CN111304115A - 一株可高产3种形态有机硒的干酪乳杆菌及其应用 - Google Patents

一株可高产3种形态有机硒的干酪乳杆菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株可高产3种形态有机硒的干酪乳杆菌及其应用，属于微生物技术领域。本发明筛选出了一株干酪乳杆菌CCFM1088，此干酪乳杆菌CCFM1088可高效转化无机硒生产硒代半胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸3种形态的有机硒，将此干酪乳杆菌CCFM1088接种至含有无机硒的培养基中发酵8h，即可使干酪乳杆菌CCFM1088菌体冻干粉中的总硒含量高达463.15mg/kg，总硒中有机硒的含量高达95％，有机硒中硒代半胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸的含量分别高达31％、27％、40％，因此，本发明的干酪乳杆菌CCFM1088在有机硒的生产中具有极高的应用前景。

Description

一株可高产3种形态有机硒的干酪乳杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株可高产3种形态有机硒的干酪乳杆菌及其应用，属于微生物技术领域。
背景技术
硒(Se)作为一种非金属，在自然界中以无机硒和有机硒(生物硒)两种方式存在。硒作为人类和动物生存所必需的微量元素，在人体内通常以硒蛋白的形态存在。中国营养学会将硒列为人体必需的15种营养素之一，2013版制订的《中国居民膳食营养素参考摄入量(DRIs)》中明确提出18岁以上者硒元素推荐摄入量为60微克/天。硒摄入不足可能导致心血管疾病、大骨节病，肌肉和免疫功能紊乱等疾病，因此，及时补硒对人体健康十分重要。
目前，补硒的方法主要为人工补硒，即摄取人工添加的各类补硒产品。人工添加的各类补硒产品主要分为无机硒和有机硒两类。其中，无机硒主要为亚硒酸钠，其吸收利用率低且有很大的毒性，国外多用于饲料。有机硒则是由无机硒与氨基酸、蛋白质、活性多糖等有机营养成分相结合形成的一类物质，主要包括硒代半胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸三种。与无机硒相比，有机硒的毒副作用大大降低，安全性高，而且，有机硒在人体内更易被消化吸收，生物利用率显著高于无机硒，因此，摄取有机硒是目前主要的补硒形式。
目前，主要是利用微生物的生物转化功能将无机硒与氨基酸、蛋白质、活性多糖等有机营养成分相结合以生产得到有机硒，但是，由于现有微生物转化无机硒生产有机硒的转化效率过低，利用此方法生产有机硒的产量一直不高，这无疑阻碍了有机硒市场的进一步发展。
公开号为CN103898163A的专利申请文本中，姜疏君等人筛选得到了一株断乳杆菌CGMCC NO.6683，此短乳杆菌CGMCC NO.6683虽然将亚硒酸钠进行了富集，但其大多将亚硒酸钠转化为了红色的单质硒，真正被转化成为有机硒的亚硒酸钠比例十分低；公开号为CN110317757A的专利申请文本中，唐旭等人筛选得到了一株植物乳杆菌CGMCC NO.17720，此植物乳杆菌CGMCC NO.17720虽然将亚硒酸钠进行了富集，但其转化的有机硒含量也只有52.31％。
因此，急需找到可高效转化无机硒生产硒代半胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸3种形态有机硒的微生物。
发明内容
[技术问题]
本发明要解决的技术问题是提供一株可高效转化无机硒生产硒代半胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸3种形态有机硒的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)。
[技术方案]
为解决本发明的技术问题，本发明提供了一株干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)CCFM1088，所述干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088已于2019年11月01日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.60879，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
所述干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088是从来源于四川省若尔盖牧场打更沟村的粪便样本中分离得到的，该菌株经测序分析，其16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，将测序得到的序列在NCBI中进行核酸序列比对，结果显示菌株为干酪乳杆菌，命名为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088。
所述干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088在MRS固体培养基上的菌落呈大的、白色、不透明状。
本发明还提供了一种生产有机硒的方法，所述方法为先将上述干酪乳杆菌CCFM1088接种至含有无机硒的培养基中进行发酵，得到含有有机硒的干酪乳杆菌菌体，然后将含有有机硒的干酪乳杆菌菌体进行提取，得到有机硒。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、吐温80和无机硒。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基为富硒培养基或定向转化培养基；
所述富硒培养基的成分包含蛋白胨5～10g/L、酵母提取物5～15g/L、葡萄糖20～50g/L、牛肉浸膏5～10g/L、无水乙酸钠2～5g/L、柠檬酸氢二胺2～5g/L、K2HPO4·3H2O 2～5g/L、MgSO4·7H2O 0.25～0.58g/L、MnSO4·H2O 0.05～0.30g/L、吐温801g/L、五水亚硒酸钠8～12mg/L；
所述定向转化培养基的成分包含蛋白胨5～15g/L、酵母提取物5～15g/L、葡萄糖20～50g/L、K2HPO4·3H2O 2～5g/L、MgSO4·7H2O 0.25～0.58g/L、MnSO4·H2O 0.05～0.30g/L、吐温801g/L、五水亚硒酸钠7～16mg/L。
在本发明的一种实施方式中，所述方法为先将上述干酪乳杆菌接种至富硒培养基中，于温度为35～40℃、转速为75～150rpm、pH为5.0～6.0的条件下进行发酵，得到含有有机硒的干酪乳杆菌菌体，然后将含有有机硒的干酪乳杆菌菌体进行提取，得到有机硒。
在本发明的一种实施方式中，所述方法为先将上述干酪乳杆菌接种至定向转化培养基中，于温度为35～40℃、pH为5.0～6.0的厌氧条件下进行发酵，得到含有有机硒的干酪乳杆菌菌体，然后将含有有机硒的干酪乳杆菌菌体进行提取，得到有机硒。
在本发明的一种实施方式中，所述发酵的时间为6～8h。
在本发明的一种实施方式中，所述无机硒为亚硒酸钠、硒酸钠和/或单质硒。
在本发明的一种实施方式中，所述无机硒为亚硒酸钠。
在本发明的一种实施方式中，所述有机硒为硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和/或硒甲基硒代半胱氨酸。
本发明还提供了上述干酪乳杆菌CCFM1088或上述方法在生产有机硒中的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述有机硒为硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和/或硒甲基硒代半胱氨酸。。
[有益效果]
(1)本发明筛选出了一株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088，此干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088可高效转化无机硒生产硒代半胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸3种形态的有机硒，将此干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088接种至含有无机硒的培养基中发酵8h，即可使干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)CCFM1088菌体冻干粉中的总硒含量高达463.15mg/kg，总硒中有机硒的含量高达95％，有机硒中硒代半胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸的含量分别高达31％、27％、40％，因此，本发明的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088在有机硒的生产中具有极高的应用前景。
(2)本发明提供了一种可高效生产有机硒的方法，利用此方法将可高效转化无机硒生产硒代半胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸3种形态有机硒的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088接种至定向转化培养基中发酵8h，即可使干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088菌体冻干粉中的总硒含量高达463.15mg/kg，总硒中有机硒的含量高达95％，有机硒中硒代半胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸的含量分别高达31％、27％、40％，因此，本发明的可高效生产有机硒的方法在有机硒的生产中具有极高的应用前景。
生物材料保藏
一株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088，分类学命名为Lactobacilluscasei，已于2019年11月01日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo.60879，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
图1：干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088的菌落特征。
图2：干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088的菌体特征。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图对本发明进行进一步的阐述。
下述实施例中涉及的亚硒酸钠(产品编号：D16-1030015、CAS：26970-82-1)购自上海创赛科技有限公司；蛋白酶XIV(产品编号：P5147、CAS：9036-06-0)和蛋白酶K(产品编号：3375201、CAS：39450-01-6)购自北京百灵威科技有限公司；葡萄糖购于国药集团化学试剂有限公司。
下述实施例中涉及的培养基如下：
MRS固体培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO40.05g/L、吐温801mL/L、琼脂20g/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L。
MRS液体培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO40.05g/L、吐温801mL/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L。
富硒培养基：蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、葡萄糖30g/L、牛肉浸膏10g/L、无水乙酸钠2g/L、柠檬酸氢二胺2g/L、K2HPO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、MnSO4·H2O0.25g/L、吐温801g/L、五水亚硒酸钠8～12mg/L。
下述实施例中涉及的检测方法如下：
总硒检测方法：参考《GB 5009.93-2017食品安全国家标准食品中硒的测定》中总硒分析方法。
有机硒检测方法：参考《GB 1903.21-2016食品安全国家标准食品营养强化剂富硒酵母》中有机硒分析方法。
硒形态检测方法：将样品置于研钵中加入液氮研磨破碎，取研磨后的样品0.15g于离心管中，加入6mL Tris-HCl(50mmol/L、pH 7.2)溶解，超声波细胞破碎器破碎5min；之后每隔12h分别加入蛋白酶K(10mg)及蛋白酶XIV(15mg)，在37℃、100r/min下振荡酶解24h，酶解后，以4000r/min离心10min，取上清液在0.22μm滤膜过滤；通过HPLC-ICP-MS进行形态分析。
下述实施例中涉及的培养方法如下：
乳酸菌种子液的培养：蘸取甘油管中的乳酸菌菌液在在MRS固体培养基上划线，于37℃倒置培养36h，得到单菌落；挑取单菌落接种至MRS液体培养基中，于37℃培养12h，得到培养液；将培养液以1％(v/v)的接种量接种至MRS液体培养基中，于37℃培养12h，得到种子液。
实施例1：干酪乳杆菌CCFM1088的筛选及菌种鉴定
1、筛选
以来源于四川省若尔盖牧场打更沟村的粪便为样本，用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释至10-6，然后分别取100μL稀释倍数为10-4、10-5、10-6的稀释液于MRS固体培养基上进行平板涂布，37℃倒置培养48h，观察并记录菌落形态；挑取MRS固体培养基上不同形态的菌落进行划线分离，经37℃培养48h后，再次挑取MRS固体培养基上不同形态的单菌落进行划线分离，直至得到形态一致的纯的单菌落；挑取MRS固体培养基上的单菌落接种于5mL富硒培养基中，37℃培养18h；取1mL菌液于无菌离心管中，8000r/min离心3min后弃去上层培养基，将得到的菌泥进行冷冻干燥，检测冻干后菌粉的总硒和有机硒含量，筛选出硒富集较高的菌株，得到菌株CCFM1088。
2、鉴定
提取菌株CCFM1088的基因组，将菌株CCFM1088的16S rDNA进行扩增和测序(由英潍捷基贸易有限公司进行，其中，菌株CCFM1088的16S rDNA扩增的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示)，将该序列在NCBI中进行核酸序列比对，结果显示菌株为干酪乳杆菌，命名为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088。
3、保存
挑取干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088的单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃培养18h，得到菌液；取1mL菌液于无菌离心管中，8000r/min离心3min后弃去上层培养基，菌泥重悬于30％甘油溶液中置于-80℃中保藏。
实施例2：干酪乳杆菌CCFM1088的培养和观察
从甘油管中蘸取实施例1获得的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088的菌液在MRS固体培养基上划线，于37℃培养48h后，观察其菌落，发现其菌落呈大的、白色、不透明状(具体可见图1)。
从甘油管中蘸取实施例1获得的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088的菌液在MRS固体培养基上划线，于37℃培养48h，得到单菌落；取洁净载玻片一张，在火焰上微微加热后冷却；待冷却后，在洁净载玻片中央部位滴加一小滴无菌水，用接种环在火焰旁挑取MRS固体培养基上少量菌体与水混合；烧去接种环上多余菌体，在用接种环将菌体途成直径1cm的均匀薄层；待洁净载玻片上的均匀薄层自然干燥后，在微火上加热3～4次固定；在涂片处滴加1～2滴结晶紫溶液，染色1min；用水轻轻洗去染液，用吸水纸轻轻吸去载玻片上水分；干燥后以显微镜进行镜检以观察干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088的菌体，发现其菌体形态符合干酪乳杆菌的典型特征(具体可见图2)。
实施例3：有机硒的生产(干酪乳杆菌CCFM1088+富硒转化)
将实施例1获得的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088的种子液以5％(v/v)的接种量接种至富硒培养基中，于温度为37℃、转速为100rpm、pH为6.0的条件下培养8h，得到发酵液；将发酵液在4℃的条件下8000r/min离心15min，得到干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088的菌体；将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088的菌体纯水洗涤2次，弃去上清液后冻干，得到富含有机硒的干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)CCFM1088冻干粉；其中，富硒培养基：蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、葡萄糖30g/L、牛肉浸膏10g/L、无水乙酸钠2g/L、柠檬酸氢二胺2g/L、K2HPO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O0.5g/L、MnSO4·H2O 0.25g/L、吐温801g/L、亚硒酸钠8mg/L。
检测干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布(检测结果见表1)。
由表1可知，干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088可高效转化无机硒生产有机硒，仅发酵8h，即可使干酪乳杆菌CCFM1088CCFM1088冻干粉中的总硒含量高达369.64mg/kg，总硒中有机硒的含量高达78％，有机硒中硒代半胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸的含量分别高达37％、29％、32％。
表1干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布
Figure BDA0002346643830000061
实施例4：有机硒的生产(干酪乳杆菌CCFM1088+定向转化)
在实施例3和4的基础上，将富硒培养基替换为定向转化培养基(蛋白胨5～15g/L、酵母提取物5～15g/L、葡萄糖20～50g/L、K2HPO4·3H2O 2～5g/L、MgSO4·7H2O 0.25～0.58g/L、MnSO4·H2O 0.05～0.30g/L、吐温801g/L、五水亚硒酸钠7～16mg/L)，并将发酵条件进行一定的调整，具体如下：
将实施例1获得的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088的种子液以5％(v/v)的接种量接种至定向转化培养基中，于温度为37℃、pH为6.0的厌氧条件下培养8h，得到发酵液；将发酵液在4℃的条件下8000r/min离心15min，得到干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)CCFM1088的菌体；将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088的菌体纯水洗涤2次，弃去上清液后冻干，得到富含有机硒的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088冻干粉；其中，定向转化培养基：蛋白胨10g/L、酵母提取物6g/L、葡萄糖30g/L、K2HPO4·3H2O2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.58g/L、MnSO4·H2O 0.25g/L、吐温801g/L、亚硒酸钠12mg/L。
检测干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布(检测结果见表1)。
由表2可知，定向转化培养基更有利于干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088高效转化无机硒生产有机硒，使用定向转化培养基时，仅发酵8h，即可使干酪乳杆菌CCFM1088CCFM1088冻干粉中的总硒含量高达463.15mg/kg，总硒中有机硒的含量高达95％，有机硒中硒代半胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸的含量分别高达31％、27％、40％。
表2干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布
Figure BDA0002346643830000071
对比例1：菌种对有机硒转化效率的影响(富硒转化)
在实施例3的基础上，将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088替换为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)M2-03-F02-L4-1-5、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FNMGEL5-1以及鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FJSYC1-5；
其中，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661的保藏编号为CGMCCNo.5494，记载于公开号为CN102586148A的专利申请文本中；干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)M2-03-F02-L4-1-5、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FNMGEL5-1以及鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FJSYC1-5则为与干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)CCFM1088同批次从来源于四川省若尔盖牧场打更沟村的粪便样本中筛选得到的其他乳酸菌。
检测植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661冻干粉、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)M2-03-F02-L4-1-5冻干粉、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)FNMGEL5-1冻干粉以及鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FJSYC1-5冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布(检测结果见表3)。
由表3可知，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661(保藏编号为CGMCCNo.5494)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)M2-03-F02-L4-1-5、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FNMGEL5-1以及鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FJSYC1-5转化无机硒生产有机硒的转化效率远不如干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088。
表3植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661冻干粉、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)M2-03-F02-L4-1-5冻干粉、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)FNMGEL5-1冻干粉以及鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FJSYC1-5冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布
Figure BDA0002346643830000081
对比例2：菌种对有机硒转化效率的影响(定向转化)
在实施例4的基础上，将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088替换为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)M2-03-F02-L4-1-5、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FNMGEL5-1以及鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FJSYC1-5；
其中，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661的保藏编号为CGMCCNo.5494，记载于公开号为CN102586148A的专利申请文本中；干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)M2-03-F02-L4-1-5、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FNMGEL5-1以及鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FJSYC1-5则为与干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)CCFM1088同批次从来源于四川省若尔盖牧场打更沟村的粪便样本中筛选得到的其他乳酸菌。
检测植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661冻干粉、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)M2-03-F02-L4-1-5冻干粉、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)FNMGEL5-1冻干粉以及鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FJSYC1-5冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布(检测结果见表4)。
由表4可知，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661(保藏编号为CGMCCNo.5494)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)M2-03-F02-L4-1-5、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FNMGEL5-1以及鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FJSYC1-5转化无机硒生产有机硒的转化效率远不如干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1088。
表4植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661冻干粉、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)M2-03-F02-L4-1-5冻干粉、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)FNMGEL5-1冻干粉以及鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)FJSYC1-5冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布
Figure BDA0002346643830000091
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
序列表
<110> 江南大学
<120> 一株可高产3种形态有机硒的干酪乳杆菌及其应用
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1452
<212> DNA
<213> 干酪乳杆菌
<400> 1
ctatacatgc aagtcgacga gttctcgttg atgatcggtg cttgcaccga gattcaacat 60
ggaacgagtg gcggacgggt gagtaacacg tgggtaacct gcccttaagt gggggataac 120
atttggaaac agatgctaat accgcataga tccaagaacc gcatggttct tggctgaaag 180
atggcgtaag ctatcgcttt tggatggacc cgcggcgtat tagctagttg gtgaggtaat 240
ggctcaccaa ggcgatgata cgtagccgaa ctgagaggtt gatcggccac attgggactg 300
agacacggcc caaactccta cgggaggcag cagtagggaa tcttccacaa tggacgcaag 360
tctgatggag caacgccgcg tgagtgaaga aggctttcgg gtcgtaaaac tctgttgttg 420
gagaagaatg gtcggcagag taactgttgt cggcgtgacg gtatccaacc agaaagccac 480
ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttat ccggatttat 540
tgggcgtaaa gcgagcgcag gcggtttttt aagtctgatg tgaaagccct cggcttaacc 600
gaggaagcgc atcggaaact gggaaacttg agtgcagaag aggacagttg aacttcctag 660
tgtagcggtg aaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt ggcgaaggcg gctgtctggt 720
ctgtaactga cgctgaggct cgaaagcatg ggtagcgaac aggattagat accctggtag 780
tccatgccgt aaacgatgaa tgctaggtgt tggagggttt ccgcccttca gtgccgcagc 840
taacgcatta agcattccgc ctggggagta cgaccgcaag gttgaaactc aaaggaattg 900
acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt 960
accaggtctt gacatctttt gatcacctga gagatcaggt ttccccttcg ggggcaaaat 1020
gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 1080
cgagcgcaac ccttatgact agttgccagc atttagttgg gcactctagt aagactgccg 1140
gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta tgacctgggc 1200
tacacacgtg ctacaatgga tggtacaacg agttgcgaga ccgcgaggtc aagctaatct 1260
cttaaagcca ttctcagttc ggactgtagg ctgcaactcg cctacacgaa gtcggaatcg 1320
ctagtaatcg cggatcagca cgccgcggtg aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc 1380
cgtcacacca tgagagtttg taacacccga agccggtggc gtaacccttt tagggagcga 1440
gccgtctaag gt 1452

Claims (10)

1.一株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)，其特征在于，所述干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)已于2019年11月01日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.60879。
2.一种生产有机硒的方法，其特征在于，所述方法为先将权利要求1所述的干酪乳杆菌接种至含有无机硒的培养基中进行发酵，得到含有有机硒的干酪乳杆菌菌体，然后将含有有机硒的干酪乳杆菌菌体进行提取，得到有机硒。
3.如权利要求2所述的一种生产有机硒的方法，其特征在于，所述培养基的成分包含蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、吐温80和无机硒。
4.如权利要求2或3所述的一种生产有机硒的方法，其特征在于，所述培养基为富硒培养基或定向转化培养基；
所述富硒培养基的成分包含蛋白胨5～10g/L、酵母提取物5～15g/L、葡萄糖20～50g/L、牛肉浸膏5～10g/L、无水乙酸钠2～5g/L、柠檬酸氢二胺2～5g/L、K2HPO4·3H2O 2～5g/L、MgSO4·7H2O 0.25～0.58g/L、MnSO4·H2O 0.05～0.30g/L、吐温80 1g/L、五水亚硒酸钠8～12mg/L；
所述定向转化培养基的成分包含蛋白胨5～15g/L、酵母提取物5～15g/L、葡萄糖20～50g/L、K2HPO4·3H2O 2～5g/L、MgSO4·7H2O 0.25～0.58g/L、MnSO4·H2O 0.05～0.30g/L、吐温80 1g/L、五水亚硒酸钠7～16mg/L。
5.如权利要求4所述的一种生产有机硒的方法，其特征在于，所述方法为先将权利要求1所述的干酪乳杆菌接种至富硒培养基中，于温度为35～40℃、pH为5.0～6.0的条件下进行发酵，得到含有有机硒的干酪乳杆菌菌体，然后将含有有机硒的干酪乳杆菌菌体进行提取，得到有机硒。
6.如权利要求4所述的一种生产有机硒的方法，其特征在于，所述方法为先将权利要求1所述的干酪乳杆菌接种至定向转化培养基中，于温度为35～40℃、pH为5.0～6.0的条件下进行发酵，得到含有有机硒的干酪乳杆菌菌体，然后将含有有机硒的干酪乳杆菌菌体进行提取，得到有机硒。
7.如权利要求5或6所述的一种生产有机硒的方法，其特征在于，所述发酵的时间为6～8h。
8.如权利要求2-7任一所述的一种生产有机硒的方法，其特征在于，所述无机硒为亚硒酸钠、硒酸钠和/或单质硒。
9.如权利要求2-8任一所述的一种生产有机硒的方法，其特征在于，所述有机硒为硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和/或硒甲基硒代半胱氨酸。
10.权利要求1所述的干酪乳杆菌或权利要求2-9任一所述的方法在生产有机硒中的应用。
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