CN111978427A - 一种黄精多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黄精多糖的提取方法。该提取方法包括步骤：S1：称取干燥的黄精饮片，粉碎，加入蒸馏水浸泡24h；S2：按一定料液比加入蒸馏水，回流提取后离心、浓缩；S3：在浓缩液中加入95％乙醇，过夜，离心，冷冻干燥得粗多糖；S4：取黄精粗多糖，溶解，与氯仿‑正丁醇混合后，剧烈振摇30min，蛋白质变性生成凝胶状，离心除去中间层的变性蛋白；S5：向黄精多糖溶液中加入活性炭，脱色，其间每10min搅拌1次，向提取液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到80％，静置过夜，离心，冷冻干燥即可。该方法操作简单、经济可行；通过多次提取，具有提取率更高、杂质少等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种提取方法，特别涉及一种黄精多糖的提取方法。
背景技术
随着社会的不断进步，生活水平的不断提高，人们对美的追求也越来越严苛。当下，以天然、绿色、无添加的化妆品越来越受到人们的青睐。将自然界中的植物有效成分应用在化妆品中已经是大势所趋。随着时代的发展，中药凭借着其悠久的历史又重新受到了人们的关注。如若能将传统中药中的有效成分和现代化妆品结合，不仅能够大大满足人们对天然、绿色化妆品的需求，必将赋予中药新的内涵。
黄精，又名鸡头黄精、黄鸡菜、笔管菜、爪子参等，是一种药食同源的原料。多项研究表明黄精中的有效成分为黄精多糖，具有防治心血管疾病、抗衰老、抗肿瘤、降血糖、增强人体免疫等多种功效。
当前关于多糖的提取有多种方法，但是与多糖传统的“水提醇沉”方法相比，存在能耗高、污染大、操作繁琐、仪器高昂等一系列问题。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明目的是提供一种操作简单、提取效率高、杂质少的黄精多糖的提取方法。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供一种黄精多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1：称取干燥的黄精饮片，粉碎，加入蒸馏水浸泡24h；
S2：按一定料液比加入蒸馏水，回流提取后离心、浓缩；
S3：在浓缩液中加入95％乙醇，过夜，离心，冷冻干燥得粗多糖；
S4：取黄精粗多糖，溶解，与氯仿-正丁醇混合后，剧烈振摇30min，蛋白质变性生成凝胶状，离心除去中间层的变性蛋白；
S5：向黄精多糖溶液中加入活性炭，脱色，其间每10min搅拌1次，向提取液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到80％，，静置过夜，离心，即得黄精多糖提取物。
进一步地，所述步骤S1中料液比为1：10～30g/ml。
更进一步地，所述步骤S1中料液比为1：20g/ml。
进一步地，步骤S2中提取方法为回流提取，所述提取温度为75～85℃，提取时间为1～3h，所述提取次数为1～3次。
更进一步地，所述提取次数为3次。
进一步地，步骤S3中，粗多糖提取率为18％～35％。
进一步地，步骤S4中，氯仿与正丁醇溶液混合比例为5：1；
进一步地，步骤S4中，黄精粗多糖与氯仿-正丁醇按5～8：1；
更进一步地，步骤S4中，黄精粗多糖与氯仿-正丁醇按5：1。
进一步地，所述活性炭的添加量为1～4％，所述脱色温度为90～100℃，所述脱色时间为60～80min；
进一步地，得到所述提纯后的黄精多糖提取物后，还包括对所述提纯后的黄精多糖根提取物进行冷冻干燥的过程。
与现有技术相比，本发明黄精多糖的提取方法具有以下有益效果：
本发明使用蒸馏水提取，绿色无污染；多次提取，优化提取条件，提取率更高；多次纯化，提取纯度高。
附图说明
图1为效果试验例2中黄精多糖的标准曲线图；
图2为效果试验例3中黄精多糖对DPPH自由清除能力折线图；
图3为效果试验例3中黄精多糖对羟基自由基清除能力折线图。
具体实施方式
现结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
一种黄精多糖的提取方法，包括以下步骤：
1.称取干燥黄精饮片2kg，浸泡24h，按料液比1∶10加入蒸馏水，选择提取温度为70℃，加热回流1h，在提取1次的条件下，将滤液进行浓缩后用95％乙醇进行沉淀，静置过夜后冷冻干燥，计算粗多糖提取率18.5％。
2.除蛋白
取黄精粗多糖1g，溶解至20mg/mL，与氯仿-正丁醇(5/1)溶液以5∶1混合后，剧烈振摇30min，蛋白质变性生成凝胶状，离心除去中间层的变性蛋白。
3.脱色
向黄精多糖溶液中加入1％活性炭，在100℃水浴下脱色80min，其间每10min搅拌1次，向提取液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到80％，静置过夜，离心，冷冻干燥即得。
实施例2
一种黄精多糖的提取方法，包括以下步骤：
1.称取干燥黄精饮片2kg，浸泡24h，按料液比1∶10加入蒸馏水，选择提取温度为80℃，加热回流2h，在提取2次的条件下，将滤液进行浓缩后用95％乙醇进行沉淀，静置过夜后冷冻干燥，计算粗多糖提取率19.6％。
2.除蛋白
取黄精粗多糖1g，溶解至20mg/mL，与氯仿-正丁醇(5/1)溶液以5∶1混合后，剧烈振摇30min，蛋白质变性生成凝胶状，离心除去中间层的变性蛋白。
3.脱色
向黄精多糖溶液中加入2％活性炭，在100℃水浴下脱色80min，其间每10min搅拌1次，向提取液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到80％，静置过夜，离心，冷冻干燥即得。
实施例3
一种黄精多糖的提取方法，包括以下步骤：
1.称取干燥黄精饮片2kg，浸泡24h，按料液比1∶20加入蒸馏水，选择提取温度为80℃，加热回流3h，在提取1次的条件下，将滤液进行浓缩后用95％乙醇进行沉淀，静置过夜后冷冻干燥，计算粗多糖提取率27.8％。
2.除蛋白
取黄精粗多糖1g，溶解至20mg/mL，与氯仿-正丁醇(5/1)溶液以5∶1混合后，剧烈振摇30min，蛋白质变性生成凝胶状，离心除去中间层的变性蛋白。
3.脱色
向黄精多糖溶液中加入2％活性炭，在100℃水浴下脱色70min，其间每10min搅拌1次，向提取液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到80％，静置过夜，离心，冷冻干燥即得。
实施例4
一种黄精多糖的提取方法，包括以下步骤：
1.称取干燥黄精饮片2kg，浸泡24h，按料液比1∶30加入蒸馏水，选择提取温度为80℃，加热回流1h，在提取2次的条件下，将滤液进行浓缩后用95％乙醇进行沉淀，静置过夜后冷冻干燥，计算粗多糖提取率28.7％。
2.除蛋白
取黄精粗多糖1g，溶解至20mg/mL，与氯仿-正丁醇(5/1)溶液以5∶1混合后，剧烈振摇30min，蛋白质变性生成凝胶状，离心除去中间层的变性蛋白。
3.脱色
向黄精多糖溶液中加入2％活性炭，在100℃水浴下脱色1h，其间每10min搅拌1次，向提取液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到80％，静置过夜，离心，冷冻干燥即得。
实施例5
一种黄精多糖的提取方法，包括以下步骤：
1.称取干燥黄精饮片2kg，浸泡24h，按料液比1∶20加入蒸馏水，选择提取温度为80℃，加热回流3h，在提取2次的条件下，将滤液进行浓缩后用95％乙醇进行沉淀，静置过夜后冷冻干燥，计算粗多糖提取率32.3％。
2.除蛋白
取黄精粗多糖1g，溶解至20mg/mL，与氯仿-正丁醇(5/1)溶液以5∶1混合后，剧烈振摇30min，蛋白质变性生成凝胶状，离心除去中间层的变性蛋白。
3.脱色
向黄精多糖溶液中加入2％活性炭，在100℃水浴下脱色1h，其间每10min搅拌1次，向提取液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到80％，静置过夜，离心，冷冻干燥即得。
以下为效果试验例的内容。
效果试验例1
为得到较优的多糖提取工艺，对提取温度、料液比、提取次数、提取时间进行正交优化实验，正交试验设计各因素水平表，见表1。
表1正交试验因素水平表
表2正交试验结果表
| 试验号 | A | B | C | D | 提取率/％ |
| 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 18.5 |
| 2 | 1 | 2 | 2 | 2 | 19.6 |
| 3 | 1 | 3 | 3 | 3 | 16.5 |
| 4 | 2 | 1 | 2 | 3 | 24.8 |
| 5 | 2 | 2 | 3 | 1 | 27.8 |
| 6 | 2 | 3 | 1 | 2 | 28.7 |
| 7 | 3 | 1 | 3 | 2 | 21.3 |
| 8 | 3 | 2 | 1 | 3 | 17.8 |
| 9 | 3 | 3 | 2 | 1 | 19.5 |
| K1 | 18.100 | 21.433 | 21.567 | 21.833 | |
| K2 | 272.100 | 21.733 | 22.300 | 23.200 | |
| K3 | 19.533 | 21.567 | 21.867 | 19.700 | |
| R | 9.000 | 0.300 | 0.567 | 3.500 |
表3正交试验方差分析表
| 因素 | 偏差平方和 | 自由度 | F比 | F临界值 | 显著性(P＜0.05) |
| A | 140.309 | 2 | 1031.684 | 19.000 | * |
| B(误差) | 0.136 | 2 | 1.000 | 19.000 | |
| C | 0.482 | 2 | 3.544 | 19.000 | |
| D | 18.669 | 2 | 137.272 | 19.000 | * |
正交试验结果(见表2-3)，从极差直观分析结果，可看出黄精多糖提取的最佳提取工艺为A2B2C3D2，即20倍量水80℃下超声提取2次，1次1.5h。从实施例5可以验证。从极差R值可以看出，影响多糖提取率的因素依次为：A＞D＞C＞B，即提取温度＞次数＞时间＞液料比。方差分析表明，提取温度、提取次数对结果有显著性影响。
效果试验例2
蒽酮硫酸法测定黄精多糖纯度。
对照品的制备：
精密称定于105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品50mg，加少量水溶解后置100ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，得0.5mg/ml的标准品溶液。
标准曲线的制定：
精密量取标准品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，分别置于2ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，移至10ml试管。在冰水浴中换换滴加0.2％蒽酮硫酸溶液至刻度，摇匀，放冷后置水浴中保温10min，取出。以蒸馏水为空白对照，用紫外分光光度法于582nm处测定吸光度。
结果如表4，图1所示。
表4标准品吸光度
黄精多糖纯度的测定：
配置浓度分别为0.03、0.05、0.08、0.10、0.12mg/ml的黄精多糖溶液。以蒸馏水为空白对照，用紫外分光光度法于582nm处测定吸光度，代入标准曲线公式测定黄精多糖的纯度。结果如表5，黄精多糖的纯度在85％以上。
表5黄精多糖纯度
效果试验例3(抗氧化活性)
1、黄精多糖提取物对DPPH的清除能力
依次向洁净试管中分别加入2.0mL不同浓度的黄精多糖样品溶液(1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mg/mL)，2.0mL浓度为0.1mmol/L的DPPH一乙醇试剂和1.0mL的0.2mol/L pH＝7.0磷酸盐缓冲溶液。混合均匀后，避光处反应30min，紫外分光光度计中517nm处，测定样品的A1值。以无水乙醇代替DPPH得到吸光值A2，以蒸馏水代替多糖样品溶液得到吸光值A0。以Vc溶液作为阳性对照，DPPH清除率由下式计算得到：
DPPH自由基护清除率(％)＝[A0一(A1一A2)]/A0×100
式中，式中：A1为不同浓度样品溶液的吸光值；A2为无水乙醇代替DPPH的参比对照吸光值；A0为蒸馏水代替样品的空白对照吸光值。
2、黄精多糖提取物对OH·的清除能力
依次向洁净试管中加入9.0mmol/L水杨酸－乙醇溶液0.5mL，待测样品(1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mg/mL)2.0mL，9.0mmol/L硫酸亚铁溶液0.5mL，蒸馏水6.5mL，最后加入8.8mmol/L H2O2溶液0.5mL，在37℃恒温水浴锅中水浴反应30min，测定510nm处吸光值A1，以蒸馏水代替硫酸亚铁溶液得到吸光值A2，取蒸馏水代替样品测得吸光值A3，并以稀释100倍的VC溶液(0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06mg/mL)作阳性对照。
羟基自由基清除率计算公式：
R(％)＝[A3一(A1一A2)]/A3×100；
式中：A1为不同浓度样品溶液的反应后吸光值；A2为蒸馏水取代亚铁离子的吸光值；A3为蒸馏水空白组吸光值。
DPPH自由清除能力以及羟基自由基的清除能力是体外评价抗氧化活性的重要指标之一。
通过图2、3发现，随着黄精多糖的浓度升高，对DPPH和羟基自由基的清除能力逐渐增强。在黄精多糖浓度为6mg/mL的时候，对DPPH的清除率为59％，对羟基自由基的清除率为47％，表现了良好的抗氧化能力。
本发明并不局限于上述实施方式，如果对本发明的各种改动或变型不脱离本发明的精神和范围，倘若这些改动和变型属于本发明的权利要求和等同技术范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变动。
Claims (10)
1.一种黄精多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：称取干燥的黄精饮片，粉碎，加入蒸馏水浸泡24h；
S2：按一定料液比加入蒸馏水，回流提取后离心、浓缩；
S3：在浓缩液中加入95％乙醇，过夜，离心，冷冻干燥得粗多糖；
S4：取黄精粗多糖，溶解，与氯仿-正丁醇混合后，剧烈振摇30min，蛋白质变性生成凝胶状，离心除去中间层的变性蛋白；
S5：向黄精多糖溶液中加入活性炭，脱色，其间每10min搅拌1次，向提取液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到80％，，静置过夜，离心，即得黄精多糖提取物。
2.如权利要求1所述的黄精多糖的提取方法，其特征在于：步骤S1中，所述料液比为1：10～30g/ml。
3.如权利要求2所述的黄精多糖的提取方法，其特征在于：步骤S1中,所述料液比为1：20g/ml。
4.如权利要求1所述的黄精多糖的提取方法，其特征在于：步骤S2中，所述提取方法为回流提取，所述提取温度为75～85℃，提取时间为1～3h，所述提取次数为1～3次。
5.如权利要求1所述的黄精多糖的提取方法，其特征在于：步骤S3中，粗所述多糖提取率为18％～35％。
6.如权利要求1所述的黄精多糖的提取方法，其特征在于：步骤S4中，所述氯仿与正丁醇溶液混合比例为5：1。
7.如权利要求1所述的黄精多糖的提取方法，其特征在于：步骤S4中，所述黄精粗多糖与氯仿-正丁醇按5～8：1。
8.如权利要求7所述的黄精多糖的提取方法，其特征在于：步骤S4中，所述黄精粗多糖与氯仿-正丁醇按5：1。
9.如权利要求1所述的黄精多糖的提取方法，其特征在于：所述活性炭的添加量为1～4％，所述脱色温度为90～100℃，所述脱色时间为60～80min。
10.如权利要求1所述的黄精多糖的提取方法，其特征在于：得到所述提纯后的黄精多糖提取物后，还包括对所述提纯后的黄精多糖提取物进行冷冻干燥的过程。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201124 |
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