CN107802726A - 一种覆盆子保健品及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种覆盆子保健品及其制备方法，该覆盆子保健品能够增强机体免疫力，改善睡眠，延缓衰老，增强身体机能。该覆盆子保健品以重量份计，包括以下原料及配比：覆盆子8‑15份、玉簪花7‑14份、萝藦子3‑8份、接骨草4‑8份、广东紫珠1‑5份、杜仲雄花1‑4份、熟地1‑4份、北五味子2‑4份、茯苓1‑4份、龙骨1‑4份。制备该覆盆子保健品的方法简单、有效成分提取完全。

Description

一种覆盆子保健品及其制备方法
技术领域
本发明涉及制药技术领域，具体涉及一种覆盆子保健品及其制备方法。
背景技术
免疫力，指的是“免除疫疠”，也就是防治传染病的意思。从生物学上来讲，是指抵御疾病发展的能力。免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)；处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。现代免疫学认为，免疫力是人体识别和排除“异己”的生理反应，来维持健康和生存，而人体内执行这一功能的是免疫系统。各种原因使免疫系统不能正常发挥保护作用，在此情况下，极易招致细菌、病毒、真菌等感染，因此免疫力低下最直接的表现就是容易生病。因经常患病，加重了机体的消耗，所以一般有体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现，生病、打针吃药便成了家常便饭。每次生病都要很长时间才能恢复，而且常常反复发作。长此以往会导致身体和智力发育不良，还易诱发重大疾病。
衰老(ageing)指在正常状况下生物体发育成熟后，随年龄的增加，自身组织结构逐步发生退行性变化，机体器官的机能减退，内环境自稳能力减弱、对内外环境损伤因素的抵抗力降低，趋向死亡的自然现象。睡眠量不正常以及睡眠中出现异常行为的表现﹐也是睡眠和觉醒正常节律性交替紊乱的表现。可由多种因素引起，常与躯体疾病有关，包括睡眠失调和异态睡眠。
睡眠与人的健康息息相关。睡眠障碍是神经内科复杂的系列疾病之一，分类繁杂广泛，临床表现多样，与病因病机关系密切，包括失眠症、调查显示，很多人都患有睡眠方面的障碍或者和睡眠相关的疾病，成年人出现睡眠障碍的比例高达30％。专家指出睡眠是维持人体生命的极其重要的生理功能，对人体必不可少。
发明内容
本发明针对上述情况，提供了一种覆盆子保健品及其制备方法，能够增强机体免疫力，改善睡眠，延缓衰老，增强身体机能。
为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种覆盆子保健品，以重量份计，包括以下原料及配比：
覆盆子8-15份、玉簪花7-14份、萝藦子3-8份、接骨草4-8份、广东紫珠1-5份、杜仲雄花1-4份、熟地1-4份、北五味子2-4份、茯苓1-4份、龙骨1-4份。
进一步优化地，该覆盆子保健品，以重量份计，包括以下原料及配比：
覆盆子9-12份、玉簪花8-10份、萝藦子3-5份、接骨草4-6份、广东紫珠1-3份、杜仲雄花1-2份、熟地1-2份、北五味子2-3份、茯苓1-2份、龙骨1-2份。
覆盆子为蔷薇科植物华东覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果实，为中国药典收载的常用中药，具有益神、固精、缩尿和养肝明目之效和增强机体免疫力、抗衰老、抗氧化的作用，鲜品亦可作为水果食用。
玉簪花为百合科多年生草本植物玉簪Hostaplantaginea(Lam.)Ascherson的干燥花，可清咽、利尿、通经，鲜品亦可供蔬食或作甜菜，可消肿，解毒，止血。
萝藦子为萝科植物萝藦Metaplexisjaponica(Thunb.)Mak的嫩果实，又名羊角菜，含有蛋白质、碳水化合物、矿物质、维生素等营养成分，性味甘辛温，具有补益精气、生肌止血、解毒的功效，鲜品亦可作为野菜蔬食食用。
接骨草为药用植物，可治跌打损伤，有去风湿、通经活血、解毒消炎之功效。
广东紫珠为马鞭草科植物广东紫珠Callicarpa kwangtun-gensis Chun的干燥茎枝和叶，可收敛止血，散瘀，清热解毒，主要用于肺热咳嗽，咽喉肿痛，热毒疮疡，水火烫伤等。
杜仲雄花为杜仲雄树开的花，是我国十分珍贵的药用花粉资源，其强肝、补肾、通便、安眠、降三高的效果尤为显著。
熟地又名熟地黄或伏地，为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa(Gaetn.)Libosch.ex Fisch.et Mey.的块根，是一种上好中药材，具有补血滋阴功效，可用于血虚萎黄，眩晕，心悸失眠，月经不调，崩漏等症，亦可用于肾阴不足的潮热骨蒸、盗汗、遗精、消渴等症。
北五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实，含有五味子素(Schisandrin C23H3206)及维生素C、树脂、鞣质及少量糖类，具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心之功效。常用于久嗽虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗盗汗，津伤口渴，内热消渴，心悸失眠。
茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，味甘、淡，性平，主要用于水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便溏泄泻，心神不安，惊悸失眠。
龙骨为古代哺乳动物如象类、犀牛类、三趾马等的骨胳的化石，味甘，平，可重镇安神，敛汗固精，止血涩肠，生肌敛疮，治惊痫癫狂，怔忡健忘，失眠多梦，自汗盗汗，遗精淋浊，吐衄便血，崩漏带下，泻痢脱肛，溃疡久不收口。
现代中医免疫学认为，免疫疾病的发生和发展主要与先天禀赋不足、外感六淫之邪、营卫气血失调、腑脏功能紊乱、痰浊瘀血内生等因素有密切相关。外感六淫之邪是疾病的外在原因，先天禀赋不足、营卫气血失调、腑脏功能紊乱等是内在原因。中医认为肾为先天之本，脾是后天之本，因而强调肾具有调整和维持免疫平衡及其稳定的重要作用，脾脏是人体最大的腺器官，也是免疫细胞的主要寄居场所。脾脏的亏虚，其细胞免疫和体液免疫功能均比正常人低下。而脾胃运化水谷精微，必须在肾阳推动作用下，才能化生气血。而免疫力低下正是免疫疾病的一种表现形式，免疫力低下使得机体无法抵御外界病毒侵袭，且机体自身功能紊乱，严重影响人体健康。
在本发明的中药配方中，覆盆子具有益神、固精，增强免疫力、延缓衰老作用，杜仲雄花具有强肝补肾的作用，熟地具有补血滋阴的作用，五味子具有益气生津，补肾宁心的作用，萝藦子具有补精益气、生肌止血的作用，选用上述中药组合，补肾元，从根本上调整和维持免疫平衡，以增强机体免疫力，同时，兼有延缓衰老，改善睡眠的作用；玉簪花具有解毒消炎的作用，广东紫珠具有清肺热的作用，接骨草具有痛经活血的作用，茯苓具有调节脾胃，利水的作用，选用玉簪花、广东紫珠、接骨草、茯苓与覆盆子、杜仲雄花、熟地、五味子、萝藦子组合，补肾元的同时，调节脾胃，活血通经，并从气、血、津、液各方面作用，进一步提高本配方的增强免疫力、延缓衰老的作用；与此同时，加入具有重镇安神，敛汗固精的龙骨，进一步增强机体免疫力、延缓衰老的作用的同时，辅助改善睡眠。上述诸药科学配伍，共同起到具有增强免疫力、延缓衰老、改善睡眠的作用。
本发明还提供了一种采用所述原料制备覆盆子保健品的制备方法，如下所述：
1、将配方比的新鲜覆盆子、新鲜玉簪花于65℃干燥30小时后，于-20℃--40℃冷冻6小时后，立即取出在室温条件下进行常规粉碎，并用150-240目筛网筛分得到粒径范围在60-106um的莲子及覆盆子混合粉末后，于-20℃--40℃冷冻3小时后，用超微粉碎机以60-75Hz功率超微粉碎15分钟后制得粒径范围在70-90um覆盆子及玉簪花混合超微粉末；
2、将步骤1覆盆子及玉簪花混合超微粉末加入8-10倍量的30％-40％乙醇溶液，冷浸15分钟后，70HZ超声提取2次，每次20分钟，中间间隔15分钟，提取完成后，过滤，分离滤渣，获得覆盆子及玉簪花的醇提液后，浓缩得到浸膏；
3、将步骤2中的药渣与配方比的龙骨合并，粉碎，加入8-10倍量的水并煎煮10分钟后，加入配方比的熟地、杜仲雄花、北五味子、接骨草、萝藦子、广东紫珠、茯苓，补充8-10倍量水，并继续煎煮50分钟，过滤，分离出滤液，并继续向滤渣中加入8-10倍量的水，煎煮60分钟，过滤，分离出滤液，合并两次滤液；
4、将步骤3中合并后的滤液浓缩到3/4重量时，加入步骤2中的浸膏，搅拌均匀后，继续浓缩，得到密度为1.0853-1.3249g的浸膏后，干燥、粉碎，过筛，制粒，压片后得到片剂。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明中的覆盆子、玉簪花、萝藦子、接骨草、广东紫珠、熟地、杜仲雄花、北五味子、茯苓、龙骨，能够起到增强机体免疫力，改善睡眠，延缓衰老，增强身体机能的效果。
2、本发明中主选覆盆子、玉簪花、萝藦子等即可增强机体免疫力、延缓衰老，又可药食两用的原料，以及熟地、北五味子、杜仲雄花等具有补益精气的原料，药性平和，毒副作用小，对人体没有不良影响。
3、本发明中，选用新鲜覆盆子及新鲜玉簪花，通过常规粉碎和超微粉碎获得超微粉末后，水提与醇提相结合，极大程度地保留了其有效成分，并增加其有效成分的溶出，且整个制备过程中，严格控制温度及提取顺序，制备工艺严谨。
4、本发明的产品的原料易得、制作方法简单、成本低廉。
具体实施方式
实施例1
1、取覆盆子8份、新鲜玉簪花7份于65℃干燥30小时后，于-20℃冷冻6小时后，立即取出在室温条件下进行常规粉碎，并用150目筛网筛分得到粒径范围在60-106um的莲子及覆盆子混合粉末后，于-20℃冷冻3小时后，用超微粉碎机以75Hz功率超微粉碎15分钟后制得粒径范围在70-90um覆盆子及玉簪花混合超微粉末；
2、将步骤1覆盆子及玉簪花混合超微粉末加入10倍量的30％乙醇溶液，冷浸15分钟后，70HZ超声提取2次，每次20分钟，中间间隔15分钟，提取完成后，过滤，分离滤渣，获得覆盆子及玉簪花的醇提液后，浓缩得到浸膏；
3、将步骤2中的药渣与1份龙骨合并，粉碎，加入10倍量的水并煎煮10分钟后，加入熟地1份、杜仲雄花1份、北五味子2份、接骨草4份、萝藦子3份、广东紫珠1份、茯苓1份，补充10倍量水，并继续煎煮50分钟，过滤，分离出滤液，并继续向滤渣中加入10倍量的水，煎煮60分钟，过滤，分离出滤液，合并两次滤液；
4、将步骤3中合并后的滤液浓缩到3/4重量时，加入步骤2中的浸膏，搅拌均匀后，继续浓缩，得到密度为1.1427g的浸膏后，干燥、粉碎，过筛，制粒，压片后得到片剂。
实施例2
1、取覆盆子15份、新鲜玉簪花14份于65℃干燥30小时后，于-40℃冷冻6小时后，立即取出在室温条件下进行常规粉碎，并用240目筛网筛分得到粒径范围在106-60um的莲子及覆盆子混合粉末后，于-40℃冷冻3小时后，用超微粉碎机以60Hz功率超微粉碎15分钟后制得粒径范围在70-90um覆盆子及玉簪花混合超微粉末；
2、将步骤1覆盆子及玉簪花混合超微粉末加入8倍量的30％乙醇溶液，冷浸15分钟后，70HZ超声提取2次，每次20分钟，中间间隔15分钟，提取完成后，过滤，分离滤渣，获得覆盆子及玉簪花的醇提液后，浓缩得到浸膏；
3、将步骤2中的药渣与4份龙骨合并，粉碎，加入8倍量的水并煎煮10分钟后，加入熟地4份、杜仲雄花4份、北五味子4份、接骨草8份、萝藦子8份、广东紫珠5份、茯苓4份，补充8倍量水，并继续煎煮50分钟，过滤，分离出滤液，并继续向滤渣中加入8倍量的水，煎煮60分钟，过滤，分离出滤液，合并两次滤液；
4、将步骤3中合并后的滤液浓缩到3/4重量时，加入步骤2中的浸膏，搅拌均匀后，继续浓缩，得到密度为1.2461g的浸膏后，干燥、粉碎，过筛，制粒，压片后得到片剂。
实施例3
1、取覆盆子9份、新鲜玉簪花8份于65℃干燥30小时后，于-20℃冷冻6小时后，立即取出在室温条件下进行常规粉碎，并用200目筛网筛分得到粒径范围在106-60um的莲子及覆盆子混合粉末后，于-40℃冷冻3小时后，用超微粉碎机以65Hz功率超微粉碎15分钟后制得粒径范围在70-90um覆盆子及玉簪花混合超微粉末；
2、将步骤1覆盆子及玉簪花混合超微粉末加入10倍量的40％乙醇溶液，冷浸15分钟后，70HZ超声提取2次，每次20分钟，中间间隔15分钟，提取完成后，过滤，分离滤渣，获得覆盆子及玉簪花的醇提液后，浓缩得到浸膏；
3、将步骤2中的药渣与1份龙骨合并，粉碎，加入8倍量的水并煎煮10分钟后，加入熟地1份、杜仲雄花1份、北五味子2份、接骨草4份、萝藦子3份、广东紫珠1份、茯苓1份，补充10倍量水，并继续煎煮50分钟，过滤，分离出滤液，并继续向滤渣中加入8倍量的水，煎煮60分钟，过滤，分离出滤液，合并两次滤液；
4、将步骤3中合并后的滤液浓缩到3/4重量时，加入步骤2中的浸膏，搅拌均匀后，继续浓缩，得到密度为1.3021g的浸膏后，干燥、粉碎，过筛，制粒，压片后得到片剂。
实施例4
1、取覆盆子12份、新鲜玉簪花10份于65℃干燥30小时后，于-40℃冷冻6小时后，立即取出在室温条件下进行常规粉碎，并用240目筛网筛分得到粒径范围在106-60um的莲子及覆盆子混合粉末后，于-20℃冷冻3小时后，用超微粉碎机以70Hz功率超微粉碎15分钟后制得粒径范围在70-90um覆盆子及玉簪花混合超微粉末；
2、将步骤1覆盆子及玉簪花混合超微粉末加入10倍量的40％乙醇溶液，冷浸15分钟后，70HZ超声提取2次，每次20分钟，中间间隔15分钟，提取完成后，过滤，分离滤渣，获得覆盆子及玉簪花的醇提液后，浓缩得到浸膏；
3、将步骤2中的药渣与2份龙骨合并，粉碎，加入10倍量的水并煎煮10分钟后，加入熟地2份、杜仲雄花2份、北五味子3份、接骨草6份、萝藦子5份、广东紫珠3份、茯苓2份，补充8倍量水，并继续煎煮50分钟，过滤，分离出滤液，并继续向滤渣中加入10倍量的水，煎煮60分钟，过滤，分离出滤液，合并两次滤液；
4、将步骤3中合并后的滤液浓缩到3/4重量时，加入步骤2中的浸膏，搅拌均匀后，继续浓缩，得到密度为1.1842g的浸膏后，干燥、粉碎，过筛，制粒，压片后得到片剂。
实施例5
1、取覆盆子10份、新鲜玉簪花9份于65℃干燥30小时后，于-40℃冷冻6小时后，立即取出在室温条件下进行常规粉碎，并用240目筛网筛分得到粒径范围在106-60um的莲子及覆盆子混合粉末后，于-20℃冷冻3小时后，用超微粉碎机以70Hz功率超微粉碎15分钟后制得粒径范围在70-90um覆盆子及玉簪花混合超微粉末；
2、将步骤1覆盆子及玉簪花混合超微粉末加入10倍量的30％乙醇溶液，冷浸15分钟后，70HZ超声提取2次，每次20分钟，中间间隔15分钟，提取完成后，过滤，分离滤渣，获得覆盆子及玉簪花的醇提液后，浓缩得到浸膏；
3、将步骤2中的药渣与2份龙骨合并，粉碎，加入10倍量的水并煎煮10分钟后，加入熟地2份、杜仲雄花2份、北五味子3份、接骨草5份、萝藦子4份、广东紫珠2份、茯苓1份，补充8倍量水，并继续煎煮50分钟，过滤，分离出滤液，并继续向滤渣中加入10倍量的水，煎煮60分钟，过滤，分离出滤液，合并两次滤液；
4、将步骤3中合并后的滤液浓缩到3/4重量时，加入步骤2中的浸膏，搅拌均匀后，继续浓缩，得到密度为1.2365g的浸膏后，干燥、粉碎，过筛，制粒，压片后得到片剂。
实施例6
抗衰老动物实验
1、试验动物
老龄小鼠共100只，年龄22个月，雌雄各半，体重25-30g，随机分成4组，每组25只，进行实验。
2、试验方法
第一组，喂食精饲料(鱼、肉、蛋各17％，米40g，蔬菜14g，多种维生素4g)；
第二组，喂食一般饲料；
第三组，喂食一般饲料，饲料内添加4g本发明实施例1制备的片剂粉末；
第四组，喂食精饲料(鱼、肉、蛋各17％，米40g，蔬菜14g，多种维生素4g)，饲料内添加4g本发明实施例1制备的片剂粉末。
四组小鼠在同等环境下，连续喂养6个月后处死，低温分离血清，-20℃保存，小鼠处死后在75％的乙醇中浸泡3-5分钟，无菌环境中取出肝脏组织，称重后迅速置于液氮中，移入-80℃冰箱中保存。
取适量冷冻的肝组织，用OCT包埋，制成6微米厚的冰冻片，丙酮固定20分钟后，采用末端脱氧核糖核苷酸转氨酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)。在光学显微镜400倍视野下，每张切片随机选择5个阳性视野，每个视野计数200个肝组织细胞中的阳性细胞核数，以平均计算阳性细胞所占百分比，求其均数值作为凋亡细胞阳性指数(AI)。
3、试验结果及分析
结果见表1。
表1不同组小鼠肝细胞凋亡指数AI比较
从表1可得，喂食本品的实验组与不喂食本品的对照组对比，实验组凋亡指数下降，且差异具有显著性(P<0.05)，表明，本品能够在一定程度上抑制细胞凋亡，从而延缓衰老。
实施例7
免疫功能检测动物实验
1、试验动物
成年小鼠共320只，全雌，体重为18-22克，分为免疫Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组，每组40只，进行增强免疫力功能检测实验。
2、试验方法及结果分析
参照卫生部《保健食品检验与评价技术规范-2003》中的增强免疫力功能检测方法和操作规程进行。实验设200、400、800mg/kg Bw三个高中低剂量组和一个阴性对照组(给予等体积蒸馏水)，每组10只小鼠，所有试验动物均食用全价营养配合饲料，动物自由摄食、摄水。给予受试物的灌胃体积为0.2ml/10g Bw，连续灌胃受试样品(实施例5中制备的样品)30天，进行各项免疫指标的检测。
其中，免疫Ⅰ组，进行脏/体比值测定；免疫Ⅱ组进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)；免疫Ⅲ组进行二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应实验(耳肿胀法)；免疫Ⅳ组进行碳廓清实验；免疫Ⅴ组进行腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)；免疫Ⅵ组进行NK细胞活性测定实验(乳酸脱氢酶测定法)；免疫Ⅶ组进行抗体生成细胞检测实验(Jerne改良玻片法)；免疫Ⅷ组进行血清溶血素的测定实验(血凝法)。
(1)免疫Ⅰ组----脏/体比值测定
实验结束处死小鼠，取出胸腺和脾脏，称重后计算脏/体比值。结果见表1。
脏器体重比值(％)＝脏器重(g)/终体重(g)X 100
表1不同剂量的受试物对小鼠的免疫器官脏器/体重比值(n＝10，X±SD)
表1中，中低剂量的受试物均低于阴性对照小鼠组的胸腺/体重或脾脏/体重，且差异均无显著性(P>0.05)，表明该受试物对小鼠的免疫器官重量无明显差异。
(2)免疫Ⅰ组----免疫Ⅱ组ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)
①试剂配制
a完全培养液：RPMI1640培养液过滤除菌，用前加入10％小牛血清，1％谷氨酰胺(200mmol/L)，青霉素(100U/ml)，链霉素(100μg/L)及5×10-5mol/L的2巯基乙醇，用无菌的1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH调pH至7.0-7.2，即完全培养液。
b ConA液：用双蒸水配制成100μg/ml的溶液，过滤除菌，在低温冰箱(-20℃)中保存。
c无菌Hank’s液：用前以3.5％的无菌NaHCO3调pH至7.2-7.4。
d MTT液：将5mg MTT溶于1ml pH7.2的PBS中，现配现用。
e酸性异丙醇溶液：96ml异丙醇中加入4ml 1mol/L的HCl，临用前配制。
②脾细胞悬液制备：无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank s液平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hank s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，然后将细胞悬浮于1ml完全培养液中，用台酚蓝染色计数活细胞数(应在95％以上)，调整细胞浓度为3×106个/ml。
③淋巴细胞增殖反应：将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μl ConA液(相当于7.5μg/ml)，另一孔作为对照，置5％CO2，37℃CO2孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解，然后分装到96孔培养板中，每个孔分装3-6孔作为平行样，用酶联免疫检测仪，以570nm波长测定光密度值(OD)。结果见表2。
(3)免疫Ⅲ组----二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应实验(耳肿胀法)
①DNFB溶液的配制：DNFB溶液应新鲜配制，称取DNFB 50mg，置清洁干燥小瓶中，将预先配好的5ml丙酮麻油溶液(丙酮∶麻油＝1∶1)倒入小瓶，盖好瓶塞并用胶布密封。混匀后，用250μl注射器通过瓶盖取用。
②致敏：实验结束前5天，每只小鼠腹部皮肤用硫化钡脱毛(范围约3cm×3cm)后，用DNFB溶液50μl均匀涂抹致敏。
③DTH的产生与测定：5天后，用DNFB溶液10μl均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击，攻击后24h颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径8mm的耳片，称重。结果见表2。
表2不同剂量的受试物对小鼠脾淋巴细胞转化及迟发型变态反应(DTH)实验结果(n＝10，X±SD)
表2中，高剂量、中剂量的受试物小鼠组高于阴性对照小鼠组的抗体生成细胞数，且差异具有显著性(分别为P<0.05，P<0.01)，表明该受试物具有促进小鼠的淋巴细胞增殖的作用；不同剂量的受试物均高于阴性对照组的左右耳片重量差异，且差异具有显著性(P<0.05)，表明该受试物具有促进小鼠的迟发型变态反应的作用。
(4)免疫Ⅳ组----碳廓清实验
①溶液配制
a注射用墨汁：将印度墨汁原液用生理盐水稀释3-4倍。
b Na2CO3溶液取0.1g Na2CO3，加蒸馏水至100ml。
②注射墨汁：末次给受试物1h后，称体重，从小鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁，按每10g体重注入0.1ml，待墨汁注入，立即计时。
③测定：注入墨汁后第2min和10min，分别从内眦静脉丛取血20μl，并立即将其加到2ml 0.1％Na2CO3溶液中。用721型分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD)，以Na2CO3溶液作空白对照。将小鼠处死，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，称重。结果按下列公式计算吞噬指数，结果见表3。
吞噬指数＝体重肝重+脾重×3K，K＝lgOD2min-lgOD10min10min-2min
(5)免疫Ⅴ组----腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)
①鸡红细胞悬液制备：取鸡血置于有玻璃珠的锥形瓶中，朝一个方向充分摇动，以脱纤维。用生理盐水洗涤2-3次，离心(2000r/min，10min)，去上清，用生理盐水配成20％(V/V)的鸡红细胞悬液。
②吞噬功能测定：末次给受试物1h后，每只小鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1ml，注射30min后，颈椎脱臼处死小鼠，将其仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板1min，然后吸出腹腔洗液1ml，平均分滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞，晾干，以丙酮：甲醇溶液(1∶1)固定，4％(V/V)Giemsa磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干，每张片油镜下观察100个巨噬细胞，按下式计算吞噬百分率和吞噬指数，结果见表3。
吞噬百分率(％)＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数计数的100个巨噬细胞×100；
吞噬指数＝吞噬的鸡红细胞总数计数的100个巨噬细胞
表3不同剂量受试物对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清及腹腔吞噬鸡红细胞实验结果(n＝10，X±SD)
表3中，不同剂量的受试物小鼠组的碳廓清吞噬指数均高于阴性小鼠对照组，且差异具有显著性(P<0.05)，表明该受试物具有促进小鼠的单核-巨噬细胞碳淸功能的作用；中低剂量的受试物小鼠组对巨噬细胞吞噬率均高于阴性对照小鼠组，且差异具有显著性(P<0.05)，表明受试物对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能具有明显的提高作用。
(6)免疫Ⅵ组----NK细胞活性测定实验(乳酸脱氢酶测定法)
①乳酸脱氢酶LDH基质液的配制：
乳酸锂5×10-2mol/L；硝基氯化四氮唑(INT)6.6×10-4mol/L；吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)2.8×10-4mol/L；氧化型辅酶Ⅰ(NAD)1.3×10-3mol/L；
将上述试剂溶于0.2mol/L的Tris HCl缓冲液中(pH8.2)
②靶细胞的传代(YAC1细胞)：实验前24h将靶细胞进行传代培养。应用前以Hank s液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/ml。
③脾细胞悬液的制备(效应细胞)：无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank s液的小平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hank s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，弃上清将细胞浆弹起，加入0.5ml灭菌水20s，裂解红细胞后再加入0.5ml 2倍Hank’s液及8ml Hank’s液，离心10min(1000r/min)，用1ml含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用1％冰醋酸稀释后计数(活细胞数应在95％以上)，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/ml。
④NK细胞活性检测：取靶细胞和效应细胞各100μl(效靶比50∶1)，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40或2.5％Triton各100μl。上述各项均设三个平行孔，于37℃、5％CO2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μl置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μl，反应3min，每孔加入1mol/L的HCl 30μl，在酶标仪490nm处测定光密度值(OD)，按下式计算NK细胞活性。结果见表4。
NK细胞活性(％)＝反应孔OD-自然释放孔OD最大释放孔OD-自然释放孔OD×100％表4不同剂量受试物对小鼠NK细胞活性测定结果
表4中，不同剂量的受试物小鼠组的NK细胞活性均高于阴性对照组，且差异具有显著性(P<0.05)，表明该受试物对小鼠的NK细胞活性有明显的提高作用。
(7)免疫Ⅶ组----抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)
①SRBC：绵羊颈静脉取血，将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中，朝一个方向摇动，以脱纤维，放入4℃冰箱保存备用，可保存2周。
②制备补体：采集豚鼠血，分离出血清(至少5只豚鼠的混合血清)，将1ml压积SRBC加入5ml豚鼠血清中，4℃冰箱放置30min，经常振荡，离心取上清，分装，-70℃保存。用时以SA液按1∶8-15稀释。
③玻片涂膜：在清洁玻片上刷上一薄层琼脂糖(0.5g琼脂糖加双蒸水至100ml，加热溶解)，待干后放片盒可长期保存备用。
④免疫动物：取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min，计数细胞，每只鼠经腹腔或静脉注射SRBC5×107-2×108个。也可将压积SRBC用生理盐水配成2％(V/V)的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2ml。
⑤脾细胞悬液制备：将SRBC免疫4-5天后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，放在盛有Hank s液的小平皿内，轻轻撕碎脾脏，制成细胞悬液，经200目筛网过滤，或用4层纱布将脾磨碎，离心(1000r/min)10min，用Hank s液洗2遍，最后将细胞悬浮在5ml RPMI1640培养液中，计数细胞，并将细胞浓度调整为5×106个/ml。也可将细胞悬浮在8ml Hank s液，测定脾空斑形成数。
⑥空斑的测定：将表层培养基(1g琼脂糖加双蒸水至100ml)加热溶解后，放45℃水浴保温，与等量pH7.2-7.4、2倍浓度的Hank s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50μl 10％SRBC(V/V，用SA液配制)，20μl脾细胞悬液(5×106个/ml)或25μl脾细胞悬液，迅速混匀，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1-1.5h，然后用SA缓冲液稀释的补体(1∶8)加到玻片架凹槽内，继续温育1-1.5h后，计数溶血空斑数。结果见表5。
(8)免疫Ⅷ----血清溶血素的测定(血凝法)
①SRBC：绵羊颈静脉取血，将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中，朝一个方向摇动，以脱纤维，放入4℃冰箱保存备用，可保存2周。
②免疫动物及血清分离：取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min。将压积SRBC用生理盐水配成2％(V/V)的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2ml进行免疫。4-5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。
③凝集反应：用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝实验板内，每孔100μl，再加入100μl 0.5％(V/V)的SRBC悬液，混匀，装入湿润的平盘内加盖，于37℃温箱孵育3h，观察血球凝集程度。
按下式计算抗体积数，结果见表5。
抗体水平＝(S1+2S2+3S3…+nSn)
式中1、2、3…n代表对倍稀释的指数，S代表凝集程度的级别，抗体积数越大，表示血清抗体越高。
表5不同剂量的受试物对抗体生成细胞检测及溶血素的测定实验结果
表5中，不同剂量的受试物小鼠组的抗体生成细胞数高于阴性对照小鼠组，但差异无显著性(P>0.05)，表明受试物不具有促进小鼠的抗体生成细胞增殖的作用；高、低剂量的受试物组小鼠的抗体积数均高于阴性对照组，但差异不具有显著性(P>0.05)，表明该受试物不具有提高小鼠的血清溶血素水平的作用。
综合上述实验结果表明，受试物具有促进小鼠的抗体生成细胞增殖、迟发型变态反应及提高单核-巨噬细胞碳淸功能、腹腔巨噬细胞的吞噬功能的作用，因此，本受试物具有增强免疫力的功能。
实施例8
临床试验
病例1：李某，女62岁，睡眠不佳，晚上入睡困难，有时日夜不能入睡，严重时连续三天基本没睡，白天也精神萎靡，食欲不佳，服用本品三个月，每日两次后，夜间更容易入睡，且每日睡眠时间可达6个小时左右，白天精力充足，食欲良好。
病例2：袁某，女，36岁，因为长期工作压力大，导致身体容易疲劳，免疫力低下，经常感冒咳嗽，且每次咳嗽都会拖上一个月左右的时间，服用本品三个月，每日两次后，明显感觉抵抗力增强，半年来未感冒一次。
病例3：杨某，男，45岁，工作时间长，平时不锻炼，身体经常感觉疲乏，精力涣散，一运动就上气不接下气，服用本品三个月，每日两次后，身体疲乏感消失，精力充沛，可以气息和顺的连续运动半个小时。
病例4：程某，男，73岁，两年前因肝癌早期化疗治疗后，身体一直很虚弱，说话气若游丝，脸色蜡黄，平时走路基本需要借助工具或外人帮助，服用本品四个月，每日两次后，脸色逐渐恢复光泽，行走自如，说话也较为顺畅轻松。

Claims (3)

1.一种覆盆子保健品，其特征在于，包括以下原料及配比：覆盆子8-15份、玉簪花7-14份、萝藦子3-8份、接骨草4-8份、广东紫珠1-5份、杜仲雄花1-4份、熟地1-4份、北五味子2-4份、茯苓1-4份、龙骨1-4份。
2.根据权利要求1所述的一种覆盆子保健品，其特征在于，包括以下原料及配比：覆盆子9-12份、玉簪花8-10份、萝藦子3-5份、接骨草4-6份、广东紫珠1-3份、杜仲雄花1-2份、熟地1-2份、北五味子2-3份、茯苓1-2份、龙骨1-2份。
3.采用权利要求1所述的原料制备覆盆子保健品的制备方法，其特征在于，如下所述：
1、将配方比的新鲜覆盆子、新鲜玉簪花于65℃干燥30小时后，于-20℃--40℃冷冻6小时后，立即取出在室温条件下进行常规粉碎，并用150-240目筛网筛分得到粒径范围在106-60um的莲子及覆盆子混合粉末后，于-20℃--40℃冷冻3小时后，用超微粉碎机以60-75Hz功率超微粉碎15分钟后制得粒径范围在70-90um覆盆子及玉簪花混合超微粉末；
2、将步骤1覆盆子及玉簪花混合超微粉末加入8-10倍量的30％-40％乙醇溶液，冷浸15分钟后，70HZ超声提取2次，每次20分钟，中间间隔15分钟，提取完成后，过滤，分离滤渣，获得覆盆子及玉簪花的醇提液后，浓缩得到浸膏；
3、将步骤2中的药渣与配方比的龙骨合并，粉碎，加入8-10倍量的水并煎煮10分钟后，加入配方比的熟地、杜仲雄花、北五味子、接骨草、萝藦子、广东紫珠、茯苓，补充8-10倍量水，并继续煎煮50分钟，过滤，分离出滤液，并继续向滤渣中加入8-10倍量的水，煎煮60分钟，过滤，分离出滤液，合并两次滤液；
4、将步骤3中合并后的滤液浓缩到3/4重量时，加入步骤2中的浸膏，搅拌均匀后，继续浓缩，得到密度为1.0853-1.3249g的浸膏后，干燥、粉碎，过筛，制粒，压片后得到片剂。
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