低剂量的平均值)。
5.试验结果
(1)从溃疡体积方面看，和模型对照组比较，XX胃泰和鱼皮胶原蛋白组无显著性差异，海参肽高、低剂量组、XX胃泰+海参肽组差异显著；和XX胃泰、鱼皮胶原蛋白组比较，海参肽高、低剂量组差异性显著。
(2)从溃疡面积方面看，和模型对照组比较，XX胃泰和鱼皮胶原蛋白组无显著性差异，海参肽高、低剂量组均显著低于模型组。
(3)从溃疡指数方面看，和模型对照组比较，各个组别均有显著性差异。
(4)从溃疡抑制率方面来看，海参肽高、低剂量组均大于阳性对照组，且海参肽+XX胃泰组高于单独灌胃XX胃泰组。
(5)结合以上几个指标测定结果，海参肽高、低剂量组在促进胃溃疡修复方面的效果较好，且低剂量组的效果要稍微高于高剂量组。
(6)从试验各组胃部组织图片(图3)可以看出，模型组损伤较为严重，且有炎症，XX胃泰组和鱼皮胶原蛋白组仍有局部的炎症，且出血点较多，灌胃海参肽组的出血点最少。
以上通过动物试验获得了由东海海参自溶液制得的海参肽(相对分子质量分布在5500-6500Da内)具有高效、快速修复动物受损胃黏膜的功能。
综上，由东海海参自溶液制得的海参肽作为动物蛋白质的降解产物与动物胃黏膜具有很好的亲和性，可在受损胃黏膜部位形成保护性屏障，并且可以被胃黏膜细胞吸收，促进胃黏膜的再生修复。
此种海参肽可以通过保健品或复方中成药方式，用于辅助胃病病人的治疗，既可使低值的东海海参通过精深加工大幅提高经济效益，亦能给胃病病人的治疗提供一种促进治疗的辅助方法。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种海参肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将新鲜海参预处理后粉碎制得料液，在蒸煮罐内加热维持料液的温度在38～39℃；
将料液从蒸煮罐泵入自溶反应器，反应后返回蒸煮罐；重复该步骤进行循环自溶反应，当料液滴速达到设定值终止反应；
收集料液，经过初虑、灭酶、脱色、膜过滤，得到相对分子量为5500-6500Da的滤液；
所述自溶反应器包括密封的箱体，所述箱体相对的两个侧壁分别设置有进料口和出料口，所述箱体内部设置有衔接进料口和出料口倾斜设置的反应坡槽以及用于向反应坡槽投射紫外线的紫外线光源。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的预处理包括将新鲜海参去除内脏、石灰嘴并洗净后用氢氧化钙溶液浸泡；所述氢氧化钙溶液的质量浓度为0.3～0.8％；氢氧化钙溶液浸泡时间为5-10min。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述料液滴速的设定值为30滴/分～35滴/分。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，紫外线光源的光强度以每㎡反应坡槽上方安装3-5支功率为40W的紫外线灯管且紫外线灯管距离料液表面的垂直距离为10～30cm计。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述料液流经反应坡槽的厚度为3～8cm；所述料液流经反应坡槽的流速为0.3-1.0m3/h。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的循环自溶反应过程中，向料液中添加二价钙离子；按w/w占总液体量的0.01-0.03％添加。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述箱体的内部靠近进料口的位置设有用于将来自进料口的料液导流至反应坡槽的导流板。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括将所述滤液浓缩，喷雾干燥。
9.由权利要求1～8任一项权利要求所述制备方法制备得到的海参肽。
10.根据权利要求9所述的海参肽在用于制备修复受损胃黏膜的药品、食品或保健品中的应用。
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