CN108841742A - 一种耐盐碱芽孢杆菌属菌株zh-1及其制备方法和应用 - Google Patents

一种耐盐碱芽孢杆菌属菌株zh-1及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明具体涉及一种耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH‑1及其制备方法和应用，分类命名为芽孢杆菌属菌株(Bacillus sp.)ZH‑1，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 2017659，用于降低氧化铝赤泥的pH值。本发明的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH‑1，在强碱性条件下具有很好的耐受能力，对赤泥碱性环境有很好的适应性；活性稳定，适应性强，培养成本低廉；可明显降低赤泥pH值，并且有利于赤泥团聚体颗粒的形成，有利于加速赤泥土壤化进程。

Description

一种耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1及其制备方法和应用。
背景技术
赤泥是氧化铝生产过程中产生的最大工业固体废弃物，每生产1吨氧化铝将会产生1.0～1.8吨赤泥。赤泥处理是一个世界性难题。目前，我国90％以上氧化铝生产采用拜耳法工艺。我国拜耳法赤泥年排放量已超过7000万吨，其综合利用率不到5％。国内外大都采用筑坝湿法堆存法使其自然沉降，之后再回收滤液，但该法易出现滤液泄露污染环境事故，而且堆场中干燥的赤泥也会对环境产生危害，赤泥扬尘会使大气能见度降低，降尘使其周边土壤出现盐碱化。
赤泥碱性强、盐分含量高，污染物迁移风险大，自然碳化中和过程慢，堆场生态重建难，赤泥环境安全问题正严重威胁氧化铝工业可持续发展。氧化铝工业过程的赤泥减排和综合利用已成为世界性难题，迄今国际上尚无切实可行的赤泥规模化处置方法。
国内外有很多关于赤泥堆场土壤修复的研究，如加改良剂改良、土壤淋洗和客土改良覆盖等，这些方法虽可以修复赤泥堆场污染，但其操作性都不强，且容易造成二次污染。
现有对赤泥进行脱碱处理的专利，例如《微生物处理赤泥游离碱的工艺方法》(CN103693830 A)，此方法是利用驯化的乳酸菌或铁硫杆菌酸性溶液，在一定条件下处理赤泥矿浆，压滤后得到含微生物溶液和经微生物处理的赤泥，以达到赤泥游离碱脱除的目的。但是，该方法需要一定的时间、压力、温度搅拌等条件。《一种赤泥柠檬酸脱碱工艺》(CN105170307A)，该发明是将赤泥进行柠檬酸三级错流脱碱作业，在柠檬酸用量较低和低温条件下，脱除赤泥中的钠和钾，但是此种方法为化学法脱碱，工艺复杂，成本较高。
发明内容
针对上述已有技术存在的不足，本发明提供一种耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1及其制备方法和应用。本发明提供的一种耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1具有耐盐碱性强的特点，在赤泥环境中具有很强的适生性，活性稳定，适应性强，培养成本低廉，并可显著降低赤泥pH值，有利于赤泥团聚体颗粒的形成。
本发明是通过以下技术方案实现的。
一种耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1，其特征在于，分类命名为芽孢杆菌属菌株(Bacillus sp.)ZH-1，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2017659，保藏日期为：2017年11月06日，保藏地址为：中国武汉市武汉大学中国典型培养物保藏中心。
一种如上述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的制备方法，其特征在于，所述方法步骤包括：
(1)取赤泥5g置于100mL液体培养基中，于温度为30℃、转速为175rpm·min-1的恒温振荡培养箱中避光振荡培养48h；所述液体培养基包括：酵母膏3.0g·L-1、葡萄糖5.0g·L-1、NaCl 50.0g·L-1以及水；
(2)制备100mL的与步骤(1)相同配置的液体培养基，取2mL经步骤(1)得到的混合液的上清液至液体培养基中，继续在温度为30℃、转速为175rpm·min-1的恒温振荡培养箱中培养48h；
(3)采用稀释涂布平板法将经步骤(2)得到的混合菌液分离筛选得到多个纯培养，将多个纯培养分别接种到与步骤(1)相同配置的液体培养基中，于温度为30℃、转速为175rpm·min-1的恒温振荡培养箱中继续培养48h；
(4)检测经步骤(3)得到的培养液的pH，将能够使培养液pH降低至6.0以下的菌株命名为ZH-1。
一种如上述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1用于降低赤泥的pH。
根据上述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述步骤包括：
(1)将耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1接种到液体培养基中培养，得到耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液；
(2)配置产酸培养基，加入NaOH溶液调节产酸培养基pH，吸取经步骤(1)得到的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液，接种于产酸培养基中培养；
(3)将经步骤(2)得到的菌液加入到与步骤(2)相同配置的产酸培养基中得到稀释菌液，将稀释菌液与赤泥混合，然后将混合物置于生化培养箱中培养。
根据上述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述液体培养基按照如下方法配置：将酵母膏、葡萄糖、NaCl和水混合，得到液体培养基。
根据上述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述酵母膏在所述液体培养基中的浓度为3.0g·L-1，所述葡萄糖在所述液体培养基中的浓度为5.0g·L-1，所述NaCl在所述液体培养基中的浓度为50.0g·L-1。
根据上述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述产酸培养基按照如下方法配置：将葡萄糖、酵母膏、可溶性淀粉、磷酸二氢钾、氯化镁和水混合，得到产酸培养基。
根据上述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述葡萄糖在所述产酸培养基中的浓度为2-8g·L-1，所述酵母膏在所述产酸培养基中的浓度为2-4g·L-1，所述可溶性淀粉在所述产酸培养基中的浓度为1-2g·L-1，所述磷酸二氢钾在所述产酸培养基中的浓度为0.3-0.7g·L-1，所述氯化镁在所述产酸培养基中的浓度为0.3-0.7g·L-1。
根据上述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，具体步骤包括：
(1)将耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1接种到液体培养基中，然后置于恒温振荡培养箱中培养48h-72h，得到耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液；所述液体培养基包括：酵母膏3.0g·L-1，葡萄糖5.0g·L-1，NaCl 50.0g·L-1和水；所述恒温振荡培养箱中的培养条件为温度30℃，转速为175rpm·min-1；
(2)配置产酸培养基，加入NaOH溶液调节产酸培养基pH至11.5～12.5，吸取经步骤(1)得到的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液，接种于产酸培养基中，耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液的加入量按质量比计为产酸培养基加入量的1％～3％，然后置于恒温振荡培养箱中培养48h～120h；所述产酸培养基包括：葡萄糖2-8g·L-1，酵母膏2-4g·L-1，可溶性淀粉1-2g·L-1，磷酸二氢钾0.3-0.7g·L-1，氯化镁0.3-0.7g·L-1和水；
(3)将经步骤(2)得到的菌液加入到与步骤(2)相同配置的产酸培养基中得到稀释菌液，经步骤(2)得到的菌液加入量按质量比计为产酸培养基加入量的10％～20％，将稀释菌液与赤泥按质量比5:1-1:1混合，然后将混合物置于生化培养箱中培养4～28天，温度为30℃～38℃。
根据上述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述步骤(2)NaOH溶液浓度为5％～30％。
本发明的有益技术效果，本发明提供了一种耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1及其制备方法和应用，具有以下优点：
1)本发明的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1，在强碱性条件下具有很好的耐受能力，对赤泥碱性环境有很好的适应性；
2)本发明的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1生长速率较快，活性稳定，适应性强，培养成本低廉；
3)本发明的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1可明显降低赤泥pH值，并且有利于赤泥团聚体颗粒的形成，有利于加速赤泥土壤化进程，赤泥pH值降低至7.5-8.8；赤泥中＞2mm的团聚体颗粒由0.85％增长至51％-67％。
附图说明
图1为本发明的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1系统发育树状图。
分类命名为芽孢杆菌属菌株(Bacillus sp.)ZH-1，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2017659，保藏日期为：2017年11月06日，保藏地址为：中国武汉市武汉大学中国典型培养物保藏中心。该培养物于2017年11月20日经保藏中心检测结果为存活。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
取河南省荥阳市高山镇的堆场赤泥5g置于100mL液体培养基(酵母膏3.0g·L-1、葡萄糖5.0g·L-1、NaCl 50.0g·L-1以及水)中，即酵母膏在液体培养基中的浓度为3.0g·L-1(克/升)，葡萄糖在液体培养基中的浓度为5.0g·L-1，NaCl(氯化钠)在液体培养基中的浓度为50.0g·L-1，于温度为30℃、转速为175rpm·min-1的恒温振荡培养箱中避光振荡培养48h得到混合液，取2mL该混合液的上清液至新配置的100mL液体培养基(酵母膏3.0g·L-1、葡萄糖5.0g·L-1、NaCl 50.0g·L-1以及水)中，继续在培养条件为温度为30℃、转速为175rpm·min-1的恒温振荡培养箱中培养48h得到混合菌液；然后采用稀释涂布平板法将混合菌液分离筛选得到多个纯培养，将多个纯培养分别接种到100ml液体培养基(酵母膏3.0g·L-1、葡萄糖5.0g·L-1、NaCl 50.0g·L-1以及水)中，置于恒温振荡培养箱中，在温度为30℃，转速为175rpm·min-1的条件下继续培养48h得到培养液，通过检测培养液pH，筛选出一株能够使培养液pH降低至6.0以下的菌株，并命名为ZH-1。菌株ZH-1经金斯瑞生物科技有限公司16SrRNA测序，鉴定为芽孢杆菌属(Bacillussp.)，分类命名为芽孢杆菌属菌株(Bacillus sp.)ZH-1，已保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2017659，保藏日期为：2017年11月06日，保藏地址为：中国武汉市武汉大学中国典型培养物保藏中心，并证明存活；该耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1用于降低赤泥的pH值。
稀释涂布平板法的具体过程为：吸取混合菌液0.1毫升，加入到0.9毫升的无菌水中，标记为10-1；依次以同样的方式稀释到10-5及10-6作为涂布液。吸取200微升10-5及10-6的涂布液均匀涂布到固体平板，至于30℃静置培养箱培养48小时，根据菌落形态及颜色选取不同的单菌落，利用接种针将各个单菌落接种于新鲜的固体平板并进一步纯化，从而得到多个纯培养。
鉴定：将分离得到的菌株的16S rRNA通过PCR扩增测序。菌株ZH-1的16SrRNA基因序列的Genebank登陆号为MG385861.1，具体序列见SEQ ID NO:1。将得到的序列与Genebank上的相关16S rRNA序列进行比对。与Genebank公开的相应菌株序列用Cluster X方法进行比对。基于1000个重复的抽样分析，使用MEGA 4.0。按邻接法构建系统树。构建得到的16SrRNA系统发育树如图1所示。目标菌株与Bacillus sp.KSM-K38(AB044748.1)相似性达99％，因此，菌株ZH-1被界定为芽孢杆菌属Bacillus sp.。
形态特征：耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1革兰氏阳性，为杆状，固体LB培养基上培养48小时后，菌落表面光滑、不透明、边缘整齐、淡黄色。
具体应用步骤包括：
(1)将保存的耐盐碱芽孢杆菌属菌株(Bacillus sp.)ZH-1接种到液体培养基中培养，得到耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液；具体步骤为：用接种针挑取耐盐碱芽孢杆菌属菌株(Bacillus sp.)ZH-1单菌落，并在无菌状态下将其接种至100ml液体培养基(酵母膏3.0g·L-1、葡萄糖5.0g·L-1、NaCl 50.0g·L-1以及水)中，然后置于恒温振荡培养箱中，在温度30℃，转速为175rpm·min-1振荡培养48h-72h,得到耐盐碱芽孢杆菌属菌株(Bacillussp.)ZH-1菌液；
(2)配置产酸培养基：将葡萄糖、酵母膏、可溶性淀粉、磷酸二氢钾、氯化镁与水混合，得到产酸培养基，其中，葡萄糖在该产酸培养基中的浓度为2-8g·L-1，酵母膏在该产酸培养基中的浓度为2-4g·L-1，可溶性淀粉在该产酸培养基中的浓度为1-2g·L-1，磷酸二氢钾在该产酸培养基中的浓度为0.3-0.7g·L-1，氯化镁在该产酸培养基中的浓度为0.3-0.7g·L-1；
(3)将经步骤(2)得到的产酸培养基进行灭菌，并利用浓度为5％-30％NaOH(氢氧化钠)溶液调节经步骤(2)得到的产酸培养基pH至11.5-12.5，吸取经步骤(1)得到的耐盐碱芽孢杆菌属菌株(Bacillus sp.)ZH-1菌液，接种于产酸培养基中，耐盐碱芽孢杆菌属菌株(Bacillus sp.)ZH-1菌液的加入量按质量比计为产酸培养基加入量的1％～3％，置于恒温振荡培养箱中，在30℃、175rpm·min-1条件下培养48h～120h，该产酸培养基pH降低至5.6-8.9；
(4)将经步骤(3)得到(即培养至对数期)的菌液加入到新的产酸培养基中得到稀释菌液，该新的产酸培养基与步骤(2)的产酸培养基配置相同，经步骤(3)得到的菌液加入量按质量比计为新的产酸培养基加入量的10％～20％，将稀释菌液与赤泥按质量比5:1-1:1混合，将混合物置于生化培养箱中培养4-28天，温度为30℃-38℃，赤泥pH值降低至7.5-8.8，赤泥中＞2mm的团聚体颗粒由0.85％增长至51％-67％。
表1拜耳法赤泥的化学成分
实施例1
(1)用接种针挑取耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1单菌落，并在无菌状态下将其接种至100mL液体培养基(酵母膏3.0g·L-1、葡萄糖5.0g·L-1、NaCl 50.0g·L-1以及水)中，然后置于恒温振荡培养箱中，在温度30℃，转速为175rpm·min-1振荡培养48h得到耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液；
(2)配置产酸培养基(葡萄糖5.0g·L-1、酵母膏3.0g·L-1、可溶性淀粉1.5g·L-1、磷酸二氢钾0.7g·L-1、氯化镁0.3g·L-1、余量为水)并进行灭菌，加浓度为5％NaOH溶液调节产酸培养基pH至11.5，将4g经步骤(1)得到的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液接入到400g产酸培养基中，置于恒温振荡培养箱中，在30℃、175rpm·min-1条件下震动培养80h，该产酸培养基pH降低至7.4。
(3)配置新的产酸培养基(葡萄糖5.0g·L-1、酵母膏3.0g·L-1、可溶性淀粉1.5g·L-1、磷酸二氢钾0.7g·L-1、氯化镁0.3g·L-1、余量为水)，将90g经步骤(2)培养得到的菌液加入到600g新配置的产酸培养基中得到稀释菌液，取300g稀释菌液与100g赤泥混合，赤泥pH为11.57，将混合物置于生化培养箱中培养16天，温度为38℃，赤泥pH值降低至8.2，赤泥中＞2mm的团聚体颗粒由0.85％增长至59％。
实施例2
(1)配置产酸培养基(葡萄糖2.0g·L-1、酵母膏4.0g·L-1、可溶性淀粉2.0g·L-1、磷酸二氢钾0.5g·L-1、氯化镁0.7g·L-1、余量为水)并进行灭菌，加浓度为30％NaOH溶液调节产酸培养基pH至12.5，将12g耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液加入到400g产酸培养基中，置于恒温振荡培养箱中，在30℃、175rpm·min-1条件下震动培养120h，该产酸培养基pH降低至5.6；
(2)按步骤(1)配置新的产酸培养基(葡萄糖2.0g·L-1、酵母膏4.0g·L-1、可溶性淀粉2.0g·L-1、磷酸二氢钾0.5g·L-1、氯化镁0.7g·L-1、余量为水)，将40g经步骤(1)培养得到的菌液加入到400g新配置的产酸培养基中得到稀释菌液，取200g稀释菌液与200g赤泥混合，赤泥pH为11.57，将混合物置于生化培养箱中培养4天，温度为34℃，赤泥pH降低至8.8，赤泥中＞2mm的团聚体颗粒由0.85％增长至51％。
实施例3
(1)配置产酸培养基(葡萄糖8.0g·L-1、酵母膏2.0g·L-1、可溶性淀粉1.0g·L-1、磷酸二氢钾0.3g·L-1、氯化镁0.5g·L-1、余量为水)并进行灭菌，加浓度为18％NaOH溶液调节产酸培养基pH至12.0，将8g耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液接种到400g产酸培养基中，置于恒温振荡培养箱中，在30℃、175rpm·min-1条件下震动培养48h，该产酸培养基pH降低至8.9；
(2)配置新的产酸培养基(葡萄糖8.0g·L-1、酵母膏2.0g·L-1、可溶性淀粉1.0g·L-1、磷酸二氢钾0.3g·L-1、氯化镁0.5g·L-1、余量为水)，将200g经步骤(1)培养得到的菌液加入到1000g新配置的产酸培养基中得到稀释菌液，取500g稀释菌液与100g赤泥混合，赤泥pH为11.57，将混合物置于生化培养箱中培养28天，温度为30℃，赤泥pH降低至7.5，赤泥中＞2mm的团聚体颗粒由0.85％增长至67％。
以上所述的仅是本发明的较佳实施例，并不局限发明。应当指出对于本领域的普通技术人员来说，在本发明所提供的技术启示下，还可以做出其它等同改进，均可以实现本发明的目的，都应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国铝业股份有限公司
<120> 一种耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1及其制备方法和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1437
<212> RNA
<213> 芽孢杆菌属 (Bacillus sp.)
<400> TGCAAGTCGAGCGCAGGAAGCATCACGATCTCTTCGGAGTGAATGATGTGGAATGAGCG
GCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCCCTGTAGACTGGGATAACTTCGGGAA
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CAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCCGGAATTGCTAGTAATCGC
GGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACAC
CACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCCGCCG

Claims (10)

1.一种耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1，其特征在于，分类命名为芽孢杆菌属菌株(Bacillus sp.) ZH-1，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2017659，保藏日期为：2017年11月06日，保藏地址为：中国武汉市武汉大学中国典型培养物保藏中心。
2.一种如权利要求1所述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的制备方法，其特征在于，所述方法步骤包括：
（1）取赤泥5g置于100mL液体培养基中，于温度为30℃、转速为175 rpm∙min-1的恒温振荡培养箱中避光振荡培养48h；所述液体培养基包括：酵母膏 3.0g∙L-1、葡萄糖 5.0g∙L-1、NaCl 50.0g∙L-1以及水；
（2）制备100mL的与步骤（1）相同配置的液体培养基，取2mL经步骤（1）得到的混合液的上清液至液体培养基中，继续在温度为30℃、转速为175 rpm∙min-1的恒温振荡培养箱中培养48h；
（3）采用稀释涂布平板法将经步骤（2）得到的混合菌液分离筛选得到多个纯培养，将多个纯培养分别接种到与步骤（1）相同配置的液体培养基中，于温度为30℃、转速为175 rpm∙min-1的恒温振荡培养箱中继续培养48h；
（4）检测经步骤（3）得到的培养液的pH，将能够使培养液pH降低至6.0以下的菌株命名为ZH-1。
3.一种如权利要求1所述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1用于降低赤泥的pH。
4.根据权利要求3所述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述步骤包括：
（1）将耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1接种到液体培养基中培养，得到耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液；
（2）配置产酸培养基，加入NaOH溶液调节产酸培养基pH，吸取经步骤（1）得到的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液，接种于产酸培养基中培养；
（3）将经步骤（2）得到的菌液加入到与步骤（2）相同配置的产酸培养基中得到稀释菌液，将稀释菌液与赤泥混合，然后将混合物置于生化培养箱中培养。
5.根据权利要求4所述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述液体培养基按照如下方法配置：将酵母膏、葡萄糖、NaCl和水混合，得到液体培养基。
6.根据权利要求5所述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述酵母膏在所述液体培养基中的浓度为 3.0g∙L-1，所述葡萄糖在所述液体培养基中的浓度为 5.0g∙L-1，所述NaCl在所述液体培养基中的浓度为 50.0g∙L-1。
7.根据权利要求4所述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述产酸培养基按照如下方法配置：将葡萄糖、酵母膏、可溶性淀粉、磷酸二氢钾、氯化镁和水混合，得到产酸培养基。
8.根据权利要求7所述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述葡萄糖在所述产酸培养基中的浓度为2-8g∙L-1，所述酵母膏在所述产酸培养基中的浓度为2-4g∙L-1，所述可溶性淀粉在所述产酸培养基中的浓度为1-2g∙L-1，所述磷酸二氢钾在所述产酸培养基中的浓度为0.3-0.7g∙L-1，所述氯化镁在所述产酸培养基中的浓度为0.3-0.7g∙L-1。
9.根据权利要求4所述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，具体步骤包括：
（1）将耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1接种到液体培养基中，然后置于恒温振荡培养箱中培养48h-72h，得到耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液；所述液体培养基包括：酵母膏3.0g∙L-1，葡萄糖 5.0g∙L-1， NaCl 50.0g∙L-1和水；所述恒温振荡培养箱中的培养条件为温度30℃，转速为175 rpm∙min-1；
（2）配置产酸培养基，加入NaOH溶液调节产酸培养基pH至11.5~12.5，吸取经步骤（1）得到的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液，接种于产酸培养基中，耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1菌液的加入量按质量比计为产酸培养基加入量的1%~3%，然后置于恒温振荡培养箱中培养48h~120h；所述产酸培养基包括：葡萄糖2-8g∙L-1，酵母膏2-4g∙L-1，可溶性淀粉1-2g∙L-1，磷酸二氢钾0.3-0.7g∙L-1，氯化镁0.3-0.7g∙L-1和水；
（3）将经步骤（2）得到的菌液加入到与步骤（2）相同配置的产酸培养基中得到稀释菌液，经步骤（2）得到的菌液加入量按质量比计为产酸培养基加入量的10%~20%，将稀释菌液与赤泥按质量比5:1-1:1混合，然后将混合物置于生化培养箱中培养4~28天，温度为30℃~38℃。
10.根据权利要求9所述的耐盐碱芽孢杆菌属菌株ZH-1的应用，其特征在于，所述步骤（2）NaOH溶液浓度为5%~30%。
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