CN112057491A - 铁苋菜水提物在制备减肥降脂药物或减肥降脂保健品中的应用 - Google Patents
铁苋菜水提物在制备减肥降脂药物或减肥降脂保健品中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种铁苋菜水提物在制备减肥降脂药物或减肥降脂保健品中的应用；铁苋菜水提物的制备方法为：采集铁苋菜全草，清洗干净，烘干；粉碎，即得铁苋菜全草干粉；将铁苋菜全草干粉加入提取罐中，然后加入纯水浸泡，煎煮，过滤，收集滤液，过滤后的固体再次纯水煎煮，过滤，收集滤液，过滤后的固体最终加入纯水再煎煮，过滤，收集滤液，合并三次滤液，于旋转蒸发仪内浓缩，即得到铁苋菜水提物原药液。体内动物试验表明铁苋菜水提物有明显的减肥降脂效果；铁苋菜水提物还能抑制小鼠血清中TC、TG、LDL‑C含量，增加小鼠肝脏中SOD酶活性，降低MDA含量，使得机体抗氧化活性高，减少脂质氧化，缓解肝脏损伤，达到保护机体的功效。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种铁苋菜水提物在制备减肥降脂药物或减肥降脂保健品中的应用。
背景技术
随着社会经济的迅猛发展，人民生活水平及质量不断提高，由于热量及营养摄入超标而导致的肥胖症患者数量逐年增加，肥胖症已然成为全球医疗关注的热点。同时，肥胖症引起的如心血管疾病等并发症，已经成为威胁全体人类健康的全球性问题之一。目前常用降脂药物因副作用等使得血脂无法降低至正常水平，给治愈疾病带来了巨大困难。因此研究安全稳定的生物类降脂药物是今后治愈此类疾病亟需解决的方向。
铁苋菜属于大戟科铁苋菜属，分布十分广泛，多生于草地或较湿润的耕地处。中医常将铁苋菜的全草或其地上部分入药，具清热解毒、利湿消积的功效，用于治疗肠炎、痢疾、阿米巴痢疾等疾病。同时，铁苋菜也是国家三类新药—苋菜黄莲素胶囊的主要原料。基于初期预实验发现，铁苋菜能够降低小鼠体重，有减肥降脂的潜在功能。故本发明围绕铁苋菜在减肥降脂方面的潜在功效进行探究，期望能为铁苋菜综合开发利用及其产业化发展提供理论支持。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种铁苋菜水提物在制备减肥降脂药物中的应用。
优选的是，所述铁苋菜水提物的制备方法为：采集铁苋菜全草，使用清水清洗三次，再用去离子水清洗干净，置于50～70℃烘箱烘干至恒重；粉碎研磨过0.5mm筛，即得铁苋菜全草干粉；将铁苋菜全草干粉加入提取罐中，然后加入8～12倍纯水浸泡60min以上，煎煮1～3h后，过滤，收集滤液，过滤后的固体再次用6～10倍纯水煎煮1～3h，过滤，收集滤液，过滤后的固体最终加入4～8倍纯水再煎煮0.5～1.5h，过滤，收集滤液，合并三次滤液，于75～85℃旋转蒸发仪浓缩至1g/mL的膏状，即得到铁苋菜水提物原药液。
优选的是，所述铁苋菜水提物的制备方法为：采集铁苋菜全草，使用清水清洗三次，再用去离子水清洗干净，置于60℃烘箱烘干至恒重；粉碎研磨过0.5mm筛，即得铁苋菜全草干粉；将铁苋菜全草干粉加入提取罐中，然后加入10倍纯水浸泡90min，煎煮2h后，过滤，收集滤液，过滤后的固体再次用8倍纯水煎煮2h，过滤，收集滤液，过滤后的固体最终加入6倍纯水再煎煮1h，过滤，收集滤液，合并三次滤液，于80℃旋转蒸发仪浓缩至1g/mL的膏状，即得到铁苋菜水提物原药液。
优选的是，所述减肥降脂药物的剂型为混悬剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、片剂、乳剂、溶液剂、滴丸剂、注射剂、栓剂、灌肠剂、气雾剂、贴剂或滴剂中的任意一种。
优选的是，所述减肥降脂药物还包括辅料；所述辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
本发明还提供一种铁苋菜水提物在制备减肥降脂保健品中的应用。
优选的是，所述铁苋菜水提物的制备方法为：采集铁苋菜全草，使用清水清洗三次，再用去离子水清洗干净，置于50～70℃烘箱烘干至恒重；粉碎研磨过0.5mm筛，即得铁苋菜全草干粉；将铁苋菜全草干粉加入提取罐中，然后加入8～12倍纯水浸泡60min以上，煎煮1～3h后，过滤，收集滤液，过滤后的固体再次用6～10倍纯水煎煮1～3h，过滤，收集滤液，过滤后的固体最终加入4～8倍纯水再煎煮0.5～1.5h，过滤，收集滤液，合并三次滤液，于75～85℃旋转蒸发仪浓缩至1g/mL的膏状，即得到铁苋菜水提物原药液。
优选的是，所述铁苋菜水提物的制备方法为：采集铁苋菜全草，使用清水清洗三次，再用去离子水清洗干净，置于60℃烘箱烘干至恒重；粉碎研磨过0.5mm筛，即得铁苋菜全草干粉；将铁苋菜全草干粉加入提取罐中，然后加入10倍纯水浸泡90min，煎煮2h后，过滤，收集滤液，过滤后的固体再次用8倍纯水煎煮2h，过滤，收集滤液，过滤后的固体最终加入6倍纯水再煎煮1h，过滤，收集滤液，合并三次滤液，于80℃旋转蒸发仪浓缩至1g/mL的膏状，即得到铁苋菜水提物原药液。
优选的是，所述减肥降脂保健品的剂型为混悬剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、片剂、乳剂、溶液剂、滴丸剂或滴剂中的任意一种。
优选的是，所述减肥降脂保健品还包括辅料；所述辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
本发明至少包括以下有益效果：
(1)体内动物试验表明铁苋菜水提物有明显的减肥降脂效果；肥胖小鼠铁苋菜水提物灌胃8周后，各组小鼠的体重都有不同程度的降低，其中铁苋菜水提物中剂量组和高剂量组处理后的高脂小鼠体重显著低于高脂对照小鼠(p<0.01)，且铁苋菜灌胃后的各组高脂小鼠的Lee’s指数均低于高脂对照小鼠。同时，铁苋菜水提物还能抑制小鼠血清中TC、TG、LDL-C含量，增加小鼠肝脏中SOD酶活性，降低MDA含量，使得机体抗氧化活性高，减少脂质氧化，缓解肝脏损伤，达到保护机体的功效。
(2)通过体内动物试验表明铁苋菜水提物对小鼠肠道菌群紊乱有明显的改善，具体表现为：通过对小鼠肠道菌群分析，发现高脂诱导后的肥胖小鼠肠道菌种失衡，与正常小鼠肠道菌群计数存在明显差异。铁苋菜水提物处理4～8周后，双歧杆菌及乳酸菌菌群有较明显的改善，趋于正常水平。研究结果表明，铁苋菜水提物能够促进高脂小鼠中双歧杆菌及乳酸菌的生长，能够改善高脂饮食引起的小鼠肠道菌群紊乱的现象。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明：
图1为本发明建模期小鼠体重变化曲线；
图2为铁苋菜水提物灌胃期间小鼠摄食量的变化曲线；
图3为铁苋菜水提物给药期间小鼠体重变化曲线；
图4为铁苋菜给药后小鼠Lee’s指数；
图5为谷丙转氨酶(ALT)标准曲线；
图6为谷草转氨酶(AST)标准曲线；
图7为铁苋菜水提物对小鼠肝组织病理的影响显微镜图；
图8为铁苋菜水提物对小鼠脂肪组织病理的影响显微镜图。
具体实施方式：
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
实施例1：
一种铁苋菜水提物在制备减肥降脂药物中的应用，其中，所述铁苋菜水提物的制备方法为：采集铁苋菜全草，使用清水清洗三次，再用去离子水清洗干净，置于60℃烘箱烘干至恒重；粉碎研磨过0.5mm筛，即得铁苋菜全草干粉；将铁苋菜全草干粉加入提取罐中，然后加入10倍纯水浸泡90min，煎煮2h后，过滤，收集滤液，过滤后的固体再次用8倍纯水煎煮2h，过滤，收集滤液，过滤后的固体最终加入6倍纯水再煎煮1h，过滤，收集滤液，合并三次滤液，于80℃旋转蒸发仪浓缩至1g/mL的膏状，即得到铁苋菜水提物原药液。
进一步的，本发明所述减肥降脂药物的剂型为混悬剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、片剂、乳剂、溶液剂、滴丸剂、注射剂、栓剂、灌肠剂、气雾剂、贴剂或滴剂中的任意一种。
进一步的，所述减肥降脂药物还包括辅料；所述辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
实施例2：
一种铁苋菜水提物在制备减肥降脂保健品中的应用，其中，所述铁苋菜水提物的制备方法为：采集铁苋菜全草，使用清水清洗三次，再用去离子水清洗干净，置于60℃烘箱烘干至恒重；粉碎研磨过0.5mm筛，即得铁苋菜全草干粉；将铁苋菜全草干粉加入提取罐中，然后加入10倍纯水浸泡90min，煎煮2h后，过滤，收集滤液，过滤后的固体再次用8倍纯水煎煮2h，过滤，收集滤液，过滤后的固体最终加入6倍纯水再煎煮1h，过滤，收集滤液，合并三次滤液，于80℃旋转蒸发仪浓缩至1g/mL的膏状，即得到铁苋菜水提物原药液。
进一步的，所述减肥降脂保健品的剂型为混悬剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、片剂、乳剂、溶液剂、滴丸剂或滴剂中的任意一种。
进一步的，所述减肥降脂保健品还包括辅料；所述辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
实施例3：
铁苋菜水提物对高脂小鼠的减肥降脂作用研究
试验动物：
SPF级昆明小鼠84只，体重18～20g，雌雄各半，购于四川省成都达硕实验动物有限公司，许可证号：SYXK(川)2014-189，符合国家标准GB14925-2010。所有动物操作经由西南科技大学生命科学与工程学院动物保护及利用委员会许可。
小鼠饲养条件：
小鼠每笼4～5只，雌雄分笼；温度20～26℃；相对湿度40～70％；动物房间昼夜明暗交替时间为12/12h，动物给予自由饮水及进食。
动物饲料：
普通饲料，主要原料成分包含优质玉米、优质小麦、膨化豆粕、优质苜蓿草粉、多种维生素、复合酶、赖氨酸、蛋氨酸等氨基酸及氯化钠、磷酸氢钙及多种矿物质等。
高脂饲料由实验室制备，配方包含10％猪油、10％蛋黄粉、1％胆固醇及0.2％胆盐加热融化后混合均匀后再与78.8％普通饲料混合“Nyblom H,
E,Simrén M,etal.The AST/ALT ratio as an indicator of cirrhosis in patients with PBC[J].Liver International,2010,26(7):840-845”。
表1饲料所含成分分析保证值(以每千克饲料计)
高脂模型的建立：
84只昆明小鼠饲喂普通饲料适应7d后，按照体重随机分为高脂组(n＝70)和空白对照组(n＝14)，雌雄各半。高脂组小鼠饲喂高脂饲料，正常对照小鼠饲喂基础饲料。每天固定时间记录小鼠进食量，每3天测量小鼠体重一次。喂养2-3w后，禁食12h，取小鼠尾血，2500rpm离心10min，收集血清，测定血清中TC、TG、HDL-C及LDL-C含量，确认高脂模型建立情况。
按照体重及血脂四项指标，将高脂组随机分成5组，分组情况如下：
组1：铁苋菜水提物低剂量组：高脂饲料喂养，每天定时铁苋菜水提物300mg/Kg灌胃；
组2：铁苋菜水提物中剂量组：高脂饲料喂养，每天定时铁苋菜水提物600mg/Kg灌胃；
组3：铁苋菜水提物高剂量组：高脂饲料喂养，每天定时铁苋菜水提物900mg/Kg灌胃；
组4：辛伐他汀阳性对照组：高脂饲料喂养，每天辛伐他汀灌胃；
组5：高脂模型组：饲喂普通饲料，每天同量无菌水水灌胃。
组6：正常对照组饲喂普通饲料，每天同量无菌水水灌胃。
每天固定时间灌胃一次，连续灌胃8周。
试验期间，各组动物单笼饲养，雌雄分开饲养，室内温度(22±2)℃，湿度控制在(50±10)％，鼠房12h光照黑暗交替，小鼠自由摄食饮水。
样品收集、检测指标及方法：
每隔3天固定时间测量小鼠体重，每天定时称重饲料，计算小鼠摄食量。摄食量为前日投料量减去今日剩料量，并根据记录数据计算食物利用率(体重增加量/摄食量×100％)
收集样本前，小鼠断食12h以上，饮水自由，并称重及测量小鼠体长，同时计算小鼠Lee’s指数。
小鼠生长状况在高脂饮食中的变化：
高脂小鼠建模期间，比较饲喂高脂饲料和饲喂普通饲料的小鼠生长情况相比，正常对照组小鼠生长状态正常，小鼠皮毛光洁，行为及进食量均正常，体质量增加符合正常小鼠生长趋势。相反高脂组小鼠毛发明显凌乱，进食量较正常小鼠明显减少，但体质量缺增长明显，活动缓慢怠懒，行为暴躁易怒，雄性小鼠之间多争斗行为，粪便未见异常。
高脂饲料诱导肥胖小鼠模型的建立：
试验结果如图1所示(与空白组相比较*p<0.05，**p<0.01)，高脂饲料诱导肥胖高脂小鼠模型前，小鼠体重无显著差异(p>0.05)。经过8周不同饲料喂养结束后，高脂组小鼠体重增加明显，相对于正常对照组小鼠有极显著差异(p<0.01)，与造模小鼠比较，正常小鼠在普通饲料的喂养下，体重呈匀速增长趋势，而高脂造模小鼠在造模第二周后，体重有突然升高的现象，这种现象持续2-3周后，体重逐渐趋于平缓增长。对小鼠进行抽样断尾取血检测血脂水平(表2)，试验结果显示高脂组小鼠TC、LDL-C均显著升高，与正常对照组小鼠相比有极显著差异(p<0.01)，TG升高也具有显著性(p<0.05)，HDL-C与对照组相比有明显降低(p<0.05)。表明实验所配置的高脂饲料对促进小鼠肥胖有显著作用，高脂模型建立成功。
表2造模后小鼠血脂水平(
n＝8)
| 组别 | TC(mmol/L) | TG(mmol/L) | HDL-C(mmol/L) | LDL-C(mmol/L) |
| 高脂组 | 9.36±0.33<sup>**</sup> | 2.194±0.241<sup>*</sup> | 0.284±0.138<sup>*</sup> | 15.030±1.01<sup>**</sup> |
| 正常组 | 3.04±0.29 | 1.492±0.383 | 0.821±0.197 | 1.541±0.539 |
注：与正常组相比较*p<0.05，**p<0.01。
铁苋菜水提物对小鼠摄食量及食物利用率的影响：
铁苋菜水提物灌胃期间，小鼠的摄食量变化情况如图2所示，开始灌胃铁苋菜水提液后，从第二周开始，铁苋菜低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组摄食量与正常组小鼠都有较明显的降低趋势，可能是铁苋菜提取物对小鼠摄食量有一定的抑制作用；正常对照组小鼠摄食量明显高于其他组，这可能与饲料的适口性有关，同时高脂饲料提供的热量大于普通饲料，所以小鼠摄食普通饲料的量比高脂饲料多从而满足能量需求。
表3铁苋菜灌胃期间小鼠摄食量的变化(
n＝12)
铁苋菜水提物对小鼠体重变化情况的影响：
给药前时间标记为0，表4所示，铁苋菜水提物开始灌胃高脂小鼠，各剂量小鼠体重增长速度减缓，体重逐渐下降。到第8周灌胃结束时，与灌胃第1周相比，低剂量组小鼠体重降低了8.6％；中剂量体重降低了9.9％；高剂量体重降低了6.7％，差异具有显著性(p<0.05)。
从图3可以看出，从铁苋菜水提物给药开始的第1周起，相对于高脂组，铁苋菜提取物的给药各组(低剂量组、中剂量组、高剂量组)以及辛伐他汀给药的阳性对照组的小鼠体重开始有所降低，且减轻体重升高的作用在给药周期始终有效。上述试验结果表明，铁苋菜提取物具有明显的减缓肥胖小鼠体重上升，并降低小鼠体重的减肥功效。
表4小鼠体重变化情况(
n＝12)
注：各组内与0周对照比较：#p<0.05，##p<0.01；8w时各组与高脂对照组比较：*p<0.05，**p<0.01
铁苋菜水提物对小鼠Lee’s指数的调控作用：
Lee’s指数能够指征小鼠及大鼠的肥胖程度，是目前动物试验中常用的表征肥胖的手段之一。试验结果由表5与图4(注：与正常对照组比较：#p<0.05，##p<0.01；与高脂对照组比较：*p<0.05，**p<0.05)可知，高脂饲料喂养的高脂组小鼠的Lee’s指数最高，与正常对照组小鼠相比其Lee’s指数具有极显著性(p<0.01)，阳性对照小鼠及高剂量铁苋菜水提物灌胃小鼠与高脂对照小鼠相较都具有极显著差异(p<0.01)，铁苋菜中剂量小鼠与高脂对照小鼠相较也具有显著性(p<0.05)，说明铁苋菜水提物能够明显降低高脂小鼠肥胖症状。
表5小鼠Lee’s指数(
n＝12)
| 组别 | Lee’s index | SD |
| 低剂量 | 214.10±2.6 | 1.91 |
| 中剂量 | 209.30±1.7<sup>*</sup> | 1.15 |
| 高剂量 | 204.87±3.3<sup>**</sup> | 2.01 |
| 阳性对照 | 208.90±2.1<sup>**</sup> | 2.44 |
| 高脂对照 | 220.81±4.8<sup>##</sup> | 2.93 |
| 正常对照 | 205.31±1.9 | 1.73 |
注：与正常对照组比较：#p<0.05，
与高脂对照组比较：*p<0.05，
小鼠摘眼取血，室温静置2-3h后，离心设置2500rpm离心10min，上清为澄清淡黄色血清，小心分装置于提前预冷的无菌离心管中，并于超低温冰箱中储存待测。摘取小鼠肝组织、肾组织、肾周脂肪、附睾脂肪(雌鼠摘取子宫附近脂肪)，生理盐水清洗后，滤纸擦干，称重，组织于超低温冰箱中储存待测。
血清血脂测定：
小鼠眼球取血，全血在低温离心机中4℃下2500rpm离心10min分离血清，使用试剂盒测定血清血脂中的TC、TG、HDL-C、LDL-C含量。
血清中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)能够与试剂盒中试剂生成红色醌类化合物，其含量与颜色成正比，故能够通过样本吸光度计算样本中总胆固醇含量[尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].人民卫生出版社，2015.]。根据公式：胆固醇量(mmol/L)＝(样本OD值-空白OD值)/(校准OD值-空白OD值)×校准品浓度(mmol/L)[尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].人民卫生出版社，2015.]。
并根据测定结果计算血脂LDL-C/HDL-C、TG/HDL-C，并计算动脉硬化指数AI，动脉粥样硬化指数A1＝(TC-HDL-C)/HDL-C“尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].人民卫生出版社，2015”。
铁苋菜水提物处理高脂小鼠后对血脂的影响结果如表6中所示，与正常对照组相比，高脂对照组小鼠血清中的TC、TG、LDL-C均明显增加(p＜0.01)，而血清中的HDL-C则显著降低(p＜0.05)。与高脂对照组比较，铁苋菜高剂量和阳性对照组的高脂小鼠血清中的TC、TG、LDL-C含量也呈明显下降状态，HDL-C的升高效果明显。AI指数方面，高脂对照小鼠AI指数较其他各组显著升高，铁苋菜高剂量与阳性对照组均能极显著降低小鼠AI指数(p＜0.01)，同时铁苋菜中剂量也能较明显的降低高脂小鼠AI指数(p＜0.05)。这说明铁苋菜不仅能够降低高脂小鼠的体重，并能够降低体内血脂含量，帮助高脂肥胖小鼠身体恢复正常体态好健康血脂。
表6铁苋菜对小鼠血脂水平的影响(
n＝12)
| 组别 | TC(mmol/L) | TG(mmol/L) | HDL-C(mmol/L) | LDL-C(mmol/L) | AI(％) |
| 低剂量 | 6.106±0.69 | 3.521±0.43 | 0.145±0.06 | 8.498±1.81 | 65.937±3.18 |
| 中剂量 | 5.985±1.56 | 3.221±0.42 | 0.308±0.13 | 7.086±2.71 | 26.224±4.74<sup>*</sup> |
| 高剂量 | 5.267±2.46<sup>**</sup> | 2.909±0.32<sup>**</sup> | 0.408±0.03<sup>**</sup> | 6.219±2.28<sup>**</sup> | 13.625±3.50<sup>**</sup> |
| 阳性对照 | 5.433±2.84<sup>*</sup> | 3.293±0.69<sup>**</sup> | 0.377±0.26<sup>**</sup> | 5.263±2.64<sup>**</sup> | 13.411±3.41<sup>**</sup> |
| 高脂对照 | 6.581±3.36<sup>##</sup> | 4.275±1.02<sup>##</sup> | 0.083±0.12<sup>#</sup> | 11.310±2.92<sup>##</sup> | 80.216±3.08<sup>##</sup> |
| 正常对照 | 5.035±3.29 | 3.173±1.08 | 0.110±0.02 | 6.253±2.53 | 62.954±4.43 |
与正常对照组相比：#p＜0.05，##p＜0.01；与高脂对照组相比：*p＜0.05，**p＜0.01。
血清ALT、AST酶活测定：
谷丙转氨酶(ALT)与丙氨酸及α酮戊二酸组成的底物在37℃、pH7.4的条件下作用30min后，生成丙酮酸和谷氨酸，后再加入2,4-二硝基苯肼(DNPH)盐酸溶液，终止反应，DNPH能够与酮酸中羰基反应生成丙酮酸苯腙，苯腙能在碱性条件下呈显红棕色，酶标仪OD 505下测吸光度计算酶活力“Nyblom H,
E,Simrén M,et al.The AST/ALT ratio asan indicator of cirrhosis in patients with PBC[J].Liver International,2010,26(7):840-845”。
试验步骤：(1)谷丙转氨酶基质液37℃预热，在96孔板中每孔加入20μL，并加入血清样本各5μL，反复吸打仔细混匀后，37℃水浴30min，同时设立对照孔，加入20μL基质液同条件处理；
(2)各孔加入20μL DNPH，同时向对照孔中加入5μL与样本孔相同的血清样本。反复吸打混匀后37℃水浴20min；
(3)每孔中加入200μL 0.4mol/L氢氧化钠液，轻轻水平晃动96孔板混匀，室温放置15min，510nm波长下使用酶标仪测各孔OD值。测定孔OD值-对照孔OD值＝绝对OD值，根据标准曲线(图5)，计算酶活，单位以卡门氏单位计算“Nyblom H,
E,Simrén M,etal.The AST/ALT ratio as an indicator of cirrhosis in patients with PBC[J].Liver International,2010,26(7):840-845”。
测定谷草转氨酶(AST)试剂盒是通过血清中的AST能将α-酮戊二酸及天门冬氨酸转换氨基和酮基，最终经过一系列生化反应最终生成2,4二硝基苯腙，其在碱性的条件下，具有显色反应，能够在紫外光度计中检测“于兰.脑心康口服液对实验大鼠心肌缺血的保护作用及相关机制的研究[D].吉林：吉林大学,2006.”、“Nyblom H,
E,Simrén M,et al.The AST/ALT ratio as an indicator of cirrhosis in patients with PBC[J].Liver International,2010,26(7):840-845”。
试验步骤：(1)谷草转氨酶基质液37℃预热，在96孔板中加入20μL，加入样本血清5μL，反复仔细吹打混匀，小心避免产生气泡，37℃水浴30min，同时设立对照孔，加入20μL基质液同条件处理；
(2)各孔加入20μL DNPH，同时向对照孔中加入5μL与样本孔相同的血清样本。反复吸打混匀后37℃水浴20min；
(3)每孔中加入200μL 0.4mol/L氢氧化钠液，水平晃动96孔板，室温放置15min，510nm波长下于酶标仪中测各孔OD值。计算绝对值OD值，根据标准曲线(图6)，计算酶活，单位以卡门氏单位计算Nyblom H，
E，Simrén M，et al.The AST/ALT ratio as anindicator of cirrhosis in patients with PBC[J].Liver International，2010，26(7)：840-845”。
由表7可以看出，与正常对照相小鼠比，高脂对照组小鼠血清中的ALT、AST活性明显升高，呈极显著性(p＜0.01)。铁苋菜水提物灌胃高脂小鼠后，其高剂量组与高脂对照小鼠的血清中ALT、AST水平相较，有明显改善效果(p＜0.01)，铁苋菜水提物中剂量组具有显著性(p＜0.05)，铁苋菜低剂量组对高脂小鼠血清中ALT、AST的活性抑制效果并不明显(p＞0.05)。血清中AST与ALT两种酶的比值常常被用作诊断是否患有肝纤维化或肝硬化病症的依据，它们的比值越大，患者的肝脏损伤越严重。本次试验中，铁苋菜中剂量组和高剂量组均能够明显降低AST/ALT比值，其中高剂量组效果与阳性药物组相似。
表7铁苋菜对小鼠AST、ALT水平的影响(
n＝12)
| 组别 | AST(U/L) | ALT(U/L) | AST/ALT |
| 低剂量 | 101.73±17.20 | 53.67±2.06 | 1.90±1.33 |
| 中剂量 | 81.32±12.46<sup>*</sup> | 51.07±3.22<sup>*</sup> | 1.59±1.02<sup>*</sup> |
| 高剂量 | 71.98±14.33<sup>**</sup> | 49.04±1.59<sup>**</sup> | 1.47±0.77<sup>**</sup> |
| 阳性对照 | 74.05±19.74<sup>**</sup> | 50.72±9.76<sup>**</sup> | 1.46±0.83<sup>**</sup> |
| 高脂对照 | 120.91±16.425<sup>##</sup> | 60.49±4.47<sup>##</sup> | 2.00±1.27<sup>##</sup> |
| 正常对照 | 73.04±18.738 | 48.33±1.48 | 1.51±0.92 |
与正常对照组相比：#p＜0.05，##p＜0.01；与高脂对照组相比：*p＜0.05，**p＜0.01。
血清超氧化物歧化酶SOD、丙二醛MDA的测定：
称取各组小鼠部分肝脏组织，加入组织9倍匀浆介质，研磨后置于离心机中3000rpm，10min，取肝脏组织上清液，制备为终浓度10％的组织匀浆，4℃储存。使用丙二醇测试盒及总超氧化物歧化酶测试盒，按照说明书测定肝脏中MDA及SOD含量。
检测SOD超氧化物歧化酶使用黄嘌呤氧化酶法，最终反应物为紫红色，可在紫外分光光度计测定其吸光度[83]。结果以活力单位计量，即1mg组织蛋白在1mL反应液中SOD抑制率大50％时的SOD量为一个SOD活力单位(U)[陈汉,王慧君,李学锋,等.甲基苯丙胺对大鼠脑组织中NO,SOD和MDA的影响[J].中国药物依赖性杂志,2007,16(2):102-104.]。计算公式为：总SOD活力(U/mgprot)＝对照OD值-测定OD值/50％×反应体系稀释倍数/待测样本蛋白浓度(mgprot/ml)[陈汉,王慧君,李学锋,等.甲基苯丙胺对大鼠脑组织中NO,SOD和MDA的影响[J].中国药物依赖性杂志,2007,16(2):102-104.]。
肝脏内丙二醛MDA检测方法使用硫代巴比妥酸(TBA，Thibabituric Acid)，结果以nmol/mL表示，不饱和脂肪酸的氧化产物醛类能够与硫代巴比妥酸生生有色化合物，在OD532处用分光光度测定[陈汉,王慧君,李学锋,等.甲基苯丙胺对大鼠脑组织中NO,SOD和MDA的影响[J].中国药物依赖性杂志,2007,16(2):102-104.]。计算公式为：MDA含量(nmol/mgprot)＝(测定OD值-对照OD值)×标准品浓度(10nmol/ml)/待测样本蛋白浓度(mgprot/ml)[陈汉,王慧君,李学锋,等.甲基苯丙胺对大鼠脑组织中NO,SOD和MDA的影响[J].中国药物依赖性杂志,2007,16(2):102-104.]。
SOD超氧化物歧化酶是生物体内最关键和最普遍的抗氧化酶，能够清除机体内的活性氧自由基，保护身体免受自由基损害，使得机体抗氧化性能增强。铁苋菜水提物灌胃高脂小鼠后，检测各组肝脏中SOD及MDA的活性试验结果可由表8发现，高脂对照小鼠肝脏中的SOD酶的活性与正常对照组小鼠比较大大衰减，与铁苋菜处理的低剂量组高脂小鼠肝内SOD酶活性相比别无差异，但铁苋菜中剂量及高剂量组均能显著提高小鼠肝脏中的SOD酶活，其中高剂量提高SOD酶活具极显著(p<0.01)，中剂量提高SOD酶活具有显著性(p<0.05)。脂质过氧化产物丙二醛(MDA)能与含氮类的生物分子发生交联，使动物组织硬化，造成其机体损伤。本次试验结果显示，高脂对照组小鼠肝脏中的MDA较其他各组均有明显累积的现象；相反，铁苋菜水提作用下的高剂量组、中剂量组及低剂量组与高脂对照组相较则含量明显减少，具有显著性，各组对MDA抑制效果与正常对照组相似。
表8铁苋菜对小鼠肝脏SOD、MDA活性的影响(
n＝12)
注：与正常对照组相比：#p<0.05，##p<0.01；与高脂对照组相比：*p<0.05，**p<0.01。
脏体比、附睾周脂重、肾周脂重等指标：
为计算小鼠的脏体比、附睾周脂重/体重和肾周脂重/体重比值及脂肪系数，将处死的小鼠，摘得肝脏组织、肾组织、附睾周围脂肪以及肾脏周围的脂肪组织，使用预冷的PBS洗去表面血渍，滤纸吸取表面水分后，称重计算[李季.柑橘皮膳食纤维对大鼠降血脂效果的研究[D].四川：四川农业大学,2009.]。其中，脂肪系数＝(肾周脂肪+睾丸周脂肪)/动物体重×100％[薛冬娜.荷叶总黄酮提取纯化工艺及减肥降脂作用的研究[D].重庆：西南大学,2008.]。
铁苋菜水提物对高脂小鼠的肝、肾、脂肪重量及脂肪系数的影响效果作用如表9所示，高脂对照组小鼠的肝重量、附睾脂肪及肾周脂肪重量都明显高于正常对照组小鼠，差异极显著(p<0.01)，此项数据证明了高脂饲料能有效促进小鼠体内脂肪的生长。铁苋菜能够抑制小鼠体内脂肪积累，与高脂对照组相较，阳性对照组与高剂量铁苋菜附睾脂肪质量及肝质量都有明显下降(p<0.01)。脂肪系数方面，高脂对照组显著高于其他各组，铁苋菜高剂量组脂肪系数明显下降(p<0.05)，其效果与阳性对照组对高脂小鼠的作用相似。
表9铁苋菜对小鼠肝、肾、肾周脂肪及附睾脂肪质量及脂肪系数的影响(
n＝12)
与正常对照组相比：#p<0.05，##p<0.01；与高脂对照组相比：*p<0.05，**p<0.01。
组织形态学观察：
取小鼠肝脏肉眼观察后，取适量肝脏左叶浸泡于4％的多聚甲醛固定液中固定24h作用，包埋石蜡切片后HE染色，最后光镜下观察拍照。
试验步骤：
(1)取组织于4％多聚甲醛组织固定液(PFA)低速摇床过夜，再置于20％蔗糖浸泡24h，再于30％蔗糖溶液中浸泡24h；
(2)石蜡包埋，存于4℃冰箱，脱模后使用切片机切片，使用载玻片将组织紧贴，60℃烤片2h，再于室温过夜干片；
(3)用PBS在组织周围画圈，标明组织切片区域。再用棉签擦干PBS溶液，使用组化笔圈出组织区域；
(4)使用PBS泡片2次，每次10min；
(5)HE染色3min；
(6)漂洗至反蓝，再使用伊红染色40～60s；
(7)漂洗2min，再用1×PBS漂洗30s；
(8)依次使用80％、95％、100％乙醇分别清洗30s、1min、3min，每个梯度清洗两次，每次换新鲜乙醇；
(9)再使用二甲苯浸泡2次，各3min；
(10)使用中性树胶封片，在正置显微镜下观察拍照。
小鼠脂肪肉眼观察后，取适量脂肪浸泡于4％的多聚甲醛固定液中固定24h作用，石蜡包埋，切片后进行HE染色，光镜下观察拍照。
解剖小鼠肝脏肉眼观察：饲喂普通饲料的正常对照组小鼠肝脏颜色呈健康的暗红色，大小适中；高脂对照组小鼠的肝脏颜色呈奶黄色，有油脂颗粒，体积较正常组小鼠肝脏明显增大，边缘肥大圆钝，整体具有有油腻感；阳性药物对照小鼠肝脏与正常小鼠肝脏形态相似，鲜有脂肪肝情况的出现；铁苋菜水提物灌胃给药8周后的给药各组小鼠肝脏有不同程度体积增大，低剂量组最严重，多数肝脏脂滴含量大，有局部病变的情况，中剂量和高剂量小鼠肝脏多呈红黄色至暗红色，油腻感较少，与正常组小鼠肝脏相似。
显微镜下观察(图7，A：正常组；B：高脂组；C：低剂量组；D：中剂量组；E：高剂量组；F：阳性对照组)，正常对照组小鼠(图7A)肝脏细胞颜色深红，正常大小，且细胞间隙小、胞质丰富、细胞结构、肝窦清晰及肝索排列整齐，整个肝组织无脂肪变性；高脂对照肥胖小鼠(图7B)肝脏组织重度脂肪变性，胞质内含有大量脂滴及脂肪空泡，肝索完全解离，细胞间界限不清；铁苋菜水提物处理浓度低剂量组(图7C)小鼠肝脏细胞肿胀明显、空泡变大，细胞间界模糊，部分肝细胞发生脂肪变性，肝索解离肝；铁苋菜中剂量组(图7D)小鼠肝脏轻度脂肪变性，细胞空泡明显小于低剂量小组，肝索结构尚存；铁苋菜高剂量组(图7E)小鼠肝脏细胞间隙较中剂量组明显更加紧密，细胞核大小与正常组小鼠核细胞相似，其余结构组织尚未见明显异常。阳性对照组高脂小鼠(图7F)肝脏细胞间隙紧密，但胞内伴有轻度脂肪变性，细胞胞稍有空泡产生。
分析各组小鼠脂肪组织的形态学发现(图8，A：正常组；B：高脂组；C：低剂量组；D：中剂量组；E：高剂量组；F：阳性对照组)，高脂模型组小鼠(图8B)脂肪细胞明显大于其他各组小鼠，细胞形态呈多边形且细胞形态变形严重，细胞大小不一；正常对照(图8A)小鼠脂肪细胞与其他各组细胞比较体积最小，排列致密；给药各组小鼠(图8C-E)脂肪组织切片显示，脂肪细胞大小随铁苋菜浓度增大而依次减小，其中铁苋菜高剂量组脂肪细胞大小与阳性对照组细胞大小相似。
对以上实验内容进行总结：
一般人体内三分之一的胆固醇及三分之二的甘油三酯是从外源食物中获得的，是导致高血脂症的重要因素。目前建立高脂血症动物模型，常用的方法包括饮食诱导以及直接灌胃高热量食物等方法。在动物饲料中添加高脂成分(如胆固醇、猪油、蛋黄粉等)的方法中，虽然其建模时间更长，但易操作，对动物伤害低，并形成肥胖方式与人类致病的情况相似，试验数据更具有可信度，故本实验采用高脂饮食饲养小鼠，诱导其为肥胖高脂模型。高脂饲料中胆固醇及胆盐能够显著影响血清总胆固醇及低密度脂蛋白，猪油影响甘油三酯水平。本试验采用10％猪油、10％蛋黄粉、1％胆固醇和0.2％胆盐和78.8％普通饲料配成高脂饲料，持续喂养小鼠8周，高脂模型小鼠较正常对照小鼠体重有明显升高，并采用断尾取血的方式，分离血清，检测血脂四项水平。高脂对照组小鼠TG、TC、LDL-C较正常对照组小鼠明显升高，具有极显著性，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)显著降低。说明本次实验采用高脂饲料建立高脂肥胖小鼠模型成功。
表征机体脂质代谢的指标一般包括血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。其中，高脂血症通常是由于血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)过高，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)过低的疾病。高脂血症与血清或血浆中胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白成正比，与高密度脂蛋白水平呈负相关。本次试验通过设置不同浓度梯度铁苋菜水提物灌胃高脂小鼠8周，发现铁苋菜水提取物能够明显降低高脂小鼠血清TC、TG、LDL-C水平，同时升高HDL-C水平，这与研究降脂类天然活性产物对血脂抑制情况一致。
AI指数(动脉粥样硬化指数)是衡量病人动脉硬化程度的指标，AI值越高则预示动脉粥样硬化(AS)及引起其他心血管疾病的发病风险就越高。动脉粥样硬化临床上常表现为在动脉内壁上形成脂质胆固醇的粥样斑块，从而使机体的血管变窄，易受损，严重还可阻塞血液，并诱发血液凝固，形成血栓，严重能够引起血管堵塞，血压升高甚至危及生命。本次试验结果表明，铁苋菜水提物能显著降低高脂小鼠AI指数，高剂量浓度作用后降低指数程度最大，说明适当的铁苋菜能降低高脂小鼠的动脉粥样硬化及冠心病等心血管疾病发病几率。Lee’s指数常用来反映机体的肥胖程度，并可作为衡量减肥药药效的标准。相较正常对照组小鼠，高脂对照组小鼠Lee’s指数明显升高，说明高脂饲料确实能够增高小鼠Lee’s指数。铁苋菜水提物各剂量组灌胃高脂小鼠8周后，各组小鼠Lee’s指数都明显下降，中剂量及高剂量组小鼠Lee’s指数下降具有显著性。这些试验结果表明铁苋菜水提物在体内有明显的减肥降脂功效。
SOD(Superoxide Dismutase,SOD)，即超氧化物歧化酶，其能够将超氧阴离子(O2-)歧化为过氧化氢(H2O2)，而H2O2在过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的催化下分解为水。谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)可以清除由活性氧引起的脂类过氧化，保护组织细胞免受过氧化物的损伤，保证细胞功能，它与SOD共同组成清除自由基的酶系防御体系。MDA(Malondialdehyde,MDA)丙二醛能与含氮生物分子发生交联，使动物组织硬化，从而造成动物机体损伤。本次试验证明，高脂肥胖小鼠肝脏的SOD酶活性大大降低，MDA含量显著升高，肝损伤严重。经过铁苋菜水提液灌胃高脂肥胖小鼠，8周后能够有效提高高脂小鼠肝脏SOD酶活性，抑制体内MDA产生，从而增强高脂小鼠机体的抗氧化能力，有效制止脂质过氧化并防止机体损伤。
天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)在机体中主要分布于心肌、肝脏、肾脏等组织中，AST在细胞不同部位以两种同工酶的形式存在，细胞质型天门冬氨酸氨基转移酶(s-AST)以及线粒体型天门冬氨酸氨基转移酶(m-AST)。临床上一般诊断肝纤维化或肝硬化疾病的指标用AST和ALT的比值衡量。肝细胞线粒体内，大部分为m-AST，小部分分散于胞质中，ALT相反，大部分分布于细胞质胞质中，肝细胞发生轻度损伤时，细胞膜通透性增强，ALT逸出；肝细胞严重病变时，线粒体内的m-AST被大量释放出来，故肝细胞病变越严重，比值的也越大。本次试验中发现，高脂小鼠血清中AST和ALT含量较正常对照小组明显增高，具有显著性。铁苋菜水提液灌胃高脂小鼠8周后，各剂量组高脂小鼠血清中的AST和ALT含量都有所下降，并且能够降低AST/ALT比值，这说明铁苋菜有一定的保肝护肝作用。
综上所述，本文通过建立小鼠高脂模型，灌胃铁苋菜体内试验证明，铁苋菜水提取物确有较明显的减肥降脂、能够明显提高肝脏抗氧化、降低肝损伤等作用功效。具体表现为高脂小鼠的体重、反映机体肥胖程度的指数Lee’s指数、体脂含量、脏器脂质化及血脂水平都有不同程度的下降。随着铁苋菜水提取物剂量的增加，作用愈发显著。因此，铁苋菜提取物对控制体重，恢复脂质代谢紊乱有明显的功效。
粪便的采集：
肥胖小鼠造模成功后，进行铁苋菜灌胃，灌胃前记做0周，于灌胃第1周开始，每4周固定时间进行小鼠粪便采集。使用腹部按压方法，每只小鼠采集1-2g粪便于1.5mL无菌离心管中，-80℃保存备用。
肠道菌的培养与计数：
取各组小鼠粪便1g，加入4mL灭菌水中，涡旋混匀后，无菌工作台中使用移液器吸取1mL菌液加入9mL无菌生理盐水中，制成浓度为1×10-1的肠道菌液，再根据梯度稀释法，获得1×10-6、1×10-7、1×10-8浓度的肠道菌液。如表10所示，取各梯度菌液100μL，加入各菌种的选择培养基中，平板涂布。根据表中的培养条件，培养24-72h后，使用平板计数法进行微生物菌落计数。结果以菌落形成单位(CFU·g-1)进行计数，结果用每克粪便中的细菌菌落数的对数值表示。
表10肠道菌群培养基及培养条件
培养基：“中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范[M].北京:人民卫生出版社,2003”。
铁苋菜灌胃后，小鼠肠道菌群变化结果如表11所示，组内与灌胃前0w比较，正常对照组双歧杆菌、拟杆菌、肠球菌和大肠杆菌4w与8w无明显变化，双歧杆菌在8w左右有较明显的上升，差异具有统计学意义(p<0.05)。高脂对照组在小鼠高脂饲料喂养4w后，肠道菌有明显的紊乱趋势，包括双歧杆菌、乳酸菌、拟杆菌和肠球菌计数都发生下降，尤其在8w时菌落计数下降最为显著(p<0.01)，而大肠杆菌则于4w后开始上升，8w后尤为显著(p<0.01)。铁苋菜灌胃后初期，各组肠道菌计数与高脂对照组无显著差异，灌胃8w后，乳酸菌在各剂量铁苋菜组中都上升明显(p<0.01)，双歧杆菌在铁苋菜中剂量组和高剂量组小鼠肠道菌种的比例都有明显上升。这两种肠道菌的上升趋势与阳性对照组相同。但铁苋菜水提物和阳性药物对小鼠肠道菌中的拟杆菌、肠球菌及大肠杆菌的调控效果并不明显。
表11小鼠粪便菌群计数结果(log10 CFU·g-1,x±s)
注：各组内与0w对照比较：#p<0.05，##p<0.01
本发明通过研究铁苋菜水提物干预高脂血症小鼠数周，收集粪便，通过检测小鼠肠道菌群改变，探讨铁苋菜在高脂肥胖中的作用。
小鼠是最广泛的动物模型，其作为模式动物具有很多优点，与人类遗传与生理方面有极高的相似性。本试验采用昆明小鼠，饲喂高脂饲料后，建立肥胖高脂模型后，灌胃不同浓度铁苋菜水提物8周。设立0周、4周和8周三个时间节点采取小鼠粪便于-80℃保存。选择几种肠道菌群对应的培养基进行细菌培养，选择不同的浓度梯度进行平板涂布时发现，当稀释倍数较低时(如10-7、10-8、10-9)，厌氧菌几乎无法生长或数目不符合统计规则，而采用较大稀释倍数时(如10-2、10-3、10-4)时细菌密度大，无法计数。本试验通过预实验，确定稀释浓度为10-5、10-6时细菌密度正常，计数符合细菌计数规则。通过培养小鼠肠道微生物发现，高脂饲料诱导肥胖小鼠后，肠道菌群种类有明显紊乱。其中，有益菌双歧杆菌、乳酸菌、拟杆菌和肠球菌含量都有明显下降，而大肠杆菌在8周后在小鼠肠道菌比例变大。有研究发现，肥胖高脂能够使得机体肠道菌群发生紊乱，其中厚壁门菌、拟杆菌门和放线菌门等有益菌均处于逐渐减少的趋势，而有害菌则会在肠道中大量繁殖[王志凡,马慧,陈旺盛,等.高脂饮食对SD大鼠排便状况和粪便菌群的影响及其意义[J].吉林大学学报(医学版),2014,40(4):734-738.Kotzampassi K,Stavrou G.Obesity as a consequence of gutbacteria and diet interactions[J].Isrn Obes,2015,2014(196):651895.]。这些研究与本次试验结果相同，高脂引起肠道菌群紊乱的原因可能与长期高脂食物的摄入有关，长期高脂饮食可能提高了组织代谢率，从而自由基过多生成，引起肠道氧化应激，改变了肠道有益菌的生长环境。同时脂质代谢会产生副产物如胆酸及硫化氢等有害物质，损害肠道，导致炎症，破坏了肠道有益菌的生长代谢。
综上所述，高脂饮食对于自身肠道微生物环境有极大的破坏性，导致肠道菌种比例失衡，体内各个器官组织都收到极大损伤。铁苋菜水提物能够改善肠道微环境，有益于双歧杆菌及乳酸菌的生长，抑制肠道微环境持续恶化，从而具有改善人体肠道健康，维护肠道环境平衡的潜在功效。但本实验仅初步利用经典平板涂布法探究了几种常见的肠道关键菌种，具体铁苋菜是通过何种机制作用哪几种肠道菌达到改善肠道环境的作用，还需更加深入的使用分子测序及信号通路检测等手段研究。
其中，上述研究中的数据分析：分析数据使用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析，组间差异显著性比较用t检验，并且显著水平设定为p<0.05，以平均数±标准差的形式表示此次试验结果。使用Quality One分析Western blot蛋白灰度值，GraphPad Prism 5进行数据分析作图。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。
Claims (10)
1.一种铁苋菜水提物在制备减肥降脂药物中的应用。
2.如权利要求1所述的铁苋菜水提物在制备减肥降脂药物中的应用，其特征在于，所述铁苋菜水提物的制备方法为：采集铁苋菜全草，使用清水清洗三次，再用去离子水清洗干净，置于50～70℃烘箱烘干至恒重；粉碎研磨过0.5mm筛，即得铁苋菜全草干粉；将铁苋菜全草干粉加入提取罐中，然后加入8～12倍纯水浸泡60min以上，煎煮1～3h后，过滤，收集滤液，过滤后的固体再次用6～10倍纯水煎煮1～3h，过滤，收集滤液，过滤后的固体最终加入4～8倍纯水再煎煮0.5～1.5h，过滤，收集滤液，合并三次滤液，于75～85℃旋转蒸发仪浓缩至1g/mL的膏状，即得到铁苋菜水提物原药液。
3.如权利要求2所述的铁苋菜水提物在制备减肥降脂药物中的应用，其特征在于，所述铁苋菜水提物的制备方法为：采集铁苋菜全草，使用清水清洗三次，再用去离子水清洗干净，置于60℃烘箱烘干至恒重；粉碎研磨过0.5mm筛，即得铁苋菜全草干粉；将铁苋菜全草干粉加入提取罐中，然后加入10倍纯水浸泡90min，煎煮2h后，过滤，收集滤液，过滤后的固体再次用8倍纯水煎煮2h，过滤，收集滤液，过滤后的固体最终加入6倍纯水再煎煮1h，过滤，收集滤液，合并三次滤液，于80℃旋转蒸发仪浓缩至1g/mL的膏状，即得到铁苋菜水提物原药液。
4.如权利要求1所述的铁苋菜水提物在制备减肥降脂药物中的应用，其特征在于，所述减肥降脂药物的剂型为混悬剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、片剂、乳剂、溶液剂、滴丸剂、注射剂、栓剂、灌肠剂、气雾剂、贴剂或滴剂中的任意一种。
5.如权利要求1所述的铁苋菜水提物在制备减肥降脂药物中的应用，其特征在于，所述减肥降脂药物还包括辅料；所述辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
6.一种铁苋菜水提物在制备减肥降脂保健品中的应用。
7.如权利要求6所述的铁苋菜水提物在制备减肥降脂保健品中的应用，其特征在于，所述铁苋菜水提物的制备方法为：采集铁苋菜全草，使用清水清洗三次，再用去离子水清洗干净，置于50～70℃烘箱烘干至恒重；粉碎研磨过0.5mm筛，即得铁苋菜全草干粉；将铁苋菜全草干粉加入提取罐中，然后加入8～12倍纯水浸泡60min以上，煎煮1～3h后，过滤，收集滤液，过滤后的固体再次用6～10倍纯水煎煮1～3h，过滤，收集滤液，过滤后的固体最终加入4～8倍纯水再煎煮0.5～1.5h，过滤，收集滤液，合并三次滤液，于75～85℃旋转蒸发仪浓缩至1g/mL的膏状，即得到铁苋菜水提物原药液。
8.如权利要求7所述的铁苋菜水提物在制备减肥降脂保健品中的应用，其特征在于，所述铁苋菜水提物的制备方法为：采集铁苋菜全草，使用清水清洗三次，再用去离子水清洗干净，置于60℃烘箱烘干至恒重；粉碎研磨过0.5mm筛，即得铁苋菜全草干粉；将铁苋菜全草干粉加入提取罐中，然后加入10倍纯水浸泡90min，煎煮2h后，过滤，收集滤液，过滤后的固体再次用8倍纯水煎煮2h，过滤，收集滤液，过滤后的固体最终加入6倍纯水再煎煮1h，过滤，收集滤液，合并三次滤液，于80℃旋转蒸发仪浓缩至1g/mL的膏状，即得到铁苋菜水提物原药液。
9.如权利要求6所述的铁苋菜水提物在制备减肥降脂保健品中的应用，其特征在于，所述减肥降脂保健品的剂型为混悬剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、片剂、乳剂、溶液剂、滴丸剂或滴剂中的任意一种。
10.如权利要求6所述的铁苋菜水提物在制备减肥降脂保健品中的应用，其特征在于，所述减肥降脂保健品还包括辅料；所述辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
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