CN112175880A

CN112175880A - 一种耐盐碱解磷菌及其应用

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Publication number: CN112175880A
Application number: CN202011132508.9A
Authority: CN
Inventors: 王瑾; 杨成立; 雷涛; 李婷婷; 彭湃; 杨君子
Original assignee: Shanxi Dadi Ecological Environment Technology Research Institute Co ltd; Shenyang Research Institute of Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Shanxi Dadi Ecological Environment Technology Research Institute Co ltd; Shenyang Research Institute of Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 2020-10-21
Filing date: 2020-10-21
Publication date: 2021-01-05
Anticipated expiration: 2040-10-21
Also published as: CN112175880B

Abstract

本发明涉及农用微生物技术领域，具体涉及一种耐盐碱解磷菌及其在盐碱土壤改良中的应用，其中，所述解磷菌为巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium，所述解磷菌的保藏号为CCTCC M 2020453。本发明的解磷菌能够耐受pH＝9.5，5.0％NaCl的盐碱条件，同时具有较高的解磷功能，尤其适用于盐碱地解磷菌的生物菌肥开发。

Description

一种耐盐碱解磷菌及其应用

技术领域

本发明涉及盐碱地改良技术领域，具体涉及一种耐盐碱解磷菌及其在盐碱地中的应用。

背景技术

磷元素是植物生长发育所必需的矿物质元素之一，主要用于植物生长过程中核酸、磷脂和ATP的合成，并通过光合作用、生物氧化、营养物质吸收和细胞分解代谢等途径促进作物生长。土壤中95％以上的磷以有机磷或者不可溶性的无机磷等无效态磷存在，不能够被植物利用。解磷菌(Phosphate-Solubilizing Bacteria)是一类可以将难溶性磷转化成植物可吸收利用磷素的一种促生菌，对于提高土壤有效磷含量具有重要作用，筛选具有高效解磷菌已成为我国农业微生物技术领域的热点研究课题。

中国盐碱土总面积超过约14.87亿亩，占我国总可利用土壤面积的4.88％。不同类型的盐碱土中所含的盐碱成分不同，主要包括NaSO₄、NaCl、Na₂CO₃、NaHCO₃，另外盐碱土中含有大量的Ca²⁺、Mg²⁺、Al³⁺等金属离子。盐碱土壤中的磷酸盐离子容易与土壤中的钙离子、铝离子等金属离子产生络合作用，致使盐碱土壤中有效磷含量极低，从而导致盐碱地植被对磷素吸收不够。盐碱地改良的方法主要包括水利工程改良、化学改良、生物改良。在治理盐碱地的各项技术措施中，生物改良被认为是既经济又有效的改良途径，通过筛选适宜盐碱环境的解磷菌提高盐碱地磷素含量，形成有利于农业生态的良性循环。

目前已报道的解磷细菌主要集中在芽孢杆菌属、假单胞杆菌属、沙雷氏菌属、土壤杆菌属、节杆菌属等，但已有报道中不同菌属、同一菌属不同菌种之间的解磷效能高低不齐，解磷机理不同，在盐碱地中的应用效果不一，部分解磷菌仅能够耐受高盐环境，不能耐受高碱环境，部分解磷菌仅能耐受高碱环境，不能耐受高盐环境，尤其在实际盐碱地应用过程中，受复杂的大田环境影响，相比温室环境解磷菌的作用大打折扣。因此，通过筛选既能耐受高盐又能耐受高碱环境的解磷菌对于开发稳定高效应用于盐碱土壤的解磷菌生物肥料具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的上述缺陷，提供一种耐盐碱解磷菌及其在盐碱地中的应用。

本发明的目的可通过以下的技术措施来实现：

一种耐盐碱的解磷菌，解磷菌为巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium DC-3-P，其已于2020年8月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国武汉大学，保藏号为CCTCCNO:M 2020453。

所述解磷菌于无机磷液体培养基中培养生长；该菌株基因序列为SEQ ID No.1中碱基所示；

所述无机磷液体培养基成分为：10-15g葡萄糖，0.5-1g酵母粉，0.5-1g(NH₄)₂SO₄，0.3-0.5g NaCl，0.3-0.5g KCl，0.3-0.5g MgSO₄·7H₂O，0.03-0.05g FeSO₄·7H₂O，0.03-0.05g MnSO₄·4H₂O，5-10g Ca₃(PO₄)₂，补蒸馏水至1000mL，pH 7.0-7.5。

一种耐盐碱解磷菌的应用，所述菌株在解磷中的应用。

所述菌株在pH为7.0-9.5的碱性环境和/或0.5-5.0％NaCl的盐环境下解磷的应用。

一种耐盐碱菌剂，菌剂含所述的解磷菌。

所述菌剂为菌株发酵液、发酵培养物或发酵浓缩物。

所述菌剂为所述巨大芽孢杆菌于发酵培养基中发酵条件下培养1-2天，分离沉淀即为发酵培养物，滤液即为发酵液，发酵液进一步浓缩即为浓缩物。

所述发酵培养条件为发酵温度控制在30℃，pH控制在7.2，调节转速使溶解氧维持在30％以上。

一种微生物菌肥，所述微生物菌肥含所述的菌剂。

所述微生物菌肥为菌剂5-10份，有机载体80-85份。

所述有机载体为载体或载体和糖渣；其中，有机载体为载体和糖渣按质量5-10：1-2比例混合；所述载体为秸秆粉、碳酸钙、草木灰或麦麸粉。

优选，所述有机载体为载体和糖渣

一种菌肥的应用，所述的微生物菌肥在土壤改良或盐碱地生物改良中的应用。

所述盐碱地生物为在pH为7.0-9.5的碱性环境和/或0.5-5.0％NaCl的盐环境。

优选地，所述盐碱地类型为中重度内陆苏打盐碱地，盐碱土pH为8.5-9.5之间，ESP为20％-40％。

本发明还提供了上述的解磷菌、或以解磷菌为基础制备的微生物菌肥在盐碱地水稻田中的用途。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明解磷菌为一株能够耐盐碱的解磷菌DC-3-P菌株，且发现该菌株能够同时耐受高盐高碱环境，相对于现有技术中的耐盐碱解磷菌株更加有利于开发和应用。

本发明所发现的解磷菌能够耐受高盐高碱环境，对于盐碱土壤或低磷贫磷土壤中不溶性磷元素转化为可溶性磷元素具有高效解磷效果，尤其是中重度盐碱地，具有良好的解磷效果。

附图说明

图1是本发明实施例中不同盐碱胁迫条件对解磷菌DC-3-P菌株解磷效果的影响。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本实施例提供了一种耐盐碱解磷菌，所述解磷菌为巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)DC-3-P菌株，属于革兰氏阳性菌，所述解磷菌的保藏号为CCTCC M 2020453，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2020年08月27日。

该菌株属于耐盐碱解磷菌，命名为DC-3-P，菌株的形态特征为：粗大杆状，LB平板上菌落呈黄色，椭圆形或圆形。菌株能够耐受pH 9.5，5.0％NaCl的高碱高盐环境，最适生长条件为pH7.0，温度30℃。基于耐盐碱解磷菌制备微生物肥料，能够适应盐碱地的高盐高碱环境，有利于盐碱地生物菌肥的开发及应用。

进一步地，将菌株送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，测定基因序列为SEQ ID No.1，将基因序列登录美国国立生物技术信息中心网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)，进行核苷酸序列Blast比对，得到与相关菌株的基因序列同源的若干核苷酸序列，结果表明DC-3-P菌株与巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的基因序列的同源性在99％以上，分离菌株被鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。

本发明提供的微生物肥料由5-15份解磷菌，80-85份有机载体组成。

以下主要以中重度盐碱土壤为例，说明DC-3-P菌株的解磷性能。

本发明所提供的保藏号为CCTCC M 2020453的解磷菌DC-3-P菌株的无机磷液体培养基如下：10-15g葡萄糖，0.5-1g酵母粉，0.5-1g(NH₄)₂SO₄，0.3-0.5g NaCl，0.3-0.5g KCl，0.3-0.5g MgSO₄·7H₂O，0.03-0.05g FeSO₄·7H₂O，0.03-0.05g MnSO₄·4H₂O，5-10g Ca₃(PO₄)₂，补蒸馏水至1000mL，pH 7.0-7.5。

具体地，限制性无机磷液体培养基为：在无机磷培养基的基础上，调整NaCl的浓度为0.5％，1.0％，2.0％，3.0％，4.0％，5.0％，形成不同盐度的无机磷-钠盐培养基。

具体地，限制性无机磷液体培养基为：在无机磷培养基的基础上，调整培养基pH为7.0，7.5，8.0，8.5，9.0，9.5，形成不同碱度的无机磷培养基。

以5％的接种量将解磷菌DC-3-P回接至pH为9.5，NaCl为5.0％的无机磷培养基中，30℃、150rpm培养条件下，3d解磷效能达到105.28mg/L，充分说明解磷菌DC-3-P能够耐受较高的盐碱环境，同时具有较高的解磷效果，对于盐碱地开发微生物菌肥具有不错的应用前景。

实施例1：解磷菌DC-3-P菌株的分离和鉴定

(一)本发明中的DC-3-P菌株采用富集培养法从黑龙江盐碱土壤中分离得到，具体步骤如下：

(1)无机磷液体培养基如下：10g葡萄糖，0.5g酵母粉，0.5g(NH₄)₂SO₄，0.3g NaCl，0.3g KCl，0.3g MgSO₄·7H₂O，0.03g FeSO₄·7H₂O，0.03g MnSO₄·4H₂O，5g Ca₃(PO₄)₂，补蒸馏水至1000mL，pH 7.0-7.5。

(2)驯化过程：在无菌操作情况下，向100mL灭菌的无机磷培养基中加入1g黑龙江盐碱土壤，于30℃、150r/min条件下的摇床中振荡培养7天，取5mL菌液接种到100mL新无机磷液体培养基中，无机磷液体培养基pH按照0.5个单位增加，即7.0，7.5，8.0，8.5，9.0，9.5，同时改变无机磷液体培养基NaCl浓度0.5％，1.0％，2.0％，3.0％，4.0％，5.0％，连续转接5次，直至无机磷液体培养基中NaCl浓度为5.0％，pH为9.5。

(3)分离纯化：驯化培养好的菌液采用无菌水按10^-3、10^-4、10^-5、10^-6和10^-7稀释，取0.1mL 10^-5稀释液涂在含有无机磷培养基琼脂平板上，30℃倒置培养4-7天，挑取单菌落，进行3次划线分离纯化，得到纯化的菌株DC-3-P。

(二)采用基因测序法对DC-3-P菌株进行分类鉴定，具体步骤如下：

(1)细菌总DNA的制备：用天根公司基因组提取试剂盒提取DC-3-P菌株的基因组DNA，作为PCR反应的模板。

(2)基因的PCR扩增：

使用如下扩增引物：

第一引物27F：5’-AgAgTTTgATCMTggCTCAg-3’[M＝C,A]；

第二引物1492R：5’-CggYTACCTTgTTACgACTT-3’[Y＝T,C]。

PCR反应体系如表1所示。

表1 PCR反应体系

PCR反应条件为：(95℃预变性5分钟)-(94℃变性1分钟-55℃退火30秒-72℃延伸2分钟)×35个循环-(72℃延伸10分钟)。

(3)PCR产物的纯化、克隆、测序和分析：

将PCR产物送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，测定16S rRNA基因序列如SEQ ID No.1所示，将基因序列登录美国国立生物技术信息中心网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)，进行核苷酸序列Blast比对，得到与相关菌株的16S rRNA基因序列同源的若干核苷酸序列，结果表明DC-3-P菌株与巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的16S rRNA基因序列的同源性在99％以上，分离菌株被鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)。

SEQ ID No.1

GCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACGAGAGTAACTGCTCGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGAAAAGCGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTTTTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAACTCTAGAGATAGAGCGTTCCCCTTCGGGGGACAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAAAGGGCTGCAAGACCGCGAGGTCAAGCCAATCCCATAAAACCATTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGGGAGTAACCGTAAGGAGCTAGCCGCCTAAGTGACAGAGTT

(三)巨大芽孢杆菌DC-3-P菌株的形态鉴定特征如下：

DC-3-P菌株属于革兰氏阳性菌类，粗大杆状，LB平板上菌落呈黄色，椭圆形或圆形。菌株能够耐受pH 9.5，5.0％NaCl的高碱高盐环境，最适生长条件为：pH7.0，温度30℃。

实施例2：巨大芽孢杆菌DC-3-P菌株的生理生化特征

(1)淀粉水解试验

培养基配制：在牛肉膏3g/L、蛋白胨10g//L、NaCl 5g/L组成的肉汤培养基中添加可溶性淀粉，使其在培养基中的终浓度为0.2％，加入2％的琼脂，121℃灭菌20min，在无菌操作情况下倒平板待用。鲁哥氏碘液：1g碘、2g碘化钾，先用少量的水将碘化钾溶解，再加入碘片，待碘完全溶解后，加水稀释至300ml。取菌株点接于平板上，30℃培养2～4d，形成菌落后，在平板上滴加鲁哥氏碘液，以铺满菌落周围。阳性反应(淀粉被水解)为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明圈；阴性反应则菌落周围没有透明圈。

(2)V-P实验

培养基配制：蛋白胨5g，葡萄糖5g，NaCl 5g，蒸馏水1000ml，调节pH7.0～7.2，分装试管，每管装4～5ml，121℃灭菌20min。试剂：40％KOH，6％α-萘酚纯酒精溶液。

在无菌操作情况下，将试验菌种接种于上述培养基中，于30℃培养4d，取培养液2.5ml，先加入α-萘酚纯酒精溶液0.6ml，再加入40％KOH水溶液0.2ml，摇动2～5min，阳性菌立即变红，如无红色出现，静置于30℃恒温箱，如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。

(3)甲基红试验

培养基配制：与V-P试验一致。试剂：甲基红0.02g，95％酒精60ml，蒸馏水40ml。

在无菌操作情况下，将试验菌接种于上述培养基中，于30℃培养4d，在培养液中滴加几滴甲基红，若培养基变红色，则为阳性，若培养基为黄色，为阴性。

(4)明胶水解试验

培养基配制：蛋白胨0.5g，明胶12g，蒸馏水100ml，pH：7.2～7.4。分装于试管中，每管装4～5ml，121℃灭菌20min。

在无菌操作情况下，挑取试验菌穿刺接种于明胶高层约2/3深度，于20℃培养7～14d，每天观察实验结果，若因培养温度高使明胶本身液化应不加摇动，静置冰箱中待凝固后观察细菌是否被细菌液化，如被液化，则明胶水解阳性，否则为阴性。

(5)Tween 80水解试验

培养基配制：蛋白胨1g，NaCl 0.5g，CaCl2 0.01g，琼脂1.5g，蒸馏水100ml。121℃灭菌20min，冷却至50℃，加入Tween 80使其终浓度为1％，倒平板备用。在无菌操作情况下，挑取试验菌点接于上述平板上，35℃培养2～4d，菌落周围有白色晕圈为阳性，否则为阴性。

(6)过氧化氢酶活性

在干净载玻片上滴加1滴3％H₂O₂，用接种环挑取试验菌1环，在H₂O₂中涂抹，若有气泡产生为阳性，否则为阴性。

表2 DC-3-P菌株生理生化特征

+：阳性反应；-阴性反应

实施例3：不同盐碱胁迫条件下解磷菌DC-3-P的解磷效能测定

在pH7.0，温度30℃，无机磷液体培养基盐碱程度分别为pH＝7.0、NaCl浓度0.5％，pH＝7.5、NaCl浓度1.0％，pH＝8.0、NaCl浓度2.0％，pH＝8.5、NaCl浓度3.0％，pH＝9.0、NaCl浓度4.0％，pH＝9.5、NaCl浓度5.0％，将DC-3-P菌株的培养物接种于100mL上述不同盐碱胁迫的以磷酸三钙为唯一磷源的无机磷液体培养基中，150r/min振荡培养3d后测定培养基中磷含量，以不同培养条件为横坐标，以解磷浓度为纵坐标，结果见图1。

由图可见，随着盐碱胁迫条件加强，DC-3-P菌株对磷酸三钙的转化作用呈现先升高后降低的趋势，培养最佳条件为pH＝7.5、NaCl浓度1.0％，解磷效果能够达到158.24mg/L，随着盐碱胁迫逐渐加强，解磷效能呈现降低趋势，但pH＝9.5、NaCl浓度为5.0％时，解磷效能为105.28mg/L，远高于国标要求的70mg/L。

实施例4：解磷菌DC-3-P的微生物菌肥制备

将解磷菌DC-3-P发酵液与秸秆粉、糖渣按照一定比例混合到一起，制备微生物菌肥，具体组分为：解磷菌发酵液10份，秸秆粉65份，糖渣20份。秸秆粉为水稻或小麦秸秆粉，粒径小于60目，糖渣为制糖工业副产品，粒径小于40目，混合后经过挤压造粒机，形成3mm-4mm的颗粒菌肥。

所述解磷菌发酵液由发酵罐发酵而得，采用的发酵培养基按质量百分比计，葡萄糖2％，蛋白胨1％，K2HPO40.1％，MgSO4 0.05％，MnSO4 0.005％，CaCO3 0.05％，余量为水，pH值7.0-7.2，121℃，高压灭菌20min。发酵温度控制在30℃，pH控制在7.2，调节转速使溶解氧维持在30％以上。

实施例5：解磷菌DC-3-P、微生物菌肥对盐碱地水稻大田试验

设置不加菌剂为CK、DC-3-P解磷菌菌剂为T1、秸秆粉为T2、糖渣为T3、秸秆粉与糖渣混合物为T4、实施例所得微生物菌肥为T5，进行田间试验，每个处理设置3个平行，每个小区面积为1亩，T1添加量为10L解磷菌液体菌剂，T2添加量为秸秆粉65kg，T3添加量为糖渣20kg，T4添加量为秸秆粉65kg、糖渣20kg，T5为微生物菌肥85kg。种植作物为水稻，种植地点在黑龙江省肇源县，种植前采集土壤进行分析，实验结果见表3所示，土壤碱化度ESP为41％，pH为9.33，属于中重度盐碱地，土壤有效磷含量为9.16mg/kg，土壤磷元素匮乏。

表3供试地块土壤理化性质

经过一个种植季，田间试验土壤理化性质变化情况及水稻产量如表4所示。

表4不同试验处理土壤理化性质及水稻产量情况

注：表中不同小写字母表示处理间差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示处理间差异极显著(P<0.01)。

由表中数据可见：

(1)解磷菌菌剂及微生物菌肥能够提高土壤磷含量，T5试验组(微生物菌肥)土壤磷含量相比对照(CK)提升129.57％，对土壤磷含量的提升最显著，其次是解磷菌菌剂(T1)对土壤磷含量的提升，相比对照(CK)提升85.94％，外源添加解磷菌能够显著提升土壤磷含量；

(2)微生物菌肥能够显著降低土壤pH，T5试验组(微生物菌肥)土壤pH相比对照(CK)降低0.47个单位；

(3)微生物菌肥能够显著降低土壤ESP，T5试验组(微生物菌肥)土壤ESP相比对照(CK)降低17.42％，显著改善盐碱地碱化度ESP；

(4)微生物菌肥能够显著提高水稻产量，T5试验组(微生物菌肥)水稻产量相比对照(CK)提高38.16％

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 山西大地生态环境技术研究院有限公司

沈阳化工研究院有限公司

<120> 一种耐盐碱解磷菌及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1090

<212> DNA

<213> Bacillus megaterium

<400> 1

gcaacgccgc gtgagtgatg aaggctttcg ggtcgtaaaa ctctgttgtt agggaagaac 60

aagtacgaga gtaactgctc gtaccttgac ggtacctaac cagaaagcca cggctaacta 120

cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg gcaagcgtta tccggaatta ttgggcgtaa 180

agcgcgcgca ggcggtttct taagtctgat gtgaaagccc acggctcaac cgtggagggt 240

cattggaaac tggggaactt gagtgcagaa gagaaaagcg gaattccacg tgtagcggtg 300

aaatgcgtag agatgtggag gaacaccagt ggcgaaggcg gctttttggt ctgtaactga 360

cgctgaggcg cgaaagcgtg gggagcaaac aggattagat accctggtag tccacgccgt 420

aaacgatgag tgctaagtgt tagagggttt ccgcccttta gtgctgcagc taacgcatta 480

agcactccgc ctggggagta cggtcgcaag actgaaactc aaaggaattg acgggggccc 540

gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt 600

gacatcctct gacaactcta gagatagagc gttccccttc gggggacaga gtgacaggtg 660

gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca 720

acccttgatc ttagttgcca gcattcagtt gggcactcta aggtgactgc cggtgacaaa 780

ccggaggaag gtggggatga cgtcaaatca tcatgcccct tatgacctgg gctacacacg 840

tgctacaatg gatggtacaa agggctgcaa gaccgcgagg tcaagccaat cccataaaac 900

cattctcagt tcggattgta ggctgcaact cgcctacatg aagctggaat cgctagtaat 960

cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac 1020

cacgagagtt tgtaacaccc gaagtcggtg ggagtaaccg taaggagcta gccgcctaag 1080

tgacagagtt 1090

Claims

1.一种耐盐碱的解磷菌，其特征在于，解磷菌为巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium，其已于2020年8月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2020453。

2.根据权利要求1所述的耐盐碱解磷菌，其特征在于，所述解磷菌于无机磷液体培养基中培养生长；该菌株基因序列为SEQ ID No.1中碱基所示；

所述无机磷液体培养基成分为：10-15g葡萄糖，0.5-1g酵母粉，0.5-1g(NH₄)₂SO₄，0.3-0.5g NaCl，0.3-0.5g KCl，0.3-0.5g MgSO₄·7H₂O，0.03-0.05g FeSO₄·7H₂O，0.03-0.05gMnSO₄·4H₂O，5-10g Ca₃(PO₄)₂，补蒸馏水至1000mL，pH 7.0-7.5。

3.一种权利要求1所述的耐盐碱解磷菌的应用，其特征在于，所述菌株在解磷中的应用。

4.根据权利要求3所述的耐盐碱解磷菌的应用，其特征在于，所述菌株在pH为7.0-9.5的碱性环境和/或0.5-5.0％NaCl的盐环境下解磷的应用。

5.一种耐盐碱菌剂，其特征在于：菌剂含权利要求1所述的解磷菌。

6.根据权利要求5所述的耐盐碱菌剂，其特征在于：所述菌剂为菌株发酵液、发酵培养物或发酵浓缩物。

7.根据权利要求6所述的耐盐碱菌剂，其特征在于：所述菌剂为权利要求1所述巨大芽孢杆菌于发酵培养基中发酵条件下培养1-2天，分离沉淀即为发酵培养物，滤液即为发酵液，发酵液进一步浓缩即为浓缩物。

8.一种微生物菌肥，其特征在于，所述微生物菌肥含权利要求7所述的菌剂。

9.根据权利要求8所述的微生物菌肥，其特征在于，所述微生物菌肥为菌剂5-10份，有机载体80-85份。

10.一种权利要求8所述菌肥的应用，其特征在于：所述的微生物菌肥在土壤改良或盐碱地生物改良中的应用。