CN112852681B - 发酵乳杆菌及应用、发酵酸浆及制备方法、淀粉沉淀剂 - Google Patents

发酵乳杆菌及应用、发酵酸浆及制备方法、淀粉沉淀剂 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株发酵乳杆菌，发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429，已于2019年7月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.18278。相应的，本发明还公开了该发酵乳杆菌在淀粉沉淀分离的应用、该发酵乳杆菌的分离方法、含该发酵乳杆菌的发酵酸浆及其制备方法、该发酵酸浆经过离心分离所得的淀粉沉淀剂。本发明的含发酵乳杆菌的发酵酸浆中具有絮凝活性的物质主要存在于上清液中，其絮凝活性更高、稳定性更好、应用范围更广泛，可应用于豌豆淀粉沉淀中；其菌悬液可用于下一批次酸浆的生产，不仅提高了酸浆产量还可减少对环境的污染。

Description

发酵乳杆菌及应用、发酵酸浆及制备方法、淀粉沉淀剂
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株发酵乳杆菌及其应用、发酵酸浆及其制备方法。
背景技术
微生物发酵酸浆法生产淀粉在我国有400多年的悠久历史，酸浆是淀粉乳经自然发酵而成的一种微酸味的淡乳白色液体，在淀粉生产过程中能够加速淀粉与蛋白质、纤维等杂质絮凝分离，采用微生物发酵酸浆法生产淀粉可以大幅缩短淀粉沉淀分离周期同时，酸浆中的微生物能够显著改善淀粉的粉丝加工性质，生产出的粉丝更加透亮，是加工粉丝专用淀粉的首选工艺。
相关研究表明酸浆絮凝的本质是具有淀粉凝集作用的乳酸菌等菌体对淀粉的凝集作用，菌体活性受原料、气候变化等环境因素及操作方法的影响很大，且酸浆中含有较多的杂菌，使得酸浆絮凝与改性淀粉的活力十分不稳定、生产效率低、安全性低且产品质量欠佳。
目前，人们通过采用纯种微生物发酵酸浆技术生产淀粉可有效提高淀粉的生产效率和提高产品的安全性，但不能解决因原料、环境、季节、人工操作等多方面的影响，使得菌体的活性不稳定而导致酸浆絮凝与改性淀粉的活力不稳定的缺陷。而且，现有技术中采用纯种微生物发酵酸浆技术生产淀粉主要用于绿豆淀粉和甘薯淀粉的生产，不适用于豌豆淀粉的生产。近年来，绿豆原料价格居高不下，新鲜甘薯原料经常受到季节的限制，使得我国山东、河南、陕西等地多以豌豆代替绿豆和甘薯来生产粉丝专用淀粉，所以发酵豌豆酸浆的技术成为众多豌豆淀粉生产企业亟待解决的问题。
同时，现有技术中酸浆法生产工艺排放的酸浆废液中微生物菌体数量高，不可循环利用，对环境污染严重。
发明内容
本发明的目的在于提出一株发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429，该菌株在促进淀粉絮凝并加速淀粉分离中具有重要的作用。
本发明的另一目的在于提出一种含发酵乳杆菌的发酵酸浆及其制备方法，该发酵酸浆可有效提高淀粉的生产效率和提高产品的安全性，该发酵酸浆的制备方法简单，所需时间短。
本发明的又一目的在于提出一种淀粉沉淀剂，该淀粉沉淀剂为含发酵乳杆菌的发酵酸浆离心分离得到的上清液，该淀粉沉淀剂絮凝活性更高、稳定性更好，可有效解决菌体因原料、环境、季节、人工操作等多方面的影响而导致絮凝活性不稳定的缺陷，使其应用范围更广泛。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
一株发酵乳杆菌，该菌为发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429，已于2019年7月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.18278。
进一步的，所述发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429用于淀粉沉淀分离。
进一步的，所述发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429应用在豌豆淀粉、甘薯淀粉、马铃薯淀粉、绿豆淀粉、玉米淀粉或木薯淀粉分离沉淀中。
一株发酵乳杆菌的分离方法，用于分离出权利要求1所述的一株发酵乳杆菌，该方法包括以下步骤：
(1)取1mL自然发酵的豌豆酸浆加入9mL无菌生理盐水中，10倍梯度稀释至10-7，分别取稀释度为10-5、10-6、10-7的稀释液各1mL，分别注入至平板中，再注入至45～55℃的MRS培养基，待培养基凝固后，在30℃培养箱中倒置培养72h；
(2)挑取MRS培养基平板上的单个菌落进行平板接种培养；
(3)选取平板上菌落形态各不相同的菌株分别加入到豌豆汁培养基中30℃培养48h，再按照8～12％的添加量添加到新鲜的豌豆淀粉乳中测定絮凝率，选择絮凝率高的菌株，得到发酵乳杆菌。
进一步的，所述步骤(2)中的平板接种培养的具体方法为挑取MRS培养基平板上的单个菌落接种于豌豆汁培养基中，在28～32℃条件下培养48h，从豌豆汁培养基中分别取一环菌划线接种于MRS培养基平板中进行纯培养，28～32℃培养48h，重复纯化3代。
一种含发酵乳杆菌的发酵酸浆，所述发酵酸浆中含有权利要求1所述的一株发酵乳杆菌，所述发酵酸浆用于淀粉分离沉淀。
进一步的，所述发酵酸浆中所述发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429的含量大于1×109cfu/ml。
一种发酵乳杆菌的发酵酸浆的制备方法，该方法用于制备权利要求6的含发酵乳杆菌的发酵酸浆，该方法包括以下步骤：
(1)豌豆汁培养基配方：豌豆汁1000mL、牛奶胨10g、酵母浸粉5g、葡萄糖10g、磷酸二氢钾2g、聚山梨糖单油酯1g；
(2)豌豆汁制备方法：将40～60g豌豆洗净后加蒸馏水1000mL，加热煮沸30min，用120目的筛子过滤，即得豌豆汁；
(3)发酵乳杆菌FLL5429种子发酵液制备方法：用接种环挑取两环斜面保藏的发酵乳杆菌FLL5429于5mL豌豆汁培养基中，30℃下发酵培养24h后，将这5mL发酵液扩大培养，继续接入100mL豌豆汁培养基中，30℃下发酵培养24h，获得发酵乳杆菌FLL5429种子培养液；
(4)将发酵乳杆菌FLL5429种子培养液按10％-15％的接种量接入到豌豆汁培养基中，30℃下发酵48h，即可获得用于絮凝豌豆淀粉乳的发酵酸浆。
一种淀粉沉淀剂，所述淀粉沉淀剂为权利要求6所述的含发酵乳杆菌的发酵酸浆经过离心分离所得的上清液。
进一步的，上清液用于淀粉分离沉降。
本发明的有益效果为：
1、本发明所制备的发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429的发酵酸浆的对淀粉的絮凝率为70％～80％，其沉淀效果好，可有效促进淀粉絮凝并加速淀粉分离。并且，发酵酸浆中具有絮凝活性的物质主要存在于上清液中，与传统的具有淀粉分离活性的物质是菌体本身相比，可有效解决菌体因原料、环境、季节、人工操作等多方面的影响而导致絮凝活性不稳定的缺陷，使其絮凝活性更高、稳定性更好、应用范围更广泛。
2、发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429的发酵酸浆及其上清液可应用于豌豆淀粉、甘薯淀粉、马铃薯淀粉、绿豆淀粉、玉米淀粉或木薯淀粉分离沉淀中，尤其是应用在豌豆淀粉分离沉淀中，解决了目前豌豆淀粉生产效率低的问题。
3、发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429的发酵酸浆离心后的菌悬液可用于下一批次酸浆的生产，不仅提高了酸浆产量，酸浆产量可高达原来的10倍，而且缩短了酸浆发酵生产时间，使酸浆发酵时间由原来的96h缩短为48h，同时，可减少发酵酸浆生产排放废水中的活菌数量，减少对环境的污染。
附图说明
图1是菌株Lactobacillus fermentum FLL5429的菌落形态图；
图2菌株Lactobacillus fermentum FLL5429的菌体形态图(×1000)；
图3是菌株Lactobacillus fermentum FLL5429系统发育树；
图4发酵原液、上清液、菌悬液和洗涤菌悬液的絮凝活性分析图。
具体实施方式
下面结合附图及具体实施方式进一步说明本发明的技术方案。
一株发酵乳杆菌，该菌为发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429，已于2019年7月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.18278。
如图1和图2所示，发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429为革兰氏阳性菌，细胞呈杆状，细胞分裂后呈链状排布、无芽孢、不能运动。菌落形态为椭圆形，颜色为乳白色，表面低凸有光泽且边缘整齐。
该菌株的生理生化特征为：过氧化氢酶阴性，不能运动，硫化氢、硝酸盐还原、明胶实验阴性，15℃和45℃均可生长，代谢葡萄糖产酸不产气，能代谢果糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖、棉子糖、甘露糖、鼠李糖和蜜二糖，不能利用甘露醇、山梨醇、松三糖、七叶苷、阿拉伯糖和纤维二糖。
该菌株16S rDNA序列全长共1486bp，经Ganbank比对与Lactobacillus fermentum相似性达到99％，结合其个体、群体形态特征及生理生化实验结果，鉴定该菌株为Lactobacillus fermentum，并命名为Lactobacillus fermentum FLL5429，并构建了系统发育树，如图3所示。
进一步的，发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429用于淀粉沉淀分离。
进一步的，发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429应用在豌豆淀粉、甘薯淀粉、马铃薯淀粉、绿豆淀粉、玉米淀粉或木薯淀粉分离沉淀中。优选的，发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429应用在豌豆淀粉分离沉淀中。
本发明所制备的发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429的发酵酸浆对豌豆淀粉、甘薯淀粉、马铃薯淀粉、绿豆淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉均具有分离沉淀的作用。
一株发酵乳杆菌的分离方法，用于分离出以上的一株发酵乳杆菌，该方法包括以下步骤：
(1)取1mL自然发酵的豌豆酸浆加入9mL无菌生理盐水中，10倍梯度稀释至10-7，分别取稀释度为10-5、10-6、10-7的稀释液各1mL，分别注入至平板中，再注入至45～55℃的MRS培养基，待培养基凝固后，在30℃培养箱中倒置培养72h；
(2)挑取MRS培养基平板上的单个菌落进行平板接种培养；
(3)选取平板上菌落形态各不相同的菌株分别加入到豌豆汁培养基中30℃培养48h，再按照8～12％的添加量添加到新鲜的豌豆淀粉乳中测定絮凝率，选择絮凝率高的菌株，得到发酵乳杆菌。
进一步的，步骤(2)中的平板接种培养的具体方法为挑取MRS培养基平板上的单个菌落接种于豌豆汁培养基中，在28～32℃条件下培养48h，从豌豆汁培养基中分别取一环菌划线接种于MRS培养基平板中进行纯培养，28～32℃培养48h，重复纯化3代。
一种含发酵乳杆菌的发酵酸浆，发酵酸浆中含有发酵乳杆菌，发酵酸浆用于淀粉分离沉淀。
具体的，在25mL刻度试管中加入25mL的淀粉乳之后，再加入2.5ml的Lactobacillus fermentum FLL5429的发酵酸浆加入淀粉乳中，摇匀，静置3分钟，取刻度试管的20mL处溶液为用品，测定其540nm处的吸光度，并计算其絮凝率，由计算可得，本发明所制备的发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429的发酵酸浆的对淀粉的絮凝率为70％～80％，其沉淀效果好，可有效促进淀粉絮凝并加速豌豆淀粉分离。
进一步的，发酵酸浆中发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429的含量大于1×109cfu/ml。
一种发酵乳杆菌的发酵酸浆的制备方法，该方法用于制备以上所述含发酵乳杆菌的发酵酸浆，该方法包括以下步骤：
(1)豌豆汁培养基配方：豌豆汁1000mL、牛奶胨10g、酵母浸粉5g、葡萄糖10g、磷酸二氢钾2g、聚山梨糖单油酯1g；
(2)豌豆汁制备方法：将40～60g豌豆洗净后加蒸馏水1000mL，加热煮沸30min，用120目的筛子过滤，即得豌豆汁；
(3)发酵乳杆菌FLL5429种子发酵液制备方法：用接种环挑取两环斜面保藏的发酵乳杆菌FLL5429于5mL豌豆汁培养基中，30℃下发酵培养24h后，将这5mL发酵液扩大培养，继续接入100mL豌豆汁培养基中，30℃下发酵培养24h，获得发酵乳杆菌FLL5429种子培养液；
(4)将发酵乳杆菌FLL5429种子培养液按10％-15％的接种量接入到豌豆汁培养基中，30℃下发酵48h，即可获得用于絮凝豌豆淀粉乳的发酵酸浆。
具体的，步骤(4)中，当种子培养液的接种量少于10％时，使得所制备的发酵酸浆中具有絮凝活性的物质的浓度较低，使发酵酸浆对淀粉的絮凝率降低，需要的沉降分离时间增加，降低效率；当种子培养液的接种量超过15％时，酸浆中微生物的数量过多，不利于发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429的生长和生产具有絮凝活性的物质。故优选的，种子培养液按10％-15％的接种量接入到豌豆汁培养基中发酵生产酸浆。
一种淀粉沉淀剂，淀粉沉淀剂为上述含发酵乳杆菌的发酵酸浆经过离心分离所得的上清液。
进一步的，上清液用于淀粉分离沉降。
值得说明的是，将发酵酸浆在3000～4000r/min的条件下离心10min，得到上清液和菌悬液，上清液可用于促进淀粉分离沉降，菌悬液可用于下一批次酸浆的生产。
具体的，将发酵酸浆、上清液和菌悬液分别加入豌豆淀粉乳中，分别测定其絮凝率，如图4所示，可知，上清液的絮凝率接近发酵酸浆的絮凝率，而菌悬液的絮凝率为负值，由此可见发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum FLL5429发酵生产的酸浆中具有絮凝活性的物质主要存在于上清液中，与传统的具有淀粉分离活性的物质是菌体本身相比，可有效解决菌体因原料、环境、季节、人工操作等多方面的影响而导致絮凝活性不稳定的缺陷，使其絮凝活性更高、稳定性更好、应用范围更广泛。
同时，离心后的菌悬液可用于下一批次酸浆的生产，不仅提高了酸浆产量，酸浆产量可高达原来的10倍，而且缩短了酸浆发酵生产时间，使酸浆发酵时间由原来的96h缩短为48h，同时，可减少发酵酸浆生产排放废水中的活菌数量，减少对环境的污染。
下面结合实施例进一步说明本发明的技术方案。
实施例1
加速豌豆淀粉沉降的微生物分离、筛选与鉴定
1、培养基
(1)豌豆汁的制备：取40g豌豆洗净后加蒸馏水1000mL，加热煮沸30min，用120目筛子过滤，即得豌豆汁；
(2)豌豆汁培养基配方：豌豆汁1000mL、牛奶胨10g、酵母浸粉5g、葡萄糖10g、磷酸二氢钾2g、聚山梨糖单油酯1g，将豌豆汁培养基的pH调至6.8±0.2，121℃灭菌15min；
(3)MRS培养基：成品培养基；
(4)自然发酵豌豆酸浆：锦州医科大学食品微生物实验室自然发酵获得。
2、检测方法
2.1豌豆淀粉乳的制备方法：
将40g豌豆洗净浸泡24h，取出后加蒸馏水1000mL，用榨汁机打碎30秒，用120目筛子过滤，即为豌豆淀粉乳。
2.2豌豆淀粉絮凝率的检测方法：
在25mL刻度试管中加入25mL的豌豆淀粉乳之后，再入2.5mL空白豌豆汁培养基溶液，在密封情况下上下摇动，混匀10次，沉淀3min，取刻度试管的20mL处溶液为样品，测定540nm处吸光值计为A；同样方法在25mL刻度试管中加入25mL豌豆淀粉乳之后加入2.5mL酸浆，密封情况下上下摇动，混匀10次，沉淀3min，取刻度试管的20mL处溶液为样品，测定540nm处吸光值计为B，然后计算豌豆淀粉的絮凝率，絮凝率的计算公式为：
Figure BDA0002980938750000091
2.3乳酸菌的检测方法
参照GB 4789.35-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》。
3、加速豌豆淀粉沉降微生物分离方法
3.1菌株的分离
在自然发酵的豌豆酸浆中取1mL匀浆加入到9mL无菌生理盐水中，依次进行10倍梯度稀释，分别取稀释度为10-5、10-6、10-7的稀释液各1mL，分别注入至平板中，再注入冷却至55℃的MRS培养基，每个稀释度做两个重复。待培养基凝固后，在30℃培养箱中倒置培养72h。挑取MRS培养基平板上的单个菌落接种于豌豆汁培养基中进行培养，30℃培养48h。用接种环从豌豆汁培养基中分别取一环菌划线接种于MRS培养基平板中进行纯培养，30℃培养48h，重复纯化3代。选取平板上菌落形态各不相同的菌株分别加入到豌豆汁培养基中30℃培养48h，然后分别按照10％的添加量添加到新鲜的豌豆淀粉乳中测定絮凝率，选择絮凝率高的菌株，斜面保存，用于进一步筛选。
3.2菌株筛选
将分离到的斜面纯菌株活化后接入豌豆汁培养液中，30℃培养48h，以发酵液对豌豆淀粉的絮凝率为指标，筛选出一株促淀粉分离沉降速度高的菌株Lactobacillusfermentum FLL5429。
3.3菌种鉴定
3.3.1发酵乳杆菌FLL5429的形态特征观察
将发酵乳杆菌FLL5429在豌豆汁培养基中30℃下培养48h，然后进行革兰氏染色，其个体形态特征见表1。
表1 FLL5429菌株的形态特征
Figure BDA0002980938750000101
发酵乳杆菌FLL5429在种子培养基中，30℃下培养48h，观察菌落形态和颜色，结果见表2。
表2菌落形态特征
菌株 颜色 透明度 光泽 隆起 边缘扩展 表面
FLL5429 乳白色 - + 低凸 整齐 光滑
3.3.2发酵乳杆菌FLL5429的生理生化特性
根据常规生理生化鉴定，结果见表3，参照《伯杰细菌鉴定手册》，初步判断菌株FLL5429为发酵乳杆菌属。
表3菌株生理生化特性
测试项目 结果 测试项目 结果
过氧化氢酶 - 乳糖 +
运动性试验 - 半乳糖 +
H<sub>2</sub>S试验 - 麦芽糖 +
硝酸盐还原 - 甘露醇 -
明胶液化 - 山梨醇 -
15℃生长 + 棉子糖 +
45℃生长 + 甘露糖 +
海藻糖 + 鼠李糖 +
葡萄糖产气 - 松三糖 -
葡萄糖产酸 + 蜜二糖 +
水扬苷 - 七叶苷 -
果糖 + 阿拉伯糖 -
蔗糖 + 纤维二糖 -
3.3.3发酵乳杆菌FLL5429的16S rDNA序列分析结果
该菌株的16S rDNA序列全长共1486bp，经Genbank比对与Lactobacillusfermentum相似性达到99％，综合其群体形态观察、个体形态观察、生理生化试验结果，确定该菌株为Lactobacillus fermentum并命名为Lactobacillus fermentum FLL5429，已于2019年7月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院，中科院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCCNo.18278。
实施例2
Lactobacillus fermentum FLL5429菌株絮凝活性的分布
1、检测方法
取Lactobacillus fermentum FLL5429菌株种子发酵原液10mL接种于100mL豌豆汁培养基中，在30℃培养箱中培养48h后，在10000r/min条件下离心10min，取上清液备用，离心后的菌体加入等体积水制成菌悬液，同时用无菌蒸馏水洗涤菌体2次后加入等体积水制成洗涤菌悬液，分别测定发酵原液、上清液、菌悬液和洗涤菌悬液絮凝豌豆淀粉乳中淀粉的絮凝率。
2、测定结果
经过不同处理后Lactobacillus fermentum FLL5429菌体发酵液各部分絮凝活性如图4所示，由图4可知，发酵原液、上清液、菌悬液和洗涤菌悬液的絮凝率分别为73％、62％、-67％和-62％，由于使用豌豆汁作为空白对照，添加菌悬液和洗涤菌悬液使原本豌豆汁变得更加浑浊，故导致菌悬液和洗涤菌悬液的絮凝率为负值。
由此可知，Lactobacillus fermentum FLL5429菌株发酵液具有絮凝活性的物质主要存在于上清液中，而菌体自身并没有絮凝特性。由于Lactobacillus fermentumFLL5429菌株发酵液具有絮凝活性的物质存在于上清液中，可有效解决菌体因原料、环境、季节、人工操作等多方面的影响而导致絮凝活性不稳定的缺陷，可以稳定和长期的保存，使其运用范围更加广泛，利用价值更高。并且，收集得到的菌体可用于下一批次发酵酸浆的生产，可以减少酸浆法生产淀粉排放废水中的活菌数量，大大减少对环境的污染。
实施例3
Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆在豌豆淀粉加工中的应用
1、实验材料
试验用的菌株为本发明分离的Lactobacillus fermentum FLL5429，淀粉生产原料选择豌豆。
2、Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆的制备方法：
挑取两环斜面保藏菌于5mL豌豆汁培养基中，30℃下发酵培养24h后，将这5mL发酵液扩大培养，继续接入100mL豌豆汁培养基30℃下发酵培养24h，获得种子培养液。
将Lactobacillus fermentum FLL5429种子培养液按10％-15％的接种量接入到豌豆汁培养基中，30℃下发酵48h，即可获得用于沉降豌豆淀粉的酸浆。
3、应用于加速豌豆淀粉与蛋白质等杂质分离沉降
将Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆在3000-4000r/min离心10min后，将其上清液按体积比10％的量加入到100ml豌豆淀粉乳中，迅速搅拌1-2min，静置；
再取100mL打好的豌豆淀粉乳两份，按体积比10％分别加入自然发酵酸浆、空白豌豆汁培养基，迅速搅拌1-2min，静置；
分别测定Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆上清液、自然发酵酸浆和空白豌豆汁培养基静置3min时的絮凝率，和分别它们测定沉降10mL淀粉所需要的时间。每组做3个重复实验，检测结果如表4和表5所示：
表4不同促沉淀剂种类的絮凝率分析表
Figure BDA0002980938750000131
Figure BDA0002980938750000141
表5不同促沉淀剂种类的沉降速度
Figure BDA0002980938750000142
具体的，根据表4和表5可知，该上清液中的絮凝活性物质能够特异性结合到淀粉颗粒表面，将众多淀粉颗粒联结成大的絮凝团，由于联结在一起的豌豆淀粉颗粒的重力加大，加速了豌豆淀粉与蛋白质等杂质的分离沉降速度，可将降沉速度由22min缩短至2min，且Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆上清液的絮凝率和最终淀粉得率均显著大于自然发酵酸浆和空白豌豆汁培养基。
4、应用离心获得的菌体生产下一批次酸浆
将Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆在3000-4000r/min离心10min后，离心获得的菌体(菌泥)用于下一批次酸浆的生产。10mL酸浆离心获得的菌体，加入100mL豌豆汁培养基中，30℃发酵48h，即获得100mL酸浆，该酸浆离心后获得的菌体可以再次循环使用。由此可见，Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆离心后收集的菌体可循环利用，用于生产下一批次的酸浆，不仅提高了酸浆产量，而且缩短了酸浆发酵生产时间。
5、大肠菌群群检测
参照GB 4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》，分别对Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆和自然发酵酸浆中大肠菌群的数量进行检测，结果如下表6所示：
表6不同发酵液中大肠菌群数量比较
Figure BDA0002980938750000151
具体的，由表6可知，自然发酵酸浆中存在大肠菌群等致病菌污染，采用自然发酵酸浆生产的淀粉，食品安全性差。而本发明所制备的Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆为纯菌发酵，其不存在大肠菌群等致病菌污染，可有效提高淀粉的食品安全性。
实施例4
Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆在淀粉加工中的应用拓展
1、实验材料
试验用的菌株为本发明分离的Lactobacillus fermentum FLL5429，淀粉生产原料选择甘薯、马铃薯、绿豆、玉米、木薯。
2、实验方法
(1)Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆及上清液的制备方法同上所述。
(2)淀粉乳的制备：分别取淀粉生产原料甘薯、马铃薯和木薯各100-300g,分别加入1000mL蒸馏水，分别取淀粉生产原料绿豆、玉米各50-100g,分别加入1000mL蒸馏水，分别用榨汁机打碎30秒，用120目筛子过滤，即为各原料淀粉乳。
(3)在各原料淀粉乳中分别加入Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆上清液，测定絮凝率。同时做空白培养基组对照。
3、实验结果
测定Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆上清液对不同淀粉乳的絮凝率，测定结果如表7所示：
表7 Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆上清液应用于其他淀粉的絮凝率/％
Figure BDA0002980938750000161
从表6中可以看出，Lactobacillus fermentum FLL5429发酵酸浆上清液对表中所有淀粉乳中的淀粉均具有絮凝沉降作用。
以上结合具体实施例描述了本发明的技术原理。这些描述只是为了解释本发明的原理，而不能以任何方式解释为对本发明保护范围的限制。基于此处的解释，本领域的技术人员不需要付出创造性的劳动即可联想到本发明的其它具体实施方式，这些方式都将落入本发明的保护范围之内。
序列表
<110>锦州医科大学
<120>发酵乳杆菌及应用、发酵酸浆及制备方法、淀粉沉淀剂
<160>1
<210>1
<211>1486
<212>DNA
<213>发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）
<400>1
ccttaggcgg ctggctccta aaaggttacc ccaccgactt tgggtgttac aaactctcat 60
ggtgtgacgg gcggtgtgta caaggcccgg gaacgtattc accgcggcat gctgatccgc 120
gattactagc gattccgact tcgtgcaggc gagttgcagc ctgcagtccg aactgagaac 180
ggttttaaga gatttgcttg ccctcgcgag ttcgcgactc gttgtaccgt ccattgtagc 240
acgtgtgtag cccaggtcat aaggggcatg atgatctgac gtcgtcccca ccttcctccg 300
gtttgtcacc ggcagtctca ctagagtgcc caacttaatg ctggcaacta gtaacaaggg 360
ttgcgctcgt tgcgggactt aacccaacat ctcacgacac gagctgacga cgaccatgca 420
ccacctgtca ttgcgttccc gaaggaaacg ccctatctct agggttggcg caagatgtca 480
agacctggta aggttcttcg cgtagcttcg aattaaacca catgctccac cgcttgtgcg 540
ggcccccgtc aattcctttg agtttcaacc ttgcggtcgt actccccagg cggagtgctt 600
aatgcgttag ctccggcact gaagggcgga aaccctccaa cacctagcac tcatcgttta 660
cggcatggac taccagggta tctaatcctg ttcgctaccc atgctttcga gtctcagcgt 720
cagttgcaga ccaggtagcc gccttcgcca ctggtgttct tccatatatc tacgcattcc 780
accgctacac atggagttcc actaccctct tctgcactca agttatccag tttccgatgc 840
acttctccgg ttaagccgaa ggctttcaca tcagacttag aaaaccgcct gcactctctt 900
tacgcccaat aaatccggat aacgcttgcc acctacgtat taccgcggct gctggcacgt 960
agttagccgt gactttctgg ttaaataccg tcaacgtatg aacagttact ctcatacgtg 1020
ttcttcttta acaacagagc tttacgagcc gaaacccttc ttcactcacg cggtgttgct 1080
ccatcaggct tgcgcccatt gtggaagatt ccctactgct gcctcccgta ggagtatggg 1140
ccgtgtctca gtcccattgt ggccgatcag tctctcaact cggctatgca tcatcgcctt 1200
ggtaggccgt taccccacca acaagctaat gcaccgcagg tccatccaga agtgatagcg 1260
agaagccatc ttttaagcgt tgttcatgcg aacaacgttg ttatgcggta ttagcatctg 1320
tttccaaatg ttgtcccccg cttctgggca ggttacctac gtgttactca cccgtccgcc 1380
actcgttggc gaccaaaatc aatcaggtgc aagcaccatc aatcaattgg gccaacgcgt 1440
tcgacttgca tgtattaggc acaccgccgg cgttcatcct gagcga 1486

Claims (7)

1.一株发酵乳杆菌，其特征在于，该菌为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum ）FLL5429，已于2019年7月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.18278。
2.权利要求1所述的一株发酵乳杆菌的应用，其特征在于，所述发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum ）FLL5429用于淀粉沉淀分离。
3.根据权利要求2所述的发酵乳杆菌的应用，其特征在于，所述发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum ）FLL5429应用在豌豆淀粉、甘薯淀粉、马铃薯淀粉、绿豆淀粉、玉米淀粉或木薯淀粉分离沉淀中。
4.一种含发酵乳杆菌的发酵酸浆，其特征在于，所述发酵酸浆中含有权利要求1所述的发酵乳杆菌，所述发酵酸浆用于淀粉分离沉淀。
5.根据权利要求4所述的含发酵乳杆菌的发酵酸浆，其特征在于，所述发酵酸浆中所述发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum ）FLL5429的含量大于1×109cfu/ml。
6.一种发酵乳杆菌的发酵酸浆的制备方法，其特征在于，该方法用于制备权利要求4所述的含发酵乳杆菌的发酵酸浆，该方法包括以下步骤：
（1）豌豆汁培养基配方：豌豆汁1000mL、牛奶胨10g、酵母浸粉5g、葡萄糖10g、磷酸二氢钾2g、聚山梨糖单油酯1g；
（2）豌豆汁制备方法：将40~60g豌豆洗净后加蒸馏水1000mL，加热煮沸30min，用120目的筛子过滤，即得豌豆汁；
（3）发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum ）FLL5429种子发酵液制备方法：用接种环挑取两环斜面保藏的发酵乳杆菌FLL5429于5mL豌豆汁培养基中，30℃下发酵培养24h后，将这5mL发酵液扩大培养，继续接入100mL豌豆汁培养基中，30℃下发酵培养24h，获得发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum ）FLL5429种子培养液；
（4）将发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum ）FLL5429种子培养液按10%-15%的接种量接入到豌豆汁培养基中，30℃下发酵48h，即可获得用于絮凝豌豆淀粉乳的发酵酸浆。
7.一种淀粉沉淀分离方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）按照权利要求6所述的发酵酸浆的制备方法，制备权利要求4所述的含发酵乳杆菌的发酵酸浆；
（2）对步骤（1）制得的发酵酸浆进行离心分离，得到上清液；
（3）将步骤（2）得到的上清液用于淀粉沉淀分离。
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