CN112778474B - 用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签及制备方法 - Google Patents

用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签及制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，其通过下式(Ⅰ‑8)所示的具有稀土笼状配位物的聚合物与单克隆抗体偶联得到，其中，Ln3+为镧系稀土金属离子；
Figure DDA0002865300410000011
本发明不同于现有的质谱流式聚合物金属螯合标签，本发明巧妙的将DOTA配位基团换为笼状配位基团，一方面提高了对稀土离子的配位能力，能减少稀土离子泄露，使金属标签在流式质谱中信号更强；另一方面由于笼状配位物的天线效应，大大提高了稀土配位物的荧光强度，使其可以被流式细胞仪检测。本发明可通过较低的成本制备能用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，从而可极大降低质谱流式检测试剂的使用成本。

Description

用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签及制备 方法
技术领域
本发明涉及生物成像技术领域，特别涉及一种用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签及制备方法。
背景技术
质谱流式细胞术是在流式细胞术基础上发展而来的一种新型的单细胞检测技术，它通过使用金属元素标记的抗体对细胞进行染色，进而通过电感耦合等离子体质谱检测金属信号，达到识别细胞的目的。通过流式细胞术和质谱流式细胞术同时进行生物标志物检测和单细胞分析对病理研究、药物释放和信号网络的研究工作有着重要的意义。流式细胞术和质谱流式细胞术的作用是相互相成的，质谱流式细胞术可以提供多重检测，而流式细胞术有着更高的灵敏度和检测量，并且细胞在检测过程中不会被毁坏。能同时满足这两种检测技术要求的探针将会有广阔的应用范围，然而这类探针的发展却比较缓慢。市场上现在应用的质谱流式细胞仪商品化的标签是基于金属螯合聚合物的金属标签，每条聚合物链上大约连有20-30个稀土金属，每个抗体大约连有2-3个聚合物链。一方面，市场上的标签通常是国外进口，价格昂贵，一套标准的试剂盒(含稀土配位聚合物40*100微克，可进行40次标记实验)价格通常在50000人民币以上。另一方面，市场上的标签上的金属信号可以有效的被质谱检测到，从而达到单细胞检测的效果，然而稀土金属的荧光能力较弱，不能很好的应用于传统流式细胞仪检测。而现有文献报道过的荧光/金属检测试剂无论是荧光信号还是金属信号强度都比较弱，难以满足流式细胞术和质谱流式细胞术的检测要求。
所以，现在需要一种更可靠的方案。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签及制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，其通过下式(Ⅰ-8)所示的具有稀土笼状配位物的聚合物与单克隆抗体偶联得到，其中，Ln3+为镧系稀土金属离子；
Figure BDA0002865300390000021
该具有稀土笼状配位物的聚合物一端带有马来酰胺基团的聚合物，其中稀土金属可以提供质谱流式细胞术所能检测的金属信号，而笼状配位结构可增强稀土的发光性能，使其可用于流式细胞术检测，马来酰胺基团的作用则是用于后续标记抗体。
优选的是，其制备方法包括以下步骤：
1)制备嵌段单分散共聚物，其结构如式(Ⅰ-5)所示；
2)通过所述嵌段单分散共聚物、稀土笼状配位物、1,8-二(马来酰亚胺)-3,6-二氧杂辛烷制备如式(Ⅰ-8)所示的具有稀土笼状配位物的聚合物，稀土笼状配位物的结构如式(Ⅰ-6)所示，1,8-二(马来酰亚胺基)-3,6-二氧杂辛烷的结构如式(Ⅰ-7)所示，
该具有稀土笼状配位物的聚合物的合成路线为：
Figure BDA0002865300390000031
3)在所述具有稀土笼状配位物的聚合物上偶联单克隆，得到该稀土笼状配位物金属荧光双模标签。
优选的是，所述嵌段单分散共聚物通过N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯、N,N-二甲基丙烯酰胺、叔丁基苯并碳二硫酸酯和偶氮二异戊腈制备得到，所述嵌段单分散共聚物的合成路线为：
Figure BDA0002865300390000032
其中，式(Ⅰ-1)为N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯，式(Ⅰ-2)为N,N-二甲基丙烯酰胺，式(Ⅰ-3)为叔丁基苯并碳二硫酸酯，式(Ⅰ-4)为偶氮二异戊腈。
优选的是，所述嵌段单分散共聚物的制备方法具体包括以下步骤：
1-1)将N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯、N,N-二甲基丙烯酰胺、叔丁基苯并碳二硫酸酯和偶氮二异戊腈加入到干燥的DMF中；
1-2)反应体系用液氮进行冷冻除氧，之后在氮气保护下加热搅拌反应；
1-3)冷却至室温，加入到乙醚中沉淀，所得固体再溶于1,4-二氧六环中，并再次用乙醚沉淀；
1-4)过滤后得到的固定产物进行干燥，得到所述嵌段单分散共聚物。
优选的是，所示具有稀土笼状配位物的聚合物的制备方法具体包括以下步骤：
2-1)在嵌段单分散共聚物上连接稀土笼状配位物，具体为：
2-1-1)取步骤1)得到的嵌段单分散共聚物溶于DMF中，加入三乙胺，搅拌，得到混合物1；
2-1-2)取式(Ⅰ-8)所示的稀土笼状配位物溶于DMF中，将得到的混合物2加入到步骤2-1-1)得到的混合物1中，在氮气保护下搅拌过夜；
2-1-3)将所有溶剂在真空下除去，用水提取反应产物，得到水溶液；
2-1-4)用透析管透析步骤2-1-3)所得水溶液，并清洗；
2-1-5)将透析管中所剩溶液蒸干，真空干燥，得中间产品1，即连接有稀土笼状配位物的嵌段单分散共聚物；
2-2)在中间产品1上连接侧链马来酰胺，具体为：
2-2-1)将中间产品1溶于含M DL-二硫苏糖醇的磷酸缓冲液中，并在加热条件下搅拌；
2-2-2)用醋酸将步骤2-2-1)得到的产物的pH值调节至4；
2-2-3)用透析管透析，并清洗；
2-2-4)将步骤2-2-3)得到的溶液转移至反应瓶中，加入磷酸缓冲液，搅拌；
2-2-5)向步骤2-2-4)得到的产物中加入1,8-二(马来酰亚胺)-3,6-二氧杂辛烷的DMF溶液中，搅拌；
2-2-6)向步骤2-2-5)得到的产物中加入水，过滤除去不溶物，所得溶液用透析管透析；
2-2-7)将所得溶液分装冻干，即得所述具有稀土笼状配位物的聚合物。
优选的是，所述步骤3具体包括：
3-1)取单克隆抗体加入到含PBS缓冲液的超滤管中，室温下离心；
3-2)离心结束后向超滤管中加入含TCEP的PBS缓冲液，吹打混匀，并在37℃下孵育；
3-3)取出超滤管，加入TBS缓冲液，室温下离心；
3-4)弃废液，向得到的离心液中加入TBS缓冲液，重复洗涤，室温下离心，得到处理后的单克隆抗体溶液；
3-5)取步骤2)得到的具有稀土笼状配位物的聚合物，用TBS缓冲液溶解，然后加入到步骤3-4)得到的处理后的单克隆抗体溶液中，37℃孵育；
3-6)用TBS缓冲液清洗；
3-7)清洗后的产物中加入TBS缓冲液和叠氮化钠溶液，调节产物浓度，完成具有稀土笼状配位物的聚合物与单克隆抗体偶联，即得所述稀土笼状配位物金属荧光双模标签，4℃下保存。
优选的是，所述单克隆抗体为CD-3、CD-4、CD-8、CD-45中的任意一种。
优选的是，所述单克隆抗体为CD-4，Ln3+为Eu3+。
本发明的有益效果是：
本发明不同于现有的质谱流式聚合物金属螯合标签，本发明巧妙的将DOTA配位基团换为笼状配位基团，一方面提高了对稀土离子的配位能力，能减少稀土离子泄露，使金属标签在流式质谱中信号更强；另一方面由于笼状配位物的天线效应，大大提高了稀土配位物的荧光强度，使其可以被流式细胞仪检测。本发明可通过较低的成本制备能用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，从而可极大降低质谱流式检测试剂的使用成本。本发明通过用一种金属标签即可同时完成单细胞质谱流式细胞术和流式细胞术双重检测，对细胞生物学免疫学、血液学、药物筛选研发、临床诊断等方面的研究有着重要意义。
附图说明
图1为本发明的用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签的合成路线；
图2为本发明的实施例1中的嵌段单分散共聚物的1H NMR表征结果；
图3为本发明的实施例1中的用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签对T细胞分群的结果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
本实施例的一种用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，其通过下式(Ⅰ-8)所示的具有稀土笼状配位物的聚合物与单克隆抗体偶联得到，其中，Ln3+为镧系稀土金属离子，即Ln为镧、铈、镨、钕、钷、钐、铕、钆、铽、镝、钬、铒、铥、镱、镥中的任意一种；
Figure BDA0002865300390000061
该用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签的制备方法包括以下步骤：
1)制备嵌段单分散共聚物，其结构如式(Ⅰ-5)所示；
所述嵌段单分散共聚物通过N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯、N,N-二甲基丙烯酰胺、叔丁基苯并碳二硫酸酯和偶氮二异戊腈制备得到，所述嵌段单分散共聚物的合成路线为：
Figure BDA0002865300390000071
其中，式(Ⅰ-1)为N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯，式(Ⅰ-2)为N,N-二甲基丙烯酰胺，式(Ⅰ-3)为叔丁基苯并碳二硫酸酯，式(Ⅰ-4)为偶氮二异戊腈。
2)通过所述嵌段单分散共聚物、稀土笼状配位物、1,8-二(马来酰亚胺)-3,6-二氧杂辛烷制备如式(Ⅰ-8)所示的具有稀土笼状配位物的聚合物，稀土笼状配位物的结构如式(Ⅰ-6)所示，1,8-二(马来酰亚胺基)-3,6-二氧杂辛烷的结构如式(Ⅰ-7)所示；
该具有稀土笼状配位物的聚合物的合成路线为：
Figure BDA0002865300390000072
其中，在一种可选的实施例中，稀土笼状配位物的制备方法可参照中国专利CN201510455349.9，一种镧系化合物及其制备方法和应用。
3)在所述具有稀土笼状配位物的聚合物上偶联单克隆，得到该稀土笼状配位物金属荧光双模标签。该稀土笼状配位物金属荧光双模标签的合成路线如图1所示。
在优选的实施例中，所述单克隆抗体为CD-3、CD-4、CD-8、CD-45中的任意一种。
本发明中的稀土笼状配位物有高消光系数，可高效吸收激发光能，也有长寿命激发态；配位物具有侧链氨基，可以和聚合物链上的活性琥珀酰亚胺结构共价结合在嵌段共聚物上，从而形成具有土金属笼状配位物的聚合物。该具有土金属笼状配位物的聚合物通过二硫苏糖醇处理后末端的硫苯甲酸可被还原为巯基，进而与双官能团偶联剂1,8-二(马来酰亚胺)-3,6-二氧杂辛烷反应，形成末端带马来酰胺基团的聚合物：具有稀土笼状配位物的聚合物，该聚合物与单克隆偶联后即的稀土笼状配位物金属荧光双模标签。
本发明中巧妙的将DOTA配位基团换为笼状配位基团，一方面提高了对稀土离子的配位能力，能减少稀土离子泄露，使金属标签在流式质谱中信号更强；另一方面由于笼状配位物的天线效应，大大提高了稀土配位物的荧光强度，使其可以被流式细胞仪检测到。这样通过用一种金属标签即可同时完成单细胞质谱流式细胞术和流式细胞术双重检测，对细胞生物学免疫学、血液学、药物筛选研发、临床诊断等方面的研究有着重要意义。
以上为本发明的总体构思，以下提供更为具体的实施例以作进一步说明。
实施例1
本实施例中，所述单克隆抗体选择为CD-4，Ln3+选择为Eu3+。
本实施例中，用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签的制备方法包括以下步骤：
1、制备嵌段单分散共聚物
1-1)将2.46gN-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯、0.96gN,N-二甲基丙烯酰胺、54mg叔丁基苯并碳二硫酸酯和16mg偶氮二异戊腈加入到45mL干燥的DMF中；
1-2)反应体系用液氮进行冷冻除氧，之后在氮气保护下60℃搅拌16小时；
1-3)冷却至室温，加入到400ML乙醚中沉淀，所得固体再溶于1,4-二氧六环中，并再次用乙醚沉淀；
1-4)过滤后得到的固定产物进行干燥，得到所述嵌段单分散共聚物3.0g。
参照图2，为嵌段单分散共聚物的1H NMR表征结果。
2、制备具有稀土笼状配位物的聚合物
2-1)在嵌段单分散共聚物上连接稀土笼状配位物，具体为：
2-1-1)取100mg步骤1)得到的嵌段单分散共聚物溶于3mL DMF中，加入1mL三乙胺，搅拌，得到混合物1；
2-1-2)取183mg式(Ⅰ-8)所示的稀土笼状配位物((稀土金属为151Eu))溶于2mL DMF中，将得到的混合物2加入到步骤2-1-1)得到的混合物1中，在氮气保护下搅拌过夜；
2-1-3)将所有溶剂在真空下除去，用水提取反应产物，得到水溶液；
2-1-4)用5K MW C.O.透析管透析步骤2-1-3)所得水溶液，并用5x3mL水洗(清洗5次，每次3ml水)，除去未反应的原料及分子量小于5K的短链聚合物；
2-1-5)将透析管中所剩溶液蒸干，真空干燥，得中间产品1，即连接有稀土笼状配位物的嵌段单分散共聚物；
2-2)在中间产品1上连接侧链马来酰胺，具体为：
2-2-1)将中间产品1溶于含20m MDL-二硫苏糖醇的磷酸缓冲液(50mM，pH＝8.5)中，并在50℃下搅拌1小时；
2-2-2)用醋酸将步骤2-2-1)得到的产物的pH值调节至4；
2-2-3)用5K MW C.O.透析管透析，并用5x3mL水洗(清洗5次，每次3ml水)；
2-2-4)将步骤2-2-3)得到的溶液转移至反应瓶中，加入磷酸缓冲液(100mM,pH8.5,5mL)，搅拌；
2-2-5)向步骤2-2-4)得到的产物中加入含170mg 1,8-二(马来酰亚胺)-3,6-二氧杂辛烷的DMF溶液中，常温搅拌1小时；
2-2-6)向步骤2-2-5)得到的产物中加入3mL水，过滤除去不溶物，所得溶液用5KMW C.O.透析管透析(5X5mL)；
2-2-7)将所得溶液分装冻干，即得所述具有稀土笼状配位物的聚合物。
3、在具有稀土笼状配位物的聚合物上偶联单克隆
3-1)取100ug单克隆抗体CD-4加入到含400uL PBS缓冲液(100mM，PH＝7.2，含2.5mM EDTA)的50k超滤管中，室温下离心(12,000g，10min)；
3-2)离心结束后向超滤管中加入100ul含4mM TCEP的PBS缓冲液(100mM，PH＝7.2，含2.5mM EDTA)，吹打混匀，并在37℃下孵育30分钟；
3-3)取出超滤管，加入300uL浓度为20mM的Tris-buffered saline缓冲液(TBS,pH7.0)，室温下离心(12,000g，10min)；
3-4)弃废液，向得到的离心液中加入400uL浓度为20mM的Tris-buffered saline缓冲液(TBS,pH 7.0)，重复洗涤，室温下离心(12,000g，10min)，得到处理后的单克隆抗体溶液；
3-5)取100ug步骤2)得到的具有稀土笼状配位物的聚合物，用80uL TBS缓冲液溶解，然后加入到步骤3-4)得到的处理后的单克隆抗体溶液中，37℃孵育90分钟；
3-6)用400uL浓度为20mM的Tris-buffered saline缓冲液清洗三次；3-7)清洗后的产物中加入TBS缓冲液，使产物总体积达到100uL，检测蛋白浓度，加入0.01％叠氮化钠溶液，使得抗体终浓度为0.5mg/mL,完成具有稀土笼状配位物的聚合物与单克隆抗体偶联，即得所述稀土笼状配位物金属荧光双模标签，4℃下保存。使用时，用所得稀土笼状配位物金属荧光双模标签对人外周血单核细胞进行染色并通过质谱流式细胞仪检测。参照图3，为实施例1制备的稀土笼状配位物金属荧光双模标签对T细胞分群的结果，可以看出实施例1制备的稀土笼状配位物金属荧光双模标签对T细胞可以实现有效分群(左右两个细胞群)，其中标记有CD4抗体的细胞占细胞总数的55.07％。图3中，纵坐标为165Ho-cd45，横坐标为151Eu-cd4，左边的群在纵坐标上的数值为100-102之间(这个数值是165Ho的离子强度，由于165Ho是连在CD45上的，也可以认为是CD45的强度)，表示它检测到了CD45的信号，在横坐标上的数值为-100-101之间(151Eu的离子强度，等价于CD4)，数值很小，可以认为没有CD4的信号，也就是左边的群只有标记了CD45的细胞。右边的群纵坐标与左边一致，表明右边的群细胞上标有CD45，横坐标为101-103之间，证明可以检测到CD4的信号，说明右边的细胞上也标有CD4.也可以这么理解：所有的细胞上都标记了CD45(就是纵坐标抗体)，然后这些细胞中有一部分细胞表面有cd4抗原，我们用cd4标签去标记，就可以把这一部分细胞区分出来(右边的群)，而表面没有cd4抗原的细胞，则留在左面的群里。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。

Claims (8)

1.一种用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，其特征在于，其通过下式(Ⅰ-8)所示的具有稀土笼状配位物的聚合物与单克隆抗体偶联得到，其中，Ln3+为镧系稀土金属离子；
Figure FDA0002865300380000011
2.根据权利要求1所述的用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：
1)制备嵌段单分散共聚物，其结构如式(Ⅰ-5)所示；
2)通过所述嵌段单分散共聚物、稀土笼状配位物、1,8-二(马来酰亚胺)-3,6-二氧杂辛烷制备如式(Ⅰ-8)所示的具有稀土笼状配位物的聚合物，稀土笼状配位物的结构如式(Ⅰ-6)所示，1,8-二(马来酰亚胺基)-3,6-二氧杂辛烷的结构如式(Ⅰ-7)所示，
该具有稀土笼状配位物的聚合物的合成路线为：
Figure FDA0002865300380000021
3)在所述具有稀土笼状配位物的聚合物上偶联单克隆，得到该稀土笼状配位物金属荧光双模标签。
3.根据权利要求2所述的用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，其特征在于，所述嵌段单分散共聚物通过N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯、N,N-二甲基丙烯酰胺、叔丁基苯并碳二硫酸酯和偶氮二异戊腈制备得到，所述嵌段单分散共聚物的合成路线为：
Figure FDA0002865300380000022
其中，式(Ⅰ-1)为N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯，式(Ⅰ-2)为N,N-二甲基丙烯酰胺，式(Ⅰ-3)为叔丁基苯并碳二硫酸酯，式(Ⅰ-4)为偶氮二异戊腈。
4.根据权利要求3所述的用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，其特征在于，所述嵌段单分散共聚物的制备方法具体包括以下步骤：
1-1)将N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯、N,N-二甲基丙烯酰胺、叔丁基苯并碳二硫酸酯和偶氮二异戊腈加入到干燥的DMF中；
1-2)反应体系用液氮进行冷冻除氧，之后在氮气保护下加热搅拌反应；
1-3)冷却至室温，加入到乙醚中沉淀，所得固体再溶于1,4-二氧六环中，并再次用乙醚沉淀；
1-4)过滤后得到的固定产物进行干燥，得到所述嵌段单分散共聚物。
5.根据权利要求4所述的用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，其特征在于，所示具有稀土笼状配位物的聚合物的制备方法具体包括以下步骤：
2-1)在嵌段单分散共聚物上连接稀土笼状配位物，具体为：
2-1-1)取步骤1)得到的嵌段单分散共聚物溶于DMF中，加入三乙胺，搅拌，得到混合物1；
2-1-2)取式(Ⅰ-8)所示的稀土笼状配位物溶于DMF中，将得到的混合物2加入到步骤2-1-1)得到的混合物1中，在氮气保护下搅拌过夜；
2-1-3)将所有溶剂在真空下除去，用水提取反应产物，得到水溶液；
2-1-4)用透析管透析步骤2-1-3)所得水溶液，并清洗；
2-1-5)将透析管中所剩溶液蒸干，真空干燥，得中间产品1，即连接有稀土笼状配位物的嵌段单分散共聚物；
2-2)在中间产品1上连接侧链马来酰胺，具体为：
2-2-1)将中间产品1溶于含20mM DL-二硫苏糖醇的磷酸缓冲液中，并在加热条件下搅拌；
2-2-2)用醋酸将步骤2-2-1)得到的产物的pH值调节至4；
2-2-3)用透析管透析，并清洗；
2-2-4)将步骤2-2-3)得到的溶液转移至反应瓶中，加入磷酸缓冲液，搅拌；
2-2-5)向步骤2-2-4)得到的产物中加入1,8-二(马来酰亚胺)-3,6-二氧杂辛烷的DMF溶液中，搅拌；
2-2-6)向步骤2-2-5)得到的产物中加入水，过滤除去不溶物，所得溶液用透析管透析；
2-2-7)将所得溶液分装冻干，即得所述具有稀土笼状配位物的聚合物。
6.根据权利要求5所述的用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，其特征在于，所述步骤3具体包括：
3-1)取单克隆抗体加入到含PBS缓冲液的超滤管中，室温下离心；
3-2)离心结束后向超滤管中加入含TCEP的PBS缓冲液，吹打混匀，并在37℃下孵育；
3-3)取出超滤管，加入TBS缓冲液，室温下离心；
3-4)弃废液，向得到的离心液中加入TBS缓冲液，重复洗涤，室温下离心，得到处理后的单克隆抗体溶液；
3-5)取步骤2)得到的具有稀土笼状配位物的聚合物，用TBS缓冲液溶解，然后加入到步骤3-4)得到的处理后的单克隆抗体溶液中，37℃孵育；
3-6)用TBS缓冲液清洗；
3-7)清洗后的产物中加入TBS缓冲液和叠氮化钠溶液，调节产物浓度，完成具有稀土笼状配位物的聚合物与单克隆抗体偶联，即得所述稀土笼状配位物金属荧光双模标签，4℃下保存。
7.根据权利要求6所述的用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，其特征在于，所述单克隆抗体为CD-3、CD-4、CD-8、CD-45中的任意一种。
8.根据权利要求7所述的用于流式细胞术的稀土笼状配位物金属荧光双模标签，其特征在于，所述单克隆抗体为CD-4，Ln3+为Eu3+。
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